CH287475A - Procédé de préparation d'acide ptéroyl- -glutamyl- -glutamylglutamique. - Google Patents

Description

Procede de preparation d'acide pteroyl-y-glutamyl-y-glutamylglutamique.

La presente invention a pour objet un proeecIe de pi'eparation dune pteridine subs tituee, e'est-ä-dire d'aei-de pteroyl-y-gliitamyl-y -

glutamylglutamique qui. sous l'une de ses formen tautomeres au moins, repond ä 1a. for inule suivante:

Jans laquelle -NHR est 1e reste de 1'acide y - glutamyl - y - rlutamylglutamique. L'acide pteroyl-y-ölutamyl-"-glntamylglutamique peut egalenient eire clenonirne aride N-[(2-amino--1 hyd roxy - 6 - p@-i'iniido [ 4,:5 - b ] py-razyl) methyl J aniino i benzo-,-1] -; -,#'lutamyl-^@-g@ntamyl-luta mique, suivant 1e systeme de nonienclature du Ring Index (Patterson, Capell).

Soivant la pre@erite invention, an prepare ce compose en faisant rea.gir simultaile111ent ou dass n'importe duel ordre de 1a 2,4,ä ti-ianiino-6 liy(Iroxypyrimidine, un a,/3-clihalo pror)ioiia]cleliy de et un ester de 1'aeide p aminobenzoyl-y-glutainyl-y-glutainylgIiltami que et en hydrolysant ensuite 1e produit de la Haetion sous des eonditions alealines.

L'acide pteroyl - ;# - glutamyl - ;, - alutamy 1 glutaniique obtenu par le proeedevseton la presente invention est une nouvelle substanee solide. jause a brtni rougeätre, difi-ieilemerit soluble Clans 1'eau et les solvants organiques et utilisable en therapie. Cet aride possede des proprietes analogues ä celles de vitamines

ei senible eire necessaire pour ou stimuler la croissance de certaines baeteries et d'orga nismes plus developpes du domaiiie animal. Ce compose s'est en outre revele utile pour cal mer les douleurs occasionnees pai# cles tumeurs.

0n peut preparei, les sels d'acides de Vacide pteroylglutamylglutainylglutamique en traitant celui-ei par des arides mineraux forts tels que 1'aeide ehlorh,#-driq-Lie et 1'acide sulfu rique. 0n peut aussi en obtenir des sels de bases en 1e traitant au moy en d'un aleali approprie, par exeniple au moyen d'un 11y droxyde de met.al alcalin, d'ammoniaque ou Tune amine. A partir de Ces sels, an peut obtenir d'autres sels metalliques contenant des eations tels que 1e zinc, 1'argent, 1e eiekel, 1e euivre et 1e magilesinin, par double deeompo sition, par exemple en traitant. une solution d'un sel de metal alealin de 1'aeide pt6royl glutainylg1utanij-Iglutamique par un sel solu ble du eation voulu.

La 2.4,-triamiiio-6-hydroxypyrimidine est un coinpose connu qui peut exister sous plu-

sieurs foriues tautomeres telles que la 2,4,5 triamino-pyrimidone-6 ou la 2-imino-4,5-di amino-pyrimidone-6. Ces formes tautoüieres peuvent eire utilisees Fune pour Fautre.

L'a,pi - dihalopropionaldeliyde peut et.re 1'a,ss-dibromopropionaldehy de, 1'a,fl'-dichloi-o propionaldehyde ou 1'a,ss-diiodopropionalde hyde. Ces composk peuvent eire utilises sous forme de leurs acetals, etaiit donne qu'il existe un equilibre entre 1'aldehyde libre et sou a(#etal, en solution.

L'ester de 1'acide p-aminoben@oyl-y -g@ut amyl-y-glutamy lglutaniique peut etre prepare par aetion de Chlorure de p-nitroberizoyle sur im estei- de Facide @@-@Ylutaniyl-y-glut.aniyl.. ,lutamique et. par reduction c111 groupe nitro en groupe amino.

