CN101144816B - 一种3-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫磁珠检测方法 - Google Patents
一种3-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫磁珠检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101144816B CN101144816B CN200710134517XA CN200710134517A CN101144816B CN 101144816 B CN101144816 B CN 101144816B CN 200710134517X A CN200710134517X A CN 200710134517XA CN 200710134517 A CN200710134517 A CN 200710134517A CN 101144816 B CN101144816 B CN 101144816B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- methyl
- solution
- supernatant
- centrifugal
- night
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Abstract
一种3-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫磁珠检测方法，属于免疫分析化学技术领域。本发明是利用磁珠作为固相载体，通过检测化学发光信号检测3-甲基-喹啉-2-羧酸，包括包被原、免疫源和抗体的制备，包被原的固定以及化学发光的检测；大大提高了检测的灵敏度，且操作更加简便，达到了高通量的目的，而且以铁磁微粒作为固相载体，具有清洗和分离方便，操作简单的优点，大大满足国内对其检测的需要。
Description
技术领域
一种3-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫磁珠检测方法，属于免疫分析化学技术领域。
背景技术
3-甲基-喹啉-2-羧酸，英文名称：3-methyl-quinoxaline-2-carboxylic acid(MQCA)，是喹噁啉类饲料添加剂在动物体内的代谢产物，以喹诺酮和喹乙醇为主要代表。当鸡、猪、鱼等食用此类饲料添加剂后，会在体内，主要是肌肉，肠道，肾脏中代谢生成3-甲基-喹啉-2-羧酸，这种代谢物对人体毒性极大。由于国内对喹啉类添加剂的大量滥用，造成了添加剂在动物体内的含量严重超标，国内的检测技术尚停留在对原药的检测。随着国际标准的提高，我国贸易的国际化，这种检测要求已经不能满足要求。近年来，国外开始逐渐加大了对代谢物3-甲基-喹啉-2-羧酸的研究和检测。为了与国际接轨，减少我国的肉类制品在出口时不必要的损失，我国有必要加大对代谢物的研究力度，由于对其研究较少，检测限仍然较高，为了弥补这一空白，有必要研究一种灵敏度高，检测限低，操作简单的，针对3-甲基-喹啉-2-羧酸的检测方法。
HPLC和LC-MS/MS的方法虽然灵敏，但是所需仪器价格昂贵，对操作人员的要求较高，较难推广。
发明内容
本发明的目的是提供一种3-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫磁珠检测方法，针对3-甲基-喹啉-2-羧酸的检测，灵敏度高，操作方便，线性范围宽。
本发明的技术方案：一种3-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫磁珠检测方法，利用磁珠作为固相载体，通过检测化学发光信号检测3-甲基-喹啉-2-羧酸，包括包被原、免疫源和抗体的制备，包被原的固定以及化学发光的检测；工艺步骤为：
(1)包被原的制备：
将3-甲基-喹啉-2-羧酸与间氨基苯甲酸相连，再与卵清蛋白偶联得到包被原；
(2)免疫源的制备：
将3-甲基-喹啉-2-羧酸与牛血清蛋白偶联得到免疫源；
(3)抗体的制备：
用步骤(2)得到的免疫源免疫兔子得到特异性兔多克隆抗体；
(4)磁性纳米粒子修饰：
用3-氨丙基三乙氧基硅烷修饰Fe3O4磁性纳米颗粒；
(5)包被原的固定：
将步骤(1)得到的包被原与磁性微粒偶联，并固定在玻璃微通道内；
(6)流动注射化学发光的检测：
