BRPI0616589A2

BRPI0616589A2 - polipeptìdeo, e, métodos para produzir um anticorpo para um polipeptìdeo, para reduzir ou inibir a inflamação e para tratar um mamìfero afligido com uma doença inflamatória

Info

Publication number: BRPI0616589A2
Application number: BRPI0616589-3A
Authority: BR
Inventors: Steven D Levin; Mark W Rixon; Zeren Gao; Katherine E Lewis; Janine Billsborough; David W Taft
Original assignee: Zymogenetics Inc
Priority date: 2005-09-28
Filing date: 2006-09-28
Publication date: 2011-06-28
Also published as: IL189726A0; KR20080056241A; DE602006016965D1; DK1931697T3; AU2006294511B2; AU2006294511A1; CA2621623A1; HK1112927A1; EP1931697B1; PT1931697E; EA200800956A1; EP1931697A2; CY1110856T1; WO2007038703A2; JP2009510093A; PL1931697T3; US20070238658A1; EA015351B1; ATE481424T1; WO2007038703A3

Abstract

POLIPEPTìDEO, E, MéTODOS PARA PRODUZIR UM ANTICORPO PARA UM POLIPEPTìDEO, PARA REDUZIR OU INIBIR A INFLAMAçãO E PARA TRATAR UM MAMìFERO AFLIGIDO COM UMA DOENçA INFLAMATóRIA. A presente invenção diz respeito a antagonistas de IL-17A e IL-17F. Os antagonistas da invenção são fundamentados apenas em IL-17RC ou tanto em IL-17RC quanto IL-17RA ("IL-17RC/IL-17RA"). Tais antagonistas servem para bloquear, inibir, reduzir, antagonizar ou neutralizar a atividade de IL-17F, IL-17A ou tanto de IL-17A quanto de IL-17F. IL-17A e IL-17F são citocinas que estão envolvidas em processos inflamatórios e doença humana. IL-17RA é um receptor para IL-17A e IL-17RC é um receptor comum tanto para IL-17A quanto IL-17F. A presente invenção inclui antagonistas de IL-17A e IL-17F solúveis, assim como métodos para usar os mesmos.

Description

"POLIPEPTÍDEO SOLÚVEL ISOLADO, MOLÉCULA DE ÁCIDONUCLÉICO ISOLADA, VETOR DE EXPRESSÃO, CÉLULACULTIVADA, MÉTODO PARA PRODUZIR UM POLIPEPTÍDEO, E,USOS DO POLIPEPTÍDEO SOLÚVEL, E, DE UM ANTAGONISTA DEIL-17A E/OU IL-17F"

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

As citocinas são proteínas solúveis, pequenas que medeiamuma variedade de efeitos biológicos, incluindo a regulagem do crescimento ediferenciação de muitos tipos de célula (ver, por exemplo, Arai et al., Annu.Rev. Biochem. 59: 783 (1990); Mosmann, Curr. Opin. Immunol. 3: 311(1991); Paul e Seder, Cell 76: 241 (1994)). As proteínas que constituem ogrupo de citocina incluem interleucinas, interferons, fatores estimuladores decolônia, fatores de necrose de tumor e outras moléculas regulatórias. Porexemplo, a interleucina-17 humana é uma citocina que estimula a expressãoda interleucina-6, molécula de adesão intracelular 1, interleucina-8, fatorestimulador de colônia de granulócito macrófago e a expressão daprostaglandina E2 e desempenha um papel na maturação preferencial deprecursores hematopoiéticos CD34+ em neutrófílos (Yao et al., J. Immunol.155: 5483 (1995); Fossiez et al, J. Exp. Med. 183: 2593 (1996)).

Os receptores que ligam citocinas são tipicamente compostosde uma ou mais proteínas de membrana integrais que ligam a citocina comalta afinidade e transduzem este evento de ligação para a célula através dasporções citoplasmáticas das certas subunidades receptoras. Os receptores decitocina foram agrupados em diversas classes com base nas similaridades emseus domínios de ligação de ligando extracelular.

As atividades demonstradas in vivo de citocinas e seusreceptores ilustram o potencial clínico de e a necessidade quanto a, outrascitocinas, receptores de citocina, agonistas de citocina e antagonistas decitocina. Por exemplo, as atividades demonstradas in vivo da família decitocina pró-inflamatória ilustra o enorme potencial clínico de e a necessidadequanto a antagonistas de moléculas pró-inflamatórias.DESCRIÇÃO RESUMIDA DOS DESENHOS

As Figuras IAelB são representações gráficas da estrutura doexon de ILA-17RCxl humana (SEQ ID NO: 2). Para aqueles aminoácidoonde códon foi unido pela junção de exon/intron, a junção foi movida paraincluir o códon inteiro.

As figuras 2A e 2B são representações gráficas da estrutura doexon de ILA-17RCx4 humana (SEQ ID NO: 166).

A Figura 3 é uma representação gráfica da estrutura do exonde ILA-17RA humana (SEQ ID NO: 21).

As Figuras 4A e 4B são representações gráficas da estrutura doexon de um polipeptídeo solúvel preferido da presente invenção como aquidescrito e nas SEQ ID NOs: 157 e 158. Este polipeptídeo solúvel compreendeexons tanto de ILA-17RA humana (SEQ ID NO: 21) quanto de ILA-17RCxlhumana (SEQ ID NO: 2).

A Figura 5 é uma representação gráfica de um resultado deensaio típico usando o protocolo esboçado no Exemplo 34. O gráfico foigerado usando o programa de software Prizm. Os valores Y representam oMFI normalizado para máximo e mínimo (100% e 0%) com base apenas noligando e nenhum ligando/nenhum reservatório de controle de receptorsolúvel e assim a ligação percentual do ligando às células. O software calculaa IC50 para cada curva.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A presente invenção trata estas necessidades pelofornecimento de antagonistas para as citocinas pró-inflamatórias ILA-17A eILA-17F. Especificamente, as citocinas pró-inflamatórias ILA-17A e ILA-17F têm um alto grau de similaridade de seqüência, compartilham muitaspropriedades biológicas e são ambas produzidas pelas células T ativadas.Ambas foram implicadas como fatores que contribuem para a progressão devárias doenças autoimunes e inflamatórias incluindo artrite reumatóide easma. De fato, os reagente que anulam a função de ILA-17Asignificantemente melhoram a incidência e a gravidade de doença em diversosmodelos de camundongo de doença humana. A ILA-17A medeia seus efeitosatravés da interação com seu receptor cognato, o receptor de ILA-17 (ILA-17R), mas o receptor para ILA-17F ainda não foi identificado. Anteriormente,nós relatamos que ILA-17RC é um receptor tanto para ILA-17A quanto ILA-17F e liga ambos com uma alta afinidade similar. O ILA-17R por outro lado,liga ILA-17A com alta afinidade, mas liga ILA-17F com afinidade muitobaixa. Compatível com isto, foi mostrado que uma forma solúvel de ILA-17Rbloqueia a ligação e sinalização de ILA-17A em células que expressam cadareceptor, mas não interfere com a ligação ou função de ILA-17F a ILA-17RC.

Visto que a intervenção de ILA-17A tem sido proposta comouma terapia eficaz para diversas doenças auto-imunes, o uso dos antagonistasda presente invenção, que podem bloquear, inibir, reduzir, antagonizar ouneutralizar a atividade de ILA-17A, ILA-17F ou tanto ILA-17A quanto ILA-17F, que incluem os receptores de ILA-17RC e ILA-17RC/ ILA-17RAsolúveis, terá vantagens em relação às terapias que alvejam apenas uma destasduas citocinas. A invenção fornece ainda usos para tal em doençainflamatória, assim como composições e métodos relacionados.

A) Vista Geral

As doenças imuno relacionadas e inflamatórias são amanifestação ou conseqüência de caminhos biológicos interconectadosbastante complexos, freqüentemente múltiplos que na fisiologia normal sãocríticos para responder a insulto ou dano, iniciar o reparo de insulto ou dano emontar a defesa inata e adquirida contra organismos estranhos. A doença oupatologia ocorre quando estes caminhos fisiológicos normais causam insultoou dano adicionais como diretamente relacionado com a intensidade daresposta, como uma conseqüência da regulagem anormal ou estimulaçãoexcessiva, como uma reação a si mesma ou como uma combinação destas.

Embora a gênese destas doenças freqüentemente envolvacaminhos de etapas múltiplas e freqüentemente sistemas/caminhos biológicosdiferentes múltiplos, a intervenção em pontos críticos em um ou mais destescaminhos pode ter um efeito melhorativo ou terapêutico. A intervençãoterapêutica pode ocorrer pelo antagonismo de um processo/caminhoprejudiciais ou estimulação de um processo/caminho benéficos.

Muitas doenças imuno relacionadas são conhecidas e foramextensivamente estudadas. Tais doenças incluem doença inflamatórias imuno-mediadas (tais como a artrite reumatóide, doença renal imuno mediada,doenças hepatobiliares, doença do intestino inflamatório (IBD), psoríase easma), doença inflamatórias não imuno-mediadas, doenças infecciosas,doenças da imunodeficiência, neoplasia, etc.

Os linfócitos T (células T) são um componente importante deuma resposta imune de mamífero. As células T reconhecem antígenos que sãoassociados com uma auto-molécula codificada pelos genes dentro docomplexo da histocompatibiulidade principal (MHC). O antígeno pode serdemonstrado junto com as moléculas MHC na superfície de células queapresentam antígeno, células infectadas com vírus, células cancerosas,enxertos, etc. O sistema de célula T elimina estas células alteradas queapresentam uma ameaça à saúde para o mamífero hospedeiro. As células Tincluem as células T auxiliares e as células T citotóxicas. As células Tauxiliares proliferam extensivamente a seguir do reconhecimento de umcomplexo de antígeno-MHC em uma célula que apresenta antígeno. Ascélulas T auxiliares também secretam uma variedade de citocinas, isto é,linfocinas, que desempenham um papel central na ativação de células B,células T citotóxicas e uma variedade de outras células que participam naresposta imune.

Um evento central nas respostas imunes tanto mediadas porcélula quanto humorais é a ativação e expansão clonal de células T auxiliares.A ativação de célula T auxiliar é iniciada pela interação do complexo receptorde célula T (TCR)-CD3 com um antígeno-MHC na superfície de uma célulaque apresenta antígeno. Esta interação medeia uma cascata de eventosbioquímicos que induzem a célula T auxiliar em repouso a entra em um ciclocelular (a transição de GO para Gl) e resulta na expressão de um receptor dealta afinidade para ILA-2 e algumas vezes ILA-4. A célula T ativada progrideatravés da proliferação de ciclo e diferencia em células de memória ou célulasefetoras.

Além dos sinais mediados através da TCR, a ativação decélulas T envolve a co-estimulação adicional induzida pelas citocinasliberadas pela célula que apresenta antígeno ou através de interações commoléculas ligadas à membrana na célula que apresenta antígeno e na célula T.As citocinas ILA-I e ILA-6 foram mostradas fornecer um sinal co-estimulatório. Também, a interação entre a molécula B7 expressada nasuperfície de uma célula que apresenta antígeno e as moléculas CD28 eCTLA-4 expressadas na superfície da célula T efetuam a ativação da célula T.As células T ativadas expressam um número aumentado de moléculas deadesão celular, tais como ICAM-1, integrinas, VLA-4, LFA-1, CD56, etc.

A proliferação de célula T em uma cultura de linfócito mistoou reação de linfócito misto (MLR) é uma indicação estabelecida dacapacidade de um composto para estimular o sistema imune. Em muitasrespostas imunes, as células inflamatórias infiltram o sítio de dano ouinfecção. As células migratórias podem ser neutrofílicas, eosinofílicas,monocíticas ou linfocíticas como pode ser determinado pela examinaçãohistológica dos tecidos afetados. Current Protocols in Immunology, ed. JohnE. Coligan, 1994, John Wiley & Sons, Inc.

As doenças imuno relacionadas podem ser tratadas pelasupressão da resposta imune. O uso de receptores solúveis e/ou anticorposneutralizadores que inibem moléculas tendo atividade imuno estimulatóriaseria benéfico no tratamento de doenças imuno-mediadas e inflamatórias. Asmoléculas que inibem a resposta imune podem ser utilizadas (proteínasdiretamente ou por intermédio do uso de agonistas de anticorpo) para inibir aresposta imune e assim melhorar a doença imuno relacionada.

A interleucina-17 (ILA-17A) foi identificada como umortólogo celular de uma proteína codificada pelo Vírus Saimiri do Herpes(HSV) linfotrópico T[ver, Rouvier et al., J. Immunol., 150(12): 5445-5456(19993); Yao et al., J. Immunol., 122(12): 5483-5486 (1995) e Yao et al.,Immunity, 3(6): 811-821 (1995)]. A caracterização subseqüente tem mostradoque esta proteína é uma citocina potente que atua para induzir respostas pró-inflamatórias em uma ampla variedade de tecidos periféricos. A ILA-17A éuma citocina homodimérica ligada a dissulfeto de cerca de 32 kDa que ésintetizada e secretada apenas pelas células T de memória ativadas por CD4+(revisado em Fossiez et al., Int. Rev. Immunol., 16: 541-551 [1998]).Especificamente, a ILA-17 é sintetizada como um polipeptídeo precursor de155 aminoácidos com uma seqüência de sinal de terminal N de 19 a 23resíduos e é secretada como uma glicoproteína homodimérica ligada adissulfeto. A Ila-17A é divulgada na W09518826 (1995), W09715320(1997) e W09704097 (1997), assim como na Patente US Ne 6.063.372.

A despeito da sua distribuição de tecido restrita, a ILA-17Aexibe atividades biológicas pleitrópicas em vários tipos de células. A ILA-17A foi descoberta estimular a produção de muitas citocinas. Ela induz asecreção de ILA-6, ILA-8, ILA-12, fator inibidor de leucemia (LIF),prostaglandina E2, MCP-I e G-CSF pelas células aderentes comofibroblastos, queratinócitos, células epiteliais e endoteliais. A ILA-17Atambém tem a capacidade para induzir a expressão de superfície ICAM-1,proliferação de células T e crescimento e diferenciação de progenitoreshumanos CD34+ em neutrófilos. A ILA-17A também foi implicada nometabolismo ósseo e foi sugerido desempenhar um pepel importante emcondições patológicas caracterizadas pela presença de células T ativadas eprodução de TNF-alfa tal como a artrite reumatóide e o afrouxamento deimplantes ósseos (Van Bezooijen et al., J. Bone Miner. Res. 14: 1513-1521 [1999]). As células T ativadas de tecido sinovial derivadas de pacientescom artrite reumatóide foram descobertas secretar quantidades mais altas deILA-17A do que aquelas derivadas de indivíduos normais ou pacientes comosteoartrite (Chabaud et al., Arthritis Rheum. 42: 963-970[1999]). Foisugerido que esta citocina pró inflamatória ativamente contribui para ainflamação sinovial na artrite reumatóide. À parte do seu papel próinflamatório, a ILA-17A parece contribuir para a patologia da artritereumatóide ainda por um outro mecanismo. Por exemplo, a ILA-17A tem sidomostrada induzir a expressão de mRNA do fator de diferenciação deosteoclasto (ODF) em osteoblastos (Kotake et al., J. Clin. Invest., 103: 1345-1352[1999]). O ODF estimula a diferenciação de células progenitoras emosteoclastos, as células envolvidas na reabsorção óssea.

Visto que o nível de ILA-17A é significantemente aumentadono fluido sinovial de pacientes com artrite reumatóide, parece que a formaçãode osteoclasto induzida pela ILA-17A desempenha um papel crucial nareabsorção óssea na artrite reumatóide. Acredita-se também que a ILA-17Adesempenha um papel chave em certos outros distúrbios autoimunes taiscomo a esclerose múltipla (Matusevicius et al., Mult. Scler., 5: 101-104[1999]). A ILA-17A foi ainda mostrada, pela sinalização intracelular,estimular o influxo de Ca e uma redução em[cAMP], em macrófagoshumanos (Jovanovic et al., J. Immunol., 160: 3513[1998]). Fibroblastostratados com ILA-17A induzem a ativação de NF-KB,[Yao et al., Immunity,3: 811 (1995), Jovanovic et al., supra], enquanto que os macrófagos tratadoscom a mesma ativam NF-κΒ e cinases de proteína ativadas por mitógeno(Shalom-Barek et al., J. Biol. Chem., 273: 27467[1998]).Adicionalmente, ILA-17A também compartilha similaridadede seqüência com o fator 7 equivalente à citocina de mamífero que estáenvolvida no crescimento ósseo e de cartilagem. Outras proteínas com que ospolipeptídeos de ILA-17A compartilham similaridade de seqüência são ofator relacionado com a interleucina derivada de embrião humano (EDIRF) einterleucina-20.

Compatível com a ampla faixa da ILA-17A de efeitos, oreceptor de superfície celular para ILA-17A foi descoberto ser amplamenteexpressado em muitos tecidos e tipos de célula (Yao et al., Cytokine, 9:794[1997]). Embora a seqüência de aminoácido do receptor de ILA-17Ahumano (ILA-17R) (866 aminoácidos) prognostique uma proteína com umdomínio de transmembrana único e um domínio intracelular longo, de 525aminoácido, a seqüência receptora é única e não é similar àquela de nenhumdos receptores da família de citocina/receptor do fator de crescimento. Isto15 junto com a falta de similaridade da própria ILA-17A a outras proteínasconhecidas indica que a ILA-17A e seu receptor podem ser parte de uma novafamília de proteínas e receptores de sinalização. Foi demonstrado que aatividade da ILA-17A é mediada através da ligação ao seu único receptor desuperfície celular, em que estudos anteriores têm mostrado que contatarcélulas T com uma forma solúvel do polipeptídeo receptor de ILA-17A inibiua proliferação de célula Tea produção de ILA-2 induzidas por PHA,concanavalina A e anticorpo monoclonal anti-TCR (Yao et al., J. Immunol.,155: 5483-5486[1995]). Como tal, existe interesse significante naidentificação e caracterização de novos polipeptídeos tendo homologia comos receptores de citocina conhecidos, especificamente receptores de ILA-17A.

O padrão de expressão de ILA-17F parece ser similar àquelede ILA-17A, tal que o mesmo inclui apenas células T CD4+ ativadas emonócitos (Starnes et al. J. Immunol. 167: 4137-4140[2001]). A ILA-17F foidemonstrada induzir G-CSF, ILA-6 e ILA-8 em fibroblastos (Hymowitz et al,EMBO J. 20: 5322-5341 [2001]) e TGF-b em células endoteliais (Starnes etal. J. Immunol. 167: 4137-4140[2001]). Foi recentemente relatado que ILA-23, uma citocina produzida pela célula dendrítica, pode mediar a produçãotanto de ILA-17A quanto de ILA-17F, primariamente em células T dememória (Aggarwal et al. J. Biol. Chem. 278: 1910-1914[2003]).

Além disso, a super expressão ou super regulagem tanto deILA-17A quanto de ILA-17F foram mostradas em indivíduos artríticos easmáticos (revisado em Moseley et al. Cytokine Growth Factor Rev 14: 155-174[2003]). com respeito à artrite, estas citocinas atuam em uma maneiracaracterística com a destruição de cartilagem e junta que é associada com aartrite reumatóide e a osteo-artrite. Por exemplo, a ILA-17A e a ILA-17Fforam demonstradas realçar a degradação de matriz em explantes decartilagem articular por intermédio da liberação de proteoglicano decartilagem, glicosaminoglicanos e fragmentos de colágeno, enquanto inibem asíntese de novos proteoglicanos e colágenos (Cai et al. Cytokine 16: IO-21 [2001]; Attur et al Arthritis Rheum 44: 2078-2083[2001]).

Similar à ILA-17A, a superexpressão de ILA-17F emcamundongos também mostrou aumentar o recrutamento de neutrófilopulmonar e resulta na expressão aumentada de citocinas associada com Thlpulmonar, incluindo ILA-6, IFN-gama, IP-IO e MIG (Starnes et al. J.Immunol. 167: 4137-4140[2001]). A ILA-17F também foi super regulada emcélulas T de asmáticos inoculados com alérgeno (Kawaguchi et al J. Immunol167: 4430-4435[2001 ]) e descoberta induzir a produção de ILA-6 e ILA-8em NHBE. Ao contrário da ILA-17A, a ILA-17F parece inibir a angiogênesein vitro (Starnes et al. J. Immunol. 167: 4137-4140[2001]).

O mRNA de ILA-17F não foi detectado pelo northern blot emvários tecidos humanos mas foi dramaticamente induzido na ativação decélulas T CD4+ e monócitos. Id. Em camundongos, as células Th2 emastóides foram descoberto expressar ILA-17F na ativação. Ver Dumont,Expert Opin. Ther. Patents 13(3) (2003). Como a ILA-17A, a expressão daILA-17F foi alos descoberto ser super regulado pela ILA-23 em camundongo.

As famílias de citocina Ila-17/receptor parecem representar umúnico sistema de sinalização dentro da rede de citocina que oferecerá métodosinovativos para a manipulação de respostas imunes e inflamatórias.Conseqüentemente, a presente invenção está fundamentada na descoberta deum novo receptor da família de ILA-17, ILA-17RC e na sua capacidade paraligar tanto ILA-17A quanto ILA-17F.

A ILA-17RC foi inicialmente identificada usando um métodode bioinformáticas para pesquisar quanto a proteínas relacionadas com ILA-17RA e identificada através de um cDNA que codifica a proteína relacionadacom o receptor de ILA-17, a ILA-17RC. A despeito da sua similaridade óbviacom o receptor de ILA-17 (ILA-17RA), que se liga ao membro prototípico dafamília de ILA-17, ILA-17A e a identificação de cinco outros membros dafamília de citocina ILA-17, um ligando específico para ILA-17RC não foianteriormente relatado. Entretanto, ILA-17A e ILA-17F foram identificadoscomo os ligandos específicos para ILA-17RC como descrito no Pedido dePatente US N- 11/150.533, depositado em 10 de junho de 2005 e publicadocomo a Publicação de Patente US Ne 20060002925. Especificamente, estesligandos foram identificados usando células Renais de Hamster Bebê (BHK)que foram estavelmente transfectadas com construções que codificam a ILA-17RA (hILA-17RA) ou ILA-17RC (hILA-17RC) humanas. A expressão dereceptores na superfície foi confirmada pela análise FACS usando umanticorpo monoclonal para hILA-17RA ou um antissoro policlonal parahILA-17RC. Para avaliar a ligação de citocina, as formas biotiniladas de ILA-17A, C, D e e F humanas e estreptavidina conjugado a fluorocromo foramusadas para detectar a ligação de citocina às células transfectadas pelacitometria de fluxo. Os resultados claramente mostraram que as células BHKestavelmente transfectadas que expressam hILA-17RA claramente ligaramILA-17Α humano (hILA-17A) como esperado, ao passo que aquelastransfectadas com vetor de expressão vazio falharam em ligar quaisquermembros da família de ILA-17 testados. A ligação relativamente fraca deILA-17F humana (hILA-17F) às células transfectadas com hILA-17RAtambém foi observada, mas não houve nenhuma ligação significante de outrosmembros da família de ILA-17 testada. Outros membros da família de ILA-17foram examinados quanto a ligação de às células transfectadas com hlLA-17RC e foi observado que estas células apresentaram ligação significante àhILA-17F. Além disso, ligação significante de hILA-17A a estas células foiobservada, mas nenhuma ligação de MLA-17C, D ou E. Estes dadosmostraram que hILA-17RC foi o receptor tanto para hILA-17F quanto parahILA-17A.

Adicionalmente, o nível de fluorescência em uma faixa deconcentrações de citocina foi examinada para determinar afinidades relativasde hILA-17A e hILA-17F para hILA-17RA e hILA-17RC. Comparando-se asintensidades de fluorescência média das citocinas individuais em cadatransfectante, foi observado que a hILA-17A liga-se muito melhor a hlLA-17RA do que a hILA-17F, mas que ambas as citocinas pareceram ligar-seigualmente bem às células transfectadas com a hILA-17RC.Interessantemente, a ligação de citocina às células que expressaram ambos osreceptores pareceram ser aditivos, sem nenhuma evidência decooperatividade.

Em seguida, a especificidade desta ligação foi investigada pelatentativa para competir quanto a ligação com citocina não rotulada. As célulasBHK transfectadas foram incubadas com uma concentração fixa de citocinabiotinilada e concentrações crescentes de citocina não rotulada e a quantidadede material biotinilado ligado foi quantificado por FACS. Foi mostrado que aligação tanto de hILA-17A quanto hILA-17F a hILA-17RC foi específicovisto que as concentrações crescentes de citocina não rotulada interferiramcom a ligação do material biotinilado. De fato, hILA-17A e hILA-17F nãorotulados eficazmente competiram cruzado quanto a ligação de formasbiotiniladas de ambas as citocinas às células transfectadas com a hILA-17RC,sugerindo que as duas citocinas estavam ligando hILA-17RC com afinidadessimilares e que estavam ligando em sobreposição, se não sítios idênticos. AhILA-17A não rotuladas também competiu eficazmente quanto a ligaçãotanto de hILA-17A quanto de hILA-17F biotiniladas às células transfectadascom hILA-17RA, enquanto que a hILA-17F não rotulada não mostrouessencialmente nenhuma capacidade para competir quanto a ligação de hlLA-17A à hILA-17RA. Isto indicou que embora hILA-17F mostrasse ligaçãoespecífica à hILA-17RA, a avidez desta interação pareceu sersignificantemente mais baixa do que a interação de hILA-17A e hILA-17RA.

Estudos de ligação de saturação foram feitos para medir aafinidade de ligação de hILA-17A e hILA-17F à hILA-17RC e hILA-17RA.As linhagens de célula BHK que estavelmente expressam hILA-17RA ouMLA-17RC foram incubadas com hILA-17A ou F iodadas sob condições deligação de saturação para determinar as constantes de afinidade de cadacitocina a cada receptor. hILA-17A liga tanto hILA-17RA quanto hILA-17RCcom afinidades comparáveis (Tabela 1). Especificamente, as células BHKtransfectadas com o receptor indicado foram usadas para estabelecer valoresKd para hILA-17A e hILA-17F como descrito em Métodos. Os resultadosmostrados são valores Kd médios derivados de determinações em triplicata.

Tabela 1

<table>table see original document page 13</column></row><table>

1Denota a variante de junção xl de hILA-17RC.

Além disso, a afinidade de hILA-17F para hILA-17RC foimuito similar à afinidade de hILA-17A para este receptor (ver a Tabela 1acima). Entretanto, compatível com os resultados obtidos usando citocinasbiotiniladas, a afinidade de hILA-17F para hILA-17RA foi aproximadamente1000 vezes mais baixa em relação às outras afinidades medidas (.Id.). Istoindica que hILA-17A e hILA-17F ligam hILA-17RC com afinidadessimilares, mas suas afinidades para hILA-17RA diferem dramaticamente.

A observação de que hILA-17RC liga tanto hILA-17A quantoF com alta afinidade sugere que as células que expressam hILA-17RC devemser igualmente capazes de responder a hILA-17A e hILA-17F. Por outro lado,visto que hILA-17RA liga hILA-17A com alta afinidade, mas hILA-17Fcerca de 1000 vezes menos bem, a implicação é que as células que expressamhILA-17RA, sob condições fisiológicas, responderiam apenas à hILA-17A.Anteriormente, foi mostrado que a hILA-17RA é expressadaubiqüitariamente, mas a sua expressão foi relatada ser mais alta em célulashematopoiéticas com expressão mais baixa em outros tecidos. Portanto, aexpressão da hILA-17RC foi examinada para determinar o grau desobreposição nos padrões de expressão. A análise de Northern blot mostrouque a MLA-17RC foi expressada em níveis altos em tecidos glandulares taiscomo a glândula adrenal, próstata, fígado e tireóide sem nenhuma expressãodetectável em tecidos hematopoiéticos.

Para investigar ainda mais a expressão destes receptores emcélulas hematopoiéticas, a ligação de hILA-17A e hILA-17F biotinilados àscélulas mononucleares de sangue periférico (PBMC) pela análise de FACS deparâmetro múltiplo também foi examinada. Os resultados indicaram que ahILA-17A ligou a virtualmente todos os subconjuntos de PBMC examinados,ao passo que a hILA-17F falhou em mostrar a ligação detectável a qualquerdestas populações. Isto é compatível com a capacidade de hILA-17RA paraligar hILA-17A com alta afinidade, mas não hILA-17F e com a para detectarmRNA hILA-17RC em PBMC. Coletivamente, estes dados indicam que ILA-17RC é preferencialmente expressada em tecidos não hematopoiéticos,enquanto que ILA-17RA é preferencialmente expressada em célulashematopoiéticas.

A ligação de alta afinidade de hILA-17A e hILA-17F àscélulas transfectadas com a hILA-17RC sugere que um produto terapêuticoeficaz poderia estar em uma forma solúvel de hILA-17RC. Uma tal moléculaseria um antagonista eficaz destas duas citocinas. Para testar isto diretamente,uma forma solúvel de hILA-17RC humana foi produzida como uma proteínade fusão de Fc e testada a sua capacidade para inibir a ligação tanto de hlLA-17A quanto de hILA-17F. Estes efeitos foram depois comparados com osresultados obtidos usando uma forma solúvel de hILA-17RA. Concentraçõescrescentes de hILA-17RC-Ig ou hILA-17RA-Ig foram incluídas em reaçõesde ligação e a análise FACS foi usada para avaliar os efeitos dos receptoressolúveis na ligação de citocinas biotiniladas às células BHK estavelmentetransfectadas. A hILA-17RC solúvel inibiu a ligação tanto de hILA-17Aquanto de hILA-17F em um grau similar, ao passo que uma proteína de fusãoFc de um outro membro da família ILA-17R, hILA-17RD, não teve nenhumefeito. Por outro lado, hILA-17RA solúvel eficazmente bloqueou a ligação dehILA-17A, mas essencialmente não teve nenhum efeito sobre a ligação dehILA-17F. Resultados similares foram obtidos examinando a ligação dehILA-17A às células hematopoiéticas. Esta ligação foi eficazmente bloqueadausando hILA-17RA-Ig e hILA-17RC-Ig, mas não hILA-17RD-Ig. Estes dadossão compatíveis com os resultados obtidos das medições de afinidade eindicam que os receptores solúveis estão se comportando da mesma maneiracomo as suas formas ancoradas a membrana.

Como uma avaliação adicional da capacidade da hILA-17RC-Ig humana para ligar-se à hILA-17A e hILA-17F, a afinidade do receptorsolúvel para estas citocinas foi avaliada usando a análise Biacore. A hlLA-17RC solúvel ligou tanto à hILA-17A quanto à hILA-17F com alta afinidade(Tabela 2), fornecendo suporte adicional para a idéia de usar este reagentecomo um antagonista para os efeitos tanto de hILA-17A quanto de hILA-17Fin vivo. Especificamente, os receptores solúveis foram capturados em chips eexperimentos de ligação foram realizados como descrito abaixo. ND =nenhuma ligação detectável.

Tabela 2

<table>table see original document page 16</column></row><table>

O número de variantes de junção em seres humanos é muitomaior e portanto nós realizamos nossos experimentos iniciais apenas em umsubconjunto destas moléculas. Aquelas escolhidas para esta análise tambémdiferiram na sua inclusão ou exclusão do exon 7, mas, diferente docamundongo, todas as variantes de junção incorporaram todos os exons 8. Oaceitador de junção crítico descoberto no meio da seqüência de exon 8 docamundongo não está presente no exon 8 humano. Entretanto, as outrasvariantes de junção testadas incluíram ou excluíram o exon 12 de hlLA-17RC. Estas variantes foram designadas hILA-17RCxl (idêntica nacomposição de exon ao xl de camundongo acima), hILA-17RCx4 (idênticana composição de exon ao x4 de camundongo acima), hILA-17RCx2 e hlLA-17RCx7. Mais uma vez, estas variantes de junção foram transitoriamenteexpressadas em células 293F e foram testadas quanto a sua capacidade paraligar ILA-17A e ILA-17F de camundongo e ser humano biotiniladas e osresultados estão resumidos na Tabela 3.Tabela 3

<table>table see original document page 17</column></row><table>

Denota exons completamente incluídos no transcripto. (+) indica umaligação de citocina detectável, significante como avaliado por um aumentosignificante na fluorescência pelo FACS. (-) indica nenhuma mudançasignificante na fluorescência.

Compatível com os experimentos apresentados mais noprincípio, hILA-17RCxl ligou tanto a HLA-17A quanto a hILA-17F, masnão ligou a cada citocina de camundongo. hILA-17RCx4 também ligou aambas as citocinas humanas e como a sua contraparte de camundongo, ligoumILA-17F, mas não mILA-17A. As hILA-17RCx2 e x7 falharam em ligarqualquer uma das quatro citocinas testadas, embora fossem claramenteexpressadas na superfície de células transfectadas visto que um antissoropoliclonal contra hILA-17RC tingiu células CD8+ (dados não mostrados).Estes resultados de ligação foram fielmente recapitulados também em célulasBHK estavelmente transfectadas. Coletivamente, estes dados sustentamconclusões com respeito às porções essenciais da proteína ILA-17RCrequerida para a ligação às citocinas humanas.

Numerosas publicações implicaram ILA-17A e, a um graumenor, ILA-17F como contribuindo para a progressão e gravidade da doençana artrite induzida por colágeno (CIA) de camundongo e artrite reumatóidehumana. A expressão tanto de mILA-17A quanto de ILA-17F nas juntas oulinfônodos de drenagem (DLN) de camundongos que foram imunizados comcolágeno para induzir CIA foi examinada. A análise pela PCR em tempo realclaramente demonstrou que ambas as citocinas foram super reguladas emambos os tecidos em camundongos doentes em relação aos controles nãoimunizados, claramente indicando que a expressão correlacionou-se com adoença. Além disso, a expressão relativa de mILA-17RA e mILA-17RCtambém foi examinada nos mesmos tecidos. Entretanto, neste caso, não houveuma correlação reprodutível de expressão de cada receptor com doença. Alémdisso, o que foi óbvio foi a discrepância na expressão comparando DLN comtecido não hematopoiético (pata traseira). Compatível com os resultadosanteriores considerando a expressão dos receptores humanos, mILA-17RA foidescoberto ser mais altamente expressada em tecido hematopoiético e mlLA-17RC ser mais altamente expressada em tecido não hematopoiético. Estesdados sugerem que a expressão de mILA-17A e a expressão de mTT,A-T 7Fcorrelacionam-se com a doença, que ambos dos receptores requeridos estãopresentes em tecido doente e normal e sugere que a neutralização destascitocinas pode ser uma terapia eficaz para impedir a progressão da doença.

Conseqüentemente, o receptor cognato para ILA-17A e ILΑ-ΠΕ foi mostrado ser ILA-17RC. Notavelmente, MLA-17RC liga a hILA-17Ae hILA-17F com afinidades similares. Visto que estes dois membros dafamília ILA-17 compartilham 55% de identidade de seqüência, talvez não sejasurpreendente que eles compartilhem receptores. Entretanto, MLA-17RA ligahILA-17A com alta afinidade, mas liga hILA-17F com uma afinidade que équase 1000 vezes mais baixa, sugerindo que sob condições fisiológicas,hILA-17RA não ligaria hILA-17F. A implicação é que as células queexpressam hILA-17RC devem responder tanto a hILA-17A quanto a hlLA-17F, ao passo que as células que apenas expressam hILA-17RA apenasresponderão a ILA-17A. Esta diferença tem o potencial para impactar comoestas citocinas afetam tecidos diferentes. Através da análise de expressão foimostrado que embora a ILA-17RA seja expressada ubiqüitariamente, amesma é mais altamente expressada em células hematopoiéticas, ao passo queILA-17RC tende a ser expressada em tecidos não hematopoiéticos semnenhuma expressão em células hematopoiéticas. Compatível com isto, todosos subconjuntos de células mononucleares de sangue periférico humanasligam hILA-17A, mas não ligam hILA-17F. Além disso, isto sugere quetecidos não hematopoiéticos devam responder tanto a ILA-17A quanto a ILΑ-Ι 7F, ao passo que as células hematopoiéticas apenas devam responder a ILA-17A.

Esta examinação da ligação de citocina às variantes de junçãode ILA-17RC diferentes tem revelado duas porções do receptor que sãoessenciais para a ligação de citocina e existem diferenças sutis nascaracterísticas de ligação das citocinas de camundongo e de ser humano.Além disso, estas características são compatíveis com as citocinasindependente da espécie do receptor examinado. Como mostrado a partir dosdados apresentados na Tabela 3, exon 12 e todos os exon 8 são requeridospara hILA-17A e hILA-17F para ligar a ILA-17RC, visto que estas citocinasapenas ligam as variantes xl humanas e as variantes x4 humanas. Cada umadestas isoformas incluem todos os exon 8 e exon 12, embora elas difiram comrespeito a se o exon 7 está incluído ou não. Isto implica que o exon 7 édispensável para a ligação das citocinas humanas.

A importância de gerar um antagonista tanto para a funçãoILA-17A quanto para a função ILA-17F parece clara a partir da informaçãodisponível que mostra uma correlação forte entre a expressão de ILA-17A eILA-17F e a progressão de várias doenças autoimunes e inflamatórias. Estasduas citocinas induzem outras citocinas e quimiocinas inflamatórias assimcomo metaloproteases de matriz, que contribuem para a destruição decolágeno e óssea na artrite autoimune. Este reagente deve servir como umproduto terapêutico eficaz para a artrite reumatóide e em outras doençasinflamatórias em que hL-17A e hL-17F desempenham um papel.

Assim, formas solúveis de ILA-17RC humana foramdesenvolvidas para servir como um antagonista tanto para ILA-17A quantopara ILA-17F. Terapeuticamente, estes polipeptídeos de ILA-17RC solúveisforam eficazes. Entretanto, devido a numerosos fatores, a ILA-17RC solúvelnão é facilmente secretada dos sistemas de produção numerosos e variáveisdisponíveis na técnica. Também não é secretado em quantidades adequadasnecessárias para propósitos de fabricação. Assim, existe uma necessidade natécnica para desenvolver antagonistas para ILA-17A e ILA-17F que possamser expressados e secretados em quantidades que possam ser escalonadas paraa fabricação.

Conseqüentemente, a presente invenção responde a estanecessidade pelo fornecimento de antagonistas de ILA-17A e ILA-17F quepodem ser expressados e secretados. Especificamente, a presente invençãoestá fundamentada no desenvolvimento e descoberta de várias moléculassolúveis ou polipeptídeos solúveis que não ocorrem naturalmente que seligam a, antagonizam e/ou bloqueiam a ligação de ILA-17A e ILA-17F aoseu(s) receptor(es) cognato(s). Estes polipeptídeos solúveis compreendem aporções de ILA-17RC. Estes polipeptídeos solúveis também podemcompreender porções tanto de ILA-17RC quanto de ILA-17RA ("ILA-17RC/ILA-17RA").

Uma tal forma de realização preferida está descrita nas figuras4A e 4B, assim como nas SEQ ID NOs: 157 e 158. Este polipeptídeo solúvelcompreende exons 1 a 6 da ILA-17RA humana (SEQ ID NO: 21) e exons 8 a16 da ILA-17RCxl humana (SEQ ID NO: 2). Mais especificamente, estepolipeptídeo solúvel é fundido se uma molécula Fc, tal como Fc5 comocontido nas SEQ ID Nos: 157 e 158. Entretanto, uma pessoa habilitada natécnica facilmente reconheceria que qualquer molécula Fc pode ser utilizadaassim como qualquer outra molécula que resultasse em dimerização.

Como tal, antagonistas para a atividade de ILA-17F e ILA-17A, tais como receptores solúveis de ILA-17RC e ILA-17RC/ILA-17RA dapresente invenção, são úteis no tratamento terapêutico de doençasinflamatórias, particularmente como antagonistas tanto para ILA-17F quantoILA-17A isoladamente ou junto no tratamento de doenças que envolvem estasmoléculas. Além disso, os antagonistas para a atividade de ILA-17A e ILA-17F, tais como os receptores solúveis da presente invenção, são úteis notratamento terapêutico de outras doenças inflamatórias por exemplo comoligador, bloqueador, inibidor, redutor, antagonizador ou neutralizador de ILA-17F e ILA-17A (individualmente ou junto) no tratamento de psoríase,dermatite atópica ou de contato, IBD, IBS, colite, endotoxemia, artrite, artritereumatóide, artrite psoriática, doença respiratória no adulto (ARD), choqueséptico, insuficiência de órgão múltiplo, dano pulmonar inflamatório tal comoasma, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), hiper-responsividade dasvias aéreas, bronquite crônica, asma alérgica, pneumonia bacteriana, psoríase,eczema e doença do intestino inflamatório tal como colite ulcerativa e doençade Crohn, infecção por helicobacter pilori. Adesões e/ou abscessosintraabdominais como resultados da inflamação peritoneal (isto é de infecção,dano, etc.), Iupo eritematoso sistêmico (SLE), esclerose múltipla, esclerosesistêmica, síndrome nefrótica, rejeição a aloenxerto de órgão, doença doenxerto vs. hospedeiro (GVHD), rejeição ao transplante de rim, pulmão,coração, etc., artrite induzida pela parede de célula estreptocócica (SCW),osteoartrite, gengivite/periodontite, queratite estrômica herpética, cânceresincluindo prostático, renal, colônico, ovariano, cervical, leucemia,angiogênese, restenose e doença de kawasaki.

As subunidades receptoras de citocina são caracterizadas poruma estrutura de domínio múltiplo que compreende um domínio de ligação deligando e um domínio efetor que está tipicamente envolvido na transdução desinal. Os receptores de citocina multiméricos incluem monômeros,homodímeros (por exemplo, as isoformas αα e ββ de receptor de PDGF,receptor da eritropoietina, MPLfreceptor de trombopoietina] e receptor de G-CSF), heterodímeros cujas subunidades cada uma têm domínios de ligação deligando e efetores (por exemplo, a isoforma αβ do receptor de PDGF) emultímeros tendo subunidades de componente com funções discrepantes (porexemplo, os receptores de ILA-2, ILA-3, ILA-4, ILA-5, ILA-6, ILA-7 e GM-CSF). Algumas subunidades de receptor são habitualmente para umapluralidade de receptores. Por exemplo, a subunidade AIC2B, que não podeligar ligando por si só mas inclui um domínio de transdução de sinalintracelular, é um componente de receptores ILA-3 e GM-CSF. Muitosreceptores de citocina podem ser colocados em uma das quatro famíliasrelacionadas com base nas suas estruturas e funções. Os receptoreshematopoiéticos de Classe I, por exemplo, são caracterizados pela presença deum domínio contendo resíduos de cisteína conservados e o motivo WSXWS.Os domínios adicionais, incluindo os domínios da cinase de proteína;domínios tipo III de fibronectina; e domínios de imunoglobulina, que sãocaracterizados pelas alças ligadas por dissulfeto, estão presentes em certosreceptores hematopoiéticos. A estrutura do receptor de citocina foi revisadapor Urdal, Ann. Reports Med. Chem. 26: 221-228, 1991 e Cosman, Cytokine5: 95-106, 1993. No geral acredita-se que sob pressão seletiva quanto aosorganismos para adquirir novas funções biológicas, novos membros dafamília de receptor surge da duplicação de genes receptores existenteslevando à existência de famílias de gene múltiplos. Os membros da famíliaassim contém vestígios do gene ancestral e estes traços característicos podemser explorados na isolação e identificação de membros da família adicionais.

Conseqüentemente, a presente invenção é direcionada aantagonistas de ILA-17A e ILA-17F que bloqueiam cada ligando respectivoda ligação e/ou sinalização através do seu receptor ou receptorescorrespondentes.

Em formas de realização preferidas, tais antagonistas estãofundamentados na estrutura de polipeptídeo da ILA-17RC como representadonas figuras 1 a 4. O receptor ILA-17RC tem um número grande de variantesde junção com base na inclusão ou exclusão de exons específicos. Comodescrito abaixo, alguns destes exons são requeridos para a ligação de ligando(ILA-17A e/ou ILA-17F).

A presente invenção está fundamentada em parte nadescoberta de similaridade estrutural ("domínios") entre ILA-17RC e outrosmembros da família ILA-17, tais como ILA-17RA (SEQ ID NO: 21).

Especificamente, três domínios foram identificados:1) Domínio 1 (SEQ ID NOs: 159 e 160) compreende os exons8 a 10 de ILA-17RC. Isto corresponde aos resíduos de aminoácido de 193 a276 de ILA-17RCxl da (SEQ ID NO: 2) e resíduos de aminoácido de 208 a291 de ILA-17RCx4 da (SEQ ID NO: 166).

2) Domínio 2 (SEQ ID NOs: 161 e 162) compreende exons de11 a 13 de ILA-17RC. Isto corresponde aos resíduos de aminoácido de 277 a370 de ILA-17RCxl da (SEQ ID NO: 2) e resíduos de aminoácido de 292 a385 de ILA-17RCx4 da (SEQ ID NO: 166).

3) Domínio 3 (SEQ ID NOs: 163 e 164) compreende exons de8 a 10 de ILA-17RC. Isto corresponde aos resíduos de aminoácido de 371 a447 de ILA-17RCxl da (SEQ ID NO: 2) e resíduos de aminoácido de 386 a462 de ILA-17RCx4 da (SEQ ID NO: 166).

Assim, a presente invenção é direcionada a polipeptídeos deILA-17RC solúveis com base em combinações diferentes dos exonsrepresentados na figura 1. Especificamente, os exemplos destes polipeptídeossolúveis incluem:

1) A Variante 1210 (SEQ ID NOs: 67 e 68) que inclui osexons de 1 a 6 e de 8 a 16 da ILA-17RCxl humana, fundida a FclO (SEQ IDNOs: 174 e 175) por intermédio de um ligador (SEQ ID NOs: 176 e 177). A

Variante 1210 também tem um peptídeo de sinal pré-pró de otPA (seqüênciade polipeptídeo mostrada na SEQ ID NO: 178). Fc5 ou qualquer equivalenteconhecido na técnica, também podem ser usados no lugar de Fc 10.

2) A Variante 1390 (SEQ ID NOs: 69 e 70) que inclui osexons de 1 a 6 e de 8 a 16 da ILA-17RCxl humana, fundida a FclO (SEQ IDNOs: 174 e 175). A Variante 1390 também tem a seqüência de sinal nativa.Fc5 ou qualquer equivalente conhecido na técnica, também podem ser usadosno lugar de Fc 10.

3) A Variante 1341 (SEQ ID NOs: 71 e 72) que inclui osexons de 1 a 6 da ILA-17RA de murino e de 8 a 16 da ILA-17RCxl humana,fundida a FclO (SEQ ID NOs: 174 e 175) por intermédio de um ligador (SEQID NOs: 176 e 177). A Variante 1341 também tem um peptídeo de sinal deILA-17RA de murino (SEQ ID NO: 181). Fc5 ou qualquer equivalenteconhecido na técnica, também podem ser usados no lugar de Fc 10.

4) A Variante 1342 (SEQ ID NOs: 73 e 74) que inclui osexons de 8 a 16 da ILA-17RCxl humana, fundida a FclO (SEQ ID NOs: 174e 175) por intermédio de um ligador (SEQ ID NOs: 176 e 177). A Variante1342 também tem um peptídeo de sinal de pré-pró de otPA (seqüência depolipeptídeo mostrada na SEQ ID NO: 178). Fc5 ou qualquer equivalenteconhecido na técnica, também podem ser usados no lugar de Fc 10.

5) A Variante Sl (SEQ ID NOs: 77 e 78) que inclui os exonsde 1 a 7 da ILA-17RCxl humana, fundida a Fc5 (SEQ ID NOs: 179 e 180). AVariante Sl também tem a seqüência de sinal nativa. FclO ou qualquerequivalente conhecido na técnica, também podem ser usados no lugar de Fc5.

6) A Variante S2 (SEQ ID NOs: 81 e 82) que inclui os exonsde 1 a 8 da ILA-17RCxl humana, fundida a Fc5 (SEQ ID NOs: 179 e 180). AVariante S2 também tem a seqüência de sinal nativa. FclO ou qualquerequivalente conhecido na técnica, também podem ser usados no lugar de Fc5.

7) A Variante S3 (SEQ ID NOs: 85 e 86) que inclui os exonsde 1 a 9 da ILA-17RCxl humana, fundida a Fc5 (SEQ ID NOs: 179 e 180). AVariante S3 também tem a seqüência de sinal nativa. FclO ou qualquerequivalente conhecido na técnica, também podem ser usados no lugar de Fc5.

8) A Variante S4 (SEQ ID NOs: 89 e 90) que inclui os exonsde 1 a 10 da ILA-17RCxl humana, fundida a Fc5 (SEQ ID NOs: 179 e 180).A Variante S4 também tem a seqüência de sinal nativa. FclO ou qualquerequivalente conhecido na técnica, também podem ser usados no lugar de Fc5.

9) A Variante S5 (SEQ ID NOs: 93 e 94) que inclui os exonsde 1 a 11 da ILA-17RCxl humana, fundida a Fc5 (SEQ ID NOs: 179 e 180).

A Variante S5 também tem a seqüência de sinal nativa. FclO ou qualquerequivalente conhecido na técnica, também podem ser usados no lugar de Fc5.

10) A Variante S6 (SEQ ID NOs: 97 e 98) que inclui os exonsde 14 a 16 da ILA-17RCxl humana, fundida a Fc5 (SEQ ID NOs: 179 e 180).A Variante S6 também tem a seqüência de sinal nativa. FclO ou qualquerequivalente conhecido na técnica, também podem ser usados no lugar de Fc5.

11) A Variante S7 (SEQ ID NOs: 101 e 102) que inclui osexons de 11 a 16 da ILA-17RCxl humana, fundida a Fc5 (SEQ ID NOs: 179e 180). A Variante S7 também tem a seqüência de sinal nativa. FclO ouqualquer equivalente conhecido na técnica, também podem ser usados nolugar de Fc5.

12) A Variante SlO (SEQ ID NOs: 105 e 106) que inclui osexons de 7 a 16 da ILA-17RCxl humana, fundida a Fc5 (SEQ ID NOs: 179 e180). A Variante SlO também tem a seqüência de sinal nativa. FclO ouqualquer equivalente conhecido na técnica, também podem ser usados nolugar de Fc5.

13) A Variante Sll (SEQ ID NOs: 109 e 110) que inclui osexons dela7edel4al6da ILA-17RCxl humana, fundida a Fc5 (SEQ IDNOs: 179 e 180). A Variante Sll também tem a seqüência de sinal nativa.FclO ou qualquer equivalente conhecido na técnica, também podem serusados no lugar de Fc5.

14) A Variante S12 (SEQ ID NOs: 113 e 114) que inclui osexons dela7edellal6da ILA-17RCxl humana, fundida a Fc5 (SEQ IDNOs: 179 e 180). A Variante S12 também tem a seqüência de sinal nativa.FclO ou qualquer equivalente conhecido na técnica, também podem serusados no lugar de Fc5.

15) A Variante S13 (SEQ ID NOs: 117 e 118) que inclui osexons de 1 a 13 da ILA-17RCxl humana e exons de 7 a 9 da ILA-17RAhumana, fundida a Fc5 (SEQ ID NOs: 179 e 180). A Variante S13 tambémtem a seqüência de sinal nativa. FclO ou qualquer equivalente conhecido natécnica, também podem ser usados no lugar de Fc5.

16) A Variante S14 (SEQ ID NOs: 121 e 122) que inclui osexons de 1 a 6 da ILA-17RA de murino, exons de 8 a 13 da ILA-17RCxlhumana e exons de 7 a 9 da ILA-17RA de murino, fundida a Fc5 (SEQ IDNOs: 179 e 180). A Variante S13 também tem a seqüência de sinal nativa.FclO ou qualquer equivalente conhecido na técnica, também podem serusados no lugar de Fc5.

17) A Variante 1407 (SEQ ID NOs: 139 e 140) que inclui osexons de 1 a 10 da ILA-17RA humana e de 8 a 16 da ILA-17RCxl humana,fundida a Fc5 (SEQ ID NOs: 179 e 180). A Variante 1407 também tem opeptídeo de sinal nativo da ILA-17RC humana. FclO ou qualquer equivalenteconhecido na técnica, também podem ser usados no lugar de Fc5.

18) A Variante 1459 (SEQ ID NOs: 151 e 152) que inclui osexons de 1 a 6 e de 8 a 16 da ILA-17RCxl humana, fundida a Fc5 (SEQ IDNOs: 179 e 180) com uma substituição Leu21Ala (quando comparada com aILA-17RCxl). A Variante 1459 também tem um peptídeo de sinal de pré-próde otPA (seqüência de polipeptídeo mostrada na SEQ ID NO: 178). FclO ouqualquer equivalente conhecido na técnica, também podem ser usados nolugar de Fc5.

19) A Variante 1454 (SEQ ID NOs: 157 e 158) que inclui osexons de 1 a 6 da ILA-17RA humana e de 8 a 16 da ILA-17RCxl humana,fundida a Fc5 (SEQ ID NOs: 179 e 180). A Variante 1454 também tem opeptídeo de sinal nativo da ILA-17RA humana. FclO ou qualquer equivalenteconhecido na técnica, também podem ser usados no lugar de Fc5.As Variantes descritas acima representam apenas um númerolimitado das formas de realização da presente invenção. Uma pessoahabilitada na técnica pode facilmente e sem experimentação indevida,planejar e testar outras Variantes de ILA-17RC e/ou ILA-17RC/ILA-17RAcom base nas divulgações do presente pedido e em particular as figuras de 1 a4 incluídas anexas. Por exemplo, outros peptídeos de sinal que podem serusados no lugar daqueles divulgados acima incluem: peptídeo de sinal dohormônio do crescimento humano (SEQ ID NOs: 168 e 169), região variávelda cadeia pesada da imunoglobulina de murino (VH 26-10) (SEQ ID NOs:170 e 171) ou CD33 humana (SEQ ID NOs: 172 e 173).

Entre outras invenções, a presente invenção fornece novosusos para os receptores solúveis da presente invenção. Estes receptoressolúveis podem ser fundamentados unicamente na ILA-17RC (designada"ILA-17RC" ou "ILA-17RC solúvel" ou "sILA-17RC", todas das quaispodem ser aqui usadas intercambiavelmente) ou podem ser fundamentadosnas porções de combinação de ILA-17RA com ILA-17RC ("ILA-17RC/ILA-17RA" ou "RC/RA híbridos" "RC/RA" ou qualquer variação destas", todas asquais podem ser aqui usadas intercambiavelmente). A presente invençãotambém fornece fragmentos de polipeptídeo de ILA-17RC e ILA-17RC/ILA-17RA solúveis e proteínas de fusão, para o uso em doenças inflamatórias eautoimunes humanas. Os receptores solúveis da presente invenção podem serusados para bloquear, inibir, reduzir, antagonizar ou neutralizar a atividade deILA-17F ou ILA-17A ou tanto ILA-17A quanto ILA-17F no tratamento deinflamação e doenças inflamatórias tais como psoríase, artrite psoriática,25 artrite reumatóide, endotoxemia, IBD, IBS, colite, asma, rejeição a enxerto,doenças renais imuno mediadas, doenças hepatobiliares, esclerose múltipla,aterosclerose, promoção de crescimento de tumor ou doença de juntadegenerativa e outras condições inflamatórias aqui divulgadas.

