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'PERFECTIONNEMENTS,APPORTES-AUX:PROCEDES POUR LE TRAITEMENT
D'ANTIBIOTIQUES.
L'invention est relative à la purification du produit connu sous le nom de Terramycine (marque déposée) et elle concerne plus particulièrement la préparation de sels métallo-organiques basiques de la Terramycineo
La Terramycine est un antibiotique qui a été décrit et spécifié en premier lieu dans le brevet E.U.A. 2.516.080 accordé le 18 juillet 1950.
Sa nature est amphotérique et on sait qu'il forme des sels acides, tels que des chlorhydrates, et certains composés'basiques tels que le sel sodiqueo Plusieurs de ces composés conviennent en soi à la thérapeutie et à la nutri- tiono Plusieurs sont utiles comme intermédiaires pour la récupération et la purification de l'antibiotique pur à partir de bouillons de fermentation bruts dans lesquels les microorganismes sont fortement dilués et dans les- quels ces microorganismes ont été élaborés.
On a découvert maintenant que la Terramycine peut être récupé- rée et purifiée et que certains nouveaux composés basiques de la Terramycine peuvent être préparés par un procédé comprenant la précipitation sélective de l'antibiotique hors des solutions aqueuses très diluées dans lesquelles il se trouve. Cette précipitation est obtenue en traitant la solution aqueu- se de Terramycine en présence d'ions métalliques polyvalents, par une base organique relativement soluble dans l'eau et choisi dans le groupe constitué par les amines et les sels d'ammonium quaternaires.
Le précipité obtenu comprend un sel métallique basique et polyvalent de Terramycine et le radi- cal amino ou ammonium quaternaire, lequel sel a une solubilité qui, d'une manière inattendue, est faible et qui permet la récupération d'une propor- tion substantielle de la totalité de l'antibiotique qui se trouve dans la solution diluée. La ré'gération de la Terramycine purifiée ou des composés simples de ce sel est alors effectuée par une méthode choisie parmi plusieurs suivant que 1-'on désire obtenir l'antibiotique pur ou ses sels acides. Le
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sel métallo-organique précipité peut être dissous dans un solvant par aci- dification et, en réglant convenablement le pH, la Terramycine amphotérique est alors précipitée et récupérée à partir de la solution.
Suivant une va- riante et de préférence, le sel métallo-organique est dissous dans un solvant organique, tel que le méthanol ou du méthanol contenant de l'acide chlorhy- drique ou du chlorure de calcium. La solution est alors clarifiée, si néces- saire par un adsorbant décolorant et elle est filtrée. L'addition d'un aci- de concentrée tel que l'acide chlorhydriqueà la solution clarifiée provo- que la séparation d'un sel acide cristallisée extrêmement pur, de la Terra- mycine, par exemple le chlorhydrate.
Une application préférée du procédé, faisant l'objet de l'inven- tione est la récupération de la Terramycine à partir de bouillons de fermen- tation de microorganismes. Ces bouillons ont généralement une activité de 500 mcg/ml ou davantage et contiennent déjà des ions métalliques polyvalents qui sont des impuretés résiduaires provenant du milieu de culture nutritif initiale Une amine organique ou un sel d'ammonium quaternaire substitué par un groupement organique, qui est propre à se dissoudre tout au moins en par- tie dans un tel bouillon pour suppléer à la réaction, est ajouté et le mi- lieu est de préférence alcalinisé et maintenu à un pH neutre ou basique.
Le précipité obtenu est séparé et un sel complexe de Terramycine est récupé- réa ce sel contenant à la fois les constituants métalliques et la base organique ajoutée. Il donne aux essais environ 300-500 mog/mg en Terramycine active. L'opération en une phase permet donc principalement de concentrer et de purifier la Terramycine.