利用间接竞争免疫检测原理，将3-甲基-喹啉-2-羧酸和步骤(3)得到的抗体通过玻璃微通道内，竞争结合后的抗体与辣根过氧化氢酶标记的羊抗兔IgG反应后，利用辣根过氧化氢酶催化对碘苯酚增强的鲁米诺-过氧化氢体系化学发光，检测3-甲基-喹啉-2-羧酸。
包被原的制备：
取3-甲基-喹啉-2-羧酸0.1mmol，溶解在6mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入120μL三正丁胺，反应0.5小时，再加入75μL氯甲酸异丁酯，反应1小时，再与含有0.1mmol间氨基苯甲酸的pH9.6碳酸钠缓冲溶液混合，在4℃下搅拌反应2小时，过程中有沉淀产生，离心，取沉淀物，干燥，得到半抗原；取半抗原0.1mmol，N-羟基琥珀酰亚胺0.1mmol，N，N-二环己基二亚胺0.1mmol，加入到3mLN，N-二甲基甲酰胺，室温搅拌反应过夜，离心去沉淀，上清液再与3mL卵清蛋白溶液在4℃下搅拌反应过夜，离心，上清液用超纯水透析3天，冻干，-20℃保存备用。
免疫源的制备：取3-甲基-喹啉-2-羧酸0.1mmol，N-羟基琥珀酰亚胺0.1mmol，N，N-二环己基二亚胺0.1mmol，加入到3mL N，N-二甲基甲酰胺中，室温搅拌反应过夜，离心去沉淀，上清液再与3mL卵清蛋白溶液在4℃下搅拌反应过夜，离心，上清液用超纯水透析3天，冻干，-20℃保存备用。
磁性纳米粒子的修饰：用二次蒸馏水分别配制FeSO4·7H2O和FeCl3·6H2O的溶液及NaOH溶液，将所配两种铁盐溶液混合，在铁盐的混合溶液中Fe2+离子的浓度为0.12mol/L，Fe3+的浓度为0.2mol/L；NaOH溶液的浓度为2.5mol/L；在剧烈搅拌下将NaOH溶液缓慢滴加到混合铁盐溶液中，将所得的沉淀在60℃陈化2小时，用二次蒸馏水将沉淀物清洗数次，过滤后再在60℃干燥24小时，在玛瑙研钵中研磨后所得产物为Fe3O4种子；将所得产物Fe3O4种子0.125g分散在100mL乙醇和1mL水混合液中，超声30min，滴加0.4mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷，室温搅拌7小时，以8000r/min离心30min，将3-氨丙基三乙氧基硅烷修饰的Fe3O4纳米颗粒从反应介质中分离，并用乙醇溶液对其清洗5次，过滤后再在60℃干燥24小时，备用。
磁性纳米粒子与包被原的偶联：取3-氨丙基三乙氧基硅烷修饰的Fe3O4纳米颗粒10mg，N-羟基琥珀酰亚胺11.5mg，N，N-二环己基二亚胺20.63mg，加入到3mLN，N-二甲基甲酰胺中，室温搅拌反应过夜，离心去沉淀，上清液再与3mL包被原溶液在4℃下搅拌反应过夜，离心，上清液用超纯水透析3天，对透析袋中溶液进行磁性分离，弃上清，得到粗磁粒-包被原的复合物，加入1mL含2％明胶的封闭液封闭，再用含吐温-20的磷酸盐缓冲液洗涤液洗涤，洗涤后磁分离，去上清，最后加入1mL 0.02mol/L pH7.6的Tris缓冲液，4℃保存备用。
流动注射化学发光的检测：将25μL磁粒-包被原的复合物注入玻璃微通道并以电磁铁固定，用蠕动泵注入50μL 3-甲基-喹啉-2-羧酸的标准品0.02ng/mL、0.04ng/mL、0.06ng/mL、0.08ng/mL、0.1ng/mL和50μL 10μg/mL的3-甲基-喹啉-2-羧酸的抗体混合液反应5分钟后，用0.01mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液清洗30s，再加入50μL 0.3μg/mL辣根过氧化氢酶标记的羊抗兔IgG反应5分钟，洗掉游离的辣根过氧化氢酶标记的抗体后，注入5×10-5mol/L路米诺和5×10-4mol/L过氧化氢，在流动注射化学分光光度仪上测定发光强度。
本发明的有益效果：免疫分析化学方法具有快速，灵敏度高，操作简单，专一性好等优点。与传统的ELISA方法相比，本发明利用磁珠作为固相载体，通过检测化学发光信号检测3-甲基-喹啉-2-羧酸，大大提高了检测的灵敏度，且操作更加简便，达到了高通量的目的，而且以铁磁微粒作为固相载体，具有清洗和分离方便，操作简单的优点。
附图说明
图1包被原的紫外扫描图。
图23-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫磁珠检测原理图。
图33-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫磁珠检测线性范围图。
具体实施方式
实施例1
(1)包被原的制备：
