CN101306129A - 一种治疗高血压的中药复方制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属中药领域,具体涉及一种治疗高血压的中药复方制剂及其制备方法。本发明采用中药原料药丹参、白蒺藜、潼蒺藜、泽泻、青葙子制成复方制剂,应用正交设计实验优选颗粒剂的提取工艺;本发明制剂兼顾“活血化瘀”、“平肝潜阳”环节,组方合理,经动物实验和临床研究结果表明,能显著改善头晕、头痛、心烦、失眠、手足麻木、腰膝酸软、舌质紫暗、舌体瘀斑等临床症状;可以有效阻止高血压病导致的靶器官损害,能一定程度地改善高血压血管重建情况,可进一步提高中医药治疗高血压病及其并发症疗效。
Description
技术领域
本发明属中药领域,具体涉及一种治疗高血压的中药复方制剂及其制备方法。
背景技术:
高血压病是常见的心血管疾病之一,研究报道,高血压病与冠状动脉粥样硬化性心脏病、脑血管疾病等密切相,迄今仍是心血管疾病的主要死因之一。虽然现代医学有了飞跃的进展,但,近年来随着大规模抗高血压临床实验和心血管分子生物学等基础研究的进展,人们逐渐认识到高血压病不只是血流动力学异常的疾病,还是多种心血管危险因素聚集、遗传的综合征。因此,在治疗上,不仅仅要将血压降低到靶目标水平,而且要综合干预上述危险因素,预防和逆转靶器官不良重塑,降低心血管发病率和死亡率,提高患者生活质量。随着利尿剂、β受体阻滞剂、钙离子拮抗剂、血管紧张素转换酶抑制剂及血管紧张素受体拮抗剂的不断应用,其在降压同时带来的诸多副作用亦日益困扰着学术界。挖掘祖国医学宝库精髓,运用中医中药防治高血压病已成为一种强有力的手段。
中医理论研究表明,“阳亢”、“血瘀”为高血压病发病的基本病理环节,该药现有技术有采用丹参、潼蒺藜等中草药制成汤剂治疗轻中度原发性高血压病(血瘀阳亢证),存在服用、携带不便及质量不容易控制、每天服用量超大等不足。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足,提供一种符合中药制剂现代化的治疗高血压的中药复方制剂及其制备方法。
本发明采用中药原料药丹参、白蒺藜、潼蒺藜(沙苑子)、泽泻、青葙子制备治疗高血压的中药复方制剂,优选制备颗粒剂。
其中原料药的重量配比是:丹参9g 白蒺藜12g 潼蒺藜12g 泽泻9g 青葙子9g。
本发明以丹参素及总黄酮提取率为指标,应用正交设计实验优选颗粒剂的提取工艺;对中试成品进行质量检查,包括溶化性、粒度、水分,装量差异,微生物限度等;用HPLC法测定药材中丹参酮IIA和丹参素的含量,测定颗粒中丹参素的含量并建立质量标准;采用TLC法对复方制剂中泽泻和沙苑子两味药进行定性鉴别。本发明优选的提取工艺为6倍量的70%乙醇,加热回流提取两次,每次1.5小时;除粒度外,中试成品颗粒的其他检查项结果均符合中国药典所要求达到的标准;采用TLC法鉴别出颗粒剂中泽泻和沙苑子;HPLC测定指标成分丹参素的流动相为甲醇-0.5%甲酸(1∶8),颗粒剂中丹参素的含量定为不低于1.40mg/g。所建立的颗粒质量标准专属性强,含量测定准确,可用于本发明颗粒剂的质量标准,本发明为进行大生产化提供可靠依据。
本发明复方制剂兼顾“活血化瘀”、“平肝潜阳”两个重要环节,组方合理,具有如下优点:
动物实验结果表明,能降低麻醉犬血压,可能通过降低外周阻力发挥作用,并具有改善血流动力学的作用具有缓慢有效的降压作用;能抑制自发性高血压大鼠(SHR)血压升高,作用平缓而持久,能改善高血压内皮细胞功能,可能与降低SHR血浆ET-1、AngII,提高血浆NO水平有关,还能改善SHR大鼠高血压相关行为;能改善SHR血液流变学指标,调节SHR纤溶系统活性;改善急性血瘀证血液流变学、抗血小板聚集及体外血栓形成,控制SHR随周龄而上升的血压,逆转高血压左心室肥厚;从活血化瘀---改善血液流变学,平肝潜阳---抑制交感神经活性,减少去甲肾上腺素的释放,降低血浆AngII水平等方面控制血压,逆转左心室肥厚;对血管紧张素II(ATII)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响实验,发现本复方制剂药物血清具有抗VSMC增殖作用,抑制VSMC DNA合成,在一定范围内有剂量依赖性。