Le sel complexe peut être aisément décomposé pour récupérer la Terramycine pure ou les sels acides simples de celle-ci, le produit pouvant être utilisé directement pour la thérapeutie ou la nutri- tiono Par exemple, les sels d'ammonium quaternaires, ayant des poids molé- culaires élevés, sont des germicides particulièrement fortso
Comme spécifié plus haut, les sels métallo-organiques complexes peuvent être traités pour régénérer la Terramycine qu'ils contiennent en les dissolvante de préférence après l'enlèvement de l'humidité en excès, dans les alcools et cétones inférieurs. A cet effet, le méthanol est un solvant très avantageux car son prix de revient est très faible, il peut être aisément récupéré et il intervient pour procurer un produit ayant une pureté élevée.
Généralement on prépare une solution méthanolique contenant environ 5,3 à 6,8 litres du solvant par kilogramme de Terramyoine active et on la traite ensuite avec de l'acide chlorhydrique concentréo- Dans ces con- ditions il peut y avoir une tendance à la précipitation de Terramycine am- photérique avant que la conversion de l'antibiotique en son chlorhydrate ait eu lieu. Une addition supplémentaire d'acide dissout la plus grande partie de la Terramycine mais un faible résidu peut subsister. Pour éviter la per- te de cette proportion réduite, le précipité séché de Terramycine-base orga- nique est,, de préférence,, ajouté au méthanol utilisé comme solvant pendant que le pH apparent de la solution est maintenu continuellement à environ 2-2,5 par l'addition diacide chlorhydrique concentré.
On obtient ainsi une solution claire. Du chlorure de calcium peut être utilisé dans un but à peu près le même, c'est-à-dire pour augmenter la solubilité de la Terramyci- ne dans le méthanol et pour empêcher sa précipitation prématurée. Quand une solution claire est obtenue, l'introduction d'un acide concentré, par exemple une quantité additionnelle d'acide chlorhydrique, donne lieu à la formation du sel acide simple de Terramycine que l'on désire obtenir.
Quand l'acide chlorhydrique est utilisé préliminairement pour faciliter la dissolution du sel complexée environ 0,4 à Ce? ml de l'acide concentré (36%) est nécessaire pour dissoudre le sel métallo-organique en équivalence à 1.0g de Terramycine active et on prépare ainsi des solutions ayant des ac- tivités d'environ 60.000 à 150.000 mcg/ml ou davantage en Terramycine.
Cette solution claire peut alors être traitée avec un absorbant tel que du charbon décolorant, pour enlever une variété d'impuretés contaminanteso On se sert généralement d'environ 0,5 à environ 1,5 g de carbone par gramme de Terramycine active., contenue dans la solution, la proportion la plus grande donnant un produit ayant une pureté meilleure sans pertes importantes dues à l'adsorption de l'antibiotique. L'adsorbant peut être séparé à l'ai-
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de d'un agent facilitant la filtration et lavé avec un solvant acidulé pour enlever les matières résiduaires.
Le chlorhydrate de Terramycine cristallise ou un sel analogue de bonne qualité est préparé à partir de la solution clarifiée ainsi obtenue en ajoutant un acide formateur de sel de Terramycine tel que 1-'acide chlor-
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hydrique concentre,, Un sel acide de Terramyoine, tel que lé chlorhydrate, se sépare à l'état cristallin, de la solution. Si on le désire on peut con- centrer la solution avant de procéder à la cristallisation En général, il est nécessaire de se servir d'un rapport d'au moins 200 ml diacide chlorhy.- drique concentré par kilogramme d'aiitîbiotîque, présent dans la solution.
Des quantités diacide un peu plus grandes peuvent améliorer le rendement en cristaux obtenus et 950 ml diacide par kilogramme de Terramycine active est une proportion fréquemment préférée. Les 'Volumes, qui donnent les résul- tats optima, sont aisément déterminés par un spécialiste du métier mais l'ad- dition de plus d'un litre diacide par kg d'antibiotique n'est pas souvent recommandable. La cristallisation est faite, de la manière'la plus parti- que, à peu près à la température ambiante bien qu9une température plus basse puisse donner un rendement légèrement meilleur.
