CN100496528C - 灯盏细辛药用成分的提取方法 - Google Patents

Abstract

灯盏细辛药用成分的提取方法，具体涉及生产灯盏细辛口服液过程中的提取和澄清技术。以灯盏细辛总黄酮含量为评价指标，采用正交试验法优化提取工艺条件，并优选出澄清剂。本发明方法为：取灯盏细辛粗粉，分别用7～10倍、5～8倍、4～6.5倍重量的65～80%乙醇提取3次，每次0.5～3.0小时，合并提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至为灯盏细辛粗粉重量的0.5～2倍，pH值调至4.5～6.7，加入0.5～2.5倍灯盏细辛粗粉重量的0.5～1.2%的蛋白干水溶液进行澄清处理。与原工艺相比，本发明方法在使用成本增加不多的前提下，提取收率可提高13.3%，经澄清处理后总黄酮收率可为原工艺的2.3倍，且减少澄清处理量及次数，从而缩短了生产时间，达到提高收率及提高产品质量的目的。工艺重现性好，产品质量稳定。

Description

灯盏细辛药用成分的提取方法

技术领域

本发明属天然植物药用成分的提取技术，具体涉及生产灯盏细辛口服液过程中的药用成分提取方法，所说药用成分提取方法包括提取液的获得和澄清方法。

灯盏细辛是菊科植物短亭飞蓬[Erigeron breviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.]的全草。从灯盏细辛中提取药用成分配制而成的制剂——灯盏细辛口服液，临床上可用于治疗瘀血症脑梗塞所致偏瘫、风湿痛、冠心病、心绞痛，眼底视网膜静脉阻塞，血管炎性皮肤病。本专利申请人现已取得灯盏细辛口服液的生产批准文号。该产品技术质量要求为：含量以总黄酮计为每10ml含70mg±10mg，颜色为棕黄色，液体澄清，PH值为5.0—8.0。

生产灯盏细辛口服液，必须对灯盏细辛的药用成分进行提取。提取工艺的关键在于制备半成品的总黄酮含量及除杂质后的澄清效果。现有工艺分别以10、6倍药材量80％乙醇提取二次，时间为1.5、1.0小时，采用提取液总量2％活性碳进行澄清处理，回收乙醇，浓缩至与药材等量后，再加入浓缩液量0.5％活性碳进行澄清处理，冷藏24小时，过滤即得。在实际生产过程中发现：提取原料按标准检验合格后，所制备半成品的总黄酮含量较低，在原料稳定的情况下，工艺波动性大、适应性差，常发生因总黄酮含量低于配制要求而需采取浓缩等措施以适应生产，造成产品收率低，且易产生沉淀，质量不稳定。

从灯盏细辛中提取灯盏花乙素的工艺研究虽已有报道(见李廷钊等：灯盏细辛提取工艺的研究，中国医药工业杂志，2002，33(6)：281—282；以及见李勇军等：从灯盏花提取野黄芩苷的工艺研究，中成药，2004，26(10)855—856)，但灯盏细辛口服液是依据口服固体制剂益脉康片改剂型而来，其有效成分为灯盏细辛总黄酮，故工艺上有别于单一成分的提取(见杨文宇等：灯盏细辛注射液和灯盏花素的HPLC-DAD对比分析，中成药，2005，27(2)202—204)。作为以乙醇提取所得灯盏细辛提取液除含有效成分外，同时也存有叶绿素、鞣质、树脂等杂质，若不将这些大分子物质除去，就会影响制剂质量。采用活性碳纯化处理，因其吸附的无选择性，将会对总黄酮收率造成影响。关于对灯盏细辛提取液的澄清处理方法的技术方案目前尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于为生产灯盏细辛口服液提供一种灯盏细辛药用成分的提取方法，包括提取液的获得和澄清过程，该方法能让提取液在最大程度地保留有效成分的基础上增加澄清度。

本发明方法为：取灯盏细辛粗粉，分别用7～10倍、5～8倍、4～6.5倍重量的65～80％乙醇提取3次，每次0.5～3.0小时，合并提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至为灯盏细辛粗粉重量的0.5～2倍，PH值调至4.5～6.7，加入0.5～2.5倍灯盏细辛粗粉重量的0.5～1.2％的蛋白干水溶液进行澄清处理。

