CH622528A5 - Process for the preparation of aminoglycoside antibiotics - Google Patents

Description

La présenté invention concerne un nouveau procédé de préparation d'antibiotiques aminoglycosidiques qui sont des dérivés de kanamycine à groupe 1-amino substitué.

Des exemples de ces dérivés de kanamycine à groupe 1-amino protégé ont été décrits dans la demande de brevet britannique N° 46412/74 du 26 octobre 1974. D'autres sont des composés 40 connus tels que la l-N-[4-amino-2-hydroxybutyryl]kanamycine A (BB-K8) décrite dans le brevet britannique N° 1401221. Pour préparer ces composés à partir de kanamycine, produit de fermentation facile à obtenir, il est désirable de protéger certains ou la totalité des groupes amino autres que le groupe 1-amino. La 45 substitution peut ensuite être effectuée préférentiellement sur le groupe amino en position 1 et la séparation du produit final 1-N-substitué est ainsi simplifiée. La présente invention a pour but d'offrir un procédé de préparation de dérivés de kanamycine à groupe 1-amino substitué, à partir de ces composés intermédiaires 50 sélectivement N-protégés. En conséquence, l'invention concerne un procédé de préparation de composés de formule:

R3NH

dans laquelle les symboles R1 à R4 ont les définitions données ci-dessus, à éliminer le groupe R2 s'il s'agit d'un groupe benzyle, et les groupes R3, et à isoler le composé de formule I.

2. Application du procédé selon la revendication 1 à la préparation des composés de formule I à partir de composés de formule II obtenus par une méthode qui consiste à faire réagir avec un agent acylant un sel d'addition d'acide ou un dérivé de kanamycine A, kanamycine B ou 3-N-benzylkanamycine A protégé sur toutes ses fonctions amino, à éliminer les groupes protégeant les

NHR

3

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dans laquelle:

R est un groupe amino ou hydroxyle et R1 est un groupe alkyle inférieur éventuellement substitué avec des groupes hydroxyle ou avec des groupes amino ou les deux, procédé qui consiste à alkyler un composé de formule :

CK„NHR3

Ci

30

dans laquelle:

R2 est un atome d'hydrogène ou un groupe benzyle;

R3 est un groupe acyle labile protégeant la fonction amino, comme défini dans le présent mémoire, et

R4 est un groupe hydroxyle ou un groupe NHR3, pour former 35 un composé de formule :

NHR1 45

50

HO

dans laquelle :

R1 à R4 ont les définitions données ci-dessus,

à éliminer les groupes R2 (s'il s'agit de groupes benzyle) et R3,

et

à isoler le composé de formule I.

Dans le présent brevet, l'expression alkyle inférieur signifie que ces groupes contiennent 1 à 6 atomes de carbone et que leur chaîne peut être droite ou ramifiée. Le groupe acyle labile R3 protégeant la fonction amino est un groupe acyle qui peut être éliminé sélectivement du composé de formule III par des opérations classiques.

R3 peut être un groupe halogénacétyle, de préférence un groupe trifluoracétyle, qui peut être éliminé par hydrolyse dans des conditions douces, par exemple avec une solution diluée

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d'hydroxyde d'ammonium. R3 peut aussi être un groupe formyle ou un groupe monochloracétyle, dichloracétyle ou trichloracétyle. R3 peut être, en outre, un groupe alcanoyle inférieur, par exemple un groupe acétyle, un groupe benzoyle éventuellement substitué dans le noyau aromatique, par exemple avec un groupe nitro ou avec un ou plusieurs atomes d'halogènes, ou un groupe alkoxy-carbonyle inférieur, par exemple un groupe éthoxycarbonyle ou méthoxycarbonyle. L'élimination de ces groupes nécessite des conditions d'hydrolyse plus énergiques. Des exemples de groupes acyle labiles, protégeant la fonction amino, avantageux à utiliser dans la présente invention comprennent les groupes acétyle et trifluoracétyle.

