BRPI0818079B1 - composição de lipídeo - Google Patents

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Ben Dror Gai
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Abstract

composição de lipídeo a presente invenção proporciona o uso de uma composição de lipídeo para a preparação de uma composição nutricional, farmacêutica ou nutracêutica ou um alimento funcional, para a prevenção e o tratamento de distúrbios e doenças gastrointestinais, e para promover desenvolvimento, maturação, adaptação e diferenciação intestinais.

Description

Esta invenção refere-se ao campo de distúrbios e doenças gastrointestinais e ao desenvolvimento e à maturação intestinais.
FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO
Nutrição neonatal adequada é essencial para o crescimento apropriado e para a evitação de complicações associadas com deficiências nutricionais. Exigências nutricionais neonatais variam com os estados metabólicos, o grau de prematuridade e as doenças afetando os sistemas gastrointestinal, pulmonar, e cardíaco.
Bebês podem sofrer de vários distúrbios digestivos severos que podem variar desde desconfortos suaves a doenças graves ameaçadoras da vida.
A incidência crescente de nascimentos prematuros, combinada com sobrevivência melhorada como um resultado de tecnologias elevadamente desenvolventes, tem resultado em uma necessidade aumentada do desenvolvimento de modalidades de tratamento inovadoras e custoefetivas para bebês prematuros durante o período neonatal e na vida mais tardia. Bebês prematuros não alcançam a maturidade intestinal normalmente acretiva durante o terceiro trimestre de gravidez, e nascem frequentemente com trato gastrointestinal imaturo, e distúrbios e doenças gastrointestinais.
US2003/0072865 descreve uma fórmula para bebê compreendendo um componente lipídico no qual resíduos de ácido palmítico compõem mais do que 10% dos resíduos de ácido graxo total presentes nos triglicerídeos resultando em constipação reduzida, desconforto abdominal diminuído, e problemas gastrointestinais minorados.
Fases pós-natais levando à maturação das células epiteliais intestinais ocorrem na vida inicial de um animal: morfogênese e citodiferenciação preparam o epitélio para digestão e absorção de colostro e
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 23/115 / 52 componentes do leite; espessamento da mucosa ocorre devido ao crescimento de vilosidades e criptas.
Função e estrutura epiteliais do trato gastrointestinal em neonatos mudam abruptamente antes do desmame para adaptação a uma mudança em alimentação de leite para alimento sólido. Embora maturação intestinal no neonato tenha sido o tema de estudos intensivos, os fatores acionadores das maiores mudanças bioquímicas e morfológicas durante a maturação ainda são insatisfatoriamente entendidos. Bebês recém-nascidos têm um revestimento celular muito imaturo nos intestinos. As junções entre enterócitos não são impermeáveis, e a borda em escova e as camadas de muco não estão completamente desenvolvidas. Devido à barreira mucosal menos impermeável, o bebê está sob um risco maior de contrair infecções e de desenvolver alergias. Assim, são desejadas maturação e diferenciação intestinais da barreira do intestino para proteger contra agressão ambiental.
Durante a vida, as células epiteliais intestinais têm que desempenhar diferentes papéis, incluindo funções digestivas e absortivas clássicas, manutenção de uma barreira contra bactérias e antígenos nóxios, e secreção de água e eletrólitos para manter uma viscosidade apropriada do conteúdo luminal e expulsar os componentes nocivos.
Desenvolvimento, maturação, adaptação e diferenciação intestinais são elevadamente importantes no curso da vida de um indivíduo. SUMÁRIO DA INVENÇÃO
A presente invenção proporciona o uso de uma composição de lipídeo compreendendo pelo menos um triglicerídeo da seguinte fórmula I:
OR2
OH,---g ---OR3 (I)
H2 H2 na qual R1, R2 e R3 podem se idênticos ou diferentes e são cada um independentemente selecionados de H ou um grupo acila, sendo que o
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 24/115 / 52 dito grupo acila é selecionado de um grupo consistindo de resíduos de ácidos graxos saturados, monoinsaturados e poli-insaturados, e sendo que o teor total de resíduo de ácido palmítico é de cerca de 15% a cerca de 55% dos resíduos de ácidos graxos totais na composição, para a preparação de uma composição nutricional, farmacêutica ou nutracêutica ou de um alimento funcional, para a prevenção e o tratamento de doenças e distúrbios gastrointestinais, e para promover desenvolvimento, maturação, adaptação e diferenciação intestinais.
A presente invenção adicionalmente contempla um método para tratar um indivíduo tendo, ou tendo um risco aumentado de, distúrbio ou doença gastrointestinal, e de promover desenvolvimento, maturação, adaptação e diferenciação intestinais compreendendo administrar ao indivíduo uma composição de lipídeo compreendendo pelo menos um triglicerídeo da seguinte fórmula I:
OR2
OH,---g ---OR3 (I) na qual R1, R2 e R3 podem se idênticos ou diferentes e são cada um independentemente selecionados de H ou um grupo acila, sendo que o dito grupo acila é selecionado de um grupo consistindo de resíduos de ácidos graxos saturados, monoinsaturados e poli-insaturados e sendo que o teor total de resíduo de ácido palmítico é de cerca de 15% a cerca de 55% dos resíduos de ácidos graxos totais na composição.
DESENHOS DA INVENÇÃO
Com o propósito de entender a invenção e de ver como ela pode ser realizada na prática, as modalidades agora serão descritas, por meio de apenas exemplo não limitante, com referência aos desenhos acompanhantes, nos quais:
Figura 1 demonstra o efeito de tratamento dietético sobre o peso mucosal de ratos após 2 semanas de alimentação. Valores são média
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 25/115 / 52 ±SEM. Dieta A (contendo óleos enriquecidos com um teor alto de ácido palmítico na posição sn-2), Dieta B (contendo uma mistura de óleo vegetal padrão com um teor alto de ácido palmítico) e Dieta C (contendo óleos com um teor baixo de ácido palmítico) foram comparadas.
§p<0,05 Dieta A ou Dieta B vs Dieta C tp<0,05 Dieta A vs Dieta B
Figura 2 demonstra o efeito de tratamento dietético sobre aparência intestinal microscópica de ratos após 2 semanas de alimentação. Valores são média ±SEM. Dieta A (contendo óleos enriquecidos com um teor alto de ácido palmítico na posição sn-2), Dieta B (contendo uma mistura de óleo vegetal padrão com um teor alto de ácido palmítico) e Dieta C (contendo óleos com um teor baixo de ácido palmítico) foram comparadas.
§p<0,05 Dieta A ou Dieta B vs Dieta C fp<0,05 Dieta A vs Dieta B
Figura 3 demonstra o efeito de tratamento dietético sobre proliferação de enterócito em ratos após 2 semanas de alimentação. Incorporação de 5-BrdU em células de cripta ileal e jejunal proliferantes foi detectada com um anticorpo de cabra anti-BrdU. O número de células marcadas em 10 criptas longitudinais, bem orientadas por seção de cada rato foi determinado usando microscopia de luz. Valores são média ±SEM. Dieta A (contendo óleos enriquecidos com um teor alto de ácido palmítico na posição sn-2), Dieta B (contendo uma mistura de óleo vegetal padrão com um teor alto de ácido palmítico) e Dieta C (contendo óleos com um teor baixo de ácido palmítico) foram comparadas.
§p<0,05 Dieta A ou Dieta B vs Dieta C fp<0,05 Dieta A vs Dieta B
Figura 4: Confluência e diferenciação da monocamada de células Caco-2 após incubação com mistura de Gordura 7 (óleo enriquecido com um teor alto de ácido palmítico na posição sn-2) em comparação com
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 26/115 / 52
LPO (óleo com um teor baixo de ácido palmítico) foram avaliadas por medições de Resistência-Elétrica-Trans-Epitelial (TEER).
(A) Medições de valores de TEER de células incubadas por 7 e 9 dias com 10μM de óleos diferentes ou óleo de controle.
(B) O delta em valores de TEER entre dia 7 e dia 9 representa o aumento adicional em confluência e diferenciação das células Caco-2. DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
A presente invenção proporciona o uso de uma composição de lipídeo compreendendo pelo menos um triglicerídeo da seguinte fórmula I:
OR2
OH,---g ---OR3 (I) na qual R1, R2 e R3 podem se idênticos ou diferentes e são cada um independentemente selecionados de H ou um grupo acila, sendo que o dito grupo acila é selecionado de um grupo consistindo de resíduos de ácidos graxos saturados, monoinsaturados e poli-insaturados, e sendo que o teor total de resíduo de ácido palmítico é de cerca de 15% a cerca de 55% dos resíduos de ácidos graxos totais na composição, para a preparação de uma composição nutricional, farmacêutica ou nutracêutica ou de um alimento funcional, para a prevenção e o tratamento de doenças e distúrbios gastrointestinais, e para promover desenvolvimento, maturação, adaptação e diferenciação intestinais.
A composição de lipídeo usada na invenção tipicamente compreende uma mistura de ditos triglicerídeos de fórmula I. Uma tal mistura compreende dois ou mais triglicerídeos de fórmula I.
A presente invenção adicionalmente contempla um método para tratar um indivíduo tendo, ou tendo um risco aumentado de, distúrbio ou doença gastrointestinal, e de promover desenvolvimento, maturação, adaptação e diferenciação intestinais compreendendo administrar ao indivíduo uma composição de lipídeo compreendendo pelo menos um triglicerídeo da
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 27/115 / 52 seguinte fórmula I:
OR2
OH,---g ---OR3 (I) na qual R1, R2 e R3 podem se idênticos ou diferentes e são cada um independentemente selecionados de H ou um grupo acila, sendo que o dito grupo acila é selecionado de um grupo consistindo de resíduos de ácidos graxos saturados, monoinsaturados e poli-insaturados e sendo que o teor total de resíduo de ácido palmítico é de cerca de 15% a cerca de 55% dos resíduos de ácidos graxos totais na composição.
A presente invenção adicionalmente contempla um método de prevenir um distúrbio ou uma doença gastrointestinal em um indivíduo compreendendo administrar ao indivíduo uma composição de lipídeo compreendendo pelo menos um triglicerídeo da seguinte fórmula I:
OR2 ^CH
OR,---^C---OR3 (I)
H2 H2 na qual R1, R2 e R3 podem se idênticos ou diferentes e são cada um independentemente selecionados de H ou um grupo acila, sendo que o dito grupo acila é selecionado de um grupo consistindo de resíduos de ácidos graxos saturados, monoinsaturados e poli-insaturados e sendo que o teor total de resíduo de ácido palmítico é de cerca de 15% a cerca de 55% dos resíduos de ácidos graxos totais na composição.
Composições da presente invenção são intencionadas para tratar ou prevenir doenças e distúrbios gastrointestinais em um indivíduo, e para promover desenvolvimento, maturação, adaptação e diferenciação intestinais.
O termo indivíduo como aqui usado deve ser entendido para
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 28/115 / 52 incluir qualquer mamífero, incluindo, mas não limitado a, humanos, animais domésticos (e.g. gato, cão), e animais de fazenda (e.g. vaca, cabra, ovelha). Dito indivíduo pode estar em qualquer estágio de desenvolvimento ou maturidade em seu ciclo de vida. O indivíduo pode ser, mas não é limitado a, um recém-nascido, um bebê prematuro e nascido no tempo certo, uma criança que começa a andar, uma criança, um adolescente, um adulto ou um indivíduo geriátrico.
Um bebê como aqui usado pode ser qualquer bebê, tal como, mas não limitado a, um bebê recém-nascido, um bebê prematuro e um bebê nascido no tempo certo, bebês prematuros pequenos, que são suscetíveis ao trato gastrointestinal imaturo, bebês com peso no nascimento muito baixo (VLBW) ou peso no nascimento extremamente baixo (ELBW), particularmente aqueles com risco aumentado de enterocolite necrosante e outros.
Uma composição como aqui usada pode ser, mas não é limitada a, uma composição nutricional (tal como uma fórmula para bebê), uma composição nutracêutica (tal como um suplemento dietético), um alimento funcional, um alimento medical, ou uma composição farmacêutica.
Em uma modalidade, uma composição de lipídeo para uso na invenção é preparada de uma fonte natural, sintética ou semi-sintética. Em uma outra modalidade específica, dita fonte natural é qualquer uma de fonte de planta, animal ou microorganismo. Em ainda uma outra modalidade, a produção de dita composição de lipídeo envolve uma catálise enzimática.
