CN103301064A

CN103301064A - 一种白介素-2或其衍生物鼻喷剂及其制备方法

Info

Publication number: CN103301064A
Application number: CN2013102189136A
Authority: CN
Inventors: 程度胜; 韩明娣; 桑建彬; 龙应国
Original assignee: Beijing Sihuan Biopharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Beijing Sihuan Biopharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2013-06-04
Filing date: 2013-06-04
Publication date: 2013-09-18
Anticipated expiration: 2033-06-04
Also published as: CN103301064B

Abstract

本发明属于生物制药领域，具体来说是一种白介素-2鼻喷剂，其含有药理学上有效量的白介素-2或其衍生物，以及缓冲体系、促溶剂、水、稳定剂和防腐剂，其中，所述的缓冲体系选自柠檬酸-柠檬酸钠缓冲体系、醋酸-醋酸钠缓冲体系或者磷酸盐缓冲体系，所述鼻喷剂的pH值为3.0-5.0；所述的促溶剂选自吐温-80，或羟丙基-β-环状糊精；所述稳定剂选自甘露醇、乳糖、或白蛋白中的一种或两种以上；所述防腐剂选自苯酚、苯甲醇、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲或其乙酯、对羟基甲酸丙或其丁酯中的一种或两种以上。这种鼻喷剂常温稳定性好，对鼻腔黏膜无刺激、无毒性，适合对鼻炎的鼻腔给药治疗。

Description

一种白介素-2或其衍生物鼻喷剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物制药领域，具体来说是一种白介素-2或白介素-2衍生物鼻喷剂。

背景技术

白介素-2（IL-2）是一种很好的免疫调节剂，临床主要用于肿瘤的免疫治疗。一些临床检测数据表明白介素－2与人类多种疾病的发生密切相关，尤其是免疫性疾病，其治疗功能尚未得到充分挖掘。

正常情况下，白介素-2的水溶性差，溶液状态下保存极不稳定，所以多以冻干粉形式储存，用前再配制成溶液。北京四环生物制药有限公司在注射用重组人白介素-2（冻干粉针剂）基础上经过多年研究，解决了重组人白介素-2在水溶液中的溶解性和稳定性问题，在国际上首家开发成重组人白介素-2注射液（水针剂）新药，用于肿瘤的免疫治疗，商品名：新德路生，该产品保存条件为：2-8℃保存和运输，有效期为两年，该水针剂避免了临床使用时需反复溶解抽吸的过程，大大方便了临床用药。该技术于2005年获得国家发明专利，专利号为：ZL02117736.8，发明名称为：重组人白细胞介素-2注射液和制备方法，并已实现投产，投产过程被认定为北京市成果转化项目。

此外，北京四环生物制药有限公司一直致力于生物制品临床功能的深入开发，经临床监测及动物试验验证，开发出了白介素-2在过敏性鼻炎治疗中的应用潜力，并于2006年申请了“白介素2及其衍生物作为制备治疗鼻炎药物的应用”专利，申请号为200610089292.6。

国内外对于蛋白类药物的注射替代给药方法研究甚多，其中鼻腔局部给药是近年来研究热点，为特异性免疫治疗开辟了新的途径。鼻黏膜上皮内，黏膜下层及黏膜表面有大量的免疫细胞和免疫分子弥散，还有单个或多个淋巴滤泡聚集。黏膜免疫的优点不仅在于能诱导局部免疫反应，而且能引发系统免疫应答。且鼻腔局部用药具有鼻粘膜接触面积大、局部用药浓度高、不影响鼻腔正常生理功能、避免首过效应、避免注射给药带来的不适反应等优点，适合于过敏性鼻炎的治疗。目前已在国内外上市的多肽蛋白类鼻用制剂主要包括：干扰素、降钙素、胰岛素、生长激素、去氨加压素等，但是，尚无重组人白介素-2鼻用制剂的研究内容。

然而，鼻喷剂给药方式的特点决定了其对药品的要求与注射给药不同，例如注射液通常是一次性用药，且在注射前才打开包装，通常又是在医院内使用，具有低温储存条件；而鼻喷剂通常一瓶或一罐要反复使用多次，而且一般是由患者在医院外自行使用，所以不具有低温储存条件。因此，白介素-2鼻喷剂与注射液相比，对溶液稳定性要求更高，要求在常温条件下稳定。另外，鼻黏膜上皮组织的生理组成决定了鼻腔给药与注射给药相比，对药物的致敏刺激性要求更高，必须对鼻腔黏膜无刺激。而目前多肽蛋白类鼻腔给药类剂型普遍存在所含辅料对鼻黏膜刺激性大、长期使用具有破坏性、生物利用度低、常温稳定性差等缺点，这也是开发大分子鼻喷剂的技术难点。也正基于此，现在的白介素-2注射液体系并不能直接作鼻喷剂使用。

