CN101181227B - 生物黏附性环孢素a固体脂质纳米粒原位凝胶制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，公开了一种生物黏附性环孢素A固体脂质纳米粒原位凝胶制剂及其制备方法。此制剂包括治疗有效量的环孢素A、乳化剂、脂质材料及电荷调节剂/包衣材料等，每1000ml制剂中包含：环孢素A0.05g-5.0g，脂质材料0.0g-50g，乳化剂0.5g-60g，包衣材料0.1g-30g，凝胶基质200.0g-500.0g，纯化水加1000ml。先将正电荷材料包裹于纳米粒表面，再制备成原位凝胶制剂。本发明制备的纳米粒粒径小于200nm，具有较高的包封率，表现大于+23mv的zeta电位，并随电荷调节剂/包衣材料用量增大，电位提高。本发明制剂显示出了较好的双重粘膜粘附性，可用于局部给药，并因在给药部位滞留时间延长，药物的作用时间长，可提高药物生物利用度和药物治疗指数，可以减少用药剂量和毒副作用。

Description

生物黏附性环孢素A固体脂质纳米粒原位凝胶制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种生物黏附性环孢素A固体脂质纳米粒原位凝胶制剂及其制备方法，更具体而言，涉及一种用带正电的材料包衣的固体脂质纳米粒原位凝胶制剂及其制备方法。

背景技术

环孢素A是一种脂溶性的、由11个氨基酸所构成的环状多肽化合物。1983年，美国食品药品监督管理局批准环孢素A正式注册上市，主要用于器官或组织移植后排异反应的防治和自身免疫性疾病的治疗。全身应用环孢素制剂生物利用度低、个体差异大，易引起肾毒性、肝毒性、中枢神经系统毒性、消化道反应等副作用，局部应用环孢素制剂可以直接作用于病灶部位，用药量少，副作用少。眼部应用环孢素A主要治疗角膜移植排斥、单纯疱疹病毒性角膜炎、过敏性结膜炎、干眼症、坏死性巩膜炎、增殖性玻璃体视网膜病变等；皮肤应用环孢素A用于治疗银屑病等。

局部环孢素制剂有环孢素滴眼剂、微乳、脂质体等。上市的局部应用制剂主要是环孢素油溶液滴眼剂，药物载体主要是一些植物油等，具有刺激性，且药物在用药部位停留时间短，生物利用度差。固体脂质纳米粒生物相容性好，药物生物利用度高，易于大规模生产。正电荷包衣的固体脂质纳米粒由于表面带正电，易于与带负电的皮肤或生物膜表面结合，与普通的固体脂质纳米粒相比，纳米粒颗粒在生物膜表面的滞留时间长，有利于药物的充分吸收。关于带正电的环孢素脂质纳米粒目前在国内外没有报道，仅有带正电荷的微乳制剂在国外有报道。

与此同时，原位凝胶又区别于普通的凝胶制剂，它在体外为粘度很小的流体，入眼后随温度的升高，迅速转变为粘度极大的透明凝胶，粘附于生物膜表面，延长了纳米粒与生物膜的接触时间，有助于药物的充分吸收。而且，所形成的凝胶为假塑性流体，眨眼过程的剪切力足以使之变为粘度很小的流体，从而易于在眼表的均匀涂布。

目前，国内已有含环孢素A的眼用凝胶专利，“环孢素眼用凝胶(公开号：CN1456350)”。固体脂质纳米粒原位凝胶与普通凝胶制剂相比，具有如下优点：(1)脂质纳米粒原位凝胶具有双重缓释作用，即从纳米粒到凝胶层，从凝胶层到眼部，而普通凝胶剂只有凝胶层的缓释作用。(2)脂质纳米粒原位凝胶在眼部的停留时间长，即凝胶的黏附和纳米粒的黏附双重作用，即使凝胶层溶蚀了，带正电荷的纳米粒对带负电的眼黏膜具有黏附作用，充分延长药物的作用时间，而普通凝胶剂只是通过凝胶的物理黏附作用增加眼部的滞留时间，凝胶溶蚀后药物随眼泪流出，作用时间相对短。(3)原位凝胶在室温下黏度小，流动性好，有利于眼部给药，药物在眼部形成凝胶延长停留时间，而普通凝胶剂室温粘度大，流动性不好，使用不方便。(4)原位凝胶在室温黏度小，有利于配制的罐装，而普通凝胶剂粘度大，配制时易产生大量的气泡，工业生产和灌装不方便。(5)原位凝胶在滴眼时由于黏度小，有利于均匀分布在眼内，然后形成凝胶，而普通凝胶粘度大，药物不易在角膜、结膜表面均匀分布，只能靠眨眼动作均匀涂布。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种表面带正电的固体脂质纳米粒，并将其载于凝胶基质中，此制剂可以增加药物的稳定性，达到药物的缓慢释放，延长药物的作用时间，提高药物的生物利用度。本发明还提供了正电固体脂质纳米粒原位凝胶制剂的制备方法。