A des température plus élevées le rendement est un peu diminuéo
En plus de la régénération de la Terramycine par.cristallisation
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directe de ses sels acides à partir de aompoiésmétallo-organiques, la régéné- ration peut être effectuée en dissolvant les composés en question dans un solvant organique, tel que le méthanol, à l'aide 'un acide. La présente d'une
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proportion minime d'eau n'est pas gênante. De lacide sulfurique est le plus souvent utilisé à cet effet. Les impuretés précipitées, telles que du sul- fate de calcium.!' sont enlevées par filtration et le pH est augmenté depuis une valeur d'environ 5 à environ 7. Un précipité contenant une proportion
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de Terramycine amphotérique libre est ainsi obtenu.
Celle-ci peut, si on le désire, être convertie en un sel acide cristallisé par les moyens usuelso Le solvant organique peut être enlevé par distillation et remplacé par de l'eau avant filtrationo Ceci augmente le rendement jusqu'à un certain de- gréo Suivant une variante, le produit peut être filtré et le solvant peut être enlevé pour obtenir un deuxième précipité d'une activité un peu moin- dre et qui peut être recyclé pour subir un traitement ultérieur.
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Une variété d'amines et de composés d'amuonium quateraires or- ganiques et différents peuvent être utilisés pour le traitement faisant l'ob-
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jet de l'invention en vue de préparer les sels basiques de la Terramyoine. Il est préférable que le poids moléculaire de la base soit suffisamment éle- vé afin qu'un précipité soit aisément formé dans le système dilué pour sé- parer une proportion appréciable de la teneur totale en antibiotique.
Les
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bouillons de fermentation de Terramyoînep quand ils sont préparés selon la kéthode décrite dans le brevet E.UoAo 205l6o0S0>> ont une actitivé d'au moins 50 meg/ml de IPantibiotiquso La base organique ou son sel doit également être relativement soluble dans l'eau afin que la réaction, par laquelle on
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obtient la formation de la Terramyoine insoluble puisse se faire en un temps raisonnable. Des exemples de basas organiques préférées sont les amines
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primaires, secondaires et tertiaires, des halogénures d9ammonîum quaternai res et analogues. Parmi ces derniers.. les chlorures d'alcoyle-triméthyl am- monium à longue chaine, dans lesquels le groupement alcoyle contient environ huit atomes de carbone ou davantage, sont particulièrement économiques et
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utiles.
Plutôt que d'utiliser ces composés individuels.\> il est possible de se servir de leurs mélanges industriels qui se trouvent sur le marché et qui comportent des chlorures d'alcoyle et aldéhyde trirêthyl ammonium contenant de huit à dix huit atomes de carbone (C8 à C18). Ces matières ne sont pas coûteuses et très efficaces. Divers groupements tels que les chaînes alcoy- les peuvent être substitués à un ou plusieurs radicaux alcoyles de ces com-
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posés.
Parmi les amine3,!> leSt genres aliphatiques à longue chaîne telles que 19octylamine, la nonylamine ou la ecylamine9 ou des mélanges industriels contenant plusieurs de ces substances donnent tout spécialement de bons ré- sultatso D'autres bases organiques, telles que des composés hétérocycliques
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et des eyelo-alcoyle amines ainsi que des bases quaternaires de ces composés
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peuvent être utilisés.
En général, il semble qu'environ huit atomes de car- bone soient nécessaires? au moins, pour le précipitant organique utilisés
Un précipitant organique et basique? particulièrement utile,
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pour les bouillons de fermentation de Terramyoïne, est le produit connu sous le nom de Arquad 0 que l'on peut se procurer sous la forme d'une solution à 50 % dlisopropano1 ou d'une solution aqueuse à 33 %0 Ce produit est un mé- lange technique contenant environ 50 % de chlorure de dodecyl-triméthyl-ammo- nium et des quantités moindres de chlorures de octyl-e deeyl-, tetradecyl-, hexadecyl=p octadecyl- et octadecenyl-triméthyl-ammonium.