发明内容

针对现有白介素-2注射用的水溶液不能鼻腔给药的问题，以及治疗鼻炎时对鼻腔给药的现实需求，本发明的目的在于提供一种适合鼻腔给药的白介素-2或其衍生物鼻喷剂。

发明人经过多年研究和大量的试验，终得本发明，本发明采用如下技术方案：

一种白介素-2鼻喷剂，其含有药理学上有效量的白介素-2或其衍生物，缓冲体系、促溶剂、稳定剂、防腐剂和水，

其中，所述的缓冲体系选自柠檬酸-柠檬酸钠缓冲体系或者醋酸-醋酸钠缓冲体系、磷酸盐缓冲体系，所述鼻喷剂的pH值为3.0-5.0；

所述的促溶剂选自吐温-80，或羟丙基-β-环状糊精；这些物质作为促溶剂既有促溶作用，又有促吸收作用。

所述稳定剂选自甘露醇、乳糖、或白蛋白中的一种或两种以上；

所述防腐剂选自苯酚、苯甲醇、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲或其乙酯、对羟基甲酸丙或其丁酯中的一种或两种以上。

所述白介素-2选自天然白介素-2，与天然白介素-2相同结构的重组人白介素-2。

所述白介素-2衍生物选自利用基因工程方法进行点突变将Cys125改成Ser，或者将Cys125变成Ala，或者将Met104变成Ala；或者利用大分子进行化学修饰（如聚乙二醇化）后得到的重组人白介素-2衍生物。

所述鼻喷剂中药理学上有效量的活性成分白介素-2的浓度范围优选为5万IU/ml——400万IU/ml。

所述缓冲体系的浓度优选为0.01-0.1mol/L。

比较理想的是，每1000ml鼻喷剂含有：重组人白介素-2原液5000-400000万IU，0.01-0.1mol的柠檬酸缓冲液，0.01-0.1ml的吐温-80，1-10g的氯化钠，2-5ml的苯乙醇、苯甲醇，10-50g的甘露醇，其余为注射用水。

由于构成白介素-2鼻喷剂的组分性质和所起作用不同，因此加入顺序对白介素-2及其衍生物的溶解度和溶液稳定性有不同影响，所以本发明还提供了上述白介素-2鼻喷剂的制备方法，其方法为：

（1）按所需浓度配制构成缓冲溶液，然后将白介素-2或白介素-2衍生物原液用缓冲溶液中的柠檬酸或醋酸或磷酸盐溶液溶解，再以构成该缓冲体系的柠檬酸钠或醋酸钠或磷酸盐调PH至3.0-5.0；

（2）将其余成分按所需浓度用水配制成稀释液；

（3）以上述稀释液稀释步骤1中的白介素-2溶液；

（4）进行除菌和无菌分装。

本发明的白介素-2鼻喷剂，与现有白介素-2注射用水溶液相比，对鼻黏膜无毒性、无致敏性，易于鼻黏膜吸收，并且具有良好的常温稳定性，能很好的调动机体免疫反应，对过敏性鼻炎患者有较好的疗效。该产品可以由过敏性鼻炎患者随身携带用药，有可能成为从根本上预防和治疗过敏性鼻炎的良药。

附图说明

图1为低浓度25℃长期保存条件下活性变化趋势图；

图2为低浓度37℃长期保存条件下活性变化趋势图；

图3为高浓度25℃长期保存条件下活性变化趋势图；

图4为高浓度37℃长期保存条件下活性变化趋势图；

图5为25℃不同浓度和不同缓冲体系条件下活性变化趋势图。

具体实施例

下面结合具体实施例对本发明作进一步详细描述，以助于理解本发明的内容。

实施例1

鼻喷剂配方按1000ml溶液其组成为：

制备方法：

1.按所需浓度配制柠檬酸溶液，将IL-2原液用柠檬酸溶解，后以枸橼酸钠溶液调PH，

2.将其余成分按所需浓度用注射用水配制成稀释液，

3.以上述稀释液稀释步骤1中的溶液，

4.过来除菌，

5.分装。

实施例2

鼻喷剂配方按1000ml溶液其组成为：

方法同实施例1。

实施例3

鼻喷剂配方按1000ml溶液其组成为：

方法同实施例1.

实施例4

鼻喷剂配方按1000ml溶液其组成为：

方法参照实施例1.

实施例5

1000ml鼻喷剂含：

方法参照实施例1.

试验例

1、稳定性试验

1.1、低浓度稳定性试验

为验证本发明鼻喷剂的低浓度常温稳定性，进行了稳定性对比试验。

试样1采用实施例1的配方。对比样1采用ZL02117736.8的辅料，即每1000ml注射液含重组人IL-2原液50000万IU、羟丙基-β-环状糊精0.05ml、醋酸—醋酸钠缓冲0.05mol、氯化钠10g，其余为注射用水。分别测定在25℃条件下长期保存，测定白介素-2的活性，结果如图1所示。从图1可以看出，试样1与对比样1相比，经过25℃条件下长期保存，活性略有降低，而对比样1的活性下降明显，达50%左右，证明试样1在常温下可以长期保存，稳定性好。而对比样1的水溶液则达不到长期保存的效果。