Uma composição nutricional como aqui usada pode ser qualquer composição nutricional incluindo, mas não limitada a, substituto de gordura de leite de humano, fórmula para bebê, produto lácteo, sorvete, biscoito, produto de soja, produto de padaria, massa de pastelaria e pão, molho, sopa, alimento preparado, alimento congelado, condimento, confeitos, óleos e gordura, margarina, pasta, recheio, cereal, produto instantâneo,
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 29/115 / 52 alimento para bebê, alimento para criança que começa a andar, barra, petisco, bala e produto de chocolate.
Um alimento funcional como aqui usado pode ser qualquer alimento funcional, incluindo, mas não limitado a, produto lácteo, sorvete, biscoito, produto de soja, produto de padaria, massa de pastelaria e pão, molho, sopa, alimento preparado, alimento congelado, condimento, confeitos, óleos e gordura, margarina, pasta, recheio, cereal, produto instantâneo, bebidas e bebida batida, alimento para bebê, alimento para criança que começa a andar, barra, petisco, bala e produto de chocolate.
Uma composição nutracêutica como aqui usada pode ser qualquer composição nutracêutica, que pode ser qualquer substância que pode ser considerada um alimento ou parte de um alimento e proporciona benefícios medicais ou saudáveis, incluindo a prevenção e o tratamento de doença. Tais composições nutracêuticas incluem, mas não são limitadas a, um suplemento de alimento, um suplemento dietético, alimentos geneticamente engenhados tais como por exemplo hortaliças, produtos herbáceos, e alimentos processados tais como cereais, sopas e bebidas e alimento funcional estimulante, alimento medical e alimento farmacêutico.
Em uma modalidade da invenção, as composições farmacêuticas ou nutracêuticas estão em uma forma de dispensação de dosagem.
Rotas de administração adequadas para as composições da presente invenção são administração oral, bucal e sublingual ou administração via um tubo de alimentação. Em uma modalidade específica, os compostos são administrados oralmente.
A dose exata e o regime de administração da composição necessariamente serão dependentes do efeito terapêutico a ser alcançado (e.g. tratamento de doença gastrointestinal) e pode variar com a fórmula particular, a rota de administração, a idade e a condição do indivíduo individual ao qual
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 30/115 / 52 a composição é para ser administrada.
A presente invenção assim também proporciona composições farmacêuticas para uso na invenção em mistura com auxiliares farmaceuticamente aceitáveis, e opcionalmente outros agentes terapêuticos. Os auxiliares precisam ser “aceitáveis” no sentido de serem compatíveis com os outros ingredientes da composição e não serem prejudiciais para o seu indivíduo recipiente.
Em uma modalidade, a composição farmacêutica adicionalmente compreende pelo menos um agente farmaceuticamente ativo.
As composições podem ser preparadas por qualquer método bem conhecido na arte da farmácia.
Tais métodos incluem a etapa de associar os ingredientes com qualquer agente auxiliar. O(s) agente(s) auxiliar(es), também chamado(s) de ingrediente(s) acessório(s), inclui(em) aqueles convencionais na arte, tais como veículos, cargas, aglutinantes, diluentes, desintegrantes, lubrificantes, colorantes, agentes aromatizantes, antioxidantes, e agentes umedecedores.
As composições farmacêuticas adequadas para administração oral podem ser apresentadas como unidades de dosagem discretas tais como pílulas, tabletes, drágeas ou cápsulas, ou como um pó ou grânulos, ou como uma solução ou suspensão.
As composições podem ser apresentadas em recipientes de dose unitária ou de doses múltiplas, por exemplo ampolas ou frascos selados, e podem ser armazenadas em uma condição seca por congelamento (liofilizada) exigindo apenas a adição de veículo líquido estéril, por exemplo água, antes do uso.
A invenção adicionalmente proporciona uma embalagem comercial para preparar uma composição para uso na invenção tal como uma fonte de gordura edível ou artigo de alimento de acordo com a invenção compreendendo (a) uma fonte de gordura que sob administração a um
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 31/115 / 52 indivíduo previne ou trata distúrbios do sistema digestivo, e/ou promove desenvolvimento, maturação, adaptação e diferenciação intestinais; (b) opcionalmente pelo menos um aditivo ativo ou não-ativo, nucleotídeo, aminoácido, mineral, vitamina, carboidrato ou proteína edível fisiologicamente aceitável; (c) opcionalmente pelo menos um diluente ou veículo edível fisiologicamente aceitável para transportar o(s) constituinte(s) definido(s) em (a) e (b); (d) meios e receptáculos para misturar os constituintes definidos em (a), (b) e/ou (c); e (e) instruções para uso tais como, mas não limitadas a, termos de armazenagem, instruções para preparação da fonte de gordura ou do artigo de alimento para administração, diluições, dosagens, frequência de administração exigidas e semelhantes.
Uma embalagem comercial de acordo com a invenção também pode conter uma fonte de gordura da invenção em uma forma pronta-parauso, juntamente com instruções para uso. Dosagens são costumeiramente determinadas de acordo com a idade, o peso, o sexo e a condição do indivíduo, de acordo com a boa prática médica conhecida pelo médico atendente e outro pessoal medical.
Distúrbio ou doença gastrointestinal como aqui usado(a) deve ser entendido(a) como incluindo refluxo gastroesofágico (GER), doença de refluxo gastroesofágico (GERD), enterocolite necrosante (NEC), hiperbilirrubinemia, doenças intestinais inflamatórias (tais como mas não limitadas a doença de Crohn e colite ulcerativa), síndrome do intestino curto, incisões ou seções intestinais, reanastomose intestinal, úlcera, intervenções cirúrgicas por exemplo para tratar adesões intestinais, e obstrução intestinal.
O termo intestino como aqui usado deve ser entendido para incluir um segmento do canal alimentar se estendendo do estômago até o ânus. Em humanos e outros mamíferos, o intestino consiste de dois segmentos, o intestino delgado (em humanos adicionalmente dividido em duodeno, jejuno, e íleo), e intestino grosso (em humanos adicionalmente
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 32/115 / 52 dividido em cécum e cólon). Outros mamíferos podem ter um intestino mais complexo.
Promover desenvolvimento intestinal como aqui usado deve ser entendido como incluindo promover um processo ou parte de um processo de intensificar, aumentar, crescer, suportar ou avançar a formação de um epitélio maduro especializado.
Promover maturação intestinal como aqui usado deve ser entendido para incluir promover um processo ou parte de um processo de intensificar, aumentar, crescer, suportar ou avançar os processos de diferenciação de enterócito e segmentos intestinais.
Ambos desenvolvimento (segmento) e maturação intestinais podem ser medidos por parâmetros mucosais intestinais tais como, mas não limitados à circunferência intestinal, peso intestinal e peso mucosal e por mudanças histológicas tais como mas não limitadas à altura da vilosidade e a profundidade da cripta.
Promover adaptação intestinal como aqui usado deve ser entendido para incluir qualquer mudança fisiológica pela qual a capacidade absortiva do intestino delgado é intensificada, aumentada, suportada ou avançada incluindo, mas não limitada a, alargamento ou alongamento da vilosidade encontrada no revestimento, aumento no diâmetro do intestino delgado e desaceleração em peristalsia ou movimento de alimento através do intestino delgado, mas não limitado a, alargamento ou alongamento da vilosidade encontrada no revestimento, aumento no diâmetro do intestino delgado e diminuição da velocidade em peristalsia ou movimento de alimento através do intestino delgado.
Promover diferenciação intestinal como aqui usado deve ser entendido para incluir um processo pelo qual uma célula pré-diferenciada torna-se um tipo de célula especializada. Por exemplo, no caso de diferenciação intestinal, células-tronco pluripotentes, localizadas próximas da
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 33/115 / 52 base da cripta, são subsequentemente diferenciadas em um dos quatro tipos de células primárias: enterócitos absortivos, células caliciformes, células de Paneth, e células enteroendócrinas.
GER (refluxo gastroesofágico) é um distúrbio no qual o conteúdo gástrico líquido é retro-esguichado. Em vez de esguichamento para dentro dos intestinos, ele é esguichado para cima para dentro do esôfago. Em bebês a causa maior de GER é a imaturidade do esfíncter esofágico inferior. Quando o refluxo danifica o esôfago ele é chamado de GERD.
GERD (doença de refluxo gastroesofágico) é um distúrbio com sintomas crônicos ou dano mucosal produzido pelo refluxo anormal no esôfago. Isto é comumente devido às mudanças transientes ou permanentes na barreira entre o esôfago e o estômago. GERD é mais evidente em bebês prematuros ou tratgastrointestinal não totalmente desenvolvido.
Hiperbilirrubinemia é comum e na maioria dos casos um problema benigno. A cor costumeiramente resulta do acúmulo na pele de pigmento bilirrubina solúvel em lipídeo, não polar, não conjugado. O efeito tóxico de níveis elevados de bilirrubina não conjugada em soro é aumentado por vários fatores, tais como ácidos graxos livres, que reduzem a retenção de bilirrubina na circulação.
NEC é uma doença gastrointestinal que na maioria das vezes afeta bebês prematuros; ela envolve infecção e inflamação que causam destruição do intestino ou parte do intestino. NEC é o distúrbio gastrointestinal mais comum e mais sério entre bebês prematuros hospitalizados.
Estudos têm mostrado que o risco de NEC é aumentado quando o bebê nasce mais cedo e que o risco de bebês alimentados pela mama é menor do que o de bebês que são alimentados por fórmula.
NEC tipicamente ocorre após ter início a alimentação com leite. Bebês prematuros têm intestinos imaturos, que são sensíveis às
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 34/115 / 52 mudanças em fluxo sanguíneo e propensos à infecção.
A causa exata de NEC é desconhecida, mas existem várias teorias. É considerado que os tecidos intestinais de bebês prematuros são enfraquecidos pelo fluxo de sangue ou de oxigênio muito baixo, e quando alimentações são iniciadas, o estresse adicionado de alimento se movimentando através do intestino permite que bactérias que são normalmente encontradas no intestino invadam e danifiquem a parede dos tecidos intestinais.
O bebê é incapaz de continuar a se alimentar e começa a mostrar-se doente se as bactérias continuarem a se espalhar através da parede dos intestinos e algumas vezes para dentro da corrente sanguínea. Devido ao fato de os sistemas corporais do bebê serem imaturos, mesmo com tratamento rápido para NEC pode haver complicações sérias.
Outros fatores parecem aumentar o risco de desenvolvimento de NEC. Alguns peritos acreditam que a composição da fórmula para bebê, a velocidade de dispensação da fórmula, ou a imaturidade das membranas mucosais nos intestinos podem causar NEC.
Doença intestinal inflamatória (IBD) é um grupo de condições inflamatórias do intestino grosso e do intestino delgado. Os tipos maiores de IBD são doença de Crohn e colite ulcerativa. Colite ulcerativa é uma doença inflamatória do intestino grosso. Em colite ulcerativa, o revestimento interno ou mucosa - do intestino torna-se inflamado (significando que o revestimento da parede intestinal se torna vermelho e incha) e desenvolve úlceras significando um ferimento doloroso, aberto. Doença intestinal inflamatória (IBD) pode causar sintomas tais como, mas não limitados a, fezes sanguinolentas, sangue oculto nas fezes, perda de peso corporal, diarréia sanguinolenta, atividade física reduzida, anemia severa, comprimento colônico encurtado, e lesão perianal. Doença de Crohn difere de colite ulcerativa nas áreas do intestino que ela envolve - ela mais comumente afeta
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 35/115 / 52 a última parte do intestino delgado (chamada de íleo) e partes do intestino grosso. Contudo, doença de Crohn não está limitada a estas áreas e pode atacar qualquer parte do trato digestivo. Doença de Crohn causa inflamação que se estende muito mais profundamente para dentro das camadas da parede intestinal do que a colite ulcerativa o faz. Doença de Crohn geralmente tende a envolver a parede intestinal inteira, enquanto que a colite ulcerativa afeta apenas o revestimento do intestino.
Síndrome do intestino curto (SBS) é um distúrbio de má absorção causado por remoção cirúrgica do intestino delgado, ou raramente decorrente da disfunção completa de um segmento grande do intestino. Os casos são adquiridos em sua maioria, embora algumas crianças nasçam com um intestino curto congênito. SBS costumeiramente não se desenvolve a não ser que uma pessoa tenha perdido mais do que dois terços de seu intestino delgado.
Intervenção cirúrgica como aqui usada deve ser entendida para incluir uma intervenção por e.g. diagnose e/ou tratamento de lesão, deformidade, ou doença. Tal intervenção pode envolver uma operação ou um procedimento no trato gastrointestinal, tal como, mas não limitada a, uma incisão ou seção intestinal e reanastomose intestinal. Uma tal incisão ou seção intestinal pode ser um corte ou um ferimento feito por corte do intestino com um instrumento afiado, tal como um usado durante cirurgia.
