CN101172095A - 含有蜂王浆的蛋白水解物的化妆材料 - Google Patents
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Abstract
本发明的目的在于提供蜂王浆蛋白水解物的化妆品用途，特别是提供美白化妆材料、护肤化妆材料、抗老化化妆材料、美化肌肤化妆材料、皱纹改善/皱纹预防用化妆材料。另外，本发明的目的在于提供透明质酸产生促进剂。一种透明质酸产生促进剂，其含有蜂王浆材料的蛋白水解物。
Description
技术领域
本发明涉及含有透明质酸产生促进剂的化妆材料，具体而言，本发明涉及美白、护肤、抗老化、美化肌肤、皱纹改善/皱纹预防、透明质酸产生促进等用途。
背景技术
目前，蜂王浆在健康食品、医药品、化妆品等领域中被广泛应用，报道了血管扩张、血压下降、抗菌作用等各种药理作用和营养生理作用。蜂王浆是在蜜蜂唾液腺合成的、从头部的下咽头腺和大颚腺分泌出的一种乳状物质，是工蜂为了养育蜂王而给与被放入蜂王幼虫用巢房中的幼蜂的物质。蜂王浆均衡地含有蛋白质、维生素和矿物质，一生持续食用蜂王浆的蜂王寿命是工蜂的40倍，具有1天2000个的产卵能力。该蜂王浆有效成分的研究，是以10-羟基-2-癸烯酸为代表脂肪酸、氨基酸、维生素等的低分子量化合物为中心进行的。
另一方面，蜂王浆中通常含有10％以上的蛋白质，但是有关该蛋白质的分子结构以及生理作用的研究很落后。另外，配合蜂王浆的饮剂等的制造时，进行醇提取，蛋白质作为沉淀物被分离出来，但是目前该蛋白质还不能被有效利用。
关于蜂王浆蛋白质的蛋白酶处理物，已知钙吸收促进作用(非专利文献1)、血糖值降低作用(非专利文献2)，也报道了抗氧化作用(非专利文献3)、胶原蛋白产生促进作用(专利文献1)和降压作用(专利文献2)。
【专利文献1】日本特开2003-171258
【专利文献2】日本特开2005-255670
【非专利文献1】仲佐輝子、食品と開発、34，5(1999)
【非专利文献2】上田修一郎、Food Style 21，6，5(2002)
【非专利文献3】(社)全国ロ一ヤルゼリ一公正取引協議会「ロ一ヤルゼリ一(Royal Jelly)に関する研究」平成13年度研究報告書
发明内容
本发明的目的在于提供蜂王浆蛋白水解物的化妆品用途，特别是提供美白化妆材料、护肤化妆材料、抗老化化妆材料、美化肌肤化妆材料、皱纹改善/皱纹预防用化妆材料。
另外，本发明的目的在于提供透明质酸产生促进剂。
本发明人对上述问题进行了反复地研究，结果发现，蜂王浆材料的蛋白水解物具有很强的透明质酸产生促进作用，基于这种透明质酸产生促进作用，可以得到具有护肤、美白、抗老化(anti-aging)、美化肌肤、皱纹改善/皱纹预防等各种效果。
本发明提供以下的透明质酸产生促进剂、美白化妆材料、护肤化妆材料、抗老化化妆材料、美化肌肤化妆材料、皱纹改善/皱纹预防化妆材料。
1.一种透明质酸产生促进剂，其含有蜂王浆材料的蛋白水解物。
2.一种美白化妆材料，其含有如项1所述的透明质酸产生促进剂。
3.一种护肤化妆材料，其含有如项1所述的透明质酸产生促进剂。
4.一种抗老化化妆材料，其含有如项1所述的透明质酸产生促进剂。
5.一种美化肌肤化妆材料，其含有如项1所述的透明质酸产生促进剂。
6.一种改善或预防皱纹的化妆材料，其含有如项1所述的透明质酸产生促进剂。
根据本发明，通过将含有蜂王浆蛋白水解物的化妆材料应用于皮肤，可以解决雀斑、皮肤暗淡、皮肤粗糙、褐斑、皮肤松弛等与肌肤有关的问题。