此外,还可改善增殖VSMC的超微结构。急性毒理实验发现,小鼠在给予活血潜阳颗粒生药浸膏后,在各时间点各组小鼠体重无明显差异,所有给药小鼠未出现死亡,也未发现其它与给药有关的临床表现;长期毒理实验发现,在给药3个月、6个月和恢复期内,本发明复方制剂对大鼠的各重要脏器均未出现与药物相关的病理学改变,未见有大鼠死亡,也未出现毒性反应,血液学、凝血酶原时间和病理组织学检查,均未发现与药物明显相关的异常变化。说明本复方制剂的临床用药量是一个相当安全的剂量。
临床研究结果表明,能显著改善头晕、头痛、心烦、失眠、手足麻木、腰膝酸软、舌质紫暗、舌体瘀斑等临床症状;可以有效阻止高血压病导致的靶器官损害。活血潜阳胶囊能一定程度地改善高血压血管重建情况,可能与改善血浆ET-1、AngII、TXB2/6-keto-PGF1α及bFGF在血管壁的分布情况有关。可进一步提高中医药治疗高血压病及其并发症疗效。
具体实施方式
实施例1 提取工艺研究
药材及对照品:
丹参、白蒺藜、潼蒺藜(沙苑子)、泽泻、青葙子等五味药材均购于上海康桥中药饮片有限公司,并经鉴别均符合中国药典规定;
丹参素钠:(批号110855-200203)购于中国药品生物制品鉴定所;
芦丁:(批号)购于中国药品生物制品鉴定所。
试剂:医用95%乙醇 批号 A2-54(上海振兴化工一厂);甲醇:色谱级;蒸馏水。
仪器:马头牌JYT-10架盘药物天平(上海医用激光仪器厂);
HHS0-2型电恒温水浴锅(上海医疗器械五厂);
W201S恒温水浴锅(上海申生科技有限公司);
R206D型旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司);
SHB-IIIA型循环水式多用真空泵(上海豫康科教仪器设备有限公司);
ZK-82B型真空干燥箱(上海市实验仪器总厂);
FA-1004型电子天平(上海天平仪器厂);
HP1100型高效液相色谱仪(美国惠谱公司);
HP8453紫外分光光度仪(美国惠谱公司)。
正交设计确定提取工艺条件:
采用醇提工艺,在整个提取过程中,提取所用醇的浓度和量以及提取时间对丹参素收率的影响较大,故采用正交实验优选醇提的最佳条件。按L9(34)正交表进行实验。表1是正交试验因素水平表。
表1
按配方量的一半称取中药材共九份,按L9(34)正交试验设计表确定的实验条件进行试验。提取液滤过,合并两次的滤液。滤液回收乙醇,用蒸馏水定容于50ml容量瓶中,以测定丹参素及总黄酮的含量。
(1)丹参素
精密称取干燥至恒重的丹参素钠对照品2.85mg置25ml容量瓶,用甲醇定容至刻度,浓度为0.114mg/ml。取所得的9份药液各1ml,经微孔滤膜再次过滤。吸取上述丹参素钠对照品及9份续滤液各5μl注入液相色谱仪,两点法计算含量。
(2)总黄酮
精密称取干燥至恒重的芦丁15.2mg,用70%乙醇定容于50ml容量瓶中,浓度为0.304mg/ml。精密移取上述芦丁溶液0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0ml,分别置25ml容量瓶中。精密移取5%NaNO2 1.0ml,放置6分钟;再精密加入10%Al(NO3)3 1.0ml,放置6分钟;最后精密移取NaOH试液5.0ml,并用70%乙醇定容。放置30分钟后,用紫外分光光度仪测定总黄酮的含量,作标准曲线,0管作为空白。Y=0.4246X-0.0154R2=0.9995(X为浓度,Y为吸收值)。另移取9份药液各0.1ml,分别置25ml容量瓶中,处理方法同上。将测得结果代入标曲,计算总黄酮含量。表2是正交试验设计表。表3是正交试验直观分析表。
表2
表3
直观分析表明,以丹参素提取率为指标,乙醇的浓度对丹参素的提取率影响最大,乙醇加入量和提取时间的影响均较小,其中提取时间对丹参素的提取率影响稍大。选取最优的水平组合为A1B2C2。以总黄酮提取率为指标,同样也是乙醇浓度的影响最大,提取时间次之,乙醇加入量对总黄酮提取率的影响为最小。选取最优的水平组合为A2B1C2。
