CN101011499A - 一种沉香叶提取物及其医药和保健用途 - Google Patents

一种沉香叶提取物及其医药和保健用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及天然药物及医药保健领域,具体涉及一种沉香叶提取物,本发明还公开了它的制备方法和用于医药和保健的用途。

Description

一种沉香叶提取物及其医药和保健用途
技术领域
本发明涉及天然药物及医药保健领域,具体涉及一种沉香叶提取物,本发明公开了它的制备方法和用于医药和保健的用途。
背景技术
沉香为瑞香科(Thymelaeaceae)沉香属(Aquilaria)白木香(Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg)和同属植物沉香(Aquilria agallocha Roxb.)含树脂的木材。前者产于我国海南、台湾、广东、广西、云南、贵州、福建等省区,习称“国产沉香”,后者产于柬埔寨、印度、泰国、越南、缅甸、印度尼西亚等国,习称“进口沉香”。沉香为我国传统中药,具有行气止痛,温中止呕,纳气平喘之功效,主治胸腹胀闷疼痛,胃寒呕吐呃逆,肾虚气逆喘急,使用历史悠久,疗效确切,同时具有良好的保健功能,应用十分广泛。传统中医学及现有报道中用的无论是国产沉香还是进口沉香,都是沉香的木质部。然而不论是天然结香还是人工结香都比较困难,且耗费时间较长,很大程度限制沉香药材的应用。白木香为常绿乔木,其叶的资源非常丰富,但有关沉香叶的药理活性均未见报道。
发明内容
本发明公开了一种沉香叶的提取物,其资源丰富,制备简单,并且该提取物有多种药用功能。
发明人在对沉香叶的研究中发现,沉香叶的提取物具有较好的药理活性,并且至今沉香叶几乎没有被用于工业、商业和食品业,因此,其成本低廉,资源丰富,应用前景广阔。
研究发现,本发明的沉香叶提取物显示了一定程度的药理活性。下面是对本发明的详细描述:
本发明的沉香叶提取物,由以下方法制备得到:沉香叶经浸泡后渗漉或回流提取,再浓缩即得,其中用于渗漉或回流提取的溶剂选自:水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮中的一种或几种。即所用溶剂即可以是上述溶剂中的任何一种,也可以是上述任意几种的混合溶剂。
优选的提取溶剂是水或乙醇。用乙醇提取时乙醇的浓度优选10~80%。进一步优选50%。均为重量百分比。
沉香叶经渗漉或回流提取后,溶液可进一步浓缩得浸膏,浸膏可直接用于制备成各种制剂;也可将浸膏进一步干燥后再制备成各种制剂。
下面是本发明的沉香叶提取物的部分药理学试验及数据:
1.实验材料
1.1药品和试剂
沉香叶2005年十月份采自广东省电白县,为沉香Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg的叶。干燥沉香叶500g分别用水、50%乙醇或70%乙醇回流提取2次,每次2小时,收集合并两次滤液,回收乙醇,浓缩后经冷冻干燥得提取物,得率分别为16.32%、16.96%、15.25%。实验前将药品用生理盐水配成所需浓度的混悬液备用,各实验中所用剂量均以生药量/kg(动物重量)表示。
1.2实验动物
ICR小鼠,18-22g
1.3瘤种:小鼠H22肝癌由中科院上海药物研究所提供。
2.实验方法与结果
2.1沉香叶镇痛活性研究
2.1.1醋酸所致小鼠扭体试验
雄性ICR小鼠50只,禁食12-14h后,随机分组,分别ig生理盐水、沉香叶水提物10g/kg、沉香叶50%乙醇提物10g/kg、沉香叶70%乙醇提物10g/kg、吲哚美辛20mg/kg。给药1h后,ip0.7%醋酸0.1ml/10g,立即观察并记录小鼠15分钟内出现扭体的次数,并计算镇痛率=(给药组扭体数-对照组扭体数)/对照组扭体数×100%。另取雄性ICR小鼠50只,同法考察沉香叶50%乙醇提物不同剂量的效应。
结果由表1可见,沉香叶三种提取物均对醋酸致小鼠扭体模型具有不同的镇痛效果,其中水提物和50%乙醇提物镇痛效果较好,且镇痛强度相当。由表2可见,沉香叶50%乙醇提取物5、2.5g/kg可明显减少醋酸致小鼠扭体反应,表明其具有明显外周镇痛活性。