具体实施方式
本发明中，成为蛋白质原料的蜂王浆材料(ロ一ヤルゼリ一素材)，是指含有蜂王浆的蛋白质的材料，只要满足上述条件就没有特别限制，例如是指鲜蜂王浆(生ロ一ヤルゼリ一)、干燥蜂王浆、对蜂王浆进行乙醇沉淀、硫酸铵处理、加热处理等蛋白变性处理而得到的蛋白沉淀物(包括乙醇沉淀物)、或者含有通过提取、过滤、离心分离、层析等各种方法对蜂王浆进行分级后的蛋白质的材料。
蜂王浆可以是任何一种，可以广泛使用蜜蜂为了养育蜂王而分泌的蜂王浆。具体而言，蜂王浆是将蜜蜂中的工蜂由下咽头腺及大颚腺分泌的分泌物混合而成的乳白色的胶状物质。作为来自蜂王浆的蛋白质级分，可以适宜使用将蜂王浆进行醇沉淀而得到的蛋白级分。特别优选使用在制造蜂王浆饮料时作为水不溶性蛋白副产物产生的蜂王浆的乙醇变性蛋白质。乙醇变性蛋白质，可以得到使用约50～约100体积％的乙醇从蜂王浆中提取癸烯酸等饮料用生理活性物质后的残渣的对水溶解度小的蛋白质。
本发明的蜂王浆材料的水解物，可以利用蛋白质分解酶进行水解得到。蛋白质分解酶中含有肽链内切酶和肽链端解酶，可以使用这些酶的1种或者2种以上。
作为本发明中使用的蛋白质分解酶，可以例示来自动物(例如，胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、胰酶等)、来自植物(例如，木瓜蛋白酶等)或者来自微生物(例如，乳酸菌、酵母、霉菌、枯草菌、放线菌等)的肽链内切酶、羧肽酶、氨基肽酶、或者来自微生物(例如，乳酸菌、曲霉属菌、根霉属菌)等的肽链端解酶。
作为蛋白质分解酶的优选例子，可以列举例如：灰色链霉菌(Streptomyces griseus)产生的肽酶(商品名：アクチナ一ゼAS)、米曲霉(Aspergillus oryzae)产生的肽酶(商品名：プロテア一ゼA、フレ一バ一ザイム)、蜂蜜曲霉(Aspergillus melleus)产生的肽酶(商品名：プロテア一ゼP)、米曲霉(Aspergillus oryzae)产生的肽酶(商品名：ウマミザイムG、Promod 192P、Promod 194P、スミチ一ムFLAP)、酱油曲霉(Aspergillus sojae)产生的肽酶(商品名：Sternzyme B15024)、曲霉属产生的肽酶(商品名：コクラ一ゼP)、米根霉(Rhizopus oryzae)产生的肽酶(商品名：ペプチダ一ゼR)、枯草杆菌(Bacillus subtilis)产生的肽酶(商品名：オリエンタ一ゼ22BF、ヌクレイシン)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)产生的肽酶(商品名：アルカラ一ゼ)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)产生的肽酶(商品名：プロテア一ゼS)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)产生的肽酶(商品名：ニユ一トラ一ゼ)、芽孢杆菌属产生的肽酶(商品名：プロタメツクス)。
另外，也可以使用通过在蛋白质分解酶中替代、添加、缺失、插入1以上氨基酸等进行改性而得到的突变酶。这样的突变蛋白质分解酶也可以用于本发明蜂王浆材料的酶分解。