Uma seqüência de nucleotídeo ilustrativa que codifica a ILA-17RC humana ("ILA-17RCxl) é fornecida pela SEQ ID NO: 1; opolipeptídeo codificado é mostrado na SEQ ID NO: 2. A ILA-17RC funcionacomo um receptor tanto para ILA-17A (SEQ ID NOS: 13 & 14) quanto ILΑ-Ι 7F (SEQ ID NOS: 15 & 16). A ILA-17RC pode atuar como um monômero,um homodímero ou um heterodímero. Preferivelmente, a ILA-17RC atuacomo um receptor homodimérico tanto para ILA-17A e/ou ILA-17F. Comodescrito no presente pedido, os receptores monomérico ou homodiméricopodem compreender apenas ILA-17RC ou podem compreender porções deoutros receptores da família ILA-17, tais como ILA-17RA (ILA-17RC/ILA-17RA"). Como tal, a presente invenção abrange receptores solúveis quecompreendem porções de ILA-17RC em combinação com ILA-17RA, ILA-17RE ou qualquer outro receptor da família ILA-17. A ILA-17RC tambémpode atuar como uma subunidade receptora heterodimérica para uma citocinarelacionada com ILA-17. Por exemplo, a ILA-17RC pode formar umheterodímero com ILA-17RA ou um outro receptor equivalente á ILA-17. AILA-17RC é divulgada no Pedido de Patente US de propriedade comum N°10/458.647 e publicação WIPO de propriedade comum WO 01/04304, ambasas quais são aqui incorporadas em sua totalidade por referência. A análise deum clone de cDNA humano que codifica ILA-17RC (SEQ ID NO: 1) revelouuma matriz de leitura aberta que codifica 692 aminoácidos (SEQ ID NO: 2)que compreende uma seqüência de sinal putativa de aproximadamente 20resíduos de aminoácido (resíduos de aminoácido de 1 a 20 da SEQ ID NO: 2),um domínio de ligação de ligando extracelular de aproximadamente 431resíduos de aminoácido (resíduos de aminoácido de 21 a 452 da SEQ ID NO:2; SEQ ID NO: 3), um domínio de transmembrana de aproximadamente 20resíduos de aminoácido (resíduos de aminoácido de 453 a 473 da SEQ IDNO: 2) e um domínio intracelular de aproximadamente 203 resíduos deaminoácido (resíduos de aminoácido de 474 a 677 da SEQ ID NO: 2). Alémdisso, um domínio de ligação de ligando é representado pela SEQ ID NO: 22.Já uma outra seqüência de nucleotídeo ilustrativa que codificauma ILA-17RC variante humana, designada como "ILA-17RCx4" é fornecidapela SEQ ID NO: 165, o polipeptídeo codificado é mostrado na SEQ ID NO:166. Os peptídeos de sinal prognosticados é dos resíduos de 1 a 60 da SEQ ID NO: 165 e 1 a 20 da SEQ ID NO: 166; o domínio extracelular dos resíduos de61 a 1401 da SEQ ID NO: 165 e de 21 a 467 da SEQ ID NO: 166; o domíniode transmembrana é dos resíduos de 1402 a 1464 da SEQ ID NO: 165 e de468 a 488 da SEQ ID NO: 166; e o domínio intracelular é dos resíduos de1465 a 2121 da SEQ ID NO: 165 e de 489 a 707 da SEQ ID NO: 166.

Já uma outra seqüência de nucleotídeo ilustrativa que codificauma ILA-17RC variante humana, designada como "ILA-17RC-1" é fornecidapela SEQ ID NO: 4, o polipeptídeo codificado é mostrado na SEQ ID NO: 5.

A ILA-17RC-1 é divulgada no Pedido de Patente US de propriedade comumN- 10/458.647 e publicação WIPO de propriedade comum WO 01/04304,ambas as quais são aqui incorporadas em sua totalidade por referência. Aanálise de seqüência revelou que a ILA-17RC-1 é uma forma truncada depolipeptídeo receptor. Isto é, a ILA-17RC-1 carece de resíduos de aminoácidode 1 a 113 da SEQ ID NO: 2. A SEQ ID NO: 10 apresenta uma seqüência deaminoácido de um polipeptídeo de ILA-17RC-1 que inclui a porção determinal N de ILA-17RC.

Uma comparação das seqüências de aminoácido de ILA-17RCe ILA-17RC-1 também indicou que os dois polipeptídeos representamvariantes alternativamente unidas. A seqüência de aminoácido de ILA-17RCinclui um segmento de 17 aminoácidos (resíduos de aminoácido de 339 a 355da SEQ ID NO: 2), que a ILA-17RC-1 carece, enquanto a ILA-17RC carece,a seguir do aminoácido 479, um segmento de 13 aminoácidos descoberto naILA-17RC-1 (resíduos de aminoácido de 350 a 362 da SEQ ID NO: 5). Umpolipeptídeo que contém ambos os segmentos de aminoácido é fornecido pelaSEQ ID NO: 11, ao passo que a SEQ ID NO: 12 apresenta a seqüência deaminoácido de um polipeptídeo que carece tanto do segmento de 13aminoácidos quanto do de 17.

Já uma outra seqüência de nucleotídeo ilustrativa que codificauma ILA-17RC variante humana, designada como "ILA-17RC-6" é fornecidapela SEQ ID NO: 23, o polipeptídeo codificado é mostrado na SEQ ID NO:24. A ILA-17RC-6 contém uma deleção de 25 resíduos de aminoácidoquando comparada com a ILA-17RC como expressado na SEQ ID NO: 2.Especificamente, a ILA-17RC-6 não contém do resíduo de aminoácido 94 aoresíduo de aminoácido 118 da SEQ ID NO: 2. A análise de um clone decDNA humano que codifica a ILA-17RC-6 (SEQ ID NO: 23) revelou umdomínio de ligação de ligando extracelular de aproximadamente 427 resíduosde aminoácido (resíduos de aminoácido de 1 a 427 da SEQ ID NO: 24), umdomínio de transmembrana de aproximadamente 20 resíduos de aminoácido(resíduos de aminoácido de 428 a 448 da SEQ ID NO: 24) e um domíniointracelular de aproximadamente 218 resíduos de aminoácido (resíduos deaminoácido de 449 a 667 da SEQ ID NO: 24).

Uma seqüência de nucleotídeo ilustrativa que codifica umaILA-17RC variante de murino é fornecida pela SEQ ID NO: 25; opolipeptídeo codificado é mostrado na SEQ ID NO: 26. A ILA-17RC demurino funciona como um receptor tanto para a ILA-17A de murino (SEQ IDNOS: 17 & 18) quanto para a ILA-17F de murino (SEQ ID NOS: 19 & 20). Aanálise de um clone de cDNA de murino que codifica a ILA-17RC (SEQ IDNO: 25) revelou um domínio de ligação de ligando extracelular deaproximadamente 449 resíduos de aminoácido SEQ ID NO: 27). Além disso,um domínio de ligação de ligando é representado pela SEQ ID NO: 28.

Já uma outra seqüência de nucleotídeo ilustrativa que codificauma ILA-17RC variante de murino é fornecida pela SEQ ID NO: 29; opolipeptídeo codificado é mostrada na SEQ ID NO: 30.

O gene ILA-17RC reside no cromossoma 3p25 - 3p24. Comodebatido abaixo, esta região é associada com vários distúrbios e doenças

As análises de Northern indicam que existe expressão forte dogene ILA-17RC em tecidos da tireóide, glândula adrenal, próstata e fígado emenos expressão nos tecidos de coração, intestino delgado, estômago etraquéia. Ao contrário, existe pouca ou nenhuma expressão no cérebro,placenta, pulmão, músculo esqueletal, rim, pâncreas, baço, timo, testículo,ovário, cólon, leucócitos de sangue periférico, cordão espinal, linfônodo emedula óssea. Estas observações mostram que as seqüências de ILA-17RCpodem ser usadas diferenciadas entre vários tecidos.

Como descrito abaixo, a presente invenção fornecepolipeptídeos isolados que compreendem uma seqüência de aminoácido que épelo menos 70%, pelo menos 80% ou pelo menos 90% ou mais do que 95%,tal como 96%, 97%, 98% ou mais do que 99% ou mais idêntica a umaseqüência de aminoácido de referência de 21 a 692 da SEQ ID NO: 2, em queo polipeptídeo isolado especificamente se liga com um anticorpo queespecificamente se liga com um polipeptídeo que compreende a seqüência deaminoácido da SEQ ID NO: 2. A presente invenção também fornecepolipeptídeos isolados que compreendem uma seqüência de aminoácido que épelo menos 70%, pelo menos 80% ou pelo menos 90% idêntica a umaseqüência de aminoácido de referência selecionada do grupo que consiste de:(a) resíduos de aminoácido de 21 a 452 da SEQ ID NO: 2, (b) resíduos deaminoácido de 21 a 435 da SEQ ID NO: 10, (c) resíduos de aminoácido de 21a 677 da SEQ ID NO: 2 e (d) resíduos de aminoácido de 1 a 692 da SEQ IDNO: 2, em que o polipeptídeo isolado especificamente se liga com umanticorpo que especificamente se liga com um polipeptídeo que consiste daseqüência de aminoácido da SEQ ID NO: 2 ou da seqüência de aminoácido daSEQ ID NO: 10. Os polipeptídeos ilustrativos incluem um polipeptídeo quecompreende a seqüência de aminoácido da SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 10,SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 12.A presente invenção também fornece polipeptídeos isoladosque compreendem um domínio extracelular, em que o domínio extracelularcompreende os resíduos de aminoácido de 21 a 452 da seqüência deaminoácido da SEQ ID NO: 2 ou resíduos de aminoácido de 21 a 435 daseqüência de aminoácido da SEQ ID NO: 10. Tais polipeptídeos podemcompreender ainda um domínio de transmembrana que reside em umaposição de terminal carboxila em relação ao domínio extracelular, em que odomínio de transmembrana compreende os resíduos de aminoácido de 453 a473 da SEQ ID NO: 2. Estes polipeptídeos também podem compreender umdomínio intracelular que reside em uma posição de terminal carboxila emrelação ao domínio de transmembrana, em que o domínio intracelularcompreende resíduos de aminoácido de 474 a 677 da SEQ ID NO: 2 ouresíduos de aminoácido de 457 a 673 da SEQ ID NO: 10 e opcionalmente,uma seqüência secretora de sinal que reside em uma posição de terminalamino em relação ao domínio extracelular, em que a seqüência secretora desinal compreende resíduos de aminoácido de 1 a 20 da seqüência deaminoácido da SEQ ID NO: 2.

A presente invenção também inclui polipeptídeos de ILA-17RC variante, em que a seqüência de aminoácido do polipeptídeo variantecompartilha uma identidade com a seqüência de aminoácido da SEQ ID NO:2 selecionada do grupo que consiste de pelo menos 70% de identidade, pelomenos 80% de identidade, pelo menos 90% de identidade, pelo menos 95%de identidade ou mais do que 95% de identidade e em que qualquer diferençaentre a seqüência de aminoácido do polipeptídeo variante e a seqüência deaminoácido da SEQ ID NO: 2 é devido a uma ou mais substituições deaminoácido conservativas.

Além disso, a presente invenção também fornece polipeptídeoisolados como divulgados acima que se ligam a ILA-17F (por exemplo, aseqüência de polipeptídeo da ILA-17F humana como mostrada na SEQ IDNO: 16). A seqüência de polinucleotídeo da ILA-17F humana é mostrada naSEQ ID NO: 15. A seqüência de polinucleotídeo da ILA-17F de camundongoé mostrada na SEQ ID NO: 19 e o polipeptídeo correspondente é mostrado naSEQ ID NO: 20. A presente invenção também fornece polipeptídeos isoladoscomo divulgados acima que ligam ILA-17A (por exemplo, a seqüência depolipeptídeo de ILA-17A humano como mostrada na SEQ ID NO: 14). Aseqüência de polinucleotídeo da ILA-17A humano é mostrada na SEQ IDNO: 13. A seqüência de polinucleotídeo da ILA-17A de camundongo émostrada na SEQ ID NO: 17 e o polipeptídeo correspondente é mostrado naSEQ ID NO: 18.

A presente invenção também fornece polipeptídeo isolados eepítopos que compreendem pelo menos 15 resíduos de aminoácido contíguosde uma seqüência de aminoácido das SEQ ID NOs: 2 ou 3. Os polipeptídeosilustrativos incluem polipeptídeos que compreendem ou consistem das SEQID NOs: 2 ou 3, um epítopo antigênico destas ou um fragmento de ligação deILA-17A ou ILA-17F funcional desta. Além disso, a presente invençãotambém fornece polipeptídeos isolados como divulgado acima que se ligam a,bloqueiam, inibem, reduzem, antagonizam ou neutralizam a atividade de ILA-17F ou ILA-17A.

A presente invenção também inclui polipeptídeos de ILA-17RC variantes, em que a seqüência de aminoácido do polipeptídeo variantecompartilha uma identidade com os resíduos de aminoácido da SEQ ID NO: 2selecionados do grupo que consiste de pelo menos 70% de identidade, pelomenos 80% de identidade, pelo menos 90% de identidade, pelo menos 95%de identidade ou mais do que 95% de identidade, tal como 96%, 97%, 98% oumais do que 99% ou mais de identidade e em que qualquer diferença entre aseqüência de aminoácido do polipeptídeo variante e a seqüência deaminoácido correspondente da SEQ ID NO: 2 é devida a uma ou maissubstituições de aminoácido conservativas. Tais substituições de aminoácidoconservativas são aqui descritas. Além disso, a presente invenção tambémfornece polipeptídeos isolados como divulgados acima que se ligam a,bloqueiam, inibem, reduzem, antagonizam ou neutralizam a atividade de ILA-17F ou ILA-17A.

A presente invenção fornece ainda composições farmacêuticasque compreendem um carreador farmaceuticamente aceitável e pelo menosum de um tal vetor de expressão ou vírus recombinante que compreende taisvetores de expressão. A presente invenção inclui ainda composiçõesfarmacêuticas, que compreendem um carreador farmaceuticamente aceitável eum polipeptídeo ou anticorpo aqui descrito.

A presente invenção também fornece proteínas de fusão, quecompreendem um polipeptídeo de ILA-17RC e uma porção deimunoglobulina. Em tais proteínas de fusão, a porção de imunoglobulina podeser uma região constante da cadeia pesada de imunoglobulina, tal como umfragmento Fc humano. A presente invenção inclui ainda moléculas de ácidonucleico isoladas que codificam tais proteínas de fusão.

Estes e outros aspectos da invenção tornar-se-ão evidentes nareferência à seguinte descrição detalhada. Além disso, várias referências sãoidentificadas abaixo e são incorporadas por referência em sua totalidade.B) Definições

Na descrição que segue, vários termos são usadosextensivamente. As seguintes definições são fornecidas para facilitar oentendimento da invenção.

Como aqui usado, "ácido nucleico" ou "molécula de ácidonucleico" refere-se a polinucleotídeos, tais como ácido desoxirribonucleico(DNA) ou ácido ribonucleico (RNA), oligonucleotídeos, fragmentos geradospela reação da cadeia da polimerase (PCR) e fragmentos gerados por qualquerum de ligação, cisão, ação de endonuclease e ação de exonuclease. Asmoléculas de ácido nucleico podem ser compostas de monômeros que sãonucleotídeos que ocorrem naturalmente (tais como DNA e RNA) ou análogosde nucleotídeos que ocorrem naturalmente (por exemplo, as formas a-enantioméricas de nucleotídeos que ocorrem naturalmente) ou umacombinação de ambos. Os nucleotídeos modificados podem ter alterações nasporções de açúcar e/ou nas porções de base de pirimidina ou purina. Asmodificações de açúcar incluem, por exemplo, a substituição de um ou maisgrupos hidroxila com halogênios, grupos alquila, aminas e grupos azido ou osaçúcares podem ser funcionalizados como éteres ou ésteres. Além disso, aporção de açúcar inteira pode ser substituída com estruturas estérica eeletronicamente similares, tais como aza-açúcares e análogos de açúcarcarbocíclico. Os exemplos de modificações em uma porção de base incluempurinas e pirimidinas alquiladas, purinas ou pirimidinas aciladas ou outrossubstitutos heterocíclicos bem conhecidos. Os monômeros de ácido nucleicopodem ser ligados pelas ligações de fosfodiéster ou análogos de tais ligações.Análogos de ligações de fosfodiéster incluem fosforotioato, fosforoditioato,fosforosselenoato, fosforodisselenoato, fosforoanilotioato, fosforanilidato,fosforamidato e outros. O termo "molécula de ácido nucleico" também incluios chamados "ácidos nucleicos peptídicos," que compreendem bases de ácidonucleico que ocorrem naturalmente ou modificadas ligadas a uma cadeiaprincipal de poliamida. Os ácidos nucleicos podem ser de filamento único oude filamento duplo.

O termo "complemento de uma molécula de ácido nucleico"refere-se a uma molécula de ácido nucleico tendo uma seqüência denucleotídeo complementar e orientação reversa quando comparada com umaseqüência de nucleotídeo de referência. Por exemplo, a seqüência 5'ATGCACGGG 3' é complementar a 5' CCCGTGCA 3'.

O termo "seqüência de nucleotídeo degenerada" denota umaseqüência de nucleotídeos que inclui um ou mais códons degenerados quandocomparada com uma molécula de ácido nucleico de referência que codificaum polipeptídeo. Os códons degenerados contêm tripletos diferentes denucleotídeos, mas codificam os mesmos resíduos de aminoácido (isto é, ostripletos GAU e GAC cada um codifica Asp).

O termo "gene estrutural" refere-se a uma molécula de ácidonucleico que é transcrita em RNA mensageiro (mRNA), que é depoistraduzida em uma seqüência de aminoácidos característica de um polipeptídeoespecífico.

Uma "molécula de ácido nucleico isolada" é uma molécula deácido nucleico que não está integrada no DNA genômico de um organismo.Por exemplo, uma molécula de DNA que codifica um fator de crescimentoque foi separada do DNA genômico de uma célula é uma molécula de DNAisolada. Um outro exemplo de uma molécula de ácido nucleico isolada é umamolécula de ácido nucleico quimicamente sintetizada que não é integrada nogenoma de um organismo. Uma molécula de ácido nucleico que foi isolada deuma espécie particular é menor do que a molécula de DNA completa de umcromossoma daquela espécie.

Uma "construção de molécula de ácido nucleico" é umamolécula de ácido nucleico, de filamento único ou duplo, que foi modificadaatravés da intervenção humana para conter segmentos de ácido nucleicocombinados e justaposto em um arranjo que não existe na natureza.

"DNA Linear" denota moléculas de DNA não circulares tendoextremidades 5' e 3' livres. O DNA linear pode ser preparado a partir demoléculas de DNA circulares fechadas, tais como plasmídeos, pela digestãoenzimática ou rompimento físico.

"DNA complementar (cDNA)" é uma molécula de DNA defilamento único que é formada a partir de um padrão de mRNA pelatranscriptase reversa enzimática. Tipicamente, um iniciador complementar àsporções de mRNA é utilizado para o início da transcrição reversa. Aqueleshabilitados na técnica também usam o termo "cDNA" para dirigir-se à umamolécula de DNA de filamento duplo que consiste de uma tal molécula deDNA de filamento único e seu filamento de DNA complementar. O termo"cDNA" também refere-se a um clone de uma molécula de cDNA sintetizadaa partir de um padrão de RNA.

Um "promotor" é uma seqüência de nucleotídeo que direcionaa transcrição de um gene estrutural. Tipicamente, um promotor está localizadona região não codificadora 5' de um gene, próximo ao sítio de iníciotranscricional de um gene estrutural. Os elementos de seqüência dentro depromotores que funcionam no início da transcrição são freqüentementecaracterizados pelas seqüências de nucleotídeo de consenso. Estes elementospromotores incluem os sítios de ligação da RNA polimerase, seqüênciasTATA, seqüências CAAT, elementos específicos de diferenciação (DSEs;McGehee et al., Mol. Endocrinol. 7: 551 (1993)), elementos de resposta AMPcíclica (CREs), elementos de resposta sérica (SREs; Treisman, Seminars inCâncer Biol. 1: 47 (1990)), elementos de resposta de glicocorticóide (GREs) esítios de ligação para outros fatores de transcrição, tais como CRE/ATF(O'Reilly et al, J. Biol. Chem. 267: 19938 (1992)), AP2 (Ye et al., J. Biol.Chem. 269: 25728 (1994)), SPl, a proteína de ligação de elemento deresposta cAMP (CREB; Loeken, Gene Expr. 3: 253 (1993)) e fatoresoctaméricos (ver, no geral, Watson et al., eds., Molecular Biology of o gene,4a ed. (The Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc. 1987) e Lemaigree Rousseau, Biochem. J. 303: 1 (1994)). Se um promotor é um promotorindutível, então a taxa de transcrição aumenta em resposta a um agenteindutor, ao contrário, a taxa de transcrição não é regulada por um agenteindutor se o promotor é um promotor constitutivo. Os promotores repressíveistambém são conhecidos.

Um "promotor de núcleo" contém seqüências de nucleotídeoessenciais para a função promotora, incluindo o TATA box e o início detranscrição. Por esta definição, um promotor de núcleo pode ter ou nãoatividade detectável na ausência de seqüências específicas que podem realçara atividade ou conferir atividade específica de tecido.

Um "elemento regulador" é uma seqüência de nucleotídeo quemodula a atividade de um promotor de núcleo. Por exemplo, um elementoregulador pode conter uma seqüência de nucleotídeo que se liga com fatorescelulares possibilitando a transcrição exclusiva ou preferencialmente emcélulas, tecidos ou organelas particulares. Estes tipos de elementosreguladores são normalmente associados com genes que são expressados emuma maneira "específica de célula," "específica de tecido," ou "específica deorganela".

Um "realçador" é um tipo de elemento regulador que podeaumentar a eficiência de transcrição, independente da distância ou orientaçãodo realçador em relação ao sítio de partida da transcrição.

"DNA heterólogo" refere-se a uma molécula de DNA ou umapopulação de moléculas de DNA, que não existem naturalmente dentro deuma dada célula hospedeira. As moléculas de DNA heterólogas a uma célulahospedeira particular pode conter DNA derivado da espécie de célulahospedeira (isto é, DNA endógeno) contanto que o DNA hospedeiro sejacombinado com DNA não hospedeiro (isto é, DNA exógeno). Por exemplo,uma molécula de DNA contendo um segmento de DNA não hospedeiro quecodifica um polipeptídeo operavelmente ligado a um segmento de DNAhospedeiro que compreenda um promotor de transcrição é considerado seruma molécula de DNA heteróloga. Ao contrário, uma molécula de DNAheteróloga pode compreender um gene endógeno operavelmente ligado comum promotor exógeno. Como uma outra ilustração, uma molécula de DNAque compreende um gene derivado de uma célula do tipo selvagem éconsiderada ser DNA heterólogo se esta molécula de DNA é introduzido emuma célula mutante que carece do gene do tipo selvagem.

Um "polipeptídeo" é um polímero de resíduos de aminoácidounidos pelas ligações peptídicas, sejam produzidos natural ou sinteticamente.Os polipeptídeos de menos do que cerca de 10 resíduos de aminoácido sãohabitualmente aludidos como "peptídeos."

Uma "proteína" é uma macromolécula que compreende umaou mais cadeias de polipeptídeo. Uma proteína também pode compreendercomponentes não peptídicos, tais como grupos de carboidrato. Carboidratos eoutros substituintes não peptídicos podem ser adicionados a uma proteína pelacélula em que a proteína é produzida e variará com o tipo de célula. Asproteínas são aqui definidas em termos de suas estruturas de cadeia principalde aminoácido; os substituintes tais como grupos carboidrato no geral não sãoespecificados, mas não obstante podem estar presentes.

Um peptídeo ou polipeptídeo codificados por uma molécula deDNA não hospedeira são um peptídeo ou polipeptídeo "heterólogos".

Um "vetor de clonagem" é uma molécula de ácido nucleico,tal como um plasmídeo, cosmídeo ou bacteriofago, que tem a capacidade dereplicar autonomamente em uma célula hospedeira. Os vetores de clonagemtipicamente contêm um ou um número pequeno de sítios de restrição deendonuclease que permitem a inserção de uma molécula de ácido nucleico emuma maneira determinável sem a perda de uma função biológica essencial dovetor, assim como as seqüências de nucleotídeo que codificam um genemarcador que é adequado para o uso na identificação e seleção de célulastransformadas com o vetor de clonagem. Os genes marcadores tipicamenteincluem genes que fornecem resistência à tetraciclina ou resistência àampicilina.

Um "vetor de expressão" é uma molécula de ácido nucleicoque codifica um gene que é expressado em uma célula hospedeira.Tipicamente, um vetor de expressão compreende um promotor de transcrição,um gene e um terminador de transcrição. A expressão de gene é usualmentecolocada sob o controle de um promotor e um tal gene é dito ser"operavelmente ligado ao" promotor. Similarmente, um elemento regulador e

um promotor de núcleo são operavelmente ligados se o elemento reguladormodula a atividade do promotor de núcleo.

Um "hospedeiro recombinante" é uma célula que contém umamolécula de ácido nucleico heteróloga, tal como um vetor de clonagem ouvetor de expressão. No presente contexto, um exemplo de um hospedeirorecombinante é uma célula que produz ILA-17RC a partir de um vetor deexpressão. Ao contrário, a ILA-17RC pode ser produzida por uma célula queé uma "fonte natural" de ILA-17RC e que carece de um vetor de expressão.

"Transformantes integrativos" são células hospedeirasrecombinantes, em que o DNA heterólogo tem se tornado integrado no DNAgenômico das células.

Uma "proteína de fusão" é uma proteína híbrida expressadapor uma molécula de ácido nucleico que compreende a seqüências denucleotídeo de pelo menos dois genes. Por exemplo, uma proteína de fusãopode compreender pelo menos parte de um polipeptídeo ILA-17RC fundidocom um polipeptídeo que se liga a uma matriz de afinidade. Uma tal proteínade fusão fornece um meio para isolar quantidades grandes de ILA-17RCusando a cromatografia de afinidade.

O termo "receptor" denota uma proteína associada com acélula que se liga a uma molécula bioativa chamada de um "ligando." Estainteração medeia o efeito do ligando sobre a célula. Receptores podem serligados à membrana, citossólicos ou nucleares; monoméricos (por exemplo,receptor do hormônio estimulador da tireóide, receptor beta-adrenérgico) oumultimérico (por exemplo, receptor de PDGF, receptor do hormônio docrescimento, receptor de ILA-3, receptor de GM-CSF, receptor de G-CSF,receptor de eritropoietina e receptor ILA-6). Os receptores ligados àmembrana são caracterizados por uma estrutura de domínio múltiplo quecompreende um domínio de ligação de ligando extracelular e um domínioefetor intracelular que é tipicamente envolvido na transdução de sinal. Emcertos receptores ligados à membrana, o domínio de ligação de ligandoextracelular e o domínio efetor intracelular estão localizados em polipeptídeosseparados que compreendem o receptor funcional completo.

No geral, a ligação de ligando ao receptor resulta em umamudança conformacional no receptor que causa uma interação entre odomínio efetor e outra(s) molécula(s) na célula, que por sua vez leva a umaalteração no metabolismo da célula. Os eventos metabólicos que sãofreqüentemente ligados às interações de receptor-ligando incluem atranscrição de gene, fosforilação, desfosforilação, aumentos na produção deAMP cíclica, mobilização de cálcio celular, mobilização de lipídeos demembrana, adesão celular, hidrólise de lipídeos de inositol e hidrólise defosfolipídeos.

Um "receptor solúvel" é um polipeptídeo receptor que não estáligado a uma membrana celular. Os receptores solúveis são maishabitualmente polipeptídeos do receptor de ligação de ligando que carecemdos domínios de transmembrana e citoplásmicos e outras ligações para amembrana celular tal como por intermédio de glicofosfoinositol (gpi). Osreceptores solúveis podem compreender resíduos de aminoácido adicionais,tais como rótulos de afinidade que fornecem a purificação do polipeptídeo oufornecem sítios para a ligação do polipeptídeo a um substrato ou seqüênciasda região constante da imunoglobulina. Muitos receptores de superfíciecelular ocorrem naturalmente, contrapartes solúveis que são produzidas pelaproteólise ou traduzidas a partir de mRNAs alternativamente unidas. Osreceptores solúveis podem ser monoméricos, homodiméricos, heterodiméricosou multiméricos, com receptores multiméricos no geral não compreendendomais do que 9 subunidades, preferivelmente não compreendendo mais do que6 subunidades e o mais preferivelmente não compreendendo mais do que 3subunidades. Os polipeptídeos receptores são ditos ser substancialmente livresde segmentos de polipeptídeo de transmembrana e intracelular quando elescarecem de porções suficientes destes segmentos para fornecer a ancoragemde membrana ou transdução de sinal, respectivamente. Os receptores solúveisde receptores de citocina no geral compreendem o domínio de ligação decitocina extracelular livre de um domínio de transmembrana e domíniointracelular. Por exemplo, os receptores solúveis representativos incluemreceptores solúveis para ILA-17RA como mostrado nas SEQ ID NOs: 167(polinucleotídeo) e 21 (polipeptídeo). Está bem dentro do nível de uma pessoade habilidade na técnica delinear quais seqüências de uma seqüência receptorade citocina conhecida compreendem o domínio de ligação de citocinaextracelular livre de um domínio de transmembrana e domínio intracelular.Além disso, uma pessoa de habilidade na técnica usando o código genéticopode facilmente determinar polinucleotídeos que codificam tais polipetídeosde receptor solúvel.

O termo "seqüência secretora de sinal" denota uma seqüênciade DNA que codifica um peptídeo (um "peptídeo secretor") que, como umcomponente de um polipeptídeo maior, direciona o polipeptídeo maior atravésde um caminho secretor de uma célula na qual o mesmo é sintetizado. Opolipeptídeo maior é habitualmente clivado para remover o peptídeo secretordurante o trânsito através do caminho secretor.

Um "polipeptídeo isolado" é um polipeptídeo que éessencialmente livre de contaminar componentes celulares, tais comocarboidrato, lipídeo ou outras impurezas proteináceas associadas com opolipeptídeo real. Tipicamente, uma preparação de polipeptídeo isoladocontém o polipeptídeo em uma forma altamente purificada, isto é, pelo menoscerca de 80% pura, pelo menos cerca de 90% pura, pelo menos cerca de 95%pura, mais do que 95% pura, tal como 96%, 97% ou 98% ou mais pura oumais do que 99% pura. Uma maneira para mostrar que uma preparação deproteína particular contém um polipeptídeo isolado é pelo aparecimento deuma faixa única a seguir da eletroforese em gel de dodecil sulfato de sódio(SDS)-poliacrilamida da preparação de proteína e tingimento de CoomassieBrilliant Blue do gel. Entretanto, o termo "isolado" não exclui a presença domesmo polipeptídeo em formas físicas alternativas, tais como dímeros oualternativamente formas glicosiladas ou derivatizadas.

Os termos "terminal amino" e "terminal carboxila" são aquiusados para denotar posições dentro de polipeptídeos. Onde contexto permite,estes termos são usados com referência a uma seqüência ou porção particularde um polipeptídeo para denotar proximidade ou posição relativa. Porexemplo, uma certa seqüência posicionada no terminal carboxila em relação auma seqüência de referência dentro de um polipeptídeo está localizadapróxima ao terminal carboxila da seqüência de referência, mas não estánecessariamente no terminal carboxila do polipeptídeo completo.

O termo "expressão" refere-se à biossíntese de um produto degene. Por exemplo, no caso de um gene estrutural, a expressão envolve atranscrição do gene estrutural em mRNA e a tradução do mRNA em um oumais polipeptídeos.

O termo "variante de junção" é aqui usado para denotar formasalternativas de RNA transcrito a partir de um gene. A variação de junçãosurge naturalmente através do uso de sítios de junção alternativos dentro deuma molécula de RNA transcrita ou menos habitualmente entre moléculas deRNA separadamente transcritas e pode resultar em diversos mRNAstranscritos a partir do mesmo gene. As variantes de junção podem codificarpolipeptídeos tendo seqüência de aminoácido alterada. O termo variante dejunção também é aqui usado para denotar um polipeptídeo codificado poruma variante de junção de um mRNA transcrito a partir de um gene.

Como aqui usado, o termo "imunomodulador" inclui citocinas,fatores de crescimento de célula tronco, linfotoxinas, moléculas co-estimuladoras, fatores hematopoiéticos e outros e análogos sintéticos destasmoléculas.

O termo "par complemento/anti-complemento" denota porçõesnão idênticas que formam um par estável não covalentemente associado,estável sob condições apropriadas. Por exemplo, biotina e avidina (ouestreptavidina) são membros prototípicos de um par de complemento/anti-complemento. Outros pares de complemento/anti-complemento exemplaresincluem pares de receptor/ligando, anticorpo/ antígeno (ou hapteno ouepítopo), pares de polinucleotídeo de sentido/anti-sentido e outros. Onde adissociação subseqüente do par de complemento/anti-complemento édesejável, o par de complemento/anti-complemento preferivelmente tem umaafinidade de ligação de menos do queIO9M-1.

Um "anticorpo anti-idiotípico" é um anticorpo que se liga como domínio da região variável de uma imunoglobulina. No presente contexto,um anticorpo anti-idiotípico liga com a região variável de um anticorpo anti-ILA-17RC e assim, um anticorpo anti-idiotípico imita um epítopo de ILA-17RC.

Um "fragmento de anticorpo" é uma porção de um anticorpotal como F(ab')2, F(ab)2, Fab', Fab e outros. Independente da estrutura, umfragmento de anticorpo liga com o mesmo antígeno que é reconhecido peloanticorpo intacto. Por exemplo, um fragmento de anticorpo monoclonal anti-ILA-17RC se liga com um epítopo de ILA-17RC.

O termo "fragmento de anticorpo" também inclui umpolipeptídeo sintético ou um geneticamente engendrado que se liga a umantígeno específico, tal como polipeptídeos que consistem da região variávelde cadeia leve, os fragmentos "Fv" que consistem das regiões variáveis dascadeias pesada e leve, moléculas de polipeptídeo de cadeia únicarecombinante em que as regiões variáveis leve e pesada são conectadas porum peptídeo ligador ("proteínas scFv") e unidades de reconhecimentomínimas que consistem dos resíduos de aminoácido que imitam a região^ hipervariável.

Um "anticorpo quimérico" é uma proteína recombinante quecontém os domínios variáveis e regiões determinadoras decomplementaridade derivadas de um anticorpo de roedor, enquanto o resto damolécula de anticorpo é derivada de um anticorpo humano.

"Anticorpos humanizados" são proteínas recombinantes emque as regiões determinadoras de complementaridade de murino de umanticorpo monoclonal foram transferidas das cadeias variáveis pesadas e leveda imunoglobulina de murino em um domínio variável humano. A construçãode anticorpos humanizados para o uso terapêutico em seres humanos que sãoderivados de anticorpos de murino, tal como aqueles que se ligam a ouneutralizam uma proteína humana, estão dentro da habilidade de uma pessoana técnica.

Como aqui usado, um "agente terapêutico" é uma molécula ouátomo que são conjugados a uma proporção de anticorpo para produzir umconjugado que é útil para terapia. Os exemplos de agentes terapêuticosincluem medicamentos, toxinas, imunomoduladores, queladores, compostosde boro, agentes fotoativos ou corantes e radioisótopos.

Um "rótulo detectável" é uma molécula ou átomo que pode serconjugado a uma porção de anticorpo para produzir uma molécula útil para odiagnóstico. Os exemplos de rótulos detectáveis incluem queladores, agentesfotoativos, radioisótopos, agentes fluorescentes, íons paramagnéticos ououtras porções marcadoras.

O termo "rótulo de afinidade" é aqui usado para denotar umsegmento de polipeptídeo que pode ser ligado a um segundo polipeptídeo parafornecer a purificação ou detecção do segundo polipeptídeo ou fornecer sítiospara a ligação do segundo polipeptídeo a um substrato. Principalmente,qualquer peptídeo ou proteína para a qual um anticorpo ou outro agente deligação específico está disponível pode ser usado como um rótulo deafinidade. Os rótulos de afinidade incluem um trato de poli-histidina, proteínaA (Nilsson et al., EMBO J. 4: 1075 (1985); Nilsson et al., Metods Enzymol.198: 3 (1991)), glutationa S transferase (Smith e Johnson, Gene 67: 31(1988)), rótulo de afinidade Glu-Glu (Grussenmeyer et al., Proc. Natl. Acad.Sei. USA 82: 7952 (1985)), substância P, peptídeo FLAG (Hopp et al.,Biotechnology 6: 1204 (1988)), peptídeo de ligação de estreptavidina ou outroepítopo antigênico ou domínio de ligação. Ver, no geral, Ford et al., ProteinExpression and Purification 2: 95 (1991). As moléculas de DNA quecodificam os rótulos de afinidade são disponíveis de fornecedores comerciais(por exemplo, Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ).

Um "anticorpo nu" é um anticorpo inteiro, como oposto a umfragmento de anticorpo, que não é conjugado com um agente terapêutico. Osanticorpos nús incluem anticorpos tanto policlonais quanto monoclonais,assim como certos anticorpos recombinantes, tais como anticorpos quiméricose humanizados.

Como aqui usado, o termo "componente de anticorpo" incluitanto um anticorpo inteiro quanto um fragmento de anticorpo.

Um "imunoconjugado" é um conjugado de um componente deanticorpo com um agente terapêutico ou um rótulo detectável.

Como aqui usado, o termo "proteína de fusão de anticorpo"refere-se a uma molécula recombinante que compreende um componente deanticorpo e um componente de polipeptídeo ILA-17RC. Os exemplos de umaproteína de fusão de anticorpo incluem uma proteína que compreende umdomínio extracelular de ILA-17RC e um domínio Fc ou uma região deligação de antígeno.

Um "polipeptídeo alvo" ou um "peptídeo alvo" é umaseqüência de aminoácido que compreende pelo menos um epítopo e que éexpressado em uma célula alvo, tal como uma célula de tumor ou uma célulaque carrega um antígeno de agente infeccioso. As células T reconhecemepítopos de peptídeo apresentados por um complexo da molécula dahistocompatibilidade principal a um polipeptídeo alvo ou peptídeo alvo etipicamente lisar a célula alvo ou recrutar outras células imunes para o sítio dacélula alvo, matando deste modo a célula alvo.

Um "peptídeo antigênico" é um peptídeo que ligará umamolécula de complexo da histocompatibilidade principal para formar umcomplexo de MHC-peptídeo que é reconhecido por uma célula T, induzindodeste modo uma resposta linfocítica citotóxica na apresentação à célula T.Assim, peptídeos antigênicos são capazes de ligação a um complexoapropriado da molécula de histocompatibilidade principal e induzindo umaresposta de células T citotóxica, tal como a Iise celular ou liberação decitocina específico contra a célula alvo que liga ou expressa o antígeno. Opeptídeo antigênico pode ser ligado no contexto de uma molécula docomplexo da histocompatibilidade principal classe I ou classe II, em umacélula que apresenta antígeno ou em uma célula alvo.

Nos eucariotas, a RNA polimerase II catalisa a transcrição deum gene estrutural para produzir mRNA. Uma molécula de ácido nucleicopode ser designada para conter um padrão da RNA polimerase II em que otranscrito de RNA tem uma seqüência que é complementar àquela de ummRNA específico. O transcrito de RNA é chamado de um "RNA de anti-sentido" e uma molécula de ácido nucleico que codifica o RNA de anti-sentido é chamado um "gene de anti-sentido." As moléculas de RNA de anti-sentido são capazes de ligação às moléculas de mRNA, resultando em umainibição da tradução de mRNA.

Um "oligonucleotídeo de anti-sentido específico para ILA-17RC" ou um "oligonucleotídeo de anti-sentido de ILA-17RC" é umoligonucleotídeo tendo uma seqüência (a) capaz de formar um triplex estávelcom uma porção do gene ILA-17RC ou (b) capaz de formar um duplexestável com uma porção de um transcrito de mRNA do gene ILA-17RC.Uma "ribozima" é uma molécula de ácido nucleico quecontém um centro catalítico. O termo inclui enzimas de RNA, RNAs de auto-junção, RNAs auto-cliváveis e moléculas de ácido nucleico que realizam estasfunções catalíticas. Uma molécula de ácido nucleico que codifica umaribozima é chamada de um "gene de ribozima."

Uma "seqüência guia externa" é uma molécula de ácidonucleico que direciona a ribozima endógena, RNase P, a uma espécieparticular de mRNA intracelular, resultando na clivagem da mRNA pelaRNase P. Uma molécula de ácido nucleico que codifica uma seqüência guiaexterna é chamada de um "gene de seqüência guia externa."

O termo "gene de ILA-17RC variante" refere-se às moléculasde ácido nucleico qμe codificam um polipeptídeo tendo uma seqüência deaminoácido que é uma modificação da SEQ ID NO: 2. Tais variantes incluempolimorfismos que ocorrem naturalmente de genes ILA-17RC, assim comogenes sintéticos que contêm substituições de aminoácido conservativas daseqüência de aminoácido da SEQ ID NO: 2. As formas variantes adicionaisde genes ILA-17RC são moléculas de ácido nucleico que contêm inserções oudeleções das seqüências de nucleotídeo aqui descritas. Um gene ILA-17RCvariante pode ser identificado, por exemplo, pela determinação de se o genehibridiza com uma molécula de ácido nucleico tendo a seqüência denucleotídeo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 4 ou seu complemento, sobcondições severas.

Alternativamente, os genes ILA-17RC variantes podem seridentificados pela comparação de seqüência. Duas seqüências de aminoácidotêm "100% de identidade de seqüência de aminoácido" se os resíduos deaminoácido das duas seqüências de aminoácido são os mesmos quandoalinhados para correspondência máxima. Similarmente, duas seqüências denucleotídeo têm "100% de identidade de seqüência de nucleotídeo" se osresíduos de nucleotídeo das duas seqüências de nucleotídeo são os mesmosquando alinhados para correspondência máxima. As comparações deseqüência podem ser realizadas usando programas de software padrão taiscomo aqueles incluídos no conjunto de computação de bioinformáticasLASERGENE, que é produzido pela DNASTAR (Madison, Wisconsin).

Outros métodos para comparar duas seqüências de nucleotídeo ou aminoácidopela determinação do alinhamento ótimo são bem conhecidos por aqueles dehabilidade na técnica (ver, por exemplo, Peruski e Peruski, The Internet andthe New Biology: Tools for Genomic and Molecular Research (ASM Press,Inc. 1997), Wu et ai. (eds.), "Information Superhighway and ComputerDatabases of Nucleic Acids and Proteins," em Metods in GeneBiotechnology, páginas 123-151 (CRC Press, Inc. 1997) e Bishop (ed.),Guide to Human Genome Computing, 2a Edição (Academic Press, Inc.1998)). Os métodos particulares para a determinação de identidade deseqüência são descritos abaixo.

Independente do método particular usado para identificar umgene de ILA-17RC variante ou polipeptídeo de ILA-17RC variante, um geneou polipeptídeo variantes codificados por um gene variante podem serfuncionalmente caracterizados pela capacidade para ligar especificamente aum anticorpo anti-ILA-17RC. Um gene de ILA-17RC variante oupolipeptídeo de ILA-17RC variante também podem ser funcionalmentecaracterizados pela capacidade para ligar ao seu ligando, por exemplo, ILA-17A e/ou ILA-17F, usando um ensaio biológico ou bioquímico aqui descrito.

O termo "variante alélica" é aqui usado para denotar qualqueruma de duas ou mais formas alternativas de um gene que ocupam o mesmo25 local cromossômico. A variação alélica surge naturalmente através damutação e podem resultar no polimorfismo fenotípico dentro das populações.As mutações de gene podem ser silenciosas (nenhuma mudança nopolipeptídeo codificado) ou podem codificar polipeptídeos tendo seqüência deaminoácido alterada. O termo variante alélica também é aqui usado paradenotar uma proteína codificada por uma variante alélica de um gene.

O termo "ortólogo" denota um polipeptídeo ou proteínaobtidos de uma espécie que é a contraparte funcional de um polipeptídeo ouproteína de uma espécie diferente. As diferenças de seqüência entre ortólogossão o resultado da especiação.

"Parálogos" são proteínas distintas mas estruturalmenterelacionadas fabricadas por um organismo. Acredita-se que os parálogossurjam através da duplicação de gene. Por exemplo, a-globina, β-globina emioglobina são parálogos entre si.

A presente invenção inclui fragmentos funcionais de genesILA-17RC. Dentro do contexto desta invenção, um "fragmento funcional" deum gene de ILA-17RC refere-se a uma molécula de ácido nucleico quecodifica uma porção de um polipeptídeo de ILA-17RC que é um domínio aquidescrito ou pelo menos especificamente liga com um anticorpo anti-ILA-17RC.

Devido à imprecisão de métodos analíticos padrão, os pesosmoleculares e os comprimentos de polímeros são entendidos ser valoresaproximados. Quando um tal valor é expressado como "cerca de" X ou"aproximadamente" X, o valor estabelecido de X será entendido ser preciso a±10%.

C) Produção de Polinucleotídeos ou Genes de ILA-17RA e ILA-17RC

As moléculas de ácido nucleico que codificam um gene ILA-17RA ou ILA-17RC humano ou polinucleotídeos que codificam qualquer umdos polipeptídeos solúveis da presente invenção podem ser obtidos pelatriagem de um cDNA humano ou biblioteca genômica usando sondas depolinucleotídeo com base na SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 4. Estas técnicassão padrão e bem-estabelecidas e podem ser realizadas usando kits declonagem disponível pelos fornecedores comerciais. Ver, por exemplo,Ausubel et al. (eds.), Short Protocols in Molecular Biology, 3a Edição, JohnWiley & Sons 1995; Wu et al., Metods in Gene Biotechnology, CRC Press,Inc. 1997; Aviv e Leder, Proc. Nat'l Acad. Sei. USA 69: 1408 (1972); Huynhet al., "Construiring and Triar cDNA Libraries in XgtlO and Xgtl 1," em DNACloning: A Practical Metod Vol. I, Glover (ed.), página 49 (IRL Press, 1985);Wu (1997) nas páginas 47-52.

Moléculas de ácido nucleico que codificam um gene ILA-17RA ou ILA-17RC humano também podem ser obtidas usando a reação dacadeia da polimerase (PCR) com iniciadores de oligonucleotídeo tendoseqüências de nucleotídeo que são fundamentadas nas seqüências denucleotídeo do gene ILA-17RA ou ILA-17RC ou cDNA. Os métodos geraispara triar bibliotecas com PCR são fornecidos, por exemplo, por Yu et al.,"Use of the Polymerase Chain Reaction to Screen Phage Libraries," emMetods in Molecular Biology, Vol. 15: PCR Protocols: Current Metods andApplications, White (ed.), Humana Press, Inc., 1993. Além disso, as técnicaspara usar PCR para isolar genes relacionados são descritos, por exemplo, porPreston, "Use of Degenerate Oligonucleotides Primers and the PolymeraseChain Reaction to Clone Gene Family Members," em Metods in MolecularBiology, Vol. 15: PCR Protocols: Current Metods and Applications, White(ed.), Humana Press, Inc. 1993. Como uma alternativa, um gene ILA-17RAou ILA-17RC pode ser obtido sintetizando-se moléculas de ácido nucleicousando oligonucleotídeos longos de imprimação mútua e as seqüências denucleotídeo aqui descritas (ver, por exemplo, Ausubel (1995)). As técnicasestabelecidas usando a reação da cadeia da polimerase fornecem a capacidadepara sintetizar moléculas de DNA de pelo menos dois quilobases nocomprimento (Adang et al., Plant Molec. Biol. 21: 1131 (1993), Bambot etal., PCR Metods and Applications 2: 266 (1993), Dillon et al., "Use of thePolymerase Chain Reaction for the Rapid Construction of Synthetic Genes,"em Metods in Molecular Biology, Vol. 15: PCR Protocols: Current Metodsand Applications, White (ed.), páginas 263-268, (Humana Press, Inc. 1993) eHolowachuk et al., PCR Metods Appl. 4: 299 (1995)). Para revisões sobre asíntese de polinucleotídeo, ver, por exemplo, Glick e Pasternak, MolecularBiotechnology, Principies and Applications of recombinant DNA (ASM Press1994), Itakura et al., Annu. Rev. Biochem. 53: 323 (1984) e Climie et al.,Proc. Nat'1 Acad. Sei. USA 87: 633 (1990).

D) Produção de Variantes dos Genes ILA-17RA ou ILA-17RC

A presente invenção fornece uma variedade de moléculas deácido nucleico, incluindo moléculas de DNA e RNA5 que codificam ospolipeptídeos ILA-17RA ou ILA-17RC aqui divulgados. Aqueles habilitadosna técnica facilmente reconhecerão que, em vista da degenerescência docódigo genético, variação de seqüência considerável é possível entre estasmoléculas de polinucleotídeo. Além disso, a presente invenção tambémfornece polipeptídeos receptores isolados, solúveis, monoméricos,homodiméricos, heterodiméricos e multiméricos que compreendem pelomenos uma porção da ILA-17RC que é substancialmente homóloga aopolipeptídeo receptor da SEQ ID NO: 2. Assim, a presente invençãoconsidera as moléculas de ácido nucleico que codificam o polipeptídeo deILA-17RA ou ILA-17RC que compreendem nucleotídeos degenerados daSEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 4 e seus equivalentes de RNA.

Aqueles habilitados na técnica facilmente reconhecerão que,em vista da degenerescência do código genético, variação de seqüênciaconsiderável é possível entre estas moléculas de polinucleotídeo. A SEQ IDNO: 7 é uma seqüência de nucleotídeo degenerada que abrange todas asmoléculas de ácido nucleico que codificam o polipeptídeo de ILA-17RC daSEQ ID NO: 2. aqueles habilitados na técnica reconhecerão que a seqüênciadegenerada da SEQ ID NO: 7 também fornece todas as seqüências de RNAque codificam a SEQ ID NO: 2, pela substituição de U no lugar de T. Assim,a presente invenção considera as moléculas de ácido nucleico que codificam opolipeptídeo de ILA-17RC que compreendem do nucleotídeo 154 aonucleotídeo 2229 da SEQ ID NO: 1 e seus equivalentes de RNA.Similarmente, a seqüência degenerada de ILA-17RC-1 da SEQ ID NO: 6também fornece todas as seqüências de RNA que codificam a SEQ ID NO: 5,pela substituição de U no lugar de T.

A Tabela 4 apresenta os códigos de uma letra para denotarposições de nucleotídeo degeneradas. As "resoluções" são os nucleotídeosdenotados por uma letra do código. "Complemento" indica o código para o(s)nucleotídeo(s) complementar(es). Por exemplo, o código Y denota C ou T eseu complemento R denota A ou G, A sendo complementar a T e G sendocomplementar a C.

Tabela 4

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Os códons degenerados, que abrangem todos os códonspossíveis para um dado aminoácido, são apresentados na Tabela 5.Tabela 5

<table>table see original document page 54</column></row><table>

Uma pessoa de habilidade comum na técnica avaliará quealguma ambigüidade é introduzida na determinação de um códon degenerado,representativo de todos os códons possíveis que codificam um aminoácido.Por exemplo, o códon degenerado para serina (WSN) pode, em algumascircunstâncias, codificar arginine (AGR) e o códon degenerado para arginina(MGN) pode, em algumas circunstâncias, codificar serina (AGY). Umarelação similar existe entre códons que codificam fenilalanina e leucina.Assim, alguns polinucleotídeos abrangidos pela seqüência degenerada podemcodificar as seqüências de aminoácido variantes, mas uma pessoa dehabilidade comum na técnica pode facilmente identificar tais seqüênciasvariantes pela referência às seqüências de aminoácido da SEQ ID NO: 6. Asseqüências variantes podem ser facilmente testadas quanto a funcionalidadecomo aqui descrito.

Espécies diferentes podem exibir "uso de códon preferencial."No geral, ver, Grantham et al., Nucl. Acids Res. 8: 1893 (1980), Haas et al.Curr. Biol. 6: 315 (1996), Wain-Hobson et al, Gene 13: 355 (1981), Grosjeane Fiers, Gene 18: 199 (1982), Holm, Nuc. Acids Res. 14: 3075 (1986),Ikemura, J. Mol. Biol. 158: 573 (1982), Sharp e Matassi, Curr. Opin. Genet.

Dev. 4: 851 (1994), Kane, Curr. Opin. Biotechnol. 6: 494 (1995) e Makrides,Microbiol. Rev. 60: 512 (1996). Como aqui usado, o termo "uso de códonpreferencial" ou "códons preferenciais" é um termo da técnica que se refereaos códons de tradução de proteína que são mais freqüentemente usados emcélulas de uma certa espécie, favorecendo assim um ou uns poucosrepresentativos dos códons possíveis que codificam cada aminoácido (Ver aTabela 5). Por exemplo, o aminoácido treonina (Thr) pode ser codificado porACA, ACC, ACG ou ACT, mas em células de mamífero ACC é o códon maishabitualmente usado; em outras espécies, por exemplo, células de inseto,levedura, vírus ou bactérias, códons de Thr diferentes podem ser preferenciais.Os códons preferenciais para uma espécie particular podem serintroduzidos dentro dos polinucleotídeos da presente invenção por umavariedade de métodos conhecidos na técnica. A introdução de seqüências decódon preferenciais no DNA recombinante, por exemplo, pode realçar aprodução da proteína tornando a tradução da proteína mais eficiente dentro deum tipo ou espécie de célula particulares. Portanto, as seqüências de códondegenerado aqui divulgadas servem como um padrão para otimizar aexpressão de polinucleotídeos em vários tipos e espécies de célulahabitualmente usados na técnica e aqui divulgados. As seqüências contendocódons preferenciais podem ser testadas e otimizadas para a expressão emvárias espécies e testadas quanto a funcionalidade como aqui divulgado.

Um cDNA que codifica ILA-17RA ou ILA-17RC pode serisolado por uma variedade de métodos, tais como sondando-se com um cDNAhumano completo ou parcial ou com um ou mais conjuntos de sondasdegeneradas com base nas seqüências divulgadas. Um cDNA também podeser clonado usando a reação da cadeia da polimerase com iniciadoresplanejados a partir das seqüências ILA-17RA ou ILA-17RC humanasrepresentativas aqui divulgada. Além disso, uma biblioteca de cDNA pode serusada para transformar ou transfectar células hospedeiras e a expressão docDNA de interesse pode ser detectada com um anticorpo para o polipeptídeode ILA-17RA ou ILA-17RC.

Aqueles habilitados na técnica reconhecerão que a seqüênciadivulgada na SEQ ID NO: 1 representa um alelo único da ILA-17RC humanae que a variação alélica e a junção alternativa são esperadas ocorrer. Asvariantes alélicas desta seqüência podem ser clonadas sondado-se o cDNA oubibliotecas genômicas de indivíduos diferentes de acordo com procedimentospadrão. As variantes alélicas das seqüências de nucleotídeo aqui divulgadas,incluindo aquelas contendo mutações silenciosas e aquelas em que asmutações resultam em mudanças de seqüência de aminoácido, estão dentro doescopo da presente invenção, como são as proteínas que são variantes alélicasdas seqüências de aminoácido aqui divulgadas. As moléculas de cDNAgeradas a partir de mRNAs alternativamente unidos, que retêm aspropriedades do polipeptídeo de ILA-17RC são incluídos dentro do escopo dapresente invenção, como o são os polipeptídeos codificados por tais cDNAs e mRNAs. As variantes alélicas e variantes de junção destas seqüências podemser clonadas sondando-se cDNA ou bibliotecas genômicas de indivíduos outecidos diferentes de acordo com procedimentos padrão conhecidos natécnica.

