CN104546884A - 一种白木香叶提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种白木香叶提取物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及中药提取领域，具体公开了一种白木香叶提取物及其制备方法和应用。本发明提取物含有如下六种成分：2-O-a-鼠李糖苷-4,6,4’.-三羟基二苯甲酮、3-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、芒果苷、3.5-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、5,4-二甲氧基-7-羟基黄酮、洋芹素-？7,？4’-二甲醚。所述的白木香叶提取物具有很好的抗炎镇痛作用，可用于制备抗炎镇痛药，该提取物中的有效成分明确，有利于用药安全。

Description

一种白木香叶提取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及中药提取领域，具体涉及一种白木香叶提取物及其制备方法和应用。
背景技术
白木香习称土沉香，主产于印度、马来西亚等国东南亚国家。盛产于我国岭南地区，是我国历史悠久的名贵中药材，也是重要的“南药”资源，位列“十大南药”之一，其药用部位来源为瑞香科植物白木香［Aquilaria sinensis( Lour．)Gilg.］含树脂的心材部分。现代临床常用于消化系统、神经系统以及心血管系统为主的多种疾病的治疗，具有良好的效果。各版《中国药典》对白木香均有收载，并且自2010版药典开始，白木香被规定为沉香药材唯一的法定植物来源。目前白木香资源的开发利用仅限于其药用部位（含树脂心材）的研究，而白木香叶作为该植物最为丰富的资源部位。
炎症，习惯被称为“发炎”，由于其具有侵袭易感、缠绵多发、愈后困难且易诱导多种继发性恶疾等诸多特点，历来是困扰人们身体健康的重大疾病之一。现代临床对于炎症的治疗多以抗生素为主，但大多数抗生素在针对疾病治疗的同时，对机体造成的毒副作用也是显而易见的。在此背景下，有关中药抗炎作用的研究则应运而生。中药在我国沿用历史悠久，其可靠性与安全性受到人们的一致好评，此外由于中药本身构成的繁杂性以及应用的多样性，致使中药作用具有长效应与多靶点的特征，对于现代临床各种顽疾具有良好的治疗效果。现代研究证明，大多数具有清热功效的中药，如黄芩、蒲公英、板蓝根等，都具有显著的抗炎效果，其活性部位中的生物碱类、黄酮苷类以及其他结构的多酚类化合物是这些中药抗炎作用的重要物质基础。因此，中药对于炎症的治疗具有确切的疗效，具有广阔的开发应用前景。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种具有抗炎镇痛作用的一种白木香叶提取物。
本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：
一种白木香叶提取物，含有如下六种成分：2-O-a-鼠李糖苷-4,6,4’.-三羟基二苯甲酮、3-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、芒果苷、3.5-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、5,4-二甲氧基-7-羟基黄酮、洋芹素- 7, 4’-二甲醚。
本发明通过了一系列的色谱技术，制备出具有优异抗炎活性的白木香叶提取物，并明确了提取物中的有效成分，有利于用药安全。上述化合物的结构式如下：
 