Reanastomose intestinal é uma conexão entre dois vasos do corpo. Anastomose cirúrgica envolve a junção deliberada de dois vasos ou partes ocas de um órgão; por exemplo, quanto parte do intestino tiver sido removida e as extremidades livres restantes são unidas e costuradas.
Adesões intestinais são bandas de tecido fibroso que podem conectar as alças dos intestinos umas nas outras, ou os intestinos em outros órgãos abdominais, ou os intestinos na parede abdominal. Estas bandas podem puxa seções dos intestinos para fora do lugar e podem bloquear a
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 36/115 / 52 passagem de alimento. Adesões são uma causa maior de obstrução intestinal. Adesões podem estar presentes no nascimento (congênitas) ou podem se formar após inflamação ou cirurgia abdominal.
Obstrução intestinal refere-se ao bloqueio mecânico ou nãomecânico parcial ou completo do intestino delgado ou grosso. Bebês abaixo de um ano de idade são mais propensos a terem obstrução intestinal causada por íleo meconial, vólvulo, e intussuscepção. Íleo meconial, que é a incapacidade de passar a primeira excreção fecal após o nascimento (mecônio), é um distúrbio de recém-nascidos. Também pode ocorrer em bebês de peso no nascimento muito baixo (VLBW). Em íleo meconial, o mecônio anormal precisa ser removido com um enema ou por intermédio de cirurgia. Vólvulo é a torção do intestino quer delgado quer grosso, que pode interromper o fornecimento de sangue para o intestino, acarretando a morte do tecido (gangrena). Em intussuscepção, o intestino telescopa-se para dentro de si mesmo como o fechamento de uma antena de rádio. É mais comum em crianças entre as idades de três e nove anos, embora também possa ocorrer em crianças mais velhas. Quase o dobro dos meninos sofrem mais de intussuscepção do que as meninas.
Uma fonte de gordura é usada na preparação de uma composição (tal como uma fórmula para bebê) para uso na presente invenção. Tal composição, por exemplo, uma fórmula para bebê, pode adicionalmente compreender outros componentes tais como, mas não limitados a, uma fonte de proteína, uma fonte de carboidrato, minerais, vitaminas, nucleotídeos, aminoácidos e opcionalmente pelo menos um de um veículo, diluente, aditivo ou excipiente, todos sendo edíveis.
Uma mistura de gordura como aqui usada para a preparação de uma composição para uso na invenção, tal como uma fórmula para bebê, pode ser, mas não é limitada a, qualquer fonte de gordura, tais como aquelas descritas em WO05/036987, que incluem concentrados de gordura (também
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 37/115 / 52 chamados de bases de gordura). A mistura de gordura usada na presente invenção pode ser qualquer ingrediente dietético compreendendo uma fonte de gordura edível. Em uma modalidade particular, misturas de gordura são aquelas que são baseadas em triglicerídeos sintéticos (que podem ser produzidos tanto química quanto enzimaticamente) que imitam a composição de triglicerídeo da gordura de leite de mama de humano. Em uma modalidade, tal base de gordura (e mistura de gordura) contém um nível alto de ácido palmítico na posição sn-2 dos triglicerídeos de fórmula I (e.g., pelo menos 30%), e um nível alto de ácidos graxos insaturados nas posições sn-1 e sn-3 dos triglicerídeos de fórmula I (e.g. pelo menos 50% de ácido graxo total nas posições sn-1 e sn-3). Um exemplo não-limitante é uma mistura chamada de InFat® (Enzymotec Ltd., Migdal HaEmeq, Israel).
OR2
CH sn-2 sn-1^~'sn-3
OR1----C C---OR3 (I)
H2 H2
Visto que misturas de gordura são preparadas por misturação da base de gordura com outros óleos, a composição de ácido graxo das misturas de gordura resulta da composição de ácido graxo de ambos a base de gordura e outros óleos misturados com a base de gordura.
Fórmula para bebê usada na presente invenção pode ser um substituto para a composição de gordura de leite de humano compreendendo uma mistura de gordura consistindo de pelo menos 25% de uma base de gordura com até 75% de pelo menos um óleo vegetal.
Exemplos não limitantes de óleo vegetal usados na preparação de misturas utilizadas na invenção são óleos de soja, palmeira, canola, coqueiro, semente de palma, girassol, milho e colza, bem como outros óleos e gorduras vegetais e suas misturas.
Como aqui usado, o termo lipídeo refere-se às gorduras e aos compostos semelhantes à gordura, que são essencialmente insolúveis em água
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 38/115 / 52 e que incluem, mas não são limitados a, triglicerídeos, esteróis, ácidos graxos, e assim por diante.
Como aqui usado, o termo grupo acila” refere-se a um radical orgânico denotado por -C(=O)R, no qual R é selecionado de resíduo alifático C4-C28 saturado, monoinsaturado e poli-insaturado do resíduo de ácido graxo.
Como aqui usado, o termo ácido graxo refere-se a um ácido carboxílico com uma cauda (cadeia) alifática não-ramificada longa, que está quer saturada quer insaturada tendo uma ligação insaturada (ácidos graxos monoinsaturados) ou duas ou mais ligações insaturadas (ácidos graxos poliinsaturados).
Exemplos não limitantes de ácidos graxos saturados que podem ser usados nesta invenção incluem: ácido butírico (ácido butanóico, C4:0), ácido capróico (ácido hexanóico, C6:0), ácido caprílico (ácido octanóico, C8:0), ácido cáprico (ácido decanóico, C10:0), ácido láurico (ácido dodecanóico, C12:0), ácido mirístico (ácido tetradecanóico, C14:0), ácido palmítico (ácido hexadecanóico, C16:0), ácido esteárico (ácido octadecanóico, C18:0), ácido araquídico (ácido eicosanóico, C20:0), ácido behênico (ácido docosanóico, C22:0).
Exemplos não limitantes de ácidos graxos insaturados que podem ser usados nesta invenção incluem: ácido miristoleico (ω-5, C14:1), ácido palmitoleico (ω-7, C16:1), ácido oleico (ω-9, C18:1), ácido linoleico (ω-6, C18:2), ácido alfa-linolênico (ω-3, C18:3), ácido araquidônico (ω-6, C20:4), ácido eicosapentaenóico (ω-3, C20:5), ácido erúcico (ω-9, C22:1) e ácido docosahexaenóico (ω-3, C22:6).
Em uma modalidade da invenção, R2 é um resíduo de ácido graxo saturado. Em uma outra modalidade, o resíduo de ácido graxo saturado é selecionado de resíduos de ácido graxo saturado C14-C18. Em ainda uma outra modalidade, o ácido graxo saturado é um resíduo de ácido palmítico.
Em uma modalidade, o teor total de resíduo de ácido palmítico
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 39/115 / 52 é de cerca de 15% a cerca de 40% de resíduos de ácido graxo totais na composição. Em outra modalidade, o teor total de resíduo de ácido palmítico é de cerca de 15% a cerca de 33% de resíduos de ácido graxo totais na composição.
Em outra modalidade da invenção, R1 e R3 são ambos H.
Em uma modalidade, pelo menos 13% dos ácidos graxos totais na posição sn-2 da estrutura principal de triglicerídeo são resíduos de ácido palmítico. Em outra modalidade, pelo menos 15% dos ácidos graxos totais na posição sn-2 da estrutura principal de triglicerídeo são resíduos de ácido palmítico. Em ainda outra modalidade, pelo menos 18% dos ácidos graxos totais na posição sn-2 da estrutura principal de triglicerídeo são resíduos de ácido palmítico. Em ainda outra modalidade, pelo menos 22% dos ácidos graxos totais na posição sn-2 da estrutura principal de triglicerídeo são resíduos de ácido palmítico.
Em uma modalidade, pelo menos 30% dos resíduos totais de ácido palmítico na composição estão ligados na posição sn-2 da estrutura principal de triglicerídeo. Em outra modalidade, pelo menos 33% dos resíduos totais de ácido palmítico estão ligados na posição sn-2 da estrutura principal de triglicerídeo. Em ainda outra modalidade, pelo menos 38% dos resíduos totais de ácido palmítico estão ligados na posição sn-2 da estrutura principal de triglicerídeo. Em ainda outra modalidade, pelo menos 40% dos resíduos totais de ácido palmítico estão ligados na posição sn-2 da estrutura principal de triglicerídeo.
Em uma outra modalidade da invenção, R1 e R3 são resíduos de ácidos graxos insaturados.
Em uma modalidade, pelo menos 50% dos resíduos totais de ácido graxo nas posições sn-1 e sn-3 da estrutura principal de triglicerídeo estão insaturados. Em uma outra modalidade, pelo menos 70% dos resíduos totais de ácido graxo nas posições sn-1 e sn-3 da estrutura principal de
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 40/115 / 52 triglicerídeo estão insaturados. Em uma modalidade, dito resíduo de ácido graxo insaturado é selecionado do grupo consistindo de ácido oleico, ácido linoleico, ácido linolênico e ácido gadoleico. Em uma modalidade específica, pelo menos 35% dos resíduos de ácidos graxos insaturados nas posições sn-1 e sn-3 são resíduos de ácido oleico. Em uma outra modalidade específica, pelo menos 40% dos resíduos de ácidos graxos insaturados nas posições sn-1 e sn-3 são resíduos de ácido oleico.
Em uma modalidade específica, pelo menos 4% de ditos resíduos de ácidos graxos insaturados nas posições sn-1 e sn-3 são resíduos de ácido linoleico. Em uma outra modalidade específica, pelo menos 6% de ditos resíduos de ácidos graxos insaturados nas posições sn-1 e sn-3 são resíduos de ácido linoleico.
Em uma primeira modalidade, dita composição de lipídeo consiste de:
0-10% de ácidos graxos C8:0 dos ácidos graxos totais;
0-10% de ácidos graxos C10:0 dos ácidos graxos totais; 0-22% de ácidos graxos C12:0 dos ácidos graxos totais; 0-15% de ácidos graxos C14:0 dos ácidos graxos totais; 15-55% de ácidos graxos C16:0 dos ácidos graxos totais; sendo que pelo menos 30% na posição sn-2;
1- 7% de ácidos graxos C18:0 dos ácidos graxos totais;
20-75% de ácidos graxos C18:1 dos ácidos graxos totais;
2- 40% de ácidos graxos C18:2 dos ácidos graxos totais; 0-8% de ácidos graxos C18:3 dos ácidos graxos totais;
outros ácidos graxos estão presentes em níveis menores do que 8% dos ácidos graxos totais.
Em uma segunda modalidade, dita composição de lipídeo consiste de:
5-15% de ácidos graxos C12:0 dos ácidos graxos totais;
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2-10% de ácidos graxos C14:0 dos ácidos graxos totais;
17-25% de ácidos graxos C16:0 dos ácidos graxos totais; sendo que pelo menos 40% na posição sn-2;
2-5% de ácidos graxos C18:0 dos ácidos graxos totais;
28-45% de ácidos graxos C18:1 dos ácidos graxos totais;
5-20% de ácidos graxos C18:2 dos ácidos graxos totais;
1- 3% de ácidos graxos C18:3 dos ácidos graxos totais;
outros ácidos graxos estão presentes em níveis menores do que 5% dos ácidos graxos totais.
Todas as combinações possíveis de dita primeira e dita segunda modalidades também estão contempladas. Por exemplo:
0-22% de ácidos graxos C12:0 dos ácidos graxos totais, (da primeira modalidade) podem ser combinados com:
2- 10% de ácidos graxos C14:0 dos ácidos graxos totais;
20-25% de ácidos graxos C16:0 dos ácidos graxos totais;
2-5% de ácidos graxos C18:0 dos ácidos graxos totais;
28-45% de ácidos graxos C18:1 dos ácidos graxos totais;
5-20% de ácidos graxos C18:2 dos ácidos graxos totais;
1-3% de ácidos graxos C18:3 dos ácidos graxos totais; outros ácidos graxos estão presentes em níveis menores do que 5% dos ácidos graxos totais.
É para ser entendido que os compostos aqui obtidos podem conter centros quirais. Tais centros quirais podem ser de configuração quer (R) quer (S), ou pode ser qualquer mistura das mesmas Assim, os compostos aqui obtidos podem ser enantiomericamente puros, ou ser misturas estereoisoméricas ou diastereoméricas tais como misturas racêmicas ou nãoracêmicas.
EXEMPLOS
Esta invenção é adiante descrita nos seguintes exemplos, que
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 42/115 / 52 não são em nenhuma maneira intencionados para limitarem o escopo das invenções como reivindicado.
Exemplo 1
Composições
Tabela 1 detalha os teores de várias bases de gordura enriquecidas com um teor alto de ácido palmítico na posição sn-2 (doravante bases de gordura). Tabela 2 detalha os teores de várias fontes de gordura (doravante misturas de gordura) compreendendo qualquer base de gordura 1, 7, 8, 9, 10 ou 11 para uso na presente invenção.