La quantité rédui- te d9isopropanol introduite quand on se sert de la solution ne gêne pas sé- rieusement le rendement de la précipitation des sels de Terramycineo Un vo- lume aussi réduit que 0,5 % en volume de la solution aqueuse à 33 % peut être utilisé avec de très bons résultats pour le traitement en question et l'ac- tivité des bouillons de fermentation est généralement réduite à moins de 100 mag/ml.
Quand on diminue la proportion du réactif il existe une tendan- ce à ce que plus de Terramycine reste dissoute dans la solution. Il n'est généralement pas pratique d'augmenter la quantité de Terramycine précipitée
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et cet accroissement n'augmente pas fortement la quantité de Terramyeine"pré- cipitée ce fait indiquant que la limite de solubilité est atteinte. En ef- fet, un usage de quantités excessives du produit Arquard comme précipitant peut également être peu pratique à cause de la dissolution partielle du pré- cipité qui en résulte parfois. En général une proportion d'environ 1.0 à environ 2,5 g (à sec) de ce réactif particulier par litre d'un bouillon nor- mal est préférée.
D'autres préoipitants de ce genre pour la Terramycine sont également efficaces dans une proportion approximativement la même. On peut admettre, toutefois, que pour des composés, ayant un poids moléculaire moindre, on doit se servir de quantités plus petites et que lorsqu'ils ont un poids moléculaire supérieur, ces quantités doivent être un peu plus gran- des.
Le degré de précipitation de la Terramycine hors de solutions aqueuses,, plus spécialement des bouillons de fermentation, par des bases or- ganiques varie avec la valeur du pH pour laquelle la solution est réglée, L'utilisation de pH inférieur à environ 5,5 est peu pratique alors que des pH d'environ 6 à environ 10 donnent des résultats excellents.
Gomme la sta- bilité de la Terramycine diminue avec les pH plus élevée, un pH d'environ 800 à 9.5 est préférée La méthode généralement utilisée pour récupérer la Terramycine à partir d'un bouillon de fermentation de micro-organismes est de séparer le mycelium par filtration du bouillon acidifié, d'ajouter la base organique que l'on désire utiliser comme précipitant et de régler en- suite le pH de la solution avec un alcali soluble tel que la soude ou po- tasse caustique. On a observé que l'addition rapide d'une solution alca- line tend à provoquer la précipitation d'un produit finement divisé qui peut être difficile à filtrer. Une addition plus lente donne un produit plus aisément filtrable.
Les précipités qui sont obtenus par le traitement des solu- tions de Terramycine avec les différentes bases organiques utilisables en présence d'ions métalliques polyvalents ne sont pas constitués par des sels simples de l'antibiotique et de la base choisie mais sont plutôt des sels complexes de ces substances, ces sels contenant divers ions métalliques pré- sents au cours du traitement. Ceci est prouvé par le fait que l'on 'nob- tient aucun précipité quand on traite une solution aqueuse diluée de Terra- myoine pure, dont la concentration est comparable à celle d'un bouillon de
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fermentation usuel de Terramyeine, avec une amine qui est connue comme con- venant à la précipitation de la Terramysine hors des bouillons de fermenta- tion.
Toutefois, 19addîtîon de quantités réduites d'ions métalliques bi- ou tri-valents à une telle solution de Terramyeine pure provoque la précipi- tation aisée des sels antibiotiques. Apparemment les précipités sont con-
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stitués par des composés complexes de Terramyolne., de la base organique et d'un ou de plusieurs ions métalliques polyvalents. Comme indiqué plus haut, ces derniers sont normalement présents dans les bouillons de fermentationo Par exemple, un précipité typique obtenu à partir d'un bouillon de fermenta-
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tion de Terramycine.. traité avec du Arquad C a été analysé et on a trouvé qu'il contient approximativement 51 % de Terramycine, 19 % de l'ion ammonium quater- naire et 7 % de cendres.
Les composants métalliques des cendres contiennent environ 45 % de magnésium et environ 45 % de calcium. Comme les milieux uti- lisés pour la préparation de Terramycine par fermentation varient un peu en ce qui concerne leur composition en ions métalliques, la composition du pré- cipité, obtenu avec une amine donnée ou avec un sel quaternaire déterminé,, varie également. Les milieux de fermentation normaux de la Terramycine con- tiennent au moins une-quantité d'ions métalliques polyvalents suffisants pour assurer la précipitation quand une base organique est ajoutée au bouillon fil- tré et quand le pH est rendu basique.
En réalité, le bouillon contient sou- vent plus de constituants métalliques que nécessaire auquel cas 1-'excédent peut être enlevé préalablement par des moyens appropriés? par exemple par la méthode de séquestration. Si le bouillon de Terramycine contient'une quan- tité insuffisante d'ions métalliques on peut ajouter du fer, du zinc.. du magnésium et analogue pour aider davantage à la précipitation.' Ces additions doivent être faites, évidemment, de manière à traiter convenablement une so- lution aqueuse de Terramyoine qui ne provient pas d'un bouillon ou de métaux qu'il contient naturellement. Les diverses bases organiques varient en ce qui concerne leur sélectivité, comme on peut s'y attendre.
La proportion de 19antibiotique qui se trouve dans les sels précipités ne reste pas constante avec les différents précipitants. La composition du précipité varie évidem- ment aussi quelque peu avec le pH utilisé.
Bien qu'il soit possible de se servir de solutions ou de bouil- lons ayant une activité en Terramyoine de 500 meg/ml et moins, on préfère se servir de solutions ou de bouillons donc Inactivité est un peu plus éle- vée afin que le produit obtenu ait une activité élevée et soit formé avec un bon rendement. En général, une fraction seulement du sel d'ammonium quaternaire ou autre base organique réactive est trouvée dans le précipité obtenu c'est-à-dire qu'on doit se servir d'un excès si l'on veut récupérer pour ainsi dire complètement l'antibiotique. Un excès molaire, à peu près égal à trois, du réactif est généralement le plus avantageux.
Pour la récupération de Terramycine pure ou de ses sels simples comme le chlorhydrate de Terramycine à partir de solutions de complexes mé- tallo-organiques, la base organique utilisée comme précipitant et un peu de l'anti-biotique lui-même subsiste dans la liqueur-mère et dans les résidus.
Il peut être désirable de récupérer et à-utiliser à nouveau ces matières.
Par exemple, si la liqueur-mère est recyclée et ajoutée à la charge suivan- te de la solution ou du bouillon de Terramycine à traiter conformément à l'invention la quantité de base organique, qui est alors nécessaire, peut être notablement réduite sans abaisser d'une manière appréciable le rende- ment en précipité de Teramycine. Une partie ou la,totalité du solvant peut d'abord être séparé de la liqueur-mère avant son addition à la charge suivante mais ceci n'est pas essentiel. Certaines impuretés colorées peu- vent être ramenées dans la liqueur-mère et donnent un sel de Terramycine un peu plus foncé. Si l'opération de recyclage est répétée trop souvent, cet assombrissement de la couleur du produit peut être gênant et le rendement peut diminuer.
Toutefois le recyclage de la liqueur-mère pour plusieurs fois est parfaitement faisable et ne diminue pas la qualité.
Le procédé, faisant l'objet de l'invention présente plusieurs avantages. Il fait intervenir des réactifs économiques, aisément disponi= bles et de toxicité réduite. On obtient un sel cristallisé de qualité éle- vée à partir de solutions de Terramyoine très diluées et/ou très brutes.
Le traitement comprend un minimum d'opérations et fournit de bons rendements en antibiotique.
Les exemples? donnés ci-après, ne sont nullement limitatifs ou restrictifs et servent uniquement à illustrer l'objet de l'invention.
EXEMPLE 1.- Une quantité de bouillon de Terramycine, filtré et acidifié? contenant 25,3 g de l'antibiotique est traitée avec 5 g diacide citrique par litre de solution pour séquestrer une partie des ions métalliques poly-
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valents dans celle-ci. On ajoute ensuite-5 ml d'une.solution aqueuse à 33 % dArquad G par litre de bouillon et on règle le pH de la solution à 9.0 en y ajoutant une solution de soude caustique au cours d'une période d'une heu- re. Un précipité complexe contenant de la Terramycine et mélangé à des bases
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aléo7l-trîméthyl-ammonîum ainsi que différents métaux est obtenu et ce pré- cipité est filtré en se servant d'un agent faoilitant la filtration.
Le fil- trat résiduel est soumis à un essai et on trouve qu'il contient 0,83 g de Terramycine active. Le gateau recueilli sur le filtre est séché à 50 sous vide et est ensuite broyé. La matière solide, finement divisée, ainsi obte- nue est extraite avec une quantité suffisante de méthanol et on recueille
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une solution contenant 136 mg/ml de Terramycineo On filtre cette solution et on ajoute par portions de l'acide chlorhydrique concentré en agitant con- stamment. On obtient la séparation de chlorhydrate de Terramycine cristal- lisé que l'on filtre, que 1-'on lave avec du méthanol acidifié et que 1-l'on sè- che. On obtient en tout 14,2 g de chlorhydrate de Terramycine cristallisé et purifié par un traitement simple.
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EXEMPLE II - On traite du bouillon filtré de Terramycine contenant 25,3 g de Terramycine active avec 0,2 % d9Arquad G (solution aqueuse à 33 %). A cette solution on ajoute la liqueur-mère obtenue par cristallisation du chlorhydrate de Terramycine préparé selon l'exemple I. Cette liqueur recy- clée contient 6,6 gr de Terramycine active. Le pH de là solution mélangée est ajusté à 9.0 par addition lente d'une solution de soude caustique. Le
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filtrat contient 1.08 g de l'antibîotîque. Le précipité contient des sels complexes métallo-quaternaires dl'ammonium, la teneur totale en antibiotique étant de 29,8 g.
Ce produit est dissous dans le méthanol et de l'acide chlorhydrique concentré est ajouté simultanément suivant une quantité corres- pondant à 0,48 ml diacide par gramme de Terramycine active. On obtient une
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solution contenant 62,5 mg/ml de antibiotique. On traite ce produit avec 0,99 g d'un charbon activé, qui se trouve dans le commerce, par gramme de
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Terramycine active. Après avoir agité pendant une demi-heure, le charbon est filtré à l'aide d'un agent facilitant la filtration. A la solution cla- rifiée on ajoute 0,19 g de chlorure de calcium anhydre par gramme de Terra- mycine pour empêcher la cristallisation prématurée de la Terramycine ampho- térique et pour obtenir la formation de chlorhydrate de Terramycine de qua- lité élevée.
A la solution claire on ajoute 0,60 ml diacide chlorhydrique concentré par gramme d'antibiotique en présence. Ceci donne lieu à la for- mation de chlorhydrate de Terramycine cristallisé. Les cristaux sont filtrés lavés soigneusement avec du méthanol avant d'être séchés sous vide à 50 .
On obtient au total 15,75 g du sel acide cristallisé. La liqueur-mère ré-
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sultant de la cristallisation, contient 19,3 mg/ml d'anti-biotique epest-à- dire au total 8,56 g. Une quantité plus grande de 1-'antibiotique peut être récupérée par une deuxième extraction des gâteaux recueillis sur le filtre ou à partir du charbon décolorant.
EXEMPLE III.- Du bouillon de Terramycine filtré est traité avec divers sels de chlorures d'ammonium quaternaires en solution aqueuse (H2O) et dans
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une solution d-isopropanol (IPO). Du Arquad 12 est constitué principalement par du chlorure de dodéoyitriméthiammonium et le Arquad 18 est le composé octadécyle correspondant. Dans le tableau ci-dessous on donne le volume du
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réactif utilisé pour traiter 500 ml de bouillon de Terramycine9 Inactivité du bouillon épuisé après enlèvement du précipité par la base organique et Inactivité du précipité après séchage.
Le pH de chaque échantillon du bouil- lon est réglé à 9.0 avec de la soude caustique pour obtenir la précipitation.
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<tb> Réactif <SEP> Volume <SEP> Activité <SEP> du <SEP> Activité <SEP> du
<tb>
<tb> filtrat <SEP> produit <SEP> sé-
<tb>
<tb> chée
<tb>
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-=-------- --- Arquad 0 (33% dans H 20) 2,5 ml 45mcg/ml 505 mcg/ml Arquad 12 (33% dans H0) 2,5 " 40 If 480 " Arquad 12 (50% dans IPO) li, 65 " 40 515 " Arquad 18 (50% dans IPO) le65 n .50 " À45, "
Il est à noter que des changements dans la nature de la base organique utilisée ne modifient pas, d'une manière appréciable;,-la séparation effective de 1?antibiotique d'avec le bouillon ou la qualité du produit.
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EXEMPLE IVo- On a constaté qu9un autre groupe de sels d9ammonium quaternai- res et certaines amines sont très efficaces pour obtenir la précipitation de la Terramycine daveo le bouillon de fermentation clarifié de Terramyoineo
Un tel bouillon est traité avec 5 g diacide citrique par litre de bouillon et µ des portions d'un litre du bouillon traité on ajoute des
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portions de 5.0g (5a0 ml des liquides) des réactifs indiqués ci-dessous.
Dans chaque cas la solution est réglée par l'addition de soude caustique di- luée pour un pH d'environ 8,5 à environ 9.0. Les produits précipités, con- tenant la Terramycine sont filtrés en se servant d'une proportion réduite d'une substance facilitant la filtration. On soumet les filtrats, fournis par chacun des précipités, à un essai par une méthode biologique normalisée en vue de connaître 1-'antibiotique résiduel. Dans le tableau ci-dessous sont indiqués les réactifs intéressants en question avec leur marque de fabrique et leur désignation générique ainsi que le pourcentage de la Terramycine récupérée hors du bouillon de fermentation.
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<tb>
Réactif <SEP> % <SEP> de <SEP> Terramycine <SEP> séparée <SEP> du
<tb> bouillon <SEP> de <SEP> fermentation
<tb>
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ommomommommmAmo odm.ommmeoooomo' ommmmmoammmmmomme chlorure d9alcoyle (C 8 à C 18) triméthylmammonium (Arquad 0) 93 %
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<tb> Un <SEP> chlorure <SEP> substitué
<tb>
<tb> stearyle-imidazolinium <SEP> (Quaternary <SEP> S) <SEP> 93
<tb>
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chlorure d JI a1coy1benzy1- triméthy1-ammoniu]!!.
96
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<tb> chlorure <SEP> de <SEP> p-di-isobutyl
<tb>
<tb> phenoxy <SEP> ethoxy <SEP> éthyl <SEP> diméthyl
<tb>
<tb> benzyl <SEP> ammonium <SEP> 96
<tb>
<tb> chlorure <SEP> de <SEP> cetyl <SEP> diméthyl
<tb>
<tb> benzyl <SEP> ammonium <SEP> 98
<tb>
<tb>
<tb> décylamine <SEP> 93
<tb>
<tb>
<tb> nonylamine <SEP> 78
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> octylamine <SEP> 90
<tb>
<tb>
<tb> une <SEP> imidazoline <SEP> à <SEP> poids <SEP> moléculaire
<tb>
<tb> élevé <SEP> (Amine-C) <SEP> 96
<tb>
<tb> une <SEP> imidazoline <SEP> à <SEP> poids
<tb>
<tb> moléculaire <SEP> élevé <SEP> (Amine-0) <SEP> 88
<tb>
Comme il va de soi et comme il résulte d'ailleurs déjà de ce qui procède, 1?invention ne se limite aucunement à celui de ses modes d'ap-
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plication non pluq qu-là ceux des modes de réalisation de ses diverses par- ties,
ayant plus-spécialement été indiqués; elle en embrassée au contraire toutes les varianteso