优选地，所述的六种成分的含量占提取物总重量的50~99%。
优选地，所述的提取物，含有提取物总重量1~15%的 2-O-a-鼠李糖苷-4,6,4’.-三羟基二苯甲酮、提取物总重量1~15%的3-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、提取物总重量20~80%的芒果苷、提取物总重量1~15%的3.5-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、提取物总重量1~15%的5,4-二甲氧基-7-羟基黄酮、提取物总重量1~15%的洋芹素- 7, 4’-二甲醚。
更优选地，所述的提取物，含有提取物总重量6~12%的 2-O-a-鼠李糖苷-4,6,4’.-三羟基二苯甲酮、提取物总重量6~12%的3-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、提取物总重量30~60%的芒果苷、提取物总重量6~12%的3.5-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、提取物总重量6~12%的5,4-二甲氧基-7-羟基黄酮、提取物总重量6~12%的洋芹素- 7, 4’-二甲醚。
最优选地，所述的提取物，含有提取物总重量8~12%的 2-O-a-鼠李糖苷-4,6,4’.-三羟基二苯甲酮、提取物总重量8~12%的3-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、提取物总重量45~55%的芒果苷、提取物总重量8~12%的3.5-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、提取物总重量8~12%的5,4-二甲氧基-7-羟基黄酮、提取物总重量8~12%的洋芹素- 7, 4’-二甲醚。
本发明还提供一种上述提取物的制备方法，其包含如下步骤：
S1. 称取干燥的白木香叶，加入乙醇，回流提取，浓缩提取液至无醇味后上大孔树脂；
S2. 先用水洗脱大孔树脂除杂，再用体积分数为30~60%的乙醇洗脱大孔树脂，收集乙醇洗脱部位，浓缩干燥即得白木香叶提取物。
优选地，S1.中的乙醇的体积分数为50~80%。
优选地，S2.中先用3~5倍柱体积的水洗脱除杂；再用3~5倍柱体积的乙醇洗脱大孔树脂。
本发明还提供一种上述提取物在制备抗炎镇痛药物中的应用。
有益效果：
    （1）本发明制备得到的白木香叶提取物具有很好的抗炎镇痛作用，其抗炎作用与醋酸地塞米松相当，在一些最佳实施例中甚至优于醋酸地塞米松；（2）本发明提取物明确了其中的有效成分，有利于用药安全；（3）本发明制备方法简单，适合于大规模的工业化生产。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
实施例1
称取干燥的白木香叶粉末1kg 分置于圆底烧瓶中，加入10倍量70%乙醇，回流3次，每次1h，滤过，合并滤液，将滤液浓缩至无醇味；过AB-8大孔树脂柱，控制流速度为2BV/h，先用5倍柱体积（5BV）的水洗脱大孔树脂除杂；然后用3倍柱体积60%的乙醇洗脱大孔树脂，收集乙醇洗脱部位浓缩干燥即得白木香叶提取物。
经检测，该提取物中含有6%的 2-O-a-鼠李糖苷-4,6,4’.-三羟基二苯甲酮、5%的3-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、40%的芒果苷、6%的3.5-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、14%的5,4-二甲氧基-7-羟基黄酮、13%的洋芹素- 7, 4’-二甲醚。
上述各成分的检测方法使用HPLC方法检测得到，检测条件为：
采用kromasil-C18色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸缓冲盐为流动相进行梯度洗脱，固定流速为0.8ml/min，进样量10μl，柱温为250C，检测波长为340nm。梯度洗脱程序见表1。
实施例2
称取干燥的白木香叶粉末1kg 分置于圆底烧瓶中，加入10倍量70%乙醇，回流3次，每次1h，滤过，合并滤液，将滤液浓缩至无醇味；过AB-8大孔树脂柱，控制流速度为2BV/h，先用5倍柱体积（5BV）的水洗脱大孔树脂除杂；然后用3倍柱体积50%的乙醇洗脱大孔树脂，收集乙醇洗脱部位浓缩干燥即得白木香叶提取物。
经检测（检测方法同实施例1），该提取物中含有8%的 2-O-a-鼠李糖苷-4,6,4’.-三羟基二苯甲酮、10%的3-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、45%的芒果苷、8%的3.5-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、12%的5,4-二甲氧基-7-羟基黄酮、10%的洋芹素- 7, 4’-二甲醚。
实施例3
称取干燥的白木香叶粉末1kg 分置于圆底烧瓶中，加入10倍量70%乙醇，回流3次，每次1h，滤过，合并滤液，将滤液浓缩至无醇味；过AB-8大孔树脂柱，控制流速度为2BV/h，先用5倍柱体积（5BV）的水洗脱大孔树脂除杂；然后用3倍柱体积40%的乙醇洗脱大孔树脂，收集乙醇洗脱部位浓缩干燥即得白木香叶提取物。
经检测（检测方法同实施例1），该提取物中含有10%的 2-O-a-鼠李糖苷-4,6,4’.-三羟基二苯甲酮、12%的3-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、52%的芒果苷、9%的3.5-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、4%的5,4-二甲氧基-7-羟基黄酮、6%的洋芹素- 7, 4’-二甲醚。
实施例4
称取干燥的白木香叶粉末1kg 分置于圆底烧瓶中，加入10倍量70%乙醇，回流3次，每次1h，滤过，合并滤液，将滤液浓缩至无醇味；过AB-8大孔树脂柱，控制流速度为2BV/h，先用5倍柱体积（5BV）的水洗脱大孔树脂除杂；然后用3倍柱体积30%的乙醇洗脱大孔树脂，收集乙醇洗脱部位浓缩干燥即得白木香叶提取物。
经检测（检测方法同实施例1），该提取物中含有6%的 2-O-a-鼠李糖苷-4,6,4’.-三羟基二苯甲酮、8%的3-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、65%的芒果苷、8%的3.5-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、3%的5,4-二甲氧基-7-羟基黄酮、4%的洋芹素- 7, 4’-二甲醚。
实施例5  白木香叶提取物对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响实验
取体重18～22g 的KM种小鼠70只，随机分为7组，即空白对照组、醋酸地塞米松组、实施例1~4白木香叶提取物组、白木香叶芒果总苷组，每组10只，雌雄各半。各组每天灌胃给药1次，连续给药6d，空白对照组给予0.1ml/10g生理盐水，其他各组给药剂量见表1。末次给药前禁食12h，给药1h后各组每只小鼠按0.1mL/10g尾静脉注射0.5%伊文思兰溶液，并按0.1mL/10g腹腔注射0.6%醋酸溶液。30min后将小鼠脱颈处死，剪开腹膜，用生理盐水冲洗腹腔，吸出洗涤液，离心10min，4000r/min，上清液定容至10ml，以生理盐水为空白对照，在610nm波长下测定OD值，实验结果见表2。
上述实验数据表明，本发明制备得到的白木香叶提取物能够显著抑制小鼠腹腔毛细血管通透性，具有显著的抗炎作用，且其抗炎作用与醋酸地塞米松相当，甚至抗炎作用优于醋酸地塞米松，尤其实施例2制备得到的白木香叶提取物效果尤为显著。与白木香叶芒果总苷组比较，本发明制备得到的提取物抗炎作用高于白木香叶芒果总苷，这是由于该提取物中的六种主要成分产生协同抗炎作用所致。上述实施例中的白木香叶芒果总苷是根据如下文献制备得到：张炜华等. 莞香叶芒果总苷的制备及其抗炎镇痛药效学研究.医学研究杂志.2014,03:48-51.
实施例6  白木香提取物对二甲苯致小鼠耳肿胀抑制作用
取体重18～22g的KM种小鼠70只，随机分为空白对照组、醋酸地塞米松组、实施例1~4白木香叶提取物组、白木香叶芒果总苷组共7组，每组10只，雌雄各半。各组给药方法同实施例5。末次给药前禁食12h，给药1h后，用微量移液器将40μl二甲苯准确涂布于每只小鼠右侧耳廓，左耳对照。20min后将小鼠脱颈处死，用直径8mm打孔器分别在两侧耳廓同一部位打孔，精密称取打下的耳片重量，以两侧耳片重量差表示肿胀度，并根据下式计算小鼠耳廓肿胀度和肿胀抑制率:
耳肿胀度= 右耳片重量—左耳片重量
肿胀抑制率=(空白对照组肿胀度—给药组肿胀度)/空白对照组肿胀度×100％
上述实验数据表明，本发明制备得到的白木香叶提取物可显著抑制二甲苯致炎小鼠的耳廓肿胀度，具有显著的抗炎作用，且其抗炎作用优于醋酸地塞米松，尤其实施例2制备得到的白木香叶提取物效果尤为显著。与白木香叶芒果总苷组比较，本发明制备得到的提取物抗炎作用高于白木香叶芒果总苷，这是由于该提取物中的六种主要成分产生协同抗炎作用所致。上述实施例中的白木香叶芒果总苷是根据如下文献制备得到：张炜华等. 莞香叶芒果总苷的制备及其抗炎镇痛药效学研究.医学研究杂志.2014,03:48-51. 