A base de gordura pode representar cerca de 30% até cerca de
83% das misturas de gordura adequadas para uso em uma fórmula para uso na invenção.
A preparação destas fontes de gordura é essencialmente descrita em WO05/036987.
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Tabela 1
base de gordura 1 base de gordura 2 base de gordura 3 base de gordura 4 base de gordura 5 base de gordura 6 base de gordura 7 base de gordura 8 base de gordura 9 base de gordura 10 base de gordura 11
C12:0
C14:0
C16:0 32 29,4 29,6 32,6 32,2 30,6 29 29 30 33 30
C16:0 em sn-2 de ácidos graxos totais em sn-2 67,2 59,7 61,3 66,1 66 62,9 53,9 55,6 59 52,9 55,8
Razão (%) de ácido palmítico sn-2 de ácido palmítico total 70,0 67,7 69,0 67,6 68,3 68,5 62 64 64 53,5 62
C18:0 4 4,4 4,4 4 4,1 3,8 2,6 2,6 3 3 3
C18:l 53,1 55,9 55,5 53,1 53,4 55 55,5 56 56,1 52 56,1
C18:2 8 7,8 8,2 8 7,9 8,3 9 9 8,5 10 8,5
Todos os números representam % (p/p),exceto a razão que é definida como %. C16:0 representa o teor total de ácido palmítico. C16:0 na posição sn-2 representa a % de ácido palmítico na posição sn-2 de ácidos palmíticos totais sn-2 posicionados. A razão significa a % de ácido palmítico sn-2 de ácido palmítico total {(% de ácido palmítico sn-2 de ácidos palmíticos totais sn-2 posicionados)/3)/(% de ácido palmítico total)}xl00.
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Tabela 2
Preparação A Preparação B Preparação C Preparação D Preparação E Preparação F Preparação G Preparação H Preparação I Preparação J
Mistura de gordura 1 Mistura de gordura 2 Mistura de gordura 3 Mistura de gordura 4 Mistura de gordura 5 Mistura de gordura 6 Mistura de gordura 7 Mistura de gordura 8 Mistura de gordura 9 Mistura de gordura 10
Ácido graxo
C12:0 11,1 7,2 7,8 6,5 4,4 8,1 8,7 13,4 10,1 10
C14:0 4,5 3,1 3,3 2,8 2,1 2,9 3,5 5,3 3,7 4,2
C16:0 22,8 25,4 26,9 25,1 27,7 21,6 21 15 22,1 17
C16:0 em sn-2 de ácidos graxos totais em sn-2 33,4 42,9 48.9 50,8 56,9 31,3 31,8 25 28,7 16
Razão (%) de ácido palmítico sn-2 de ácido palmítico total 48,7 56,3 60,7 67,4 68,5 48,3 50,5 55 43,3 31,5
C18:0 2,3 3,0 3,1 3,5 4,0 2,6 2,6 2,9 2,7 3,2
C18:l 38.4 40,8 41,6 47,9 46,6 42,7 44,4 39,7 43,9 41,7
C18:2 13,5 15,6 12,8 8,6 11,7 18 16,4 15,3 13,6 18,2
C18:3 1,7 0,6 1,4 1,8 1,5 2 1,4 2,1
% Base de gordura 1 em mistura de gordura 30 50 63 73 83
% Base de gordura 7 em mistura de gordura 60
% Base de gordura 8 em mistura de gordura 60
% Base de gordura 9 em mistura de gordura 36
% Base de gordura 10 em mistura de gordura 52
% Base de gordura 11 em mistura de 25
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gordura
Óleo Vegetal
Óleo de semente de palmeira 18
Oleo de coqueiro 23 15 16 13,5 9,3 17 28 21 21
Óleo de palmeira 21 15 9 14
Óleo de girassol 5 7,7 11 14
Óleo de milho 10 10 12 11
Óleo de açafroa 3 5
Óleo de colza 16 5 13,5 4 6 20 16 21
Óleo de feijãosoja 18 17
Total 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
C16:0 representa o teor total de ácido palmítico. C16:0 na posição sn-2 representa a % de ácido palmítico na posição sn-2 de ácidos palmíticos totais sn-2 posicionados. A razão significa a % de ácido palmítico sn-2 de ácido palmítico total (% de ácido palmítico sn-2 de ácidos palmíticos totais sn-2 posicionados)/3)/(% de ácido palmítico total)}xl00. Todos os números representam % (p/p), exceto a razão que é definida como %.
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Exemplo 2
Fórmula para bebê
Uma fórmula para bebê compreendendo uma base de gordura e óleos e gorduras adicionais (i.e. misturas de gordura) que imitam a composição de gordura de leite de mama de humano foi preparada como segue:
A fração de gordura foi produzida por misturação da base de gordura com outros óleos. O óleo foi misturado junto com outros componentes de fórmula para bebê (proteínas, carboidratos, minerais, vitaminas, e outros). A pasta fluida foi passada através de um homogeneizador de pressão para obter uma emulsão estável. O produto homogeneizado foi então seco em um secador por pulverização para obter o produto final. Outros aditivos podem ser adicionados no pó seco para obter a formulação final.
A fração de gordura produzida pela misturação da base de gordura com outros óleos e gorduras como descritos acima foi depois misturada com outros nutrientes tais como proteínas, minerais, vitaminas e carboidratos para dar um produto alimentício suprindo um bebê com os nutrientes principais também encontrados em leite de humano. Os nutrientes e as gorduras foram homogeneizados usando homogeneização de pressão e secos por pulverização para dar um pó homogêneo. O pó foi depois redisperso em água (aproximadamente 9 g de pó por 60 mL de água) para dar uma fórmula pronta-para-uso. O teor de gordura do alimento pronto foi de aproximadamente 3,5 g por 100 mL que corresponde ao teor de gordura do leite de mama de humano, que está dentro da faixa de 30-40g/L.
Tabela 3 mostra a composição de ácidos graxos da Mistura de gordura 11 compreendendo a base de gordura da invenção (30%) que é misturada/mesclada com outros óleos e gorduras usados para criar uma fonte de gordura usada em uma fórmula para bebê para utilização na invenção.
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Tabela 4 mostra detalhes dos ingredientes e das propriedades da fórmula para bebê compreendendo a fonte de gordura de Tabela 3. Visto que misturas de gordura são preparadas por misturação de base de gordura com outros óleos, a composição de ácidos graxos das misturas resulta da composição de ácidos 5 graxos de ambos a base de gordura e dos outros óleos misturados com a base de gordura.
Tabela 3
Ácido graxo % de ácidos graxos
C10:0 1,3
C12:0 10,3
C14:0 4,3
C16:0 23,5
C16:0 em sn-2 de ácidos graxos totais em sn-2 30,3
Razão (%) de ácido palmítico sn-2 de ácido palmítico total 43
C18:0 3,2
C18:l 39,2
C18:2 13,6
C18:3 1,7
C20:0 0,3
C20:l 0,3
C22:0 0,2
Todos os números representam % (p/p),exceto a razão que é definida como %. Cl6:0 representa o teor total de ácido palmítico. Cl6:0 na posição sn-2 representa a % de ácido palmítico na posição sn-2 de ácidos palmíticos totais sn-2 posicionados. A razão significa a % de ácido palmítico sn-2 de ácido palmítico total {(% de ácido palmítico sn-2 de ácidos palmíticos totais sn-2 posicionados)/3)/(% de ácido palmítico total)}xl00.
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Tabela 4
Fórmula Por 100 g de Pó Por 100 mL de forma pronta para alimentar
Energia (kcal) 508 68
Sódio (mg) 140 18,8
Proteína (g)(Lacatalbumina/Caseína 60/40) 11,4 1,5
Gordura (g) 26,5 3,5
Gordura saturada (g) 11,3 1,49
Ácido linoleico (mg) 5000 670
Ácido alfa-linolênico (mg) 530 71
Ácido araquidônico (mg) 115 15,3
Ácido Docosahexaenóico (mg) 108 14,4
Colesterol (mg) 2 0,3
Lactose (g) 56 7,5
Cálcio (mg) 430 57,3
Fósforo (mg) 250 33,5
Potássio (mg) 420 56,3
Cloreto (mg) 300 40,2
Ferro (mg) 5,25 0,7
Magnésio (mg) 50 6,7
Zinco (mg) 3,5 0,47
Cobre (gg) 300 40,2
Manganês (gg) 45 6
Iodo (gg) 45 6
Taurina (mg) 45 6
Vitamina A U.I. 1500 200
Vitamina D U.I 300 40,2
Vitamina E (mg) 10 1,3
Vitamina K (gg) 45 6
Vitamina C (mg) 60 8
Vitamina Bi (gg) 400 53
Vitamina B2 (gg) 800 127
Vitamina Bó (gg) 375 50
Vitamina B12 (gg) 1,15 0,2
Niacina (mg) 6 0,8
Ácido Pantotênico (mg) 3 0,4
Ácido Fólico (gg) 67 9
Biotina (gg) 14,3 1,9
Colina (mg) 37,5 5
Inositol (mg) 22,5 3
Umidade % 3
O nível de gordura e a composição exata podem ser controlados com o propósito de dar as fórmulas para bebê planejadas para imitarem os diferentes períodos de lactação.
Tabela 5 mostra a composição de ácidos graxos de Mistura de
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28/52 gordura 12 compreendendo a base de gordura da invenção misturada com outros óleos e gorduras usados para criar a fonte de gordura utilizada na fórmula para bebê para uso na invenção.
Tabela 5
Acido graxo % de ácidos graxos totais
C8:0 1,6
C10:0 1,5
C12:0 10,6
C14:0 3,9
C16:0 17,2
C16:0 em sn-2 de ácidos graxos totais em sn-2 26,3
Razão (%) de ácido palmítico sn-2 de ácido palmítico total 51
C18:0 2,4
C18:l 41,1
C18:2 18,2
C18:3 2,2
% Base de gordura (concentrada) em mistura de gordura 43
J Oleo Vegetal
Óleo de coqueiro randomizado 22
Óleo de girassol randomizado 15
Óleo de colza randomizado 20
Todos os números representam % (p/p), exceto a razão que é definida como %. Cl6:0 representa o teor total de ácido palmítico. Cl6:0 na posição sn-2 representa a % de ácido palmítico na posição sn-2 de ácidos palmíticos totais sn-2 posicionados. A razão significa a % de ácido palmítico sn-2 de ácido palmítico total {(% de ácido palmítico sn-2 de ácidos palmíticos 10 totais sn-2 posicionados)/3)/(% de ácido palmítico total)}xl00.
Exemplo 3
Efeito da mistura de gordura sobre a maturidade intestinal e a tolerância gastrointestinal (GI)
O efeito de bases de gordura e misturas de gordura da presente invenção sobre a maturidade intestinal e a tolerância GI é examinado por um estudo clínico em modelos animais, em (i) ratos prematuramente nascidos (Ito Y et al., Intestinal microcirculatory dysfunction during the development of experimental necrotizing enterocolitis, Pediatric Research 2007), e (ii) em modelo de rato neonato (Dvorak B, Epidermal growth factor reduces the
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O estudo inclui três grupos de animais que recebem fórmulas que diferem apenas em sua composição de gordura, principalmente o teor de ácido palmítico. Um grupo é administrado com substituto de leite de rato padrão (que imita o leite de rato), o segundo grupo é administrado com substituto de leite de rato que contém um teor de gordura de ácido palmítico de cerca de 8% de ácido graxo total, do qual cerca de 10% está na posição sn2 do triglicerídeo e o terceiro grupo é administrado com um substituto de leite de rato que contém mistura de gordura 1 (veja Tabela 2) que contém um teor total de gordura de ácido palmítico de cerca de 20% de ácido graxo, do qual ~50% está na posição sn-2 do triglicerídeo. A fórmula é administrada a todos os grupos por 3 meses e sua tolerância GI é examinada por saúde geral e tolerância GI conhecidas detalhadas em linha base e durante o estudo aproximadamente por 3 meses e sua tolerância GI é examinada por saúde geral e tolerância GI detalhadas em linha base e durante o estudo aproximadamente cada mês. Ademais, a maturidade intestinal dos indivíduos de estudo é examinada por ensaios histológicos no final do estudo. Os animais nos primeiro e terceiro grupos demonstram melhores tolerância GI e maturidade intestinal do que o segundo grupo conforme determinadas por análise estatística de questionários e pelos testes histológicos. Os animais no terceiro grupo demonstram tolerância GI e maturidade intestinal ainda melhores do que o primeiro grupo conforme determinadas por análise estatística de questionários e pelos testes histológicos.