作为用蛋白质分解酶处理蜂王浆材料的条件，例如通过在水性溶剂中在约15℃至约60℃，优选约20℃至约50℃，特别是37℃左右处理约1～约72小时，优选处理约3～约48小时，可以较好地实施。蛋白质分解酶的使用量，例如每100g蛋白质为约0.01～约3g，优选约0.05～约1g。蛋白质分解酶可以使用游离的酶，也可以使用固定在载体上的酶。
反应液适合使用水，也可以在含有少量乙醇等水混溶性有机溶剂的含水乙醇等水性溶剂中进行。
通过对酶解产物(酵素分解物)的反应液进行热处理、以及根据需要进一步进行离心分离、过滤、提取、脱盐、冻干或喷雾干燥等后处理，可以得到蛋白分解物。例如，使用鲜蜂王浆或干燥蜂王浆作为蜂王浆材料的情况下，也可以除去来自蜂王浆的糖类等成分。
在本发明的优选实施方式之一中，本发明的蜂王浆材料的蛋白分解物，利用凝胶过滤柱测定的平均分子量为约300～约7000，特别是约500～约6000。
本发明的蛋白分解物在酶处理后，根据需要可以进行脱盐处理来制造，也可以进一步通过色谱柱等的处理，收集透明质酸产生促进作用更强的级分。
本发明中蜂王浆蛋白水解物的配合量，在化妆材料总量中，以干燥物计为0.0005至20.0重量％、优选0.001至10.0重量％。当小于0.0005重量％时，本发明的效果不能充分显现，而超过20.0重量％时，制剂困难，因此不优选。另外，即使配合10.0重量％以上，也观察不到很大效果的提高。另外，特别优选蜂王浆的蛋白水解物以0.01至0.1重量％的浓度应用于皮肤。
透明质酸是通过真皮成纤维细胞的膜中存在的透明质酸合成酶(HAS)合成的酸性粘多糖(Y.Sugiyama等，J.Invest.Dermatol.，110，116(1998))。透明质酸有助于细胞间隙中水分的保持、基于组织内胶状基质形成的细胞的保持、组织的润滑性与柔软性的保持(BIOINDUSTRY Vol8，346(1991))。已报道透明质酸随年龄增加而减少(K.Matsuoka等，Aging，1，47(1989))、或者变性(L.A.M.Meyer等，J.Invest.Dermatol.，102，385(1994))，据称这样的变化是引起皮肤干燥、皱纹、松弛等的一个原因。
本发明中使用的蜂王浆蛋白水解物，对任何人的皮肤都具有优良的透明质酸产生促进作用，因此，配合该水解物的化妆材料，可以给与皮肤张力和湿润，防止皮肤的老化，消除或者减轻皱纹，让皮肤变得娇嫩，使皮肤斑点和暗淡变得不显著，具有美化肌肤效果，可以维持健康的皮肤，因此可以用于美白化妆材料、抗老化化妆材料、美化肌肤化妆材料、护肤化妆材料、改善/预防皱纹用化妆材料等。
本发明的化妆材料中，除了蜂王浆蛋白水解物以外，根据需要可以适当添加化妆品中通常使用的成分，例如，美白剂、保湿剂、抗氧化剂、油性成分、紫外线吸收剂、表面活性剂、增稠剂、醇类、粉末成分、色料、水性成分、水、各种皮肤营养剂等。
本发明的化妆材料的剂型，可以采用水溶液型、增溶型、乳化型、粉末型、油液型、凝胶型、软膏型、气溶胶型、水-油2相型、水-油-粉末3相型等广泛的剂型。例如，基础化妆品可以列举洗面奶、化妆水、乳液、膏剂、凝胶、精油、美容液、剥撕式面膜(パツク)、面膜等，脸部化妆用化妆品(メ一クアツプ)可以列举粉底、口红、腮红、眼影、眼线膏、睫毛膏等，其它可以列举洗面奶、按摩用剂、洁肤用剂、胡后水、剃须水、剃须膏、沐浴露、肥皂、洗发剂、润发素、护发素、定型膏、生发油、毛发生长剂、止汗剂、卫生用品等。
实施例
以下，通过实施例说明本发明，但是本发明不受这些实施例的限制。
制造例1
