CN101366844B - 枇杷花及其提取物的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了枇杷花Eriobotrya japonica Lindl及其提取物在制备治疗咽炎的药物中的用途。本发明还提供了一种治疗咽炎的药物组合物及其制备方法。本发明枇杷花及其提取物用于治疗咽炎，尤其针对慢性咽炎，药效明确；采用本发明方法制备的药物组合物，药效明显优于已有制剂，且可控性强，为临床提供了一种新的选择。

Description

枇杷花及其提取物的新用途

技术领域

本发明涉及枇杷花Eriobotrya japonica Lindl及其提取物的新用途，具体地，是在制备治疗咽炎的药物中的用途。

背景技术

枇杷，学名Eriobotrya japonica(Thunb.)Lindl，蔷薇科。枇杷的果实、种子、花、叶、皮、根均可入药。枇杷花具有治伤风感冒、咳嗽痰血、润喉止咳的功效(参见江苏新医学院编，《中药大辞典》1977年第一版上册，上海科学技术出版社，第1250页)。申请号：200610022453.X，发明名称：一种枇杷花提取物、含有该提取物的组合物及用途，本发明涉及枇杷花提取物，它是由枇杷Eriobotrya japonica Lindl的花、花蕾、花托为原料，加入水或有机溶剂提取制备而成，其中，含有总黄酮50-350mg/g。本发明还提供了该枇杷花提取物的制备方法和用途。本发明提取物用于镇咳、抑菌，药效明确。本发明提取物中首次发现含有黄酮类成分，并以该成分为主要质量控制指标，通过测定总黄酮的含量，可达到控制药物质量的目的。同时采用齐墩果酸、熊果酸进行测定，提高药物的可控性。在对本发明提取物进行量化控制的同时，采用指纹图谱，进一步保证了提取物的质量，且质量控制方法简便易行、准确灵敏、重现性好、使用范围广，可用于检验、评价枇杷花及其产品质量控制。邓晶晶等，枇杷花镇咳祛痰和抗炎的药效学研究，时珍国医国药2006年第17卷第12期，报道了通过对小鼠氨水引咳的镇咳试验，小鼠气管酚红法，抗二甲苯致小鼠耳肿胀作用，证明枇杷花水提取物和50％的醇提取物均具有镇咳、祛痰、抗炎作用。

咽炎是指咽部粘膜发炎，主要由链球菌、肺炎球菌、葡萄球菌、鼻病毒、柯萨奇病毒、埃柯病毒等，通过飞沫或直接接触传染。咽炎的发病病因复杂，受凉、疲劳、烟酒过度、长期受化学气体及粉尘等刺激，或因鼻窦炎等影响，使抵抗力减弱，细菌或病毒乘虚而入，均可导致咽炎。咽炎分急性咽炎和慢性咽炎。

急性咽炎是咽粘膜，并波及粘膜下及淋巴组织的急性炎症，常继发于急性鼻炎或急性扁桃体之后或为上呼吸道感染之一部分，亦常为全身疾病的局部表现或为急性传染病之前驱症状。急性咽炎先有咽干不适或灼热感，渐有疼痛，吞咽时加重；全身可有头痛、食欲不振、发热等，咽部粘膜呈弥漫性充血、肿胀，咽腭弓、悬雍垂可水肿，咽后壁淋巴滤泡红肿，化脓者在滤泡中央出现黄白色小点，下颌淋巴结肿大，有压痛，小儿有时发生疱疹性咽炎，于软腭及舌腭弓有疱疹出现，初为黄色小疱，破裂后成糜烂面，可有咳嗽，咯黄白色痰，严重时可痰中带血(实为咽部炎性分泌物，并非从气管和支气管来)。

