CN101094651A - 含有胶原凝集素家族蛋白质或者其变体的喷雾干燥的组合物和其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于治疗和预防微生物感染性疾病的喷雾干燥的组合物,其包含作为活性成分的胶原凝集素家族的至少一种成员蛋白或者其变体。本发明还涉及产生该组合物的方法。该组合物的特征还在于它的颗粒大小为0.1到10μm。通过本发明方法产生的组合物有效抑制病毒、细菌和真菌引起的感染。因为该组合物以适于吸入的形式开发,所以它可以直接对这些微生物的感染部位提供活性成分,从而治疗和预防呼吸道感染和外部伤口。本发明的组合物还可用于掺入其他载体中以形成片剂。
Description
技术领域
本发明涉及治疗或者预防微生物感染疾病的组合物,其包含胶原凝集素家族的至少一个成员蛋白质或者其变体。该组合物适于通过呼吸系统吸入或者直接递送到感染部位的表皮细胞。本发明还涉及以喷雾干燥的形式产生所述组合物以允许直接递送到感染部位的方法。
背景技术
甘露糖结合凝集素(MBL)是已知参与针对微生物感染的先天性免疫的人血液蛋白。MBL识别感染微生物的细胞表面上蛋白质的特定糖基化模式并结合它们以根据下述的三种途径抑制微生物感染:在第一种途径中,MBL结合微生物糖基化的蛋白以形成复合体,然后它激活MBL相关的丝氨酸蛋白酶(MASPs)。MASP又切割C4和C2,导致补体系统的活化。在第二种途径中,结合到糖基化的微生物细胞表面蛋白质的MBL作为调理素并且通过嗜中性粒细胞和巨噬细胞指导吞噬作用。同样结合的MBL还在第三种途径中中和微生物的感染,阻断它们的增殖。因此,MBL针对微生物感染的防御中最重要的最初步骤识别并结合微生物。
MBL是胶原凝集素家族的成员,与其他成员具有共同的结构,该结构由胶原蛋白结构域和糖类识别结构域组成。MBL单体具有32kDa的分子量。它在C-末端具有C型糖类识别结构域(CRD),在N-末端具有富含半胱氨酸的区域,在它们之间具有胶原蛋白结构域。三个MBL单体通过它们的胶原蛋白结构域结合形成三螺旋复合体。该三螺旋复合体又通过N-末端区中的半胱氨酸形成分子间二硫键,产生六聚体复合体。该三螺旋是所有胶原凝集素家族成员包括表面活性剂蛋白A(SP-A)和D(SP-D)、胶原凝集素-肝脏1(CL-L1)和胶原凝集素-胎盘1(CL-P1)共有的结构特征。因此,属于胶原凝集素家族的这些成员蛋白都具有相似的物理化学性质。已经表明这些胶原凝集素家族蛋白质共有在针对血清以及肺表面的微生物感染的免疫前防御中起重要作用的另一特征(Hans-Jurgen et al,ProteinScience,3:1143,1994)。除了上面列出的,其他家族成员包括CL-43、牛共凝集素和人共凝集素同源物。
已知MBL能够结合多种微生物。MLB最通常结合具有外壳(病毒包膜)的病毒。代表性实例包括:流感病毒(Hartshorn,K.L.et al.,J.Clin.Invest.,91:1414,1993;Kase,T.et al.,Immunol.,97:385,1999),人免疫缺陷病毒(Ezekowitz,R.A.et al.,J.Exp.Med.,169:185,1989;Haurum,J.C.et al.,AIDS,7:1307,1993),疱疹病毒(Fischer,C.B.et al.,Scan.J Immunol.,39:439,1994)和SARS冠状病毒(Ksiazek,T.G.et al.,N.Eng.J Med.,348:1953,2003;Peiris,J.S.M.et al.,Lancet,361:1319,2003)。造成普通感冒的鼻病毒预期也是MBL的良好结合者。在细菌中,报导金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(Neth,O.et al.,Infect.Immunol.,68:688,2000)和流感嗜血菌(Hemophilus influenzae)(Van E.et al.,Clin.Exp.Immunol.,97:411,1994)是良好的结合者,而在真菌中,已知白假丝酵母(Candida albicans)(Tabona,P.et al.,Immunol.,85:153,1995)。
在结合MBL的微生物中,流感病毒、鼻病毒、动物来源的SARS冠状病毒和流感病毒主要通过呼吸上皮的感染引起症状,而金黄色葡萄球菌和流感嗜血菌感染肺。金黄色葡萄球菌可以感染外部伤口,白假丝酵母涉及阴道炎。因为在溶液相中处理MBL不适于治愈这些呼吸疾病和外部伤口,所以需要特定剂型。尽管对MBL有许多研究,但是MBL涉及针对上述上皮和外部伤口中感染的防御的程度还知之甚少。唯一相关的研究是报导在唾液和母乳中MBL的检测的研究(Tregoat,V.et al.,J.Clin.Lab.Anal.,16(6):304,2002)。
当流感感染时,病毒在呼吸器官表面排列的上皮细胞中建群。一旦病毒在受感染的细胞中扩增它自已,那么新的病毒细胞攻击邻近的上皮细胞。因此,使用能够识别糖基化微生物表面蛋白质并且结合它们的MBL,可能破坏上皮细胞和病毒之间的接触。对于暴露于表面的细胞的感染,可以选择涉及通过结合进行物理阻断的机制用于来自上述三种途径的防御。当巨噬细胞在表面上出现时,调理素途径可以用于防御。实际上,在培养的细胞中观察到通过MBL结合的物理中和足够阻断邻近细胞的微生物感染。例如,当培养的细胞接种SARS冠状病毒时,加入到培养基的MBL阻止了病毒感染(韩国专利公报号1020040106194)。对于流感也观察到通过MBL对感染的类似的预防(Wakamiya,N.et al.,Biochem.Biophys.Res.Commun.,187:1270,1992;Hartley,C.A.et al.,J Virol.,66:4358,1992;Patrick,C.R.et al.,J.Virol.,71:8204,1997;Kase,T.et al.,Immunol.,97:385,1999)。
为了用BML治疗外部伤口和呼吸感染,在许多方面希望将蛋白质配制成粉剂。粉剂剂型能够有效递送到感染部位,递送最佳量的MBL,由于它的局部应用和减少的用量而降低副作用。