Ce procédé de préparation de composés de formule I comporte, comme étape initiale, une alkylation d'un composé de formule II en vue d'introduire le substituant R1 sur le groupe amino qui se trouve en position 1. Cette réaction peut être conduite de diverses façons bien connues de l'homme de l'art. Par exemple, on peut effectuer l'alkylation par voie de réduction, en utilisant un aldéhyde ou une cétone convenable ou un dérivé d'aldéhyde du type défini dans la demande de brevet britannique N° 7529/76 du 25 février 1976, ou par réduction du dérivé acylé correspondant (par exemple avec du diborane). Naturellement, au cas où on utilise un composé de formule II dans laquelle R2 est un atome d'hydrogène, la réaction a lieu également dans la position 3-amino mais, si l'on n'utilise qu'un léger excès de réactif, l'isomère requis substitué sur le groupe 1-amino peut être séparé assez facilement de l'isomère substitué sur le groupe 3-amino et du produit disubstitué sur les groupes amino en positions 1 et 3 par des opérations classiques, par exemple par Chromatographie par échange ionique. Cela peut être fait à ce stade du procédé ou plus avantageusement après l'élimination des groupes protégeant la fonction amino.

La seconde étape du procédé consiste à éliminer le groupe protecteur R3 du groupe 2'-amino éventuel et des groupes 6'-amino et 3"-amino et à éliminer aussi le groupe benzyle éventuel du groupe 3-amino. Dans quelques cas, lorsque le substituant du groupe 1-amino porte lui-même un substituant amino, il peut être désirable de protéger ce substituant amino en cours de procédé, et il peut ensuite être nécessaire d'éliminer également ce groupe protecteur dans l'étape finale du procédé. Il existe diverses conditions bien connues de l'homme de l'art pour éliminer complètement ces groupes protégeant la fonction amino et ces conditions dépendent naturellement de la nature du groupe protecteur utilisé et de l'environnement de l'amine protégée et, comme on l'a déjà mentionné, il est nécessaire de choisir ces conditions en tenant compte du substituant qui se trouve dans la psoition 1-amino. Le milieu utilisé peut être anhydre ou aqueux et, dans des cas particuliers, il peut être acide ou basique avec diverses forces. Par exemple, le groupe benzyle éventuel peut être éliminé par hydro-génolyse catalytique d'une manière classique, en présence d'un catalyseur au palladium. Certains groupes acyle peuvent être éliminés par hydrolyse dans des conditions basiques douces; par exemple, le groupe trifluoracétyle peut être éliminé par traitement avec de l'hydroxyde d'ammonium IN à la température ambiante pendant 24 h, tandis que les groupes acétyle, benzoyle et éthoxycarbonyle requièrent des conditions plus énergiques pour leur élimination, par exemple un chauffage avec de l'hydroxyde de sodium 5N pendant plusieurs heures à 60-80° C. Le produit (I)

peut finalement être purifié, le cas échéant, par des opérations classiques, par exemple par cristallisation ou par Chromatographie.

Le procédé de l'invention est illustré par la préparation de la l-N-[(S)-4-amino-2-hydroxybutyl]kanamycine A. Dans ce cas, la kanamycine protégée intermédiaire (II) est tout d'abord alkylée, par exemple par alkylation par voie de réduction avec un dérivé aldéhydique, comme décrit dans la demande de brevet britannique N° 7529/76 précitée, et cette opération est suivie de l'élimination des groupes protégeant les fonctions amino et de l'isole

