CN101190941B - 具有溶血栓活性的多肽、其制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一系列具有溶血栓活性的多肽、其制备方法及应用。本发明通过试验发现P6A经小鼠体内代谢，其中的代谢产物之一PAK显示出比母体ARPAK更为优秀的溶血栓活性；在此基础上，本发明将PAK中的氨基酸残基调换位置产生变换序列AKP和KPA，并进一步以PAK为结构单元合成重复序列肽(PAK)2(PAK)3、(PAK)4、(PAK)5和(PAK)6，以AKP为结构单元合成重复序列肽(AKP)2、(AKP)3、(AKP)4、(AKP)5和(AKP)6，以KPA为结构单元合成重复序列肽(KPA)2、(KPA)3、(KPA)4、(KPA)5和(KPA)6。动物溶血栓模型试验表明，本发明多肽均具有良好的溶血栓活性。
Description
技术领域
本发明涉及多肽，尤其涉及具有溶血栓活性的多肽、其制备方法及它们作为溶血栓剂的应用，属于生物医药领域。
背景技术
目前临床使用的治疗急性血栓栓塞性疾病的链激酶、尿激酶和重组组织型纤溶酶原激活剂等药物普遍存在全身出血倾向和免疫原性反应，寻找安全有效的溶血栓药物是新药研究的热点之一。大量研究表明，纤维蛋白β链的降解产物-血管活性肽P6A作为小分子内源性寡肽不仅有良好的溶栓活性，而且不存在上述副作用，是理想的溶栓先导结构。P6A的氨基酸序列为ARPAK。我们发现，ARPAK在小鼠体内代谢成为RPAK，PAK，ARPA和ARP四种代谢产物。在大鼠颈动静脉旁路插管溶血栓模型上，PAK显示出比母体ARPAK优秀的溶栓作用。在药物化学研究中，将肽链中的氨基酸残基调换位置产生变换序列，以及将相同的序列拼合产生重复序列，往往可以产生一些意外的结果。
发明内容
本发明的目的之一是提供一类具有良好的溶血栓活性的多肽。
本发明的目的之一是通过以下技术方案来实现的；
一类具有溶血栓活性的多肽，选自以下任意一种的氨基酸序列：
(一)PAK(Pro-Ala-Lys)，PAKPAK(Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys)，PAKPAKPAK(Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys)，PAKPAKPAKPAK(Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys)，PAKPAKPAKPAKPAK(Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys)，PAKPAKPAKPAKPAKPAK(Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys)；
(二)AKP(Ala-Lys-Pro)，AKPAKP(Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro)，AKPAKPAKP(Ala-Lus-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro)，AKPAKPAKPAKP(Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro)，AKPAKPAKPAKPAKP(Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro)，AKPAKPAKPAKPAKPAKP(Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro)；
(三)KPA(Lys-Pro-Ala)，KPA KPA(Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala)，KPA KPA KPA(Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala)，KPAKPAKPAKPA(Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala)，KPA KPA KPA KPA KPA(Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala)，KPAKPA KPAKPAKPAKP(Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala)。
链激酶、尿激酶和重组组织型纤溶酶原激活剂等普遍存在全身出血倾向和免疫原性反应。纤维蛋白β链的降解产物-血管活性肽P6A(ARPAK)作为小分子内源性寡肽不仅有良好的溶栓活性，而且不引起全身出血倾向和免疫原性反应；本发明通过试验发现P6A经小鼠体内的代谢，其中的代谢产物之一PAK显示出比母体ARPAK更为优秀的溶血栓活性；在此基础上，本发明将PAK中的氨基酸残基调换位置产生变换序列AKP和KPA，并进一步以PAK为结构单元合成重复序列肽(PAK)2(PAK)3、(PAK)4、(PAK)5和(PAK)6；以AKP为结构单元分别合成重复序列肽(AKP)2、(AKP)3、(AKP)4、(AKP)5和(AKP)6，以KPA为结构单元合成重复序列肽(KPA)2、(KPA)3、(KPA)4、(KPA)5和(KPA)6。
本发明以上所有多肽均可按照常规的液相接肽法制备而成。
动物溶血栓模型试验表明，本发明多肽均具有良好的溶血栓活性。
为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
本发明中所出现的术语或缩略语的说明：
THF 四氢呋喃
DCC 二环己基酰亚胺
DCU 二环己基脲
OBzl 苄氧基
Boc 叔丁氧羰基
HOBt N-羟基苯并三唑
TLC 薄层层析
DMF 二甲基甲酰胺
NMM N-甲基吗啉
具体实施方式
实施例1PAK的制备
1)制备Boc-Pro-ONP
将1.0g(4.65mmol)Boc-Pro-OH置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌，形成溶液A。将711mg(5.12mmol)对硝基苯酚(HONP)置于25ml三角瓶中，加入8ml无水四氢呋喃溶解，形成溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，得到溶液C。将1.05g(5.12mmol)二环己基羰二亚胺(DCC)加入溶液C中，冰浴搅拌3h，期间任冰浴自行融化，不再加冰。反应混合物过滤，滤除生成的二环己基脲(DCU)。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩，残留物用40ml乙酸乙酯溶解。溶液置于50ml分液漏斗中，以饱和碳酸氢钠水溶液萃洗三遍(10ml×3)，TLC确认酯层无Boc-Pro-OH后，乙酸乙酯层用饱和氯化钠水溶液洗至中性(10ml×3)，分出乙酸乙酯层并置于50ml茄形瓶中用旋转蒸发仪减压浓缩，得到油状产物即为Boc-Pro-ONP。
2)制备Boc-Pro-Ala-OH
油状Boc-Pro-ONP置于50ml茄形瓶中，加入15ml二氧六环溶解，得到溶液A。将496mg(5.58mmol)L-Ala-OH及468mg(5.581mmol)碳酸氢钠固体置于25ml茄形瓶中，加入8ml水溶解，用单通抽出CO2，得到溶液B。将溶液B滴加至搅拌下的溶液A中，并随时用N-甲基吗啉(NMM)调节pH至8-9，持续搅拌12h，分别在第1、3及6小时抽除CO2。TLC检测确认Boc-Pro-ONP消失后，反应混合物用饱和硫酸氢钾水溶液调节至pH 7后用旋转蒸发仪减压浓缩，得到的油状物加1ml水稀释后，继续滴加饱和硫酸氢钾水溶液酸化至pH 2。得到的水溶液置于50ml分液漏斗中，用氯仿萃取三次(15ml×3)。合并氯仿层，并用饱和氯化钠水溶液洗涤至中性(5ml×3)。分出氯仿层，加入无水硫酸钠干燥过夜。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯-石油醚结晶，得950mg无色晶体(72％)即为Boc-Pro-Ala-OH。(Mp 153-155℃，[a]D 25＝109.8(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)287[M+H]+.元素分析(C13H22N2O5)：计算值C 54.53、H 7.74、N 9.78；实测值C 54.67、H 7.82、N9.61。
3)制备Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将500mg(1.75mmol)Boc-Pro-Ala-OH置于50ml茄形瓶中，加入15ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入260mg(1.92mmol)N-羟基苯并三唑(HOBt)及396mg(1.92mmol)DCC，得到溶液A。将948mg(1.75mmol)H-Lys(Z)-OBzl对甲苯磺酸盐置于50ml茄形瓶中，加入15ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到Boc-Pro-Ala-OH消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用40ml乙酸乙酯重新溶解并置于50ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(10ml×3)、饱和氯化钠水溶液(10ml×3)萃洗三遍，分出的乙酸乙酯层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得到无色油状产物1.01g(90％)即为Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。([a]D 25＝-32.7(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)639[M+H]+.1HNMR(CDCl3-d)δ/ppm＝7.371(m，10H)，5.223(s，2H)，5.156(s，2H)，4.601(q，1H)，4.454(t，1H)，4.271(t，1H)，3.494(t，1H)，3.430(t，1H)，3.130(t，2H)，2.193(s，3H)，2.034(t，1H)，1.909(m，2H)，1.817(t，1H)，1.712(m，2H)，1.703(m，1H)，1.506(m，1H)，1.417(s，9H)，1.359(d，3H)，1.278(m，2H)。元素分析(C34H46N4O8)：计算值C 63.93、H 7.26、N 8.77；实测值C 63.80、H 7.33、N 8.95。
4)制备H-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将1g(1.567mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl置于50ml茄形瓶中，用3ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 6ml，反应3小时直到原料点消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次直到得900mg类白色固体(100％)即为H-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl盐酸盐。Mp57-59℃，[a]D 25＝-47.9(C＝19，MeOH)。ESI-MS(m/e)539[M+H]+。元素分析(C29H38N4O6)：计算值C 64.67、H 7.11、N 10.40；实测值C 64.81、H 7.04、N 10.58。
5)制备H-Pro-Ala-Lys-OH
将900mg(1.673mmol)H-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入1.5gPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2直至H-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。H-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物反复用无水乙醚磨洗，得520mg类白色固体(95％)即为H-Pro-Ala-Lys-OH。Mp 117-119℃，[a]D 32＝-48.5(C＝15，MeOH)。ESI-MS(m/e)315[M+H]+1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.783(s，1H)，7.901(s，1H)4.308(q，1H)，4.029(t，1H)，3.896(t，1H)，3.099(t，2H)，2.724(t，2H)，2.228(t，1H)，2.090s，4H)，1.888(t，1H)，1.788(m，2H)，1.692(m，1H)，1.599(m，1H)，1.569(m，2H)，1.321(d，3H)，1.263(m，2H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝175.64，171.72，170.16，65.36，59.45，53.12，48.91，46.27，31.43，30.37，27.20，24.70，22.63，18.61。元素分析(C14H26N4O4)：计算值C 53.49、H 8.34、N 17.82；实测值C 53.66、H 8.41、N 17.98。
实施例2(PAK)2的制备
1)制备Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OH
将1.20g(3.8mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl置于50ml茄形瓶中，用3ml甲醇溶解，冰浴搅拌5分钟，逐滴加入2N氢氧化钠水溶液调节pH至11，检测反应一直保持pH 11，反应2小时直到Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液至反应溶液中调节pH至7，滤除析出的盐，盐饼滴加甲醇滤洗，转蒸发仪减压浓缩除去甲醇。继续逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液调节pH至2，将此水溶液转移至50ml分液漏斗中，加入20ml乙酸乙酯萃取一次，将有机层分出置于50ml三角瓶中，水层再以10ml乙酸乙酯萃取两次(10ml×2)，合并有机层，有机层以饱和氯化钠水溶液萃洗三遍(10ml×3)，分出乙酸乙酯，并用无水硫酸钠固体干燥过夜，过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，得到920mg白色固体(90％)即为Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OH。Mp 113-115℃，[a]D 25＝-98.2(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)549[M+H]+。1HNMR(CDCl3-d)δ/ppm＝7.361(m，5H)，5.157(s，2H)，4.523(q，1H)，4.499(t，1H)，4.284(t，1H)，3.499(t，1H)，3.331(t，1H)，3.191(t，2H)，2.193(s，4H)，2.067(t，1H)，1.912(m，2H)，1.814(t，1H)，1.755(m，2H)，1.727(m，1H)，1.526(m，1H)，1.499(s，9H)，1.380(d，3H)，1.281(m，2H)。元素分析(C27H40N4O8)：计算值C 59.11、H 7.35、N 10.21；实测值C 59.00、H 7.48、N 10.06。