将试样1与对比样1在37℃条件下进行加速试验，并测定其活性，结果如图2所示，试样1基本稳定，而对比样1活性下降超过50%，稳定性差。

1.2、高浓度稳定性试验

为验证本发明鼻喷剂的高浓度常温稳定性，进行了稳定性对比试验。

试样2采用实施例2的配方。对比样2采用ZL02117736.8的辅料组成，即每1000ml注射液含重组人IL-2原液200000万IU、羟丙基-β-环状糊精0.1ml、醋酸—醋酸钠缓冲0.1mol、氯化钠1g，其余为注射用水。分别测定在25℃条件下长期保存，测定白介素-2的活性，结果如图3所示。从图3可以看出，试样2与对比样2相比，经过25℃条件下长期保存，试样2略有下降，而对比样2下降明显，证据试样2在高浓度时常温下可以长期保存，稳定性好。

将试样2与对比样2在37℃条件下进行加速试验，并测定其活性，结果如图4所示，试样2基本稳定，而对比样2活性下降至只有原来20%左右，稳定性差。

1.3、不同体系稳定性

将实施例1、4、5中的试样分别在25℃条件下长期保存，测其活性。结果见图5.

从图5可以看出，本发明的白介素-2鼻喷剂高、低浓度以及不同缓冲体系均可在常温下长时间保持稳定。

长期保存试验条件下，鼻喷剂可保存18个月生物活性仍合格，而注射剂仅可保存6个月左右。在37℃加速试验条件下保存6个月，鼻喷剂生活活性仍合格，而注射剂在此实验条件下活性下降剧烈。说明鼻喷剂完全可满足常温保存一年的生产需求。

2.犬局部给药毒性试验

动物对重组人白介素-2（rhIL-2）喷雾剂的耐受性较好，100万IU/100μl/喷，相当于200万IU/只动物对动物各项检测指标未见影响，给药局部前庭、呼吸部、嗅部粘膜未见刺激反应，未见局部组织过度增生，呼吸功能未见影响。

2.1鼻粘膜输送功能检测

用SPECT方法测定了对照组3只动物及给药高剂量组2只动物的蛋白在鼻腔的移动距离，用以观察鼻粘膜纤毛摆动，输送蛋白的功能，以同位素99mTc显影观察标记的聚合白蛋白移动位置。结果显示，给药组与对照组的移动距离未见明显差异。

2.2纤毛摆动频率：

末次药后检测的各剂量组动物纤毛摆动频率，各剂量组动物的纤毛摆动频率，给药组与对照组比较未见差异。

重组人白介素－2（rh IL-2）喷鼻剂反复喷鼻给药对动物纤毛摆动频率的影响

n=4。

Claims

1.一种白介素-2鼻喷剂，其特征在于：含有药理学上有效量的白介素-2或其衍生物，以及缓冲体系、促溶剂、稳定剂、防腐剂和水；

其中，所述的缓冲体系选自柠檬酸-柠檬酸钠缓冲体系、醋酸-醋酸钠缓冲体系或者磷酸盐缓冲体系，所述鼻喷剂的pH值为3.0-5.0；

所述的促溶剂选自吐温-80，或羟丙基-β-环状糊精；

2.如权利要求1所述的白介素-2鼻喷剂，其特征在于：所述白介素-2选自天然白介素-2，或与天然白介素-2相同结构的重组人白介素-2。

3.如权利要求1所述的白介素-2鼻喷剂，其特征在于：所述白介素-2衍生物选自利用基因工程方法进行点突变将Cys125改成Ser，或者将Cys125变成Ala，或者将Met104变成Ala；或者利用大分子进行化学修饰后得到的重组人白介素-2衍生物。

4.如权利要求1所述的白介素-2鼻喷剂，其特征在于：所述鼻喷剂中药理学上有效量的活性成分白介素-2或白介素-2衍生物的浓度范围为5万IU/ml——400万IU/ml。

5.如权利要求1所述的白介素-2鼻喷剂，其特征在于：所述缓冲体系的浓度为0.01-0.1mol/L。

6.如权利要求1所述的白介素-2鼻喷剂，其特征在于每1000ml鼻喷剂含有：重组人白介素-2原液5000-400000万IU，0.01-0.1mol的柠檬酸缓冲液，0.01-0.1ml的吐温-80，1-10g的氯化钠，2-5ml的苯乙醇和苯甲醇，10-50g的甘露醇，其余为注射用水。

7.一种权利要求1所述白介素-2鼻喷剂的制备方法，其特征在于：

（1）按所需浓度配制缓冲溶液，然后将白介素-2或白介素-2衍生物原液用缓冲溶液中的柠檬酸或醋酸或磷酸盐溶液溶解，再以构成该缓冲体系的柠檬酸钠或醋酸钠或磷酸盐调PH至3.0-5.0；

（2）将其余成分按所需浓度用水配制成稀释液；

（3）以上述稀释液稀释步骤1中的白介素-2溶液；

（4）进行除菌和无菌分装。