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ment du produit désiré. Ainsi, lorsqu'on utilise la 3-benzyl-6-[S]-dihydroxyméthyltétrahydro-l,3-oxazine-2-one dans l'alkylation par voie de réduction avec la 3",6'-di-N-acétylkanamycine A, une hydrolyse basique subséquente pour éliminer les groupes acétyle et une hydrogénolyse pour éliminer le groupe benzyle donnent le composé désiré de formule I, dans laquelle R est un groupe hydroxy et R1 est un groupe (S)-4-amino-2-hydroxybutyle. L'alkylation par voie de réduction peut avantageusement être effectuée en dissolvant les corps réactionnels dans un solvant organique approprié, par exemple du méthylformamide, en utilisant le borohydrure de sodium, et la réaction est en général terminée en quelques heures à 30° C. L'élimination des groupes acétyle est effectuée par hydrolyse à l'hydroxyde de sodium 3N à 80° pendant 4 h et le groupe benzyle est éliminé par hydrogénation catalytique à 60° C et sous pression de 4,2 bars pendant 16 h. Le produit désiré est ensuite séparé par Chromatographie de l'isomère à groupe 3-amino substitué, qui est formé en même temps.

Les composés de formule II sont eux-mêmes des composés nouveaux. On peut les préparer par une réaction de migration sélective 0->N du groupe acyle. Ainsi, dans un procédé de préparation de ces composés, un sel d'addition d'acide de kanamycine A ou B ou de 3-N-benzylkanamycine A est tout d'abord traité avec un excès d'agent acylant, dans des conditions acides, choisies de manière que, initialement, les groupes hydroxyle soient seuls acylés. Ensuite, le sel d'addition d'acide du produit O-acylé, dissous dans un solvant organique inerte, est neutralisé. Dans ces conditions, il peut y,avoir une migration intramoléculaire du groupe acyle, qui vient se fixer sur tout groupe amino voisin d'un groupa acyloxy occupant une position adjacente du noyau, c'est-à-dire les groupes 6'-amino et 3'-amino et le groupe 2'-amino de la kanamycine B. Les groupes O-acyle restants sont ensuite éliminés de la manière usuelle, par exemple par hydrolyse ou par alcoolyse et le produit peut être purifié, le cas échéant, par Chromatographie.

Ce procédé de préparation de composés de formule II s'est montré particulièrement efficace pour la préparation des composés dans lesquels R4 est un groupe hydroxyle et R3 est un groupe trifluoracétyle. Dans ce cas, la kanamycine A ou la 3-N-benzylkanamycine A est dissoute dans de l'acide trifluoracétique et la solution est traitée à 0° avec de l'anhydride trifluoracétique en excès. La réaction est sensiblement terminée au bout de quelques heures à 0°C (par exemple environ 16 h) et le dérivé per-O-trifluoracétylé de la kanamycine sous la forme de son trifluoracé-tate peut être isolé par évaporation des solvants sous vide. Le produit est dissous dans un solvant organique inerte, de préférence le tétrahydrofuranne, et la solution est neutralisée par traitement avec une base, par exemple en l'agitant avec du carbonate de sodium ou du carbonate de potassium. On a trouvé que, dans ces conditions, la réaction de migration 0->N du groupe acyle a lieu rapidement et est sensiblement terminée en 20 mn à la température ambiante. Les groupes O-trifluoracétyle restants sont éliminés d'une manière classique, par exemple par méthanolyse, et le produit 3",6'-di-N-trifluoracétylé peut ensuite être isolé par évaporation du solvant et purifié, le cas échéant, par Chromatographie classique sur colonne.

Dans une variante du procédé de préparation, la kanamycine A ou la 3-N-benzylkanamycine A est tout d'abord traitée avec un réactif capable d'introduire des groupes aminoprotecteurs qui peuvent être éliminés sélectivement. Des groupes protecteurs convenables sont, par exemple, le groupe tertiobutyloxycarbonyle et le groupe benzyloxycarbonyle. Le produit à fonctions amino entièrement protégées est ensuite O-acylé par des opérations connues, par exemple par traitement avec un anhydride ou un chlorure d'acide tel que l'anhydride acétique dans la pyridine ou avec un chloroformiate d'alkyle tel que le chloroformiate d'éthyle et les groupes aminoprotecteurs sont ensuite éliminés (par exemple les groupes tertiobutyloxycarbonyle sont éliminés par traitement à l'acide trifluoracétique et les groupes benzyloxycarbonyle sont éliminés par hydrogénolyse catalytique), et la solution est neutralisée. La migration 0->N des groupes acyle peut ensuite s'effectuer comme précédemment; les groupes O-acyle restants sont éliminés et le produit est isolé comme décrit ci-dessus.

