CN101125199A - 白介素2及其衍生物作为制备治疗鼻炎药物的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了白介素2(白介素－2)及其衍生物作为制备治疗鼻炎药物的应用，属于生物医药领域。本发明的优点是：本发明首次使用重组人白介素2治疗鼻炎，结果表明其能够明显缓解鼻炎的症状体征，明显改善鼻部的病变，疗效确切。

Description

白介素2及其衍生物作为制备治疗鼻炎药物的应用

技术领域

本发明涉及白介素2(白介素-2)及其衍生物作为制备治疗鼻炎药物的应用，属于生物医药领域。

背景技术

鼻炎是指鼻腔粘膜出现炎症，表现为充血或者水肿，患者经常会出现鼻塞，流清水涕，鼻痒，喉部不适，咳嗽等症状。鼻炎分过敏性鼻炎、慢性鼻炎、慢性鼻窦炎等，鼻炎发病的临床症状各异，危害极大，当影响鼻腔的生理功能时，会出现呼吸障碍，引发血氧浓度降低，影响其它组织和器官的功能与代谢，而出现一些如头痛、头晕、记忆力下降，胸痛、胸闷、精神萎糜等症状，甚至会并发肺气肿、肺心病、哮喘等严重并发症。而当鼻炎未能得到及时治疗，影响嗅觉粘膜时，就会出现嗅觉障碍，导致闻不着香臭等气味。当长期反复发作的鼻窦炎未得到及时治疗，炎症就会扩散至邻近器官、组织，而并发如额骨骨髓炎、眶骨壁骨炎及骨膜炎、眶壁骨膜下脓肿、眶内蜂窝织炎、球后视神经炎、硬脑膜外脓肿、硬脑膜下脓肿、化脓性脑膜炎、脑脓肿、海绵窦血栓性静脉炎等多种危重急症。

目前治疗鼻炎的主要药物及其优缺点如下：(1)抗组胺药，口服吸收较快，能较迅速地改善鼻痒、喷嚏、流涕症状，但对鼻堵症状无效，且嗜睡等副作用较大，有一些抗组胺药物还有严重的心脏毒副作用。(2)鼻粘膜减充血药，可以局部应用也可以全身应用，局部用药如麻黄素等起效很快，可迅速解除鼻堵塞症状，但这类药不能长期应用，通常不应超过4天，因为它具有血管扩张的副作用，导致鼻堵加重，长期应用必然引起药物性鼻炎，增加了鼻炎的复杂性和治疗的困难。(3)皮质类固醇，保护鼻腔组织不受过敏源的刺激，能有效的抑制过敏性鼻炎的各种症状，减少鼻黏膜肿胀及减缓鼻痒、打喷嚏、流鼻水等症状。皮质类固醇药物有口服及鼻喷剂两种，在症状比较严重时，可以选择口服类固醇来治疗，但副作用较大，一般建议服用几天后就停药。鼻喷剂型类固醇直接作用于鼻黏膜上，经局部吸收治疗来缓解症状，低剂量，使用类固醇鼻喷剂通常一周后才会改善症状。

白介素2(InterLeukin-2)是T淋巴细胞分泌的一种细胞因子(由133个氨基酸组成的多肽，分子量约为15KD)。它是人体免疫应答的核心物质，具有免疫增强、抗肿瘤和抗感染等作用。临床上已用于肾癌、黑色素瘤、淋巴瘤、肺癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、肠癌、膀胱癌、头颈部肿瘤、白血病及癌性胸腹水等病症的治疗，与放、化疗比较，白介素-2对正常细胞毒副作用轻微，能减轻肿瘤患者的疼痛，提高其生活质量。此外结核病、肝炎、艾滋病、性病、成瘾性吸毒者及其它免疫功能低下病人均可使用白介素-2。国外更是应用大剂量(1000万单位)治疗艾滋病患者。迄今为止，国内外尚未有应用白介素2治疗鼻炎的报道。

