CN101050226A - 一种牡荆素衍生物分离方法 - Google Patents

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Abstract

一种分离牡荆素衍生物：牡荆素牡荆素－4′－O－葡萄糖苷及牡荆素－2″－O－鼠李糖苷的方法，其特征在于取山里红叶及山楂叶药材，粉碎成粗粉，用含水醇回流提取，提取液过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，经AB－8或D101大孔吸附树脂除杂，以30－80％乙醇洗脱，减压浓缩至无醇味，以石油醚脱色素后，再用正丁醇萃取，减压回收正丁醇，所得提取物经硅胶柱层析分离，依次用氯仿－甲醇梯度洗脱，氯仿、甲醇配料比为4－3∶1，洗脱部分将其减压浓缩，经硅胶柱层析，填料为薄层层析硅胶，再以乙酸乙酯－丁酮－甲酸－水洗脱或乙酸乙酯－丙酮－甲酸－水洗脱，在温度0－15℃放置下直接得牡荆素－4′－O－葡萄糖苷及牡荆素－2″－O－葡萄糖苷。应用本发明的方法所分离的牡荆素－4′－O－葡萄糖苷及牡荆素－2″－O－鼠李糖苷的收率高、纯度高，方法简便实用，低毒、环保，适合工业化生产。

Description

一种牡荆素衍生物分离方法
技术领域
本发明涉及由普通硅胶柱层析分离一种牡荆素衍生物：牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷的方法，本发明特别涉及的是采用硅胶柱色谱(所用的填料为薄层层析硅胶)，以乙酸乙酯-丁酮(或丙酮)-甲酸-水为洗脱剂，从山里红叶或山楂叶提取物中直接分离得牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷的方法。
背景技术
山楂叶为蔷薇科植物山里红(Crataegus pinnatifida Bge.var major N.E.Br.)、山楂(C.pinnatifida Bge.)的干燥叶，收载于《中华人民共和国药典》2005版，22页。具有活血化瘀，理气通脉，用于气滞血瘀，胸闷憋气，心悸见忘，眩晕耳鸣。研究结果表明牡荆素衍生物：牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷是已经被证实治疗心血管疾病，并有很强的抑制人类的乳癌细胞DNA的合成及抗氧化作用。硅胶色谱适合分离黄酮类成分，因此本发明将硅胶柱色谱技术并结合薄层层析填料，成功用于分离牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷，两种化合物可作为治疗相关疾病药物的原料。
目前牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷的分离方法主要采用醇提、溶剂萃取同时结合硅胶柱层析的方法。文献报道特点是成本高，周期长，收率低。[刘荣华等山里红叶化学成分研究中药材，2006，29(11)；丁杏苞等山楂叶化学成分的研究中国中药杂志，1990；15(5)]
发明内容
本发明提供了简便、环保、快速，纯度高，产率高的一种牡荆素衍生物：牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷的分离方法。
本发明的目的是这样实现的：
一种分离牡荆素衍生物：牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷的方法，是取山里红叶或山楂叶药材，粉碎成粗粉，用含水醇回流提取，提取液过滤，合并滤液，减压浓缩至浸膏无醇味，经AB-8(D101)大孔吸附树脂除杂，以30-80％乙醇洗脱至不再检出黄酮止，以石油醚脱色素后，再用正丁醇萃取至洗脱液无色，减压回收正丁醇至干，所得干燥物经硅胶柱层析(其中硅胶以200-260目)分离，用氯仿-甲醇洗脱，将氯仿、甲醇(4-3∶1)部位所有流分(1-2个柱体积)洗脱液减压浓缩至干，干燥物再经薄层层析硅胶柱层析，以乙酸乙酯-丁酮(或丙酮)-甲酸-水(4-3∶3∶1∶1)洗脱至两个可见主要色带流出，在0-15℃温度下直接析出结晶，纯度为90-99％。
山里红叶或山楂叶粗粉，根据实际生产，可采用乙醇提取为宜，用量为药材的8-16倍，可采用冷浸、超声及回流提取等方式，其中加热回流的方式为优选方案。
含水醇的回流提取操作中，含水醇的浓度为30-80％，用量为药材的8-16倍，回流提取2-3次，每次1-3小时，醇可选用甲醇或乙醇，根据实际生产及毒性，选用乙醇最为合适。
醇提液过滤，减压浓缩至无醇味，经AB-8(D101)大孔吸附树脂除杂，以30-80％乙醇洗脱，以石油醚脱色素后，再用正丁醇萃取，减压回收正丁醇，所得提取物经硅胶柱层析(其中硅胶以200-260目)分离。
硅胶柱用氯仿-甲醇洗脱，氯仿-甲醇(4-3∶1)部位所有流分(1-2个柱体积)洗脱物减压浓缩，干燥物再经硅胶柱层析分离，其中填料为薄层层析硅胶，以乙酸乙酯-丁酮(或丙酮)-甲酸-水洗脱至两个主要可见色带流出，在0-15℃温度下直接析出牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷结晶。酮可选用丁酮或丙酮，采用乙酸乙酯-丁酮(或丙酮)-甲酸-水(4-3∶3∶1∶1)。
本方法所制得的牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷的提取收率为0.015-0.05％，牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷的含量为90-99％(采用高效液相色谱，归一化法测定)。本提取物可以单独或联合作为原料药应用于各种相关疾病的治疗药剂中。
本发明与现有文献不同的是：采用单一的硅胶柱层析分即可分离山里红叶或山楂叶中的牡荆素衍生物：牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷，避免了操作困难、成本高的缺点。应用本法所分离的牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷收率高、纯度高、毒性小、环保。本方法简便、快速、实用性强，适合工业化生产。
具体实施方式
实施例一
山里红叶粉碎成粗粉，用10倍量70％乙醇回流提取3次，每次分别为2、1、1小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味。所得浸膏经AB-8大孔吸附树脂除杂至糖不再检出，再用50％乙醇洗脱至不再检出黄酮止，醇洗脱液减压浓缩至无醇味，以石油醚脱色素后，正丁醇萃取至洗脱液无色，减压回收正丁醇至干，所得干燥物经硅胶柱层析(其中硅胶以200-260目)分离，用氯仿-甲醇洗脱，将氯仿、甲醇(4-3∶1)部位所有流分(1-2个柱体积)洗脱物减压浓缩，干燥物经薄层层析硅胶柱，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(4∶3∶1∶1)洗脱至两个主要可见色带流出，在0-15℃温度下直接析出牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷结晶，纯度均大于90％(经高效液相色谱，归一化法测定)。
实施例二
山楂叶粉碎成粗粉，用10倍量50％乙醇回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味。所得浸膏经D101大孔吸附树脂除杂至糖不再检出，再用60％乙醇洗脱至不再检出黄酮止，醇洗脱液减压浓缩至无醇味，以石油醚脱色素后，正丁醇萃取至洗脱液无色，减压回收正丁醇，干燥，所得干燥物经硅胶柱层析(其中硅胶以200-260目)分离，用氯仿-甲醇洗脱，将氯仿、甲醇(4-3∶1)部位所有流分(1-2个柱体积)洗脱物减压浓缩，干燥物经薄层层析硅胶柱，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(3∶3∶1∶1)洗脱至两个主要可见色带流出，在0-15℃温度下直接析出牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷结晶，纯度为99％(经高效液相色谱，归一化法测定)。
实施例三
山里红叶粉碎成粗粉，用16倍量60％乙醇回流提取2次，每次2小时，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味。所得浸膏经AB-8大孔吸附树脂除杂至糖不再检出，再用70％乙醇洗脱至不再检出黄酮止，醇洗脱液减压浓缩至无醇味，以石油醚脱色素后，正丁醇萃取至洗脱液无色，减压回收正丁醇，干燥，所得干燥物经硅胶柱层析(其中硅胶以200-260目)分离，用氯仿-甲醇洗脱，将氯仿、甲醇(4-3∶1)部位所有流分(1-2个柱体积)洗脱物减压浓缩，干燥物经薄层层析硅胶柱，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(4∶3∶1∶1)洗脱至两个主要可见色带流出，在0-15℃温度下直接析出牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷结晶，纯度均大于95％(经高效液相色谱，归一化法测定)。