La reaction donnant lieu ä la formation de Fester d'acide pteroyl-;-glutamyl-y-lut amylgIittamique peut etre i-epresentee par 1'equation suivante

dans laqnelle -NHR est 1e reste d'un ester de 1'a.cide y-glutamyl-y-glutamylglutamiqiie.

Bien , que cela ne soit pas necessaire, an obtient en geiieral de ineilleurs rendements en operant en presence d'agents oxy dants, tels que les biehromates de inetaux alcalins, Fiode, etc.

La. temperature de reaetion peut varier eonsiderablement, c'est-ä-dire de 2-3 C jus qu'ä 100 C ou plus. De meme, la reaction a lieu dann de larges limites de PH. Les meil leurs resultats sont toutefois obtenus ä un PH compris entre 3 et 5.

Pour effeetuer la reaetion, il est avanta geux d'utiliser eine solution an une suspen sion des reaetifs dann un liquide tel. que Feau, 1'aleool ethylique, Facetone, 1e benzene, 1e tetrachlorure de carbone, 1e ehloroforme ou des melanges de Ces solvants.

Les exem.ples suivants se referent ä des mises en Oeuvre du procede suivant la pre sente invention.

<I>Exempe 1:</I>

011 prepare mie solution d'a.ss'-dibronio propiona.ldeliyde par broinuration dune salu tion de 1,205 kg d'acroleine dans 1,65 kg d'acide acet.ique <U>g</U>@lacial et 258 eni'3 d'an @iZ- dride acetique ä 5 ä <B>10"('</B> cn utilisant 3,402 kg de bronie. 0n prepare une solution de 5,53 kg de sulfate de ?,4,5-trianiino-6 hydroxypyrimidine et de :i,25 k- de ehlorure de baivum dihydrate Jans 80 litres d'ean ä 60 C, la solution kaut refroidie 'a 40 C apres 10 minutes. 0n nielanve rette solution avec 66,5 litres dune solution de Fester @@-ethylidue de Facide p-am@nobenzoyl-y-glutamyl-y-g@ut ainylgl.utamique. A11 cours de 1a. condensation, an ajoutera au melange une solution d'hydroxyde de sodium 10n pour inaintenir 1e pH ä 3. 0n effectue la condensation en a.joutant lentement, ii. peu pres 5 la menie vitesse, la solution du dibroinopropionalde hy de (dont la preparation est deerite au coni mencement de cet exemple) et une solution oxydante de bichromate (préparée par disso lution de 1075 g de bichromate de sodium dans 6,451 g d'eau). Cette opération demande environ 30 minutes, le pll étant. maintenu à environ 3 pendant 1 heure et demie. Le produit, soit. l'ester ,,-éthylique de l'acide ptéroyl-y-glutamyl-,,-glutainylgIutaniique, est ensuite isolé et lavé. Le produit. humide pèse 4.7, 5 kg.

Pour liycli-olysei- le produit brut, dont l'activité correspond à celle de 2493 @, de matière pure, on le dissout dans une solution d'hydroxyde de sodium 0,1n à. raison de 1 mg par cm3 à 50 C. La solution est agitée pen dant 20 minutes et traitée par 550 ; de chlorure de calcium par litre. La solution obtenue est filtrée à 40 C. Le filtrat présente une activité correspondant. à 1704 g de subs tance pure. On ajuste le hl, du filtrat à. 10,0 à 11 en utilisant une solution de chlorure de zinc à 20 % et on filtre à 50 C. On ajuste ensuite le pll (lu filtrat à 6,8 au moyen d'une solution de chlorure de zinc à 20 % et on filtre à 60 à. 70 C. On dissout le gâteau de filti,a",e dans de l'hydroxyde de sodium 0,111 à raison de 4:ï0 g/litre, on ajuste le pli de la solution à<B>2, ,5</B> au moyen d'acide chlorhydri que et on filtre. On dissout le gâteau de fil trage dans de l'hydroxyde de sodiuDi 0,1n et. on filtre. Le pll du filtrat est. ajusté à 0,9 à 35 C, ce dernier étant refroidi pendant plu sieurs heures à 0" C et. ensuite filtré. Le pré cipité est dissout dans 12litres d'hydroxyde de sodium 0,1n. La solution est. traitée au moyen de 550 g de chlorure de calcium par litre et ensuite filtrée à 40 C. Le pH du filtrat est ajusté à 0,95 à 35 C. Après refroi dissement à 0 C pendant plusieurs heures, le précipité est recueilli, lavé, congelé et séché partiellement. Un échantillon de ce produit présente une teneur de 84,9% en acide ptéroyl-,, -glutamyl-y-glutamylglutainique.

