CN104053449B - 胃肠疾患的治疗 - Google Patents

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Abstract

本发明示出使用激活鸟苷酸环化酶C(GC‑C)受体的肽和其他试剂用于治疗包括但不限于肠应激综合征(IBS)、胃肠蠕动障碍、胃肠功能性障碍、胃食管返流疾病(GERD)、十二指肠胃反流、克罗恩病、溃疡性结肠炎、炎性肠病、功能性烧心、消化不良、内脏痛、胃轻瘫、慢性肠假性梗阻(或结肠假性梗阻)、与便秘相关的疾患和病症、以及本文描述的其他病症和疾患的胃肠疾患和病症的肽、组合物、和相关的方法。

Description

胃肠疾患的治疗
技术领域
本发明涉及治疗胃肠疾患的肽、组合物和方法。
发明背景
胃肠疾患(GI)包括肠应激综合征(IBS)，其是肠道常见的慢性疾患，单在美国就影响着2至6千万个体(Lehman Brothers，Global Healthcare-Irritable bowel syndromeindustry update，September1999)。IBS是胃肠病学家诊断中最常见的疾患，并且占到初级护理医师出诊的12％(Camilleri2001，Gastroenterology120：652-668)。在美国，预估IBS每年的经济影响达$250亿，通过对健康保健的直接消耗和由于缺勤工作导致的间接消耗(Talley1995，Gastroenterology109：1736-1741)。具有IBS的患者缺勤工作多三倍，并且报告降低生命质量。由于治疗IBS的处方选择很少，所以患有IBS的患者的需求极大程度未得到满足。
具有IBS的患者患有腹痛和肠道不适。基于主要的大便习惯来定义IBS的三种亚类：便秘型肠易激综合征(c-IBS)、腹泻型肠易激综合征(d-IBS)或交替型肠易激综合征(a-IBS)。预估患有c-IBS的个体占IBS患者的20-50％，通常报道为30％。与具有类似性别比的两亚类相比，c-IBS最常见于妇女(3∶1的比率)(Talley等人，1995，Am J Epidemiol142：76-83)。
在“Rome Criteria”(Drossman等人，1999，Gut45：Suppl II：1-81)中规定IBS的定义和诊断标准，它是临床操作中已经被广泛肯定。目前，越来越多证据关于在IBS的病原学中炎症的作用。报道表明：IBS患者的亚类具有结肠炎和肥大细胞的少但显著增加，增加了诱生型一氧化氮(NO)和合酶(iNOS)和改变了炎性细胞因子的表达(由Talley2000，Medscape Coverage of DDW week综述)。
胃肠疾患也可包括便秘，其中多大3400万美国人患有与慢性便秘(CC)相关的病症，并且850万人寻求治疗。具有CC的患者通常感觉大便困难和具有大块的大便，在排便中需要用力，感觉粪便没有排完全，并且每周少于三次肠道运动。CC的不舒适和胃气胀使他们工作能力下降和参与日常生活，因而显著影响患者的生活质量。
一半的CC患者不满意CC目前的治疗方法。因此，对治疗CC的新化合物和方法仍然有需求。
美国专利7,304,036和7,371,727公开用于治疗胃肠疾患的用作鸟苷酸环化酶C(GC-C)受体的激动剂的肽。一种特别公开的肽是利那洛肽，其由以下氨基酸序列组成：CysCys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr。这些专利也公开制备利那洛肽和相关肽的方法。
利那洛肽具有以下氨基酸结构：
利那洛肽口服，目前临床试验中用于治疗具有便秘(IBS-c)和慢性便秘(CC)的肠应激综合征，其对GI生理具有以下多种作用：(1)减少内脏痛；(2)减少胃气胀；以及(3)增加GI转变，其可导致增加排便频率和增加排便稠度。口服的利那洛肽通过在腔道表面激活GC-C来局部作用；在治疗剂量水平下口服施用之后没有系统观察到可检测水平的利那洛肽。因此，由利那洛肽的临床试验、以及使用利那洛肽和相关的肽的临床前研究表明：GC-C肽激动剂可治疗使用。
美国专利7,304,036和7,371,727的内容通过引用方式全部并入本文中。
本发明示出在其α-胺基团处可被修饰为酮衍生物的肽，其能够在不同亲和力下激活和/或结合鸟苷酸环化酶-C(GC-C)受体。本发明也示出在其半胱氨酸键处使用另外的硫原子可被修饰的肽，其另外可在其α-胺基团处被修饰。虽然在其他组织中检测到低水平的GC-C，但GC-C是哺乳动物肠道功能的关键调节剂。GC-C应答内源性激素、鸟苷蛋白和尿鸟苷素，以及来自耐热肠毒素家族的肠道菌群肽(ST肽)。当激动剂结合GC-C时，第二信使、环状GMP(c-GMP)有升高，以及氯化物和碳酸氢盐增加，这导致肠道流体分泌增加。在本发明的一些实施例中，本文描述的肽可使得c-GMP水平升高和提供对治疗胃肠疾患的治疗选项。
发明概要
本发明示出使用激活鸟苷酸环化酶C(GC-C)受体的肽和组合物用于治疗包括但不限于肠应激综合征(IBS)胃肠蠕动障碍、便秘、胃肠功能性障碍、胃食管返流疾病(GERD)、十二指肠胃反流、克罗恩病、溃疡性结肠炎、炎性肠病、功能性烧心、消化不良、内脏痛、胃轻瘫、慢性肠假性梗阻(或结肠假性梗阻)、和本文描述的其他病症和疾患的肽、组合物、和相关的方法。
本发明的一方面提供肽或其药学上可接受的盐，其中肽包含氨基酸序列Cys CysGlu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr，其中肽的Cys1氨基酸的α-胺为通过氧化或酶反应来脱氨基的(“Cys1-α-酮肽”)。
在一个实施方案中，所述肽包含以下氨基酸结构：
或其药学上可接受的盐。
在另一实施方案中，所述肽包含以下氨基酸结构：
或其药学上可接受的盐。
在以下描述中示出本发明的一个或多个实施方案的细节。
附图简述
图1显示在竞争放射性配体结合分析法中本发明的示例性肽与细胞表面GC-C受体在T84细胞中特异性结合。
图2显示在T84细胞cGMP测定法中本发明的示例性肽的剂量反应。
图3证实通过RP-HPLC分析示例性肽的例子，其中“Cys1-α-酮”是指在它的N-末端α-胺基团上修饰的利那洛肽酮衍生物。
通过示意方式提供图，并不是旨在限制本发明的范围。
发明详述
鸟苷酸环化酶C(GC-C)是在胃肠道中位于上皮细胞的顶端表面上的跨膜受体。受体具有细胞外配体结合结构域、单个跨膜区和C-末端鸟苷酰基环化酶结构域。当配体结合GC-C的细胞外结构域时，细胞外催化结构域催化cGMP由GTP产生。在体内，在细胞内cGMP的该增加激活导致至肠腔内的氯化物和碳酸氢盐的分泌增加、腔道pH增加、腔道钠吸收增加、流体分泌增加、和肠道传输加速的事件的串联。cGMP是由上皮双向分泌至粘膜和腔道内。本发明的肽和组合物结合肠道GC-C受体，其是肠中流体和电解质平衡的调节剂。
在一些情况下，治疗具有结合和激活肠GC-C受体、但比肽的非变体形式活性更低或更高的变体或修饰肽的患者可以为所需要的。一旦结合或降低肽的稳定性，则由于受体亲和力降低或者激活受体的能力降低导致活性降低。一旦结合或增加肽的稳定性，则由于受体的亲和力增加或者激活受体的稳定性增加可导致活性增加。
示例性肽的描述：
在各实施方案中，肽包含氨基酸序列Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro AlaCys Thr Gly Cys Tyr，其中肽的Cys1氨基酸的α-胺为通过氧化反应或酶催化来脱氨基的。例如，通过包括Cys1氨基酸的α-胺亲核攻击的利那洛肽的氧化脱氨作用(其形成希夫碱产物)，随后为希夫碱的质子转移互变异构化，最后在酸中水解以得到α-Cys1酮和平衡中它的水合物可制备该肽。两肽的该混合物称为“Cys1-α-酮”或“Cys1-酮”。这些肽可为互变异构体，并且不同比率的各种互变异构混合物可用于本发明，其在本发明的范围内。
在多个实施方案中，肽包含氨基酸序列Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro AlaCys Thr Gly Cys Tyr，其中肽的Cys1氨基酸的α-胺为脱氨基的。
在一个实施方案中，所述肽包含以下氨基酸结构：
或其药学上可接受的盐。
在另一实施方案中，所述肽包含以下氨基酸结构：
或其药学上可接受的盐。
本领域技术人员意识到，包含以下氨基酸结构的肽
可与包含以下氨基酸结构的偕二醇一水合物形式在平衡中：
如本文所使用，术语“Cys1-α-酮肽”或者以下结构
旨在包括Cys1-α-酮结构和偕二醇一水合物形式。
在另一实施方案中，肽包含氨基酸序列Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro AlaCys Thr Gly Cys Tyr，其中另外的硫原子可连接六个半胱氨酰硫中任意一个。
在一个实施方案中，肽包含利那洛肽三硫化物产物，其由加入一个硫原子至在利那洛肽中三个二硫化物半胱氨酰键的一个形成(本文称为“利那洛肽三硫化物产物”或者“利那洛肽三硫化物肽”)。
在一个实施方案中，肽包含选自以下的氨基酸结构：
和
在进一步的实施方案中，肽由氨基酸序列Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn ProAla Cys Thr Gly Cys Tyr组成，其中其中的Cys1氨基酸的α-胺为脱氨基的。
在一个实施方案中，所述肽由以下氨基酸结构组成：
或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，所述肽由以下氨基酸结构组成：
或其药学上可接受的盐。