Le procédé peut aussi être appliqué à la kanamycine B, la migration des groupes acyle s'effectuant en outre dans ce cas du groupe 3'-hydroxyle au groupe 2'-amino adjacent pour former un composé intermédiaire tri-N-acylé.

Les composés de formule II, de même que ceux qui répondent aux formules I et III, peuvent exister avec diverses configurations et l'invention n'est pas limitée à l'une quelconque de ces formes. Généralement, les noyaux sont chacun de la forme chaise et chacun des groupes substituant a une forme équatoriale par rapport au noyau.

En outre, les liaisons glycosidiques entre les noyaux d'hexopy-rannosyle et le noyau de 2-déoxystreptamine sont très souvent des liaisons en a par rapport aux premiers. La 3-N-benzylkanamycine A est elle-même un composé nouveau. On peut la préparer par alkylation par voie de réduction de la kanamycine A avec le benzaldéhyde dans des conditions de pH déterminées avec soin. On a découvert que, lorsque la kanamycine A en solution aqueuse est soumise à une alkylation par voie de réduction à la température ambiante ou à une température plus basse, avec un léger excès de benzaldéhyde en présence de cyanoborohydrure de sodium et en ajustant soigneusement le pH de la solution à 6, le produit réactionnel principal est alors la 3-N-benzylkanamy-cine A. Naturellement, des quantités secondaires des autres isomères à groupes amino substitués et des produits polysubsti-tués sont également formés dans la réaction, mais on peut les séparer en grande partie par Chromatographie classique par échange ionique. La fraction principale isolée de la colonne par élution à l'hydroxyde d'ammonium consiste en 3-N-benzylkana-mycine A contaminée avec une petite quantité de l'isomère 1-N-benzylique. Dans la pratique, ce produit est suffisamment pur pour qu'on puisse l'utiliser directement dans le procédé de l'invention, bien que l'isomère 1-N-benzylique présent conduise naturellement, après alkylation et élimination des groupes protecteurs, à la formation de l'isomère substitué sur le groupe 3-amino comme composant secondaire, en même temps que le produit désiré substitué sur le groupe 1-amino, de formule I. Toutefois, on peut ensuite le séparer aisément par l'étape chromatographique finale décrite.

Dans les exemples qui suivent, l'exemple 1 décrit la préparation de la 3-N-benzylkanamycine A. Les exemples 2 à 5 décrivent la préparation des nouveaux composés de formule II. L'exemple 6 illustre le nouveau procédé de l'invention pour la préparation de composés de formule I. La Chromatographie en couche mince a été effectuée sur des plaques de silice, en utilisant le système de solvants indiqué. Les taches ont été révélées après séchage des plaques, par pulvérisation d'une solution à 5% d'hypochlorite tertiobutylique dans le cyclohexane, séchage des plaques à 100° pendant 10 mn dans une étuve ventilée, refroidissement et pulvérisation d'une solution d'amidon et d'iodure de potassium.

Les températures sont exprimées en degrés Celsius. Amberlite est une marque déposée.