慢性咽炎是咽部黏膜、黏膜下层及淋巴组织的慢性炎症，视其病变情况，可分为单纯性、增生性和萎缩性三种类型。慢性咽炎的发病原因很多，如急性咽炎反复发作和邻近器官疾病(慢性扁桃体炎、牙龈炎、慢性鼻炎、慢性鼻窦炎)等都可引起。外因气候寒冷干燥，工作环境中的空气被粉尘、化学气体污染，烟酒和辛辣饮食长期刺激，以及由于职业因素而用嗓过多的人都易患慢性咽炎。此外，长期生活不规律、疲劳、精神紧张，可使身体抵抗力下降，细菌和病毒容易反复感染，也会引起慢性咽炎。慢性咽炎咽部不适感或异物感，干燥，瘙痒感，灼热感，微痛感，咽部有痰等，但不妨碍进食；异物梗塞感于吞咽唾液时明显，但进干性食物时则不明显，以上感觉常可致短促而频繁的咳嗽，晨起较剧，并且容易引起恶心；在用嗓过度、气候突变或吸入干冷的空气时及烟酒后，上述症状均可加重，检查可见咽部粘膜慢性充血，咽后壁干燥或淋巴滤泡增生。综上，慢性咽炎的主要症状是咽部有异物感，咽部干燥、咳嗽等不是主要症状。

慢性咽炎的病情常反复发作，经久不愈，治疗上有一定难度，除微生物感染外，化学物质的刺激也可以导致咽部炎症。费刚，慢性咽炎病因浅析，中国中西医结合耳鼻喉科杂志2008年第16卷第1期，其中公开了影响慢性咽炎的多种病因，如慢性扁桃体炎、鼻部疾病、变应性疾病、胃-食管疾病、心理、精神疾病，其中诊治过程中的难点在于如何降低疾病的复发、如何及早控制症状。此外，慢性咽部很大一部分不是由于细菌引起的，而是由于一些长期的物理化学刺激所造成的。

目前治疗慢性咽炎的方法很多，如西医一般主张用口泰、复方硼砂溶液等漱口液，含服华素片、安吉含片等。这些药物长期使用会导致口腔内环境紊乱。对于肥厚增生性咽炎，可采用激光、微波、冷冻等方法。但这些疗法目前有滥用趋势，门诊经常见到因手术后咽部瘢痕严重增生、挛缩而病情加重前来就诊的病人。慢性咽炎的病因较为复杂，病情常反复发作，经久不愈，治疗上有一定难度，慢性咽炎非常难治愈，只能是缓解症状，目前，中医在医疗慢性咽炎方面，较西医能够改善病情。

临床中，镇咳、祛痰针对的是具体的症状，

咽炎针对是具体的适应症，它的病因、病症复杂，虽然咽炎中可能伴有咳嗽，痰多的症状，但是镇咳、祛痰并非是治疗咽炎的必要条件，也非咽炎的主要治疗症状。

抑菌、抗炎是一个广义的概念(其治疗范围可能包括全身各个部位)，它是通过体外实验进行检测的，抗炎就是应用各种手段抑制炎症的发生发展，手段也较多，比如因感染导致的炎症，就要抗感染治疗。抗咽炎是一个狭义的概念，指咽部发生炎症后应用某些手段控制咽部的炎症，缓解咽部不适等症状。抗炎治疗不一定能够治疗咽炎。同样地，具有抑菌作用的药物不一定能针对具体病变部位发挥抑制功效，在人体的吸收、代谢、发挥抑菌作用，是比较复杂的，甚至有文献报道慢性咽炎一般不需要使用抗生素治疗，它并非细菌感染引起的。徐伶，56例慢性咽炎咽分泌物培养，湖北民族学院学报，医学版，2007年第24卷第1期，通过对慢性咽炎患者咽后壁分泌物进行细菌培养和药敏试验，证明慢性咽炎细菌感染不是慢性咽炎的主要病因。

综上所述，虽然公开了枇杷花具有镇咳、祛痰、抑菌、抗炎的作用，但由于咽炎的病因、病机和临床表现复杂多样，用于镇咳、祛痰、抑菌的药物不一定能用于治疗咽炎，它们之间并非存在对应关系。

