CN101235081A - 缩宫素的制备方法 - Google Patents

缩宫素的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101235081A
CN101235081A CNA2008100849408A CN200810084940A CN101235081A CN 101235081 A CN101235081 A CN 101235081A CN A2008100849408 A CNA2008100849408 A CN A2008100849408A CN 200810084940 A CN200810084940 A CN 200810084940A CN 101235081 A CN101235081 A CN 101235081A
Authority
CN
China
Prior art keywords
oxytocin
preparation
reaction
dmf
reaction temperature
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CNA2008100849408A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101235081B (zh
Inventor
吴永平
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yancheng Kaili Pharmaceutical Co ltd
Original Assignee
WUXI KAILI PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by WUXI KAILI PHARMACEUTICAL CO Ltd filed Critical WUXI KAILI PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority to CN2008100849408A priority Critical patent/CN101235081B/zh
Publication of CN101235081A publication Critical patent/CN101235081A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101235081B publication Critical patent/CN101235081B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种缩宫素的制备方法。该方法先分别合成中间体a和中间体b，然后以叠氮基磷酸二苯酯为缩合剂，在DMF、DPPA、二氧六环、哌啶、TFA及DCM存在的条件下，以中间体a和中间体b进行反应，控制反应温度－20～40℃，反应10～40小时，在通入空气氧化反应完成后，经真空干燥除去反应体系中的溶剂，得到缩宫素。本发明具有肽链接完全、纯化简单易行、收率高、目标产物缩宫素的光学活性及化学纯度高的优点。