我公司产品“基因工程人白细胞介素-2”是国家重点科技项目(攻关)计划和“863”高技术研究开发项目。该项目1995年获得中国发明协会“中国发明成果金杯奖”，1996年获得国家“国家八五攻关重大科技成果奖”和“北京国际发明展览会金牌奖”，1997年获得“国家科技进步二等奖”。至投产以来，我们相继对该产品进行了深度挖掘，并在2002年获得了水针剂的专利。在已有基础上，我们开发出了该产品的新用途。

发明内容

本发明的目的是提供白介素2及其衍生物作为制备治疗鼻炎药物的应用。

其中白介素2及其衍生物尤指人的白介素2及其衍生物。

为了提高白介素2的生物活性或者便于以基因工程方式大规模生产，人们对白介素2的天然结构进行了各式各样的改造，形成了很多白介素2衍生物。包括天然结构在内的白介素2及其衍生物，都适用于本发明所公开的新适应症。本发明可以单独作为药物使用，也可以与其他治疗鼻炎的药物联合使用，以协同增效。

所述鼻炎包括但不限于过敏性鼻炎，白介素2及其衍生物对各种类型鼻炎的炎症症状均有改善作用。

所述药物由治疗有效量的白介素2或其衍生物和药剂学可接受的辅料组成。

所述药物为鼻粘膜给药剂型。鼻粘膜给药避免了药物的首过效应，鼻粘膜面积大，血管丰富，用药方便，吸收快，损伤小，易于被患者接受。

所述鼻粘膜给药剂型为鼻喷剂或滴鼻剂。

本发明药效学动物实验针对治疗过敏性鼻炎，对大鼠建立过敏性鼻炎的动物模型，试验重组人白介素-2对治疗过敏性鼻炎的效果，并同已上市的，治疗效果比较好的化学药：伯克纳鼻气雾剂(丙酸倍氯米松鼻气雾剂，葛兰素史克制药有限公司生产)进行对比。主要是从动物体征(动物的鼻痒、喷嚏、清涕出现的时间、次数与轻重程度)和组织病理观察两个方面比较和确定药物的治疗效果。

从动物体征方面观察，中剂量(100ku.kg^-1)重组人白介素-2的治疗效果和阳性对照药基本相当。

从组织病理方面观察。在“中性粒细胞浸润”方面，重组人白介素-2鼻喷剂100ku.kg^-1、丙酸倍氯米松鼻气雾剂可明显减轻“中性粒细胞浸润”病变。在“粘膜上皮变性、坏死”方面，重组人白介素-2鼻喷剂100ku.kg^-1、50ku.kg^-1、丙酸倍氯米松鼻气雾剂可明显减轻“粘膜上皮变性、坏死”病变。在“血管充血、水肿”方面，重组人白介素-2鼻喷剂100ku.kg^-1、丙酸倍氯米松鼻气雾剂可明显减轻“血管充血、水肿”病变。

本发明的优点是：本发明首次使用重组人白介素2治疗鼻炎，结果表明其能够明显缓解鼻炎的症状体征，明显改善鼻部的病变，疗效确切。

下面结合附图和具体实施方式对本发明做进一步说明，凡依照本发明公开内容所作出的任何本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。

附图说明

图1为正常对照组鼻粘膜切片。

图2为模型组鼻粘膜切片。

图3为低剂量组鼻粘膜切片。

图4为中剂量组鼻粘膜切片。

图5为高剂量组鼻粘膜切片。

图6为阳性组鼻粘膜切片。

图7为阴性组鼻粘膜切片。

具体实施方式

实施例.抗鼻炎动物试验

一.试验目的

观察重组人白介素-2鼻喷剂对于过敏性鼻炎动物模型的影响，为其临床应用提供药理学实验依据。

二.试验材料

1.动物：清洁级SD大鼠，70只，雌雄各半，南京市军区总医院提供，体重220～250克，动物合格证号：SCXK(苏2003-0004)，在本实验室饲养3～5天后使用。