冷冻干燥和喷雾干燥通常用于将蛋白质药物配制成粉剂。冷冻干燥是当前最常用的。冷冻干燥适于热敏感的蛋白质,但是它不适于产生具有几微米直径的为易于吸入形式的均匀粉剂。冷冻干燥还倾向于在冷却时在冰晶之间浓缩蛋白质。该浓缩引起蛋白质周围的pH和离子强度的快速改变,导致变性和沉淀(Schwartz,P.L.et al.,Endocrinology,92(6):1795,1973;Koseki,T.et al.,J.Biochem.,107:389,1990)。相反,喷雾干燥包括喷雾液体样品的连续液流以形成微观上分散的小滴,而同时用热空气干燥它们。喷雾干燥已经用于配制多种药物。喷雾干燥具有产生具有适于递送药物到呼吸道和肺的颗粒大小的粉剂的优点。喷雾干燥还消耗较小的能量从而可以在生产线节约时间和成本(Broadhead,J.et al.,Drug Dev.Ind.Pharm.,18(11&12):1169,1992)。由于蛋白质通常对热不稳定,用热空气喷雾干燥的蛋白质药物制剂的例子不多。然而,如下的尝试应用喷雾干燥:氧合血红蛋白(Labrude,P.et al.,J.Pharm.Sci.,78(3):223,1989),人生长激素(Mumenthaler,M.et al.,Pharm.Res.,11(1):12,1994;Bosquillon,C.,J.Cont.Rel.,96:233,2004),组织纤溶酶原激活物(t-PA,Mumenthaler.M.et al.,Pharm.Res.,11(1):12,1994),DNA酶(Chan,H.K.et al.,Pharm.Res.,14(4):431,1997),甲状旁腺激素(Codrons,V.et al.,J.Pharm.Sci.,92(5):938,2003)和人源化的单克隆抗体(抗-IgE,Maa,Y.F.et al.,Biotechnol.Bioeng.,60(3):301,1998)。
特别当生产用于呼吸应用的喷雾干燥的蛋白质组合物时,希望将蛋白质配制成5μm或者更小的粉剂大小。此类粉剂的颗粒大小、形状和水含量是治疗功效中的重要因素(Hickey,A.J.et al.,Pharm.Tech.,18:58,1994)。这种粉剂的物理特征的主要决定因素是机械条件,如热空气的输入速度和蛋白质溶液、温度和喷雾压力(Maa,Y.F.et al.,Pharm.Res.,15(5):768,1998)以及蛋白质溶液的添加剂如盐、糖和赋形剂蛋白质的身份和浓度(Andya,J.D.et al.,Pharm.Res.,16(3):350,1999;Maa,Y.F.et al.,Pharm.Dev.Tech.,2(3):213,1997)。而且在喷雾干燥得到的重组人MBL的粉剂制剂中,重要的考虑是喷雾干燥的MBL粉剂溶解时应该在丝氨酸蛋白酶存在下保持它通过特异结合糖基化的MBL结合的蛋白质激活补体的能力,并且这种能力在长期保存中不丧失。
然而,关于生产用于治疗诸如呼吸炎症的疾病的人重组甘露糖结合凝集素组合物的喷雾干燥方法还没有报导;因此,非常需要生产用于呼吸吸入和应用于外部伤口的重组人MBL组合物的喷雾干燥的方法。
为了解决此类问题,本发明提供了通过向含有至少一种胶原凝集素家族成员蛋白质的溶液添加糖和/或蛋白质添加剂并喷雾干燥该溶液形成的粉剂。该粉剂能够支持长期保存而不损失其功效。
内容
技术方案
本发明提供了含有至少一种胶原凝集素家族成员蛋白质或者其变体的喷雾干燥的粉剂组合物,其颗粒大小为0.1到10μm并且能够直接递送到呼吸器官、其他腔和表面上微生物感染部位以治疗和预防此类感染。本发明还提供了生产所述组合物的方法,其包括步骤:
(i)制备含有糖和至少一种胶原凝集素家族成员蛋白质或者其变体的水溶液;
(ii)用足够的压力喷雾干燥步骤(i)的溶液以保持500到2,000升/小时(L/h)的喷雾速度和400到1,200 L/分钟的热空气流速,其中热空气温度是50到220℃并且排出温度是42到150℃;和
(iii)收集从步骤(ii)产生的粉剂。
从上面方法产生的粉剂适于呼吸吸入和治疗表皮中的感染。
为了实现上面目标,详细描述本发明。
本发明提供了包含至少一种胶原凝集素家族成员蛋白质或者其变体的喷雾干燥的粉剂组合物,其颗粒大小为0.1到10μm并且能够直接递送到呼吸器官、其他腔和表面上微生物感染部位以治疗和预防此类感染。本发明还提供了生产上面的组合物的方法,其包括步骤:
(i)制备含有糖至少一种胶原凝集素家族成员蛋白质或者其变体的水溶液;
(ii)用足够的压力喷雾干燥步骤(i)的溶液以保持500到2,000升/小时(L/h)的喷雾速度和400到1,200 L/分钟的热空气流速,其中热空气温度是50到220℃并且排出温度是42到150℃;和
(iii)收集从步骤(ii)产生的粉剂。
本发明的喷雾干燥的组合物含有作为活性成分的来自胶原凝集素家族的至少一种成员蛋白质或者其变体蛋白质并且具有0.1到10μm的颗粒大小。它可以被吸入到呼吸器官中或者直接递送到表皮中的感染部位以治疗或者预防微生物感染。
本文使用的胶原凝集素家族成员蛋白质指具有胶原蛋白结构域和糖类识别结构域的任一蛋白质。这些蛋白质具有非常相似的理化性质。
本文使用的“变体”指多肽,其由于至少一个氨基酸修饰而导致它的序列与最初的胶原凝集素家族成员蛋白质序列不同,而同时是最初成员的功能等同物。这些变体包括属于相同或者不同物种的胶原凝集素家族成员蛋白质的同源物,和其具有相似的功能或者生理性质的天然和人工突变体。
胶原凝集素家族包括诸如SP-A、SP-D、CL-L1、CL-P1、CL-43和人共凝集素样蛋白质的成员。胶原凝集素家族中的每个成员蛋白质在它的C-末端具有识别并结合糖类的凝集素结构域(Hans-Jurgen et al,ProteinScience,3:1143,1994)。例如,CL-43结合gp160——组成人免疫缺陷病毒(HIV)的外壳的一种糖蛋白,抑制它与CD40受体的结合(Anderson et al,Scand.J Immunology,32:81,1990)。已知人共凝集素样蛋白结合HIV-1的gp120以阻断感染(Ushijima et al,Jpn.J.Cancer Res.,83:458,1992)。有关于SP-A和SP-D以及这些蛋白质通过结合微生物而阻断微生物感染的报导(Zimmerman et al,J.Clin.Invest.,89:143,1992;McNeely et al,J.Infect.Dis.,91,1993;Kuan et al,J. Clin.Invest.90:97,1992)。
从这些发现,可以预期使用MBL之外的其他胶原凝集素家族成员蛋白质作为本发明的喷雾干燥的粉剂组合物的活性成分用于治疗和预防微生物感染。
上面的胶原凝集素家族成员蛋白质可以通过商业途径获得或者用重组载体通过本领域技术人公知的分子生物学方案产生;例如,人CL-P1可以以重组形式(目录号2690-CL)从R&D systems(Minneapolis,MN,USA)获得用于生产本发明的组合物。
上面的组合物的一种优选的喷雾干燥的粉末制剂可以含有按重量计0.001到60份重组MBL,0.1到10份NaCl,0.1到10份CaCl2,和5到80份糖。更优选的制剂可以含有按重量计0.001到0.1份重组MBL,8到9份NaCl,1到2份CaCl2,20份乳糖或者蔗糖,和0.5份聚乙烯醇(PVA)。上面份额的数值指形成喷雾干燥的组合物的成分的重量比。因为本发明的组合物从水溶液喷雾而来并且所有溶质都是不挥发的,显然溶质的重量比将在最终组合物中保持不变。因此,每体积摩尔和重量百分数容易转换成按重量计的份,例如,10mM CaCl2(分子量111)对应于10×10-3×111=1.11份(重量)。
本发明优选组成为但不限于,按重量计0.01到60份胶原凝集素家族成员蛋白质。胶原凝集素家族成员蛋白质或者其变体优选为但不限于天然或者重组的甘露糖结合的凝集素(MBL),其中更优选重组的。该重组MBL优选从但不限于保藏号KCTC 10472BP(韩国专利公报号1020040106194)的细胞系产生。
