CN100447151C - 硼酸盐及其在制备治疗血栓形成药物中的应用 - Google Patents

Abstract

一种硼酸肽药物的盐，例如Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)₂。与硼酸平衡的离子可以是碱金属或者衍生自一种有机含氮化合物。所述盐用于治疗血栓形成。

Description

硼酸盐及其在制备治疗血栓形成药物中的应用

技术领域

本发明涉及得自有机硼酸的药物学有用的产物。本发明还涉及前述一类产物中的各成员的应用，涉及其配制、其制备、其合成中间体及涉及其它主题。

本发明进一步涉及含有所述产物的口服药物制剂。

背景技术

硼酸化合物

这些年来已经知道硼酸(boronic acid)化合物及其衍生物例如酯具有生物学活性，特别是作为蛋白酶抑制剂或底物。例如，Koehler等，Biochemistry 10：2477，1971报道了2-苯乙烷硼酸在毫摩尔水平抑制丝氨酸蛋白酶胰凝乳蛋白酶。Phillip等，Proc.Nat.Acad.Sci.USA 68：478-480，1971报道了芳基硼酸(苯基硼酸、间硝基-苯基硼酸、间氨基苯基硼酸、间溴苯基硼酸)对胰凝乳蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶的抑制。Seufer-Wasserthal等，Biorg.Med.Chem.2(1)：35-48，1994描述了多种硼酸，尤其由Cl、Br、CH₃、H₂N、MeO等取代的苯基硼酸对枯草杆菌蛋白酶Carisberg抑制的研究。

在描述蛋白酶的抑制剂或底物中，P1、P2、P3等是指易断裂的肽键的氨基末端的底物或抑制剂残基，S1、S2、S3等是指根据Schechter，I.and Berger，A.On the Size of the Active Site in Proteases，Biochem.Biophys.Res.Comm.，27：157-162，1967所述关连蛋白酶的相应亚位点。在凝血酶中，S1结合位点或“特异性口袋”是指所述酶中的裂缝，同时S2和S3结合亚位点(也分别称为近端和远端疏水性口袋)是疏水性的，而且例如分别与Pro和(R)-Phe强有力地反应。

对丝氨酸蛋白酶抑制剂的药物学研究已经从简单的芳基硼酸转移至硼酸肽(boropeptide)，即含有α-氨基羧酸的硼酸类似物的肽。所述硼酸可以是衍生的，通常形成一种酯。Shenvi(EP-A-145441和US4499082)揭示了含有具有中性侧链的一种α-氨基硼酸的肽是弹性蛋白酶的有效抑制剂，随后有许多关于丝氨酸蛋白酶的硼酸肽抑制剂的专利出版物。特别地，已经报道了如下酶的紧密结合的硼酸抑制剂：弹性蛋白酶(Ki，0.25nM)、胰凝乳蛋白酶(Ki，0.25nM)、组织蛋白酶G(Ki，21nM)、α-裂解蛋白酶(Ki，0.25nM)、IV型二肽基(dipeptidyl)氨基肽酶(Ki，16pM)及更最近的凝血酶(Ac-D-Phe-Pro-boroArg-OH(DuP 714，初始Ki 1.2nM)。

Claeson等(US 5574014等)及Kakkar等(WO 92/07869及同族专利，包括US 5648338)揭示了具有中性C末端侧链例如烷基或烷氧基烷基侧链的凝血酶抑制剂。

WO 96/25427揭示了对Kakkar等所述化合物的修饰，针对肽基丝氨酸蛋白酶抑制剂进行，其中P2-P1天然肽键由另一个键置换。非天然肽键例如可以是-CO₂-、-CH₂O-、-NHCO-、-CHYCH₂-、-CH＝CH-、-CO(CH₂)pCO-，其中p是1、2或3、-COCHY-、-CO₂-CH₂NH-、-CHY-NX-、-N(X)CH₂-N(X)CO-、-CH＝C(CN)CO-、-CH(OH)-NH-、-CH(CN)-NH-、-CH(OH)-CH₂-或-NH-CHOH-，其中X是H或氨基保护基，Y是H或卤素，尤其是F。特殊的非天然肽键是-CO₂-或-CH₂O-。

Metternich(EP 471651及US 5288707，后一专利被转让给TrigenLimited)揭示了Phe-Pro-BoroArg硼酸肽的变体，其中P3Phe由一个非天然的疏水性氨基酸如三甲基甲硅烷丙氨酸、对-叔丁基-联苯基-甲硅氧基甲基-苯丙氨酸或者对-羟甲基苯丙氨酸置换，P1侧链可以是中性的(烷氧基烷基、烷基硫代烷基或三甲基甲硅烷基烷基)。

Fevig J M et al Bioorg.Med.Chem.8：301-306及Rupin A et alThromb.Haemost.78(4)：1221-1227，1997描述了N-取代的甘氨酸对硼酸三肽凝血酶抑制剂的P2 Pro残基的置换，也见于US 5,585,360所述(deNanteuil et al)。

Amparo(WO 96/20698及同族专利，包括US 5698538)揭示了结构为芳基-接头-Boro(Aa)的肽模拟物，其中Boro(Aa)可以是具有非碱性侧链的一个氨基硼酸残基，例如BoroMpg。所述接头是化学式为-(CH₂)mCONR-(其中m是0-8，R是H或某些有机基团)的化合物或其类似物，其中肽键-CONR-由-CSNR-、-SO₂NR-、-CO₂-、-C(S)O-或-SO₂O-置换。芳基是由1、2或3个选自一个特定基团的基团取代的苯基、萘基或联苯基。最典型地，这些化合物是结构为芳基-(CH₂)n-CONH-CHR²-BY¹Y²的化合物，其中R²例如是上述中性侧链，n是0或1。

非肽硼酸酯已经被提议在去污剂组合物中作为蛋白酶抑制剂。WO92/19707和WO 95/12655报道了芳基硼酸酯可以在去污剂组合物中用作蛋白酶抑制剂。WO 92/19707揭示了由氢键结合基团尤其乙酰氨基(-NHCOCH₃)、磺酰氨基(sufonamido)(-NHSO₂CH₃)和烷基氨基取代硼酸根基团的化合物。WO 95/12655教导正位取代的化合物是优异的。

硼酸酯酶抑制剂具有广泛应用，从去污剂至细菌孢子形成抑制剂再至医药品中。在制药学领域，有描述丝氨酸蛋白酶例如凝血酶、因子Xa、激肽释放酶、弹性蛋白酶、纤溶酶以及其它丝氨酸蛋白酶如脯氨酰肽链内切酶和Ig AI蛋白酶的硼酸酯抑制剂的专利文献。凝血酶是凝血途径中最后的蛋白酶，作用是从纤维蛋白原的每个分子中水解四种小肽，因此使其聚合位点去保护。线性纤维蛋白聚合物一旦形成就可以通过由凝血酶激活的因子XIIIa而交联。另外，凝血酶是血小板的强力激活剂，凝血酶作用于血小板上的特定受体。凝血酶还通过激活因子V和VIII而加强其自身产生。

丝氨酸蛋白酶的其它氨基硼酸酯或硼酸肽抑制剂或底物如以下文献所述：

·US 4935493

·EP 341661

·WO 94/25049

·WO 95/09859

·WO 96/12499

·WO 96/20689

·Lee S-L et al，Biochemistry 36：13180-13186，1997

·Dominguez C et al，Bioorg.Med.Chem.Lett.7：79-84，1997

·EP 471651

·WO 94/20526

·WO 95/20603

·WO97/05161

·US 4450105

·US 5106948

·US 5169841.

丙型肝炎病毒蛋白酶的肽硼酸抑制剂在WO 01/02424中描述。

Matteson D S Chem.Rev.89：1535-1551，1989回顾了α-卤素硼酸酯(halo boronic esters)作为中间体与其它物质在合成氨基硼酸及其衍生物中的应用。Matteson描述了频哪醇硼酸酯在非手性合成中的应用，及蒎二醇(pinanediol)硼酸酯在手性控制中的应用，包括在氨基和酰氨基硼酸酯的合成中。

Contreras et al J.Organomet.Chem.246：213-217，1983描述了通过对环状硼酸酯进行光谱学研究论证了分子内N→B配位作用，所述环状硼酸酯是通过Me₂CHCMe₂-BH₂与二乙醇胺的反应而制备的。

已经显示了硼酸及酯化合物可以作为蛋白酶体的抑制剂，蛋白酶体是负责多数胞内蛋白质周转的多重催化性蛋白酶。Ciechanover，Cell，79：13-21，1994教导蛋白酶体是遍在蛋白-蛋白酶体途径的一个蛋白酶解成分，其中蛋白质通过缀合于遍在蛋白的多个分子而定向降解。Ciechanover还教导遍在蛋白-蛋白酶体途径在多种重要的生理学过程中起重要作用。

Adams等，美国专利No 5780454(1998)、美国专利No 6066730(2000)、美国专利No 6083903(2000)及等同的WO 96/13266，及美国专利No 6297217(2001)描述了用作蛋白酶体抑制剂的肽硼酸酯和酸化合物。这些文献还描述了硼酸酯和酸化合物在降低肌蛋白质降解速度、降低细胞中NF-κB活性、降低细胞中p53蛋白的降解速度、抑制细胞中细胞周期蛋白降解、抑制癌细胞生长、抑制细胞中抗原呈递、抑制NF-κB依赖性细胞附着及抑制HIV复制中的应用。Brand等的WO 98/35691教导蛋白酶体抑制剂包括硼酸化合物用于治疗梗塞如在中风或心肌梗塞期间发生的梗塞。Elliott等的WO 99/15183教导蛋白酶体抑制剂用于治疗炎症和自身免疫疾病。

不幸地，有机硼酸相对地难以获得分析醇形式。因此，烷基硼酸及其环硼氧烷通常是空气敏感的。Korcek et al，J.Chem.Soc.PerkinTrans.2：242，1972，教导丁基硼酸易于在空气中氧化而产生1-丁醇和硼酸。

已知硼酸的衍生物作为环酯提供氧化抗性。例如Martichonok V etal J.Am.Chem.Soc.118：950-958，1996，阐述了二乙醇胺衍生化提供了针对可能的硼酸氧化的保护作用。美国专利No 5,681,978(Matteson DSet al)教导1，2-二醇及1，3-二醇，例如频哪醇，形成不易于氧化的稳定的环状硼酸酯。

Wu et al，J.Pharm.Sci.，89：758-765，2000，论述了一种抗癌剂即化合物N-(2-吡嗪)羰基-苯丙氨酸-亮氨酸硼酸(LDP-341，也称作bortezomib)的稳定性。描述了“在配制非肠道给药的[LDP-341]期间，所述化合物示出“无规律的稳定性行为”。研究了降解途径并推断所述降解是氧化性的，初始的氧化归因于过氧化物或氧分子及其自由基。

WO 02/059131揭示了稳定的硼酸产物。特别地，这些产物是某些硼酸肽和/或硼酸肽模拟物，其中硼酸基团已经用糖衍生化。所揭示的糖衍生物具有疏水性氨基酸侧链，其化学式如下：

其中：

P是氢或一个氨基基团保护基团；

R氢或烷基；

A是0、1或2；

R¹、R²和R³是独立的氢、烷基、环烷基、芳基或-CH₂-R⁵；

R⁵在每种情况中均是芳基，芳烷基、烷芳基、环烷基、杂环基、杂芳基或-W-R⁶之一，其中W是一个硫族元素及R⁶是烷基；

R¹、R²、R³或R⁵中所述任何芳基、芳烷基、烷芳基、环烷基、杂环基或杂芳基的环状基团可以被任意取代；及

Z¹和Z²一起形成一个衍生自糖的基团，其中在每种情况中均附着于硼的原子是氧原子。

一些揭示的化合物是LDP-341的糖衍生物(见上述)。

许多药物包含为羧酸的一种活性基团。在羧酸与硼酸之间有许多不同，其对(例如)药物输送、稳定性和转运的作用还未加以研究。三价硼化合物的一个特点是硼原子是sp²杂化，其在硼原子上留下了一个空2p_z轨道。BX₃类型的分子因此可作为电子对接受体(acceptor)或者路易斯酸。可以使用空2p_z轨道从路易斯酸中获得一对非键合的电子以形成共价键。BF₃因此与路易斯碱基如NH₃反应，形成酸-碱复合物，其中所有原子均具有价电子充填壳层。

因此，硼酸可作为路易斯酸，接受OH^-：

B(OH)₃+H₂O→B(OH)₄ ^-+H⁺

另外，RB(OH)₂类型的硼酸是二碱价的，并具有两个pKa。区别硼化合物的另一点是硼的键长非常短，可能是因为三个因素：

1.pπ-pπ键的形成；

2.离子共价共振；

3.在非键合电子之间的相斥降低。

KOH水溶液中硼酸和羧酸的预定平衡如下所示(排除RBO₂ ^2-的形成)：

血栓形成

止血是血液的正常生理学情形，其中其成分存在动态平衡。当所述平衡被破坏时，例如在血管损伤后，在这个实例中某些生物化学途径被触发，导致由于血凝块的形成(凝固)而止血。凝固是一种动态的和复杂的过程，其中蛋白酶如凝血酶起关键作用。血液凝固可以通过两个级联酶原激活的任一个而发生，即外源性和内源性凝血级联途径。外源性途径中的因子VIIa和内源性途径中的因子IXa是因子X被激活为Xa的重要决定因素，Xa自身催化凝血酶原激活为凝血酶，同时凝血酶依次催化纤维蛋白原单体聚合为纤维蛋白聚合物。在每个途径中最后的蛋白酶因此是凝血酶，其作用是水解来自每个纤维蛋白原分子的4种小肽(两种FpA及两种FpB)，由此使其聚合位点去保护。一旦线性纤维蛋白聚合物形成，则其可以通过自身被凝血酶激活的因子XIIIa而交联。另外，凝血酶是一种有效的血小板激活剂，在此之上其对特定受体起作用。血小板的凝血酶激活导致细胞聚集及额外的因子分泌，进一步促进止血栓子的产生。凝血酶通过激活因子V和VIII还加强其自身产生(见Hemker和Beguin：Jolles，et.al.，“Biology and Pathology ofPlatelet Vessel Wall Interactions，”pp.219-26(1986)，Crawford和Scrutton：Bloom和Thomas，“Haemostasis and Thrombosis，”pp.47-77，(1987)，Bevers，et.al.，Eur.J.Biochem.122：429-36，1982，Mann，Trends Biochem.Sci.12：229-33，1987)。

蛋白酶是在特异的肽键裂解蛋白质的酶。Cuypers et al.，J.Biol.Chem.257：7086，1982及其引用的参考文献，将蛋白酶根据机械论原理分为5类：丝氨酸、半胱氨酰基或硫醇、酸或天冬氨酰基、苏氨酸和金属蛋白酶。每个类别的成员均通过相似机制催化肽键的水解，具有相似活性位点氨基酸残基，及对类别特异性抑制剂敏感。例如，已经鉴定的所有丝氨酸蛋白酶均具有一个活性位点丝氨酸残基。

凝固蛋白酶凝血酶、因子Xa、因子VIIa和因子IXa是对序列特异性Arg-Xxx肽键的裂解具有胰蛋白酶样特异性的丝氨酸蛋白酶。正如其它丝氨酸蛋白酶一样，裂解事件首先是攻击底物的易断裂的键上活性位点丝氨酸，导致四面体中间体形成。随后该四面体中间体折拢形成酰基酶并释放裂解的序列的氨基末端。然后酰基酶的水解释放羧基末端。

如上所述，血小板在正常止血中起两种重要作用。首先，通过血小板的聚集组成了最初的止血栓子，其立即减少从破坏的血管中流出的血液。其次，血小板表面可以成为活性的并加强血液凝固，这是称作血小板促凝血活性的一种性质。这可以作为在存在因子Va和Ca²⁺的情况下，因子Xa激活凝血酶原的速度提高而观测到，称为凝血酶原酶反应。通常地，未刺激的血小板表面上几乎没有(即便有也是很少)凝固因子，但是当血小板被激活时，通常在膜的胞质侧的负电荷的磷脂(磷脂酰丝氨酸和磷脂酰肌醇)变为可利用的，并提供在其上发生两步凝固的一个表面。激活的血小板表面上的磷脂极度促进导致凝血酶形成的反应，以便凝血酶能与其被抗凝血酶III的中和相比更快速产生。在有或无肝素情况中，在血小板表面上发生的反应不易于被血液中天然的抗凝血物质如抗凝血酶III抑制(See Kelton和Hirsch：Bloom andThomas，“Haemostasis and Thrombosis，”pp.737-760，(1981)；Mustard etal：Bloom and Thomas，“Haemostasis and Thrombosis，”pp.503526，(1981)；Goodwin et al；Biochem.J.308：15-21，1995)。

可以认为血栓是正常机制的一种异常产物，并可以解释为在心血管系统例如心或血管的表面上从血液组分中形成的一种块状物或沉积物。血栓形成被认为是病理状况，其中不正确的止血机制活性导致血管内血栓形成。现在识别了三种基本类型的血栓：

·白色血栓，其通常见于动脉，主要由血小板组成；

·红血栓，其见于静脉，主要由纤维蛋白和红细胞组成；

·混合血栓，其由白色血栓和红血栓的成分组成。

血栓的成分受在其形成部位的血流速度的影响。通常白色血小板富集的血栓在血流速度快的系统形成，而红色凝固血栓在淤滞的区域形成。动脉的高切变率防止血液凝固的中间体聚集在循环的动脉侧壁上：只有血小板具有通过Willebrand因子形成与损伤部位结合的血栓的能力。仅由血小板组成的这种血栓是不稳定及分散的。如果刺激强则血栓将再次形成，然后持续分散直至刺激降低。为使血栓稳定，必须形成纤维蛋白。在这个方面，少量的凝血酶可以聚集在血小板血栓内并使因子Va激活及刺激血小板促凝血活性。这两个事件导致因子Xa对凝血酶原的激活速度整体提高300,000倍。纤维蛋白沉积物使血小板血栓稳定。间接的凝血酶抑制剂如肝素在抑制刺激血小板促凝血活性方面无临床效力。因此，抑制血小板促凝血活性的治疗剂将有用于治疗或预防动脉血栓病变。

在循环的静脉侧，血栓包括纤维蛋白：由于静脉侧血流缓慢因此凝血酶可聚集，血小板仅起次要作用。

因此不认为血栓形成是一个单一指征，而是包含适合不同治疗剂和/或方案的不同亚类的一类指征。因此，管理机构将治疗疾病例如深部静脉血栓形成、脑血管动脉血栓形成及肺栓塞作为批准药物的指标。两种主要的血栓形成亚类是动脉血栓形成和静脉血栓形成。动脉血栓形成包括特异的病变如急性冠状动脉综合征((例如急性心肌梗塞(由冠状动脉血栓形成引起的心脏病发作))、脑血管动脉血栓形成(由脑血管动脉系统中血栓形成引起的中风)及周围动脉血栓形成。由静脉血栓形成引起的病变例如是深部静脉血栓形成和肺栓塞。

血栓形成的处理一般包括使用抗血小板药物(血小板聚集的抑制剂)以控制进一步的血栓形成，及使用血栓溶解剂溶解新形成的血块，这两种制剂的一种或两种可以与抗凝血剂联合或组合应用。在治疗认为易患血栓形成的患者中也可以预防性使用抗凝血剂。

目前，临床用作抗凝血剂的最有效的两类药物是肝素和维生素K拮抗剂。肝素是与抗凝血酶III结合并因此加强其作用的硫酸多糖的不明混合物。抗凝血酶III是激活的凝血因子IXa、Xa、XIa、凝血酶及可能的XIIa的一种天然发生的抑制剂(见Jaques，Pharmacol.Rev.31：99-166，1980)。维生素K拮抗剂，例如熟知的杀鼠灵，通过抑制维生素K依赖性凝血因子II、VII、IX和X的核糖体后羧化作用而间接起作用(见Hirsch，Semin.Thromb.Hemostasis 12：1-11，1986)。尽管肝素和维生素K拮抗剂是治疗血栓形成的有效方法，但其具有出血、肝素诱导的血小板减少(在肝素的情况中)等不利的副作用，及明显的患者间可变性，导致治疗安全性小及不可预知。

应用直接起作用的凝血系统的凝血酶及其它丝氨酸蛋白酶的抑制剂期望可以减轻这些问题。为此，已经测试了大量的丝氨酸蛋白酶抑制剂，包括硼酸肽，即含有α-氨基酸的硼酸类似物的肽。在这个说明书的前文已经论述了直接起作用的硼酸凝血酶抑制剂，在一下章节进一步描述。

中性的P1残基硼酸肽凝血酶抑制剂

Claeson等(US 5574014等)及Kakkar等(WO 92/07869及同族专利，包括US 5648338)揭示了具有一个中性(无电荷的)C末端(P1)侧链例如一个烷氧基烷基侧链的亲脂性凝血酶抑制剂。

Claeson等及Kakkar等同族专利揭示了含有氨基酸序列D-Phe-Pro-BoroMpg[(R)-Phe-Pro-BoroMpg]的硼酸酯，其是凝血酶的高度特异性抑制剂。这些化合物中可以提及的特别是Cbz-(R)-Phe-Pro-BoroMpg-O频哪醇(也称作TRI 50b)。相应的游离硼酸称作TRI 50c。关于TRI 50b及相关化合物的进一步的信息，读者可查阅如下文献：

·Elgendy S et al.，in The Design of Synthetic inhibitors of Thrombin，Claeson G et al Eds，Advances in Experimental Medicine，340：173-178，1993.