Usando os métodos debatidos acima, uma pessoa de habilidadecomum na técnica pode preparar uma variedade de polipeptídeos quecodificam um receptor solúvel que compreende uma porção de umasubunidade do receptor de ILA-17RC é substancialmente homóloga à SEQ IDNO: 1 ou SEQ ID NO: 4 ou que codifica toda ou um fragmento da SEQ IDNO: 2 ou SEQ ID NO: 5 ou variantes alélicas destas e retêm as propriedadesde ligação de ligando do receptor de ILA-17RC do tipo selvagem. Taispolipeptídeos também podem incluir segmentos de polipeptídeo adicionaiscomo no geral aqui divulgados.

Dentro de certas formas de realização da invenção, asmoléculas de ácido nucleico isoladas podem hibridizar sob condições severascom as moléculas de ácido nucleico que compreendem as seqüências denucleotídeo aqui divulgadas. Por exemplo, tais moléculas de ácido nucleicopodem hibridizar sob condições severas com as moléculas de ácido nucleicoque compreendem a seqüência de nucleotídeo da SEQ ID NO: 1 ou SEQ IDNO: 4 ou com as moléculas de ácido nucleico que compreende uma seqüênciade nucleotídeo complementar à SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 4 oufragmentos destas.

No geral, as condições severas são selecionadas para seremcerca de 5o C mais baixas do que o ponto de fusão térmica (Tm) para aseqüência específica em uma concentração iônica e pH definidos. A Tm é atemperatura (sob concentração iônica e pH definidos) na qual 50% daseqüência alvo hibridiza com uma sonda perfeitamente emparelhada. A seguirda hibridização, as moléculas de ácido nucleico podem ser lavadas pararemover moléculas de ácido nucleico não hibridizadas sob condições severasou sob condições altamente severas. Ver, por exemplo, Sambrook et al.,Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Segunda Edição (Cold SpringHarbor Press 1989); Ausubel et al., (eds.), Current Protocols in MolecularBiology (John Wiley and Sons, Inc. 1987); Berger e Kimmel (eds.), Guide toMolecular Cloning Techniques, (Academic Press, Inc. 1987); e Wetmur, Crit.Rev. Biochem. Mol. Biol. 26: 227 (1990)). O software de análise deseqüência tal como OLIGO 6.0 (LSR; De comprimento Lake, MN) e PrimerPremier 4.0 (Premier Biosoft International; Palo Alto, CA), assim como sítiosna Internet, são ferramentas disponíveis para analisar uma dada seqüência ecalcular a Tm com base nos critérios definidos pelo usuário. Está bem dentrodas capacidades de uma pessoa habilitada na técnica adaptar as condições dehibridização e lavagem para o uso com um híbrido de polinucleotídeo particular.

A presente invenção também fornece polipeptídeos de ILA-17RA ou ILA-17RC isolados que têm uma identidade de seqüênciasubstancialmente similar aos polipeptídeos da SEQ ID NO: 2 (ILA-17RC) eSEQ ID NO: 21 (ILA-17RA) ou seus ortólogos. O termo "identidade deseqüência substancialmente similar" é aqui usado para denotar polipeptídeostendo pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelo menos 95%,tal como 96%, 97%, 98% ou mais do que 95% de identidade de seqüênciacom as seqüências mostradas na SEQ ID NO: 2 ou seus ortólogos. Porexemplo, receptores de ILA-17RA ou ILA-17RC variantes e ortólogos podemser usados para gerar uma resposta imune e elevar anticorpos reativoscruzados para a ILA-17RA ou ILA-17RC humanas. Tais anticorpos podemser humanizados e modificados como aqui descrito e usados terapeuticamentepara tratar psoríase, artrite psoriática, IBD, IBS, colite, endotoxemia assimcomo em outras aplicações terapêuticas aqui descritas.

A presente invenção também considera as moléculas de ácidonucleico variantes de ILA-17RA ou ILA-17RC que podem ser identificadasusando dois critérios: uma determinação da similaridade entre o polipeptídeocodificado com a seqüência de aminoácido da SEQ ID NO: 2 (ILA-17RC) ouSEQ ID NO: 21 (ILA-17RA) e um ensaio de hibridização. Tais variantesincluem moléculas de ácido nucleico (1) que permanecem hibridizadas comuma molécula de ácido nucleico tendo a seqüência de nucleotídeo da SEQ IDNO: 1 ou SEQ ID NO: 4 para ILA-17RC (ou seu complemento) sobcondições de lavagem severas, em que a severidade de lavagem é equivalentea 0,5x a 2x SSC com 0,1% de SDS de 55 a 65°C e (2) que codificam umpolipeptídeo tendo pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelomenos 95% ou mais do que 95% tal como 96%, 97%, 98% ou 99%, deidentidade de seqüência com a seqüência de aminoácido da SEQ ID NO: 2.Alternativamente, as variantes de ILA-17RC podem ser caracterizadas comomoléculas de ácido nucleico (1) que permanecem hibridizadas com umamolécula de ácido nucleico tendo a seqüência de nucleotídeo da SEQ ID NO:1 ou SEQ ID NO: 4 (ou seu complemento) sob condições de lavagemaltamente severas, em que a severidade de lavagem é equivalente a O,Ix a0,2x SSC com 0,1% de SDS de 50 a 65°C e (2) que codificam umpolipeptídeo tendo pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%, pelomenos 95% ou mais do que 95%, tal como 96%, 97%, 98% ou 99% ou maior,de identidade de seqüência com a seqüência de aminoácido da SEQ ID NO: 2.

A identidade de seqüência percentual é determinada pelosmétodos convencionais. Ver, por exemplo, Altschul et ai., Buli. Math. Bio.48: 603 (1986) e Henikoffe Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 89: 10915(1992). Em resumo, duas seqüências de aminoácido são alinhadas paraotimizar as contagens de alinhamento usando uma penalidade de abertura deintervalo de 10, uma penalidade de extensão de intervalo de 1 e a matriz decontagem "blosum62" de Henikoff e Henikoff (ibid.) como mostrado naTabela 6 (os aminoácidos são indicados pelos códigos de uma letra padrão). Aidentidade percentual é depois calculada como: ([Número total deemparelhamentos idênticos]/[comprimento da seqüência mais longa mais onúmero de intervalos introduzidos na seqüência mais longa de modo a alinharas duas seqüências])(100).Tabela 6

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Aqueles habilitados na técnica avaliam que existem muitosalgoritmos estabelecidos disponíveis para alinhar duas seqüências deaminoácido. O algoritmo de pesquisa de similaridade "FASTA" de Pearson eLipman é um método de alinhamento de proteína adequado para examinar onível de identidade compartilhada por uma seqüência de aminoácido aquidivulgada e a seqüência de aminoácido de uma ILA-17RC variante putativa.O algoritmo FASTA é descrito por Pearson e Lipman, Proc. Nat'l Acad. Sei.USA 85: 2444 (1988) e por Pearson, Met. Enzymol. 183: 63 (1990). Emresumo, FastA primeiro caracteriza a similaridade de seqüência pelaidentificação de regiões compartilhadas pela seqüência dúvida (por exemplo,SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 3) e uma seqüência de teste que tem adensidade mais alta de identidades (se a variável ktup é 1) ou pares deidentidades (se ktup = 2), sem considerar as substituições, inserções oudeleções de aminoácido conservativas. As dez regiões com a densidade maisalta de identidades são depois recontadas comparando-se a similaridade detodos os aminoácidos emparelhados usando uma matriz de substituição deaminoácido e as extremidades das regiões são "cortadas" para incluir apenasaqueles resíduos que contribuem para a contagem mais alta. Se existemdiversas regiões com contagens maiores do que o valor de "corte" (calculadopor uma fórmula pré determinada com base no comprimento da seqüência e ovalor ktup), depois as regiões iniciais cortadas são examinadas paradeterminar se as regiões podem ser unidas para formar um alinhamentoaproximado com intervalos. Finalmente, as regiões de contagem mais alta dasduas seqüências de aminoácido são alinhadas usando uma modificação doalgoritmo de Needleman-Wunsch-Sellers (Needleman e Wunsch, J. Mol.Biol. 48: 444 (1970); Sellers, SIAM J. Appl. Math. 26: 787 (1974)), quepermite as inserções e deleções de aminoácido. Os parâmetros ilustrativospara a análise de FASTA são: ktup = 1, penalidade de abertura de intervalo =10, penalidade de extensão de intervalo =Ie matriz de substituição =blosum62. Estes parâmetros podem ser introduzidos em um programa FASTApela modificação do arquivo da matriz de contagem ("SMATRIX"), comoexplicado no Apêndix 2 de Pearson, Met. Enzymol. 183: 63 (1990).

FASTA também podem ser usado para determinar a identidadede seqüência das moléculas de ácido nucleico usando uma razão comodivulgada acima. Para as comparações de seqüência de nucleotídeo, o valorktup pode variar entre um a seis, preferivelmente de três a seis, o maispreferivelmente três, com outros parâmetros ajustados como descrito acima.

A presente invenção inclui moléculas de ácido nucleico quecodificam um polipeptídeo tendo uma mudança de aminoácido conservativa,comparada com uma seqüência de aminoácido aqui divulgada. Por exemplo,variantes podem ser obtidas que contêm uma ou mais substituições deaminoácido da SEQ ID NO: 2 ou 21, em que um alquil aminoácido ésubstituído no lugar de um alquil aminoácido em uma seqüência deaminoácido de ILA-17RA ou ILA-17RC, um aminoácido aromático ésubstituído no lugar de um aminoácido aromático em uma seqüência deaminoácido de ILA-17RA ou ILA-17RC, um aminoácido contendo enxofre ésubstituído no lugar de um aminoácido contendo enxofre em uma seqüênciade aminoácido de ILA-17RA ou ILA-17RC, um aminoácido contendo hidróxié substituído no lugar de um aminoácido contendo hidróxi em uma seqüênciade aminoácido de ILA-17RA ou ILA-17RC, um aminoácido ácido ésubstituído no lugar de um aminoácido ácido em uma seqüência deaminoácido de ILA-17RA ou ILA-17RC, um aminoácido básico é substituídono lugar de um aminoácido básico em uma seqüência de aminoácido de ILA-17RA ou ILA-17RC ou um aminoácido monocarboxílico dibásico ésubstituído no lugar de um aminoácido monocarboxílico dibásico em umaseqüência de aminoácido de ILA-17RA ou ILA-17RC. Entre os aminoácidoscomuns, por exemplo, uma "substituição de aminoácido conservativa" éilustrada por uma substituição entre aminoácidos dentro de cada um dosseguintes grupos: (1) glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina, (2)fenilalanina, tirosina e triptofano, (3) serina e treonina, (4) aspartato eglutamato, (5) glutamina e asparagina e (6) lisina, arginina e histidina. Atabela BLOSUM62 é uma matriz de substituição de aminoácido derivada decerca de 2.000 alinhamentos múltiplos locais de segmentos da seqüência deproteína, que representam regiões altamente conservadas de mais do que 500grupos de proteínas relacionadas (Henikoff e Henikoff, Proc. Nat'l Acad. Sei.USA 89: 10915 (1992)). Conseqüentemente, as freqüências de substituiçãoBLOSUM62 podem ser usadas para definir substituições de aminoácidoconservativas que podem ser introduzidas nas seqüências de aminoácido dapresente invenção. Embora seja possível planejar substituições de aminoácidocom base unicamente nas propriedades químicas (como debatido acima), alinguagem "substituição de aminoácido conservativa" preferivelmente refere-se a uma substituição representada por um valor BLOSUM62 de mais do que-1. Por exemplo, uma substituição de aminoácido é conservativa se asubstituição é caracterizada por um valor BLOSUM62 de 0, 1, 2 ou 3. Deacordo com este sistema, as substituições de aminoácido conservativaspreferidas são caracterizadas por um valor BLOSUM62 de pelo menos 1 (porexemplo, 1, 2 ou 3), embora as substituições de aminoácido conservativasmais preferidas sejam caracterizadas por um valor BLOSUM62 de pelomenos 2 (por exemplo, 2 ou 3). As variantes particulares de ILA-17RC sãocaracterizadas por ter pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 90%,pelo menos 95% ou mais do que 95% tal como 96%, 97%, 98% ou 99% oumais de identidade de seqüência com a seqüência de aminoácidocorrespondente (por exemplo, SEQ ID NO: 2 ou 21), em que a variação naseqüência de aminoácido é devido a uma ou mais substituições de aminoácidoconservativas.

As mudanças de aminoácido conservativas em um gene ILA-17RA ou ILA-17RC podem ser introduzidas, por exemplo, pela substituiçãode nucleotídeos no lugar dos nucleotídeos relatados na SEQ ID NO: 1 ou SEQID NO: 4. Tais variantes de "aminoácido conservativo" podem ser obtidaspela mutagênese direcionada por oligonucleotídeo, mutagênese de varredurade ligador, mutagênese usando a reação da cadeia da polimerase e outras (verAusubel (1995); e McPherson (ed.), Directed Mutagenesis: A Practical Metod(IRL Press 1991)). Um polipeptídeo de ILA-17RC variante pode seridentificado pela capacidade para ligar especificamente anticorpos anti-ILA-17RC.

As proteínas da presente invenção também podemcompreender resíduos de aminoácido que não ocorrem naturalmente. Osaminoácidos que não ocorrem naturalmente incluem, sem limitação, trans-3-metilprolina, 2,4-metanoprolina, cis-4-hidroxiprolina, trans-4-hidroxiprolina,N-metilglicina, alo-treonina, metiltreonina, hidroxietila-cisteína, hidroxietila-homocisteína, nitroglutamina, homoglutamina, ácido pipecólico, ácidotiazolidino carboxílico, desidroprolina, 3-e 4-metilprolina, 3,3-dimetilprolina,terc-leucina, norvalina, 2-azafenila-alanina, 3-azafenilalanina, 4-azafenilalanina e 4-fluorofenilalanina. Diversos métodos são conhecidos natécnica para incorporar resíduos de aminoácido que não ocorrem naturalmenteem proteínas. Por exemplo, um sistema in vitro pode ser utilizado em quemutações que não de sentido são suprimidos usando tRNAs supressorquimicamente aminoacilados. Os métodos para sintetizar aminoácidos eaminoacilar tRNA são conhecidos na técnica. A transcrição e tradução deplasmídeos contendo mutações que não de sentido é tipicamente realizada emum sistema isento de célula que compreende um extrato de E. coli S30 eenzimas comercialmente disponíveis e outros reagentes. As proteínas sãopurificadas pela cromatografla. Ver, por exemplo, Robertson et al, J. Am.Chem. Soe. 113: 2722 (1991), Ellman et al., Metods Enzymol. 202: 301(1991), Chung et al., Science 259: 806 (1993) e Chung et al., Proc. Nat'lAcad. Sei. USA 90: 10145 (1993).

Em um segundo método, a tradução é realizada em oócitos deXenopus pela microinjeção de mRNA mutado e tRNAs supressoresquimicamente aminoacilados (Turcatti et al, J. Biol. Chem. 271: 19991(1996)). Dentro de um terceiro método, as células de E. coli são cultivadas naausência de um aminoácido natural que deva ser substituído (por exemplo,fenilalanina) e na presença do(s) aminoácido(s) que não ocorremnaturalmente desejados (por exemplo, 2-azafenilalanina, 3-azafenilalanina, 4-azafenilalanina ou 4-fluorofenila-alanina). o aminoácido que não ocorrenaturalmente é incorporado na proteína no lugar da sua contraparte natural.Ver, Koide et al, Biochem. 33: 7470 (1994). Os resíduos de aminoácido queocorrem naturalmente podem ser convertidos para a espécie que não ocorrenaturalmente pela modificação química in vitro. A modificação química podeser combinada com a mutagênese direcionada ao sítio para expandir aindamais a faixa de substituições (Wynn e Richards, Protein Sei. 2: 395 (1993)).

Um número limitado de aminoácidos não conservativos,aminoácidos que não são codificados pelo código genético, aminoácidos quenão ocorrem naturalmente e aminoácidos não naturais podem ser substituídosno lugar dos resíduos de aminoácido de ILA-17RA ou ILA-17RC.

Os aminoácidos essenciais nos polipeptídeos da presenteinvenção podem ser identificados de acordo com procedimentos conhecidosna técnica, tais como mutagênese direcionada ao sítio ou mutagênese devarredura de alanina (Cunningham e Wells, Science 244: 1081 (1989), Bass etal., Proc. Nat'l Acad. Sei. USA 88: 4498 (1991), Coombs e Corey, "Site-Directed Mutagenesis and Protein Engineering," em Proteins: Analysis andDesign, Angeletti (ed.), páginas 259-311 (Academic Press, Inc. 1998)). Naúltima técnica, mutações de alanina únicas são introduzidas en cada resíduona molécula e as moléculas mutantes resultantes são testadas quanto aatividade biológica para identificar resíduos de aminoácido que são críticospara a atividade da molécula. Ver também, Hilton et al., J. Biol. Chem. 271:4699 (1996).

Embora a análise de seqüência possa ser usada para definirainda mais a região de ligação de ligando de ILA-17RA ou ILA-17RC, osaminoácidos que desempenham um papel na atividade de ligação de ILA-17RA ou ILA-17RC (tal como a ligação de ILA-17RC a Ila- 17A ou ILA-17Fe ILA-17RA a ILA-17A) também podem ser determinados pela análise físicada estrutura, como determinado por tais técnicas como ressonância magnéticanuclear, cristalografia, difração de elétron ou rotulação de fotoafinidade, emconjunção com a mutação de aminoácidos de sítio de contato putativo. Ver,por exemplo, de Vos et al., Science 255: 306 (1992), Smith et al., J. Mol.Biol. 224: 899 (1992) e Wlodaver et al., FEBS Lett. 309: 59 (1992).Especificamente, três domínios foram identificados:

1) Domínio 1 (SEQ ID NOs: 159 e 160) compreende exons 8 a10 da ILA-17RC. Isto corresponde aos resíduos de aminoácido 193 a 276 daILA-17RCxl da (SEQ ID NO: 2) e resíduos de aminoácido 208 a 291 da ILA-17RCx4 da (SEQ ID NO: 166).

2) Domínio 2 (SEQ ID NOs: 161 e 162) compreende os exonsde 11 a 13 da ILA-17RC. Isto corresponde aos resíduos de aminoácido 277 a370 da ILA-17RCxl da (SEQ ID NO: 2) e resíduos de aminoácido 292 a 385da ILA-17RCx4 da (SEQ ID NO: 166).

3) Domínio 3 (SEQ ID NOs: 163 e 164) compreende exons 8 ada ILA-17RC. Isto corresponde aos resíduos de aminoácido 371 a 447 daILA-17RCxl da (SEQ ID NO: 2) e resíduos de aminoácido 386 a 462 da ILA-17RCx4 da (SEQ ID NO: 166).

As substituições de aminoácido múltiplas podem serfabricadas e testadas usando métodos conhecidos de mutagênese e triagem,tais como aqueles divulgados por Reidhaar-Olson e Sauer (Science 241: 53(1988)) ou Bowie e Sauer (Proc. Nat'l Acad. Sei. USA 86: 2152 (1989)). Emresumo, estes autores divulgam métodos para randomizar simultaneamenteduas ou mais posições em um polipeptídeo, selecionando quanto aopolipeptídeo funcional e depois seqüencial os polipeptídeos mutagenizadospara determinar o espectro de substituições permissíveis em cada posição.Outros métodos que podem ser usados incluem a demonstração de fago (porexemplo, Lowman et al, Biochem. 30: 10832 (1991), Ladner et al, PatenteU.S.N2 5.223.409, Huse, Publicação Internacional N2 WO 92/06204 emutagênese direcionada à região (Derbyshire et al, Gene 46: 145 (1986) eNer et al, DNA 7: 127, (1988)). Além disso, a ILA-17RC ou ILA-17RArotuladas com biotina ou FITC podem ser usadas para a clonagem deexpressão de ligandos de ILA-17RC.

As variantes das seqüências de nucleotídeo e polipeptídeo deILA-17RC ou ILA-17RA divulgadas também podem ser geradas através doembaralhamento de DNA como divulgado por Stemmer, Nature 370: 389(1994), Stemmer, Proc. Nat'l Acad. Sei. USA 91: 10747 (1994) e PublicaçãoInternacional N2 WO 97/20078. Em resumo, as moléculas de DNA variantesão geradas pela recombinação homóloga in vitro pela fragmentação aleatóriade um DNA precursor seguido pela remontagem usando PCR, resultando nasmutações pontuais aleatoriamente introduzidas. Esta técnica pode sermodificada pelo uso de uma família de moléculas de DNA precursoras, taiscomo as variantes alélicas ou moléculas de DNA da espécie diferente, paraintroduzir variabilidade adicional no processo. A seleção ou triagem quanto aatividade desejada, seguido pelas iterações adicionais de mutagênese e ensaiofornece a "evolução" rápida das seqüências pela seleção quanto às mutaçõesdesejadas enquanto simultaneamente selecionando contra mudançasprejudiciais.

Os métodos de mutagênese como aqui divulgados podem sercombinados com métodos de triagem de auto rendimento, automatizado paradetectar a atividade de polipeptídeos clonados, mutagenizados em célulashospedeiras. As moléculas de DNA mutagenizadas que codificampolipeptídeos biologicamente ativos ou polipeptídeos que se ligam comanticorpos anti-ILA-17RC ou ILA-17RA, podem ser recuperados a partir decélulas hospedeiras e rapidamente seqüenciados usando equipamentomoderno. Estes métodos permitem a determinação rápida da importância deresíduos de aminoácido individuais em um polipeptídeo de interesse e podemser aplicados aos polipeptídeos de estrutura desconhecida.

A presente invenção também inclui "fragmentos funcionais"de polipeptídeos ILA-17RC ou ILA-17RA e moléculas de ácido nucleico quecodificam tais fragmentos funcionais. Estes fragmentos funcionais podemligar ligando ou ligandos (isto é tanto ILA-17A e ILA-17F) isoladamente oujuntos. As análises de deleção rotina de moléculas de ácido nucleico podemser realizadas para se obter fragmentos funcionais de uma molécula de ácidonucleico que codifica um polipeptídeo ILA-17RC ou ILA-17RA. Como umailustração, as moléculas de DNA tendo a seqüência de nucleotídeo da SEQ IDNO: 1 ou SEQ ID NO: 4 podem ser digeridas com nuclease Bal31 para obteruma série de deleções abrigadas. Os fragmentos são depois inseridos emvetores de expressão na matriz de leitura apropriada e os polipeptídeosexpressados são isolados e testados quanto a capacidade para ligar anticorposanti-ILA-17RC. Uma alternativa para a digestão de exonuclease é usar amutagênese direcionada a oligonucleotídeo para introduzir deleções oucódons de parada para especificar a produção de um fragmento desejado.Alternativamente, fragmentos particulares de um gene ILA-17RC ou ILA-17RA podem ser sintetizados usando a reação da cadeia da polimerase.

Este método geral é exemplificado pelos estudos sobre atruncagem em cada um ou ambos os terminais de interferon foram resumidospor Horisberger e Di Marco, Pharmac. Ther. 66: 507 (1995). Além disso,técnicas padrão para a análise funcional de proteínas são descritas, porexemplo, por Treuter et al., Molec. Gen. Genet. 240: 113 (1993), Content etai., "Expression and preliminary deletion analysis of the 42 kDa 2-5Asintetase induced by humano interferon," em Biological Interferon Systems,Proceedings of ISIR-TNO Meeting on Interferon Systems, Cantell (ed.),páginas 65-72 (Nijhoff 1987), Herschman, "The EGF Receptor," in Controlof Animal Cell Proliferation, Vol. 1, Boynton et al., (eds.) páginas 169-199(Academic Press 1985), Coumailleau et al., J. Biol. Chem. 270: 29270

(1995); Fukunaga et al., J. Biol. Chem. 270: 25291 (1995); Yamaguchi et al.,Biochem. Pharmacol. 50: 1295 (1995) e Meisel et al., Plant Molec. Biol. 30: 1(1996).

A presente invenção também considera fragmentos funcionaisde um gene ILA-17RC ou ILA-17RA que tenham mudanças de aminoácido,comparadas com uma seqüência de aminoácido aqui divulgada. Um geneILA-17RC ou ILA-17RA variante pode ser identificado com base na estruturapela determinação do nível de identidade com as seqüências de nucleotídeo eaminoácido divulgadas, como debatido acima. Um método alternativo paraidentificar um gene variante com base na estrutura é determinar se umamolécula de ácido nucleico que codifica um gene ILA-17RC ou ILA-17RAvariante potencial pode hibridizar a uma molécula de ácido nucleico quecompreende uma seqüência de nucleotídeo, tal como a SEQ ID NO: 1 ou SEQID NO: 4.

A presente invenção também inclui usar fragmentos funcionaisde polipeptídeos ILA-17RC ou ILA-17RA, epítopos antigênicos, porções quecarregam epítopo ou porções de ligação de ligando de polipeptídeos ILA-17RC e/ou ILA-17RA e moléculas de ácido nucleico que codificam taisfragmentos funcionais, epítopos antigênicos, porções que carregam epítopo ouporções de ligação de ligando de polipeptídeos ILA-17RC e/ou ILA-17RA..Tais fragmentos são usados para gerar polipeptídeos para o uso na geração dereceptores solúveis ou moléculas de ligação que ligam, bloqueiam, inibem,reduzem, antagonizam ou neutralizam a atividade de ILA-17A ou ILA-17F outanto ILA-17A quanto ILA-17F. Um polipeptídeo ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA "funcional" ou fragmento deste como aqui definido écaracterizado pela sua capacidade para bloqueiam, inibem, reduzem,antagonizam ou neutralizam a atividade inflamatória, proliferativa ou dediferenciação de ILA-17A e/ou ILA-17F, pela sua capacidade para induzir ouinibir funções de célula especializada ou pela sua capacidade para ligarespecificamente a ILA-17A e/ou ILA-17F. Como previamente aqui descrito,tanto ILA-17RA quanto ILA-17RC são caracterizados por uma únicaestrutura de receptor de citocina e domínios como aqui descritos. Assim, apresente invenção considera ainda o uso de proteínas de fusão abrangendo: (a)moléculas de polipeptídeo que compreendem um ou mais dos domíniosdescritos acima; e (b) fragmentos funcionais que compreendem um ou maisdestes domínios. A outra porção de polipeptídeo da proteína de fusão pode sercontribuída por um outro receptor de citocina, tal como um receptorequivalente à ILA-17, ILA-17RA, ILA-17RE, ILA-17RD ou por um secretorde sinal peptídico não nativo e/ou um não relacionado que facilita a secreçãoda proteína de fusão.

A presente invenção também fornece fragmentos depolipeptídeo ou peptídeos que compreendem uma porção de ligação deligando de um polipeptídeo ILA-17RC ou ILA-17RA aqui descrito. Taisfragmentos ou peptídeos podem compreender uma porção de ILA-17RC ouILA-17RA que se liga ao seu respectivo ligando (ILA-17A e/ou ILA-17F).

Para qualquer polipeptídeo de ILA-17RC ou ILA-17RA,incluindo variantes e proteínas de fusão, uma pessoa de habilidade comum natécnica pode facilmente gerar uma seqüência de polinucleotídeo totalmentedegenerada que codifica esta variante usando a informação apresentada nasTabelas 1 e 2 acima. Além disso, aqueles de habilidade na técnica podem usarsoftware padrão para planejar variantes de ILA-17RC ou ILA-17RA com baseno nucleotídeo e seqüências de aminoácido aqui descritos.

E) Produção de Polipeptídeos ILA-17RC, ILA-17RA e ILA-17RC/ILA-17RAOs polipeptídeos da presente invenção, incluindo polipeptídeosde tamanho natural; receptores monoméricos, homodiméricos,heterodiméricos e multiméricos solúveis; receptores de tamanho natural;fragmentos de receptor (por exemplo, fragmentos de ligação de ligando eepítopos antigênicos), fragmentos funcionais e proteínas de fusão, podem serproduzidos em células hospedeiras recombinantes seguindo técnicasconvencionais. A expressão de um gene de ILA-17RC, ILA-17RA e ILA-17RC/ILA-17RA, uma molécula de ácido nucleico que codifica opolipeptídeo deve ser operavelmente ligada às seqüências reguladoras quecontrolam a expressão transcricional em um vetor de expressão e depois,introduzidos em uma célula hospedeiro. Além das seqüências reguladorastranscricionais, tais como promotores e realçadores, os vetores de expressãopodem incluir seqüências reguladoras traducionais e um gene marcador que éadequado para a seleção de células que carregam o vetor de expressão.

Os vetores de expressão que são adequados para a produção deuma proteína estranha em células eucarióticas tipicamente contêm (1)elementos de DNA procarióticos que codificam uma origem de replicaçãobacteriana e um marcador de resistência a antibiótico para fornecer ocrescimento e a seleção do vetor de expressão em um hospedeiro bacteriano;(2) elementos de DNA eucarióticos que controlam o início da transcrição, talcomo um promotor; e (3) elementos de DNA que controlam o processamentode transcritos, tais como uma seqüência de terminação detranscrição/poliadenilação. Como debatido acima, os vetores de expressãotambém podem incluir as seqüências de nucleotídeo que codificam umaseqüência secretora que direciona o polipeptídeo heterólogo no caminhosecretor de uma célula hospedeira. Por exemplo, um vetor de expressão ILA-17RC pode compreender um gene de ILA-17RC, ILA-17RA e ILA-17RC/ILA-17RA e uma seqüência secretora derivada de qualquer gene secretado.

As proteínas de ILA-17RC, ILA-17RA e ILA-17RC/ILA-17RA da presente invenção podem ser expressadas em células de mamífero.Os exemplos de células hospedeiras de mamífero adequadas incluem ascélulas renais do macaco verde africano (Vero; ATCC CRL 1587), célulasrenais embrionárias humanas (293-HEK; ATCC CRL 1573), células renais dehamster bebê (BHK-21, BHK-570; ATCC CRL 8544, ATCC CRL 10314),células renais caninas (MDCK; ATCC CCL 34), células do ovário do hamsterchinês (CHO-K1; ATCC CCL61; CHO DG44 (Chasin et al., Som. Cell.Molec. Genet. 12: 555, 1986)), células pituitárias de rato (GH1; ATCCCCL82), células HeLa S3 (ATCC CCL2,2), células de hepatoma de rato (H-4-II-E; ATCC CRL 1548) células renais de macaco transformadas com SV40(COS-1; ATCC CRL 1650) e células embrionárias de murino (NIH-3T3;ATCC CRL 1658).Para um hospedeiro mamífero, os sinais reguladorestranscricionais e traducionais podem ser derivados de fontes virais demamífero, por exemplo, adenovírus, vírus do papiloma bovino, vírus símio oucoisa parecida, em que os sinais reguladores são associadas com um geneparticular que tenha um alto nível de expressão. As seqüências reguladorastranscricionais e traducionais adequadas também pode ser obtidas a partir degenes de mamífero, por exemplo, os genes da actina, colágeno, miosina emetalotioneína.

As seqüências reguladoras transcricionais incluem uma regiãopromotora suficiente para direcionar o início da síntese de RNA. Ospromotores eucarióticos adequados incluem o promotor do gene dametalotioneína I de camundongo (Hamer et al., J. Molec. Appl. Genet. 1: 273(1982)), o promotor TK do vírus do Herpes (McKnight, Cell 31:355 (1982)),o promotor inicial SV40 (Benoist et ai, Nature 290: 304 (1981)), o promotordo vírus do sarcoma de Rous (Gorman et al., Proc. Nat'l Acad. Sei. USA 79:6777 (1982)), o promotor de citomegalovírus (Foecking et al., Gene 45: 101(1980)) e o promotor do vírus do tumor mamário de camundongo (ver, nogeral, Etcheverry, "Expression of Engineered Proteins in Mammalian CellCulture," em Protein Engineering: Principies and Practice, Cleland et al.(eds.), páginas 163-181 (John Wiley & Sons, Inc. 1996)).

Alternativamente, um promotor procariótico, tal como opromotor da T3 RNA polimerase de bacteriófago, pode ser usado paracontrolar a expressão de gene em células de mamífero se o promotorprocariótico é regulado por um promotor eucariótico (Zhou et al., Mol. Cell.Biol. 10: 4529 (1990) e Kaufman et al., Nucl. Acids Res. 19: 4485 (1991)).

Em certas formas de realização, uma seqüência de DNA quecodifica um polipeptídeo solúvel de receptor de ILA-17RC, ILA-17RA eILA-17RC/ILA-17RA ou um fragmento de polipeptídeo de ILA-17RC, ILA-17RA ou ILA-17RC/ILA-17RA é operavelmente ligado a outros elementosgenéticos requeridos para a sua expressão, no geral incluindo um promotor eterminador de transcrição, dentro de um vetor de expressão. O vetor tambémhabitualmente conterá um ou mais marcadores selecionáveis e uma ou maisorigens de replicação, embora aqueles habilitados na técnica reconhecerãoque dentro de certos sistemas marcadores selecionáveis podem ser fornecidosem vetores separados e a replicação do DNA exógeno possa ser fornecidapela integração no genoma da célula hospedeira. A seleção de promotores,terminadores, marcadores selecionáveis, vetores e outros elementos é umaquestão de planejamento de rotina dentro do nível de habilidade comum natécnica. Muitos tais elementos são descritos na literatura e são disponíveisatravés de fornecedores comerciais. Os componentes múltiplos de umcomplexo de receptor solúvel podem ser co-transfectados em vetores deexpressão individuais ou estar contidos em um único vetor de expressão. Taistécnicas de expressar componentes múltiplos de complexos de proteína sãobem conhecidos na técnica.

Um vetor de expressão pode ser introduzido em célulashospedeiras usando uma variedade de técnicas padrão incluindo transfecçãocom fosfato de cálcio, transfecção mediada por lipossoma, liberação mediadapor microprojétil, eletroporação e outras. As células transfectadas podem serselecionadas e propagadas para fornecer células hospedeiras recombinantesque compreendem o vetor de expressão estavelmente integrado no genoma dacélula hospedeira. As técnicas para a introdução de vetores em célulaseucarióticas e técnicas para selecionar tais transformantes estáveis usando ummarcador selecionável dominante são descritos, por exemplo, por Ausubel(1995) e por Murray (ed.), Gene Transfer and Expression Protocols (HumanaPress 1991).

Por exemplo, um marcador selecionável adequado é um geneque fornece resistência ao antibiótico neomicina. Neste caso, a seleção érealizada na presença de um medicamento do tipo neomicina, tal como G-418ou coisa parecida. Os sistemas de seleção também podem ser usados paraaumentar o nível de expressão do gene de interesse, um processo aludidocomo "amplificação." A amplificação é realizada cultivando-se transfectantesna presença de um nível baixo do agente seletivo e depois aumentando aquantidade de agente seletivo para selecionar quanto a células que produzemaltos níveis dos produtos dos genes introduzidos. Um marcador selecionávelamplificável adequado é a diidrofoliato redutase (DHFR), que confereresistência ao metotrexato. Outros genes de resistência a medicamento (porexemplo, resistência à higromicina, resistência a medicamento múltiplo,puromicina acetiltransferase) também podem ser usados. Alternativamente,marcadores que introduzem um fenótipo alterado, tal como a proteínafluorescente verde ou proteínas de superfície celular tal como CD4, CD8,MHC de Classe I, fosfatase alcalina placentária podem ser usados paraseparar células transfectadas de células não transfectadas por meios tais comoseparação de FACS ou a tecnologia de separação de pérola magnética.

Os polipeptídeos da invenção também podem ser produzidospelas células de mamífero cultivadas usando um sistema de liberação viral. Osvírus exemplares para este propósito incluem adenovírus, retrovírus,herpesvírus, virus da vacínia e vírus adeno-associados (AAV). Adenovírus,um virus de DNA de filamento duplo, é correntemente o melhor vetor detransferência de gene estudado para a liberação de ácido nucleico heterólogo(para uma revisão, ver Becker et al., Met. Cell Biol. 43: 161 (1994) e Douglase Curiel, Science & Medicine 4: 44 (1997)). As vantagens do sistema deadenovírus incluem a acomodação de insertos de DNA relativamente grandes,a capacidade para cultivar até título alto, a capacidade para infectar uma faixaampla de tipos de célula de mamífero e flexibilidade que possibilita o usocom um número grande de vetores disponíveis contendo promotoresdiferentes.

Pela deleção de porções do genoma de adenovírus, insertosmaiores (até 7 kb) de DNA heterólogo podem ser acomodado. Estes insertospodem ser incorporados no DNA viral pela ligação direta ou pelarecombinação homóloga com um plasmídeo co-transfectado. Uma opção édeletar o gene El essencial do vetor viral, que resulta na incapacidade parareplicar a menos que o gene El seja fornecido pela célula hospedeira. Ascélulas 293 humanas infectadas com vetor de Adenovirus (ATCC N— CRL-1573, 45504, 45505), por exemplo, podem ser cultivadas como célulasaderentes ou em cultura de suspensão na densidade de célula relativamentealta para produzir quantidades significantes de proteína (ver Garnier et al.,Cytotechnol. 15: 145 (1994)).

Os polipeptídeos da invenção também podem ser expressadosem outras células eucarióticas superiores, tais como células aviárias, fungicas,de inseto, de levedura ou vegetais. O sistema de baculovírus fornece um meioeficiente para introduzir genes clonados em células de inseto. Os vetores deexpressão adequado são fundamentados no vírus da poliedrose nuclearmúltipla da Autographa califomica (AcMNPV) e contêm promotores bemconhecidos tais como o promotor da proteína de choque térmico deDrosophila (hsp) 70, promotor do gene imediato-inicial do vírus dapoliedrose nuclear da Autographa califomica (ie-1) e o promotor 39K inicialretardado, promotor plO de baculovírus e o promotor da metalotioneína deDrosophila. Um segundo método de fabricar baculovírus recombinante utilizaum sistema com base em transposon descrito por Luckow (Luckow, et al., J.Virol. 67: 4566 (1993)). Este sistema, que utiliza vetores de transferência, évendido no kit BAC-to-BAC (Life Technologies, Rockville, MD). Estesistema utiliza um vetor de transferência, PFASTBAC (Life Technologies)contendo um transposon Tn7 para mover o DNA que codifica umpolipeptídeo em um genoma de baculovírus mantido na E. coli como umplasmídeo grande chamado um "bacmídeo." Ver, Hill-Perkins e Posver, J.Gen. Virol. 71: 971 (1990), Bonning, et al., J. Gen. Virol. 75: 1551 (1994) eChazenbalc e Rapoport, J. Biol. Chem. 270: 1543 (1995). Além disso, vetoresde transferência podem incluir uma fusão na matriz com DNA que codificaum rótulo de epítopo nos terminais C ou N do polipeptídeo expressado, porexemplo, um rótulo de epítopo Glu-Glu (Grussenmeyer et al., Proc. Nat'lAcad. Sei. 82: 7952 (1985)). Usando uma técnica conhecida no ramo, umvetor de transferência contendo um gene que codifica um polipeptídeo dapresente invenção é transformado na E. coli e triado quanto a baemídeos quecontêm um gene IacZ interrompido indicativo de baculovírus recombinante. ODNA de baemídeo contendo o genoma de baculovírus recombinante é depoisisolado usando técnicas comuns.

O vetor pFastBac ilustrativo pode ser modificado a um grauconsiderável. Por exemplo, o promotor da poliedrina pode ser removido esubstituído com o promotor da proteína básica de baculovírus (tambémconhecido como promotores Pcor, p6.9 ou MP) que é expressado mais noinício na infecção por baculovírus e mostrou ser vantajoso para expressarproteínas secretadas (ver, por exemplo, Hill-Perkins e Posver, J. Gen. Virol.71: 971 (1990), Bonning, et al., J. Gen. Virol. 75: 1551 (1994) e Chazenbalc eRapoport, J. Biol. Chem. 270: 1543 (1995). Em tais construções de vetor detransferência, uma versão curta ou longa do promotor da proteína básicapodem ser usadas. Além disso, vetores de transferência podem ser construídosde modo que substituam as seqüências de sinal secretoras nativas com asseqüências de sinal secretoras derivadas de proteínas de inseto. Por exemplo,uma seqüência secretora de sinal da Ecdiesteróide Glicosiltransferase (EGT),Melitina da abelha melífera (Invitrogen Corporation; Carlsbad, CA) oubaculovírus gp67 (PharMingen: San Diego, CA) podem ser usados naconstrução para substituir a seqüência secretora de sinal de ILA-17RC nativa.

O vírus recombinante ou baemídeo é usado para transfectarcélulas hospedeiras. As células hospedeiras de inseto adequadas incluemlinhagens de célula derivadas de IPLB-Sf-21, uma linhagem de célulaovariana pupal de Spodoptera frugiperda, tal como Sf9 (ATCC CRL 1711),Sf21AE e Sf21 (Invitrogen Corporation; San Diego, CA), assim como ascélulas Schneider-2 de Drosophila e a linhagem de célula HIGH FIVEO(Invitrogen) derivados de Trichoplusia ni (Patente U.S. N- 5.300.435). Osmeios isentos de soro comercialmente disponíveis podem ser usados paracultivar e manter células. Os meios adequados são Sf900 II® (LifeTechnologies) ou ESF 921® (Expression Systems) para as células Sf9; e Ex-cell0405® (JRH Biosciences, Lenexa, KS) ou Express FiveO® (LifeTechnologies) para as células de T. ni. Quando vírus recombinante é usado, ascélulas são tipicamente cultivadas a partir de uma densidade de inoculação deaproximadamente 2 a 5 χ IO5 células a uma densidade de 1 a 2 χ IO6 célulastempo no qual um estoque viral recombinante é adicionado a umamultiplicidade de infecção (MOI) de 0,1 a 10, mais tipicamente próximo a 3.

As técnicas estabelecidas para produzir proteínasrecombinantes em sistemas de baculovírus são fornecidas por Bailey et al.,"Manipulation of Baculovírus Vectors," em Methods in Molecular Biology,Volume 7: Gene Transfer and Expression Protocols, Murray (ed.), páginas147-168 (The Humana Press, Inc. 1991), por Patel et al., "The baculovírusexpression system," em DNA Cloning 2: Expression Systems, 2a Edição,Glover et al. (eds.), páginas 205-244 (Oxford University Press 1995), porAusubel (1995) nas páginas 16-37 a 16-57, por Richardson (ed.), BaculovírusExpression Protocols (The Humana Press, Inc. 1995) e por Lucknow, "InsectCell Expression Technology," em Protein Engineering: Principies andPractice, Cleland et al. (eds.), páginas 183-218 (John Wiley & Sons, Inc.1996).

As células fungicas, incluindo células de levedura, tambémpodem ser usadas para expressar os genes aqui descritos. A espécie delevedura de interesse particular a este respeito incluem Saccharomyceseerevisiae, Piehia pastoris e Piehia metanoliea. Os promotores adequadospara a expressão em levedura incluem promotores da GALl (galactose), PGK(fosfoglicerato cinase), ADH (álcool desidrogenase), AOXl (álcool oxidase),HIS4 (histidinol desidrogenase) e outros. Muitos vetores de clonagem delevedura foram planejados e são facilmente disponíveis. Estes vetores incluemvetores com base em YIp, tais como YIp5, vetores YRp, tais como YRp 17,YEp vetores tais como YEp 13 e vetores YCp5 tais como YCp 19. Métodospara transformar células de S. cerevisiae com DNA exógeno e produzindopolipeptídeos recombinantes a partir destes são divulgados, por exemplo, porKawasaki, Patente U.S. Nfi 4.599.311, Kawasaki et al, Patente U.S. Ν-4.931.373, Brake, Patente U.S. N2 4.870.008, Welch et al, Patente U.S. Na5.037.743 e Murray et al, Patente U.S. N- 4.845.075. As célulastransformadas são selecionadas pelo fenótipo determinado pelo marcadorselecionável, habitualmente resistência a medicamento ou a capacidade paracrescer na ausência de um nutriente particular (por exemplo, leucina). Umsistema de vetor adequado para o uso na Saccharomyces cerevisiae é osistema de vetor POTl divulgado por Kawasaki et al. (Patente U.S. Ns4.931.373), que permite que células transformadas sejam selecionadas pelocultivo em meio contendo glicose. Os promotores e terminadores adequadosadicionais para o uso em levedura incluem aqueles dos genes da enzima glicolítica (ver, por exemplo, Kawasaki, Patente U.S. Ne 4.599.311,Kingsman et al., Patente U.S. Ns 4.615.974 e Bitter, Patente U.S. N24.977.092) e genes da álcool desidrogenase. Ver também as Patentes U.S. N-4.990.446, 5.063.154, 5.139.936 e 4.661.454.

Os sistemas de transformação para outras leveduras, incluindo Hansenula polimorpha, Schizosaccharomyces pombe, Kluyveromyces laetis,Kluyveromyces fragilis, Ustilago maydis, Pichia pastoris, Pichia metanoliea,Piehia guillermondii e Candida maltosa são conhecidos na técnica. Ver, porexemplo, Gleeson et al., J. Gen. Microbiol. 132: 3459 (1986) e Cregg, PatenteU.S. N- 4.882.279. As células de Aspergillus podem ser utilizadas de acordocom os métodos de McKnight et al., Patente U.S. N° 4.935.349. Os métodospara transformar Acremonium ehrysogenum são divulgados por Sumino et al.,Patente U.S. N- 5.162.228. Os métodos para transformar Neurospora sãodivulgados por Lambowitz, Patente U.S. N- 4.486.533.

Por exemplo, o uso de Piehia metanoliea como hospedeiropara a produção de proteínas recombinantes é divulgado por Raymond,Patente U.S. N° 5.716.808, Raymond, Patente U.S. N- 5.736.383, Raymond etal., Yeast 14: 11-23 (1998) e nas Publicações Internacionais Nq5 WO97/17450, WO 97/17451, WO 98/02536 e WO 98/02565. As moléculas deDNA para o uso na transformação de P. metanoliea habitualmente serãopreparadas como plasmídeos de filamento duplo, circulares, que sãopreferivelmente linearizados antes da transformação. Para a produção depolipeptídeo em P. metanoliea, o promotor e terminador no plasmídeo podemser aqueles de um gene de P. metanoliea, tal como um gene da utilização deálcool de P. metanoliea (AUG1 ou AUG2). Outros promotores úteis incluemaqueles dos genes da diidroxiacetona sintase (DHAS), formiato desidrogenase(FMD) e catalase (CAT). Para facilitar a integração do DNA no cromossomahospedeiro, é preferido ter o segmento de expressão inteiro do plasmídeoflanqueado em ambas as extremidades pelas seqüências de DNA dohospedeiro. Um marcador selecionável adequado para o uso em Piehiametanoliea é um gene ADE2 de P. metanoliea, que codifica a fosforibosil-5-aminoimidazol carboxilase (AIRC; EC 4.1.1.21) e que permite que as célulashospedeiras de ade2 cresçam na ausência de adenina. Para processos emlarga-escala, industriais onde é desejável minimizar o uso de metanol, ascélulas hospedeiras podem ser usadas em que ambos os genes da utilização demetanol (AUG1 e AUG2) são deletados. Para a produção de proteínassecretadas, as células hospedeiras podem ser deficientes em genes da proteasevacuolar (PEP4 e PRB1). A eletroporação é usada para facilitar a introduçãode um plasmídeo contendo DNA que codifica um polipeptídeo de interesseem células de P. metanolica. As células de P. metanolica podem sertransformadas pela eletroporação usando um campo elétricoexponencialmente decadente, pulsado tendo uma força de campo de 2,5 a 4,5kV/cm, preferivelmente de cerca de 3,75 kV/cm e uma constante de tempo (t)de 1 a 40 milissegundos, o mais preferivelmente de cerca de 20milissegundos.

Vetores de expressão também podem ser introduzidos emprotoplastos vegetais, tecidos vegetais intactos ou células vegetais isoladas.Os métodos para introduzir vetores de expressão em tecido vegetal incluem ainfecção direta ou co-cultivo de tecido vegetal com Agrobacteriumtumefaciens, liberação mediada por microprojétil, injeção de DNA,eletroporação e outros. Ver, por exemplo, Horsch et al., Science 227: 1229(1985), Klein et ai., Biotechnology 10: 268 (1992) e Miki et al., "Proceduresfor Introducing Foreign DNA into Plants," em Methods in Plant MolecularBiology and Biotechnology, Glick et al. (eds.), páginas 67-88 (CRC Press,1993).

Alternativamente, genes que codificam os polipeptídeos dapresente invenção podem ser expressados em células hospedeirasprocarióticas. Os promotores adequados que podem ser usados para expressarpolipeptídeos de ILA-17RC em um hospedeiro procariótico são bemconhecidos por aqueles de habilidade na técnica e incluem promotorescapazes de reconhecer as T4, T3, Sp6 e T7 polimerases, os promotores Pr ePl de bacteriofago lambda, os promotores trp, recA, de choque térmico,lacUV5, tac, lpp-lacSpr, phoA e IacZ de E. coli, promotores de B. subtilis, ospromotores dos bacteriofagos de Bacillus, promotores de Streptomyces, opromotor int de bacteriofago lambda, o promotor bla de pBR322 e o promotorCAT do gene da cloranfenicol acetil transferase. Os promotores procarióticosforam revisados por Glick, J. Ind. Microbiol. 1: 277 (1987), Watson et al.,Molecular Biology of the Gene, 4a Ed. (Benjamin Cummins 1987) e porAusubel et al (1995).

Os hospedeiros procarióticos adequados incluem E. coli eBacillus subtilus. As cepas adequadas de E. coli incluem BL21(DE3),BL21 (DE3)pLysS, BL21(DE3)pLysE, DHl, DH4I, DH5, DH5I, DH5IF',DH5IMCR, DHlOB5 DH10B/p3, DHl 1S, C600, HBlOl5 JM101, JM105,JM109, JMl 10, K38, RRl, Y1088, Y1089, CSH18, ER1451 e ER1647 (ver,por exemplo, Brown (ed.), Molecular Biology Labfax (Academic Press1991)). As cepas adequadas de Bacillus subtilus incluem BR151, YB886,MIl 19, MI120 e B170 (ver, por exemplo, Hardy, "Bacillus CloningMethods," em DNA Cloning: A Practical Method, Glover (ed.) (IRL Press1985)).

Quando da expressão de um polipeptídeo da presente invençãoem bactérias tais como E. coli, o polipeptídeo pode ser retido no citoplasma,tipicamente como grânulos insolúveis ou podem ser direcionados ao espaçoperiplásmico por uma seqüência de secreção bacteriana. No primeiro caso, ascélulas são lisadas e os grânulos são recuperados e desnaturados usando, porexemplo, guanidina isotiocianato ou uréia. O polipeptídeo desnaturado podeser depois redobrado e dimerizado pela diluição do desnaturante, tal comopela diálise contra uma solução de uréia e uma combinação de glutationareduzida e oxidada, seguido pela diálise contra uma solução salinatamponada. No último caso, o polipeptídeo pode ser recuperado do espaçoperiplásmico em uma forma solúvel e funcional pelo rompimento das células(por exemplo, pela sonificação ou choque osmótico) para liberação dosconteúdos do espaço periplásmico e recuperação da proteína, removendodeste modo a necessidade quanto a desnaturação e redobra.

Os métodos para expressar proteínas em hospedeirosprocarióticos são bem conhecidos por aqueles de habilidade na técnica (ver,por exemplo, Williams et al., "Expression of foreign proteins in E. coli usingplasmid vectors and purification of specific policlonal antibodies," em DNACloning 2: Expression Systems, 2a Edição, Glover et al. (eds.), página 15(Oxford University Press 1995), Ward et al., "Genetic Manipulation andExpression of Antibodies," em Monoclonal Antibodies: Principies andApplications, página 137 (Wiley-Liss, Inc. 1995) e Georgiou, "Expression ofProteins in Bactéria," em Proteína Engineering: Principies and Practice,Cleland et al. (eds.), página 101 (John Wiley & Sons, Inc. 1996)).

Os métodos padrão para introduzir vetores de expressão emcélulas bacterianas, de levedura, de inseto e vegetais são fornecidos, porexemplo, por Ausubel (1995).

Os métodos gerais para expressar e recuperar proteína estranhaproduzida por um sistema de célula de mamífero são fornecidos, por exemplo,por Etcheverry, "Expression of Engineered Proteins in Mammalian CellCulture," em Protein Engineering: Principies and Practice, Cleland et al.(eds.), página 163 (Wiley-Liss, Inc. 1996). As técnicas padrão para arecuperação de proteína produzida por um sistema bacteriano é fornecido, porexemplo, por Grisshammer et al., "Purification of over-produced proteinsfrom E. coli cells," em DNA Cloning 2: Expression Systems, 2a Edição,Glover et al. (eds.), páginas 59-92 (Oxford University Press 1995). Osmétodos estabelecidos para isolar proteínas recombinantes a partir de umsistema de baculovírus são descritos por Richardson (ed.), BaculovirusExpression Protocols (The Humana Press, Inc. 1995).

Como uma alternativa, os polipeptídeos da presente invençãopodem ser sintetizados pela síntese de fase sólida exclusiva, métodos de fasesólida parciais, condensação de fragmento ou síntese de solução clássica.Estes métodos de síntese são bem conhecidos por aqueles de habilidade natécnica (ver, por exemplo, Merrifield, J. Am. Chem. Soe. 85: 2149 (1963),Stewart et al., "Solid Phase Peptide Synthesis" (2a Edição), (Pierce ChemicalCo. 1984), Bayer e Rapp, Chem. Pept. Prot. 3: 3 (1986), Atherton et al., SolidPhase Peptide Synthesis: A Practical Approach (IRL Press 1989), Fields eColowick, "Solid-Phase Peptide Synthesis," Methods in Enzymology Volume289 (Academic Press 1997) e Lloyd-Williams et al., Chemical Approaches tothe Synthesis of Peptides and Proteins (CRC Press, Inc. 1997)). As variaçõesnas estratégias de síntese química totais, tais como "ligação química nativa" e"ligação de proteína expressada" também são padrão (ver, por exemplo,Dawson et al., Science 266: 776 (1994), Hackeng et al., Proc. Nat'l Acad.Sei. USA 94: 7845 (1997), Dawson, Methods Enzymol. 287: 34 (1997), Muiret al, Proc. Nat'l Acad. Sei. USA 95: 6705 (1998) e Severinov e Muir, J. Biol.Chem. 273: 16205 (1998)).

Os peptídeos e polipeptídeos da presente invençãocompreendem pelo menos seis, pelo menos nove ou pelo menos 15 resíduosde aminoácido contíguos da SEQ ID NO: 2, 5 ou 21. Como uma ilustração, ospolipeptídeos podem compreender pelo menos seis, pelo menos nove ou pelomenos 15 resíduos de aminoácido contíguos da SEQ ID NO: 2, 5 e/ou 21.Dentro de certas formas de realização da invenção, os polipeptídeoscompreendem 20, 30, 40, 50, 100 ou mais resíduos contíguos destasseqüências de aminoácido. As moléculas de ácido nucleico que codificam taispeptídeos e polipeptídeos são úteis como iniciadores e sondas da reação dacadeia da polimerase.