表1沉香叶不同提取物对醋酸致小鼠扭体的影响(
Figure A20071001996900041
,n=10)
组别 剂量(g/kg) 15min内扭体次数 镇痛率(%)
对照 - 24.3±4.9 -
沉香叶水提物 10 10.3±1.8** 57.7
沉香叶50%醇提物 10 10.5±2.0** 56.9
沉香叶70%醇提物 10 15.9±1.0* 34.8
吲哚美辛 0.02   1.0±0.3**  98.2
*P<0.05,**P<0.01与对照组比较
表2沉香叶醇提物对醋酸致小鼠扭体的影响(
Figure A20071001996900051
,n=10)
组别 剂量(g/kg) 15min内扭体次数   镇痛率(%)
对照 - 29.6±4.8   -
沉香叶醇提物 1.25 18.1±3.1   38.8
2.50 11.2±2.1*   62.2
5.00 9.8±1.4**   66.9
吲哚美辛 0.02 4.1±0.4**   86.1
*P<0.05,**P<0.01与对照组比较
2.1.2热板法所致小鼠疼痛反应实验
雌性ICR小鼠,利用水浴锅将温度控制在55±1℃,以舔后足作为疼痛反应的指标,先进行疼痛敏感性筛选,以痛阈值为5~30s的为合格小鼠,选取合格小鼠随机分组,禁食12-14h后,分别ig生理盐水、沉香叶50%乙醇提取物5、2.5、1.25g/kg、吲哚美辛20mg/kg,实验前禁食12-14h,实验前两次测定给药前小鼠对热板刺激的反应时间,取平均值作为给药前阈值。给药后测定给药后1、2h小鼠痛阈,并计算痛阈延长率=(给药后痛阈-给药前痛阈)/给药前痛阈*100%。
结果由表3可见,沉香叶醇提物5g/kg、2.5g/kg,给药2h后均可明显延长热刺激致小鼠痛阈值,表明沉香叶醇提物具有明显中枢镇痛活性。
表3沉香叶醇提物对热板法所致小鼠疼痛的影响(
Figure A20071001996900052
,n=10)
组别   剂量(g/kg)                      痛阈值(s)
    0h   1h     2h
对照   -     15.2±1.0   14.2±2.4     14.4±1.3
沉香叶醇提物   1.25     15.1±1.0   19.6±4.5     17.2±1.4
  2.50     15.8±2.2   21.6±4.4     21.6±2.2*
  5.00     15.2±1.4   15.9±1.4   22.6±1.2**
吲哚美辛   0.02     15.7±0.8   23.9±4.2*   34.9±7.3*
*P<0.05,**P<0.01与对照组比较
2.2沉香叶抗炎活性研究
2.2.1角叉菜胶所致小鼠足跖肿胀实验
雄性昆明种小鼠,禁食12-14h后,随机分组,测定小鼠右后足体积后,分别ig生理盐水、本发明沉香叶醇提取物5、2.5、1.25g/kg、吲哚美辛20mg/kg。给药1h后小鼠右后足足跖皮下注射2%角叉菜胶0.02ml/只,分别测定注射角叉菜胶后1、3、5h右后足的体积,与给药前的体积比较,计算肿胀率=(该时间点足体积-给药前足体积)/给药前足体积×100%,以此反映炎症反应程度。
结果由表4可见,沉香叶醇提物5g/kg,可明显降低注射角叉菜胶1h、3h、5h后小鼠足跖肿胀率,与对照组相比具有显著或非常显著差异。
表4沉香叶醇提物对角叉菜胶致小鼠足跖肿胀的影响(
Figure A20071001996900061
,n=10)
组别   剂量(g/kg)                注射角叉菜胶后足肿胀率(%)
    1h   3h     5h
对照   -     19.9±2.0   36.0±4.5     33.2±1.9
沉香叶醇提物   1.25     19.9±4.1   22.3±5.8     31.9±3.5
  2.50     17.4±4.1   25.0±6.0     24.3±3.2