Exemplo 4: Os efeitos de uma dieta baseada em mistura de gordura 6 sobre crescimento, desenvolvimento e maturação intestinais em ratos após desmame
A eficácia da mistura de gordura (veja Tabela 2) sobre a
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 51/115 / 52 intensificação do crescimento, desenvolvimento e maturação intestinais foi investigada em um estudo de modelo animal. Animais alimentados com uma dieta enriquecida com um teor alto de ácido palmítico na posição sn-2 (mistura de gordura 6) foram comparados com animais alimentados com dietas paralelas, que continham quer concentração similar de ácido palmítico quer concentração baixa de ácido palmítico.
Planejamento de estudo
Ratos machos Sprague-Dawley foram obtidos dos Harlan Laboratories (Rehovot, Israel) em 21 dias de idade, imediatamente após o desmame e em peso corporal de 40-50g.
Os ratos foram aleatoriamente designados para receberem umas das 3 dietas diferentes (veja Tabelas 6 e 7); as dietas fornecidas foram diferentes apenas em seu teor de gordura:
1. Dieta A: Dieta com óleo contendo 21% de ácido palmítico, dos quais 48% estão esterificados na posição sn-2 (contém mistura de gordura 6 (veja Tabela 2));
2. Dieta B: Dieta com óleo contendo 22% de ácido palmítico, dos quais 13% estão esterificados na posição sn-2;
3. Dieta C: Dieta com óleo contendo 8% de ácido palmítico, dos quais 11% estão esterificados na posição sn-2.
O estudo foi realizado em duas fases
1. Na primeira fase, tratamento dietético foi administrado durante uma semana. Ratos foram aleatoriamente designados para um dos três grupos, cada grupo continha 12 animais.
2. Na segunda fase, tratamento dietético foi administrado por duas semanas. Ratos foram aleatoriamente designados para um dos três grupos, cada grupo continha 8 animais.
Após 8o ou 15o dia de alimentação, os animais foram anestesiados, mortos e o intestino delgado foi removido e dividido em três
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31/52 segmentos: duodeno, jejuno próximo e íleo terminal. Os segmentos do intestino delgado foram usados para patologia macroscópica, morfologia e ensaios histológicos, que indicam maturidade intestinal dos animais de estudo.
Dietas
Todas as dietas foram idênticas com respeito ao teor de nutriente e diferiram apenas com respeito ao tipo de óleo (Tabelas 6 e 7). Tabela 6: Composição de ácidos graxos de óleos suplementados (% de ácidos graxos totais)
Acido graxo (% dos ácidos graxos totais) Mistura de gordura 6 Preparação de controle I Preparação de controle II
C8 0,6 0,6 1
C10 0,7 0,6 0,9
C12 8,1 8,2 13,2
C14 2,9 3,3 4,6
C16 21,6 22,6 8,2
C16:0 em sn-2 de ácidos graxos totais em sn-2 31,3 9,1 2,8
Razão (%) de ácido palmítico sn- 2 de ácido palmítico total 48,3 13,4 11,4
Ácido palmítico em sn-2 de ácido graxo total saturado em sn-2 66 37 11
C18 2,6 3,5 2,7
C18:l 42,7 41,9 47,3
C18:2 18 16,4 18,8
C18:3 1,8 1,7 1,9
outros 0,90 4,6 1,4
Todos os números representam % (p/p), exceto a razão que é definida como %. Cl6:0 representa o teor total de ácido palmítico. Cl6:0 na posição sn-2 representa a % de ácido palmítico na posição sn-2 de ácidos palmíticos totais sn-2 posicionados. A razão significa a % de ácido palmítico sn-2 de ácido palmítico total {(% de ácido palmítico sn-2 de ácidos palmíticos totais sn-2 posicionados)/3)/(% de ácido palmítico total)}xl00. Ácido palmítico em sn-2 de ácido graxo total em sn-2 representa a % de ácido palmítico na posição sn-2 de ácidos graxos saturados totais posicionados sn-2. Tabela 7: Composições de Dieta
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Dieta A Dieta B Dieta C
Proteína (% em peso) 19,1 19,1 19,1
Carboidrato (% em peso) 61,9 61,9 61,9
Gordura (% em peso) 6,2 6,2 6,2
Calorias (kcal/g) 3,8 3,8 3,8
Mistura de gordura 6 (g/kg) 60
Preparação de controle I (g/kg) 60
Preparação de controle II (g/kg) 60
Consumo de alimento
Durante o período de alimentação, peso corporal e alimento não-consumido foram pesados duas vezes por semana. Ingestão de alimento foi calculada e expressada como gramas por dia. Ingestão de gordura e energia foram calculadas correspondendo à quantidade de alimento ingerido. Análise morfológica e patologia macroscópica intestinal
O intestino delgado foi removido e dividido em três segmentos: duodeno, jejuno proximal e íleo terminal. Cada segmento foi pesado e o peso por cm de comprimento de intestino foi calculado. Os segmentos foram abertos; a circunferência intestinal em cada segmento foi medida em três sítios diferentes e circunferência intestinal média foi calculada. Mucosa foi raspada e pesada. Peso de intestino e mucosal foi expressado como mg/cm de comprimento intestinal / lOOg de peso corporal. Análise de mudanças histológicas
Seções histológicas foram preparadas dos restos jejunais e ileais.
O intestino para histologia foi dividido na borda antimesentérica e lavado com solução salina gelada. Pedaços de jejuno proximal imediatamente distai ao ligamento de Treitz e íleo terminal próximo à junção ileo-cecal foram fixados por 24 horas em formalina 5%, lavados com álcool absoluto, e embebidos em parafina. Seções transversais de 5 μηι foram preparadas em um modo padronizado e foram coradas com Hematoxilina e Eosina. A altura da vilosidade e a profundidade da cripta foram medidos usando o programa de computador de análise de imagens Image Pro Plus 4
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 54/115 / 52 (Media Cybernetics, Baltimore, Maryland, USA) e expressadas em pm. Proliferação de enterócito
Proliferação de célula de cripta foi avaliada usando um sistema de anticorpo monoclonal biotinilado anti-BrdU fornecido em uma forma de kit (Zymed Laboratories, Inc, San Francisco, CA). Reagente de marcação padrão 5-bromo-desoxi-uridina (5-BrdU) (Cat. No. 00-0103, Zymed Laboratories, Inc, San Francisco, CA) foi injetado intraperitonealmente em uma concentração de 1mL/ 100 g de peso corporal 2 horas antes da morte. Fatias de tecido (5 um) foram desparafinadas e reidratadas com xileno e álcool graduado. As fatias foram aquecidas por 10 minutos em tampão citrato, prétratado com solução desnaturado por 20 minutos, e incubadas com solução de bloqueio por 10 minutos. As seções foram coradas com um anticorpo monoclonal biotinilado anti-BrdU por 60 minutos e foram então tratadas com estreptavidina-peroxidase por 10 minutos. Desenvolvimento de cor positiva para BRDU foi obtida pela incubação das seções com mistura de DUB por 35 minutos. Um índice de proliferação foi determinado como a razão de células de cripta corando positivamente para BrdU por 10 criptas (Shamir et al.,2005, Digestive Diseases e Sciences, Vol. 50, No. 7 pp. 1239-1244 e Sukhotnik et al., 2008 Dig. Dis. Sci.; Vol 53(5):1231-9).
Resultados
Ingestão de energia, ingestão de alimento e gordura
Ingestão de alimento aumentou significativamente durante o período de duas semanas em todos os animais, sem uma diferença estatisticamente significativa entre os grupos experimentais.
Parâmetros mucosais intestinais
Efeitos de tratamento dietético sobre parâmetros mucosais intestinais foram diferentes em intestinos proximal e distal. Os parâmetros mucosais intestinais testados foram circunferência intestinal, peso intestinal e peso mucosal. Aqueles parâmetros indicam o desenvolvimento fisiológico do
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Em intestino proximal
Um intestino proximal (jejuno e duodeno), após uma semana de alimentação, os ratos do grupo de dieta A demonstraram peso mucosal e intestinal mais altos estatisticamente significativos comparados com o grupo de dieta C (Tabela 8). Deve ser enfatizado que a privação de ácido palmítico em dieta C resultou em sinais iniciais de hipoplasia mucosal, que se tornaram mais proeminentes após 2 semanas do tratamento dietético. Após duas semanas de alimentação, os ratos do grupo de dieta A demonstraram uma tendência para o aumento em peso intestinal em jejuno quando comparados com os animais de dieta B e dieta C. Peso mucosal de animais alimentados com dieta A foi significativamente mais alto comparado com os animais de dieta C (p=0,027) (Figura 1, Tabela 8).
Em íleo
Em íleo, após uma semana de alimentação não houve diferenças em pesos intestinal e mucosal entre Dieta A e Dieta B. Contudo os ratos que receberam Dieta A e Dieta B demonstraram peso mucosal maior comparados com os animais de Dieta C (Tabela 8). Após duas semanas de alimentação, dieta A exerceu um peso intestinal e mucosal maior do que dieta C. Além disso ratos de Dieta A mostraram peso mucosal ileal mais elevado comparados com o grupo de dieta B (p=0,048) (Tabela 8).
Tabela 8: Efeitos de tratamento dietético sobre parâmetros mucosais intestinais
Parâmetros Dieta A Dieta B Dieta C Valor de P
Alimentação de uma semana
circunferência intestinal (mm) Duodeno 8,0±0,2 8,0±0,3 8,2±0,1
Jejuno 7,3±0,3 7,1±0,2 7,3±0,3
Íleo 6,9±0,2 6,3±0,4 6,1±0,3 0,031 A vs C
Peso intestinal (mg/cm/100 g de peso corporal (BW)) Duodeno 69,7±3,7 63,2±3,5 61±3,4 0,051 A vs C
Jej.uno 54,4±3,6 49,1±3,8 45,7±2,4 0,034 A vs C
Íleo 30,7±2,2 32,1±2,4 28,7±2,8
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peso mucosal (mg/cm/100 g de peso corporal (BW)) Duodeno 34,7±2,5 29±1,7 26,7±2,1 0,044 A vs B 0,014 A vs C
Jejuno 26,9±3 24,2±3,2 20,5±1,8 0,045 A vs C
Íleo 13,1±0,6 13,4±1,6 10,2±1,3 0,029 A vs C 0,044 B vs C
Alimentação de duas semanas
circunferência intestinal (mm) Duodeno 8,0±0,2 8,6±0,1 8,3±0,2 0,028 A vs B
Jejuno 8,1±0,2 7,8±0,2 7,4±0,1 0,007 A vs C
Íleo 7,6±0,2 8,0±0,2 6,7±0,4 0,051 B vs C 0,054 A vs B
peso intestinal (mg/cm/100 g de peso corporal (BW)) Duodeno 53,5±1,9 47,8±2,3 48,9±2,4 0,038 A vs B
Jejuno 38,3±2,2 35,9±1,5 34,7±1,2
Íleo 29,0±1,9 26,7±1,9 24,5±1,3 0,037 A vs C
peso mucosal (mg/cm/ 100 g de peso corporal (BW)) Duodeno 24,3±1,9 18,6±1,9 20,2±2,5 0,026 A vs B
Jejuno 16,9±1,9 13,6±1,4 13,6±0,7 0,063 A vs C
Íleo 12,3±1,7 9,2±0,9 8,2±0,9 0,027 A vs C 0,048 A vs B
Figura 1 mostra que Dieta A teve um efeito melhorado total sobre o peso mucosal após duas semanas de tratamento dietético comparado com Dietas B e C. Peso mucosal e intestinal foi expressado como mg/cm de comprimento intestinal / 100 g de peso corporal (BW)
Mudanças microscópicas
Após uma semana, dieta de alimentação C resultou em encurtamento significativo de vilosidades ileais comparada com os outros grupos (Tabela 9). Aqueles efeitos foram intensificados após duas semanas de alimentação; dieta A resultou em mudanças microscópicas significativamente 10 maiores comparada com dieta B e dieta C (Figura 2, Tabela 9). Animais alimentados com dieta A demonstraram vilosidades mais altas em jejuno (P=0,028) e íleo (P=0,018) comparados como animais de dieta B bem como vilosidades mais altas em íleo comparados animais de dieta C (P=0,033). Animais de dieta A também demonstraram criptas mais profundas em jejuno 15 comparados com dietas B e C (P=0,015, 0,0016 respectivamente) e íleo comparados com dieta B e C (P=0,024, 0,04 respectivamente). Em adição, houve uma correlação clara entre as medições de parâmetros histológicos e microscópicos.