2)制备Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将819mg(1.495mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OH置于100ml茄形瓶中，加入30ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入222mg(1.645mmol)HOBt及339mg(1.645mmol)DCC，得到溶液A。将860mg(1.495mmol)H-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，加入30ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到原料点消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml乙酸乙酯重新溶解并置于100ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(20ml×3)、饱和氯化钠水溶液(20ml×3)萃洗三遍，分出的乙酸乙酯层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得到类白色固体1.400g(88％)即为Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。Mp 54-56℃，[a]D 25＝-28.7(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1069[M+H]+。1HNMR(CDCl3-d)δ/ppm＝7.389(m，15H)，5.157(s，2H)，4.998(s，4H)，4.409(q，2H)，4.364(m，2H)，4.132(m，2H)，3.590(m，2H)，3.498(m，2H)，3.350(t，4H)，2.148(br，6H)，2.082(m，2H)，1.968(m，4H)，1.798(br，2H)，1.720(b2，4H)，1.652(br，2H)，1.499(br，2H)，1.398(s，9H)，1.328(m，6H)，1.203(m，4H)。元素分析(C56H76N8O13)：计算值C 62.90、H 7.16、N 10.48；实测值C 62.74、H 7.07、N 10.61。
2)制备H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将1g(0.936mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl置于50ml茄形瓶中，用5ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 8ml，反应3小时直到原料点消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次直到得940mg类白色固体(100％)即为H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。Mp 73-75℃，[a]D 25＝-34.7(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)969[M+H]+。元素分析(C51H68N8O11)：计算值C 63.21、H 7.07、N 11.56；实测值C 63.04、H 7.19、N 11.79。
3)制备(PAK)2
将320mg(0.319mmol)H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入300mgPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2至H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物反复用无水乙醚磨洗，得180mg类白色固体(87％)即为(PAK)2。Mp 128-130℃，[a]D 32-70.7(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)611[M+H]+.1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.568(br，1H)，8.167(br，1H)，7.915(br，1H)，7.706(br，1H)，4.441(br，1H)，4.318(br，1H)，4.220(br，1H)，3.967(br，1H)，3.619(br，2H)，3.055(br，4H)，2.724(br，4H)，2.227(br，2H)，2.082(s，6H)，1.868(br，2H)，1.768(br，4H)，1.644(br， 2H)，1.627(br，2H)，1.552(br，4H)，1.373(br，6H)，1.205(br，4H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝173.98，172.09，170.37，67.06，59.50，53.68，49.37，46.74，31.15，30.46，27.05，24.79，22.24，18.71。元素分析(C28H50N8O7)：计算值C 55.06、H 8.25、N 18.35；实测值C 55.20、H 8.32、N 18.51。
实施例3(PAK)3的制备
1)制备Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将381mg(0.697mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-OH置于100ml茄形瓶中，加入30ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入104mg(0.767mmol)HOBt及159mg(0.767mmol)DCC，得到溶液A。将700mg(0.697mmol)H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，加入30ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml乙酸乙酯重新溶解并置于100ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(20ml×3)、饱和氯化钠水溶液(20ml×3)萃洗三遍，分出的乙酸乙酯层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得类白色固体835mg(80％)即为Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。Mp70-72℃，[a]D 25＝-69.6(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1499[M+H]+。元素分析(C78H106N12O18)：计算值C 62.47、H 7.12、N 11.21；实测值C 62.52、H 7.21、N 11.37。
2)制备H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将800mg(0.534mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl置于50ml茄形瓶中，用5ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 8ml，反应3小时直到原料点消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次直到得760mg类白色固体(99％)即为H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。Mp 93-95℃，[a]D 25＝-76.2(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1399[M+H]+。元素分析(C73H98N12O16)：计算值C 62.64、H 7.06、N 12.01；实测值C 62.81、H 7.12、N 12.18。
3)制备(PAK)3
将310mg(0.216mmol)H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入250mgPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2直至H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至于，残留物反复用无水乙醚磨洗，得180mg类白色固体(89％)即为(PAK)3。Mp 141-143℃，[a]D 32＝-100.1(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)907[M+H]+。1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.203(br，1H)，8.176(br，2H)，7.938(br，2H)，7.765(br，1H)，4.447(br，2H)，4.432(br，2H)，4.427(br，2H)，3.629(br，1H)，3.573(br，2H)，3.116(br，6H)，2.722(br，6H)，2.298(br，3H)，2.096(s，8H)，1.855(br，9H)，1.639(br，6H)，1.552(br，6H)，1.373(br，9H)，1.202(br，6H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝173.56，172.34，170.78，67.08，59.73，53.61，49.05，47.32，31.16，30.46，27.11，24.95，22.29，18.73。元素分析(C42H74N12O10)：计算值C 55.61、H 8.22、N 18.53；实测值C 55.77、H 8.13、N 18.69。
实施例4(PAK)4的制备
1)制备Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH
将320mg(0.300mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl用3ml甲醇溶解，冰浴搅拌5分钟，逐滴加入2N氢氧化钠水溶液调节pH至11，检测反应一直保持pH11，反应2小时直到Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液至反应溶液中调节pH至7，滤除析出的盐，盐饼滴加甲醇滤洗，转蒸发仪减压浓缩除去甲醇。继续逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液调节pH至2，将此水溶液转移至50ml分液漏斗中，加入20ml乙酸乙酯萃取一次，将有机层分出置于50ml三角瓶中，水层再以10ml乙酸乙酯萃取两次(10ml×2)，合并有机层，有机层以饱和氯化钠水溶液萃洗三遍(10ml×3)，分出乙酸乙酯，并用无水硫酸钠固体干燥过夜，过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，得到290mg白色固体(99％)即为Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH。Mp 85-87℃，[a]D 25＝-90.3(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)979[M+H]+。1HNMR(CDCl3-d)δ/ppm＝7.360(m，10H)，5.084(s，4H)，4.496(br，4H)，4.254(br，2H)，3.672(br，1H)，3.586(br，1H)，3.429(br， 1H)，3.358(br，1H)，3.157(br，4H)，2.127(br，7H)，2.047(br，2H)，1.876(br，6H)，1.744(br，8H)，1.499(br，9H)，1.380(br，6H)，1.285(br，4H)。元素分析(C49H70N8O13)：计算值C 60.11、H 7.21、N 11.44；实测值C 60.28、H 7.30、N 11.62。
2)制备Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将194mg(0.199mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入30mg(0.219mmol)HOBt及45mg(0.219mmol)DCC，得到溶液A。将200mg(0.199mmol)H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml氯仿重新溶解并置于100ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(10ml×3)、饱和氯化钠水溶液(10ml×3)萃洗三遍，分出的氯仿层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得300mg类白色固体(78％)即为Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。Mp 78-80℃，[a]D 25＝-34.5(C＝1.5，MeOH)。ESI-MS(m/e)1931[M+H]+。元素分析(C100H136N16O23)：计算值C 62.22、H 7.10、N 11.61；实测值C 62.06、H 7.02、N 11.78。
3)制备H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将260mg(0.135mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl置于50ml茄形瓶中，用5ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc8ml，反应3小时直到Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次得230mg类白色固体(91％)即为H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。Mp 100-102℃，[a]D 25＝-42.5(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1831[M+H]+。元素分析(C95H128N16O21)：计算值C 62.35、H 7.05、N 12.25；实测值C62.20、H 7.97、N 12.42。