进一步优化的本发明方法为：取灯盏细辛粗粉，分别用7.5～8.5倍、5.5～6.5倍、5.5～6.5倍重量的65～80％乙醇提取3次，每次1.2～1.7小时，合并提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至为灯盏细辛粗粉重量的0.8～1.2倍，PH值调至5.6～6.7，加入1.8～2.2倍灯盏细辛粗粉重量的0.8～1.2％的蛋白干水溶液进行澄清处理。

最优化的本发明方法为：取灯盏细辛粗粉，分别用8倍、6倍、6倍重量的70％乙醇提取3次，每次1.5小时，合并提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至与灯盏细辛粗粉等重量，PH值调至6.5，加入2倍灯盏细辛粗粉重量的1％的蛋白干水溶液，加热煮沸，冷却至室温，冷藏，过滤。

以下用开发研究过程中的试验数据对本发明进行详细说明。

本工艺方法的开发研究以灯盏细辛总黄酮含量为评价指标，采用正交试验法优化提取工艺条件，并分别选用目前在中药澄清技术领域应用较为广泛的澄清剂——蛋白干、壳聚糖、ZTC—III型天然澄清剂及植物精提复合酶进行澄清处理，与原工艺使用的活性碳做除杂效果比较，优选出较佳的工艺及澄清剂。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Sartorius BP110S电子天平；岛津UV-2401PC紫外分光光度计；YB—2型澄明度检测仪(天津大学精密仪器厂)；SH010型恒温恒湿加速实验箱(上海实验仪器厂)；旋转蒸发仪SD—1000(TOKYO RIKAKIKAI Co.，Ltd.)。

1.2 药材

灯盏细辛购于云南鸿翔药业有限公司(产地云南文山)，符合1996年版云南省药品质量标准；

1.3 试药

芦丁对照品(0080—9804，中国药品生物制品检定所)；ZTC—III型天然澄清剂[津卫食准字(120)第3588-1号，天津正天成澄清技术有限公司提供]；蛋白干(食品级，中国粮油进出口公司)；活性炭(药用级，四川省绵阳市活性炭厂)；壳聚糖(食品级，上海伟康生物制品有限公司)；SPE—005型植物精提复合酶(宁卫食字(2004)第097号，宁夏夏盛实业集团有限公司提供)；其余试剂均为分析纯。

2 评价指标

芦丁作对照，以灯盏细辛总黄酮含量作为优化提取工艺条件的评价指标，以灯盏细辛总黄酮收率及澄清度作为澄清剂筛选的依据。

2.1 总黄酮含量的测定

2.1.1 芦丁对照品溶液的制备

精密称取芦丁对照品适量(相当于无水芦丁20mg)，置于100ml容量瓶中，加入60％乙醇溶液适量，置水溶液上微热使溶解，冷至室温，用60％乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取25ml，至50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得(每ml含无水芦丁0.1mg)。

2.1.2 标准曲线的制备

精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置10ml量瓶中，分别加30％乙醇溶液至5.0ml，分别精密加亚硝酸钠溶液(1→20)0.3ml摇匀，再放置6分钟，分别加氢氧化钠溶液4ml，用水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟，照分光光度法(中国药典2005版一部附录IIA)分别在510nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2.1.3 测定法  精密量取供试品溶液适量，置25ml量瓶中，用30％乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加30％乙醇溶液至5.0ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线中读出供试品溶液总黄酮的含量，计算，即得。

3 提取工艺研究方法与结果

3.1 预试验初步确定提取用乙醇浓度

称取灯盏细辛粗粉10g，加入10倍量的溶剂，回流提取2次，每次1小时，过滤，合并提取液，减压浓缩，用60％乙醇定容至50ml，用分光光度计按2.1.3测定法测定总黄酮含量。每个乙醇浓度平行实验3次，取平均值。考察0％、20％、40％、60％、80％、95％，6个乙醇浓度，结果显示60％——80％乙醇浓度提取效率较佳。