Exemple 1 :

On dissout 24,3 g (0,03 mol) de sulfate de kanamycine A dans 150 ml d'eau et on ajuste le pH à 6 par l'addition goutte à goutte d'acide chlorhydrique 5N. On ajoute 1,95 g (0,03 mol) de cyanoborohydrure de sodium et on refroidit le mélange à 0°C, puis on l'agite tout en y ajoutant goutte à goutte, en 2,5 h, une solution de 3,61 g (0,033 mol) de benzaldéhyde dans 15 ml de méthanol. On laisse le mélange se réchauffer à la température ambiante. Au bout de 16 h, on ajuste le pH de la solution à 5,5 par l'addition d'acide chlorhydrique IN et on filtre la solution, puis on l'ajoute à une colonne de résine d'échange ionique Amberlite CG-50 sous la forme de l'ion ammonium. Par élution d'abord avec de l'eau, puis

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avec un gradient d'hydroxyde d'ammonium de concentration croissant de 0 à 0,7 N, on obtient comme produit principal la 3-N-benzylkanamycine A contaminée avec un peu du dérivé 1-N-benzylique (5,0 g, 28%) de Rf égal à 0,44 dans un mélange de méthanol, de chloroforme et d'hydroxyde d'ammonium à 17% dans la proportion de 4:1:2 (la kanamycine A a une valeur de Rf de 0,15).

On transforme un échantillon en dérivé tétra-N-acétylhepta-O-triméthylsilylique volatil par traitement avec de l'anhydride acétique dans du méthanol à la température ambiante pendant 24 h, suivi de la réaction avec un mélange à 2:1 d'hexaméthyldisi-lazane et de triméthylchlorosilane à la température ambiante pendant 24 h. On trouve une valeur m/e de 1246. la formule C54H106N4O15SÌ7 requiert m/e = 1246.

La position de substitution a été confirmée par la séquence réactionnelle suivante :

a) un traitement au tertiobutyloxycarbonylazide qui donne un composé contenant trois groupes tertiobutyloxycarbonyle de même que le groupe benzyle (d'après la résonance magnétique nucléaire); b) une hydrogénation pour éliminer le groupe benzyle; c) une acylation avec le N-[(S)-4-benzyloxycarbonylamino-2-hydroxybutyryloxy]succinimide, et d) une élimination des groupes protégeant les fonctions amino par hydrogénation suivie d'un traitement à l'acide trifluoracétique, donnant comme produit principal la 3-N-[(S)-4-amino-2-hydroxybutyryl]kanamycine A (BB-K29) identique à un échantillon préparé par le procédé décrit par Naito et collaborateurs («J. Antibiotics», 1973, 26,297).

Exemple 2:

On ajoute lentement 5,0 ml d'anhydride trifluoracétique à une solution sous agitation de 1,0 g de kanamycine A dans 40 ml d'acide trifluoracétique à 0°. On laisse reposer la solution à 0-4° pendant 20 h. On évapore ensuite le solvant sous vide et on traite le résidu avec 10 ml de toluène, puis on l'évaporé à sec. On reprend le trifluoracétate dans du tétrahydrofuranne anhydre et on neutralise la solution en l'ajoutant lentement à une suspension sous agitation de carbonate de potassium anhydre en excès dans le tétrahydrofuranne. On agite le mélange à la température ambiante pendant 20 mn, puis on filtre la suspension et on évapore le filtrat à sec. On reprend le produit dans 20 ml de méthanol et on le maintient à la température ambiante pendant 30 mn. On évapore le solvant sous pression réduite et on Chromatographie le résidu sur de la silice, en effectuant l'élution avec un gradient des solvants, en passant du chloroforme et du méthanol à 3:1 au chloroforme, au méthanol et à l'hydroxyde d'ammonium à 17% dans la proportion de 8:4:1, pour obtenir 0,52 g d'hydrate de 3",6'-di-N-trifluoracétylkanamycine A sous la forme d'une substance solide blanche hygroscopique. Le Rf est égal à 0,7 dans le méthanol, le chloroforme et l'hydroxyde d'ammonium à 17% à 4:1:1 (la kanamycine A a un Rf de 0,05). vc=o 1665 cm ~1.