本发明的局部应用带正电的环孢素A固体脂质纳米粒原位凝胶制剂，基于1000ml的总量，其包含：

环孢素A         0.05g-5.0g

脂质材料        0.0g-50g

乳化剂          0.5g-60g

包衣材料        0.1g-30g

凝胶基质        200.0g-500.0g

纯化水          加至1000ml

其中的活性成分是环孢素A，但不局限于环孢素A，大部分亲脂性药物均可适用。并且，此剂型不仅适合于眼部给药，还适用于其他粘膜给药或皮肤给药方式。

可应用于本发明的脂质材料包括：硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、双硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、山嵛酸甘油酯、月桂酸甘油酯、甘油棕榈酸硬脂酸酯、二十二酸单、双、三甘油酯的混合物、三豆蔻酸甘油酯、枸橼酸甘油酯、十八醇、棕榈酸、二十二碳烷酸、癸酸、豆蔻酸、山嵛酸、月桂酸、胆固醇、鲸蜡醇棕榈酸酯、蜂蜡中的一种或多种；优选山嵛酸甘油酯与单硬脂酸甘油酯的混合物，混合物中山嵛酸甘油酯的比例为10％-70％，最佳比例为10％-30％。

乳化剂可以是泊洛沙姆188、泊洛沙姆182、泊洛沙姆407、泊洛沙姆908、泰洛沙姆、卵磷脂、大豆磷脂和/或合成磷脂、胆酸钠、甘胆酸钠、牛黄胆酸钠、去氧牛黄胆酸钠、十二烷基硫酸钠、十八烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、吐温-80、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚乙二醇、苄泽、卖泽中的一种或多种；可以添加助乳化剂，如乙醇，或无助乳化剂。

包衣材料为十八胺、磷酸鲸蜡酯、氯化苯甲烃铵、溴化十六烷基三甲胺、氯化十六烷基嘧啶、溴化二甲基双十八烷基铵。首先将包衣材料溶于稀盐酸，稀盐酸也作为pH调节剂，用量使最终制剂PH在6-7之间，然后用此稀酸溶液包衣。随包衣材料用量的增加，纳米粒表面逐渐由带负电转变为不带电、带正电，继续增加包衣材料用量，正电电位提高。

凝胶基质选用泊洛沙姆407，或泊洛沙姆407与188的混合物，使最终凝胶的胶凝温度在室温以上，体温以下。眼部应用制剂经模拟泪液稀释后，胶凝温度在眼表温度(34℃)以下。

本发明的带正电的固体脂质纳米粒原位凝胶制剂，外观呈半透明且具有蓝色乳光，PH值为6.0-7.0，纳米粒平均粒径小于200nm，zeta电势大于23mv，环孢素A的包封率大于80％。

本发明提供上述正电固体脂质纳米粒原位凝胶制剂的制备方法，该方法的特点在于，采用正电荷材料包裹纳米粒，方法简单。操作步骤包括：(一)固体脂质纳米粒的制备：称取脂质材料，置80℃的水浴中熔融后，相继加入药物、乳化剂，搅拌混合均匀，加水适量，继续搅拌10分钟左右直到形成均匀初乳，经过高压乳匀机或探头超声，过0.45um微孔滤膜即可。(二)正电荷包衣纳米粒的制备：包衣材料用少量温热的无水乙醇溶解后，慢慢加入稀盐酸，摇匀，趁热将此稀酸溶液加入上述制备好的纳米粒混悬液中，整个过程最好保持温度不低于70℃，混悬液继续超声半分钟混匀。(三)纳米粒原位凝胶制剂的制备：将上一步制备的包衣纳米粒混悬液置于冰箱中冷藏片刻，于高速磁力搅拌下缓缓加入准确称量的泊洛沙姆407，或泊洛沙姆407与188按比例的混合物，继续搅拌使其分散均匀，然后将其放入4℃冰箱中保存12小时以上，直至聚合物完全溶解，得到澄明溶液。