·Claeson G et al，Biochem J.290：309-312，1993

·Tapparelli C et al，J Biol Chem，268：4734-4741，1993

·Claeson G，in The Design of Synthetic inhibitors of Thrombin，Claeson G et al Eds，Advances in Experimental Medicine，340：83-91，1993

·Phillip et al，in The Design of Synthetic inhibitors of Thrombin，Claeson G et al Eds，Advances in Experimental Medicine，340：67-77，1993

·Tapparelli C et al，Trends Pharmacol.Sci.14：366-376，1993

·Claeson G，Blood Coagulation and Fibrinolysis 5：411-436，1994

·Elgendy et al，Tetrahedron 50：3803-3812，1994

·Deadman J et al，J.Enzyme Inhibition 9：29-41，1995

·Deadman J et al，J.Medicinal Chemistry 38：1511-1522，1995.

TRI 50b的三肽序列有3个手性中心。认为至少在具有商业有益的抑制剂活性的化合物中，Phe残基是(R)-构型及Pro残基是天然(S)-构型；在具有商业有益的抑制剂活性的异构体中确信Mpg残基是(R)-构型。因此，认为活性或最大活性的TRI 50b立体异构体是R，S，R构型，可以如下化学式所示：

虽然已经发现间接起作用的凝血酶抑制剂用于治疗易患或患有静脉血栓形成的患者，但动脉血栓却不是这样的，因为需要将用于治疗静脉血栓的剂量增加许多倍以治疗(预防)动脉血栓。这种增加的剂量典型地引起出血，这使得间接起作用的凝血酶抑制剂不适于或者不优选用于治疗动脉血栓。肝素及其低分子量的衍生物是间接的凝血酶抑制剂，因此不适于治疗动脉血栓。口服直接的凝血酶抑制剂是治疗动脉血栓的一个进展，但治疗指数低于所希望的治疗指数(therapeutic indices)，即在治疗剂量下具有高于希望水平的出血情况。

可以将许多有机硼酸化合物分为亲脂类或疏水类。典型地，这种化合物包括如下化合物：

·全部或大部分氨基酸是疏水性的硼酸肽，

·至少一半氨基酸是疏水性的而且具有一个疏水性N末端取代基(氨基保护基)的硼酸肽，

·基于疏水性基团的非肽。

口服吸收

可以通过主动或被动途径在胃肠道中吸收。通过转运机制的主动吸收在个体之间趋于可变及与肠道内容物相关(Gustafsson et al，Thrombosis Research，2001，101，171-181)。已经确定上部的肠道是口服药物吸收的主要部位。特别地，十二指肠由于其表面积大而是吸收口服药物的惯例靶定部位。肠粘膜作为一个屏障控制跨细胞的被动吸收：离子的吸收被阻断而有利于亲脂类分子的跨细胞吸收(Palm K et al.，J.Pharmacol and Exp.Therapeutics，1999，291，435-443)。

口服药物需要持续及充分吸收。讨厌的是个体之间及同一个体的不同时机之间的不同而吸收不同。相似地，一般不可接受生物利用度水平低的药物(仅少部分给予的活性剂被吸收)。

被动吸收有利于非离子化合物的吸收，这是与不变性相关的一种途径，因此被优选为进行持续吸收。被动吸收机制特别有利于亲脂类物质，因此表明最利于非离子的亲脂类药物的持续和高度口服吸收。

药物与其生理学靶位的相互作用所需要的典型功能性是功能型基团如羧酸和磺酸。这些基团在胃中(在pH2-3)以质子化形式存在，但在较高pH的肠液中有一定程度的离子化。用于避免羧酸盐或磺酸盐离子化的一个策略是将其以酯形式存在，一旦吸收入血管腔中则被裂解。

例如，未达到最佳胃肠道吸收的直接作用的凝血酶抑制剂melagatran，具有末端羧基和脒基基团，而且当所述羧酸和脒基基团均是带电荷的时在pH 8-10是纯两性离子。因此开发了一种前体药物H376/95，其具有羧酸和脒的保护基，而且是比melagatran更亲脂的分子。所述前体药物经过培养的Caco-2上皮细胞的透性系数高于melagatran的80倍，口服生物利用度高于melagatran的2.7-5.5倍，以及在药物血浆浓度vs时间曲线下的范围内可变性较小(Gustafsson et al，Thrombosis Research，2001，101，171-181)。

硼酸肽、硼酸肽模拟物及其它有机硼酸酯的口服吸收

TRI 50b的硼酸酯基团在血浆的条件下迅速裂解，形成相应的硼酸基团，该基团被认为是抑制凝血酶的催化位点的活性基团。

硼酸是二价的功能基团，具有更典型的单键特点的硼-氧键长度(1.6

)，与羧酸和磺酸中的C-O和S-O的键不同。因此，硼酸基团具有两种离子化潜力。硼酸基团在十二指肠液的pH下部分离子化，与希望的被动十二指肠吸收不相称。因此，一种带电荷的硼酸酯抑制剂H-D-PheProBoroArg是通过主要的主动转运机制被吸收的(Saitoh，H.andAungst，B.J.，Pharm.Res.，1999，16，1786-1789)。

通过TRI 50b的这种裂解形成的肽硼酸(该酸被称为TRI 50c)在水中相对不能溶解，特别是在酸性或中性pH下，并趋于在胃和十二指肠中难以吸收。该酸的结构为Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH。

而肽硼酸Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH在十二指肠条件下部分离子化，达到那样的程度不利于被动转运，该酸的酯被设计为高速被动转运(因此一致)。三肽序列Phe-Pro-Mpg有一个非碱性P1侧链(特别是甲氧基丙基)，由此所述三肽由三个非极性氨基酸组成。所述肽硼酸的酯是不可离子化的，而且酯形成种类进一步授予亲脂性性质，由此促进高速被动转运。

计算技术已经证实可推测TRI 50b及Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH的其它二醇酯具有良好的生物可利用度。因此，极性表面区域(PSAd)是推测生物利用度的一个参数，高于60

的PSAd值与被动跨细胞转运及已知药物的生物利用度密切相关联(Kelder，J.Pharm.Res.，1999，16，1514-1519)。对上述肽硼酸的二醇酯包括频哪醇酯TRI 50b的测定，示出该二醇酯具有高于60的PSAd值，推测被动转运和良好的生物利用度，如表1所示：

表1：选择的Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH二醇酯的PSAd值

二醇	PSAd值
		频哪醇	98.74
蒎二醇	90.64

相应的单羟基醇(例如烷醇)酯被认为太不稳定，在体外自然裂解释放酸。二醇如蒎二醇和频哪醇的酯具有与单羟基醇的酯相比增强的动力学稳定性，在部分水解为单酯衍生物之后，它们趋于通过便利的分子内反应而重新组合。

发明内容

为平衡TRI 50b的这些高度需要的特征，已经揭示了TRI 50b趋于水解。因此在HPLC分析的酸性条件下，TRI 50b被转变为半衰期较短的酸形式，这意味着在十二指肠及在胃肠道中其它部位潜在的十二指肠内水解为离子形式，离子形式将抵抗被动转运，并且如果有什么的话，则由主动转运吸收，最多表现出不定的生物利用度。

TRI 50b对水解的不稳定性在化合物的制备及其配制，以及含有其的药物制剂的贮存中还具有潜在的不利之处。

由TRI 50b引起的另一种具有挑战性的困难是数据示出对象之间的生物利用度中的显著变化。这种可变性可产生一种无法接受的药物候选物，因此需要降低这种观测到的可变性。

解决TRI 50b不稳定性的一种理想方法是开发对水解更稳定的二醇酯，因为这种二醇酯与TRI 50b相似，可以预测与TRI 50c相比其具有氧化抗性。在此方面，已知环的大小可影响硼酸酯的稳定性，而且已经示出glycolato boron与频哪醇相比具有增强的水性稳定性(D.S.Matteson，Stereodirected Synthesis with Organoboranes，Springer-Verlag，1995，ch.1)。相似地，蒎二醇酯与频哪醇相比更稳定；确信这是由于蒎二醇基团是高度位阻的并且不利于对硼的亲核攻击。事实上，已经报道了从频哪醇到蒎二醇的酯交换(Brosz，CS，Tet.Assym，8：1435-1440，1997)，而反向过程不顺利。然而认为蒎二醇酯在血浆中太不活跃以至于不能裂解，因此需要提供一种改良的二醇酯。

解决TRI 50b的不稳定性的另一种方法是在其原位给予TRI 50c。然而，TRI 50c数据提示TRI 50c的生物利用度中可变性太高。

TRI 50c也具有不稳定性，因为存在硼酸肽部分通过去硼化(碳-硼键裂解)而自身降解的趋向，通过先前文献教导的氧化途径进行(例如Wu et al，如上述)。降解水平可非常高。

TRI 50b和TRI 50c的上述性质非限于这种化合物，而是由其它硼酸肽酯和酸共有，即使这种其它硼酸肽的性质在数量上不同。

本发明是以某些有机硼酸产物表现出增强的稳定性等发现为基础。

本发明的益处包括解决了二醇硼酸酯尤其TRI 50b不稳定性的问题，也就是说本发明揭示的产物尤其提供了药物活性化合物，其与TRI 50b及其它可对比的酯在对水解的稳定性方面相比更稳定。本发明进一步包括了解决有机硼酸不稳定性的问题，也就是说本发明揭示的产物尤其提供了药物活性化合物，其与TRI 50c相比对去硼化更稳定。在本发明的构架中提供的稳定性不是绝对的，但与对比的化合物相比是改良的。本发明的提供的益处进一步包括提供在口服制剂中具有效力的未曾预料的产物。

本发明揭示了一种氨基硼酸衍生物，其避免了频哪醇酯的缺点。本发明进一步包括一种肽硼酸衍生物，其表现出增强的稳定性。特别地，本发明包括一种药物制剂，其包含一种氨基硼酸衍生物并且可以在十二指肠内提供一种离子性硼酸肽物质同时避免了频哪醇酯的缺点，并可以提供生物利用度。本发明进一步包括硼酸衍生物，其对水解和去硼化相对稳定并且在抑制凝血酶的口服制剂中有益。

本发明涉及一种药物可接受的某些有机硼酸药物的碱加成盐，特别是疏水性硼酸肽(例如二肽或三肽)，及更特别是具有非碱性P1基团的凝血酶抑制剂。作为一个种类，这种盐不仅与现有技术领域的指导相反，而且额外具有改良的稳定性水平，这基于已知化学原理不能解释或预知。

一方面，本发明涉及药物可接受的硼酸的碱加成盐，所述硼酸具有并具有一中性氨基硼酸残基以及经一肽键与该中性氨基硼酸残基相连接的疏水性基团，所述中性氨基硼酸残基能结合凝血酶S1亚位点，所述疏水性基团能结合凝血酶S2和S3亚位点。在第一个实施方案中，揭示了一种药物可接受的例如式(I)所示硼酸的碱加成盐：

其中

Y包含一个疏水性基团，其与氨基硼酸残基-NHCH(R⁹)-B(OH)₂一起对凝血酶的底物结合位点具有亲和性；及

R⁹是由一或多个醚键(例如1或2个)中断的一个直链烷基基团，其中氧和碳原子的总数是3，4，5或6(例如5)，或者R⁹是-(CH₂)_m-W，其中m是2，3，4或5(例如4)，W是-OH或卤素(F，Cl，Br或I)。R⁹在化合物的一个亚型中是烷氧基烷基基团，例如含有4个碳原子的烷氧基烷基。

本发明包含药物可接受的凝血酶的疏水性硼酸抑制剂的碱加成盐，及因此包括肽硼酸的这种盐，其在生理pH及在25℃条件下在1-n-辛醇和水之间的分配系数以log P表示高于1.0。本发明中的一些肽硼酸的分配系数为至少1.5。本发明中一类疏水性肽硼酸的分配系数为不超过5。

作为某些实例揭示的是药物可接受的凝血酶的疏水性硼酸抑制剂的碱加成盐。这种抑制剂可含有疏水性氨基酸，这类氨基酸包括侧链是烃基、含有一个链内氧和/或通过链内氧或杂芳基与分子的其余部分连接的烃基、或者被羟基、卤素或三氟甲基取代的任何前述基团的氨基酸。代表性疏水侧链包括烷基、烷氧基烷基、由至少一种芳基或杂芳基取代的前述基团、芳基、杂芳基，由至少一种烷基取代的芳基以及由至少一种烷基取代的杂芳基。脯氨酸以及环没有被取代的或者由前一句所列的一种基团进行环取代的亚氨基酸也是疏水性的。

一些疏水性侧链含有1-20个碳原子，例如具有1、2、3或4个碳原子的非环状基团。包含一个环状基团的侧链典型地但非必须含有5-13个环成员，在许多情况中是苯基或由一或两个苯基取代的烷基。

疏水性非肽典型地基于上述可以形成疏水性氨基酸侧链的基团。

疏水性化合物可含有例如一个氨基基团和/或一个酸基团(例如-COOH、-B(OH)₂)。通常地，它们不含有任一类型的多极性基团。

一类疏水性有机硼酸在生理pH及在25℃条件下，在1-n-辛醇和水之间的分配系数以log P表示高于1。例如，TRI 50c的分配系数为大约2。

疏水性有机硼酸的一些亚类是在下文标题为“一些实施例详述”中由式(I)和(III)所示的那些化合物。

作为另一个实施方案揭示的是药物可接受的式(II)所示肽硼酸的碱加成盐：

其中：

X是与N末端氨基基团结合的基团，可以是H以形成NH₂。X的性质不是关键的，可以是上述一特殊的X基团。在一个实施例中，是提及的苄氧基羰基。

aa¹是具有一个烃基侧链的氨基酸，其含有不超过20个碳原子(例如最多15个及任选最多13个碳原子)并且包含具有最多13个碳原子的至少一个环状基团。在某些实施例中，aa¹的环状基团有5或6个环成员。例如，aa¹的环状基团可以是芳基基团，特别是苯基。典型地，在aa¹侧链中有一或两个环状基团。某些侧链包含或由被一或两个5或6个成员的环取代的甲基组成。

更特别地，aa¹是Phe、Dpa或其完全或部分氢化的类似物。所述完全氢化的类似物是Cha，因此本发明包括包含有机硼酸的盐例如金属盐的药物，所述有机硼酸是凝血酶抑制剂，特别是具有一个中性P1(S1结合)基团的选择性凝血酶抑制剂。关于结合凝血酶的S3，S2和S1位点的基团的信息见例如Tapparelli C et al，Trends Pharmacol.Sci.14：366-376，1993；Sanderson P et al，Current Medicinal Chemistry，5：289-304，1998；RewinkelJ et al，Current Pharmaceutical Design，5：1043-1075，1999；及Coburn C Exp.Opin.Ther.Patents 11(5)：721-738，2001。本发明的凝血酶抑制性盐非限于在前一句列出的出版物中描述的具有S3，S2和S1亲和性基团的那些。

aa²是有4-6个环成员的一个亚氨基酸。或者，aa²由C₃-C₁₃烃基基团例如包含C₃-C₆烃基环的C₃-C₈烃基基团在N末端取代的Gly；所述烃基基团可以是饱和的，例如N末端取代基是环丙基、环丁基、环戊基和环己基。含有一或多个不饱和键的烃基基团可以是所述的苯基和由苯基取代的甲基或乙基，例如2-苯乙基，以及β，β-二烷基苯乙基。

文献中有一争论之处是水溶液中硼酸根是否形成“三角形”B(OH)₂或者“四面体形”B(OH)₃-硼类，但NMR迹象似乎表明在pH低于硼酸的第一个pKa之处，主要的硼类是中性B(OH)₂。在十二指肠中，pH很可能在6和7之间，因此三角形的种类在那里很可能占优势。在任何情况中，符号-B(OH)₂包括四面体以及三角形硼类，并且在本说明书中表示三角形硼类的符号也包含四面体形的类别。该符号进一步可包含酐形式的硼酸基团(boronic group)。

所述盐可以是溶剂合物形式，特别是水合物形式。

所述盐可包含或者基本由酸式盐组成，其中硼酸是单独去质子化的。因此本发明包括具有与主要(50mol％以上)携带单一负电荷的产物中硼酸根基团一致的金属/硼酸根化学计量的产物。

本发明还提供了所述盐的口服制剂。特别地，本发明提供了包含固相所述盐的口服制剂，例如将微粒的盐配制成压缩的片剂或配制成胶囊。

根据本发明的另一方面，提供了一种治疗其中需要抗血栓形成活性的病症的方法，所述方法包括给予患有或处于这种病症危险之中的患者口服治疗有效量的式(I)所示硼酸的盐。

如后文进一步的描述，本发明还提供了包含本发明的盐的血液透析溶液。

本发明所述的盐包括通过硼酸与强碱反应可获得的产物(具有通过该反应获得的产物的特性)，由此理解本发明的术语“盐”。因此针对所揭示的产物的术语“盐”非必须意味着产物含有分立的阳离子和阴离子，而应理解为包含使用硼酸与碱的反应可获得的产物。本发明在更大或更小程度上包含配位化合物形式的产物。本发明因此还提供了通过硼酸(I)与强碱反应可获得的产物(具有通过这种反应可获得的产物的特性)，以及这种产物的治疗，包括预防应用。

本发明不受盐的制备方法的限制，只要它们含有衍生自硼酸(I)的硼酸根类和一个平衡离子即可。这种硼酸根类可以是其任何平衡形式的硼酸根阴离子。术语“平衡形式”是指相同化合物的不同形式，其可以在平衡等式中表示(例如与硼酸酐平衡及与不同硼酸根离子的平衡中的硼酸)。固相的硼酸盐可以形成酐，并且当所揭示的硼酸盐是固相时可包含硼酸酐，作为硼酸平衡种类。非必需通过含有平衡离子的碱与硼酸(I)反应制备所述盐。另外，本发明包括这样的盐产物，其被认为是通过这种酸/碱反应而间接制备的，以及通过这种间接制备可获得的盐(具有通过这种反应获得的产物的特性)。可能的间接制备方法例如可以是这样的方法，其中在初始盐的回收之后，将其纯化和/或处理以修饰其物理化学性质，例如修饰其固体形式或水合物形式或这两者。

在一些实施方案中，所述盐的阳离子是一价的。

在一些实施方案中，所述盐包含酐类，在其它实施方案中，它们基本是无酐类。

所述盐可以是分离的形式。如通过实施例28的方法确定，所述盐可具有例如至少大约90％的纯度，例如高于或等于大约95％。在药物制剂的情况中，这种盐的形式可以与药物可接受的稀释剂、赋形剂或载体组合。

本发明包括一种从相应的硼酸作为中间体制备盐的方法，以及式(I)所示中间体硼酸和制备其的方法。

本发明的其它方面和实施方案在以下描述和权利要求中阐述。

在本说明书的描述和权利要求中，术语“包含”和“含有”及其变化术语，例如“包括”，是指“包括但非限于”，并且不排除其它基团、添加剂、成分、整数或步骤。

本发明申请含有的数据表明有机硼酸的稳定性(去硼化抗性)可以通过将其以盐例如金属盐的形式提供而增加。在个别的实验中，TRI50c的铵盐表现为基于干燥而分解产生氨，同时胆碱盐表现为迅速分解为去硼化混杂物。尽管已经进行实验以重现这些不可重复的观测结果，但还是提供了一个亚类，其中排除了铵盐和胆碱盐。所述盐可以是酸式盐。在任何情况中，这种稳定化技术形成了本发明的一部分，并且例如可适用于“背景”标题下描述的有机硼酸及在该标题下提及的出版物中描述的有机硼酸。

附图简述

图1是实施例32的一个示意图，示出在经p.o.给予TRI 50b或TRI 50c后的口期清除率和动力学。

图2是实施例32的另一个示意图，示出在经十二指肠内给予TRI 50b或TRI 50c后的口期清除率和动力学。

一些实施例的详述

术语表

在本说明书中使用以下术语和缩写：

针对硼酸的盐所用术语“酸式盐”是指其三角形的酸基团-B(OH)₂的一个-OH基团被去质子化的一种盐。因此其中硼酸根基团携带一个负电荷并可以表示为-B(OH)(O^-)或[-B(OH)₃]^-的盐是酸式盐。该术语涵盖了具有化合价n的阳离子盐，其中硼酸与阳离子的摩尔比率为大约n∶1。在实际中，观察的化学计量不可能真正是n∶1，但与理论的n∶1化学计量一致。例如，观察的阳离子质量可以在针对n∶1化学计量计算的质量之上变化不超过大约10％，例如不超过大约7.5％；在一些情况中，观察的阳离子质量与计算的质量之间的变化不超过大约1％。计算的质量是基于三角形形式的硼酸根。(在原子水平，与酸式盐的化学计量一致的盐可以含有质子化状态的硼酸盐混合物，其平均值与单一去质子化相近，这种“混和的”盐包含在术语“酸式盐”内)。酸式盐例如是单钠盐和半锌盐。

α-氨基硼酸或Boro(aa)是指其中CO₂基团已经由BO₂置换的氨基酸。

术语“氨基基团保护基团”是指用于衍生一个氨基基团尤其是肽或氨基酸的N末端氨基基团的任何基团。这种基团包括但非限于烷基、酰基、烷氧基羰基、氨基羰基和磺酰基基团。然而，术语“氨基基团保护基团”非限于在有机合成中常用的那些特殊的保护基，也非限于易于裂解的那些基团。

本发明所用短语“药物可接受的”是指那些化合物、物质、成分和/或剂型，它们在合理的医学判断范围内，适合用于与人体或动物的组织接触而无过多的毒性、刺激性、变态反应、或其它问题或并发症，与合理的益处/危险率相应。

