CN101206209B - 一种用hplc法分析西多福韦原料及其制剂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用HPLC法分析西多福韦原料及其制剂的方法，采用此方法可以很好的将西多福韦及其合成过程中引入的有关物质进行有效分离，从而控制西多福韦的质量，准确测定西多福韦原料药及其制剂的含量，指示西多福韦及其制剂的稳定性。本发明所建立的方法专属性强，准确度高，操作简便。
Description
技术领域
本发明涉及一种高效液相分析方法，尤其是一种用HPLC法分析分离西多福韦原料及其制剂的方法。
背景技术
西多福韦是开环核苷酸类似物，能抑制病毒DNA聚合酶，对巨细胞病毒有强的抑制作用，对单纯疱疹病毒、带状疱疹病毒、人类乳头瘤病毒等也有很强的抑制作用。被广泛的用于免疫功能低下患者巨细胞病毒感染的预防和治疗。其结构式为
其在合成的过程当中有几步中间体(有关物质)需要严格控制，其结构式分别为
对于合成西多福韦中引入的有关物质，不论是在原料药还是制剂中都是需要进行质量控制的。因此，实现西多福韦及其有关物质的分离在西多福韦的合成和制剂过程的质量控制方面具有现实意义。
经反复试验发现，用以季铵盐为键合相的强阴离子交换柱(SAX(250mm×4.6mm))，采用甲醇—(0.01mol/L磷酸二氢钠，磷酸调pH4.0)＝40∶60为流动相，可以将西多福韦及其有关物质进行有效分离，从而可以准确控制西多福韦原料药及制剂的质量。本发明的方法能简便、快速、准确地分析西多福韦的纯度和含量并能有效的控制其有关物质。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分析分离西多福韦及其有关物质的高效液相色谱方法，从而保证西多福韦的纯度，实现其原料及制剂的质量控制。
本发明所述的用高效液相色谱法分析西多福韦的纯度以及分离其有关物质的方法，是采用以季铵盐为键合相的强阴离子交换柱(SAX(250mm×4.6mm))，采用甲醇—(0.01mol/L磷酸二氢钠，磷酸调pH4.0)＝40：60为流动相。
上述所说的离子交换色谱柱选自以季铵盐为键合相的强阴离子交换柱(SAX(250mm×4.6mm))。
本发明的流动相中有机相选自下列化合物：甲醇、乙醇、乙腈。
本发明的方法，有机相—缓冲液的体积比为50∶50～20∶80。
上述所说的流动相中缓冲液的pH＝3～4.5。
本发明所述的分析分离方法，可按照以下方法实现：
(1)取各中间体与西多福韦的混合样品适量，用缓冲液溶解样品，配制成每1mL含混合样0.5mg的样品溶液。
(2)设置流动相流速为1.0mL/min，检测波长为237nm，柱温为室温。
(3)取(1)的样品溶液20μL注入液相色谱仪，完成西多福韦及其有关物质的分离与分析。
其中：
高效液相色谱仪：岛津：LC-10ATvp，SPD-M10Avp
色谱柱：SAX(250mm×4.6mm)
流动相：甲醇—(0.01mol/L磷酸二氢钠，磷酸调pH4.0)＝40：60
流速：1.0mL/min
检测波长：260nm
柱温：室温
进样体积：20μL
本发明采用强阴离子交换色谱柱SAX(250mm×4.6mm)，能够有效的分离西多福韦及其有关物质，准确测定西多福韦的纯度；本发明解决了西多福韦及其有关物质的分离问题，从而确保了西多福韦原料药及其制剂的质量可控。(结果见附图1)
附图说明
图1最优选条件的PHLC图，图1中1号峰为中间体3，2号峰为中间体2，3号峰为西多福韦，4号峰为中间体1，可以看出在该条件下西多福韦主峰可以和三个中间体完全分离开来，且西多福韦主峰在11min左右。
图2有机相为乙腈的HPLC图，图2中1号峰为中间体3和中间体2，2号峰为西多福韦，3号峰为中间体1。可以看出，西多福韦与中间体2，中间体3分离良好，且刚好可以和中间体1达到基线分离。
图3甲醇与缓冲液比例为20：80时的HPLC图，图3中1号峰为中间体3，2号峰为中间体2，3号峰为西多福韦，4号峰为中间体1，可以看出在该条件下西多福韦主峰可以和三个中间体完全分离开来，且西多福韦主峰在6min左右。
图4缓冲液浓度为0.02mol/L时的HPLC图，图4中1号峰为中间体3，2号峰为中间体2，3号峰为西多福韦，4号峰为中间体1，可以看出在该条件下西多福韦主峰可以和三个中间体完全分离开来，且西多福韦主峰在6min左右。
图5pH为3时的HPLC图，图5中1号峰为中间体3，2号峰为中间体2，3号峰为西多福韦，4号峰为中间体1，可以看出在该条件下西多福韦主峰可以和三个中间体完全分离开来，且西多福韦主峰在6min左右。
图6pH为4.5时的HPLC图，图6中1号峰为中间体3和中间体2，2号峰为西多福韦，3号峰为中间体1。可以看出，西多福韦与中间体2，中间体3分离良好，且刚好可以和中间体1达到基线分离。
具体实施方式：
实施例1
仪器与条件
高效液相色谱仪：日本岛津：LC-10Avp，SPD-10Avp；
色谱柱：SAX(250mm×4.6mm)强阴离子交换柱；
流动相：乙腈—(0.01mol/L磷酸二氢钠缓冲液，稀磷酸调pH至4)＝40：60；
流速：1.0mL/min；
检测波长：260nm；
柱温：室温；
进样体积：20μL。
实验步骤
分别称取3个中间体与西多福韦各5mg，置于25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取单一中间体及西多福韦各5mg，分别置于4个25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图2，图中1号峰为中间体3和中间体2，2号峰为西多福韦，3号峰为中间体1。可以看出，西多福韦与中间体2，中间体3分离良好，且刚好可以和中间体1达到基线分离。
实施例2
仪器与条件
高效液相色谱仪：日本岛津：LC-10Avp，SPD-10Avp；
色谱柱：SAX(250mm×4.6mm)强阴离子交换柱；
流动相：甲醇—(0.01mol/L磷酸二氢钠缓冲液，稀磷酸调pH至4)＝20：80；
流速：1.0mL/min；
检测波长：260nm；
柱温：室温；
进样体积：20μL。
实验步骤
分别称取3个中间体与西多福韦各5mg，置于25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取单一中间体及西多福韦各5mg，分别置于4个25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图3，图中1号峰为中间体3，2号峰为中间体2，3号峰为西多福韦，4号峰为中间体1，可以看出在该条件下西多福韦主峰可以和三个中间体完全分离开来，且西多福韦主峰在6min左右。