4)制备(PAK)4
将230mg(0.123mmol)H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入150mgPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2直至H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl 消失。H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物反复用无水乙醚磨洗，得135mg类白色固体(90％)即为(PAK)4。Mp188-189℃，[a]D 32＝-98.9(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1203[M+H]+。1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.461(br，4H)，7.925(br，2H)，7.579(br，2H)，4.624(br，4H)，4.258(br，4H)，3.778(br，4H)，2.702(br， 16H)，2.473(br，4H)，2.096(br，10H)，1.790(br，12H)，1.558(br,16H)，1.212(br，20H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝173.45，172.32，170.56，65.51，60.52，50.56，49.13，47.35，30.97，29.85，27.06，24.92，21.72，18.87。元素分析(C56H98N16O13)：计算值C 55.89、H 8.21、N 18.62；实测值C 55.77、H 8.14、N 18.89。
实施例5(PAK)5的制备
制备Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将307mg(0.314mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入47mg(0.345mmol)HOBt及7lmg(0.345mmol)DCC，得到溶液A。将450mg(0.199mmol)H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml氯仿重新溶解并置于100ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(10ml×3)、饱和氯化钠水溶液(10ml×3)萃洗三遍，分出的氯仿层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得到白色固体470mg(64％)即为Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。Mp85-87℃，[a]D 25＝-30.6(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1180[M+H]2+。元素分析(C122H166N20O28)：计算值C 62.07、H 7.09、N 11.87；实测值C 62.23、H7.20、N 11.70。
2)制备H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将410m g(0.174mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl置于50ml茄形瓶中，用5ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 8ml，反应3小时直到Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次直到得380mg类白色固体(95％)即为H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。Mp112-114℃，[a]D 25＝-47.5(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1130[M+H]2+。元素分析(C117H158N20O26)：计算值C 62.16、H 7.04、N，12.39；实测值C 62.01、H 7.12、N12.21。
3)制备(PAK)5
将200mg(0.087mmol)H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入100mgPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2直至H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物反复用无水乙醚磨洗，得120mg类白色固体(90％)即为(PAK)5。Mp 193-195℃，[a]D 32＝-75.9969(C＝10mg/ml，MeOH)。ESI-MS(m/e)1500[M+H]+1，1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.098(br，10H)，4.445(br，3H)，4.312(br，4H)，4.226(br，3H)，3.628(br，5H)，2.732(br，20H)，2.673(m，3H)，2.322(m，2H)，2.096(br，12H)，1.825(br，15H)，1.558(br，20H)，1.312(br，25H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝172.35，171.72，170.37，65.38，60.09，50.59，49.38，47.32，30.43，29.56，27.07，24.94，23.89，18.85。元素分析(C70H122N20O16)：计算值C 56.06、H 8.20、N 18.68；实测值C 56.21、H 8.12、N 18.51。
实施例6(PAK)6的制备
1)制备Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH
将690mg(0.461mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl用3ml甲醇溶解，冰浴搅拌5分钟，逐滴加入2N氢氧化钠水溶液调节pH至11，检测反应一直保持pH11，反应2小时直到Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液至反应溶液中调节pH至7，滤除析出的盐，盐饼滴加甲醇滤洗，转蒸发仪减压浓缩除去甲醇。继续逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液调节pH至2，将此水溶液转移至50ml分液漏斗中，加入20ml乙酸乙酯萃取一次，将有机层分出置于50ml三角瓶中，水层再以10ml乙酸乙酯萃取两次(10ml×2)，合并有机层，有机层以饱和氯化钠水溶液萃洗三遍(10ml×3)，分出乙酸乙酯，并用无水硫酸钠固体干燥过夜，过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，得到570mg类白色固体(88％)即为Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH。Mp 86-88℃，[a]D 25＝-74.8(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1409[M+H]+。元素分析(C71H100N12O18)：计算值C 60.50、H 7.15、N 11.92；实测值C 60.66、H 7.29、N 11.78。
2)制备Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将314mg(0.223mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入33mg(0.245mmol)HOBt及50mg(0.245mmol)DCC，得到溶液A。将320mg(0.223mmol)H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调pH8-9，持续搅拌3h直到Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OH消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml氯仿重新溶解并置于100ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(10ml×3)、饱和氯化钠水溶液(10ml×3)萃洗三遍，分出的氯仿层，用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得到类白色固体370mg(59％)即为Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。Mp 93-95℃，[a]D 25＝-23.6(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1395[M+H]2+。元素分析(C144H196N24O33)：计算值C 61.96、H 7.08、N 12.04；实测值C 61.82、H 7.00、N 12.21。
3)制备H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl
将320mg(0.115mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl置于50ml茄形瓶中，用5ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 8ml，反应3小时直到Boc-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次直到得280mg类白色固体(90％)即为H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl。Mp 117-119℃，[a]D 25＝-81.4(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1345[M+H]2+。元素分析(C139H188N24O31)：计算值C 62.04、H 7.04、N 12.49；实测值C 62.21、H 7.11、N 12.65。
4)制备(PAK)6
将280mg(0.103mmol)H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入100mgPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2直至H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。H-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-OBzl消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物反复用无水乙醚磨洗，得168mg类白色固体(89％)即为(PAK)6。Mp 202-204℃，[a]D 32＝-64.9(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1797[M+H]+。1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.029(br，12H)，4.451(br，6H)，4.256(br，6H)，3.550(br，6H)，2.729(br，24H)，2.489(br，6H)，2.098(br，14H)，1.795(br，18H)，1.536(br，24H)，1.227(br，30H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝172.49，171.71，170.23，65.58，60.22，51.01，49.28，47.32，31.14，29.51，27.14，24.90，22.62，18.42。元素分析(C84H146N24O19)：计算值C 56.17、H 8.19、N 18.72；实测值C 56.01、H 8.13、N 18.91。
实施例7KPA的制备
1)制备Boc-Pro-Ala-OBzl
将3.0g(13.95mmol)Boc-Pro-OH置于100ml茄形瓶中，加入40ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入2.072g(15.35mmol)HOBt及3.162mg(15.35mmol)DCC，得到溶液A。将5.14g(14.65mmol)H-Ala-OBzl对甲苯磺酸盐置于50ml茄形瓶中，加入30ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到原料点消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml乙酸乙酯重新溶解并置于100ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(20ml×3)、饱和氯化钠水溶液(20ml×3)萃洗三遍，分出的乙酸乙酯层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，乙酸乙酯-石油醚重结晶，得到无色晶体4.62g(88％)即为Boc-Pro-Ala-OBzl。Mp 111-113℃，[a]D 25＝-64.6(C＝1，MeOH)。E SI-MS(m/e)377[M+H]+。元素分析(C20H28N2O5)：计算值C 63.81、H 7.50、N 7.44；实测值C 63.98、H 7.60、N 7.31。
2)制备H-Pro-Ala-OBzl
将3.76g(10mmol)Boc-Pro-Ala-OBzl置于100ml茄形瓶中，用7ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 10ml，反应10小时直到Boc-Pro-Ala-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次得无色油状产物即为H-Pro-Ala-OBzl。[a]D 25＝-78.5(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)277[M+H]+。元素分析(C15H20N2O3)：计算值C 65.20、H 7.30、N 10.14；实测值C 65.03、H 7.21、N 10.00。
3)制备Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl
将3.776g(9.10mmol)Boc-Lys(Z-2-Cl)-OH置于100ml茄形瓶中，加入30ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入1.289g(9.55mmol)HOBt及2.060g(10.00mmol)DCC，得到溶液A。将3.125g(10.00mmol)H-Pro-Ala-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，加入30ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到H-Pro-Ala-OBzl消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml乙酸乙酯重新溶解并置于50ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(20ml×3)、饱和氯化钠水溶液(20ml×3)萃洗三遍，分出的乙酸乙酯层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得到无色油状产物5.85g(95％)即为Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl。[a]D 25＝-50.7405(C＝10mg/ml，MeOH)。ESI-MS(m/e)673[M+H]+.1HNMR(CDCl3-d)δ/ppm＝7.316(m，9H)，5.342(s，2H)，5.207(s，2H)，4.656(q，1H)，4.583(t，1H)，4.469(t，1H)，3.693(t，1H)，3.538(t，1H)，3.186(t，2H)，2.323(s，3H)，2.098(t，1H)，1.987(m，2H)，1.893(t，1H)，1.737(m，2H)，1.652(m，1H)，1.499(m，1H)，1.408(s，9H)，1.388(d，3H)，1.263(m，2H)。元素分析(C34H45ClN4O8)：计算值C 60.66、H 6.74、N 8.32；实测值C 60.50、H 6.67、N 8.51。
4)制备H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl
将3.916g(5.810mmol)Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl置于100ml茄形瓶中，用7ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 10ml，反应10小时直到Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次直到得白色固体3.406g(96％)即为H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl。Mp49-51℃，[a]D 25＝-70.5(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)573[M+H]+。元素分析(C29H37ClN4O6)：计算值C 60.78、H 6.51、N 9.78；实测值C 60.94、H6.61、N 9.62。
5)制备KPA
将350mg(0.611mmol)H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入600mgPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2直至H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失。H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物反复用无水乙醚磨洗，得200mg类白色固体(100％)即为KPA。Mp 120-122℃，[a]D 32＝-19.3(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)315[M+H]+。1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.273(s，1H)，8.165(s，1H)4.238(q，1H)，4.097(t，1H)，3.629(t，1H)，3.317(t，2H)，2.705(t，2H)，2.429(t，1H)，2.063(s，4H)，1.893(t，1H)，1.735(m，2H)，1.532(m，2H)，1.378(m，2H)，1.224(d，3H)，1.198(m，2H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝173.21，171.41，167.68，60.68，59.31，52.37，50.98，47.52，31.68，29.50，26.73，24.98，20.96，18.02。元素分析(C14H26N4O4)：计算值C 53.49、H 8.34、N 17.82；实测值C 53.64、H 8.42、N 17.99。
实施例8(KPA)2的制备
1)制备Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OH
将5.020g(7.459mmol)Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl用10ml甲醇溶解，冰浴搅拌5分钟，逐滴加入2N氢氧化钠水溶液调节pH至11，检测反应一直保持pH11，反应2小时直到Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失。逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液至反应溶液中调节pH至7，滤除析出的盐，盐饼滴加甲醇滤洗，转蒸发仪减压浓缩除去甲醇。继续逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液调节pH至2，将此水溶液转移至100ml分液漏斗中，加入60ml乙酸乙酯萃取一次，将有机层分出置于100ml三角瓶中，水层再以10ml乙酸乙酯萃取两次(10ml×2)，合并有机层，有机层以饱和氯化钠水溶液萃洗三遍(10ml×3)，分出乙酸乙酯，并用无水硫酸钠固体干燥过夜，过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，得到4.000g无色油状产物(92％)即为Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OH。[a]D 25＝-55.3494(C＝10mg/ml，MeOH)。ESI-MS(m/e)583[M+H]+。1HNMR(CDCl3-d)δ/ppm＝7.369(m，2H)，7.273(m，2H)，5.210(s，2H)，4.694(q，1H)，4.508(t，1H)，4.493(t，1H)，3.729(t，1H)，3.612(t，1H)，3.196(t，2H)，2.244(s，4H)，2.098(t，1H)，1.909(m，2H)，1.807(m，2H)，1.655(m，2H)，1.504(m，1H)，1.499(s，9H)，1.387(d，3H)，1.261(m，2H)。元素分析(C27H39ClN4O8)：计算值C 55.62、H 6.74；N 9.61；实测值C 55.76、H 6.82、N 9.80。
2)制备Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl
将1.549g(2.657mmol)Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OH置于100ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入0.395g(2.923mmol)HOBt及0.602g(2.923mmol)DCC，得到溶液A。将1.700g(2.790mmol)H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml乙酸乙酯重新溶解并置于50ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(20ml×3)、饱和氯化钠水溶液(20ml×3)萃洗三遍，分出的乙酸乙酯层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得到类白色固体2.655g(88％)即为Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl。Mp 59-61℃，[a]D 25＝-61.2(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1137[M+H]+。元素分析(C56H74Cl2N8O13)：计算值C 59.10、H 6.55、N 9.85；实测值C 59.25、H 6.72、N 9.99。
2)制备H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl
将816mg(0.718mmol)Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl置于100ml茄形瓶中，用3ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 7ml，反应3小时直到原料点消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次直到得类白色粉末692mg(90％)即为H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl。Mp79-81℃，[a]D 25＝-63.6(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1037[M+H]+。元素分析(C51H66Cl2N8O11)：计算值C 59.01、H 6.41、N 10.79；实测值C 59.18、H 6.49、N 10.61。
2)制备(KPA)2
将365mg(0.340mmol)H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入300mgPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2直至H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl 消失。H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物反复用无水乙醚磨洗，得220mg类白色固体(92％)即为(KPA)2。Mp 132-134℃，[a]D 32＝-78.2(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)611[M+H]+.1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.314(br，1H)，8.283(br，1H)，7.958(br，1H)，7.796(br，1H)，4.445(br，1H)，4.293(br，2H)，4.015(br，1H)，3.670(br，2H)，3.507(br，4H)，2.732(br，4H)，2.137(s，6H)，2.028(br，2H)，1.854(br，4H)，1.722(br，2H)，1.660(br，4H)，1.552(br，4H)，1.205(br，6H)，1.121(br，4H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝172.99，171.32，167.93，65.37，60.34，51.04，49.03，47.53，31.25，29.59，26.81，24.93，21.86，18.52。元素分析(C28H50N8O7)：计算值C 55.06、H 8.25、N 18.35；实测值C 55.21、H 8.33、N 18.20。
实施例9(KPA)3的制备
1)制备Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OH
将3.000g(2.638mmol)Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl用6ml甲醇溶解，冰浴搅拌5分钟，逐滴加入2N氢氧化钠水溶液调节pH至11，检测反应一直保持pH11，反应2小时直到Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失。逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液至反应溶液中调节pH至7，滤除析出的盐，盐饼滴加甲醇滤洗，转蒸发仪减压浓缩除去甲醇。继续逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液调节pH至2，将此水溶液转移至100ml分液漏斗中，加入60ml乙酸乙酯萃取一次，将有机层分出置于100ml三角瓶中，水层再以10ml乙酸乙酯萃取两次(10ml×2)，合并有机层，有机层以饱和氯化钠水溶液萃洗三遍(10ml×3)，分出乙酸乙酯，并用无水硫酸钠固体干燥过夜，过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，得到2.700g类白色固体(98％)即为Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OH。Mp 86-88℃，[a]D 25＝-32.4(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1047[M+H]+。元素分析(C49H68Cl2N8O13)：计算值C 56.16、H 6.54、N 10.69；实测值C 56.00、H 6.48、N10.83。
2)制备Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl
将1.047g(1mmol)Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OH置于100ml茄形瓶中，加入30ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入149mg(1.1mmol)HOBt及227mg(1.1mmol)DCC，得到溶液A。将609mg(1mmol)H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，加入30ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OH消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml乙酸乙酯重新溶解并置于100ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(20ml×3)、饱和氯化钠水溶液(20ml×3)萃洗三遍，分出的乙酸乙酯层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得到类白色固体1.440g(90％)即为Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl。Mp 73-75℃，[a]D 25＝-60.1(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1601[M+H]+。元素分析(C78H103Cl3N12O18)：计算值C 58.44、H 6.48、N 10.48；实测值C 58.62、H 6.50、N 10.31。
