CN104998022A - 一种龙血树叶提取物及其制备方法、其药物组合物、制剂与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种龙血树叶提取物及其制备方法、其药物组合物、制剂与应用。所述的龙血树叶提取物是以百合科龙血树属植物海南龙血树Dracaena?cambodiana?Pierreex?Gagnep.或剑叶龙血树Dracaena?cochinchinensis(Lour.)S.C.Chen的干燥叶为原料制备得到,所述的龙血树叶提取物总黄酮含量≥1.0%,并不得检出鞣质、树脂和草酸盐。本发明制备得到的龙血树叶提取物具有防治骨质疏松和降血糖的显著效果,在临床上有广阔的应用前景。本发明提供的龙血树叶提取物的制备方法具有原料易得,操作简单,经济环保,产品质量稳定可控的优点,适合于产业化规模生产。
Description
技术领域
本发明属于医药学技术领域,具体涉及一种龙血树叶提取物及其制备方法、其药物组合物、制剂与应用。
背景技术
龙血树,《中国植物志》14卷记载, 全世界约有40 种,主要分布于亚洲和非洲的热带与亚热带地区。我国有5种龙血树属植物,主要分布于云南、广西、海南和台湾等地,分别是:海南龙血树D. cambodiana Pierre ex Gagnep、剑叶龙血树D. cochinchinensis(Lour.)S. C. Chen、长花龙血树D. angustifoliaRoxb.、细枝龙血树D. gracilis Wall. Ex Baker和矮龙血树D.terniflora Roxb.。
其中,剑叶龙血树的树干破损受伤后,受特定真菌如禾谷镰刀菌等病源菌的侵入和感染,会分泌出一种红色的血液样树脂。含有上述树脂的树干木材,经乙醇提取,所得到的红色树脂被称为国产血竭,又称广西血竭或龙血竭,具有活血化瘀、消肿止痛、收敛止血、补血等功效。现代药理学研究证实,国产血竭具有抗炎、镇痛、活血、止血和改变血液流变学等药理作用。
目前,国内外对剑叶龙血树的含脂木材或龙血竭的研究报道较多,但对龙血树树叶的研究报道较少,尤其是在龙血树的树叶提取物及其制备方法和用途方面尚属空白,未见文献报道。
龙血树生长十分缓慢,一年之内树干增粗不到1厘米,几百年才能长成-棵大树,几十年才开-次花,但在植物界中它的生命期最长,可达八千年,被植物学家们誉之为“植物寿星”,因此十分珍贵稀有。然而,近年来,由于生产龙血竭而遭到毁灭性采伐,目前野生龙血树资源已频临枯竭,被我国列为国家二级保护濒危物种。在不砍伐、毁坏龙血树植株的情况下,对可再生的龙血树的树叶进行加工利用,可使宝贵的龙血树资源更多更好地造福于人类的健康福祉,因此,对龙血树的树叶部分进行研究和开发利用,具有十分重要的现实意义。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种龙血树叶提取物;第二目的在于提供所述的龙血树叶提取物的制备方法;第三目的在于提供所述的龙血树叶提取物为活性成分的药物组合物;第四目的在于提供所述的龙血树叶提取物的制剂;第五目的在于提供所述的龙血树叶提取物的应用。
本发明的第一目的是这样实现的,所述的龙血树叶提取物是以百合科龙血树属植物海南龙血树Dracaena cambodiana Pierreex Gagnep. 或剑叶龙血树Dracaena cochinchinensis ( Lour. ) S. C. Chen的干燥叶为原料制备得到,所述的龙血树叶提取物总黄酮含量≥1.0%,并不得检出鞣质、树脂和草酸盐。
本发明的第二目的是这样实现的,包括以下步骤:
A、将原料龙血树叶粉碎过筛,加入重量比10~15倍的磷酸氢二钠水溶液,于10~30℃浸泡30~120min,20~30℃超声提取4~5h,过滤得到提取液;