On transforme un échantillon en dérivé di-N-acétylhepta-O-triméthylsilylique volatil, comme décrit dans l'exemple 1. La valeur m/e trouvée est égale à 1264. La formule C47H94N4O requiert m/e =1264.

Exemple 3:

On ajoute lentement 0,7 ml (5 mmol) d'anhydride trifluoracétique à une solution de 0,23 g (0,4 mmol) de 3-N-benzylkanamycine A dans 15 ml d'acide trifluoracétique à 0°C. On maintient la solution à 0-4° pendant 20 h. On évapore ensuite le solvant et on traite le résidu avec 10 ml de toluène, puis on l'évaporé à sec. On dissout le produit dans 20 ml de tétrahydrofuranne et on ajoute lentement la solution à une suspension sous agitation de carbonate de potassium en excès dans le tétrahydrofuranne. On agite la suspension à la température ambiante pendant 30 mn, on la filtre et on évapore le filtrat à sec sous pression réduite. On reprend le résidu dans 20 ml de méthanol puis on le laisse reposer à la température ambiante pendant 30 mn. On chasse ensuite le solvant sous vide pour obtenir la 3-N-benzyl-3",6'-di-N-trifluoracé-tylkanamycine A. Le Rf est égal à 0,5 dans le méthanol, le chloroforme et l'hydroxyde d'ammonium à 8% dans la proportion de 4:1:0,1 (la 3-N-benzylkanamycine A a une valeur de Rf de 0,01).

Exemple 4:

A) On agite pendant environ 16 h à la température ambiante, puis on verse dans 1,9 1 d'eau une solution de 189,4 g de 1,3,3",6'-tétra-N-benzyloxycarbonylkanamycine A («Bull. Chem. Soc. Japan», 1965, 38,1181) dans 568 ml de pyridine. On extrait la solution aqueuse avec une fois 1,8 1 et une fois 1,01 de chloroforme et on évapore l'extrait organique à sec sous pression réduite. Par trituration du résidu avec de l'éther, on obtient 224,8 g de penta-0-acétyl-l,3,3",6'-tétra-N-benzyloxycarbonyl-kanamycine A qu'on filtre et qu'on sèche sous vide. Le produit fond à 223-229°; son Rf est égal .à 0,55 dans un mélange de chloroforme et d'alcool dénaturé industriel (12:1); 5 1,8-2,05 (multiplet de 15 protons, 5 groupes acétyle) et 7,4 (singulet de 20 protons, 4 groupes phényle).

B) On hydrogène sur 15 g de palladium à 5% fixé sur du carbone, à 60° et sous pression de 3,5 bars pendant 7 h, une solution de 53 g de penta-O-acétyl-1,3,3",6'-tétra-N-benzyloxycar-bonylkanamycine A dans 260 ml d'acétate d'éthyle contenant 260 ml d'acide acétique cristallisable. On filtre la solution et on évapore le filtrat à sec sous pression réduite. On triture le résidu avec de l'éther et on recueille la penta-O-acétylkanamycine A obtenue comme produit, en quantité de 32,9 g, que l'on sèche sous vide; le produit fond à 97-105°; son Rf est égal à 0,0 dans un mélange de chloroforme et d'alcool dénaturé industriel (12:1), comparativement au Rf de 0,55 que l'on trouve pour la matière première. Le spectre de résonance magnétique des protons révèle l'absence totale de protons aromatiques.

C) On laisse reposer pendant environ 16 h à la température ambiante, puis on évapore à sec sous pression réduite une solution de 139,2 g de penta-O-acétylkanamycine A dans 1,41 de méthanol saturé d'ammoniac, puis on l'évaporé à sec sous pression réduite. On dissout le résidu dans 140 ml de méthanol et on précipite le produit brut avec 2,5 1 de chloroforme, on filtre et on sèche sous vide. On met la substance solide brute en suspension dans 400 ml d'alcool dénaturé industriel et on recueille par filtra-tion 91,9 g de 3",6'-di-N-acétylkanamycine A, qu'on lave à l'éther et qu'on sèche sous vide. Le produit fond à 150-180° et son Rf est égal à 0,77 dans un mélange de méthanol et d'hydroxyde d'ammonium (0,880) à 1:1. Son spectre de résonance des noyaux de 13C et son spectre de résonance nucléaire des protons concordent tout à fait avec la structure requise.