3)制备H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl
将1000mg(0.625mmol)Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl置于50ml茄形瓶中，用5ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 8ml，反应3小时直到原料点消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次直到得900mg类白色固体(94％)即为H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl。Mp 91-93℃，[a]D 25＝-71.9(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1501[M+H]+。元素分析(C73H95Cl3N12O16)：计算值C 58.34、H 6.37、N 11.18；实测值C 58.20、H 6.31、N11.36。
4)制备(KPA)3
将300mg(0.195mmol)H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入200mgPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2直至H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失。H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物反复用无水乙醚磨洗，得200mg类白色固体(99％)即为(KPA)3。Mp 147-149℃，[a]D 32＝-98.1(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)907[M+H]+。1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.315(br，1H)，8.128(br，3H)，7.982(br，2H)，4.429(br，2H)，4.257(br，2H)，4.199(br，2H)，3.702(br，1H)，3.613(br，2H)，3.386(br，6H)，2.732(br，6H)，2.108(br，11H)，1.785(br，9H)，1.539(br，6H)，1.320(br，6H)，1.210(br，9H)，1.087(br，6H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝172.50，171.80，170.41，167.58，65.37，59.85，52.33，49.02，47.56.31.16，30.87，27.01，24.82，22.28，18.65。元素分析(C42H74N12O10)：计算值C 55.61、H 8.22、N 17.64；实测值C 55.79、H 8.30、N 17.49。
实施例10(KPA)4的制备
1)制备Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl
将488mg(0.466mmol)Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OH置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入69mg(0.513mmol)HOBt及106mg(0.513mmol)DCC，得到溶液A。将500mg(0.466mmol)H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml氯仿重新溶解并置于100ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(10ml×3)、饱和氯化钠水溶液(10ml×3)萃洗三遍，分出的氯仿层，用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得到白色固体540mg(56％)即为Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl。Mp 81-83℃，[a]D 25＝-68.6(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1034[M+H]2+。元素分析(C100H132Cl4N16O23)：计算值C 58.08、H6.43、N 10.84；实测值C 58.22、H 6.52、N 10.70。
2)制备H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl
将500mg(0.242mmol)Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl置于50ml茄形瓶中，用5ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 8ml，反应3小时直到Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次直到得425mg类白色固体(88％)即为H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl。Mp108-110℃，[a]D 25＝-114.0(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1967[M+H]+。元素分析(C95H124Cl4N16O21)：计算值C 57.98、H 6.35、N 11.39；实测值C 58.16、H 6.43、N 11.22。
3)制备(KPA)4
将325mg(0.162mmol)H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入150mgPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2直至H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl 消失。H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物反复用无水乙醚磨洗，得140mg类白色固体(70％)即为(KPA)4。Mp 185-187℃，[a]D 32＝-105.7(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1203[M+H]+.1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.361(br，2H)，8.133(br，4H)，7.902(br，2H)，4.434(br，4H)，4.327(br，4H)，3.667(br，4H)，2.706(br，16H)，2.097(br，10H)，1.850(br，16H)，1.633(br，16H)，1.396(br，12H)，1.287(br，4H)，1.193(br，4H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝173.52，172.46，171.68，170.41，167.59，59.86，59.38，50.97，48.53，47.98，30.97，29.59，27.03，24.94，22.22，18.90。元素分析(C56H98N16O13)：计算值C 55.89、H 8.21、N 18.62；实测值C 55.72、H 8.12、N 18.77。
实施例11(KPA)5的制备
1)制备Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl
将200mg(0.191mmol)Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OH置于50ml茄形瓶中，加入15ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入29mg(0.210mmol)HOBt及44mg(0.210mmol)DCC，得到溶液A。将294mg(0.191mmol)H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，加入15ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml氯仿重新溶解并置于100ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(10ml×3)、饱和氯化钠水溶液(10ml×3)萃洗三遍，分出的氯仿层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得到类白色固体380mg(79％)即为Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl。Mp 87-89℃，[a]D 25＝-102.4(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1266[M+H]2+。元素分析(C122H161Cl5N20O28)：计算值C 57.85、H 6.41、N11.06；实测值C 58.01、H 6.49、N 11.22。
2)制备H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl
将380mg(0.150mmol)Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl置于50ml茄形瓶中，用2ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 3ml，反应3小时直到Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次直到得346mg 类白色固体(95％)即为H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl。Mp 117-119℃，[a]D 25＝-90.6(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1239[M/2+Na]+。元素分析(C117H153Cl5N20O26)：计算值C 57.76、H 6.34、N 11.51；实测值C 57.60、H 6.28、N 11.67。
3)制备(KPA)5
将320mg(0.130mmol)H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入100mgPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2直至原料点消失。H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物反复用无水乙醚磨洗，得180mg类白色固体(90％)即为(KPA)5。Mp 196-198℃，[a]D 32＝-101.0(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1500[M+H]+.1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.112(br，10H)，4.454(br，3H)，4.309(br，4H)，4.213(br，3H)，3.568(br，20H)，2.821(br，10H)，2.076(br，12H)，1.815(br，15H)，1.574(br，20H)，1.342(br，10H)，1.213(br，10H)，1.096(br，5H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝174.36，171.98，170.19，65.27，59.31，52.46，50.67，48.29，47.23，31.12，29.61，26.91，24.93，22.21，18.25。元素分析(C70H122N20O16)：计算值C 56.06、H 8.20、N18.68；实测值C 56.24、H 8.28、N 18.84。
实施例12(KPA)6的制备
1)制备Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OH
将300mg(0.187mmol)Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl用3ml甲醇溶解，冰浴搅拌5分钟，逐滴加入2N氢氧化钠水溶液调节pH至11，检测反应一直保持pH11，反应2小时直到Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失。逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液至反应溶液中调节pH至7，滤除析出的盐，盐饼滴加甲醇滤洗，转蒸发仪减压浓缩除去甲醇。继续逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液调节pH至2，将此水溶液转移至50ml分液漏斗中，加入20ml乙酸乙酯萃取一次，将有机层分出置于50ml三角瓶中，水层再以10ml乙酸乙酯萃取两次(10ml×2)，合并有机层，有机层以饱和氯化钠水溶液萃洗三遍(10ml×3)，分出乙酸乙酯，并用无水硫酸钠固体干燥过夜，过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，得到280mg 白色固体(98％)即为Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OH。Mp 85-87℃，[a]D 25＝-67.3(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1511[M+H]+。元素分析(C71H97Cl3N12O18)：计算值C 56.36、H 6.46、N 11.11；实测值C 56.20、H 6.38、N 11.29。
2)制备Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl
将200mg(0.132mmol)Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OH置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入20mg(0.146mmol)HOBt及30mg(0.146mmol)DCC，得到溶液A。将203mg(0.132mmol)H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OH消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml氯仿重新溶解并置于100ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(10ml×3)、饱和氯化钠水溶液(10ml×3)萃洗三遍，分出的氯仿层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得到类白色固体270mg(68％)即为Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl。Mp 94-96℃，[a]D 25＝-75.9(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1521[M/2+Na]+。元素分析(C144H190Cl6N24O33)：计算值C 57.69、H 6.39、N 11.21；实测值C 57.52、H 6.31、N 11.38。
3)制备H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl
将270mg(0.090mmol)Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl置于50ml茄形瓶中，用2ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 3ml，反应3小时直到Boc-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次直到得250mg类白色固体(96％)即为H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl。Mp118-120℃，[a]D 25＝-58.5(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1471[M/2+Na]+。元素分析(C136H182Cl6N24O31)：计算值C 57.61、H 6.33、N 11.60；实测值C 57.46、H 6.24、N 11.42。
4)制备(KPA)6
将230mg(0.078mmol)H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入100mgPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2直至H-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-Lys(Z-2-Cl)-Pro-Ala-OBzl消失。原料点消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物反复用无水乙醚磨洗，得140mg类白色固体(98％)即为(KPA)6。Mp 197-199℃，[a]D 32＝-94.5(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1797[M+H]+.1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.14(br，12H)，4.44(br，6H)，4.32(br，6H)，3.62(br，3H)，3.39(br，3H)，2.73(br，24H)，2.08(br，20H)，1.82(br，18H)，1.58(br，24H)，1.37(br，10H)，1.25(br，20H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝174.34，172.51，171.68，170.32，65.37，59.65，50.59，49.04，47.76，31.17，29.59，27.05，24.94，22.26，19.01，18.38。元素分析(C84H146N24O19)：计算值C56.17、H 8.19、N 18.72；实测值C 56.34、H 8.10、N 18.89。
实施例13AKP的制备
1)制备Boc-Ala-Lys(Z)-OBzl
将2.0g(10.582mmol)Boc-Ala-OH置于100ml茄形瓶中，加入40ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入1.571g(11.640mmol)HOBt及2.398mg(11.640mmol)DCC，得到溶液A。将5.740g(14.65mmol)H-Lys(Z)-OBzl对甲苯磺酸盐置于50ml茄形瓶中，加入30ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到H-Lys(Z)-OBzl消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml乙酸乙酯重新溶解并置于100ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(20ml×3)、饱和氯化钠水溶液(20ml×3)萃洗三遍，分出的乙酸乙酯层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，乙酸乙酯-石油醚重结晶，得到无色晶体4.920g(86％)即为Boc-Ala-Lys(Z)-OBzl。Mp 115-117℃，[a]D 25＝-25.7(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)542[M+H]+。元素分析(C29H39N3O7)：计算值C 64.31、H 7.26、N 7.76；实测值C 64.47、H 7.33、N 7.92。
2)制备Boc-Ala-Lys(Z)-OH
将4.5g(8.318mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-OBzl置于100ml茄形瓶中，用9ml甲醇溶解，冰浴搅拌5分钟，逐滴加入2N氢氧化钠水溶液调节pH至11，检测反应一直保持pH11，反应2小时直到Boc-Ala-Lys(Z)-OBzl消失。逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液至反应溶液中调节pH至7，滤除析出的盐，盐饼滴加甲醇滤洗，转蒸发仪减压浓缩除去甲醇。继续逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液调节pH至2，将此水溶液转移至100ml分液漏斗中，加入50ml乙酸乙酯萃取一次，将有机层分出置于50ml三角瓶中，水层再以10ml乙酸乙酯萃取两次(10ml×2)，合并有机层，有机层以饱和氯化钠水溶液萃洗三遍(10ml×3)，分出乙酸乙酯，并用无水硫酸钠固体干燥过夜，过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，得无色油状产物3.75g(100％)即为Boc-Ala-Lys(Z)-OH。[a]D 25＝-36.5(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)452[M+H]+。元素分析(C22H33N3O7)：计算值C 58.52、H 7.37、N 9.31；实测值C 58.40、H 7.28、N 9.48。
3)制备Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl
将3.75g(8.315mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-OH置于100ml茄形瓶中，加入30ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入1.235g(9.146mmol)HOBt及1.884g(9.146mmol)DCC，得到溶液A。将3.76g(9.978mmol)H-Pro-OBzl对甲苯磺酸盐置于50ml茄形瓶中，加入30ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到Boc-Ala-Lys(Z)-OH消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml乙酸乙酯重新溶解并置于100ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(20ml×3)、饱和氯化钠水溶液(20ml×3)萃洗三遍，分出的乙酸乙酯层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得到淡黄色油状产物5.002g(94％)即为Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl。[a]D 25＝-92.6(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)639[M+H]+.1HNMR(CDCl3-d)δ/ppm＝7.390(m，10H)，5.440(s，2H)，5.106(s，2H)，4.618(q，1H)，4.508(t，1H)，4.357(t，1H)，3.758(m，1H)，3.724(m，1H)，3.626(m，2H)，2.231(m，3H)，2.071(m，1H)，1.966(m，2H)，1.732(m，3H)，1.448(m，11H)，1.368(d，3H)，1.238(m，2H)。元素分析(C34H46N4O8)：计算值C 63.93、H 7.26、N 8.77；实测值C63.76、H 7.16、N 8.59。
4)制备H-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl
将3.536g(5.534mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl置于100ml茄形瓶中，用8ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 10ml，反应3小时直到Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次直到得2.985g淡黄色固体(94％)即为H-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl盐酸盐。Mp 53-55℃，[a]D 25＝-73.1(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)539[M+H]+。元素分析(C29H38N4O6)：计算值C 64.67、H 7.11、N 10.40；实测值C 64.79、H 7.18、N 10.24。
4)制备AKP
将340mg(0.592mmol)H-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入600mgPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2直至原料点消失。原料点消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物反复用无水乙醚磨洗，得193mg类白色固体(93％)即为AKP。Mp 157-159℃，[a]D 32＝-52.9(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)315[M+H]+.1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.627(s，1H)，8.397(s，1H)4.519(q，1H)，4.154(t，1H)，3.662(t，1H)，3.3173(t，2H)，2.734(t，2H)，2.030(m，4H)，1.902(t，1H)，1.860(t，1H)，1.727(m，2H)，1.589(m，2H)，1.459(m，2H)，1.280(d，3H)，1.102(m，2H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝175.18，170.70，169.46，65.38，60.67，50.78，49.04，46.97，31.77，29.34，26.93，24.97，21.69，18.41。元素分析(C14H26N4O4)：计算值C 53.49、H 8.34、N 17.82；实测值C 53.64、H 8.42、N 17.97。
实施例14(AKP)2的制备
1)制备Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-OH
将5.305g(8.302mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl置于100ml茄形瓶中，用8ml四氢呋喃溶解，冰浴搅拌5分钟，逐滴加入2N氢氧化钠水溶液调节pH至11，检测反应一直保持pH11，反应2小时直到Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失。逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液至反应溶液中调节pH至7，滤除析出的盐，盐饼滴加甲醇滤洗，转蒸发仪减压浓缩除去四氢呋喃及甲醇。继续逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液调节pH至2，将此水溶液转移至100ml分液漏斗中，加入50ml乙酸乙酯萃取一次，将有机层分出置于50ml三角瓶中，水层再以10ml乙酸乙酯萃取两次(10ml×2)，合并有机层，有机层以饱和氯化钠水溶液萃洗三遍(10ml×3)，分出乙酸乙酯，并用无水硫酸钠固体干燥过夜，过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，得到4.226g淡黄色油状产品(93％)即为Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-OH。[a]D 25＝-25.0(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)549[M+H]+。1HNMR(CDCl3-d)δ/ppm＝7.357(m，5H)，5.156(s，2H)，4.836(q，1H)，4.524(t，1H)，4.262(t，1H)，3.806(t，1H)，3.639(t，1H)，3.161(t，2H)，2.252(s，4H)，2.086(t，1H)，2.001(m，2H)，1.787(t，1H)，1.682(m，2H)，1.550(m，2H)，1.441(s，9H)，1.360(d，3H)，1.279(m，2H)。元素分析(C27H40N4O8)：计算值C 59.11、H 7.35、N 10.21；实测值C 59.27、H 7.43、N 10.39。
2)制备Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl
将1.189g(2.171mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-OH置于100ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入322mg(2.388mmol)HOBt及492mg(2.388mmol)DCC，得到溶液A。将1.310mg(2.280mmol)H-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到H-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml乙酸乙酯重新溶解并置于100ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(20ml×3)、饱和氯化钠水溶液(20ml×3)萃洗三遍，分出的乙酸乙酯层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得到淡黄色油状产品2.058g(89％)即为Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl。[a]D 25＝-61.9(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1069[M+H]+。元素分析(C56H76N8O13)：计算值C 62.90、H 7.16、N 10.48；实测值C 62.73、H 7.05、N 10.62。
3)制备H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl
将1.900g(1.779mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl置于50ml茄形瓶中，用5ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 8ml，反应3小时直到Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次直到得1.700mg 淡黄色固体(95％)即为H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl。Mp 78-80℃，[a]D 25＝-103.3(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)969[M+H]+。元素分析(C51H68N8O11)：计算值C 63.21、H 7.07、N 11.56；实测值C 63.38、H 7.16、N 11.41。
4)制备(AKP)2
将380mg(0.378mmol)H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入300mgPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2直至H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失。H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物反复用无水乙醚磨洗，得230mg类白色固体(收率86％)即为(AKP)2。Mp160-162℃，[a]D 32＝-105.9(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)611[M+H]+.1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.72(br，1H)，8.16(br，2H)，7.97(br，1H)，4.46(br，1H)，4.30(br，2H)，4.22(br，1H)，3.61(br，2H)，3.38(br，4H)，2.72(br，4H)，2.08(m，6H)，2.03(br，2H)，1.82(br，10H)，1.58(br，6H)，1.37(br，4H)，1.19(d，2H)，1.03(m，2H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝173.65，172.72，171.70，169.74，65.37，59.71，52.28，50.44，47.34，31.02，29.52，27.08，24.90，22.45，18.37。元素分析(C28H50N8O7)：计算值C 55.06、H 8.25、N 18.35；实测值C 55.19、H 8.34、N 18.53。
实施例15(AKP)3的制备
1)制备Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OH
将900mg(0.843mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl用3ml甲醇溶解，冰浴搅拌5分钟，逐滴加入2N氢氧化钠水溶液调节pH至11，检测反应一直保持pH11，反应2小时直到Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失。逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液至反应溶液中调节pH至7，滤除析出的盐，盐饼滴加甲醇滤洗，转蒸发仪减压浓缩除去甲醇。继续逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液调节pH至2，将此水溶液转移至50ml分液漏斗中，加入20ml乙酸乙酯萃取一次，将有机层分出置于50ml三角瓶中，水层再以10ml乙酸乙酯萃取两次(10ml×2)，合并有机层，有机层以饱和氯化钠水溶液萃洗三遍(10ml×3)，分出乙酸乙酯，并用无水硫酸钠固体干燥过夜，过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，得到800mg淡黄色油状产物(97％)即为Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OH。Mp 85-87℃，[a]D 25＝-73.2(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)979[M+H]+.。元素分析(C49H70N8O13)：计算值C 60.11、H 7.21、N 11.44；实测值C 60.28、H 7.27、N 11.62。
2)制备Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl
将1.530mg(1.564mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OH置于100ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入233mg(1.721mmol)HOBt及355mg(1.721mmol)DCC，得到溶液A。将898mg(1.564mmol)H-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OH消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml乙酸乙酯重新溶解并置于100ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(20ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(20ml×3)、饱和氯化钠水溶液(20ml×3)萃洗三遍，分出的乙酸乙酯层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得到类白色固体2.056mg(88％)即为Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl。Mp 73-75℃，[a]D 25＝-99.2(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1499[M+H]+。元素分析(C78H106N12O18)：计算值C 62.47、H 7.12、N 11.21；实测值C 62.30、H 7.02、N 11.38。
3)制备H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl
将800mg(0.534mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl置于50ml茄形瓶中，用5ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 8ml，反应3小时直到Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次直到得725mg类白色固体(95％)即为H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl。Mp 99-101℃，[a]D 25＝-96.0(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1399[M+H]+。元素分析(C73H98N12O16)：计算值C 62.64、H 7.06、N 12.01；实测值C 62.50、H 7.00、N 12.19。
4)制备(AKP)3
将380mg(0.265mmol)H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入250mgPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2直至H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失。H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物反复用无水乙醚磨洗，得200mg类白色固体(80％)即为(AKP)3。Mp 175-178℃，[a]D 32＝-102.7(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)907[M+H]+.1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.425(br，1H)，8.235(br，3H)，7.988(br，2H)，4.471(br，2H)，4.230(br，2H)，4.218(br，2H)，3.611(br，6H)，3.387(br，3H)，2.729(br，6H)，2.030(br，11H)，1.827(br，9H)，1.560(br，6H)，1.366(br，6H)，1.194(br，9H)，1.074(br，6H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝173.56，172.28，170.49，166.55，65.37，63.19，59.61，50.59，49.30，47.35，31.06，29.53，27.29，24.93，22.30，18.20。元素分析(C42H74N12O10)：计算值C 55.61、H 8.22、N 18.53；实测值C 55.77、H 8.31、N18.69。
实施例16(AKP)4的制备
1)制备Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl
将824mg(0.842mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OH置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入126mg(0.927mmol)HOBt及191mg(0.927mmol)DCC，得到溶液A。将845mg(0.824mmol)H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml氯仿重新溶解并置于100ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(10ml×3)、饱和氯化钠水溶液(10ml×3)萃洗三遍，分出的氯仿层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得到1.256g类白色固体(77％)即为Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl。Mp 79-81℃，[a]D 25＝-58.8(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1931[M+H]+。元素分析(C100H136N16O23)：计算值C 62.22、H 7.10、N 11.61；实测值C62.04、H 7.01、N 11.78。
2)制备H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl
将500mg(0.259mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl置于50ml茄形瓶中，用3ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 4ml，反应3小时直到原料点消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次直到得465mg类白色固体(96％)即为H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl。Mp 110-112℃，[a]D 25＝-78.6(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1831[M+H]+。元素分析(C95H128N16O21)：计算值C 62.35、H 7.05、N 12.25；实测值C 62.20、H 7.15、N 12.39。
3)制备(AKP)4
将330mg(0.177mmol)H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入150mgPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2直至H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失。H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物反复用无水乙醚磨洗，得215mg类白色固体(98％)即为(AKP)4。Mp 196-198℃，[a]D 32＝-124.0(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1203[M+H]+.1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.684(br，1H)，8.406(br，2H)，8.165(br，2H)，8.085(br，2H)，7.796(br，1H)，4.493(br，4H)，4.308(br，4H)，3.859(br，4H)，2.724(br，16H)，2.044(br，10H)，1.831(br，16H)，1.570(br，16H)，1.357(br，12H)，1.276(br，4H)，1.210(br，4H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝172.52，172.07，171.70，170.36，170.21，65.38，59.79，50.65，48.8847.35，31.02，29.55，27.15，24.97，22.28，18.34。元素分析(C56H98N16O13)：计算值C 55.89、H 8.21、N 18.62；实测值C 55.73、H 8.12、N 18.44。
