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Procédé de préparation d'un nouveau sel d'hydroxocobalamine La présente invention a pour objet un procédé de préparation d'un nouveau sel d'hydroxocobal- amine, à savoir l'iodure d'hydroxocobalamine.
On sait que l'hydroxocobalamine est un produit assez instable à l'état solide. On a observé que cette base commençait à se dégrader à la température ambiante déjà au bout de quelques semaines et que la dégradation pouvait même atteindre un taux de l'or- dre de 10% par mois. Cette instabilité ne semble d'ailleurs pas être fonction de la pureté du produit, les produits les plus purs se dégradant aussi vite que les échantillons courants. Le stockage de l'hydroxocobalamine pose dans ces conditions des problèmes sérieux.
On connaissait d'autre part certains sels minéraux ou organiques de cette base - comme le chlorure, le sulfate ou l'acétate - mais ces dérivés ne résolvaient pas le problème de stockage, soit parce qu'ils n'offraient pas une stabilité satisfaisante, soit parce que leur préparation faisait déjà perdre une partie de l'activité précieuse de la base.
Il a été trouvé à présent d'une manière surprenante que l'iodure d'hydroxocobalamine obtenu par le procédé objet de l'invention présente, par rapport aux autres sels susmentionnés, une stabilité chimique nettement supérieure.
Le tableau comparatif donné ci-après dans la partie expérimentale montre par exemple que la dégradation de la structure de l'iodure, chauffé à 80c) en présence d'air pendant 7 jours, n'est que de l'or- dre de 2,5 %.
De même, sur le plan de l'activité biologique, l'iodure d'hydroxocobalamine présente une résistance à la chaleur et à l'oxydation remarquable. Ce sel est par exemple beaucoup plus stable que l'acétate correspondant.
Le produit obtenu par le procédé objet de l'invention, peut par conséquent servir pour le stockage de l'hydroxocobalamine pour des périodes plus ou moins prolongées. Pour l'usage, on pourra ensuite soit l'utiliser tel quel ou encore, si on le désire, libérer la base ou préparer d'autres sels selon les procédés courants.
L'iodure d'hydroxocobalamine est doté de propriétés vitaminiques intéressantes. Il possède notamment une action préventive ou curative vis-à-vis de l'anémie de Biermer ou des anémies hyperchromes mégaloblastiques., des anémies hypochromes ferripri- ves ou post-infectieuses ainsi qu'une action neurotro- phique et stimulante générale.
Il peut être utilisé pour le traitement desdites anémies, des synchromes neuro-anémiques, dans les complications nerveuses des anémies de Biermer, des troubles moteurs, des troubles de la sensibilité profonde, des polynévrites alcooliques, des névrites optiques rétrobulbaires, des neuropathies périphériques, des manifestations neurologiques du diabète et des syndromes neurologiques divers tels que sclérose en plaques.
La posologie utile s'échelonne entre 0,1 mg et 2 mg par prise chez l'adulte en fonction de la voie d'administration. Le procédé de préparation de ce nouveau sel de l'hydroxocobalamine, selon l'invention, est caractérisé en ce que l'on fait réagir l'acide iodhydrique sur une solution aqueuse d'hydroxocobalamine, ou d'un sel d'acide faible de celle-ci, précipite ensuite
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l'iodure formé par addition d'un solvant oxygéné miscible à l'eau, tel que l'acétone, le dioxane, etc. et isole ledit sel d'hydroxocobalamine selon les procédés connus.
Pour l'exécution du procédé ci-dessus, on emploie, de préférence, des solutions aqueuses de 0,5 à 5 % d'hydroxocobalamine ou d'un sel d'acide fai- ble de celle-ci comme par exemple l'acétate de préférence entre 1 et 2 0/0 ; on peut ajouter dès le début une faible quantité d'un solvant oxygéné tel que l'acétone ou le dioxane puis faire réagir l'acdie iodhy- drique dont on emploie un fort excès, de préférence 10 à 15 fois la quantité théorique.
Les exemples suivants illustrent l'invention. Exemple 1 Préparation de l'iodure d'Iaydroxocobalamirie par salification de la base libre A 333 cm3 d'une solution hydroacétonique renfermant - hydroxocobalamine 0,5 g - eau 67 cm3 - acétone 265 cm3 refroidie à 0 C, on ajoute 1,13 g d'une solution d'acide iodhydrique (densité = 1,7) puis 400 cm' d'acétone. On abandonne le mélange réactionnel en glacière pendant vingt-quatre heures, essore ensuite les cristaux formés, lave à l'acétone, sèche et obtient 419 mg d'iodure d'hydroxocoba_amine.
Le produit obtenu se présente sous forme de cristaux rouges très foncés, plus foncés que l'hydroxoco- balamine base libre. II est solvaté à 5,5 % et l'analyse spectrale montre qu'il renferme 93,8 % d'hydroxoco- balamine. Le taux d'iode est de 8,8 0/0, le titre théorique étant de 8,6 0l0.
Spectre UV (dans le tampon acétate de sodium, pH = 4,5)
EMI2.44
Titrage potentiométrique 6,62 équivalents X 10-4/g (théorie 6,78 X 10-4). Le produit est soluble dans l'eau, dans l'alcool et dans les acides dilués aqueux. Il est insoluble dans l'éther, l'acétone, le benzène, le chloroforme, etc., et il se décompose dans les alcalis dilués aqueux.
II n'est pas décrit dans la littérature. Exemple 2 Préparation d'iodure d'hydroxocobalamine à partir de l'acétate On dissout dans un demi-litre d'eau 4,91 g d'acétate d'hydroxocobalamine renfermant 4,34 g d'hy- droxocobalamine pure, ajoute 1 litre et demi d'acétone anhydre puis, en refroidissant à 0 , 7 cm3 d'acide iodhydrique, (densité = 1,7).
On rajoute ensuite 2,5 litres d'acétone anhydre, abandonne pendant une nuit à 0 C puis essore le produit formé, lave à l'acétone, sèche et obtient 3,79 g d'iodure d'hydroxocobalamine, produit soivaté à 5,9 % et dont l'analyse spectrophotométrique et bactériologique (920 t/mg) confirme une pureté de 100 0/0.
Etude comparative (le stabilité de différents sels de l'hvdroxocobalainine Pour effectuer cette étude, on introduit les produits en question dans des ampoules de 2 cm3 à raison de 40 mg de produit par ampoule. Les ampoules sont scellées sous air et chauffées en étuve à 80,).
On prélève, pour l'analyse, une ampoule de chaque sel après deux et sept jours et détermine la sol- vatation et le titre spectrophotométrique.
Les résultats obtenus sont résumés dans le tableau qui suit.
EMI2.72
<tb> Nature <SEP> (*) <SEP> Titre <SEP> Perte <SEP> en <SEP> Perte <SEP> en
<tb> du <SEP> sel <SEP> initial <SEP> Z <SEP> jours <SEP> 7 <SEP> jours
<tb> I
<tb> Chlorure <SEP> 915 <SEP> 5 <SEP> 0/0 <SEP> 10 <SEP> 0/0
<tb> Acétate <SEP> 960 <SEP> 27 <SEP> %
<tb> Iodure <SEP> 920 <SEP> 2,5% <SEP> 2,5()/o
('-\) Exprimé en y d'hydroxocobalamine par mg de sel sec.