CN114748555B - 沉香叶水提取物强效部位在制备改善心肌缺血再灌注损伤药物中的应用 - Google Patents

沉香叶水提取物强效部位在制备改善心肌缺血再灌注损伤药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了沉香叶水提取物强效部位在制备改善心肌缺血再灌注损伤药物中的应用，所述沉香叶水提取物强效部位用下述步骤制成：沉香树叶用10~50质量倍的水浸泡20‑40 min，回流提取30‑120 min，过滤，重复回流提取2‑5次，合并滤液，经型号为HPD‑100大孔吸附树脂柱层析色谱，用水进行洗脱，减压浓缩，冷冻干燥，得沉香叶水提取物强效部位。实验证明，沉香叶水提取物强效部位可显著缓解大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤，其活性更强，安全范围更广。

Description

沉香叶水提取物强效部位在制备改善心肌缺血再灌注损伤药 物中的应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，特别涉及一种沉香叶水提取物强效部位在制备改善心肌缺血再灌注损伤药物中的应用。
背景技术
医学研究发现，在缺血性疾病治疗过程中，缺血组织或细胞恢复血液供应后，过量的自由基攻击重新获得血液供应的组织细胞，进而造成该部分组织细胞较缺血时进一步的损伤，这种损伤称为“缺血/再灌注损伤”，该损伤可引起器官功能进一步恶化。因此，研发出改善缺血/再灌注损伤的药物是缺血性疾病治疗过程中不可缺少的一部分。
缺血/再灌注损伤与多种疾病的发生发展密切相关（H. Groot等.Transplantation Proceedings, 2007, 39: 481-484; C. D. Collard等,Anesthesiology, 2001, 94: 1133-1138），其中在缺血性心脏病治疗过程中产生的缺血/再灌注损伤是最为常见的病症之一，改善缺血/再灌注损伤是治疗缺血性心脏病的重要手段（D. J. Hausenloy等，Nature Reviews Cardiology, 2016, 13: 193-209）。因此，研发改善缺血/再灌注损伤的创新型药物将成为治疗缺血性心脏病的重要突破口，也是目前新型药物研发与病理机制的研究热点。
沉香来源于瑞香科（Thymelaeaceae）沉香属（Aquilaria）植物，其作为传统香料和名贵中药，已有上千年的应用历史。作为传统中药，沉香味辛、苦，性微温。归脾、胃、肾经，具有行气止痛，温中止呕，纳气平喘的功效。用于胸腹胀闷疼痛，胃寒呕吐呃逆，肾虚气逆喘急。但沉香产香周期长，来源少，限制了沉香药材的应用。然而，沉香叶资源丰富，产量大，周期短，但其药用价值尚有待进一步开发，具有较大的潜在开发价值。近年来，沉香叶的产品开发应用主要见于沉香茶的制作。关于沉香叶的研究也日渐丰富（许利嘉等，中国现代中药，2021, 23:1525-1533）。研究表明，沉香叶提取物具有多种药理活性，包括抗氧化、抗炎、降血糖及调血脂等，在平喘、抗炎镇痛及降血糖作用方面与沉香效果相当甚至略优。然而，由于沉香叶相关的研究起步较晚，目前对于沉香叶的生物活性和保健功效的研究尚停留在初级探索阶段，关于其在治疗心肌缺血/再灌注损伤及保护心血管系统方面的功能及应用尚未见相关报道。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供沉香叶水提取物强效部位在制备改善心肌缺血再灌注损伤药物中的应用。
本发明的技术方案概述如下：
沉香叶水提取物强效部位在制备改善心肌缺血再灌注损伤药物中的应用；所述沉香叶水提取物强效部位用下述步骤制成：沉香树叶用10~50质量倍的水浸泡20-40 min，回流提取30-120 min，过滤，重复回流提取2-5次，合并滤液，经型号为HPD-100大孔吸附树脂柱层析色谱，用水进行洗脱，减压浓缩，冷冻干燥，得沉香叶水提取物强效部位。
本发明的优点：
实验证明，沉香叶水提取物强效部位可显著改善大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤，其活性显著强于沉香叶水提取物，扩大了沉香树种的药用使用范围，有效利用沉香树种的可再生药用资源。
附图说明
图1为沉香叶水提取物强效部位和芒果苷的高效液相色谱图。
图2为沉香叶水提取物及其强效部位改善心肌细胞缺氧/复氧损伤活性。
具体实施方式
我们在对沉香叶生物活性研究方面，发现沉香叶水提取物具有一定的改善心肌缺血再灌注损伤的功能。经文献调研发现，有报道沉香叶中含有芒果苷，而芒果苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。为锁定沉香叶水提取物中的活性成分，我们采用大孔吸附树脂柱色谱对沉香叶水提取物进行分离，随后意外地发现，大孔吸附树脂水洗脱部位表现出最强的改善心肌缺血再灌注损伤活性，提示我们该沉香叶水提取物大孔树脂柱色谱水洗脱部位为改善心肌缺血再灌注损伤的强效部位，经高效液相色谱对比分析发现，该大孔吸附树脂水洗脱部位并不含有芒果苷。