实施例17(AKP)5的制备
1)制备Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OH
将1.300mg(0.868mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl用3ml甲醇溶解，冰浴搅拌5分钟，逐滴加入2N氢氧化钠水溶液调节pH至11，检测反应一直保持pH11，反应2小时直到Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失。逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液至反应溶液中调节pH至7，滤除析出的盐，盐饼滴加甲醇滤洗，转蒸发仪减压浓缩除去甲醇。继续逐滴滴加饱和硫酸氢钾水溶液调节pH至2，将此水溶液转移至50ml分液漏斗中，加入20ml乙酸乙酯萃取一次，将有机层分出置于50ml三角瓶中，水层再以10ml乙酸乙酯萃取两次(10ml×2)，合并有机层，有机层以饱和氯化钠水溶液萃洗三遍(10ml×3)，分出乙酸乙酯，并用无水硫酸钠固体干燥过夜，过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，得到1.115mg类白色固体(91％)即为Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OH。Mp 86-88℃，[a]D 25＝-91.0(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1409[M+H]+。元素分析(C71H100N12O18)：计算值C 60.50、H 7.15、N 11.92；实测值C60.67、H 7.24、N 11.73。
2)制备Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl
将600mg(0.426mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OH置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入64mg(0.469mmol)HOBt及97mg(0.469mmol)DCC，得到溶液A。将428mg(0.426mmol)H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OH消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml氯仿重新溶解并置于100ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(10ml×3)、饱和氯化钠水溶液(10ml×3)萃洗三遍，分出的氯仿层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得到白-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl。Mp 90-92℃，[a]D 25＝-23.6(C＝1，MeOH)ESI-MS(m/e)1180[M+H]2+。元素分析(C122H166N20O28)：计算值C 62.07、H 7.09、N 11.87；实测值C 62.24、H 7.19、N 11.70。
3)制备H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl
将376mg(0.159mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl置于50ml茄形瓶中，用5ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 8ml，反应3小时直到Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次直到得330mg类白色固体(90％)即为H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl。Mp116-118℃，[a]D 25＝-90.5(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1131[M+H]2+。元素分析(C117H158N20O26)：计算值C 62.16、H 7.04、N 12.39；实测值C 62.00、H 6.95、N12.58。
4)制备(AKP)5
将330mg(0.144mmol)H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入100mgPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2直至H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失。H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物反复用无水乙醚磨洗，得200mg类白色固体(91％)即为(AKP)5。Mp203-205℃，[a]D 32＝-98.1(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1500[M+H]+.1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.12(br，10H)，4.45(br，3H)，4.31(br，4H)，4.22(br，3H)，3.61(br，10H)，3.39(br，10H)，2.73(br，10H)，2.08(br，12H)，1.85(br，15H)，1.58(br，20H)，1.36(br，10H)，1.20(br，10H)，1.11(br，5H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝172.49，171.71，170.37，170.04，65.37，59.67，50.59，49.03，48.50，47.32，30.97，29.11，27.03，24.94，22.24，18.36。元素分析(C70H122N20O16)：计算值C 56.06、H 8.20、N 18.68；实测值C 56.22、H 8.31、N 18.51。
实施例18(AKP)6的制备
1)制备Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl
将500mg(0.355mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OH置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，冰浴搅拌下加入53mg(0.391mmol)HOBt及81mg(0.391mmol)DCC，得到溶液A。将510mg(0.355mmol)H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，加入20ml无水四氢呋喃溶解，用NMM调pH7，得到溶液B。将溶液B滴加至冰浴搅拌下的溶液A中，用NMM调节pH8-9，持续搅拌3h直到H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失。反应混合物过滤，滤除DCU。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物用80ml氯仿重新溶解并置于l00ml分液漏斗中，然后依次用饱和碳酸氢钠水溶液(10ml×3)、5％硫酸氢钾水溶液(10ml×3)、饱和氯化钠水溶液(10ml×3)萃洗三遍，分出的氯仿层，并用无水硫酸钠干燥2h。过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，200-300目硅胶柱层析，得到类白色固体350mg(35％)即为Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl。Mp99-107℃，[a]D 25＝-60.3(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1418[M/2+Na]+。元素分析(C144H196N24O33)：计算值C 61.96、H 7.08、N 12.04；实测值C 61.80、H 6.98、N12.22。
2)制备H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl
将350mg(0.126mmol)Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl置于50ml茄形瓶中，用5ml乙酸乙酯溶解，滴入4N HCl/EtOAc 8ml，反应3小时直到Boc-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失。用水泵将反应液抽干，加入无水乙醚，再次用水泵将反应液抽干，重复5次。残留物用无水乙醚泡洗，塑料铲磨洗，将无水乙醚倾出，反复多次直到得300mg类白色固体(88％)即为H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl。Mp 121-123℃，[a]D 25＝-102.1(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1368[M/2+Na]+。元素分析(C139H188N24O31)：计算值C 62.04、H 7.04、N12.49；实测值C 62.39、H 7.12、N 12.31。
3)制备(AKP)6
将300mg(0.110mmol)H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl盐酸盐置于50ml茄形瓶中，用8ml乙醇及2ml水溶解，加入100mgPd/C，滴加3滴甲酸，用三通抽出空气，通入装在气袋内的H2，反复五次，三通的最终状态停留在通H2，持续通H2直至H-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-Ala-Lys(Z)-Pro-OBzl消失。原料点消失后，反应混合物过滤，滤除Pd/C。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至干，残留物反复用无水乙醚磨洗，得150mg类白色固体(75％)即为(AKP)6。Mp 207-209℃，[a]D 32＝-98.2(C＝1，MeOH)。ESI-MS(m/e)1797[M+H]+.1HNMR(DMSO-d)δ/ppm＝8.115(br，12H)，4.476(br，4H)，4.328(br，4H)，4.230(br，4H)，3.623(br，3H)，3.394(br，3H)，2.738(br，24H)，2.049(br，20H)，1.803(br，18H)，1.574(br，24H)，1.328(br，10H)，1.180(br，20H).13CNMR(DMSO-d)δ/ppm＝172.51，172.35，171.69，170.36，65.37，59.72，50.64，49.04，47.36，30.96，29.53，27.06，24.94，22.95，18.38，17.81。元素分析(C84H146N24O19)：计算值C 56.17、H 8.19、N 18.72；实测值C 56.00、H 8.11、N 18.91。
试验例1本发明多肽溶血栓活性试验
1)大鼠手术与器械
SD大鼠(雄性，220～230g)按1200mg·kg-1剂量腹腔注射乌拉坦溶液进行麻醉。麻醉大鼠仰卧位固定，分离右颈总动脉，于近心端夹动脉夹，近心端和远心端分别穿入手术线，将远心端的手术线于皮毛用止血钳夹紧，在远心端插管，松开动脉夹，放出约1ml动脉血，装在1ml子弹头中。往垂直固定的玻璃管(长15mm，内径2.5mm，外径5.0mm，管底用胶塞密封)中注入0.1ml大鼠动脉血液，往管内迅速插入一支不锈钢质料的血栓固定螺栓。该血栓固定螺旋用直径为0.2mm的不锈钢丝绕成，螺旋部分长12mm，含15个螺圈，螺圈的直径为1.0mm，托柄与螺旋相连，长7.0mm，呈问号型。血液凝固15min后，打开玻璃管底部的胶塞，用镊子固定血栓固定螺旋的托柄，从玻璃管中小心地取出被血栓包裹的血栓固定螺旋。精确称重。
2)大鼠颈动静脉旁路插管
旁路插管由3段构成，中段为聚乙烯胶管，长60.0mm，内径3.5mm；两端为相同的聚乙烯管，管长100.0mm，内径1.0mm，外径2.0mm该管的一端拉成尖管(用于插入大鼠颈动脉或静脉)，外径为1.0mm，另一端的外部套一段长7.0mm，外径为3.5mm的聚乙烯管(加粗，用于插入中段的聚乙烯胶管内)3段管的内壁均硅烷化。将血栓包裹的血栓固定螺旋放入中段聚乙烯胶管内，胶管的两端分别与两根聚乙烯的加粗端相套。用注射器通过尖管端将管中注满肝素生理盐水溶液(50IU·kg-1)，备用。
继续分离麻醉大鼠的气管，并做气管插管。分离大鼠的左颈外静脉，近心端和远心端分别穿入手术线，在暴露的左颈外静脉上小心地剪一斜口，将上面制备好的旁路管道的尖管由斜口插入左颈外静脉开口的近心端，同时远离旁路管中段(含精确称重的血栓固定螺旋)内血栓固定螺旋的托柄。用注射器通过另一端的尖管推入准确量的肝素生理盐水(50IU·kg-1)，此时注射器不要撤离聚乙烯管，用止血钳夹住注射器与聚乙烯管之间的软管。在右颈总动脉的近心端用动脉夹止血，在离动脉夹不远处将右颈总动脉小心地剪一斜口。从聚乙烯管的尖部拔出注射器，将聚乙烯管的尖部插入动脉斜口的近心端。旁路管道的两端都用4号手术缝线与动静脉固定。
3)给药
用头皮针将生理盐水(3ml·kg-1)，尿激酶的生理盐水溶液(20000IU·kg-1)或线性肽的生理盐水溶液(10μmol·kg-1)通过旁路管的中段(含精确称重的血栓固定螺旋)，刺入远离血栓固定螺旋的近静脉处，打开动脉夹，使血流通过旁路管道从动脉流向静脉，此即大鼠动静脉旁路溶栓模型，缓慢将注射器中的液体注入到血液中，使生理盐水(空白对照)，尿激酶(阳性对照)或线性肽(治疗剂)通过血液循环，按静脉-心脏-动脉的顺序作用到血栓上。从开始注射时计时，1h后从旁路管道中取出血栓固定螺旋，精确称重。求每只大鼠旁路管道中血栓固定螺旋给药前后的质量差，统计各组的血栓质量差值(X±SD)，并做t检验。
4)结果
血栓质量差值列入下表。
表1经药物治疗引起的血栓减重
a.与NS比P＜0.001。
Claims (3)
1.具有溶血栓活性的多肽，选自以下任意一种的氨基酸序列：
Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys，Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys，Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys，Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys或Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys-Pro-Ala-Lys。
2.一种制备权利要求1的多肽方法，其特征在于：采用常规液相接肽法逐步接肽而成。
3.权利要求1的多肽在制备溶血栓药物中的用途。
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