此外,本发明组合物的颗粒大小优选为约5μm并且更优选为0.1到4μm以便对于诸如呼吸吸入的这类应用途径具有治疗功效。
本发明的组合物可以还包含药用载体。此类载体优选为但不限于,糖,其中糖优选为但不限于蔗糖或者乳糖。本发明组合物中此类载体的含量优选为但不限于,按重量计5到80%。
同时,本发明的感染性微生物优选为病毒、细菌和真菌,其中病毒优选为但不限于流感病毒、人免疫缺陷病毒、疱疹病毒、SARS冠状病毒和鼻病毒;其中细菌优选为但不限于金黄色葡萄球菌、流感嗜血菌和化脓性葡萄球菌(S.pyogens);并且其中真菌优选为但不限于白假丝酵母。
本发明的喷雾干燥的组合物还包含作为支持成分的酪蛋白以便在配制后保持稳定的功效。组合物中酪蛋白的含量优选为但不限于按重量计0.1到20%。
同时,作为本发明的治疗和预防靶标的感染性微生物优选为病毒、细菌和真菌,其中病毒优选为但不限于具有外壳的病毒,包括流感病毒、人免疫缺陷病毒、疱疹病毒、SARS冠状病毒和鼻病毒,其中细菌优选为但不限于具有可以被BML识别的糖基化模式的细菌,包括金黄色葡萄球菌、流感嗜血菌和化脓性葡萄球菌;并且其中真菌优选为但不限于白假丝酵母。
本发明还提供了生产含有MBL的喷雾干燥的粉剂组合物的方法,该组合物适于呼吸吸入或者直接递送到表皮的感染部位,该方法包括步骤:(i)制备含有糖和至少一种胶原凝集素家族成员蛋白质和其变体的水溶液;(ii)用足够的压力喷雾干燥步骤(i)的溶液以保持500到2,000升/小时(L/h)的喷雾速度和400到1,200 L/分钟的热空气流速,其中热空气温度是50到220℃并且排出温度是42到150℃;和(iii)收集从步骤(ii)产生的粉剂。
在步骤(i)中,水溶液优选包括但不限于,0.1到4%(w/v)糖和0.0005到10%(w/v)胶原凝集素家族成员蛋白质或者其变体,其中糖优选为但不限于糖或者乳糖。优选地,步骤(i)的水溶液还包含药用载体或者酪蛋白,其中酪蛋白含量优选为但不限于0.005到0.2%(w/v)。
本发明人已经对胶原凝集素家族成员蛋白质或者其变体的合适的制剂用于治疗细菌呼吸感染如肺炎进行了研究,目的是开发气溶胶吸入途径,而不是经口或者注射施用,以便能够直接递送到靶器官中的上皮细胞;结果,我们已经发现具有显微颗粒的粉末化制剂而不是普通混悬液对于施用更有效。然而,用于产生本发明组合物的冷冻干燥——制备粉剂的常规方法产生了具有对于吸入不够的大小(小于5mm是合适的)的颗粒;所以,冷冻干燥的制剂不适于吸入。我们因此预期喷雾干燥作为形成具有适当大小的颗粒的优选方法。因为喷雾干燥涉及应用强的压力来喷雾悬浮液并且用热空气干燥悬浮液,它在从热敏感的蛋白质形成颗粒中具有有限的应用。仅仅对蛋白质报导了喷雾干燥制剂的很少几种孤立的实例,它们没有一种是结合甘露糖的凝集素。
为了解决该问题,本发明人已经试图通过喷雾干燥产生含有胶原凝集素家族成员蛋白质或者其变体的组合物,并分析所产生的组合物是否可以保持其活性和稳定性。我们已经证实如此获得的喷雾干燥的显微组合物具有与含有相同的胶原凝集素成员蛋白质或者其变体的非干燥的悬浮液相当的活性并且该组合物容易支持长期保存。此外,通过改变糖的身份和浓度,本发明人已经建立了产生具有合适的颗粒大小以支持足够的吸入的组合物的最佳条件。我们还已经建立了维持该组合物的活性的温度和压力条件。此外,当组合物还包含酪蛋白作为支持成分时,该组合物显示出它的活性比不加入酪蛋白的对照增强的支持(sustenance),从而产生对于微生物感染性疾病的更有效的治疗和预防剂。
本发明的组合物可以作为气溶胶直接吸入。它的剂量范围可以根据患者的体重、年龄、性别、健康状况、饮食和施用方式、给药间隔、清除率和患者的病症的严重性而有很大变化。剂量范围为50μg/剂到20mg/剂,优选1mg/剂到5mg剂。优选本发明的组合物以单次或者多次日剂量施用。
附图描述
图1显示了本发明的喷雾干燥的MBL组合物的颗粒大小分布。
图2显示了用于测试MBL的形态在喷雾干燥前后是否保持的蛋白质印迹的结果。
图3比较了喷雾干燥的MBL粉剂与非干燥的MBL溶液的C4激活。
图5到8比较了在不同温度下产生的喷雾干燥的MBL粉剂与非干燥的MBL溶液的C4激活。
图9到12比较了在不同的糖添加剂存在下产生的喷雾干燥的MBL粉剂与非干燥的MBL溶液的C4激活。
图13证实了在不同的糖添加剂存在下产生的喷雾干燥的MBL组合物的颗粒大小。
图14到17显示了在不同的糖添加剂存在下产生的喷雾干燥的MBL组合物的扫描电子显微镜图像。
图18到21比较了在不同浓度的添加剂乳糖下产生的喷雾干燥的MBL粉剂与非干燥的MBL溶液的C4激活。
图22到26比较了在不同浓度的添加剂蔗糖下产生的喷雾干燥的MBL粉剂与非干燥的MBL溶液的C4激活。
图27证实了在不同浓度的添加剂乳糖下产生的喷雾干燥的MBL组合物的颗粒大小。
图28证实了在不同浓度的添加剂蔗糖下产生的喷雾干燥的MBL组合物的颗粒大小。
图29到32显示了在不同浓度的添加剂乳糖存在下产生的喷雾干燥的MBL组合物的电子显微镜图像。
图33到37显示了在不同浓度的添加剂蔗糖存在下产生的喷雾干燥的MBL组合物的扫描电子显微镜图像。
图38到41比较了在酪蛋白存在或不存在时用糖添加剂产生的喷雾干燥的MBL粉剂与非干燥的MBL溶液的C4激活。
图42到45比较了在严酷温度条件下保存的喷雾干燥的MBL粉剂与室温下保存的喷雾干燥的MBL粉剂的C4激活。
图46到47是MBL的曲线图,比较了在不同添加剂存在下产生的喷雾干燥的MBL粉剂与非干燥的MBL溶液对微生物的结合。
发明方式
实施例
下面,以实施例的方式更详细地解释本发明。下面的实施例用于提供对本发明的进一步理解并且绝不意在限制本发明的有效范围。除非另外指出,下面的实施例中使用的百分数指体积-重量比。
实施例1
MBL粉剂的表征和它的分析方法的建立
为了将重组的甘露糖结合蛋白(MBL)配制成适于吸入的形式,处理外部伤口或者成为粉剂形式,其又可以配制成片剂,将遇到下面的情况:喷雾干燥的MBL粉剂将是具有可吸入大小的气溶胶;复合体形成的MBL的结构特征和此类复合体的分布应该在整个喷雾干燥过程中保持;产生的粉剂在溶解时应该在糖基化MBL结合蛋白和丝氨酸蛋白酶存在下激活补体。另外,需要建立分析此类性能的方法。
作为开始,本发明人已经在蛋白质的正常喷雾条件下产生MBL粉剂。用于喷雾干燥的MBL溶液如下制备:5μg/mL重组MBL(Dobeel,Korea),150mM NaCl,0mM CaCl2,1mg/mL酪蛋白,0.4%(w/v)蔗糖。使用实验室喷雾干燥器(LaPlant SD-05,UK)。通过蠕动泵将MBL溶液以3.5mL/min的速率送入喷嘴(直径0.5mm),喷雾速率为1,600L/小时。通过干燥管的热空气流为1,150L/分钟,它的温度保持在100℃,而排出温度为69℃。
使用上面的方法得到细的白色粉末,通过下述方法分析产生的MBL粉剂的特征。
实施例1-1:MBL粉剂的显微颗粒大小分布
已知配制成粉剂的药物必须作为气溶胶吸入以便实现向呼吸道和肺的有效递送,并且吸入所需的颗粒大小优选为5mm或者更小。用激光zeta电位计(ELS-8000,Otsuka Electronics,Japan)检测喷雾干燥的MBL颗粒的大小和分布。