Claims (9)

1.一种白木香叶提取物，其特征在于，含有如下六种成分：2-O-a-鼠李糖苷-4,6,4’.-三羟基二苯甲酮、3-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、芒果苷、3.5-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、5,4-二甲氧基-7-羟基黄酮、洋芹素- 7, 4’-二甲醚。
2.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于，所述的六种成分的含量占提取物总重量的50~99%。
3.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于，含有提取物总重量1~15%的 2-O-a-鼠李糖苷-4,6,4’.-三羟基二苯甲酮、提取物总重量1~15%的3-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、提取物总重量20~80%的芒果苷、提取物总重量1~15%的3.5-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、提取物总重量1~15%的5,4-二甲氧基-7-羟基黄酮、提取物总重量1~15%的洋芹素- 7, 4’-二甲醚。
4.根据权利要求3所述的提取物，其特征在于，含有提取物总重量6~12%的 2-O-a-鼠李糖苷-4,6,4’.-三羟基二苯甲酮、提取物总重量6~12%的3-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、提取物总重量30~60%的芒果苷、提取物总重量6~12%的3.5-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、提取物总重量6~12%的5,4-二甲氧基-7-羟基黄酮、提取物总重量6~12%的洋芹素- 7, 4’-二甲醚。
5.根据权利要求4所述的提取物，其特征在于，含有提取物总重量8~12%的 2-O-a-鼠李糖苷-4,6,4’.-三羟基二苯甲酮、提取物总重量8~12%的3-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、提取物总重量45~55%的芒果苷、提取物总重量8~12%的3.5-C-葡萄糖苷-2,4,6,4’.-四羟基二苯甲酮、提取物总重量8~12%的5,4-二甲氧基-7-羟基黄酮、提取物总重量8~12%的洋芹素- 7, 4’-二甲醚。
6. 权利要求1~5任一项提取物的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：
S1. 称取干燥的白木香叶，加入乙醇，回流提取，浓缩提取液至无醇味后上大孔树脂；
S2. 先用水洗脱大孔树脂除杂，再用体积分数为30~60%的乙醇洗脱大孔树脂，收集乙醇洗脱部位，浓缩干燥即得白木香叶提取物。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，S1.中的乙醇的体积分数为50~80%。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，S2.中先用3~5倍柱体积的水洗脱除杂；再用3~5倍柱体积的乙醇洗脱大孔树脂。
9.权利要求1~6任一项所述的提取物在制备抗炎镇痛药物中的应用。
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