CN101244072B - 积雪草苷在制备抗肺纤维化迁延期的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了积雪草苷在制备抗肺纤维化迁延期的药物中的新应用。在肺纤维化迁延末期，积雪草苷在体内可在促纤维化的细胞因子作用下产生抗肺纤维化作用，因此本发明还公开一种抗肺纤维化迁延期的药物组合物，其活性成分包括积雪草苷和外源性的促纤维化的细胞因子。

Description

积雪草苷在制备抗肺纤维化迁延期的药物中的应用

技术领域

本发明涉及积雪草苷的药物用途，特别涉及一种积雪草苷在抗肺纤维化迁延期中的新应用。

背景技术

本申请人公开号为CN1439376A的专利申请中公开了积雪草苷在制备抗肺纤维化药物中的应用。其中显示积雪草苷在肺纤维化前4周，即肺纤维化的炎症期及纤维化初期的应用具有一定的抗纤维化作用。然而，肺纤维化的病理过程是个迁延、渐进的过程，其通常分为四个阶段：I期急性肺泡炎，II期急性肺泡炎演变为慢性，III期病变进行性加重、间质内胶原组织紊乱、大量纤维组织增生，IV期为本病晚期、肺泡结构完全损害、囊性变形成蜂窝肺。

现有大量研究发现，有许多的细胞因子在肺纤维化发生发展中起关键作用，其中促纤维化的主要有两类：1)参与局部损伤和炎症反应的细胞因子：肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)、单核细胞趋化因子(MCP-1)等，2)参与纤维化进展的细胞因子：转化生长因子-β(TGF-β)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、内皮素-1(ET-1)、血小板衍生生长因子(PDGF)、胰岛素样生长因子(IGF-1)、结缔组织生长因子(CTGF)等(韦小瑜、何云、程明亮.细胞因子与肺纤维化.西南军医，2006年4月)。因此，这些细胞因子在肺纤维化的炎症期及纤维化初期的进展期中含量较高，而在纤维化的中、晚期纤维化的病理活动渐趋平缓、乃至静止，上述各种促纤维化的细胞因子含量也逐渐恢复，进入了肺纤维化的迁延期。

目前治疗肺纤维化的药物大多针对肺纤维化的炎症期和纤维化进展期，如糖皮质激素、N-乙酰半胱氨酸等，而对于纤维化迁延期，这些药物无明显疗效且副反应大，目前尚无有效药物。

发明内容

本发明要解决的技术问题即是上述课题，提供积雪草苷在抗肺纤维化中的新应用，即在制备抗肺纤维化迁延期的药物中的新应用。

本发明所说的积雪草苷(Asiaticoside)，又称亚细亚皂苷，积雪苷，积雪草甙等，其是从中草药积雪草[Centella asiatica(L.)Urb.]中提取的一种苷类化合物，分子式为C₄₈H₇₈O₁₉。其提取方法可参见上述本申请人的专利申请文件，也可商业购得。

本发明人在进一步以博莱霉素诱导的肺纤维化鼠的动物试验研究中发现，在博莱霉素给药(造模)28天后模型组测得肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、内皮素-1(ET-1)等细胞因子还处于较高水平；而在博莱霉素给药第50天时，测得上述细胞因子TNF-α、TGF-β已恢复正常(模型组与正常组统计学上无差别意义)，而ET-1也较第28天时明显下降，说明博莱霉素给药第28天后，进入了肺纤维化的迁延期，特别是至第50天时，纤维化活动基本静止。另外，动物模型显示博莱霉素给药第50天时大鼠肺纤维化有所自行恢复，而药物组在给予积雪草苷用药28天后，继续用药至49天，第50天的病理显示较模型组炎症及纤维增生程度更轻。更令人惊奇地是：在造模第50天始分别给予积雪草苷、积雪草苷+外源性细胞因子(TNF-α、bFGF、ET-1)治疗28天，第78天时发现积雪草苷+外源性细胞因子给药组的病理示肺间隔呈轻度局灶性增厚，增生灶内只有少量成纤维细胞增生，较单给予积雪草苷组增生范围和程度均较轻。可见，积雪草苷在促纤维化的细胞因子，不管内源性还是外源性的协同作用下，具有治疗迁延期的肺纤维化的作用；特别是对于细胞因子水平低的纤维化静止期，当同时给予外源性促纤维化的细胞因子时，积雪草苷还能发挥抗纤维化的治疗效 果。因此，对于发现时已处于肺纤维化迁延期的众多患者的治疗，无疑具有重要的意义；而且由于积雪草苷是中草药来源的天然化合物，众所周知其较激素和免疫抑制剂的副作用更小、安全性更佳。