如图1中所示,上面方法产生的MBL颗粒具有2.18到3.18μm的颗粒大小,平均大小为2.57±0.24μm。因此证实喷雾干燥可以产生可以有效吸入到呼吸道和肺的MBL粉剂。
实施例1-2蛋白质印迹分析
本发明人检查了在用热空气喷雾干燥的整个过程中,MBL的复合体形成特征和它们的分布是否仍然保存。将MBL粉剂溶解在适量水中并在非变性条件下对溶液进行蛋白质印迹分析以检查喷雾干燥前后的任何差异(图2)。
图2显示了用于检查喷雾干燥前后MBL的形态改变的蛋白质印迹的结果,其中M条带代表分子量标准参照物,1是喷雾干燥前的MBL溶液,2是喷雾干燥的MBL粉剂。如图2中所示,在喷雾干燥之前和之后没有检测到明显的结构差异。因此证实没有结构改变的MLB的粉剂制剂是可能的。
实施例1-3补体系统中的C4激活
本发明人通过下述方法检查了在糖基化的MBL结合蛋白和丝氨酸蛋白酶存在下,喷雾干燥的MBL粉剂当溶解时是否保持它激活补体的活性:首先,用乙型肝炎病毒前-S抗原以500ng/孔包被免疫测定板(MaxiSorpTM Immunoplate,Nunc,Denmark)。将喷雾干燥的粉剂或者非干燥的(对照)MBL溶解在水中并将溶液以200ng、100ng、50ng、25ng、12.5ng、6.25ng或者3.125ng/孔加入上面的板中并温育2小时进行结合。向每孔中加入用稀释缓冲液以1∶100稀释的100μl无MBL的血清(Dobeel,Korea)以提供MBL结合的血清蛋白酶(MASPs)。用洗涤缓冲液洗涤平板6次。向平板加入500ng C4,接着温育2小时。以1∶1,500的稀释比例加入抗-C4辣根过氧化物酶(HRP)缀合物(Biogenesis,UK),接着温育1小时。加入150μl邻苯二胺(OPD)溶液并让比色反应进行20分钟以检测C4b沉积。加入50μl 3M HCl后用ELISA读出器测量492nm下的吸光度(图3)。
图3显示了比较本发明的喷雾干燥的MBL组合物(空心圆形)和对照组(实心圆形)中C4激活的曲线图。非干燥的和喷雾干燥的MBL都诱导相似的激活水平。所以,本发明人能够证实喷雾干燥的MBL粉剂对于呼吸道感染和外部伤口的功效没有损失。
如实施例1中描述的,使用常规喷雾干燥方法产生MBL粉剂。我们能够证明产生的MBL粉剂具有1)可吸入的颗粒大小,2)它们的复合体形成的结构特征和它们的分布不变,和3)仍然保留它的补体激活能力。因此,我们已经证实通过喷雾干燥将MBL配制成粉剂的可行性。
实施例2
喷雾干燥期间空气温度对MBL粉剂的活性的影响
多数蛋白质易于热变性,并且变性的蛋白质失去了它们的生物活性。因为喷雾干燥器使用热气流将液体样品转变成粉末,所以我们检查了在不同温度条件下产生的MBL粉剂在糖基化的MBL结合蛋白和丝氨酸蛋白酶存在下的补体激活的差异。
用于喷雾干燥的MBL溶液具有下面的组成:5μg/mL重组MBL,150mM NaCl,10mM CaCl2,250μg/mL酪蛋白,2%(w/v)蔗糖。喷雾干燥的进入/排出温度分别设置成80℃/58℃、100℃/68℃、115℃/78℃、130℃/87℃和150℃/100℃。将在它自身的温度条件下产生的每种粉末化的MBL组合物溶解在适量水中并与非干燥的MBL溶液(对照)比较在根据实施例1—3的补体系统中激活C4的能力(图4到6)。
图4到6比较了上面在不同温度下制备的喷雾干燥的MBL组合物与非干燥的MBL溶液的C4激活。每个图的进入/排出温度设置如下:80℃/58℃(图4),100℃/68℃(图5),115℃/78℃(图6),130℃/87℃(图7)和150℃/100℃(图8)。空心圆形表示本发明的喷雾干燥的MBL组合物,实心圆形表示对照实验。
如图4到8所示,在80℃/58℃和100℃/68℃的温度设置下喷雾干燥的MBL与对照MBL溶液具有相似的活性,而在更高温度设置下产生的粉末化MBL组合物随着温度升高而活性减小。因此,这些结果已经证实在喷雾干燥中,低于100℃/68℃的温度设置可有效产生具有高活性的MBL粉剂。
实施例3
稳定剂添加剂对MBL的影响:根据加入的糖的粉剂性质
当使用热空气将蛋白质喷雾干燥成粉剂制剂时,通常为了物理和生物稳定性而加入不同种类的糖。在本发明中,我们已经根据稳定剂添加剂——糖(蔗糖、乳糖、海藻糖和pluran)的身份研究了MBL粉剂的补体激活、大小分布和形状。用于喷雾干燥的MBL溶液含有5μg/mL重组MBL,150mM NaCl,10mM CaCl2,250μg/mL酪蛋白,加入0.4%蔗糖、0.5%乳糖、0.4%海藻糖或者0.4%pluran。
实施例3-1补体系统中的C4激活
喷雾干燥使用不同糖添加剂制备的MBL溶液后,使用实施例1-3的方法测量每种MBL粉剂的活性并与非干燥的BML溶液比较(对照,图9到12)。图9到12比较了在不同的糖添加剂存在下产生的喷雾干燥的MBL粉剂与干燥前MBL溶液的C4激活。空心圆形表示本发明的喷雾干燥的MBL组合物,实心圆形表示对照实验。
如图9到12所示,对于0.4%蔗糖(图9)和0.5%乳糖(图10)制剂,喷雾干燥的MBL粉剂与对照具有相似的活性水平,但是对于0.4%海藻糖(图11)和0.4%pluran(图12),活性存在很大损失。这些数据确定蔗糖和乳糖是喷雾干燥MBL的有效的稳定剂添加剂。
实施例3-2 MBL粉剂的颗粒大小分布
用激光zeta电位计(ELS-8000,Otsuka Electronics,Japan)检测喷雾干燥的MBL粉剂的颗粒大小分布(图13和表1)。图13描绘了在不同糖添加剂存在下,本发明的喷雾干燥的MBL组合物的颗粒大小,其中实心圆形表示喷雾干燥的MBL粉剂的0.4%蔗糖制剂;空心圆形,0.5%乳糖制剂;实心三角形,0.4%海藻糖制剂;空心三角形,0.4%pluran制剂。
如图13和表1中所示,喷雾干燥的MBL粉剂具有1.04到4.00μm的颗粒大小。加入蔗糖、乳糖或者海藻糖实现颗粒大小的更均匀的分布。然而,加入pluran导致0.39到15.43μm的宽范围的大小分布。因此断定向MBL溶液中加入蔗糖、乳糖或者海藻糖对于产生预期具有良好的吸入功效的MBL粉剂比pluran更有效。
表1根据它们的糖制剂,喷雾干燥的MBL粉剂的颗粒大小分布
糖 | 最小值(μm) | 最大值(μm) | 平均值±S.D.(μm) |
蔗糖 | 2.18 | 3.18 | 2.57±0.24 |
乳糖 | 0.85 | 6.16 | 3.32±1.17 |
海藻糖 | 0.23 | 3.32 | 1.04±0.37 |
pluran | 0.39 | 15.43 | 4.00±5.43 |
实施例3-3MBL粉剂的形状
用扫描电子显微镜观测MBL粉剂的形状(图14到17)。图14到17显示了在不同糖添加剂存在下产生的喷雾干燥的MBL组合物的电子显微镜图像,其中图14代表喷雾干燥的MBL粉剂的0.4%蔗糖制剂;图15,0.5%乳糖制剂;图16,0.4%海藻糖制剂;图17,0.4%pluran制剂。
如图14到17中所示,观察到用于稳定MBL溶液的不同的糖添加剂将MBL粉剂成形为不同的形式。而且,用激光zeta电位计测定的MBL粉剂的颗粒大小分布与通过电子显微术测定的分布一致。