取3-甲基-喹啉-2-羧酸188mg，溶解在6mLN，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入120μL三正丁胺，反应0.5小时，再加入75μL氯甲酸异丁酯，反应1小时，再与含有100mg间氨基苯甲酸的碳酸钠缓冲液(pH9.6)混合，在4℃下搅拌反应2小时，过程中有沉淀产生，离心，取沉淀物，干燥，得到半抗原。
取半抗原9.9mg，N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)11.5mg，N，N-二环己基二亚胺(DCC)20.63mg，加入到3mLN，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，室温搅拌反应过夜，离心去沉淀，上清液再与3mL卵清蛋白(OVA)(60mg)溶液在4℃下搅拌反应过夜，离心，上清液用超纯水透析3天，冻干，-20℃保存备用。
(2)免疫源的制备：
取3-甲基-喹啉-2-羧酸188mg，N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)11.5mg，N，N-二环己基二亚胺(DCC)20.63mg，加入到3mL N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，室温搅拌反应过夜，离心去沉淀，上清液再与3mL卵清蛋白(OVA)(130mg)溶液在4℃下搅拌反应过夜，离心，上清液用超纯水透析3天，冻干，-20℃保存备用。
(3)免疫动物：采用新西兰大白兔作为被免疫的动物，首次免疫时将免疫源与等量的弗氏完全佐剂混合制成乳化剂，在大白兔背部皮下多点注射，免疫剂量为1mg/只，间隔2-4周后，用相同剂量免疫源加等量弗氏不完全佐剂混合制成乳化剂，加强免疫，免疫期间监测抗体效价及特异性，最后一次免疫不加佐剂。最后一次免疫7天后心脏放血，经硫酸铵分级沉淀得纯化的MQCA多克隆抗体。
(4)抗体效价的测定：
采用间接ELISA方法对免疫后不同时期的抗体进行效价的监测，以OD值达到1.0左右时判断为阳性，结果显示所制备的抗体的效价为3.2×105。
(5)磁性纳米粒子的修饰：
用二次蒸馏水分别配制FeSO4·7H2O和FeCl3·6H2O的溶液及NaOH溶液，将所配两种铁盐溶液混合。在铁盐的混合溶液中Fe2+离子的浓度为0.12mol/L，Fe3+的浓度为0.2mol/L，NaOH溶液的浓度为2.5mol/L。在剧烈搅拌下将一定体积的NaOH溶液缓慢滴加到混合铁盐溶液中，将所得的沉淀在60℃陈化2小时，用二次蒸馏水将沉淀物清洗数次，过滤后再在60℃干燥24小时，在玛瑙研钵中研磨后所得产物为Fe3O4种子。
将上步产物Fe3O4种子0.125g分散在100mL乙醇和1mL水中，超声30min，滴加0.4mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)，室温搅拌7小时，以8000r/min离心30min，将APTES修饰的Fe3O4纳米颗粒从反应介质中分离，并用乙醇溶液对其清洗5次，过滤后再在60℃干燥24小时，备用。
(6)磁性纳米粒子与包被原的偶联：
取步骤(5)所得最终产物10mg，N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)11.5mg，N，N-二环己基二亚胺(DCC)20.63mg，加入到3mLN，N-二甲基甲酰胺(DMF)中，室温搅拌反应过夜，离心去沉淀，上清液再与3mL包被原溶液在4℃下搅拌反应过夜，离心，上清液用超纯水透析3天，对透析袋中溶液进行磁性分离，弃上清，得到粗磁粒-包被原的复合物，加入1mL含2％明胶的封闭液封闭，再用含吐温-20的磷酸盐缓冲液(PBST)洗涤液洗涤，洗涤后磁分离，去上清，最后加入1mL 0.02mol/LpH7.6的Tris缓冲液，4℃保存备用。
(7)流动注射化学发光的检测：
将25μL磁粒-包被原的复合物注入玻璃微通道并以电磁铁固定。用蠕动泵注入50μL 3-甲基-喹啉-2-羧酸的标准品(0.02ng/ml、0.04ng/ml、0.06ng/ml、0.08ng/ml、0.1ng/ml)和50μL 10μg/mL的3-甲基-喹啉-2-羧酸的抗体混合液反应5分钟后，用0.01mol/L pH7.4的PBS清洗30s。再加入50μL 0.3μg/mL HRP标记的羊抗兔反应5分钟，洗掉游离的HRP标记的抗体后，注入5×10-5mol/L路米诺和5×10-4mol/L过氧化氢，在流动注射化学分光光度仪上测定发光强度。绘制得3-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫磁珠检测线性范围图，见图3。