本发明的带正电固体脂质纳米粒原位凝胶制剂的制备方法，是采用先制备纳米粒，再将正电荷材料包裹于纳米粒表面的方法，取代已有文献报道的将正电荷材料混于脂质材料中的方法。此方法简便，减少正电荷材料的用量，同时增加了纳米粒的稳定性。

本发明中所述的固体脂质纳米粒的制备方法中，除可用高压乳匀或探头式超声法，还可以用微乳法，乳化溶剂扩散法。

上述方法利用探头超声的超声功率为400w。若加大超声功率可适当减少超声时间。超声功率控制在400w-600w，不低于400w。超声时间4到6分钟，最好不超过6分钟。制备的纳米粒粒径在120nm-160nm。

本发明用泊洛沙姆作为凝胶基质制备的原位凝胶为温度敏感型原位凝胶，非离子表面活性剂泊洛沙姆室温下为自由流动的液体，达到临界胶束温度后，聚合物链上的疏水性聚氧丙烯(PPO)嵌段脱水，泊洛沙姆分子在溶液中聚集成以脱水PPO链为核心，以水化膨胀的聚氧乙烯(PEO)链为外壳的球状胶束，随温度升高，胶束间的缠结与堆砌作用加剧而诱发胶凝。低浓度的泊洛沙姆在模拟泪液稀释下不能形成凝胶，固体脂质纳米粒的加入使泊洛沙姆原位凝胶的胶凝温度上升，纳米粒浓度越大，胶凝温度上升越高，凝胶透明度下降。本发明找到最优的纳米粒浓度范围及相应的凝胶基质含量如下：

每1000ml制剂中包含：

环孢素A        0.05g-5.0g

脂质材料       0.0g-50g

乳化剂         0.5g-60g

包衣材料       0.1g-30g

凝胶基质       200.0g-500.0g

纯化水        加至1000ml

本发明除可以用于眼部给药外，还适用于其他粘膜给药或皮肤给药方式。

本发明制剂相比于现有的油溶性滴眼液和普通凝胶剂具有如下的有益效果：

1、油溶液对眼部有刺激性，易损失，药物生物利用度低，原位凝胶的缓慢溶蚀作用及纳米粒表面正电荷效应使载药纳米粒在眼部停留时间延长，有利于药物的充分吸收，增加生物利用度。

2、相比于普通凝胶制剂，由于室温下为自由流动的液体，便于滴入眼中，生产、使用方便，且易在眼表均匀涂布。

3、粒径小，对于脂溶性药物包封率高，脂质材料对眼部几乎无刺激和毒副作用。

本发明开发的固体脂质纳米粒凝胶制剂，将纳米粒和原位凝胶的优势结合，纳米粒又用正电荷材料包衣，可知纳米粒凝胶制剂此大大增加了药物的局部滞留，为提高药物的生物利用度提供了新的方法。

附图说明

图1为环孢素固体脂质纳米粒的粒度分布。

图2为正电固体脂质纳米粒混悬液的zeta电位。

图3为带正电与带负电的固体脂质纳米粒在角膜上的粘附照片。

图3a，b分别为模拟泪液稀释前、稀释后角膜表面纳米粒滞留情况图，每幅图左方角膜表示带负电的纳米粒滞留情况，右方角膜为带正电纳米粒滞留情况

具体实施方式

下面的实施例将有助于理解本发明，但本发明不局限于这些实施例：

实施例1

按照下表1给出的实施例1的组成，将400mg单硬脂酸甘油酯和100mg山嵛酸甘油酯混合物在80℃水浴中熔融，相继加入40mg环孢素A、600mg泊洛沙姆188，搅拌混合均匀后，滴加同温度的去离子水7.5ml，搅拌10分钟至形成初乳。初乳400w超声6分钟，趁热过0.45um微孔滤膜后，滴入预先配制好的十八胺酸溶液，继续超声半分钟，室温冷却。