从这三个组的结果,可以断定蔗糖和乳糖是产生适于吸入并且能够在补体系统中更强的C4激活的优选的添加剂。
实施例4
表征MBL粉剂的糖含量的变化
当糖添加剂用于增强喷雾干燥的蛋白质的稳定性时,结果随着糖的身份和浓度而变。本发明人为每种糖确定了适合喷雾干燥的浓度范围。该实验的目的是确定当向MBL溶液中加入乳糖或者蔗糖时糖浓度对产生的MBL粉剂的C4补体激活、颗粒大小分布和颗粒形状的影响。用于喷雾干燥的MLB溶液都含有5μg/mL重组MBL,150mM NaCl,10mM CaCl2,250μg/mL酪蛋白。向该共同的组合物中加入终浓度分别为0.5%、1%、2%或4%的蔗糖后喷雾干燥。对于乳糖,它为0.5%、1%、2%、4%或8%。
实施例4-1补体系统中的C4激活
根据实施例1-3的方法在MBL结合蛋白和丝氨酸蛋白酶存在下测量使用不同的糖添加剂制备的MBL粉剂的补体激活。将它们与相同组合物的非干燥的MBL溶液(对照)比较(图18-21,图22到26)。图18和21比较了在不同浓度的添加剂乳糖下产生的喷雾干燥的MBL粉剂与干燥前MBL溶液的C4激活,其中图18代表0.5%乳糖混悬液;图19,1%乳糖混悬液;图20,2%乳糖混悬液;和图21,4%乳糖混悬液。空心圆形表示本发明的喷雾干燥的MBL组合物,实心圆形表示对照实验。
如图18到21所示,在0.5%到4%的乳糖浓度范围内,喷雾干燥的MBL粉剂与对照具有相似水平的活性;特别地,1%乳糖制剂(图19)显示了相对高水平的活性。0.5%制剂显示出与对照相比的很小差异。从这些结果可以推断对于通过喷雾干燥得到活性MLB制剂,MBL溶液的乳糖浓度优选为1到2%。
图22到26比较了在不同浓度的添加剂蔗糖下产生的喷雾干燥的MLB粉剂与非干燥的MBL溶液的C4激活,其中图22表示0.5%蔗糖混悬液;图23,1%蔗糖混悬液;图24,2%蔗糖混悬液;图25,4%蔗糖混悬液;和图26,8%蔗糖混悬液。空心圆形表示本发明的喷雾干燥的MBL组合物,实心圆形表示对照实验。
如图22到26所示,对于0.5到8%的蔗糖浓度范围,喷雾干燥的MBL粉剂与对照具有相似水平的活性;特别地,1%(图23)和2%(图24)显示出相对高水平的活性。然而,8%制剂与对照相比显示出很小差异。从这些结果可以推断对于通过喷雾干燥得到活性MLB制剂,MBL溶液的蔗糖浓度优选为1到2%。
实施例4-2 MBL粉剂的颗粒大小分布
用激光zeta电位计(ELS-8000,Otsuka Electronics,Japan)检测不同的糖浓度下喷雾干燥的MBL粉剂的颗粒大小分布(图27和28,表2和3)。图27绘制了不同乳糖浓度下本发明的喷雾干燥的MBL组合物的颗粒大小,其中实心圆形表示喷雾干燥的MBL粉剂的0.5%乳糖制剂;空心圆形,1.0%乳糖制剂;实心三角形,2.0%乳糖制剂;和空心三角形,2.0%乳糖制剂。
表2不同乳糖浓度下喷雾干燥的MBL粉剂的颗粒大小
糖浓度 | DV0.1(μm) | DV0.9(μm) | 平均值±S.D.(μm) |
0.5%乳糖 | 2.01 | 4.90 | 3.22±1.17 |
1.0%乳糖 | 2.37 | 7.56 | 4.67±2.06 |
2.0%乳糖 | 2.64 | 13.39 | 7.36±4.31 |
4.0%乳糖 | 2.82 | 15.51 | 8.32±5.35 |
在上表中,DV0.1表示在10%累积体积水平时的颗粒直径,而DV0.9表示在90%累积体积水平时的颗粒直径。
如图27和表2所示,MBL粉剂的平均颗粒大小为3.22到8.32μm。出现了一种明显的趋势,其中稳定剂添加剂乳糖的浓度的增加伴随着颗粒大小的增加;高于2%的乳糖浓度对应于大于5μm的颗粒大小。已经表明为了实现喷雾干燥的粉剂向呼吸道和肺的有效递送,颗粒大小应该小于5μm。上面的结果表明以不高于2%的浓度掺入糖添加剂乳糖可以产生具有有效吸入的颗粒大小的MBL粉剂。
图28绘制了在不同浓度的蔗糖添加剂下产生的喷雾干燥的MBL组合物的颗粒大小,其中实心圆形表示喷雾干燥的MBL粉剂的0.5%蔗糖制剂;空心圆形,1.0%蔗糖制剂;实心三角形,2.0%蔗糖制剂;空心三角形,4.0%蔗糖制剂;和实心倒三角形,8.0%蔗糖制剂。
表3在不同蔗糖浓度下喷雾干燥的MBL粉剂的颗粒大小
糖浓度 | DV0.1(μm) | DV0.9(μm) | 平均值±S.D.(μm) |
0.5%蔗糖 | 2.28 | 5.32 | 3.52±1.22 |
1.0%蔗糖 | 2.68 | 9.59 | 5.83±2.71 |
2.0%蔗糖 | 2.38 | 7.49 | 4.64±2.03 |
4.0%蔗糖 | 2.94 | 12.21 | 7.07±3.61 |
8.0%蔗糖 | 2.52 | 9.98 | 5.85±2.94 |
在上表中,DV0.1表示在10%累积体积水平下的颗粒直径,而DV0.9表示在90%累积体积水平下的颗粒直径。
如图28和表3中所示,MBL粉剂的平均颗粒直径为3.52到7.07μm。在稳定剂添加剂蔗糖的浓度和颗粒大小之间没有明显相关性;然而,高于4%的蔗糖浓度与大于5μm的颗粒数目的增加相关。已知为了实现喷雾干燥的粉剂向呼吸道和肺的有效递送,颗粒大小应该小于5μm。上面的结果表明掺入浓度不高于4%的糖添加剂蔗糖可以产生有效吸入的颗粒大小的MBL粉剂。
实施例4-3MBL粉剂的形状
用扫描电子显微镜(JSM-5400,JEOL,Tokyo,Japan)观察MBL粉剂的形状(图29至32和33至37)。
图29到32显示了在不同浓度的乳糖下产生的喷雾干燥的MBL组合物的扫描电子显微镜图像,其中图29表示喷雾干燥的MBL粉剂的0.5%乳糖制剂;图30,1.0%蔗糖制剂;图31,2.0%乳糖制剂;和图32,4.0%乳糖制剂。
图33到37显示了在不同浓度的蔗糖下产生的喷雾干燥的MBL组合物的电子显微镜图像,其中图33表示喷雾干燥的MBL粉剂的0.5%蔗糖制剂;图34,1.0%蔗糖制剂;图35,2.0%乳糖制剂;和图36,4.0%蔗糖制剂;和图37,8.0%蔗糖制剂。
如图29到32和33到37所示,随着加入更多的糖,MBL粉剂的形状更接近球形。而且,如通过电子显微术证实的,颗粒大小随着糖浓度增加。
从这三组结果,对于产生有效吸入和在补体系统中强烈C4激活的MBL粉剂,可以断定蔗糖和乳糖添加剂的优选浓度为1到2%。
实施例5
关于增强剂添加剂CaCl2变化表征MBL粉剂
CaCl2的存在对于MBL结合微生物表面上的糖蛋白后对补体系统的激活是必需的。通常,已知血液CaCl2水平为5到10mM。因为这对应于MBL活性所需的水平,所以不必在血管注射中额外施用CaCl2。同时,当递送MBL到如呼吸道或者肺等靶标时,MBL必须溶解在对应的粘膜的体液中。然而,这些体液中CaCl2水平没还有充分了解;因此预期加入CaCl2以便吸入的MBL粉剂溶解在此类体液中并且得到足够水平的活性。
本发明人研究了CaCl2对喷雾干燥的MBL粉剂的稳定性和产生过程的影响。用于喷雾干燥的MBL溶液都含有5mg/mL重组MBL,150mM NaCl,2%蔗糖。向该共同的溶液中分别加入终浓度10、25、50、75、100、150和200mM的CaCl2后喷雾干燥。