3.2 灯盏细辛总黄酮提取工艺的确定

3.2.1 正交试验设计

依据预试验结果，选定60％、70％、80％乙醇浓度，提取次数、回流提取时间和乙醇用量(相对药材的倍量)4个因素，每个因素选择3个水平(表1)，进行正交试验。

表1 灯盏细辛提取工艺因素水平表

由于考虑到所选因素相互之间存在的交互作用较小，故选取L9(3⁴)正交表进行正交试验。称取灯盏细辛粗粉10g，加入相应倍量的溶剂，回流提取，过滤，合并提取液，减压浓缩后再用60％乙醇定容至50ml，用分光光度计按2.1.3测定法测定总黄酮含量，实验设计及分析结果见下页中的表2。

表2 L9(3⁴)实验设计及分析结果

从表中进行直观分析，提取因素影响D>B>A>C，提取次数影响最大，乙醇用量因素影响最小。最佳工艺为A₂B₁C₁D₃。即10倍量70％乙醇，提取3次，每次1.5小时。其正交试验结果的方差分析见表3。

表3 以提取的总黄酮含量为指标正交试验结果方差分析表

从正交试验方差分析结果可知：乙醇用量对灯盏细辛总黄酮提取含量无显著性影响，乙醇浓度对灯盏细辛总黄酮含量有影响，提取时间及提取次数有显著影响。

3.2.2 乙醇用量验证及与原提取工艺对比实验

分别取灯盏细辛粗粉各100g，采用不同倍量组合70％乙醇提取3次，每次提取时间为1.5小时，过滤，合并提取液，减压浓缩后再用60％乙醇定容至500ml，摇匀，用分光光度计按2.1.3测定法测定总黄酮含量。

另取灯盏细辛粗粉100g，按原工艺进行提取，减压浓缩后再用60％乙醇定容至500ml，摇匀，用分光光度计按2.1.3测定法测定总黄酮含量。

每组平行实验3次，取平均值。结果见表4。

表4：乙醇用量验证及与原提取工艺对比实验结果

从乙醇用量验证及与原提取工艺对比实验证实：溶剂用量对灯盏细辛总黄酮提取含量无显著性影响。考虑生产实际，采用倍量为8、6、6倍70％乙醇提取3次，每次提取时间为1.5小时作为灯盏细辛总黄酮的最佳提取工艺。新工艺比原提取工艺收率提高13.3％。

4 澄清工艺研究方法与结果

4.1 原活性炭吸附处理工艺对总黄酮含量的影响考察

取灯盏细辛粗粉三份，按原工艺，用倍量分别为10、6倍80％乙醇提取2次，提取时间分别为1.5、1.0小时，合并提取液，称量，取样待测。加入提取液总量2％活性碳，搅拌，回流30分钟，冷却至室温，过滤，称量，取样待测。回收乙醇，浓缩至与药材等量后，再加入浓缩液量0.5％的活性碳回流15分钟，冷藏隔夜，过滤，称量，取样待测。样品用分光光度计按2.1.3测定法测定总黄酮含量。计算活性碳对总黄酮的吸附率及考察澄清度结果见表5。

表5 活性炭吸附澄清对总黄酮含量的影响考察实验结果

 

组号	2％活性炭吸附率(％)	0.5％活性炭吸附率(％)	澄清度	总黄酮收率(％)
					1	52.06	27.47	+	34.77
2	50.45	28.24	+	35.56
					3	53.59	26.63	+	34.05

注：“+”表示澄清，“-”表示混浊，“±”表示介于两者之间

总黄酮收率(％)＝(100％-2％活性炭吸附率)×(100％-0.5％活性炭吸附率)

通过对活性炭吸附处理工艺考察，结果显示：使用2％、0.5％活性炭进行二次吸附澄清处理，虽可得到澄清度较好的半成品，但总黄酮收率平均仅有34.79％，吸附造成有效成分损失较大，说明原工艺澄清处理方法对总黄酮含量影响较大。

4.2 预试验选择新的澄清处理方法

针对原工艺在澄清处理方法上存在的问题，选取目前在中药澄清技术领域应用较为广泛的澄清剂——蛋白干、壳聚糖、ZTC—III型天然澄清剂及植物精提复合酶进行澄清处理预试验，并与原工艺使用的活性碳做除杂效果比较，以选择较佳的澄清剂。