将250克鲜蜂王浆量取到500mL的烧杯中，加入离子交换水20mL，搅拌至均匀。加入47mL的2N NaOH，将pH调节至8.7。添加2.5克酶BP(Sternzyme BP 14202：来自SternEnzyme公司制造的枯草杆菌(Bacillus subtilis)的bacillolysin)，再添加离子交换水33mL并搅拌至均匀。将烧杯浸入恒温水槽中，用スリ一ワンモ一タ一搅拌蜂王浆液，同时使其在45℃反应1 5小时。升高恒温水槽的温度，用スリ一ワンモ一タ一搅拌蜂王浆液同时加热，到达80℃后立即进行水冷却，进行冷冻干燥，从而得到作为冷冻干燥物形式的蜂王浆蛋白水解物。
实施例1：透明质酸产生促进(体外，in vitro)
在含有10％FCS(胎牛血清)的RPMI-1640培养基中将人正常成纤维细胞株化系(樹立株)WI-38细胞调节为1×105细胞/mL(细胞悬浮液)，每个孔中加入100μL的细胞悬浮液。然后，将板在37℃下、在5％CO2-95％空气中培养过夜，用RPMI-1640培养基150μL与PBS(-)40μL的混合物进行培养基交换，在各孔中添加制造例1得到的蜂王浆蛋白水解物，使其(最终浓度)为100μg/mL，在37℃下在5％CO2-95％空气中培养48小时。将培养物以1500rpm离心15分钟，得到上清液。使用市售的透明质酸测定试剂盒(生化学工业公司制)测定所得上清液中的透明质酸量。
另外，对未处理的鲜蜂王浆冷冻干燥物代替制造例1中得到的蜂王浆蛋白水解物、或者它们的对照组，也同样测定了上清液中的透明质酸浓度。将添加0.01mL水代替试样时的透明质酸量设定为100，计算透明质酸产生促进率。结果如表1所示。
表1
| 试样 | 试样浓度(μg/ml) | 透明质酸浓度(pg/ml) | 增加率(％) |
| 蜂王浆蛋白水解物 | 100 | 361.92 | 131 |
| 未处理的蜂王浆冷冻干燥物 | 100 | 303.47 | 110 |
| 对照 | 0 | 275.30 | 100 |
从表1的结果可以看出，本发明的蜂王浆蛋白水解物对于人细胞具有优良的透明质酸产生促进作用。
实施例2：透明质酸产生促进(体内，in vivo)
在无毛小鼠(Hos：hr-1)的皮肤上，2周时间内以100μl/5cm2/只/天的量涂布蜂王浆蛋白水解物的水溶液以及基剂(水，对照)，最后涂布24小时后取皮肤。通过将取下的无毛皮肤按以下所示的方法进行处理，对皮肤中的透明质酸进行定量。
透明质酸的定量如下所述进行。
将用丙酮脱脂的小鼠皮肤切细后，进行碱处理、中和、链霉蛋白酶E(シグマ)处理、再进行三氯乙酸处理和透析(Spectra/POR1，级分分子量6000至8000，Spectrum公司制)，制备透明质酸定量用的试样。透明质酸的定量通过使用生物素标记的透明质酸结合蛋白(生化学工业公司制)的ELISA法(A.J.Fosangetal.，Matrix，10，306-313，1990)进行。另外，作为皮肤的透明质酸含量的指标，使用相对于对照的干燥皮肤重量单位的透明质酸含量(相对值％)。
上述试验结果可知，蜂王浆蛋白水解物促进皮肤的透明质酸产生，特别是在10至100μg/ml的浓度下可以得到很高的效果。
配方例1：化妆水
根据以下配方通过常法调制化妆水。作为蜂王浆蛋白水解物，使用上述制造例1中制备的蜂王浆蛋白水解物。
化妆水配方
组成 配合量(％)
乙醇 10.00
山梨糖醇液 5.00
对羟基苯甲酸甲酯 0.05
三聚氧乙烯醚磷酸盐 0.40
蜂王浆蛋白水解物 0.01