发明内容

本发明的技术方案是提供了枇杷花的新用途。具体地，是用于制备治疗咽炎的药物中的用途。本发明的另一技术方案是提供了一种治疗咽炎的药物组合物及其制备方法。

本发明提供了枇杷花Eriobotrya japonica Lindl及其提取物在制备治疗咽炎的药物中的用途。

其中，所述的药物是治疗慢性咽炎的药物。

其中，所述的药物是治疗单纯性咽炎的药物。所述的药物是治疗单纯性咽炎或非细菌性咽炎nonbacterial pharyngitis的药物。

其中，所述的枇杷花提取物为枇杷花水提取物、有机溶剂提取物。

其中，所述的枇杷花有机溶剂提取物为95％-80％乙醇提取物与65％-40％乙醇提取物的混合物。

本发明提供了一种枇杷花提取物，其中齐墩果酸占提取物的重量百分含量为0.5-1.5％，熊果酸占提取物的重量百分含量为1.5-4.5％，总黄酮占提取物的重量百分含量为13-40％。它是由95％-80％和65％-40％乙醇采用二步法提取得到。

本发明还提供了该杷花提取物的提取方法，它包括如步骤：

a、称取干燥枇杷花，先用95％-80％乙醇作为提取溶剂，固液体积比为1：(6-12)，温度60-100℃，提取；

b、残渣再用65％-40％乙醇作为提取溶剂，固液体积比1：(6-12)，温度60-100℃；

c、提取后，将提取液过滤，合并滤液进行浓缩至比重为1.05-1.45，作为干燥备用枇杷花提取物。

本发明还提供了一种治疗咽炎的药物组合物，它是由枇杷花提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅料性成分制备而成的制剂。

其中，所述的药剂为口服液、片剂、胶囊剂、丸剂、滴丸剂、散剂、颗粒剂、煎膏剂、糖浆剂、合剂或茶剂。

本发明枇杷花提取物用于治疗咽炎，尤其针对慢性咽炎，药效明确；采用本发明方法制备的药物组合物，药效明显优于已有制剂，且可控性强，为临床提供了一种新的选择。

具体实施方式

实施例1本发明药物的制备

称取约100g的干燥枇杷花，先用90％乙醇作为提取溶剂，固液比1：6，温度90℃，提取至无熊果酸和齐墩果酸检出；残渣再用40％乙醇作为提取溶剂，固液比1：12，温度90℃，提取至无总黄酮检出。提取后，将提取液过滤，浓缩至比重约为1.22，干燥，得枇杷花提取物。

实施例2本发明提取物的制备

称取约100g的干燥枇杷花，先用80％乙醇作为提取溶剂，固液比1：12，温度100℃，提取至无熊果酸和齐墩果酸检出；残渣再用40％乙醇作为提取溶剂，固液比1：6，温度100℃，提取至无总黄酮检出。提取后，将提取液过滤，浓缩至比重约为1.45，干燥，得枇杷花提取物。

实施例3本发明提取物的制备

称取约100g的干燥枇杷花，先用95％乙醇作为提取溶剂，固液比1：8，温度60℃，提取至无熊果酸和齐墩果酸检出；残渣再用65％乙醇作为提取溶剂，固液比1：12，温度80℃，提取至无总黄酮检出。提取后，将提取液过滤，浓缩至比重约为1.05，干燥，得枇杷花提取物。

实施例4本发明提取物的提取方法参数选择试验

试验方法：称取约100g的干燥枇杷花，分别用水，50％乙醇，80％乙醇，90％乙醇作为提取溶剂，提取至无熊果酸和齐墩果酸检出；实验结果见下表，90％乙醇的效果最好。