在实验过程中，对澄清处理后仍为混浊的溶液，不再测定其含量。

4.2.1 供试液的制备

取灯盏细辛粗粉，用倍量为8、6、6倍70％乙醇提取3次，每次提取时间为1.5小时，合并提取液，回收乙醇，并减压浓缩至与药材等量，备用。用分光光度计按2.1.3测定法测定总黄酮含量为37.68mg/ml，测定PH值为6.4。

4.2.2 澄清液的配制

①ZTC—III天然澄清剂(分为A、B两种组份)溶液：将A组份用纯化水配制成1％溶液，B组份用1％醋酸配制成1％溶液；

②蛋白干溶液：用纯化水配制成1％饱和溶液；

③壳聚糖溶液：用1％醋酸配制成1％溶液；

④植物精提复合酶溶液：用40℃纯化水(调整PH为4.8)，按1：10的比例稀释，活化5—10分钟；

4.2.3 ZTC—III天然澄清剂澄清效果考察

精密量取4.1制备的供试液8ml三份，根据澄清剂使用说明书，分别用水稀释至40ml(药材：提取液为1:5，定容至50ml总黄酮含量应为6.03mg/ml)，用稀硫酸调节PH为5，加热至80℃，分别加入4％、6％、8％药材量的ZTC—III天然澄清剂B溶液，搅拌均匀，于60℃分别加入2％、3％、4％药材量的A液，搅拌均匀，再加温至80℃保温20分钟，冷却至室温，冷藏隔夜，过滤，滤液加蒸馏水定容至50ml，摇匀，测定总黄酮含量及考察澄清度。见表6

表6 ZTC—III天然澄清剂澄清实验结果

 

组号	ZTC—III天然澄清剂用量A％；B％	总黄酮含量(mg/ml)	澄清度	总黄酮收率(％)
					1	2％；4％	4.48	±	74.30
2	3％；6％	3.76	+	62.35
					3	4％；8％	3.23	+	53.56

注：“+”表示澄清，“-”表示混浊，“±”表示介于两者之间

4.2.4蛋白干澄清剂澄清效果考察

精密量取4.1制备的供试液10ml三份，分别加入待处理药液体积1、2、3倍量1％蛋白干溶液，搅拌均匀，加热煮沸10分钟，冷却至室温，冷藏隔夜，过滤，滤液加蒸馏水定容至50ml(总黄酮含量应为7.54mg/ml)，摇匀，测定总黄酮含量及考察澄清度。见表7

表7 蛋白干澄清剂澄清实验结果

 

组号	1％蛋白干溶液用量	总黄酮含量(mg/ml)	澄清度	总黄酮收率(％)
					1	1倍量	6.42	±	85.14
2	2倍量	6.13	+	81.30
					3	3倍量	5.96	+	79.04

注：“+”表示澄清，“-”表示混浊，“±”表示介于两者之间

4.2.5 壳聚糖澄清剂澄清效果考察

精密量取4.1制备的供试液10ml四份，分别用水稀释至40ml(药材：提取液为1:4，定容至50ml后总黄酮含量应为7.54mg/ml)，加热至70℃，搅拌同时，按表8分别加入1％壳聚糖澄清剂溶液，保温20分钟，冷却至室温，冷藏隔夜，过滤，滤液加蒸馏水定容至50ml，摇匀，测定总黄酮含量及考察澄清度。见表8

表8 壳聚糖澄清剂澄清实验结果

 

组号	1％壳聚糖澄清剂用量	总黄酮含量(mg/ml)	澄清度	总黄酮收率(％)
					1	4ml	/	-	/
2	6ml	5.87	±	77.85
					3	8ml	4.91	+	65.12
4	10ml	4.07	+	53.98

注：“+”表示澄清，“-”表示混浊，“±”表示介于两者之间

4.2.6 植物精提复合酶澄清效果考察

精密量取4.1制备的供试液50ml三份，根据使用说明，用稀硫酸调节PH为5，加热至50℃，分别加入植物精提复合酶溶液4、5、6ml(相当于生药材量的0.4％，0.5％，0.6％)，同时搅拌，保温2小时后升温煮沸3分钟灭活，冷却至室温，冷藏隔夜，过滤，滤液加蒸馏水定容至50ml，摇匀，测定总黄酮含量及考察澄清度。见表9

表9 植物精提复合酶澄清实验结果

 

组号	植物精提复合酶用量	总黄酮含量(mg/ml)	澄清度	总黄酮收率(％)
					1	4ml	/	-	/
2	5ml	32.47		86.17
					3	6ml	29.61	±	78.58

注：“+”表示澄清，“-”表示混浊，“±”表示介于两者之间

4.2.7 结果分析

新的澄清处理方法预试验结果(表6—9)显示：对于ZTC—III天然澄清剂，采用药材量3％A组份和6％B组份溶液进行澄清处理，总黄酮收率为62.35％，是原活性碳澄清工艺的1.8倍；采用药材量2倍的1％蛋白干溶液进行澄清处理，总黄酮收率为81.30％，是原活性碳澄清工艺的2.3倍；采用药材量0.8％壳聚糖澄清剂进行澄清处理，总黄酮收率为65.12％，是原活性碳澄清工艺的1.9倍；上述三种方法所制备液体澄清稳定，采用植物精提复合酶进行澄清处理，得不到澄清溶液。

综合考虑总黄酮收率、澄清效果及成本因素，以蛋白干澄清处理方法总黄酮收率最高，成本最低，故选取蛋白干作为对灯盏细辛提取液进行澄清处理的澄清剂。

4.3 蛋白干澄清处理工艺条件优化实验

根据蛋白干澄清效果考察预实验结果及总黄酮性质，澄清处理应考虑PH的影响，故选择蛋白干澄清剂用量为待处理药液体积1.5、2倍量，用10％硫酸溶液或10％氢氧化钠溶液调节提取液的PH值，考察在不同PH条件下的澄清效果。结果见表10。

表10 蛋白干澄清剂在不同PH条件下澄清实验结果

注：“+”表示澄清，“-”表示混浊，“±”表示介于两者之间

从蛋白干澄清剂在不同PH条件下澄清实验结果显示：随着待处理液PH值升高，所得澄清液总黄酮的含量增加，但当PH为7时，蛋白干加热煮沸不产生变性凝聚现象，丧失澄清作用。蛋白干用量增加，所得澄清液总黄酮的含量降低。在PH为5.5时，采用药液体积1.5倍量的蛋白干溶液澄清处理，总黄酮收率为78.47％；在PH为6.5时，采用药液体积2倍量的蛋白干溶液澄清处理，总黄酮收率为82.12％，综合考虑成本及工艺的适应性，故选择蛋白干用量为药材的2倍量，在PH为6.5时进行澄清处理为最佳的工艺条件。

5.新工艺的验证实验及与原工艺的对比分析

分别取灯盏细辛粗粉500g各三份，按新工艺进行验证实验，结果见表11。

表11：新工艺验证实验结果

 

实验编号	澄清处理前总黄酮含量(mg/ml)	处理前液体得量(ml)	澄清处理后总黄酮含量(mg/ml)	处理后液体得量(ml)	澄清度	收率(％)
							1	38.96	500	10.69	1500	+	82.32
2	38.27	500	10.24	1500	+	80.27
							3	37.55	500	10.32	1500	+	82.45

注：①“+”表示澄清，“-”表示混浊，“±”表示介于两者之间

②为方便计算对比，将处理后液体用纯化水补至1500ml

新工艺验证实验结果与4.1原工艺实验结果对比分析可见：在采用同批原料的条件下，原工艺中总黄酮平均收率为34.79％，而新工艺总黄酮平均收率为81.68％，是原工艺的2.3倍，且制备液体澄清，含量符合配制要求，具有重现性。新工艺中蛋白干用量成本与原工艺中活性炭用量成本相当，并减少了澄清处理量及次数，缩短了生产时间，降低了成本。