B、提取液中滴加盐酸搅拌中和并调节pH值至3~5,10~30℃静置沉降8~48h,真空抽滤,过滤物水洗至抽滤的滤出液pH为6.5~7.5,抽干;
C、在B步骤抽干后的过滤物中加入重量比30~40倍的乙醇溶液于60~70℃下萃取2~4次,合并萃取液,加入萃取液重量百分比0.1~0.5%的针用活性炭,加热至沸后静置降温至30~40℃,用0.45μm的微孔薄膜过滤得到滤液;
D、将滤液干燥得到目标物龙血树叶提取物。
本发明的第三目的是这样实现的,是由含有治疗有效量的所述龙血树叶提取物及药学上可接受的其他药物活性成分或药用辅料组成。
本发明的第四目的是这样实现的,是在所述的龙血树叶提取物中加入药学上可以接受的辅料制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、注射液、冻干粉针、贴剂、膏剂、巴布剂、酊剂、搽剂、喷雾剂或气雾剂。
本发明的第五目的是这样实现的,所述的龙血树叶提取物在制备防治骨质疏松和/或降血糖药物中的应用。
本发明所述的龙血树叶提取中可加入其它药物活性成分(药学药理上能够组合的活性成分)形成药效更好的药物组合物。
龙血树在全世界约有40 种,我国有5种,分别是海南龙血树D. cambodiana Pierre ex Gagnep、剑叶龙血树D. cochinchinensis(Lour.)S. C. Chen、长花龙血树D. angustifoliaRoxb.]、细枝龙血树D. gracilis Wall. Ex Baker和矮龙血树D.terniflora Roxb.。
龙血树的基源不同,采收时间不同,其树叶的性味归经、有效成分和药理功能也大不相同。本发明所述的龙血树叶提取物,其特征还在于所采用的龙血树叶为百合科龙血树属植物海南龙血树Dracaena cambodiana Pierreex Gagnep. 或剑叶龙血树Dracaena cochinchinensis ( Lour. ) S. C. Chen的干燥叶,于每年的7-9月间采收。海南龙血树Dracaena cambodiana Pierreex Gagnep. 为常绿乔木,高可达3-4m,叶聚生于茎和枝顶,呈套叠状,长约70cm,抱茎,无柄。分布于海拔9 00 -1500 米的热带雨林或石灰岩雨林中 。主产于云南孟连,海南亦有。越南、柬埔寨也有分布。
剑叶龙血树Dracaena cochinchinensis (Lour.) S. C. Chen为常绿乔木,高可达5-15米,树茎粗大,分枝多,树皮灰白色,光滑,叶聚生在茎、分枝或小枝顶端。分布于越南、老挝及中国的广西、云南。多生长于海拔1700米以下的石灰岩山地中。树干破损受伤后,受特定真菌的感染,会分泌出一种红色的血液样树脂。含脂木材砍伐后,经乙醇提取,所得到的红色树脂即为国产血竭,又称广西血竭或龙血竭。
骨质疏松症是一种常见病,主要累及中老年人。随着老龄化社会的到来,骨质疏松症已成为威胁中老年人健康,严重影响人类生活质量的一个不容忽视的公共健康问题。骨质疏松症的特点是骨量减少、骨组织微细结构受损和脆性骨折的风险增加。骨髓间充质干细胞 (BMSCs) 是一种多能干细胞,能够分化成成骨细胞并反映测试药物对骨质疏松症的治疗效果。本发明选用 SD 大鼠的骨髓间充质干细胞作为测试骨质疏松药效的细胞模型,实验结果表明,龙血树叶提取物对SD大鼠骨髓间充质干细胞的增殖具有明显促进作用,并呈现一定的量效关系,提示龙血树叶提取物对骨质疏松症具有治疗作用,可以应用于防治骨质疏松药物的制备。
本发明人通过实验研究表明,本发明所述的龙血树叶提取物还具有显著的降血糖作用,可以应用于降血糖药物的制备。