术语“凝血酶抑制剂”是指一种产物，其在可靠的药物学判断范围内，在药物学方面潜在或真正用作凝血酶的抑制剂，包括包含药物学活性物的物质并且被描述为推荐或审定作为凝血酶抑制剂。这种凝血酶抑制剂可以是选择性的，即其在可靠的药物学判断范围内与其它蛋白酶相比被认为对凝血酶是选择性的；术语“选择性凝血酶抑制剂”包括包含药物学活性物的物质并且被描述为推荐或审定作为选择性凝血酶抑制剂。

术语“杂芳基”是指一个环系统，其具有至少1个(例如1、2或3个)环内杂原子，并且具有一个缀合的环内双键系统。术语“杂原子”包括氧、硫和氮，其中有时不太优选硫。

“天然氨基酸”是指选自如下中性(疏水性或极性)的带正电荷及负电荷的氨基酸的一种L-氨基酸(或其残基)：

疏水性氨基酸

A＝Ala＝丙氨酸

V＝Val＝缬氨酸

I＝Ile＝异亮氨酸

L＝Leu＝亮氨酸

M＝Met＝甲硫氨酸

F＝Phe＝苯丙氨酸

P＝Pro＝脯氨酸

W＝Trp＝色氨酸

极性(中性或无电荷的)氨基酸

N＝Asn＝天冬酰胺

C＝Cys＝半胱氨酸

Q＝Gln＝谷胺酰胺

G＝Gly＝甘氨酸

S＝Ser＝丝氨酸

T＝Thr＝苏氨酸

Y＝Tyr＝酪氨酸

带正电荷的(碱性)氨基酶

R＝Arg＝精氨酸

H＝His＝组氨酸

K＝Lys＝赖氨酸

带负电荷的氨基酸

D＝Asp＝天冬氨酸

E＝Glu＝谷氨酸

ACN＝乙腈

氨基酸＝α-氨基酸

碱加成盐＝向游离酸(在这个情况中是硼酸)中加入一种无机碱或有机碱而制备的盐

Cbz＝苄氧基羰基

Cha＝环己基丙氨酸(一种疏水性非天然氨基酸)

带电荷的(如用于药物或药物分子的片段，例如氨基酸残基)＝在生理pH携带电荷，如在氨基、脒基或羧基基团的情况中

Dcha＝二环己基丙氨酸(一种疏水性非天然氨基酸)

Dpa＝二苯丙氨酸(一种疏水性非天然氨基酸)

药物＝一种药物学有益物质，无论是在体内有活性的还是一种前体药物

i.v.＝静脉内

Mpg＝3-甲氧基丙基甘氨酸(一种疏水性非天然氨基酸)

多价＝至少两价的化合价，例如二或三价

中性的(如用于药物或药物分子的片段，例如氨基酸残基)＝无电荷的＝在生理pH不带电荷

Pinac＝频哪醇＝2，3-二甲基-2，3-丁二醇

蒎二醇＝2，3-蒎二醇＝2，6，6-三甲基二环[3.1.1]庚烷-2，3-二醇

Pip＝2-哌啶酸

p.o.＝per os＝通过口腔给予(因此口服制剂是通过p.o.给予的)

s.c.＝皮下

强碱＝有足够高的pKb以与硼酸反应的碱。合适的这种碱的pKb为7或更高，例如7.5或更高，例如大约8或更高。

THF＝四氢呋喃

Thr＝凝血酶

化合物

本发明的产物包含硼酸的盐，其具有一能结合凝血酶S1亚位点的中性氨基硼酸残基以及经一肽键与该中性氨基硼酸残基相连接的能结合凝血酶S2和S3亚位点的疏水性基团。本发明包含式(I)所示酸的盐：

其中

Y包含一个疏水性基团，其与氨基硼酸残基-NHCH(R⁹)-B(OH)₂一起对凝血酶的底物结合位点有亲和性；及

R⁹是由一或多个醚键中断的直链烷基基团，其中氧和碳原子的总数是3，4，5或6(例如5)，或者R⁹是-(CH₂)_mW，其中m是2，3，4或5(例如4)，W是-OH或卤素(F，Cl，Br或I)。由一或多个醚键(-O-)中断的直链烷基例如可以是提及的烷氧基烷基(一处中断)和烷氧基烷氧基烷基(两处中断)。R⁹是一种化合物亚型中的一个烷氧基烷基基团，例如含有4个碳原子的烷氧基烷基。

典型地，YCO-包含与凝血酶的S2亚位点结合的一个氨基酸残基(无论天然还是非天然的)，氨基酸残基与结合凝血酶的S3亚位点的一个基团在N末端连接。

在一类式(I)所示的酸中，YCO-是任选N末端保护的二肽残基，其与凝血酶的S3和S2结合位点结合，所述酸中的肽键任选并独立地由C₁-C₁₃烃基基团在N末端取代，所述烃基基团任选含有链内和/或环内氮、氧或硫及任选由选自卤素、羟基和三氟甲基的取代基取代。当存在N末端保护基时，其可以是上述基团X(除了氢之外)。通常所述酸不含有N末端取代的肽键；在存在N取代的肽键之处，取代基通常是1C-6C的烃基，例如饱和的烃基；在一些实施方案中N取代基包含一个环，例如环烷基，并可以是例如环戊基。一类酸具有一个N末端保护基(例如X基团)和未取代的肽键。

在YCO-是一个二肽残基之处(无论N末端保护与否)，S3结合氨基酸残基可以是R构型和/或S2结合残基可以是S构型。片段-NHCH(R⁹)-B(OH)可以是R构型。然而本发明非限于这些构象的手性中心。

在一类化合物中，P3(S3-结合)氨基酸和/或P2(S2-结合)氨基酸的侧链是选自式A或B所示基团除了氢之外的一个基团：

-(CO)_a-(CH₂)_b-D_c-(CH₂)_d-E        (A)

-(CO)_a-(CH₂)_b-D_c-C_e(E¹)(E²)(E³)  (B)

其中

a是0或1；

e是1；

b和d独立地是0或者一个整数，由此(b+d)为0-4，或者

(b+e)是1-4；

c是0或1；

D是O或S；

E是H，C₁-C₆烷基，或者一个饱和或不饱和的环基团，其通常含有最多14个成员特别是5-6个成员的环(例如苯基)或者8-14个成员的稠环系统(例如萘基)，烷基或环基团任选由独立地选自如下的最多三个基团(例如一个基团)取代，所述基团为C₁-C₆三烷基甲硅烷基，-CN，-R¹³，-R¹²OR¹³，-R¹²COR¹³，-R¹²CO₂R¹³和-R¹²O₂CR¹³，其中R¹²是-(CH₂)_f-，R¹³是-(CH₂)_gH，或者烷基或环基团任选由一种基团取代，该基团的非氢原子由碳原子和环内杂原子组成，数目为5-14个，其含有一个环系统(例如芳基)及任选一个烷基和/或亚烷基基团，其中f和g均独立地是0-10，g特别是至少1(尽管-OH也可以是一个取代基)，条件是(f+g)不超过10，更特别地不超过6，最特别是1，2，3或4，及条件是如果取代基是含有一个环系统的所述基团则只有一个取代，或者E是C₁-C₆三烷基甲硅烷基；E¹，E²和E³均独立地选自-R¹⁵和-J-R¹⁵，其中J是一个5-6个成员的环，R¹⁵选自C₁-C₆三烷基甲硅烷基，-CN，-R¹³，-R¹²OR¹³，-R¹²COR¹³，-R¹²CO₂R¹³，-R¹²O₂CR¹³及一或两种卤素(例如在后一情况中为形成-J-R¹⁵基团其是二氯苯基)，其中R¹²和R¹³分别是如上述R¹²基团和R¹³基团(在E¹，E²和E³含有R¹³基团的一些酸中，g是0或1)；

在式(A)或(B)所示的基团中，任何环均是碳环或芳族环，或者是这两者；与碳原子键合的任一或多个氢原子均任选由卤素尤其是F取代。

在某些实施例中，a是0。如果a是1，c可以是0。在特殊的实施例中，(a+b+c+d)和(a+b+c+e)不超过4，尤其是1、2或3。(a+b+c+d)可以是0。

E，E¹，E²和E³的基团例如包括芳环如苯基、萘基、吡啶基、喹啉基(quinolinyl)和呋喃基；非芳族不饱和环，例如环己烯基；饱和的环如环己基。E可以是含有芳环和非芳环二者的一个稠环系统，例如芴基。一类E、E¹、E²和E³基团是芳环(包括杂芳环)，尤其是6个成员的芳环。在一些化合物中，E¹是H，同时E²和E³不是H；在那些化合物中，E²和E³基团例如是苯基(取代或未取代的)，C₁-C₄烷基，例如甲基。

在一类实施方案中，E含有一个取代是C₁-C₆烷基，(C₁-C₅烷基)羰基，羧基C₁-C₅烷基，芳基(包括杂芳基)，尤其是5个成员或优选6个成员的芳基(例如苯基或吡啶基)，或芳烷基(例如芳基甲基或芳基乙基，其中芳基可以是杂环的，优选是6个成员的)。

在另一类实施方案中，E含有一个取代是OR¹³，其中R¹³可以是6个成员的环，其可以是芳环(例如苯基)，或者含有的一个取代是由这种6个成员的环取代的烷基(例如甲基或乙基)。

一类式A或B所示的基团是那些其中E是6个成员的芳环，任选特别是在第2或第4位由-R¹³或-OR¹³取代。

本发明包括这样的盐，其中P3和/或P2侧链包含其中1或2个氢原子已经由卤素例如F或Cl置换的一个环状基团。

本发明包括这样的一类盐，其中式(A)或(B)的侧链如下式(C)、(D)或(E)所示：

其中q是0-5，例如是0，1或2，每个T均独立地是氢、卤素(例如F或Cl)、-SiMe₃、-R¹³、-OR¹³、-COR¹³、-CO₂R¹³或-O₂CR¹³。在结构(D)和(E)的一些实施方案中，T是在苯基的第4位，并且是-R¹³、-OR¹³、-COR¹³、-CO₂R¹³或-O₂CR¹³，及R¹³是C₁-C₁₀烷基，更特别的是C₁-C₆烷基。在一个亚类中，T是-R¹³或-OR¹³，例如其中f和g均独立地是0，1，2或3；在这个亚类的一些侧链基团中，T是-R¹²OR¹³及R¹³是H。

在一类基团中，所述侧链如式(C)所示，每个T均独立地是R¹³或OR¹³，及R¹³是C₁-C₄烷基。在一些这种化合物中，R¹³是分支的烷基，在其它化合物中其是直链的。在一些基团中，碳原子数是1-4。

在许多二肽片段YCO-(该二肽可以是N-末端保护或不是)中，P3氨基酸有一个如上述式(A)或(B)所示的侧链，P2残基是一个亚氨基酸。

本发明因此包括这样的药物，其包含是凝血酶抑制剂，特别是选择性凝血酶抑制剂的具有中性P1(S1结合)基团的有机硼酸的盐例如金属盐。关于结合凝血酶S3，S2和S1位点的基团的更多信息，见例如Tapparelli C et al，Trends Pharmacol.Sci.14：366-376，1993；Sanderson Pet al，Current Medicinal Chemistry，5：289-304，1998；Rewinkel J et al，Current Pharmaceutical Design，5：1043-1075，1999；及Coburn C Exp.Opin.Ther.Patents 11(5)：721-738，2001所述。本发明的凝血酶抑制性盐非限于在前一句中列出的出版物中描述的具有S3，S2和S1亲和性基团的那些。

所述硼酸对凝血酶的Ki为大约100nM或更低，例如为大约20nM或更低。

式(I)所示酸的一个亚型包含式(III)所示的酸：

X是与N末端氨基基团键合的一个基团，可以是H以形成NH₂。X的性质不是关键的，但可以是上述特定的X基团。在一个实施例中，可以是提及的苄氧基羰基。

在某些实例中，X是R⁶-(CH₂)_p-C(O)-，R⁶-(CH₂)_p-S(O)₂-，R⁶-(CH₂)_p-NH-C(O)-或R⁶-(CH₂)_p-O-C(O)-，其中p是0，1，2，3，4，5或6(优选0和1)，R⁶是H或者是5-13个成员的环基团，该基团任选由选自卤素，氨基，硝基，羟基，C₅-C₆环状基团，C₁-C₄烷基及含有链内氧和/或与5-13个成员的环基团通过链内氧连接的C₁-C₄烷基的1、2或3个取代基取代，前述烷基基团任选由选自卤素，氨基，硝基，羟基和C₅-C₆环状基团的一个取代基取代。更特别地，X是R⁶-(CH₂)_p-C(O)-或R⁶-(CH₂)_p-O-C(O)-，p是0或1。所述5-13个成员的环状基团通常是芳环或杂芳环，例如是6个成员的芳环或杂芳环基团。在许多情况中，该基团不被取代。

X基团例如是(2-吡嗪)羰基，(2-吡嗪)磺酰基，特别是苄氧基羰基。

aa¹是具有一个烃基侧链的氨基酸残基，该侧链含有不超过20个碳原子(例如最多15个及任选最多13个碳原子)并包含具有最多13个碳原子的至少一个环状基团。在某些实施例中，aa¹的环状基团有5或6个环成员。例如aa¹的环状基团可以是芳基，特别是苯基。典型地，在aa¹侧链中有一或两个环状基团。某些侧链包含或由被一或两个5或6个成员的环取代的甲基组成。

更特别地，aa¹是Phe，Dpa或其完全或部分氢化的类似物。完全氢化的类似物是Cha和Dcha。

aa²是一个有4-6个环成员的亚氨基酸残基。

一类产物例如是包含其中aa²是式(IV)所示亚氨基酸的残基的那些产物：

其中R¹¹是-CH₂-，CH₂-CH₂-，-S-CH₂-或-CH₂-CH₂-CH₂-，当环是5或6个成员时，该基团任选在一或多个-CH₂-基团由1-3个C₁-C₃烷基取代，例如以形成R¹¹基团-S-C(CH₃)₂-。例如这些亚氨基酸是铃兰氨酸，特别是(s)铃兰氨酸，更特别是脯氨酸。

从上所可知，一类非常优选的产物由其中aa¹-aa²是Phe-Pro的那些组成。在另一优选的类别中，aa¹-aa²是Dpa-Pro。在其它产物中，aa¹-aa²是Cha-Pro或Dcha-Pro。当然，也包括其中Pro由(s)-铃兰氨酸置换的相应的产物类别。

R⁹如前述，并且可以是式-(CH₂)_s-Z所示的一基团R¹。整数s是2，3或4，W是-OH，-OMe，-OEt或卤素(F，Cl，I或者优选Br)。特别说明的是Z基团是-OMe和-OEt，尤其是-OMe。在一些实施例中，对所有Z基团而言s是3，事实上对本发明所有化合物而言均如此。特别地，R¹基团是2-溴乙基，2-氯乙基，2-甲氧基乙基，4-溴丁基，4-氯丁基，4-甲氧基丁基，特别是3-溴丙基，3-氯丙基和3-甲氧基丙基。更优选地，R¹是3-甲氧基丙基。2-乙氧基乙基是另一个优选的R¹基团。

因此，一类非常优选的盐由式X-Phe-Pro-Mpg-B(OH)₂尤其是式Cbz-Phe-Pro-Mpg-B(OH)₂所示酸的那些盐组成；也优选的是其中Mpg由一个具有另一个特别优选的R¹基团的残基置换和/或Phe由Dpa或另一个aa¹残基置换的这些化合物的类似物。

所述盐的aa¹基团优选是R构型。aa²基团优选是(S)-构型。特别优选的盐具有(R)-构型的aa¹及(S)-构型的aa²。手性中心-NH-CH(R¹)-B-优选是(R)-构型。商业制剂具有(R，S，R)排列中的手性中心，例如在Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH的盐的情况中：

本发明包括Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-boroMpg-OH(及式X-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-boroMpg-OH所示其它化合物)的盐，其是至少90％纯的，例如至少95％纯。

在主要的术语中，本发明的盐可被认为是相应于上述有机硼酸与一种强碱的反应产物，例如碱金属化合物；然而所述盐非限于得自这种反应的产物，而且可以是通过另外途径获得的产物。

所述盐因此可通过将式(I)所示酸与一种强碱接触而获得。本发明因此涵盖了具有式(I)所示酸与强碱的反应产物的性质的产物(物质组合物)。所述碱是药物可接受的。

可以提及的合适的盐是：

1.金属盐，特别是一价的金属，可提及的是碱金属；

2.强碱性有机含氮化合物的盐，包括：

2A.胍的盐及其类似物；

2B.强碱性胺的盐，例如包括(i)氨基糖和(ii)其它胺。

在上述盐中，特别说明的是碱金属，尤其Na和Li。也说明了氨基糖。

特异性盐是酸性硼酸(acid boronate)的盐，尽管实际上所述酸式盐可含有非常少部分的双去质子化硼酸盐。术语“酸性硼酸”是指三角形的-B(OH)₂基团，其中B-OH基团之一是去质子化的，以及是指平衡中相应的四面体形基团。酸性硼酸具有与单一去质子化一致的化学计量。

本发明因此包括包含可由式(V)表示的盐的产物(物质组合物)：

其中Yⁿ⁺是一种药物可接受的可得自强碱的阳离子，aa¹，aa²，X和R¹如上述。本发明还包括其中R¹由另一个R⁹基团置换的产物。

一类盐的溶解性当如实施例所述在25mg/ml的分散系中确定时，其溶解性为大约10mM或更多，例如至少大约20mM。更特别的是当其溶解性如实施例所述在50mg/ml的分散系中确定时为至少50mM。

本发明包含式(I)所示硼酸的盐，其观察化学计量与式“(硼酸根^-)_n阳离子ⁿ⁺”所示的盐的化学计量一致。一类这种盐由下式表示：

[Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)(O^-)]M⁺

其中M+代表一个一价的阳离子，尤其是碱金属阳离子。应理解上述表示式是产物的理论上的表示式，其观察化学计量未必完全及确切地是1∶1。在上式中，三角形表示的硼酸根总是代表三角形、四面体形或混合的三角形/四面体形的硼酸根。

特别例示这样的产物，其包含：

(i)选自(a)式(VIII)：X-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)₂所示的酸，其中X是H或者氨基保护基，尤其是Cbz，及(b)其硼酸根阴离子的种类；及

(ii)与所述种类组合的具有化合价n的离子，所述种类和所述离子具有与n∶1的理论种类：离子化学计量一致的观测化学计量。在一类盐中，V是1。

然后考虑平衡离子：

1.一价金属，尤其碱金属盐

合适的碱金属包括锂、钠和钾。所有这些均是明显可溶的。因为其高度溶解性例证锂和钠。锂盐特别是钠盐相对于钾盐是显著高溶解性的。许多情况中使用钠。本发明涵盖了含有碱金属混合物的盐。

本发明包括包含式(VI)的盐的产物：

其中M⁺是一种碱金属离子，aa¹，aa²，X和R¹如上述，本发明还包括这样的盐，其中硼酸根基团的两个羟基基团均是盐形式(优选具有另一个相同的M⁺基团)，及这种盐的混合物。本发明还包括这样的产物，其中R¹由另一个R⁹基团置换。

2.强碱性有机含氮化合物

本发明包括可通过如上述的肽硼酸与一种强有机碱反应获得的产物(具有通过这种反应获得的产物的特性)。两类优选的有机碱在下文2A和2B中描述。特别优选的是酸式盐(其中两个硼酸-OH基团之一是去质子化的)。最常见地，所述盐含有单一类型的有机平衡离子(不考虑痕量污染物)，然而本发明也涉及含有有机平衡离子混合物的盐；在一个亚类中，所述不同的平衡离子均属于下述段落2A家族，或者也有可能属于下述段落2B家族；在另一亚类，所述盐包含并非全部来自于同一家族(2A或2B)的有机平衡离子的混合物。

合适的有机碱包括pKb为7或更高、例如7.5或更高的那些有机碱，如在8或更高的范围。优选亲脂性较低的碱[例如有至少一个极性官能团(例如1，2或3个这种基团)，如羟基]；因此氨基糖是一类优选的碱。

2A.胍及其类似物

胍基化合物(胍)原则上可以是任何可溶的及药物可接受化合物，其具有一个胍基或取代的胍基基团，或者一个取代或未取代的胍类似物。合适的取代基包括芳基(例如苯基)，烷基或由一个醚键或硫醚键中断的烷基，在任何情况中，典型地含有1-6个、尤其1、2、3或4个碳原子，如在甲基或乙基的情况中。所述胍基基团可有1，2，3或4个取代基团，但通常有1或2个取代基团，例如在末端氮上。一类胍是单烃基化的；另一类是二烃基化的。作为胍类似物可以提及的是硫胍和2-氨基吡啶。具有未取代的胍基基团、例如胍和精氨酸的化合物形成一个特殊类别。

本发明涉及含有胍混合物的盐。

一种特殊的胍基化合物是L-精氨酸或L-精氨酸类似物，例如D-精氨酸，或者高精氨酸或精胍基丁胺[(4-氨基丁基)胍]的D-或优选L-异构体。不太优选的精氨酸类似物例如是NG-硝基-L-精氨酸甲酯，及限制的胍类似物，特别是2-氨基嘧啶，例如2，6-喹唑啉二胺如5，6，7，8-四氢-2，6-喹唑啉二胺。胍基混合物也可以是一种肽，例如含有精氨酸的二肽；一个这样的二肽是L-酪氨酰-L-精氨酸。

一些特殊的胍基化合物是式(VII)所示的化合物：

其中n式1-6，例如至少是2，例如3或更多，在许多情况中不超过5。最特别地，n是3，4或5。R²是H或羧酸盐或衍生的羧酸盐，例如以形成一种酯(例如C₁-C₄烷基酯)或酰胺。R³是H，C₁-C₄烷基或者一个天然或非天然氨基酸(例如酪氨酸)的残基。式(IV)所示化合物通常是L-构型。式(IV)所示化合物是精氨酸(n＝3；R²＝羧基；R³＝H)及精氨酸衍生物或类似物。