Description

缩宫素的制备方法
技术领域
本发明涉及药的制备方法，具体地说，本发明是一种缩宫素的制备方法。
背景技术
缩宫素(OXYTOCIN)，又称为催产素，是一种由9个氨基酸残基组成的、具有生物活性的多肽氨基酸产品。缩宫素不仅可作为育龄妇女生育时催产使用，同时该产品在国际上也被广泛应用于动、植物养殖业方面，如用于动物，不仅可提高动物的受胎率及繁殖率，还可提高单位产奶量；用于果树，则不仅可加强果物的优异外观，还能起到催熟的作用。
目前缩宫素的制备方法有液相合成法及固相合成法。
液相合成法采用了苄氧羰酰(CBZ)路线，如文献J.Amer.Chem.Soc.，81(1959)，p.5688-5691，以及：Coll.Czechoslow.Chem.Con.21(1956)，p.202-210，以及：专利GB1097434(1968)公开的方法。
在所公布的液相法制备缩宫素的工艺中，采用了如下述式1的制备路线，即用BOC(叔丁氧羰基)保护的二肽，与已制备的七肽在酸性条件下进行缩合，再经脱保护基处理、氧化后得到目标产物缩宫素。
在该工艺中，七肽的保护基主要为苯基，因此导致脱保护基的条件相对苛刻，并最终导致目标产物缩宫素产品的纯度须经多次处理才能达到期望的化学纯度；同时，因为脱保护基的条件控制严格，导致目标产物缩宫素的光学纯度(效价)难以保证。
Figure S2008100849408D00021
                                                    式1
固相合成法采用了叔丁氧羰基(BOC)路线，如文献“生物化学与生物物理学报，1976年6月，第8卷，第2期，第121-128页”公开的方法；以及中国专利申请CN1990501A(申请号200510112356.5，申请日2005年12月29日，公开日2007年7月4日)所公开的方法。
在所公布的固相法制备缩宫素的工艺中，采用了FMOC(芴甲氧羰基)保护的氨基酸单体，以树脂为载体进行逐个链接，大量采用了TBTU(O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸酯)，或HBTU/HOBt(苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯/1-羟基苯并三唑)作为缩合剂，最终目标产物的纯度通过C18柱或C8柱的分离而得以保证。该工艺虽然保证了目标产物的光学纯度，但处理过程繁琐，且总收率低。
发明内容
本发明克服了上述缺点，提出了一种缩宫素的制备方法。
本发明解决其技术问题所采取的技术方案是：
一种缩宫素的制备方法，由以下步骤组成：
A.分别制备中间体a和中间体b；
Figure S2008100849408D00031
                                                  中间体a
Figure S2008100849408D00032
                                                  中间体b
在中间体a的制备中，采用3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-苯并三嗪-4-酮(简称为“DEPBT”)作为缩合剂；
B.以叠氮基磷酸二苯酯为缩合剂，在DMF、DPPA、二氧六环、哌啶、TFA及DCM存在的条件下，以中间体a和中间体b进行反应，控制反应温度-20～40℃，反应10～40小时，在通入空气氧化反应完成后，经真空干燥除去反应体系中的溶剂，得到缩宫素。如式2所示。
Figure S2008100849408D00041
                                                式2
采用以下方法制备中间体a：在DMF及DEPBT的存在下，控制反应温度在0～40℃，反应0.5～3小时，反应完成后，用固体氢氧化钠或10～30％的氢氧化钠水溶液进行皂化反应，得到中间体a。如式3所示：
Figure S2008100849408D00042
                                                式3
在式3中的原料a1为Boc及Fmoc保护的半胱氨酰酪氨酸(二肽)；a2为甲酯基保护的异亮氨酰谷氨酸(二肽)，可以直接从市场上采购，或按已知的方法自行制备。
采用以下方法制备中间体b：在茴香醚存在下，控制反应温度在0～40℃，反应0.5～3小时，反应完成后，得到中间体b，如式4所示。
                                                式4
式4中的原料b1，为Fmoc保护的五肽树脂，可按常规的肽链接方法予以制备。
在本发明所指明的流程中，所使用的保护基、缩合剂为：
Fmoc-芴甲氧羰基，作为氨基酸的保护基；
BOC-叔丁氧羰基，作为氨基酸的保护基；
Brz-溴代苯基，作为氨基酸的保护基；
Ome-甲酯基团，作为氨基酸的保护基；
MBHA-树脂—肽链接树脂，氨基酸保护；
DPPA-叠氮基磷酸二苯酯，作为新型的缩合剂；
DEPBT-3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-苯并三嗪-4-酮，作为新型的缩合剂。
在本发明中所指明的流程中，所使用的溶剂或试剂为：
DMF-二甲基甲酰胺；
二氧六环；
TFA-三氟乙酸(浓度为0～50％)；
DCM-二氯甲烷；
茴香醚；
哌啶(20～60％的DMF溶液)；
氢氧化钠：固体或10～30％的水溶液。
本发明的优点是：
本发明具有肽链接完全、纯化简单易行、收率高、目标产物缩宫素的光学活性(效价)及化学纯度高的优点。以起始原料五肽树脂计，目标产物缩宫素的收率为7～10％，而已知的国、内外专利工艺的收率约为1～3％。
按本发明流程所制备的目标产物缩宫素，其活性(效价)平均为：600单位/mL；而已知的国内、外专利所制备的目标产物缩宫素的活性(效价)平均为：300～400单位/mL。
具体实施方式
实施例1中间体a的制备
取0.1mol的半胱氨酰酪氨酸(二肽，a1)及异亮氨酰谷氨酸(二肽，a2)，0.1mol的DEPBT，溶于500ml的DMF中，将温度控制在30℃，反应2小时，真空条件(真空度不大于10mmHg)下去除DMF，然后加入30％的氢氧化钠溶液200ml，控制皂化温度30℃，皂化反应时间1小时，得到中间体a。
实施例2中间体b的制备
取0.1mol的五肽树脂b1，加入600ml的茴香醚，控制反应温度为30℃，反应时间为1小时，过滤后去除树脂后得到中间体b。
实施例3缩宫素的制备
将实施例1及实施例2所得产物合并，加入300ml的DMF、120ml的DPPA、100ml的二氧六环，控制反应温度为10℃，反应时间为24小时。反应结束后，过滤并用适量二氧六环/水进行漂洗，然后将滤渣加入100ml的TFA(30％)、400ml的DCM，控制反应温度0℃，反应时间2小时；然后加入500ml的哌啶(50％)以及500ml的DMF，通入足够的空气，控制反应温度不大于10℃，反应时间为3小时，在真空条件(真空度不大于10mmHg)下去除溶剂，得到目标产物缩宫素。
以上对本发明所提供的缩宫素的制备方法进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。

Claims (3)