Claims (1)
1.一种3-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫磁珠检测方法，其特征是利用磁珠作为固相载体，通过检测化学发光信号检测3-甲基-喹啉-2-羧酸，包括包被原、免疫源和抗体的制备，磁性纳米粒子与包被原的偶联以及化学发光的检测；工艺步骤为：
(1)包被原的制备：
取3-甲基-喹啉-2-羧酸188mg，溶解在6mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入120μL三正丁胺，反应0.5小时，再加入75μL氯甲酸异丁酯，反应1小时，再与含有100mg间氨基苯甲酸的pH9.6碳酸钠缓冲液混合，在4℃下搅拌反应2小时，过程中有沉淀产生，离心，取沉淀物，干燥，得到半抗原；
取半抗原9.9mg，N-羟基琥珀酰亚胺11.5mg，N，N-二环己基二亚胺20.63mg，加入到3mL N，N-二甲基甲酰胺中，室温搅拌反应过夜，离心去沉淀，上清液再与3mL含60mg卵清蛋白溶液在4℃下搅拌反应过夜，离心，上清液用超纯水透析3天，冻干，-20℃保存备用；
(2)免疫源的制备：
取3-甲基-喹啉-2-羧酸188mg，N-羟基琥珀酰亚胺11.5mg，N，N-二环己基二亚胺20.63mg，加入到3mLN，N-二甲基甲酰胺中，室温搅拌反应过夜，离心去沉淀，上清液再与3mL含130mg卵清蛋白溶液在4℃下搅拌反应过夜，离心，上清液用超纯水透析3天，冻干，-20℃保存备用；
(3)抗体的制备：用步骤(2)得到的免疫源免疫兔子得到特异性兔多克隆抗体；
(4)磁性纳米粒子的修饰：
用二次蒸馏水分别配制FeSO4·7H2O和FeCl3·6H2O的溶液及NaOH溶液，将所配两种铁盐溶液混合，在铁盐的混合溶液中Fe2+离子的浓度为0.12mol/L，Fe3+的浓度为0.2mol/L，NaOH溶液的浓度为2.5mol/L，在剧烈搅拌下将一定体积的NaOH溶液缓慢滴加到混合铁盐溶液中，将所得的沉淀在60℃陈化2小时，用二次蒸馏水将沉淀物清洗数次，过滤后再在60℃干燥24小时，在玛瑙研钵中研磨后所得产物为Fe3O4种子；
将上步产物Fe3O4种子0.125g分散在100mL乙醇和1mL水中，超声30min，滴加0.4mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷APTES，室温搅拌7小时，以8000r/min离心30min，将APTES修饰的Fe3O4纳米颗粒从反应介质中分离，并用乙醇溶液对其清洗5次，过滤后再在60℃干燥24小时，备用；
(5)磁性纳米粒子与包被原的偶联：
取步骤(4)所得最终产物10mg，N-羟基琥珀酰亚胺11.5mg，N，N-二环己基二 亚胺20.63mg，加入到3mL N，N-二甲基甲酰胺中，室温搅拌反应过夜，离心去沉淀，上清液再与3mL包被原溶液在4℃下搅拌反应过夜，离心，上清液用超纯水透析3天，对透析袋中溶液进行磁性分离，弃上清，得到粗磁粒-包被原的复合物，加入1mL含2％明胶的封闭液封闭，再用含吐温-20的磷酸盐缓冲液作洗涤液洗涤，洗涤后磁分离，去上清，最后加入1mL 0.02mol/L pH7.6的Tris缓冲液，4℃保存备用；
(6)流动注射化学发光的检测：
将25μL磁粒-包被原的复合物注入玻璃微通道并以电磁铁固定，用蠕动泵注入50μL 3-甲基-喹啉-2-羧酸的标准品和50μL 10μg/mL的3-甲基-喹啉-2-羧酸的抗体混合液反应5min后，用0.01mol/L pH7.4的PBS清洗30s，再加入50μL0.3μg/mL HRP标记的羊抗兔反应5min，洗掉游离的HRP标记的抗体后，注入5×10-5mol/L鲁米诺和5×10-4mol/L过氧化氢，在流动注射化学分光光度仪上测定发光强度，绘制得3-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫磁珠检测线性范围图；