当加入的CaCl2的浓度高于100mM时,不能得到适于吸入的粉剂。在10到50mM CaCl2的浓度范围可以得到可吸入的气溶胶,因此,使得可以产生能够在糖基化的MBL结合蛋白和丝氨酸蛋白酶存在下激活补体。然而,在10到50mM之间的浓度没有显著差异。这些结果证实对于喷雾干燥MBL,优选加入低于50mM浓度的CaCl2。
实施例6
通过糖和蛋白质的共同加入产生的MBL粉剂的表征
多种蛋白质添加剂通常用于蛋白质药物的稳定制剂。本发明人检查了在制备期间加入或者不加入(对照)蛋白质稳定剂添加剂酪蛋白的喷雾干燥的MBL粉剂的补体激活(图38到41)。用于喷雾干燥的添加剂组成为2%蔗糖或者乳糖与或不与250μg/mL酪蛋白。
图38到41比较了用糖添加剂在酪蛋白存在或不存在下产生的喷雾干燥的MBL粉剂与非干燥的MBL溶液的C4激活,其中图38代表2%蔗糖与酪蛋白;图39,2%蔗糖无酪蛋白;图40,2%乳糖与酪蛋白;图41,2%乳糖无酪蛋白。空心圆形表示本发明的喷雾干燥的MBL组合物,实心圆形表示非干燥的对照实验。
如14a到14d所示,用糖和酪蛋白产生的MBL在保持C4激活方面比无酪蛋白产生的粉剂更好。当糖添加剂为乳糖时,酪蛋白特别有效。
为了发现MBL粉剂的特征和酪蛋白浓度之间的关系,本发明人还喷雾干燥了在不同的酪蛋白浓度下制备的一系列MBL溶液。又分析了产生的MBL粉剂并根据实施例1的方法比较它们的补体激活、颗粒大小分布和颗粒形状。用于喷雾干燥的MBL溶液都含有5μg/mL重组的MBL,150mMNaCl,10mM CaCl2,0.8%蔗糖。向该共同的组合物中分别加入终浓度为0、50、200、500、1000和2000μg/mL的酪蛋白后喷雾干燥。加入的酪蛋白产生的MBL粉剂比没有酪蛋白产生的MBL粉剂在保持C4激活的能力方面更强;在它们的能力中没有观察到依赖浓度的差异。喷雾干燥的MBL粉剂的颗粒大小为2.1到3.1μm,其适于气溶胶吸入。大小分布既不依赖于酪蛋白的存在也不依赖于它的浓度。这些结果证实当喷雾干燥MBL溶液时,优选加入低浓度的酪蛋白。
实施例7
使用生物可降解的聚合物作为产生MBL粉剂的添加剂
生物可降解的聚合物广泛用于制药工业。本发明人已经测试了生物相容的聚合物作为MBL的喷雾干燥中的添加剂是否是相容的。将一种可溶的生物可降解的聚合物聚乙烯醇(PVA)以0.05、0.1、0.2、0.3或0.4%的终浓度加入到含有2%蔗糖和250μg/mL酪蛋白的重组MBL溶液中后干燥。在低于0.4%的PVA浓度下,喷雾干燥的MBL粉剂的C4激活几乎与非干燥的MBL溶液的相同,当加入0.4%的PVA时,与非干燥的溶液相比,粉剂中的C4激活较低。这些结果证实生物相容的聚合物PVA在低于0.2%的浓度下作为喷雾干燥添加剂是相容的。
实验实施例1
MBL粉剂在长期保存期间的稳定性分析
为了测试MBL的生物活性在长期保存期间是否保持,用严酷的温度条件测试MBL粉剂在长期保存期间的稳定性。将粉剂在70℃保存2天或者60℃保存4天,这些是已知对应于1年保存的条件;然后将粉剂在MBL结合糖蛋白和丝氨酸蛋白酶的存在下比较它们的C4补体激活(图42到45)。制备的MBL溶液含有5μg/mL重组MBL,150mM NaCl,10mM CaCl2,加入2%乳糖或者2%蔗糖和0.05%PVA。将这些溶液喷雾干燥并测试它们的稳定性。
图42到45比较在严酷温度条件下保存的喷雾干燥的MBL粉剂与在室温条件下保存的喷雾干燥的MBL粉剂的C4激活,其中附图图解了保存的喷雾干燥的MBL粉剂并且其含有如下的添加剂:图42,2%乳糖,70℃下两天;图43,2%蔗糖和0.05%PVA,70℃下2天;图44,2%乳糖,60℃下4天;图45,2%蔗糖和0.05%PVA,60℃下4天。
如图42到45所示,证实了测试的所有MBL组合物都保持它们的C4激活活性。在室温下,保持100%稳定性1年;因此,本发明的生产方法使得可以配制无任何活性损失的MBL粉剂,并且此类粉剂在长时间内保持活性。
实验实施例2
分析MBL粉剂和微生物之间的结合
因为不同的微生物在它们的表面表达不同的糖蛋白,所以MBL在与微生物的结合中显示出变化。本发明人比较了喷雾干燥的MBL粉剂的结合亲和力与MBL溶液的结合亲和力(图46和47)。制备的MBL溶液含有5μg/mL重组MBL,150mM NaCl,10mM CaCl2,与额外的2%乳糖或者2%蔗糖和0.05%PVA。
将免疫测定板(MaxiSorpTM Immunoplate,Nunc,Denmark)用微生物以1×107、1×105、1×103或1×101个细胞/孔包被。将喷雾干燥的粉剂或者非干燥(对照)的MBL以5μg/mL溶解在水中。向每孔加入100μl该溶液并温育平板2小时以允许结合。除去反应混合物并用洗涤缓冲液洗涤平板6次。向每孔加入用稀释缓冲液以1∶10,000稀释的100μl抗-MBL抗体(Dobeel,Korea),并允许混合物在室温结合1小时。除去反应混合物后,用洗涤缓冲液洗涤平板6次。然后向每孔加入用稀释缓冲液以1∶10,000稀释的100μl抗小鼠抗体-HRP缀合物(Kirkegaard & Perry Laboratories(KPL),USA),并温育反应混合物1小时。用洗涤缓冲液洗涤6次后,加入100μl TMB底物溶液(KPL,USA)并允许比色反应进行30分钟。通过加入50μl 3N H2SO4停止反应。用ELISA读出器测量450nm的吸光度(图46和47)。
图46是显示非干燥的溶液相MBL和多种微生物之间的结合的曲线图。图47是显示比较在不同添加剂存在下产生的喷雾干燥的MBL粉剂与非干燥的MBL溶液对微生物的结合的曲线图。在每个图中,a表示金黄色葡萄球菌ATCC29213;,b,金黄色葡萄球菌CCARM3197;c,金黄色葡萄球菌CCARM3114;d,表皮葡萄球菌ATCC12228;e,表皮葡萄球菌CCARM35048;f,化脓性葡萄球菌ATCC8668;g,流感嗜血菌ATCC51907;h,粪肠球菌(Enterococcus faecalis)ATCC51907;i.屎肠球菌(E.faecium)CCARM5028;j,肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)ATCC10031;和k表示白假丝酵母。在图34中,黑色条形表示具有2%乳糖的喷雾干燥的MBL组合物,灰色条形表示具有2%乳糖和0.05%PVA的喷雾干燥的MBL组合物。
如图46和47所示,非干燥的MBL溶液显示出对于金黄色葡萄球菌ATCC29213、金黄色葡萄球菌CCARM3197、流感嗜血菌ATCC51907的强结合亲和力;对于金黄色葡萄球菌CCARM3114和化脓性葡萄球菌ATCC8668的弱亲和力;对表皮葡萄球菌ATCC1228、表皮葡萄球菌CCARM35048、粪肠球菌ATCC51907、屎肠球菌CCARM5028和肺炎克雷伯氏菌ATCC10031几乎无亲和力。通过具有添加剂的两种MBL粉剂类似地重复了此类结合行为。在喷雾干燥的和非干燥的MBL和具有不同添加剂的MBL制剂之间观察到结合的小的变化,认为其来自实验误差。