Além disso, os polipeptídeos e seus fragmentos da presenteinvenção podem ser expressados como monômeros, homodímeros,heterodímeros ou multímeros dentro de células eucarióticas superiores. Taiscélulas podem ser usadas para produzir ILA-17RC monoméricas,homodiméricas, heterodiméricas e polipeptídeos de receptor multiméricos quecompreendem pelo menos uma porção de um polipeptídeo de ILA-17RC("receptores que compreendem ILA-17RC" ou "polipeptídeos receptores quecompreendem ILA-17RC"), uma porção de ILA-17RC e ILA-17RA junto(como um monômero, homodímero ou heterodímero) ou podem ser usadascomo células de ensaio em sistemas de triagem. Dentro de um aspecto dapresente invenção, um polipeptídeo da presente invenção que compreendepelo menos a porção de ligação de ligando do domínio extracelular de ILA-17RC ou ILA-17RA é produzido por uma célula cultivada e a célula é usadapara triar quanto a ligandos para o receptor, incluindo o ligando natural, ILA-17F, assim como ILA-17A ou mesmo agonistas e antagonistas do ligandonatural. Para resumir este método, um cDNA ou gene que codifica o receptorsão combinados com outros elementos genéticos requeridos para a suaexpressão (por exemplo, um promotor de transcrição) e o vetor de expressãoresultante é inserido em uma célula hospedeira. As células que expressam oDNA e produz receptores funcionais são selecionadas e usadas dentro de umavariedade de sistemas de triagem. Cada componente dos complexo dereceptor monomérico, homodimérico, heterodimérico e multimérico pode serexpressado na mesma célula. Além disso, os componentes do complexo dereceptor monomérico, homodimérico, heterodimérico e multimérico tambémpodem ser fundidos a um domínio de transmembrana ou outra porção defusão de membrana para permitir a montagem do complexo e a triagem detransfectantes como descrito acima.

Os polipeptídeos de ensaio da presente invenção, células demamífero adequadas para o uso na expressão de receptores ILA-17RC e ILA-17RC/ILA-17RA ou outros receptores conhecidos por ligar ILA-17A ou ILA-17F (por exemplo, células que expressam ILA-17R) e transduzir um sinalmediado por receptor incluem células que expressam outras subunidadesreceptoras que podem formar um complexo funcional com ILA-17RC.Também é preferido usar uma célula da mesma espécie como o receptor a serexpressado. Dentro de uma forma de realização preferida, a célula édependente de um fator de crescimento hematopoiético exogenamentefornecido para a sua proliferação. As linhagens de célula preferidas deste tiposão a linhagem de célula TF-I humana (ATCC número CRL-2003) e alinhagem de célula AML-193 (ATCC número CRL-9589), que são linhagensde célula leucêmica humanas dependentes de GM-CSF e BaF3 (Palacios eSteinmetz, Cell 41: 727-734, (1985)) que é uma linhagem de célula pré-B demurino dependente de ILA-3. Outras linhagens de célula incluem as célulasBHK, COS-I e CHO. As células hospedeiras adequadas podem serengendradas para produzir as subunidades receptoras necessárias ou outrocomponente celular necessário para a resposta celular desejada. Este método évantajoso porque as linhagens de célula podem ser engendradas paraexpressar subunidades receptoras de qualquer espécie, superando deste modolimitações potenciais que surgem da especificidade de espécie. Ortólogos emespécie do cDNA receptor humano podem ser clonados e usados dentro delinhagens de célula da mesma espécie, tal como um cDNA de camundongo nalinhagem de célula BaF3. As linhagens de célula que são dependentes de umfator de crescimento hematopoiético, tal como GM-CSF ou ILA-3, pode serassim engendrado para se tornar dependente de uma outra citocina que atuaatravés do receptor de ILA-17RC ou ILA-17RA, tal como ILA-17F ou ILA-17 A.

As células que expressam receptores funcionais são usadasdentro de ensaios de triagem. Uma variedade de ensaios adequados sãoconhecidos na técnica. Estes ensaios são fundamentados na detecção de umaresposta biológica em uma célula alvo. Um tal ensaio é um ensaio deproliferação celular. As células são cultivadas na presença ou ausência de umcomposto de teste e a proliferação celular é detectada, por exemplo, medindo-se a incorporação de timidina tritiada ou pelo ensaio colorimétrico com baseno colapso metabólico de brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT) (Mosman, J. Immunol. Met. 65: 55-63, (1983)). Um formatode ensaio alternativo usa células que são ainda engendradas para expressar umgene repórter. O gene repórter é ligado a um elemento promotor que éresponsivo ao caminho ligado ao receptor e o ensaio detecta a ativação datranscrição do gene repórter. Um elemento promotor preferido a este respeitoé um elemento de resposta sérica ou SRE. Ver, por exemplo, Shaw et al., Cell56: 563-572, (1989). Um tal gene repórter preferido é um gene da luciferase(de Wet et al., Mol. Cell. Biol. 7: 725, (1987)). A expressão do gene daluciferase é detectado pela luminescência usando métodos conhecidos natécnica (por exemplo, Baumgartner et al., J. Biol. Chem. 269: 29094-29101,(1994); Schenborn e Goiffin, Promega_Notes 41: 11, 1993). Os kits de ensaiode atividade de luciferase são comercialmente disponíveis, por exemplo, daPromega Corp., Madison, WI. As linhagens de célula alvo deste tipo podemser usadas para triar bibliotecas de produtos químicos, meio de culturacondicionado por célula, caldos fungicos, amostras de solo, amostras de águae outros. Por exemplo, um banco de amostras de meio condicionado porcélula podem ser ensaiados em uma célula alvo para identificar células queproduzem ligando. As células positivas são depois usadas para produzir umabiblioteca de cDNA em um vetor de expressão de mamífero, que é divididoem grupos, transfectadas em células hospedeiras e expressadas. As amostrasde meio das células transfectadas são depois ensaiadas, com divisãosubseqüente de grupos, re-transfecção, subcultivo e re-ensaio de célulaspositivas para isolar um cDNA clonado que codifica o ligando.

Um método de triagem adicional fornecido pela presenteinvenção inclui o uso de polipeptídeos de receptor híbrido. Estespolipeptídeos híbridos caem em duas classes gerais. Dentro da primeiraclasse, o domínio intracelular de ILA-17RC, é unido ao domínio de ligação deligando de um segundo receptor. Uma segunda classe de polipeptídeosreceptores híbridos compreendem o domínio extracelular (ligação de ligando)de ILA-17RC (SEQ ID NO: 3) e ILA-17RA (SEQ ID NO: X) com umdomínio intracelular de um segundo receptor, preferivelmente um receptor decitocina hematopoiética e um domínio de transmembrana. Tais monômeros,homodímeros, heterodímeros e multímeros híbridos de receptores da presenteinvenção desta segunda classe são expressadas em células conhecidas como86sendo capazes de responder aos sinais transduzidos pelo segundo receptor.Juntas, estas duas classes de receptores híbridos permitem a identificação deum tipo de célula responsiva para o desenvolvimento de um ensaio paradetectar ILA-17F ou ILA-17A. Além disso, tais células podem ser usadas na presença de ILA-17F ou ILA-17A para ensaiar os antagonistas de receptorsolúvel da presente invenção em um ensaio do tipo de competição, em talensaio, uma diminuição na proliferação ou atividade de transdução de sinal deILA-17F ou ILA-17A na presença de um receptor solúvel da presenteinvenção demonstra atividade antagonística. Além disso ensaios de ligação dereceptor solúvel ILA-17RC, um ensaio com base em célula, também pode serusado para avaliar se um receptor solúvel liga, bloqueia, inibe, reduz,antagoniza ou neutraliza a atividade de ILA-17F ou ILA-17A.F) Produção de Proteínas de Fusão e ILA-17RC, ILA-17RA e ILA-17RC/ILA-17RA Conjugados

Uma classe geral de análogos de ILA-17RC, ILA-17RA eILA-17RC/ILA-17RA são variantes tendo uma seqüência de aminoácido queé uma mutação da seqüência de aminoácido aqui divulgada. Uma outra classegeral de análogos de ILA-17RC, ILA-17RA e ILA-17RC/ILA-17RA éfornecido pelos anticorpos anti-idiotípicos e fragmentos destes, como descritoabaixo. Além disso, os anticorpos recombinantes que compreendem domíniosvariável anti-idiotípico podem ser usados como análogos (ver, por exemplo,Monfardini et al., Proc. Assoc. Am. Physicians 108: 420 (1996)). Visto queos domínios variáveis de anticorpos ILA-17RC anti-idiotípicos imitam ILA-17RC, estes domínios podem fornecer atividade de ligação de ILA-17RC.Métodos de produzir anticorpos catalíticos anti-idiotípicos são conhecidos poraqueles de habilidade na técnica (ver, por exemplo, Joron et al., Ann. N YAcad. Sei. 672: 216 (1992), Friboulet et al., Appl. Biochem. Biotechnol. 47:229 (1994) e Avalie et al., Ann. N Y Acad. Sei. 864: 118 (1998)).

Um outro método para identificar análogos de ILA-17RC,ILA-17RA e ILA-17RC/ILA-17RA é fornecido pelo uso de bibliotecascombinatórias. Métodos para construir e triar a demonstração de fago e outrasbibliotecas combinatórias são fornecidos, por exemplo, por Kay et al., PhageDisplay of Peptides and Proteins (Academic Press 1996), Verdine, PatenteU.S. N- 5.783.384, Kay, et al., Patente U.S. N5 5.747.334 e Kauffinan et ai.,Patente U.S. N2 5.723.323.

Os polipeptídeos de ILA-17RC, ILA-17RA e ILA-17RC/ILA-17RA têm usos tanto in vivo quanto in vitro. Como uma ilustração, umaforma solúvel de ILA-17RC pode ser adicionada ao meio de cultura de célulapara inibir os efeitos do ligando de ILA-17RC (isto é ILA-17F, ILA-17A ouambos) produzidos pelas células cultivadas.

As proteínas de fusão de ILA-17RC, ILA-17RA e ILA-17RC/ILA-17RA podem ser usadas para expressar e isolar o polipeptídeocorrespondente. Como descrito abaixo, proteínas de fusão de ILA-17RC,ILA-17RA e ILA-17RC/ILA-17RA particulares também têm usos nodiagnóstico e terapia. Um tipo de proteína de fusão compreende um peptídeoque guia um polipeptídeo de ILA-17RC de uma célula hospedeirarecombinante. Para direcionar um polipeptídeo de ILA-17RC no caminhosecretor de uma célula hospedeira eucariótica, uma seqüência secretora desinal (também conhecidas como um peptídeo de sinal, uma seqüência líder,seqüência prepro ou seqüência pre) são fornecidas no vetor de expressão deILA-17RC. Embora a seqüência secretora de sinal possa ser derivada de ILA-17RC, uma seqüência de sinal adequada também pode ser derivada de umaoutra proteína secretada ou sintetizada de novo. A seqüência secretora de sinalé operavelmente ligada a uma seqüência que codifica ILA-17RC tal que asduas seqüências sejam unidas na matriz de leitura correta e posicionada paradirecionar o polipeptídeo recém sintetizado no caminho secretor da célulahospedeira. As seqüências de sinal secretoras são habitualmente posicionadas5' em relação à seqüência de nucleotídeo que codifica o polipeptídeo deinteresse, embora certas seqüências de sinal secretoras possam serposicionadas alhures na seqüência de nucleotídeo de interesse (ver, porexemplo, Welch et al., Patente U.S. Nfi 5.037.743; Holland et al., Patente U.S.Ns 5.143.830).

Embora a seqüência secretora de sinal de ILA-17RC, ILA-17RA e ILA-17RC/ILA-17RA como produzido pelas células de mamífero(por exemplo, seqüência de sinal ativadora de plasminogênio do tipo tecido,como descrito, por exemplo, na Patente U.S. N° 5.641.655) é útil para aexpressão do polipeptídeo correspondente em mamíferos hospedeirosrecombinantes, uma seqüência de sinal de levedura é preferida para aexpressão nas células de levedura. Os exemplos de seqüências de sinal delevedura adequados são aqueles derivados do fator α do feromônio deacasalamento de levedura (codificado pelo gene MFa 1), invertase (codificadapelo gene SUC2) ou fosfatase ácida (codificada pelo gene PH05). Ver, porexemplo, Romanos et al., "Expression of Cloned Genes in Yeast," em DNACloning 2: A Practical Method, 2a Edição, Glover e Hames (eds.), páginas123-167 (Oxford University Press 1995).

Os polipeptídeos de receptor solúvel da presente invençãopodem ser preparados expressando-se um DNA truncado que codifica odomínio extracelular, por exemplo, um polipeptídeo que contém toda ou umaporção da SEQ ID NO: 3 ou a região correspondente de um receptor nãohumano. E preferido que os polipeptídeos do domínio extracelular sejampreparados em uma forma substancialmente livre de transmembrana esegmentos de polipeptídeo intracelulares. Para direcionar a exportação dodomínio de receptor da célula hospedeira, o DNA receptor é ligado a umsegundo segmento de DNA que codifica um peptídeo secretor, tal como umpeptídeo secretor t-PA. Para facilitar a purificação do domínio receptorsecretado, uma extensão de terminal C, tal como um rótulo de poli-histidina,substância P, peptídeo Flag® (Hopp et al., Biotechnology 6: 1204-1210,(1988); disponível da Eastman Kodak Co., New Haven, CT) ou um outropolipeptídeo ou proteína para o qual um anticorpo ou outro agente de ligaçãoespecífico é disponível, pode ser fundido ao polipeptídeo receptor.

Em um método alternativo, um domínio extracelular receptorou porção deste de ILA-17RC, ILA-17RA ou ILA-17RC/ILA-17RA juntospodem ser expressados como uma fusão com regiões constantes de cadeiapesada de imunoglobulina, tipicamente um fragmento Fc, que contém doisdomínios de região constante e uma região de dobradiça mas carece da regiãovariável (Ver, Sledziewski, AZ et al., Patente US N2 6.018.026 e 5.750.375).Os polipeptídeos solúveis da presente invenção incluem tais fusões. Uma talfusão é mostrada na SEQ ID NO: 64. Tais fusões são tipicamente secretadascomo moléculas multiméricas em que as porções Fc são dissulfeto ligadosentre si e dois polipeptídeos receptor são ordenados em proximidade íntimaentre si. As fusões deste tipo podem ser usadas para purificar por afinidade oligando cognato da solução, como uma ferramenta de ensaio in vitro, parabloquear, inibir ou reduzir sinais in vitro titulando-se especificamente oligando e como antagonistas in vivo administrando-os parenteralmente paraligar ligando circulante e depurá-lo da circulação. Para purificar ligando, umaquimera ILA-17RC, ILA-17RA e ILA-17RC/ILA-17RA-Ig é adicionado auma amostra contendo o ligando (por exemplo, meio de cultura condicionadoa célula ou extrato de tecido) sob condições que facilitam a ligação receptor-ligando (tipicamente a temperatura quase fisiológica, pH e concentraçãoiônica). O complexo quimera-ligando é depois separado pela mistura usandoproteína A, que é imobilizada em um suporte sólido (por exemplo, pérolas deresina insolúvel). O ligando é depois eluído usando técnicas químicasconvencionais, tais como com um gradiente salino ou de pH. Na alternativa, aprópria quimera pode ser ligada a um suporte sólido, com ligação e eluiçãorealizada como acima. As quimeras podem ser usadas in vivo para regularrespostas inflamatórias incluindo respostas de fase aguda tais como amilóideA sérico (SAA), proteína reativa em C (CRP) e outros. As quimeras com altaafinidade de ligação são parenteralmente administradas (por exemplo, pelainjeção intramuscular, subcutânea ou intravenosa). As moléculas circulantesligam ligando e são depuradas da circulação pelos processos fisiológicosnormais. Para o uso nos ensaios, as quimeras são ligadas a um suporte porintermédio da região Fc e usadas em um formato de ELISA.

Para auxiliar na isolação de polipeptídeos da presenteinvenção, um sistema de ensaio que usa um receptor de ligação de ligando (ouum anticorpo, um membro de um par de complemento/ anti-complemento) ouum fragmento de ligação deste e um instrumento de biosensorcomercialmente disponível (BIAcore, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ)podem ser vantajosamente utilizado. Tal receptor, anticorpo, membro de umpar de complemento/anti-complemento par ou fragmento é imobilizado nasuperfície de um chip receptor. O uso deste instrumento é divulgado porKarlsson, J. Immunol. Methods 145: 229-40, 1991 e Cunningham e Wells, J1Mol. Biol. 234: 554-63, 1993. Um receptor, anticorpo, membro ou fragmentoé covalentemente ligado, usando a química da amina ou sulfidrila, às fibras dedextrano que são ligadas a película de ouro dentro da célula de fluxo. Umaamostra de teste é passada através da célula. Se um ligando, epítopo oumembro oposto do par de complemento/anti-complemento está presente naamostra, o mesmo ligar-se-á ao receptor, anticorpo ou membro imobilizado,respectivamente, causando uma mudança no índice refrativo do meio, que édetectado como uma mudança na ressonância de plasma de superfície dapelícula de ouro. Este sistema permite a determinação de índices deassociação e desassociação, a partir dos quais a afinidade de ligação pode sercalculada e avaliada da estequiometria de ligação. Alternativamente, a ligaçãoligando/receptor pode ser analisada usando a tecnologia SELDI(TM)(Ciphergen, Inc., Palo Alto, CA).

Polipeptídeos do receptor de ligação de ligando tambémpodem ser usados dentro de outros sistemas de ensaio conhecidos na técnica.Tais sistemas incluem a análise de Scatchard para a determinação daafinidade de ligação (ver Scatchard, Ann. NY Acad. Sei. 51: 660-72, 1949) eensaios calorimétricos (Cunningham et ai, Science 253: 545-48, 1991;Cunningham et ai., Science 245: 821-25, 1991).

A presente invenção fornece ainda uma variedade de outrasfusões de polipeptídeo e proteínas multiméricas relacionadas quecompreendem uma ou mais fusões de polipeptídeo. Por exemplo, umpolipeptídeo receptor de ILA-17RC, ILA-17RA ou ILA-17RC/ILA-17RAsolúvel pode ser preparado como uma fusão a uma proteína dimerizante comodivulgado nas Patentes U.S. Na 5.155.027 e 5.567.584. As proteínasdimerizantes preferidas a este respeito incluem domínios da região constanteda imunoglobulina, por exemplo, IgGyl e a cadeia leve κ humana, as fusõessolúveis de imunoglobulina - da presente invenção podem ser expressadas emcélulas geneticamente engendradas para produzir uma variedade de análogosde receptor de ILA-17RC, ILA-17RA ou ILA-17RC/ILA-17RAmultiméricos. Os domínios auxiliares podem ser fundidos a polipeptídeossolúveis da presente invenção para alvejá-los às células, tecidos oumacromoléculas específicas (por exemplo, colágeno ou células que expressamILA-17F ou ILA-17A). Os polipeptídeos da presente invenção podem serfundidos a duas ou mais porções, tais como um rótulo de afinidade para apurificação e um domínio de alvejamento. As fusões de polipeptídeo tambémpodem compreender um ou mais sítios de clivagem, particularmente entredomínios. Ver, Tuan et al., Connective Tissue Research 34: 1-9, 1996.

Nas células bacterianas, é freqüentemente desejável expressaruma proteína heteróloga como uma proteína de fusão para diminuir atoxicidade, aumentar a estabilidade e para realçar a recuperação da proteínaexpressada. Por exemplo, ILA-17RC (ou qualquer polipeptídeo da presenteinvenção) pode ser expressado como uma proteína de fusão que compreendeum polipeptídeo de glutationa S-transferase. As proteínas de fusão deglutationa S-transferease são tipicamente solúveis e facilmente purificáveis apartir de lisados da E. coli em colunas de glutationa imobilizadas. Emmétodos similares, uma proteína de fusão de ILA-17RC que compreende umpolipeptídeo da proteína de ligação de maltose pode ser isolado com umacoluna de resina de amilose, enquanto que uma proteína de fusão quecompreende a extremidade de terminal C de um gene da Proteína A truncadopode ser purificado usando IgG-Sepharose. As técnicas estabelecidas paraexpressar um polipeptídeo heterólogo como uma proteína de fusão em umacélula bacteriana são descritas, por exemplo, por Williams et al., "Expressionof Foreign Proteins in E. coli Using Plasmid Vectors and Purification ofEspecified Policlonal Antibodies," em DNA Cloning 2: A Practical Method,2a Edição, Glover e Hames (Eds.), páginas 15-58 (Oxford University Press1995). Além disso, sistemas de expressão comercialmente disponíveis sãodisponíveis. Por exemplo, o sistema de purificação de proteína PINPOINT Xa(Promega Corporation; Madison, WI) fornece um método para isolar umaproteína de fusão que compreende um polipeptídeo que se torna biotiniladodurante a expressão com uma resina que compreende avidina.

Os rótulos de peptídeo que são úteis para isolar polipeptídeosheterólogos expressados por células procarióticas ou eucarióticas incluemrótulos de poli-Histidina (que têm uma afinidade quanto a resina queladora deníquel), os rótulos c-myc, proteína de ligação de calmodulina (isolada com acromatografia de afinidade de calmodulina), substância Ρ, o rótulo RYIRS(que liga com anticorpos anti-RYIRS), o rótulo Glu-Glu e o rótulo FLAG(que liga com anticorpos anti-FLAG). Ver, por exemplo, Luo et al., Arch.Biochem. Biophys. 329: 215 (1996), Morganti et al., Biotechnol. Appl.Biochem. 23: 67 (1996) e Zheng et al., Gene 186: 55 (1997). Moléculas deácido nucleico que codificam tais rótulos de peptídeo são disponíveis, porexemplo, da Sigma-Aldrich Corporation (St. Louis, MO).Uma outra forma de proteína de fusão compreende umpolipeptídeo da presente invenção e uma região constante da cadeia pesada deimunoglobulina, tipicamente um fragmento de Fc5 que contém dois ou trêsdomínios da região constante e uma região de dobradiça mas carece da regiãovariável. Como uma ilustração, Chang et al., Patente U.S. N- 5.723.125,descreve uma proteína de fusão que compreende um interferon humano e umfragmento Fc da imunoglobulina humana. O terminal C do interferon é ligadoao terminal N do fragmento Fc por uma porção de ligador de peptídeo. Umexemplo de um ligador de peptídeo é um peptídeo que compreendeprimariamente uma seqüência inerte de célula T, que é imunologicamenteinerte. Um peptídeo ligador exemplar tem a seqüência de aminoácido:GGSGG SGGGG SGGGG S (SEQ ID NO: 9). Nesta proteína de fusão, umaporção Fc ilustrativa é uma cadeia γ4 humana, que é estável em solução e tempouca ou nenhuma atividade ativadora de complemento. Conseqüentemente, apresente invenção considera um ILA-17RC ou uma proteína de fusão ILA-17RC/ILA-17RA que compreende uma porção ILA-17RC ou uma ILA-17RCe ILA-17RA e um fragmento Fc humano, em que o término C da porção ILA-17RC é ligada ao terminal N do fragmento Fc por intermédio de um peptídeoligador, tal como um peptídeo que compreende pelo menos uma porção daseqüência de aminoácido da SEQ ID NO: 2, 5 ou 21. Ambas as porções ILA-17RC e a ILA-17RA podem ser o domínio extracelular ou qualquerfragmento deste. Por exemplo, uma proteína de fusão pode compreender oaminoácido da SEQ ID NO: 3 e um fragmento Fc (por exemplo, umfragmento Fc humano) (SEQ ID NO: 64). Um outro exemplo de uma talproteína de fusão é a variante 1454 (SEQ ID NOs: 157 e 158) que inclui osexons de 1 a 6 da ILA-17RA humana e de 8 a 16 da ILA-17RCxl humana,fundida a Fc5 (SEQ ID NOs: 179 e 180). A variante 1454 também tem opeptídeo de sinal nativo da ILA-17RA humana. FclO ou qualquer equivalenteconhecido na técnica, também pode ser usado no lugar de Fc5.Em uma outra variação, uma proteína de fusão da presenteinvenção compreende uma seqüência IgG, uma porção ILA-17RC, ILA-17RAou ILA-17RC/ILA-17RA covalentemente unida à extremidade de terminalamino da seqüência IgG e um peptídeo de sinal que é covalentemente unidaao terminal amino da porção ILA-17RC ou ILA-17RA, em que a seqüênciaIgG consiste dos seguintes elementos na seguinte ordem: uma região dedobradiça, um domínio CH2 e um domínio CH3. Conseqüentemente, aseqüência IgG carece de um domínio CHi. Estas porções devem demonstraruma atividade biológica, como aqui descrito, tal como a capacidade para ligarcom ILA-17A e/ou ILA-17F. Este método geral para produzir proteínas defiisão que compreendem tanto porções de anticorpo quanto que não deanticorpo foi descrito por LaRochelle et al., EP 742830 (WO 95/21258).

As proteínas de fusão que compreendem uma porção de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA e uma porção Fc podem ser usadas, porexemplo, como uma ferramenta de ensaio in vitro. Por exemplo, a presença deILA-F em uma amostra biológica pode ser detectada usando uma proteína defusão de ILA-17RC-imunoglobulina, em que a porção ILA-17RC é usadapara ligar o ligando e uma macromolécula, tal como a Proteína A ou anticorpoanti-Fc, é usado para ligar a proteína de fusão a um suporte sólido. Taissistemas podem ser usados para identificar agonistas e antagonistas queinterferem com a ligação de um ligando da família ILA-17, por exemplo,ILA-17F ou tanto ILA-17A quanto ILA-17F, aos seus receptores.

A presente invenção fornece ainda uma variedade de outrasfusões de polipeptídeo. Por exemplo, parte ou todo de um domínio(s) queconfere(m) uma função biológica desejada (por exemplo, ligação de ILA-17A) pode ser adicionada a uma porção de ILA-17RC com o(s) domínio(s)funcionalmente equivalentes de um outro membro da família de receptor decitocina (isto é ILA-17RA) para criar uma molécula diferente (isto é ILA-17RC/ILA-17RA). As fusões de polipeptídeo podem ser expressadas emcélulas hospedeiras recombinantes para produzir uma variedade destesanálogos de fusão. Um polipeptídeo de ILA-17RC, ILA-17RA ou ILA-17RC/ILA-17RA pode ser fundido a duas ou mais porções ou domínios, taiscomo um rótulo de afinidade para a purificação e um domínio de alvejamento.

As fusões de polipeptídeo também podem compreender um ou mais sítios declivagem, particularmente entre domínios. Ver, por exemplo, Tuan et al.,Connective Tissue Research 34: 1 (1996).

As proteínas de fusão podem ser preparadas pelos métodosconhecidos por aqueles habilitados na técnica pela preparação de cadacomponente da proteína de fusão e quimicamente conjugando-os.Alternativamente, um polinucleotídeo que codifica ambos os componentes daproteína de fusão na matriz de leitura apropriada pode ser gerado usandotécnicas conhecidas e expressadas pelos métodos aqui descritos. Os métodosgerais para a clivagem enzimática e química de proteínas de fusão sãodescritas, por exemplo, por Ausubel (1995) nas páginas 16-19 a 16-25.

Os domínios de ligação de ILA-17RC e/ou ILA-17RA podemser ainda caracterizados pela análise física da estrutura, como determinadopor técnicas tais como ressonância magnética nuclear, cristalografia, difraçãode elétron ou rotulação de fotoafinidade, em conjunção com a mutação deaminoácidos de sítio de contato putativo de agonistas de ligando. Ver, porexemplo, de Vos et al., Science 255: 306 (1992), Smith et al., J. Mol. Biol.224: 899 (1992) e Wlodaver et al., FEBS Lett. 309: 59 (1992).

A presente invenção também considera composições de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA quimicamente modificadas, em que opolipeptídeo é ligado com um polímero. Polipeptídeos ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA ilustrativos são polipeptídeos solúveis que carecem de umdomínio de transmembrana funcional, tal como um polipeptídeo que consistede resíduos de aminoácido da SEQ ID NO: 3 ou X. Tipicamente, o polímero ésolúvel em água de modo que o conjugado não precipita em um ambienteaquoso, tal como um ambiente fisiológico. Um exemplo de um polímeroadequado é um que foi modificado para ter um único grupo reativo, tal comoum éster ativo para a acilação ou um aldeído para alquilação. Desta maneira,o grau de polimerização pode ser controlado. Um exemplo de um aldeídoreativo é propionaldeído de polietileno glicol ou mono-alcóxi (Ci-Ci0) ouderivados de arilóxi destes (ver, por exemplo, Harris, et al., Patente U.S. N-5.252.714). O polímero pode ser ramificado ou não ramificado. Além disso,uma mistura de polímeros pode ser usada para produzir conjugados de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA.

Os conjugados da presente invenção usados para a terapiapodem compreender porções poliméricas solúveis em águafarmaceuticamente aceitáveis. Os polímeros solúveis em água adequadosincluem polietileno glicol (PEG), monometóxi-PEG, mono-alcóxi (Cl-ClO)-PEG, arilóxi-PEG, poli-(N-vinilpirrolidona)PEG, tresil monometóxi PEG,PEG propionaldeído, carbonato de bis-succinimidil PEG, homopolímeros depropileno glicol, um co-polímero de óxido de polipropileno/óxido de etileno,polióis polioxietilados (por exemplo, glicerol), álcool polivinílico, dextrano,celulose ou outros polímeros com base em carboidrato. O PEG adequadopode ter um peso molecular de cerca de 600 a cerca de 60.000, incluindo, porexemplo, 5.000, 12.000, 20.000 e 25.000. Um conjugado de ILA-17RCtambém pode compreender uma mistura de tais polímeros solúveis em água.

Um exemplo de um conjugado de ILA-17RC compreende umaporção de ILA-17RC (ou uma porção de ILA-17RC/ILA-17RA) e umaporção de óxido de polialquila ligada ao terminal N da porção de ELA-17RC.O PEG é um óxido de polialquila adequado. Como uma ilustração, ILA-17RC(ou ILA-17RC/ILA-17RA) pode ser modificada com PEG, um processoconhecido como "PEGuilação." A PEGuilação de ILA-17RC pode serrealizada por qualquer uma das reações de PEGuilação conhecidas na técnica(ver, por exemplo, a EP 0 154 316, Delgado et al., Criticai Reviews inTherapeutic Drug Carrier Systems 9: 249 (1992), Duncan e Spreafico, Clin.Pharmacokinet. 27: 290 (1994) e Francis et al., Int J Hematol 68: 1 (1998)).Por exemplo, a PEGuilação pode ser realizada por uma reação de acilação oupor uma reação de alquilação com uma molécula reativa de polietileno glicol.Em um método alternativo, conjugados de ILA-17RC são formadoscondensando-se PEG ativado, em que um terminal hidróxi ou grupo amino dePEG foi substituído por um ligador ativado (ver, por exemplo, Karasiewicz etal., Patente U.S. N2 5.382.657).

A PEGuilação pela acilação tipicamente requer reagir umderivado de éster ativo de PEG com um polipeptídeo de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA. Um exemplo de um éster de PEG ativado é PEGesterificado com N-hidroxissuccinimida. Como aqui usado, o termo"acilação" inclui os seguintes tipos de ligações entre ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA e um polímero solúvel em água: amida, carbamato, uretanoe outros. Os métodos para preparar ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RApeguilado pela acilação tipicamente compreenderá as etapas de (a) reagir umpolipeptídeo de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA com PEG (tal como uméster reativo de um derivado de aldeído de PEG) sob condições por meio doqual um ou mais grupos PEG ligados a ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA e(b) obter o(s) produto(s) de reação. No geral, as condições de reação ótimaspara as reações de acilação serão determinadas com base nos parâmetrosconhecidos e resultados desejados. Por exemplo, quanto maior a razão dePEG:ILA-17RC (ou PEG:ILA-17RC/ILA-17RA), maior a porcentagem deproduto ILA-17RC (ou ILA-17RC/ILA-17RA) polipeguilado.

O produto de PEGuilação pela acilação é tipicamente umproduto polipeguilado, em que os grupos lisina ε-amino são peguilados porintermédio de um grupo de ligação de acila. Um exemplo de uma ligaçãoconectora é uma amida. Tipicamente, a ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RAresultante serão pelo menos 95% mono-, di- ou tri-peguilado, embora algumaespécie com graus mais altos de PEGuilação podem ser formados dependendodas condições de reação. A espécie peguilada pode ser separada depolipeptídeos ILA-17RC ou ILA-17RC/ELA-17RA não conjugados usandométodos de purificação padrão, tais como diálise, ultrafiltração, cromatografiade troca iônica, cromatografia de afinidade e outros.

A PEGuilação pela alquilação no geral envolve reagir umderivado de terminal aldeído de PEG com ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA na presença de um agente redutor. Os grupos PEG podem ser ligadosao polipeptídeo por intermédio de um grupo -CH2-NH.

A derivatização por intermédio da alquilação redutiva paraproduzir um produto monopeguilado leva vantagem da reatividade diferencialde tipos diferentes de grupos amino primários disponíveis para aderivatização. Tipicamente, a reação é realizada a um pH que permite que seleve vantagem das diferenças de pKa entre os grupos ε-amino dos resíduos delisina e o grupo α-amino do resíduo de terminal N da proteína. Por talderivatização seletiva, a ligação de um polímero solúvel em água que contémum grupo reativo tal como um aldeído, a uma proteína é controlada. Aconjugação com o polímero ocorre predominantemente no terminal N daproteína sem modificação significante de outros grupos reativos tais como osgrupos amino da cadeia lateral de lisina. A presente invenção fornece umapreparação substancialmente homogênea de polímeros monoconjugados deILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA.

A alquilação redutiva para produzir uma populaçãosubstancialmente homogênea de molécula conjugada de monopolímero ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA pode compreender as etapas de: (a) reagir umpolipeptídeo de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA com um PEG reativosob condições de alquilação redutiva em um pH adequado para permitir amodificação seletiva do grupo α-amino no terminal amino da ILA-17RC ouILA-17RC/ILA-17RA e (b) obter o(s) produto(s) de reação. O agente redutorusado para a alquilação redutiva deve ser estável em solução aquosa e capazde reduzir apenas a base de Schiff formada no processo inicial de alquilaçãoredutiva. Os agentes redutores ilustrativos incluem boroidreto de sódio,cianoboroidreto de sódio, dimetilamino borano, trimetilamino borano epiridino borano.

Para uma população substancialmente homogênea deconjugados de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA monopoliméricos, ascondições de reação de alquilação redutiva são aquelas que permitem aligação seletiva da porção polimérica solúvel em água ao terminal N de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA. Tais condições de reação no geral fornecemdiferenças de pKa entre os grupos amino da lisina e o grupo α-amino noterminal Ν. O pH também afeta a razão de polímero para proteína a ser usada.No geral, se o pH é mais baixo, um excesso grande de polímero para proteínaserá desejado porque quanto menos reativo o grupo α do terminal N, maispolímero é necessário para se obter condições ótimas. Se o pH é mais alto, apolímero:ILA-17RC (ou polímero:ILA-17RC/ILA-17RA) não precisa ser tãogrande porque mais grupos reativos são disponíveis. Tipicamente, o pH cairádentro da faixa de 3 a 9 ou 3 a 6. Este método pode ser utilizado para fabricarconjugados de receptor solúvel homodiméricos, heterodiméricos oumultiméricos que compreende ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA.

Um outro fator a considerar é o peso molecular do polímerosolúvel em água. No geral, quanto mais alto o peso molecular do polímero,menor o número de moléculas poliméricas que podem ser ligadas à proteína.Para as reações de PEGuilação, o peso molecular típico é de cerca de 2 kDa acerca de 100 kDa, cerca de 5 kDa a cerca de 50 kDa ou cerca de 12 kDa acerca de 25 kDa. A razão molar de polímero solúvel em água para ILA-17RCou ILA-17RC/ILA-17RA no geral estará na faixa de 1:1 a 100:1.Tipicamente, a razão molar de polímero solúvel em água para ILA-17RC ouILA-17RC/ILA-17RA será de 1:1 a 20:1 para a poliPEGuilação e 1:1 a 5:1para a monoPEGuilação.

Os métodos gerais para produzir conjugados quecompreendem um polipeptídeo e porções poliméricas solúveis em água sãoconhecidas na técnica. Ver, por exemplo, Karasiewicz et al, Patente U.S. N25.382.657, Greenwald et al, Patente U.S. N- 5.738.846, Nieforth et al, Clin.Pharmacol. Ther. 59: 636 (1996), Monkarsh et al, Anal. Biochem. 247: 434(1997)). Este método pode ser utilizado para fabricar conjugados de. receptorsolúvel homodiméricos, heterodiméricos ou multiméricos que compreendemILA-17RC.

A presente invenção considera composições que compreendemum peptídeo ou polipeptídeo, tal como um receptor solúvel ou anticorpo aquidescrito. Tais composições podem compreender ainda um carreador. Ocarreador pode ser um carreador orgânico ou inorgânico convencional. Osexemplos de carreadores incluem água, solução tampão, álcool, propilenogücol, macrogol, óleo de gergelim, óleo de milho e outros.

G) Isolação de Polipeptídeos de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA

Os polipeptídeos da presente invenção podem ser purificados apelo menos cerca de 80% de pureza, a pelo menos cerca de 90% de pureza, apelo menos cerca de 95% de pureza ou mais do que 95%, tal como 96%, 97%,98% ou mais do que 99% de pureza com respeito às macromoléculascontaminantes, particularmente outras proteínas e ácidos nucleicos e livre deagentes infecciosos e pirogênicos. Os polipeptídeos da presente invençãotambém podem ser purificados a um estado farmaceuticamente puro, que émais do que 99,9% puro. Em certas preparações, o polipeptídeo purificado ésubstancialmente livre de outros polipeptídeos, particularmente outrospolipeptídeos de origem animal.

Os métodos de fracionação e/ou purificação convencionaispodem ser usados para se obter preparações de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA purificadas de fontes naturais (por exemplo, fontes de tecido humano),polipeptídeos de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA sintéticos epolipeptídeos de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA recombinantes epolipeptídeos de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA de fusão purificados apartir de células hospedeiras recombinantes. No geral, a precipitação comsulfato de amônio e ácido ou extração caotrópica podem ser usadas para afracionação de amostras. As etapas de purificação exemplares podem incluirhidroxiapatita, exclusão de tamanho, FPLC e cromatografia líquida de altodesempenho de fase reversa. Os meios cromatográficos adequados incluemdextranos derivatizados, agarose, celulose, poliacrilamida, sílicas especiais eoutros. Os derivados de PEI5 DEAE, QAE e Q são adequados. Os meioscromatográficos exemplares incluem aqueles meios derivatizados com gruposfenila, butila ou octila, tais como Phenil-Sepharose FF (Pharmacia),Toyopearl butil 650 (Toso Haas, Montgomeryville, PA), Octil-Sepharose(Pharmacia) e outros; ou resinas poliacrílica, tais como Amberchrom CG 71(Toso Haas) e outras. Os suportes sólidos adequados incluem pérolas devidro, resinas com base em celulose, resinas celulósicas, pérolas de agarose,pérolas de agarose reticuladas, pérolas de poliestireno, resinas depoliacrilamida reticuladas e outras que são insolúveis sob as condições emque elas devam ser usadas. Estes suportes podem ser modificados com gruposreativos que permitem a ligação de proteínas pelos grupos amino, gruposcarboxila, grupos sulfidrila, grupos hidroxila e/ou porções de carboidrato.

Os exemplos de químicas de ligação incluem ativação debrometo de cianogênio, ativação de N-hidroxissuccinimida, ativação deepóxido, ativação de sulfidrila, ativação de hidrazida e carboxila e derivadosde amino para as químicas de ligação de carbodiimida. Estes e outros meiossólidos são bem conhecidos e amplamente usados na técnica e são disponíveisde fornecedores comerciais. A seleção de um método particular para aisolação e purificação de polipeptídeo é uma questão de planejamento derotina e é determinado em parte pelas propriedades do suporte escolhidos.Ver, por exemplo, Affinity Chromatography: Principies & Methods(Pharmacia LKB Biotechnology 1988) e Doonan, Protein PurificationProtocols (The Humana Press 1996).

As variações adicionais na isolação e purificação de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA podem ser planejadas por aqueles dehabilidade na técnica.

Os polipeptídeos da presente invenção também podem serisolados pela exploração de propriedades particulares. Por exemplo, acromatografia de adsorção de íon metálico imobilizado (IMAC) pode serusada para purificar proteínas ricas em histidina, incluindo aquelas quecompreendem rótulos de poli-histidina. Em resumo, um gel é primeirocarregado com íons metálicos bivalentes para formar um quelato (Sulkowski,Trends in Biochem. 3: 1 (1985)). As proteínas ricas em histidina serãoabsorvidas a esta matriz com afinidades diferentes, dependendo do íonmetálico usado e será eluído pela eluição competitiva, diminuição do pH ouuso de agentes queladores fortes. Outros métodos de purificação incluem apurificação de proteínas glicosiladas pela cromatografia de afinidade delectina e cromatografia de troca iônica (M. Deutscher, (ed.), Met. Enzymol.182: 529 (1990)). Dentro das formas de realização adicionais da invenção,uma fusão do polipeptídeo de interesse e um rótulo de afinidade (porexemplo, proteína de ligação de maltose, um domínio de imunoglobulina)podem ser construídos para facilitar a purificação. Além disso, aspropriedades de ligação de ligando dos polipeptídeos ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA solúveis da presente invenção podem ser exploradas para apurificação, por exemplo, de receptores solúveis que compreendem ILA-17RC; por exemplo, pelo uso da cromatografia de afinidade em que o ligandode ILA-17F é ligado a uma coluna e o receptor que compreende ILA-17RC éligado e subseqüentemente eluído usando métodos de cromatografia padrão.

Os polipeptídeos de ILA-17RC, ILA-17RA ou ILA-17RC/ILA-17RA ou fragmentos destes também podem ser preparados atravésda síntese química, como descrito acima. Estes polipeptídeos podem sermonômeros ou multímeros; glicosilados ou não glicosilados; peguilados ounão peguilados; e podem incluir ou não um resíduo de aminoácido demetionina inicial.

H) Produção de Anticorpos para Proteínas de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA

Os anticorpos para ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RApodem ser obtidos, por exemplo, usando o produto de um vetor de expressãode ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA ou ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA isolados de uma fonte natural como um antígeno. Os anticorpos anti-ILA-17RC ou ILA-17RC/IL A-17RA particularmente úteis "ligamespecificamente" com ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA. Os anticorpossão considerados como sendo de ligação específica se os anticorpos exibempelo menos uma das seguintes duas propriedades: (1) anticorpos ligam a ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA com um nível de limiar de atividade deligação e (2) anticorpos não reagem cruzado de modo significante com ospolipeptídeos relacionados com ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA.

Com respeito à primeira característica, os anticorpos ligamespecificamente se eles ligam a um polipeptídeo, peptídeo ou epítopo de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA com uma afinidade de ligação (Ka) de IO6M"1 ou maior, preferivelmente IO7 M"1 ou maior, mais preferivelmente IO8M"1 oumaior e o mais preferivelmente IO9 M"1 ou maior. A afinidade de ligação deum anticorpo pode ser facilmente determinada por uma pessoa de habilidadecomum na técnica, por exemplo, pela análise de Scatchard (Scatchard, Ann.NY Acad. Sei. 51: 660 (1949)). Com respeito à segunda característica,anticorpos não reagem cruzado de modo significante com moléculas depolipeptídeo relacionadas, por exemplo, se eles detectam ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA, mas não polipeptídeos presentemente conhecidos usandouma análise de Western blot padrão. Os exemplos de polipeptídeosrelacionados conhecidos incluem receptores de citocina conhecidos.

Os anticorpos anti-ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RApodem ser produzidos usando peptídeos e polipeptídeos que carregam oepítopo de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA antigênico. Os peptídeos epolipeptídeos que carregam epítopo antigênico da presente invenção contêmuma seqüência de pelo menos nove ou entre 15 a cerca de 30 aminoácidoscontidos dentro da SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5 ou umaoutra seqüência de aminoácido aqui divulgada. Entretanto, os peptídeos oupolipeptídeos que compreendem uma porção maior de uma seqüência deaminoácido da invenção, contendo de 30 a 50 aminoácidos ou qualquercomprimento até e incluindo a seqüência de aminoácido inteira de umpolipeptídeo da invenção, também são úteis para induzir anticorpos que seligam com ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA. É desejável que a seqüênciade aminoácido do peptídeo que carrega epítopo seja selecionada para fornecersolubilidade substancial em solventes aquosos (isto é, a seqüência incluiresíduos relativamente hidrofílicos, enquanto que os resíduos hidrofóbicos sãotipicamente evitados). Além disso, as seqüências de aminoácido contendoresíduos de prolina também podem ser desejáveis para a produção de anticorpo.

Como uma ilustração, sítios antigênicos potenciais em ILA-17RC foram identificados usando o método de Jameson-Wolf, Jameson eWolf, CABIOS 4: 181, (1988), como implementado pelo programaPROTEAN (versão 3.14) de LASERGENE (DNASTAR; Madison, WI).

Parâmetros básicos foram usados nesta análise.

O método de Jameson-Wolf prognostica determinantesantigênicos potenciais pela combinação de seis subrotinas principais para oprognóstico estrutural de proteína. Em resumo, o método de Hopp-Woods,Hopp et ai., Proc. Nat'l Acad. Sei. USA 78: 3824 (1981), foi primeiro usadopara identificar as áreas que representam seqüências de aminoácido de maiorhidrofilicidade local (parâmetro: sete resíduos em média). Na segunda etapa,o método de Emini, Emini et al, J. Virology 55: 836 (1985), foi usado paracalcular as probabilidades de superfície (parâmetro: limiar de decisão desuperfície (0,6) = 1). Terceira, o método de Karplus-Schultz, Karplus eSchultz, Naturwissenschaften 72: 212 (1985), foi usado para prognosticar aflexibilidade da cadeia principal (parâmetro: limiar de flexibilidade (0,2) = 1).Nas quarta e quinta etapas da análise, os prognósticos de estrutura secundáriaforam aplicadas aos dados usando os métodos de Chou-Fasman, Chou,"Prediction of Protein Structural Classes from Amino Acid Composition," emPrediction of Protein Structure and the Principies of Protein Conformation,Fasman (ed.), páginas 549-586 (Plenum Press 1990) e Garnier-Robson,Garnier et al, J. Mol. Biol. 120: 97 (1978) (parâmetros de Chou-Fasman:tabela de conformação = 64 proteínas; limiar da região α = 103; limiar daregião β = 105; parâmetros de Garnier-Robson: constantes de decisão α e β =0). Na sexta subrotina, os parâmetros de flexibilidade e hidropatia/fatores deacessibilidade de solvente foram combinados para determinar um valor decontorno de superfície, designado como o "índice antigênico." Finalmente,uma função de ampliação de pico foi aplicada ao índice antigênico, queamplia os picos de superfície principais pela adição de 20, 40, 60 ou 80% dorespectivo valor de pico considerando a energia livre adicional derivada damobilidade de regiões de superfície em relação às regiões interiores. Estecálculo não foi aplicado, entretanto, a qualquer pico principal que reside emuma região helicoidal, visto que as regiões helicoidais tendem a serem menosflexíveis. Perfis de hidrofilicidade de Hopp/Woods podem ser usados paradeterminar regiões que têm o potencial mais antigênico dentro da SEQ IDNO: 3 (Hopp et al, Proc. Natl. Acad. Sei, 78: 3824-3828, 1981; Hopp, J1Immun. Met. 88: 1-18, 1986 e Triquier et al, Protein Engineering JJ_: 153-169, 1998). O perfil está fundamentado em uma janela de seis resíduosdeslizante. Os resíduos G, S e T encobertos e os resíduos Η, Y e W expostosforam ignorados. Além disso, os epítopos antigênicos ILA-17RC dentro daSEQ ID NO: 3 como prognosticado por uma plotagem de Jameson-Wolf5 porexemplo, usando o programa DNASTAR Protean (DNASTAR, Inc.,Madison, WI) serve como epítopos antigênicos preferidos e pode serdeterminado por uma pessoa de habilidade na técnica. Tais epítoposantigênicos incluem (1) resíduo de aminoácido 73 ao resíduo de aminoácido82 da SEQ ID NO: 3; (2) resíduo de aminoácido 95 ao resíduo de aminoácido104 da SEQ ID NO: 3; (3) resíduo de aminoácido 111 ao resíduo deaminoácido 119 da SEQ ID NO: 3; (4) resíduo de aminoácido 179 ao resíduode aminoácido 186 da SEQ ID NO: 3; (5) resíduo de aminoácido 200 aoresíduo de aminoácido 205 da SEQ ID NO: 3; (6) resíduo de aminoácido 229ao resíduo de aminoácido 236 da SEQ ID NO: 3; (7) resíduo de aminoácido264 ao resíduo de aminoácido 268 da SEQ ID NO: 3; e (8) resíduo deaminoácido 275 ao resíduo de aminoácido 281 da SEQ ID NO: 3. A presenteinvenção considera o uso de qualquer um dos peptídeos antigênicos XaYpara gerar anticorpos para ILA-17RC ou como uma ferramenta para triar ouidentificar anticorpos monoclonais neutralizantes da presente invenção. Apresente invenção também considera polipeptídeos que compreendem pelomenos um dos peptídeos antigênicos X a Υ. A presente invenção considera ouso de quaisquer peptídeos antigênicos ou epítopos aqui descritos para geraranticorpos para ILA-17RC, assim como para identificar e triar anticorposmonoclonais anti-ILA-17RC que são neutralizantes e que pode ligar,bloquear, inibir, reduzir, antagonizar ou neutralizar a atividade de ILA-17F eILA-17A (individualmente ou junto).

Além disso, antígenos adequados também incluem ospolipeptídeos de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA que compreendem umaligação de citocina de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA ou domínioextracelular divulgado acima em combinação com um outro domínioextracelular de citocina, tal como um domínio de receptor de citocina declasse I ou II, tal como aqueles que podem formar polipeptídeosheterodiméricos ou multiméricos de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RAsolúveis e outros.

Os anticorpos policlonais para a proteína ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA recombinante ou para ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RAisolado de fontes naturais podem ser preparados usando métodos bemconhecidos por aqueles de habilitados na técnica. Ver, por exemplo, Green etai, "Production of Policlonal Antisera," em Immunochemical Protocols(Manson, ed.), páginas 1 a 5 (Humana Press 1992) e Williams et ai.,"Expression of foreign proteins in E. coli using plasmid vectors andpurification of specific policlonal antibodies," em DNA Cloning 2:Expression Systems, 2a Edição, Glover et al. (eds.), página 15 (OxfordUniversity Press 1995). A imunogenicidade de um polipeptídeo de ILA-17RCou ILA-17RC/ILA-17RA pode ser aumentada através do uso de umadjuvante, tal como alúmem (hidróxido de alumínio) ou adjuvante completoou incompleto de Freund. Os polipeptídeos úteis para a imunização tambémincluem polipeptídeos de fusão, tais como fusões de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA ou uma porção deste com um polipeptídeo deimunoglobulina ou com proteína de ligação de maltose. O imunógeno depolipeptídeo pode ser uma molécula de tamanho natural ou uma porção desta.Se a porção de polipeptídeo é "equivalente de hapteno," tal porção pode servantajosamente unida ou ligada a um carreador macromolecular (tal comohemocianina do lapa buraco de fechadura (KLH), albumina sérica bovina(BSA) ou toxóide do tétano) para imunização.

Embora os anticorpos policlonais sejam tipicamente incitadosem animais tais como cavalos, vacas, cães, galinhas, ratos, camundongos,coelhos, porquinhos da índia, cabras ou ovelhas, um anticorpo anti-ILA-17RCou ILA-17RC/ILA-17RA da presente invenção também pode ser derivado deum anticorpo de primata sub-humano. As técnicas gerais para incitaranticorpos diagnostica e terapeuticamente úteis em babuínos podem serencontradas, por exemplo, em Goldenberg et al., international patentpublication N- WO 91/11465 e em Losman et al., Int. J. Câncer 46: 310 (1990).

Alternativamente, os anticorpos anti-ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA podem ser gerados. Os anticorpos monoclonais de roedorpara antígenos específicos podem ser obtidos pelos métodos conhecidos poraqueles habilitados na técnica (ver, por exemplo, Kohler et al., Nature 256:495 (1975), Coligan et al. (eds.), Current Protocols in Immunology, Vol. 1,páginas 2.5.1-2.6.7 (John Wiley & Sons 1991) ["Coligan"], Picksley et al.,"Production of monoclonal antibodies against proteins expressed in E. coli,"em DNA Cloning 2: Expression Systems, 2a Edição, Glover et al. (eds.),página 93 (Oxford University Press 1995)).

Em resumo, anticorpos monoclonais podem ser obtidosinjetando-se camundongos com uma composição que compreende um produtode gene de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA, verificando a presença deprodução de anticorpo pela remoção de uma amostra de soro, removendo obaço para obter linfócitos B, fundindo os linfócitos B com células de mielomapara produzir hibridomas, clonando os hibridomas, selecionando clonespositivos que produzem anticorpos para o antígeno, cultivando os clones queproduzem anticorpos para o antígeno e isolando os anticorpos das culturas dehibridoma.

Além disso, um anticorpo anti-ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA da presente invenção pode ser derivado de um anticorpo monoclonalhumano. Os anticorpos monoclonais são obtidos a partir de camundongostransgênicos que foram engendrados para produzir anticorpos humanosespecíficos em resposta à inoculação antígênica. Nesta técnica, elementos dolocal de cadeia pesada e leve humana são introduzidos nas cepas decamundongos derivados de linhagens de célula tronco embrionária quecontêm rompimentos alvejados dos locais de cadeia pesada e leve endógenos.Os camundongos transgênicos podem sintetizar anticorpos humanosespecífico para antígenos humanos e os camundongos podem ser usados paraproduzir hibridomas que secretam anticorpo humano. Os métodos para aobtenção de anticorpos humanos a partir de camundongos transgênicos sãodescritos, por exemplo, por Green et al., Nature Genet. 7:13 (1994), Lonberget al., Nature 368: 856 (1994) e Tailor et al., Int. Immun. 6: 579 (1994).

Os anticorpos monoclonais podem ser isolados e purificados apartir de culturas de hibridoma por uma variedade de técnicas bemestabelecidas. Tais técnicas de isolação incluem a cromatografia de afinidadecom Proteína-A Sepharose, cromatografia de exclusão de tamanho ecromatografia de troca iônica (ver, por exemplo, Coligan nas páginas 2.7.1-2.7.12 e páginas 2.9.1-2.9.3; Baines et al., "Purification of Immunoglobulin G(IgG)," em Methods in Molecular Biology, Vol. 10, páginas 79-104 (The

Humana Press, Inc. 1992)).

Para usos particulares, pode ser desejável preparar fragmentosde anticorpos anti-ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA. Tais fragmentos deanticorpo podem ser obtidos, por exemplo, pela hidrólise proteolítica doanticorpo. Os fragmentos de anticorpo podem ser obtidos pela digestão compepsina ou papaína de anticorpos inteiros pelos métodos convencionais.Como uma ilustração, fragmentos de anticorpo podem ser produzidos pelaclivagem enzimática de anticorpos com pepsina para fornecer um fragmento5S denotado F(ab')2. Este fragmento pode ser ainda clivado usando um agentede redução de tiol para produzir fragmentos 3,5S Fab' monovalentes.Opcionalmente, a reação de clivagem pode ser realizada usando um grupobloqueador para os grupos sulfidrila que resultam da clivagem de ligações dedissulfeto. Como uma alternativa, uma clivagem enzimática usando pepsinaproduz dois fragmentos Fab monovalentes e um fragmento Fc diretamente.Estes métodos são descritos, por exemplo, por Goldenberg, Patente U.S. Ns4.331.647, Nisonoff et al., Arch Biochem. Biophys. 89: 230 (1960), Porter,Biochem. J. 73: 119 (1959), Edelman et al., em Methods in Enzymology Vol.1, página 422 (Academic Press 1967) e por Coligan nas páginas 2.8.1-2.8.10 e2.10.-2.10.4.