所述3-甲基-喹啉-2-羧酸的标准品，其浓度分别为：0.02ng/mL、0.04ng/mL、0.06ng/mL、0.08ng/mL、及0.1ng/mL。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200710134517XA CN101144816B (zh) | 2007-10-31 | 2007-10-31 | 一种3-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫磁珠检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200710134517XA CN101144816B (zh) | 2007-10-31 | 2007-10-31 | 一种3-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫磁珠检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101144816A CN101144816A (zh) | 2008-03-19 |
| CN101144816B true CN101144816B (zh) | 2011-05-11 |
Family
ID=39207446
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN200710134517XA Expired - Fee Related CN101144816B (zh) | 2007-10-31 | 2007-10-31 | 一种3-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫磁珠检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101144816B (zh) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101315371B (zh) * | 2008-06-23 | 2012-05-23 | 江南大学 | 一种3-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫荧光猝灭检测方法 |
| CN102516822B (zh) * | 2011-11-04 | 2014-08-06 | 昆明理工大学 | 一种表面功能化Fe3O4纳米粒子及其制备方法和应用 |
| CN102735842A (zh) * | 2012-05-29 | 2012-10-17 | 西安金磁纳米生物技术有限公司 | 一种基于金磁微粒的化学发光免疫学检测小分子物质的方法 |
| CN103645329A (zh) * | 2013-12-20 | 2014-03-19 | 扬州大学 | 一种基于磁性微粒的自动化牛细胞因子化学发光免疫检测方法 |
| CN105301265B (zh) * | 2015-10-10 | 2017-06-30 | 山西师范大学 | 在线自动化磁性固相微萃取‑解吸‑检测装置及其方法 |
| CN113281517B (zh) * | 2021-05-10 | 2024-01-30 | 洛阳师范学院 | 一种免疫磁珠前处理联合hplc-uv检测2,4-二氨基嘧啶类药物残留的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1963507A (zh) * | 2006-12-06 | 2007-05-16 | 华中农业大学 | 3－甲基喹噁啉－2－羧酸残留的酶联免疫检测方法及试剂盒 |
| CN1971279A (zh) * | 2006-12-06 | 2007-05-30 | 华中农业大学 | 喹噁啉－2－羧酸残留的酶联免疫检测方法及试剂盒 |
| CN101046474A (zh) * | 2006-03-30 | 2007-10-03 | 中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所 | 一种检测喹噁啉类药物残留的酶联免疫试剂盒 |
-
2007
- 2007-10-31 CN CN200710134517XA patent/CN101144816B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101046474A (zh) * | 2006-03-30 | 2007-10-03 | 中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所 | 一种检测喹噁啉类药物残留的酶联免疫试剂盒 |
| CN1963507A (zh) * | 2006-12-06 | 2007-05-16 | 华中农业大学 | 3－甲基喹噁啉－2－羧酸残留的酶联免疫检测方法及试剂盒 |
| CN1971279A (zh) * | 2006-12-06 | 2007-05-30 | 华中农业大学 | 喹噁啉－2－羧酸残留的酶联免疫检测方法及试剂盒 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 晁博.喹烯酮残留标示物的ELISA检测方法研究及半抗原设计与合成.《中国优秀博硕士学位论文全文数据库（硕士） 农业科学辑，2006年第10期》.2006, * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101144816A (zh) | 2008-03-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101144816B (zh) | 一种3-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫磁珠检测方法 | |
| Crowle | Immunodiffusion | |
| CN103386282B (zh) | 一种表面环氧基活化的具有超顺磁性微球的合成以及环氧基与蛋白连接的方法 | |
| CN102072957B (zh) | 丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒及其制备方法 | |
| CN101382541B (zh) | 一种微囊藻毒素-lr的免疫荧光猝灭检测方法 | |
| CN103911345B (zh) | 用于外周血中循环肿瘤细胞捕获的免疫磁性微球 | |
| CN104697988A (zh) | 检测丙型肝炎病毒抗体的试剂盒及其检测方法和应用 | |
| CN101382542B (zh) | 一种微囊藻毒素-lr的免疫荧光pcr检测方法 | |
| CN103777013B (zh) | 一种检测水中大肠杆菌的微流控芯片以及方法 | |
| CN103344772B (zh) | Miltenberger血型抗体检测新方法 | |
| CN101865924A (zh) | 基于免疫磁珠联合酶联免疫吸附试验检测伏马毒素的方法 | |
| CN107202884A (zh) | 基于免疫磁珠和MnO2纳米粒子检测副溶血性弧菌试剂盒 | |
| CN101315371B (zh) | 一种3-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫荧光猝灭检测方法 | |
| CN113687063B (zh) | 一种基于苯硼酸交联剂的糖蛋白动态光散射免疫方法 | |
| CN105277423B (zh) | 一种用于呕吐毒素富集净化的免疫磁珠及其制备方法和应用 | |
| CN108148128B (zh) | 一种重金属镉人工抗原的制备方法及dota在制备重金属镉人工抗原试剂中的应用 | |
| CN109164257A (zh) | 一种基于磁微粒的时间分辨荧光免疫检测方法 | |
| CN101949926A (zh) | 人体包虫病胶体金免疫层析试尿液快速诊断试纸卡 | |
| CN110632148B (zh) | 一种测定分泌型自噬小体的电化学免疫传感器及其制备方法与应用 | |
| CN101315370A (zh) | 一种3-甲基-喹啉-2-羧酸的免疫荧光pcr检测方法 | |
| CN105478087A (zh) | 一种基于涂覆葡聚糖的羧基磁珠的制备方法及其应用 | |
| CN107238710B (zh) | 一种基于直接竞争荧光免疫法定量检测叶酸功能化二氧化硅靶向纳米药物载体的方法 | |
| CN105567724A (zh) | 一种胃泌素释放肽前体蛋白表达载体的构建、单抗及试剂盒的制备方法 | |
| CN107955069A (zh) | 一种改进的重金属铅人工抗原的合成方法及dota在制备重金属铅人工抗原试剂中的用途 | |
| CN107955070A (zh) | 一种改进的重金属铜人工抗原的合成方法及nota在制备重金属铜人工抗原试剂中的用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20110511 Termination date: 20111031 |