在另一实施方案中，肽由Cys Cys Glu Tyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr GlyCys Tyr的氨基酸序列组成，其中另外的硫原子可连接六个半胱氨酰硫中任意一个。
在一个实施方案中，肽由选自以下的氨基酸结构组成：
和
在一些实施方案中，肽或其药学上可接受的盐激活鸟苷酸环化酶C受体。
在其他实施方案中，肽或其药学上可接受的盐包含30或更少的氨基酸。
在进一步的实施方案中，肽或其药学上可接受的盐包含20或更少的氨基酸。
在其他实施方案中，肽或其药学上可接受的盐包含肽，其中少于五个氨基酸在所述氨基酸序列的第一个Cys残基之前。
在一些实施方案中，分离肽或其药学上可接受的盐。
在其他实施方案中，纯化肽或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，提供肽的药学上可接受的盐。在一些情况下，药学上可接受的盐是盐酸盐。
变体或修饰的肽
在各实施方案中，肽包括形成一个二硫键的两个Cys；肽包括形成两个二硫键的四个Cys；或者肽包括形成三个二硫键的六个Cys。
在各实施方案中，肽包括形成一个三硫键的两个Cys；肽包括形成两个三硫键的四个Cys；或者肽包括形成三个三硫键的六个Cys。
在一些肽中，通常形成二硫键的Cys残基的一对或两对的一个或两个成员可被同型半胱氨酸、青霉胺、3-巯基脯氨酸(Kolodziej等人，1996Int J Pept Protein Res48：274)；β，β二甲基半胱氨酸(Hunt等人，1993Int J Pept Protein Res42：249)或者二氨基丙酸(Smith等人，1978J Med Chem21：117)取代，从而在通常二硫键的位置处形成可替代的内交联。在其他实施方案中，二硫键可被烃交联(Schafmeister等人，2000J Am Chem Soc122：5891；Patgiri等人，2008Acc Chem Res41：1289；Henchey等人，2008Curr Opin ChemBiol12：692)取代。
肽的产生
在一个实施方案中，在任何已知蛋白表达体系中可重组产生本发明的肽或前体肽，该已知蛋白表达体系包括但不限于细菌(例如，大肠杆菌或枯草芽孢杆菌)、昆虫细胞体系(例如，Drosophila Sf9细胞体系)、酵母细胞体系(例如，酿酒酵母、酵母菌属)或者丝状真菌表达体系、或动物细胞表达体系(例如，哺乳动物细胞表达体系)。在一些实施方案中，在表达重组产生的肽以形成本发明的肽之后，可化学修饰该重组产生的肽。
如果肽或变体肽由重组产生，例如，大肠杆菌，则编码肽的核酸分子也可编码使得成熟肽由细胞分泌的前导序列。因此，编码肽的序列可包括例如天然存在的细菌ST肽的前肽顺序(pre sequence)和前导序列(pro sequence)。分泌的成熟肽可由培养基中纯化。
可将编码本文所述肽的序列插入能够在细菌细胞中递送和携带核酸分子的载体内。可将DNA分子插入自主复制载体内(合适的载体包括例如pGEM3Z和pcDNA3、及其衍生物)。载体核酸可以为细菌或噬菌体DNA，例如噬菌体λ或M13或其衍生物。包含本文所述的核酸的载体构建之后可以为诸如细菌的宿主细胞的转化。合适的细菌宿主包括但不限于：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、假单胞菌属和沙门氏菌属。除了编码核酸分子之外，遗传构建物也包括使得可表达例如启动子和调节序列的元件。表达载体可包含控制转录起始的转录控制序列，例如启动子、增强子、操纵基因、和阻抑物序列。各种转录控制序列是本领域众所周知的。表达载体也可包括翻译调节序列(例如，未经翻译的5′序列、未经翻译的3′序列、或者内核糖体进入位点)。载体能够自主复制或者它能够整合至宿主DNA以确保在肽产生时稳定性。
包括本文所述肽的编码蛋白的序列也可与编码以下肽亲和标签的核酸融合，例如，谷胱甘肽S-转移酶(GST)、麦芽糖E结合蛋白、蛋白A、FLAG标签、六-组氨酸、myc标签或流感HA标签，从而便于纯化。亲和标签或报道基因融合将目标肽的阅读框架与编码亲和标签的基因的阅读框架连接，从而生成翻译融合。融合基因的表达导致单个肽的翻译，该单个肽包括目标肽和亲和标签。在利用亲和标签的一些情况下，编码蛋白酶识别位点的DNA序列将在亲和标签的阅读框架和目标肽之间融合。
适合在除细菌之外的蛋白表达体系中产生肽的不成熟和成熟形式以及本文所述的变体的遗传构建物和方法、和本领域技术人员众所周知的那些也可用在生物系统中于产生肽。
在其他实施方案中，通过tRNA修饰方法可重组产生包含不是通过翻译机制常规并入的氨基酸和本文所述的肽。使得可并入非天然和/或任意氨基酸的修饰tRNA的方法是本领域已知的，该方法包括但不限于修饰反密码子、氨基酸附着位点、和/或接纳茎(Biochem.Biophys.Res.Comm.(2008)372：480-485；Chem.Biol.(2009)16：323-36；Nat.Methods(2007)4：239-44；Nat.Rev.Mol.Cell Biol.(2006)7：775-82；Methods(2005)36：227-238；Methods(2005)36：270-278；Annu.Rev.Biochem.(2004)73：147-176；Nuc.Acids Res.(2004)32：6200-6211；Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2003)100：6353-6357；Royal Soc.Chem.(2004)33：422-430)。
在一些实施方案中，可化学产生肽。通过大量不同的方法可合成肽，这些方法包括使用BOC或FMOC保护的溶液和固相合成。例如，使用保守氨基酸偶联可在2-氯代三苯甲基或Wang树脂上合成肽。可使用以下保护基团：芴基甲氧基羰基或者叔丁基氧基羰基(α-氨基，N-末端)；三苯甲基或叔丁基(Cys的硫醇基团)；叔丁基(谷氨酸的γ-羧基和苏氨酸的羟基，如果存在)；以及三苯甲基(天冬酰胺侧链的β-酰胺官能团和酪氨酸的苯酚基，如果存在)。在叔胺的存在下，使用DIC和HOBt可作用于偶联，并且使用混合物K(三氟乙酸81％、苯酚5％、苯甲硫醚5％、1，2-乙二硫醇2.5％、水3％、二甲硫2％、碘化铵1.5％w/w)肽可由固体载体中去保护和分裂。在去除三氟乙酸和其他挥发物之后，使用有机溶剂可沉淀肽。使用二甲亚砜(Tam等人，(1991)J.Am.Chem.Soc.113：6657-62)或者使用空气氧化策略可形成Cys残基之间的二硫键。通过反向色谱法可纯化所得肽，然后冻干。在一些实施方案中，在合成肽之后，可对化学合成的肽进行化学修饰以形成本发明的肽。
这些肽可以碱性或其药学上可接受的盐的形式制备、分离或使用。盐的例子包括但不限于肽的醋酸盐、氯化物、硫酸盐和磷酸盐。
肽和GC-C受体激动剂的组合物
在另一方面中，提供药物组合物，其中肽可与任何药学上可接受的载体或介质单独或联合使用。
在多个实施方案中，药物组合物包含如本文所述的肽或其药学上可接受的盐。药物组合物可包含两种或更多种如本文所述的肽或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，药物组合物包含两种或更多种选自以下的肽：
i.肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
ii肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
或者
iii.肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
在其他实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
并且与利那洛肽的重量相比，所述肽或其药学上可接受的盐包含小于10重量％、20重量％、30重量％、40重量％、50重量％、60重量％、70重量％、80重量％、或90重量％。
在进一步的实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
并且如与利那洛肽的重量相比，其中药物组合物包含小于9重量％、8重量％、7重量％、6重量％、5重量％、4重量％、3重量％、2重量％、1重量％或者0.5重量％的肽或其药学上可接受的盐。
在进一步的实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
并且如与利那洛肽的重量相比，其中药物组合物包含约0.01-9重量％(例如，约0.01-8重量％、约0.01-7重量％、约0.01-6重量％、约0.01-5重量％、约0.01-4重量％、约0.01-3重量％、约0.01-2重量％、约0.01-2重量％、约0.01-1重量％)的肽或其药学上可接受的盐。
在其他实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
并且如与利那洛肽的重量相比，所述肽或其药学上可接受的盐包含小于10重量％、20重量％、30重量％、40重量％、50重量％、60重量％、70重量％、80重量％、或90重量％。
在进一步的实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
并且如与利那洛肽的重量相比，肽或其药学上可接受的盐包含小于9重量％、8重量％、7重量％、6重量％、5重量％、4重量％、3重量％、2重量％、1重量％、或者0.5重量％。
在进一步的实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
并且如与利那洛肽的重量相比，其中药物组合物包含约0.01-9重量％(例如，约0.01-8重量％、约0.01-7重量％、约0.01-6重量％、约0.01-5重量％、约0.01-4重量％、约0.01-3重量％、约0.01-2重量％、约0.01-2重量％、约0.01-1重量％)的肽或其药学上可接受的盐。
在其他实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
并且与利那洛肽的重量相比，肽或其药学上可接受的盐包含小于10重量％、20重量％、30重量％、40重量％、50重量％、60重量％、70重量％、80重量％。
在进一步的实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中肽由以下氨基酸结构组成：
并且与利那洛肽的重量相比，肽或其药学上可接受的盐包含小于9重量％、8重量％、7重量％、6重量％、5重量％、4重量％、3重量％、2重量％、1重量％、或者0.5重量％。
在进一步的实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中肽由以下氨基酸结构组成：
并且如与利那洛肽的重量相比，其中药物组合物包含约0.01-9重量％(例如，约0.01-8重量％、约0.01-7重量％、约0.01-6重量％、约0.01-5重量％、约0.01-4重量％、约0.01-3重量％、约0.01-2重量％、约0.01-2重量％、约0.01-1重量％)的肽或其药学上可接受的盐。
在其他实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中肽由以下氨基酸结构组成：
并且与利那洛肽的重量相比，所述肽或其药学上可接受的盐包含小于10重量％、20重量％、30重量％、40重量％、50重量％、60重量％、70重量％、80重量％、或90重量％。
在进一步的实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中肽由以下氨基酸结构组成：
并且与利那洛肽的重量相比，肽或其药学上可接受的盐包含小于9重量％、8重量％、7重量％、6重量％、5重量％、4重量％、3重量％、2重量％、1重量％或者0.5％。
在进一步的实施方案中，药物组合物包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐，其中肽由以下氨基酸结构组成：
并且其中如与利那洛肽的重量相比，药物组合物包含约0.01-9重量％(例如，约0.01-8重量％、约0.01-7重量％、约0.01-6重量％、约0.01-5重量％、约0.01-4重量％、约0.01-3重量％、约0.01-2重量％、约0.01-2重量％、约0.01-1重量％)的肽或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，Cys1-α-酮肽包含小于约15重量％的组合物、小于约10重量％的组合物、小于约7重量％的组合物、小于约5重量％的组合物、小于约4重量％的组合物、小于约3重量％的组合物、小于约2重量％的组合物、或小于约1重量％的组合物。在其他示例性实施方案中，Cys1-α-酮肽包含约0.01％至约15重量％的组合物、约0.05％至约10重量％的组合物、约0.05％至约7重量％的组合物或约0.05％至约5重量％的组合物。在进一步示例性实施方案中，Cys1-α-酮肽包含约0.5％至约2重量％的组合物。
在进一步的实施方案中，提供在需要其的患者中治疗胃肠疾患的方法，其包括施用包含利那洛肽和Cys1-α-酮肽的药物组合物。
在一些实施方案中，提供包含利那洛肽和利那洛肽三硫化物产物的药物组合物。在一个实施方案中，当将单个硫原子加入在利那洛肽中三个二硫化物半胱氨酰键中之一时，形成利那洛肽三硫化物产物。以下示出产物的三种可能结构，但是本领域技术人员意识到，硫原子可连接六个半胱氨酰硫中任意一个：
在另一实施方案中，可加入多于一个硫原子至利那洛肽，每加入一个硫原子可增加32AU的分子量。
在一些其他实施方案中，利那洛肽三硫化物产物包含小于约15重量％的组合物、小于约10重量％的组合物、小于约7重量％的组合物、小于约5重量％的组合物、小于约4重量％的组合物、小于约3重量％的组合物、小于约2重量％的组合物、或小于约1重量％的组合物。
在其他示例性实施方案中，利那洛肽三硫化物产物包含约0.01％至约15重量％的组合物、约0.05％至约10重量％的组合物、约0.05％至约7重量％的组合物或约0.05％至约5重量％的组合物。在进一步示例性实施方案中，利那洛肽三硫化物产物包含约0.5％至约2重量％的组合物。
在进一步的实施方案中，提供在需要其的患者中治疗胃肠疾患的方法，其包括施用包含利那洛肽和利那洛肽三硫化物产物的药物组合物。
在其他实施方案中，药物组合物基本上由肽或其药学上可接受的盐组成，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
在其他实施方案中，药物组合物基本上由肽或其药学上可接受的盐组成，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
当用于表示组合物时，术语“基本上由……组成”及其变化形式用于本文中表示：组合物包括单一活性肽和其他所需药物非活性添加剂、赋形剂、和/或组分(例如，聚合物、空间位阻的伯胺、阳离子、填充剂、粘合剂、载体、赋形剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、溶剂、分散剂、涂料、吸收促进剂、缓蚀剂、抗结块剂、抗菌剂、防腐剂、甜味剂、着色剂、调味剂、干燥剂、增塑剂、染料等)，而没有其他活性药物成分。
在一些实施方案中，提供包含利那洛肽、Cys1-α-酮肽、和一种或多种选自以下的肽的药物组合物：
i.肽(“Cys1-IMD”)或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
ii水解肽(“Asp7”)或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
iii.乙酰化肽(“Cys1-N-乙酰基”)或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
iv.利那洛肽三硫化物肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含Cys Cys GluTyr Cys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr的氨基酸序列，其中另外的硫原子可连接六个半胱氨酰硫中任意一个；以及
v.肽(“Des-Tyr14”)或其药学上可接受的盐，其中所述肽包含以下氨基酸结构：
在一些实施方案中，Cys1-α-酮肽包含小于约15重量％的组合物、小于约10重量％的组合物、小于约7重量％的组合物、小于约5重量％的组合物、小于约4重量％的组合物、小于约3重量％的组合物、小于约2重量％的组合物、小于约1.5重量％的组合物、或小于约1重量％的组合物。在其他示例性实施方案中，Cys1-α-酮肽包含约0.01％至约15重量％的组合物、约0.05％至约10重量％的组合物、约0.05％至约7重量％的组合物或约0.05％至约5重量％的组合物。
在一些实施方案中，Cys1-IMD肽包含小于约15重量％的组合物、小于约10重量％的组合物、小于约7重量％的组合物、小于约5重量％的组合物、小于约4重量％的组合物、小于约3.5重量％的组合物、小于约3重量％的组合物、小于约2重量％的组合物、或小于约1重量％的组合物。在其他示例性实施方案中，Cys1-IMD肽包含约0.01％至约15重量％的组合物、约0.05％至约10重量％的组合物、约0.05％至约7重量％的组合物或约0.05％至约5重量％的组合物。
在一些实施方案中，水解肽(“Asp7”)包含小于约15重量％的组合物、小于约10重量％的组合物、小于约7重量％的组合物、小于约5重量％的组合物、小于约4重量％的组合物、小于约3.5重量％的组合物、小于约3重量％的组合物、小于约2重量％的组合物、或小于约1重量％的组合物。在其他示例性实施方案中，水解肽(“Asp7”)包含约0.01％至约15重量％的组合物、约0.05％至约10重量％的组合物、约0.05％至约7重量％的组合物或约0.05％至约5重量％的组合物。
在一些实施方案中，乙酰化肽(“Cys1-N-乙酰基”)包含小于约15重量％的组合物、小于约10重量％的组合物、小于约7重量％的组合物、小于约5重量％的组合物、小于约4重量％的组合物、小于约3.5重量％的组合物、小于约3重量％的组合物、小于约2重量％的组合物、或小于约1重量％的组合物。在其他示例性实施方案中，乙酰化肽(“Cys1-N-乙酰基”)包含约0.01％至约15重量％的组合物、约0.05％至约10重量％的组合物、约0.05％至约7重量％的组合物或约0.05％至约5重量％的组合物。
在一些实施方案中，利那洛肽三硫化物肽包含小于约15重量％的组合物、小于约10重量％的组合物、小于约7重量％的组合物、小于约5重量％的组合物、小于约4重量％的组合物、小于约3.5重量％的组合物、小于约3重量％的组合物、小于约2重量％的组合物、或小于约1重量％的组合物。在其他示例性实施方案中，利那洛肽三硫化物肽包含约0.01％至约15重量％的组合物、约0.05％至约10重量％的组合物、约0.05％至约7重量％的组合物或约0.05％至约5重量％的组合物。
在一些实施方案中，Des-Tyr14肽包含小于约15重量％的组合物、小于约10重量％的组合物、小于约7重量％的组合物、小于约5重量％的组合物、小于约4重量％的组合物、小于约3.5重量％的组合物、小于约3重量％的组合物、小于约2重量％的组合物、或小于约1重量％的组合物。在其他示例性实施方案中，Des-Tyr14肽包含约0.01％至约15重量％的组合物、约0.05％至约10重量％的组合物、约0.05％至约7重量％的组合物或约0.05％至约5重量％的组合物。
在一些实施方案中，药物组合物包含利那洛肽、Cys1-α-酮肽、和任意所需浓度的二硫键合的多聚体。
在一些实施方案中，组合物包含小于10重量％的多聚体。
在一些实施方案中，组合物包含小于7重量％的多聚体。
在一些实施方案中，组合物包含小于6重量％的多聚体。
在一些实施方案中，组合物包含小于5重量％的多聚体。
在一些实施方案中，组合物包含小于4重量％的多聚体。
在一些实施方案中，组合物包含小于3重量％的多聚体。
在一些实施方案中，组合物包含小于2重量％的多聚体。
在一些实施方案中，组合物包含小于1重量％的多聚体。
本文所述的肽可以以下任何药学上可耐受的载体或介质联合使用，例如溶剂、分散剂、涂料、吸收促进剂、缓蚀剂、和一种或多种惰性赋形剂(其包括淀粉、多醇、成粒剂、微晶纤维素(例如celphere、Celphere)稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等)等。如果需要，通过标准水性或非水性技术可包覆所公开的组合物的片剂剂量。
用作药学上可接受的载体和药学上可接受的惰性载体和上述另外的成分的赋形剂的例子包括但不限于粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、抗菌剂、和涂料。
如本文所使用，术语“粘合剂”是指在本发明的操作中可使用的任何药学上可接受的粘合剂。药学上可接受的粘合剂的例子包括但不限于淀粉(例如，玉米淀粉、土豆淀粉、预糊化淀粉(例如，STARCH和STARCH1500通过Colorcon，Ltd.市售)和其他淀粉)、麦芽糖糊精、明胶、诸如阿拉伯胶的天然和合成树胶、西黄蓍胶粉、瓜尔豆胶、纤维素或纤维素醚绘和它的衍生物(例如，甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素)、乙基纤维素、醋酸纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素、微晶纤维素(例如AVICELTM，例如，AVICEL-PH-101TM、-103TM和-105TM，通过FMC Corporation，Marcus Hook，PA，USA市售))、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮(例如，聚乙烯吡咯烷酮K30、聚维酮)、纤维素醚及其混合物。
如本文所使用，术语“填料”是指在本发明的操作中可使用的任何药学上可接受的填充剂。药学上可接受的填充剂的例子包括但不限于滑石粉、碳酸钙(例如，颗粒或粉末)、二价磷酸钙、三价磷酸钙、硫酸钙(例如，颗粒或粉末)、微晶纤维素(例如，Avicel PH101或Celphere CP-305)、粉末状纤维素、葡聚糖结合剂、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉(例如，淀粉1500)、预糊化淀粉、乳糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、海藻糖、蔗糖、麦芽糖、异麦芽酮糖醇、棉子糖、麦芽糖醇、松三糖、水苏糖、拉克替醇、方辉玄质岩、木糖醇、肌醇、及其混合物。
可特别用于包覆肽的药学上可接受的填充剂的例子包括但不限于滑石粉、微晶纤维素(例如，Avicel PH101或Celphere CP-305)、微细纤维素、粉末状纤维素、葡聚糖结合剂、高岭土、甘露醇、硅酸、山梨醇、淀粉、预糊化淀粉、乳糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、海藻糖、蔗糖、麦芽糖、异麦芽酮糖醇、磷酸氢钙、棉子糖、麦芽糖醇、松三糖、水苏糖、拉克替醇、方辉玄质岩、木糖醇、甘露醇、肌醇、及其混合物。
如本文所使用，术语“添加剂”是指任何药学上可接受的添加剂。药学上可接受的添加剂包括但不限于崩解剂、分散添加剂、润滑剂、助流剂、抗氧化剂、填料、稀释剂、表面活性剂、调味剂、湿润剂、吸收促进剂、缓释剂、抗结块剂、抗菌剂(例如，防腐剂)、着色剂、干燥剂、增塑剂和染料。如本文所使用，“赋形剂”是任何药学上可接受的添加剂、填充剂、粘合剂或试剂。
本发明的组合物也可任选包括其他治疗成分、抗结块剂、防腐剂、甜味剂、着色剂、调料、干燥剂、增塑剂、染料、助流剂、防粘剂、抗静电剂、表面活性剂(湿润剂)、抗氧化剂、膜涂料等。任何这些任选的成分必须与本文所述的化合物相容，从而确保配制物的稳定性。如果需要，组合物可包含其他添加剂，其包括例如乳糖、葡萄糖、果糖、半乳糖、海藻糖、蔗糖、麦芽糖、棉子糖、麦芽糖醇、松三糖、水苏糖、拉克替醇、方辉玄质岩、淀粉、木糖醇、甘露醇、肌醇等、及其水合物、和诸如丙氨酸、甘氨酸和甜菜碱的氨基酸、以及肽和诸如白蛋白的蛋白。
组合物可包括例如各种另外的溶剂、分散剂、涂料、吸收促进剂、缓释剂、以及一种或多种惰性添加剂(其包括例如淀粉、多醇、成粒剂、微晶纤维素、稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等)等。如果需要，通过标准水性或非水性技术可包覆所公开的组合物的片剂剂量。组合物也可包括例如抗结块剂、防腐剂、甜味剂、着色剂、调味剂、干燥剂、增塑剂、染料等。
合适的崩解剂包括例如琼脂、碳酸钙、微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交聚维酮、聚维酮、聚克立林钾、淀粉羟基乙酸钠、土豆或木薯淀粉、其他淀粉、预糊化淀粉、粘土、其他藻胶、其他纤维素、树胶、及其混合物。
合适的润滑剂包括例如硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、轻矿物油、丙三醇、山梨醇、甘露醇、聚乙二醇、其他甘醇、硬脂酸、月桂基磺酸钠、滑石粉、氢化植物油(例如，花生油、棉籽油、向日葵油、麻油、橄榄油、玉米油和豆油)、硬脂酸锌、油酸乙酯、月桂酸乙酯、琼脂、syloid硅胶(AEROSIL200、W.R.Grace Co.，Baltimore，MD USA)、合成二氧化硅的凝结的气溶胶(Evonik Degussa Co.，Plano，TX USA)、焦化二氧化硅(CAB-O-SIL，Cabot Co.，Boston，MA USA)、及其混合物。
合适的助流剂包括例如亮氨酸、胶体二氧化硅、三硅酸镁、粉末状纤维素、淀粉、滑石粉、和三价磷酸钙。
合适的抗结块剂包括例如硅酸钙、硅酸镁、二氧化硅、胶体二氧化硅、滑石粉、及其混合物。
可用作例如肽组合物的防腐剂的合适抗菌剂包括例如苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲酸、苄醇、羟苯丁酯、氯化十六烷基吡啶、甲酚、氯代丁醇、脱氢乙酸、羟苯乙酯、羟苯甲酯、苯酚、苯基乙醇、苯氧乙醇、醋酸苯基汞、醋酸苯基汞、山梨酸钾、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠、脱氢醋酸钠、丙酸钠、山梨酸、硫柳汞、thymo、及其混合物。
合适的抗氧化剂包括例如BHA(丁羟基茴香醚)、BHT(丁基化羟基甲苯)、维生素E、没食子酸丙酯、抗坏血酸及其盐和酯、生育酚及其酯、α-硫辛酸和β-胡萝卜素。
合适的填料包括例如羧甲基纤维素钠、邻苯二甲酸醋酸纤维素、乙基纤维素、明胶、药用釉料、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、聚乙二醇、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、虫胶、蔗糖、二氧化钛、巴西棕榈蜡、微晶蜡、及其混合物。合适的保护性涂料包括Aquacoat(例如Aquacoat乙基纤维素水性分散体(AquacoatEthylcellulose Aquaeous Dispersion)，15％w/w，FMC Biopolymer，ECD-30)、Eudragit(例如Eudragit E PO PE-EL，Roehm Pharma Polymers)和Opadry(例如Opadry AMB分散体，20％w/w，Colorcon)。
在某些实施方案中，肽组合物的合适添加剂包括蔗糖、滑石粉、硬脂酸镁、交聚维酮或BHA的一种或多种。
本发明的组合物也可包括其他赋形剂、试剂、及其包括但不限于以下的种类：L-组氨酸、泊洛沙姆(例如和泊洛沙姆188)、抗坏血酸、谷胱甘肽、渗透性增强剂(例如液体、牛胆酸钠、酰基肉毒碱、水杨酸盐、混合的胆盐、脂肪酸胶团、螯合剂、脂肪酸、表面活性剂、中链甘油酯)、蛋白酶抑制剂(例如大豆胰蛋白抑制剂、有机酸)、pH降低剂和有效地促进生物利用率(包括但不限于在US6086918和US5912014中描述的那些)的吸收增强剂、咀嚼片的材料(类似于葡聚糖、果糖、乳糖一水合物、乳糖和阿司帕坦、乳糖和纤维素、麦芽糖糊精、麦芽糖、甘露醇、微晶纤维素和瓜尔豆胶、山梨醇结晶)；肠衣(类似于甘露醇和聚维酮)；增塑剂(类似于癸二酸二丁酯、涂料的增塑剂、聚乙烯醋酸邻苯二甲酸酯)；粉末润滑剂(类似于甘油二十二烷酸酯)；软明胶胶囊(类似于山梨醇特殊溶液)；涂料用球体(类似于糖球)；滚圆剂(类似于甘油二十二烷酸酯和微晶纤维素)；悬浮剂/胶凝剂(类似于角叉藻聚糖、结冷胶、甘露醇、微晶纤维素、聚维酮、淀粉羟基乙酸钠、黄单胞菌胶)；增甜剂(类似于阿司帕坦、阿司帕坦和乳糖、葡聚糖、果糖、蜂蜜、麦芽糖糊精、麦芽糖、甘露醇、糖蜜、山梨醇结晶、山梨醇特殊溶液、蔗糖)；湿式制粒剂(类似于碳酸钙、无水乳糖、乳糖一水合物、麦芽糖糊精、甘露醇、微晶纤维素、聚维酮、淀粉)、焦糖、羧甲基纤维素钠、樱桃乳香料和樱桃香料、无水柠檬酸、柠檬酸、糖果剂的糖、D&C红No.33、D&C黄#10铝色淀、依地酸钠、乙醇15％、FD&C黄No.6铝色淀、FD&C Blue#1铝色淀、FD&C蓝No.1、FD&C蓝no.2铝色淀、FD&C绿No.3、FD&C红No.40、FD&C黄No.6铝色淀、FD&C黄No.6、FD&C黄No.10、棕榈硬脂酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、靛蓝胭脂红、卵磷脂、甘露醇、对羟基苯甲和丙酯、甘草酸单铵盐、天然和人工橙子香料、药用釉料、泊洛沙姆188、葡聚糖、聚山梨酯20、聚山梨酯80、聚维酮、预糊化玉米淀粉、预糊化淀粉、红氧化铁、糖精钠、羧甲基醚钠、氯化钠、柠檬酸钠、磷酸钠、草莓香料、合成黑色氧化铁、合成红氧化铁、二氧化钛、和白蜡。
在一些实施方案中，提供包含本文所述的肽和一种或多种选自Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2 +、K+、Na+或Al3+、其组合、和/或空间位阻的伯胺的试剂的药物组合物。
在进一步的实施方案中，试剂是Mg2+、Ca2+或Zn2+或其组合。在一些实施方案中，提供但不限于作为醋酸镁、氯化镁、磷酸镁、硫酸镁、醋酸钙、氯化钙、磷酸钙、硫酸钙、醋酸锌、氯化锌、磷酸锌、硫酸锌、醋酸锰、氯化锰、磷酸锰、硫酸锰、醋酸钾、氯化钾、磷酸钾、硫酸钾、醋酸钠、氯化钠、磷酸钠、硫酸钠、醋酸铝、氯化铝、磷酸铝或硫酸铝的阳离子。在进一步的实施方案中，提供作为氯化镁、氯化钙、磷酸钙、硫酸钙、醋酸锌、氯化锰、氯化钾、氯化钠或氯化铝的阳离子。在其他实施方案中，提供作为氯化钙、氯化镁或醋酸锌的阳离子。
在另一实施方案中，试剂是空间位阻的伯胺。
在进一步的实施方案中，空间位阻的伯胺是氨基酸。
在又一进一步的实施方案中，氨基酸是天然存在的氨基酸。
在又进一步的实施方案中，天然存在的氨基酸选自：组氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、酪氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、色氨酸、甘氨酸和缬氨酸；又进一步，天然存在的氨基酸是亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸或甲硫氨酸。
在又进一步的实施方案中，天然存在的氨基酸是亮氨酸。在另一实施方案中，空间位阻的伯胺是非天然存在的氨基酸(例如，1-氨基环己烷羧酸、lanthanine或者茶氨酸)。
在进一步的实施方案中，空间位阻的伯胺是环己胺、2-甲基丁基胺或聚合胺(例如，脱乙酰壳多糖)。
在另一实施方案中，一种或多种空间位阻的伯胺可用于组合物中。
在一些情况下，空间位阻的伯胺具有式：
其中R1、R2和R3独立地选自：H、C(O)OH、C1-C6烷基、C1-C6烷基醚、C1-C6烷基硫醚、C1-C6烷基羧酸、C1-C6烷基羧基酰胺和烷基芳基，其中任何基团可被卤素或氨基取代一次或多次，并且条件是R1、R2和R3不超过两个为H。
在另一实施方案中，R1、R2和R3不超过一个为H。
在其他实施方案中，提供包含药学上可接受的载体、肽、阳离子、和空间位阻的伯胺的药物组合物，该阳离子选自Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+、K+、Na+或Al3+、或其混合物。
在一个实施方案中，阳离子是Mg2+、Ca2+或Zn2+或其混合物。
在进一步的实施方案中，药物组合物进一步包含药学上可接受的粘合剂和/或药学上可接受的助流剂、润滑剂或者用作助流剂和润滑剂和/或抗氧化剂的添加剂。
在一些实施方案中，将药物组合物应用至载体。
在一些实施方案中，载体是填充剂。
在一些情况下，在应用至载体的水溶液中阳离子∶空间位阻的伯胺∶肽的摩尔比率为5-100∶5-50∶1。在一些情况下，阳离子∶空间位阻的伯胺的摩尔比率可以等于或大于2∶1(例如，介于5∶1和2∶1之间)。因此，在一些情况下，应用至载体的阳离子∶空间位阻的伯胺∶肽的摩尔比率为100∶50∶1、100∶30∶1、80∶40∶1、80∶30∶1、80∶20∶1、60∶30∶1、60∶20∶1、50∶30∶1、50∶20∶1、40∶20∶1、20∶20∶1、10∶10∶1、10∶5∶1或5∶10∶1。当诸如甲基纤维素的粘合剂存在于应用至载体的GC-C激动剂肽溶液时，它可以0.5％-2.5重量％(例如，0.7％-1.7％或0.7％-1％或1.5％或0.7％)存在。
在进一步的实施方案中，药物组合物进一步包含药学上可接受的粘合剂或添加剂、和/或药学上可接受的助流剂、润滑剂或者用作助流剂和润滑剂和/或抗氧化剂的添加剂。
取决于预期目的，根据本发明的合适药物组合物通常包括一定量具有诸如无菌水溶液的可接受药物稀释剂或赋形剂的活性化合物，从而得到最终浓度范围。如通过Remington′s Pharmaceutical Sciences(第18版，Mack Publishing Company，1995)所例证，制备技术通常是本领域众所周知的。
取决于待治疗的疾病的严重程度和类型，可全身或局部施用本文所述的组合物，例如：口服(例如使用胶囊、粉末、溶液、悬浮剂、片剂、舌下片剂等)、通过吸入(例如使用气雾剂、气体、吸入器、喷雾器等)、耳用(例如使用滴耳液)、局部(例如使用乳剂、凝胶、擦剂、洗剂、软膏、糊剂、透皮贴剂等)、眼用(例如使用滴眼液、眼用凝胶、眼用软膏)、直肠用(例如使用灌肠剂或栓剂)、鼻用、面颊用、阴道(例如使用冲洗液、子宫内装置、阴道栓剂、阴道环或片剂等)、通过植入容器等、或者胃肠外。如本文所使用的术语“胃肠外”包括但不限于皮下、静脉内、肌肉内、动脉内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输液技术。优选地，可口服、腹膜内或静脉内施用组合物。
对于治疗胃肠疾患，本文所述的肽优选口服施用，例如，作为片剂、胶囊、包含预定量的活性成分小丸的囊剂、凝胶、糊剂、糖浆、大丸剂、药糖剂、膏剂、粉末、冻干粉、颗粒、作为溶液或者在水溶液或非水溶液中悬浮剂；作为水包油液体乳剂或油包水液体乳剂、通过脂质体配制物(参见例如，EP736299)或者在一些其他形式中。口服组合物可包括粘合剂、润滑添加剂、惰性稀释剂、润滑剂、表面活性剂和分散剂、调味品和湿润剂。可任选包覆或刻痕或者可配制诸如片剂的口服配制物以得到持续、延迟或缓释的本文的活性成分。
可将肽与包括但不限于本文所述试剂的用于治疗胃肠疾患的其他试剂共同配制。
在另一方面中，合适的药物组合物可包含一种或多种其他治疗剂。这些治疗剂包括但不限于镇痛剂；包括质子泵抑制剂、酸泵拮抗剂、H2受体拮抗剂的抗分泌剂；PDE5抑制剂；GABA-B拮抗剂；胆汁酸螯合剂；促胃肠运动和蠕动剂；抗抑郁剂；抗生素；止吐药；以及粘膜保护剂。
治疗的方法
在各实施方案中，本文所述的肽和组合物用于治疗患者胃肠疾患。
在一些实施方案中，胃肠疾患选自：肠应激综合征(IBS)、便秘、a功能性胃肠障碍，胃食管返流疾病、功能性烧心、消化不良、内脏痛、胃轻瘫、慢性肠假性梗阻、结肠假性梗阻、克罗恩病、溃疡性结肠炎、和炎性肠病。
在进一步的实施方案中，胃肠疾患是便秘。便秘可以为慢性便秘、由于术后肠梗阻的原因或者阿片类使用导致的特发性便秘。定义便秘的临床可接受的标准包括肠道运动的频率、粪便的稠度和肠道运动的舒畅性。便秘的一个常见定义为每周小于三次肠道运动。其他定义包括常见的大便秘结或者需要过度用力的排便(Schiller2001，Aliment PharmacolTher15：749-763)。便秘可以为特发性(功能性便秘或者缓慢传输型便秘)或者由包括神经、代谢或内分泌疾患的其他原因导致的继发性便秘。这些疾患包括糖尿病、甲状腺机能减退、甲状腺机能亢进、低钙血症、多发性硬化症、帕金森氏病、脊髓损害、神经纤维瘤病、自主神经病、查加斯病、赫希施普龙氏病、和囊性纤维化。便秘也可以是手术(术后肠梗阻)或者由于使用药物的结果，例如镇痛剂(类似于类罂粟碱)、抗高血压剂、抗惊厥剂、抗抑郁剂、镇痉剂和抗紧张剂。
在其他实施方案中，胃肠疾患是肠应激综合征(IBS)。肠应激综合征可以为便秘型肠易激综合征(c-IBS)、腹泻型肠易激综合征(d-IBS)或交替型肠易激综合征(a-IBS)。
在其他实施方案中，胃肠疾患是消化不良。
在其他实施方案中，胃肠疾患是胃轻瘫。胃轻瘫可以选自特发性、糖尿病或术后胃轻瘫。
在又一其他实施方案中，胃肠疾患是慢性肠假性梗阻。
在其他实施方案中，胃肠疾患是克罗恩病。
在一些实施方案中，胃肠疾患是溃疡性结肠炎。
在一些实施方案中，胃肠疾患是炎性肠病。
在另一实施方案中，胃肠疾患是内脏痛。
在进一步的实施方案中，本发明示出在患者中降低胃肠疼痛或内脏痛的方法，该方法包括向患者施用包含本文所述肽的药物组合物。本文所述的激动剂可单独或联合治疗，用于治疗、预防或降低与胃肠疾患相关的内脏痛或者与另一疾患相关的疼痛。
在另一实施方案中，本发明示出治疗炎症的方法，该炎症包括胃肠道的炎症，例如，与胃肠疾患或感染或者一些其他疾患相关的炎症，本方法包括向患者施用包含本文所述的纯化肽的药物组合物。