2.药品

(1)重组人白介素-2鼻喷剂。北京四环生物制药有限公司生产，规格：100万u·ml^-1，3ml/支。活性成分为白介素2，采用常规辅料按常规操作制备。

(2)伯克纳鼻气雾剂(丙酸倍氯米松鼻气雾剂)。葛兰素史克制药有限公司生产，规格：0.154％，丙酸倍氯米松50μg/喷，200喷/瓶，批号：H10960001。

(3)阴性对照液。按重组人白介素-2鼻喷剂处方配制，内含除活性成分重组人白介素-2外的所有成分。

三.试验方法

1.药液配制

(1)阳性药

规格：每喷含丙酸倍氯米松50μg。

配制方法：4喷鼻喷剂，加50μl无水乙醇均匀分散，加入灭菌注射用水稀释至2.0ml，得0.1μg/μl。

(2)致敏剂

配制方法：用移液枪取100μl的甲苯-2，4-二异氰酸酯(TDI)，向其中加入0.9ml的橄榄油，得浓度为10％的TDI溶液。

(3)高剂量

北京四环生物制药有限公司提供的鼻喷剂，浓度为100万u/ml的鼻喷剂。

(4)中剂量

对重组人白介素-2鼻喷剂以阴性对照液稀释成为浓度为50万u/ml的鼻喷剂。

(5)低剂量

对重组人白介素-2鼻喷剂以阴性对照液稀释成浓度为25万u/ml。

(6)阴性对照液

按重组人白介素-2鼻喷剂处方配制，内含除主药重组人白介素-2的所有成分。

2.滤纸条的准备

将滤纸剪成5mm×40mm大小，一端为1mm×13mm。

3.重组人白介素-2的治疗作用

(1)致敏(建立模型)

70只健康，体重220～250g的SD大鼠，按体重随机分为7组，即正常对照组，模型组，阳性药组，阴性对照组，重组人白介素-2鼻喷剂高、中、低剂量组，每组10只，雌雄各半。除正常对照组外，其余各组每天给予10％的TDI的橄榄油溶液，每侧鼻腔每次10μl，1次/天，连续5天，然后再于第7日、第9日给予10％的TDI的橄榄油溶液，每侧鼻腔每次10μl。正常对照组每天给予橄榄油，每侧鼻腔每次10μl，1次/天，连续5天，然后再于第7日、第9日给予橄榄油，每侧鼻腔每次10μl。

(2)给药治疗

致敏期(9天)后，于第10天至第16天进行给药治疗，治疗期为7天。各组进行如下处理：

A.正常对照组：正常饲养，于第11、13、15天给予橄榄油，每侧鼻腔每次10μl，1次/天。

B.模型组：正常饲养，于第11、13、15天给予10％的TDI的橄榄油溶液，每侧鼻腔每次10μl，1次/天。

C.阳性药组：正常饲养，于第11天至第16天，每天鼻腔给予阳性药液，用药剂量20μg/kg体重，每天两次，连续7天，同时于第11、13、15天给予10％的TDI的橄榄油溶液，每侧鼻腔每次10μl，1次/天。

D.阴性对照组：正常饲养，于第11天至第16天，每天鼻腔给予阴性对照液，给药容积为200μl/kg体重，每天两次，连续7天，同时于第11、13、15天给予10％的TDI的橄榄油溶液，每侧鼻腔每次10μl，1次/天。

E.重组人白介素-2鼻喷剂低剂量(50ku.kg^-1)组：正常饲养，于第11天至第16天，每天鼻腔给予浓度为25万u/ml的鼻喷剂，给药容积为200μl/kg体重，每天两次，连续7天，同时于第11、13、15天给予10％的TDI的橄榄油溶液，每侧鼻腔每次10μl，1次/天。

F.重组人白介素-2鼻喷剂中剂量(100ku.kg^-1)组：正常饲养，于第11天至第16天，每天鼻腔给予浓度为50万u/ml的滴鼻剂，给药容积为200μl/kg体重，每天两次，连续7天，同时于第11、13、15天给予10％的TDI的橄榄油溶液，每侧鼻腔每次10μl，1次/天。

G.重组人白介素-2鼻喷剂高剂量(200ku.kg^-1)组：正常饲养，于第11天至第16天，每天鼻腔给予浓度为100万u/ml的滴鼻剂，给药容积为200μl/kg体重，每天两次，连续7天，同时于第11、13、15天给予10％的TDI的橄榄油溶液，每侧鼻腔每次10μl，1次/天。