检测方法：熊果酸和齐墩果酸和总黄酮的测定方法按专利申请号：200610022453.X公开的方法进行测定。

测定结果为：

将残渣再用乙酸乙酯、甲醇、95％乙醇、65％乙醇、40％乙醇、水回流提取作为提取溶剂，提取至无总黄酮检出，实验结果表明40％的乙醇效果最好：

表2溶剂对提取枇杷花中总黄酮影响

测定实施例1-3制备的本发明枇杷花提取物，其中各指标成份的含量为：齐墩果酸的含量在0.5-1.5％，熊果酸的含量在1.5-4.5％，总黄酮的含量在13-40％。

专利申请号：200610022453.X中的含量为齐墩果酸的含量在4-10mg/g(0.4-1％w/w)，熊果酸的含量在15-40mg/g(1.5-4％w/w)，总黄酮的含量在50-350mg/g(5-35％w/w)。

本发明枇杷花提取物与之相比，其中指标成分的含量范围不相同。

实施例5本发明药物糖浆剂的制备

枇杷花提取物(实施例1制备)低温干燥，粉碎，每30g加入适量60％乙醇，单糖浆和苯甲酸钠适量制成1000ml，搅匀，灌装，即得。

实施例6本发明药物散剂的制备

枇杷花提取物(实施例1制备)低温干燥，粉碎成细粉，过筛，按设计计量分装，即得。

实施例7本发明药物丸剂的制备

枇杷花提取物(实施例1制备)，过筛，每100g加入炼蜜120～140g制成小蜜丸，即得。

实施例8本发明药物煎膏剂的制备

取枇杷花(实施例1制备)100g，加水煎煮三次，每次2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩成相对密度1.21～1.25(80～85℃)的清膏。每100g清膏加炼蜜200g，加热溶化，混匀，浓缩至规定相对密度，制成1000g，即得。

实施例9本发明药物茶剂的制备

将枇杷花提取物(实施例1制备)浓缩至相对密度为1.08～1.10(60℃)的药液，1000ml加入2000g干燥枇杷花粗粉吸附药液，干燥，与适量茶叶混匀，分装入茶袋，即得。

实施例10本发明药物片剂的制备

取100g枇杷花提取物(实施例2制备)，粉碎过100目筛，另取淀粉45克，糊精32克，蔗糖10g，分别粉碎过100目筛，上述原料混匀，加水制成软材，过30目制粒，60℃以下干燥，30目整粒，加滑石粉10g，硬脂酸镁3g，混匀，压制成1000片，包衣，即得。

实施例11本发明药物滴丸剂的制备

取1份枇杷花提取物(实施例1制备)，另取3～7份PEG6000。PEG6000加热至约120℃，加入枇杷花提取物细粉，不断搅拌使全部熔融，趁热过滤，置贮液瓶中，60～120℃下保温，用滴管滴制，滴速为每分钟50～80滴，滴入含43％煤油的液体石蜡(外层为冰水浴)冷却液中，冷凝成丸，以液体石蜡洗丸，至无煤油味，用毛边纸吸去粘附的液体石蜡，即得。

实施例12本发明药物硬胶囊剂的制备

取枇杷花提取物(实施例1制备)50～100g、淀粉350～400g、糊精50～100g、蔗糖50～100g，混匀制成颗粒。60℃以下干燥，加入滑石粉4～8g，硬脂酸镁0.5～2g，混匀，装空心胶囊，即得。

实施例13本发明药物软胶囊的制备

软胶囊的内容物制法：取枇杷花提取物(实施例1制备)1份，加入到2～5份PEG400中；或加入到2～5份含有0.5％～4％的蜂蜡的植物油中。

软胶囊胶皮制法：胶皮：水：甘油＝1：1：0.3～0.5。

实施例14本发明药物口服液的制备

将枇杷花提取物(实施例1制备)浓缩至相对密度为1.08～1.10(60℃)的药液，加入适量蔗糖(或葡萄糖)、香精、防腐剂、水等混匀，灌封，灭菌，包装，即得。

实施例15本发明药物颗粒剂的制备

将枇杷花提取液(实施例1制备)浓缩至相对密度为1.40～1.45(60℃)的稠浸膏，加蔗糖和糊精适量，混匀，制成颗粒，或者直接取枇杷花提取物，加蔗糖和糊精适量，少量水混匀，制成颗粒，干燥即得。