在另一实施方案中，本发明示出治疗胃肠疾患的方法，其包括通过口服、通过直肠栓剂、或胃肠外施用肠鸟苷酸环化酶(GC-C)受体的激动剂。
在又一其他实施方案中，本发明示出治疗胃肠疾患的方法，其包括施用肠鸟苷酸环化酶(GC-C)受体的激动剂。
在另一实施方案中，本发明示出在生物样品、组织(例如，肠道粘膜)、或细胞(例如，具有GC-A受体的细胞)、或整个有机体中增加鸟苷酸环化酶C(GC-C)受体活性的方法。
在另一方面中，本发明示出在生物样品、组织(例如，肠道粘膜)、或细胞(例如，具有GC-A受体的细胞)、或整个有机体中通过使样品、组织、或机体接触本文所述的肽来增加环鸟苷3’-单磷酸(cGMP)水平的方法。
可联合其他试剂来施用本文所述的肽GC-C受体激动剂。例如，可与镇痛肽或化合物一起施用肽。镇痛肽或化合物可共价连接本文所述的肽或者它可以为在联合治疗中与本文所述的肽共同施用或者连续施用的单独的试剂。本文所述的肽也可以联合包括抗抑郁剂、促胃肠蠕动或运动剂、止吐药、抗生素、质子泵抑制剂、酸阻断剂(例如，组胺H2受体拮抗剂)、酸泵拮抗剂、PDE5抑制剂、GABA-B激动剂、胆汁酸螯合剂、和粘膜保护剂的用于治疗GI疾患的其他试剂施用。
在一些实施方案中，可以与本文所述的肽使用的有用的镇痛剂包括Ca通道阻断剂(例如，齐考诺肽)、5HT受体拮抗剂(例如，5HT3、5HT4和5HT1受体拮抗剂)、5HT4激动剂(例如，替加色罗莫沙必利、扎考必利、西沙必利、伦扎必利、普卢卡必利诸如BIMU1和BIMU8的苯并咪唑酮衍生物、以及利沙必利)、5HT1激动剂(例如，舒马普坦和丁螺环酮)、阿片受体激动剂(例如，洛哌丁胺、非多托秦、脑啡肽五肽、吗啡、地芬诺酯、氟雷法胺、曲美布汀和芬太尼)、CCK受体激动剂(例如，氯谷胺和右氯谷胺)、NK1受体拮抗剂(例如，阿瑞匹坦、沃氟匹坦、依洛匹坦、R-673(Hoffmann-La Roche Ltd)、SR-48968和SR-14033(Sanofi Synthelabo)、CP-122，721(Pfizer、Inc.)、GW679769(GlaxoSmith Kline)和TAK-637(Takeda/Abbot))、NK2受体拮抗剂(例如，奈帕坦特、沙瑞度坦、GW597599(Glaxo Smith Kline)、SR-144190(Sanofi-Synthelabo)和UK-290795(PfizerInc))、NK3受体拮抗剂(例如，奥沙奈坦(SR-142801；Sanofi-Synthelabo)、SR-241586和他奈坦)、去甲肾上腺素-5-羟色胺重摄取抑制剂(NSRI)(例如，米那普仑)、混合和选择性多巴胺受体拮抗剂(例如-甲氧氯普胺、伊托必利、多潘立酮)、辣椒素(vanilloid)和大麻素(cannabanoid)受体激动剂、sialorphin和sialorphin相关的肽。在文献中描述各类的镇痛剂。
在一些实施方案中，可联合本文所述的肽来使用一种或多种其他治疗剂。这些试剂包括抗抑郁剂、促胃肠蠕动或运动剂、止吐药、抗生素、质子泵抑制剂、酸阻断剂(例如，组胺H2受体拮抗剂)、酸泵拮抗剂、PDE5抑制剂、GABA-B激动剂、胆汁酸螯合剂、和粘膜保护剂。
抗抑郁剂的例子包括但不限于三环抗抑郁剂，例如阿米替林地昔帕明丙咪嗪阿莫沙平去甲替林；选择性5-羟色胺重摄取抑制剂(SSRI’s)，例如帕罗西汀氟西汀舍曲林和西酞普兰以及其他，例如多塞平和曲唑酮
促胃肠蠕动和运动剂的例子包括但不限于伊托必利、奥曲肽、甲氨酰甲基胆碱、甲氧氯普胺多潘立酮红霉素(及其衍生物)和西沙必利止吐药的例子包括但不限于丙氯拉嗪。
可使用的抗生素的例子包括可用于治疗幽门螺杆菌感染的那些，例如阿莫西林、四环素、甲硝唑、或克拉霉素。可联合本文所述的肽来使用诸如红霉素的其他抗生素及其衍生物。
质子泵抑制剂的例子包括但不限于奥美拉唑艾美拉唑兰索拉唑泮托拉唑和雷贝拉唑H2受体阻断剂的例子包括但不限于西咪替丁、雷尼替丁、法莫替丁和尼扎替丁。酸泵拮抗剂的例子包括但不限于revaprazan、CS-526(J.Pharmacol.Exp.Ther.(2007)323：308-317)、PF-03716556(J.Pharmacol.Exp.Ther.(2009)328(2)：671-9)、和YH1885(Drug Metab.Dispos.(2001)29(1)：54-9)。
PDE5抑制剂的例子包括但不限于阿伐那菲(avanafil)、罗地那非(lodenafil)、米罗那非、枸橼酸西地那非、他达拉非(tadalafil)、伐地那非和乌地那非。GABA-B激动剂包括但不限于氯苯氨丁酸和XP19986(CAS登录号847353-30-4)。胆汁酸螯合剂的例子包括但不限于GT102-279、考来烯胺、考来维仑、考来维仑盐酸盐、胆烷酸、考来替泊、考来替兰、司维拉姆、与表氯醇交联的聚二苯烯胺、交联的葡聚糖的二烷基氨基烷基衍生物、和N-(环烷基)烷基胺。粘膜保护剂的例子包括但不限于硫糖铝(Carafate)、替普瑞酮、聚普瑞锌、西曲酸酯和碱式水杨酸铋(bismuth subsalicyclate)。
通过施用两种或更多种试剂，例如，分别单独配制和使用的本文所述的肽和另一治疗肽或化合物，或者通过在单一配制物中施用两种或更多种试剂可达到联合治疗。通过联合治疗也涵盖其他组合，例如，可连同包含第三种试剂的单独配制物一起配制和施用两种试剂。尽管在联合治疗中两种或更多种试剂可同时施用，但是不需要一定如此。例如，第一种试剂(或者试剂的组合)的施用可以在第二种试剂(或者试剂的组合)的施用之前数分钟、数小时、数天或数周。因此，两种或更多种试剂可在相隔数分钟内、或者在相隔1、2、3、6、9、12、15、18、或24小时、或者相隔1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14天、或者相隔2、3、4、5、6、7、8、9、或10周施用。在一些情况下，更久的间隔是可能的。尽管在一些情况下，在患者的体内可同时存在联合治疗使用的两种或更多种试剂，但是不需要一定如此。
剂量
本文所述肽的成人口服剂量范围通常为5μg至100mg/天。片剂、胶囊、或者以离散单位提供的呈递形式包含在这些剂量或作为其倍数下有效的本文所述化合物的量，例如，包含25μg至2mg或者约100μg至1mg的单位。处方给患者的化合物精确量是巡诊医生的职责。然而，采用的剂量取决于多种因素，这就包括患者的年龄和性别、待治疗的具体疾患、和它的严重程度。
在其他实施方案中，口服剂量为50μg、67.5μg、100μg、133μg、145μg、150μg、200μg、266μg、290μg、300μg、400μg、500μg或600μg/天。
在各实施方案中，在一天中任意时间与食物一起施用、在一天中任意时间不与食物一起施用、在空腹一晚之后与食物(例如早餐)一起施用、在低脂肪餐点之后就寝时施用剂量单位。
在一个具体的实施方案中，在食物消耗(例如，饮食)之前或之后施用剂量单位。
在进一步的实施方案中，在食物消耗之前约15分钟至1小时施用剂量单位。
在各实施方案中，每天一次、一天两次、一天三次、一天四次、一天五次或一天六次施用剂量单位。在某些实施方案中，剂量单位和日剂量相同。
在剂量单位中两种或更多种活性成分的各精确量取决于各化合物所需剂量。因此，它可用于得到当根据特定剂量规则(例如，指明单位某些数目和施用特定时间的剂量规则)施用时递送如果仅使用一种组分治疗患者需施用的各组分相同剂量的剂量单位。
在其他情况下，得到递送小于如果仅使用一种组分治疗患者需要施用的一种或多种组分的剂量的剂量单位为所需要的。
最后，得到递送大于如果仅使用一种组分治疗患者需要施用的一种或多种组分的剂量的剂量单位为所需要的。
药物组合物可包括另外的成分，其包括但不限于本文所述的赋形剂。在某些实施方案中，剂量单位的一种或多种治疗剂可存在于延长或控制释放配制物中，并且另外的治疗剂可存在于延长释放的配制物中。例如，本文所述的肽或激动剂可以与可以或可以不在缓释或延长释放的配制物中的另一试剂的相同剂量单位存在于缓释配制物或延长释放的配制物中。因此，在某些实施方案中，提供本文所述一种或多种试剂的立即释放、和一种或多种其他试剂的缓释为所需要的。
参照本发明的某些实施方案描述本发明。然而，对本领域技术人员显而易见，除了上述的那些示例性实施方案之外，可以具体形式具体化本发明。在没有违背本发明的精神下可以完成这点。示例性实施方案仅为示意性，不应当以任何方式认为其具有限制性。通过所附权利要求和它们等同表述、而不是通过前述描述来限定本发明的范围。
通过American Peptide Company(Sumnyvale，CA)的固相化学合成和天然折叠(空气氧化)来制备如本文所述的GC-C激动剂肽或其药学上可接受的盐。在一些情况下，在如本文所述的合成之后修饰肽。例如，通过加入1.5L甲醇/二甲基甲酰胺(9∶1v/v)和28.8g3，5-二-叔丁基-1，2-苯醌(10当量)至20g(13.1mmol)的利那洛肽来合成Cys1-α-酮肽，并在室温下搅拌1小时。通过HPLC来监控希夫碱形成。一旦消耗所有利那洛肽，则加入17L的0.1MHCl，然后将反应混合物搅拌2天。将反应混合物过滤，使用二氯甲烷萃取两次，然后将所得水溶液应用至制备级反相HPLC C-18柱，从而纯化Cys1-α-酮。在制备型HPLC中使用的HPLC柱是2-英寸直径、使用流动相A(在水中0.05％醋酸)平衡的C18柱。在100mL/分钟的流速下使用流动相洗涤未结合的材料，然后使用10％至40％的流动相B(乙腈)的线性梯度在60分钟内洗脱肽相关的材料。将包含Cysl-酮的部分混合，然后通过冷冻干燥去除溶剂。