Exemple 5:

On ajoute lentement 3,6 ml d'anhydride trifluoracétique à une solution sous agitation de 960 mg (2 mmol) de kanamycine B dans 50 ml d'acide trifluoracétique à 0°C. On laisse reposer la solution à 0-4° pendant 20 h. On évapore ensuite le solvant sous pression réduite et on traite le résidu avec 10 ml de toluène, puis on l'évaporé à sec. On dissout le sel d'acide trifluoracétique dans 30 ml de tétrahydrofuranne et on ajoute lentement la solution à une solution sous agitation de triéthylamine en excès dans le tétrahydrofuranne. On laisse reposer la solution à la température ambiante pendant 40 mn, puis on évapore le solvant sous pression réduite. On dissout le résidu dans du méthanol pour hydrolyser les groupes O-trifluoracétyle restants et, après 30 mn à la température ambiante, on évapore le solvant sous pression réduite et on Chromatographie le produit sur de la silice en effectuant l'élution avec un gradient de solvants en passant d'un mélange de chloroforme et de méthanol à 3:1 à une mélange de chloroforme, de méthanol et d'hydroxyde d'ammonium à 17% dans la proportion de 20:10:1 pour obtenir 452 mg (29%) de 2',3",6'-tri-N-trifluora-cétylkanamycine B sous la forme d'une substance vitreuse. Le Rf est égal à 0,70 dans un mélange de méthanol, de chloroforme et

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d'hydroxyde d'ammonium à 8% dans la proportion de 4:1:0,1 (la kanamycine B a un Rf de 0,0).

La structure a été confirmée par la séquence réactionnelle suivante:

a) une acétylation à l'anhydride acétique dans le méthanol pendant 20 h à la température ambiante, suivie d'un traitement à l'hydroxyde d'ammonium IN pendant 18 h pour éliminer les groupes trifluoracétyle donne un produit contenant deux groupes acétyle; m/e (désorption dans un champ) m +1 trouvé, 568; la formule C22H41N5O12 requiert m +1 = 568 ;

b) un traitement du dérivé di-N-acétylé à l'anhydride deuté-roacétique dans le méthanol à la température ambiante pendant 24 h, suivi d'une réaction avec un mélange à 2:1 d'hexaméthyldi-silazane et de triméthylchlorosilane à la température ambiante pendant 24 h, donne le dérivé tri-N-deutéroacétyldi-N-acétylhexa-O-triméthylsilylé volatil, m/e trouvé 1134; la formule C^gHgeNjOj jD9Si6 requiert m/e= 1134. Il est démontré qu'une diacétylation s'est produite sur le noyau de 2-déoxystreptamine d'après le diagramme de fragmentation, ce qui confirme le fait que la trifluoracétylation a eu lieu initialement dans les positions 2', 3" et 6' de la kanamycine B.

Exemple 6:

On chauffe à 60° pendant 1 h une solution de 2,84 g de 3",6'-

di-N-acétylkanamycine A et 1,305 g de 3-benzyl-6-(S)-dihydroxy-méthyltétrahydro-l,3-oxazine-2-one dans 28,4 ml de diméthylfor-mamide, puis on la refroidit à 30°. On ajoute 0,189 g de borohy-drure de sodium et on agite le mélange pendant encore 1 h. On 5 ajoute 1;0 ml d'eau, on laisse reposer le mélange pendant environ 16 h, puis on chasse le solvant sous pression réduite. On chauffe le résidu avec 28,4 ml de solution d'hydroxyde de sodium 3N à 80° pendant 4 h et, après refroidissement, on ajuste le pH du mélange réactionnel à 5,7 par addition d'acide chlorhydrique concentré. 10 On fait descendre la solution brute de l-N-[(S)-4-benzylamino-2-hydroxybutyljkanamycine A et de 3-N-[(S)-4-benzylamino-2-hydroxybutyljkanamycine A sur une colonne de résine d'échange ionique Amberlite CG-50 (forme NH4+) en effectuant l'élution, d'abord avec de l'eau pour éliminer les substances minérales, puis 15 avec de l'ammoniaque 0,15M pour isoler le mélange brut d'ami-noglycosides. Les fractions désirées sont évaporées et le résidu est dissous dans un mélange de 15 ml de méthanol, 15 ml d'acide acétique et 15 ml d'eau et hydrogéné par passage sur un catalyseur à 30% de palladium fixé sur du carbone, à 60° et sous pression de 4,2 bars pendant 16 h. On filtre la solution et on chasse le solvant sous pression réduite. On purifie le produit par Chromatographie par échange ionique comme indiqué ci-dessus et on obtient ainsi 0,5 g de l-N-[(S)-4-amino-2-hydroxybutyl]kanamy-cine A identique à un échantillon de référence.

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R

Claims (3)

1. 622 528

   REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation de composés de formule :

   0

   dans laquelle:

   R est un groupe amino ou hydroxyle, et R1 est un groupe alkyle inférieur pouvant éventuellement être substitué avec des groupes hydroxyle ou avec des groupes amino ou avec les deux, procédé caractérisé par le fait qu'il consiste à alkyler un composé de formule :

   fonctions amino, à neutraliser le dérivé O-acylé ainsi formé pour effectuer la migration intramoléculaire 0->N du groupe axyle, à éliminer tous groupes O-acyle restants et à isoler le dérivé sélectivement N-protégé de formule (II).

   5 3. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé par le fait que R3 est un groupe trifluoracétyle et le composé II est de préférence la 3-N-benzyl-3",6'-di-N-trifluoracétylkanamycine A, la 3",6'-di-N-trifluoracétylkanamycine A ou la 2',3",6'-tri-N-trifluo-racétylkanamycine B.

   io 4. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé par le fait que R3 est un groupe acétyle et le composé de formule II est, de préférence, la 3",6'-di-N-acétylkanamycine A.
2. 5. Procédé suivant l'une des revendications 1 à 4, caractérisé par le fait que R1 est un groupe (S)-4-amino-2-hydroxybutyle. 15 6. Application suivant la revendication 2, caractérisée par le fait que le dérivé à fonctions amino entièrement protégées est un dérivé benzyloxycarbonylique ou tertiobutyloxycarbonylique ou la tétra-N-benzyloxycarbonylkanamycine A ou la penta-N-benzyloxycarbonylkanamycine B.

   20 7. Application suivant la revendication 2 ou la revendication 6, caractérisée par le fait que l'agent acylant est un agent d'acétylation, de préférence l'anhydride acétique ou l'anhydride trifluoracétique, ou l'agent acylant est le chloroformiate d'éthyle ou le chloroformiate de méthyle, l'agent acylant étant de préfé-2s rence l'acide trifluoracétique lorsque le sel d'acide trifluoracétique de la kanamycine A, de la kanamycine B ou de la 3-N-benzylka-namycine A est utilisé.
3. 8. Application suivant la revendication 6, caractérisée par le fait que les groupes benzyloxycarbonyle sont éliminés par hydro-30 génolyse catalytique.

   U3NH

   dans laquelle:

   R2 est un atome d'hydrogène ou un groupe benzyle;

   R3 est un groupe acyle labile protégeant la fonction amino, et R4 est un groupe hydroxyle ou un groupe NHR3, pour former un composé de formule: