Procédé de préparation d'une solution concentrée et pure de streptomycine. La présente invention se rapporte à un procédé de préparation d'une solution con centrée et pure de streptomycine. Jusqu'à maintenant, il était habituel d'employer le charbon de bois ou le charbon activé pour la séparation de la streptomycine de ses solutions, la streptomycine étant adsorbée et ensuite extraite. Ce procédé présente ce pendant certains désavantages, en ce sens que le rendement de la récupération est assez bas et que la pureté des solutions obtenues après extraction de la streptomycine n'est pas satisfaisante.
Alors que les matières d'échange consti tuées par des bases inorganiques naturelles sont totalement inefficaces dans la sépara tion (le la streptomycine de ses solutions, on a trouvé maintenant que les aluminosili cates d'échange basique, inorganiques et synthétiques (qui seront désignés ci-après par l'expression alumino-silicates d'échange ) sont remarquablement efficaces; en consé quence, le procédé selon la présente inven tion est basé sur l'utilisation (le tels alumino- silicates.
Ledit procédé est caractérisé en ce que l'on fait une culture d'un organisme du genre Actinomyces pour produire de la strepto mycine en solution, en ce que l'on met en contact la solution obtenue de streptomycine avec un aluminosilicate d'échange basique. inorganique et synthétique, pour adsorber la streptomycine et pour la séparer de sa solu tion et en ce que l'on extrait la st.reptoiny- cine ainsi adsorbée avec un -solvant, de la streptomycine.
Les aluminosilicates d'échange basique, inorganiques et synthétiques, peuvent être utilisés, si on le désire, en mélange avec du charbon de bois ou. du charbon activé..
On a constaté que ces aluminosilicates d'échange adsorbent la streptomycine de ses solutions avec un rendement plus élevé que ne le fait le charbon de bois ou le charbon activé, tandis que l'extraction de la strepto mycine de l'alumino-silicate d'échange peut se faire aisément, par exemple au moyen. d'une solution aqueuse diluée de chlorure de sodium, avec mi. plus grand rendement et en produisant des solutions de plus grande pureté qu'à partir du charbon de bois ou du charbon activé.
On a constaté encore que, par le procédé selon l'invention, il est. possible d'obtenir une augmentation considérable de la concen tration en streptomycine, telle que la solu tion obtenue par l'extraction peut avoir une concentration en streptomycine de l'ordre de 50 fois celle de la solution obtenue par la culture de microorganismes du genre Acti- nomyces. De plus, la solution contient moins d'impuretés, autres que le chlorure de sodium ou une autre matière présente dans le liquide d'extraction, que celle qui est ob tenue par l'emploi du carbone.
Au lieu de mettre directement en contact avec ledit aluminosilicate les solutions brutes de streptomycine obtenues par fer mentation de milieux de culture appropriés au moyen d'organismes du genre Actino- myces, on peut d'abord concentrer et/ou purifier partiellement ces solutions brutes de façon usuelle et ensuite mettre en contact avec l'alumino-silicate les solutions partielle ment concentrées et/ou purifiées.
On utilise de préférence pour la réalisa tion du présent procédé l'alumino-silicate synthétique vendu sous le nom déposé De calso par la liaison The Permutit Co. (Grande-Bretagne); le Decalso dit de grain biologique 60-90 mailles s'est montré spécialement satisfaisant.
Il est indiqué d'effectuer la culture de l'Actinomyces dans des conditions telles que la concentration en sels de la solution, brute obtenue soit aussi basse que possible, par exemple d'au plus<B>0,5%</B> en poids en chlorure de sodium et de préférence inférieure à 0,1 %. La récupération de la streptomycine après adsorption sur l'alumino-silicate synthétique peut se faire en traitant ce dernier par une solution aqueuse à 5% en poids de chlorure de sodium. Le traitement de la solution de streptomycine par l'alumino-silicate synthé tique peut se faire de toute manière appro priée.
On préfère cependant employer une tour ou une colonne chargée d'alumino- silicate et faire passer à travers celle-ci la solution en traitement. La solution saline ou autre, ou le solvant utilisé pour récupérer la streptomycine peut passer à travers la tour ou la colonne d'alumino-silicate dans la même direction que la solution de strepto- mycine brute ou en direction opposée.
L'exemple suivant se réfère à une mise en oeuvre du procédé selon l'invention. <I>Exemple:</I> Par fermentation au moyen de spores d'Actinomyces griseus d'un milieu de culture aqueux contenant de la farine de soya, du dextrose, de l'extrait de viande et un peu de NaCl, à 25 C et sous aération, on a obtenu 2000 cm3 de bouillon de streptomycine à 52 unités de streptomycine par cm3, contenant 0,06% en poids de chlorure de sodium et ayant un pH de 8,3.
Cette solution est passée à travers une couche de 20 cm de Decalso ; de grain biologique 60-90 mailles, à la vitesse de 10 cm3 par minute. Pendant la première heure, la couche de Decalso adsorbe une moyenne de 78% en poids de toute la streptomycine qui passe.
Après une heure de fonctionnement, l'acti vité de la couche a diminué et l'adsorption moyenne pendant la seconde heure se monte à 68% en poids de la streptomycine passant pendant cette heure.
Une couche ayant ainsi adsorbé au total 71200 unités de streptomycine est ensuite extraite avec 100 cm3 d'une solution aqueuse à 5% en poids de chlorure de sodium à une vitesse de 10 cm3 par minute, le liquide extracteur étant recueilli par portions de 20 cm3 chacune. La table suivante donne les unités de streptomycine adsorbée extraites pour chaque portion.
EMI0002.0051
Portion <SEP> du <SEP> Unités <SEP> Rendement <SEP> total
<tb> liquide <SEP> extracteur <SEP> extraites <SEP> en
<tb> Ire <SEP> 48000 <SEP> 67
<tb> 2e <SEP> 11400 <SEP> 83
<tb> 3e <SEP> 4600 <SEP> 90
<tb> 4e <SEP> 2400 <SEP> 93 <SEP> 5e <SEP> 96 <SEP> 94 Cette table montre que la concentration de la streptomycine dans la première portion du liquide extracteur est environ 50 fois plus grande que dans le bouillon initial et, en outre, que 94% de la streptomycine adsorbée par l'alumino-silicate d'échange sont récu pérés.
Les solutions résultant de la deuxième extraction et des suivantes, de relativement basse concentration, peuvent être réutilisées ensuite comme première portion pour l'ex traction de la streptomycine d'une couche fraîchement chargée; cela permet d'élever leur concentration en streptomycine à la valeur optimum. Le produit connu sous le nom déposé de Doucil et préparé par Crossfield & Sons (U. S. A.) est un autre aluminosilicate d'é change qui peut être utilisé pour réaliser la présente invention.