对于MBL有效递送到呼吸器官如肺和呼吸道,或者对于外部损伤的治疗,MBL必须配制成粉剂化组合物。此类MBL的粉剂化组合物应该具有气溶胶形式的可吸入的颗粒大小。此类组合物必须还含有MBL的结构特征,即MBL的结合复合体形成的程度和分布。最后,此类组合物应该能够在MBL结合糖蛋白和丝氨酸蛋白酶存在下激活补体。
工业应用性
本发明人已经完成了满足上面标准的发明,如前面段落中描述的结果所示。本发明人已经证实本发明的MBL的喷雾干燥的粉剂组合物具有对用于它的生产的添加剂的身份和浓度敏感的物理和生物学性质。基于这些结果,它们已经为本发明组合物开发了能够保持活性和更有效的施用的喷雾干燥方法。因为通过上面的方法产生的发明性MBL粉剂组合物能够抑制病毒、细菌和真菌感染并且已经被配制而适于吸入,所以,该组合物可用于治疗和预防呼吸道感染和来自这些微生物的外部伤口。应该指出的是本发明的MBL粉剂组合物可以与用作片剂制剂的赋形剂混合。
Claims (24)
1.用于治疗和预防微生物感染性疾病的喷雾干燥的粉剂组合物,其包含作为活性成分的胶原凝集素家族的至少一种成员蛋白或者其变体;所述组合物具有0.1到10微米的颗粒大小以支持胶原凝集素家族成员蛋白的有效吸入到肺和呼吸道或者直接递送到表皮中的感染部位。
2.根据权利要求1的喷雾干燥的粉剂组合物,其中所述组合物具有3到5微米的颗粒大小。
3.根据权利要求1的喷雾干燥的粉剂组合物,其中所述组合物还包含药用载体。
4.根据权利要求3的喷雾干燥的粉剂组合物,其中所述药用载体是糖或者生物可降解的聚合物。
5.根据权利要求4的喷雾干燥的粉剂组合物,其中所述糖是蔗糖或者乳糖。
6.根据权利要求4的喷雾干燥的粉剂组合物,其中所述生物可降解的聚合物是聚乙烯醇。
7.根据权利要求1的喷雾干燥的粉剂组合物,其中所述组合物还包含酪蛋白。
8.根据权利要求7的喷雾干燥的粉剂组合物,其中酪蛋白含量为按重量计0.1%到20%。
9.喷雾干燥的粉剂组合物,其包含按重量计0.001到60份重组的甘露糖结合凝集素(MBL)、0.1到10份NaCl、0.1到10份CaCl2、和5到80份糖。
10.根据权利要求9的喷雾干燥的粉剂组合物,其中所述组合物包含按重量计0.001到0.1份重组MBL、8到9份NaCl、1到2份CaCl2、20份乳糖或蔗糖,和0.5份聚乙烯醇。
11.根据权利要求1到9任一项的喷雾干燥的粉剂组合物,其中所述感染性微生物是病毒、细菌或者真菌。
12.根据权利要求11的喷雾干燥的粉剂组合物,其中所述病毒为具有病毒包膜的病毒,包括人免疫缺血病毒、疱疹病毒、SARS(严重急性呼吸道综合征)冠状病毒和鼻病毒。
13.根据权利要求11的喷雾干燥的粉剂组合物,其中所述细菌具有可被胶原凝集素家族成员蛋白质识别的糖基化模式,包括金黄色葡萄球菌(Staphylcoccus aureus)、流感嗜血菌(Hemophilus influenzae)和化脓性葡萄球菌(Staphylococcus pyogens)。
14.根据权利要求11的喷雾干燥的粉剂组合物,其中所述真菌具有可被胶原凝集素家族成员蛋白质识别的糖基化模式,包括白假丝酵母(Candida albicans)。
15.根据权利要求1到14任一项的喷雾干燥的粉剂组合物,其中胶原凝集素家族成员蛋白质选自由甘露糖结合凝集素(MBL)、表面活性剂蛋白A(SP-A)、表面活性剂蛋白D(SP-D)、胶原凝集素-肝脏1(CL-L1)、胶原凝集素-胎盘1(CL-P1)和CL-43组成的组。
16.根据权利要求1到14任一项的喷雾干燥的粉剂组合物,其中胶原凝集素家族成员蛋白质是MBL。
17.产生喷雾干燥的粉剂组合物的方法,所述组合物包含胶原凝集素家族的至少一种成员蛋白质或者其变体,并且适于吸入到呼吸器官或者直接将胶原凝集素家族成员蛋白质直接递送到表皮中的感染部位,所述方法包括步骤:
(i)制备含有糖和至少一种胶原凝集素家族成员蛋白质或者其变体的水溶液;
(ii)用足够的压力喷雾干燥步骤(i)的溶液以保持500到2,000升/小时的喷雾速度和400到1,200升/分钟的热空气流速,其中热空气温度是50到220℃并且排出温度是42到150℃;和
(iii)收集从步骤(ii)产生的粉剂。
18.根据权利要求17的方法,其中步骤(i)的溶液包含0.1到4%(w/v)糖和0.0005到10%(w/v)胶原凝集素家族成员蛋白质或者其变体。
19.根据权利要求17或18的方法,其中所述糖是蔗糖或乳糖。
20.根据权利要求17的方法,其中步骤(i)的溶液还包含药用载体或者稀释剂。
21.根据权利要求17的方法,其中步骤(i)的溶液还包含酪蛋白。
22.根据权利要求17到21任一项的方法,其中胶原凝集素家族成员蛋白质选自由表面活性剂蛋白A(SP-A)、表面活性剂蛋白D(SP-D)、胶原凝集素-肝脏1(CL-L1)、胶原凝集素-胎盘1(CL-P1)和CL-43组成的组。
23.根据权利要求17到21任一项的方法,其中胶原凝集素家族成员蛋白质是甘露糖结合凝集素(MBL)。
24.根据权利要求17到21任一项的方法,其中通过所述方法产生的粉剂组合物的颗粒大小为0.1到10微米。
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US5855880A (en) * | 1987-06-04 | 1999-01-05 | Washington University | Avirulent microbes and uses therefor |
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US5464649A (en) * | 1992-10-30 | 1995-11-07 | Hershey Foods Corporation | Reduced fat confectionery products and process |
PL179443B1 (pl) * | 1994-03-07 | 2000-09-29 | Inhale Therapeutic Syst | Kompozycja insuliny, sposób wytwarzania kompozycji insuliny i sposób wytwarzania dawki insuliny w postaci aerozolu PL PL PL PL |
US6315983B1 (en) * | 1996-01-24 | 2001-11-13 | Byk Gulden Lomberg Chemische Fabrik Gmbh | Process for the production of powdered pulmonary surfactant preparations |
US7049099B2 (en) * | 1998-01-23 | 2006-05-23 | Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. | Recombinant human mannan-binding proteins and producing method of the same |