柠檬酸 0.02
柠檬酸钠 0.05
纯化水 余量
(合计) 100.00
配方例2：美容液
根据以下配方通过常法调制美容液。作为蜂王浆蛋白水解物，使用上述制造例1中制备的蜂王浆蛋白水解物。
美容液配方
组成 配合量(％)
乙醇 8.00
1，3-丁二醇 5.00
对羟基苯甲酸甲酯 0.10
聚氧乙烯鲸蜡基醚 0.20
蜂王浆蛋白水解物 0.05
黄原胶 0.05
羟乙基纤维素 0.10
依地酸二钠 0.01
纯化水 余量
(合计) 100.00
配方例3：洗发剂
根据以下配方通过常法调制洗发剂。作为蜂王浆蛋白水解物，使用上述制造例1中制备的蜂王浆蛋白水解物。
组成 配合量(％)
月桂基硫酸三乙醇胺 20.00
聚氧乙烯月桂醚硫酸钠 10.00
烷基硫酸钠液 10.00
椰油脂肪酰胺丙基甜菜碱液 10.00
聚氧乙烯月桂醚 1.00
椰油脂肪酸二乙醇酰胺 3.00
椰油脂肪酸单乙醇酰胺 0.45
乙二醇二硬脂酸酯 0.50
对羟基苯甲酸甲酯 0.10
甘油 5.00
氯化O-[2-羟基-3-(三甲基铵)丙基]
羟乙基纤维素 0.20
聚氧乙烯-甲基聚硅氧烷共聚物 0.10
蜂王浆蛋白水解物 0.05
纯化水 余量
(合计) 100.00
配方例4：乳液
根据以下配方通过常法调制乳液。作为蜂王浆蛋白水解物，使用上述制造例1中制备的蜂王浆蛋白水解物。
组成 配合量(％)
软质羊毛脂脂肪酸胆甾醇酯 10.00
POE(20)山梨糖醇酐单硬脂酸酯 1.80
单硬脂酸甘油酯 1.20
蜂王浆蛋白水解物 0.10
甘油 3.00
对羟基苯甲酸甲酯 0.10
对羟基苯甲酸乙酯 0.10
香料 适量
纯化水 余量
(合计) 100.00
配方例5：霜剂
根据以下配方通过常法调制霜剂。作为蜂王浆蛋白水解物，使用上述制造例1中制备的蜂王浆蛋白水解物。
组成 配合量(％)
澳州坚果油脂肪酸胆甾醇酯 10.00
硬脂酸 7.50
十八十六醇 1.50
三异辛酸甘油酯 12.00
羊毛脂 3.00
棕榈酸鲸蜡酯 4.00
PEG(40)单硬脂酸酯 2.00
单硬脂酸甘油酯 5.00
蜂王浆蛋白水解物 0.10
防腐剂 适量
抗氧化剂 适量
香料 适量
纯化水 余量
(合计) 100.00
试验例
关于配方例1得到的化妆水(本发明)、和除了不含蜂王浆蛋白水解物以外具有相同组成的化妆水(对照)，由10名调查对象就保湿作用(湿润感)、美白作用(皮肤暗淡的改善)、抗老化(皱纹的改善)、美化肌肤作用(皮肤的张力、光泽)4个项目进行了试验。
结果，含有蜂王浆蛋白水解物的本发明化妆水，与不含该水解物的对照化妆水相比，全部项目都得到了更高评价。
另外，尽管没有列出数据，但是上述4个项目评价的提高，与调查对象的透明质酸量增加有关系，这些评价的提高，显然是基于透明质酸产生促进作用。
Claims (6)
1.一种透明质酸产生促进剂，其含有蜂王浆材料的蛋白水解物。
2.一种美白化妆材料，其含有如权利要求1所述的透明质酸产生促进剂。
3.一种护肤化妆材料，其含有如权利要求1所述的透明质酸产生促进剂。
4.一种抗老化化妆材料，其含有如权利要求1所述的透明质酸产生促进剂。
5.一种美化肌肤化妆材料，其含有如权利要求1所述的透明质酸产生促进剂。
6.一种改善或预防皱纹的化妆材料，其含有如权利要求1所述的透明质酸产生促进剂。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20080507 |