  5.00     13.1±2.3*   17.4±2.9*     1 6.4±2.4**
吲哚美辛   0.02     12.6±2.8*   17.2±2.3*     14.8±1.6**
*P<0.05,**P<0.01与对照组比较
2.2.2二甲苯所致小鼠耳廓肿胀实验
雄性昆明种小鼠,分组给药同上,给药1h后于小鼠右耳两面均匀涂布二甲苯30μl,左耳不涂作对照,致炎1h后剪下左右耳,以直径8mm打孔器打下左右耳片称重,以肿胀率=(左右耳重量差)/左耳重量×100%表示炎症反应的强度。
结果由表5可见,沉香叶醇提物5g/kg、2.5g/kg,可明显降低二甲苯致小鼠耳廓肿胀,与对照组相比具有显著或非常显著差异。
表5沉香叶醇提物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(
Figure A20071001996900062
,n=10)
组别 剂量(g/kg)     肿胀率(%)   抑制率(%)
对照 -     74.4±7.5
沉香叶醇提物 1.25     57.2±7.4     23.1
2.50     51.0±7.4*     31.2
5.00     37.6±6.2**     49.5
吲哚美辛 0.02     26.8±5.1**     64.0
*P<0.05,**P<0.01与对照组比较
2.2.3羧甲基纤维素钠致小鼠腹腔白细胞游走实验
雄性昆明种小鼠,分组给药同上,给药1h后各鼠ip1.5%羧甲基纤维素钠,4h后断颈椎处死小鼠,各鼠腹腔均注射5ml生理盐水,并按摩30s收集腹腔液,进行腹腔液白细胞计数。
结果由表6可见,沉香叶醇提物5、2.5、1.25g/kg均可显著地减少羧甲基纤维素钠模型组小鼠腹腔液游走的白细胞数,与对照组相比具有显著或非常显著差异。上述结果表明沉香叶醇提物具有明显的抗炎活性。
表6沉香叶醇提物对羧甲基纤维素钠致小鼠腹腔白细胞游走试验(
Figure A20071001996900071
,n=10)
组别 剂量(g/kg) 白细胞计数(×104) 抑制率(%)
对照 - 97.00±11.72 -
模型 - 182.14±11.74### -
沉香叶醇提物 1.25 118.33±5.87*** 74.9
2.50 117.91±9.57** 75.4
5.00 105.00±8.22*** 90.6
地塞米松 0.02 99.68±9.47*** 96.8
###P<0.001与对照组比较,***P<0.001与对照组比较
2.3沉香叶泻下功能研究
2.3.1正常小鼠小肠推进实验
雄性ICR小鼠随机分为5组,即沉香叶醇提物1.25、2.5、5g/kg三个剂量组、吗叮啉20mg/kg组和生理盐水对照组。实验前动物禁食18h,各组均按0.2ml/10g灌胃给药。给药1h后各鼠按0.2mL/只ig给予炭末混悬液(含5%炭末、2%羧甲基纤维素钠),20min后断颈椎处死小鼠,取出从幽门到回盲部的肠管,观察炭末推进距离和肠管的全长,并计算炭末推进率。小肠推进率=幽门至炭末前沿的距离/幽门至回盲部的全长*100%。
结果由表7可见,沉香叶醇提物5、2.5g/kg两个剂量组对正常小鼠小肠运动均具有明显的促进作用,且随着剂量的增加肠推进作用加强。
表7沉香叶醇提物对正常小鼠小肠运动的影响(
Figure A20071001996900072
,n=10)
组别 剂量(g/kg)     肠推进率(%)
对照 -     53.12±1.69
沉香叶醇提物 1.25     50.48±3.55
2.50     58.60±1.60*
5.00     63.69±2.83**
吗叮啉  0.02   60.68±2.63*
*P<0.05,**P<0.01与对照组比较
2.3.2阿托品引起小鼠小肠推进抑制模型
雄性小鼠随机分为6组,即沉香叶醇提物1.25、2.5、5g/kg三个剂量组、吗叮啉20mg/kg组、模型组和生理盐水对照组,实验前动物禁食18h,模型组和生理盐水组给予生理盐水,其它3组给予相应剂量药物,给药后45min,除生理盐水对照组外,另4组均ip阿托品5mg/kg(0.1ml/10g),15min后每组均灌胃炭末混悬液(含5%炭末、2%羧甲基纤维素钠)0.2ml/只,20min后处死动物,取出从幽门到回盲部的肠管计算炭末推进率。