将上述制备的半成品经配制、灌封、灭菌处理制成成品，于温度为(40±2)℃，相对湿度(75±5)％条件下进行六个月加速试验。结果见表12。

表12：灯盏细辛口服液稳定性加速试验考察

加速试验考察结果表明：用新的提取工艺所制备的灯盏细辛口服液质量稳定。

6 生产性验证和成品质量稳定性考察

6.1 生产性验证

取灯盏细辛粗粉100kg，置于多能提取罐内，分别采用8、6、6药材倍量70％乙醇提取3次，每次提取时间为1.5小时，过滤，合并提取液，减压回收乙醇，并浓缩至100L(为澄清处理前液体得量)，冷却至室温，用10％硫酸溶液调节PH值为6.5，加入200kgl％的蛋白干溶液，于敞口浓缩锅内搅拌混合均匀，蒸汽加热煮沸10分钟，冷藏15小时，过滤。滤液用分光光度计按2.1.3测定法测定总黄酮含量，按工艺参数连续生产三批，结果见表13。

表13：灯盏细辛总黄酮提取生产工艺验证结果

 

生产批号	澄清处理前总黄酮含量(mg/ml)	澄清处理后总黄酮含量(mg/ml)	液体得量(L)	澄清度	收率(％)
						20031101	35.13	10.97	255	+	79.63
20031102	36.48	11.04	268	+	81.10
						20031103	36.75	11.52	261	+	81.81

注：“+”表示澄清，“-”表示混浊，“±”表示介于两者之间

6.2 成品质量稳定性考察

将6.1中所得半成品加入矫味剂、防腐剂等辅料，按7mg/ml配制成口服液，经精滤、灌封、灭菌处理，于室温条件下进行长期稳定性考察，结果见表14。

表14：灯盏细辛口服液质量稳定性考察试验

从表13、14生产数据证实：新的灯盏细辛提取工艺在实际应用过程中重现性较好，成品经留样观察，在其有效期(18个月)内，质量稳定。

7 结论

7.1 以灯盏细辛总黄酮含量为评价指标，通过采用正交试验法对灯盏细辛提取工艺进行优化，得出以8、6、6倍70％乙醇，回流提取3次，每次提取时间为1.5小时的工艺参数为灯盏细辛口服液最佳的提取条件。

7.2 通过对原工艺中活性炭吸附澄清效果考察，结果显示：使用活性炭吸附澄清处理，虽成本最低，对叶绿素及除杂质虽然效果较好，可制备澄清度较好的半成品，但其吸附为无选择性吸附，总黄酮收率仅有34.79％，造成有效成分损失较大。

7.3 植物精提复合酶(SPE—005型)主要由纤维酶、果胶酶、木聚糖酶、β—葡聚糖酶及淀粉酶组成，除杂质选择性较强，专属性高。对有效成分保留量最大，但除弃叶绿素效果差。ZTC—III天然澄清剂、壳聚糖、蛋白干同为天然高分子化合物，其机理为与中药提取液中的蛋白质、鞣质等杂质发生分子间架桥作用，使胶体不稳定成分的分子增大，加快了从提取液中絮凝析出，三者都能使灯盏细辛提取液澄清，但以蛋白干澄清处理总黄酮收率最高，成本最低，澄清处理快捷方便，适合于大生产要求。故可以选择采用2倍药材量1％蛋白干溶液加入至调整PH为6.5的灯盏细辛提取液(药材：浓缩液为1:1)中，加热煮沸10分钟，冷却至室温，冷藏15小时，过滤，作为澄清处理的工艺。

7.4 考虑到灯盏细辛口服液最终以水溶液形式出现，且提取溶媒与澄清剂选择使用交互影响较大，以水作为提取溶媒，用蛋白干进行澄清处理的补充实验证实：所制备的半成品总黄酮含量明显低于醇提澄清工艺，且溶液颜色较深，经高效液相色谱分析，成分差异较大。这也证实了灯盏细辛口服液是依据口服固体制剂益脉康片改剂型而来，采用乙醇为提取溶媒的工艺合理性。

本发明的有益效果：与原工艺相比，本发明方法在使用成本增加不多的前提下，提取收率可提高13.3％，经澄清处理后总黄酮收率可为原工艺的2.3倍，且减少澄清处理量及次数，从而缩短了生产时间，达到提高收率及提高产品质量的目的。工艺重现性好，产品质量稳定。