实施例3
仪器与条件
高效液相色谱仪：日本岛津：LC-10Avp，SPD-10Avp；
色谱柱：SAX(250mm×4.6mm)强阴离子交换柱；
流动相：甲醇—(0.02mol/L磷酸二氢钠缓冲液，稀磷酸调pH至4)＝40：60；
流速：1.0mL/min；
检测波长：260nm；
柱温：室温；
进样体积：20μL。
实验步骤
分别称取3个中间体与西多福韦各5mg，置于25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取单一中间体及西多福韦各5mg，分别置于4个25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图4，图中1号峰为中间体3，2号峰为中间体2，3号峰为西多福韦，4号峰为中间体1，可以看出在该条件下西多福韦主峰可以和三个中间体完全分离开来，且西多福韦主峰在6min左右。
实施例4
仪器与条件
高效液相色谱仪：日本岛津：LC-10Avp，SPD-10Avp；
色谱柱：SAX(250mm×4.6mm)强阴离子交换柱；
流动相：甲醇—(0.01mol/L磷酸二氢钠缓冲液，稀磷酸调pH至3)＝40：60；
流速：1.0mL/min；
检测波长：260nm；
柱温：室温；
进样体积：20μL。
实验步骤
分别称取3个中间体与西多福韦各5mg，置于25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取单一中间体及西多福韦各5mg，分别置于4个25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图5，图中1号峰为中间体3，2号峰为中间体2，3号峰为西多福韦，4号峰为中间体1，可以看出在该条件下西多福韦主峰可以和三个中间体完全分离开来，且西多福韦主峰在6min左右。
实施例5
仪器与条件
高效液相色谱仪：日本岛津：LC-10Avp，SPD-10Avp；
色谱柱：SAX(250mm×4.6mm)强阴离子交换柱；
流动相：甲醇—(0.01mol/L磷酸二氢钠缓冲液，稀磷酸调pH至4.5)＝40：60；
流速：1.0mL/min；
检测波长：260nm；
柱温：室温；
进样体积：20μL。
实验步骤
分别称取3个中间体与西多福韦各5mg，置于25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为混合样品溶液。并分别称取单一中间体及西多福韦各5mg，分别置于4个25mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释置刻度，摇匀，作为定性对照溶液。
分别取各对照溶液和混合样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。结果见附图6，图中1号峰为中间体3和中间体2，2号峰为西多福韦，3号峰为中间体1。可以看出，西多福韦与中间体2，中间体3分离良好，且刚好可以和中间体1达到基线分离。
Claims (6)
1.一种高效液相色谱法分析分离西多福韦及其合成中引入的有关物质的方法，其特征在于：采用以季铵盐为键合相的250mm×4.6mm的SAX强阴离子交换柱，甲醇-磷酸二氢钠缓冲溶液或乙腈-磷酸二氢钠缓冲液为流动相。
2.根据权利要求1所述的分析分离方法，所述的流动相中有机相与缓冲液的体积比为40∶60。
3.根据权利要求1所述的分析分离方法，所述的磷酸二氢钠缓冲液的浓度为0.01mol/L～0.02mol/L。
4.根据权利要求1所述的分析分离方法，流动相中缓冲液的pH选择范围为3～4.5。
5.根据权利要求1所述的分析分离方法，其特征在于所述的方法包括以下几个步骤：
(1)取各中间体与西多福韦的混合样品适量，用流动相溶解样品，配制成每1mL含中间体与西多福韦0.05～1mg的样品溶液；
(2)设置流动相流速为0.8～1.2mL/min，检测波长为260nm；
(3)取(1)的样品溶液2-50μL注入液相色谱仪，记录色谱图。
6.根据权利要求5所述的分析分离方法，其特征在于流动相的流速优选为1.0mL/min。
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| CN1700918A (zh) * | 2001-10-26 | 2005-11-23 | P·安杰莱蒂分子生物学研究所 | 关于hiv整合酶的n－取代的羟基嘧啶酮甲酰胺抑制剂 |
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Non-Patent Citations (2)
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| KENNETH C. CUNDY et al..Clinical Pharmacokinetics of Cidofovir in Human Immunodeficiency Virus-Infected Patients.《ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY》.1995,第39卷(第6期),1247-1252. * |
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Assignee: Beijing Wanquan Sunshine Medical Technology Co., Ltd. Assignor: Dezhong Wanquan Pharmaceuticals Tech. Dev. Co., Ltd., Beijing Contract record no.: 2012110000096 Denomination of invention: Method for analyzing cidofovir raw material and preparation thereof by HPLC method Granted publication date: 20110810 License type: Exclusive License Open date: 20080625 Record date: 20120522 |
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