(3)症状和体征观察

A.实验期间每天在给完致敏剂后观察动物体征30分钟，内容包括喷嚏数目，抓痒，鼻粘膜色泽，鼻通气情况。

B.鼻分泌量的测定：用滤纸法收集鼻分泌量，将剪好的滤纸条插入大鼠鼻腔内，5min后取出称重，比较滤纸条插入前后的质量差，计算鼻分泌量。

(4)组织病理学观察

实验结束后，于第二天乙醚麻醉，断头处死，驳除上颌骨部皮肤并将上颌骨从颅骨中游离出来，沿鼻中线切开，暴露鼻中隔及双侧鼻腔，将鼻中隔前中段剪下，固定于10％福尔马林中，一周后剥离粘膜，脱水，石蜡包埋，制片，HE染色，光镜观察。

四.试验结果

1.体征观察

记录每次激发后30min内动物的鼻痒、喷嚏、清涕出现的时间、次数与轻重程度，并评分(评分标准如下：对每只动物以以下3个指标分别记分后以叠加法记总分，[1]鼻痒：轻度1分，轻擦鼻数次；重度2分，抓挠鼻、面不止，到处摩擦。[2]喷嚏：1～3个为1分，，4～10个为2分，11个以上为3分。[3]清涕：流到鼻前孔为1分，超过鼻前孔为2分，涕流满面3分。当症状平均积分超过5分为造模成功。对各组动物每天的记分取均值记录如下)

模型组与正常对照组相比有极显著性差异(p＜0.01)，阳性组，重组人白介素鼻喷剂低、中、高剂量组与模型组相比均有极显著性差异(p＜0.01)。结果见表1。

表1.rhIL-2鼻喷剂对大鼠过敏性鼻炎体征的影响

组别	剂量	记分
			正常对照组模型组阴性对照组丙酸倍氯米松重组人白  低介素-2鼻  中喷剂      高	---20μg/kg50ku.kg-1100ku.kg-1200ku.kg-1	1.71±0.956.71±0.76**6.00±0.584.00±0.82##5.57±0.53##3.86±0.9##4.00±1.00##

与正常对照组比较：**p<0.01

与模型组比较：##p＜0.01

2.鼻分泌量

模型组与正常对照组相比有极显著性差异(p＜0.01)，重组人白介素鼻喷剂中、高剂量与模型组相比均有显著性差异(p＜0.05)。结果见表2。

表2.rhIL-2鼻喷剂对各组大鼠鼻分泌量(mg)的影响

组别	剂量	鼻分泌量(mg)
			正常对照组模型组阴性对照组丙酸倍氯米松重组人白  低介素-2鼻  中喷剂      高	---20ug/kg50ku.kg-1100ku.kg-1200ku.kg-1	1.66±0.443.95±0.57**3.95±0.52.98±0.82#3.67±0.433.09±0.51#2.98±0.67#

与正常对照组比较：**p＜0.01

与模型组比较：#p＜0.05

3.动物病理切片检查，参见图1-图7所示。

(1)正常对照组

本组鼻粘膜均呈正常形态。粘膜上皮无变性坏死及脱落，未见炎细胞浸润；粘膜下层血管无扩张充血，无炎细胞浸润。

(2)模型组

本组鼻粘膜均可出现中至重度炎症表现。粘膜上皮细胞变性、坏死明显，可见大量中性粒细胞浸润，粘膜下层血管扩张充血，组织水肿。

(3)阳性药组

本组鼻粘膜总体病变程度比模型组减轻。出现轻至中度炎症表现。部分粘膜上皮细胞变性、坏死，可见中性粒细胞浸润，粘膜下层可见充血，组织水肿。

(4)低剂量组

本组鼻粘膜出现轻至中度炎症表现，总体病变程度比模型组有所减轻。部分粘膜上皮细胞变性、坏死，可见中性粒细胞浸润，粘膜下层充血，组织水肿。

(5)剂量组

本组鼻粘膜出现轻至中度炎症表现，总体病变程度亦比模型组减轻。部分粘膜上皮细胞变性、坏死，可见一定量中性粒细胞浸润，粘膜下层未见明显充血及组织水肿。

(6)高剂量组

本组鼻粘膜出现轻至中度炎症表现。部分粘膜上皮细胞变性、坏死，可见中性粒细胞浸润，粘膜下层可见充血，组织水肿。

(7)阴性组

本组鼻粘膜总体病变程度与模型组相当。

2.数理统计

(1)t检验

在病理学表征方面，分别以“中性粒细胞浸润”、“粘膜上皮变性、坏死”、“血管充血水肿”等3个指标，对各组进行积分，即以“-”计为0分，以“+”计为1分，以“++”计为2分，以“+++”计为3分，以“++++”计为4分。并进行t检验。

表3.各组动物病理学指标的比较(x±s，n＝10)

组别	剂量	中性粒细胞浸润	粘膜上皮变性、坏死	血管充血水肿
					正常对照组模型组阴性对照组丙酸倍氯米松重组人   高白介素   中-2鼻喷低剂	---20ug/kg200ku.kg-1100ku.kg-150ku.kg-1	0±02.50±1.27**2.10±1.371.30±0.67#1.80±1.031.40±0.70#1.40±1.17	0±02.2±1.40**2.2±1.321.0±0.82#2.0±0.941.0±0.94#1.0±0.82#	0±02.2±1.32**2.3±1.341.0±0.82#1.3±1.061.0±0.94#1.2±1.03

与正常对照组比较：**p＜0.05

与模型组相比：#p＜0.05

(1)模型组与正常对照组相比，在“中性粒细胞浸润”、粘膜上皮变性、坏死”、“血管充血水肿”等方面均有极显著性差异(p＜0.01)。

(2)在“中性粒细胞浸润”方面，阳性组、重组人白介素-2鼻喷剂中剂量(100ku.kg^-1)组与模型组之间均有显著性差异(p＜0.05)。说明重组人白介素-2鼻喷剂100ku.kg^-1、丙酸倍氯米松鼻气雾剂可明显减轻“中性粒细胞浸润”病变。

(3)在“粘膜上皮变性、坏死”方面，阳性组、重组人白介素-2鼻喷剂中(100ku.kg^-1)、低剂量(50ku.kg^-1)组与模型组之间均有显著性差异(p＜0.05)。说明重组人白介素-2鼻喷剂100ku.kg^-1、50ku.kg^-1、丙酸倍氯米松鼻气雾剂可明显减轻“粘膜上皮变性、坏死”病变。

(4)在“血管充血、水肿”方面，、阳性组、重组人白介素-2鼻喷剂100ku.kg^-1组与模型组之间均有显著性差异(p＜0.05)。说明重组人白介素-2鼻喷剂100ku.kg^-1、丙酸倍氯米松鼻气雾剂可明显减轻“血管充血、水肿”病变。

五.结论

经给药后，用药组大鼠鼻粘膜病变在形态学上与模型组相比均有不同程度的减轻，其中以中剂量组(100ku.kg^-1)的病变减轻较为明显。

RhIL-2鼻喷剂可以明显缓解大鼠过敏性鼻炎的症状体征，明显改善其鼻部的病变。

Claims (6)

1.白介素2及其衍生物作为制备治疗鼻炎药物的应用。

2.根据权利要求1所述的白介素2及其衍生物作为制备治疗鼻炎药物的应用，其特征在于：其中白介素2及其衍生物为人的白介素2及其衍生物。

3.根据权利要求1或2所述的白介素2及其衍生物作为制备治疗鼻炎药物的应用，其特征在于：所述鼻炎为过敏性鼻炎。

4.根据权利要求1或2所述的白介素2及其衍生物作为制备治疗鼻炎药物的应用，其特征在于：所述药物由治疗有效量的白介素2或其衍生物和药剂学可接受的辅料组成。

5.根据权利要求1或2所述的白介素2及其衍生物作为制备治疗鼻炎药物的应用，其特征在于：所述药物为鼻粘膜给药剂型。

6.根据权利要求5所述的白介素2及其衍生物作为制备治疗鼻炎药物的应用，其特征在于：所述鼻粘膜给药剂型为鼻喷剂或滴鼻剂。

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