本发明包括包含式(IX)的盐的产物：

其中aa¹，aa²，X和R¹如前述，G⁺是质子化形式的一种药物可接受的有机化合物，其包含一个胍基基团或其类似物，本发明还包括其中硼酸根基团的两个羟基基团均是盐形式的(优选具有另一个相同的G⁺基团)的盐及这种盐的混合物。本发明还包括其中R¹由另一个R⁹基团置换的产物。

2B.强碱性胺

本发明包括可通过上述肽硼酸与一种强碱反应获得的产物(具有通过这种反应获得的产物的特性)，所述强碱是一种胺。所述胺原则上可以是任何可溶的及药物可接受的胺。

一合适类别的胺包括除了单一胺基团外还具有极性官能团的那些，这种化合物更亲水性更强并因此与其它化合物相比更可溶。在某些盐中，所述或每个额外的官能团均是羟基。一些胺有1，2，3，4，5或6个额外的官能团，尤其是羟基基团。例如在一类胺中，(氨基加上羟基基团)∶碳原子的比率为1∶2至1∶1，特别优选后一比率。具有一或多个额外的极性官能团的这些胺可以是烃，尤其是由氨基基团和额外的极性基团取代的烷。所述氨基基团可以是取代或未取代的，并且排除氨基取代，极性碱可包含例如至多10个碳原子；通常不少于3个这种碳原子，例如4，5或6个。氨基糖包含在这种极性碱的范畴内。

本发明包括包含式(X)的盐的产物：

其中aa¹，aa²，X和R¹如前述，A⁺是质子化形式的一种药物可接受的胺，本发明还包括其中硼酸根基团的两个羟基均是盐形式(优选地具有另一个相同的A⁺基团)的盐及这种盐的混合物。在一类这种产物中，A⁺是如段落2B(i)所述的质子化形式的一种胺；在另一类别中，A⁺是如2B(ii)所述的质子化形式的一种胺。本发明还包括其中R¹被另一个R⁹基团置换的产物。

段落2B(i)和2B(ii)举例说明了两类胺碱。特别优选的是酸式盐(其中两个硼酸-OH基团之一是去质子化的)。最常见地，所述盐含有单一类型的胺平衡离子(不考虑痕量污染物)，然而本发明也涉及含有胺平衡离子混合物的盐；在一个亚类中，所述不同的平衡离子均属于下述段落2B(i)家族，或者也有可能属于下述段落2B(ii)家族；在另一亚类，所述盐包含并非全部属于同一家族(2B(i)或2B(ii))的有机平衡离子的混合物。

2B(i)氨基糖

氨基糖的特性对本发明不是关键的。优选的氨基糖包括开放环的糖，尤其是葡糖胺。也优选环形的氨基糖。一类氨基糖是N末端未取代的，另一类优选是N末端由一或两个(例如一个)N末端取代基取代的。合适的取代基例如是烃基基团，非限于含有1-12个碳原子；所述取代基可包含烷基或芳基基团或这二者。取代基例如是C₁，C₂，C₃，C₄，C₅，C₆，C₇和C₈烷基基团，特别是甲基和乙基，例证了甲基。数据表明氨基糖、尤其N-甲基-D-葡糖胺具有非常高的溶解性。

一种最优选的氨基糖是N-甲基-D-葡糖胺：

2B(ii)其它胺

其它合适的胺包括氨基酸(无论天然发生与否)，其侧链由一个氨基基团、尤其赖氨酸取代。

一些胺是式(XI)所示的化合物：

其中n，R²和R³与式(IV)中所示相同。式(VI)的化合物通常是L-构型。式(VI)的化合物是赖氨酸(n＝4；R²＝羧基；R³＝H)及赖氨酸衍生物或类似物。最优选的胺是L-赖氨酸。

其它合适的胺是含氮杂环。至少通常这种杂环化合物是脂环族的；一类杂环化合物是N取代的，另一类优选是N未取代的。所述杂环可含有6个环形成原子，如在哌啶、哌嗪和吗啉的情况中。一类胺包括由极性取代基、尤其羟基取代的含N杂环，例如取代1、2或3次。

本发明因此包括除了氨基糖之外的胺，其除了一个胺基团之外还具有一或多个(例如1，2，3，4，5或6)极性取代基，尤其是羟基。这种化合物的(氨基加羟基基团)∶碳原子的比率为1∶2-1∶1，特别优选后一比率。

本发明包括混和的盐，即含有硼酸肽基团和/或平衡离子的混合物的盐，但优选单一的盐。

固体形式的盐可含有一种溶剂，例如水。本发明包括其中所述盐基本上是无水的一类产物。本发明还包括其中所述盐是水合物的一类产物。

本发明产物的应用

本发明的盐是凝血酶抑制剂。其因此用于抑制凝血酶。因此本发明提供了具有控制淤血及尤其抑制凝集的潜力的化合物，例如在治疗或预防心肌梗塞形成后的继发事件。所述化合物的医学应用可以是预防性的(包括治疗血栓形成以及预防血栓形成的发生)以及治疗性的(包括预防血栓形成再次发生或继发血栓形成事件)。

当需要抗凝血酶原制剂时可以应用所述盐。另外，已经发现所述盐包括式(III)所示的硼酸的那些盐，可通过治疗或预防用于治疗动脉血栓形成。所揭示的盐因此示出可治疗或预防动物包括人的血液和组织中血栓形成及血凝过快。术语“血栓形成”包括例如衰弱性血栓形成、动脉血栓形成、心内血栓形成、冠状动脉血栓形成、匐行性血栓形成、传染性血栓形成、肠系膜血栓形成、胎盘血栓形成、蔓延性血栓形成、外伤性血栓形成及静脉血栓形成。

已知血凝过快可导致血栓栓塞性疾病。

可以用本发明的化合物治疗或预防的静脉血栓栓塞例如包括静脉阻塞、肺动脉阻塞(肺栓塞)、深部静脉血栓形成、与癌症和癌症化疗相关的血栓形成、继发于具有血栓形成倾向的疾病如蛋白C缺乏、蛋白S缺乏、抗凝血酶III缺乏及因子V Leiden的血栓形成、及得自获得性血栓形成倾向的疾病如系统性红斑狼疮(炎症性结缔组织疾病)的血栓形成。对于静脉血栓栓塞而言，本发明的化合物用于保持留置导管的开放性。

可以用本发明的化合物治疗或预防的心源性血栓栓塞例如包括血栓栓塞性中风(导致与脑供血不足相关的神经学病变的分离血栓)、与心房纤颤(快速的、不规律的上部心房肌纤维颤搐)相关的心源性血栓栓塞、与修复的心脏瓣膜如人工心脏瓣膜相关的心源性血栓栓塞、及与心脏疾病相关的心源性血栓栓塞。

包含动脉血栓形成的病症例如包括不稳定性绞痛(胸部源于冠状动脉的严重的压榨性疼痛)、心肌梗塞(由于血供不足引起的心肌细胞死亡)，缺血性心脏病(由于血供阻塞(如动脉狭窄)所致局部缺血)、在经皮穿刺冠状动脉成形术期间或之后的再闭塞、在经皮穿刺冠状动脉成形术后再狭窄、冠状动脉旁路搭桥术的闭塞、及阻塞性脑血管疾病。就动静脉(混和的)血栓形成而言，本发明的抗血栓形成化合物也用于保持动静脉支路的开放性。

可以提及的与血凝过快及血栓栓塞性疾病血管的其它病症继发于或获得自肝素辅助因子II的缺乏、循环抗磷脂抗体(狼疮抗凝血剂)的缺乏、高半胱氨酸血症、肝素诱导的血小板减少症及纤维蛋白溶解缺陷。

可以提及的特殊用途包括治疗性和/或预防性处理静脉血栓形成及肺栓塞。本发明的产物(特别是TRI 50c的盐)的优选用途包括：

·预防静脉血栓栓塞(例如深部静脉血栓形成和/或肺栓塞)。例如包括经历整形外科手术如全部髋关节置换、全部膝关节置换、主要髋或膝关节手术的患者；处于血栓形成高危险状态中经历普通外科手术的患者，如癌症的腹部或骨盆手术；及卧床3天以上及具有急性心力衰竭、急性呼吸衰竭、感染的患者。

·预防患者血液透析通路、晚期肾病患者中血栓形成。

·预防晚期肾病患者中心血管病变(死亡、心肌梗塞等)，无论是否需要血液透析。

·预防通过留置导管接受化疗的患者中静脉血栓栓塞事件。

·预防经历下肢动脉重建手术(旁路、终动脉切除术、穿刺血管成形术等)的患者中血栓栓塞事件。

·治疗静脉血栓栓塞事件。

·与另一种心血管治疗剂组合预防急性冠状动脉综合征中的心血管事件(例如不稳定心绞痛、无Q波心肌缺血/梗塞)，所述另一种心血管治疗剂例如是阿司匹林(乙酰水杨酸；阿司匹林是在德国已经注册的商标)、溶血栓剂(见下文实例)、抗血小板制剂(见下文实例)。

·与乙酰水杨酸、溶血栓剂(见下文实例)组合治疗患有急性心肌梗塞的患者。

本发明的凝血酶抑制剂因此可用于治疗和/或预防性处理前述所有病症。

在一个方法中，本发明的产物用于治疗血液透析的患者，通过在透析溶液中提供本发明的产物，如在WO 00/41715中关于其它凝血酶抑制剂所述。本发明因此包含透析溶液及包含本发明的一种产物的透析浓缩物，本发明还包含治疗需要这种治疗的透析患者的方法，所述方法包括使用一种包含低分子量凝血酶抑制剂的透析溶液。本发明还包括本发明的抗血栓形成的产物在生产治疗透析患者的药物中的应用，其中本发明的抗血栓形成产物在透析溶液中提供。

在另一个方法中，本发明的产物用于抗击不利的细胞增殖，如在WO 01/41796中关于其它凝血酶抑制剂所述。所述不利的细胞增殖是典型不利的增生性细胞增殖，例如平滑肌细胞、尤其血管平滑肌细胞的增殖。发现本发明的产物在治疗内膜超常增生中特别有用，血管内膜增生的一部分是平滑肌细胞增生。再狭窄可被认为是由于新生内膜超常增生所致；因此本发明说明书中内膜超常增生包括再狭窄。

本发明的产物也预期可治疗缺血性疾病。更特别地，它们可用于治疗(无论治疗性或是预防性)患有或处于非瓣膜心房纤颤(NVAF)危险中的患者的缺血性疾病，如WO 02/36157中关于其它凝血酶抑制剂所述。缺血性疾病是其结果包括机体一部分血流限制的病症。该术语应理解为包括血液、组织和/或器官中的血栓形成和血凝过快。可以提及的特殊用途包括预防和/或治疗缺血性心脏病、心肌梗塞、系统性栓塞例如在肾或脾中，及更特别是脑缺血，包括脑血栓形成、脑栓塞和/或与非脑血栓形成或栓塞相关的脑缺血(换句话说，即治疗(无论治疗性还是预防性)血栓形成性或缺血性中风及治疗短暂脑缺血发作)，特别是治疗患有或处于NVAF危险中的患者。

本发明的产物还预期可治疗风湿性/关节炎疾病，如在WO03/007984中关于其它凝血酶抑制剂所述。因此，本发明的产物可用于治疗慢性关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎或强直性脊椎炎。

另外，期望本发明的产物用于预防溶栓、经皮穿刺血管成形术(PTA)及冠状动脉旁路术后再闭塞(即血栓形成)；预防一般性显微外科和血管手术后再次血栓形成。本发明的产物的用途进一步包括治疗和/或预防性治疗由细菌、多处外伤、中毒或任何其它机制导致的弥散性血管内凝血；当血液与机体内外源表面如血管移植物、血管支架、血管导管、机械性和生物性修复的瓣膜或任何其它医学装置接触时进行抗凝血处理；及当血液与机体外医学装置接触如在使用心-肺机进行心血管手术期间或在血液透析时进行抗凝血处理。

本发明的产物的用途进一步包括治疗其中存在不利的过量凝血酶而无血凝过快迹象的病症，例如神经变性疾病如阿尔茨海默病。除了凝血酶对凝集过程的作用之外，已知其可激活大量细胞(如嗜中性粒细胞、成纤维细胞、内皮细胞和平滑肌细胞)。因此，本发明的化合物也可用于治疗和/或预防性治疗特发性及成人呼吸窘迫综合征、在放疗或化疗处理后的肺纤维化、败血症休克、败血病、炎症反应，包括但非限于水肿，急性或慢性动脉硬化如冠状动脉疾病、脑动脉疾病、周围动脉疾病、再灌注损伤及在经皮穿刺成形术(PTA)后再狭窄。

所述盐还可以用于治疗胰腺炎。

本发明的盐进一步可用于抑制血小板促凝血活性。本发明提供了一种抑制血小板促凝血活性的方法，通过给予患有或处于动脉血栓形成危险中的哺乳动物、特别是人一种本发明所述的硼酸的盐。本发明还提供了这种盐在生产抑制血小板促凝血活性的药物中的应用。

本发明的产物作为血小板促凝血活性抑制剂的应用基于这样观察，即本发明的硼酸表现出有效抑制动脉血栓形成以及静脉血栓形成。

包含动脉血栓形成的病症包括急性冠状动脉综合征(尤其是心肌梗塞和不稳定心绞痛)，脑血管血栓形成和周围动脉闭塞及由于心房纤颤、瓣膜性心脏病，动静脉旁路，留置导管或冠状动脉支架发生的动脉血栓形成。因此，本发明另一方面提供了一种治疗选自这些疾病或病症的方法，包括给予哺乳动物尤其是人类患者一种本发明的盐。本发明包括用于动脉环境例如冠状动脉支架或其它动脉植入体中的产物，其具有包含本发明的盐的一个包被。

本发明的盐可预防性用于治疗确信处于患有动脉血栓形成或者包含动脉血栓形成的疾病或病症的危险中的个体，或者治疗性应用(包括预防血栓形成的再次发生或继发的血栓形成)。

因此本发明包括所述选择性凝血酶抑制剂(有机硼酸盐)在预防性或治疗性处理上述疾病中的应用，以及其在药物制剂及药物制剂的生产中的应用。

给药及药物制剂

所述盐可以给予宿主，例如在所述药物有抗凝血酶原活性的情况中，以获得抗凝血酶原作用。在较大动物如人的情况中，所述化合物可单独给予或与药物可接受的稀释剂、赋形剂或载体组合给予。术语“药物可接受的”包括人和兽医目的均可接受性，其中优选人用药物应用可接受性。在口服给药的情况中，所述化合物优选以防止本发明的盐与酸性胃液接触的形式给予，如是肠衣制剂形式，这样防止本发明的盐释放直至达到十二指肠。

肠衣例如是由碳水化合物聚合物或聚乙烯聚合物适当地制成。肠衣原料例如包括但非限于乙酸纤维素邻苯二甲酸酯，乙酸纤维素琥珀酸酯，纤维素氢邻苯二甲酸酯，乙酸纤维素偏苯三酸酯，乙基纤维素，羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯，羟丙基甲基乙酸纤维素琥珀酸酯，羧甲基乙基纤维素，淀粉乙酸邻苯二甲酸酯，直链淀粉乙酸邻苯二甲酸酯，聚乙酸乙烯酯邻苯二甲酸酯，聚丁酸乙烯酯邻苯二甲酸酯，苯乙烯顺丁烯二酸共聚物，甲基丙烯酸-甲基丙烯酸共聚物(MPM-05)，甲基丙烯酸-甲基丙烯酸-甲基丙烯酸甲酯共聚物(MPM-06)，及甲基甲基丙烯酸-甲基丙烯酸共聚物(Eudragit

L&S).。任选所述肠衣含有一种增塑剂。增塑剂例如包括但非限于柠檬酸三乙酯，三醋精和二乙基邻苯二甲酸酯。

本发明的盐可以组合和/或与任何心血管治疗剂共同给予。在商业应用、临床评价和临床前研发中有大量可利用的心血管治疗剂，可以加以选择与本发明的产物一起通过组合药物治疗以预防心血管疾病。这种制剂可以是选自但非限于几个主要类别的一或多种制剂，即降脂药物，包括IBAT(回肠Na⁺/胆酸协同转运蛋白)抑制剂，贝特类药(fibrate)，烟酸，抑制素，CETP(胆固醇酯转移蛋白)抑制剂，及胆酸螯合剂，抗氧化剂，包括维生素E和普罗布可(probucol)，IIb/IIIa拮抗剂(例如abciximab，eptifibatide，tirofiban)，醛甾酮抑制剂(例如螺内酯(spirolactone)和epoxymexrenone)，腺苷A2受体拮抗剂(例如losartan)，腺苷A3受体激动剂，β-阻滞剂，乙酰水杨酸，袢利尿剂及ACE(血管紧张素转换酶)抑制剂。

本发明的盐可以组合和/或与具有不同作用机制的任何抗血栓形成剂共同给予，如抗血小板制剂乙酰水杨酸，ticlopidine，clopidogrel，血栓烷受体和/或合成酶抑制剂，前列环素模拟物和磷酸二酯酶抑制剂及ADP-受体(P₂T)拮抗剂。

本发明的产物在治疗血栓形成疾病、特别在心肌梗塞中可进一步组合和/或与溶栓剂共同给予，所述溶栓剂如组织纤溶酶原激活物(天然的、重组的或修饰的)，链激酶，尿激酶，尿激酶原，茴香酰纤溶酶原-链激酶激活物复合物(APSAC)，动物唾液腺纤溶酶原激活物等等。

本发明的盐可以组合和/或与一种保心剂例如腺苷A1或A3受体激动剂共同给予。

本发明还提供了治疗患者炎症疾病的一种方法，包括用本发明的产物与NSAID例如COX-2抑制剂一起治疗该患者。这种疾病包括但非限于肾炎，系统性红斑狼疮，类风湿性关节炎，肾小球肾炎，脉管炎和肉样瘤病。因此，本发明的抗血栓形成盐可以组合和/或与NSAID共同给予。

因此，典型地，本发明的盐可以给予宿主以获得一种凝血酶抑制作用，或者本发明中提及的任何其它凝血酶抑制性或抗血栓形成作用。

本发明药物组合物中活性成分的实际剂量水平可以变化，以获得针对特定患者、组合物及给药模式有效达到所需治疗应答的活性化合物的量(本发明称之为“治疗有效量”)。所选择的剂量水平依赖于特定化合物的活性，所治疗的病症的严重性及所治疗的患者的状态和现病史。然而，本领域技术人员已知所述化合物的起始剂量低于达到希望的治疗作用所需要的水平，然后逐步增加剂量直至达到希望的作用。

例如，目前预期在口服给予TRI 50c的盐的情况中，所述盐例如可以每日两次给予0.5-2.5mg/Kg的量，计作TRI 50c的量。其它盐可以等摩尔量给予。本发明非限于以这种数量或方案给予，包括在前句所述之外的剂量和方案。

根据本发明的另一方面，提供了一种口服药物制剂，其包含本发明的产物并混和一种药物可接受的佐剂、稀释剂或载体。

口服给药的固体剂型包括胶囊、片剂(也称为药丸)、粉末和颗粒。在这种固体剂型中，所述活性化合物典型地混合至少一种惰性的药物可接受的赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或一或多种以下原料：a)充填剂或增量剂如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；b)粘合剂如羧甲基纤维素，藻酸盐，明胶，聚乙烯吡咯烷酮，蔗糖和阿拉伯树胶(acacia)；c)湿润剂如甘油；d)崩解剂如琼脂-琼脂，碳酸钙，马铃薯或木薯淀粉，藻酸，某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂如石蜡；f)吸收促进剂如季铵化合物；g)湿润剂如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；h)吸收剂如高岭土和皂土及i)润滑剂如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠及其混合物。在胶囊和片剂的情况中，所述剂型还可以包含缓冲剂。在软和硬填充的明胶胶囊中也可以使用相似类型的固体组合物用作充填剂，例如使用乳糖以及高分子量的聚乙二醇作为赋形剂。

适当地，口服制剂可含有一种溶解辅助物。所述溶解辅助物非限于是其性质，只要其是药物可接受的即可。例如包括非离子表面活性剂，如蔗糖脂肪酸酯，甘油脂肪酸酯，失水山梨糖醇脂肪酸酯(例如失水山梨醇三油酸酯)，聚乙二醇，聚氧乙烯氢化蓖麻油，聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯，聚氧乙烯烷基醚，甲氧基聚乙氧烯烷基醚，聚氧乙烯烷基苯基醚，聚乙二醇脂肪酸酯，聚氧乙烯烷基胺，聚氧乙烯烷基硫醚，聚氧化烯聚氧丙烯共聚物，聚氧乙烯甘油脂肪酸酯，季戊四醇脂肪酸酯，丙二醇单脂肪酸酯，聚氧乙烯丙二醇单脂肪酸酯，聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯，脂肪酸烷基醇酰胺，及烷基胺氧化物；胆汁酸及其盐(例如鹅脱氧胆酸，胆酸，脱氧胆酸，脱氢胆酸及其盐，及甘氨酸或其牛磺酸缀合物)；离子表面活性剂，如十二烷基硫酸钠，脂肪酸皂，烷基磺酸盐，烷基磷酸盐，磷酸乙醚，碱性氨基酸的脂肪酸盐；三乙醇胺皂，及烷基季铵盐；及兼性表面活性剂如甜菜碱和氨基羧酸盐。