具体实施方式

实施例1：取灯盏细辛粗粉，分别用7.5倍、6.5倍、5.5倍重量的65％乙醇提取3次，每次1.3小时，合并提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至为灯盏细辛粗粉重量的0.8倍，PH值调至6，加入1.8倍灯盏细辛粗粉重量的1.2％的蛋白干水溶液，加热煮沸12分钟，冷却至室温，冷藏16小时，过滤。该实施例总黄酮收率高，产品质量稳定。

实施例2：取灯盏细辛粗粉，分别用8.5倍、5.5倍、6.5倍重量的78％乙醇提取3次，每次1.6小时，合并提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至为灯盏细辛粗粉重量的1.2倍，PH值调至6.7，加入2.2倍灯盏细辛粗粉重量的0.8％的蛋白干水溶液，加热煮沸9分钟，冷却至室温，冷藏14小时，过滤。该实施例总黄酮收率高，产品质量稳定。

实施例3：取灯盏细辛粗粉，分别用8倍、6倍、6倍重量的70％乙醇提取3次，每次1.5小时，合并提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至与灯盏细辛粗粉等重量，PH值调至6.5，加入2倍灯盏细辛粗粉重量的1％的蛋白干水溶液，加热煮沸10分钟，冷却至室温，冷藏15小时，过滤。该实施例总黄酮收率高，产品质量稳定。

以上3个实施例中，又以实施例3的综合效果最佳。

实施例4：取灯盏细辛粗粉，分别用10倍、5倍、6倍重量的80％乙醇提取3次，每次0.6小时，合并提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至为灯盏细辛粗粉重量的0.6倍，PH值调至5，加入0.6倍灯盏细辛粗粉重量的1.2％的蛋白干水溶液进行澄清处理。

实施例5：取灯盏细辛粗粉，分别用7倍、8倍、4倍重量的65％乙醇提取3次，每次3小时，合并提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至为灯盏细辛粗粉重量的2倍，PH值调至6，加入2.5倍灯盏细辛粗粉重量的0.6％的蛋白干水溶液进行澄清处理。

实施例6：取灯盏细辛粗粉，分别用9倍、7倍、5倍重量的75％乙醇提取3次，每次1.5小时，合并提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至为灯盏细辛粗粉重量的1.5倍，PH值调至6.7，加入1.5倍灯盏细辛粗粉重量的0.9％的蛋白干水溶液进行澄清处理。

以上3个实施例的综合效果虽不如实施例3的，但它们的总黄酮收率和产品质量稳定性均优于现有技术。

以上实施例仅对发明做进一步的说明，本发明的范围不受其局限。

Claims (3)

1、一种灯盏细辛药用成分的提取方法，其特征在于：取灯盏细辛粗粉，分别用7～10倍、5～8倍、4～6.5倍重量的65～80％乙醇提取3次，每次0.5～3.0小时，合并提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至为灯盏细辛粗粉重量的0.5～2倍，PH值调至4.5～6.7，加入0.5～2.5倍灯盏细辛粗粉重量的0.5～1.2％的蛋白干水溶液进行澄清处理。

2、如权利要求1所说的药用成分的提取方法，其特征在于：取灯盏细辛粗粉，分别用7.5～8.5倍、5.5～6.5倍、5.5～6.5倍重量的65～80％乙醇提取3次，每次1.2～1.7小时，合并提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至为灯盏细辛粗粉重量的0.8～1.2倍，PH值调至5.6～6.7，加入1.8～2.2倍灯盏细辛粗粉重量的0.8～1.2％的蛋白干水溶液进行澄清处理。

3、如权利要求2所说的药用成分的提取方法，其特征在于：取灯盏细辛粗粉，分别用8倍、6倍、6倍重量的70％乙醇提取3次，每次1.5小时，合并提取液，回收乙醇，将提取液浓缩至与灯盏细辛粗粉等重量，PH值调至6.5，加入2倍灯盏细辛粗粉重量的1％的蛋白干水溶液，加热煮沸，冷却至室温，冷藏，过滤。