Outros métodos de clivar anticorpos, tais como a separação decadeias pesadas para formar fragmentos de cadeia leve-pesada monovalentes,outra clivagem de fragmentos ou outras técnicas enzimáticas, químicas ougenéticas também podem ser usadas, desde que os fragmentos se liguem aoantígeno que é reconhecido pelo anticorpo intacto.

Por exemplo, fragmentos Fv compreendem uma associação decadeias Vh e VL. Esta associação pode ser não covalente, como descrito porInbar et al., Proc. Nat'l Acad. Sei. USA 69: 2659 (1972). Alternativamente, ascadeias variáveis podem ser ligadas por uma ligação de dissulfetointermolecular ou reticuladas por produtos químicos tais como glutaraldeído(ver, por exemplo, Sandhu, Crit. Rev. Biotech. 12: 437 (1992)).

Os fragmentos Fv podem compreender cadeias Vh e Vl quesão conectadas por um peptídeo ligador. Estas proteínas de ligação deantígeno de cadeia única (scFv) são preparadas pela construção de um geneestrutural que compreende as seqüências de DNA que codificam os domíniosVh e Vl que são conectadas por um oligonucleotídeo. O gene estrutural éinserido em um vetor de expressão que é subseqüentemente introduzido emuma célula hospedeira, tal como E. coli. As células hospedeirasrecombinantes sintetizam uma única cadeia de polipeptídeo com um peptídeoligador ligando em ponte os dois domínios V. Os métodos para produzirscFvs são descritos, por exemplo, por Whitlow et al., Methods: A Companionto Methods in Enzymology 2: 97 (1991) (também ver, Bird et al., Science242: 423 (1988), Ladner et al., Patente U.S. N2 4.946.778, Pack et al.,Bio/Technology 11: 1271 (1993) e Sandhu, supra).Como uma ilustração, um scFV pode ser obtido pela exposiçãode linfócitos ao polipeptídeo ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA in vitro eselecionando bibliotecas que demonstram anticorpo em vetores fago ousimilares (por exemplo, através do uso de proteína ou peptídeo de ILA-17RCou ILA-17RC/ILA-17RA imobilizados ou rotulados). Os genes que codificampolipeptídeos tendo domínios de ligação de polipeptídeo de ILA-17RC ouILA-17RC/ILA-17RA potenciais podem ser obtidos triando-se bibliotecas depeptídeo aleatórias demonstradas no fago (demonstração de fago) ou embactérias, tais como E. coli. As seqüências de nucleotídeo que codificam ospolipeptídeos podem ser obtidas em um número de modos, tais como atravésda mutagênese aleatória e síntese de polinucleotídeo aleatória. Estasbibliotecas de demonstração de peptídeo aleatória podem ser usadas para triarquanto a peptídeos que interagem com um alvo conhecido que pode ser umaproteína ou polipeptídeo, tal como um ligando ou receptor, umamacromolécula biológica ou sintética ou substâncias orgânicas ouinorgânicas. As técnicas para criar e triar tais bibliotecas de demonstração depeptídeo aleatórias são conhecidas no ramo (Ladner et al., Patente U.S. N-5.223.409, Ladner et al., Patente U.S. N2 4.946.778, Ladner et al., PatenteU.S. N- 5.403.484, Ladner et al., Patente U.S. Ne 5.571.698 e Kay et al.,Phage Display of Peptides and Proteins (Academic Press, Inc. 1996)) ebibliotecas de demonstração de peptídeo aleatória e kits para triar taisbibliotecas são comercialmente disponíveis, por exemplo da ClontechLaboratories, Inc. (Paio Alto, CA), Invitrogen Inc. (San Diego, CA), NewEngland Biolabs, Inc. (Beverly, MA) e Pharmacia LKB Biotechnology Inc.(Piscataway, NJ). As bibliotecas de demonstração de peptídeo aleatóriaspodem ser tríadas usando as seqüências ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RAaqui divulgadas para identificar proteínas que se ligam a ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA.

Uma outra forma de um fragmento de anticorpo é um peptídeoque codifica uma região determinadora de complementaridade única (CDR).Os peptídeos CDR ("unidades de reconhecimento múltiplo") podem serobtidos pela construção de genes que codificam a CDR de um anticorpo deinteresse. Tais genes são preparados, por exemplo, pelo uso da reação dacadeia da polimerase para sintetizar a região variável de RNA de células queproduzem anticorpo (ver, por exemplo, Larrick et al., Methods: A Companionto Methods in Enzymology 2: 106 (1991), Courtenay-Luck, "GeneticManipulation of Monoclonal Antibodies," em Monoclonal Antibodies:Production, Engineering and Clinicai Application, Ritter et al. (eds.), página166 (Cambridge University Press 1995) e Ward et al., "Genetic Manipulationand Expression of Antibodies," em Monoclonal Antibodies: Principies andApplications, Birch et al., (eds.), página 137 (Wiley-Liss, Inc. 1995)).

Alternativamente, um anticorpo anti-LLA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA pode ser derivado de um anticorpo monoclonal"humanizado". Os anticorpos monoclonais humanizados são produzidos pelatransferência de regiões determinadoras de complementaridade decamundongo das cadeias variáveis pesadas e leve da imunoglobulina decamundongo em um domínio variável humano. Os resíduos típicos deanticorpos humanos são depois substituídos nas regiões de matriz dascontrapartes de murino. O uso de componentes de anticorpo derivados deanticorpos monoclonais humanizados remove problemas potenciaisassociados com a imunogenicidade de regiões constantes de murino. Astécnicas gerais para a clonagem de domínios variáveis de imunoglobulina demurino são descritas, por exemplo, por Orlandi et al., Proc. Nat'l Acad. Sei.USA 86: 3833 (1989). Técnicas para produzir anticorpos monoclonaishumanizados são descritas, por exemplo, por Jones et al., Nature 321: 522(1986), Carter et al., Proc. Nat'l Acad. Sei. USA 89: 4285 (1992), Sandhu,Crit. Rev. Biotech. 12: 437 (1992), Singer et al., J. Immun. 150: 2844 (1993),Sudhir (ed.), Antibody Engineering Protocols (Humana Press, Inc. 1995),Kelley, "Engineering Terapeutic Antibodies," em Protein Engineering:Principies and Practice, Cleland et al. (eds.), páginas 399-434 (John Wiley &Sons, Inc. 1996) e por Queen et al., Patente U.S. Na 5.693.762 (1997).

Além disso, anticorpos anti-ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA ou fragmentos de anticorpo da presente invenção podem serPEGuilados usando métodos na técnica e aqui descritos.

Anticorpos anti-idiotípicos policlonais podem ser preparadospela imunização de animais com anticorpos anti-ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA ou fragmentos de anticorpo, usando técnicas padrão. Ver,por exemplo, Green et al., "Production of Policlonal Antisera," em MethodsIn Molecular Biology: Immunochemical Protocols, Manson (ed.), páginas 1-12 (Humana Press 1992). Também, ver Coligan nas páginas 2.4.1-2.4.7.

Alternativamente, anticorpos anti-idiotípicos monoclonais podem serpreparados usando anticorpos anti-ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA oufragmentos de anticorpo como imunógenos com as técnicas, descritas acima.

Como uma outra alternativa, anticorpos anti-idiotípicos humanizados ouanticorpos anti-idiotípicos de primata sub-humano podem ser preparadosusando as técnicas descritas acima. Os métodos para produzir anticorpos anti-idiotípicos são descritos, por exemplo, por Irie, Patente U.S. N- 5.208.146,Greene, et al, Patente U.S. N° 5.637.677 e Varthakavi e Minocha, J. Gen.Virol. 77: 1875 (1996).

Um anticorpo anti-ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA podeser conjugado com um rótulo detectável para formar um imunoconjugadoanti-ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA. Os rótulos detectáveis adequadosincluem, por exemplo, um radioisótopo, um rótulo fluorescente, um rótuloquimioluminescente, um rótulo de enzima, um rótulo bioluminescente ououro coloidal. Os métodos de fabricar e detectar tais imunoconjugadosdetectavelmente rotulados são bem conhecidos por aqueles de habilidadecomum na técnica e são descritos em mais detalhes abaixo.O rótulo detectável pode ser um radioisótopo que é detectadopela autorradiografia. Os isótopos que são particularmente úteis para opropósito da presente invenção são 3H, 125I, 1311,35S e 14C.

Os imunoconjugados anti-ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA também podem ser rotulados com um composto fluorescente. Apresença de um anticorpo fluorescentemente rotulado é determinada pelaexposição dos imunoconjugados à luz do comprimento de onda apropriado edetectando a fluorescência resultante. Os compostos de rotulação fluorescenteincluem isotiocianato de fluoresceína, rodamina, ficoeriterina, ficocianina,aloficocianina, o-ftaldeído e fluorescamina.

Alternativamente, os imunoconjugados anti-ILA-17RC ouILA-17RC/ILA-17RA podem ser detectavelmente rotulados pela ligação deum componente de anticorpo a um composto quimioluminescente. A presençados imunoconjugados rotulados com quimioluminescente é determinadadetectando-se a presença de luminescência que surge durante o curso de umareação química. Os exemplos de compostos de rotulaçãoquimioluminescentes incluem luminol, isoluminol, um éster de acridínioaromático, um imidazol, um sal de acridínio e um éster de oxalato.

Similarmente, um composto bioluminescente pode ser usadopara rotular imunoconjugados anti-ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA dapresente invenção. A bioluminescência é um tipo de quimioluminescênciaencontrada em sistemas biológicos em que uma proteína catalítica aumenta aeficiência da reação quimioluminescente. A presença de uma proteínabioluminescente é determinada detectando-se a presença de luminescência.Os compostos bioluminescentes que são úteis para a rotulação incluemluciferina, luciferase e aequorina.

Alternativamente, os imunoconjugados anti-ILA-17RC ouILA-17RC/ILA-17RA podem ser detectavelmente rotulados pela ligação deum componente de anticorpo anti-ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA a umaenzima. Quando os conjugados anti-ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA-enzima são incubados na presença do substrato apropriado, a porção deenzima reage com o substrato para produzir uma porção química que pode serdetectada, por exemplo, pelos meios espectrofotométricos, fluorimétricos ouvisual. Os exemplos de enzimas que podem ser usados para rotulardetectavelmente imunoconjugados poliespecíficos incluem β-galactosidase,glicose oxidase, peroxidase e fosfatase alcalina.

Aqueles de habilidade na técnica saberão de outros rótulosadequados que podem ser utilizados de acordo com a presente invenção. Aligação de porções marcadoras para os anticorpos anti-ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA podem ser realizados usando técnicas padrão conhecidas natécnica. A metodologia típica a este respeito é descrita por Kennedy et al.,Clin. Chim. Acta 70: 1 (1976), Schurs et al., Clin. Chim. Acta 81: 1 (1977),Shih et al., Int'l J. Câncer 46: 1101 (1990), Stein et al., Câncer Res. 50: 1330(1990) e Coligan, supra.

Além disso, a conveniência e versatilidade de detecçãoimunoquímica pode ser realçada pelo uso de anticorpos anti-ILA-17RC ouILA-17RC/ILA-17RA que foram conjugadas com avidina, estreptavidina ebiotina (ver, por exemplo, Wilchek et al. (eds.), "Avidin-Biotin Technology,"Methods In Enzymology, Vol. 184 (Academic Press 1990) e Bayer et al.,"Immunochemical Applications of Avidin-Biotin Technology," em MethodsIn Molecular Biology, Vol. 10, Manson (ed.), páginas 149-162 (The HumanaPress, Inc. 1992).

Os métodos para realizar imunoensaios são bem estabelecidos.Ver, por exemplo, Cook e Self, "Monoclonal Antibodies in DiagnosticImmunoassays," em Monoclonal Antibodies: Production, Engineering andClinicai Application, Ritter e Ladyman (eds.), páginas 180-208, (CambridgeUniversity Press, 1995), Perry, "The Role of Monoclonal Antibodies in theAdvancement of Immunoassay Technology," em Monoclonal Antibodies:Principies and Applications, Birch e Lennox (eds.), páginas 107-120 (Wiley-Liss, Inc. 1995) e Diamandis, Immunoassay (Academic Press, Inc. 1996).

A presente invenção também considera kits para realizar umensaio de diagnóstico imunológico para a expressão de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA. Tais kits compreendem pelo menos um recipiente quecompreende um anticorpo ou fragmento anticorpo anti-ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA. Um kit também pode compreender um segundo recipienteque compreende um ou mais reagentes capazes de indicar a presença deanticorpo ou fragmentos de anticorpo ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA.Os exemplos de tais reagentes indicadores incluem rótulos detectáveis taiscomo um rótulo radioativo, um rótulo fluorescente, um rótuloquimioluminescente, um rótulo de enzima, um rótulo bioluminescente, ourocoloidal e outros. Um kit também pode compreender um meio para transmitirao usuário que os anticorpos ou fragmentos de anticorpo ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA são usados para detectar a proteína de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA. Por exemplo, instruções escritas podem declarar que oanticorpo ou fragmento de anticorpo incluído pode ser usado para detectarILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA. O material escrito pode ser aplicadodiretamente a um recipiente ou o material escrito pode ser fornecido na formade um inserto de embalagem.

Usos Terapêuticos dos Polipeptídeos ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA daInvenção

As seqüências de aminoácido tendo atividade de ILA-17RC ouILA-17RC/ILA-17RA solúvel podem ser usadas para modular o sistemaimune pelos ligandos de ligação ILA-17A e ILA-17F (isoladamente ou junto)e assim, impedindo a ligação destes ligandos com receptor de ILA-17RC e/ouILA-17RA endógeno. Tais antagonistas, tais como ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA solúveis, também podem ser usados para modular o sistemaimune pela inibição da ligação de ILA-17A e/ou ILA-17F com o receptorILA-17RC e/ou ILA-17RA endógeno. Conseqüentemente, a presenteinvenção inclui o uso de proteínas, polipeptídeos e peptídeos tendo atividadede ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA (tais como polipeptídeos de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA solúveis, fragmentos de polipeptídeo de ILA-17RC ou ILA-17RA, análogos de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA eproteínas de fusão de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA) a um paciente quecareça de uma quantidade adequada deste polipeptídeo ou que produza umexcesso de ILA-17A e/ou ILA-17F. Os polipeptídeos da presente invenção(por exemplo, ILA-17RC e/ou ILA-17RC/ILA-17RA solúveis) tambémpodem ser usados para tratar um paciente que produza um excesso de ILA-17A, ILA-17F, ILA-17RA ou ILA-17RC. Os pacientes adequados incluemmamíferos, tais como seres humanos. Por exemplo, tais polipeptídeo solúveissão úteis na ligação, bloqueio, inibição, redução, antagonização ouneutralização ILA-17A e ILA-17F (isoladamente ou junto), no tratamento deinflamação e doenças inflamatórias tais como psoríase, artrite psoriática,artrite reumatóide, endotoxemia, IBD, IBS, colite, asma, rejeição a enxerto,doença renal imuno mediadas, doenças hepatobiliares, esclerose múltipla,aterosclerose, promoção do crescimento de tumor ou doença de juntadegenerativa e outras condições inflamatórias aqui divulgadas.

Dentro das formas de realização preferidas, o receptor solúvelcompreende ILA-17RC (SEQ ID NO: 3) e é um monômero, homodímero,heterodímero ou multímero que se liga a, bloqueia, inibe, reduz, antagonizaou neutraliza ILA-17F e ILA-17A (individualmente ou junto) in vivo. Osanticorpos e polipeptídeos de ligação para tal monômero, homodímero,heterodímero ou multímeros de ILA-17RC também servem comoantagonistas da atividade de ILA-17RC e como antagonistas de ILA-17A EILA-17F (isoladamente ou junto), como aqui descrito.

Dentro de outras formas de realização preferidas, o receptorsolúvel compreende porções tanto de ILA-17RC quanto de ILA-17RA. Umatal forma de realização preferida é a variante 1454 (SEQ ID NOs: 157 e 158)que inclui os exons de 1 a 6 de ILA-17RA humano e de 8 a 16 da ILA-17RCxl humana, fundidos a Fc5 (SEQ ID NOs: 179 e 180). A variante 1454também tem o peptídeo de sinal nativo da ILA-17RA humana. FclO ouqualquer equivalente conhecido na técnica, também pode ser usado no lugarde Fc5.

Além disso, nós descrevemos aqui que os anticorpos anti-ILA-17F neutralizantes tanto policlonais e monoclonais se ligam a, bloqueiam,inibem, reduzem, antagonizam ou neutralizam a atividade de ILA-17F e ILA-17A em ensaios de neutralização com base em célula. A análise dadistribuição de tecido do mRNA que corresponde ao cDNA de ILA-17RCmostrou que o mRNA do gene ILA-17RC é fortemente expressado em tecidosda tireóide, glândula adrenal, próstata e fígado e expressado a um grau menornos tecidos do coração, intestino delgado, estômago e traquéia. Em particular,ILA-17RC é compativelmente expressada em linhagens de célula de sangueperiférico que não de célula T, incluindo monócitos, células B e células dalinhagem mielóide. Também, o mRNA de ILA-17RC é confiavelmenteexpressado em linhagens de célula derivadas da pele. Outras linhagens decélula que expressam ILA-17RC são todas 5 das linhagens de célula dointestino grosso que estavam presentes na série. Ao contrário, existe pouca ounenhuma expressão no cérebro, placenta, pulmão, músculo esqueletal, rim,pâncreas, baço, timo, testículo, ovário, cólon, leucócitos de sangue periférico,medula espinhal, linfônodo e medula óssea. O ligando ao qual ILA-17RC liga(ILA-17F e/ou ILA-17A) está implicado na indução da resposta inflamatória econtribuindo para doenças inflamatórias, primariamente por intermédio da suacapacidade para realçar a produção de mediadores inflamatórios, incluindoILA-lb, ILA-6 e TNF-α, assim como aqueles mediadores que estãoenvolvidos na proliferação, maturação e quimiotaxia de neutrófilos (revisadoem Witowski et ai Cell. Mol. Life Sei. 61: 567-579 [2004]).Assim, as formas de realização particulares da presenteinvenção são direcionadas para o uso de polipeptídeos de ILA-17RC solúvel eILA-17RC/ELA-17RA solúvel como antagonistas em doenças inflamatórias eimunes ou condições tais como psoríase, artrite psoriática, dermatite atópica,condições de pele inflamatórias, artrite reumatóide, IBD, IBS, Doença deCrohn, diverticulose, asma, pancreatite, diabete tipo I (IDDM), câncerpancreático, pancreatite, Doença de Graves, câncer colônico e intestinal,doença autoimune, septicemia, transplante de órgão ou medula óssea;inflamação devido à endotoxemia, trauma, cirurgia ou infecção; amiloidose;esplenomegalia; doença do enxerto versus hospedeiro; e onde a inibição deinflamação, supressão imune, redução da proliferação de célulashematopoiéticas, imunes, inflamatórias ou linfóides, macrófagos, células T(incluindo células Thl e Th2), supressão de resposta imune a um patógeno ouantígeno ou outros casos onde a inibição de ILA-17F e/ou ILA-17A édesejada.

Além disso, os polipeptídeos de ILA-17RC solúvel e ILA-17RC/ILA-17RA solúvel são úteis para:

(1) Bloquear, inibir, reduzir, antagonizar ou neutralizar asinalização por intermédio de ILA-17RA ou ILA-17RC no tratamento deinflamação aguda, inflamação como um resultado de trauma, dano tecidual,cirurgia, septicemia ou infecção e doenças inflamatórias crônicas tais comoasma, doença do intestino inflamatório (IBD), IBS, colite crônica,esplenomegalia, artrite reumatóide, episódios inflamatórios agudosrecorrentes (por exemplo, tuberculose) e tratamento de amiloidose eaterosclerose, Doença de Castleman, asma e outras doenças associadas com aindução de resposta de fase aguda.

(2) Bloquear, inibir, reduzir, antagonizar ou neutralizar asinalização de ILA-17RA ou ILA-17RC no tratamento de doençasautoimunes tais como IDDM, esclerose múltipla (MS), Lupo eritematososistêmico (SLE), miastenia grave, artrite reumatóide, IBS e IBD para impedirou inibir a sinalização em células imunes (por exemplo, linfócitos, monócitos,leucócitos). Bloquear, inibir, reduzir ou antagonizar a sinalização porintermédio de ILA-17RC e/ou ILA-17RA, usando os polipeptídeos dapresente invenção, também pode beneficiar doenças do pâncreas, rim,pituitária e células neuronais. IDDM, NIDDM, pancreatite e carcinomapancreático podem beneficiar-se. ILA-17RC e/ou ILA-17RA podem servircomo um alvo para o tratamento de câncer onde um antagonista da presenteinvenção inibe o crescimento do câncer e alveja a morte imuno-mediada.(Holliger P e Hoogenboom, H: Nature Biotech. 16: 1015-1016, 1998). Ospolipeptídeos solúveis da presente invenção também podem ser úteis paratratar nefropatias tais como glomerulosclerose, neuropatia membranosa,amiloidose (que também afeta os rins entre outros tecidos), arterioscleroserenal, glomerulonefrite de várias origens, doenças fibroproliferativas dos rins,assim como disfunção renal associadas com SLE, IDDM, diabete tipo II(NIDDM), tumores renais e outras doenças.

(3) Agonizar, realçar, aumentar ou iniciar a sinalização porintermédio de ILA-17RA ou ILA-17RC no tratamento de doenças autoimunestais como IDDM, MS, SLE, miastenia grave, artrite reumatóide, IBS e IBD.Os polipeptídeos solúveis da presente invenção podem sinalizar linfócitos ououtras células imunes para diferenciar, alterar proliferação ou mudar aprodução de citocinas ou proteínas de superfície celular que melhorem aautoimunidade. Especificamente, a modulação de uma resposta de célula T-auxiliar a um padrão alternado de secreção de citocina pode desviar umaresposta autoimune para melhorar doença (Smith JA et ai., J. Immunol. 160:4841 a 4849, 1998). Similarmente, polipeptídeos solúveis agonísticos podemser usados para sinalizar, esgotar e desviar células imunes envolvidas naasma, alergia e doença atopoic. A sinalização por intermédio de ILA-17RCe/ou ILA-17RA também pode beneficiar doenças do pâncreas, rim, pituitáriae células neuronais. IDDM, NIDDM, pancreatite e carcinoma pancreáticopodem se beneficiar.

Os polipeptídeos de ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RAsolúveis aqui descritos podem ser usados para ligar, bloquear, inibir, reduzir,antagonizar ou neutralizar a atividade de ILA-17F ou ILA-17A, isoladamenteou junto, no tratamento de doença autoimune, doença atópica, NIDDM,pancreatite e disfunção renal como descrito acima. Uma forma solúvel deILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA podem ser usados para promover umaresposta de anticorpo mediada pelas células Th e/ou para promover aprodução de ILA-4 ou outras citocinas pelos linfócitos ou outras célulasimunes.

Os polipeptídeos solúveis da presente invenção são úteis comoantagonistas de ILA-17A e/ou ILA-17F. Tais efeitos antagonísticos podem serobtidos pela neutralização direta ou ligação de ILA-17A ou ILA-17F. Alémdos usos antagonísticos, os receptores solúveis da presente invenção podemligar ILA-17F ou ILA-17A e atuar como proteínas carreadoras para o ligando,de modo a transportá-lo aos tecidos, órgãos e células diferentes dentro docorpo. Como tais, os receptores solúveis da presente invenção podem serfundidos ou ligados às moléculas, polipeptídeos ou porções químicas quedirecionam o complexo de receptor solúvel-Ligando a um sítio específico, talcomo um tecido, célula imune ou tumor específicos. Por exemplo, na infecçãoaguda ou alguns cânceres, benefício pode resultar da indução de inflamação eproteínas de resposta de fase aguda local pela ação de ILA-17F. Assim, osreceptores solúveis da presente invenção podem ser usados para direcionarespecificamente a ação de ILA-17A ou ILA-17F. Ver, Cosman, D. Cytokine5: 95-106, 1993; e Fernandez-Botran, R. Exp. Opin. Invest. Drugs 9: 497-513, 2000.

A inflamação é uma resposta protetora por um organismo parase defender de um agente invasor. A inflamação é um evento em cascata queenvolve muitos mediadores celulares e humorais. Por um lado, a supressão derespostas inflamatórias pode deixar um hospedeiro imunocomprometido;entretanto, se deixada incontrolada, a inflamação pode levar a complicaçõessérias incluindo doenças inflamatórias crônicas (por exemplo, psoríase,artrite, artrite reumatóide, esclerose múltipla, doença do intestino inflamatórioe outras), choque séptico e insuficiência de órgão múltiplo. Importantemente,estes diversos estados de doença compartilham mediadores inflamatórioscomuns. As doenças coletivas que são caracterizadas pela inflamação têm umimpacto grande sobre a morbidez e mortalidade humanas. Portanto está claroque proteínas anti-inflamatórias, tais como os polipeptídeos solúveis dapresente invenção podem ter potencial terapêutico crucial para um vastonúmero de doenças humanas e de animal, da asma e alergia atéautoimunidade e choque séptico.

1. Artrite

A artrite, incluindo a osteoartrite, artrite reumatóide, juntasartríticas como um resultado de dano e outros, são condições inflamatóriascomuns que poderiam se beneficiar do uso terapêutico de proteínas anti-inflamatórias, tais como os polipeptídeos solúveis da presente invenção. Porexemplo, a artrite reumatóide (RA) é uma doença sistêmica que afeta o corpointeiro e é uma das formas mais comuns de artrite. A mesma é caracterizadapela inflamação da membrana que reveste a junta, que causa dor,inflexibilidade, quentura, vermelhidão e inchaço. As Células inflamatóriasliberam enzimas que podem digerir o osso e a cartilagem. Como um resultadoda artrite reumatóide, o revestimento da junta inflamado, o sinóvio, podeinvadir e danificar o osso e a cartilagem levando à deterioração da junta e dorgrave entre outros efeitos fisiológicos. A junta envolvida pode perder a suaforma e alinhamento, resultando em dor e perda de movimento.

A artrite reumatóide (RA) é uma doença imuno-mediadaparticularmente caracterizada por inflamação e dano tecidual subseqüentelevando à incapacidade grave e mortalidade aumentada. Uma variedade decitocinas são produzidas localmente nas juntas reumatóides. Numerososestudos têm demonstrados que ILA-I e TNF-alfa, duas citocinas pró-inflamatórias prototípicas, desempenham um papel importante nosmecanismos envolvidos na inflamação sinovial e na destruição de juntaprogressiva. De fato, a administração de TNF-alfa e inibidores de ILA-I empacientes com RA tem levado a uma melhora dramática de sinais clínicos ebiológicos de inflamação e uma redução de sinais radiológicos de erosãoóssea e destruição de cartilagem. Entretanto, a despeito destes resultadosencorajadores, uma porcentagem significante de pacientes não respondem aestes agentes, sugerindo que outros mediadores também estão envolvidos nafisiopatologia da artrite (Gabay, Expert. Opin. Biol. Ther. 2(2): 135-149,2002). Um destes mediadores poderia ser ILA-17A ou ILA-17F e como taisuma molécula que se liga ou inibe A atividade de ILA-17F ou ILA-17A, talcomo ILA-17RC ou ILA-17RC/ILA-17RA solúveis, poderiam servir comoum produto terapêutico valioso para reduzir a inflamação na artritereumatóide e outras doenças artríticas.

Existem diversos modelos de animal para a artrite reumatóideconhecidos na técnica. Por exemplo, no modelo de artrite induzido porcolágeno (CLA), camundongos desenvolvem a artrite inflamatória crônica queintimamente se parece com a artrite reumatóide humana. Visto que a CIAcompartilha características imunológicas e patológicas similares com a RA,isto a torna um modelo ideal para triar compostos anti-inflamatórios humanospotenciais. O modelo de CIA é um modelo bem conhecido em camundongosque depende tanto de uma resposta imune quanto de uma respostainflamatória, de modo a ocorrer. A resposta imune compreende a interação decélulas B e células T CD4+ em resposta ao colágeno, que é dado comoantígeno e leva à produção de anticorpos anti-colágeno. A fase inflamatória éo resultado de respostas de tecido de mediadores de inflamação, como umaconseqüência de alguns destes anticorpos que reagem cruzado com ocolágeno nativo do camundongo e que ativa a cascata de complemento. Umavantagem em usar o modelo CIA é que os mecanismos básicos de patogênesesão conhecidos. Os epítopos de célula T e célula B relevantes no colágenotipo II foram identificados e vários parâmetros imunológicos (por exemplo,hipersensibilidade tipo retardado e anticorpo anti-colágeno) e inflamatórios(por exemplo, citocinas, quimiocinas e enzimas que degradam matriz) quedizem respeito à artrite imuno-mediada foram determinadas e podem assimser usadas para avaliar a eficácia do composto de teste no modelo de CIA(Wooley, Curr. Opin. Rheum. 3: 407-20, 1999; Williams et al., Immunol. 89:9784-788, 1992; Myers et al., Life Sei. 61: 1861 a 78, 1997; e Wang et al.,Immunol. 92: 8955-959, 1995).

Um grupo tem mostrado que um anticorpo ILA-17 anti-camundongo reduz os sintomas em um modelo de CIA de camundongo emrelação aos camundongos de controle, mostrando assim de forma conceituaique os polipeptídeos solúveis da presente invenção seriam benéficos notratamento de doença humana. A administração de um único anti-soro de ratoespecífico de ILA-17 de camundongo reduziu os sintomas de artrite nosanimais quando introduzido profilaticamente ou depois que os sintomas deartrite já estavam presentes no modelo (Lubberts et al, Artrite Rheum. 50:650-9, 2004). Portanto, a ILA-17RC-Fc ou ILA-17RC/ILA-17RA-Fc podemser usadas para neutralizar ILA-17A e/ou ILA-17F no tratamento de doençashumanas específicas tais como artrite, psoríase, artrite psoriática,endotoxemia, doença do intestino inflamatório (IBD), IBS, colite e outrascondições inflamatórias aqui divulgadas.

A administração dos polipeptídeos solúveis da presenteinvenção, tais como ILA-17RC-Fc ou outro ILA-17RC/ILA-17RA solúvel eproteínas de fusão para estes camundongos de modelo CIA é usada paraavaliar seu uso como um antagonista para ILA-17F e ILA-17A para melhorarsintomas e alterar o curso da doença. Além disso, resultados que mostram ainibição ou neutralização de ILA-17F e/ou ILA-17A pelos polipeptídeossolúveis da presente invenção poderiam fornecer prova de conceito que outrosantagonistas de ILA-17A ou ILA-17F também podem ser usados paramelhorar sintomas e alterar o curso de doença. Além disso, visto que ILA-17A e/ou ILA-17F induz a produção de ILA-Ib e TNF-α, ambos dos quaissão implicados na patogênese e progressão da artrite reumatóide, aadministração sistêmica ou local destes polipeptídeos solúveis podempotencialmente suprimir a resposta inflamatória em RA. Por via de exemplo esem limitação, a injeção de 10 a 200 μg de ILA-17RC-Fc por camundongo(uma a sete vezes por semana por até mas não limitadas a 4 semanas porintermédio das vias s.c., i.p. ou i.m de administração) pode significantementereduzir a contagem da doença (contagem da pata, incidente de inflamação oudoença). Dependendo do início da administração de ILA-17RC-Fc (porexemplo, antes ou no tempo de imunização de colágeno ou em qualquer pontode tempo a seguir da segunda imunização com colágeno, incluindo aquelespontos de tempo no qual a doença já progrediu), ILA-17RC pode ser eficaz naprevenção da artrite reumatóide, assim como prevenindo a sua progressão.Outros produtos terapêuticos potenciais incluem polipeptídeos de ILA-17RC/ILA-17RA e outros.

2. Endotoxemia

Endotoxemia é uma condição severa que habitualmente resultade agentes infecciosos tais como bactérias e outros agentes de doençainfecciosa, septicemia, síndrome de choque tóxico ou em pacientesimunocomprometidos submetidos às infecções oportunísticas e outros.Terapeuticamente úteis de proteínas anti-inflamatórias, tais como ospolipeptídeos solúveis da presente invenção poderiam ajudar na prevenção etratamento da endotoxemia em seres humanos e animais. Estes polipeptídeossolúveis podem servir como um produto terapêutico valioso para reduzir ainflamação e os efeitos patológicos na endotoxemia.

A endotoxemia induzida por lipopolissacarídeo (LPS) atraimuitos dos mediadores pró inflamatórios que produzem efeitos patológicosnas doenças infecciosas e a endotoxemia induzida por LPS em roedores é ummodelo amplamente usado e aceitável para estudar os efeitos farmacológicosde agentes pró-inflamatórios ou imunomoduladores potenciais. LPS,produzido em bactérias gram negativas, é um agente causativo principal napatogênese de choque séptico (Glausner et al., Lancet 338: 732, 1991). Umestado equivalente a choque pode de fato ser induzido experimentalmente poruma única injeção de LPS nos animais. As moléculas produzidas pelas célulasque respondem ao LPS podem alvejar patógenos diretamente ouindiretamente. Embora estas respostas biológicas protejam o hospedeirocontra patógenos invasores, eles também podem causar danos. Assim, aestimulação maciça de imunidade inata, que ocorre como um resultado deinfecção bacteriana Gram-negativa grave, leva à produção em excesso decitocinas e outras moléculas e ao desenvolvimento de uma síndrome fatal, asíndrome do choque séptico, que é caracterizada por febre, hipotensão,coagulação intravascular disseminada e falência de órgão múltiplo (Dumitruet al. Cell 103: 1071-1083, 2000).

Estes efeitos tóxicos de LPS são principalmente relacionadoscom a ativação de macrófago que leva à liberação de mediadoresinflamatórios múltiplos. Entre estes mediadores, TNF parece desempenhar umpapel crucial, como indicado pela prevenção da toxicidade de LPS pelaadministração de anticorpos anti-TNF neutralizantes (Beutler et al., Science229: 869, 1985). Está bem estabelecido que 1 μg de injeção de LPS de E. coliem um camundongo C57B1/6 resultará em aumentos significantes na ILA-6,TNF-alfa, ILA-I circulantes e proteínas de fase aguda (por exemplo, SAA)aproximadamente 2 horas após a injeção. A toxicidade de LPS parece sermediada por estas citocinas visto que a imunização passiva contra estesmediadores pode resultar em mortalidade diminuída (Beutler et ai., Science229: 869, 1985). As estratégias de imunointervenção potenciais para aprevenção e/ou tratamento de choque séptico incluem mAb anti-TNF,antagonista do receptor de ILA-1, LIF, ILA-IO e G-CSF.

A administração dos polipeptídeos solúveis da presenteinvenção a estes modelos induzidos por LPS pode ser usada para avaliar o usode ILA-17RC ou IL= 17RC/ILA-17RA para melhorar sintomas e alterar ocurso de doença induzida por LPS. Além disso, resultados que mostram ainibição de ILA-17F ou ILA-17A por estes polipeptídeos solúveisforneceriam prova de conceito de que outros tais antagonistas também podemser usados para melhorar sintomas no modelo induzido por LPS e alterar ocurso da doença. O modelo mostrará indução de ILA-17F pela injeção de LPSe o tratamento potencial da doença pelos polipeptídeos solúveis. Visto que aLPS induz a produção de fatores pró-inflamatórios possivelmentecontribuindo para a patologia da endotoxemia, a neutralização da atividade deILA-17F ou outros fatores pró-inflamatórios por um polipeptídeo solúvelantagonista pode ser usada para reduzir os sintomas da endotoxemia, tal comoobservado no choque endotóxico.

3. Doença do Intestino Inflamatório IBD

Nos Estados Unidos aproximadamente 500.000 pessoassofrem da doença do intestino inflamatório (IBD) que pode afetar o cólon e oreto (Colite Ulcerativa) ou tanto o intestino delgado quanto o grosso (Doençade Crohn). A patogênese destas doenças é incerta, mas elas envolvem ainflamação crônica dos tecidos afetados. Os polipeptídeos solúveis dapresente invenção podem servir como um produto terapêutico valioso parareduzir a inflamação e os efeitos patológicos na IBD, UC e doençasrelacionadas.

A colite ulcerativa (UC) é uma doença inflamatória dointestino grosso, habitualmente chamado de cólon, caracterizada pelainflamação e ulceração da mucosa ou revestimento interno do cólon. Estainflamação faz com que o cólon se esvazie freqüentemente, resultando emdiarréia. Os sintomas incluem a soltura das fezes e espasmodicidadeabdominal, febre e perda de peso associadas. Embora a causa exata da UCseja desconhecida, pesquisa recente sugere que as defesas naturais do corpoestão operando contra as proteínas no corpo que o corpo pensa seremestranhas (uma "reação autoimune"). Talvez porque elas se parecem comproteínas bacterianas no intestino, estas proteínas podem instigar ou estimularo processo inflamatório que começa a destruir o revestimento do cólon.Conforme o revestimento do cólon é destruído, úlceras se formam liberandomuco, pus e sangue. A doença usualmente começa na área retal e podemeventualmente se estender através de todo o intestino grosso. Episódiosrepetidos de inflamação levam ao espessamento da parede do intestino e retocom tecido cicatricial. A morte do tecido do cólon ou septicemia pode ocorrercom doença grave. Os sintomas de colite ulcerativa variam em gravidade eseu início pode ser gradual ou repentino. Ataques podem ser provocados pormuitos fatores, incluindo infecções respiratórias ou estresse.

Embora não exista correntemente nenhuma cura para UCdisponível, os tratamentos são focalizados na supressão do processoinflamatório anormal no revestimento do cólon. Os tratamentos incluindocorticoesteróides imunosupressivos (por exemplo, azatioprina,mercaptopurina e metotrexato) e aminossalicilatos estão disponíveis paratratar a doença. Entretanto, o uso de longa duração de imunossupressivos taiscomo corticoesteróides e azatioprina pode resultar em sérios efeitos colateraisincluindo o revestimento dos ossos, catarata, infecção e efeitos hepáticos e damedula óssea. Nos pacientes em quem as terapias correntes não são bemsucedidas, a cirurgia é uma opção. A cirurgia envolve a remoção do cóloninteiro e do reto.

Existem diversos modelos de animal que podem imitarparcialmente a colite ulcerativa crônica. 0 modelo mais amplamente usado éo modelo de colite induzido pelo ácido 2,4,6-trinitrobenessulfônico/etanol(TNBS), que induz a inflamação crônica e ulceração no cólon. Quando TNBSé introduzido no cólon de camundongos suscetíveis por intermédio dainstilação intra-retal, o mesmo induz resposta imune mediada pela célula T namucosa colônica, neste caso levando a uma inflamação mucósica maciçacaracterizada pela infiltração densa de células T e macrófagos por todas aparede inteira do intestino grosso. Além disso, este quadro histopatológico éacompanhado pelo quadro clínico de perda de peso progressiva (debilitante),diarréia sanguinolenta, prolapso retal e espessamento da parede do intestinogrosso (Neurath et al. Intern. Rev. Immunol. 19: 5de 1 a 62, 2000).

Um outro modelo de colite usa o sulfato de dextrano sódico(DSS), que induz uma colite aguda manifestada pela diarréia sanguinolenta,perda de peso, encurtamento do cólon e ulceração mucósica com infiltraçãode neutrófilo. A colite induzida por DSS é caracterizada histologicamentepela infiltração de células inflamatórias na lâmina própria, com hiperplasiados nódulos linfóticos, dano ao folículo focai e ulceração epitelial. Estasmudanças são consideradas desenvolver devido a um efeito tóxico de DSSsobre o epitélio e pela fagocitose de células da lâmina própria e produção deTNF-alfa e IFN-gama. A despeito do seu uso comum, diversos problemascom respeito aos mecanismos de DSS em torno da relevância para a doençahumana permanece insolúvel. O DSS é considerado como um modeloindependente de célula T porque o mesmo é observado em animaisdeficientes em célula T tais como camundongos SCID.

A administração dos polipeptídeos solúveis da presenteinvenção a estes modelos de TNBS ou DSS podem ser usados para avaliar seuuso para melhorar sintomas e alterar o curso da doença gastrointestinal. Alémdisso, os resultados que mostram a inibição ou neutralização de ILA-17F e/ouILA-17A por estes polipeptídeos solúveis fornecem prova de conceito de queeles (ou moléculas similares) também podem ser usados para melhorarsintomas nos modelos de colitis/IBD e alterar o curso da doença.

4. Psoríase

A psoríase é uma condição de pele crônica que afeta mais doque sete milhões de americanos. A psoríase ocorre quando novas células depele crescem anormalmente, resultando em pedaços inflamados, intumescidose escamosos de pele onde a pele velha não desprendeu rápido o suficiente. Apsoríase em placa, a forma mais comum, é caracterizada por pedaçosinflamados de pele ("lesões") encimados com escamas brancas prateadas. Apsoríase pode ser limitada a umas poucas placas ou envolve áreas moderadasa extensivas de pele, aparecendo mais habitualmente sobre o couro cabeludo,joelhos, cotovelos e tronco. Embora seja altamente visível, a psoríase não éuma doença contagiosa. A patogênese da doença envolve a inflamaçãocrônica dos tecidos afetados. Os polipeptídeos solúveis da presente invençãopodem servir como um produto terapêutico valioso para reduzir a inflamaçãoe efeitos patológicos na psoríase, outras doenças de pele inflamatórias,alergias de pele e mucósicas e doenças relacionadas.

A psoríase é um distúrbio inflamatório mediada pela célula Tda pele que pode causar desconforto considerável. A mesma é uma doençapara a qual não existe nenhuma cura e afeta pessoas de todas as idades. Apsoríase afeta aproximadamente dois por cento das populações da Europa eAmérica do Norte. Embora os indivíduos com psoríase branda possamfreqüentemente controlar a sua doença com agentes tópicos, mais do que ummilhão de pessoas no mundo requerem terapia de ultravioleta ouimunossupressiva sistêmica. Infelizmente, a inconveniência e os riscos daradiação ultravioleta e as toxicidades de muitas terapias limitam o seu uso delonga duração. Além disso, pacientes usualmente têm recorrência de psoríasee em alguns casos rebote, logo depois da interrupção da terapiaimunossupressiva.Os polipeptídeos solúveis da presente invenção tambémpodem ser usados dentro de sistemas de diagnóstico para a detecção de níveiscirculantes de ILA-17F ou ILA-17A e na detecção de ILA-17F ou ILA-17Aassociadas com a resposta inflamatória de fase aguda. Dentro de uma formade realização relacionada, os polipeptídeos solúveis da presente invençãopodem ser usados para detectar polipeptídeos de ILA-17F ou ILA-17Acirculantes ou de ação local. Os níveis elevados ou deprimidos depolipeptídeos de ligando ou receptor podem ser indicativos de condiçõespatológicas, incluindo a inflamação ou câncer. A ILA-17F é conhecida porinduzir resposta inflamatória de fase aguda associada. Além disso, a detecçãode proteínas ou moléculas de fase aguda tais como ILA-17A ou ILA-17Fpode ser indicativa de uma condição inflamatória crônica em certos estadosde doença (por exemplo, asma, psoríase, artrite reumatóide, colite, IBD, IBS).A detecção de tais condições serve para ajudar no diagnóstico de doençaassim como ajudar um médico na escolha da terapia apropriada.

Além de outros modelos de doença aqui descritos, a atividadedos polipeptídeos solúveis da presente invenção sobre o tecido inflamatórioderivado de lesões psoriáticas humanas pode ser medida in vivo usando ummodelo de camundongo imuno deficiente (SCID) grave combinado. Diversosmodelos de camundongo foram desenvolvidos em que células humanas sãoimplantadas em camundongos imunodeficientes (coletivamente aludido comomodelos de xenoenxerto); ver, por exemplo, Cattan AR, Douglas E, Leuk.Res. 18: 513-22, 1994 e Flavell, DJ, Hematological Oncology 14: 67-82,1996. Como um modelo de xenoenxerto in vivo para a psoríase, tecido de pelepsoriática humana é implantado no modelo de camundongo SCID einoculados com um antagonista apropriado. Além disso, outros modelos deanimal com psoríase na técnica podem ser usados para avaliar antagonistas deILA-17A E ILA-17F, tais como enxertos de pele psoriática humanaimplantados no modelo de camundongo AGRl29 e inoculados com umantagonista apropriado (por exemplo, ver, Boyman, O. et al., J. Exp. Med.publicação online #20031482, 2004, aqui incorporado por referência). Ospolipeptídeos solúveis da presente invenção que ligam, bloqueiam, inibem,reduzem, antagonizam ou neutralizam a atividade de ILA-17F ou tanto deILA-17A quanto de ILA-17F são antagonistas preferidos, assim como outrosantagonistas de ILA-17A E ILA-17F podem ser usados neste modelo.

Similarmente, tecidos ou células derivados de colite, IBD, IBS, artritehumanas ou outras lesões inflamatórias podem ser usadas no modelo SCIDpara avaliar as propriedades anti-inflamatórias dos antagonistas de ILA-17A eILA-17F aqui descritas.

As terapias planejadas para abolir, retardar ou reduzir ainflamação usando os polipeptídeos solúveis da presente invenção podem sertestadas pela administração aos camundongos SCID que carregam tecidoinflamatório humano (por exemplo, lesões psoriáticas e outros) ou outrosmodelos aqui descritos. A eficácia de tratamento é medida e estatisticamenteavaliada como efeito anti-inflamatório aumentado dentro da população tratadacom o tempo usando métodos bem conhecidos na técnica. Alguns métodosexemplares incluem, mas não são limitados a medir por exemplo, em ummodelo de psoríase, o espessamento epidérmico, o número de célulasinflamatórias na derme superior e os graus de paraqueratose. Tais métodossão conhecidos na técnica e aqui descritos. Por exemplo, ver Zeigler, M. et al.Lab Invest SI: 1253, 2001; Zollner, Τ. M. et al. J. Clin. Invest. 109: 671,2002; Yamanaka, N. et al. Microbiol. Immunol. 45: 507, 2001; Raychaudhuri,S. P. et al. Br. J. Dermatol. 144: 931, 2001; Boehncke, W. H et al. Arch1Dermatol. Res. 291: 104, 1999; Boehncke, W. H et al. J. Invest. Dermatol.116: 596, 2001; Nickoloff, B. J. et al. Am. J. Pathol. 146: 580, 1995;Boehncke, W. H et al. J. Cutan. Pathol. 24: 1, 1997; Sugai, J., M. et al. LDermatol. Sei. 17: 85, 1998; e Villadsen L.S. et al. J. Clin. Invest. 112: 1571,2003. A inflamação também pode ser monitorada com o tempo usandométodos bem conhecidos tais como citometria de fluxo (ou PCR) paraquantificar o número de células inflamatórias ou lesionais presentes em umaamostra, contagem (perda de peso, diarréia, sangramento retal, comprimentodo cólon) para IBD, contagem de doença da pata e contagem de inflamaçãopara o modelo CIA RA. Por exemplo, as estratégias terapêuticas apropriadaspara testar em um tal modelo incluem tratamento direto usando ILA-17RC ouILA-17RC/ILA-17RA solúvel ou outros antagonistas de ILA-17A E ILA-17F(isoladamente ou junto) ou conjugados relacionados ou antagonistas com basena interação de rompimento de ILA-17RC e/ou ILA-17RA com seus ligandoscorrespondentes.

A psoríase é uma doença de pele inflamatória crônica que estáassociada com queratinócitos epidérmicos hiperplásticos e célulasmononucleares infiltrantes, incluindo células T de memória CD4+, neutrófilose macrófagos (Christophers, Int. Arch. Allergy Immunol., 110: 199, 1996).Acredita-se presentemente que antígenos ambientais desempenham um papelsignificante no início e contribuição para a patologia da doença. Entretanto, éa perda de tolerância aos auto-antígenos que é considerada mediar a patologiada psoríase. As células dendríticas e células T CD4+ são consideradasdesempenhar um papel importante na apresentação de antígeno ereconhecimento que medeiam a resposta imune levando à patologia. Nósrecentemente desenvolvemos um modelo de psoríase com base no modelo detransferência de CD4+CD45RB (Davenport et al., Internat.Immunopharmacol., 2: 653-672). Os polipeptídeos solúveis da presenteinvenção são administrados aos camundongos. A inibição das contagens dadoença (lesões de pele, citocinas inflamatórias) indica a eficácia daquelespolipeptídeos solúveis na psoríase.

5. Dermatite Atópica.

A AD é uma doença inflamatória crônica comum que écaracterizada pelas citocinas hiperativadas do subconjunto 2 auxiliar de célulaT (Th2). Embora a etiologia exata da AD seja desconhecida, fatores múltiplosforam implicados, incluindo respostas imunes Th2 hiperativas,autoimunidade, infecção, alérgenos e pré disposição genética. Ascaracterísticas chave da doença incluem xerose (secura da pele), prurido(coceira da pele), conjuntivite, lesões de pele inflamatórias, infecção porStaphilococcus aureus, eosinofilia sangüínea elevada, elevação de IgE e IgGlséricos e dermatite crônica com célula T, mastóide, macrófago e infiltraçãoeosinofílica. A colonização ou infecção com S. aureus foi reconhecidaexacerbar a AD e perpetuar a cronicidade desta doença de pele.

A AD é freqüentemente encontrada em pacientes com asma erinite alérgica e é freqüentemente a manifestação inicial de doença alérgica.

Cerca de 20% da população nos países ocidentais sofrem destas doençasalérgicas e a incidência de AD nos países desenvolvidos está ascendente porrazões desconhecidas. A AD tipicamente começa na infância e podefreqüentemente persistir através da adolescência no adulto. Os tratamentoscorrentes para a AD incluem corticoesteróides tópicos, ciclosporina A oral,imunossupressores que não corticosteróide tais como tacrolimus (FK506 naforma de ungüento) e interferon-gama. A despeito da variedade detratamentos para AD, muitos sintomas do pacientes não melhoram ou eles têmreações adversas às medicações, que requerem a pesquisa quanto a outros,agentes terapêuticos mais eficazes. Os polipeptídeos solúveis da presenteinvenção podem ser usados para neutralizar ILA-17F e ILA-17A notratamento de doenças humanas específicas tais como dermatite atópica,condições de pele inflamatórias outras condições inflamatórias aquidivulgadas.

6. Asma

A ILA-17 desempenha um papel importante na ativação decélula T induzida por alérgeno e influxo neutrofilico nas vias aéreas. Oreceptor para ILA-17 é expressado nas vias aéreas(Yao, et al. Immunity 3:811 (1995)) e o recrutamento de neutrófilo mediado pela ILA-17 na asmaalérgica é largamente induzida pelo quimioatraente ILA-8, GRO-D eproteína-2 inflamatória de macrófago (MIP-2) produzida pelas célulasepiteliais brônquicas humanas (HBECs) estimuladas por ILA-17 efibroblastos brônquicos humanos (Yao, et al. J Immunol 155: 5483 (1995));Molet, et ai. J Allergy Clin Immunol 108: 430 (2001)). ILA-17 tambémestimula HBECs a liberar ILA-6, um fator ativador de neutrófilo (Fossiez etal., J. Exp. Méd. 183: 2593 (1996) e Linden et al. Int Arch Allergy Immunol126: 179 (2001)) e foi mostrado sinergizar com TNF-α para prolongar asobrevivência de neutrófilos humanos in vitro (Laan, et al. Eur Respir J 21:387 (2003)). Além disso, a ILA-17 é capaz de amplificar as respostasinflamatórias na asma pela sua capacidade para realçar a secreção de citocinasimplicadas na remodelagem das vias aéreas tais como as citocinasprofibróticas, ILA-6 e ILA- lie fator estimulador de colônia de granulócitomediador inflamatório (G-CSF) e fator estimulador de colônia de granulócitomacrófago (GM-CSF) (Molet, et al. J Allergy Clin Immunol 108: 430(2001)).

Evidência clínica mostra que exacerbações agudas, graves deasma são associadas com o recrutamento e ativação de neutrófilos nas viasaéreas, assim ILA-17 é provável desempenhar um papel significante na asma.Os pacientes com asma branda demonstram um aumento detectável naconcentração local de proteína de ILA-17A livre, solúvel (Molet, et al. JAllergy Clin Immunol 108: 430 (2001)) enquanto os voluntários humanossaudáveis com inflamação das vias aéreas induzidas, graves devido àexposição a um confinamento de suíno, demonstra um aumento pronunciadona concentração de proteína ILA-17A livre, solúvel no espaçobronquioalveolar (Fossiez, et al, J Exp Med 183: 2593 (1996) e Linden, et al.Int Arch Allergy Immunol 126: 179 (2001)). Além disso, os níveis de ILA-17no escarro correlacionaram-se com indivíduos que têm hiper-reatividade dasvias aéreas Barczyk, et al. Respir Med 97: 726 (2003).

Em modelos de animal da hiper-responsividade das viasaéreas, a inalação crônica de ovalbumina pelos camundongos sensibilizadosresultou na inflamação eosinofílica brônquica e indução precoce da expressãode mRNA de ILA-17 em tecido pulmonar inflamado, junto com umaneutrofilia brônquica Hellings, et al. Am J Respir Cell Mol Biol 28: 42(2003). Os anticorpos monoclonais anti-ILA-17 fortemente reduziram oinfluxo neutrofílico brônquico mas significantemente realçou os níveis deILA-5 tanto no fluido de lavagem broncoalveolar e soro e influxo eosinofílicobrônquico induzido por alérgeno agravado, sugerindo que ILA-17A podeestar envolvido na determinação do equilíbrio entre o acúmulo de neutrófilo eeosinófilo a seguir do insulto de antígeno Id.

Entre os membros da família de ILA-17, ILA-17F é maisintimamente relacionado com ILA-17A. As atividades biológicas mediadaspor ILA-17F são similares àquelas de ILA-17A, onde ILA-17F estimula aprodução de ILA-6, ILA-8 e G-CSF Hurst, et al. J Immunol 169: 443 (2002).ILA-17F também induz a produção de ILA-2, fator de crescimentotransformador (TGF)-D e proteína quimioatraente de monócito (MCP) emcélulas endoteliais Starnes, et al. J Immunol 167: 4137 (2001). Similarmente,a inoculação de alérgeno pode aumentar a ILA-17F local em pacientes comasma alérgica Kawaguchi, et al. J Immunol 167: 4430 (2001). A liberação degene de ILA-17F em pulmão de murino aumenta neutrófilos no espaçobroncoalveolar, enquanto que a transferência mucósica do gene ILA-17Frealça os níveis de neutrofilia pulmonar induzida por Ag e responsividade dasvias aéreas à metacolina Oda, et al. Am J Respir Crit Care Med 171: 12 (2005).