所述活性化合物也可以是微囊化形式，如果适当则具有一或多种上述赋形剂。

口服制剂的液体剂型包括药物可接受的乳状液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物之外，该液体剂型可含有本领域常用的惰性稀释剂如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂如乙醇，异丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苯甲醇，苯甲酸苄酯，丙二醇，1，3-丁二醇，二甲基甲酰胺，油(特别是棉油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)，甘油，四氢糠醇，聚乙二醇及脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及其混合物。除了惰性稀释剂之外，口服组合物还可以包括佐剂如湿润剂，乳化剂和悬浮剂，甜味剂，调味剂和香料。悬浮液除了所述活性化合物之外，还可含有悬浮剂如乙氧基化异硬脂醇，聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨糖醇酯，微晶纤维素，间氢氧化铝，皂土，琼脂-琼脂，及黄蓍胶及其混合物。

本发明的产物可以是细碎粒状的固体形式，例如可以是微粉化的。粉末或细碎粒可以装入胶囊。

所述活性混合物可以单一剂量、多重剂量或作为缓释制剂给予。

从前述内容应理解本发明提供了适于给药的干细颗粒形式的药物产物，其包含式(I)所示硼酸的金属盐，例如碱金属盐。所述金属盐可以是适于口服的形式。所述金属盐优选是一种酸式盐。

合成

1.肽/肽模拟物的合成

硼酸肽包括例如Cbz-D-Phe-Pro-BoroMpg-O频哪醇的合成是本领域技术人员熟知的，并在现有技术领域已经加以描述，包括Claeson et al(US 5574014及其它)和Kakkar et al(WO 92/07869及同族专利，包括US5648338)。Elgendy et al Adv.Exp.Med.Biol.(USA)340：173-178，1993；Claeson，G.et al Biochem.J.290：309-312，1993；Deadman et al J.Enzyme Inhibition 9：29-41，1995及Deadman et al J.Med.Chem.38：1511-1522，1995对此也加以了描述。

在手性B末端碳S或R构型的立体选择性合成可以使用确定的方法学进行(Elgendy et al Tetrahedron.Lett.33：4209-4212，1992；WO92/07869及同族专利，包括US 5648338)，使用(+)或(-)-蒎二醇作为手性定向物(chiral director)(Matteson et al J.Am.Chem.Soc.108：810-819，1986；Matteson et al Organometallics.3：1284-1288，1984)。另一种方法是溶解必备的氨基硼酸酯中间体(例如Mpg-BO频哪醇)以选择性获得希望的(R)-异构体并将其与二肽基团(例如Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro，与Cbz-D-Phe-L-Pro相同)偶联，这将形成所述分子的剩余物。

所述硼酸肽最初可以硼酸酯形式合成，特别是具有二醇的酯。如下文所述，这种二醇酯可以转变为肽硼酸。

2.酯至酸的转化

可以将一种肽硼酸酯如Cbz-(R)-Phe-Pro-BoroMpg-O频哪醇水解以形成相应的酸。

将式(I)所示肽硼酸的二醇酯转变为酸的一种新技术包括将该二醇酯溶解于醚尤其二烷基醚中，由此溶解的二醇与一种二醇胺例如二烷醇胺反应形成沉淀产物，回收该沉淀，将其溶解于极性有机溶剂中并将由此溶解的产物与一种水性介质例如水性酸反应，形成肽硼酸。所述硼酸可以从得自反应的混合物的有机层中回收，例如通过除去溶剂进行，如通过在真空下蒸发或蒸馏除去溶剂。二醇酯与二醇胺之间的反应可以在例如回流下进行。

二醇的性质不是关键的。可以提及的合适的二醇是脂肪族和芳族化合物，其具有在相邻碳原子或在被另一个碳取代的碳原子上被取代的羟基基团。也就是说合适的二醇包括具有链内或环内由至少两个相连碳原子分开的至少两个羟基基团的化合物。一类二醇包含由两个羟基基团精确取代的烃。这种二醇是一种是频哪醇，另一种是蒎二醇；还可以提及的是新戊二醇，1，2-乙二醇，1，2-丙二醇，1，3-丙二醇，2，3-丁二醇，1，2-二异丙基乙二醇，5，6-癸二醇和1，2-二环己基乙二醇。

二烷基醚的烷基基团优选地具有1，2，3或4个碳原子，并且所述这些烷基基团可以相同或不同。一种举例性的醚是二乙醚。

二烷醇胺的烷基基团优选地具有1，2，3或4个碳原子，并且所述这些烷基基团可以相同或不同。一种举例性的二烷醇胺是二乙醇胺。二乙醇胺/硼酸反应产物在室温于水中水解，水解速率可通过加入酸或碱而加速。

极性有机溶剂优选地是CHCl₃。其它例子通常为多卤化烷和乙酸乙酯。原则上除了醇以外的任何极性有机溶剂均是可接受的。

酸水溶液合适地为pH为1的强无机酸，如盐酸。

与酸反应后，反应混合物合适地用例如NH₄Cl或另一种弱碱洗涤。

具体程序的例如以下所述：

1.将所选择的肽硼酸的频哪醇或蒎二醇酯溶解在二乙醚中。

2.加入二乙醇胺并将混合物在40℃回流。

3.除去(过滤)沉淀产物，用二乙醚或除了醇以外的另一种极性有机溶剂洗涤(通常几次)，并干燥(例如通过真空蒸发)。

4.将干燥产物溶于除了醇之外的一种有机溶剂例如CHCl₃中，加入酸或碱水溶液，例如盐酸(pH1)，在室温搅拌混合物例如1小时。

5.取出有机层并用NH₄Cl溶液洗涤。

6.蒸发掉有机溶剂并干燥残余的固体产物。

上述方法导致形成可被方便地称作式(I)的肽硼酸的“二醇胺加成物”，特别是具有二乙醇胺的这种加成物，本发明包括这种加成物。这种加成物的分子结构还未知，它们可能包含一种化合物，该化合物中二醇胺的两个氧和氮均与硼配位；它们可包含离子。然而所述加成物被认为是酯。本发明包含的一种特定的新产物是可通过式VIII所示化合物、特别是(R，S，R)-TRI 50c的频哪醇或蒎二醇酯与二乙醇胺的反应获得的产物，即新产物是(R，S，R)-TRI 50c/二乙醇胺“加成物”，其中所述酸是(R，S，R)-TRI 50c。

本发明的二醇胺可以是包含如下物质的一种组合物：

(i)式(XII)所示物质

其中X是H或一个氨基保护基，硼原子任选额外与氮原子配位，末端氧的化合价状况是开放的(它们可以附于另一个共价键上，离子化为-O^-，或者有一些其它的例如中间体状态)；及处于键合中。

(ii)式(XIII)所示物质

其中氮原子和两个氧原子的化合价状态是开放的。应意识到式(IX)所示种类的末端氧原子和式(X)所示种类的氧原子可以是相同的氧原子，在这种情况中式(X)的种类与式(IX)的种类形成一种二醇酯。

应理解的是前述技术包括一种回收有机硼酸产物的方法，所述方法包括提供一种溶解于溶剂中的混合物，该混合物包含可溶形式的有机硼酸和具有两个羟基基团和一个氨基基团的化合物(即二醇胺)，使得所述有机硼酸与二醇胺反应形成沉淀，回收所述沉淀。可溶形式的有机硼酸可以是如上所述的一种二醇酯。所述溶剂可以是如上所述的一种醚。所述有机硼酸可以是本说明书中提及的有机硼酸之一，例如其可以是式(I)，(II)或(III)所示的有机硼酸。本段中所述的方法是新的并且形成了本发明的一个方面。回收方法是过滤。

二醇胺与可溶形式的有机硼酸之间的反应是在升高的温度下适当进行的，例如在回流下进行。

本发明的另一方面是回收有机硼化合物的方法，所述方法包括：

提供于醚中可溶形式的一种有机硼酸，例如一种药物如式(III)所示的化合物；

形成于醚中的可溶形式的一种溶液；

将所述溶液与一种二烷醇胺组合，使得二烷醇胺与可溶形式的有机硼酸反应形成一种不溶的沉淀；及

回收所述沉淀。

前一段落中的术语“可溶”是指在反应介质比沉淀产物中基本上更可溶的化合物。在该方法的变化方法中，所述醚由甲苯或另一种芳族溶剂代替。

上述二乙醇胺沉淀技术例如是另一种新方法，这是从醚溶液中回收肽硼酸的频哪醇或蒎二醇酯的一种方法，包括将二乙醇胺溶解于溶液中，使得沉淀形成并回收该沉淀。本发明涵盖了这种方法的变化方法，其中使用除了频哪醇或蒎二醇之外的另一种二醇。

所述沉淀物，即“加成物”，可以被转变为游离有机硼酸，例如通过将其与酸接触而进行。所述酸可以是一种水性酸，例如上述一种水性无机酸。所述沉淀可例如溶解于有机溶剂中，之后再与所述酸接触。

本发明因此提供了一种生产有机硼酸的方法，包括将其二醇胺反应产物转变为酸。

得自前两段所述方法的酸可以被转变为该酸与一种多价金属的盐，该盐随后被配制成一种口服剂型的药物组合物。

3.盐合成

通常地，所述盐可以通过将相应的肽硼酸与一种合适的强碱接触以形成希望的盐。在金属盐的情况中，金属的氢氧化物是合适的碱(或者例如可以使用金属的碳酸盐)，有时更便利地是将所述酸与一种相应的金属醇盐(例如甲醇盐)接触，为此相应的烷醇是一种合适的溶剂。有机碱的盐可以通过将肽硼酸与有机碱自身接触而制备。所述盐例如是酸式盐(一个-BOH质子被置换)，用一种一价阳离子产生酸式盐，所述酸和碱以基本等摩尔量适当地反应。因此惯例的酸∶碱摩尔比率基本为n∶1，其中n是碱的阳离子的化合价。

在一个程序中，将肽硼酸于可与水混溶的有机溶剂例如乙腈或醇(例如乙醇、甲醇、丙醇例如异丙醇，或另一种烷醇)中的溶液，与碱的水溶液组合。使酸和碱反应并回收盐。该反应典型地在环境温度(例如15-30℃，例如15-25℃)进行，但可以使用升高的温度，例如直至反应混合物的沸点，但更常见的是较低的温度，例如至多40℃或50℃。静置反应混合物或者搅动(通常是搅拌)。

酸和碱的反应时间不是关键的，但已发现希望的是保持反应混合物至少一小时。一至两个小时的反应时间通常是合适的，当然也可以采用更长的反应时间。

盐可以从反应混合物中经任何合适的方法如蒸发或沉淀而回收。沉淀可以通过加入过量的可混溶剂而进行，所述盐在该可混溶剂中溶解度有限。在一个优选的技术中，盐是通过将反应混合物抽真空干燥而回收。之后优选将盐纯化，例如通过将盐重新溶解之后过滤所得溶液并将其干燥，例如抽真空至干燥而纯化。重新溶解可以使用水例如蒸馏水进行。然后将盐进一步纯化，例如以除去剩余的水，这可以通过在合适的溶剂，优选乙酸乙酯或THF中进一步重新溶解，随后蒸发至干燥而进行。纯化程序可以在环境温度进行(即15-30℃，例如15-25℃)，或者在适当升高的温度例如不超过40℃或50℃进行；例如盐可以通过搅动溶解于水和/或溶剂中，加温或不加温至例如37℃。

本发明还包括一种干燥本发明的盐及其它肽硼酸盐的方法，所述方法包括将它们溶解于有机溶剂例如乙酸乙酯或THF中，然后例如通过抽真空而蒸发至干燥。

通常用于纯化盐的优选的溶剂是乙酸乙酯或THF，或者也许是另一种有机溶剂。

合成Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH的盐的一般程序如下：

将Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH(20.00g，38.1mM)在室温经搅拌溶解于乙腈(200ml)中。向此溶液中加入必要的于蒸馏水(190ml)中的碱溶液；加入的碱作为一价阳离子的0.2M溶液。使所得澄清的溶液例如通过静置或搅拌反应一段时间，在任一情况中均为1-2小时。典型地在室温进行反应(例如15-30℃，例如15-25℃)，但或者可以升高温度(例如至多为30℃，40℃或50℃)。然后将反应混合物在真空下抽真空至干燥，温度不超过37℃，典型地产生一种白色易碎的固体或一种油状/粘液。将该油状/粘液重新溶解于最少量的蒸馏水(200ml-4L)中，典型地加温(例如至30-40℃)，通常至多2小时。通过滤纸过滤溶液并抽真空至干燥，溶液温度也不超过37℃，或者冻干。所得产物在真空下干燥过夜以正常产生一种白色的易碎固体。如果产物是以油状或粘液状态存在的，则然后将其溶解于乙酸乙酯中并抽真空至干燥，产生白色固体。该白色固体典型是一种粗糙的非晶质粉末。

在前述一般程序的变体中，乙腈由另一种与水可混溶的有机溶剂代替，所述溶剂特别是如上述醇，特别是乙醇、甲醇、异丙醇或另一种丙醇。

在一种有机硼酸盐在选择的盐形成反应介质中可溶性较低的情况中，不便于直接从相应的酸和碱中制备，因此可溶性较低的盐可以从在该反应介质中更可溶的一种盐中制备。

本发明还提供了硼酸在生产本发明的盐中的应用。本发明还包括一种制备本发明的产物的方法，包括将例如式(I)，(II)或(III)所示的硼酸与能产生这种盐的碱接触。

用于制备药物制品的式(I)所示肽硼酸典型具有GLP或GMP性质，或者符合GLP(《药品非临床研究质量管理规范》)或GMP(《药品生产质量管理规范》；本发明包括这种酸。

相似地，所述酸通常是无菌和/或适于药物学应用的，本发明的一方面涉及一种组合物，其是无菌或适于药物学应用的或者包括这二者，并且包含式(I)所示的肽硼酸。这种组合物可以是微粒形式或者是液体溶液或分散液形式。

中间体酸可以是分离形式的，本发明包括这种分离的酸，特别是如式(VIII)所示肽硼酸的分离的酸：

X-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)₂ (VIII)

其中X是H(以形成NH₂)或一个氨基保护基。

提供中间体酸的一种典型方式是作为微粒组合物，该组合物主要由这种肽硼酸组成，本发明包括这些组合物。肽硼酸通常占该组合物重量的至少75％，典型为占该组合物重量的至少85％，例如占组合物重量的至少95％。

提供中间体酸的另一种典型方式是作为一种液体组合物，该组合物由式(II)所示肽硼酸和肽硼酸溶解或悬浮于其中的一种液体载体组成或基本由式(II)所示肽硼酸和肽硼酸溶解或悬浮于其中的一种液体载体组成。所述液体载体可以是水性介质，例如水，或醇如甲醇、乙醇、异丙醇或另一种丙醇，另一种烷醇或前述介质的混合物。

中间体酸的组合物通常是无菌的。该组合物可含有细碎粒形式的肽硼酸以便于进一步加工。

立体异构体的分离

肽硼酸酯或合成的中间体氨基硼酸酯的立体异构体可以通过例如任何已知方式拆分。特别地，硼酸酯的立体异构体可以通过HPLC拆分。

实施例

实施例1至3以及实施例33-绪言

仪器：

在如下实施例1-3及实施例33的程序中，使用标准实验室玻璃器具类，及操作和转移空气敏感性试剂的专业器具。

所有玻璃器具在使用前均在140-160℃加热至少4小时，然后在干燥器中或通过集中热量并用干氮气流吹风冷却。

溶剂：

实施例1-3及实施例33中使用的有机溶剂均是无水的。适当地，将它们在使用之前经过钠线干燥。

干燥：

在实施例1-3和实施例33的干燥程序中，通过观测在干燥过程中重量的减少而测试产物的干燥程度(包括有机溶剂的干燥)。根据如下程序测定干燥过程中重量的减少：将样品置于真空干燥器中并在40℃在100mbar干燥2小时。当在干燥时重量的减少低于起始物总重的0.5％时，认为产物是干燥的。

实施例1-3描述了如下反应方案的执行及所得TRI 50c转变其钠盐的过程：

LDA＝二异丙基酰胺锂

LiHMDS＝六甲基二硅氮烷锂，也称为双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂

实施例1-TRI 50D的合成

步骤1：Z-DIPIN B

程序A

加入17.8g(732.5mmole)镁镟屑，0.1g(0.4mmole)碘和127ml无水四氢呋喃并加热至回流。随后加入15ml的66g(608mmole)1-氯-3-甲氧基丙烷于185ml无水四氢呋喃中的溶液并在回流下搅拌直至发生强烈反应。最初放热停止后，缓慢加入1-氯-3-甲氧基丙烷溶液以保持温和回流直至全部镁被消耗。在反应完成后，将反应混合物冷却至环境温度，并缓慢加入64.4g(620mmole)三甲基硼酸盐于95ml无水四氢呋喃中的溶液；将后一溶液冷却至0℃以下，如果在反应过程期间其升温，则反应混合物必须非常缓慢地加入以保持这个溶液的温度低于65℃。在加入完成后，使反应混合物升温至大约0℃并再搅拌60分钟。然后缓慢加入22.4ml硫酸于400ml水中的溶液，以保持温度低于20℃。使该层沉下并分离各相。将水性层用200ml叔丁基甲醚再洗涤3次。使组合的有机层沉下并除去从这个溶液中分离出的额外的水。将有机层经过硫酸镁干燥并蒸发至干。蒸发残渣从沉淀的固体中过滤并将滤物溶解于175ml甲苯中。将34.8g(292mmole)频哪醇加入该溶液中，随后在环境温度搅拌不少于10小时。将该溶液蒸发至干，溶解于475ml正庚烷中并用290ml饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤3次。将正庚烷溶液蒸发至干并将蒸发残渣蒸馏及在Bp 40-50℃在0.1-0.5mbar回收级分。

沸点：40-50℃/0.1-0.5mbar

收率：40.9g(70％)Z-DIPIN B(油)

程序B

加入17.8g(732.5mmole)镁镟屑，0.1g(0.4mmole)碘和127ml无水四氢呋喃并加热至回流。随后加入15ml的66g(608mmole)1-氯-3-甲氧基丙烷于185ml无水四氢呋喃中的溶液并在回流下搅拌直至发生强烈反应。最初放热停止后，缓慢加入1-氯-3-甲氧基丙烷溶液以保持温和回流。在反应完成后，将反应混合物冷却至环境温度，并缓慢加入64.4g(620mmole)三甲基硼酸盐于95ml无水四氢呋喃中的溶液，将这个溶液的温度低于-65℃。在加入完成后，使反应混合物升温至大约0℃并再搅拌60分钟。然后缓慢加入22.4ml硫酸于400ml水中的溶液，以保持温度低于20℃。有机溶剂通过在真空下蒸馏而除去。将300ml正庚烷加入蒸发残渣的水溶液中，随后加入34.8g(292mmole)频哪醇。将两相混合物在环境温度搅拌不少于2小时。在使该层沉下后，分离水性相。将300ml正庚烷加入水性相并在环境温度搅拌两相混合物不少于2小时。在使该层沉下后，分离水性相。组合有机层并用200ml水洗涤一次，随后用200ml饱和的碳酸氢钠溶液洗涤一次，再用200ml水洗涤两次。将正庚烷溶液蒸发至干并将蒸发残渣蒸馏及在Bp 40-50℃在0.1-0.5mbar回收级分。

沸点：40-50℃/0.1-0.5mbar

收率：40.9g(70-85％)Z-DIPIN B(油)

步骤2：Z-DIPIN C

加入16.6g(164mmole)二异丙胺和220ml四氢呋喃并冷却至-30至-40℃。向此溶液中加入41.8g(163mmole)正丁基锂于正庚烷中25％的溶液，随后在0至-5℃搅拌1小时。将这个新鲜制备的二异丙酰胺锂溶液冷却至-30℃，然后在-60和-75℃之间加入27.9g(139mmole)Z-DIPIN B于120ml四氢呋喃中的溶液及35.5g(418mmole)二氯甲烷。在该温度搅拌溶液半小时，随后加入于四氢呋喃中的480ml(240mmole)0.5N无水氯化锌(II)或者32.5g(240mmole)无水固体氯化锌(II)。在-65℃搅拌1小时后，使反应混合物升温至环境温度，再搅拌16-18小时。将反应混合物蒸发至干(即直至除去溶剂)，随后加入385ml正庚烷。反应混合物用150ml 5％硫酸、190ml饱和碳酸氢钠溶液和180ml饱和氯化钠溶液洗涤。有机层经过硫酸镁干燥，过滤并蒸发至干(即直至除去溶剂)。油性残余物无需进一步纯化而进行下一个步骤。

收率：19g(55％)Z-DIPIN C

步骤3：Z-DIPIN D

向23.8g(148mmole)六甲基二硅氮烷于400ml四氢呋喃的溶液中在-15℃加入34.7g(136mmole)正丁基锂于正庚烷中的25％溶液，并搅拌1小时。将该溶液冷却至-55℃，随后加入溶解于290ml四氢呋喃中的30.6g(123mmole)Z-DIPIN C，并向这个新鲜制备的LiHMDS溶液中加入35ml四氢呋喃。使溶液升温至环境温度并搅拌12小时。将反应混合物蒸发至干，蒸发残渣溶解于174ml正庚烷中，用170ml水和75ml饱和的氯化钠溶液洗涤。有机相经过硫酸镁干燥，过滤并蒸发至完全干(即直至除去溶剂)。将油性残余物溶解于100g正庚烷中。这一溶液无需进一步纯化而进行下一步骤.