本发明还提供了一种药物组合物,包含有治疗有效量的本发明所述龙血树叶提取物及药学上可接受的其它药物活性成分或药用辅料。
根据本发明,在制备本发明药物组合物中,通常将本发明所述龙血树叶提取物与药用辅料混合,或用药用辅料稀释,或包封于药用或食用辅料内。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明,但不以任何方式对本发明加以限制,基于本发明教导所作的任何变换或替换,均属于本发明的保护范围。
本发明所述的龙血树叶提取物,是以百合科龙血树属植物海南龙血树Dracaena cambodiana Pierreex Gagnep. 或剑叶龙血树Dracaena cochinchinensis ( Lour. ) S. C. Chen的干燥叶为原料制备得到,所述的龙血树叶提取物总黄酮含量≥1.0%,并不得检出鞣质、树脂和草酸盐。
所述的龙血树叶采收时间为每年的7~9月。
本发明所述的龙血树叶提取物的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
A、将原料龙血树叶粉碎过筛,加入重量比10~15倍的磷酸氢二钠水溶液,于10~30℃浸泡30~120min,20~30℃超声提取4~5h,过滤得到提取液;
B、提取液中滴加盐酸搅拌中和并调节pH值至3~5,10~30℃静置沉降8~48h,真空抽滤,过滤物水洗至抽滤的滤出液pH为6.5~7.5,抽干;
C、在B步骤抽干后的过滤物中加入重量比30~40倍的乙醇溶液于60~70℃下萃取2~4次,合并萃取液,加入萃取液重量百分比0.1~0.5%的针用活性炭,加热至沸后静置降温至30~40℃,用0.45μm的微孔薄膜过滤得到滤液;
D、将滤液干燥得到目标物龙血树叶提取物。
A步骤中所述的粉碎过筛为粉碎过40~60目筛。
A步骤中所述的磷酸氢二钠水溶液的质量体积浓度为15~25%。
A步骤中所述的超声提取的频率为 20kHz ~800K Hz。
B步骤中所述的盐酸的体积浓度为10%。
C步骤中所述的乙醇的体积浓度为70~80%。
D步骤中所述的干燥是于50~60℃真空喷粉干燥。
本发明所述的龙血树叶提取物的制剂,是在所述的龙血树叶提取物中加入药学上可以接受的辅料制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、注射液、冻干粉针、贴剂、膏剂、巴布剂、酊剂、搽剂、喷雾剂或气雾剂。
本发明所述制剂为口服制剂、注射用制剂和外用制剂, 所述的口服制剂包括片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂和滴丸剂等, 所述的注射用制剂包括注射液和冻干粉针等,所述的外用制剂包括贴剂、膏剂、巴布剂、酊剂、搽剂、喷雾剂和气雾剂等。
本发明的应用为所述的龙血树叶提取物在制备防治骨质疏松和/或降血糖药物中的应用。
下面以实施例对本发明做进一步说明:
实施例1 龙血树叶提取物1的制备
药材基源与采收时间:本实验所用龙血树叶系海南龙血树Dracaena cambodiana Pierre ex Gagnep.的干燥树叶,产地为云南孟连。于2014年8月份采摘,于日光下自然晒干。
制备方法:
干燥的龙血树叶经拣选后,用粉碎机粉碎,过50目筛,称取上述树叶粗粉10kg,加入100 kg的20%磷酸氢二钠水溶液,室温静置浸润30分钟以上,于20-25℃条件下连续超声提取5h。
上述提取液用型号为2815的丙纶单丝滤布过滤,滤液收集后,滴加10%盐酸搅拌中和并调节pH至3,室温静置沉降8h以上,真空抽滤,过滤物反复水洗、抽滤至滤出液呈中性,抽干,得过滤物0.95 kg。