以下通过药效学试验及临床试验证明本发明的效果。

试验例1本发明药物临床试验

1、受试人数：65人。

2、临床表现：慢性咽炎患者病状繁多，如：咽干、微痛、异物感、咽痒、灼热感、紧束感、撑胀感及干咳、黏痰等，检查咽部可见咽部黏膜慢性充血、肿胀，侧索肥厚，咽后壁淋巴颗粒增大及干燥等。为了便于观察，以咽部微痛感、干燥感和异物感作为代表性症状。

3、诊断及疗效标准：参照中华人民共和国中医药行业标准《中医药症诊断疗效标准》(ZY/001、1-001、9-94)，制定诊断标准如下：①有一个或一个以上的代表性症状，病史2年以上，反复发作；②检查咽部黏膜慢性充血、呈暗红色、肿胀、肥厚、干燥及咽后壁淋巴组织增生等现象；③排除咽喉及食道肿瘤者。

4、治疗方法：

将枇杷花提取物(由实施例1方法制备)按照1倍剂量(2.5g/kg/日)给患有慢性咽炎的患者服用，一日三次。

5、治疗结果：

完全治愈(自觉症状和体征消失)的40人，治愈率为61.5％；显效(自觉症状大部分消失，体征明显好转)的22人，3人无效。总有效率为95.4％。

综上所述，本发明药物治疗咽炎，尤其是治疗慢性咽炎，有显著的效果，说明枇杷花Eriobotrya japonica Lindl及其提取物在治疗咽炎方面，具有明显的效果。

试验例2枇杷花水提取物的临床试验

将枇杷花约16-24g用三倍的水煎煮三次后，合并煎煮液，给患有慢性咽炎的患者服用，一日三次。按试验例1所述的方法进行诊断治疗判断，试验结果为：

完全治愈(自觉症状和体征消失)的15人，治愈率为42.9％；显效(自觉症状大部分消失，体征明显好转)的13人，7人无效。总有效率为80％。

综上所述，本发明药物治疗咽炎，尤其是治疗慢性咽炎，有显著的效果，说明枇杷花Eriobotryajaponica Lindl及其提取物在治疗咽炎方面，具有明显的疗效。

试验例3本发明药物药效实验

将实施例1制备的枇杷花提取物与申请号：200610022453.X所述方法制备的枇杷花提取物进行对比，

1材料与试剂：

供试品(药液)：枇杷花提取物(由实施例1制备)由四川师范大学生命科学学院配制。

对照品：按申请号：200610022453.X所述的方法制备；

复方磷酸可待因口服溶液(4.5mg/mL)：又名联邦止咳露，香港奥美制药厂生产，批号：20070005；

羧甲基纤维素钠：由上海三浦化工有限公司生产，批号为：20040902。

小鼠(KM)：由四川省医学科学院实验动物研究所(许可证号：SCXK(川)2004-15)提供。

2方法：

采用小鼠氨水引咳法。雌雄小鼠各半随机分组，分别灌胃给药，灌胃体积为25mL·kg，每天1次，连续6d。于最后一次灌胃后1h，在通风较好的环境中，将小白鼠放入容积为1000ml的烧杯中，烧杯口用保鲜膜密闭，通过超声波雾化器将氨水雾化后由底部均匀地喷入钟罩内(雾化器雾化量及排风量均设为50％，喷雾口径为1cm×1cm)，持续喷雾60S，氨水浓度为13％。在通入氨气的同时，用秒表开始计时，记录小白鼠咳嗽潜伏期(由通入氨气开始至小鼠发生咳嗽所需要的时间为潜伏期)及三分钟内的咳嗽次数。咳嗽的表现为：张大口或张小口时伴有咳嗽声，均可见腹肌收缩。

统计学处理：

分析采用SPSS13.0软件进行统计分析，数据以x±s表示，组间比较采用LSD-t检验。

3结果分析与讨论：

表3枇杷花对氨水致小鼠咳嗽的影响(x±s)