A parte da asma, diversas doenças das vias aéreasinflamatórias crônicas são caracterizadas pelo recrutamento de neutrófilo nasvias aéreas e ILA-17 foi relatado desempenhar um papel importante napatogênese de condições respiratórias tais como doença pulmonar obstrutivacrônica (COPD), pneumonia bacteriana e fibrose cística (Linden, et al. EurRespir J 15: 973 (2000), Ye, et al. Am J Respir Cell Mol Biol 25: 335 (2001),Rahman, et al. Clin Immunol 115: 268 (2005)). Uma molécula terapêuticaanti-ILA-17A e/ou anti-ILA-17F pode ser demonstrada ser eficaz para adoença das vias aéreas inflamatórias crônicas em um modelo in vitro deinflamação. A capacidade de antagonistas para a atividade de ILA-17F e/ouILA-17A, tal como receptores solúveis de ILA-17RC e anticorpos para estesincluindo os anticorpos monoclonais anti-ILA-17RC humana eneutralizadores da presente invenção para inibir ILA-17A ou e/ou a produçãode citocina ou de quimiocina induzida por ILA-17F a partir de HBECscultivadas ou fibroblastos brônquicos podem ser usados como uma medida deeficácia para tais antagonistas na prevenção da produção de mediadoresinflamatórios resultando diretamente da estimulação de ILA-17A e/ou F. Se aadição de antagonistas, tais como os polipeptídeos solúveis da presenteinvenção, para a atividade de ILA-17F e/ou ILA-17A, acentuadamente reduza produção e a expressão de mediadores inflamatórios, seria esperado sereficaz em aspectos inflamatórios associados com a inflamação das vias aéreascrônicas.

7. Síndrome do Intestino Irritável ("IBS")

A síndrome do intestino irritável representa uma doençacaracterizada por dor abdominal ou desconforto e um hábito de intestinoerrático. Pacientes com IBS podem ser caracterizados em três gruposprincipais com base nos hábitos intestinais: aqueles com fezespredominantemente soltas ou freqüentes, aqueles com fezespredominantemente duras ou infreqüentes e aqueles com fezes variáveis ounormais (Talley et al., 2002). A motilidade intestinal alterada, anormalidadesna função epitelial, trânsito anormal de fezes e gás e estresse, podemcontribuir para sintomas, enquanto que a hipersensibilidade visceral é umacaracterística chave na maioria dos pacientes. Fatores genéticos que afetam asinalização de dor e perturbações no processamento central de sinais aferentessão postulados para predispor indivíduos ao IBS a seguir das exposiçõesambientais específicos. Os estudos também têm demonstrado que as respostasinflamatórias no cólon podem contribuir para sensibilidade aumentada demúsculo liso e nervos entéricos e portanto perturbam as funções sensoriaismotoras no intestino (Collins et al., 2001). Existe sobreposição clínica entreIBS e IBD, com sintomas equivalentes à IBS freqüentemente relatados empacientes antes do diagnóstico de IBD e um mais alto do que os sintomas deIBS esperados em pacientes em remissão de IBD estabelecida. Assim, estascondições podem coexistir com uma freqüência mais alta do que a esperadaou pode existir em uma seqüência contínua, com IBS e IBD em extremidadesdiferentes do mesmo espectro. Entretanto, deve ser mencionado que namaioria dos pacientes com IBS, os espécimes de biópsias colônicas parecemnormais. Não obstante, IBS significantemente afeta um número muito grandede indivíduos (a preponderância U.S. em 2000, aproximadamente 16 milhõesde indivíduos), resultando em uma carga de custo total de 1,7 bilhões dedólares (ano de 2000). Assim, entre as doenças e distúrbios gastrointestinaismais predominantes e dispendiosos, a IBS é a segunda apenas para a doençado refluxo gastroesofágico (GERD). Embora diferente da GERD, otratamento para IBS permanece insatisfatório (Talley et al., 2002; Farhadi etal., 21001; Collins et al., 2001), demonstrando que IBS claramente representauma necessidade médica não atingida.

Modelos de doença convergentes foram propostos quepostulam uma responsividade realçada de circuitos neurais, imuno ouneuroimuno no sistema nervoso central (CNS) ou no intestino paraperturbações centrais (psicossociais) ou periféricas (irritação de tecido,inflamação, infecção) de homeostase normal (Talley et al., 2002). Estaresponsividade realçada resulta na desregulagem da motilidade intestinal,função epitelial (imuno, permeabilidade) e hipersensibilidade visceral, quepor sua vez resulta em sintomas de IBS.

Pode haver um papel para várias moléculas diferentes napatogênese de IBS incluindo um papel para as moléculas que estimulam osneurônios e aqueles que são envolvidos no início do processo inflamatório.

Várias de nossas moléculas domésticas são conhecidas por estarem ligadas àatividade possível em neurônios devido à sua expressão direta pelos neurôniosou expressão de seus receptores nos neurônios, incluindo ILA-17D, ILA-17Be ILA-31. Além disso, vários membros da família de ILA-17 e moléculasrelacionadas foram associadas com a inflamação no intestino, incluindo ILA-17A, ILA-17F, ILA-23 e ILA-31.

A eficácia de inibidores destas moléculas pode ser testada invivo em modelos de animal da doença. Diversos modelos de animal forampropostos que imitam características chave de IBS e envolvem os estímuloscentralmente alvejados (estresse) ou estímulos perifericamente alvejados(infecção, inflamação). Dois exemplos de modelos de animal in vivo quepodem ser usados para determinar a eficácia de inibidores no tratamento deIBS são (i) modelos focalizando na patogênese direcionada ao CNS primáriade IBS (modelos de estresse) e (ii) modelos focalizando nos indutoresdirecionados ao intestino de estresse (isto é inflamação, infecção ou estressefísico do intestino). Deve ser mencionado entretanto, que eventos dentro doCNS ou no trato gastrointestinal (GI) não ocorrem na isolação e que ossintomas de IBS mais provavelmente resultam de uma interação complexaentre sinais do CNS no GI e vice versa.

J) Formulações Farmacêuticas

Para o uso farmacêutico, os polipeptídeos solúveis da presenteinvenção são formulados para a liberação parenteral, particularmenteintravenosa ou subcutânea, de acordo com métodos convencionais. Aadministração intravenosa será pela injeção de bolo, liberação controlada, porexemplo, usando mini-bombas ou outra tecnologia apropriada ou pela infusãoem um período típico de uma a diversas horas. No geral, as formulaçõesfarmacêuticas incluirão uma proteína hematopoiética em combinação com umveículo farmaceuticamente aceitável, tal como solução salina, solução salinatamponada, 5% de dextrose em água ou coisa parecida. As formulaçõespodem incluir ainda um ou mais excipientes, conservantes, solubilizadores,agentes de tamponamento, albumina para impedir a perda de proteína nassuperfícies do frasco, etc. Quando da utilização de uma tal terapia decombinação, as citocinas podem ser combinadas em uma única formulação oupodem ser administradas em formulações separadas. Os métodos deformulação são bem conhecidos na técnica e são divulgados, por exemplo, emRemington's Pharmaceutic Sciences, Gennaro, ed., Mack Publishing Co.,Easton PA, 1990, que é incorporada aqui por referência. As doses terapêuticasno geral estarão na faixa de 0,1 a 100 mg/kg de peso do paciente por dia,preferivelmente de 0,5 a 20 mg/kg por dia, com a dose exata determinada pelomédico de acordo com padrões aceitos, levando-se em conta a natureza eseveridade da condição a ser tratada, traços do paciente, etc. A determinaçãode dose está dentro do nível de habilidade comum na técnica. As proteínashabitualmente serão administradas em um período de até 28 dias a seguir daquimioterapia ou transplante da medula óssea ou até que uma contagem deplaquetas de >20.000/mm , preferivelmente >50.000/mm , seja obtida. Maisabitualmente, as proteínas serão administradas em uma semana ou menos,freqüentemente em um período de um a três dias. No geral, uma quantidadeterapeuticamente eficaz dos polipeptídeos solúveis da presente invenção emuma quantidade suficiente para produzir um aumento clinicamentesignificante na proliferação e/ou diferenciação de células progenitoras linfóideou mielóide, que será manifestada como um aumento nos níveis circulatóriosde células maduras (por exemplo, plaquetas ou neutrófilos). O tratamento dedistúrbios de plaqueta será assim continuada até uma contagem de plaqueta depelo menos 20.000/mm , preferivelmente 50.000/mm , seja atingida. Ospolipeptídeos solúveis da presente invenção também podem ser administradosem combinação com outras citocinas tais como ILA-3, -6 e -11; fator decélula tronco; eritropoietina; G-CSF e GM-CSF. Dentro de regimes de terapiade combinação, as doses diárias de outras citocinas no geral serão: EPO, 150U/kg; GM-CSF, 5 a 15 lg/kg; ILA-3, 1 a 5 lg/kg; e G-CSF, 1 a 25 lg/kg. Aterapia de combinação com EPO, por exemplo, é indicada em pacientesanêmicos com níveis de EPO baixos.

No geral, a dosagem de polipeptídeos solúveis administradosvariará dependendo de fatores tais como a idade do paciente, peso, altura,sexo, condição médica geral e história médica anterior. Tipicamente, édesejável prover o receptor com uma dosagem de tal polipeptídeo solúvel queestá na faixa de cerca de 1 pg/kg a 10 mg/kg (quantidade de agente/pesocorporal do paciente), embora uma dosagem mais baixa ou mais alta tambémpossa ser ministrada conforme as circunstâncias imponham.

A administração dos polipeptídeos solúveis da presenteinvenção a um paciente pode ser intravenosa, intraarterial, intraperitoneal,intramuscular, subcutânea, intrapleural, intratecal, por perfusão através de umcateter regional ou pela injeção intralesional direta. Quando da administraçãode proteínas terapêuticas por injeção, a administração pode ser pela infusãocontínua ou pelos bolos únicos ou múltiplos.

As vias adicionais de administração incluem oral, membranamucósica, pulmonar e transcutânea. A liberação oral é adequada paramicroesferas de poliéster, microesferas de zeína, microesferas de proteinóide,microesferas de policianoacrilato e sistemas com base em lipídeo (ver, porexemplo, DiBase e Morrei, "Oral Delivery of Microencapsulated Proteins,"em Protein Delivery: Physical Systems, Sanders e Hendren (eds.), páginas255-288 (Plenum Press 1997)). A praticabilidade de uma liberação intranasalé exemplificada por um tal modo de administração de insulina (ver, porexemplo, Hinchcliffe e Illum, Adv. Drug Deliv. Rev. 35: 199 (1999)). Aspartículas secas ou líquidas que compreendem anticorpos ILA-17RC ou anti-ILA-17RC solúveis podem ser preparados e inalados com a ajuda dedispensadores de pó seco, geradores ou nebulizadores aerossol líquido ounebulizadores (por exemplo, Pettit e Gombotz, TIBTECH 16: 343 (1998);Patton et al., Adv. Drug Deliv. Rev. 35: 235 (1999)). Este método é ilustradopelo sistema de controle da diabete AERX, que é um inalador eletrônicomanual que libera insulina aerossolizada nos pulmões. Estudos têm mostradoque as proteínas tão grandes quanto 48.000 kDa foram liberadas através dapele em concentrações terapêuticas com a ajuda de ultra-som de baixafreqüência, que ilustra a praticabilidade da administração trascutânea(Mitragotri et al., Science 269: 850 (1995)). A liberação transdérmica usandoeletroporação fornece um outro meio para administrar os polipeptídeossolúveis da presente invenção (Potts et al., Pharm. Biotechnol. 10: 213(1997)).

Uma composição farmacêutica que compreende ospolipeptídeos solúveis da presente invenção pode ser formulada de acordocom métodos conhecidos para preparar composições farmaceuticamente úteis,por meio das quais as proteínas terapêuticas são combinadas em uma misturacom um carreador farmaceuticamente aceitável. Uma composição é dita serum "carreador farmaceuticamente aceitável" se a sua administração pode sertolerada por um paciente receptor. A solução salina tamponada com fosfatoestéril é um exemplo de um carreador farmaceuticamente aceitável. Outroscarreadores adequados são bem conhecidos por aqueles na técnica. Ver, porexemplo, Gennaro (ed.), Remington's Pharmaceutic Sciences, 19a Edição(Mack Publishing Company 1995).

Para os propósitos de terapia, os polipeptídeos solúveis dapresente invenção e um carreador farmaceuticamente aceitável sãoadministrados a um paciente em uma quantidade terapeuticamente eficaz.Uma combinação de uma molécula terapêutica da presente invenção e umcarreador farmaceuticamente aceitável é dita ser administrada em uma"quantidade terapeuticamente eficaz" se a quantidade administrada éfisiologicamente significante. Um agente é fisiologicamente significante se asua presença resulta em uma mudança detectável na fisiologia de um pacientereceptor. Por exemplo, um agente usado para tratar a inflamação éfisiologicamente significante se a sua presença alivia a resposta inflamatória.

Uma composição farmacêutica que compreende umpolipeptídeo solúvel da presente invenção pode ser fornecida na formalíquida, em um aerossol ou na forma sólida. As formas líquidas, são ilustradaspelas soluções injetáveis e suspensões orais. As formas sólidas exemplaresincluem cápsulas, tabletes e formas de liberação controlada. A última forma éilustrada pelas bombas e implantes miniosmóticos (Bremer et al., Pharm.Biotechnol. 10: 239 (1997); Ranade, "Implants in Drug Delivery," em DrugDelivery Systems, Ranade e Hollinger (eds.), páginas 95-123 (CRC Press1995); Bremer et al., "Protein Delivery com Infusion Pumps," em ProteinDelivery: Physical Systems, Sanders e Hendren (eds.), páginas 239-254(Plenum Press 1997); Yewey et al., "Delivery of Proteins from a ControledRelease Injectable Implant," em Protein Delivery: Physical Systems, Sanderse Hendren (eds.), páginas 93-117 (Plenum Press 1997)).

Os lipossomas fornecem um meio para liberar polipeptídeosterapêutico a um paciente intravenosa, intraperitoneal, intratecal,intramuscular, subcutaneamente ou por intermédio da administração oral,inalação ou administração intranasal. Os lipossomas são vesículasmicroscópicas que consistem de uma ou mais bicamadas lipídicascircundando compartimentos aquosos (ver, no geral, Bakker-Woudenberg etal., Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 12 (Supl. 1): S61 (1993), Kim, Drugs46: 618 (1993) e Ranade, "Site-Specific Drug Delivery Using Liposomes asCarriers," em Drug Delivery Systems, Ranade e Hollinger (eds.), páginas 3-24 (CRC Press 1995)). Os lipossomas são similares em composição àsmembranas celulares e como um resultado, os lipossomas podem seradministrados com segurança e são biodegradáveis. Dependendo do métodode preparação, os lipossomas podem ser unilamelares ou multilamelares e oslipossomas podem variar em tamanho com diâmetros variando de 0,02 μηι amais do que 10 μηι. Uma variedade de agentes pode ser encapsulada emlipossomas: partição de agentes hidrofóbicos nas bicamadas e partição deagentes hidrofílicos dentro do(s) espaço(s) aquoso(s) interno(s) (ver, porexemplo, Machy et al., Liposomes In Cell Biology And Pharmacology (JohnLibbey 1987) e Ostro et al., American J. Hosp. Pharm. 46: 1576 (1989)).Além disso, é possível controlar a disponibilidade terapêutica do agenteencapsulado variando-se o tamanho do lipossoma, o número de bicamadas, acomposição lipídica, assim como a carga e características de superfície doslipossomas.

Os lipossomas podem absorver virtualmente qualquer tipo decélula e depois lentamente liberar o agente encapsulado. Alternativamente,um lipossoma absorvido podem ser endocitado pelas células que sãofagocíticas. A endocitose é seguida pela degradação intralisossômica delipídeos lipossômicos e a liberação dos agentes encapsulados (Scherphof etal., Ann. Ν. Y. Acad. Sei. 446: 368 (1985)). Depois da administraçãointravenosa, lipossomas pequenos (0,1 a 1,0 μιη) são tipicamente absorvidospelas células do sistema reticulo-endotelial, localizadas principalmente nofígado e baço, ao passo que os lipossomas maiores do que 3,0 μηι sãodepositados nos pulmões. Esta captação preferencial de lipossomas pequenospelas células do sistema reticulo-endotelial tem sido usada para liberaragentes quimioterapêuticos aos macrófagos e aos tumores do fígado.

O sistema reticulo-endotelial pode ser enganado por diversosmétodos incluindo saturação com doses grandes de partículas de lipossoma ouinativação de macrófago seletiva por meios farmacológicos (Claassen et al.,Biochim. Biophys. Acta 802: 428 (1984)). Além disso, a incorporação defosfolipídeos derivatizados em glicolipídeo ou polieteleno glicol emmembranas lipossômicas foi mostrada resultar em uma captaçãosignificantemente reduzida pelo sistema reticulo-endotelial (Allen et al.,Biochim. Biophys. Acta 1068: 133 (1991); Allen et al., Biochim. Biophys.Acta 1150: 9(1993)).

Lipossomas também podem ser preparados para alvejar célulasou órgãos particulares pela variação da composição de fosfolipídeo ou pelainserção de receptores ou ligandos nos lipossomas. Por exemplo, lipossomas,preparados com um alto teor de um tensoativo não iônico, foram usados paraalvejar o fígado (Hayakawa et al., Patente Japonesa 04-244.018; Kato et al.,Biol. Pharm. Buli. 16: 960 (1993)). estas formulações foram preparadasmisturando-se fosfatidilcolina de soja, α-tocoferol e óleo de mamonahidrogenado etoxilado (HCO-60) em metanol, concentrando a mistura sobvácuo e depois reconstituindo a mistura com água. Uma formulaçãolipossômica de dipalmitoilfosfatidil-colina (DPPC) com uma mistura deesterilglicosídeo (SG) derivado de soja e colesterol (Ch) também mostroualvejar o fígado (Shimizu et al., Biol. Pharm. Buli. 20: 881 (1997)).

Alternativamente, vários ligandos de alvejamento podem serligados à superfície do lipossoma, tais como anticorpos, fragmentos deanticorpo, carboidratos, vitaminas e proteínas de transporte. Por exemplo,lipossomas podem ser modificados com derivados de galactosillipídeo tiporamificado para alvejar receptores de asialoglicoproteína (galactose), que sãoexclusivamente expressadas na superfície de células hepáticas (Kato eSugiyama, Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 14: 287 (1997); Murahashi etal., Biol. Pharm. Buli, 20: 259 (1997)). Similarmente, Wu et al., Hepatology27: 772 (1998), têm mostrado que os lipossomas de rotulação comasialofetuína levaram a uma meia vida plasmática de lipossoma encurtada ecaptação enormemente realçada de lipossoma rotulado por asialofetuína peloshepatócitos. Por outro lado, o acúmulo hepático de lipossomas quecompreende derivados de galactosillipídeo tipo ramificado pode ser inibidopela pré injeção de asialofetuína (Murahashi et al., Biol. Pharm. Buli, 20: 259(1997)). Lipossomas de albumina sérica humana poliaconitilada fornecem umoutro método para alvejar lipossomas às células hepáticas (Kamps et al., Proc.NatΊ Acad. Sei. USA 94: 11681 (1997)). Além disso, Geho, et ai. PatenteU.S. N5 4.603.044, descreve um sistema de liberação de vesícula delipossoma direcionado a hepatócito, que tem especificidade quanto aosreceptores hepatobiliares associados com as células metabólicasespecializadas do fígado.

Em um método mais general para alvejar tecido, as célulasalvo são pré rotuladas com anticorpos biotinilados específicos para umligando expressado pela célula alvo (Harasym et al., Adv. Drug Deliv. Rev.32: 99 (1998)). Depois da eliminação plasmática de anticorpo livre, oslipossomas conjugados com estreptavidina são administrados. Em um outrométodo, os anticorpos de alvejamento são diretamente ligados aos lipossomas(Harasym et al., Adv. Drug Deliv. Rev. 32: 99 (1998)).

Os polipeptídeos e anticorpos podem ser encapsulados dentrode lipossomas usando técnicas padrão de microencapsulação de proteína (ver,por exemplo, Anderson et al., Infect. Immun. 31: 1099 (1981), Anderson etal., Câncer Res. 50: 1853 (1990) e Cohen et al., Biochim. Biophys. Acta1063: 95 (1991), Alving et al. "Preparation and Use of Liposomes inImmunological Studies," em Liposome Technology, 2a Edição, Vol. III,Gregoriadis (ed.), página 317 (CRC Press 1993), Wassef et al., Met.Enzymol. 149: 124 (1987)). Como mencionado acima, lipossomasterapeuticamente úteis podem conter um variedade de componentes. Porexemplo, os lipossomas podem compreender derivados lipídicos depoli(etileno glicol) (Allen et al., Biochim. Biophys. Acta 1150: 9 (1993)).

As microesferas de polímero degradável foram planejadas paramanter níveis sistêmicos altos de proteínas terapêuticas. As microesferas sãopreparadas a partir de polímeros degradáveis tais como poli(lactídeo-co-glicolídeo) (PLG), polianidretos, poli (orto ésteres), polímeros de acetato deetilvinila não biodegradáveis, em que as proteínas são aprisonadas nopolímero (Gombotz e Pettit, Bioconjugate Chem. 6: 332 (1995); Ranade,"Role of Polymers in Drug Delivery," em Drug Delivery Systems, Ranade eHollinger (eds.), páginas 51-93 (CRC Press 1995); Roskos e Maskiewicz,"Degradable Controled Release Systems Useful for Protein Delivery," emProtein Delivery: Physical Systems, Sanders e Hendren (eds.), páginas 45-92(Plenum Press 1997); Bartus et ai, Science 281: 1161 (1998); Putney eBurke, Nature Biotechnology 16: 153 (1998); Putney, Curr. Opin. Chem.Biol. 2: 548 (1998)). Nanoesferas revestidas com Polietilene glycol (PEG)podem também fornecer carreadores para a administração intravenosa deproteínas terapêuticas (ver, por exemplo, Gref et al., Pharm. Biotechnol. 10:167(1997)).

A presente invenção também considera polipeptídeosquimicamente modificados tendo atividade de ligação de ILA-17A e/ou ILA-17F tal como receptores de ILA-17RC ou IL A-17RC/IL A-17RAmonoméricos, homodiméricos, heterodiméricos ou multiméricos solúveis, queum polipeptídeo é ligado com um polímero, como debatido acima.

Outras formas de dosagem podem ser planejadas por aqueleshabilitados na técnica, como mostrado, por exemplo, por Ansel e Popovich,Pharmaceutic Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 5a Edição (Lea &Febiger 1990), Gennaro (ed.), Remington's Pharmaceutic Sciences, 19aEdição (Mack Publishing Company 1995) e por Ranade e Hollinger, DrugDelivery Systems (CRC Press 1996).

Como uma ilustração, as composições farmacêuticas podemser fornecidas como um kit que compreende um recipiente que compreendeum dos polipeptídeos solúveis da presente invenção. Os polipeptídeosterapêuticos podem ser fornecidos na forma de uma solução injetável paradoses únicas ou múltiplas ou como um pó estéril que será reconstituído antesda injeção. Alternativamente, um tal kit pode incluir um dispensador de póseco, gerador de aerossol líquido ou nebulizador para a administração de umpolipeptídeo terapêutico. Um tal kit pode compreender ainda informaçãoescrita sobre indicações e uso da composição farmacêutica. Além disso, talinformação pode incluir uma declaração de que a composição écontraindicada em pacientes com hipersensibilidade conhecida à ILA-17RCou ILA-17RA.

Uma composição farmacêutica que compreende polipeptídeossolúveis da presente invenção pode ser fornecida na forma líquida, em umaerossol ou na forma sólida. As formas líquidas, são ilustradas pelas soluçõesinjetáveis, aerossóis, gotícuias, soluções topológicas e suspensões orais. Asformas sólidas exemplares incluem cápsulas, tabletes e formas de liberaçãocontroladas. A última forma é ilustrada pelas bombas miniosmóticas eimplantes (Bremer et al., Pharm. Biotechnol. 10: 239 (1997); Ranade,"Implants in Drug Delivery," em Drug Delivery Systems, Ranade e Hollinger(eds.), páginas 95-123 (CRC Press 1995); Bremer et al., "Protein Deliverycom Infusion Pumps," em Proteína Delivery: Physical Systems, Sanders eHendren (eds.), páginas 239-254 (Plenum Press 1997); Yewey et al.,"Delivery of Proteins from a Controled Release Injectable Implant," emProtein Delivery: Physical Systems, Sanders e Hendren (eds.), páginas 93-117(Plenum Press 1997)). Outras formas sólidas incluem cremes, pastas, outrasaplicações topológicas e outras.

Os lipossomas fornecem um meio para liberar polipeptídeosterapêuticos a um paciente intravenosa, intraperitoneal, intratecal,intramuscular, subcutaneamente ou por intermédio da administração oral,inalação ou administração intranasal. Os lipossomas são vesículasmicroscópicas que consistem de uma ou mais bicamadas lipídicas quecircundam compartimentos aquosos (ver, no geral, Bakker-Woudenberg et al.,Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 12 (Supl. 1): S61 (1993), Kim, Drugs 46:618 (1993) e Ranade, "Site-Specific Drug Delivery Using Liposomes asCarriers," em Drug Delivery Systems, Ranade e Hollinger (eds.), páginas 3-24 (CRC Press 1995)). Os lipossomas são similares em composição àsmembranas celulares e como um resultado, os lipossomas podem seradministrados com segurança e são biodegradáveis. Dependendo do métodode preparação, os lipossomas podem ser unilamelares ou multilamelares e oslipossomas podem variar no tamanho com diâmetros variando de 0,02 μm amais do que 10 μm. Uma variedade de agentes pode ser encapsulada emlipossomas: partição de agentes hidrofóbicos nas bicamadas e partição deagentes hidrofílicos dentro do(s) espaço(s) aquoso(s) interno(s) (ver, porexemplo, Machy et al., Liposomes In Cell Biology And Pharmacology (JohnLibbey 1987) e Ostro et al., American J. Hosp. Pharm. 46: 1576 (1989)).Além disso, é possível controlar a disponibilidade terapêutica do agenteencapsulado variando-se o tamanho do lipossoma, o número de bicamadas, acomposição lipídica, assim como a carga e características de superfície doslipossomas.

Os lipossomas podem absorver virtualmente qualquer tipo decélula e depois lentamente liberar o agente encapsulado. Alternativamente,um lipossoma absorvido pode ser endocitado pelas células que sãofagocíticas. A endocitose é seguida pela degradação intralisossômica delipídeos lipossômicos e a liberação dos agentes encapsulados (Scherphof etal., Ann. Ν. Y. Acad. Sei. 446: 368 (1985)). Depois da administraçãointravenosa, lipossomas pequenos (0,1 a 1,0 μm) são tipicamente absorvidospelas células do sistema reticulo-endotelial, localizadas principalmente nofígado e baço, ao passo que os lipossomas maiores do que 3,0 μm sãodepositados nos pulmões. Esta captação preferencial de lipossomas menorespelas células do sistema reticulo-endotelial tem sido usada para liberaragentes quimioterapêuticos aos macrófagos e aos tumores do fígado.

O sistema reticulo-endotelial pode ser enganado por diversosmétodos incluindo saturação com doses grandes de partículas de lipossoma ouinativação de macrófago seletiva por meios farmacológicos (Claassen et al.,Biochim. Biophys. Acta 802: 428 (1984)). Além disso, a incorporação defosfolipídeos derivatizados em glicolipídeo ou polieteleno glicol emmembranas lipossômicas foi mostrada resultar em uma captaçãosignificantemente reduzida pelo sistema reticulo-endotelial (Allen et al.,Biochim. Biophys. Acta 1068: 133 (1991); Allen et al, Biochim. Biophys.Acta 1150: 9(1993)).

Lipossomas também podem ser preparados para alvejar célulasou órgãos particulares pela variação da composição de fosfolipídeo ou pelainserção de receptores ou ligandos nos lipossomas. Por exemplo, lipossomas,preparados com um alto teor de um tensoativo não iônico, foram usados paraalvejar o fígado (Hayakawa et al., Patente Japonesa 04-244.018; Kato et al.,Biol. Pharm. Buli. 16: 960 (1993)). estas formulações foram preparadasmisturando-se fosfatidilcolina de soja, α-tocoferol e óleo de mamonahidrogenado etoxilado (HCO-60) em metanol, concentrando-se a mistura sobvácuo e depois reconstituindo a mistura com água. Uma formulaçãolipossômica de dipalmitoilfosfatidil-colina (DPPC) com uma mistura deesterilglicosídeo (SG) derivado de soja e colesterol (Ch) também mostroualvejar o fígado (Shimizu et al., Biol. Pharm. Buli. 20: 881 (1997)).

Alternativamente, vários ligandos de alvejamento podem serligados à superfície do lipossoma, tais como anticorpos, fragmentos deanticorpo, carboidratos, vitaminas e proteínas de transporte. Por exemplo,lipossomas podem ser modificados com derivados de galactosillipídeo tiporamificado para alvejar receptores de asialoglicoproteína (galactose), que sãoexclusivamente expressadas na superfície de células hepáticas (Kato eSugiyama, Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 14: 287 (1997); Murahashi etal., Biol. Pharm. Buli, 20: 259 (1997)). Similarmente, Wu et al., Hepatology27: 772 (1998), mostrou que a rotulação de lipossomas com asialofetuínalevou a uma meia vida plasmática de lipossoma encurtada e captaçãoenormemente realçada de lipossoma rotulado por asialofetuína peloshepatócitos. Por outro lado, o acúmulo hepático de lipossomas quecompreende derivados de galactosillipídeo tipo ramificado pode ser inibidopela pré injeção de asialofetuína (Murahashi et al., Biol. Pharm. Buli, 20: 259(1997)). Lipossomas de albumina sérica humana poliaconitilada fornecem umoutro método para alvejar lipossomas às células hepáticas (Kamps et al., Proc.NatΊ Acad. Sei. USA 94: 11681 (1997)). Além disso, Geho, et al. PatenteU.S. N2 4.603.044, descreve um sistema de liberação de vesícula delipossoma direcionado a hepatócito, que tem especificidade quanto aosreceptores hepatobiliares associados com as células metabólicasespecializadas do fígado.

Os polipeptídeos da presente invenção podem serencapsulados dentro de lipossomas usando técnicas padrão demicroencapsulação de proteína (ver, por exemplo, Anderson et al., Infect.Immun. 31: 1099 (1981), Anderson et al., Câncer Res. 50: 1853 (1990) eCohen et al., Biochim. Biophys. Acta 1063: 95 (1991), Alving et al."Preparation and Use of Liposomes in Immunological Studies," em LiposomeTechnology, 2a Edição, Vol. III, Gregoriadis (ed.), página 317 (CRC Press1993), Wassef et al., Met. Enzymol. 149: 124 (1987)). Como mencionadoacima, lipossomas terapeuticamente úteis podem conter um variedade decomponentes. Por exemplo, os lipossomas podem compreender derivadoslipídicos de poli(etileno glicol) (Allen et al., Biochim. Biophys. Acta 1150: 9(1993)).

As microesferas de polímero degradável foram planejadas paramanter níveis sistêmicos altos de proteínas terapêuticas. As microesferas sãopreparadas a partir de polímeros degradáveis tais como poli(lactídeo-co-glicolídeo) (PLG), polianidretos, poli (orto ésteres), polímeros de acetato deetilvinila não biodegradáveis, em que as proteínas são aprisonadas nopolímero (Gombotz e Pettit, Bioconjugate Chem. 6: 332 (1995); Ranade,"Role of Polymers in Drug Delivery," em Drug Delivery Systems, Ranade eHollinger (eds.), páginas 51-93 (CRC Press 1995); Roskos e Maskiewicz,"Degradable Controled Release Systems Useful for Protein Delivery," emProtein Delivery: Physical Systems, Sanders e Hendren (eds.), páginas 45-92(Plenum Press 1997); Bartus et al., Science 281: 1161 (1998); Putney eBurke, Nature Biotechnology 16: 153 (1998); Putney, Curr. Opin. Chem.Biol. 2: 548 (1998)). Nanoesferas revestidas com polietileno glicol (PEG)podem também fornecer carreadores para a administração intravenosa deproteínas terapêuticas (ver, por exemplo, Gref et al., Pharm. Biotechnol. 10:167(1997)).

[1] Outras formas de dosagem podem ser planejadas poraqueles habilitados na técnica, como mostrado, por exemplo, por Ansel ePopovich, Pharmaceutic Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 5 aEdição (Lea & Febiger 1990), Gennaro (ed.), Remington's PharmaceuticSciences, 19a Edição (Mack Publishing Company 1995) e por Ranade eHollinger, Drug Delivery Systems (CRC Press 1996).

A presente invenção considera composições dos polipeptídeossolúveis da presente invenção e métodos e usos terapêuticos quecompreendem os mesmos polipeptídeos aqui descritos. Tais composiçõespodem compreender ainda um carreador. O carreador pode ser um carreadororgânico ou inorgânico convencional. Os exemplos de carreadors incluemágua, solução tampão, álcool, propileno glicol, macrogol, óleo de gergelim,óleo de milho e outros.

K) Produção de Camundongos Transgênico

Os camundongos transgênicos podem ser engendrados parasuper-expressar o gene ILA-17F, ILA-17A, ILA-17RA ou ILA-17RC emtodos os tecidos ou sob o controle de um elemento regulador específico detecido ou preferido de tecido. Estes super-produtores podem ser usados paracaracterizar o fenótipo que resulta da super-expressão e os animaistransgênicos podem servir como modelos para a doença humana causada peloILA-17F, ILA-17A, ILA-17RA ou ILA-17RC em excesso. Os camundongostransgênicos que super-expressam qualquer um destes também fornecembiorreatores modelo para a produção de LLA-17RA ou ILA-17RC, tal comoqualquer um dos polipeptídeos solúveis da presente invenção no leite ou nosangue de animais maiores. Os métodos para produzir camundongostransgênicos são bem conhecidos por aqueles de habilidade na técnica (ver,por exemplo, Jacob, "Expression and Knockout of Interferons in TransgenicMice," em Overexpression and Knockout of Cytokines in Transgenic Mice,Jacob (ed.), páginas 111-124 (Academic Press, Ltd. 1994), Monastersky eRobl (eds.), Strategies in Transgenic Animal Science (ASM Press 1995) eAbbud e Nilson, "Recombinant Protein Expression in Transgenic Mice," emGene Expression Systems: Using Nature for the Art of Expression, Fernandeze Hoeffler (eds.), páginas 367-397 (Academic Press, Inc. 1999)).

Por exemplo, um método para produzir um camundongotransgênico que expressa um gene de ILA-17RC pode começar com machosadultos, férteis (garanhões) (B6C3fl, 2 a 8 meses de idade (Taconic Farms,Germantown, NY)), machos vasectomizados (duds) (B6D2fl, 2 a 8 meses,(Taconic Farms)), fêmeas féreteis pré pubescentes (doadores) (B6C3fl, 4 a 5semanas, (Taconic Farms)) e fêmeas adultas férteis (receptoras) (B6D2fl, 2 a4 meses, (Taconic Farms)). Os doadores são aclimatizados por uma semana edepois injetados com aproximadamente 8 IU/camundongo de GonadotropinaSérica de Égua Grávida (Sigma Chemical Company; St. Louis, MO) I.P. e 46a 47 horas mais tarde, 8 IU/camundongo de Gonadotropina Coriônica humana(hCG (Sigma)) I.P. para induzir a superovulação. Os doadores são acasaladoscom os garanhões subseqüente às injeções de hormônio. A ovulação no geralocorre dentro de 13 horas da injeção de hCG. A copulação é confirmada pelapresença de um tampão vaginal na manhã seguinte ao acasalamento.

Os ovos fertilizados são coletados sob um escopo cirúrgico. Osovidutos são coletados e os ovos são liberados em lâminas de análise de urinacontendo hialuronidase (Sigma). Os ovos são lavados uma vez emhialuronidase e duas vezes em meio W640 de Whitten (descrito, por exemplo,por Menino e OOaray, Biol. Reprod. 77: 159 (1986) e Dienhart e Downs,Zygote 4: 129 (1996)) que foi incubado com 5% de CO2, 5% de O2 e 90% deN2 a 37°C. Os ovos são depois armazenados em um incubador a 37°C/5% deCO2 até a microinjeção.

Dez a vinte microgramas de DNA plasmídico contendo umaseqüência que codifica ILA-17RC é linearizada, purificada em gel erecolocada em suspensão em 10 mM de Tris-HCl (pH 7,4), 0,25 mM deEDTA (pH 8,0), em uma concentração final de 5 a 10 nanogramas pormicrolitro para a microinjeção. Por exemplo, as seqüências que codificamILA-17RC podem codificar um polipeptídeo que compreende os resíduos deaminoácido 21 a 452 da SEQ ID NO: 2.

O DNA plasmídico é microinjetado nos ovos colhidoscontidos em uma gota de meio W640 coberto por óleo mineral equilibradocom CO2, quente. O DNA é retirado em uma agulha de injeção (puxado apartir de um capilar de vidro de borossilicato de 0,75 mm ID, 1 mm OD) einjetado em ovos individuais. Cada ovo é penetrado com a agulha de injeção,em um ou ambos dos pró núcleos haplóides.

Picolitros de DNA são injetados nos pró núcleos e a agulha deinjeção retirada sem entrar em contato com os nucléolo. O procedimento érepetido até que todos os ovos sejam injetados. Os ovos microinjetados comêxito são transferidos em uma placa de cultura de tecido de órgão com meioW640 pré-tratado com gás para armazenagem durante a noite em umincubador a 37°C/5% de CO2.

No dia seguinte, os embriões de duas células são transferidospara receptores pseudográvidos. Os receptores são identificados pela presençade tampões de copulação, depois de copular com duds vasectomizados.Recipientes são anestesiados e raspados no lado esquerdo dorsal e transferidospara um microscópio cirúrgico. Uma pequena incisão é fabricada na pele eatravés da parede muscular no meio da área abdominal delineada pelascostelas, o lombo e a perna traseira, a meio caminho entre os joelhos e o baço.

Os órgãos reprodutivos são exteriorizados em um pequeno pano cirúrgico. Aalmofada de gordura é esticada sobre o pano cirúrgico e uma serrefine debebê (Roboz, Rockville, MD) é ligada à almofada de gordura e deixadapendurada sobre as costas do camundongo, impedindo os órgãos deescorregarem de volta para dentro.

Com uma pipeta de transferência fina contendo óleo mineralseguido pela alternação de W640 e bolhas de ar, 12 a 17 embriões de duascélulas saudáveis da injeção do dia anterior são transferidos no receptor. Aampola intumescida é localizada e mantendo o oviduto entre a ampola e abursa, uma incisão no oviduto é feita com uma agulha 28 g próxima à bursa,tendo-se certeza de não rasgar a ampola ou a bursa.

A pipeta é transferida para dentro da incisão no oviduto e osembriões são soprados dentro, permitindo que a primeira bolha de arescapasse da pipeta. A almofada de gordura é suavemente empurrada paradentro do peritôneo e os órgãos reprodutivos deixados deslizar para dentro. Aparede peritoneal é fechada com uma sutura e a pele fechada com um clipe deferimento. Os camundongos se recuperam em um aquecedor de lâmina a37°C por um mínimo de quatro horas.

Os receptores são retornados às gaiolas em pares e deixados 19a 21 dias de gestação. Depois do nascimento, 19 a 21 dias após o parto édeixado antes do desmame. Os recém desmamados são classificados quantoao sexo e colocados em gaiolas separadas por sexo e uma biópsia de 0,5 cm(usada para genotipagem) é cortado da cauda com tesouras limpas.

O DNA genômico é preparado a partir dos cortes da caudausando, por exemplo, um kit Dneasy da Qiagen seguindo as instruções dofabricante. O DNA genômico é analisado pela PCR usando iniciadoresplanejados para amplificar um gene ILA-17RC ou um gene marcadorselecionável que foi introduzido no mesmo plasmídeo. Depois que os animaissão confirmados serem transgênicos, eles são retro-cruzados em uma cepacongênita pela colocação de uma fêmea transgênica com um macho do tiposelvagem ou um macho transgênico com uma ou duas fêmeas do tiposelvagem. Na medida em que os filhotes nascem e são desmamados, os sexossão separados e as suas caudas cortadas para a genotipagem.

Para checar quanto a expressão de um transgene em um animalvivo, uma hepatectomia parcial é realizada. Uma prep cirúrgica é feita doabdômen superior diretamente abaixo do processo zifóide. Usando técnicaestéril, uma pequena incisão de 1,5 a 2 cm é feita abaixo do esterno e o lóbulolateral esquerdo do fígado exteriorizado. Usando seda 4-0, um laço é feito emtorno do lobo inferior segurando-o fora da cavidade corporal. Um grampoatraumático é usado para manter o laço enquanto que um segundo laço deDexon absorvível (American Cyanamid; Wayne, N. J.) é colocado próximoao primeiro laço. Um corte distai é feito a partir do laço de Dexon eaproximadamente 100 mg do tecido hepático excisado são colocados em umaplaca de petri estéril. A seção de fígado excisada é transferida a um tubo defundo redondo de polipropileno de 14 ml e subtamente congelado emnitrogênio líquido e depois armazenado em gelo seco. O local cirúrgico éfechado com sutura e clipes de ferimento e a gaiola do animal colocada emuma almofada de aquecimento a 37°C por 24 horas após a operação. O animalé checado diariamente após a operação e os clipes de ferimento removidos de7 a 10 dias depois da cirurgia. O nível de expressão de mRNA de ILA-17RC éexaminado para cada camundongo transgênico usando um ensaio dehibridização de solução de RNA ou reação da cadeia da polimerase.

Além de produzir camundongos transgênicos que super-expressam ILA-17F, ILA-17A, ILA-17RA ou ILA-17RC, o mesmo é útil paraengendrar camundongos transgênicos com expressão anormalmente baixa ounenhuma de qualquer destes genes. Tais camundongos transgênicos fornecemmodelos úteis para doenças associadas com uma falta de ILA-17F, ILA-17A,ILA-17RA ou ILA-17RC. Como debatido acima, a expressão de gene deILA-17RC pode ser inibida usando genes de anti-sentido, genes de ribozimaou genes guia de seqüência externa. Por exemplo, para produzir camundongostransgênicos que subexpressam o gene ILA-17RC, tais seqüências inibidorassão alvejadas ao mRNA de ILA-17RC. Os métodos para produzircamundongos transgênicos que têm expressão anormalmente baixa de umgene particular são conhecidos por aqueles na técnica (ver, por exemplo, Wuet ai., "Gene Underexpression in Cultured Cells and Animais by AntisenseDNA and RNA Strategies," em Methods in Gene Biotechnology, páginas205-224 (CRC Press 1997)).

Um método alternativo para produzir camundongostransgênicos que têm pouca ou nenhuma expressão de gene ILA-17RC é gerarcamundongos tendo pelo menos um alelo de ILA-17RC normal substituídopor um gene de ILA-17RC não funcionais. Um método de planejar um genede ILA-17RC não funcional é inserir um outro gene, tal como um genemarcador selecionável, dentro de uma molécula de ácido nucleico quecodifica ILA-17RC. Os métodos padrão para produzir estes chamados"camundongos silenciados" são conhecidos por aqueles habilitados na técnica(ver, por exemplo, Jacob, "Expression and Knockout of Interferons inTransgenic Mice," em Overexpression and Knockout of Cytokines inTransgenic Mice, Jacob (ed.), páginas 111-124 (Academic Press, Ltd. 1994) eWu et al., "New Strategies for Gene Knockout," em Methods in GeneBiotechnology, páginas 339-365 (CRC Press 1997)).

A invenção é ainda ilustrada pelos seguintes exemplos nãolimitante.

EXEMPLO 1

Expressão do Gene ILA-17RC

As análises de Northern foram realizadas usando HumanMultiple Tissue Blots (Clontech Laboratories, Inc., Palo Alto, CA). Duassondas foram geradas a partir dos produtos de PCR purificados em gel. Aprimeira sonda foi fabricada usando ZC21798 (5' CGG CGT GGT GGT CTTGCT CTT 3'; SEQ ID NO: 8) e ZC21808 (5' TCC CGT CCC CCG CCCCAG GTC 3'; SEQ ID NO: 31) como iniciadores. A sonda foi umaradioativamente rotulada usando o kit de rotulação Multiprime da Amersham(Arlington Heights, IL) de acordo com o protocolo do fabricante. A sonda foipurificada usando uma coluna de compresão NucTrap (Stratagene, La Jolla,CA). Solução ExpressHib (Clontech) foi usada para a pré-hibridização esoluções de hibridização para as northern blots. A hibridização ocorreudurante a noite a 65°C. A seguir da hibridização, as manchas foram lavadaspor 30 minutos cada em soluções que contiveram 0,1% de SDS e SSC comosegue: duas vezes em 2x SSC na temperatura ambiente, três vezes em 0,lxSSC a 50°C, uma vez em 0,lx SSC at 55°C e uma vez em 0,lx SSC a 65°C.

Os resultados demonstraram que o gene ILA-17RC é fortemente expressadonos tecidos da tireóide, glândula adrenal, próstata e fígado e expressado emum grau menor nos tecidos do coração, intestino delgado, estômago etraquéia. Ao contrário, existe pouca ou nenhum expressão no cérebro,placenta, pulmão, músculo esqueletal, rim, pâncreas, baço, timo, testículo,ovário, cólon, leucócitos dè sangue periférico, medula espinhal, linfônodo emedula óssea.

EXEMPLO 2

Distribuição de mRNA em painéis de Linhagem de célula Usando PCR

O RNA Total foi purificado a partir das linhas de célula emrepouso e estimuladas cultivadas "em casa" e purificadas usando um kitRNeasy da Qiagen (Valencia, CA) de acordo com as instruções do fabricanteou um protocolo de purificação de ácido-fenol (Chomczynski e Sacchi,Analytical Biochemistry, 162: 156-9, 1987). A qualidade do RNA foiavaliada conduzindo-se uma alíquota em um Agilent Bioanalyzer. Se o RNAfoi significantemente degradado, o mesmo não foi usado para a criaçãosubseqüente do cDNA do primeiro filamento. A presença de DNA genômicocontaminante foi avaliada por um ensaio de PCR em uma alíquota do RNAcom zc41011 (5'CTCTCCATCCTTATCTTTCA TCAAC 3'; SEQ ID NO:

32) e zc41012 (5'CTCTCTGCTGGCTA AACAAAACAC 3'; SEQ ID NO:33), os iniciadores que amplificam um único sítio de DNA genômicointergênico. As condições de PCR para o ensao de DNA genômicocontaminante foram como segue: 2,5 μΐ de tampão IOX e 0,5 μΐ de mistura decDNA polimerase Advantage 2 (BD Biosciences Clontech, Palo Alto, CA), 2μl de mistura de dNTP a 2,5 mM (Applied Biosystems, Foster City, CA), 2,5μl de 10X Rediload (Invitrogen, Carlsbad, CA) e 0,5 μΐ de zc41011 e zc41012a 20 μΜ, em um volume final de 25 μΐ. os parâmetros de ciclagem foram94°C 20", 40 ciclos de 94°C 20" 60°C 1'20" e um ciclo de 72°C T. 10 μΐ decada reação foi submetida à eletroforese em gel de agarose e os géis foramexaminados quanto a presença de um produto de PCR do DNA genômicocontaminante. Se o DNA genômico contaminante foi observado, o RNA totalfoi DNAsed usando reagentes isentos de DNA (Ambion, Inc, Austin, TX) deacordo com as instruções do fabricante, depois retestados como descritoacima. Apenas RNAs que pareceram ser livres de DNA genômicocontaminante foram usados para a criação subseqüente de cDNA do primeirofilamento.

20 μg de RNA total de 82 linhagens de célula humana foramcada uma levada a 98 μl com H2O, depois divididas em duas alíquotas de 49μl, cada uma contendo 10 μg de RNA total e colocada em duas placas de PCRde 96 reservatórios. A cada alíquota foram adicionados reagentes para asíntese de DNA de primeiro filamento (Invitrogen First Strand cDNASynthesis System, Carlsbad, CA): 20 μl de MgCl2 25 mM, 10 μl de tampão10X RT, 10 μl de DTT 0,1 M, 2 μl de oligo dT, 2 μl de RNAseOut. Depois, auma alíquota de cada linhagem de célula 2 μl de Transcriptase ReversaSuperscript II foram adicionados e à linhagem de célula correspondentealíquota de 2 μΐ de H2O foi adicionada para fabricar um controle deTranscriptase Reversa negativo. Todas as amostras foram incubadas comosegue: 250C 10', 42°C 50', 70°C 15'. As amostras foram dipostas em placasde reservatório profundo e diluídas a 1,7 ml com H2O. Um robô Multipette(Saigan) foi usado para aliquotar 16,5 μl em cada reservatório de uma placade PCR de 96 reservatórios múltiplas vezes, gerando numerosos painéis dePCR de uso único das linhas de célula, que foram depois seladas earmazenadas a -20°C. Cada reservatório nestes painéis representa o cDNA doprimeiro filamento de aproximadamente 100 ng de RNA total. As 82linhagens de célula são espalhadas através de dois painéis, série #118A e#118B. A qualidade do cDNA do primeiro filamento nos painéis foi avaliadapor um ensaio de PCR multiplex em um conjunto dos painéis usandoiniciadores para dois genes amplamente expressados, mas apenas genesmoderadamente abundante, CLTC (clatrina) e TFRC (receptor de transferrinaC). 0,5 μΐ de cada um dos iniciadores de Clatrina zc42901(5 'CTC AT ATTGCTC AACTGTGTGAAAAG 3'; SEQ ID NO: 34),zc42902(5'TAGAAGCCACCTGAACACAAATCTG3'; SEQ ID NO: 35) einiciadores de TFRC zc42599 (5'ATCTTGCGTTGTATGTTGAAAATC AATT3'; SEQ ID NO: 36), zc42600 (5'TTCTCCACCAGGTAAACAAGTCTAC3'; SEQ ID NO: 37), foram misturadoscom 2,5 μΐ de tampão IOX e 0,5 μΐ de mistura de cDNA polimeraseAdvantage 2 (BD Biosciences Clontech, Palo Alto, CA), 2 μΐ de mistura dedNTP 2,5 mM (Applied Biosystems, Foster City, CA), 2,5 μΐ de IOXRediload (Invitrogen, Carlsbad, CA) e adicionado a cada reservatório de umpainel da série #118A e série #118B. os parâmetros de ciclagem foram comosegue: 94°C 20", 35 ciclos de 94°C 20", 67°C 80" e um ciclo de 12°C T. 10μΐ de cada reação foi submetida à eletroforese em gel de agarose e os géisforam contados quanto a presença de um produto de PCR robusto para cadagene específico aos reservatórios +RT para cada linhagem de célula.

A expressão de mRNA nos painéis de cDNA do primeirofilamento humano para ILA-17RC foi ensaiado pela PCR com oligo desentido ZC42756 (5'ctctccaggcccaagtcgtgctct3'; SEQ ID NO: 38) e oligo deanti-sentido ZC42757 (5'ttgtcctgggggcctcgtg tctcc3'; SEQ ID NO: 39) sobestas condições de PCR por amostra: 2,5 μΐ de tampão IOX e 0,5 μΐ demistura de cDNA polimerase Advantage 2 (BD Biosciences Clontech, PaloAlto, CA), 2 μΐ de mistura de dNTP 2,5 mM (Applied Biosystems), 2,5 μΐIOX Rediload (Invitrogen, Carlsbad, CA) e 0,5 μΐ de cada iniciador de sentidoe anti-sentido 20 μΜ. As condições de ciclagem foram 94°C 2', 35 ciclos de94°C 1', 66°C 30", 72°C 1,5' e um ciclo de 12°C T. 10 μΐ de cada reaçãoforam submetidos à eletroforese em gel de agarose e os géis foram contadosquanto a expressão positiva ou negativa de ILA-17RC.

O mRNA de ILA-17RC é amplamente expressado em muitaslinhagens de célula que representam um amplo espectro de tipos de tecido ecélula. Em particular, a ILA-17RC é compatívelmente expressada emlinhagens de célula de sangue periférico de célula não T, incluindo monócitos,células B e células da linhagem mielóide. Também, o mRNA de ILA-17RC éconfiavelmente expressado nas linhagens de célula derivadas da pele. Outraslinhagens de célula que expressam ILA-17RC são todas 5 das linhagens decélula do intestino grosso que estavam presentes na série.

EXEMPLO 3

Distribuição de mRNA em Painéis de Linhagem de Célula deCamundongo Usando RT PCR

O RNA total foi purificado de 60 linhagens de célula emrepouso e estimuladas cultivadas "em casa" e purificadas usando um kitRNeasy da Qiagen (Valencia, CA) de acordo com as instruções do fabricante,um protocolo de purificação de ácido-fenol (Chomczynski e Sacchi,Analytical BioChemistry, 162: 156-9, 1987) ou um protocolo de reagente deTrizol (Invitrogen, Carlsbad, CA).

5 μg de RNA total de cada linhagem de célula foram dipostosem uma placa de 96 reservatórios de reservatório profundo, 125 μΐ de NaOAc3M e 100 μΐ de Pellet Paint (Novagen, Madison, WI)) foram adicionados acada reservatório, depois o volume final foi ajustado a 1,25 ml com H2O. Umrobo Multipette (Saigan) foi usado para aliquotar 25 μΐ da mistura do RNAseguidos por 75 μΐ de EtOH em cada reservatório de uma placa de PCR de 96reservatórios múltiplas vezes, gerando numerosos painéis de RT PCR de usoúnico das linhagens de célula, que foram depois seladas e armazenadas a -20°C. A triagem pela RT PCR foi realizada primeiro centrifugando-se umpainel em uma centrífuga de 96 reservatórios da Qiagen (Valencia, CA) por10' a 6000 RPM. O sobrenadante foi removido invertendo-se a placa sobrepapel absorvente. As pelotas de RNA foram lavadas com 100 μΐ de EtOH a70%, seguidos por uma centrifugação de 5' a 6000 RPM. O sobrenadante foimais uma vez removida e as placas deixadas secar ao ar até que o EtOHremanescente foi evaporado. As pelotas de RNA foram recolocadas emsuspensão em 15 μΐ de H2O.A expressão de mRNA de ILA-17RC nos painéis de RNA delinhagem de célula de camundongo foi ensaiada pela RT PCR com zc38910(5'acgaagcccaggtaccagaaagag3'; SEQ ID NO: 40) e zc38679(5'aaaagcgccgcagccaagagtagg3'; SEQ ID NO: 41) sob estas condições de RTPCR por amostra: kit SuperScript A-Step PCR com Platinum Taq, Invitrogen,Carlsbad, CA. As condições de ciclagem foram: 1 ciclo de 48°C por 30minutos, 94°C por 2 minutos, seguido por 35 ciclos de 94°C por 15 segundos,55°C por 30 segundos, 72°C por 1,5 minuto, seguido por 1 ciclo de 72°C por7 minutos. 10 μl de cada reação foram submetidos à eletroforese em gel deagarose e os géis foram contados quanto a expressão positiva ou negativa deILA-17RC.

A ILA-17RCmRNA de murino é expressada em diversaslinhagens de célula de camundongo, notavelmente em linhagens de céluladerivadas de medula óssea, incluindo linhagens de célula de osteoblasto,adipócito e pré-adipócito. Também, camundongo ILA-17RC é mRNA érepresentado em diversas amostras do sistema endócrino, tal como linhagensde célula estrômicas do pâncreas, linhagens de célula da ilhota pancreática elinhagens de célula do hipotálamo, glândula salivar e testículos.

EXEMPLO 4

Redobra e Purificação de pILA-17F Produzido na E. coli

A) Isolação e extração de corpo de inclusão de pILA-17F

A seguir da indução da expressão da proteína em cultura defermentação de batelada ou de frasco agitador, o caldo da E. coli écentrifugado em garrafas de 1 litro @ 3000 RPM em um rotor de cestooscilante Sorvall. A lavagem da pasta de célula para remover quaisquercontaminantes do caldo é realizada com 50 mM de Tris pH 8,0 contendo 200mM de NaCl e 5 mM de EDTA até que o sobrenadante esteja claro.