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Tabela 9 Efeitos de tratamento dietético sobre mudanças microscópicas
Mudanças microscópicas Dieta A Dieta B Dieta C Valor de P
Alimentação de uma semana
Altura da vilosidade (um)
Jejuno 475,6±27 514,6±26 447±27,4 0,048 B vs C
Íleo 336,9±36 281±11,4 250,1±10 0,015 A vs C 0,041 B vs C
Profundidade da cripta (um)
Jejuno 199,3±9,7 219,7±15 194,9±10
Íleo 158,6±12 173,2±11 154,3±11
Alimentação de duas semanas
Altura da vilosidade (um)
Jejuno 502±20 446±29 497±34,5 0,028 A vs B
Íleo 298±24 230±13 231,8±23 0,018 A vs B 0,033 A vs C
Profundidade da cripta (um)
Jejuno 252±10 197±7 206±9 0,0015 A vs B 0,0016 A vs C
Íleo 179±14 144±7 147±10 0,024 A vs B 0,04 A vs C
Figura 2 mostra que Dieta A teve um efeito melhorado total sobre aparência intestinal microscópica após duas semanas de tratamento dietético comparada com Dietas B e C.
Proliferação de enterócito
Em jejuno
Após uma semana de alimentação, animais com dieta A resultaram em um aumento significativo em proliferação celular quando comparados com os animais alimentados com dietas B e C, e os animais alimentados com dieta B aumentaram a proliferação celular quando comparados com os ratos alimentados com dieta C. Após duas semanas de alimentação os ratos alimentados apenas com dieta A mostraram um índice de proliferação significativamente maior em jejuno quando comparados com os ratos de dieta C (P=0,036) (Figura 3, Tabela 10).
Em íleo
Após uma semana de alimentação: grupo de dieta A exerceu uma estimulação forte de proliferação de enterócito quando comparado com o grupo de dieta C (Tabela 10).
Após duas semanas de alimentação, grupo de dieta A exerceu uma estimulação forte de proliferação de enterócito em íleo. Animais
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 58/115 / 52 alimentados com dieta A mostraram um índice de proliferação significativamente maior em íleo quando comparados com os animais de dieta B e dieta C (P=0,0004, 0,0001 respectivamente) (Figura 3, Tabela 10). Deve ser observado que a exposição à dieta C resultou nas taxas de proliferação de enterócito mais baixas em íleo quando comparado com os outros grupos (Tabela 10).
Tabela 10 Efeito de tratamento dietético sobre proliferação de enterócito
proliferação de enterócito (Células positivas para BrdU /10 criptas) Dieta A Dieta B Dieta C Valores de P
Uma semana de alimentação
Jejuno 176± 3,6 167±3,2 159±2,4 0,042 A vs B 0,0011 A vs C 0,041 B vs C
Íleo 151,1± 5,7 140,3±3,7 134,3±4,8 0,02 A vs C
Duas semanas de alimentação
Jejuno 171,4± 4,4 164,3±4,3 162±3,4 0,036 A vs C
Íleo 170,3± 4,5 148,5±2,7 132±3,8 0,0004 A vs B 0,0001 A vs C 0,0017 B vs C
Assim, tratamento com Dieta A resultou em maturação e desenvolvimento intestinais intensificados, detectados após a primeira semana de tratamento dietético e se tornaram mais significativos após duas semanas de tratamento. Um aumento marcante em altura de vilosidade é considerado um índice importante de área de superfície absortiva aumentada neste grupo de animais. Aumento em células de cripta juntamente com hipertrofia das células individuais, que foi morfometricamente demonstrado, é característico de tecidos sofrendo reparo e/ou proliferação celulares aumentados.
Privação de ácido palmítico em dieta C resultou em mudanças hipoplásticas em jejuno e especialmente em íleo. Estas mudanças pareceram após uma semana de tratamento dietético e aumentaram após 2 semanas de tratamento dietético, e acentuaram o efeito prejudicial de privação de ácido palmítico. Em adição, decréscimo em proliferação de enterócito mostrado em ratos alimentados com dieta baixa em ácido palmítico pode ser considerado um mecanismo maior, responsável pela diminuição da massa celular intestinal e por hipoplasia mucosal.
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O processo dinâmico de renovação de células intestinais é uma função das taxas de proliferação de células de cripta, migração ao longo do eixo de cripta-vilosidade, diferenciação de enterócito, e morte celular via apoptose. Um aumento significativo em proliferação celulares após administração de Dieta A foi acompanhado por uma tendência para aumento em apoptose celular, sugerindo renovação celular acelerada durante crescimento intestinal.
Em conclusão, uma quantidade alta de ácido palmítico dos quais uma quantidade elevada está conjugada na posição sn-2 é um fator importante em crescimento intestinal em ratos após desmame. Dieta A resultou em desenvolvimento, crescimento e maturação intestinais intensificados proeminentes comparada com dietas contendo uma mistura de óleo vegetal padrão com composições com um teor alto de ácido palmítico ou teor baixo de ácido palmítico. Os desenvolvimento, crescimento e maturação intestinais intensificados proeminentes apareceram após 1 semana e foram intensificados após 2 semanas de tratamento dietético. Dieta A adicionalmente exerceu efeitos estimulantes maiores sobre renovação e proliferação de enterócito comparada com outras dietas.
A redução de formação de sabão de cálcio é um efeito benéfico elevadamente reconhecido e conhecido de ambos os óleos enriquecidos com ácido palmítico esterificado na posição sn-2 e óleos com teor baixo de ácido palmítico (Koo et al., 2006, Journal of American college of Nutrition, Vol 25, No 2 pp 117-122). Este efeito é similar entre estes óleos e conhecidamente é atribuído à redução de desconfortos e sintomas relacionados à digestão de alimento.
Visto que Dieta A (nos exemplos acima) demonstrou efeitos superiores e significativamente diferentes sobre desenvolvimento e maturação intestinais em comparação com a Dieta C, é evidente que estes efeitos de desenvolvimento e maturação intestinais intensificados não estão relacionados
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 60/115 / 52 com, nem associados com o efeito de redução da formação de sabão de cálcio. Exemplo 5: O efeito de mistura de gordura sobre a proliferação e a diferenciação de células Caco-2
O efeito da mistura de gordura sobre a proliferação e a diferenciação em cultura de tecido foi examinado em células Caco-2. A linhagem de célula Caco-2 tem sido usada até hoje em muitos estudos qualitativos e quantitativos como um modelo celular epitelial intestinal in vitro. As células são crescidas sobre insertos permeáveis de junções impermeáveis e alcançam muitas das características morfológicas e funcionais de enterócitos de intestino delgado (Artursson P., Karlsson J., 1991, Biochem. Biophys. Res. Commun., Vol 175, 880—885). Este sistema de modelo celular demonstrou o efeito positivo de um suplemento de gordura da invenção sobre maturação intestinal, por meio de proliferação celular e permeabilidade paracelular.
Planejamento de estudo
Células Caco-2, originárias de um carcinoma colorretal de humano, foram obtidas da ATCC (American Type Culture Collection, ATCC® Number HTB-37).
Células foram propagadas em Meio de Crescimento Caco-2 sob condições estéreis. As células foram subcultivadas duas vezes antes do tratamento. As culturas celulares foram incubadas a 37±1oC, 5±0,5% de CO2 e 95±5% de umidade, em frascos de plástico (NUNC). Diferenciação e maturação celulares Caco-2 foram avaliadas por confluência de células e transporte paracelular.
Confluência e transporte paracelular
Confluência e transporte paracelular foram medidos em células Caco-2 semeadas sobre insertos de membrana de poliéster. Confluência e diferenciação da monocamada celular sobre insertos de membrana foram medidas 7 e 9 dias após a semeadura pela avaliação das medições de
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Resistência-Elétrica-Trans-Epitelial (TEER). Medições de TEER têm se tornado universalmente estabelecidas como o método não-destrutivo mais conveniente e confiável para avaliar e monitorar o crescimento de culturas de tecido epitelial in vitro. A confluência da monocamada celular, que é um 5 modelo para maturidade intestinal, é determinada por um aumento em TEER.
TEER foi medida usando um eletrodo Millicell-ERS (Millipore) durante incubação celular em meio de crescimento contendo 2μΜ dos itens testados:
(i) Suplemento de óleo contendo teor baixo de ácido (8% de ácidos graxos totais com cerca de 10% dos quais na posição sn-2) (LPO - veja Tabela 11).
(ii) Mistura de gordura 7 contendo teor alto de ácido palmítico (20% de ácidos graxos totais dos quais cerca de 50% na posição sn-2) (veja Tabela 2).
Tabela 11: Composição de ácidos graxos de um óleo suplementado e uma 15 mistura de gordura (% de ácidos graxos totais) antes da diluição para concentrações de ensaio finais
Acido graxo (como % de ácido graxo total) Óleo de conteúdo alto em ácido palmítico enriquecido em sn-2 (Mistura de gordura 7) Óleo com teor baixo de ácido palmítico
C8 0,6 1,1
C10 0,6 1,0
C12 8,7 14,05
C14 3,5 4,9
C16 21 8,3
C16:0 em sn-2 de ácidos graxos totais em sn-2 31,8 2,9
Razão (%) de ácido palmítico sn-2 de ácido palmítico total 50,5 11,9
C16:l 0,00 0,1
C18 2,6 2,6
C18:l 44,4 47,6
C18:2 16,4 18,1
C18:3 1,5 1,6
C20 0,2 0,3
C20:l 0,3 0,4
Todos os números representam % (p/p), exceto a razão que é definida como %. Cl6:0 representa o teor total de ácido palmítico. Cl6:0 na
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 62/115 / 52 posição sn-2 representa a % de ácido palmítico na posição sn-2 de ácidos palmíticos totais sn-2 posicionados. A razão significa a % de ácido palmítico sn-2 de ácido palmítico total {(% de ácido palmítico sn-2 de ácidos palmíticos totais sn-2 posicionados)/3)/(% de ácido palmítico total)}x100.
Resultados
Parâmetros de confluência
Sete dias após a semeadura, o valor de TEER de célula Caco-2 na presença de óleo LPO, foi 233±59 ohms/cm2. Após um adicional de dois dias i.e. 9 dias após semeadura o valor de TEER de célula Caco-2 aumentou em 119,4 (Fig 4B) e alcançou 352,5±37 ohms/cm2 (Fig 4A). Na presença de mistura de gordura 7, sete dias após a semeadura o valor de TEER de células Caco-2 foi 330±11 ohms/cm2 e após adicional de dois dias 389±26 ohms/cm2 (Fig 4A), i.e. aumentou em 59,2 (Fig. 4B) ohms/cm2. Medição de TEER das células de controle mostrou 325±12 ohms/cm2 e 432±11, 7 e 9 dias após a semeadura correspondentemente (Fig4A); um aumento total de 107,2 ohms/cm2 i.e. maior do que na presença de mistura de gordura 7 (Fig 4B). À medida que a taxa de crescimento de camada satura aproximada de monocamada completa, as mudanças no óleo LPO, sendo as mais altas, indicaram-as como sendo as menos diferenciadas dos três óleos.
Conclusão: o modelo in vitro mostrou que a incubação de mistura de gordura 7 não interfere com a proliferação e a diferenciação de células Caco-2, contrária à incubação com um óleo com um teor baixo de ácido palmítico. Os resultados indicam que a mistura de gordura 7 promove desenvolvimento intestinal e maturidade intestinal mais rápida, enquanto que um óleo com um teor baixo de ácido palmítico interfere com desenvolvimento intestinal.
Exemplo 6: O efeito do teor de ácido palmítico em uma dieta sobre a recuperação e o tratamento de síndrome de intestino curto em um modelo animal.
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O efeito de dietas com teor diferente de ácido palmítico sobre prevenção e tratamento de síndrome de intestino curto bem como melhoria de maturação e adaptação intestinais é investigado em um estudo de modelo animal.
Planejamento de estudo
Animais após quer uma transeção intestinal com reanastomose quer uma reseção parcial do intestino delgado são aleatoriamente designados para um dos grupos de dietas que diferem apenas em seu teor de ácido palmítico. Após um período de alimentação, os animais são mortos e os parâmetros histológicos de intestino e a proliferação e apoptose de enterócitos são estudados.
O estudo é realizado em duas fases:
1. Na primeira fase, tratamento dietético é administrado antes e após a indução de síndrome de intestino curto e é monitorado o efeito das dietas diferentes sobre recuperação da síndrome.
2. Na segunda fase, tratamento dietético é administrado após a indução de síndrome de intestino curto e é monitorado o efeito das dietas diferentes para melhorar as recuperação e adaptação intestinais da síndrome. Dietas
Todas as dietas são indicadas com respeito ao teor de nutrientes e diferem apenas em teor de ácido palmítico:
1. Dieta I: Dieta com óleo com pelo menos 15% de ácido palmítico, dos quais pelo menos 33% estão esterificados na posição sn-2.