结果由表8可见,与对照组相比,模型组可显著抑制小鼠小肠活动,使肠推进率减慢,然而在给予两个不同剂量沉香叶醇提物以及吗叮啉后,被抑制的小肠活动得到改善,肠推进率也有不同程度的加强,与模型组相比具有明显的差异,其中给予高剂量的沉香叶醇提物可使肠推进基本恢复到正常状态。
表8沉香叶醇提物对阿托品引起小肠推进抑制的影响(
Figure A20071001996900081
,n=10)
  组别   剂量(g/kg)     肠推进率(%)
  对照   -     57.80±1.92
  阿托品   0.005     43.87±2.13##
  沉香叶醇提物+阿托品   1.25+0.005     52.53±2.96*
  沉香叶醇提物+阿托品   2.50+0.005     51.35±3.28*
  沉香叶醇提物+阿托品   5.00+0.005     56.28±2.29**
  吗丁啉+阿托品   0.02+0.005     52.1 6±2.99*
##P<0.01与对照组比较,*P<0.05,**P<0.01与阿托品模型组比较
2.3.3正常小鼠泻下实验
雄性小鼠随机分为5组,即沉香叶醇提物1.25、2.5、5g/kg三个剂量组、比沙可啶2.5mg/kg组和生理盐水对照组。实验前动物禁食不禁水20-24h,灌服相应炭末混悬药液(含炭末0.1g/ml),生理盐水对照组ig炭末溶液(0.1g/ml)。此时开始计时,将各鼠分置于铺有滤纸的小鼠笼内进行观察。记录其出现黑便的时间,排黑便的数量、性状以及稀粪沾染肛门的情况,连续观察6h,将结果进行统计学处理。
结果由表9可见,沉香叶醇提物两个剂量组均可显著缩短小鼠排黑便的时间提前,增加排黑便的数量,粪便软化,但并未出现稀粪沾染肛门的现象。
表9沉香叶醇提物对正常小鼠排便时间和数量的影响(
Figure A20071001996900091
,n=10))
组别 剂量(g/kg) 首次排黑粪时间(min)   6h内排黑便次数 粪便性状
对照 - 241.00±17.36   1.50±0.34   干燥
沉香叶醇提物 1.25 193.16±18.7   3.17±0.65   干燥
2.50 158.57±14.05**   3.29±0.71*   软、成形
5.00 155.83±9.70**   4.66±1.08*   软、成形
比沙可啶 0.0025 188.33±10.56*   3.00±0.58*   干燥
*P<0.05,**P<0.01与对照组比较
2.4沉香叶止血、抗脑缺氧、降血糖、抗肿瘤活性研究
2.4.1毛细管法测定小鼠凝血时间实验
雄性ICR小鼠随机分为5组,即沉香叶醇提物1.25、2.5、5g/kg三个剂量组、酚磺乙胺750mg/kg组和生理盐水对照组。灌胃给药1h后,用毛细管(0.9-1.1mm内径,长10cm)眼眶采血,立即计时,每过30s后折断约5mm毛细管,直到折断处出现血凝丝为止,记录凝血时间。
结果由表10可见,沉香叶醇提物5、2.5、1.25g/kg,均可显著缩短小鼠凝血时间,提示其具有明显止血作用。
表10沉香叶醇提物对小鼠凝血时间的影响(
Figure A20071001996900092
,n=10)
组别   剂量(g/kg) 凝血时间(s)
对照   -   107.7±6.9
沉香叶醇提物   1.25   81.3±7.3*
  2.50   76.8±7.3*
  5.00   63.3±2.6**
酚磺乙胺   0.75   72.4±4.5**
*P<0.05,**P<0.01与对照组比较
2.4.2小鼠断头呼吸实验
取昆明种小鼠40只,随机分为4组,每组10只,即沉香叶醇提物1.25、2.5g/kg二个剂量组、EGB76140mg/kg组和生理盐水对照组,给药1h后沿耳中缝线稍后快速断头,并记录最后一次呼吸的时间以计算喘息的持续时间。