As pelotas celulares são depois colocadas em suspensão emtampão de Iise gelado (50 mM de Tris pH 8,0; 5 mM de EDTA; 200 mM deNaCl5 10% de sacarose (p/v); 5 mM de DTT; 5 mM de Benzamidina) a 10-20unidades de Densidade Otica a 600 nm. Esta pasta fluida é depois submetida a3 passadas a 8500-9000 psi em um Homogeneizador APV 2000 Labcongelado produzindo um lisado de célula rompido. A fração insolúvel(corpos de inclusão) é recuperado pela centrifugação do lisado de célula a20.000 X G por 1 hora a 4°C.

A pelota do corpo de inclusão resultante do giro a 20.000 X Gé pesada e depois recolocada em suspensão em tampão de lavagem (50 mMde Tris pH 8 contendo 200 mM de NaCl, 5 mM de EDTA, 5 mM de DTT, 5mM de Benzamidina) a 10 ml de tampão de lavagem por grama de corpos deinclusão. A dispersão completa é obtida homogeneizando-se com um geradorde rotor estator da OMNI International. Esta suspensão é centrifugada a20.000 X G por 30 minutos a 4°C. O ciclo de lavagem é repetido 3 a 5 vezesaté que o sobrenadante fosse claro.

A pelota lavada final é solubilizada em Guanidina HCl a 7 Mem 40 mM de tampão Tris no pH 8 contendo 0,1 M de Sulfito de sódio e 0,02M de Tetrationato de Sódio. A extração e reação de sulfitólise é deixadaprocessar com agitação suave a 4°C durante a noite. A solução de cor rósearesultante é centrifugada a 35.000 X g por 1 hora a 4°C e o sobrenadanteclarificado, contendo a pILA-17F solúvel, é filtrado em 0,45 μηι.

Β) Procedimento de redobra de pILA-17F

O pILA-17F solubilizado, sulfitolisado é redobrado peladiluição às gotas em tampão de redobra gelado contendo 55 mM de MES,10,56 mM de NaCl, 0,44 mM de KCl5 0,055% de PEG (3400 K), 1,1 mM deEDTA, 20% de Glicerol, 0,5 M de Guanidina HCl, 0,75 M de Arginina e opar de redox de Glutationa a uma razão 1:1 (1 mM de GSH: 1 mM de GSSG).O pH do tampão de redobra é ajustado a 6,5 com HCl e o pILA-17F éadicionado a uma concentração final de 100 μg/ml. Uma vez diluída, amistura é deixada agitar lentamente no ambiente frio por 72 horas.C) Recuperação & purificação de produto

A pILA-17F redobrada é concentrada IOX vs. uma membranade corte de 10 kDa em um sistema TFF em escala de lab. Em seguida amesma é filtrada usando uma membrana de 0,45 mícron e o pH é ajustado a5,1 com a adição de Acido acético. O material ajustado no pH é capturadopela cromatografia de troca iônica em uma coluna de Fluxo RápidoPharmacia SP equilibrada em tampão de Acetato a 50 mM, pH 5,1. A pILA-17F é carregada pelo proporcionamento em linha a 1:5 com tampão deequilíbrio a uma taxa de fluxo de 190 cm/h. Esta diluição diminui aconcentração iônica permitindo a ligação eficiente do alvo à matriz. Depoisque o carregamento da amostra estiver completo, a coluna é lavada até aabsorbância de referência com tampão de equilíbrio. A coluna é lavada comNaCl 0,4 M em 50 mM de tampão de Acetato no pH 5,1 e depois a proteínaligada é eluída com um gradiente de 5 CV de NaCl de 0,4 M a 1,5 M em 50mM de Tampão de Acetato no pH 5,1. A proteína elui em NaCl ~ IM e éaproximadamente 85% dimérico pela análise de SDS PAGE das fraçõeseluídas. As frações contendo pILA-17F são reunidas e concentradas contrauma membrana de ultrafiltração de corte de 10 kDa usando uma célulaagitada Amicon na preparação para a purificação final e troca de tampão pelacromatografia de exclusão de tamanho.

D) Troca de tampão por exclusão de tamanho e formulação

A reunião de cátion concentrada (em um volume de 3 a 4% deCV) é injetado a uma taxa de fluxo de 30 cm/h em uma coluna de exclusão detamanho Superdex 75 da Pharmacia equilibrada em 50 mM de tampão deFosfato de sódio contendo 109 mM de NaCl, pH 7,2. O pico do eluídosimétrico contendo o produto é diluído a uma concentração de 1 mg/ml em 50mM de Tampão de Fosfato de Sódio contendo 109 mM de NaCl, pH 7,2.

Finalmente a pILA-17F é filtrada estéril a 0,2 mícron, aliquotada earmazenada a -80°C. O rendimento de processo final é de 20%.EXEMPLO 5

Construção de Construto de Expressão de ILA-17RC Solúvel deMamífero

Um construto de expressão contendo ILA-17RC[L21-K451]-mFcl humano (camundongo BALB/c μ2ά Fe) é construído por intermédio daPCR de sobreposição e recombinação homóloga usando um fragmento deDNA (SEQ ID NO: 42) que codifica um polipeptídeo de ILA-17RC (SEQ IDNO: 43), um fragmento de DNA que codificam mFcl (SEQ ID NO: 44) e ovetor de expressão pZMP20. Os fragmentos são gerados pela amplificaçãopelaPCR.

O fragmento de PCR que codifica ILA-17RC[L21-K451]contém uma sobreposição 5' com a seqüência do vetor pZMP20 na regiãocodificadora da seqüência líder da secreção pre-pro do ativador deplasminogênio tecidual otimizado, o domínio extracelular de ILA-17RC quecodifica [L21-K451] e uma sobreposição 3' com a região codificadora mFcl.A reação de amplificação de PCR usa o oligonucleotídeo 5'[GTTTCGCTCAGCCAGGAAATCCATGCCGAGTTGAGACGCTTCCGTAGACTGGAGAGGCTTGTGGGGCCT; SEQ ID NO: 46], ooligonucleotídeo 3' [TGTGGGCCCTCTGGGCTCCTTGTGGATGTATTTGTC; SEQ ID NO: 47] e um clone de DNA antecipadamente gerado de ILA-17RC como o padrão.

O fragmento de PCR que codifica mFcl contém umasobreposição 5' com a seqüência de ILA-17RC, a região codificadora demFcl e uma sobreposição 3' com o vetor pZMP20 na região do síotio deentrada de ribossoma interno de poliovírus. A reação de amplificação pelaPCR usa o oligonucleotídeo 5' [GACAAATACATCCACAAGGAGCCCAGAGGGCCCACA; SEQ ID NO: 48], o oligonucleotídeo 3' [CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTATTTACCCGGAGTCCGGGA; SEQ ID NO: 49] e um clone de DNA antecipadamente gerado de mFclcomo o padrão.

As condições de reação de amplificação pela PCR são comosegue: 1 ciclo, 94°C, 5 minutos; 35 ciclos, 94°C, 1 minuto, seguido por 55°C,2 minutos, seguido por 72°C, 3 minutos; 1 ciclo, 72°C, 10 minutos. Asmisturas de reação de PCR são conduzidas em um gel de agarose a 1% e osfragmentos de DNA que corresponde aos tamanhos esperados são extraídosdo gel usando um Kit de Extração em Gel QIAquick® (Qiagen, Cat. N228704).

Os dois fragmentos de PCR são unidos pela PCR desobreposição. Aproximadamente 1 μΐ de cada um dos dois fragmentosextraídos em gel são combinados em uma reação de amplificação de PCRusando o oligonucleotídeo 5' [GTTTCGCTCAGCCAGGAAATCCATGCCGAGTTGAGACGCTTCCGTAGACTGGAGAGGCTTGTGGGGCCT;SEQ ID NO: 46] e o oligonucleotídeo 3' [CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTATTTACCCGGAGTCCGGGA; SEQ ID NO: 49].As condições de PCR usadas são como segue: 1 ciclo, 94°C, 5 minutos; 35ciclos, 94°C, 1 minuto, seguido por 55°C, 2 minutos, seguido por 72°C, 3minutos; 1 ciclo, 72°C, 10 minutos. A mistura da reação de PCR é conduzidaem um gel de agarose a 1% e o fragmento de DNA que corresponde aotamanho do inserto é extraído do gel usando um Kit de Extração em GelQIAquick® (Qiagen, Cat. N^ 28704).

Plasmídeo pZMP20 é um vetor de expressão mamíferocontendo um cassete de expressão tendo o promotor MPSV, um sítio BglIIpara a linearização antes da recombinação de levedura, uma seqüência depeptídeo de sinal otPA, um elemento de entrada de ribossoma interno depoliovírus, o domínio extracelular de CD8 truncado na extremidade doterminal C do domínio de transmembrana; uma origem E. coli de replicação;uma unidade de expressão de marcador selecionável de mamífero quecompreende um promotor, realçador e origem de replicação de SV40, umgene DHFR e o terminador SV40; e as seqüências URA3 e CEN-ARSrequeridas para a selecção e replicação na S. cerevisiae.

O plasmídeo pZMP20 é digerido com BglII antes darecombinação na levedura com o fragmento de PCR ILA-17RC[L21-K451]-mFcl extraído em gel. 100 μl de células competentes de levedura (S.cerevisiae) são combinadas com 10 μl do DNA de inserto de ILA-17RC[L21-K451]-mFcl e 100 ng de vetor pZMP20 digerido com BglII e a mistura étransferida a uma cubeta de eletroporação de 0,2 cm. A mistura delevedura/DNA é eletropulsada usando ajustes de suprimento de energia(BioRad Laboratories, Hercules, CA) de 0,75 kV (5 kV/cm), oo ohms e 25 μΡ.Seiscentos μΐ de sorbitol 1,2 M são adicionados à cubeta e a levedura éplaqueada em 100 μΐ e alíquotas de 300 μΐ em duas placas URA-D eincubadas a 30°C. Depois de cerca de 72 horas, os transformantes de leveduraUra+ de uma única placa são recolocados em suspensão em 1 ml de H2O egirados ligeiramente para pelotizar as células de levedura. A pelota de célula érecolocada em suspensão em 0,5 ml de tampão de Iise (2% de Triton X-100,1% de SDS, 100 mM de NaCl, IOmMde Tris, pH 8,0, 1 mM de EDTA). Osquinhentos μl da mistura de Iise são adicionados a um tubo de Eppendorfcontendo 250 μl de pérolas de vidro lavadas com ácido e 300 μΐ de fenol-clorofórmio, são turbilhonados por 3 minutos e girados por 5 minutos em umacentrífuga Eppendorf na velocidade máxima. Trezentos μl da fase aquosa sãotransferidos a um tubo novo e o DNA é precipitado com 600 μl de etanol,seguido por centrifugação por 30 minutos na velocidade máxima. O tubo édecantado e a pelota é lavada com 1 ml de etanol a 70%. O tubo é decantado ea pelota de DNA é recolocada em suspensão em 30 μΐ de TrislO mM, pH 8,0,1 mM de EDTA.

A transformação de células hospedeiras de E. colieletrocompententes (DH12S) é feita usando 5 μl da preparação de DNA delevedura e 50 μl de células de E. coli. As células são eletropulsadas a 2,0 kV,25 μΡ e 400 ohms. A seguir da eletroporação, 1 ml de SOC (Bacto™ Triptonaa 2% (Difco, Detroit, MI), 0,5% de extrato de levedura (Difco), 10 mM deNaCl, 2,5 mM de KCl, 10 mM de MgCl2, 10 mM de MgSO4, 20 mM deglicose) é adicionado e depois as células são plaqueada em alíquotas de 50 μΐe 200 μΐ em duas placas LB AMP (caldo LB (Lennox), 1,8% de Bacto™ Ágar(Difco), 100 mg/L de Ampicilina).

Os insertos de três clones de DNA para o construto sãosubmetidos à análise de seqüência e um clone contendo a seqüência correta éselecionado. O DNA plasmídeo em escala grande é isolado usando um kitcomercialmente disponível (Kit QIAGEN Plasmid Mega, Qiagen, Valencia,CA) de acordo com as instruções do fabricante.EXEMPLO 6

Construcção de Construto de Expressão de ILA-17RC Solúvel deMamífero que Expressa ILA-17RC-CEE, ILA-17RC-CHIS e ILA-17RC-CFLAG

Um construto de expressão contendo ILA-17RC[L21-K451]humana com um rótulo de terminal C, Glu-Glu (CEE), seis His (CHIS) ouFLAG (CFLAG), é construído por intermédio da PCR e recombinaçãohomóloga usando um Jfragmento de DNA que codifica ILA-17RC[L21-K451](SEQ ID NO: 42) e o vetor de expressão pZMP20.

O fragmento de PCR que codifica ILA-17RCCEE contém umasobreposição em 5' com a seqüência de vetor pZMP20 na região codificadorada seqüência líder de secreção pre-pro do ativador de plasminogênio de tecidootimizados, o domínio extracelular ILA-17RC [L21-K451], a seqüência dorótulo Glu-Glu (Glu Glu Tyr Met Pro Met Glu; SEQ ID NO: 53) e umasobreposição 3' com o vetor pZMP20 na região do sítio de entrada doribossoma interno de poliovírus. A reação de amplificação de PCR usa ooligonucleotídeo 5' [GTTTCGCTCAGCCAGGAAATCCATGCCGAGTTGAGACGCTTCCGTAGACTGGAGAGGCTTGTGGGGCCT; SEQ ID NO: 46], o oligonucleotídeo 3' [CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTATTCCATGGGCATGTATTCTTCCTTGTGGATGTATTTGTC; SEQ ID NO: 50] e um clone de DNAantecipadamente gerado de ILA-17RC como o padrão.

A condição de reação de amplificação de PCR é como segue: 1ciclo, 94°C, 5 minutos; 35 ciclos, 94°C, 1 minuto, seguido por 55°C, 2minutos, seguido por 72°C, 3 minutos; 1 ciclo, 72°C, 10 minutos. A misturade reação de PCR é conduzida em um gel de agarose a 1% e o fragmento deDNA que corresponde ao tamanho esperado é extraído do gel usando um Kitde Extração em Gel QIAquick® (Qiagen, Cat. N- 28704).

O plasmídeo pZMP20 é digerido com BglII antes darecombinação em levedura com o fragmento de PCR ILA-17RCCEE gelextraído. Cem μΐ de células de levedura (S. cerevisiae) competentes sãocombinados com 10 μΐ do DNA de inserto de ILA-17RCCEE e 100 ng devetor pZMP20 digerido com BglII e a mistura é transferida a uma cubeta deeletroporação de 0,2 cm. A mistura de levedura/DNA é eletropulsada usandoajuistes de fornecimento de energia (BioRad Laboratories, Hercules, CA) de0,75 kV (5 kV/cm), oo ohms e 25 μΡ. Seiscentos μΐ de sorbitol 1,2 M sãoadicionados à cubeta e a levedura é plaqueada em alíquotas de 100 μΐ e 300 μΐem duas placas URA-D e incubados a 30°C. Depois de cerca de 72 horas, ostransformantes de levedura Ura+ de uma única placa são recolocadas emsuspensão em 1 ml de H2O e brevemente giradas para pelotizar as células delevedura. A pelota de célula é recolocada em suspensão em 0,5 ml de tampãode Iise (2% de Triton X-100, 1% de SDS, 100 mM de NaCl, IOmMde Tris,pH 8,0, 1 mM de EDTA). Os quinhentos μΐ da mistura de Iise é adicionada aum tubo de Eppendorf contendo 250 μΐ de pérolas de vidro lavadas com ácidoe 300 μΐ de fenol-clorofórmio, é turbilhonado por 3 minutos e girados por 5minutos em uma centrífuga de Eppendorf na velocidade máxima. Trezentosμl da fase aquosa é transferida a um tubo novo e o DNA é precipitado com600 μl de etanol, seguido por centrifugação por 30 minutos na velocidademáxima. O tubo é decantado e a pelota é lavada com 1 ml de etanol a 70%. Otubo é decantado e a pelota de DNA é recolocada em suspensão em 30 μl deTris a 10 mM, pH 8,0, 1 mM de EDTA.

A transformação de células hospedeiras de E. colieletrocompetentes (DH12S) é feita usando 5 μl da preparação de DNA delevedura e 50 μl de células E. coli. As células são eletropulsadas a 2,0 kV, 25μΡ e 400 ohms. A seguir da eletroporação, 1 ml de SOC (Bacto® Triptona a2% (Difco, Detroit, MI), 0,5% de extrato de levedura (Difco), 10 mM deNaCl, 2,5 mM de KCl, 10 mM de MgCl2, 10 mM de MgSO4, 20 mM deglicose) é adicionado e depois as células são plaqueada em 50 μl e 200 μl dealíquotas em duas placas LB AMP (caldo LB (Lennox), 1,8% de Bacto® Ágar(Difco), 100 mg/L de Ampicilina).

Os insertos de três clones de DNA para o construto sãosubmetidos à análise de seqüência e um clone contendo a seqüência correta éselecionado. O DNA plasmídico em escala grande é isolado usando um kitcomercialmente disponível (Kit QIAGEN Plasmid Mega, Qiagen, Valencia,CA) de acordo com as instruções do fabricante.

O mesmo processo é usado para preparar o ILA-17RC com umrótulo his de terminal C, composto de Gly Ser Gly Gly His His His His HisHis (ILA-17RCCHIS; SEQ ID NO: 51) ou o rótulo FLAG de terminal C,composto de Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys (ILA-17RCCFLAG; SEQ ID NO: 52). Para preparar estes construtos, ao invés dooligonucleotídeo 3' da SEQ ID NO: 50; o oligonucleotídeo 3' [CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTAGTGATGGTGATGGTGATGTCCACCAGATCCCTTGTGGATGTATTTGTC; SEQ ID NO: 54] éusado para gerar ILA-17RCCHIS ou o oligonucleotídeo 3' [CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTACTTATCATCATCATCCTTATAATCGGATCCCTTGTGGATGTATTTGTC; SEQ ID NO: 55] é usadopara gerar ILA-17RCCFLAG.

EXEMPLO 7

Transfecção e Expressão de Construtos de Expressão de Receptor deILA-17RC Solúvel que Expressam a Proteína de Fusão ILA-17RC-mFcle as proteínas Alvejadas de Terminal C ILA-17RC-CEE, ILA-17RC-CHIS e ILA-17RC-CFLAG

Três conjuntos de 200 μg de cada um dos construtos deexpressão de ILA-17RC de fusão ou alvejado solúveis são separadamentedigeridos com 200 unidades de PvuI a 37°C por três horas, precipitados comálcool isopropílico e centrifugados em um tubo de microcentrífuga de 1,5 ml.O sobrenadante é separado por decantação da pelota e a pelota é lavada com 1ml de etanol a 70% e deixado incubar por 5 minutos na temperatura ambiente.O tubo é girado em uma microcentrífuga por 10 minutos a 14.000 RPM e osobrenadante é separado por decantação da pelota. A pelota é depoisrecolocada em suspensão em 750 μΐ de meio de cultura de tecido de célulaCHO em um ambiente estéril, deixados incubar a 60°C por 30 minutos e sãodeixados esfriar até a temperatura ambiente. Aproximadamente 5 χ IO6células CHO são pelotadas em cada um dos três tubos e são recolocadas emsuspensão usando a solução de DNA-meio. As misturas de DNA/célula sãocolocadas em uma cubeta de 0,4 cm de intervalo e eletroporadas usando osseguintes parâmetros; 950 μΡ, capacitância alta, a 300 V. Os conteúdos dascubetas são depois removidos, reunidos e diluídos a 25 ml com meio decultura de tecido de célula CHO e colocados em um frasco de agitação de 125ml. O frasco é colocado em um incubador em um agitador a 37 °C, 6% deCO2 com agitação a 120 RPM.

As células CHO são submetidas à seleção de nutriente seguidopela etapa de amplificação a 200 nM de metotrexato (MTX) e depois a 1 μΜde MTX. A expressão da proteína de fusão ou alvejada é confirmada pelaWestern blot e a reunião de célula CHO é adaptada para colheitas para apurificação de proteína.

EXEMPLO 8

Expressão de ILA-17RC Solúvel

Um plasmídeo de expressão contendo ILA-17RC-Tbx-C(Fc9)(SEQ ID NO: 64) foi construído por intermédio da recombinação homólogausando um fragmento de DNA de ILA-17RC Tbx e o vetor de expressãopZMP40. O fragmento foi gerado pela amplificação pela PCR usandoiniciadores zc44531 e zc44545.

O fragmento de PCR ILA-17RC Tbx contém uma regiãocodificadora extracelular de domínio de ILA-17RC parcial, que foi fabricadausando um clone antecipadamente gerado de ILA-17RC como o padrão. Ofragmento inclui uma sobreposição 5' com a seqüência de vetor pZMP40 naregião codificadora otPA, o segmento ILA-17RC (resíduo de aminoácido 21a451 da SEQ ID NO: 2), uma seqüência ligadora, um sítio de clivagem detrombina e uma sobreposição 3' com o vetor pZMP40 na região codificadoraFc9. As condições de PCR usadas foram como segue: 1 ciclo, 94°C, 5minutos; 35 ciclos, 94°C, 1 minuto, seguido por 55°C, 2 minutos, seguido por72°C, 3 minutos; 1 ciclo, 72°C, 10 minutos.

As misturas de reação de PCR foram conduzidas em um gel deagarose a 1% e uma faixa que corresponde aos tamanhos dos insertos foramextraídos em gel usando um Kit de Extração em Gel QIAquick® (Qiagen, Cat.N- 28704).

O plasmídeo pZMP40 é um vetor de expressão de mamíferocontendo um cassete de expressão tendo o promotor MPSV, sítios de restriçãomúltiplos para a inserção de seqüências codificadoras, uma seqüência depeptídeo de sinal otPA e a seqüência para Fc9; um elemento de sítio deentrada de ribossoma interno (IRES) de poliovírus e o domínio extracelular deCD8 truncado na extremidade de terminal C do domínio de transmembrana;uma origem E. coli de replicação; uma unidade de expressão de marcadorselecionável de mamífero que compreende um promotor, realçador e origemde replicação de SV40, um gene DHFR e o terminador SV40; e as seqüênciasURA3 e CEN-ARS requeridas para a seleção e replicação em S. cerevisiae.Foi construído a partir de pZMP21 (Patent Pub. Ns US 2003/0232414 Al;depositada na American Type Culture Collection e designado como ATCC#PTA-5266).

O plasmídeo pZMP40 foi cortado com BglII antes darecombinação em levedura com o fragmento de PCR. Cem microlítros decélulas de levedura (S. cerevisiae) competentes foram independentementecombinados com 10 μΐ do DNA do inserto (SEQ ID NO: 66) e 100 ng devetor de pZMP40 de corte e a mistura foi transferida a uma cubeta deeletroporação 0,2 cm. A mistura de levedura/DNA foi eletropulsada usandoajustes de fornecimento de energia (BioRad Laboratories, Hercules, CA) de0,75 kV (5 kV/cm), oo ohms e 25 μΡ. Seiscentos μΐ de sorbitol 1,2 M foiadicionado à cubeta e a levedura foi plaqueada em uma alíquota de 100 μΐ e300 μl em duas placas URA-D e incubadas a 30°C. Depois de cerca de 72horas, os transformantes de levedura Ura+ de uma única placa foramrecolocados em suspensão em 1 ml de H2O e firados ligeiramente parapelotizar as células de levedura. A pelota de célula foi recolocada emsuspensão em 0,5 ml de tampão de Iise (2% de Triton X-100, 1% de SDS, 100mM de NaCl, 10 mM de Tris, pH 8,0, 1 mM de EDTA). Os quinhentosmicrolitros da mistura de Iise foi adicionado a um tubo de Eppendorfcontendo 250 μΐ de pérolas de vidro lavadas com ácido e 300 μΐ de fenol-clorofórmio, foram turbilhonados por 3 minutos e girados por 5 minutos emuma centrífuga Eppendorf na velocidade máxima, trezentos microlitros dafase aquosa foram transferidos a um tubo novo e o DNA foi precipitado com600 μl de etanol (EtOH), seguido por centrifugação por 30 minutos navelocidade máxima. O tubo foi decantado e a pelota foi lavada com 1 ml deetanol a 70%. O tubo foi decantado e a pelota de DNA foi recolocada emsuspensão em 30 μl de TE.

A transformação de células hospedeiras de E. colieletrocompetentes (DH12S) foi feita usando 5 μΐ da prep de DNA de levedurae 50 μl de células. As células foram eletropulsadas a 2,0 kV, 25 μΡ e 400ohms. A seguir da eletroporação, 1 ml de SOC (Bacto® Triptona a 2% (Difco,Detroit, MI), 0,5% de extrato de levedura (Difco), 10 mM de NaCl, 2,5 mMde KCl, 10 mM de MgCl2, 10 mM de MgSO4, 20 mM de glicose) foiadicionado e depois as células foram plaqueada em uma alíquota de 50 μΐ euma de 200 μΐ em duas placas de LB AMP (caldo LB (Lennox), 1,8% deBacto® Ágar (Difco), 100 mg/L de Ampicilina).

Os insertos de três clones para o construto foram submetidos àanálise de seqüência e um clone para cada construto, contendo a seqüênciacorreta, foram selecionados, o DNA plasmídico em escala grande foi isoladousando um kit comercialmente disponível (QIAGEN Plasmídeo Mega Kit,Qiagen, Valencia, CA) de acordo com as instruções do fabricante.

Três conjuntos de 200 μg do construto ILA-17RC[L21-K451]_Tbx_C(Fc9) foram depois cada um digeridos com 200 unidades dePvu I a 37°C por três horas e depois foram precipitados com IPA e giradosinfra em um tubo de microcentrífuga de 1,5 ml. O sobrenadante foi separadopor decantação da pelota e a pelota foi lavada com 1 ml de etanol a 70% edeixado incubar por 5 minutos na temperatura ambiente. O tubo foi girado emuma microcentrífuga por 10 minutos a 14.000 RPM e o sobrenadante foiseparado por decantação da pelota. A pelota foi depois recolocada emsuspensão em 750 μΐ de meio PF-CHO em um ambiente estéril, deixadoincubar a 60°C por 30 minutos e foi deixado esfriar até a temperaturaambiente. 5E6 células APFDXB11 foram giradas infra em cada um dos trêstubos e foram recolocadas em suspensão usando a solução de DNA-meio. Asmisturas de DNA/célula foram colocadas em uma cubeta de 0,4 cm deintervalo e eletroporada usando os seguintes parâmetros: 950 μΐ, capacitânciaalta e 300 V. Os conteúdos das cubetas foram depois removidos, reunidos ediluídos a 25 ml com meio PF-CHO e colocados em um frasco de agitação de125 ml. O frasco foi colocado em um incubador em um agitador a 37°C, 6%de CO2 e agitação a 120 RPM.

A linhagem de célula foi submetida à seleção em nutrienteseguida pela amplificação escalonada a 200 nM de metotrexato (MTX) edepois a 1 μΜ de MTX. A expressão foi confirmada pela western blot e alinhagem de célula foi adaptada e a purificação de proteína seguiu.

EXEMPLO 9

Purificação DE ILA-17RC Solúvel a Partir de Células CHO

Meio condicionado a partir de células CHO que expressamILA-17RC-TbX-Fc9 (SEQ ID NO: 64) foi concentrado aproximadamente 10vezes com um sistema de fluxo tangencial Pellicon-II contra dois cassetes demembrana de corte de peso molecular em 30 kD Biomax 0,1 m2 (Millipore,Bedford, MA). O meio concentrado foi ajustado no pH em 5,5 com ácidoacético glacial, filtrado estéril em 0,2 μηι depois carregado em uma resina defluxo rápido de proteína G sefarose (Pharmacia, Piscataway, NJ) porintermédio da cromatografia em batelada durante a noite a 4°C. Antes decarregar o meio condicionado ajustado no pH, a resina de Proteína G foi pré-equilibrada com 5 volumes da coluna (aproximadamente 150 ml) de acetatode sódio 25 mM, 150 mM de NaCl, pH 5,5. A razão de meio condicionadoajustado no pH, filtrado para resina foi de 33:1 (v/v).

O processo de cromatografia em batelada foi realizado natemperatura ambiente (aproximadamente 21°C). O meio condicionadoajustado no pH, em batelada, 0,22 μιη foi vertido em uma coluna de vidro de5,5 χ 20,5 cm vazia (BioRad, Hercules, CA) e empacotada por intermédio dagravidade. A coluna foi lavada com 10 volumes de coluna (aproximadamente300 ml) de acetato de sódio 25 mM, 150 mM de NaCl, pH 5,5. A proteínaligada foi depois eluído em pH com 100 mM de glicina, pH 2,7. Frações de9,0 ml foram coletadas e imediatamente neutralizada com 1,0 ml de Tris 2,0M, pH 8,0. As frações coletadas foram analisadas por intermédio detingimento com Coomassie em SDS-PAGE. As frações contendo ILA-17RC-Tbx-Fc9 foram reunidas e concentradas aproximadamente 6 vezes usando umconcentrador giratório de membrana Biomax de corte de peso molecular de 5kD (Millipore, Bedford, MA) de acordo com as instruções do fabricante.

As frações reunidas, concentradas foram depois dialisadas a4°C, extensivamente contra solução salina tamponada com fosfato IX, pH 7,3(Sigma, St. Louis, MO) usando uma membrana de corte de peso molecular de7 kD Slide-A-Lyzer (Pierce, Rockford, IL). ILA-17RC-TbX-Fc9 comoformulado em solução salina tamponada com fosfato lx, pH 7,3 foi filtradoestéril a 0,22 μm antes da aliquotagem e armazenamento a -80°C.

EXEMPLO 10

Ligação de ILA-17A e ILA-17F ao ILA-17RC Humano

A) Ligação de citocinas biotiniladas às células transfectadas

Células renais de Hamster Bebê (BHK) que foramtransfectadas com vetores de expressão que codificam receptor de ILA-17humano (SEQ ID NO: 21), ILA-17RC humano (SEQ ID NO: 2) ou ambosdestes receptores receptores são avaliados quanto a sua capacidade para ligarILA-17A humano biotinilada e ILA-17F humana. As células são colhidascom versene, contadas e diluídas a 107 células por ml em meio de tingimento(SM), que é HBSS mais 1 mg/ml de albumina sérica bovina (BSA), 10 mMde Hepes e 0,1% de azida de sódio (p/v). ILA-17A humano biotinilada (SEQID NO: 14) e ILA-17F humana (SEQ ID NO: 16) são incubadas com ascélulas em gelo por 30 minutos em várias concentrações. Depois de 30minutos, citocina em excesso é lavada foram com SM e as células sãoincubadas com uma diluição 1:100 de estreptavidina conjugada comficoeritrina (SA-PE) por 30 minutos em gelo. SA-PE em excesso é lavadafora e as células são analisadas pela citometria de fluxo. A quantidade deligação de citocina foi quantitaficada a partir da intensidade de fluorescênciamédia do tingimento de citocina. A partir desta análise, nós descobrimos queILA-17A humano liga tanto a ILA-17R quanto a ILA-17RC humanas a umgrau similar. Também, ILA-17F humana liga ILA-17RC a um nível similar,mas liga ILA-17R detectavelmente, mas a um nível muito mais baixo do quefoi observado com a ILA-17A.

B) Ligação de citocinas biotiniladas às células mononucleares humanas desangue periférico

As células mononucleares de sangue periférico (PBMC)humanas foram preparadas a partir do sangue integral pela centrifugação degradiente de densidade ficoll. As PBMC em 10 células por ml foramsimultaneamente incubadas com ILA-17A ou ILA-17F biotiniladas a 1 μg/mle anticorpos conjugados a fluorocromo às proteínas de superfície celularespecíficas que foram planejadas para distinguir várias linhagens de célulabranca sangüínea. Estes marcadores incluem CD4, CD8, CD19, CDl lb,CD56 e CDl6. O anticorpo e a citocina em excesso são lavadas fora e aligação de citocina específica é detectada incubando-se com SA-PE comodescrito acima. As amostras foram analisadas pela citometria de fluxo e apartir desta análise, nós descobrimos que a ILA-17A humano liga-se avirtualmente todas as populações de PBMC examinadas, mas que a ILA-17Fhumana não se liga detectavelmente a nenhuma população.

C) Inibição da ligação específica de ILA-17A e ILA-17F humanasbiotiniladas com citocina não rotulada

Os estudos de ligação são realizados como debatido acima,mas as ILA-17A e ILA-17F humanas não rotuladas em excesso são incluídasna reação de ligação. Em estudos com as células BHK, a quantidade decitocina não rotulada foi variada em uma faixa de concentrações e nósdescobrimos que a adição de ILA-17A não rotulada competiu quanto aligação tanto de ILA-17A quanto de ILA-17F tanto a ILA-17RC quanto ILA-17R. Entretanto, ILA-17F não rotulada competiu quanto a ligação tanto deILA-17A quanto de ILA-17F a ILA-17RC, mas a mesma não competeeficazmente quanto a ligação a ILA-17R. Isto indica que tanto ILA-17Aquanto ILA-17F especificamente se ligam a ILA-17RC e que eleas se ligamem um sítio que é idêntico ou se sobrepõe significantemente visto que elescompetem cruzado quanto a ligação. Também, ILA-17A compete quanto aligação relativamente fraca de ILA-17F no lugar de ILA-17R, indicando queestas duas citocinas também se ligam a uma região similar na ILA-17R, mas aILA-17F liga ILA-17R com afinidade muito reduzida em relação à ILA-17RC.

D) Inibição da ligação específica de ILA-17A e ILA-17F humana biotiniladacom ILA-17RC e ILA-17R solúvel

Os estudos de ligação são realizados como debatido acima,exceto que uma forma solúvel de ILA-17RC ou ILA-17R são incluídos nasreações de ligação. Estes receptores solúveis são proteínas de fusão derivadasdo domínio extracelular de cada receptor fundido à região (Fc) constante deIgGl humana. Nós descobrimos que a ILA-17RC solúvel inibe a ligação tantode ILA-17A quanto de ILA-17F humanas às células BHK transfectadas tantopor ILA-17R quanto por ILA-17RC. Entretanto, a ILA-17R solúvel inibe aligação de ILA-17A ao seu receptor, mas não bloqueia eficazmente a ligaçãode ILA-17F a ILA-17RC, compatível com a ligação deficiente de ILA-17F nolugar de ILA-17R.

EXEMPLO 11

Ligação de ILA-17A e ILA-17F à ILA-17RC

A) Inibição da Ligação com Ligando Frio

As células BHK transfectadas com hILA-17RC (SEQ ID NO:

2) e ILA-17R (SEQ ID NO: 21) foram plaqueadas a 40.000 células/reservatório em uma placa de 24 reservatórios (Costar 3527) dois dias antesdo ensaio. ILA-17A (SEQ ID NO: 14) e ILA-17F (SEQ ID NO: 16) queforam radiorrotuladas pelo método das pérolas de iodo foram adicionadasindependentemente dos reservatórios em triplicata a 10 ng/ml com um total de250 μl/reservatório em tampão de ligação (meio RPMI 1640 (JRH 51502-500M) com 10 mg/ml de albumina sérica bovina (Gibco 15260-037)). Oscompetidores frios foram adicionados em excesso molar de 100 vezes. Oscompetidores testados incluíram ILA-17A, ILA-17B, ILA-17C, ILA-17D,ILA-17E, ILA-17F e ILA-21. Os reservatórios foram incubados em gelo por 1hora seguido por duas lavagens com PBS (Invitrogen 20012-027) e umalavagem com uma alta solução salina (1,5 M de NaCl5 50 mM de HEPES pH7,4). Os reservatórios foram extraídos com 500 μΐ de NaOH 0,8 M por 30min. na temperatura ambiente e as contagens por minuto foram medidas emum contador gama (Packard Cobra IIA5005).

Os resultados indicaram que IOOx molar de ILA-17A e ILA-17F frios foram capazes de reduzir a ligação de iz3I ILA-17A às BHK hlLA-17RC em aproximadamente 7 vezes enquanto que ILA-17B,C,D,E e ILA-21não tiveram nenhum efeito sobre a ligação. IOOx molar de ILA-17A frioreduziram a ligação de ,ZJI ILA-17A a BHKILA-17R em aproximadamente 4vezes enquanto ILA-17B,C,D,E,F e ILA-21 não tiveram nenhum efeito sobrea ligação. 100x molar de ILA-17A e ILA-17F frios reduziram a ligação de IILA-17F a BHK hILA-17RC em aproximadamente 4 vezes e 5 vezes,respectivamente, enquanto ILA-17B,C,D,E e ILA-21 não teve nenhum efeitosobre a ligação.

B) Inibição da Ligação com Receptor Solúvel:

A ligação a hzytorl4 (SEQ ID NO: 2) e ILA-17R (SEQ IDNO: 21) de células BHK transfectadas foi realizada como em um, mas 100vezes o excesso molar de hILA-17RCxl/Fc9 solúvel (Exemplo 8) e ILA-17R/Fc solúvel (obtidas de R&D; Ref. 177-IR) foram usados no lugar deligando frio na competição. As células foram lavadas, extraídas e contadascomo na parte a.A hILA-17RC/Fc solúvel inibiu a ligação de 125ILA-17F aBHK hILA-17RC com um IC50 de excesso molar médio de 10X de trêsexperimentos. A inibição de hILA-17RC/Fc solúvel de 125I ILA-17A namesma linhagem de célula deu um IC50 médio de excesso molar de 20X e ainibição de ILA-17R/Fc solúvel de izjI ILA-17A deu um IC50 médio deexecesso molar de 20X.

C) Saturação de Ligação

As células BHK transfectadas foram plaqueadas em placas de24 reservatórios como em a. ILA-17A e ILA-17F radiorrotulados foramadicionados partindo a uma concentração de 4 nM em oito diluições 1:3 (auma concentração de 1,83 pM) em triplicata com um total de 250μl/reservatório em tampão de ligação. Separadamente, um excesso molar de 100vezes de ligando frio foi adicionado a cada ponto de diluição. As célulasforam lavadas, extraídas e contadas como em a. As contagens específicas porminuto foram plotadas contra a concentração de ligando radiorrotuladoadicionado pela subtração das contagens de 100 vezes de excesso dascontagens não competidas em cada ponto de diluição. Estes dadosnormalizados foram plotados para gerar curvas de ligação de saturação paracada combinação de ligando radiorrotulado e células BHK transfectadas. ATabela 7 mostra os valores de afinidade calculados a partir de todos os trêsexperimentos.<table>table see original document page 183</column></row><table>

Os ajustes da curva de ligação de sítio único estão maisexatamente de acordo com a ligação de ILA-17A & ILA-17F a ILA-17R. Osajustes da curva de ligação de sítio duplo estão mais exatamente de acordo"5 com a ligação de ILA-17A e ILA-17F a hILA-17RC. O sítio de ligação dealta afinidade é o valor mostrado acima. O sítio de ligação de afinidade baixateve afinidade muito baixa e variou amplamente entre os três experimentos.

EXEMPLO 12

As Células Nih3t3 de Murino Respondem à ILA-17A e ILA-17F Humano

A) Plaqueamento de célula e infecção de repórter de adenovírus kzl42.

As células Nih3t3, derivadas de fibroblastos Nih3t3 decamundongo (descritos na ATCC) foram plaqueadas a 5000 células/reservatório em placas de 96 reservatórios revestidas de cultura de célulasólida, brancas, (Cat. #3917. Costar) usando DMEM/10% de FBS, contendoglutamina e corrigida com piruvato e cultivadas durante a noite a 37°C e 5%de CO2. Neste segundo dia, o meio de plaqueamento foi removido e aspartículas de adenovírus Kz 142 em uma multiplicidade de infecção de 5000partículas/célula foram preparadas em DMEM/1% de FBS, contendoglutamina e corrigidas com piruvato e cultivadas durante a noite a 37°C e 5%de CO2.

B) Ensaio de Luciferase que mede a ativação por ILA-17A e ILA-17F decélulas nih3t3 infectadas com repórter de adenovírus kzl42.

A seguir da incubação durante a noite com o repórter departícula de adenovírus, os tratamentos de Ligando ILA-17A e ILA-17Fhumanos foram preparados em meio isento de soro ()corrigido a 28% deB SA. As partículas de adenovírus e o meio foram removidos e as doses deligando apropriadas foram dadas em triplicatas. A incubação a 37°C e 5% deCO2 foi continuada por 4 horas, depois que o meio foi removido, as célulaslisadas por 15 minutos e a intensidade de fluorescência média (MFI) medidausando o sistema de ensaio e reagentes da luciferase. (Cat.#el531 Promega.Madison, WI.) e um luminômetro de microplaca. A atividade foi detectadanas concentrações variando de 1 a 1000 ng/ml de ILA-17A e ILA-17Fhumana, gerando valores EC50 de cerca de 50 ng/ml para ambos os ligandos.Estes dados sugerem que as células nih3t3 carregam receptores para estesligandos e que ILA-17A e ILA-17F ativam o fator de transcrição NfKb/Ap-1.EXEMPLO 13

As Células Nih3t3 de Murino Expressam Tanto ILA-17RA quanto ILA-17RC

15 A análise de RTPCR de RNA de nih3t3 demonstraram que

estas células são positivas tanto para ILA-17 RA quanto ILA-17RC,compatível com a sua resposta de nfkb/apl à mediação de ILA-17A e ILA-17F humanas que é mediada através de um ou ambos destes receptores.DETALHES de RTPCR:20 A) PCR de ILA-17RC de Murino

O cDNA do primeiro filamento foi preparado a partir de RNAtotal isolado de células nih3t3 usando métodos padrão. A PCR foi aplicadausando hot star polimerase e as recomendações do fabricante (Qiagen,Valencia, CA) usando iniciador de sentido, zc38910, 5 'ACGAAGCCCAG25 GTACCAGAAAGAG 3' (SEQ ID NO: 56) e iniciador de anti-sentido, zc38679, 5'AAAAGCGCCGCAGCCAAGAGTAGG 3' (SEQ ID NO:57) e 35ciclos de amplificação. A eletroforese em gel de agarose revelou um ampliconúnico, robusto do tamanho e 850 pares de base experado.B) PCR de ILA-17RA de MurinoO cDNA de primeiro filamento foi preparado a partir do RNAtotal isolado de células nih3t3 usando métodos padrão. A PCR foi aplicadausando hot star polimerase e as recomendações do fabricante (Qiagen,Valencia, CA) usando o iniciador de sentido, zc38520, 5' CGTAAGCGGTGGCGGTTTTC 3' (SEQ ID NO: 58) e iniciador de anti-sentido, zc 38521, 5'TGGGCAGGGCACAGTCACAG 3' (SEQ ID NO: 59) e 35 ciclos deamplificação. A eletroforese em gel de agarose revelou um amplicon único,robusto do tamanho de 498 pares de base, esperado.

EXEMPLO 14

Criação de um Clone de Ensaio de Nih3t3 Que Expressa o Fator deTranscrição apl/nfkb

A linhagem de célula nih3t3 de murino descrita acima foiestavelmente transfectada com o contruto reporte apl/nfkb de kzl42,contendo um marcador selecionável de neomicina. A reunião de transfecçãoresistente a Neo foi plaqueada na densidade clonal. Os clones foram isoladosusando anéis de clonagem e triados pelo ensaio de luciferase usando o ligandoILA-17A humano como um indutor. Os clones com a intensidade defluorescência média (MFI) mais alta (por intermédio da apl/NfkB luciferase)e o fundo mais baixo foram selecionados. Uma linhagem de célulatransfectante estável foi selecionada e chamada de nih3t3/kzl42.8.

EXEMPLO 15

Inibição da Ativação pela ILA-17A e ILA-17F Humana em CélulasNih3t3 de Murino Usando Quimeras ILA-17RC e ILA-17RA/FC Solúveis

As formas solúveis de ILA-17RC ou ILA-17RA foram usadascomo antagonistas da ativação de ILA-17A e ILA-17F humanas de elementosapl/nfkb em um ensaio de luciferase. Estes receptores solúveis são proteínasde fusão derivadas do domínio extracelular de cada receptor fundido à regiãoconstante de IgGl (Fc) humana. A proteína de fusão de ILA-17R FC humanasolúvel foi adquirida, (quimera de ILA-17R/FC recombinante humana,número de catálogo 177-IR-100, R&D Systems, Inc., Minneapolis, Mn.) Aquimera FC de ILA-17RC humana solúvel (ILA-17RCsR/FC9) foi construídacomo descrito acima. Nós descobrimos que uma ILA-17RCsR/FC9 emexcesso e quimera IL17RsR/FC humana inibem os níveis EC50 de mediaçãotanto de ILA-17A quanto de ILA-17F humanas de ativação de apl/nfkb dalinhagem de célula de ensaio de nih3t3/kzl42.8 de murino.

A proteína ILA-17RCsR/FC9 mostrou a potência maior naantagonização da ativação de ILA-17F e a quimera de IL17RsR/FC mostrou amaior potência na antagonização da ativação de ILA-17A.

EXEMPLO 16

O mRNA de ILA-17F é Super Regulado em um Modelo de Murino deAsma

Os níveis de mRNA de ILA-17F foram medidos em ummodelo de sensibilização e inoculação das vias aéreas em camundongos. Osgrupos de camundongos, 8 a 10 semanas de idade, foram sensibilizados pelainjeção intraperitoneal de 10 μg de alérgeno 1 de Dermatophagoidespteronyssinus (DerPl) recombinante (Indoor biotechnologies, Cardiff, UK)em 50% de Imject Alum (Pierce) nos dias 0 e 7. Sete dias mais tarde, oscamundongos foram inoculados em 3 dias consecutivos (dias 14, 15 e 16)com 20 μg de DerPl em 50 μΐ de PBS. Houve 4 camundongos representandoeste grupo. Os controles negativos incluíram 5 camundongos administradoscom sensibilização com solução salina tamponada com fosfato (PBS), seguidopela inoculação com PBS. Além de 3 camundongos administrados comsensibilização com DerP 1, seguido por inoculação com PBS. Quarenta e oitohoras a seguir da inoculação de alérgeno ou controle o tecido pulmonarintegral foi colhido e o RNA total foi isolado.

O cDNA do primeiro filamento foi preparado usandoquantidades idênticas de RNA total de cada paciente. A PCR de ILA-17F foiaplicada usando hotstar polimerase da Qiagen (Qiagen, Valencia, CA) e asrecomendações do fabricante. A PCR de ILA-17F utilizou 35 ciclos deamplificação com iniciador de sentido, zc46098, 5' ACTTGCCATTCTGAGGGAGGTAGC 3' (SEQ ID NO: 60) e iniciador de anti-sentido, 46099, 5'CACAGGTGCAGCCAACTTTTAGGA 3' (SEQ ID NO: 61). De modo aestabelecer qual a qualidade padrão foi uniforme entre todos os pacientes, aPCR de Beta Actina foi aplicada às mesmas quantidades de cada padrãousado na amplificação de ILA-17F. A PCR de B actina incluiu 25 ciclos dePCR com iniciador de sentido, zc44779, 5' GTGGGCCGCTCTAGGCACCA 3' (SEQ ID NO: 62) e iniciador de anti-sentido, zcc44776, 5' CGGTTGGCCTTAGGGTTCAGGGGGG 3' (SEQ ID NO: 63).

Todos os 4 camundongos sensibilizados com DerP 1, do grupode tratamento inoculado com DerPl (a simulação da asma) mostrouamplificação de ILA-17F robusta. Ao contrário, a amplificação de ILA-17Ffraca foi observada a partir dos controles negativos, incluindo 3 de 3 pacientesrepresentando o grupo sensibilizado com DerPl/tratamento inoculado comPBS e 5 de 5 pacientes do grupo sensibilizado com PBS/ tratamentoinoculado com PBS. A amplificação por B actina foi pelo menos tão robustopara os controles negativos quanto para os pacientes simulados com asma,demonstrando que a amplificação de ILA-17F do controle negativo fraco nãofoi devido a problemas de padrão.

EXEMPLO 17

Transfecção e Aprisionamento de Secreção de Célula COS

A) Os ensaios de transfecção e aprisionamento de secreção de célula Cosmostram que ILA-17RCsR/Fc9 e ILA-17F são um par de receptor/ligando

Um ensaio de aprisionamento de secreção foi usado paraigualar a ILA-17RC humana (SEQ ID NO: 2) com a ILA-17F humana (SEQID NO: 16). A proteína de fusão ILA-17RCsR/Fc9 solúvel (Exemplo 8) foiusada como um reagente de ligação em um ensaio de secreção. SV40 oricontendo vetores de expressão contendo cDNA de ILA-17B,C,D,E e Fhumanas foi transitoriamente transfectado em células COS. A ligação de ILA-17RCsR/Fc9 às células COS transfectadas foi realizada usando o ensaio deaprisionamento de secreção descrito abaixo. A ligação positiva de ILA-17RCsR/Fc9 foi apenas observada para ILA-17F humana. Estes resultadosdemonstram a nova descoberta de que a ILA-17RC e ILA-17F humanas sãoum par de receptor/ligando.

B) Transfecções de Célula COS

A transfecção de célula COS foi realizada como segue:Misturar 3 μl de DNA reunido e 5 μΐ de Lipofectamina® em 92 μΐ de meioDMEM isento de soro (55 mg de piruvato de sódio, 146 mg de L-glutamina, 5mg de transferrina, 2,5 mg de insulina, 1 μg de selênio e 5 mg de fetuína em500 ml de DMEM), incubados na temperatura ambiente por 30 minutos edepois adicionar 400 μΐ de meio DMEM isento de célula. Adicionar estamistura de 500 μΐ em 1,5 χ IO5 células COS/reservatório plaqueada em placade cultura de tecido de 12 reservatórios e incubar por 5 horas a 37°C.Adicionar 500 μΐ 20% de meio FBS DMEM (100 ml de FBS, 55 mg depiruvato de sódio e 146 mg de L-glutamina em 500 ml de DMEM) e incubardurante a noite.

C) Ensaio de Aprisionamento de Secreção

O aprisionamento de secreção foi realizado como segue: ascélulas foram enxagüadas do meio com PBS e depois fixadas por 15 minutoscom 1,8% de Formaldeído em PBS. As células foram depois lavadas comTNT (0,1 M de Tris-HCl, 0,15 M de NaCl e 0,05% de Tween-20 em H2O) epermeado com 0,1% de Triton-X em PBS por 15 minutos e mais uma vezlavadas com TNT. As células foram bloqueadas por 1 hora com TNB (0,1 Mde Tris-HCl, 0,15 M de NaCl e 0,5% de Reagente de Bloqueio (Kit NENRenaissance TSA-Direct) em H2O) e lavadas mais uma vez com TNT. Ascélulas foram incubadas por 1 hora com 1 μg/ml de proteína de fusão dereceptor solúvel de ILA-17RCxlsR/FC9 humana. As células foram depoislavadas com TNT. As células foram incubadas por mais uma hora com Ig-HRP de cabra-anti-humano diluída 1:200 (específico de Fc). Mais uma vez ascélulas foram lavadas com TNT.

A ligação positiva foi detectada com reagente de tiramidafluoresceína diluído 1:50 em tampão de diluição (kit NEN) e incubada por 4 a6 minutos e lavadas com TNT. As células foram preservadas com Meio deMontagem Vectashield (Vetor Labs Burlingame, CA) diluído 1:5 em TNT.As células foram visualizadas usando um filtro FITC em microscópiofluorescente.

EXEMPLO 18

Geração de Anticorpos Monoclonais de ILA-17RC Anti-Humanos deMurino

A. Imunização para a geração de Anticorpos anti-ILA-17RC1. ILA-17RC-muFc Solúvel

Camundongos intactos ou silenciados em ILA-17RC de seis adoze semanas de idade são imunizados pela injeção intraperitoneal com 25 a50 μg de proteína ILA-17RC-muFc humana solúvel (Exemplo 23) misturados1:1 (v:v) com adjuvante Ribi (Sigma) em um programa bissemanal. Nos setea dez dias seguintes à terceira imunização, as amostras de sangue foramtiradas por intermédio da sangria retroorbital, o sangue colhido e avaliadoquanto a sua capacidade para inibir a ligação de ILA-17 ou ILA-17F a ILA-17RC em ensaio de neutralização (por exemplo, aqui descrito) e para tingircélulas 293 transfectadas versus não untransfectadas com ILA-17RC em umensaio de tingimento de FACS. Os camundongos continuaram a serimunizados e as amostras de sangue tiradas e avaliadas como descrito acimaaté que os títulos de neutralização atingissem um limiar. Neste momento, oscamundongos com os títulos de neutralização mais altos foram injetadosintravascularmente com 25 a 50 μg de proteína ILA-17RC-Fc solúvel emPBS. Três dias mais tarde, o baço e os linfônodos destes camundongos foramcolhidos e usados para a geração de hibridoma, por exemplo usando célulasde mieloma de camundongo (P3-X63-Ag8,653,3,12,l 1) ou outras linhagensde célula apropriadas na técnica, usando métodos padrão conhecidos natécnica (por exemplo, ver Kearney, J. F. et al., J Immunol. 123: 1548-50,1979; e Lane, R. D. J Immunol Methods 81: 223-8, 1985).

2. ILA-17RC, ILA-17RC-CEE, ILA-17RC-CHIS, ILA-17RC-CFLAGSolúveis

Camundongos intactos ou silenciados em ILA-17RC de seis adoze semanas de idade são imunizados pela injeção intraperitoneal com 25 a50 μg de ILA-17RC-CEE, ILA-17RC-CHIS ou ILA-17RC-CFLAG humanossolúveis misturados 1:1 (v:v) com adjuvante Ribi (Sigma) em um programabisemanal. Sete a dez dias a seguir da terceira imunização, as amostras desangue são tiradas por intermédio da sangria retroorbital, o soro colhido eavaliado quanto a sua capacidade para inibir a ligação de ILA-17 ou ILA-17Fa ILA-17RC em ensaios de neutralização (por exemplo, aqui descrito) e paratingir células 293 transfectadas versus não transfectadas com ILA-17RC emum ensaio de tingimento de FACS. Os camundongos são continuados a serimunizados e as amostras de sangue tiradas e avalaidas como descrito acimaaté que os títulos de neutralização atingissem um limiar. Neste momento, oscamundongos com os títulos de neutralização mais altos são injetadosintravascularmente com 25 a 50 μg de proteína antigênica de ILA-17RC,ILA-17RC-CEE, zcytor-CHIS ou ILA-17RC-CFLAG solúveis em PBS. Trêsdias mais tarde, o baço e linfônodos destes camundongos são colhidas eusadas para a geração de hibridoma, por exemplo usando células mieloma decamundongo (P3-X63-Ag8,653,3,12,11) ou outras linhagens de célulaapropriadas na técnica, usando métodos padrão conhecidos na técnica (porexemplo, ver Kearney, J. F. et al., J Immunol. 123: 1548-50, 1979; e Lane, RD. J Immunol Methods 81: 223-8, 1985).