收率：32.2g(70％)Z-DIPIN D

步骤4：Z-DIPIN(TRI50b，粗制)

26.6g(71mmole)Z-DIPIN D于82.6g正庚烷中的溶液用60ml正庚烷稀释并冷却至-60℃，随后导入10.5g(285mmole)氯化氢。反应混合物随后抽真空并用氮排出，同时以约20℃的升幅将温度升至环境温度。从油状沉淀中除去溶剂并用60ml新鲜正庚烷更换若干次。油状残余物溶于60ml四氢呋喃(溶液A)中。

向另一烧瓶中加入130ml四氢呋喃，24.5g(61.5mmole)Z-D-Phe-Pro-OH和6.22g(61.5mmole)N-甲基吗啉并冷却至-20℃。向此溶液中加入8.4g(61.5mmole)氯甲酸异丁酯于20ml四氢呋喃中的溶液并搅拌30分钟，随后在-25℃加入溶液A。在加入完毕时，加入至多16ml(115mmole)三乙胺以调节pH至9-10，pH值用pH试纸测定。仍在氮气下使反应混合物升温至环境温度并搅拌3小时。蒸干溶剂并将蒸发残余物溶解于340ml叔丁基甲醚(t-BME)中。Z-DIPIN于t-BME中的溶液用175ml1.5％盐酸洗两次。将合并的酸性洗涤液用175ml t-BME再洗1次。合并的有机层用175ml水、175ml饱和碳酸氢钠溶液、175ml 25％氯化钠溶液洗涤，在硫酸镁上干燥并过滤。这一溶液无需进一步纯化而进行下一步骤。

收率：29.9g(80％)Z-DIPIN

实施例2-TRI 50D(TRI 50C的二乙醇胺加成物)的合成

这个实施例中使用的起始物是在实施例1中获得的TRI 50b溶液(Z-DIPIN)。该溶液无需进一步纯化而直接进行TRI 50d的合成。将于t-BME中的Z-DIPIN溶液(含有7.0g(11.5mmole)(R，S，R)TRI50b，基于Z-DIPIN的HPLC结果计算)蒸发至干，并将蒸发残渣溶解于80ml二乙醚中。加入1.51g(14.4mmole)二乙醇胺并将混合物在回流加热至少10小时，在此期间产物沉淀。将悬浮液冷却至5-10℃，过滤用二乙醚洗涤的滤渣。

为改良手性和化学纯度，将湿的滤渣(7g)溶解于7ml二氯甲烷中，冷却至0-5℃，通过加入42ml二乙醚沉淀产物并过滤。将分离的湿产物在35℃在真空干燥，或者至少4小时直至1天。

收率：5.5g(80％)Tri50d

熔点：140-145℃

实施例3-TRI50C的钠盐的制备

将在实施例2中获得的1.5kg(2.5mole)TRI50d溶解于10.5L二氯甲烷中。加入11L 2％盐酸并将混合物在室温搅拌至多30分钟(任选大约20分钟)。在有机相中形成沉淀。在搅拌后，使该层沉下并分离。将水性层用2.2L二氯甲烷再洗涤两次。组合的有机层用625g氯化铵于2.25L水中的溶液洗涤。(氯化铵缓冲水性提取物的pH在大约pH 1-2至大约pH4-5范围内，因为强酸性条件可以裂解肽键)。有机相经过硫酸镁干燥，过滤并将滤物蒸发至干。进行游离硼酸分析(通过实施例28的RP HPLC方法在室温至多进行30分钟(任选大约20分钟))，计算将酸转变为盐所需的溶剂和碱的量。如果获得2.5mol的游离酸，则将蒸发残渣溶解于5L乙腈中，随后加入100g(2.5mole)氢氧化钠于2.2L水中的5％溶液。将溶液在环境温度(例如15-30℃，任选室温)搅拌2小时，然后在不超过35℃的温度在真空(ca.10mmHg)中蒸发。将蒸发残渣再溶解于3.5L新鲜乙腈中并蒸发至干以除去微量的水。如果蒸发残渣是干的，则将其溶解于3L乙腈(或者6L THF)中，缓慢加入32L正庚烷和32L二乙醚的混合物中。足够缓慢地进行加入以避免产物结成块状或粘滞，加入时间不少于30分钟。过滤出沉淀产物，用正庚烷洗涤并在真空干燥，温度初始为大约10℃，然后升高至大约35℃限度直至变干。

收率：1.0kg(70％)Tri50c钠盐。

实施例1-3的程序可以按比例放大，如果谨慎操作可产生高纯的盐。在二乙醇胺沉淀步骤中，重要的是每当量(R，S，R)TRI 50b使用1.25当量的二乙醇胺。在二乙醇胺酯的水解中，重要的是避免过长时间与水性酸接触。同样，TRI 50b应通过Z-DIPIN A的Grignard反应合成。

实施例4-TRI 50B至TRI 50C的另一种转变

在这个及随后的合成实施例中描述的合成程序通常是在商购的氮及使用干溶剂下进行的。

1.将通过外消旋的TRI 50b的HPLC纯化获得的大约300g的TRI 50b溶解于大约2.5L二乙醚中。估计不同批次的TRI 50b的异构体纯度在85％R，S，R至超过95％R，S，R范围内。

2.加入大约54ml二乙醇胺(与总TRI 50b含量1∶1化学计量)，并将混合物在40℃回流。

3.除去沉淀产物，用二乙醚洗涤若干次并干燥。

4.将干产物溶解于CHCl₃中。加入盐酸(pH 1)并将混合物在室温搅拌大约1小时。

5.除去有机层并用NH₄Cl溶液洗涤。

6.蒸馏去有机溶剂并干燥残余的固体产物。

典型收率：大约230g

实施例5-TRI50C的锂盐的制备

将通过实施例4的方法获得的Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH(20.00g，38.1mM)在室温搅拌下溶解于乙腈(200ml)中。向这个溶液中加入LiOH于蒸馏水中(190ml)的0.2M溶液。将所得澄清溶液在室温搅拌2小时，然后在真空下抽真空干燥，温度不超过37℃。将所得油/粘液重新溶解于500ml蒸馏水中，必需用稍稍加温大约20分钟。将溶液经滤纸过滤并蒸发至干，再一次溶液温度不超过37℃。所得产物在真空干燥过夜至正常获得一种白色易碎固体。

然后将盐在真空经过硅石干燥至恒定重量(72小时)。

收率17.89g.

微量分析：

C％观察值(计算值)	H％观察值(计算值)	N％观察值(计算值)	B％观察值(计算值)	金属％观察值(计算值)
					57.14(61.03)	6.60(6.64)	7.34(7.90)	2.07(2.03)	Li 1.26(1.31)

实施例6-TRI50C的锂盐的UV/可见光谱

记录得自实施例5的程序的盐在蒸馏水中在20℃在190nm-400nm的UV/可见光谱。盐给定λ_max在210和258nm。然后测定干的盐的重量以计算消光系数。使用258nm的λ_max。使用下式计算消光系数：

A＝εcl    其中A是吸光度

C是浓度

l是UV池的通径长度

ε是消光系数。

消光系数：451

实施例7-TRI50C的锂盐的水溶解度

这个实施例中使用的盐是使用实施例5所述的方法加以修改制成的。所修改的方法的不同之处在于100mg的TRI 50c用作起始物，重新溶解于水中的产物通过冻干而干燥，及通过0.2μm滤膜进行过滤。确信盐含有大约85％的R，S，R异构体。

为确定最大的水溶解度，将25mg的干盐在37℃在水中摇动，过滤样品并测定UV光谱。该盐剩余一种未溶解的白色残余物。锂盐是比较可溶的，因此以先前所述同样的方式重新溶解成50mg/ml。

当在25mg/ml溶解时溶解度为43mM(23mg/ml)，

当在50mg/ml溶解时溶解度为81mM(43mg/ml)。

实施例8-TRI50C(TGN 255)的钠盐的制备

将通过实施例4的方法获得的Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH(20.00g，38.1mM)在室温搅拌下溶解于乙腈(200ml)中。向这个溶液中加入NaOH于蒸馏水(190ml)中的0.2M溶液。将所得澄清溶液在室温搅拌2小时，然后抽真空下干燥，温度不超过37℃。将所得油/粘液重新溶解于500ml蒸馏水中，并稍稍加温大约15-20分钟。用滤纸过滤溶液并蒸发至干，再一次溶液温度不超过37℃。所得产物在真空下干燥过夜至正常收获一种白色易碎固体。该产物由于剩余水的存在而呈油状或粘液状，在这种情况中将其溶解于乙酸乙酯中并蒸发至干以产生白色固体状产物。

然后将盐在真空下经过硅石干燥至恒定重量(72小时)。

收率：超过50％。

微量分析：

C％观察值(计算值)	H％观察值(计算值)	N％观察值(计算值)	B％观察值(计算值)	金属％观察值(计算值)
					59.93(59.24)	6.47(6.44)	7.31(7.67)	1.91(1.98)	Na 3.81(4.20)

实施例9-TRI50C的钠盐的UV/可见光谱

记录得自实施例8的程序的钠盐在蒸馏水中在20℃在190nm-400nm的UV/可见光谱。盐给定λ_max在210和258nm。然后测定干的盐的重量以计算消光系数。使用258nm的λ_max。使用下式计算消光系数：

A＝εcl    其中A是吸光度

C是浓度

l是UV池的通径长度

ε是消光系数。

消光系数：415

实施例10-TRI50C的钠盐的水溶解度

这个实施例中使用的盐是使用实施例8所述的方法加以修改制成的。所修改的方法的不同之处在于100mg的TRI 50c用作起始物，重新溶解于水中的产物通过冻干而干燥，及通过0.2μm滤膜进行过滤。确信盐含有大约85％的R，S，R异构体。

为确定最大的水溶解度，将25mg的干盐在37℃在水中摇动，过滤样品并测定UV光谱。该盐剩余一种未溶解的白色残余物。钠盐是比较可溶的，因此以先前所述同样的方式重新溶解成50mg/ml。

当在25mg/ml溶解时溶解度为44mM(25mg/ml)，

当在50mg/ml溶解时溶解度为90mM(50mg/ml)

实施例11-TRI50C的钾盐的制备

将通过实施例4的方法获得的Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH(20.00g，38.1mM)在室温搅拌下溶解于乙腈(200ml)中。向这个溶液中加入KOH于蒸馏水中的0.2M溶液(190ml)。将所得澄清溶液在室温搅拌2小时，然后在真空下抽真空干燥，温度不超过37℃。将所得油/粘液重新溶解于1L蒸馏水中，加温至37℃大约2小时。用滤纸过滤溶液并蒸发至干，再一次溶液温度不超过37℃。所得产物在真空下干燥过夜以正常收获一种白色易碎固体。

收率：14.45mg.

然后将盐在真空下经过硅石干燥至恒定重量(72小时)。

微量分析：

C％观察值(计算值)	H％观察值(计算值)	N％观察值(计算值)	B％观察值(计算值)	金属％观察值(计算值)
					54.84(57.55)	6.25(6.26)	7.02(7.45)	2.01(1.92)	K4.29(6.94)

实施例12-TRI50C的钾盐的UV/可见光谱

记录得自实施例11的程序的钾盐在蒸馏水中在20℃在190nm-400nm的UV/可见光谱。TRI50C和盐给定λ_max在210和258nm。然后测定干的盐的重量以计算消光系数。使用258nm的λ_max。使用下式计算消光系数：

A＝εcl    其中A是吸光度

C是浓度

l是UV池的通径长度

ε是消光系数

消光系数：438.

实施例13-TRI50C的钾盐的水溶解度

这个实施例中使用的盐是使用实施例11所述的方法加以修改制成的。所修改的方法的不同之处在于100mg的TRI 50c用作起始物，重新溶解于水中的产物通过冻干而干燥，及通过0.2μm滤膜进行过滤。确信盐含有大约85％的R，S，R异构体。

为确定最大的水溶解度，将25mg的干盐在37℃在水中摇动，过滤样品并测定UV光谱。该盐剩余一种未溶解的白色残余物。

当在25mg/ml溶解时溶解度为29mM(16mg/ml)

实施例14-TRI 50C的锌盐的制备

氢氧化锌的相对溶解度是这样的，如果该氢氧化物使用实施例5的程序用于制备相应的TRI 50c盐，它们不能导致同质的盐形成。因此需要揭示一种新的方法以制备锌盐，如在这个及后文的实施例中所述。

TRI 50c钠盐(2.24g，4.10mM)在室温溶解于蒸馏水(100ml)中，小心加入于THF中的氯化锌(4.27ml，0.5M)并搅拌。滤出立即形成的白色沉淀并用蒸馏水洗涤。将这个固体溶解于乙酸乙酯中并用蒸馏水洗涤(2×50ml)。将有机溶液抽真空干燥并将产生的白色固体在干燥器中经过硅石干燥3天，之后进行微量分析。收率1.20g。

¹HNMR 400MHz，δ_H(CD₃OD)7.23-7.33(20H，m，ArH)，5.14(4H，m，PhCH₂O)，4.52(4H，m，αCH)，3.65(2H，m)，3.31(12H，m)，3.23(6H，s，OCH₃)，2.96(4H，d，J 7.8Hz)，2.78(2H，m)，2.58(2H，m)，1.86(6H，m)，1.40(10H，m)。

¹³C NMR 75MHz δ_C(CD₃OD)178.50，159.00，138.05，137.66，130.54，129.62，129.50，129.07，128.79，128.22，73.90，67.90，58.64，58.18，56.02，38.81，30.06，28.57，28.36，25.29。

FTIR(KBr disc)v_max(cm^-1)3291.1，3062.7，3031.1，2932.9，2875.7，2346.0，1956.2，1711.8，1647.6，1536.0，1498.2，1452.1，1392.4，1343.1，1253.8，1116.8，1084.3，1027.7，916.0，887.6，748.6，699.4，595.5，506.5。

实施例15-TRI50C的精氨酸盐的制备

将通过实施例4的方法获得的Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH(20.00g，38.1mM)在室温搅拌下溶解于乙腈(200ml)中。向这个溶液中加入精氨酸于蒸馏水(190ml)中的0.2M溶液。将所得澄清溶液在室温搅拌2小时，然后在真空下抽真空干燥，温度不超过37℃。将所得油/粘液重新溶解于2L蒸馏水中，加温至37℃大约2小时。用滤纸过滤溶液并抽真空干燥，再一次溶液温度不超过37℃。所得产物在真空下干燥过夜以正常收获一种白色易碎固体。

然后将所得盐在真空下经过硅石干燥至恒定重量(72小时)。

收率：10.54g.

微量分析：

C％观察值(计算值)	H％观察值(计算值)	N％观察值(计算值)	B％观察值(计算值)
				52.47(56.65)	7.12(7.20)	15.25(14.01)	1.52(1.54)

实施例16-TRI50C的精氨酸盐的UV/可见光谱

记录得自实施例15的程序的盐在蒸馏水中在20℃在190nm-400nm的UV/可见光谱。TRI50C和盐给定λ_max在210和258nm。然后测定干的盐的重量以计算消光系数。使用258nm的λ_max。使用下式计算消光系数：

A＝εcl    其中A是吸光度

           C是浓度

           l是UV池的通径长度

           ε是消光系数

消光系数：406.

实施例17-TRI50C的精氨酸盐的水溶解度

这个实施例中使用的盐是使用实施例15所述的方法加以修改制成的。所修改的方法的不同之处在于100mg的TRI 50c用作起始物，重新溶解于水中的产物通过冻干而干燥，及通过0.2μm滤膜进行过滤。确信盐含有大约85％的R，S，R异构体。

为确定最大的水溶解度，将25mg的干盐在37℃在水中摇动，过滤样品并测定UV光谱。该盐剩余一种未溶解的白色残余物。

当在25mg/ml溶解时溶解度为14mM(10mg/ml)。

实施例18-TRI50C的赖氨酸盐的制备

将通过实施例4的方法获得的Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH(20.00g，38.1mM)在室温搅拌下溶解于乙腈(200ml)中。向这个溶液中加入赖氨酸于蒸馏水(190ml)中的0.2M溶液。将所得澄清溶液在室温搅拌2小时，然后在真空下抽真空干燥，温度不超过37℃。将所得油/粘液重新溶解于3L蒸馏水中，加温至37℃大约2小时。用滤纸过滤溶液并抽真空干燥，再一次溶液温度不超过37℃。所得产物在真空下干燥过夜以正常收获一种白色易碎固体。该产物可以是油状或粘液状(由于残余的水所致)，在这种情况中将产物溶解于乙酸乙酯中并抽真空干燥以产生白色固体产物。

然后将所得盐在真空下经过硅石干燥至恒定重量(72小时)

收率：17.89.

微量分析：

C％观察值(计算值)	H％观察值(计算值)	N％观察值(计算值)	B％观察值(计算值)
				57.03(59.11)	7.43(7.36)	10.50(10.44)	1.72(1.61)

实施例19-TRI50C的赖氨酸盐的UV/可见光谱

记录得自实施例18的程序的盐在蒸馏水中在20℃在190nm-400nm的UV/可见光谱。TRI50C和盐给定λ_max在210和258nm。然后测定干的盐的重量以计算消光系数。使用258nm的λ_max。使用下式计算消光系数：

A＝εcl    其中A是吸光度

           C是浓度

           l是UV池的通径长度

           ε是消光系数

消光系数：437.

实施例20-TRI50C的赖氨酸盐的水溶解度

这个实施例中使用的盐是使用实施例18所述的方法加以修改制成的。所修改的方法的不同之处在于100mg的TRI 50c用作起始物，重新溶解于水中的产物通过冻干而干燥，及通过0.2μm滤膜进行过滤。确信盐含有大约85％的R，S，R异构体。

为确定最大的水溶解度，将25mg的干盐在37℃在水中摇动，过滤样品并测定UV光谱。该盐剩余一种未溶解的白色残余物。

当在25mg/ml溶解时溶解度为13mM(8.6mg/ml)。

实施例21-TRI50C的N-甲基-D-葡糖胺盐的制备

将通过实施例4的方法获得的Cbz-Phe-Pro-BoroMpg-OH(20.00g，38.1mM)在室温搅拌下溶解于乙腈(200ml)中。向此溶液中加入N-甲基-D-葡糖胺于蒸馏水(190ml)中的0.2M溶液。将所得澄清溶液在室温搅拌2小时，然后在真空下抽真空干燥，温度不超过37℃。将所得油/粘液重新溶解于500ml蒸馏水中，并稍稍加温大约20分钟。用滤纸过滤溶液并蒸发至干，再一次溶液温度不超过37℃，或冻干。所得产物在真空下干燥过夜以正常收获一种白色易碎固体。

然后将所得盐在真空下经过硅石干燥至恒定重量(72小时).

收率：21.31g.

微量分析：

C％观察值(计算值)	H％观察值(计算值)	N％观察值(计算值)	B％观察值(计算值)
				56.67(56.67)	7.28(7.41)	7.74(7.77)	1.63(1.50)

实施例22-OF TRI50C的N-甲基-D-葡糖胺盐的UV/可见光谱

记录得自实施例21的程序的盐在蒸馏水中在20℃在190nm-400nm的UV/可见光谱。TRI50C和盐给定λ_max在210和258nm。然后测定干的盐的重量以计算消光系数。使用258nm的λ_max。使用下式计算消光系数：

A＝εcl    其中A是吸光度

           C是浓度

           l是UV池的通径长度

           ε是消光系数

消光系数：433.