实施例1：在分析GC-C活性的T84细胞中cGMP积累
由ATCC(P/N CCL-248)获得T84细胞，人结肠癌细胞系，然后在T-150烧瓶中培养达60-70％融合率(confluency)。使用胰蛋白酶提取单层，并用于在2.0x105细胞/孔的细胞密度下接种至96-孔组织培养板(Costar，P/N3596)，使其在5％二氧化碳环境下在使用5％胎牛血清(FBS)和L-谷氨酰胺(Mediatech，分别的P/Ns10-092-CV，35-0150CV和25-005-Cl)补充的2mM达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(Dulbecco’s modified Eagle’s medium)(DMEM)/F-1250/50营养素混合物中生长过夜。
在孵育一夜之后，在没有加入补充物下使用0.2mL的DMEM(Mediatech，P/N10-013-CV)洗涤使用2.0x105细胞/孔接种的96-孔板两次。为了抑制任何磷酸二酯酶活性，在37℃下使用在DMEM中0.180mL的1mM3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX；Sigma P/N15879)孵育细胞10分钟。使用Hamilton Microlab Robot(Model STARlet)制备各测试制品的范围在0.1至10,000nM(最终浓度)的标准曲线。在37℃下在96-孔板中使用在DMEM中0.180mL的1mM IBMX孵育0.02mL的各标准品30分钟来进行GC-C活性测定。在孵育之后，将上清液去除，然后在冰上使用冷0.1M盐酸(HCl)裂解细胞30分钟。将175μL/孔体积的各裂解物转移至新的96-孔板上(Waters，P/N186002481)，然后在1,000x g下离心10分钟以去除任何细胞碎片。将所得上清液以90μL等份转移至新的96-孔板，然后使用90μL的1M醋酸铵中和至pH7。使用具有串联质谱法检测(LC/MS/MS)的液相色谱法来分析离心和中和的T84细胞裂解物。在表1中示出的方法用于定量在各细胞裂解物样品中鸟苷3’，5’-环单磷酸(cGMP)的浓度。由Sigma(P/NG6129)购买的环GMP用于制备在0.1M HCl中标准曲线。使用等量的醋酸铵来中和各标准品，得到范围在1至1,024nM(最终浓度)的cGMP标准曲线。
使用LC/MS条件(下表1)测定各样品的环GMP浓度，并计算标准曲线。分析物峰面积用于生成1/x2-加权的线性校准曲线，其用于推测在各样品中cGMP浓度。使用GraphPadPrism Version5.01(GraphPad Software，San Diego，CA)生成各测试制品的半最大有效浓度(EC50)值。为了测定统计上显著的EC50值的差异，使用在GraphPad软件中F-检验比较各药品降解物的平均活性曲线与利那洛肽对照。对于各比较值，测定p-值，其中值≤0.05表示在GC-C激动剂活性中显著差异。
表1：定量在T84细胞中cGMP的LC/MS参数
实施例2：示例性肽与T84细胞的GC-C受体的相对结合亲和力
使用竞争性结合分析法来测定利那洛肽和Cys1-α-酮与鸟苷酸环化酶-C受体(GC-C)的相对结合亲和力，其中肽与已知GC-C激动剂，来自猪的热稳定性肠毒素(pSTa)竞争在人结肠上皮细胞(T84)上细胞表面GC-C受体的结合位点。使用125I来放射性标记pSTa，即MM416251，从而使能够测定它与受体的结合。通过加入各浓度的各肽(0.1至3,000nM)至包含达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(DMEM)、0.5％牛血清清蛋白(BSA)、2.0x105T84细胞、和170pM[125I]-pSTa(200,000cpm)的0.20mL反应混合物来进行竞争性结合分析法。在37℃下孵育60分钟之后，将反应混合物应用至用于真空过滤的玻璃纤维过滤器，从而分离与受体结合的材料。然后通过闪烁计数法测定在过滤器上截留的结合放射性配体的浓度。对于各肽，具有最低量的竞争剂的反应用于测定放射性配体的最大特异性结合。在包含3,000nm的各测试肽的反应中测定[125I]-pSTa的非特异性结合。如通过它们的IC50和Ki值所测定，数据用于构建竞争性放射性配体结合曲线和测定利那洛肽和Cys1-α-酮的相对结合亲和力。
利那洛肽和Cys1-α-酮竞争性抑制[125I]-pSTa与细胞表面GC-C受体在T84细胞上的特异性结合。如通过它们的抑制常数(Ki)所测定，它们的相对结合亲和力如下：利那洛肽Ki＝3.9±1.6nM和Cys1-α-酮Ki＝5.2±0.9nM(图1)。
实施例3：通过示例性肽诱导的在T84细胞中cGMP应答
如下测试在T84细胞中利那洛肽和Cys1-α-酮的鸟苷酸环化酶-C(GC-C)激动剂活性。在96-孔板的各孔中，在37℃下首先在0.18mL的达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(DMEM)中使用1mM3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)孵育约200,000T84细胞/孔10分钟。将各肽稀释至范围为0.1至10,000nM的最终浓度，然后将0.02mL的各稀释物一式两份加入包含T84细胞的96-孔板中，得到0.2mL/孔的最终体积。在37℃下将肽反应孵育30分钟。在孵育之后，将上清液移出和丢弃，并在冰上使用冷0.1M盐酸(HCl)裂解30分钟。通过离心去除细胞碎片，然后使用具有串联质谱的液相色谱法来分析鸟苷3’，5’-环单磷酸(环GMP)的浓度。使用数据构建剂量-反应曲线和计算各测试制品的半最大有效浓度(EC50)值。
如通过细胞内cGMP增加所测定，利那洛肽和Cys1-α-酮显示在T84细胞中GC-C激动剂活性(图2)。利那洛肽和Cys1-α-酮的EC50值分别为315±105nM和352±55nM。使用F-检测对利那洛肽与Cys1-α-酮的剂量-反应曲线的比较表明EC50值统计上没有差异(p＝0.8884)。
实施例4：示例性肽的内容物和纯度的测定
Cys1-α-酮肽
通过在40℃下使用75％RH孵育包含喷雾至224-mg Avicel小珠上1mg的利那洛肽的20g的药品小珠两个月来处理利那洛肽药品(如在US2010/0048489中描述，通过引用方式并入本文)。使用20mL的0.1N HCl将肽相关的材料由小珠中提取，并在室温下在漩涡混合器中轻轻振荡一小时。在1,000x g下将所得悬浮剂离心五分钟以沉淀小珠，并冻干包含分离的肽的上清液。将干燥的样品重新配制在2.5mL的0.1N HCl中，然后通过如下A YMC ProTMC18柱(规格：3.0x150mm，3.5um，Waters Corp.，Milford，MA)或者使用的等同形式的方法通过制备型HPLC将Cys-a-酮分离和纯化，并维持在40℃下。流动相A(MPA)由98∶2水/包含0.1％三氟乙酸的乙腈组成，而流动相B(MPB)由5∶95水/包含0.1％三氟乙酸的乙腈组成。使用由在12分钟内82％至78％MPA和18％至22％MPB的梯度、随后在1分钟内逐渐达到50％MPA和50％MPB、并维持在50％MPA和50％MPB下3分钟、随后通过82％MPA和18％MPB洗涤7分钟的梯度来完成肽的洗脱。流速是0.6mL/分钟，在220nm下通过UV来完成检测。
人工收集级份，并将包含Cys1-a-酮的那些级份混合和冻干。将干燥的残基重新配制在1.6mL的水中以得到0.5mg/mL的最终浓度，然后在-20℃下冷冻保存。使用下述方法通过分析型HPLC来测试一等份的纯化Cys1-a-酮，测定的纯度为90.7％。
使用具有Chemstation Rev A.09.03软件或等同形式的Agilent Series1100LC体系可测定本发明的肽的内容物和纯度。使用YMCProTMC18柱(规格：3.0x150mm，3.5um，Waters Corp.，Milford，MA)或者等同形式，并维持在40℃下。流动相A(MPA)由水和0.1％三氟乙酸组成，而流动相B(MPB)由95％乙腈：具有0.1％三氟乙酸的5％水组成。使用从0％MPB4分钟至随后10％MPB5分钟、随后23％MPB34分钟、随后34％MPB6分钟、随后80％MPB10分钟的梯度来完成肽的洗脱。通过回到0％MPB1分钟、随后维持在100％MPA下7分钟来进行柱子的再平衡。流速是0.6mL/分钟和在220nm下通过UV完成检测。
通过RP-HPLC的利那洛肽和Cys1-α-酮产物的分析例子显示在图3中。
通过相对于类似制备的内肽标准品测定在制备的样品中肽浓度来测定纯化肽的内容物。
其他实施方案
只要各单独出版物或专利申请通过引用方式具体和单独指出通过引用方式并入，则在该公开中引用的所有出版物和专利均相同程度通过引用方式并入本文中。假如在任一通过引用方式并入的专利或出版物中术语的定义与在该公开中使用的定义相冲突，则旨在按照在该公开中术语的意思。而且，上述讨论仅公开和描述本发明的示例性实施方案。由这些讨论和由附图和权利要求，本领域技术人员意识到，在没有违背在所附权利要求中定义的本发明的精神和范围下可在其中进行修改和变化。

Claims (41)

1.一种肽或其药学上可接受的盐，所述肽由以下氨基酸结构组成：
。
2.一种肽或其药学上可接受的盐，所述肽由以下氨基酸结构组成：
。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽激活鸟苷酸环化酶C受体。