Claims (4)

1、一种分离牡荆素衍生物：牡荆素牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷的方法，其特征在于取山里红叶及山楂叶药材，粉碎成粗粉，用含水醇浓度为30-80％，水醇回流提取2-3次，每次1-3小时，用量为药材的8-16倍量，提取液过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，经AB-8或D101大孔吸附树脂除杂，以30-80％乙醇洗脱至不再检出黄酮止，醇洗脱液减压浓缩至无醇味，以石油醚脱色素后，再用正丁醇萃取至洗脱液无色，减压回收正丁醇至干，所得干燥物经200-260目硅胶柱层析分离，用氯仿-甲醇洗脱，氯仿、甲醇配料比为4-3∶1，用量为柱体积的1-2倍，将洗脱液减压浓缩至干，所得干燥物经硅胶柱层析，填料为薄层层析硅胶，再以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水洗脱或乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水洗脱至两个主要可见色带流出，在0-15℃温度下直接析出牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-葡萄糖苷结晶。
2、根据权利书要求1所述的一种分离牡荆素衍生物：牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷的方法，其特征在于所述的含水醇为乙醇溶液。
3、根据权利书要求1所述的一种分离牡荆素衍生物：牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷的方法，其特征是乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水或乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水的配料比为4-3∶3∶1∶1。
4、根据权利要求1所述的一种分离牡荆素衍生物：牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷的方法，其特征是所得牡荆素-4′-O-葡萄糖苷及牡荆素-2″-O-鼠李糖苷纯度经高效液相色谱，归一法测定均为90-99％。
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