实施例23-TRI50C的N-甲基-D-葡糖胺盐的水溶解度

这个实施例中使用的盐是使用实施例21所述的方法加以修改制成的。所修改的方法的不同之处在于100mg的TRI 50c用作起始物，重新溶解于水中的产物通过冻干而干燥，及通过0.2μm滤膜进行过滤。确信盐含有大约85％的R，S，R异构体。

为确定最大的水溶解度，将25mg的干盐在37℃在水中摇动，过滤样品并测定UV光谱。观测到该盐是充分溶解的。该盐比较可溶并因此以前述同样的方式重新溶解成50mg/ml。

当在25mg/ml溶解时溶解度为35mM(25mg/ml)

当在50mg/ml溶解时溶解度为70mM(50mg/ml)

实施例24-TRI50C的精氨酸盐的另一种制备

精氨酸盐是通过将略过量摩尔的L-精氨酸加入0.2-0.3mmol的TRI50c于10ml乙酸乙酯的溶液中而简便制备的。1小时后将溶剂蒸发，残余物用己烷研磨两次以除去过量的精氨酸。

实施例25-TRI50C的溶解度

如上关于盐所述获得得自实施例5的程序的TRI 50c的UV/可见光谱及其溶解度。当在50mg/ml溶解时TRI50c的溶解度为8mM(4mg/ml)。

¹³C NMR 75MHz δ_C(CD₃C(O)CD₃)206.56，138.30，130.76，129.64，129.31，129.19，129.09，128.20，128.04，74.23，73.55，67.78，58.76，56.37，56.03，48.38，47.87，39.00，25.42，25.29。

FTIR(KBr disc)v_max(cm^-1)3331.3，3031.4，2935.3，2876.9，2341.9，1956.1，1711.6，1639.9，1534.3，1498.1，1453.0，1255.3，1115.3，1084.6，1027.6，917.3，748.9，699.6，594.9，504.5，467.8。

实施例26-(R，S，R)TRI 50C的钠盐和锌盐的分析

以下的盐使用n∶1的硼酸根：金属化学计量制备，其中n是金属的化合价，使用比实施例10中用于制备盐更高的手性纯度的(R，S，R)TRI 50c。

A.钠盐

分析数据                               物理性质

HPLC或LC/MS：HPLC betabasic C18        形状：非晶质固体

Column，CH₃CN，水

                                       颜色：白色

估计纯度：＞95％，通过UV(λ_215nm)测定

                                       熔点：N/A

微量分析：

         计算的.     发现的.     溶解度：在水性介质中可溶

C：      59.24       59.93       ca～50mg/ml

H：      6.44        6.47

N：      7.67        7.31        M_w：547.40

其它：B：1.98        1.91

         Na： 4.20            3.81

B.锌盐

分析数据                                物理性质

HPLC或LC/MS：HPLC betabasic C18         形状：非晶质固体

Column，CH₃CN，水

                                        颜色：白色

估计纯度：＞95％，通过UV(λ_215nm)测定

                                        熔点：N/A

微量分析：

           计算的. 发现的.      溶解度：在水性介质中可溶

C：        58.21   56.20        ca～2mg/ml

H：        6.33    6.33

N：        7.54    7.18         M_w：1114.18

其它：B：  1.94    1.84

      Zn： 5.87    7.26

注意：在微量分析中使用三角形化学式的酸硼酸盐。确信在实施例11中报道的钠盐溶解度较低，因为在实施例11中测试的盐具有较低的手性纯度。

结论：

钠盐和锌盐均已经分别用一个金属离子对一个TRI 50c分子及一个金属离子对两个TRI 50c分子制备。针对钠盐发现的值接近于并因此与计算的1∶1化学计量一致。就锌盐而言，发现过量的锌；但是锌盐包含有效比例的酸硼酸盐。

实施例27-稳定性

在干燥之前和之后分析TRI 50c及其钠盐和赖氨酸盐。

方法：

称重TRI 50c及其Na、Ca和Lys盐并置于HPLC瓶中，在干燥器中贮存经过五氧化二磷干燥1周。为进行样品分析，称重5mg的干和非干的物质置于5mL量瓶中，并溶解于1mL乙腈中及用水填至5mL。

通过HPLC研究化合物。针对杂质分布图，计算HPLC峰面积百分比。结果示于表1。

表1

化合物	量[μg/mL]	纯度(％面积)
			干的TRI 50c	1000.0	82.00
非干的TRI 50c	947.3	85.54

干的TRI 50c Na盐	1024	98.81
			非干的TRI 50c Na盐	1005.8	98.61
干的TRI 50c Lys盐	813.3	90.17
			非干的TRI 50c Lys盐	809.8	92.25

酸的纯度通过干燥过程而降低，但对盐的纯度影响不大；钠盐的纯度没有显著降低。然而应答因子中的明显不同将降低真实的杂质水平。

这个实施例表明本发明的盐、尤其金属盐例如碱金属盐，比酸式盐特别是TRI 50c更稳定。

实施例28-稳定性

这个实施例对比了当充填入肠衣硬明胶胶囊中时TRI 50c与TRI 50c赖氨酸盐的稳定性。

表格化结果

化合物	包装	1.5月的气候条件<sup>0)</sup>	纯度(HPLC％面积)T0	纯度(HPLC％面积)<sup>3</sup>T1
					TRI50c	起泡胶囊	25℃/60％r.h.<sup>4</sup>	99	73.9
TRI50c	起泡胶囊	40℃/75％r.h	99	73.9
					TRI50c	胶囊<sup>1</sup>	40℃/75％r.h	99	75.3

TRI50c赖氨酸盐	起泡胶囊	25℃/60％r.h.	90.2<sup>2)</sup>	90.5
					TRI50c赖氨酸盐	起泡胶囊	40℃/75％r.h	90.2<sup>2</sup>	91.8
TRI50c赖氨酸盐	胶囊<sup>1</sup>	40℃/75％r.h	90.2<sup>2</sup>	90.6

注意：

0)在给定条件下贮存1.5月，然后将样品在室温贮存直至进行分析试验。

1)在各自的气候条件下不用起泡贮存胶囊。

2)在贮存之前批次的纯度

3)贮存批次的纯度(将胶囊内容物倒出，然后进行分析)。

4)r.h.＝相对湿度

结论：

在T0和T1赖氨酸盐的纯度无显著差异。

2.分析程序

2.1样品制备

2.1.1TRI 50c及盐的分析

将TRI 50c-标准物(游离酸)贮存于干燥器中经过五氧化二磷干燥2天。然后称重参考标准物，置于量瓶中并溶解于乙腈和水的混合物中(25/75v/v％)。将所得溶液等份(ST 1A)如表4所示稀释方案用水相继稀释。

Tri 50c的原液和标准溶液

	净重	纯度	盐-因子	溶解的	溶剂	Conc.	Calibr.
									mg	％		ml中		[μg/ml]	[μg/ml]
ST 1A	40.8	98.23	1	10	ACN/水25/75(v/v％)	4007.8	C4000

									ml	ST	[μg/ml]	ad ml	溶剂	[μg/ml]
ST 2A	5	1A	4007，8	10	水	2003.9	C2000
								ST 3A	5	2A	2003，9	10	水	1001.9	C1000
ST 4A	5	3A	1001，9	10	水	501.0	C500
								ST 5A	5	4A	500，9	10	水	250.5	C250
ST 6A	1	3A	1001，9	10	水	100.2	C100
								ST 7A	1	6A	100，2	10	水	10.0	C10

2.1.2贮存的胶囊的杂质分布图

取出在相应的气候条件下贮存的每个批次的胶囊，并称重10mg内容物置于10ml量瓶中，溶解于10ml的乙腈/水混合物(25/75v/v％)中。注入这些溶液分别进行杂质分布图分析并量化。

3.数据评价

使用HPLC-PDA方法进行定量评价和杂质分布图分析。处理波长设定为258nm。

4.分析参数

4.1设备和软件

自动取样器    Waters Alliance 2795

泵            Waters Alliance 2795

柱式加热炉    Waters Alliance 2795

检测          Waters 996 diode array，extracted wavelength 258nm

软件版本      Waters Millennium Release 4.0

4.2固定相

分析柱ID      S71

材料          X-Terra^TM MS C₁₈，5μm

供应商        Waters，Eschbom，Germany

尺度        150mm×2.1mm(长度，内径)

4.3流动相

水相：  A：于水中0.1％HCOOH

有机相：C：ACN

梯度条件：

时间	流速	％A	％C
				0.00	0.5	90	10
27.0	0.5	10	90
				27.1	0.5	90	10
30.0	0.5	90	10

实施例29-TRI 50B对血小板促凝血活性的抑制

当加入用凝血酶预处理的血小板时，由单独的凝血酶、单独的胶原或凝血酶与胶原的混合物所引起的，在存在因子Va的情况中，可观测到血小板促凝血活性随因子Xa对凝血酶原的激活速度而增加。这种性质是由于血小板表面上阴离子磷脂的增加及伴随的微泡从表面释放所致。这是一个基本的生理学反应，其血小板产生促凝血活性能力下降的人(Scott综合征)示出出血倾向加重。

方法：

洗涤的血小板用1.15nM凝血酶，23μg/ml胶原或者两种物质的混合物在相同浓度在37℃处理。在加入激活物前1分钟或在与激活物温育后立即加入TRI 50b。如前述确定血小板促凝血活性(Goodwin C A et al，Biochem J.19958，308：15-21)。

TRI 50b被证实是血小板促凝血活性的强力抑制剂，其IC₅₀如下所概括。

表2：TRI 50b对由多种激动剂诱导的血小板促凝血活性的影响

表2

激动剂       无TRI 50b的提    IC50加上预温    IC50不用温育

             高倍数            育(nM)         (nM)

凝血酶       30                8              3000

胶原         45                200            300

凝血酶/胶原  110               3              80

表2示出例如当血小板用凝血酶处理时，其与对照血小板相比导致激活凝血酶原的速度提高30倍。用TRI 50在给定的多种浓度水平进行处理使这种加速度降低一半。通过IC₅₀值在纳摩尔范围内的事实表明了TRI 50的显著效力。

TRI 50b对ADP、胶原或肾上腺素诱导的洗涤的血小板聚集无作用。

实施例30-兔体外分流模型(extracorporeal shunt model)

绪言

这个技术描述了一种动物模型，其中产生了血小板富集的血栓。对比了TRI 50b与肝素的活性。

使用麻醉的兔的颈动脉和颈静脉产生含有悬浮的外源表面(丝线)的体外循环。通过高剪切应力湍流的动脉血流的产生、血小板激活、随后在存在血栓形成倾向(thrombogenic)表面的情况下凝聚而引发血栓沉积。组织病理学研究示出该血栓是血小板富集的。

材料和方法

动物：

使用NZW兔(雄性2.5-3.5kg)。允许动物摄取食物和水直至进行麻醉。

麻醉：

通过肌内注射术前给予动物术前用药共0.15ml的fontanel/氟阿尼酮(fluanisone)(Hypnorm)。用甲己酮(10mg/ml)诱导全身麻醉，随后进行气管插管。用氧/一氧化二氮中携带的异氟烷(isoflurane)(1-2.0％)保持麻醉。

手术准备：

将动物屈膝背卧放置，并对颈腹部备皮准备手术。暴露左颈动脉和右颈静脉。将大Portex

导管(黄色规格)插入动脉，切至合适长度。将Silastic

导管插入静脉。吻合处包含5cm长的“自动分析仪”线(紫色/白色规格)。用中等大小的Silastic

管形材料在动脉侧连接吻合处。该吻合处在暴露于循环之前用盐水充填。在右侧股动脉插管以测定血压。

丝线制备及插入：

吻合中央处含有一条长度为3cm的丝线。这条丝线由000规格Gutterman缝合线组成，在末端打一个外科结(打结处在吻合处之外)。

血流

血流速度使用Doppler探针(Crystal Biotech)确定。将硅胶探针在靠近插入动脉导管处置于颈动脉上。使用热敏纸将血流记录在图表记录器上。

结果

表3

处理	剂量	20分钟后血栓重量	抗血栓形成活性
				对照	N/A	22.4±2.2mg(n＝5)
TRI 50b	10mg/kg iv	9.78±1.9mg(n＝5)	活性
					3.0mg/kg iv	15.3±2.2mg(n＝5)	活性
肝素	100u/kg iv	22.9±1.65mg(n＝4)	无活性
					300u/kg iv	10.5±1.4mg(n＝4)	活性(严重出血)

讨论

表3示出在动脉高剪切应力条件下，静脉内给予3mg/kg-10mg/kg剂量的TRI 50b显著抑制血栓形成而不出血，而肝素在治疗静脉血栓形成的正常临床剂量范围内(静脉内给予100u/kg肝素)无效。较高剂量的肝素尽管可以有作用，但导致严重出血。这些示出TRI 50b有效抑制动脉血栓形成而不出血的结果与TRI 50b抑制血小板促凝血活性一致。相反，凝血酶抑制剂肝素当在大约等效剂量(即抑制动脉血栓形成)给予时，产生严重的出血，而这种出血在使用凝血酶抑制剂治疗动脉血栓形成时是正常的。

实施例31-出血时间对比

这项研究的目的是在合适的模型中对比肝素与TRI 50b处理的出血时间。一般公认肝素是一种不太好的血小板促凝血活性的抑制剂(J.Biol.Chem.1978 Oct 10；253(19)：6908-16；Miletich JP，Jackson CM，Majerus PW1：J.Clin.Invest.1983 May；71(5)：1383-91)。

出血时间是在经静脉内给予肝素和TRI 50b之后在大鼠尾部出血模型中确定的。基于其在大鼠Wessler和动力学模型中的效力而选择应用剂量，选择的剂量如下：

TRI 50b：5和10mg/kg

肝素：100单位/kg

材料和方法

麻醉

将大鼠用60mg/kg的戊巴比妥钠(ip.注射30mg/ml溶液，2.0ml/kg)麻醉。如果需要ip.给予追加麻醉。

手术准备

颈静脉插管给予测试化合物。另外用合适的插管进行气管插管使动物自然呼吸“室内空气”。

化合物给予

这些化合物以1.0ml/kg剂量在合适的载体中经静脉内给予。肝素在盐水内给予，而TRI 50b溶解于乙醇中，然后将所得溶液加入水进行注射(1份乙醇对5份水)。

技术

在给予化合物后2分钟，用新的解剖刀切下2mm动物尾部末梢并将该尾部浸入标准“通用”容器中的温盐水(37℃)中，以便清晰观测血流。在横切后立即开始记录出血时间直至尾部末端血流停止。在尾部血流停止后再观察30秒，以确保不再发生出血，如果出血再次开始，记录时间持续记载直至最多45分钟。

结果

表4给出了出血结果概要并示出了在基线值之上的增加。

表4

处理	出血时间(分钟)(±SEM<sup>+</sup>)
		盐水	5.1±0.6
肝素100u/kg iv	＞40<sup>*</sup>
		TRI 50b 5mg/kg iv	11.3±1.2
TRI50b 10mg/kg iv	30.4±5.2

^*在所有动物中均严重出血，在40分钟后不停止。

SEM＝平均值的标准误差

讨论

结果示出TRI 50b在所有剂量均优于肝素(产生较少的出血)。应注意当100u/kg肝素与5mg/kg TRI 50b相比时，肝素处理的动物与接受TRI50b的动物相比更广泛出血；先前确定了(实施例25)肝素在100u/kg的剂量与3.0mg/kg剂量的TRI 50b相比，抑制动脉血栓形成的效力较差。肝素最初是一种凝血酶抑制剂，而对血小板促凝血活性的抑制较差；这个结果因此与TRI 50b除了凝血酶抑制活性之外通过抑制血小板凝血活性而发挥抗凝活性的结果一致。

实施例32-TRI 50C的前体药物TRI 50B：药物代谢动力学和吸收

材料和方法

动物

使用体重为大约250-300g的大鼠。动物只在用于iv.阶段的当天禁食。动物在进行口服和十二指肠内给药的研究的前一夜禁食，水允许给至直至麻醉时。

表5：

口期

处理	剂量mg/kg po	数目
			TRI 50b	20mg/kg	2
TRI 50c	20mg/kg	2

表6：

十二指肠内期(intraduodenal phase)

处理	剂量mg/kg po	数目
			TRI 50b	20mg/kg	3
TRI 50c	20mg/kg	3

剂量

制剂(TRI 50b/TRI 50c)

如下制备制剂：将48mg/ml的TRI 50b溶解于乙醇∶PEG 300(2∶3 vol∶vol)中。就在给药之前，将5体积的这个溶液与3体积的5％科利当(kollidon)178F混和。

1)将两种化合物均以20mg/kg剂量通过口腔管饲或者直接注入十二指肠。

化合物在PEG/乙醇/科利当制剂中给予，该制剂在立即使用之前制备，如在标题为“给药”的段落中所述：原液15.0mg/ml。这种给药剂量是1.33ml/kg(等于30mg/kg)。

方法

经口腔管饲

给予大鼠20mg/kg。在给予大约30分钟后，大鼠被麻醉。

十二指肠内给予

在完成麻醉和手术程序后，将化合物直接滴注入十二指肠中。

取血样

口期

在麻醉和手术后从颈动脉插管取血样(0.81ml)到(0.09ml)的3.8％w/v柠檬酸三钠中。第一次取样是在给药1小时后。然后在给药后1.5、2、4小时取血样。

十二指肠内期

取血样：在给药前、给药后0.25、0.5、0.75、1.0、2、3及4小时。

血浆

通过离心(3000RPM，10分钟)获得并在-20℃贮存直至进行分析。

结果

药物代谢动力学分析

图1：在给予TRI 50b或其游离酸(TRI 50c)后的口期清除率和动力学。

图2：在经十二指肠内给予TRI 50b或其游离酸(TRI 50c)后的口期清除率和动力学。

结论：

当通过十二指肠内途径给予时，TRI 50b达到比游离酸高的生物利用度(血浆峰浓度)。这个数据与在血浆中迅速水解为TRI 50c的TRI50b及与是有效成分的TRI 50c一致。

实施例29-32的结果表明以盐的形式给予TRI 50c提供了一种治疗动脉血栓形成和/或静脉血栓形成的方式。

实施例34-人体临床研究

在使用至多2.5mg/kg iv.剂量(显著延长凝血酶凝固时间的剂量)的人体临床志愿者研究中，TRI 50b对Simplate出血时间(即使用Simplate

出血时间设备测定的出血时间)无作用。

从前述内容意识到本发明提供了用作药物的硼酸盐，其特点是如下一或多种性质：(1)改良的口服生物利用度的量；(2)改良的口服生物利用度一致性；(3)改良的稳定性；(4)无论如何在现有技术中未提及。

药物组合物的活性成分的选择是一项复杂的工作，其不仅需要考虑生物学性质(包括生物利用度)，还要考虑适于加工、配制和贮存的物理化学性质。生物利用度自身依赖于多种因素，通常包括体内稳定性、溶剂化性质及吸收性质，每项因素反过来又潜在地依赖于多种物理、化学和/或生物学行为。

有利地，至少优选的本发明产物有足够的吸收和生物利用度。就商业用途而言，可以根据优良的性质整体组合而选择溶解度略低的产物。

本发明包括如下各项的主题：

1.一种如化学式(I)所示的药物可接受的硼酸的碱加成盐：

其中：

Y包含一种疏水性成分，与氨基硼酸残基-NHCH(R⁹)-B(OH)₂一起对凝血酶的底物结合位点有亲和性；及

R⁹是被一或多个醚键中断的一个直链烷基基团，其中氧和碳原子的总数是3，4，5或6，或者R⁹是-(CH₂)_mW，其中m是2，3，4或5及W是-OH或卤素(F，Cl，Br或I)。

2.第1项中的盐，其中R⁹是一个烷氧基烷基基团。

3.第1或第2项中的盐，其中YCO-包含与凝血酶的S2亚位点结合的一个氨基酸，该氨基酸在N末端与结合凝血酶的S3亚位点的一个基团连接。

4.第1或第2项中的盐，其中Y是一个任选N末端保护的二肽，其结合凝血酶的S3和S2结合位点，酸中的肽键是任选及独立地由任选含有链内或环内氮、氧或硫的C₁-C₁₃烃基在N末端取代，及任选由选自卤素、羟基和三氟甲基的一个取代基取代。

5.第4项中的盐，其中所述二肽是N末端保护的。

6.第4或第5项中的盐，其中酸中的所有肽键均是未被取代的。

7.第1-6项中任一项的盐，其中S3结合氨基酸残基是R构型，S2结合残基是S构型，片段-NHCH(R⁹)-B(OH)是R构型。

8.第1-7项中任一项的盐，其中所述硼酸对凝血酶的Ki为大约100nM或更低。

9.第8项中的盐，其中所述硼酸对凝血酶的Ki为大约20nM或更低。

10.一种如化学式(II)所示的药物可接受的硼酸碱加成盐：

其中：

X是H(以形成NH₂)或者一个氨基保护基；

aa¹是具有烃基侧链的一个氨基酸，该侧链含有不超过20个碳原子并包含至少一个具有最多13个碳原子的环状基团；

aa²是有4-6个环成员的一个亚氨基酸；

R¹是如化学式-(CH₂)_s-Z所示的一个基团，其中s是2，3或4，Z是-OH，-OMe，-OEt或卤素(F，Cl，Br或I)。

11.第10项中的盐，其中aa¹选自Phe，Dpa及其完全或部分氢化的类似物。

12.第10项中的盐，其中aa¹选自Dpa，Phe，Dcha和Cha。

13.第10-12项中任一项的盐，其中aa¹是R-构型。

14.第10项中的盐，其中aa¹是(R)-Phe或(R)-Dpa。

15.第10项中的盐，其中aa¹是(R)-Phe。

16.第10-15项中任一项的盐，其中aa²是如化学式(IV)所示亚氨基酸的一个残基：

其中R¹¹是-CH₂-，-CH₂-CH₂-，-S-CH₂-，-S-C(CH₃)₂-或-CH₂-CH₂-CH₂-，当该环是5或6个成员时，这个基团任选在一或多个-CH₂-基团由1-3个C₁-C₃烷基基团取代。

17.第16项中的盐，其中aa²是S-构型。

18.第16项中的盐，其中aa²是(S)-脯氨酸残基。

19.第10项的盐，其中aa¹-aa²是(R)-Phe-(S)-Pro。

20.第10-19项中任一项的盐，其中片段-NH-CH(R¹)-B(OH)₂是R构型。

21.第10-20项中任一项的盐，其中R¹是2-溴乙基、2-氯乙基、2-甲氧乙基、3-甲氧丙基、3-溴丙基、3-氯丙基或3-甲氧丙基。

22.第10-20项中任一项的盐，其中R¹是3-甲氧丙基。

23.第10项中的盐，其是如化学式(VIII)所示的一种化合物的盐：

X-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)₂       (VIII).