试验结果显示，2倍剂量和1倍剂量的本发明药物提取物(5、2.5g(原生药)/kg·d)具有显著的药效，与同等剂量的对照品相比，对照品没有相应的药效。

再次将对照品进行药效剂量筛选试验，见下表：

上表可知，在对照品使用剂量为24g(原生药)/kg·d时，才具有药效。本对照品相比，本发明枇杷花提取物的用量明显降低。

进一步将本发明提取物与对照品中的指标成分进行比较，见下表：

就低倍剂量而言，本发明枇杷花90％乙醇和40％乙醇提取物有很好的效果，75％乙醇枇杷花提取物效果不显著，而在专利200610022453.X中高倍剂量两种提取物都有效。

综上，本发明提取方法采用了两步提取法，两步提取法获得的提取物的有效成分与对比文件(200610022453.X)中的提取方法获得的提取物的有效成分不相同，本发明药物提取物用于小鼠的咳嗽实验，在一倍剂量组时就可获得了较好的止咳效果，而对比文件中的提取物在(24/2.5)9.6倍剂量组才获得较好的止咳效果，而在一倍剂量组时无效。

Claims (13)

1.枇杷花及其提取物在制备治疗咽炎的药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗慢性咽炎的药物。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗单纯性咽炎或非细菌性咽炎的药物。

4.根据权利要求1-3任一项所述的用途，其特征在于：所述的枇杷花提取物为枇杷花水提取物或有机溶剂提取物。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述的枇杷花有机溶剂提取物为95％-80％乙醇提取物与65％-40％乙醇提取物的混合物。

6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的枇杷花提取物中，齐墩果酸占提取物的重量百分含量为0.5-1.5％，熊果酸占提取物的重量百分含量为1.5-4.5％，总黄酮占提取物的重量百分含量为13-40％。

7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述的枇杷花提取物是由95％-80％和65％-40％乙醇采用二步法提取得到。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：枇杷花提取物的制备方法包括如下步骤：

a、称取干燥枇杷花，先用95％-80％乙醇作为提取溶剂，固液体积比为1∶(6-12)，温度60-100℃，提取；

b、残渣再用65％-40％乙醇作为提取溶剂，固液体积比1∶(6-12)，温度60-100℃；

c、提取后，将提取液过滤，合并滤液进行浓缩至比重为1.05-1.45，作为干燥备用枇杷花提取物。

9.一种制备枇杷花提取物的方法，其特征在于：包括如下步骤：

a、称取干燥枇杷花，先用95-80％乙醇作为提取溶剂，固液体积比为1∶(6-12)，温度60-100℃，提取；

b、残渣再用65％-40％乙醇作为提取溶剂，固液体积比为1∶(6-12)，温度60-100℃；

c、提取后，将提取液过滤，合并滤液进行浓缩至比重为1.05-1.45，作为干燥备用枇杷花提取物。

10.根据权利要求9所述的枇杷花提取物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

a、称取100g的干燥枇杷花，先用90％乙醇作为提取溶剂，固液比为1∶6，温度90℃，提取至无熊果酸和齐墩果酸检出；

b、残渣再用40％乙醇作为提取溶剂，固液比为1∶12，温度90℃，提取至无总黄酮检出；

c、提取后，将提取液过滤，浓缩至比重为1.22，干燥，得枇杷花提取物。

11.权利要求10所述的方法制备得到的枇杷花提取物，其特征在于：其中齐墩果酸占提取物的重量百分含量为0.85％，熊果酸占提取物的重量百分含量为3.89％，总黄酮占提取物的重量百分含量为29.63％。

12.一种治疗咽炎的药物组合物，它是由权利要求11所述的枇杷花提取物为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅料性成分制备而成的制剂。

13.根据权利要求12所述的药物组合物，其特征在于：所述的制剂为口服液、片剂、胶囊剂、丸剂、滴丸剂、散剂、颗粒剂、煎膏剂、糖浆剂、合剂或茶剂。