由于用单指标不能完全反映实验结果,故采用综合评分法,即以丹参素和总黄酮来综合判定结果。综合指标=丹参素含量×50%+总黄酮含量×50%。
表4是正交试验综合指标分析表。表5是正交实验方差分析表(综合指标)。
表4
综合指标分析表表明,同样是乙醇浓度的影响最大,提取时间次之,乙醇加入量对总黄酮提取率的影响为最小。故优选的水平组合为A2B1C2。
表5
方差分析表明:提取用的乙醇浓度对有效成分的提取量有显著性差异;加醇量和提取时间对有效成分的提取量无显著性差异。
与原工艺(水提醇沉)试验比较结果显示,水提醇沉工艺无论丹参素含量或总黄酮含量均较低。特别是主要药效成分丹参素,原工艺的提取率只是优选工艺的17.18%;总黄酮提取率优选工艺为原工艺的162.22%。表6是两种工艺对有效成分提取率的比较。
表6
实施例2 剂型选择
采用优选的工艺提取3份,每份为处方的一半量(25.5g)回收乙醇后用蒸馏水定容于50ml容量瓶中。分别从上述3份样品中精密移取10ml药液置3个已干燥恒重的蒸发皿中,水浴至干,再放入烘箱到恒重。计算得膏率。表7是优选工艺的得膏率计算。
表7
根据得膏率计算日服用量=51g×14.15%=7.2g,加上辅料后在10g以上,按每片片剂或每粒胶囊0.5g估算,则每天需服用20片(粒)以上,大大超过人们的日常服药习惯。无法制成片剂、胶囊剂,故选择颗粒剂。
颗粒项检查:
按上述方案常规制备颗粒剂,
外观性状:干燥;颗粒均匀;色泽一致,为棕色细小颗粒;无吸潮,结块。
粒度:取单剂量分装的颗粒剂5袋,称定重量,置药筛内过筛。过筛时,将筛保持水平状态,左右往返轻轻筛动3分钟。计算不能过一号筛(10目)和能通过四号筛(65目)的颗粒和粉末总和,应不得过8.0%。实际操作时以能找到的,相近的14目和60目筛替代药典要求的一号筛和四号筛。表8是粒度检查分析表。
表8
由上表可见,不能通过14目筛和能通过65目筛的颗粒所占比例明显超过药典规定。
溶化性:取成品10g加20倍热水(200ml),搅拌。1-2分钟内全部溶化;颜色类似颗粒但稍淡,为浅棕色;不澄清,有轻微混浊;无焦屑等异物。
装量差异:取供试品10袋,分别称定每袋内容物的重量,每袋的重量与标示装量相比较,超出限度的不得多于2袋,并不得有1袋超出限量度一倍。标示量1.5g以上至6g(本品为4.5g)的,装量差异限度为±7%。表9是装量差异分析表。
表9
每袋的装量差异均小于±7%,合格。
水分检查:因不含挥发性成分,采用烘干法测定水分。
取供试品2~5g,平铺于干燥至恒重的扁形称瓶中,厚度不超过5mm,精密称定。开瓶在100~105℃干燥5小时,盖瓶,移置干燥器中,冷却30分钟,精密称定重量W1。在上述温度干燥1小时,冷却,称重W2。至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量,计算供试品中含水分的百分数。颗粒剂药典规定不得超5.0%,因制作工艺控制水分在≤2.5%,所以应不得超2.5%。表10是水分测定。
表10
微生物限度:细菌:≤1000只/g,霉菌酵母菌:≤100只/g,大肠杆菌:未检出。
实施例3 颗粒质量标准研究
丹参药材中有效成分含量测定:
1、丹参酮IIA含量的测定
(1)色谱条件与系统适应性试验:
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-水(15∶5)为流动相;检测波长λ270nm;理论板数按丹参酮IIA峰计算应不低于2000。
(2)制备对照品溶液:
称取丹参酮IIA对照品2.55mg,置25ml棕色容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀;精密量取1ml,置10ml棕色容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。(每1ml中含丹参酮IIA10.2μg)。
(3)制备供试品溶液:
取丹参药材粉末(过三号筛)0.3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,称定重量,加热回流1小时,放冷,密塞,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。
(4)测定法:
分别精密吸取对照品溶液5μl,供试品溶液10μl注入液相色谱仪,测定,即得。
表11是丹参药材中丹参酮IIA含量测定。
表11
2丹参素含量的测定
(1)色谱条件与系统适应性试验:
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-0.5%甲酸(1∶8)为流动相;检测波长λ280nm。
(2)制备对照品溶液:
精密称取丹参素钠对照品2.85mg,置25ml棕色容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。(每1ml中含丹参素钠0.114mg)。
(3)制备供试品溶液:
取丹参药材20g共3份,精密称定。加入10倍量的水,煎煮分别为1小时、1.5小时和2小时。将提取液定容至250ml。吸取少许,经微孔滤膜过滤,取续滤液,得。
(4)测定法:
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液5μl注入液相色谱仪,测定,即得。
表12丹参药材中丹参素含量测定。
表12
3、丹参素含量测定(HPLC)的成品颗粒处理方法的确定
色谱条件通上。
确定溶剂:
(1)称取平行的两份样品,分置于25ml容量瓶中,一份用蒸馏水定容,另一份用甲醇定容,超声30分钟,经微孔滤膜过滤,取续滤液。
(2)称取丹参素钠对照品12.1mg,用甲醇定容于25ml容量瓶,以次为母液,浓度为0.484mg/ml。从母液中移取1.0ml置10ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,浓度为0.0484mg/ml。
(3)吸取稀释后的丹参素钠对照品液5μl注入高效液相仪,用于定位。
(4)吸取两份用不同溶剂溶的样品续滤液5μl注入高效液相仪,每份进3针,比较不同溶剂的效果。
(5)结果:用水溶的样品图谱上锋形较佳,分离度较好。确定溶剂为水。
确定超声提取时间:
(1)称取平行的样品6份,置10ml容量瓶中,用蒸馏水定容。
(2)以2份为一组,3组的超声提取时间分别是10分钟,20分钟和30分钟,超声后经微孔滤膜过滤,取续滤液。
(3)吸取上述稀释后的丹参素钠对照品液5μl注入高效液相仪;吸取6份样品续滤液10μl注入高效液相仪。用两点法计算丹参素提取量,比较超声时间对提取量的影响。表13是超声时间对丹参素提取量的影响。
表13
由上表可得:超声时间对丹参素的提取量有一定影响,但差异量不大,故选定超声时间为10分钟。
本发明确定样品处理方法为:用蒸馏水溶,并超声10分钟。
颗粒中丹参素含量测定(HPLC)的方法学研究
标准曲线的制定:称取105℃干燥至恒重的丹参素钠对照品12.1mg,置25ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,从中移取1.0ml置5ml容量瓶,用甲醇溶解并稀释至刻度,得浓度为0.0968mg/ml的丹参素钠对照品溶液,分别吸取2μl,4μl,6μl,8μl,10μl,按上述的色谱条件进行测定。以峰面积积分值为纵坐标Y,丹参素钠对照品含量为横坐标X(mg),绘制标准曲线。计算回归方程:
Y(Area)=639.160301X-0.9397103 r=0.99999
即丹参素在0.1936mg~0.9680mg之间线形关系良好。
表14是丹参素标准曲线(n=5)。
表14
吸取浓度为0.0968mg/ml的丹参素钠对照品溶液20μl,重复进5次,计算丹参素的RSD=0.17%。表15是精密度实验结果。
表15
重复性实验:平行取样品5份,精密称定。用蒸馏水定容于10ml容量瓶,超声10分钟。经微孔滤膜过滤,取续滤液10μl,注入液相色谱仪。测定并计算丹参素含量的RSD=1.38%。表16是重复性实验结果。
表16
稳定性实验:取样品一份,精密称定,处理方法同重复性实验。每隔1.5小时进20μl,测定并计算丹参素含量的RSD=2.46%。表17是稳定性实验结果。
表17
由RSD<3%可得,在颗粒水溶后的9小时内丹参素含量较稳定。
加样回收率实验:平行取已知含量的样品6份,精密称定。分别加入一定量的标准品,具体为:1,2号样品加样品中含量的80%;3,4号加100%;5,6号加120%。处理方法同重复性实验。进样量为10μl,测定含量并计算回收率。表18是加样回收率实验结果。
表18
丹参素转移率计算:上述成品颗粒的生药量为63.75kg,其中丹参药材为11.25kg。制成浸膏,加入辅料共制得1000包颗粒,每包重4g,即每包中含丹参药材11.25g。利用重复性实验的数据计算转移率。丹参素药材含量按表12的0.187%计算。表19是丹参素转移率计算。
表19
TLC定性鉴别:
沙苑子:
(1)称取沙苑子药材粉末(40目)1g,于索氏提取器中,加70ml石油醚(60~90℃),回流提取5小时。取出,连同滤纸筒,置50ml锥形瓶中,加75%乙醇30ml,浸泡1小时,再超声30分钟。用滤纸过滤,取滤液5ml,蒸干,加1ml甲醇使溶,得药材溶液。
(2)称取成品颗粒(浸膏-辅料1∶1)1g,加甲醇5ml,超声30分钟。用滤纸过滤,滤液浓缩到1ml左右,得成品颗粒溶液。
(3)称取自制阴性干浸膏(缺沙苑子)0.5g,处理方法同成品颗粒,得阴性对照溶液。
(4)用定量毛细管吸取药材溶液,成品颗粒溶液和阴性对照溶液各15μl,点于聚酰胺薄膜上,展开剂为甲醇-水(4∶1),展开。取出,晾干,喷以1%三氯化铝溶液,120℃加热5分钟,于365nmUV下观察荧光。
(5)结果:成品颗粒溶液色谱与沙苑子药材溶液色谱在相应位置有相同荧光斑点;
阴性对照溶液的色谱在相应位置无荧光斑点。
(6)荧光图谱见附录()
泽泻:
(1)称取泽泻对照药材粉末(40目)0.5g,加乙酸乙脂15ml,超声30分钟。放冷,用滤纸过滤,滤液浓缩至0.5ml,得对照药材溶液。
(2)称取成品颗粒2.5g(浸膏-辅料1∶1),加硅藻土1g,研匀。加入乙酸乙脂10ml,超声30分钟。放冷,用滤纸过滤,滤液浓缩至0.5ml,得成品颗粒溶液。
(3)称取自制阴性干浸膏1.25g,处理方法同成品颗粒,得阴性对照溶液。
(4)用定量毛细管吸取药材溶液,成品颗粒溶液和阴性对照溶液各15μl,点于HSG硅胶预置板,展开剂为氯仿-乙酸乙脂-甲酸(6∶3.5∶0.5),展开。取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,105℃烘5分钟,待其显色,观察。
(5)结果:成品颗粒溶液色谱与沙苑子药材溶液色谱在相应位置有相同荧光斑点;
阴性对照溶液的色谱在相应位置无荧光斑点。
本发明实验材料和仪器均为市购。
Claims (7)
1、一种治疗高血压的中药复方制剂,其特征是由下列原料药与药用载体制成:
丹参、白蒺藜、潼蒺藜、泽泻、青葙子。
2、根据权利要求1的中药复方制剂,其特征是其中各原料药的重量配比为:
丹参9g 白蒺藜12g 潼蒺藜12g 泽泻9g 青葙子9g。
3、权利要求1或2的中药复方制剂的制备方法,其特征是以丹参素及总黄酮提取率为指标,用正交设计优选提取工艺;对成品进行质量检查;用HPLC法测定药材中丹参酮II A或丹参素的含量,并建立质量标准;用TLC法对复方制剂中泽泻和/或潼蒺藜进行定性鉴别。
4、根据权利要求3的制备方法,其特征是所述的提取工艺为6倍量的70%乙醇,加热回流提取两次,每次1.5小时。
5、根据权利要求3的制备方法,其特征是所述的HPLC测定指标成分丹参素的流动相为甲醇-0.5%甲酸1∶8。
6、根据权利要求3的制备方法,其特征是所述的HPLC法测定药材中丹参素的含量定为不低于1.40mg/g。
7、根据权利要求1或2的中药复方制剂,其特征是所述的制剂是颗粒剂。
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