上述抽干后的过滤物0.95 kg,用28.5 kg的浓度为70%的乙醇加热至65-70℃萃取三次,合并萃取液,加入液体重量0.1%的针用活性炭,加热至沸后静置降温至30℃,用0.45μm微孔薄膜过滤。
收集上述微孔薄膜过滤后的滤液,于50-55℃真空喷粉干燥,即得龙血树叶提取物0.52 kg,提取物得率5.2%(按粗粉投量计)。
实施例2 龙血树叶提取物2的制备
药材基源与采收时间:本实验所用龙血树叶系剑叶龙血树Dracaena cochinchinensis (Lour.) S. C. Chen的干燥树叶,产地为云南普洱。于2014年7月份采摘,于日光下自然晒干。
制备方法:
干燥的龙血树叶经拣选后,用粉碎机粉碎,过50目筛。称取上述树叶粗粉30kg,加入450 kg的20%磷酸氢二钠水溶液,室温静置浸润30分钟以上,于25-30℃条件下连续超声提取4h。
上述提取液用型号为2815的丙纶单丝滤布过滤,滤液收集后,滴加10%盐酸搅拌中和并调节pH至5,室温静置沉降8h以上,真空抽滤,过滤物反复水洗、抽滤至滤出液呈中性,抽干,得过滤物2.67 kg。
上述抽干后的过滤物2.67 kg,用106.8 kg的浓度为80%的乙醇加热至60-65℃萃取三次,合并萃取液,加入液体重量0.5%的针用活性炭,加热至沸后静置降温至40℃,用0.45μm微孔薄膜过滤。
收集上述微孔薄膜过滤后的滤液,于55-60℃真空喷粉干燥,即得龙血树叶提取物1.48 kg,提取物得率4.9%(按粗粉投量计)。
实施例3 龙血树叶提取物的质量检测
1、供试样品:
龙血树叶提取物1:按本发明实施例1制备;
龙血树叶提取物2:按本发明实施例2制备。
2、实验仪器与试剂
UV-2700紫外分光光度计(日本岛津公司);AB204-N型电子天平(瑞士Mettler公司)。芦丁对照品,由中国生物制品检验所提供;其他试剂均为分析纯,水为去离子水。
3、实验方法
3.1总黄酮含量的测定
对照品溶液的制备:精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品适量,加60%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备: 精密量称取供试样品10mg,置50ml量瓶中,加60%乙醇稀释至刻度,摇匀,即得。
测定法:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ml,分别置10ml量瓶中,各加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml,摇匀,放置6分钟。分别加入10%硝酸铝溶液0.3ml,摇匀,放置6分钟,再加入1mol/L氢氧化钠溶液4ml,用60%乙醇稀释至刻度,摇匀,放置10分钟。同时取供试品溶液5ml,加60%乙醇稀释至10ml,作为空白。照分光光度法(中国药典2010年版一部附录Ⅴ B),在505nm波长处测定吸收度,减去校正,计算,即得。本品总黄酮含量以无水芦丁(C27H30O16)计,结果见表1 。
3.2 鞣质的检查
取供试样品1 mg,加新配制的含1%鸡蛋清的生理盐水5ml,混匀后,放置10分钟。若出现浑浊或沉淀,则表示有鞣质检出;反之 ,则表示无鞣质检出。
3.3树脂的检查
取供试样品5 mg,加氯仿10ml,振摇提取,分取氯仿液,蒸干,残渣加冰醋酸2ml使溶解,置具塞试管中,加水3ml,混匀,放置30分钟。若有絮状物析出,表示有树脂检出;反之 ,则表示无树脂检出。
3.4草酸盐的检查
取供试样品2 mg,依《中国药典》2010年版一部附录Ⅸ S法检查。若出现浑浊或沉淀,则表示有草酸盐检出;反之 ,则表示无草酸盐检出。
4.实验结果
本发明龙血树叶提取物的质量检测结果见表1 。