4.根据权利要求1-2中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽或其药学上可接受的盐被分离或被纯化。
5.一种包含根据权利要求1-2中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐的药物组合物。
6.一种包含两种或更多种根据权利要求1-2中任一项所述的肽或其药学上可接受的盐的药物组合物。
7.一种包含两种或多种选自以下的肽的药物组合物：
i.肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
；
ii.肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
；以及
iii.肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
。
8.一种包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐的药物组合物，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
；
并且与利那洛肽的重量相比，所述肽或其药学上可接受的盐占小于9重量%、8重量%、7重量%、6重量%、5重量%、4重量%、3重量%、2重量%、1重量%、10重量%、20重量%、30重量%、40重量%、50重量%、60重量%、70重量%、80重量%、或90重量%。
9.一种包含肽或其药学上可接受的盐的药物组合物，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
，
并且与利那洛肽或另外的鸟苷酸环化酶C激动剂的重量相比，所述肽占至少90重量%。
10.一种基本上由肽或其药学上可接受的盐组成的药物组合物，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
；
并且与利那洛肽或另外的鸟苷酸环化酶C激动剂的重量相比，所述肽占至少90重量%。
11.一种包含利那洛肽和肽或其药学上可接受的盐的药物组合物，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
；
并且与利那洛肽的重量相比，所述肽或其药学上可接受的盐占小于9重量%、8重量%、7重量%、6重量%、5重量%、4重量%、3重量%、2重量%、1重量%、10重量%、20重量%、30重量%、40重量%、50重量%、60重量%、70重量%、80重量%、或90重量%。
12.一种包含肽或其药学上可接受的盐的药物组合物，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
，
并且与利那洛肽或另外的鸟苷酸环化酶C激动剂的重量相比，所述肽占至少90重量%。
13.一种基本上由肽或其药学上可接受的盐组成的药物组合物，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
；
并且与利那洛肽或另外的鸟苷酸环化酶C激动剂的重量相比，所述肽占至少90重量%。
14.一种包含利那洛肽、由以下氨基酸结构组成的肽或其药学上可接受的盐
和一种或多种选自以下的肽的药物组合物：
i.肽“Cys1-IMD”或其药学上可接受的盐，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
；
ii. 水解肽“Asp7”或其药学上可接受的盐，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
；
iii. 乙酰化肽“Cys1-N-乙酰基”或其药学上可接受的盐，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
；
iv. 利那洛肽三硫化物肽或其药学上可接受的盐，其中所述肽由Cys Cys Glu TyrCys Cys Asn Pro Ala Cys Thr Gly Cys Tyr的氨基酸序列组成，其中另外的硫原子可连接六个半胱氨酰硫中任意一个；以及
v.肽“Des-Tyr14”或其药学上可接受的盐，其中所述肽由以下氨基酸结构组成：
。
15.根据权利要求7-14中任一项所述的药物组合物，其进一步包含一种或多种选自以下的试剂：(i)选自Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+、K+、Na+或Al3+的阳离子；或者(ii)空间位阻的伯胺。
16.根据权利要求15所述的药物组合物，其中所述Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+、K+、Na+或Al3+作为醋酸镁、氯化镁、磷酸镁、硫酸镁、醋酸钙、氯化钙、磷酸钙、硫酸钙、醋酸锌、氯化锌、磷酸锌、硫酸锌、醋酸锰、氯化锰、磷酸锰、硫酸锰、醋酸钾、氯化钾、磷酸钾、硫酸钾、醋酸钠、氯化钠、磷酸钠、硫酸钠、醋酸铝、氯化铝、磷酸铝或硫酸铝提供。
17.根据权利要求15所述的药物组合物，其中所述试剂是空间位阻的伯胺。
18.根据权利要求17所述的药物组合物，其中所述空间位阻的伯胺是氨基酸或者氨基酸衍生物。
19.根据权利要求18所述的药物组合物，其中所述氨基酸是天然存在的氨基酸。
20.根据权利要求18所述的药物组合物，其中所述氨基酸是非天然存在的氨基酸。
21.根据权利要求18所述的药物组合物，其中所述天然存在的氨基酸是组氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、酪氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、色氨酸或缬氨酸，或者所述非天然存在的氨基酸是1-氨基环己烷羧酸、lanthanine或茶氨酸。
22.根据权利要求17所述的药物组合物，其中所述空间位阻的伯胺具有式：
其中R1、R2和R3独立地选自：H、C(O)OH、C1-C6烷基、C1-C6烷基醚、C1-C6烷基硫醚、C1-C6烷基羧酸、C1-C6烷基羧基酰胺和烷基芳基，其中任何基团可被卤素或氨基取代一次或多次，但条件是R1、R2和R3不超过一个为H。
23.根据权利要求22所述的药物组合物，其中所述空间位阻的伯胺是聚合胺、脱乙酰壳多糖、环己基胺或2-甲基丁基胺。
24.根据权利要求17-23中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物进一步包含Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+、K+、Na+或Al3+。
25.根据权利要求7-14或16-23中任一项所述的药物组合物，其进一步包含抗氧化剂、药学上可接受的粘合剂或添加剂、药学上可接受的填充剂、或另外的治疗剂。
26.根据权利要求25所述的药物组合物，其中所述抗氧化剂是BHA、维生素E或没食子酸丙酯。
27.根据权利要求25所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的粘合剂或添加剂选自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮（聚维酮）、淀粉、麦芽糖糊精或纤维素醚。
28.权利要求27所述的药物组合物，其中所述纤维素醚选自：甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素。
29.根据权利要求25所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的填充剂是纤维素、异麦芽酮糖醇、甘露醇或磷酸氢钙。
30.权利要求29所述的药物组合物，其中所述纤维素选自微细纤维素和微晶纤维素。
31.根据权利要求25所述的药物组合物，其中所述另外的治疗剂选自以下的一种或多种：镇痛剂、抗抑郁剂、促胃肠蠕动或运动剂、止吐药、抗生素、质子泵抑制剂、酸阻断剂、PDE5抑制剂、酸泵拮抗剂、GABA-B激动剂、胆汁酸螯合剂或粘膜保护剂。
32.一种包含根据权利要求7-14、16-23或26-31中任一项所述的药物组合物的剂量单位。
33.根据权利要求32所述的剂量单位，其中所述剂量单位是胶囊或片剂。
34.根据权利要求33所述的剂量单位，其中所述剂量单位各包含5 µg至1 mg的利那洛肽。
35.根据权利要求34所述的剂量单位，其中所述剂量单位各包含290µg或145µg的利那洛肽。
36.根据权利要求7-14、16-23或26-31中任一项所述的药物组合物，其用于治疗胃肠疾患。
37.权利要求36所述的药物组合物，其中所述胃肠疾患选自：肠应激综合征(IBS)、便秘、功能性胃肠障碍、胃食管返流疾病、功能性烧心、消化不良、内脏痛、胃轻瘫、慢性肠假性梗阻、结肠假性梗阻、克罗恩病、溃疡性结肠炎、和炎性肠病。
38.权利要求37所述的药物组合物，其中所述便秘是慢性便秘、由术后肠梗阻的原因或由于使用阿片剂导致的特发性便秘。
39.权利要求37所述的药物组合物，其中所述肠应激综合征是便秘型肠易激综合征(c-IBS)、腹泻型肠易激综合征(d-IBS)或交替型肠易激综合征(a-IBS)。
40.根据权利要求37所述的药物组合物，其中所述胃轻瘫是特发性、糖尿病性或术后胃轻瘫。
41.根据权利要求7-14、16-23或26-31中任一项所述的药物组合物，其用于在患者中增加肠运动。
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