结果由表11可见,沉香叶醇提物5、2.5g/kg和阳性对照药,均可明显延长小鼠的断头呼吸时间,提示沉香叶醇提物有抗脑缺氧活性。
表11沉香叶醇提物对小鼠断头呼吸时间的影响( ,n=10)
组别 剂量(g/kg)     断头呼吸时间(s)
对照 -     14.1±1.6
沉香叶醇提物 1.25     14.8±1.3
2.50     16.6±2.1*
EGB761 0.04     16.8±2.2*
*P<0.05与对照组比较
2.4.3四氧嘧啶致小鼠高血糖实验
取昆明种小鼠50只,尾静脉注射四氧嘧啶70mg/kg,72小时后,测定空腹血糖(FSG),选取FSG>150mg/ml小鼠,随机分为4组,即沉香叶醇提物1.25、2.5g/kg、二甲双胍1g/kg组和生理盐水对照组,连续灌胃给药7天,末次给药后2h测定FSG。
结果由表12可见,沉香叶醇提物2.50g/kg可明显降低四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠空腹血糖(FSG),提示沉香叶醇提物具有一定降血糖活性。
表12沉香叶醇提物对小鼠断头呼吸时间的影响( ,n=10)
组别   剂量(g/kg)     FSG(mg/dl)
对照   -     217.6±20.0
沉香叶醇提物   1.25     154.3±18.6
沉香叶醇提物   2.50     137.5±16.3*
二甲双胍   1.00     41.8±6.4**
*P<0.05,**P<0.01与对照组比较
2.4.4小鼠H22肝癌的肿瘤生长抑制实验
选用18-22克雌性ICR小鼠及生长良好的7-11天的H22瘤种,接种于小鼠右侧腋部皮下,约4.5-5×106细胞/只,接种24小时后随机分笼,口服给药。按同一剂量连续给药8天。第9天处死动物,称体重、瘤重,计算各组平均瘤重,按下公式求出肿瘤抑制率并进行T检验。肿瘤生长抑制率=(空白对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/空白对照组平均瘤重*100%。结果由表13可见,沉香叶醇提物5.00g/kg可明显抑制小鼠H22肝癌的肿瘤生长,与0.025mg/kg5-氟脲嘧啶iv的活性相当,同时对小鼠的体重无明显影响,提示沉香叶醇提物具有一定抗肿瘤活性,副作用较阳性药低。
表13沉香叶醇提物对小鼠H22肝癌的肿瘤生长的影响( ,n=10)
组别   剂量(g/kg)            体重(克)   瘤重(g)   抑制率(%)
 d1   d9
对照iv   -  21.6±4.4   29.3±2.5   1.09±0.43
沉香叶醇提物ig   2.50  21.2±3.8   24.8±3.5   0.65±0.34   40.3
沉香叶醇提物ig   5.00  20.9±2.9   25.4±4.9   0.54±0.31*   50.5
5-氟脲嘧啶iv   0.025  22.0±1.9   23.2±3.1**   0.42±0.50*   61.5
*P<0.05,**P<0.01与对照组比较
2.5沉香叶急性毒性实验(最大给药量测定)
取禁食14h(不禁水),体重19~21g昆明种小鼠20只,雌雄各半。1次ig给予最大浓度沉香叶提取物0.4ml/10g,计算剂量为生药120g/kg。观察7d内小鼠毒性反应和死亡情况。第8天将小鼠脱颈椎处死,肉眼观察其心、肝、脾、肺、肾等主要脏器,如有可见性病变需做病理组织学检查。
结果表明,小鼠1次ig给予最大浓度最大体积沉香叶醇提物7天内,饮食饮水正常,生长状况良好,皮毛光泽,活动度好,外观、行为等均无异常表现,无一死亡,尸检无肉眼可见性病变。故小鼠ig沉香叶醇提物最大给药量大于或等于生药120g/kg,按公斤体重计算,大于或等于成人每日临床用量(15g/60kg,0.25g/kg)的480倍。
综上所述,本发明的沉香叶提取物具有显著抗炎、镇痛、促进小肠运动、泻下、止血、抗脑缺氧缺血、降糖、抗肿瘤等活性,且毒性很低,为将沉香叶用以防治与炎症、疼痛、便秘、肥胖、出血、脑缺血、高血糖、肿瘤等相关的一系列疾病或亚健康状态提供药理学实验依据。
