BRPI0708873A2 - composiÇÕes e mÉtodos para tratar infecÇÕes parasÍticas - Google Patents

Abstract

COMPOSIÇÕES E MÉTODOS PARA TRATAR INFECÇÕES PARASÍTICAS. São providas composições para tratar infecções parasíticas e métodos de utilização das composições para tratar indivíduos com infecções parasiticas. São providos adicionalmente métodos para selecionar composições para uso no tratamento de infecções parasíticas.

Description

COMPOSIÇÕES E MÉTODOS PARA TRATAR INFECÇÕES PARASÍTICAS

Pedidos relacionados

Esse pedido reivindica prioridade para os PedidosProvisórios dos Estados Unidos 60/805.963 depositado em 27de junho de 2006; 60/822.067 depositado em 10 de agosto de2006; 60/865.109 depositado em 9 de novembro de 2006; e60/891.813 depositado em 27 de fevereiro de 2007.

Campo técnico

A matéria presentemente revelada se refere aosmétodos para tratar infecções parasiticas e composiçõesúteis para tratar infecções parasiticas.

Introdução e considerações gerais

Infecções parasiticas de plantas, humanos, eoutros animais constituem um problema mundial. Por exemplo,mais de 650 milhões de pessoas correm o risco de infecçãoparasitica gastrointestinal, e aproximadamente 200 milhõesestão atualmente infectados. Várias condições contribuempara o desenvolvimento e difusão das infecções parasiticas,incluindo: condições sanitárias insatisfatórias; baixaresistência do hospedeiro; expansão da população; controleinadequado de vetores e reservatórios de infecção; maiormigração de vetores; e maior migração de hospedeiros, porexemplo, viagem pelo mundo todo devido à operação militar eturismo.

Tais infecções parasiticas apresentam umaabundância de problemas medicinais e sociais. Por exemplo,a infecção em um hospedeiro pode prejudicar odesenvolvimento das crianças, realização educacional, saúdereprodutiva, e desenvolvimento social e econômico. Narealidade, algumas infecções parasiticas podem causarmorbidez e mortalidade. Apesar do grave impacto que asinfecções parasiticas podem ter, relativamente poucasopções de tratamento estão disponíveis.Tratamentos disponíveis para infecçõesparasíticas são limitados, e tratamentos para algumasinfecções parasíticas são inexistentes. Na década de 60, aniclosamida (também conhecida como yomesan) foiidentificada para uso no tratamento de certas infecçõesparasíticas helmínticas; contudo, a niclosamida tem certasdesvantagens. Por exemplo, em muitos casos uma única dosede niclosamida não proporciona um efeito curativo, maispropriamente, resulta em uma reincidência devido ao fato docomposto ter dificuldade em acessar os cisticercóidesenterrados profundamente dentro das cavidades mucosas. Comotal, resultados satisfatórios requerem um tratamentoprolongado com niclosamida por aproximadamente 7 dias.Vide, por exemplo, Davis, Drug treatment of intestinalhelminthiasis, · World Health Organization (WHO), Geneva,1973.

Outra droga que tem sido usada para tratarinfecções parasíticas helmínticas é Praziquantel(2-(ciclohexilcarbonil) ^1,-2,3,6,7, llb-hexahidro-4H-pirazino (2,1-a) isoquinolina-4-ona; tsimbém conhecida comoBiltracide). Vide Pearson and Gurrant, Praziquantel: umgrande avanço na terapia antelmíntica. Annals of InternaiMedicine, 99:195-198, 1983. Praziquantel pode seradministrado em uma única dose; contudo, as estratégias detratamento fazendo . uso de Praziquantel são arriscadasdevido à possibilidade dp desenvolvimento de resistência aoPraziquantel.

Conseqüentemente, permanece a necessidade natécnica de composições não-prejudiciais que sejam eficazespara tratar infecções parasíticas.

Sumário

A matéria presentemente revelada satisfaz algumasou todas as necessidades identificadas acima, como seráevidente para aqueles versados na técnica após um estudo dainformação provida nesse documento.

Esse sumário descreve várias modalidades damatéria presentemente revelada, e em muitos casos relacionavariações e permutações dessas modalidades. Esse Sumário éapenas um exemplar das numerosas, e variadas modalidades. Arevelação de uma ou mais características representativas deuma determinada modalidade é similarmente exemplar. Talmodalidade pode existir tipicamente com ou sem a(s)característica(s) mencionada(s) ; similarmente, essascaracterísticas podem ser empregadas em outras modalidadesda matéria presentemente revelada, quer relacionadas nesseSumário ou não. Para evitar repetição excessiva, essesumário não relaciona ou sugere todas as combinaçõespossíveis de tais características.

A matéria presentemente revelada incluicomposições e métodos para tratar infecções parasíticas, emétodos para realizar.a triagem das composições e métodospara selecionar as composições úteis para tratar umainfecção parasítica.

Em algumas modalidades, a composição para trataruma infecção parasítica em um indivíduo inclui dois ou maiscompostos selecionados a partir de: trans-anetol, para-cimeno, linalol, alfa-pineno e timol.

Em algumas modalidades, a composição inclui doisou mais compostos selecionados a partir de para-cimeno,linalol, alfa-pineno, e timol. Em algumas modalidades, acomposição inclui três ou mais compostos a partir de: para-cimeno, linalol, alfa-pineno, e timol. Em algumasmodalidades, a composição inclui para-cimeno, linalol,alfa-pineno, e timol. Em algumas modalidades, a composiçãoinclui ainda óleo de soja.Em algumas modalidades, a composição inclui 25-35% em peso de para-cimeno, 1-10% em peso de linalol, 1-10%em peso de alfa-pineno, 35-45% em peso de timol, e 20-30%em peso de óleo de soja. Em algumas modalidades, acomposição inclui 28,39% em peso de para-cimeno, 6,6% empeso de linalol, 3,8% em peso de alfa-pineno, 37,2% em pesode timol, e 24% em peso de óleo de soja.

Em algumas modalidades, a composição inclui 25-35% em volume de para-cimeno, 1-10% em volume de linalol,1-10% em volume de alfa-pineno, 35-45% em volume de timol e20-30% em volume de óleo de soja. Em algumas modalidades, acomposição inclui 30% em volume de para-cimeno, 7% emvolume de linalol, 4% em volume de alfa-pineno, 35% emvolume de timol, e 24% ,em volume de óleo de soja.

Em algumas mo.dalidades, a composição inclui trêsou mais compostos selecionados a partir de: trans-anetol,para-cimeno, linalol, alfa-pineno, timol. Em algumasmodalidades, a composição inclui quatro ou mais compostosselecionados a partir de: trans-anetol, para-cimeno,linalol, alfa-pineno, e timol. Em algumas modalidades, ainvenção inclui trans-anetol, para-cimeno, linalol, alfa-pineno, e timol.

Em algumas modalidades, a composição inclui 15-25% em peso de trans-anetol, 30-40% em peso de para-cimeno,1-10% em peso de linalol, 1-10% em peso de alfa-pineno, e35,4 5% em peso de timol. Em algumas modalidades, acomposição inclui 18,2% em peso de trans-anetol, 34,4% empeso de para-cimeno, 4,7% em peso de linalol, 1,9% em pesode alfa-pineno, e 40,8% em peso de timol.

Em algumas modalidades, a composição inclui10,20% em volume de trans-anetol, 30-40% em volume de para-cimeno, 1-10% em volume de linalol, 1-10% em volume dealfa —pineno, e 35—4 5% em volume de timol. Em algumasmodalidades, a composição inclui 17% em volume de trans-anetol, 37% em volume de para-cimeno, 5% em volume delinalol, 2% em volume de alfa-pineno, e 39% em volume detimol.

Em algumas modalidades, a composição inclui 15-25% em peso de.trans-anetol, 1-10% em peso de para-cimeno,35-45% em peso de linalol, 1-10% em peso de alfa-pineno, e30-40% em peso de timol. Em algumas modalidades, acomposição inclui 18,2% em peso de trans-anetol, 1,9% empeso de para-cimeno, 40,8% em peso de linalol, 4,7% em pesode alfa-pineno, e 34,4% em peso de timol.

Em algumas modalidades, a composição inclui 15-25% em volume de trans-anetol, 1-10% em volume de para-cimeno, 35-45% em volume de linalol, 1-10% em volume dealfa-pineno, e 30-40% em volume de timol. Em algumasmodalidades, a composição inclui 17% em volume de trans-anetol, 2% em volume de para-cimeno, 39% em volume delinalol, 5% em. volume,, de alfa-pineno, e 37% em volume detimol.

Em algumas modalidades, os compostos dacomposição em conjunto demonstram um efeito sinergistico,antiparasitico,. Em algumas modalidades, o efeito percentualefetivo da composição é maior do que o efeito percentualesperado da composição., Em algumas modalidades existe umcoeficiente de sinergia em relação a um composto dacomposição superior a.5,.10, 25, 50, 75 ou 100.

Em algumas modalidades, a infecção parasiticaocorre por intermédio de um parasita protozoário. Emalgumas modalidades, o parasita é selecionado a partir deprotozoários intestinais, protozoários de tecido, eprotozoários de sangue. Em algumas modalidades, o parasitoé selecionado a partir de: Entamoeba hystolytica, Giardialamblia, Cryptosporidium muris, Trypanosomatida gambiense,Trypanosomatida rhodesiense, Trypanosomatida crusi,Leishmania mexicana, Leishmania braziliensis, Leishmaniatropica, Leishmania donovani, Toxoplasma gondii, Plasmodiumvivax, Plasmodium ovale, Plasmodium malariae, Plasmodiumfalciparum, Trichomonas vaginalis, e Histomonas meleagridis.

Em algumas modalidades, a infecção parasiticaocorre por intermédio de um parasita helmintico. Em algumasmodalidades, o parasita é selecionado a partir denematóides. Em algumas modalidades, o parasita é selecionadoa partir de Adenophorea. Em algumas modalidades, o parasitaé selecionado a partir de Secementea. Em algumasmodalidades, o parasita é selecionado a partir de Trichuristrichiura f Ascaris lumbricoides, Enterobius vermicularis,Ancylostoma duodenale, Necator americanus, Strongyloidesstereoralis, Wuehereriat banerofti, Draeuneulus medinensis.

Em certas modalidades, o.parasita é selecionado a partir detrematódeos. Em algumas modalidades, o parasita éselecionado a partir de fasciolas sangüíneas, fascíolas defígado, fascíolas intestinais, e fascíolas de pulmão. Emalgumas modalidades, o parasita é selecionado a partir deSehistosoma mansoni, Sçhistosoma haematobium, Sehistosomajaponieum, Faseiola, . , hepatiea, Faseiola gigantiea,Heterophyes heterophyes, Paragonimus westermani.

Em algumas modalidades, o parasita é selecionadoa partir de cestódeos. Em algumas modalidades, o parasita éselecionado a partir de Taenia solium, Taenia saginata,Hymenolepis nana, Echinoeoceus granulosus.

Em algumas modalidades, a composição é provida emuma fórmula. A fórmula pode incluir a composição e umcarreador, tal como um produto alimentício. Em algumasmodalidades a fórmula inclui a composição encapsulada oumicroencapsulada com um material de invólucro externo.A matéria presentemente revelada inclui um métodopara tratar uma infecção parasitica em um indivíduo. Emalgumas modalidades, o método inclui administrar aoindivíduo uma quantidade eficaz de uma composição conformeaqui descrito.

A matéria presentemente revelada inclui um métodopara selecionar uma composição para uso no tratamento çleuma infecção parasitica. Em algumas modalidades, o métodoinclui: prover uma célula expressando um receptor detiramina; contatar os compostos de teste para a célula;medir a afinidade de ligação do receptor dos compostos;medir ao menos um parâmetro selecionado a partir de, (i)nível cAMP intracelular, e (ii) nível Ca2+ intracelular;identificar um primeiro, composto para a composição que écapaz de alterar ao menos um dos parâmetros, e o qual temuma elevada afinidade de ligação de receptor para oreceptor de tiramina; identificar um segundo composto paraa composição que é capaz de alterar ao menos um dosparâmetros, e o qual tem uma baixa afinidade de ligação dereceptor para o receptor de tiramina e selecionar umacomposição incluindo o primeiro e o segundo composto. Emalgumas modalidades, a composição selecionada demonstra umefeito antiparasítico que excede o efeito antiparasítico dequalquer um dos compostos quando usados isoladamente.

Descrição resumida dos Desenhos

A Figura 1 é um gráfico de barras demonstrandotaxas de cura de animais infectados com H. nana e tratadoscom os compostos aqui revelados.

A Figura 2 é uma série de gráficos de linhasdemonstrando o extermínio eficaz de S. mansoni in vitromediante diferentes concentrações de compostos aquirevelados. LT100 = tempo letal exigido para induzir 100% demortalidade entre os vermes tratados, ppm = mg (peso) em 1L (volume). Por exemplo, 100 ppm é igual a 100 mg (peso) emIL (volume) de solução salina.

A Figura 3 é um gráfico de barras demonstrando oextermínio efetivo de S. mansoni in vitro por intermédio deuma concentração de 100 ppm de compostos aqui revelados,seja isoladamente ou em combinação uns com os outros. LT100= tempo letal exigido para induzir 100% de mortalidadeentre os vermes tratados.

A Figura 4 é uma série de gráficos de linhademonstrando extermínio efetivo de H. meleagridis in vitromediante concentrações diferentes dos compostos aquirevelados.

A Figura 5 é uma série de gráficos de linhademonstrando extermínio de H. meleagridis in vitro mediantediferentes concentrações de compostos aqui revelados.

Descrição de Modalidades exemplares

Os detalhes de uma ou mais modalidades da matériapresentemente revelada são apresentados nesse documento.Modificações das modalidades descritas nesse documento, eoutras modalidades, serão evidentes para aqueles deconhecimento comum na técnica após um estudo da informaçãoprovida nesse documento. A informação provida nessedocumento, e particularmente os detalhes específicos dasmodalidades exemplares descritas, é provida principalmentepara esclarecimento do entendimento e nenhuma limitaçãodesnecessária deve ser entendida a partir da mesma. No casode conflito, o relatório descritivo desse documento,incluindo as definições, dominará.