2. Dieta II: Dieta com óleo com pelo menos 15% de ácido palmítico dos quais aproximadamente 10% estão esterificados na posição sn-2
3. Dieta III: Dieta com óleo com aproximadamente 8% de ácido palmítico dos quais aproximadamente 10% estão esterificados na posição sn-2
Operação
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Animais são anestesiados e operados; o abdômen é aberto por incisão de linha do meio. Em animais que sofrem de uma reseção parcial de intestino delgado, é realizada uma reseção de 75%, preservando a arcada vascular e deixando 5 cm de jejuno proximal e 10 cm de íleo distal. Continuidade intestinal é restaurada por uma anastomose de camada única de extremidade-para-extremidade. Em animais que sofrem de transeção intestinal com reanastomose, o intestino é dividido e reanastomosado sem reseção. Após laparotomia, todos os animais têm acesso à água nas primeiras 24 horas após operação (Sukhotnik et al., 2004, Pediatr. Surg. Int. Vol 20 (4): 235239).
Consumo de alimento
Durante o período de alimentação, antes e após a operação, o peso corporal e o alimento não consumido são pesados. Ingestão de alimentos é calculada e expressada como gramas por dia. Ingestão de gordura e energia são calculados correspondendo à quantidade de alimento ingerido.
O estudo demonstra que exposição inicial de um animal à Dieta I resulta em melhoria da recuperação da síndrome de intestino curto. Ademais, exposição de animais após indução de síndrome de intestino curto à Dieta I resulta em aumento em pesos totais mucosal e de parede intestinal e em taxas de recuperação melhores da síndrome de intestino curto como mostrado pela melhoria em adaptação mucosal após indução/reseção intestinal. Animais recebendo Dieta I têm respostas de hiperplasia mucosal maiores no intestino restante e efeitos estimulantes mais elevados sobre recrescimento intestinal em comparação com os animais recebendo outras dietas.
Exemplo 7: O efeito do teor de ácido palmítico em uma dieta sobre a prevenção e o tratamento de enterocolite necrosante (NEC) em um modelo animal.
O efeito de dietas com teor diferente de ácido palmítico sobre
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 65/115 / 52 a prevenção e o tratamento de enterocolite necrosante (NEC) é investigado em um estudo de modelo animal prematuro alimentado com fórmula hipoxia - hipotermia.
Planejamento do estudo
Animais são aleatoriamente designados para um dos grupos de dietas que diferem apenas em seu teor de ácido palmítico.
O estudo é realizado em duas fases:
1. Na primeira fase, após um período de alimentação os animais sofrendo de indução de NEC pelo método de hipoxia-hipotermia é monitorado o efeito de dietas diferentes sobre a incidência e a severidade de NEC e a taxa de sobrevivência.
2. Na segunda fase, tratamento dietético é administrado após indução de NEC e é monitorado o efeito das dietas diferentes para melhorar a recuperação intestinal.
Procedimento de indução de NEC
NEC experimental é desenvolvida pelo seguinte procedimento: filhotes recém-nascidos, a partir de 2 h de idade e então a cada 12 h, são desafiados com hipoxia pela respiração de gás nitrogênio 100% em uma câmara de plástico transparente, fechada, por 60 segundos, seguida por hipotermia, exposição ao frio a 4°C por 10 min.
Dietas
Todas as dietas são idênticas com respeito ao teor de nutrientes e diferem apenas em teor de ácido palmítico.
1. Dieta I: Dieta com óleo com pelo menos 15% de ácido palmítico, dos quais pelo menos 33% estão esterificados na posição sn-2.
2. Dieta II: Dieta com óleo com pelo menos 15% de ácido palmítico dos quais aproximadamente 10% estão esterificados na posição sn-2
3. Dieta III: Dieta com óleo com aproximadamente 8% de ácido palmítico dos quais aproximadamente 10% estão esterificados na
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Análises
Para estudar a incidência e a severidade de NEC, a primeira alimentação com as dietas testadas inicia a 24 h de idade. Os filhotes são aleatoriamente designados para um dos grupos de dietas que diferem apenas em seu teor de ácido palmítico. Os animais são alimentados desde o nascimento por gavagem orogástrica. Todos os filhotes são observados horariamente para sinais clínicos de NEC tais como distensão abdominal, angústia respiratória, e letargia. 96 horas após o nascimento, ou em sinais de doença, os filhotes são eutanasiados via decapitação (Travadi et al., 2006, Pediatr. Res. Vol 60(2): 185-9). Após a eutanásia, o tecido intestinal do animal é processado e examinado para escore histológico e macroscópico de dano (NEC).
Para estudar os efeitos de dietas sobre a recuperação intestinal, os animais são alimentados com as dietas diferentes após indução de NEC. Proliferação e migração (restituição) de célula epitelial Intestinal, que são os elementos chave em recuperação da lesão intestinal, são estudadas.
Para investigar o efeito de dietas diferentes sobre migração e proliferação de enterócito, bromo-desoxi-uridina é administrada intraperitonealmente 18 horas antes da morte, com intestino submetido à imuno-histoquímica com bromo-desoxi-uridina (Feng J, Besner GE., 2007, J. Pediatr. Surg. Vol;42(1):214-20).
O estudo demonstra que exposição precoce de um animal à Dieta I resulta em redução de incidência e de severidade de NEC. Ademais, exposição de animais desenvolvendo sinais clínicos de doença NEC à Dieta I, resulta em prevenção de perda de mucosa ou dano de integridade intestinal total. Animais recebendo Dieta I demonstram mudanças patológicas menos profundas de NEC comparados com animais recebendo outras dietas.
A capacidade de ácido palmítico alto na posição sn-2 para
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 67/115 / 52 proteger os intestinos contra NEC é devido, em parte, à sua capacidade para preservar a proliferação e a migração de enterócito.
Exemplo 8: O efeito de teor de ácido palmítico em uma dieta sobre a prevenção e o tratamento de doenças intestinais inflamatórias em um modelo animal.
O efeito de dietas com teor diferente de ácido palmítico sobre a prevenção e o tratamento de doenças intestinais inflamatórias, tais como doença de Crohn (CD) e colite ulcerativa (UC), é investigado em um estudo de modelo animal.
Planejamento de estudo
Animais desenvolvendo doenças intestinais inflamatórias pela administração de dextrano-sulfato de sódio (DSS) em sua água de beber são aleatoriamente designados para um dos grupos de dietas que diferem apenas em seu teor de ácido palmítico.
O estudo é realizado em duas fases:
1. Na primeira fase, após o período de tratamento dietético, DSS é adicionado na água de beber do animal e é monitorado o efeito de dietas diferentes sobre prevenção ou redução de incidência ou severidade de doenças intestinais inflamatórias.
2. Na segunda fase, tratamento dietético é administrado após administração de DSS em água de beber do animal e é estudado o efeito das dietas diferentes para melhorar a recuperação das doenças intestinais inflamatórias.
Dietas
Todas as dietas são idênticas com respeito ao teor de nutrientes e diferem apenas em teor de ácido palmítico.
1. Dieta I: Dieta com óleo com pelo menos 15% de ácido palmítico, dos quais pelo menos 33% estão esterificados na posição sn-2.
2. Dieta II: Dieta com óleo com pelo menos 15% de ácido
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 68/115 / 52 palmítico dos quais aproximadamente 10% estão esterificados na posição sn-2
3. Dieta III: Dieta com óleo com aproximadamente 8% de ácido palmítico dos quais aproximadamente 10% estão esterificados na posição sn-2
Indução de doenças intestinais inflamatórias
Administração de DSS na água de beber de roedores é amplamente usada como um modelo experimental de UC porque resulta em colite aguda e crônica e compartilha características clínicas e histopatológicas com as de UC de humano. DSS é um polímero sulfatado que induz lesão mucosal em placas em uma maneira dependente de dose. Também induz inflamação, inicialmente por meio de um efeito tóxico direto sobre células epiteliais, acarretando deste modo o desenvolvimento de colite severa (Vicario et al., 2007, J. Nutr.;Vol 137(8): 1931-7).
Consumo de alimento
Durante o período de alimentação, peso corporal e alimento não consumido são pesados. Ingestão de alimento é calculada e expressada como gramas por dia. Ingestão de gordura e energia são calculadas correspondendo à quantidade de alimento ingerido.
Análises
Para o estudo de prevenção, os animais são aleatoriamente designados para dietas diferentes. Após um período de alimentação cada grupo é aleatoriamente dividido em dois grupos experimentais, um recebe DSS em sua água de beber e o outro recebe apenas água de torneira e a incidência e a severidade de doença intestinal inflamatória são monitoradas, pela medição da produção de alguns dos mediadores envolvidos na resposta inflamatória intestinal, tais como leucotrieno B(4) (LTB(4)), fator alfa de necrose tumoral (TNFalpha) e óxido nítrico (NO) (Camuesco D, 2005, J. Nutr. Vol;135(4):687-94).
Para o estudo de tratamento, os sobreviventes da doença
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 69/115 / 52 intestinal inflamatória são aleatoriamente designados para grupos de dietas e alimentados com as dietas diferentes. Após um período de tratamento, os animais são monitorados para as averiguações clínicas (perda de peso corporal, diarréia sanguinolenta, atividade física reduzida, anemia severa, comprimento colônico encurtado, e lesão perianal) (Kishimoto S, 2000, Dig. Dis. Sci. Vol;45(8):1608-16).
Animais são mortos e adaptação intestinal é avaliada por averiguações histopatológicas (escore de lesão patológica) e análise de altura de vilosidade (VH) mucosal, profundidade de cripta (CD), altura mucosal total, incorporação de bromo-desoxi-uridina (BrdU), um índice de proliferação celular, e teor de proteína e de DNA de espessura total como medidas de crescimento adaptativo intestinal (Evans ME, 2005, JPEN J. Parenteral. Nutr. Vol;29(5):315-20).
O estudo demonstra que exposição precoce de animal à Dieta I resulta em redução da ocorrência de doenças intestinais inflamatórias. Ademais, alimentação de animais após indução de doenças intestinais inflamatórias com Dieta I resulta primeiro, em eventos decrescentes ocorrendo na mucosa colônica (degradação da barreira mucosal epitelial e infiltração mais alta de neutrófilos) e mais, em decréscimo de indução de colite severa com diarréia e lesões mucosais colônicas. Alteração positiva total da função mucosal e da inflamação é indicada após alimentação dos animais com Dieta I.
Exemplo 9: O efeito de teor de ácido palmítico sobre ingestão de energia associada com a síndrome de intestino curto em um modelo animal.
O efeito de dietas com teor diferente de ácido palmítico sobre absorção de energia, ingestão calórica e má absorção de gordura associadas com a síndrome de intestino curto é investigado em um estudo de modelo animal.
Planejamento de estudo
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Animais pós-indução de síndrome de intestino curto por reseção parcial de intestino delgado são aleatoriamente designados para um dos grupos de dietas que diferem apenas em seu teor de ácido palmítico. Após alimentação, é monitorado o efeito das dietas diferentes sobre a má absorção de gordura e a absorção intestinal. É comumente assumido que quando os sintomas gastrointestinal são melhorados, a quantidade de energia disponível da dieta é melhorada.
Operação
Animais são anestesiados e operados; o abdômen é aberto por incisão na linha do meio. Em animais que sofrem de uma reseção parcial de intestino delgado, é realizada uma reseção de 75%, preservando a arcada vascular e deixando 5 cm de jejuno proximal e 10 cm de íleo distal. Continuidade intestinal é restaurada por uma anastomose de camada única de extremidade-para-extremidade. Em animais sofrendo de transecção intestinal com reanastomose, o intestino é dividido e submetido à reanastomose sem reseção. Após laparotomia, todos os animais têm acesso à água nas primeiras 24 h após a operação (Sukhotnik et al., 2004, Pediatr. Surg. Int. Vol 20 (4): 235-239).
Consumo de alimento
Durante o período de alimentação, antes e após a operação, o peso corporal e o alimento não consumido são pesados. Ingestão de alimento é calculada e expressada em gramas por dia.
Análises
Perdas de energia nas fezes e as fontes de energia dentro das fezes são determinadas.
Após tratamento dietético, amostras de fezes são colhidas, como o são os registros de alimento. As fezes são analisadas para energia total, nitrogênio total, teor de gordura, e concentração de ácido graxo. A excreção calórica total é testada. O teor de energia por grama de amostras de
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 71/115 / 52 fezes é medido por calorimetria de bomba balística (Miller PS, Payne PR. 1959, “A ballistic bomb calorimeter”. Br. J. Nutr.;Vol 13:501-8) em uma amostra de fezes seca por congelamento. (Murphy et al., 1991, Archives of Disease in Childhood; Vol 66: 495-500).