下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述, 但本发明的实施方式不限于此。
本实验所用沉香Aquilaria sinensis树叶为市售。
芒果苷标准品采购自中国药品生物制品检定所。
实施例1
沉香叶水提取物的制备：
取100g沉香树叶用3000g水浸泡30 min，回流提取90 min，过滤，重复回流提取3次，合并滤液，减压浓缩，冷冻干燥，得沉香叶水提取物，编号为A。
实施例2
沉香叶水提取物的制备：
取100g沉香树叶用1000g水浸泡40 min，回流提取120 min，过滤，重复回流提取5次，合并滤液，减压浓缩，冷冻干燥，得沉香叶水提取物，编号为B。
实施例3
沉香叶水提取物的制备：
取100g沉香树叶用5000g水浸泡20 min，回流提取30 min，过滤，重复回流提取2次，合并滤液，减压浓缩，冷冻干燥，得沉香叶水提取物，编号为C。
实施例4
沉香叶水提取物强效部位用下述步骤制成：取100g沉香树叶用3000g水浸泡30min，回流提取90 min，过滤，重复回流提取3次，合并滤液，经型号为HPD-100大孔吸附树脂柱层析色谱，用10倍柱体积的水进行洗脱，减压浓缩，冷冻干燥，得沉香叶水提取物强效部位，编号为D。
实施例5
沉香叶水提取物强效部位用下述步骤制成：取100g沉香树叶用1000g水浸泡40min，回流提取120 min，过滤，重复回流提取5次，合并滤液，经型号为HPD-100大孔吸附树脂柱层析色谱，用10倍柱体积的水进行洗脱，减压浓缩，冷冻干燥，得沉香叶水提取物强效部位，编号为E。
实施例6
沉香叶水提取物强效部位用下述步骤制成：取100g沉香树叶用5000g水浸泡20min，回流提取30 min，过滤，重复回流提取2次，合并滤液，经型号为HPD-100大孔吸附树脂柱层析色谱，用10倍柱体积的水进行洗脱，减压浓缩，冷冻干燥，得沉香叶水提取物强效部位，编号为F。
经高效液相色谱分析（色谱柱：Grace C18 5μm 5 × 250 mm；流动相：乙腈-水；色谱梯度：0~40 min, 乙腈:水5:95~100:0），结果显示，实施例4~6获得的沉香叶水提取物强效部位(D~F)主要成分基本一致，且不含芒果苷（见图1）。
实施例7
沉香叶水提取物及沉香叶水提取物强效部位改善心肌细胞缺氧/复氧损伤活性评价
大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型是研究改善心肌缺血再灌注损伤药物的一个常用的细胞模型，因此本发明采用H9C2细胞缺氧/复氧损伤模型来考察待测物改善心肌缺血再灌注损伤的活性。
仪器：酶标仪、细胞培养箱、缺氧细胞培养箱
试剂：CCK8试剂盒（采购于北京翱擎生物科技有限公司）
实验步骤：
取生长状态良好且处于对数生长期的H9C2大鼠心肌细胞（采购于赛百慷生物技术股份有限公司），DMEM高糖培养基培养，浓度为1×104 cell/mL的细胞100µL，接种于96孔板内，在37 °C，5% CO2 培养箱中培养24 h。
对照组换为无糖DMEM培养基，并转移至缺氧细胞培养箱中缺氧6h（37℃，95% N2,5% CO2）后取出，用PBS润洗三遍，换成DMEM高糖培养基于37℃，5% CO2的培养箱中继续生长18h后，取出进行细胞存活率检测。
加药组换为含有50µg/mL不同药物的无糖DMEM培养基，并转移至缺氧细胞培养箱中缺氧6h（37℃，95% N2, 5% CO2）后取出，用PBS润洗三遍，换成含有50µg/mL不同药物的DMEM高糖培养基，于37℃，5% CO2的培养箱中继续生长18h后，取出进行细胞存活率检测。
采用CCK8试剂盒进行细胞存活率检测，按照CCK8检测试剂盒说明书标准操作步骤进行检测。细胞存活率=（加药组OD值-空白对照组OD值）/（对照组OD值-空白对照组OD值）×100%,（空白对照组:无细胞只加CCK-8溶液和培养基）。
实施例1~3制备的沉香叶水提取物（A~C）及实施例4~6制备的沉香叶水提取物强效部位(D~F)改善心肌细胞缺氧/复氧损伤活性，结果见图2。上述结果表明，沉香叶水提取物（A~C）及沉香叶水提取物强效部位(D~F)在50 μg/mL浓度下，均可显著改善心肌细胞缺氧/复氧损伤，但沉香叶水提取物强效部位（D~F）效果明显优于沉香叶水提取物（A~C）。

Claims (1)

1.沉香叶水提取物强效部位在制备改善心肌缺血再灌注损伤药物中的应用，所述沉香叶水提取物强效部位用下述步骤制成：沉香树叶用10~50质量倍的水浸泡20-40 min，回流提取30-120 min，过滤，重复回流提取2-5次，合并滤液，经型号为HPD-100大孔吸附树脂柱层析色谱，用水进行洗脱，减压浓缩，冷冻干燥，得沉香叶水提取物强效部位，提取产物中没有芒果苷。
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