十八胺酸溶液的配制：340mg十八胺用0.5ml热无水乙醇溶解后，加入5％稀盐酸2ml，摇匀即可。

取上述纳米粒混悬液2.5ml，用去离子水稀释至10ml，于高速磁力搅拌下，缓缓加入2.4g泊洛沙姆407，继续搅拌使其分散均匀，然后放入4℃冰箱中保存12小时。

实施例2-4

采用与实施例1相同的制备方法，由表1中给出的组成和工艺参数，制得实施例2-4的纳米粒原位凝胶制剂。

表1实施例1-4纳米粒原位凝胶制剂组成和制备工艺

(1)测定纳米粒的粒度分布和zeta电位

将纳米粒混悬液以蒸馏水适当稀释，用Coulter LS 230测定样品粒度分布，Nicomp-380/ZLS动电电位测定仪测定电位。

(2)测定环孢素A固体脂质纳米粒的包封率

以Sephadex G25葡聚糖凝胶微柱离心法分离环孢素固体脂质纳米粒和游离药物，分别测定纳米粒及混悬液中环孢素的含量，根据以下公式计算包封率：

EN(％)＝C/C₀×100％

其中，EN代表包封率；C和C₀分别代表被包裹的药量和纳米粒混悬液中的总药量。

(3)纳米粒对角膜的粘附试验

实验所用的纳米粒混入荧光素作为标志探针。取家兔完整角膜，去除多余组织后，用蒸馏水冲洗几次，首先将角膜置于纳米粒混悬液中浸泡5分钟，再转移至模拟泪液中浸泡5分钟。模拟泪液浸泡前后纳米粒对角膜的粘附情况，可以通过将角膜置于紫外灯下观察角膜表面荧光区域的大小来断定。荧光区域大，证明纳米粒对角膜的粘附性好。如图3所示，模拟泪液稀释前后，带正电的纳米粒比带负电。

Claims (5)

1.一种生物黏附性环孢素A固体脂质纳米粒原位凝胶制剂，其特征在于：其处方组成为：

每1000ml制剂中包含：

所述的凝胶基质是泊洛沙姆407，或泊洛沙姆407与188的混合物；包衣材料是十八胺、磷酸鲸蜡酯、氯化苯甲烃铵、溴化十六烷基三甲胺、氯化十六烷基嘧啶、溴化二甲基双十八烷基铵中的一种。

2.根据权利要求1所述的一种生物黏附性环孢素A固体脂质纳米粒原位凝胶制剂，其特征在于：所述的脂质材料是硬脂酸、单硬脂酸甘油酯、双硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、山嵛酸甘油酯、月桂酸甘油酯、甘油棕榈酸硬脂酸酯、二十二酸单甘油酯和二十二酸双甘油酯和二十二酸三甘油酯的混合物、三豆蔻酸甘油酯、枸橼酸甘油酯、十八醇、棕榈酸、二十二碳烷酸、癸酸、豆蔻酸、山嵛酸、月桂酸、胆固醇、鲸蜡醇棕榈酸酯、蜂蜡中的一种或多种；所述的乳化剂是泊洛沙姆188、泊洛沙姆182、泊洛沙姆407、泊洛沙姆908、泰洛沙姆、卵磷脂、大豆磷脂和/或合成磷脂、胆酸钠、牛磺胆酸钠、去氧牛磺胆酸钠、十二烷基硫酸钠、十八烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、吐温-80、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚乙二醇、苄泽、卖泽中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的一种生物黏附性环孢素A固体脂质纳米粒原位凝胶制剂，其特征在于：该制剂的给药方式是眼部给药、粘膜给药和皮肤给药中的一种。

4.一种如权利要求1所述的生物黏附性环孢素A固体脂质纳米粒原位凝胶制剂的制备方法，其特征在于：其操作步骤包括：(1)固体脂质纳米粒的制备：脂质材料水浴熔融后，相继加入药物、乳化剂，搅拌下加入同温度的纯化水、形成初乳后经过高压乳匀机或探头超声，形成固体脂质纳米粒混悬液，(2)包衣材料用少量稀酸溶液溶解后，趁热滴入上述纳米粒混悬液中，混匀即可，(3)纳米粒原位凝胶制剂的制备：向上述制备好的包衣纳米粒混悬液中，缓慢加入凝胶基质，同时高速搅拌，最后放于冰箱中冷藏保存12小时以上，所制备凝胶制剂的处方组成为：每1000ml制剂中包含：环孢素A0.05g-5.0g；脂质材料50g；乳化剂0.5g-60g；包衣材料0.1g-30g；凝胶基质200.0g-500.0g；纯化水余量。

5.根据权利要求4所述的生物黏附性环孢素A固体脂质纳米粒原位凝胶制剂的制备方法，其特征在于：所述的固体脂质纳米粒的制备方法中，可以用微乳法、乳化溶剂扩散法代替高压乳匀或探头式超声法。

Images