1.一种缩宫素的制备方法，其特征在于，由以下步骤组成：
A.分别制备中间体a和中间体b；
中间体a
Figure S2008100849408C00012
中间体b
在中间体a的制备中，采用3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-苯并三嗪-4-酮作为缩合剂；
B.以叠氮基磷酸二苯酯为缩合剂，在DMF、DPPA、二氧六环、哌啶、TFA及DCM存在的条件下，以中间体a和中间体b进行反应，控制反应温度-20～40℃，反应10～40小时，在通入空气氧化反应完成后，经真空干燥除去反应体系中的溶剂，得到缩宫素。
2.根据权利要求1所述的缩宫素的制备方法，其特征在于，采用以下方法制备中间体a：在DMF及DEPBT的存在下，控制反应温度在0～40℃，反应0.5～3小时，反应完成后，用固体氢氧化钠或10～30％的氢氧化钠水溶液进行皂化反应，得到中间体a。
3.根据权利要求1所述的缩宫素的制备方法，其特征在于：采用以下方法制备中间体b：在茴香醚存在下，控制反应温度在0～40℃，反应0.5～3小时，反应完成后，得到中间体b。
CN2008100849408A 2008-03-10 2008-03-10 缩宫素的制备方法 Active CN101235081B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2008100849408A CN101235081B (zh) 2008-03-10 2008-03-10 缩宫素的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2008100849408A CN101235081B (zh) 2008-03-10 2008-03-10 缩宫素的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101235081A true CN101235081A (zh) 2008-08-06
CN101235081B CN101235081B (zh) 2010-07-07

Family

ID=39919016

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2008100849408A Active CN101235081B (zh) 2008-03-10 2008-03-10 缩宫素的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101235081B (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101914136A (zh) * 2010-08-17 2010-12-15 安徽宏业药业有限公司 一种液相合成缩宫素的方法
CN102850441A (zh) * 2012-07-23 2013-01-02 无锡市凯利药业有限公司 一种缩宫素的固相合成方法
CN103012319A (zh) * 2011-09-20 2013-04-03 浙江九洲药业股份有限公司 瑞格列奈中间体的合成工艺改进
CN106075393A (zh) * 2016-06-11 2016-11-09 深圳市樊溪电子有限公司 一种间苯‑缩宫素注射液及其制备方法
CN106478780A (zh) * 2017-01-03 2017-03-08 上海上药第生化药业有限公司 一种缩宫素[4‑Glu]的制备方法
WO2018166146A1 (zh) * 2017-03-17 2018-09-20 兰州凯博药业股份有限公司 一种多肽液相合成缩宫素的方法
CN109336948A (zh) * 2018-09-21 2019-02-15 重庆奥舍生物化工有限公司 新型有机磷多肽缩合剂在多肽合成中的应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5859190A (en) * 1997-02-04 1999-01-12 Trega Biosciences, Inc. Combinatorial libraries of hydantoin and thiohydantoin derivatives, methods of making the libraries and compounds therein
EP1605894A2 (en) * 2003-03-05 2005-12-21 PR Pharmaceuticals Oxytocin controlled release formulations and methods of using same
CN1990501B (zh) * 2005-12-29 2011-10-05 周逸明 固相多肽合成缩宫素的制备方法

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101914136A (zh) * 2010-08-17 2010-12-15 安徽宏业药业有限公司 一种液相合成缩宫素的方法
CN101914136B (zh) * 2010-08-17 2012-07-04 安徽宏业药业有限公司 一种液相合成缩宫素的方法
CN103012319A (zh) * 2011-09-20 2013-04-03 浙江九洲药业股份有限公司 瑞格列奈中间体的合成工艺改进
CN103012319B (zh) * 2011-09-20 2015-06-10 浙江九洲药业股份有限公司 瑞格列奈中间体的合成工艺改进
CN102850441A (zh) * 2012-07-23 2013-01-02 无锡市凯利药业有限公司 一种缩宫素的固相合成方法
CN102850441B (zh) * 2012-07-23 2016-05-25 无锡市凯利药业有限公司 一种缩宫素的固相合成方法
CN106075393A (zh) * 2016-06-11 2016-11-09 深圳市樊溪电子有限公司 一种间苯‑缩宫素注射液及其制备方法
WO2017210989A1 (zh) * 2016-06-11 2017-12-14 深圳市樊溪电子有限公司 一种间苯三酚-缩宫素注射液及其制备方法
CN106478780A (zh) * 2017-01-03 2017-03-08 上海上药第生化药业有限公司 一种缩宫素[4‑Glu]的制备方法
CN106478780B (zh) * 2017-01-03 2019-12-31 上海上药第一生化药业有限公司 一种缩宫素[4-Glu]的制备方法
WO2018166146A1 (zh) * 2017-03-17 2018-09-20 兰州凯博药业股份有限公司 一种多肽液相合成缩宫素的方法
CN109336948A (zh) * 2018-09-21 2019-02-15 重庆奥舍生物化工有限公司 新型有机磷多肽缩合剂在多肽合成中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN101235081B (zh) 2010-07-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101235081B (zh) 缩宫素的制备方法
CN105017387B (zh) 一种制备利那洛肽的方法
CN106632604B (zh) 一种Teixobactin类似物及其制备方法和应用
EP3398957A1 (en) Method for synthesizing etelcalcetide
CN104927044B (zh) 高纯度聚乙二醇醛类衍生物的制备方法
CN103012563A (zh) 抗菌肽依色格南的固相合成方法
CN108440654A (zh) 一种抗菌活性环六肽Thermoactinoamide A的合成方法
CN101838308B (zh) 依替巴肽的固相合成方法
CN106243214B (zh) 一种美拉诺坦ⅰ的制备方法
CN106459150A (zh) 合成五肽的制造方法
CN101508724B (zh) 十四肽生长抑素的制备方法
CN102766196A (zh) 一组阳离子抗菌肽及其制备方法和应用
CN113667007A (zh) 一种索马鲁肽侧链的液相制备方法
CN108003222A (zh) 一种普利卡那肽的固相合成方法
CN102816213A (zh) 使用固相和液相组合技术制备普兰林肽的方法
CN105541968B (zh) 一种五肽的制备方法及应用
CN107098950A (zh) 一种ghk或ahk三肽的合成方法
CN106554407B (zh) 一种乌拉立肽的合成方法
KR100336139B1 (ko) 신규의펩티드활성물질및그의제조방법
Suresh Babu One hundred years of peptide chemistry
US20180370904A1 (en) Method for preparing long-chain compound
CN106554406B (zh) 一种乌拉立肽的合成方法
CN102311484A (zh) 一种抑制血管紧张素转移酶的六肽及其制备方法
CN104744563A (zh) 端基具有亲脂性结构的线性脂肽、其制备方法及用途
CN110191892A (zh) 丙氨酸-赖氨酸-谷氨酸三肽衍生物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right

Denomination of invention: Preparing process for synthesizing oxytocin from solid-phase polypeptide

Effective date of registration: 20121213

Granted publication date: 20100707

Pledgee: Jiang Shou commercial (China) Trading Co.,Ltd.

Pledgor: WUXI KAILI PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Registration number: 2012990000795

PLDC Enforcement, change and cancellation of contracts on pledge of patent right or utility model
PC01 Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right

Date of cancellation: 20140109

Granted publication date: 20100707

Pledgee: Jiang Shou commercial (China) Trading Co.,Ltd.

Pledgor: WUXI KAILI PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Registration number: 2012990000795

PLDC Enforcement, change and cancellation of contracts on pledge of patent right or utility model
PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right

Denomination of invention: Preparing process for synthesizing oxytocin from solid-phase polypeptide

Effective date of registration: 20140226

Granted publication date: 20100707

Pledgee: Hainan Jiang Shou Ji base Medicine Co.,Ltd.

Pledgor: WUXI KAILI PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Registration number: 2014990000122

PLDC Enforcement, change and cancellation of contracts on pledge of patent right or utility model
PC01 Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right

Date of cancellation: 20160511

Granted publication date: 20100707

Pledgee: Hainan Jiang Shou Ji base Medicine Co.,Ltd.

Pledgor: WUXI KAILI PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Registration number: 2014990000122

PLDC Enforcement, change and cancellation of contracts on pledge of patent right or utility model
C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20160825

Address after: 224555 Jiangsu Industrial Park, Binhai Economic Development Zone, Yancheng City, Zhongshan Province, two

Patentee after: YANCHENG KAILI PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Address before: 214261 Jiangsu city of Yixing Province Wang Zhen Zhou Peng Gan Cun No. 1

Patentee before: WUXI KAILI PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right
PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right

Denomination of invention: Preparation method of oxytocin

Effective date of registration: 20211216

Granted publication date: 20100707

Pledgee: Binhai Haibin Investment Development Co.,Ltd.

Pledgor: YANCHENG KAILI PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Registration number: Y2021980015205

PC01 Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right
PC01 Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right

Date of cancellation: 20230626

Granted publication date: 20100707

Pledgee: Binhai Haibin Investment Development Co.,Ltd.

Pledgor: YANCHENG KAILI PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Registration number: Y2021980015205

PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right
PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right

Denomination of invention: Preparation method of oxytocin

Effective date of registration: 20230627

Granted publication date: 20100707

Pledgee: Binhai Haibin Investment Development Co.,Ltd.

Pledgor: YANCHENG KAILI PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Registration number: Y2023990000319

PC01 Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right
PC01 Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right

Date of cancellation: 20231124

Granted publication date: 20100707

Pledgee: Binhai Haibin Investment Development Co.,Ltd.

Pledgor: YANCHENG KAILI PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.

Registration number: Y2023990000319