A matéria presentemente revelada incluicomposições e métodos para tratar infecções parasíticas, emétodos para realizar a triagem das composições e seleçãodas composições úteis para tratar uma infecção parasítica„Conforme aqui usado, o termo "infecçãoparasítica" se refere à infecção de um hospedeiro vegetalou animal por um parasita, tal como uma invasão bem-sucedida de um hospedeiro por um endoparasita, incluindo,por exemplo, um parasita protozoário ou um parasitahelmintico.

Conforme aqui utilizado, o termo "parasita"inclui os parasitas, tais como, porém não-limitados aosprotozoários, incluindo protozoários intestinais,protozoários de tecido, e protozoários de sangue. Exemplosde protozoários intestinais incluem, mas não são limitadosa: Entamoeba hystolytica, Giardia lamblia, eCryptosporidium muris. Exemplos de protozoários de tecidoincluem, mas não são limitados a: Trypanosomatidagambiense, Trypanosomatida rhodesiense, Trypanosomatidacrusi, Leishmania mexicana, Leishmania braziliensis,Leishmania tropica, Leishmania donovani, Toxoplasma gondii,e Trichomonas vaginalis. Exemplos de protozoários de sangueincluem, mas não são limitados a: Plasmodium vivax,

Plasmodium ovale, Plasmodium malariae, e Plasmodiumfa lcipa rum. Histomonas meleagridis é ainda outro exemplo deparasita protozoário.

Conforme aqui usado, o termo "parasita" incluiainda, mas não é limitado a: vermes parasiticos ouhelmintos, incluindo nematódeos (vermes redondos) eplatelmintos (vermes achatados). Exemplos de nematódeosincluem, mas não são limitados a: nematódeos de animais evegetais da classe ..adenophorea, tal como nematódeointestinal Trichuris trichiura (parasita do intestino) e onematódeo de vegetais Trichodorus obtusus (nematódeoobtuso); nematódeos intestinais da classe secementea, talcomo Asearis lumbrieoides, Enterobius vermieularis (oxiúro),Aneylostoma duodenale (ancilóstomo), Neeator amerieanus(ancilóstomo), e Strongyloides stercoralis; e nematódeos detecido da classe secementea, tal como Wuchereria bancrofti(Filaria bancrofti) e Dracunculus medinensis (verme daGuiné). Exemplos de platelmintos incluem, mas não sãolimitados a: Trematódeos (fasciolas) , incluindo fascíolassangüíneas, tal como Schistosoma mansoni (Esquitossomiaseintestinal), Sehistosoma haematobium e Sehistosomajaponieum; fascíolas do fígado, tal como Faseiola hepatieae Faseiola gigantiea ; fascíolas intestinais, tal comoHeterophyes heterophyes; e fascíolas de pulmão tal comoParagonimus westermani. Exemplos de platelmintos incluemainda, mas n^o são limitados a Cestódeos (tênias),incluindo Taenia solium, Taenia saginata, Hymenolepis nana,e Echinoeoceus granulosus.

Composições da matéria presentemente reveladapodem ser usadas para tratar infecções parasíticas. Emalgumas modalidades, as composições podem incluir compostosque são geralmente ..considerados como seguros (compostosGRAS). Em algumas modalidades, as composições podem incluircompostos de uma origem ..vegetal, tal como óleos essenciaisvegetais ou monoterpenóides de óleos essenciais vegetais.Em algumas modalidades, a composição inclui dois ou maiscompostos. Em algumas modalidades, as composições podemincluir qualquer um dos seguintes óleos, ou suas misturas:;

<table>table see original document page 11</column></row><table>Acetato de benzila

Álcool benzílicoBergamoteno

β-bisaboleno

óxido de bisaboleno

a-bisabololÓxido de bisabolol

Óxido β debisabolol

acetate de bornilβ-borboneno

óleo de sementepreta (BSO)

a-cadinol

Canfeno

a-canfoleno

a- canfolenoaldeido

CanforaCarvacrol

d-carvona

1-carvona

Óxido decariofileno

trans- cariofilenoOleo de ricino

Oleo de cedroCamazuleno

1,8-cineolCinamaldeido

cinamil álcoolOleo de canelacitral A

citral B

Tetrasulfeto dedialilo

dietil ftalato

lindenolóleo de linhaça

quinina

Oleo de alecrim

Diidropirocurzeren- metil-alil-trisulfeto sabinenoona

diidrotagentona mentol acetato de sabinila

beta-elemeno mentona óleo de açafroa

gamma-elemeno 2-metoxi furanodieno a-santaleno

Elmol

Estragol

Acetate de mentila santalol

Cinamato de metila

2-etil-2-hexeno-l-ol Citrate de metila

eugenol

metil

dihidrojasmonato

sativeno

δ-selineneóleo de gergelim

Acetate de eugenol salicilato de metila β-sesquifelandrenoα-farneseno óleo mineral Fluido de silicone

(Ζ,E)-a-farnesenoΕ-β-farneseno

fenchonaFuranodieno

furanoeudesma-1, 3-dieno

furanoeudesma-1,4-dieno

furano germacra1,10 (15)-diene-6-one

furanosesquiterpeno Oleo de clivaOleo de alho Oleo de laranja doce

geraniol 1 -octanol

acetate de geraniol E ocimenona

Ambrete almiscarmirceno

mirtenal

Aceto de neraldimetilnerolidolnonanona

gamma-nonalactonaOleo de poejo

lauril sulfato desódio

óleo de soja

germacreno Dgermacreno B

Oleo de toranja

α-gurjunenoa-humuleno

a-ionona

Z ocimenona3-octanona

ocimenooctil acetatoOleo de amendoim

perilil álcool

espatulenoltagetona

óleo de tangerina

a-terpinenoterpineno 900a-terpineol

a-terpinolenc

gamma-terpineol

Acetate de a-terpinil

2-tert-butil-p-quinona

a-tujonaóleo de timo

timol

timil metil étergamma-undecalactona

anidrido valérico<table>table see original document page 13</column></row><table>

Em algumas modalidades, as composições incluemdois ou mais compostos selecionados a partir dos seguintescompostos:

<table>table see original document page 13</column></row><table><table>table see original document page 14</column></row><table>

Em algumas modalidades, as composições incluemdois ou mais compostos selecionados a partir dos seguintescompostos:

<table>table see original document page 14</column></row><table>

Em algumas modalidades das composições queincluem óleo de flor - lilás, um ou mais dos seguintescompostos podem ser substitutos pelo óleo de flor lilás:tetrahidrolinaiol; etil - linalol, heliotropina; hediona;hercolina D; e citrato de trietila.

Em algumas modalidades das composições queincluem óleo de semente preta, um ou mais dos seguintescompostos podem ser substitutos pelo óleo de semente preta:alfa-trujeno, a-pineno', β-pineno, p-cimeno, limoneno, etert-butil-p-benzoquinona.

Em algumas modalidades das composições queincluem óleo de timo, um ou mais dos seguintes compostospodem ser substitutos pelo óleo de timo: timol, a-tujona;α-pineno, canfeno, β-pineno, p-cimeno, a-terpineno,linalol, borneol, e β-cariofileno. Em algumas modalidadesdas composições que incluem timol, o óleo de timo pode sersubstituído. Em algumas modalidades das composições queincluem óleo de timo, pode ser desejável incluir um tipoespecífico de óleo de timo. A esse respeito, óleo de timo(branco) é preferido ao óleo de timo (vermelho) porque esseúltimo conforme foi descoberto causa efeitos colateraisnegativos para o indivíduo ou hospedeiro.

Os compostos usados para preparar as modalidadesdas composições podem ser obtidos, por exemplo, a partirdas seguintes fontes: Millennium Chemicals, Inc.(Jacksonville, FL) , Ungerer Company (Lincoln Park, NJ) , SAFC(Milwaukee, WI), IFF Inc. (Hazlet, NJ); Sigma Chemical Co.(St. Louis, MO); e The Lebermuth Company, Inc. (Southbend, IN).

Em algumas modalidades das composições, pode serdesejável incluir uma versão de ocorrência natural, ou umaversão sintética, de.... um composto. Por exemplo, em certasmodalidades pode ser desejável incluir óleo de limão 410, umóleo de lima sintético que pode ser obtido, por exemplo,através da Millennium Chemicals, Inc. Em certas composiçõesexemplares, pode ser desejável incluir um composto que sejadesignado como de acordo com Food Chemical Codex (FCC), porexemplo, geraniol Fine.. FCC ou Tetrahydrolinalool FCC, cujoscompostos podem ser : obtidos, por exemplo, através daMillennium Chemicals, Inc.

Em algumas modalidades das composições, pode serdesejável incluir um composto tendo uma pureza específica.Em algumas modalidades das composições, pode ser desejávelincluir compostos cada um tendo uma pureza de ao menos 80%,81%, 82%, 83%,.84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%,93%, 94%, 95%,' 96%, 97%, 98%, ou 99%. Por exemplo, emalgumas modalidades das composições incluindo alfa-pineno,um alfa-pineno que é de pelo menos 98% puro pode serselecionado. Para outro exemplo, em modalidades dascomposições incluindo linalol, um linalol que é de pelomenos 97-99% puro (por exemplo, linalol natural (linalolcoeur)) pode ser selecionado.

Em algumas modalidades das composições, pode serdesejável incluir compostos tendo individualmente uma purezade aproximadamente 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% ou 95%.Por exemplo, em algumas modalidades das composições queincluem geraniol, pode ser desejável incluir um geraniol queé ao menos 60%, 85% ou 95% puro. Em algumas modalidades,pode ser desejável incluir um tipo especifico de geraniol.Por exemplo, em algumas modalidades, as composições podemincluir: geraniol 60, geraniol 85, ou geraniol 95. Quandogeraniol é obtido como geraniol 60, geraniol 85, ou geraniol95, então 40%, 50%, ou 5% do óleo pode ser Nerol. Nerol é ummonoterpeno (CioHi8O) , que pode ser extraído a partir de óleosessenciais de rosas, óleo de flores de laranja e óleo de lavanda.

Em algumas modalidades, as composições incluemdois ou mais compostos selecionados a partir dos seguintescompostos: . linalol, ..timol,· alfa-pineno, para-cimeno, etrans-anetol. Em algumas .modalidades, as composições incluemtrês ou mais compostos- ,selecionados a partir dos seguintescompostos: linalol, timol, alfa-pineno, para-cimeno, etrans-anetol. Em algumas modalidades, as composições incluemquatro ou mais compostos selecionados a partir dos seguintescompostos: linalol, .timol, alfa-pineno, para-cimeno, etrans-anetol. Em algumas modalidades, as composiçõesincluem: linalol, timol, alfa-pineno, para-cimeno, e Trans-Anetol. Em algumas modalidades, é preferido que um alfa-pineno que é de pelo menos aproximadamente 98% puro sejautilizado. Em algumas modalidades, é preferido que umlinalol que é um linalol natural (linalol coeur) seja usado.Em algumas modalidades, a composição pode incluir ainda óleode soja.

Em algumas modalidades, as- composições incluemdois ou mais compostos selecionados a.partir dos seguintescompostos: linalol, timol, alfa-pineno, e para-cimeno. Emalgumas modalidades, as composições incluem três ou maiscompostos selecionados a partir dos seguintes compostos:linalol, timol., alfa-pineno, e para-cimeno. Em algumasmodalidades, as composições incluem: linalol, timol, alfa-pineno, e para-cimeno. Em algumas modalidades, é preferidoque um alfa-pineno que seja pelo menos aproximadamente 98%puro seja utilizado. Em algumas modalidades, é preferido queum linalol que seja um linalol natural (linalol coeur) sejautilizado. Em algumas modalidades, a composição pode incluirainda óleo de soja.

Em algumas modalidades, cada- composto pode comporentre aproximadamente 1% a aproximadamente 99% em peso(peso/peso %) ou em volume (volume/volume %), da composição.Por exemplo, a composição pode compreender aproximadamente1% de alfa-pineno e aproximadamente 99% de timol. Conformeaqui usado, quantidades percentuais, em peso ou em volume,dos compostos devem ser entendidas como se referindo àsquantidades relat ivas dos compostos. Como tal, por exemplo,uma composição incluindo 7% de linalol, 35% de timol, 4% dealfa-pineno, 30% de para-cimeno, e 24% de óleo de soja(volume/volume %) pode ser considerada como incluindo umarazão de 7 para 35 para 4 para 30 para 24 linalol, timol,alfa-pineno, para-cimeno, e óleo de soja, respectivamente(em volume). Como tal, se um composto é retirado dacomposição, ou compostos adicionais ou outros ingredientesforem adicionados à composição, é considerado que oscompostos restantes podem ser providos nas mesmasquantidades relativas. Por exemplo, se óleo de soja foiretirado da composição exemplar, a composição resultanteincluiria 7 para 35 para 4 para 40 linalol, timol, alfa-pineno, e para-cimeno, respectivamente (em volume). Essacomposição resultante incluiria 9,21% de linalol, 46,05% detimol, 5,26% de alfa-pineno, e 39,48% de para-cimeno(volume/volume %). Para outro exemplo, se óleo de açafroafor adicionado; à composição original para produzir uÂiacomposição final contendo 40% (volume/volume) de óleo deaçafroa, então· a composição resultante incluiria 4,2% cielinalol, 21% de timol, 2,4% de alfa-pineno, 18% de pará-cimeno, 14,4% de óleo de soja, e 40% de óleo de açafroa(volume/volume %).

Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 1-5%, aproximadamente 5- 10%,aproximadamente 10-15%, aproximadamente 15- 20%,aproximadamente 2Q-25%., aproximadamente 25- 30%,aproximadamente 30-35%, aproximadamente 35- 40%,aproximadamente 40-45%, aproximadamente 4 5- 50%,aproximadamente 50-60%, aproximadamente 60-75%, OUaproximadamente 75-99% de linalol, conforme medido emvolume (volume/volume %). Em algumas modalidades, acomposição inclui aproximadamente 4,5-5,5% de linalol,conforme medido em volume. Em algumas modalidades, acomposição inclui aproximadamente 5% de linalol, conformemedido em volume. Em algumas modalidades, a composiçãoinclui aproximadamente 6,5-7,5% de linalol, conforme medidoem volume. Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 7% de linalol, conforme medido em volume.Em algumas modalidades, a composição inclui aproximadamente38-40% de linalol, conforme medido em volume. Em algumasmodalidades, a composição inclui aproximadamente 39% delinalol, conforme medido em volume.

Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 1-5%, aproximadamente 5-10%,aproximadamente 10-15%, aproximadamente 15-20%,aproximadamente 20-25%, aproximadamente 25-30%,aproximadamente 30-35%, aproximadamente 35-40%,aproximadamente 40-45%, aproximadamente 45-50%,aproximadamente 50-60%, aproximadamente 60-75%, ouaproximadamente 75-99% de linalol, conforme medido em peso(peso/peso %) . Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 4,2-5,2% de linalol, conforme medido empeso. Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 4,7% de linalol, conforme medido em peso.

Em algumas modalidades, a composição inclui aproximadamente6,1-7,1% de linalol, conforme medido em peso. Em algumasmodalidades, a composição inclui aproximadamente 6,6% delinalol, confor me medido em peso. Em algumas modalidades, acomposição inclui aproximadamente 40,3-41,3% de linalol,conforme medido em peso. Em algumas modalidades, acomposição inclui aproximadamente 40,8% de linalol,conforme medido em peso.

Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 1-5%, aproximadamente 5-10%,aproximadamente 10-15%, aproximadamente 15-20%,aproximadamente 20-25%, aproximadamente 25-30%,aproximadamente .30-35%, aproximadamente 35-40%,aproximadamente 40-45%, aproximadamente 45-50%,aproximadamente 50-60%, aproximadamente 60-75%, ouaproximadamente 75-99% de timol, conforme medido em volume(volume/volume %) . Em algumas modalidades, a composiçãoinclui aproximadamente 38-40% de timol, conforme medido emvolume. Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 39% de timol, conforme medido em volume. Emalgumas modalidades, a composição inclui aproximadamente36-38% de timol, conforme medido em volume. Em algumasmodalidades, a composição inclui aproximadamente 37% detimol, conforme medido em volume. Em algumas modalidades, acomposição inclui aproximadamente 34-36% de timol, conformemedido em volume. Em algumas modalidades, a composiçãoinclui aproximadamente 35% de timol, conforme medido emvolume.

Em algumas modalidades, a composição inclui

aproximadamente 1-5%, aproximadamente 5· -10%,aproximadamente 10-15%, aproximadamente 15· -20%,aproximadamente 20-25%, aproximadamente 25 -30%,aproximadamente 30-35%, aproximadamente 35· -40%,aproximadamente 40-45%, aproximadamente 45- -50%,aproximadamente 50-60%, aproximadamente 60 -75%, OUaproximadamente 75-99% de timol, conforme medido em peso(peso/peso %). Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 40,3-41,3% de timol,. conforme medido empeso. Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 40,8% ,de timol, conforme medido em peso. Emalgumas modalidades, a composição inclui aproximadamente33,9-34,9% de timol, conforme medido em peso. Em algumasmodalidades, a composição inclui aproximadamente 34,4% detimol, conforme medido em peso. Em algumas modalidades, acomposição inclui aproximadamente 36,7-37,7% de timol,conforme medido em, peso. Em algumas modalidades, acomposição inclui aproximadamente 37,2% de timol, conformemedido em peso.

Em algumas modalidades, a composição inclui

aproximadamente 1-5%, aproximadamente 5-10%,aproximadamente 10-15%, aproximadamente 15-20%,aproximadamente 20-25%, aproximadamente 25-30%,aproximadamente 30^35%, aproximadamente 35-40%,aproximadamente 40-45%, aproximadamente 45-50%,aproximadamente 50-60%, aproximadamente 60-75%, ouaproximadamente 75-99% de alfa-pineno, conforme medido emvolume (volume/volume %) . Em algumas modalidades, acomposição inclui aproximadamente 1,5-2,5% de alfa-pineno,conforme medido em volume. Em algumas modalidades, acomposição inclui aproximadamente 2% de alfa-pineno,conforme medido em volume. Em algumas modalidades, -acomposição inclui aproximadamente 4,5-5,5% de alfa-pineno,conforme medido em volume. Em algumas modalidades, acomposição inclui aproximadamente 5% de alfa-pineno,conforme medido em volume. Em algumas modalidades, acomposição inclui aproximadamente 3,5-4,5% de alfa-pineno,conforme medido em volume. Em algumas modalidades, acomposição inclui aproximadamente 4% de alfa-pineno,conforme medido em volume.

Em algumas^ . modalidades, a composição incluiaproximadamente 1-5%, aproximadamente 5- •10%,aproximadamente 10-15%, aproximadamente 15- 20%,aproximadamente 2-25%, aproximadamente 25- •30%,aproximadamente 30-35%, aproximadamente 35- •40%,aproximadamente 40-45%, aproximadamente 45- 50%,aproximadamente 50-60%, aproximadamente 60 -75%, ouaproximadamente 75-99% de alfa-pineno, conforme medido empeso (peso/pe so %) . Em algumas modalidades, a composiçãoinclui aproximadamente 1,4-2,4% de alfa-pineno, conformemedido em peso.. Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 1,9% de alfa-pineno, conforme medido empeso. Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 4,2-5,2% de alfa-pineno, conforme medido empeso. Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente? 4,7% de alfa-pineno, conforme medido empeso. Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 3,3-4,3% de alfa-pineno, conforme medido empeso. Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 3,8% de alfa-pineno, conforme medido empeso.

Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 1-5%, aproximadamente 5-10%,aproximadamente 10-15%, aproximadamente 15-20%,aproximadamente 20-25%, aproximadamente 25-30%,aproximadamente 30-35%, aproximadamente 35-40%,aproximadamente 40-45%, aproximadamente 45-50%,aproximadamente 50-60%, aproximadamente 60-75%, ouaproximadamente 75-99% de para-cimeno, conforme medido emvolume (volume/volume %). Em algumas modalidades, acomposição inclui aproximadamente 36,5-37,5% de para-cimeno, conforme medido em volume. Em algumas modalidades,a composição inclui aproximadamente 37% de para-cimeno,conforme medido em volume. Em algumas modalidades, acomposição inclui aproximadamente 29,5-30,5% de para-cimeno, conforme medido em volume. Em algumas modalidades,a composição inclui .aproximadamente 30% de para-cimeno,conforme medido em volume. Em algumas modalidades, acomposição inclui aproximadamente 1,5-2,5% de para-cimeno,conforme medido em volume. Em algumas modalidades, acomposição inclui aproximadamente 2% de para-cimeno,conforme medido em volume.

Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 1-5%, aproximadamente 5-10%,aproximadamente 10-15%, aproximadamente 15-20%,aproximadamente 20-25%, aproximadamente 25-30%,aproximadamente 30-35%, aproximadamente 35-40%,aproximadamente 40-45%, aproximadamente 45-50%,aproximadamente 50-60%, aproximadamente 60-75%, OUaproximadamente 75-99% de para-cimeno, conforme medido empeso (peso/peso %). Em algumas modalidades, a composiçãoinclui aproximadamente 33,9-34,9% de para-cimeno, conformemedido em peso,. Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 34,4% de para-cimeno, conforme medido empeso. Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente. 1,4-2,4% de para-cimeno, conforme medido empeso. Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 1,9% de para-cimeno, conforme medido empeso. Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 27,9-28,9% de para-cimeno, conforme medidoem peso. Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 28,4% de para-cimeno, conforme medido em peso.

Em algumas modalidades, a composição inclui

aproximadamente 1-5%, aproximadamente 5 -10%,aproximadamente 10-15%, aproximadamente 15 -20%,aproximadamente 20-25%, aproximadamente 25 -30%,aproximadamente 30-35%, aproximadamente 35· -40%,aproximadamente 40-45%, aproximadamente 45· -50%,aproximadamente 50-60%, aproximadamente 60 -75%, OU

aproximadamente 75-99% de trans-anetol, conforme medido emvolume (volume/volume %) . Em algumas modalidades, acomposição inclui aproximadamente 16,5-17,5% de trans-anetol, conforme medido em volume. Em algumas modalidades,a composição inclui aproximadamente 17% de trans-anetol,conforme medido em volume.

Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 1-5%, aproximadamente 5-10%,aproximadamente 10-15%, aproximadamente 15-20%,aproximadamente 20-25%, aproximadamente 25-30%,aproximadamente 30-35%, aproximadamente 35-40%,aproximadamente 40-45%, aproximadamente 45-50%,aproximadamente 50-60%, aproximadamente 60-75%, ouaproximadamente 75-99% de trans-anetol, conforme medido empeso (peso/peso %) . Em algumas modalidades, a composiçãoinclui aproximadamente 17,7-18,7% de trans-anetol, conformemedido em peso. Em algumas modalidades, a composição incluiaproximadamente 18,2% de trans-anetol, conforme medido empeso.

Em algumas modalidades, a composição inclui osseguintes compostos nas seguintes quantidades relativas,onde as quantidades relativas dos compostos são expressascomo % em peso/peso: 15-25% de trans-anetol, 30-40% depara-cimeno, 1-10% de linalol, 1-10% de alfa-pineno, e 35-45% de timol. Em algumas modalidades, a composição incluios seguintes compostos nas seguintes quantidades relativas,onde as quantidades relativas dos compostos são expressascomo % em peso/peso: 18,2% de trans-anetol, 34,4% de para-cimeno, 4,7% c|è linalol, 1,9% de alfa-pineno, e 40,8% detimol.

Em algumas modalidades, a composição inclui osseguintes compostos nas seguintes quantidades relativas,onde as quantidades relativas dos compostos são expressascomo % em volume/volume.·: 10-20% de trans-anetol, 30-40% depara-cimeno, 1-10% de linalol, 1-10% de alfa-pineno, e 35-45% de timol. Em algumas modalidades, a composição incluios seguintes compostos nas seguintes quantidades relativas,onde as quantidades relativas dos compostos são expressascomo % em volume/volume: 17% de trans-anetol, 37% de para-cimeno, 5% de linalol, 2% de alfa-pineno, e 39% de timol.

Em algumas modalidades, a composição inclui osseguintes compostos nas seguintes quantidades relativas,onde as quantidades relativas dos compostos são expressascomo % em peso/peso: 15-25% de trans-anetol, 1-10% de para-cimeno, 35-45% de linalol, 1-10% de alfa-pineno, e 30-40%de timol. Em algumas modalidades, a composição inclui osseguintes compostos nas seguintes quantidades relativas,onde as quantidades relativas dos compostos são expressascomo % em peso/peso: 18,2% de trans-anetol, 1,9% de para-cimeno, 40,8% de linalol, 4,7% de alfa-pineno, e 34,4% detimol.

Em algumas modalidades, a composição inclui qsseguintes compostos nas seguintes quantidades relativas,onde as quantidades relativas dos compostos são expressascomo % em volume/volume: 15-25% de trans-anetol, 1-10% depara-cimeno, 35-45% de linalol, 1-10% de alfa-pineno, e 30-40% de timol. Em algumas modalidades, a composição incluios seguintes compostos nas seguintes quantidades relativas,onde as quantidades relativas dos compostos são expressascomo % volume/volume: 17% de trans-anetol, 2% de para-cimeno, 39% de linalol, 5% de alfa-pineno, e 37% de timol.

Em algumas modalidades, a composição inclui osseguintes compostos nas seguintes quantidades relativas,onde as quantidades relativas dos compostos são expressascomo % em peso/peso: 25-35% de para-cimeno, 1-10% delinalol, 1-10% de alfa-pineno, 20-30% de óleo de soja, e35-40% de timol. Em algumas modalidades, a composiçãoinclui os seguintes compostos nas seguintes quantidadesrelativas, onde as quantidades relativas dos compostos sãoexpressas como % em peso/peso: 28,39% de para-cimeno, 6,6%de linalol, 3,8% de alfa-pineno, 24% de óleo de soja, e37,2% de timol.

Em algumas modalidades, a composição inclui osseguintes compostos nas seguintes quantidades relativas,onde as quantidades relativas dos compostos são expressascomo % em volume/volume: 25-35% de para-cimeno, 1-10% delinalol, 1-10% de alfa-pineno, 20-30% de óleo de soja, e35-45% de timol. Em algumas modalidades, a composiçãoinclui os seguintes compostos nas seguintes quantidadesrelativas, onde as quantidades relativas dos compostos sãoexpressas como % volume/volume: 30% de para-cimeno, 7% delinalol, 4% de alfa-pineno, 24% de óleo de soja, e 35% detimol.

Surpreendentemente, mediante mistura de certoscompostos em certas quantidades relativas, a composiçãoresultante demonstra um efeito antiparasitico que excede oefeito antiparasitico de qualquer componente da composição.

Como aqui usado, "componente de uma composição" se refere aum composto, ou a um subconjunto de compostos incluídos emuma composição, por exemplo, a composição completa menospelo menos um composto. Como aqui usado, um "efeitoantiparasitico" se refere a qualquer parâmetro mensurávelrelacionado à eficácia de uma composição para tratar umainfecção parasítica. O efeito pode ser um parâmetrorelacionado à viabilidade, extermínio, profilaxia, ou outroparâmetro útil e quantificável para um determinado momento,ou pode ser o tempo para se obter um resultado definido,por exemplo, tempo para obter 100% de extermínio com umadose determinada. A esse respeito, quando um primeiroefeito e um segundo efeito são comparados, o primeiroefeito pode indicar uma maior eficácia para tratar umainfecção parasítica se ele exceder o segundo efeito. Porexemplo, quando o efeito sendo medido é um tempo para seobter 100% de extermínio, um tempo mais curto é um efeitoantiparasitico que excede um tempo mais longo. Para outroexemplo, quando o efeito sendo medido é uma % de extermíniode parasitas visados, uma % de extermínio maior é um efeitoantiparasitico que excede uma % de extermínio menor. Osefeitos que podem ser medidos incluem, mas não sãolimitados a: tempo para exterminar uma determinadapercentagem de um parasita alvo in vivo ou in vitro;viabilidade percentual ou extermínio percentual de umparasita alvo in vivo ou in vitro; viabilidade percentualde ovos de um parasita alvo; percentagem de uma populaçãode hospedeiros que é curada de uma infestação por umparasita alvo; percentagem de uma população de hospedeirosque é protegida contra uma infecção de um parasita alvo(efeito profilático); perturbação de uma mensagem celularou de um sinal celular em um parasita alvo, tal como, porexemplo, cálcio, AMP-ciclico, e semelhante; e diminuição àaatividade ou efeitos a jusante de um alvo molecular em umparasita alvo.

Um método in vivo exemplar para avaliar o efeitoantiparasitico de uma composição especifica, ou componenteda composição, pode ser conduzido utilizando-se animaishospedeiros. Os animais hospedeiros são infectados com umparasita alvo. A composição ou componente de interesse éadministrada ao animal hospedeiro. A administração dacomposição ou componente de interesse pode ser iniciada emvários momentos antes e/ou após infecção do animalhospedeiro, dependendo do parasita alvo sendo testado. Osovos gerados pelo parasita no animal hospedeiro sãoquantificados. Por exemplo, os ovos em uma amostra de fezescoletados do animal podem ser quantificados. Aquantificação dos ovos gerados pelo parasita no animalhospedeiro recebendo a composição ou componente deinteresse pode ser comparada com a quantificação dos ovosgerados pelo parasita em outro animal hospedeiro, tal comoum animal hospedeiro recebendo outra composição oucomponente de interesse, ou um animal hospedeiro servindocomo um controle, por exemplo, controle não-infectado, oucontrole não-tratado.

Um método in vitro exemplar para avaliar oefeito antiparasitico de uma composição ou componenteespecifico pode ser conduzido utilizando-se parasitas alvoprovidos em placas de teste. A composição ou componente deinteresse é contatada com os parasitas-alvo, e o efeito éobservado, por exemplo, o efeito da composição oucomponente de interesse em relação à vitalidade dosparasitas-alvo. O efeito do tratamento sobre os parasitasalvejados pode ser comparado com o efeito de outrotratamento em parasitas alvo, tal como parasitas alvejadostratados com outra composição ou componente de interesse,ou parasitas alvo servindo como um controle, por exemplo,controle não-infectado, ou controle não-tratado.

Outros métodos podem ser usados para avaliar oefeito antiparasítico de uma composição ou componenteespecifico, cujos métodos serão evidentes para aquelesversados na técnica, ou podem ser determinados para uso emum caso especifico por aqueles versados na técnicautilizando apenas experimentação de rotina. Informaçõesadicionais relacionadas à avaliação de efeitoantiparasítico podem ser encontradas nos Exemplosapresentados nesse documento.

Em algumas modalidades, um efeito antiparasíticosinergístico é obtido quando certos compostos sãomisturados, e o efeito sinergístico pode ser aperfeiçoadoquando certos compostos são misturados em certasquantidades ou proporções relativas. Em outras palavras, ascomposições incluindo certas combinações dos compostospodem ter uma habilidade,aperfeiçoada para tratar infecçõesparasíticas, em comparação com cada um dos compostosconsiderados isoladamente.

Conforme aqui usado, "sinergia" e "efeitosinergístico" podem se referir a qualquer aperfeiçoamentosubstancial, em uma composição de ao menos dois compostos,de um efeito mensurável, por exemplo, um efeitoantiparasítico, quando comparado com o efeito de umcomponente da composição, por exemplo, um composto ativoisoladamente, ou a mistura completa de compostos menos pelomenos um composto. A sinergia é uma característicaespecifica de uma mistura de compostos, e está acima dequalquer nivel prático de aperfeiçoamento que de se deveriaapenas, por exemplo, aos efeitos aditivos de qualquercombinação aleatória de ingredientes.

Em algumas modalidades, um aperfeiçoamentosubstancial de um efeito mensurável pode ser expresso comoum coeficiente-, de sinergia. Um coeficiente de sinergia éuma expressão de comparação entre os efeitos medidos de umacomposição e os efeitos medidos de uma composição decomparação. A composição de comparação pode ser umcomponente da composição. Em algumas modalidades, ocoeficiente de sinergia pode ser ajustado para diferençasem concentração da mistura completa e da composição decomparação.

Os coeficientes de sinergia podem ser calculadoscomo a seguir. Uma relação de atividade (R) pode sercalculada mediante divisão da % do efeito da composição(Ab) pela % do efeito da composição de comparação (Xn) ,conforme a seguir:

R = AB/Xn. Fórmula 1

Um fator de ajuste de concentração (F) pode sercalculado com base na concentração (Cn), isto é, %(peso/peso) ou % (volume/volume), da composição decomparação na composição, como a seguir:

F= 100/Cn Fórmula 2

0 efeito de sinergia (S) pode então ser calculadomediante multiplicação da relação de atividade (R) e ofator de ajuste de concentração (F), como a seguir:

S = (R)(F) Fórmula 3

Como tal, o coeficiente de sinergia (S) tambémpode ser calculado, conforme a seguir:

S = [ (AB/X„) (100) ]/C„ Fórmula 4Na Fórmula 4, Ab é expresso como % do efeito damistura, Xn é expresso como % do efeito da composição decomparação (Xn) , e Cn é expresso como % (peso/peso) ou %(volume/volume) da concentração da composição de comparaçãona mistura.

Em algumas modalidades, um coeficiente desinergia de aproximadamente 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; ou 1,5 podeser substancial e comercialmente desejável. Em outrasmodalidades, o coeficiente de sinergia pode ser deaproximadamente 1,6 a aproximadamente 5, incluindo, mas nãolimitado a aproximadamente 1,8; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; e4,5. Em outras modalidades, o coeficiente de sinergia podeser de aproximadamente 5 a 50, incluindo, mas não limitadoa aproximadamente 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 e 45. Emoutras modalidades, o coeficiente de sinergia pode ser deaproximadamente 50 a. aproximadamente 500, ou mais,incluindo, mas não limitado a aproximadamente 50, 75, 100,125, 150, 200, 250, 300, 350, 400 e 450. Qualquercoeficiente de sinergia acima de 500 também é consideradodentro das modalidades as composições.

Visto que uma ampla faixa de sinergias pode serencontrada em várias moda.lidades aqui descritas, observa-seexpressamente que um , coeficiente de sinergia pode serdescrito como sendo "maior do que" um número determinado e,portanto, não-limitado necessariamente a estar dentro doslimites de uma faixa tendo um limite numérico inferior e umlimite numérico superior. Similarmente, em algumasmodalidades aqui descritas, certos baixos coeficientes desinergia, ou extremidades inferiores de faixas, sãoexpressamente excluídas. Conseqüentemente, em algumasmodalidades, a sinergia pode ser expressa como sendo "maiordo que" um determinado número que constitui um limiteinferior de sinergia para tal modalidade. Por exemplo, emalgumas modalidades, o coeficiente de sinergia é igual oumaior do que 25; em tal modalidade, todos os coeficientesde sinergia abaixo de 25, embora substanciais, sãoexpressamente excluídos.

Em algumas modalidades, a sinergia ou o efeitosinergístico associado a uma composição pode serdeterminada utilizando-se cálculos similares àquelesdescritos em Colby, S. R., "Calculating synergistic andantagonistic responses of herbicide combinations", Weeds(1967) 15:1, pp. 20-22, que é aqui incorporado atravésde ssa referência. A esse respeito, a fórmula a seguir podeser usada para expressar uma % de efeito esperado (E) deuma composição incluindo dois compostos, o Composto XeoComposto Y:

E = X + Y - (X*Y/100) Fórmula 5

Na Fórmula 5, X é a % de efeito efetivo medido doComposto X na, composição, e Y é a % do efeito efetivomedido do Composto Y da composição. A percentagem de efeitoesperado (E) da composição é então comparada com % deefeito efetivo medido (A) da composição. Se a % do efeitoefetivo (A) que é medida difere da % do efeito esperado (E)conforme calculado pela fórmula, então a diferença se devea uma interação dos compostos. Assim, a composição temsinergia (uma interação positiva dos compostos) quando A >E. Além disso, existe uma interação negativa (antagonismo)quando A < E.

A Fórmula 5 pode ser estendida para considerarqualquer número de compostos em uma composição; contudo,ela ss torna mais complexa à medida que é expandida,conforme é il ustrado pela fórmula a seguir para umacomposição incluindo três compostos, o Composto X, oComposto Y, e o Composto X:Ε = Χ + Υ + Ζ- ((XY +XZ+ YZ)/100) + (Χ*Υ*Ζ/10000)

Fórmula 6

Uma fórmula fácil de utilizar que acomoda ascomposições com qualquer número de compostos pode serprovida mediante modificação das Fórmulas 5 e 6. Talmodificação da fórmula não será descrita. Ao usar asFórmulas 5 e 6, um valor de controle não-tratado (não-tratado com uma composição ou composto) é estabelecido em100%, por exemplo, se o efeito sendo medido for aquantidade de parasitas alvejados exterminados, o valor decontrole seria; estabelecido em 100% de sobrevivência doparasita alvo. A esse respeito, se o tratamento com oComposto A resultar em 80% de extermínio de um parasita-alvo, então o tratamento com o Composto A pode serconsiderado como resultando em 20% de sobrevivência, ou 20%do valor de controle. A relação entre os valores expressoscomo efeito percentual e valores expressos como umapercentagem de controle é apresentada nas fórmulas aseguir, onde E' é a % esperada de controle da composição,Xn é o efeito % efetivo medido de um composto individual(Composto Xn) da composição, Xn' é a % de controle de umcomposto individual da composição, e A' é a % medidaefetiva do controle da composição.

E = 100 - E' Fórmula 7Xn = 100 - " Xn' Fórmula 8A = 100 - A' Fórmula 9

Substituindo-se os valores de percentagem decontrole pelos valores de efeito percentual das Fórmulas 5e 6, e realizando modificações para acomodar qualquernúmero (n) de compostos, a fórmula a seguir é provida paracalcular a percentagem esperada de controle (E' ) dacomposição:<formula>formula see original document page 33</formula>

Fórmula 10

De acordo com a Fórmula 10, a % esperada docontrole (E') para a composição é calculada mediantedivisão do produto da % efetiva medida dos valores decontrole (Xn') para cada composto da composição por 100n"1.A % esperada de controle (E') da composição é entãocomparada com a percentagem efetiva medida de controle (A')da composição. Se a percentagem efetiva de controle (A' )que é medida diferir da % esperada de controle (E')conforme calculado pela Fórmula 10, então a diferença sedeve a uma interação dos compostos. Desse modo, acomposição tem sinergia (uma interação positiva doscompostos) quando A' < E'. Adicionalmente, há uma interaçãonegativa (antagonismo) quando A' > E' .

Composições contendo dois ou mais compostos emcertas proporções ou quantidades relativas podem sertestadas em relação ao efeito sinergistico mediantecomparação do efeito antiparasitico de uma composiçãoespecifica dos compostos com o efeito antiparasitico de umcomponente da composição. Informações adicionaisrelacionadas à realização de uma determinação de sinergiapodem ser encontradas nos exemplos apresentados nessedocumento.

Considera-se , que as composições da matériapresentemente revelada poderiam ser formuladas para, eentregue pelos carreadores, incluindo produtosalimentícios. Por exemplo, aditivos são adicionados aosprodutos cozidos, tais como doces, pães, bolos, etc., paramelhorar ou mo.dificar o sabor ou cor, aumentar a vida emprateleira, melhorar o seu valor nutricional, e geralmenteproduzir um efeito desejado. Similarmente, as composiçõesda matéria presentemente revelada poderiam ser formuladascom produtos alimentícios como carreadores e entregues pelaingestão para produzir seu efeito desejado. Evidentemente,vários tipos de alimentos poderiam ser usados para empregaras composições, incluindo, mas não limitado a, bebidas,

cereais de desjejum, misturas de bebidas em pó.

Adicionalmente, as composições aqui reveladaspodem assumir formas tais como suspensões, soluções ouemulsões em carreadores oleosos ou aquosos, e podem conteragentes de formulação tais como agentes de suspensão, de

estabilização e/ou de dispersão. Para administração oral,as composições podem assumir a forma, por exemplo, decomprimidos ou cápsulas preparadas mediante uma técnicaconvencional com excipientes farmaceuticamente aceitáveistais como agentes de ligação (por exemplo, amido de milho

pré-gelatinizado, polivinilpirrolidona, ou hidroxipropilmetilcelulose); cargas (por exemplo, lactose, celulosemicrocristalina ou hidrogênio de fosfato de cálcio);lubrificantes (por exemplo, estearato de magnésio, talco(silicato de magnésio hidratado) ou sílica);

desintegradores (por exemplo, amido de batata ou amidoglicolato de sódio); ou agentes de umedecimento (porexemplo, lauril sulfato de sódio). Os comprimidos podem serrevestidos mediante métodos conhecidos na técnica. Porexemplo, uma composição aqui revelada pode ser formulada

tendo um revestimento -de liberação entérica ou retardadaque protege a composição até que ela atinja o cólon.

Preparações líquidas para administração oralpodem assumir a forma, por exemplo, de soluções, xaropes oususpensões. Tais preparações líquidas podem ser preparadas

mediante técnicas convencionais com aditivos

farmaceuticamente aceitáveis tais como agentes de suspensão(por exemplo, xarope de sorbitol, derivados de celulose, ougorduras comestíveis hidrogenadas) ; agentes deemulsificação (por exemplo, lecitina ou acácia);transportadores não aquosos (por exemplo, óleo de amêndoa,ésteres oleosos, álcool etílico, ou óleos vegetaisfracionados); e conservantes (por exemplo, metil ou propil-p-hidroxibenzoatos ou ácido sórbico). Preparações líquidaspara administração oral também podem ser formuladas paraliberação retardada, tal como, por exemplo, em "cápsulas de gel".

Em certas modalidades, as composições poderiamser providas em uma forma encapsulada ou microencapsulada.A microencapsulação é um processo onde pequenas partículasda composição, são revestidas ou encapsuladas com ummaterial de invólucro externo para controlar a liberação dacomposição ou para proteger a composição. Material deinvólucro externo exemplar inclui proteínas,polissacarídeos, amidos, ceras, gorduras, polímerosnaturais e sintéticos, e resinas. A microencapsulação podeser feita quimicamente ou fisicamente. Por exemplo, métodosfísicos para encapsular as composições poderiam incluirsecagem por pulverização, esfriamento por pulverização,revestimento em tacho, ou co-extrusão. Métodos químicos deencapsulação poderiam incluir coacervação, separação defase, extração de solvente, ou evaporação de solvente.

Como um exemplo, para co-extrusão de um núcleolíquido, o núcleo líquido e materiais de invólucro sãobombeados através dos orifícios concêntricos, com omaterial de núcleo fluindo no orifício central, e com omaterial de invólucro fluindo através do espaço anularexterno. Uma gota de composto encerrado é formada quandouma gotícula de fluido de núcleo é encerrada por uma camadade fluido de invólucro. 0 invólucro é então endurecidomediante meio apropriado; por exemplo, mediante reticulaçãoquímica no caso de polímeros, esfriamento no caso degorduras ou ceras, ou evaporação de solvente. Informaçãoadicional sobre os métodos e sistemas para prover

composições formuladas para, e entregues por intermédio dek.

produtos alimentícios, podem ser encontrados nas Patentesdos Estados Unidos de número 5.418.010, 5.407.609,4.211.668, 3.971.852 e 3.943.063, cada uma das quais éincorporada aqui por intermédio dessa referência.

As cpmposições da matéria presentemente reveladapodem ser usadas para tratar infecções parasíticas. A

matéria presentemente revelada inclui métodos para trataruma infecção parasítica em um indivíduo, incluindoadministrar uma quantidade eficaz de uma composição aquidescrita. .

Conforme aqui . usado, os termos: "hospedeiro" e"indivíduo" são usados permutavelmente e se referem a umaplanta ou a um animal capaz de ser infectado por umparasita. O animal pode ser um vertebrado. O vertebradopode ser de sangue quente. 0 vertebrado de sangue quentepode ser um mamífero. O mamífero pode ser um ser humano. O

ser humano pode ser um adulto ou uma criança. Conforme aquiusado, os termos: "hospedeiro" e "indivíduo" incluemhospedeiros e indivíduos humanos e animais. Desse modo,usos terapêuticos veterinários são providos de acordo com amatéria presentemente revelada. Como tal, a matéria

presentemente revelada provê o tratamento de mamíferos taiscomo seres humanos, assim como aqueles mamíferos deimportância devido ao fato de estarem em extinção, taiscomo tigres siberianos ou leopardos da neve; de importânciaeconômica, tais como animais criados em fazendas para

consumo pelos seres humanos; e/ou animais de importânciasocial para os seres humanos, tais como os animais mantidoscomo animais de estimação ou em zoológicos. Exemplos detais animais incluem, mas não são limitados aos carnívorostais como gatos e cães; suínos, incluindo porcos, capões,javalis selvagens; ruminantes e/ou ungulados tais comogado, carneiro, girafas, veados, cabras, bisões, e camelos;

e cavalos. Também é provido o tratamento de pássaros,incluindo o tratamento daquelas espécies de pássaros queestão em risco de extinção e/ou mantidos em zoológicos,assim como aves e mais especificamente aves domesticadas,isto é, aves domésticas, tais como perus, galinhas, patos,gansos, galinha da angola, e semelhante, uma vez que elestambém são de importância econômica para os seres humanos.

Desse modo, também é provido o tratamento de animaisdomésticos, incluindo, mas não limitados a suínosdomesticados, ruminantes, ungulados, cavalos (incluindocavalos de corrida), aves domésticas e semelhantes.

Conforme aqui usado, os termos "tratar","tratando", e "tratamento" se referem a: conferir proteçãocontra infecção; prevenir infecção; aliviar infecção;reduzir a gravidade de sintomas e/ou seqüelas de infecção;

eliminar infecção; e/ou prevenir a reincidência dainfecção. Conforme aqui usado, os termos "tratar","tratando", e "tratamento" também se referem a conferirproteção contra, prevenir, aliviar, reduzir a gravidade de,eliminar, e/ou prevenir a reincidência associada a umadoença ou sintomas causados por uma infecção parasítica.

Conforme aqui usado, o termo "quantidade efetiva"se refere a uma dosagem suficiente para prover tratamentopara uma infecção parasítica. A quantidade exata que éexigida pode variar, por exemplo, dependendo do parasitaalvo, do tratamento sendo realizado, da idade e condiçãogeral do indivíduo, da formulação específica sendo usada,do modo de administração, e semelhantes. Como tal, aquantidade efetiva variará com base nas circunstânciasespecificas, e uma quantidade efetiva apropriada pode serdeterminada em um caso especifico por aqueles jieconhecimento comum na técnica utilizando apenasexperimentação de rotina.

A matéria presentemente revelada inclui métodospara fazer a triagem de composições úteis para tratar umainfecção parasitica. Em algumas modalidades, o método detriagem é útil para estreitar o escopo de possíveiscompostos que são identificados como componentes para umacomposição para tratar uma infecção parasitica.

Em algumas modalidades, um método de selecionaruma composição para uso no tratamento de uma infecçãoparasitica inclui o seguinte. Uma célula expressando umreceptor de tiramina é provida e contatada com compostos deteste. A afinidade de ligação do receptor dos compostos émedida. Ao menos um parâmetro selecionado a partir dosseguintes parâmetros é medido: nível de cAMP intracelular,e nível de Ca2+ intracelular. Um primeiro composto para acomposição é identificado, o qual é capaz de alterar aomenos um dos parâmetros, e o qual tem uma elevada afinidadede ligação de receptor para o receptor de tiramina; e umsegundo composto para a. composição é identificado, o qual écapaz de alterar ao menos um dos parâmetros e o qual temuma baixa afinidade de ligação de receptor para o receptorde tiramina. Uma composição é selecionada a qual inclui oprimeiro e o segundo composto. Em algumas modalidades, umacomposição é selecionada que inclui o primeiro e o segundocomposto e demonstra um efeito antiparasítico que excede oefeito antiparasítico de qualquer dos componentes quandousado isoladamente.

A célula usada para o método pode ser qualquercélula capaz de ser transfectada com e expressa um Receptorde Tramina (TyrR). Exempl os de células incluem, mas não sãolimitados a: células de inseto, tal como células Schneiderde Drosophila, células Schneider 2 de Drosophila (célulasS2), e células Spodoptera frugiperda (por exemplo, Sf9 ouSf21) ; ou células de mamíferos, tal como células de Rim

Embriônico Humano (células HEK-293), células de fibroblastode rim de macaco verde africano (células COS-7), célulasHeLa, e células de Ceratinócito Humano (células HaCaT).Informações adicionaais sobre a preparação das célulasexpressando receptores podem ser encontradas nos Pedidos de

Patente dos Estados Unidos de número 10/832.022;11/086.615; e 11/365.426, que são aqui incorporadosintegralmente por intermédio dessa referência.

O receptor de tiramina (TyrR) pode ser um TyrR decomprimento completo, um fragmento funcional de um TyrR, ou

uma variante funcional de um TyrR. Um fragmento funcionalde um TyrR é um TyrR no qual resíduos de aminoácidos sãodeletados em comparação com o polipeptídeo de referência,isto é, TyrR de comprimento completo, mas onde a seqüênciade aminoácido restante retém a afinidade de' ligação dopolipeptídeo de referência para tiramina. Uma variantefuncional de um TyrR é um TyrR com inserções de aminoácido,deleções de aminoácido, ou substituições conservadoras deaminoácido, que retêm afinidade de ligação do polipeptídeode referência para tiramina. Uma "substituição conservadorade aminoácido" é uma substituição de um resíduo deaminoácido com um resíduo de funcionalidade similar.Exemplos de substituições conservadoras incluem asubstituição de um resíduo não-polar (hidrofóbico) tal comoisoleucina, v^lina, leucina, ou metionina por outro; asubstituição de um resíduo polar (hidrofílico) por outrotal como entre arginina e lisina, entre glutamina easparagina, entre glicina e serina; a substituição de umresíduo básico tal como lisina, arginina ou histidina poroutro; ou a substituição de um resíduo ácido tal como ácidoaspártico ou ácido glutâmico por outro. A substituiçãoconservadora de aminoácido também inclui substituir ümresíduo com um resíduo quimicamente derivado, desde que oresíduo resultante mantenha afinidade de ligação dopolipeptídeo de referência para tiramina. Exemplos de TyrRsincluem, mas não são limitados a: TyrRs, tal como, TyrR deDrosophila melanogaster (GENBANK® número de acessão (GAN)CAA38565), TyrR de Locusta migratória (GAN: Q25321), TyrRsde outros invertebrados, e TyrRs de nematóides, incluindoAscaris.

Em algumas modalidades, outros receptores, taiscomo os receptores acoplados de G-proteína (GPCRs), sejacom afinidade nativa para tiramina ou para outros ligantes,podem ser empregados em métodos de triagem de composiçõesúteis para tratar uma .infecção parasítica. Exemplos dereceptores que podem . ser usados incluem, mas não sãolimitados a: Anopheles gambiae (GAN: EAA07468), Heliothisvirescens (GAN: Q25188), Mamestra brassicae (GAN:AAK14402), Tribolium castaneum (GAN: XP_970290) , Aedesaegypti (GAN: EAT41524), Boophilus microplus (GAN:CAAO9335); Schistosoma mansoni (GAN: AAF73286); eSchistosoma mansoni (GAN: AAW21822).

Alguns dos receptores aqui revelados são dereferência cruzada aos números de acesso GENBANK®. Asseqüências de referência cruzada no banco de dados GENBANK®são expressamente incorporadas mediante referência comoseqüências presentes equivalentes e relacionadas noGENBANK® ou em outros bancos de dados públicos. Tambémexpressamente incorporados aqui como referência estão todasas anotações presentes no banco de dados de GENBANK®associadas com as seqüências aqui reveladas.Conforme aqui usado, o termo "afinidade deligação de receptor" se refere a uma interação entre umacomposição ou componente, por exemplo, composto, e um sitiode ligação do receptor. A interação entre uma composição oucomponente, e o sitio de ligação do receptor, pode ser

identificada como especifica ou não especifica. Em algumasmodalidades, a especificidade de uma interação entre umacomposição ou componente, e um sitio de ligação do TyrR,pode ser determinada da seguinte maneira. Uma mosca do tiposilvestre (Drosophila melanogaster) e uma mosca mutante são

providas, onde a mosca mutante não tem um TyrR. As moscasdo tipo silvestre e mutantes são expostas a uma composiçãoou componente de interesse. Se a exposição afetarnegativamente a mosca/do tipo silvestre, (por exemplo,abatimento, morte) , ma,s não afeta negativamente a mosca

mutante, então o tratamento com a composição ou componentede interesse pode ser considerado como especifico para oTyrR. Se a exposição afetar negativamente a mosca do tiposilvestre e a mosca mutante, então o tratamento com acomposição ou componente de interesse pode ser considerado

como não especifico para o TyrR.

Uma "elevada afinidade de ligação de receptor"pode ser uma interação especifica entre uma composição oucomponente, e o sitio de ligação do receptor. Em algumasmodalidades, uma elevada afinidade de ligação de receptor é

encontrada quando a constante de equilíbrio de dissociação(Kd) é inferior a aproximadamente IOOnM, 75nM, 50nM, 25nM,20nM, IOnM, 5nM ou 2nM. Em algumas modalidades, uma elevadaafinidade de ligação de receptor é encontrada quando aconstante de equilíbrio de dissociação de inibidor (Ki) é

inferior a. aproximadamente ΙΟΟμΜ, 75μΜ, 50μΜ, 25μΜ, 20μΜ,ΙΟμΜ, 5μΜ ou 2μΜ, quando competindo com tiramina. Emalgumas modalidades, a elevada afinidade de ligação dereceptor é encontrada quando a concentração efetiva na quala ligação de tiramina é inibida em 50% (EC50) é inferior aaproximadamente 500μΜ, 400μΜ, 300μΜ, 100μΜ, 50μΜ, 25μΜ ou10μΜ.

Uma "baixa afinidade de ligação de receptor" podeser uma interação não especifica entre uma composição oucomponente, e o sitio de ligação do receptor. Em algumasmodalidades, uma baixa afinidade de ligação de receptor éencontrada quando a constante de equilíbrio de dissociação(Kd) é maior do que aproximadamente 100nM, 125nM, 150nM,175nM, 200nM, 225nM, ou 250nM. Em algumas modalidades, umabaixa afinidade de ligação de receptor é encontrada quandoa constante de.equilíbrio de dissociação de inibidor (Ki) ésuperior a aproximadamente 100μΜ, 125μΜ, 150μΜ, 175μΜ,200μΜ, 225μΜ ou 250μΜ, quando competindo com tiramina. Emalgumas modalidades, uma baixa afinidade de ligação dereceptor é encontrada quando a concentração eficaz na quala ligação de tiramina" é inibida em 50% (EC50) é maior doque aproximadamente 500μΜ, 625μΜ, 750μΜ, 875μΜ, 1000μΜ,1125μΜ ou 1250μΜ.

A meigos que seja definido de outra forma, todosos termos técnicos e científicos aqui usados têm o mesmosignificado conforme comumente entendido por aquelesversados na técnica a qual pertence à matéria presentementerevelada. Embora quaisquer métodos e materiais similares ouequivalentes àqueles descritos aqui possam ser usados naprática ou no teste da matéria presentemente revelada,métodos e materiais representativos são descritos agora.

Seguindo a convenção de leis de patente de longaduração, os termos "um", "uma", e "o" se referem a "um oumais" quando usado nesse pedido, incluindo asreivindicações. Desse modo, por exemplo, referência a "umacélula" inclui uma pluralidade de tais células e assim pordiante.

A menos que seja de outra forma indicado, todosos números expressando quantidades de ingredientes;propriedades tais como condições de reação; e assim pórdiante, usados no relatório descritivo e reivindicaçõesdevem ser entendidos como sendo modificados em todas asinstâncias pelo termo "aproximadamente". Conseqüentemente,a menos que seja indicado o contrário, os parâmetrosnuméricos apresentados nesse relatório descritivo e nasreivindicações são aproximações que podem variar dependendodas propriedades desejadas que se procura obter porintermédio da matéria presentemente revelada. Conforme aquiusado, o termo "aproximadamente", ao se referir a um valorou a uma quantidade de massa, peso, tempo, volume,concentração, ou percentagem tem o propósito de abrangervariações, em algumas modalidades, de ±20%, em algumasmodalidades ±10%, em algumas modalidades ±5%, em algumasmodalidades ±1%, em algumas modalidades ±0,5%, e em algumasmodalidades ±0,1% da quantidade especificada, taisvariações são apropriadas para realizar o método revelado.

A matéria presentemente revelada é ilustradaadicionalmente pelos exemplos específicos, porém não-limitadores a seguir. Os exemplos a seguir podem incluircompilações de dados que são representativos de dadosrecolhidos em vários momentos durante o curso dodesenvolvimento e da experimentação relacionados à matériaatualmente revelada. Os exemplos a seguir incluem exemplosproféticos.EXEMPLOSEXEMPLOS 1-3

Um exemplo de um parasita que comumente infeta osseres humanos é o Hymenolepsis nana, que é um parasitaintestinal. 0 H. nana é um verme difícil de eliminar dointestino humano. Vide John Rim, Treatment of Hymenolepisnana infection, Post-Graduate Doctor Journal. Middle EastEdition, 5:330-334, 1985. O H. nana é encontrado no mundotodo e a infecção pode ocorrer em seres humanos de qualqueridade, contudo, devido a maior probabilidade de exposiçãoàs fezes humanas, crianças pequenas têm mais alto risco decontrair himenolepiase, a doença associada à infecção de H.nana.

O H. nana tem um ciclo de vida característico deaproximadamente 7 dias. Quando um hospedeiro tiver sidoinfectado, os ovos de H. nana passam para o íleo dointestino delgado e se transformam em oncoesferas, larva deH. nana capaz de mover-se, que penetra na lâmina própria dacavidade do intestino delgado. Dentro de aproximadamente 3a 4 dias, a larva amadurece em cisticercóides pré-adultos,que então entra no lúmen do intestino, se fixando à mucosada cavidade do intestino delgado. Muitas infecções sãoassintomáticas, impedindo que alguns indivíduos infectadosprocurem tratamento médico e sejam curados. Formassintomáticas da infecção são caracterizadas porirritabilidade, diarréia, dor abdominal, sono agitado,prurido anal, prurido nasal, distúrbio de comportamento, econvulsões.

Nos presentes Exemplos, Hymenolepis nana éselecionado como um parasita exemplar usado para estudar aeficácia in vitro e in vivo de composições reveladas aquipara tratar infecções parasíticas. Camundongos suíçosalbinos criados em laboratório são usados como animaishospedeiros. Machos e fêmeas não infectados são usados.Fêmeas prenhas são isoladas de outros camundongos. Osfilhotes recém-nascidos são mantidos para evitar a infecçãodos mesmos. Os camundongos-mãe são verificados duas vezèssemanalmente mediante coloração fecal salina direta e aamostra negativa é outra vez examinada mediante flotação decentrifugação em sulfato de zinco e técnicas desedimentação de solução salina para excluir aquelesparasitologicamente infectados. Vide Melvin and Brooke,Laboratory procedures for the diagnosis of intestinalparasites. DHEW Publications N0 (CDC) 76-828, Public HealthServices, 1975, incorporado aqui mediante referênciaintegralmente.

Após desmamar a ninhada, os camundongos sãoexaminados duas vezes semanalmente e a ninhada não-infectada é usada para os exemplos. Os camundongos sãomantidos sob condições, higiênicas rigorosas e alimentadosuma vez ao dia com leite e no outro dia com trigo. Dieta eágua são disponíveis ad libitum.

Ovos de H. nana, livres de resíduos, estimuladosa partir de segmentos prenhes são usados para infecção.Vide Ito, In vitro oncospheral agglutination given byimmune sera from miçe infected and rabbits injected witheggs of Hymenolepis . nana. Parasito, 71: 465, 1975,incorporado aqui como referência integralmente. Antes dainoculação, as cascas dos ovos são retiradas e cadacamundongo é inoculado com um número conhecido de ovos paramanter o ciclo de infecção. Vide Bernetzen and Voge, Invitro hatching of oncosphere of Hymenolepidid cestodes. J.Parasitol., 5:235, 1965, incorporado aqui integralmente.

A dose máxima tolerada (MTD) de cada agente deteste é determinada antes de se iniciar o estudo in vivo.Camundongos com 5 semanas de idade sem verme (25-30 gramas)são usados no experimento. Cada camundongo é inoculado com150 ovos. Eles são então subdivididos em grupos, cada grupocontendo 15 camundongos. Cada um desses grupos éespecificado para testar a eficácia de um agente de testecomo uma droga terapêutica potencial contra verme adulto deHymenolepis nana. Um grupo de controle composto de 15camundongos também é infectado com o mesmo número de ovos,porém não é submetido aos agentes de teste. A infecção émonitorada e uma contagem básica de ovos a partir das fezesé determinada para cada camundongo (grupos experimentais ede controle).

EXEMPLO 1

As composições a seguir foram individualmentetestadas para efeitos antiparasitico contra H. nana invivo: Rxl - óleo de cuminho de semente preta; Rx2 - óleo deflor lilás; Rx3 - óleo .de timo (branco); Rx4 - carvacrol;Rx5 - geraniol; Rx6 - cineol; e Rx7 - óleo de gaultéria;Rx8 - óleo-V3 de flor lilás; Rx9 - trans-anetol; RxlO - p-cimeno; Rxll - timol.

Cada camundongo nos grupos experimentais foiinoculado oralmente com 400 mg/kg de peso corpóreo docomposto de teste especificado (Rx) diariamente por 5 diassucessivos começando 24 horas após a detecção dos ovos nasfezes. Ao mesmo tempo, cada camundongo do grupo de controlefoi inoculado oralmente com 400 mg/kg de peso corpóreoapenas do material em suspensão, isto é, óleo de soja,diariamente por 5 dias sucessivos. A contagem de ovos decada camundongo (experimental e de controle) foideterminada diariamente durante os períodos de tratamento epara 2 dias adicionais após a última dose do tratamento. Noterceiro dia após a última dose do tratamento a taxa decura foi determinada. Os critérios para a cura sãoavaliados de acordo com: (1) determinação da taxa deredução de ovos; e (2) a ausência de vermes adultos. 0camundongo sendo avaliado foi sacrificado mediantedecapitação e o intestino delgado foi dissecado paradetecção dos vermes adultos.

Com referência à Tabela 1 e à Figura 1 a taxa decura variou entre aproximadamente 30% a aproximadamente 70%após tratamento com os compostos testados. Um animalinfectado foi determinado como estando curado quando eleestava completamente livre de vermes e ovos no momento daavaliação. Várias composições mostraram uma taxa de curasignificativa, incluindo: Rx2 (taxa de cura: 71,4%), Rx5(taxa de cura: 66,6%), e Rx7 (taxa de cura: 60%).

Tabela 1

<table>table see original document page 47</column></row><table>

A dissecação após o tratamento dos camundongosinfectados positivamente mostrou o seguinte: os vermesestavam intactos, vivos, e ativos; o escólex (cabeça) doverme estava intacto mantendo sua característica anatômicacom rostelo em movimento e chupadores em contração; opescoço, que é considerada a área de segmentação(produzindo novos segmentos), estava intacto; e o estróbilo(o corpo do verme) estava intacto, mantendo sua característicaanatômica com 3 grupos de segmentos (segmentos imaturos ousegmentos com órgãos reprodutores imaturos, segmentos madurosou segmentos com órgãos reprodutivos maduros, e segmentosprenhes ou segmentos com útero cheio de ovos maduros). Osvermes estavam ausentes ou mortos nos camundongos tratados pordias consecutivos com Rx2 (71%), Rx5 (67%), e Rx7 (60%). j

Esses experimentos também podem ser conduzidos parase estudar a eficácia do tratamento das composiçõespresentemente reveladas contra Trichuris trichiura in vivo.

EXEMPLO 2

Os compostos são combinados para produzir ascomposições tendo propriedades antiparasiticas aqui reveladas.As composições testadas são apresentadas na Tabela 2. Um "X"em uma célula da tabela indica que um composto específico éincluído em uma composição de teste específica. Por exemplo,na coluna rotulada "SI", existe um X na linha apresentandotimol. Como tal, a composição "SI" inclui timol. A composiçãoSl inclui ainda carvacrol, trans-anetol, e p-cimeno.

TABELA 2

<table>table see original document page 48</column></row><table>Cada camundongo nos grupos experimentais éinoculado oralmente com 400 mg/kg de peso corpóreo dacomposição de teste especificada diariamente por 5 diassucessivos. Ao mesmo tempo, cada camundongo do grupo decontrole é inoculado oralmente com 400 mg/kg de pesocorpóreo diariamente por 5 dias sucessivos apenas domaterial de suspensão, isto é, óleo de soja. A contagem deovos de cada camundongo (experimental e controle) édeterminada diariamente durante os períodos de tratamento epor 2 dias adicionais após a última dose do tratamento. Noterceiro dia após a última dose do tratamento a taxa decura é determinada. Os critérios para cura são avaliados deacordo com: (lj determinação da taxa de redução de ovos; e(2) a ausência de vermes adultos. 0 camundongo sendoavaliado é sacrificado mediante decapitação e o intestinodelgado é dissecado para detecção dos vermes adultos.

Espera-se que a taxa de cura esteja entreaproximadamente 25%. e 80% após tratamento com ascomposições Sl a S16. Um animal infectado é determinadocomo estando curado quando ele está completamente livre devermes e ovos no momento da avaliação. Os vermes estãoausentes ou mortos nos camundongos tratados por múltiplosdias consecutivos com as composições tendo taxas de cura deaproximadamente 60% ou superior.

Esses experimentos também podem ser conduzidospara estudar a eficácia do tratamento das composiçõespresentemente reveladas em relação a Trichuris trichiura invi vo.

EXEMPLO 3

Os compostos e composições de mistura a seguirforam individualmente testados para efeitos antiparasíticoscontra H. nana in vivo: (1) p-cimeno; (2) timol; (3) a-pineno; (4) linalol; (5) óleo de soja (controle); e (6)mistura de 30% de p-cimeno, 35% de timol, 4% de a-pineno, 7%de linalol, e 24% de óleo de soja, onde as percentagens sãoem peso.

Cada camundongo nos grupos foi inoculado oralmentecom 100 mg/kg de peso corpóreo do composto especificado ou dacomposição mesclada diariamente por 5 dias sucessivos. Acontagem de ovos de cada camundongo (experimental e decontrole) foi determinada diariamente durante os períodos detratamento e por mais 2 dias após a última dose dotratamento. Após o terceiro dia da última dose de tratamentoa taxa de cura foi determinada. Os critérios para a curaforam avaliados de acordo com: (1) determinação da taxa deredução de ovos; e (2) a ausência dos vermes adultos. Ocamundongo sendo avaliado foi sacrificado mediantedecapitação e o intestino delgado foi dissecado para detecçãodos vermes adultos.

Com referência à Figura 3, a taxa de cura variou de0%, para o óleo de soja (controle), a 100%, para a composiçãode mistura contendo 30% de p-cimeno, 35% de timol, 4% de a-pineno, 7% de linalol, e 24% de óleo de soja. A taxa de curarepresenta o número de animais infectados que demonstraramnenhum ovo em suas fezes e nenhum verme encontrado em seuintestino após tratamento" com os compostos testados.

TABELA 3

<table>table see original document page 50</column></row><table>Conforme indicado pelos dados acima, a composiçãode mistura tem um efeito sinergistico, em comparação com oscompostos indi viduais que são componentes da mistura. '*-0coeficiente de sinergia pode ser calculado para a misturfi,

em relação a cada composto individual, isto é, composiçãode comparação. Tais coeficientes de sinergia sãoapresentados na Tabela 4.

TABELA 4

<table>table see original document page 51</column></row><table>

Por exemplo, a razão de atividade para p-cimeno éde 7,52 porque o efeito da mistura é uma taxa de cura de100%, enquanto que o efeito de p-cimeno isoladamente é de13,3% [ (1, 00)/(0, 133)=7, 52] . 0 fator de ajuste deconcentração para p-cimeno é de 3,33 porque a misturacontém 30% de p-cimeno em comparação com 100% de p-cimenotestado isoladamente [ (1, 00)/ (0, 300)=3, 33] . O coeficientede sinergia da mistura, em relação a p-cimeno (Sp-cimeno) éportanto de 25,1 ["( (1, 00) / (0, 133) ) / (0, 300) =25, 1 ] . Comreferência adicional à Tabela 4, os coeficientes desinergia para a mistura são conforme a seguir: Sp-cimeno=25,1; Stimoi=8, 57; Sa-pineno=l00; e Siinai0i=61, 3 .EXEMPLO 4

No presente exemplo, Schistosoma mansoni éselecionado como um parasita exemplar usado para estudar aeficácia in vivo de composições reveladas aqui para tratarinfecções parasiticas. Avaliação da eficácia dascomposições testadas contra infecção de S. mansoni é comrelação à carga de vermes, proporção de vermes em relaçãoao sexo, distribuição dos vermes, fecundidade dos vermesfêmea, e deposição de ovos no fígado e intestino.

Camundongos suíços albinos fêmeas, com 8 semanasde idade, de 18-22 grama de peso, os quais podem serobtidos através do Theodore Bilharz research Institute,Cairo, são infectados de forma percutânea por cercárias deS. mansoni (100 cercárias/camundongos). Cada grupo consisteem 15 camundongos.

Para cada composição de teste, três concentraçõessão testadas. Para cada concentração nove grupos decamundongos são estudados. Um grupo de camundongosinfectados com S. mansoni recebe Praziquantel (PZQ), que éa droga antiesquitossomal padrão presente. Três grupos decamundongos não-infectados recebem o composto de teste namesma programação e concentração que os grupos de droga deteste. Um grupo de camundongos não-infectados, e não-tratados, e um grupo de camundongos infectados com S.mansoni que não recebem qualquer tratamento são mantidoscomo controle.

Três diferentes concentrações a partir de cadauma das composições de teste são determinadas apósestimativa de LD50. A programação para administração dadroga é como a seguir: (1) quatro dias após infecção (AI);(2) uma semana AI; e sete semanas AI. Praziquantel(Distocide), 600 mg/kg de peso corpóreo, é administradosete semanas após infecção. Todas as drogas sãoadministradas oralmente utilizando-se um tubo de estômago.

Para os estudos parasitológicos, contagens deovos fecais são feitas para todos os grupos infectados duasvezes semanalmente iniciando a partir da 5a semana apçsinfecção.

Os camundongos são sacrificados 9 semanas apósinfecção. A perfusão do sistema portal é feita pararecuperação dos vermes esquistossomos. São determinados onúmero total, sexo, maturação e distribuição dos vermes.Quatro porções, duas do jejuno e duas do ilio são colhidasa partir de cada camundongo, lavadas com PBS, abertas ecomprimidas entre duas lâminas e examinadasmicroscopicamente para detecção do estágio de maturação.0,3 gramas do fígado e do intestino são digeridas em 4% dehidróxido de potássio.; durante a noite, e ovos de S. mansonicontados.

EXEMPLO 5

Três grupos de camundongos são tratados com cadacomposto de teste ou mistura de composição de compostos.Para os Grupos 1 e 2, o tratamento inicia 4 e 7 dias após ainfecção, respectivamente. Para o grupo 3, o tratamentoinicia 7 semanas após a ,infecção. Para o grupo de controle,os camundongos são injetados 7 semanas após infecção comPraziquantel a 600 mg/kg. A eficácia dos agentes de teste édeterminada com base em: carga de vermes; proporção desexo; distribuição de vermes; fecundidade dos vermes fêmea;e deposição de ovos no fígado e intestino.

EXEMPLO 6

S. mansoni adultos machos e fêmeas foramcoletados a partir dos camundongos infectados etransferidos para 100 ml de solução salina tratada com ascomposições de teste Rxl-RxlO (conforme revelado no Exemplo1) ou Praziquantel em concentrações variadas e incubadas a37 C em 5% de CO2. Em muitos casos machos θ fêmeas adultossão coletados como casais. A viabilidade dos vermes éexaminada sob um microscópio bi-nuclear. Os controles sãotratados em paralelo. 0 experimento é terminado seja quandotodos os vermes estão mortos nas amostras tratadas ouquando a primeira morte entre os controles é descoberta.

Cada um dos compostos foi testado individualmenteem diferentes concentrações e os dados a partir dessesexperimentos são apresentados na Figura 2. A seguir, cadacomposto foi testado por si próprio em concentração finalde 100 ppm e então as composições foram combinadas emproporções de 1:1 quando dois compostos foram combinados ouproporções de 1:1:1 quando três compostos foram combinadose cada composição combinada testada em concentração finalde 100 ppm. Os dados a partir desses experimentos sãoapresentados na Figura 3.

EXEMPLO 7

0 presente exemplo provê um tratamento de testede estudo in vitro de Histomonas meleagridis, um parasitaprotozoário causando histomonose (doença cabeça negra) emgalinhas e perus, utilizando os compostos reveladospresentes e composições de mistura dos compostos.

H.meleagridis é cultivado in vitro e preparadopara uso em frascos de vidro com tampa de rosca contendo 1ml em meio Dwyer e.. ,inoculados com 20.000 células. Oscompostos de teste e/ou composições são diluídos até asconcentrações apropriadas, de modo que a dose desejada éadministrada aos tubos em 0,1 ml. Cada tratamento éreplicado em culturas duplicadas. As culturas são incubadaspor 2 dias.

0 número de células de H. meleagridis/ml pode sercontado utilizando um hemocitômetro padrão (Neubauer) e onúmero efetivo de células/ml é informado.Cada composto e/ou composição é testado a 1; 0,1;0,01; 0,001 e 0,0001%. Os controles são incluídos como não-tratados e com solvente (etanol). Os dados dos experimentossão apresentados nas Figuras 4 e 5.

EXEMPLO 8

Trichuris trichiura é uma infecção mundial pornematódio comum. A mais alta prevalência ocorre em climastropicais com práticas sanitárias insuficientes, uma vezque ele tem transmissão fecal/oral.

Trichuris trichiura não migra através dostecidos, e não causa eosinofilia. Ele pode sobreviver 6anos no hospedeiro (média de 3 anos), habitando nointestino grosso com sua cabeça embutida na mucosaintestinal, porém não existe virtualmente resposta celular.O diagnóstico de Trichuris trichiura é feito através dadescoberta dos ovos nas fezes.

A infecção com Trichuris trichiura freqüentementeé assintomática. Contudo, em infecção intensa em criançasdesnutridas, Trichuris trichiura pode causar prolapso retalapós diarréia crônica sanguinolenta.

Compostos e composições misturadas dos compostos,conforme aqui revelados, podem ser testados para atividadeanti-parasítica in vitr,o- utilizando os protocolos a seguir.Dez grupos (8 diferentes concentrações de composições e 2controles) podem ser testados. Os testes são realizados em6 placas de covinhas, estéreis, com 1-4 vermes por covinha.Cada covinha contém 3 ml de RPMI 1640 contendo uma solução10X de antibiótico/antimicótico(penicilina/estreptomicina/anfotercina B) para impedircrescimento excessivo dos organismos contaminadores.Mobilidade dos vermes é observada em todos os momentosiniciais, assim como 24 horas após o tratamento, isto é,após lavagem e colocação em meios sem compostos de teste.Conforme indicado, oito concentrações e doiscontroles são testados. Os controles indicados para essestestes serão: um controle surfactante e um controle demeios. 0 protocolo utiliza 5-10X das concentrações finaisdos compostos de teste a serem adicionados acionados aosmeios no momento do teste.

Quando o teste é iniciado, a mobilidade éverificada em 15, 30, 60, 120, 240 e 360 minutos após otratamento. Após o último momento, os vermes são removidosdos meios tratados, enxaguados e colocados em meios não-tratados. Uma última verificação de mobilidade é realizada24 horas após o tratamento. Os vermes não observados comocapazes de mover-se são cutucados com um bastão aplicadorde madeira estéril (esterilizado) para confirmar a ausênciade resposta.

EXEMPLO 9

Compostos e composições misturadas dos compostos,conforme aqui revelados, podem ser testados para atividadeantiparasitica in vitro utilizando os protocolos a seguir.Dez grupos (8 concentrações diferentes de composições e 2controles) podem ser testados. Os testes são realizados emfrascos estéreis de 150 cm3 com 1-2 vermes por frasco. Cadafrasco contém 200 ml de RPMI 1640 contendo uma solução de10X de antibiótico/antimicótico(penicilina/estreptomicina/anfotercina B) para prevenir ocrescimento excessivo de organismos contaminadores. Amobilidade dos vermes é observada em todos os momentosiniciais, assim como 24 horas após tratamento, isto é, apóslavagem e serem colocados em meios sem compostos de teste.

Como indicado, oito concentrações e doiscontroles são testados. Os controles indicados para essestestes serão: .um controle surfactante e um controle demeios. O protocolo utiliza 5-10X das concentrações finaisdos compostos de testes a serem adicionados aos meios nomomento do teste.

Quando o teste é iniciado, a mobilidade éverificada em 15, 30, 60, 120, 240 e 360 minutos após otratamento. Após o último momento, os vermes são removidosdos meios, enxaguados e colocados em meios não tratados.Uma última verificação de mobilidade é realizada 24 horasapós o tratamento. Os vermes que não foram observados comocapazes de mover-se são cutucados com um bastão aplicadorde madeira estéril (esterilizada) para confirmar a ausênciade resposta.

EXEMPLO 10

Uma composição de teste exemplar é usada, a qualcompreende: 7% (volume/volume) de linalol; 35%(volume/volume) de timol; 4% (volume/volume) de alfa-pineno; 30% (volume/volume) de p-cimeno; e 24%(volume/volume) de óleo de soja. As doses de teste são: 1mg/kg de Peso Corpóreo (PC), 10 mg/kg de PC, 20 mg/kg dePC, e 100 mg/kg de PC.

Os critérios de cura usados para os experimentossão: (1) tempo de exposição e nivel de dose eficaz paraproduzir 100% de extermínio de H. nana em um mínimo de 80%de camundongos infectados (por exemplo, cura = 0 vermesvivos no intestino e 0 ovos vivos nas fezes) . 0 ciclo devida curto de H. nana pode facilitar os testes profiláticosrápidos. O H. nana tem aproximadamente 14 dias de ciclo devida a partir da infecção de ovos até maturação e posturados ovos.

Vários protocolos de administração sãoimplementados para testar a eficácia da composição exemplarcontra infecção. Em um primeiro protocolo, uma dose oral éadministrada a 5 grupos de camundongos por intermédio deuma cápsula de gel 3 dias antes da infecção e diariamenteaté os camundongos serem sacrificados. Em um segundoprotocolo, uma dose oral é administrada a 5 grupos decamundongos por intermédio de uma cápsula de gel 3 semanasantes da infecção e diariamente até os camundongos seremsacrificados. Em um terceiro protocolo, uma dose oral éadministrada a 5 grupos de camundongos por intermédio deuma cápsula de gel diariamente começando 3 semanas antes dainfecção, e o tratamento é descontinuado após a infecçãoaté os camundongos serem sacrificados. Os grupos decontrole de camundongos em cada um dos protocolos sãodosados apenas com óleo de soja. Os dados dos trêsprotocolos utilizando diferente mg/kg de PC da composiçãode teste exemplar são apresentados nas Tabelas 5-8.

TABELA 5

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TABELA 6

<table>table see original document page 58</column></row><table><table>table see original document page 59</column></row><table>

TABELA 7

<table>table see original document page 59</column></row><table>

TABELA 8

<table>table see original document page 59</column></row><table>TABELA 9

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EXEMPLO 11

Uma composição de teste exemplar é usada, a qualcompreende: 7% (volume/volume) de linalol; 35%(volume/volume) de timol; 4% (volume/volume) de alfa-pineno; 30% (volume/volume) de p-cimeno; e 24%(volume/volume) de óleo de soja.

Grupos de teste de camundongos são providos parainfecção e tratamento, cada um deles contendoaproximadamente 20 camundongos (por exemplo, 5 grupos deteste χ 20 camundongos por grupo de teste = 100camundongos). Os animais são selecionados e examinados paracertificar de que eles estão livres de vermes. Os grupos detestes seguintes são designados como estando infectados epara receber o seguinte tratamento:

Grupo 1: apenas carreador de óleo de soja;

Grupo 2: composição de 1 mg/kg de peso corpóreo (PC);

Grupo 3: composição de 10 mg/kg de PC;

Grupo 4: composição de 20 mg/kg de PC; e

Grupo 5: composição de 100 mg/kg de PC.Um grupo de controle adicional que não estáinfectado pode ser provido e administrado à composiçãoexemplar.

Os grupos de teste de camundongos designados parainfecção são infectados. Aproximadamente 150 ovos vivos porcamundongo são determinados como úteis para infectar oscamundongos de tal modo que a exposição do animal de testeao estágio infeccioso do parasita é preditiva de exposiçãoambiental realista.

Uma dose oral é administrada por intermédio deuma cápsula de gel aos grupos de teste de camundongos nosdois dias após a liberação dos ovos ser observada. A doseoral é administrada diariamente até que os camundongossejam sacrificados. A meia vida das doses de composiçãoexemplar pode ser determinada em sangue de mamífero paraorientar a especificação dos regimentos profiláticos eterapêuticos.

EXEMPLO 12

Estudos de resistência das composiçõesexemplares são conduzidos.,Uma composição de teste exemplaré usada, a qual compreende: 7% (volume/volume) de linalol;35% (volume/volume) de timol; 4% (volume/volume) de alfa-pineno; 30% (volume/volume) · de p-cimeno; e 24%(volume/volume) de óleo de soja.

Os grupos de teste de camundongos são providos,cada um deles contendo aproximadamente 20 camundongos (porexemplo, 5 grupos de teste χ 20 camundongos por grupo deteste = 100 camundongos). Os animais são selecionados eexaminados para garantir que eles estejam livres de vermes.Os grupos de teste seguintes são designados para sereminfectados e para receber o seguinte tratamento:

Grupo 1: apenas carreador de óleo de soja;

Grupo 2: composição de 1 mg/kg de peso corpóreo(PC) ;

Grupo 3: composição de 10 mg/kg de PC;

Grupo 4: composição de 20 mg/kg de PC; e

Grupo 5: composição de 100 mg/kg de PC.

Um grupo de controle adicional que não estáinfectado pode ser provido e administrado à composiçãoexemplar.

Grupos de teste de camundongos designados parainfecção são infectados. Aproximadamente 150 ovos vivos porcamundongo são determinados como sendo úteis para infectaros camundongos de tal modo que exposição do animal de testeao estágio infeccioso do parasita é preditivo de exposiçãoambiental realista. O DNA alvejado dos ovos usados para ainfecção inicial é seqüenciado antes do tratamento com ascomposições exemplares, para ser usado como uma seqüênciade controle.

Uma dose oral é administrada por intermédio deuma cápsula de gel aos grupos de teste de camundongos emdois dias após a liberação dos ovos ser observada. A doseoral é administrada diariamente até que os camundongossejam sacrificados. Os ovos vivos são contados e coletados.Os ovos vivos coletados são usados para re-infectar o grupode teste de animais previamente não-infectados, os quaissão então tratados com a composição exemplar comoanteriormente. A etapa é repetida, por um total de trêscontagens e coletas de ovos vivos. Após a terceira contageme coleta de ovos vivos, o DNA alvejado de ovo vivo éseqüenciado.

Supõe-se que o parasita passou por três ciclosreprodutivos. A seqüência de DNA não exposta de controlepode ser comparada com a seqüência de DNA alvejado obtido apartir dos ovos após o terceiro ciclo, tendo trêsexposições sucessivas às composições de tratamentoexemplares. A resistência é determinada medianteconsideração: nenhuma mudança na seqüência de DNA alvejadoexposta versus seqüência de DNA alvejado de controleresulta em uma ou mais mudanças de aminoácido.

EXEMPLO 13

Estudos de segurança das composições exemplaressão conduzidos. Os estudos de segurança incluem testes detoxicidade aguda (descoberta de faixa), em estudos detoxicologia genética in vitro, e estudo de toxicidade sub-crônica em roedores (90 dias); conduzidos de acordo comPráticas Adequadas de Laboratório (GLP).

Os animais são expostos a doses diárias dacomposição terapêutica sendo testada. Por exemplo, umacomposição de teste : exemplar pode ser usada, a qualcompreende: 7% (volume/volume) de linalol; 35%(volume/volume) de timol; 4% (volume/volume) de alfa-pineno; 30% (volume/volume) de p-cimeno; e 24%(volume/volume) de óleo de soja. Os grupos de testeseguintes são designados para receber o seguintetratamento:

Grupo 1: apenas carreador de óleo de soja;

Grupo 2: 0,07 g/kg de peso corpóreo (PC) por dia;

Grupo 3: 0,7 g/kg de PC por dia; e

Grupo 4: 7 g/kg de PC por dia.

Todos os testes de observação e clínicosapropriados (incluindo histopatologia) são realizados paraavaliar quaisquer efeitos relacionados ao tratamento.Medidas de segurança (vide Tabela 10) são feitas em IOOX adose eficaz utilizando um protocolo de eficáciaprofilática. Por exemplo, se a dose eficaz é de 10 mg/kg, adose de teste de segurança é de 1 g/kg.TABELA 10

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A palatabilidade relativa das composiçõesexemplares também é testada. Combinações sinergisticas doscompostos podem ser designadas para favorecer os compostoscom palatabilidade preferida.

EXEMPLO 14

Um gene receptor codificando o receptor deTiramina (TyrR) foi isolado a partir da barata americana,mosca de fruta, mosquito, e outros organismos. A presentematéria provê· métodos de utilização da proteína TyrRexpressa nas células para triagem de compostos úteis paratratar infecções parasíticas.No presente exemplo, os genes codificando TyrRforam incorporados nas células modelo em cultura que imitaos receptores em insetos. O processo de triagem utiliza ascélulas cultivadas em combinação com ensaios de medição de[Ca2-]i e [cAMP]i para determinar quantitativamente faeficácia do composto de teste para tratar infecçõesparasiticas. O processo de triagem permite a identificaçãodos compostos que produzem composições antiparasiticasaltamente eficázes.

As etapas do ensaio são como a seguir. Uma célulaexpressando um receptor de tiramina é contatada com ocomposto de teste e a afinidade de ligação de receptor docomposto de teste é medida. Niveis de cAMP e/ou Ca2+ dentroda célula também são monitorados e quaisquer mudanças apartir do contato do composto de teste com a célula sãoanotadas para cada composto testado. Um composto de teste éidentificado como um potencial composto terapêutico se eleapresentar uma elevada afinidade de ligação de receptorpara receptor de tiramina assim como uma capacidade deefetuar mudança nos níveis de cAMP e/ou Ca2+ dentro dacélula. Um composto de teste também é identificado como umcomposto terapêutico potencial se ele exibir uma baixaafinidade de ligação de receptor para o receptor detiramina assim como uma capacidade de realizar mudança nosníveis de cAMP e/ou Ca2+ dentro da célula. A composiçãopara uso no tratamento de uma formulação parasítica podeser então selecionada, isso inclui uma pluralidade doscompostos identificados. Especificamente, a composição podecompreender ao menos um composto identificado como tendouma elevada afinidade de ligação de receptor para oreceptor de tiramina assim como uma capacidade de efetuarmudança nos níveis de cAMP e/ou Ca2+ dentro da célula e aomenos um composto adicional identificado como tendo umaba ix3 afinidade de ligação de receptor paira o receptor detiramina assim como uma capacidade de efetuar mudança nosníveis de cAMP e/ou Ca2+ dentro da célula.

A Tabela 11 relaciona os compostos testados com opresente método de triagem e a capacidade determinada decada composto em ligar o receptor de tiramina, efetuarmudanças no Ca2+ intracelular, e no cAMP intracelular.Esses resultados podem ser então utilizados para selecionaruma composição compreendendo dois ou mais dos compostostestados com características desejáveis. Por exemplo, p-cimeno e linalol podem ser selecionados para inclusão emuma composição para tratar infecções parasíticas de acordocom os critérios do método de triagem uma vez que p-cimenoexibe baixa afinidade de ligação de receptor de tiramina,linalol exibe elevada afinidade de ligação de receptor detiramina, e ambos os compostos realizam mudança nos níveisde cAMP e/ou Ca2+. Similarmente, p-cimeno e timol podem serselecionados para incluir uma composição para tratarinfecções parasíticas de acordo com os critérios do métodode triagem uma vez que p-cimeno exibe baixa afinidade deligação de receptor, timol exibe elevada afinidade deligação de receptor de tiramina, e ambos os compostosrealizam mudanças nos níveis de cAMP e/ou Ca2+. Além disso,as composições para tratar infecções parasíticas podem serformuladas, isso incluem mais do que dois compostos, talcomo, por exemplo, uma composição que inclui alfa-pineno,p-cimeno, linalol, timol, e óleo de soja. Pode serpreferível formular uma composição que exiba um efeitoantiparasítico excedendo o efeito antiparasítico dequalquer um dos compostos quando usado isoladamente.TABELA 11

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Claims (54)

1. Composição para tratar uma infecção parasíticaem um indivíduo, compreendendo dois, ou mais, compostosselecionados a partir de: trans-anetol, para-cimeno,linalol, alfa-pineno, e timol, em que a composiçãodemonstra um efeito antiparasitico que excede àquele dequalquer um de ,-seus componentes.

2. Composição da reivindicação 1 compreendendodois ou mais compostos selecionados a partir de: para-cimeno, linalol, alfa-pineno, e timol.

3. Composição da reivindicação 1 compreendendotrês ou mais compostos selecionados a partir de: para-cimeno, linalol, alfa-pineno, e timol.

4. Composição da reivindicação 1 compreendendopara-cimeno, linalol, alfa-pineno, e timol.

5. Composição da reivindicação 5, e compreendendoadicionalmente óleo de soja.

6. Composição da reivindicação 5 compreendendoaproximadamente 25-35% em peso de para-cimeno,aproximadamente 1-10% em peso de linalol, aproximadamente 1-10%em peso de alfa-pineno, aproximadamente 35-45% empeso de timol, e aproximadamente 20-30% em peso de óleo desoja.

7. Composição da reivindicação 6 compreendendo:aproximadamente 28,39% em peso de para-cimeno,aproximadamente 6,6% em peso de linalol, aproximadamente 3,8% em peso de alfa-pineno, aproximadamente 37,2% em pesode timol, e aproximadamente 24% em peso de óleo de soja.

8. Composição da reivindicação 5 compreendendo:aproximadamente 25-35% em volume de para-cimeno,aproximadamente 1-10% em volume de linalol, aproximadamente - 1-10% em volume de alfa-pineno, aproximadamente 35-45% emvolume de timol e aproximadamente 20-30% em volume de óleode soja.

9. Composição da reivindicação 8 compreendendo:aproximadamente 30% em volume de para-cimeno,aproximadamente 7% em volume de linalol, aproximadamente 4%em volume de alfa-pineno, aproximadamente 35% em volume detimol, e aproximadamente 24% em volume de óleo de soja.

10. Composição da reivindicação 1 compreendendotrês ou mais compostos selecionados a partir de: trans-anetol, para-cimeno, linalol, alfa-pineno, e timol.

11. Composição da reivindicação 10 compreendendoquatro ou mais compostos selecionados de: trans-anetol,para-cimeno, linalol, alfa-pineno, e timol.

12. Composição da reivindicação 10 compreendendo:trans-anetol, para-cimeno, linalol, alfa-pineno, e timol.

13. Composição da reivindicação 12 compreendendo:aproximadamente 15-25% em peso de trans-anetol,aproximadamente 30-4.0% em peso de para-cimeno,aproximadamente 1-10% . em peso de linalol, aproximadamente-1-10% em peso .de alfa-pineno, e aproximadamente 35-45% empeso de timol.

14. Composição da reivindicação 13 compreendendo:aproximadamente 18,2% em peso de trans-anetol,aproximadamente 34,4% em peso de para-cimeno,aproximadamente 4,7% em peso de linalol, aproximadamente1,9% em peso de alfa-pineno, e aproximadamente 40,8% empeso de timol.

15. Composição da reivindicação 12 compreendendo:aproximadamente 10-20% em volume de trans-anetol,aproximadamente 30-40% em volume de para-cimeno,aproximadamente 1-10% em volume de linalol, aproximadamente-1-10% em volume de alfa-pineno, e aproximadamente 35-45% emvolume de timol.

16. Composição da reivindicação 15 compreendendo:aproximadamente 17% em volume de trans-anetol,aproximadamente 37% em volume de para-cimeno,aproximadamente 5% em volume de linalol, aproximadamente 2%em volume de alfa-pineno, e aproximadamente 39% em volumede timol.

17. Composição da reivindicação 12 compreendendo:aproximadamente 15-25% em peso de trans-anetol,aproximadamente 1-10% em peso de para-cimeno,aproximadamente 35-45% em peso de linalol, aproximadamente1-10% em peso de alfa-pineno, e aproximadamente 30-40% empeso de timol.

18. Composição da reivindicação 17 compreendendo:aproximadamente 18,2% em peso de trans-anetol,aproximadamente 1,9% em peso de para-cimeno,aproximadamente 40,8% em peso de linalol, aproximadamente4,7% em peso de alfa-pineno, e aproximadamente 34,4% empeso de timol.

19. Composição da reivindicação 12 compreendendo:aproximadamente 15-2,5% em volume de trans-anetol,aproximadamente 1-10% em volume de para-cimeno,aproximadamente 35-45% em volume de linalol,aproximadamente 1-10% em volume de alfa-pineno, eaproximadamente 30-40% em volume de timol.

20. Composição da reivindicação 19 compreendendoaproximadamente 17% em volume de trans-anetol,aproximadamente 2% em volume de para-cimeno,aproximadamente 39% em volume de linalol, aproximadamente5% em volume de alfa-pineno, e aproximadamente 37% emvolume de timol.

21. Composição da reivindicação 1 em que ao menosdois compostos da composição em conjunto demonstram umefeito antiparasitico sinergistico.

22. Composição da reivindicação 21 em que oefeito percentual efetivo da composição é maior do que oefeito percentual esperado da composição.

23. Composição da reivindicação 21 em que umcoeficiente de sinergia relativo a um componente dacomposição é maior do que 5, 10, 25, 50, 75 ou 100.

24. Composição da reivindicação 1 em que ainfecção parasitica ocorre por intermédio de um parasitaselecionado a partir de: um parasita protozoário, e umparasita helmirçtico.

25. Composição da reivindicação 24 em que oparasita é um protozoário.

26. Composição da reivindicação 25 em que oparasita é selecionado a partir de um protozoáriointestinal, um protozoário de tecido, e um protozoário desangue.

27. Composição da reivindicação 26 em que oparasita é selecionado a partir de: Entamoeba hystolytica,Giardia Iambliar Cryptosporidium muris, Trypanosomatidagambiense, Trypanosomatida rhodesiense, Trypanosomatidacrusi, Leishmania mexicana, Leishmania braziliensis,Leishmania tropica, Leishmania donovani, Toxoplasma gondii,Plasmodium vivax, Plasmodium ovale, Plasmodium malariae,Plasmodium falciparum, Trichomonas vaginalis, e Histomonasmeleagridis.

28. Composição da reivindicação 24 em que oparasita é um helminto.

29. Composição da reivindicação 28 em que oparasita é um nematódeo.

30. Composição da reivindicação 29 em que oparasita é um Adenophorea.

31. Composição da reivindicação 29 em que oparasita é um Secementea.

32. Composição da reivindicação 29 em que oparasita é selecionado a partir de: Trichuris trichiura,Ascaris lumbricoides/ Enterobius vermicularis, Ancylostomaduodenale, Necator amerieanus, Strongyloides stereoralis,Wuehereria banerofti, e Dracunculus medinensis.

33. Composição da reivindicação 28 em que oparasita é um trematódeo.

34. Composição da reivindicação 33 em que oparasita é selecionado a partir de fasciolas sangüíneas,fascíolas de fígado, fasciolas intestinais e fasciolaspulmonares.

35. Composição da reivindicação 34 em que oparasita é selecionado a partir de: Sehistosoma mansoni,Sehistosoma haematobium, Sehistosoma japonieum, Faseiolahepatiea, Faseiola gigantiea , Heterophyes heterophyes, eParagonimus westermani.

36. Composição da reivindicação 28 em que oparasita é selecionado a partir de cestódeos.

37. Composição da reivindicação 36 em que oparasita é selecionado a partir de Taenia solium, Taeniasaginata, Hymenolepis nana, Echinoeoceus granulosus.

38. Composição da reivindicação 1 em que oindivíduo é um mamífero.

39. Composição da reivindicação 38 em que oindivíduo é um ser humano.

40. Formulação compreendendo a composição dareivindicação 1 e um carreador.

41. Formulação da reivindicação 40 em que ocarreador é um produto alimentício.

42. Formulação compreendendo a composição dareivindicação 1 encapsulada ou microencapsulada com ummaterial de invólucro externo.

43. Método de tratar uma infecção parasítica emum indivíduo, compreendendo administrar uma quantidadeeficaz da composição da reivindicação 1 ao indivíduo.

44. Método de tratar uma infecção parasítica emum indivíduo, compreendendo administrar uma quantidadeeficaz da composição da reivindicação 3 ao indivíduo.

45. Método de tratar uma infecção parasítica emum indivíduo, compreendendo administrar uma quantidadeeficaz da composição da reivindicação 4 ao indivíduo.

46. Método de tratar uma infecção parasítica emum indivíduo, compreendendo administrar uma quantidadeeficaz da composição da reivindicação 5 ao indivíduo.

47. Método de tratar uma infecção parasítica emum indivíduo, compreendendo administrar uma quantidadeeficaz da composição da reivindicação 10 ao indivíduo.

48. Método de tratar uma infecção parasítica emum indivíduo, compreendendo administrar uma quantidadeeficaz da composição da reivindicação 11 ao indivíduo.

49. Método de tratar uma infecção parasítica emum indivíduo, compreendendo administrar uma quantidadeeficaz da composição da reivindicação 12 ao indivíduo.

50. Método de selecionar uma composição para usono tratamento de uma infecção parasítica, compreendendo:(a) prover uma célula expressando um receptor de tiramina;(b) contatar os compostos de teste com a célula;(c) medir a afinidade de ligação de receptor dos compostos;(d) medir ao menos um parâmetro selecionado a partir de,(i) nível de cAMP intracelular; e(ii) nível de Ca2+ intracelular;(e) identificar um primeiro composto para acomposição que seja capaz de alterar ao menos um dosparâmetros, e que tenha uma elevada afinidade de ligação dereceptor para o receptor de tiramina; e(f) identificar um segundo composto para acomposição que seja capaz de alterar ao menos um dosparametros, e que tenha uma baixa afinidade de ligação dereceptor para o receptor de tiramina; e(g) selecionar uma composição incluindo oprimeiro e o segundo composto.

51. Método da reivindicação 50 em que acomposição selecionada demonstra um efeito antiparasiticoque excede o efeito antiparasitico de qualquer um doscompostos quando usado isoladamente.

52. Método da reivindicação 50 em que o receptorde tiramina é um receptor de tiramina Drosophilamelanogaster.

53. Método da. reivindicação 50 em que o ao menosum parâmetro é nivel de cAMP intracelular.

54. Método da reivindicação 50 em que o ao menosum parâmetro é nivel de Ca2+ intracelular.