24.第10-23项中任一项的盐，其中X是R⁶-(CH₂)_p-C(O)-、R⁶-(CH₂)_p-S(O)₂-、R⁶-(CH₂)_p-NH-C(O)-或R⁶-(CH₂)_p-O-C(O)-，其中p是0，1，2，3，4，5或6，R⁶是H或5-13个成员的环基团，任选由选自卤素、氨基、硝基、羟基、C₅-C₆环状基团、C₁-C₄烷基及含有和/或通过链内O与环状基团连接的C₁-C₄烷基的1、2或3个取代基取代，前述烷基基团任选由选自卤素、氨基、硝基、羟基和C₅-C₆环状基团的一个取代基取代。

25.第24项中的盐，其中所述5-13个成员的环状基团是芳香族或杂芳族的。

26.第25项中的盐，其中所述5-13个成员的环状基团是苯基或一个6个成员的杂芳香族基团。

27.第24-26项中任一项的盐，其中X是R⁶-(CH₂)_p-C(O)-或R⁶-(CH₂)_p-O-C(O)-，p是0或1。

28.第10-22项中任一项的盐，其中X是苄氧基羰基。

29.第1-28项中任一项的盐，其不包含胆碱或铵盐。

30.第1-29项中任一项的盐，其包含衍生自硼酸的硼酸根离子和单价平衡离子。

31.第1-29项中任一项的盐，其是肽硼酸与一种碱金属或强碱性有机含氮化合物的盐。

32.第21项的盐，其中所述强碱性有机氮化合物的pKb为大约7或更多，例如大约7.5或更多。

33.第31或32项的盐，其中所述强碱性有机含氮化合物是胍、胍类似物或胺。

34.第1-33项中任一项的盐，其是硼酸与金属的盐。

35.第1-28项中任一项的盐，其是硼酸与一种碱金属、氨基糖、胍或式(XI)所示胺的盐：

其中n是1-6，R²是H、羧酸酯或衍生的羧酸酯，R³是H、C₁-C₄烷基或者天然或非天然的氨基酸残基。

36.第1-28项中任一项的盐，其是硼酸与胍或与式(IX)所示胺的盐：

其中n是1-6，R²是H、羧酸酯或衍生的羧酸酯，R³是H、C₁-C₄烷基或者天然或非天然的氨基酸残基。

37.第36项中的盐，其是硼酸的胍盐。

38.第37项中的盐，其是硼酸与L-精氨酸或L-精氨酸类似物的盐。

39.第38项中的盐，其中L-精氨酸类似物是D-精氨酸，或者高精氨酸的D-或L-异构体，胍基丁胺[(4-氨基丁基)胍]，NG-硝基-L-精氨酸甲基酯，或者2-氨基嘧啶。

40.第37项中的盐，其是硼酸与式(VII)所示胍的盐：

其中n是1-6，R²是H、羧酸酯或衍生的羧酸酯，R³是H、C₁-C₄烷基或者天然或非天然氨基酸的残基。

41.第40项的盐，其中衍生的羧酸酯形成C₁-C₄烷基酯或酰胺。

42.第40项或41项中的盐，其中式(VII)所示化合物是L-构型。

43.第37项中的盐，其是肽硼酸的L-精氨酸盐。

44.第36项中的盐，其是硼酸与式(IX)所示胺的盐。

45.第41项中的盐，其中衍生的羧酸酯形成C₁-C₄烷基酯或酰胺。

46.第44或45项中的盐，其中式(IX)所示胺是L-构型。

47.第44项中的盐，其是硼酸的L-赖氨酸盐。

48.第1-28项的任一项的盐，其是一种钾盐。

49.第1-28项中任一项的盐，其是一种钠盐。

50.第1-28项中任一项的盐，其是一种锂盐。

51.第1-28项中任一项的盐，其是一种氨基糖盐。

52.第51项中的盐，其中所述氨基糖是开放环的糖。

53.第52项中的盐，其中所述氨基糖是葡糖胺。

54.第51项中的盐，其中所述氨基糖是一种环形氨基糖。

55.第51-54项中的盐，其中所述氨基糖是N末端未取代的。

56.第51-54项中任一项的盐，其中所述氨基糖是由一或两个取代基在N末端取代的。

57.第56项中的盐，其中所述取代基或每个取代基均是一个烃基基团。

58.第57项中的盐，其中所述取代基或每个取代基均是选自C₁，C₂，C₃，C₄，C₅，C₆，C₇和C₈烷基基团的一个基团。

59.第56-58项中任一项的盐，其中有一个单一N末端取代。

60.第51项中的盐，其中所述葡糖胺是N-甲基-D-葡糖胺。

61.第1-60项中任一项的盐，其包含衍生自肽硼酸的硼酸根离子，并具有与携带单一负电荷的硼酸根离子一致的化学计量。

62.第1-60项中任一项的盐，其中所述盐基本由酸式盐组成，其中硼酸根基团的一个B-OH基团当以三角形表示时保持质子化。

63.第1-62项中任一项的盐，其中所述盐包含衍生自肽硼酸的一个硼酸根离子及一个平衡离子，其中所述盐基本由具有单一类型的平衡离子的盐组成。

64.第1-28项中任一项的盐，其是一种单锂盐或单钠盐。

65.第23项中的盐，其是一种单锂盐或单钠盐。

66.一种固相的Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)₂单钠盐或单锂盐，其含有重量不超过1％的水。

67.第66项中的盐，其含有重量不超过0.5％的水。

68.第66项中的盐，其含有重量不超过0.1％的水。

69.第66-68项中任一项的盐，其是单钠盐。

70.第1-65项中任一项的盐，其是固相的。

71.第70项中的盐，其是基本干燥的。

72.一种用作药物的产物，其包含第1-71项中任一项的盐。

73.一种口服剂型的药物制剂，其包含第1-71项中任一项的盐及一种药物可接受的稀释剂、赋形剂或载体。

74.第73项中的制剂，其是一种固体制剂。

75.第74项中的药物制剂，其适于在十二指肠中释放所述盐。

76.第75项中的药物制剂，其是肠衣制剂。

77.第1-71项中任一项的盐在生产治疗血栓形成的药物中的应用。

78.第77项中的应用，其中所述疾病是一种急性冠状动脉综合征。

79.第77项中的应用，其中所述疾病是急性心肌梗塞。

80.第77项中的应用，其中所述疾病是静脉血栓栓塞，选自深部静脉血栓形成和肺栓塞。

81.第1-71项中任一项的盐在生产口服药物中的应用，所述口服药物用以预防患者血液透析通路中的血栓形成、预防晚期肾病患者中的心血管疾病、预防通过留置导管接受化疗的患者中静脉血栓栓塞、或预防经过下肢动脉重建手术的患者中的血栓栓塞。

82.第1-71项中任一项的盐在生产用以治疗或预防动脉疾病的口服药物中的应用，所述动脉疾病选自急性冠状动脉综合征、脑血管血栓形成、周围动脉闭塞及得自心房纤颤、心脏瓣膜疾病、动静脉支路、留置导管或冠状动脉狭窄的动脉血栓形成。

83.一种口服药物制剂，其包含(i)第1-71项中任一项的盐，及(ii)一种药物活性剂的组合。

84.一种口服药物制剂，其包含(i)第1-71项中任一项的盐，及(ii)另一种心血管治疗剂的组合。

85.第84项中的制剂，其中另一种心血管治疗剂包括降脂药物、贝特类药、烟酸、抑制素、CETP抑制剂、胆酸螯合剂、抗氧化剂、IIb/IIIa拮抗剂、醛甾酮抑制剂、A2拮抗剂、A3激动剂、β-阻断剂、乙酰水杨酸、袢利尿剂、ace抑制剂、具有不同作用机制的抗血栓形成剂、抗血小板制剂、血栓烷受体和/或合成酶抑制剂、纤维蛋白原受体拮抗剂、前列环素模拟物、磷酸二酯酶抑制剂、ADP受体(P₂T)拮抗剂、溶血栓制剂、保心剂或COX-2抑制剂。

86.第83-85项中任一项的制剂，其是基本干燥的。

87.第1-71项中任一项的盐在生产一种药物中的应用，例如共同给予所述药物及另一种心血管治疗剂以预防心血管疾病。

88.一种口服药物，其包含一种硼酸盐，所述硼酸是一种选择性凝血酶抑制剂并且具有一中性氨基硼酸残基以及经一肽键与该中性氨基硼酸残基相连接的疏水性基团，所述中性氨基硼酸残基能结合凝血酶S1亚位点，所述疏水性基团能结合凝血酶S2和S3亚位点，所述的盐包含一n价的阳离子，其观察化学计量与理论化学计量n∶1(硼酸∶阳离子)一致。

89.第88项中的药物，其中所述硼酸对凝血酶的Ki为大约100nM或更低，任选大约20nM或更低。

90.一种适于口服的药物制剂，其包含固相的一种化合物，该化合物是相应于酸Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)₂的硼酸盐物质的来源及是药物可接受的除了胆碱和铵之外的阳离子的来源。

91.一种形成式(I)所示的硼酸或者能是这种硼酸体内来源的产物的方法：

其中：

Y包含一个疏水性基团，其与氨基硼酸残基-NHCH(R⁹)-B(OH)₂一起对凝血酶的底物结合位点具有亲和性；及

R⁹是一个由一或多个醚键中断的直链烷基基团，其中氧和碳原子的总数是3，4，5或6，或者R⁹是-(CH₂)_mW，其中m是2，3，4或5，W是-OH或卤素(F，Cl，Br或I)；

所述方法包括：

提供所述酸的酯的二乙醚溶液；

将二乙醇胺溶解于该溶液中；

允许或导致一种沉淀形成并回收该沉淀；及

将沉淀物转变为一种终产物，所述终产物选自游离有机硼酸或者能是这种硼酸的体内来源的一种产物。

92.第91项中的方法，其进一步包括将所述终产物配制为药物组合物。

93.一种形成第1-71项中任一项的盐的方法，包括将相应的硼酸的乙腈溶液与一种药物可接受的碱组合以形成盐。

94.一种使一种有机硼酸稳定的方法，包括以其盐形式提供。

95.一种将有机硼酸药物以稳定形式呈递作为药物应用的方法，包括提供固相的药物可接受的其碱加成盐形式的有机硼酸药物。

96.适于口服的一种药物制剂，其包含：

a)选自式(I)所示硼酸、所述硼酸的硼酸根离子及所述硼酸及所述硼酸根离子的平衡形式的第一个物质：

其中：

Y包含一个疏水性基团，其与氨基硼酸残基-NHCH(R⁹)-B(OH)₂一起对凝血酶的底物结合位点具有亲和性；及

R⁹是由一或多个醚键中断的一个直链烷基基团，其中氧和碳原子的总数是3，4，5或6，或者R⁹是-(CH₂)_mW，其中m是2，3，4或5，W是-OH或卤素；及

(b)选自药物可接受的金属离子、赖氨酸、精氨酸和氨基糖的第二个物质，所述金属离子的化合价为n；

其中当所述第二种物质是化合价为1的金属离子或者是赖氨酸、精氨酸或氨基糖时，所述制剂中第一种与第二种物质的观察化学计量与理论化学计量1∶1基本一致；当所述第二种物质是化合价高于1的金属离子时，观察化学计量为n∶1。

Claims (83)

1.一种硼酸和金属或强碱性有机含氮化合物的药物可接受的碱加成盐，其中所述硼酸如式(II)：

其中：

X是H或氨基保护基；

aa¹是一种氨基酸，其具有含有不超过20个碳原子的一个烃基侧链并包含至少一个具有最多13个碳原子的环状基团；

aa²是具有4-6个环成员的一种亚氨基酸或由一个被C₃-C₁₃烃基基团N-取代的Gly；

R¹是如化学式-(CH₂)_s-Z所示的一个基团，其中s是2、3或4，Z是-OH、-OMe、-OEt或卤素F、Cl、Br或I。

2.权利要求1的盐，其中aa¹选自Phe、Dpa及其全部或部分氢化的类似物。

3.权利要求1的盐，其中aa¹选自Dpa、Phe、Dcha和Cha。

4.权利要求1的盐，其中aa¹是(R)-构型。

5.权利要求1的盐，其中aa¹是(R)-Phe或(R)-Dpa。

6.权利要求1的盐，其中aa¹是(R)-Phe。

7.权利要求1的盐，其中aa²是化学式(IV)所示的一种亚氨基酸残基：

其中R¹¹是-CH₂-、-CH₂-CH₂-、-S-CH₂-、-S-C(CH₃)₂-或-CH₂-CH₂-CH₂-，当所述环是5或6元环时，该亚氨基酸在一或多个-CH₂-基团处任选由1-3个C₁-C₃烷基基团取代。

8.权利要求1的盐，其中aa²是(S)-构型。

9.权利要求7的盐，其中aa²是一个(S)-脯氨酸残基。

10.权利要求1的盐，其中aa¹-aa²是(R)-Phe-(S)-Pro。

11.权利要求1的盐，其中残基-NH-CH(R¹)-B(OH)₂是R构型。

12.权利要求1的盐，其中aa¹是(R)-构型，且残基-NH-CH(R¹)-B(OH)₂是(R)-构型。

13.权利要求12的盐，其中aa¹选自Phe、Dpa及其全部或部分氢化的类似物，aa²是化学式(IV)所示的一种亚氨基酸残基：

其中R¹¹是-CH₂-、-CH₂-CH₂-、-S-CH₂-、-S-C(CH₃)₂-或-CH₂-CH₂-CH₂-，当所述环是5或6元环时，该亚氨基酸在一或多个-CH₂-基团处任选由1-3个C₁-C₃烷基基团取代，且R¹是3-甲氧基丙基。

14.权利要求12的盐，其中R¹是2-溴乙基、2-氯乙基、2-甲氧基乙基、3-溴丙基、3-氯丙基或者3-甲氧基丙基。

15.权利要求12的盐，其中R¹是3-甲氧基丙基。

16.权利要求1的盐，其是式(VIII)的化合物的盐：

X-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)₂   (VIII)。

17.权利要求11的盐，其中X是R⁶-(CH₂)_p-C(O)-、R⁶-(CH₂)_p-S(O)₂-、R⁶-(CH₂)_p-NH-C(O)-或R⁶-(CH₂)_p-O-C(O)-，其中p是0、1、2、3、4、5或6，R⁶是H或5-13元的环状基团，该环状基团任选地由1、2或3个取代基取代，所述取代基选自卤素、氨基、硝基、羟基、C₅-C₆环状基团、C₁-C₄烷基及含有链内O和/或通过链内O与所述环状基团连接的C₁-C₄烷基，前述烷基基团任选由选自卤素、氨基、硝基、羟基和C₅-C₆环状基团的取代基取代。

18.权利要求17的盐，其中所述5-13元环状基团是芳环或杂芳环。

19.权利要求18的盐，其中所述5-13元环状基团是苯基或者6元杂芳环基团。

20.权利要求12的盐，其中X是R⁶-(CH₂)_p-C(O)-，其中R⁶如权利要求17中所限定，并且p是0或1。

21.权利要求1的盐，其中X是苄氧基羰基。

22.权利要求15的盐，其中X是苄氧基羰基。

23.权利要求1的盐，其中硼酸是Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)₂。

24.权利要求12的盐，其不包含胆碱或铵盐。

25.权利要求12的盐，其由衍生自硼酸的硼酸根离子和单价平衡离子组成。

26.权利要求1的盐，其中所述强碱性有机氮化合物的pKb为7或更高。

27.权利要求12的盐，其是硼酸金属盐。

28.权利要求1的盐，其是硼酸与碱金属、氨基糖、胍或化学式(XI)所示的胺的盐：

其中n为1-6，R²是H、羧酸根，R³是H、C₁-C₄烷基或者一种天然或非天然氨基酸的残基。

29.权利要求23的盐，其是L-精氨酸盐。

30.权利要求23的盐，其是L-赖氨酸盐。

31.权利要求23的盐，其是钾盐。

32.权利要求23的盐，其是钠盐。

33.权利要求23的盐，其是锂盐。

34.权利要求23的盐，其是葡糖胺盐。

35.权利要求34的盐，其中所述葡糖胺是N-甲基-D-葡糖胺。

36.权利要求12的盐，其包含衍生自肽硼酸的硼酸根离子，且具有与携带一个单负电荷的硼酸根离子一致的化学计量。

37.权利要求12的盐，其中所述盐由衍生自肽硼酸的硼酸根离子和平衡离子组成，且其中所述盐基本由具有单一类型的平衡离子的盐组成。

38.权利要求13的盐，其是单锂盐、单钠盐或单钾盐。

39.权利要求13的盐，其是锂盐或钠盐。

40.权利要求13的盐，其是单钠盐。

41.Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)₂的碱金属盐。

42.Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)₂的单碱金属盐。

43.Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)₂的单钠盐。

44.权利要求1的盐，其是固相的。

45.权利要求32的盐，其是固相的。

46.权利要求41的盐，其是固相的。

47.权利要求1的盐，其在溶液中。

48.权利要求13的盐，其是碱金属盐并在溶液中。

49.权利要求32的盐，其在溶液中。

50.权利要求12的盐，其包含酐形式的硼酸根。

51.用作药物的一种产物，其包含权利要求1-50任一项的盐。

52.权利要求1-43任一项的盐的水溶液。

53.口服剂型的药物制剂，其包含权利要求1-50任一项的盐。

54.权利要求53的制剂，其进一步包含药物可接受的稀释剂、赋形剂或载体。

55.适于口服的一种药物制剂，其包含：

a)选自(a)如权利要求1-20任一项所限定的式(I)的硼酸、(b)所述硼酸的硼酸根阴离子及(c)所述硼酸及所述硼酸根阴离子的平衡形式的第一种物质：及

b)选自金属离子和pKb为7或更高的碱性有机含氮化合物的第二种药物可接受的物质。

56.权利要求55的制剂，其中所述第一种物质选自酐类物质。

57.权利要求55的制剂，其中所述第二种物质选自碱金属离子。

58.权利要求55的制剂，其中所述第二种物质选自L-精氨酸、L-赖氨酸或N-甲基-D-葡糖胺阳离子。

59.权利要求55的制剂，其中所述第二种物质选自钠离子。

60.权利要求55的制剂，其基本上由第一种物质、第二种物质和药物可接受的成员及任选另一种心血管治疗剂组成，所述药物可接受的成员选自稀释剂、赋形剂、载体、肠衣和形成包囊的材料。

61.权利要求1-42任一项的盐或权利要求53-60任一项的制剂在制备通过预防或治疗而治疗血栓形成的药物中的应用。

62.权利要求61的应用，其中所述药物用于治疗静脉血栓栓塞事件。

63.权利要求1-50任一项的盐或权利要求53-60任一项的制剂在制备一种口服药物中的应用，所述药物用于预防患者血液透析通路中的血栓形成、用于预防晚期肾病患者的血栓心血管事件、用于预防通过留置导管而接受化疗的患者的静脉血栓栓塞事件、或者用于预防下肢动脉重建性手术患者中血栓栓塞事件、或通过治疗或预防而治疗动脉疾病，所述动脉疾病选自急性冠状动脉综合征、脑血管血栓形成、周围动脉闭塞及产生自房颤、瓣膜心脏疾病、动静脉旁路、留置导管或冠脉支架的动脉血栓形成。

64.权利要求1-50任一项的盐或权利要求53-60任一项的制剂在制备用于当血液与机体外医学装置接触时进行抗凝血处理的药物中的应用。

65.一种口服药物制剂，其包含(i)权利要求1-50任一项的盐及(ii)另一种药物活性剂的组合，其中所述另一种药物活性剂是一种心血管治疗剂，其选自由降脂药、贝特类药、烟酸、抑制素、CETP抑制剂、胆酸螯合剂、抗氧化剂、IIb/IIIa拮抗剂、醛甾酮抑制剂、A2拮抗剂、A3激动剂、β-阻断剂、乙酰水扬酸、袢利尿剂、ace抑制剂、具有不同作用机制的抗血栓形成剂、抗血小板剂、血栓烷受体和/或合成酶抑制剂、纤维蛋白原受体拮抗剂、前列环素模拟物、磷酸二酯酶抑制剂、ADP-受体(P₂T)拮抗剂、溶栓剂、保心剂和COX-2抑制剂组成的组中。

66.一种适于口服给予的药物制剂，其包含一种固相化合物，该化合物是相应于酸Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)₂的硼酸根物质的来源并是除了胆碱和铵以外的药物可接受的阳离子的来源。

67.权利要求66的制剂，其中所述化合物选自酐类。

68.一种形成权利要求1-50任一项的盐的方法，包括：

将二乙醇胺溶解在所述酸的一种二醇酯的醚溶液中；

使得或促使一种沉淀形成并回收该沉淀；

将该沉淀物转化为游离有机硼酸；及

将该有机硼酸与一种药物可接受的碱反应形成所述盐。

69.权利要求68的方法，其中所述醚是二乙醚及所述酯是频哪醇酯。

70.一种制备口服药物制剂的方法，包括：

将权利要求1-20任一项所定义的硼酸与pKb为7或更高的药物可接受的碱接触；及

将所得产物配制成制剂。

71.权利要求70的方法，其进一步包括通过如下步骤获得有机硼酸：

形成权利要求1-20任一项所定义的硼酸的二醇酯的溶液；

组合所述溶液和二乙醇胺，并使得或促使所述二乙醇胺与所述酯反应形成不可溶的沉淀；

回收所述沉淀；

将所述沉淀转化为游离硼酸。

72.权利要求71的方法，其中所述溶液的溶剂是醚。

73.权利要求72的方法，其中所述酯是频哪醇酯。

74.权利要求70的方法，其中所述碱是pKb为7或更高的有机含氮化合物，或者是金属碱。

75.权利要求74的方法，其中所述碱pKb为7.5或更大并且不是胆碱或氨。

76.权利要求70的方法，其中所述碱是碱金属碱。

77.权利要求76的方法，其中所述碱是钠碱。

78.权利要求74的方法，其中所述碱是L-精氨酸、L-赖氨酸或N-甲基-D-葡糖胺。

79.权利要求76的方法，其中所述硼酸是Cbz-(R)-Phe-(S)-Pro-(R)-Mpg-B(OH)₂。

80.权利要求70的方法，其中所述产物包含硼酸酐类。

81.权利要求1-20任一项所定义的硼酸的二醇酯在如下制备口服药物制剂中的应用，所述制备为使得通过二醇酯水解或所述二醇酯的转酯化制得的二乙醇胺酯的水解产生的硼酸与是碱金属碱、氨基糖、胍或化学式(XI)所示的胺的一种药物可接受的碱反应并将所得产物配制为药物制剂：

其中n为1-6，R²是H、羧酸根，R³是H、C₁-C₄烷基或者一种天然或非天然氨基酸的残基。

82.权利要求81的应用，其中所述被水解的酯是频哪醇酯、蒎二醇酯或二乙醇胺酯。

83.权利要求81的应用，其中所述碱是碱金属碱、L-精氨酸、L-赖氨酸或N-甲基-D-葡糖胺。

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