Dietas
Todas as dietas são idênticas com respeito ao teor de nutrientes e diferem apenas em teor de ácido palmítico.
1. Dieta I: Dieta com óleo com pelo menos 15% de ácido palmítico, dos quais pelo menos 33% estão esterificados na posição sn-2.
2. Dieta II: Dieta com óleo com pelo menos 15% de ácido palmítico dos quais aproximadamente 10% estão esterificados na posição sn-2
3. Dieta III: Dieta com óleo com aproximadamente 8% de ácido palmítico dos quais aproximadamente 10% estão esterificados na posição sn-2
O estudo demonstra que a Dieta I resulta em melhoria da ingestão de energia e má absorção de gordura contínua e decréscimo de extração de energia das fezes em síndrome de intestino curto.
Ademais, exposição de animais após indução de síndrome de intestino curto à dieta I resulta em melhores taxas de recuperação da síndrome de intestino curto.
Exemplo 10: O efeito de teor de ácido palmítico em uma dieta sobre a prevenção de alterações em permeabilidade intestinal associadas com doenças intestinais inflamatórias em um modelo animal
O efeito de dietas com teor diferente de ácido palmítico sobre a prevenção de alterações em permeabilidade intestinal associadas com doenças intestinais inflamatórias, tais como doença de Crohn (CD) e colite ulcerativa (UC), é investigado em um estudo de modelo animal.
Planejamento de estudo
Animais desenvolvendo doenças intestinais inflamatórias pela
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 72/115 / 52 administração de dextrano-sulfato de sódio (DSS) em sua água de beber são aleatoriamente designados para um dos grupos de dietas que diferem apenas em seu teor de ácido palmítico. Tratamento dietético é administrado após administração de DSS e o efeito de dietas diferentes sobre a permeabilidade intestinal é estudado usando vazamento de lipopolissacarídeo (LPS) bacteriano do intestino pelo exame dos níveis sanguíneos de LPS após aplicação de carregamento intestinal.
Dietas
Todas as dietas são idênticas com respeito ao teor de nutrientes e diferem apenas em teor de ácido palmítico.
1. Dieta I: Dieta com óleo com pelo menos 15% de ácido palmítico, dos quais pelo menos 33% estão esterificados na posição sn-2.
2. Dieta II: Dieta com óleo com pelo menos 15% de ácido palmítico dos quais aproximadamente 10% estão esterificados na posição sn-2
3. Dieta III: Dieta com óleo com aproximadamente 8% de ácido palmítico dos quais aproximadamente 10% estão esterificados na posição sn-2
Indução de doenças intestinais inflamatórias
Administração de DSS na água de beber de roedores é amplamente usada como um modelo experimental de UC porque resulta em colite aguda e crônica e compartilha características clínicas e histopatológicas com as de UC de humano. DSS é um polímero sulfatado que induz lesão mucosal em placas em uma maneira dependente de dose. Também induz inflamação, inicialmente por meio de um efeito tóxico direto sobre células epiteliais, acarretando deste modo o desenvolvimento de colite severa (Vicario et al., 2007, J. Nutr.;Vol 137(8): 1931-7).
Consumo de alimento
Durante o período de alimentação, peso corporal e alimento não consumido são pesados. Ingestão de alimento é calculada e expressada
Petição 870180166961, de 21/12/2018, pág. 73/115 / 52 como gramas por dia. Ingestão de gordura e energia são calculadas correspondendo à quantidade de alimento ingerido.
Análises
Os sobreviventes da doença intestinal inflamatória são aleatoriamente designados para grupos de dietas e alimentados com as dietas diferentes. Após um período de tratamento, os animais são monitorados para as averiguações clínicas (perda de peso corporal, diarréia sanguinolenta, atividade física reduzida, anemia severa, comprimento colônico encurtado, e lesão perianal) (Kishimoto S, 2000, Dig. Dis. Sci. Vol;45(8):1608-16) e ensaio de permeabilidade intestinal é realizado.
Ensaio de permeabilidade intestinal
Para avaliar o efeito das dietas diferentes sobre a permeabilidade intestinal, vazamento de lipopolissacarídeo bacteriano (LPS; Escherichia coli sorotipo 0111:B4; Sigma-Aldrich) do intestino pelo exame de níveis sanguíneos de LPS após carregamento intestinal ser aplicado. Trinta minutos após carregamento com LPS, os animais são mortos, e sangue é colhido para análise pelo ensaio de endotoxina usando o kit de lisado de amebócito de Límulo (LAL) (BioWhittaker, Walkersville, MD) (Lambert et al., 2003, J. Pharmacol Exp. Ther. Vol 305(3):880-6).
Alimentação dos animais com Dieta I após indução de doenças intestinais inflamatórias resulta em prevenção de permeabilidade intestinal aumentada. Alimentação com Dieta I é causadora de um decréscimo nos níveis de endotoxina plasmática comparada com as Dieta II e Dieta III. Os resultados mostram que o intestino de animais alimentados com Dieta I é capaz de restaurar decréscimos em função de barreira durante recuperação da doença intestinal inflamatória.

Claims (17)

1. Composição de lipídeo, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um triglicerídeo sintético da seguinte fórmula I:
OR2
OH,---g ---OR3 (I) na qual R1, R2 e R3 podem se idênticos ou diferentes e são cada um um grupo acila, sendo que o dito grupo acila é selecionado de um grupo consistindo de resíduos de ácidos graxos saturados, monoinsaturados e poliinsaturados, e sendo que o teor total de resíduo de ácido palmítico é de 15% a 55% dos resíduos de ácidos graxos totais na composição, para uso em uma composição nutricional, farmacêutica ou nutracêutica ou de um alimento funcional, dita composição nutricional, farmacêutica ou nutracêutica ou de um alimento funcional sendo para a prevenção e o tratamento de síndrome do intestino curto, doenças intestinais inflamatórias e enterocolite necrosante e para promover desenvolvimento, maturação, adaptação e diferenciação intestinais.
2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que R2 é um resíduo de ácido graxo saturado.
3. Composição de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que o resíduo de ácido graxo saturado é selecionado de resíduos de ácidos graxos saturados C14-C18.
4. Composição de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que o ácido graxo saturado é um resíduo de ácido palmítico.
5. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o teor total de resíduo de ácido palmítico é de 15% a 40% de resíduos de ácido graxo totais na composição.
6. Composição de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o teor total de resíduo de ácido palmítico é de 15% a 33% de
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2 / 5 resíduos de ácido graxo totais na composição.
7. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que R1 e R3 são ambos H.
8. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que pelo menos 13% dos ácidos graxos totais na posição sn-2 da estrutura principal de triglicerídeo são resíduos de ácido palmítico.
9. Composição de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que pelo menos 15% dos ácidos graxos totais na posição sn-2 da estrutura principal de triglicerídeo são resíduos de ácido palmítico.
10. Composição de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que pelo menos 18% dos ácidos graxos totais na posição sn-2 da estrutura principal de triglicerídeo são resíduos de ácido palmítico.
11. Composição de acordo com a reivindicação 10, caracterizada pelo fato de que pelo menos 22% dos ácidos graxos totais na posição sn-2 da estrutura principal de triglicerídeo são resíduos de ácido palmítico.
12. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que pelo menos 30% dos resíduos totais de ácido palmítico estão ligados na posição sn-2 da estrutura principal de triglicerídeo.
13. Composição de acordo com a reivindicação 12, caracterizada pelo fato de que pelo menos 33% dos resíduos totais de ácido palmítico na composição estão ligados na posição sn-2 da estrutura principal de triglicerídeo.
14. Composição de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fato de que pelo menos 38% dos resíduos totais de ácido palmítico estão ligados na posição sn-2 da estrutura principal de triglicerídeo.
15. Composição de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que pelo menos 40% dos resíduos totais de ácido
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3 / 5 palmítico estão ligados na posição sn-2 da estrutura principal de triglicerídeo.
16. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que R1 e R3 são resíduos de ácidos graxos insaturados. 17. Composição de acordo com a reivindicação 16,
caracterizada pelo fato de que pelo menos 50% dos resíduos totais de ácidos graxos nas posições sn-1 e sn-3 da estrutura principal de triglicerídeo estão insaturados.
18. Composição de acordo com a reivindicação 17, caracterizada pelo fato de que pelo menos 70% dos resíduos totais de ácidos graxos nas posições sn-1 e sn-3 da estrutura principal de triglicerídeo estão insaturados.
19. Composição de acordo com a reivindicação
16, caracterizada pelo fato de que dito resíduo de ácido graxo insaturado é selecionado do grupo consistindo de ácido oleico, ácido linoleico, ácido linolênico e ácido gadoleico.
20. Composição de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo fato de que pelo menos 35% dos resíduos de ácidos graxos insaturados nas posições sn-1 e sn-3 são resíduos de ácido oleico.
21. Composição de acordo com a reivindicação 20, caracterizada pelo fato de que pelo menos 40% dos resíduos de ácidos graxos insaturados nas posições sn-1 e sn-3 são resíduos de ácido oleico.
22. Composição de acordo com a reivindicação 21, caracterizada pelo fato de que pelo menos 4% de ditos resíduos de ácidos graxos insaturados nas posições sn-1 e sn-3 são resíduos de ácido linoleico.
23. Composição de acordo com a reivindicação 22, caracterizada pelo fato de que pelo menos 6% de ditos resíduos de ácidos graxos insaturados nas posições sn-1 e sn-3 são resíduos de ácido linoleico.
24. Composição de acordo com a reivindicação 1,
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4 / 5 caracterizada pelo fato de que o lipídeo consiste de:
0-10% de ácidos graxos C8:0 dos ácidos graxos totais;
0-10% de ácidos graxos C10:0 dos ácidos graxos totais;
0-22% de ácidos graxos C12:0 dos ácidos graxos totais;
0-15% de ácidos graxos C14:0 dos ácidos graxos totais;
15-55% de ácidos graxos C16:0 dos ácidos graxos totais; sendo que pelo menos 30% na posição sn-2;
1- 7% de ácidos graxos C18:0 dos ácidos graxos totais;
20-75% de ácidos graxos C18:1 dos ácidos graxos totais;
2- 40% de ácidos graxos C18:2 dos ácidos graxos totais;
0-8% de ácidos graxos C18:3 dos ácidos graxos totais;
outros ácidos graxos estão presentes em níveis menores do que 8% dos ácidos graxos totais.
25. Composição de acordo com a reivindicação 24, caracterizada pelo fato de que o lipídeo consiste de:
5-15% de ácidos graxos C12:0 dos ácidos graxos totais;
2-10% de ácidos graxos C14:0 dos ácidos graxos totais;
17-25% de ácidos graxos C16:0 dos ácidos graxos totais; sendo que pelo menos 40% na posição sn-2;
2-5% de ácidos graxos C18:0 dos ácidos graxos totais;
28-45% de ácidos graxos C18:1 dos ácidos graxos totais;
5-20% de ácidos graxos C18:2 dos ácidos graxos totais;
1-3% de ácidos graxos C18:3 dos ácidos graxos totais;
outros ácidos graxos estão presentes em níveis menores do que 5% dos ácidos graxos totais.
26. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizada pelo fato de que dito lipídeo é de uma fonte natural, sintética ou semi-sintética.
27. Composição de acordo com a reivindicação 26,
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5 / 5 caracterizada pelo fato de que dita fonte natural é qualquer uma de fonte de planta, animal ou microorganismo.
28. Composição de acordo com a reivindicação 26, caracterizada pelo fato de que a sua produção incluiu uma catálise enzimática.
29. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que dita composição nutricional é selecionada de substituto de gordura de leite de humano, fórmula para bebê, produto lácteo, sorvete, biscoito, produto de soja, produto de padaria, massa de pastelaria e pão, molho, sopa, alimento preparado, alimento congelado, condimento, confeitos, óleos e gordura, margarina, pasta, recheio, cereal, produto instantâneo, alimento para bebê, alimento para criança que começa a andar, barra, petisco, bala e produto de chocolate.
30. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que dita composição farmacêutica ou nutracêutica está em uma forma de dispensação de dosagem.
31. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que dito alimento funcional é selecionado de produto lácteo, sorvete, biscoito, produto de soja, produto de padaria, massa de pastelaria e pão, molho, sopa, alimento preparado, alimento congelado, condimento, confeitos, óleos e gordura, margarina, pasta, recheio, cereal, produto instantâneo, bebidas e bebida batida, alimento para bebê, alimento para criança que começa a andar, barra, petisco, bala e produto de chocolate.
32. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que as doenças intestinais inflamatórias são doença de Crohn ou colite ulcerativa.
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