Exemple On prépare préalablement l'ester de dé part comme suit 100 mg d''ester tétraétby ligue d'acide p- nit.robenzoy 1-y-glutamy 1-;,-glutamylglutamique sont soumis à. la réduction au moyen de pou dre de fer et d'acide chlorhydrique. Après 11/2 heure, le fer résiduel est séparé par filtrage et lavé ati moyen de 0,5 ems d'acide acétique et 3 em3 d'eau. Le filtrat est ensuite dilué à. 8 cm-. La teneur de la solution en amine, déterminée par la méthode Bra.tton- Marshall, est de 97 % de la valeur théorique. On ajoute 65 mg de dichlorhydrate de 2,4,5 triamino-6-hydroxypyrimidine à. la solution réduite et on ajuste le pli à 3,8. On. ajoute lentement 66 mg de dibromopropionaldéhyde dans 1 cm-' d'acide acétique à la, solution, en l'agitant et en maintenant son pH à. 3,5-4. E tant donné que le précipité est assez collant, on verse l'eau et on lave le précipité à l'étha- nol et à l'éther. Rendement: 24 mg. Pureté, déterminée par analyse chimique: 23,4%. Ce produit est alors hydrolysé de la manière décrite dans l'exemple 1. Des essais micro- biologiques effectués sur L. easei après cette hydrolyse de l'ester pendant. 12 heures dans une solution d'hydroxyde de sodium 0,1n don nent une valeur de 70,6 0/0.

Claims (7)

1. REVENDICATION: Procédé de préparation d'acide ptéroyl-y- gIutamyl-y-glittamylglutamiquie qui, au moins sous l'une de ses formes tautomères, répond à la formule:

   dans laquelle NHR représente le reste de l'acide y-glutamyl-y-glutamylglutainidue, . ca- ractérisé en ce qu'on fait réagir de la 2,4,5- triainino-6-hydroxypyriniidine, un a,,l-dihalo- propionaldéhyde et. un ester de l'acide p aminobenzoyl-y -ghitamyl-y-glutamy lglutami- que et qu'on hydrolyse ensuite le produit de la réaction sous des conditions alcalines. L'acide ptéroyl - y - glutamyl - y - glLltaIYlyl- glutamique obtenu par le procédé selon la présente invention est une nouvelle substance solide, jaune à brun rougeâtre, difficilement soluble dans l'eau et les solvants organiques et utilisable en thérapie. Cet acide possède des propriétés analogues à celles de vitamines et semble être nécessaire pour ou stimuler la croissance de certaines bactéries et d'orga nismes phis développés du domaine animal. Ce composé s'est. en outre révélé utile pour calmer les douleurs occasionnées par des tu meurs. SOUS-REVENDICATIONS 1. Procédé suivant la revendication, carac térisé en ce que l'on fait réagir les trois com posés susdits simultanément.
2. 2. Procédé suivant la revendication, carac térisé en ce qu'on fait réagir d'abord entre eux deux des trois composés susdits, puis le troisième sur le produit de cette première ré action.
3. 3. Procédé suivant la revendication, carac térisé en ce que la réaction de condensation est effectuée à la température ambiante.
4. 4. Procédé suivant la re@-endication, carac térisé en ce que la réaction de condensation est effectuée à une température comprise entre 2 et 100 C. .
5. 5. Procédé suivant la revendication, carac térisé en ce que la réaction de condensation est effectuée à un<B>pli</B> compris entre 3 et :5.
6. 6. Procédé suivant la. revendication, carac térisé en ce que la réaction de condensation est effectuée en présence d'un solvant inerte.
7. 7. Procédé suivant ta revendication, carac térisé en ce que la réaction de condensation est effectuée en présence d'un agent. oxy fiant.