故而，本发明还提供一种抗肺纤维化迁延期的药物组合物，其活性成分包括积雪草苷和外源性的促纤维化的细胞因子。

根据本发明，所说的“肺纤维化迁延期”是指肺纤维化炎症期后，纤维增生趋缓，乃至可能静止的疾病阶段，此阶段纤维化细胞因子水平已从高峰逐渐回落乃至恢复正常。

本发明所述“外源性”是指非被给药者自身体内产生，而由体外给予的，其包括天然提取或重组等方法制得。所说“促纤维化的细胞因子”如背景技术中所述，优选自肿瘤坏死因子α、碱性成纤维细胞生长因子以及内皮素-1中的一种或几种。

具体实施方式

下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。

其中所用的积雪草苷为根据现有技术，如上述CN1439376A的专利文献中公开的方法来自行提取：将积雪草总苷500g加水溶解，过滤，沉淀干燥，加丙酮回流，过滤，残渣挥去丙酮，加乙酸乙酯、水混合液回流，过滤，残渣70℃干燥，粉碎即得积雪草苷粉。用HPLC检测，积雪草苷含量可达90％以上。上述积雪草总苷为常规市售产品。

实施例1

博莱霉素致大鼠肺纤维化模型的建立：雄性SD大鼠，体重200g-250g。用3％速可眠麻醉，平放于手术台上，固定。酒精消毒颈部后逐层暴露气管，经气管软骨环间隙向心端进针，以博莱霉素5mg/kg的剂量注入，将大鼠直立，随即旋转片刻使溶液均匀分布于肺内，缝合。待大鼠清醒后，随机分组。次日起给药，积雪草苷组设3个剂量组，分别为4、12、36mg/kg口服×28天，另设模型对照组和正常组。模型组及正常组给予生理盐水(NS)。在积 雪草苷给药的第28天，分别对各组大鼠进行血清细胞因子测定。结果如下：

表1、第28天时各组细胞因子含量的影响

^**与模型组比较P<0.01     ^▲▲与正常组比较P<0.01

可见造模第28天时，模型组的纤维化细胞因子含量明显较正常组高，经积雪草苷治疗后，纤维化细胞因子含量有所降低。

实施例2

将实施例1中的各积雪草苷用药组再分成a、b两组，a组从第29天始停用药物治疗，给予相应剂量生理盐水，b组继续给予药物治疗直至第49天，即积雪草苷用药组分别为4、12、36mg/kg口服×49天，模型组及正常组给予生理盐水(NS)。在积雪草苷给药的第50天，分别对各组大鼠进行血清细胞因子测定，并取大鼠的肺组织制作病理切片观察病理变化。结果如下：

表2、第50天时各组细胞因子含量的影响

其中积雪草苷用药a组细胞因子含量与b组相仿，在此不重复列出。

可见，在造模后第50天，细胞因子TNF-α、TGF-β及ET-1已恢复正常(模型组与正常组统计学上无差别意义)，说明纤维化活动渐趋缓，进入迁延期。

病理显示：

正常对照组：动物未见肺淤血或水肿，肺组织亦无炎细胞浸润及纤维化。

模型组：动物的肺组织各切片散在局灶性中度肺泡隔增厚，其中见有以淋巴细胞为主炎细胞浸润；并见纤维母细胞或成纤维细胞增生，并见肺泡内脱落变性肺泡上皮细胞及炎细胞。伴有轻度小血管壁透明变性，偶见毛细血管微血管血栓形成。

积雪草苷药物组(a组)：第50天动物的肺组织内可见淋巴细胞为主的轻度炎症和肺泡炎，肺泡间隔轻度增生，并可见肺膜下轻度肺泡萎陷或肺气肿，但上述病变的程度和范围较模型组明显减轻。

积雪草苷药物组(b组)：第50天各剂量组均未见肺淤血或肺水肿，肺泡隔轻度炎细胞浸润，未见成纤维细胞伸入肺泡腔内，亦未见有肺泡透明膜形成。未见呼吸性支气管纤维化；亦未见弥漫性间质纤维化。各切片均见轻度肺不张或代偿性肺气肿。

可见，肺纤维化的大鼠在第28天后未用药也可自行部分修复；但积雪草苷药物组的效果更明显，其中，连续用药49天后比用药28天的效果更佳。

实施例3

造模试验同实施例1，造模后第50天起给药，积雪草苷组设3个剂量组，分别为4、12、36mg/kg，另设模型对照组和正常组。模型组及正常组给予生理盐水。口服给药周期为28天(即从造模开始至第77天)。第78天分别对各组大鼠进行血清细胞因子测定(结果如表3所示)及肺部病理检查。

表3、第78天时各组细胞因子含量的影响

另外，设置积雪草苷+细胞因子药物组，在造模后第50天给予积雪草苷(分为4、12、36mg/kg三个剂量组)的同时，分别给予TNF-α(中科院上海生物工程中心)12.5ug/kg静脉给药，每天一次×28天，在第78天对各组大鼠进行TNF-α测定(结果如表4所示)及肺部病理检查；或者腹腔注射bFGF(sigma公司)4800AU/2ml/只，每天一次×28天，在第78天对各组大鼠进行TGF-β测定(结果如表5所示)及肺部病理检查；或者给予ET-1(sigma公司)2μg/kg静脉给药，每天一次×28天，在第78天对各组大鼠进行ET-1测定(结果如表6所示)及肺部病理检查；另设细胞因子组(给予生理盐水+上述剂量的细胞因子)，以及模型组和正常组(给予生理盐水)作为对照。

表4、积雪草苷+TNF-α对第78天各组TNF-α含量的影响

^**与细胞因子组比较P<0.01     ^▲▲与正常组比较P<0.01

表5、积雪草苷+bFGF对第78天各组TGF-β含量的影响

^**与细胞因子组比较P<0.05  ^▲▲与正常组比较P<0.01

表6、积雪草苷+ET-1对第78天各组ET-1含量的影响

^**与细胞因子组比较P<0.01    ^▲▲与正常组比较P<0.01

可见，在造模后第78天，细胞因子组测定值均明显升高，说明这些细胞因子对纤维化已经产生了一定的影响，而此期单纯积雪草苷药物治疗对细胞因子TNF-α、TGF-β影响不大(各药物组与模型组统计学上无差别意义)。

病理结果：

正常组：动物肺组织结构完好，未见出血、增生、水肿、炎症及纤维化等表现。

模型组：动物肺组织内炎症已基本消退。仅有散在的少量灶性区域有少 许淋巴细胞浸润。肺间隔呈中度局灶性增厚。增生灶内仍有成纤维细胞轻度至中度增生。纤维增生已累及终末细支气管周围，胸膜下尚可见轻度肺泡萎陷或肺气肿。

单纯积雪草苷给药组：肺组织内无明显炎症可见。仅有散在的灶性淋巴细胞轻度浸润。肺间隔呈中度局灶性增厚。增生灶内见少量成纤维细胞增生。纤维增生已累及终末细支气管周围，胸膜下尚可见轻度肺泡萎陷或肺气肿。

细胞因子组：动物肺组织内有炎症。镜下灶性淋巴细胞浸润区域较为常见。肺间隔呈中度局灶性增厚，增生灶内有中度的成纤维细胞增生。纤维增生已累及终末细支气管周围。胸膜下尚可见轻度肺泡萎陷或肺气肿。

联合治疗组(即积雪草苷+细胞因子)：动物肺组织内有轻度炎症。镜下灶性淋巴细胞浸润区域较为常见。肺间隔呈轻度局灶性增厚。增生灶内仅有少量成纤维细胞增生。胸膜下偶见轻度肺泡萎陷或肺气肿。其范围和程度远较模型组、单纯积雪草苷给药组轻。

可见，在肺纤维化迁延期，特别是细胞因子水平低时，给予外源性的纤维化细胞因子与积雪草苷联合治疗，可使肺间隔局灶性增厚、肺泡萎陷或肺气肿等肺纤维化程度减轻。

Claims (2)

1.积雪草苷在制备抗肺纤维化迁延期的药物中的应用。

2.一种抗肺纤维化迁延期的药物组合物，其特征在于其活性成分包括积雪草苷和外源性的促纤维化的细胞因子，其中所述的促纤维化的细胞因子选自肿瘤坏死因子α、碱性成纤维细胞生长因子以及内皮素-1中的一种或几种。