EP0933029A1 (en) * | 1998-02-03 | 1999-08-04 | Xyrofin Oy | Skimmed milk powder substitute |
US5883084A (en) * | 1998-06-08 | 1999-03-16 | Clarion Pharmaceuticals Inc. | Treatment of respiratory diseases utilizing α-tocopheryl-phosphocholine |
JP4707231B2 (ja) * | 1998-06-10 | 2011-06-22 | スタテンズ セーラム インスティテュート | マンナン結合レクチンを製造するための精製方法及びmbl医薬品 |
US6447806B1 (en) * | 1999-02-25 | 2002-09-10 | Novartis Ag | Pharmaceutical compositions comprised of stabilized peptide particles |
WO2000070043A1 (en) * | 1999-05-14 | 2000-11-23 | Steffen Thiel | Recombinant human mannan-binding lectin |
US6967023B1 (en) * | 2000-01-10 | 2005-11-22 | Foamix, Ltd. | Pharmaceutical and cosmetic carrier or composition for topical application |
US7871598B1 (en) | 2000-05-10 | 2011-01-18 | Novartis Ag | Stable metal ion-lipid powdered pharmaceutical compositions for drug delivery and methods of use |
EP1309312A2 (en) * | 2000-08-07 | 2003-05-14 | Inhale Therapeutic Systems, Inc. | Inhaleable spray dried 4-helix bundle protein powders having minimized aggregation |
IL154628A0 (en) | 2000-09-01 | 2003-09-17 | Lung surfactant compositions with dynamic swelling behaviour | |
BR0115020A (pt) * | 2000-10-31 | 2003-12-23 | Deobiopharm S A | Suspensão de uma proteìna epi-hne, processo de preparação da mesma, aerossol de pó seco derivado da mesma, composições farmacêuticas contendo a suspensão referida ou o aerossol referido, e suas aplicações |
JP4034530B2 (ja) * | 2001-02-20 | 2008-01-16 | 日本ケミカルリサーチ株式会社 | 抗hiv剤 |
JP2005508220A (ja) * | 2001-10-24 | 2005-03-31 | パーリ・ゲーエムベーハー | 薬用組成物調製用具 |
RU2004130293A (ru) * | 2002-03-11 | 2005-04-20 | Аэрис Терапьютикс, Инк. (Us) | Способы и композиции для лечения эмфиземы |
DK1344533T3 (da) * | 2002-03-15 | 2007-01-08 | Natimmune As | Farmaceutiske præparater, der omfatter mannosebindende lectin |
WO2003090682A2 (en) * | 2002-04-25 | 2003-11-06 | The Scripps Research Institute | Treatment and prevention of pulmonary conditions |
KR20100107083A (ko) * | 2002-12-17 | 2010-10-04 | 메디뮨 엘엘씨 | 생물활성 물질의 고압 분무 건조 |
ATE553113T1 (de) * | 2003-02-28 | 2012-04-15 | Agenus Inc | Verwendung von lektinen zur förderung der oligomerisierung von glycoproteinen und antigenen molekülen |
US20050137126A1 (en) * | 2003-04-09 | 2005-06-23 | Natlmmune A/S | Treatment of SARS in individuals |
WO2004091436A2 (en) * | 2003-04-15 | 2004-10-28 | The Regents Of The University Of California | Methods and compositions for treating ocular disease |
KR100755931B1 (ko) | 2003-06-11 | 2007-09-06 | (주)두비엘 | 고분자형 만노스 결합형 렉틴의 대량 생산방법 및 상기방법으로 제조된 만노스 결합형 렉틴 재조합 단백질의제제화 |
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US7550150B2 (en) * | 2005-03-15 | 2009-06-23 | Barros Research Institute | Methods of treating or preventing a disease, disorder or condition associated with a viral infection |
US20080214435A1 (en) * | 2005-04-11 | 2008-09-04 | Natlmmune A/S | Novel Cancer Indications of Mannan-Binding Lectin (Mbl) in the Treatment of Immunocompromised Individuals |
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