表1 本发明龙血树叶提取物的质量检测结果
实施例4 龙血树叶提取物的降血糖作用实验
1、供试样品:
龙血树叶提取物1:按本发明实施例1制备;
龙血树叶提取物2:按本发明实施例2制备。
2、实验动物
昆明种小鼠,体重 19-21g,昆明医科大学实验动物中心提供。
3、实验方法
健康昆明种小鼠50 只,雌雄各半,体重19-21g,随机分为5组 :正常对照组、模型组、二甲双胍对照组(100mg/kg)、龙血树叶提取物1组(100mg/kg)、龙血树叶提取物2组(100mg/kg)。除正常对照组外,其余小鼠尾静脉注射四氧嘧啶(100mg/kg),72h后测定血清葡萄糖水平。二甲双胍对照组、龙血树叶提取物1组、龙血树叶提取物2组每天灌胃给药 1 次,正常对照组、模型组给予等体积蒸馏水,连续 7 天。于末次给药后 1h,从小鼠眼眶静脉丛取血,离心取血清后用试剂盒测定血糖水平。结果见表2。
4.实验结果
供试药物对糖尿病小鼠的降血糖作用实验结果见表2。
表2 供试药物对糖尿病小鼠的降血糖作用实验结果(x±s,n=10)
上述实验表明,龙血树叶提取物1和龙血树叶提取物2均具有明显的降血糖作用。
实施例5 龙血树叶提取物的抗骨质疏松作用实验
1、供试样品:
龙血树叶提取物1:按本发明实施例1制备;
龙血树叶提取物2:按本发明实施例2制备。
2、实验方法
取处于对数生长期的 SD 大鼠骨髓间充质干细胞( BMSCs),用 0.25% 胰蛋白酶消化后配成50000个/mL的单细胞悬液。以每孔100μL体积将细胞接种于96孔板,置37℃,5%CO2、95%湿度的培养箱培养。待细胞生长至70%融合后弃去培养基,重新加入含有不同浓度龙血树叶提取物的新鲜培养液 100μL,每个孔设 6 个平行孔,并设置不加药的细胞对照孔和溶剂空白对照孔。药物作用72h后,每孔加入10μL新鲜配制的MTT染液(10g/L),于37℃培养箱继续培养8h,弃去上层液,每孔加入100μL的DMSO,低速震荡15min,用酶标仪于492nm波长处测定各孔吸光度(A)。按下面公式计算龙血树叶提取物作用下的细胞增殖率:细胞增殖率(%)=(药物作用孔 A 值-细胞对照孔 A 值)/(细胞对照孔 A 值-溶剂空白对照孔A 值)×100%。实验结果见表3。
3、实验结果
供试药物对SD大鼠BMSCs 增殖率的影响见表3。
表3 供试药物对SD大鼠BMSCs 增殖率的影响(x±s,n=6)
骨髓间充质干细胞 (BMSCs) 是一种多能干细胞,能够分化成成骨细胞并反映测试药物对骨质疏松症的治疗效果。上述实验表明,龙血树叶提取物1和龙血树叶提取物2均对SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的增殖具有明显促进作用,并呈现一定的量效关系,提示它们对骨质疏松症具有治疗作用。
实施例6 药物组合物
本发明实施例1制备的龙血树叶提取物 12%
赖氨酸 15%
淀粉 51%
微晶纤维素 15%
硬脂酸镁 7%
粉碎后过筛,混合即得。
实施例7 药物组合物
本发明实施例2制备的龙血树叶提取物 30%
精氨酸 70%
粉碎后过筛,混合即得。
实施例8 药物组合物
本发明实施例2制备的龙血树叶提取物 8%
淀粉 52%
微晶纤维素 27%
羧甲基淀粉钠 13%
粉碎后过筛,混合即得。
实施例9 片剂
本发明实施例1制备的龙血树叶提取物 8%
淀粉 52%
微晶纤维素 27%
羧甲基淀粉钠 13%
将本发明实施例1制备的龙血树叶提取物、淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠混合后于压片机上压片,即得。
实施例10 胶囊
本发明实施例2制备的龙血树叶提取物 12%
赖氨酸 15%
淀粉 51%