本发明的沉香叶提取物还可以和药学上可接受的载体制备成各种药用制剂,剂型包括:片剂、胶囊、丸剂、散剂、颗粒剂等,其也可与其它药品合并使用。
具体实施方式
                                实施例1
沉香叶500g,自然晾干粉碎后,10倍量水浸泡半小时,煎煮2次,每次2小时,收集合并滤液,水浴浓缩得浸膏81.6g。
                                实施例2
沉香叶500g,自然晾干粉碎后,用10倍量50%乙醇浸泡1小时,加热回流提取2次,每次1小时,收集合并滤液,回收乙醇,浓缩后冷冻干燥得提取物84.8g。
                                实施例3
沉香叶500g,自然晾干粉碎后,10倍量甲醇浸泡过夜,渗漉法提取,回收甲醇,浓缩后真空干燥得提取物72.4g。
                                实施例4
沉香叶500g,自然晾干粉碎后,10倍量乙酸乙酯浸泡1小时,60℃超声提取2次,每次半小时,离心收集合并上清液,水浴浓缩,冷冻干燥得提取物54.7g。
                                实施例5
将实施例1方法制备得到的浸膏50g,加炼蜜30g,山梨酸5g,枸橼酸钠5g,香精1ml,适量水混匀,制成口服液,封装。
                                实施例6
将实施例2方法制备得到的干燥提取物50g,粉粹成细粉过120目筛,用25g白面打糊掺入,搅匀,合坨,搓丸。阴凉处通风阴干,装瓶密封。
                                实施例7
将实施例3方法制备得到的干燥提取物50g,加淀粉3g混匀,70~80℃干燥,制粒,加硬脂酸镁2g,混合后压片,质检包装即得成品。
                                实施例8
沉香叶500g,自然晾干粉碎后,粉碎后,用10倍量50%乙醇浸泡1小时,加热回流提取2次,每次1小时,收集合并滤液,回收乙醇,浓缩后冷冻干燥得提取物84.8g。将其打成细粉,混匀,装入胶囊。
                                实施例9
沉香叶500g,自然晾干粉碎后,粉碎后,用10倍量30%乙醇,加热回流提取2次,每次1小时,收集合并滤液,回收乙醇,浓缩后真空干燥得提取物83.6g。加适量辅料,混匀,装入胶囊。
                                实施例10
沉香叶500g,自然晾干粉碎后,粉碎后,用10倍量70%乙醇浸泡1小时,加热回流提取2次,每次1小时,收集合并滤液,回收乙醇,浓缩后冷冻干燥得提取物76.3g。将其打成细粉,混匀,过筛,分包制成散剂。

Claims (10)

1、一种沉香叶提取物,其特征是由以下方法制备得到:沉香叶经浸泡后渗漉或回流提取,再浓缩即得,其中用于渗漉或回流提取的溶剂选自:水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮中的一种或几种。
2、权利要求1的沉香叶提取物,其中用于渗漉或回流提取的溶剂是乙醇或水。
3、权利要求1的沉香叶提取物,其中用于渗漉或回流提取的溶剂是10~80%的乙醇,为重量百分比。
4、权利要求3的沉香叶提取物,其中乙醇浓度为50%。
5、一种药物组合物,其中含有权利要求1至4中任一项的沉香叶提取物及药学上可接受的载体。
6、权利要求1至4中任一项的沉香叶提取物用于制备抗炎或镇痛药物的用途。
7、权利要求1至4中任一项的沉香叶提取物用于制备防治便秘、肠梗阻或肥胖药物的用途。
8、权利要求1至4中任一项的沉香叶提取物用于制备治疗出血或脑缺血疾病的药物的用途。
9、权利要求1至4中任一项的沉香叶提取物用于制备降血糖药物的用途。
10、权利要求1至4中任一项的沉香叶提取物用于制备抗肿瘤药物的用途。
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