微晶纤维素 15%
硬脂酸镁 7%
将本发明实施例2制备的龙血树叶提取物、赖氨酸、淀粉、微晶纤维素和硬脂酸镁,混合后填充入硬明胶胶囊中,即得。
实施例11 注射液
本发明实施例1制备的龙血树叶提取物 3%
精氨酸 7%
注射用水 90%
将本发明实施例2制备的龙血树叶提取物加精氨酸及适量注射用水,搅拌均匀,加入0.1%针用活性碳,吸附,过滤脱碳,补加注射用水至规定量,微孔过滤膜过滤,按5mL/ 支灌封,100℃湿热灭菌30min,经灯检合格,即得。
实施例12 冻干粉针剂
本发明实施例1制备的龙血树叶提取物 6%
精氨酸 14%
乙醇 12%
甘露醇 14.5 %
注射用水 53.5%
将本发明实施例2制备的龙血树叶提取物加精氨酸、乙醇搅拌溶解,加甘露醇及适量注射用水,搅拌均匀,加入0.1%针用活性碳,吸附,过滤脱碳,补加注射用水至规定量,微孔过滤膜过滤,按3mL/ 支分装,冷冻干燥,封装,经检验合格,即得。
Claims (10)
1.一种龙血树叶提取物,其特征在于所述的龙血树叶提取物是以百合科龙血树属植物海南龙血树Dracaena cambodiana Pierreex Gagnep. 或剑叶龙血树Dracaena cochinchinensis ( Lour. ) S. C. Chen的干燥叶为原料制备得到,所述的龙血树叶提取物总黄酮含量≥1.0%,并不得检出鞣质、树脂和草酸盐。
2.根据权利要求1所述的龙血树叶提取物,其特征在于所述的龙血树叶采收时间为每年的7~9月。
3.一种权利要求1或2所述的龙血树叶提取物的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
A、将原料龙血树叶粉碎过筛,加入重量比10~15倍的磷酸氢二钠水溶液,于10~30℃浸泡30~120min,20~30℃超声提取4~5h,过滤得到提取液;
B、提取液中滴加盐酸搅拌中和并调节pH值至3~5,10~30℃静置沉降8~48h,真空抽滤,过滤物水洗至抽滤的滤出液pH为6.5~7.5,抽干;
C、在B步骤抽干后的过滤物中加入重量比30~40倍的乙醇溶液于60~70℃下萃取2~4次,合并萃取液,加入萃取液重量百分比0.1~0.5%的针用活性炭,加热至沸后静置降温至30~40℃,用0.45μm的微孔薄膜过滤得到滤液;
D、将滤液干燥得到目标物龙血树叶提取物。
4.根据权利要求3所述的龙血树叶提取物的制备方法,其特征在于A步骤中所述的磷酸氢二钠水溶液的质量体积浓度为15~25%;所述的超声提取的频率为 20kHz ~800kHz。
5.根据权利要求3所述的龙血树叶提取物的制备方法,其特征在于B步骤中所述的盐酸的体积浓度为10%。
6.根据权利要求3所述的龙血树叶提取物的制备方法,其特征在于C步骤中所述的乙醇的体积浓度为70~80%。
7.根据权利要求3所述的龙血树叶提取物的制备方法,其特征在于D步骤中所述的干燥是于50~60℃真空喷粉干燥。
8.一种以权利要求1或2所述的龙血树叶提取物为活性成分的药物组合物,其特征在于是由含有治疗有效量的所述龙血树叶提取物及药学上可接受的其他药物活性成分或药用辅料组成。
9.一种权利要求1或2所述龙血树叶提取物的制剂,其特征在于是在所述的龙血树叶提取物中加入药学上可以接受的辅料制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、注射液、冻干粉针、贴剂、膏剂、巴布剂、酊剂、搽剂、喷雾剂或气雾剂。
10.一种权利要求1或2所述的龙血树叶提取物的应用,其特征在于所述的龙血树叶提取物在制备防治骨质疏松和/或降血糖药物中的应用。
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