3. Transfectantes P815 que expressam a ILA-17RCCamundongos DBA/2 fêmeas de seis a dez semanas de idadesão imunizados pela injeção intraperitoneal de 1 χ IO5 células P815 vivas,transfectadas, por exemplo células P815/ILA-17RC (por exemplo, 0,5 ml auma densidade de célula de 2 χ IO5 células/ml). Antes da injeção, as célulassão mantidas na fase de crescimento exponencial. Para a injeção as célulassão colhidas, lavadas três vezes com PBS e depois recolocadas em suspensãoem PBS a uma densidade de 2 χ IO5 células/ml. Neste modelo, oscamundongos desenvolvem um tumor de ascite dentro de 2 a 3 semanas eprogridem até a morte em 4 a 6 semanas a menos que uma resposta imunepara o antígeno alvo transfectado tenha sido montada. Em três semanas oscamundongos sem nenhum inchaço abdominal evidente (indicativo de ascite)são re-imunizados como acima em intervalos de 2 a 3 semanas. Sete a dezdias a seguir da segunda imunização, as amostras de sangue são tiradas porintermédio da sangria retroorbital, o soro colhido e avaliado quanto a suacapacidade para inibir a ligação de ILA-17 ou ILA-17F a ILA-17 ou ILA-17RC em ensaios de neutralização (por exemplo, aqui descrito) e para tingircélulas 293 transfectada versus não transfectada com ILA-17RC em umensaio de tingimento de FACS. Os camundongos continuam a ser imunizadose as amostras de sangue tiradas e avaliadas como descrito acima até que ostítulos de neutralização atingissem um limiar. Neste momento, oscamundongos com os títulos de neutralização mais altos são injetadosintraperitonealmente com 1 χ IO5 células P815 vivas, transfectadas. Quatrodias mais tarde, o baço e os linfônodos destes camundongos são colhidos eusados para a geração de hibridoma, por exemplo usando células de mielomade camundongo (P3-X63-Ag8,653,3,12,l 1) ou outras linhagens de célulaapropriadas na técnica, usando métodos padrão conhecidos na técnica (porexemplo, ver Kearney, J. F. et al., supra.; e Lane, R. D. supra.).

Uma alternativa para o esquema de imunização acima comcélulas P815 vivas, transfectadas envolve a injeção intraperitoneal de 1 a 5 χ10^6 células irradiadas, transfectadas a cada 2 a 3 semanas. Neste método,nenhum animal desenvolve e morre de ascite. Ao invés, os animais sãomonitorados quanto a uma resposta imune neutralizante para ILA-17RC emseu soro como esboçado acima, começando com uma sangria depois dasegunda imunização. Uma vez que os títulos de neutralização tenham atingidoum nível máximo, os camundongos com títulos mais altos são administradoscom uma pré-fusão, injeção intraperitoneal de 5 χ IO6 células irradiadas equatro dias mais tarde, o baço e linfônodos destes camundongos são colhidose usados para a geração de hibridoma, por exemplo usando células deft) mieloma de camundongo (P3-X63-Ag8,653,3,12,ll) ou outras linhagens decélula apropriadas na técnica, usando métodos padrão conhecidos na técnica(por exemplo, ver Kearney, J. F. et ai., supra.; e Lane, R. D. supra.).Β. A Triagem das Fusões de Hibridoma para Anticorpos que Ligam ILA-17RC e Inibem a Ligação de ILA-17 ou ILA-17F a ILA-17RC

Três triagens primárias diferentes são realizadas nossobrenadantes de hibridoma em 8 a 10 dias apó a fusão. Para o primeiroensaio, os anticorpos em sobrenadantes foram testados quanto a suacapacidade para ligar-se às proteínas ILA-17RC, ILA-17RC-muFc, ILA-17RC-CEE, ILA-17RC-CHIS ou ILA-17RC-CFLAG solúveis humanasligadas á placa pelo ELISA usando reagentes de etapa secundária kappa e decadeia leve anti-lambda de cabra anti-camundongo conjugados a HRP paraidentificar anticorpos de camundongo ligados. Para demonstrar aespecificidade para a porção ILA-17RC das proteínas de fusão ILA-17RC,sobrenadantes positivos no ensaio inicial foram avaliados em uma proteínairrelevante fundida à mesma região Fc de murino (mG2a), seqüência EE,seqüência HIS ou seqüência FLAG. O anticorpo nestes sobrenadantes queligam ILA-17RC-proteína de fusão e não muFc irrelevante ou outras proteínascontendo a seqüência da proteína de fusão foram julgadas serem específicaspara ILA-17RC. Para o segundo ensaio, anticorpos em todos sobrenadantes dehibridoma foram avaliados pelo ELISA quanto a sua capacidade para inibir aligação de ILA-17 biotinilada humana ou ILA-17F biotinilada humana à placaligada a ILA-17RC-muFc ou proteínas de fusão de ILA-17RC.

Todos os sobrenadantes contendo anticorpos que se ligamespecificamente a ILA-17RC, inibissem eles a ligação de ILA-17 ou ILA-17Fa ILA-17RC ou não no ensaio de ELISA, foram subseqüentemente testadasquanto a sua capacidade para inibir a ligação de ILA-17 ou ILA-17F àscélulas Baf3 ou BHK transfectadas com ILA-17RC ou células epiteliaisbrônquicas humanas normais. Todos os sobrenadantes que foram positivos emneutralização nos ensaios de inibição de ILA-17 ou ILA-17F ou os ensaios deinibição tanto de ILA-17 quanto ILA-17F foram subseqüentemente avaliadosquanto a sua capacidade para tingir células Baf3 ou BHK transfectadas versusnão transfectadas por ILA-17RC pela análise de FACS. Esta análise foiplanejada para confirmar que a inibição da ligação de ILA-17 ou ILA-17F aILA-17RC, foi de fato devida a um anticorpo que especificamente liga oreceptor de ILA-17RC. Adicionalmente, visto que a análise de FACS foirealizada com um reagente da segunda etapa anti-IgG, resultados positivos deFACS específicos indicam que o anticorpo neutralizador foi provável ser daclasse IgG. Por estes meios, um reservatório mestre foi identificado que ligouILA-17RC no ELISA ligado à placa, inibiu a ligação de ILA-17 ou ILA-17F aILA-17RC no ensaio de inibição com base no ELISA, bloqueou a interaçãode ILA-17 e ILA-17F com células Baf3 ou BHK transfectadas com ILA-17RC, respectivamente e foi fortemente positivo para o tingimento de célulasBaB ou BHK transfectadas com ILA-17RC com um reagente da segundaetapá de IgG anti-camundongo.

O terceiro ensaio consiste de células epiteliais brônquicashumanas primárias que expressam ILA-17RC e podem ser induzidos parasecretar ILA-8 ou ILA-6 em resposta ao tratamento com ILA-17F. Oanticorpo monoclonal específico é ensaiado pela sua capacidade para inibir aprodução de ILA-8 ou ILA-6 estimulada por ILA-17 ou ILA-17F por estascélulas. A produção de ILA-8 e ILA-6 é ensaiada em resposta a ILA-17 ouILA-17F como aqui descrito.

Alternativamente, o anticorpo monoclonal; anti-ILA-17RC,mediou a inibição da produção da luciferase induzida por ELA-17 ou ILA-17Fem células contendo NIH 3T3 ou outro ILA-17RC pode ser usado com ou nolugar de um dos ensaios de neutralização de bioatividade mencionados acima.O ensaio de luciferase mediado pór NFkB em células NIH 3T3 é aquidescrito.

C) Hibridomas que Produzem Anticorpo Específico Anti-ILA-17RC deClonagem

As linhagens de célula de Hibridoma que produzem um mAbanti-ILA-17RC específico que neutralizaram cruzado a ligação de ILA-17 eILA-17F às células BaF3 ou BHK apropriadamente transfectadas sãoclonadas por um método de diluição de densidade baixa padrão (menor doque 1 célula por reservatório). Aproximadamente 5 a 7 dias depois deplaquear, os clones são triados por ELISA, por exemplo, em ILA-17RC-muFchumano ligado a placa seguido por um reteste de reservatórios positivos peloELISA em proteína de fusão contendo muFc irrelevante como descrito acima.

Os clones selecionados, cujos sobrenadantes se ligam a ILA-17RC-muFc enão a proteína de fusão contendo muFc irrelevante, são ainda confirmadosquanto a atividade de anticorpo específica pela repetição tanto de ensaios deneutralização assim como a análise FACS. Todos os clones positivos emanticorpo ILA-17RC selecionados são clonados um mínimo de duas vezespara ajudare a garantir a clonalidade e para avaliar a estabilidade da produçãode anticorpo. Outras rodadas de clonagem são realizadas e tríadas comodescrito até que, preferivelmente, pelo menos 95% dos clones resultantesfossem positivos quanto a produção de anticorpo anti-ILA-17RCneutralizante.D) Caracterização Bioquímica da Molécula Reconhecida pelos mAbs Anti-ILA-17RC

A confirmação bioquímica de que a molécula alvo, ILA-17RC,reconhecida pelo mAbs anti-ILA-17RC putativos é de fato ILA-17RC érealizada pela imunoprecipitação padrão seguido pela análise de SDS-PAGEou procedimentos de western blotting, ambos utilizando preparações demembrana solúvel de células BaG ou BHK transfectadas versus nãotransfectadas por ILA-17RC. Além disso, as preparações de membranasolúvel das linhagens de célula não transfectadas que expressam ILA-17RCsão usadas mostram que os mAbs reconhecem a cadeia de receptor nativaassim como a transfectada. Alternativamente, os mAbs são testados quanto asua capacidade para imunoprecipitar especificamente ou western blot aproteína ILA-17RC-muFc solúvel.

EXEMPLO 19

Neutralização de ILA-17RC Humana pelos Soros de CamundongosInjetados com Células P815 Transfectadas com ILA-17RC Humana

Usando um ensaio de neutralização com base em célula, o sorode camundongos injetados com células P815 transfectadas com ILA-17RChumana viva (Exemplo 17) é adicionado como uma diluição a 1%, 0,5%,0,25%, 0,13%, 0,06%, 0,03%, 0,02% e 0%. As placas de ensaio são incubadasa 37°C, 5% de CO2 por 4 dias tempo no qual Azul de Alamar (Accumed,Chicago, EL) é adicionado a 20 μΐ/reservatório. As placas são mais uma vezincubadas a 37°C, 5% de CO2 por 16 horas. Os resultados mostraram que osoro de quatro dos animais puderam neutralizar a sinalização tanto de huILA-17 quanto huILA-17F através de ILA-17RC humana.

Os resultados tais como estes fornecem evidência adicional deque bloqueiam eficazmente a ILA-17RC pela ligação, bloqueio, inibição,redução, antagonização ou neutralização de ILA-17 ou da atividade de ILA-17F (individualmente ou junto), por exemplo por intermédio de um anticorpomonoclonal neutralizante para ILA-17RC da presente invenção, seriavantajoso na redução dos efeitos de ILA-17 e ILA-17F (sozinhos ou juntos) invivo e podem reduzir ILA-17 e/ou a inflamação induzida por ILA-17F, talcomo aquela observada, por exemplo na psoríase, IBD, colite, doençapulmonar obstrutiva crônica, fibrose cística ou outras doenças inflamatóriasinduzidas por ILA-17 e ou ILA-17F incluindo IBD, artrite, asma, artritepsoriática, colite, condições de pele inflamatórias e dermatite atópica.

EXEMPLO 20

Farmacocinéticas de um Anticorpo Monoclonal de ILA-17RC Anti-humano

O anticorpo monoclonal de teste, mAb de ILA-17RC anti-humano, é fornecido, por exemplo, em 3x alíquotas de 3 ml em umaconcentração de aproximadamente 1 mg/ml (determinada pela Absorbânciade UV a 280 nM) e foram armazenadas a -80°C até o uso. O veículo é IXPBS (50 mM de NaPO4, 109 mM de NaCl), pH 7,3. O mAb é descongeladona temperatura ambiente antes do uso e as alíquotas 1 e 2 são usadas comofornecido para os grupos de dosagem de 100 μg IV e SC, respectivamente.-Metade da líquota 3 é diluída 1:2 em IX PBS para o grupo de dose de 50 μgSC e a segunda metade da alíquota 3 é diluída 1:10 em IX PBS para o grupode dose de 10 μg SC. Camundongos SCID fêmeas (n = 96) são obtidas daCharles River Labs. Os animais são checados quanto a saúde na chegada ealojados em grupo (3 animais por gaiola). Os camundongos têm 12 semanasde idade com um peso corporal médio de aproximadamente 22 g no começodo estudo.

A) Protocolo de Dosagem

Camundongos SCID fêmeas (n = 24/grupo de dose) sãoaleatoriamente colocados em quatro grupos de dosagem (Tabela 8). O Grupo1 foi administrado com o mAb de ILA-17RC anti-humano por intermédio dainjeção IV de aproximadamente 93 μί em uma veia da cauda e os Grupos 2,3 e 4 são administrados com o mAb por intermédio de injeção SC deaproximadamente 93 μΐ na nuca do pescoço.B) Coleta de Amostra

Antes da coleta de sangue, os camundongos foramcompletamente anestesiados com halotano ou isofluorano. As amostras desangue foram coletadas por intermédio de bastão cardíaco por todos os pontosde tempo exceto no ponto de tempo de 168 horas (coletado por intermédio dasangria ocular e os mesmos animais foram sangrados mais uma vez no pontode tempo de 504 horas por intermédio de bastão cardíaco). O sangue foicoletado em tubos separadores de soro e deixados coagular por 15 minutos.As amostras foram subseqüentemente centrifugadas por 3 minutos a 14.000rpm. A seguir da centrifugação, alíquotas de 125 a 150 μΐ foram dispensadasem tubos de eppendorf rotulados e imediatamente armazenadas a -80°C até aanálise.

Tabela 8

<table>table see original document page 197</column></row><table>

* Os mesmos animais foram usados para os pontos de tempo de 168 e 504horas.

C) Quantificação das Concentrações de MAb de ILA-17RC Anti-HumanoSérico pelo ELISA

Um Ensaio Imunossorvente Ligado a Enzima (ELISA) édesenvolvido e qualificado para analisar amostras de soro de camundongo deanimais dosados com mAb anti-ILA-17RC durante os estudos defarmacocinética. Este ensaio é planejado para tirar vantagem de um anticorposecundário comercialmente disponível e detecção colorimétrica usando TMB.

As diluições usadas para a curva padrão foram modificadas para melhorar adefinição da porção linear da curva padrão. Uma curva padrão na faixa de 100ng/ml a 0,231 ng/ml com diluições 2-vezes permite a quantificação dasamostras de soro de camundongo. As amostras QC são diluídas a 1:100,1:1000 e 1:10000 em soro de camundongo SCID a 10% e retro calculada apartir da curva padrão.

D) Análise Farmacocinética

A concentração sérica versus os dados de tempo sãoinfracarregadas no software WinNonlin Professional 4.0 (Pharsight, Inc.;Cary, NC) para a análise farmacocinética. A análise não compartimental éusada para determinar parâmetros farmacocinéticos com base nos dadosmédios em cada ponto de tempo.

EXEMPLO 21

Neutralização da Atividade de ILA-17A e ILA-17F por um AnticorpoMonoclonal de ILA-17RC Anti-Humano

Usando um ensaio de neutralização com base em célula, umanticorpo monoclonal de ILA-17RC anti-humano de camundongo purificadoé adicionado como uma diluição em série, por exemplo, a 10 μg/ml, 5 μg/ml,2,5 μg/ml, 1,25 μg/ml, 625 ng/ml, 313 ng/ml, 156 ng/ml e 78 ng/ml. As placasde ensaio são incubadas a 37°C, 5% de CO2 por 4 dias tempo no qual Azul deAlamar (Accumed, Chicago, IL) é adicionado a 20 μΐ/reservatório. As placassão mais uma vez incubadas a 37°C, 5% de CO2 por 16 horas. Este ensaio écapaz de demonstrar que o anticorpo monoclonal de ILA-17RC anti-humanopurificado é capaz de neutralizar a sinalização tanto de huILA-17 quanto dehuILA-17F através da ILA-17RC humana. Para anticorpos altamente eficazes,quando usados em aprox. 10 μg/ml de concentração, o anticorpo neutralizacompletamente a proliferação induzida por huILA-17 ou huILA-17F, com ainibição da proliferação diminuindo em uma maneira dependente da dose nasconcentrações mais baixas. Um mAb de camundongo de controle negativoigualado no isótipo, testado nas concentrações descritas acima, é esperado nãofornecer nenhuma inibição de proliferação de cada citocina. Estes resultadossão capazes de demonstrar ainda que os anticorpos monoclonais para ILA-17RC de fato puderam antagonizar a atividade dos ligandos pró-inflamatórios,ILA-17 e ILA-17F em concentrações baixas.

EXEMPLO 22

ILA-17A Induz Níveis Elevados de IFN-gama e TNF-alfa em Células

Mononucleares de Sangue Periférico Humanas

As células mononucleares de sangue periférico humanas(PBMC) são purificadas pela centrifiigação de gradiente de densidade ficoll edepois incubadas durante a noite a 37°C apenas em meio, 50 ng/ml deanticorpo CD3 anti-humano ou a combinação de 50 ng/ml de anticorpo CD3anti-humano mais 1 Dg/ml de anticorpo CD28 anti-humano. Culturasduplicadas para cada uma destas condições são ajustados e não sãoadministradas nenhuma citocina, 25 ng/ml de ILA-17A humano ou 25 ng/mlde ILA-17F humano. Depois de 24 horas de incubações, os sobrenadantes decada cultura são colhidos e ensaiados quanto ao teor de citocina usando B-DBioscience's humano Th 1 /Th2 Cytometric Bead Array (CBA). Nósdescobrimos que as culturas que foram estimuladas com anti-CD3 ou anti-CD3 mais anti-CD28 e foram suplementadas com ILA-17A contiveram níveissignificantemente elevados de IFN-gama e TNF-alfa (3 a 5 vezes a elevaçãode cada um) em culturas sem nenhuma citocina adicionada ou aquelas quereceberam ILA-17F. As culturas nas quais nenhuma estimulação anti-CD3 foiadicionada não mostraram mudanças significantes nos níveis de citocina.Além disso, a adição de ILA-17A não induziu nenhuma mudança significanteem outras citocinas ensaiadas com o CBA incluindo ILA-2, ILA-4, ILA-5 eILA-10. Estes dados indicam que ILA-17A, mas não ILA-17F, pode aumentara produção de IFN-gama e TNF-alfa em culturas de PBMC estimuladas comanti-CD3 ou anti-CD3 mais anti-CD28.

EXEMPLO 23

ILA-17RC-Fc Diminui a Incidência e Progressão de Doença em Modelode Artrite Induzida por Colágeno (CIA) em Camundongo

A) Modelo de Artrite Induzida por Colágeno fCIA) em Camundongo

Camundongos DBA/IJ machos de dez semanas de idade(Jackson Labs) são divididos em 3 grupos de 13 camundongos/grupo. No dia21, os animais são administrados com uma injeção na cauda intradérmica de50 a 100 μl de colágeno tipo II de pintainho a 1 mg/ml formulado emAdjuvante de Freund Completo (preparado pela Chondrex, Redmond, WA) etrês semanas mais tarde no Dia 0 eles são administrados com a mesma injeçãoexceto que preparada em Adjuvante de Freund Incompleto. ILA-17RC-Fc éadministrado como uma injeção intraperitoneal 3 vezes por semana por 4semanas, em pontos de tempo diferentes variando do Dia 0, a um dia em quea maioria dos camundongos exibam sintomas moderados da doença. Osgrupos recebem 10 ou 100 μg de ILA-17RC-Fc por animal por dose e osgrupos de controle recebem o controle de veículo, PBS (Life Technologies,Rockville, MD). Os animais começaram a mostrar sintomas de artrite a seguirda segunda injeção de colágeno, com a maioria dos animais desenvolvendo ainflamação dentro de 1,5 a 3 semanas. O grau da doença é avaliada em cadapata pelo uso de um cálibre para medir a espessura da pata e designando-seuma contagem clinicai (0 a 3) para cada pata: 0 = Normal, 0,5 = Dedo(s) dopé inflamado(s), 1 = inflamação da pata branda, 2 = inflamação da patamoderada e 3 = inflamação da pata grave como detalhado abaixo.

B) Monitoramento da Doença

Os animais podem começar a mostrar sinais de inflamação dapata logo depois da segunda injeção de colágeno e alguns animais podemmesmo começar a ter sinais de inflamação do dedo antes da segunda injeçãode colágeno. A maioria dos animais desenvolvem artrite dentro de 1,5 a 3semanas da injeção de reforço, mas alguns podem requerer um período maislongo de tempo. A incidência de doença neste modelo é tipicamente de 95 a100% e não respondendores 0-2 (determinado depois de 6 semanas deobservação) são tipicamente observados em um estudo usando 40 animais.Observe que conforme a inflamação começa, uma ocorrência transitóriacomum de inflamação de parta ou de dedo de grau baixo variável podeocorrer. Por esta razão, um animal não é considerado ter doença estabelecidaaté que inchaço de pata acentuado, persistente tenha se desenvolvida.

Todos os animais são observados diariamente para avaliar asituação da doença em suas patas, que é feita designando-se uma contagemclínica qualitativa para cada uma das patas. A cada dia, cada animal tem assuas 4 patas contadas de acordo com seu estado de doença clínica. Paradeterminar a contagem clínica, a pata pode ser considerada como tendo 3zones, os dedos, a própria pata (palma das mãos ou pés) e as juntas do pulsoou tornozelo. O grau e severidade da inflamação em relação a estas zonas émencionado incluindo: a observação de cada dedo quanto ao intumescimento;unhas arrancadas ou vermelhidão dos dedos; a anotação de qualquer evidênciade edema ou vermelhidão em qualquer uma das patas; a anotação de qualquerperda de demarcação anatômica fina de tendões ou ossos; a avaliação dospulsos ou tornozelos quanto a qualquer edema ou vermelhidão; e anotação sea inflamação extende-se aproximadamente até a perna. Uma contagem de patade 1, 2 ou 3 está fundamentada primeiro na impressão global de gravidade esegundo em quantas zonas estão envolvidas. A escala usada para a contagemclínica é mostrada abaixo.

C) Contagem Clínica

0 = Normal

0,5 = Um ou mais dedos envolvidos, mas apenas os dedosestão inflamados1 = inflamação branda que envolve a pata (1 zona) e podeincluir um dedo ou dedos

2 = inflamação moderada na pata e pode incluir alguns dosdedos e/ou o pulso/tornozelo (2 zonas)

3 = inflamação grave na pata, pulso/tornozelo e alguns outodos do dedos (3 zonas)

A doença estabelecida é definida como uma contagemqualitativa de inflamação da pata classificando 2 ou mais, que persiste pordois dias em uma fileira. Uma vez que a doença estabelecida está presente, adata é registrada e designada como aquele primeiro dia do animal com"doença estabelecida".

O sangue é coletado por todo o experimento para monitorar osníveis séricos de anticorpos anti-colágeno, assim como os níveis deimunoglobulina e citocina séricos. Os anticorpos anti-colágeno séricoscorrelacinam-se bem com a gravidade da doença. Os animais são eutanizadosno Dia 21 e o sangue coletado para o soro e CBC's. De cada animal, uma pataafetada é coletada em NBF a 10% para histologia e uma é congelada emnitrogênio líquido e armazenada a -80°C para a análise de mRNA. Também,1/2 baço, 1/2 timo, 1/2 linfônodo mesentérico, um lóbulo hepático e o rimesquerdo são coletados em RNAlater para a análise de RNA e 1/2 baço, 1/2timo, 1/2 linfônodo mesentérico, o fígado remanescente e o rim direito sãocoletados em 10% de NBF para histologia. O soro é coletado e congelado a -80°C para os ensaios de imunoglobulina e citocina.

Os grupos de camundongos que recebem ILA-17RC-Fc emtodos os pontos de tempo são caracterizados por uma demora no início e/ouprogressão da inflamação da pata. Estes resultados indicam que a ILA-17RCpode reduzir a inflamação, assim como a incidência de doença e a progressãoassociada com este modelo. Estes resultados são ainda sustentados pelaobservação de que ILA-17RC-Fc resultou em níveis diminuídos de TNFasérico, ILA-Ib e anticorpos anti-colágeno.

EXEMPLO 24

Super-Expressão Estável de ILA-17RC da Linhagem de Célula de Ensaiode Murino, Nih3t3/kzl42.8 que Expressam o Fator de Transcriçãoapl/nfkb

A linhagem de célula de ensaio nih3t3/kzl42.8 de murino foitransfectada com um ILA-17RCxl humano (SEQ ID NO: 2) em um vetor deexpressão com um gene de resistência ao metotrexato (diidrofoliato redutase,DHFR) Esta transfecção foi realizada usando um kit comercialmentedisponível e as recomendações do fabricante. (Mirus, Madison, WI. Cat.#MIR218) as células foram colocadas em 1 μΜ de meio de cultivo corrigidocom mtx para selecionar quanto ao vetor de expressão contendo o transgeneILA-17RCX1 humano. Depois da seleção de uma reunião de transfecção deILA-17RCxl humano foi gerado e chamado nih313Ikz 142.8/hcytor 14x1.

A) Ensaio de luciferase usando o linhagem de célula de ensaio nih3t3/kz!42.8

Visto que nih3t3/kzl42.8 tem um repórter kzl42 estável, nãoexiste nenhuma necessidade quanto a infecção de adenovírus para adicionareste repórter. Assim o protocolo de ensaio de luciferase foi encurtado e feitoda seguinte maneira:

1. Plaqueamento de Célula

As células nih3t3/kzl42.8 foram plaqueadas a 5000 células/reservatório em placas de 96 reservatórios revestidas de cultura de célulasólida, brancas, (Cat. #3917. Costar) usando DMEM/10% de FBS, contendoglutamina e corrigida com piruvato e cultivada durante a noite a 37°C e 5%de CO2. Neste segundo dia, o meio de plaqueamento foi removido e trocadopor DMEM/1% de FBS, contendo glutamina e corrigido com piruvato ecultivado durante a noite a 37°C e 5% de CO2.

2. Ensaio de Luciferase que mede a ativação de ILA-17A e ILA-17F dorepórter kz!42 estávelA seguir da incubação durante a noite em diluições de fbs 1%,meio DMEM, ligandos ILA-17A e ILA-17F humanos foram fabricadas emmeio isento de soro, corrigido com BSA a um nível de 28%. Depois deadicionar as diluições de ligando, as células foram incubadas a 37°C e 5% deCO2 por 4 horas, depois do que o meio foi removido, as células lisadas por 15minutos e a intensidade de fluorescência média (MFI) medida usando osistema de ensaio e reagentes de luciferase, (Cat.#el531 Promega. Madison,WI.) e um luminômetro de microplaca. A atividade foi detectada para ambosos ligandos nas concentrações variando de 1 a 1000 ng/ml. A reunião detransfecção nih3t3/kz 142.8/hcytor 14x1 mostrou atividade similar para oligando ILA-17A de murino como o fez a linhagem de célula precursora,(exemplo 14) Entretanto, a reunião de transfectante cytorl4xl mostrou umaresponsividade elevada aos tratamentos com ILA-17A e ILA-17F humano,mesmo quando estas concentrações de ligando foram tão baixas quanto 20femptogramas. O fato de que a sinalização de mILA-17A é comparávelàquela na linhagem de célula precursora (exemplo 14) sugere não existe umproblema geral, não específico com as células que expressam ILA-17RChumano e que o ILA-17A de murino está provavelmente sinalizando atravésdo receptor de ILA-17R ou ILA-17RC de célula nih3t3 de murino endógena.

Assim, o fato de que o ILA-17A e ILA-17F humanos causam uma elevaçãode MFI em tais concentrações de ligando baixas pode indicar uma hiper-responsividade específica das células àqueles ligandos, que é mediada atravésdo receptor de ILA-17RC humano super-expressado.

Este resultado tem ramificações e utilidade clínica e biológicasignificantes. Por exemplo, as situações fisiológicas podem causar superregulagem local dos receptores de ILA-17RC que podem depois tornar estasáreas hiper-responsivas ao ILA-17A e ILA-17F, resultando na ativaçãobiológica em concentrações de ligando muito mais baixas do que aquelassugeridas sem a super-expressão de ILA-17RC. Assim, níveis de receptorsolúvel muito mais baixos podem ser suficiente para antagonizar estasconcentrações de ligando hipoteticamente mais baixas, do que anteriormentepensado ou reconhecido por aqueles no campo.

EXEMPLO 25

Antagonistas para a Atividade de ILA-17F e ILA-17A Diminuem aIncidência e Progressão de Doença em um Modelo da Doença do

Intestino Inflamatório (IBD)

Este modelo é planejado para mostrar que o tecido intestinalcultivado de pacientes com IBD produz níveis mais altos de mediadoresinflamatórios comparado com tecido de controles saudáveis. Esta produçãorealçada de mediadores inflamatórios (incluindo mas não limitados a ILA-lb,ILA-4, ILA-5, ILA-6, ILA-8, ILA-12, ILA-13, ILA-15, ILA-17 A e F5 ILA-18, ILA-23, TNF-a, IFN-g, membros da família MIP, MCP-1, G- e GM-CSF,etc.) contribui para os sintomas e patologia associados com IBDs tais comodoença de Crohn (CD) e colite ulcerativa (UC) por via de seu(s) efeito(s) naativação de caminhos inflamatórios e células efetoras a jusante. Estescaminhos e componentes depois levam ao dano/destruição de tecido e célulaobservados in vivo. Portanto, este modelo pode simular este aspecto mediadorinflamatório realçado de IBD. Além disso, quando o tecido intestinal decontroles saudáveis ou de linhagens de célula epitelial intestinal humana(IEC) é cultivado na presença destes componentes inflamatórios, a sinalizaçãodo caminho inflamatório pôde ser observada, assim como evidência do danode tecido e célula.

Os produtos terapêuticos que podem ser eficazes na IBDhumana in vivo podem funcionar nos modelos ex vivo ou IEC acima pelainibição e/ou neutralização da produção e/ou presença de mediadoresinflamatórios.

Neste modelo, o tecido intestinal humano é coletado depacientes com IBD ou de controles saudáveis que passam pela biópsiaintestinal, a re-secção ou da coleta de tecido post-mortem e processado usandouma modificação de Alexakis et al (Gut 53: 85-90; 2004). Sob condiçõesassépticas, as amostras são suavemente limpas com quantidades copiosas dePBS, seguido pelo cultivo de secções picadas de tecido, na presença de meiode cultura de tecido completa (mais antibióticos para impedir o crescimentobacteriano excessivo). As amostras do mesmo grupo de tecido picado sãotratadas com um dos seguintes: veículo (PBS); ILA-17A; rhILA-17F humanorecombinante (rh); ou rhILA-17A+rhILA-17F. Além disso, estes são tratadoscom ou sem um antagonista de ILA-17A ou ILA-17F, sozinho ou emcombinação (tal como um ILA-17RC solúvel). Este protocolo experimental éseguido para os estudos com linhagens de IEC humanas, com a exceção deque as células são passadas de estoques existentes. Depois de tempos variadosem cultura (de lha diversos dias), os sobrenadantes são coletados eanalisados quanto aos níveis de mediadores inflamatórios, incluindo aqueleslistados acima. Em amostras de pacientes com IBD ou em amostras tratadascom rhILA-17A e/ou F, os níveis de citocinas e quimiocinas inflamatórias sãoelevados comparado com as amostras de tecido de controle saudável nãotratado. A adição de antagonistas para a atividade de ILA-17F e/ou ILA-17A,tal como receptores solúveis de ILA-17RC e anticorpos para estes incluindo oanticorpo monoclonal de ILA-17RC anti-humano e os anticorposneutralizadores da presente invenção acentuadamente reduzem a produção demediadores inflamatórios e assim, esperar-se-ia fossem eficazes na IBDhumana.

EXEMPLO 26

Antagonistas para a Atividade de ILA-17F e ILA-17A Diminuem aIncidência e Progressão da Doença em um Modelo de Esclerose Múltipla(MS)

A esclerose múltipla (MS) é uma doença complexa que éconsiderada ser mediada por vários fatores, incluindo a presença de infiltradosinflamatórios de célula linfocítica e mononuclear e desmielinação por todo oCNS. Microglias são células equivalentes a macrófago que povoam o sistemanervoso central (CNS) e torna-se ativado no dano ou infecção. As microgliasforam implicadas como desempenhando papéis críticos em várias doenças doCNS incluindo MS e podem ser usadas para estudar mecanismo(s) de estudode iniciação, progressão e terapia da doença (Nagai et al. Neurobiol Dis 8:1057-1068; 2001; Olson et al. J Neurosci Methods 128: 33-43; 2003). Alinhagem de célula microglial humana imortalizada e/ou linhagens de célulade astróglia humana estabelecida, portanto, podem ser usadas para estudaralguns dos efeitos efeitos de mediadores inflamatórios nestes tipos de célula eseu potencial para neutralização. Os mediadores inflamatórios (incluindo masnão limitados a ILA-lb, ILA-6, ILA-8, ILA-12, ILA-13, ILA-15, ILA-17A eF, ILA-18, ILA-23, TNF-a, IFN-g, membros da família MIP, RANTES, IP-10, MCP-1, G- e GM-CSF, etc.) podem contribuir para os sintomas epatologia associadas com a MS por via de seu(s) efeito(s) na ativação decaminhos inflamatórios e células efetoras a jusante.

De modo a avaliar as ações pró-inflamatórias de ILA-17A eILA-17F e a capacidade de um antagonista para a atividade de ILA-17F e/ouILA-17A, tal como receptores solúveis de ILA-17RC e anticorpos para estesincluindo os anticorpos monoclonais de ILA-17RC anti-humanos eneutralizadores da presente invenção para neutralizar ou diminuir estesefeitos, as células gliais cultivadas são tratadas com um dos seguintes:veículo; rhILA-17A; rhILA-17F; rhILA-17A+ILA-17F. Além disso, estes sãotratados com ou sem um antagonista de ILA-17A ou ILA-17F, sozinho ou emcombinação (tal como um ILA-17RC solúvel). Depois de tempos variáveisem cultura (de 1 hora a diversos dias), os sobrenadantes e as células sãocoletados e analisados quanto aos níveis e/ou expressão de mediadoresinflamatórios, incluindo aqueles listados acima. Os níveis de citocinas equimiocinas inflamatórias são elevados na presença de rhILA-17A e/ou ILA-17F comparados com culturas tratadas apenas com veículo. A adição deantagonistas para a atividade de ILA-17F e/ou ILA-17A, tal como receptoressolúveis de ILA-17RC e anticorpos para estes incluindo os anticorposmonoclonais de ILA-17RC anti-humanos e neutralizadores da presenteinvenção acentuadamente reduzem a produção e expressão de mediadoresinflamatórios e assim, esperar-se-ia fossem eficazes em aspectosinflamatórios associados com a MS humana.

EXEMPLO 27

Antagonistas para a Atividade de ILA-17F e ILA-17A Diminuem aIncidência e a Progressão de Doença em um Modelo de ArtriteReumatóide (RA) e Osteoartrite (OA)

Este modelo é planejado mostrar que as culturas sinoviaishumanas (incluindo macrófagos sinoviais, fibroblastos sinoviais e condrócitosarticulares) e explantes de pacientes com RA e OA produzem níveis maisaltos de mediadores inflamatórios comparados com culturas/ explantes decontroles saudáveis. Esta produção realçada de mediadores inflamatórios(incluindo mas não limitados a oncostatina M, ILA-lb, ILA-6, ILA-8, ILA-12, ILA-15, ILA-17A e F, ILA-18, ILA-23, TNF-a, IFN-g, IP-10, RANTES,RANKL, membros da família MIP, MCP-1, G- e GM-CSF, óxido nítrico,etc.) contribui para os sintomas e patologia associados com RA e OA por viade seu(s) efeito(s) sobre a ativação de caminhos inflamatórios e célulasefetoras a jusante. Estes caminhos e componentes depois levam a infiltradosinflamatórios, perda/destruição de cartilagem e matriz, perda óssea e superregulagem de prostaglandinas e ciclooxigenases. Portanto, este modelo podesimular os aspectos inflamatórios destrutivos de RA e OA em experimentos invitro e ex vivo. Além disso, quando explantes e culturas sinoviais de controlessaudáveis são cultivados na presença de diversos destes componentesinflamatórios (por exemplo, oncostatina M, TNF-a, ILA-lb, ILA-6, ILA-17Ae ILA-17F, ILA-15, etc.), a sinalização do caminho inflamatório pode serobservada. Terapêuticos que seriam eficazes na RA humana in vivo podefuncionar nos modelos in vitro e ex vivo acima pela inibição e/ouneutralização da produção e/ou presença de mediadores inflamatórios.

Neste modelo, explantes sinoviais humanos são coletados depacientes com RA, OA ou de controles saudáveis que passam pelasubstituição de junta ou de coleta de tecido post-mortem e processada usandouma modificação de Wooley e Tetlow (Artrite Res 2: 65-70; 2000) e van'tHof et al (Rheumatology 39: 1004-1008; 2000). Culturas de fibroblastossinoviais, macrofagos sinoviais e condrócitos articulares também sãoestudados. As amostras em duplicata são tratadas com um dos seguintes:veículo (PBS); ILA-17A recombinante humano (rh); rhILA-17F; ou rhlLA-17A+rhILA-17F e algumas amostras contêm várias combinações deoncostatina M, TNF-a, ILA-lb, ILA-6, ILA-17A, ILA-17F e ILA-15. Alémdisso, estes são tratados com ou sem um antagonista para a atividade de ILA-17F e/ou ILA-17A, tal como receptores solúveis de ILA-17RC e anticorpospara estes incluindo os anticorpos monoclonais de ILA-17RC anti-humanos eneutralizadores da presente invenção. Depois de tempo variável de cultura (delha diversos dias), os sobrenadantes são coletados e analisados quanto aosníveis de mediadores inflamatórios, incluindo aqueles listados acima. Emamostras de pacientes com RA ou OA ou em amostras tratadas com rhlLA-17A e/ou F (sozinho ou em combinação com outras citocinas inflamatórias),os níveis de citocinas e quimiocinas inflamatórias são elevadas comparadocom explantes de controle saudáveis não tratados ou em culturas de célula nãotratadas. A adição de antagonistas para a atividade de ILA-17F e/ou ILA-17A,tal como receptores solúveis de ILA-17RC e anticorpos para estes incluindoos anticorpos monoclonais de ILA-17RC anti-humanos e neutralizadores dapresente invenção acentuadamente reduzem a produção de mediadoresinflamatórios e assim, esperar-se-ia fossem eficazes na RA e AO humana.

EXEMPLO 28Respostas Funcionais de ILA-17A e ILA-17F

As células de NIH-3T3/KZ142 foram estavelmentetransfectadas com ILA-17RCxl humano (SEQ ID NO: 1) e ILA-17RCxl decamundongo (SEQ ED NO: 25). Como descrito acima, cada linha foi tratadapor 7 e 15 minutos com uma resposta de dose de ILA-17A, ILA-17F, ILA-17F de murino e controles apropriados. Tanto ILA-17A quanto ILA-17Fderam uma resposta dependente de dose em fatores de transcrição de ΙκΒ-α ep38 MAPK fosforilados quando ILA-17RCxl (SEQ ID NO: 1) foitransfectado, aproximadamente 30% maior depois da sinalização inerente dalinhagem de controle. ILA-17A e ILA-17F não dera nenhum aumento nasinalização quando o ILA-17RCxl de murino (SEQ ID NO: 25) foitransfectado. O ILA-17F de murino não deu nenhum aumento na sinalizaçãopara ILA-17RCxl humano ou de murino.

EXEMPLO 29

Expressão de ILA-17A, ILA-17F, ILA-17RA e ILA-17RC em Modelos deDoença de Murino

Quatro modelos of doença de murino (asma, colite DSS,dermatite atópica e encefalomielite alérgica experimental) foram analisadosusando técnicas conhecidas para a expressão da ILA-17A, ILA-17F, ILA-17Re ILA-17RC.

No modelo de asma, ILA-17A e ILA-17F são expressados emníveis muito baixos a indetectáveis no pulmão, baço, linfônodos de drenagempulmonar e células infiltrantes pulmonares em camundongos doentes e nãodoentes. A mensagem de ILA-17RC foi descoberta ser mais altamenteexpressada no pulmão comparado com o baço e linfônodo mas não foiregulada com a doença. A ILA-17R foi mais altamente expressada no baço elinfônodo de drenagem pulmonar comparado ao pulmão mas também não foiregulado com a doença.

Ao contrário ao modelo de asma, ILA-17A e ILA-17F foramaltamente super reguladas em camundongos doentes mas não em normais nomodelo de DSS-colite tanto no cólon proximal quanto distai. Tampouco acitocina foi significantemente super regulada nos linfônodos mesentéricos.Além disso, foi descoberto que a super regulagem tanto de citocinas nocontexto da colite induzida por DSS aguda e não na colite induzida por DSScrônica. A ILA-17R foi descoberta ser proeminentemente expressada emlinfônodos mesentéricos quando comparada com cólon proximal e distai, masnão foi regulada com a doença, ao contrário, ILA-17RC foi mais altamenteexpressada em tecido de cólon proximal e distai comparado com linfônodosmesentéricos. A expressão de ILA-17RC também não foi regulada com adoença.

Na dermatite atópica, o mRNA de ILA-17A não foi detectável.A ILA-17F foi descoberta ser expressada tanto na pele quanto nos linfônodosde drenagem da pele mas não pareceram ser significantemente regulados comdoença. O mRNA de ILA-17R foi mais altamente expressada em linfônodosde drenagem da pele quando comparado com a pele mas não foi regulado coma doença. A ILA-17RC foi mais altamente expressada na pele comparado comlinfônodos de drenagem de da pele mas também não foi regulado com adoença.

Na encefalomielite alérgica experimental, tanto ILA-17Aquanto ILA-17F pareceram super reguladas na medula espinhal emcamundongos doentes mas não nos saudáveis. A ILA-17F pode ter sido maisaltamente expressada em linfônodos comparado com a medula espinhal mas aexpressão nos linfônodos não foi regulada com a doença. Entretanto, os níveisglobais de expressão nestes tecidos foi bastante baixo. A ILA-17R foi maisaltamente expressada em tecido de linfônodo comparado com o cérebro emedula espinhal. A ILA-17RC não foi testada.

Em resumo, a expressão de ILA-17A e ILA-17F parece serregulada com a doença no contexto dos modelos da colite induzida por DSS eencefalomielite alérgica experimental mas aparentemente não para asma oudermatite atópica. A expressão de ILA-17R e ILA-17RC não parece serregulado com a doença mas a expressão de ILA-17R parece ser enriquecidoem tecidos linfóide enquanto a expressão de ILA-17RC parece serenriquecida em tecidos não linfóidicos.

EXEMPLO 30

ILA-17RC é um Mediador de Ativação tanto para ILA-17A quanto paraILA-17F

A linhagem de célula de ensaio de nih3t3/kzl42.8 de murinofoi transfectada com um ILA-17RCX1 humana (SEQ ID NO: 2) em um vetorde expressão com um gene de resistência a metotrexato. (diidrofoliatoredutase, DHFR) ILA-17RA Humana (SEQ ID NO: 21) foi similarmentetranfectada nesta linhagem de célula. As transfecções foram realizadas usandoum kit comercialmente disponível e as recomendações do fabricante. (Mirus,Madison, WI. Cat. #MIR218) As células foram colocadas em 1 μΜ de meiode cultivo corrigido com mtx para selecionar quanto ao vetor de expressãocontendo as construções de expressão. Depois as reuniões de transfecção deseleção foram geradas e chamadas de nih3t3/kzl42.8/hcytorl4Xl enih3t3/kzl42.8/ILA-17R.

A) Ensaio de Luciferase usando as linhagens de célula com base menih3t3/kzl42.8.

Visto que as linhagens de célula com base em nih3t3/kzl42.8têm repórteres apl/nfkb estáveis (kzl42), não existe nenhuma necessidadepara a infecção por adenovírus adicionar este repórter. Assim o protocolo deensaio de luciferase foi encurtado e realizado do seguinte modo:

1. Plaqueamento de célula

As células foram plaqueadas a 5000 células/reservatório emplacas de 96 reservatórios revestidas de cultura de célula sólida, brancas, (Cat.#3917. Costar) usando DMEM/10% de FBS, contendo glutamina e corrigidocom piruvato e cultivadas durante a noite a 37°C e 5% de CO2. Neste segundodia, o meio de plaqueamento foi removido e trocado por DMEM/1% de FBS,contendo glutamina e corrigido com piruvato e cultivadas durante a noite a37°C e 5% de CO2.

2. Ensaio de Luciferase medindo a ativação de ILA-17A e ILA-17F dorepórter kz!42 estável

A seguir da incubação durante a noite no meio DMEM com1% de fbs, diluições de ligando ILA-17A e ILA-17F humanos foram feitasem meio isento de soro, corrigido com BSA a um nível de 28%. Depois deadicionar as diluições de ligando, as células foram incubadas a 37°C e 5% deCO2 por 4 horas, depois que o meio foi removido, as células lisadas por 15minutos e a intensidade de fluorescência média (MFI) medida usando osistema e reagentes do ensaio de luciferase, (Cat.#el531 Promega. Madison,WI.) e um luminômetro de Microplaca. A atividade foi detectada para ambosos ligandos em concentrações variando de 0,1 a 100 ng/ml.

As EC50s debatidas abaixo são médias de pelo menos 4experimentos. A reunião de transfecção nih3t3/kzl42.8/hcytorl4xl mostrouatividade similar para o ligando de ILA-17A de murino como o fêz alinhagem de célula precursora, com um EC50 de cerca de 4 ng/ml. (exemplo14) O fato de que a sinalização de mILA-17A na linhagem recombinantehcytorl4xl é comparável com aquela na linhagem de célula precursora(exemplo 14) sugere que ILA-17A de murino está provavelmente sinalizandoatravés dos receptores ILA-17RA ou ILA-17RC de célula nih3t3 de murinoendógeno e não ativa as células através de hcytorl4Xl. Entretanto, a reuniãode transfectante hILA-17RCXl mostrou uma responsividade elevada aotratamento com ILA-17A humano, com um EC50 de 0,41 ng/ml Vs 2,8 ng/ml(médias de 4 experimentos) na linhagem precursora (um EC50 6,8 vezes maispotente na linhagem recombinante) Além disso, a linhagem recombinantehILA-17RCXl teve uma responsividade realçada a hILA-17F, com um EC50de 0,61 ng/ml na linhagem recombinante Vs 10 ng/ml na linhagemprecursora, (um EC50 17 vezes mais potente na linhagem recombinante). Apotência aumentada para hILA-17A e hILA-17F na linhagem hILA-17RCXlé compatível com ILA-17RCX1 humana que é um receptor de alta afinidadetanto para ILA-17A quanto para ILA-17F humanos. Ao contrário, a linhagemrecombinante hILA-17RA teve a sensibilidade realçada apenas para hlLA-17A, com um EC50 de 0,6 ng/ml vs 2,8 ng/ml para a linhagem precursora.Não houve um realce da EC50 de hILA-17F na linhagem recombinante hlLA-17RA, com um EC50 de ILA-17F de 12,4 ng/ml vs 8,9 ng/ml na linhagemprecursora.

Este resultado é significante porque especificamente implicahILA-17RCXl como um mediador da ativação tanto de hILA-17A quanto deMLA-17F e sugere que hILA-17RA medeia a sinalização apenas para aativação de hILA-17A e não de hILA-17F.

EXEMPLO 31

Administração Intravenosa de ILA-17A e ILA-17F

Para deterrminar ρ efeito da liberação i.v. de ILA-17A ou ILA-17F de murino ou humanos nas contagens sangüíneas completas (CBC) ecitocinas/quimiocinas séricas em camundongos BALB/c em vários pontos detempo.

A administração i.v. de 1 μg de mILA-17A resultou em umaumento de aproximadamente 2 vezes nos neutrófilos circulantes (pela CBC)e aproximadamente um aumento de 10 vezes no KC e MCP-I sérico (porLuminex) 1 a 2 h a seguir da administração; resultados similares nestasquimiocinas foram observadas com 5 μg de hILA-17A. Os níveis demonócitos sangüíneos também foram significantemente aumentados emcamundongos tratados com 1 μg de mILA-17A (mostraram aumento maior),5 μg de MLA-17A ou 5 μg de hILA-17F no ponto de tempo de 2 h. Aadministração i.v. de m e hILA-17F resultou em aumentos acentuados naILA-15 sérica (pelo Luminex) nos pontos de tempo de 1 e 2 h e pequenosaumentos no KC e MCP-I séricos nestes mesmos pontos de tempo.

EXEMPLO 32

Neutralização da Administração Intravenosa de ILA-17A e ILA-17F

Para neutralizar os aumentos mediados por ILA-17A e ILA-17F i.v. nas citocinas e quimiocinas com receptores solúveis i.p. (mlLA-17RA: Fc para ligandos de murino; ILA-17RC humano solúvel para ligandoshumanos). Os camundongos BALB/c fêmeas foram administrados pelainjeção i.p. PBS5 100 μg de mILA-17RA: Fc ou 100 μg ILA-17RC humanosolúvel três horas antes de receber pela injeção da cauda i.v.: PBS; 2 μg demILA-17A, mILA-17F ou 2 μg tanto de mILA-17A quanto de ILA-17F (paracamundongos que receberam mILA-17RA:Fc); ou 2 μg de hILA-17A, hlLA-17F ou 2 μg tanto de hILA-17A quanto de hILA-17F (para camundongos quereceberam ILA-17RC humano solúvel). O soro foi coletado lha seguir daadministração de ligando e analisada quanto a um pequeno número decitocinas e quimiocinas séricas.

Os camundongos pré tratados com receptor solúvel i.p. tevereduções acentuadas em aumentos mediados por ILA-17A em concentraçõesséricas de ILA-17A e KC comparado com camundongos tratados com PBS+ILA-17A.

EXEMPLO 33

Ensaios de Ligação de Proteína com Base em Placa dos PolipeptídeosILA-17RC e ILA-17RC/ILA-17RA Solúveis

O formato do EIA de Captura é como segue: Revestir a placade ELISA com IgG de Cabra anti Humana a 1 μg/ml e incubar durante a noitea 4°C. Lavar e bloquear a placa com 200 μΐ por reservatório de BSA a 1% por1 hora na temperatura ambiente. Lavar, adicionar as variantes solúveis dereceptor (A1586F, A1587F) ou série de diluição de IL17RCxl (A1034F) (100μg/ml através de 0,10 μg/ml) à placa e incubar por 1 hora na temperaturaambiente. Lavar, adicionar ligando rotulado com biotina cerca de 10:1(IL17A) ou 6:1 (IL17F) e incubar por 1 hora na temperatura ambiente. Lavar,adicionar Estreptavidina - Rábano Peroxidase cerca de 0,5 μg/ml e incubarpor 1 hora na temperatura ambiente. Lavar, adicionar substrato de TMB por 4minutos. Interromper a reação pela adição de Solução de Parada. (Nota:Todos os volumes de reagente foram 50 μl por reservatório a menos que deoutro modo estabelecido). Um resultado positivo seria valores de OD alto, nogeral acima de 0,5. Os resultados indicaram que o construto 1342 (SEQ IDNO: 74) não liga ILA-17A e fracamente liga ILA-17F neste ensaio. Oconstruto 1341 (SEQ ID NO: 72) liga tanto ILA-17A quanto ILA-17F muitofortemente. ILA-17RCxl liga ILA-17A e ILA-17F.

O formato da EIA de neutralização é como segue: Revestir aplaca de ELISA com receptor solúvel (A1034F) a 1 μg/ml e incubar durante anoite a 4°C. Lavar e bloquear a placa com 200 μl por reservatório de BSA a1% por 1 hora na temperatura ambiente. Enquanto bloqueando, em uma placaseparada incubar as séires de diluição de variantes de receptor solúvel(A1586F, A1587F) (50 μg/ml até 0,05 μg/ml) com ligando rotulado combiotina cerca de 10:1 (IL17A) ou 6:1 (IL17F) em volumes iguais por 1 horana temperatura ambiente. Lavar a placa bloqueada, adicionar o complexo dereceptor-ligando à placa bloqueada e incubar por 1 hora na temperaturaambiente. Lavar, adicionar Estreptavidina-Rábano Peroxidase cerca de 0,5μg/ml e incubar por 1 hora na temperatura ambiente. Lavar, adicionarsubstrato TMB por 7 minutos. Interromper a reação pela adição de Solução deParada. (Nota: Todos os volumes de reagente foram 50 μl por reservatório amenos que de outro modo estabelecido). Um resultado positivo seriam valoresOD baixos, no geral abaixo de 0,5. Os resultados indicaram que o construto1342 (SEQ ID NO: 74) fracamente neutraliza a ligação de ILl7A a IL17RCxle fortemente neutraliza a ligação de IL17F a IL17RCxl. O construto 1341(SEQ ID NO: 72) fracamente neutraliza a ligação de ILl 7A a IL17RCxl efracamente neutraliza a ligação de ILl 7F a IL17RCxl. A Neutralização indicaque a proteína variante está ligando o ligando biotinilado.EXEMPLO 34

Protocolo de Ensaio de Ligação de FACS

Para avaliar a capacidade dos polipeptídeos de ILA-17RC eILA-17RC/ILA-17RA solúveis da presente invenção para ligar os ligandosILA-17A e ILA-17F, um ensaio de ligação competitiva com base nacitometria de fluxo foi utilizado. A incubação de uma linhagem de célulaBHK estavelmente transfectada com IL17RCx4 de comprimento completo napresença dos ligandos IL17A ou IL17F e o receptor solúvel alvejado paraligar os ligandos permite a detecção e quantificação relativa de ligando ligadoà superfície celular (e portanto não ligado pelo receptor solúvel). Abiotinilação do ligando permite a detecção de FACS usando um fluorofóroconjugado a Estreptavidina secundário. Uma redução no ligando ligado àcélula em uma titulação do receptor solúvel é registrada como uma redução nafluorescência média das células. Os ligandos biotinilados são individualmentepré-misturados a 1 μg/ml com quantidades titulantes de receptor solúvel emmeio de tingimento (HBSS + 1% de BSA + 0,1% de NaAzida + 10 mM deHEPES) em volumes de 100 μΐ e incubados na temperatura ambiente por 15minutos. Uma linhagem de célula BHK estavelmente transfectada comIL17RCx4 de comprimento completo é preparada para o tingimento deligando pela recolocação em suspensão com Versene (Invitrogen cat. 15040-066), equilibrando com 2 χ IO5 células/100 μΐ, pelotizando e colocando emsuspensão na pré mistura de ligando/ receptor solúvel. As células tingidas sãoincubadas a 4o por 30 minutos, lavadas Ix em meio de tingimento e tingidascom Estreptavidina-PE (BD Pharmingen cat. 554061) a uma razão de 1:100.As células são incubadas a 4o no escuro por 30 minutos, lavadas 2x em meiode tingimento e recolocadas em suspensão em uma razão 1:1 de meio detingimento e Cytofix (BD Bioscience 554655). O Citômetro de Fluxo BDLSRII ou instrumento similar é usado para a coleta e análise de dados. Afigura 5 representa um gráfico padrão. O gráfico foi gerado usando oprograma de software Prizm. Os valores Y representam o MFI normalizadoao máximo e mínimo (100% e 0%) com base no ligando apenas e nenhumreservatório de controle de ligando/nenhum reservatório de controle dereceptor solúvel e assim a ligação percentual do ligando às células. Osoftware calcula a IC50 para cada curva.

EXEMPLO 35

Inibição da Ligação Específica de ILA-17A e IL17F Biotinilado Humanocom um polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel

O ensaio de ligação usado para determinar a capacidade dospolipeptídeos de ILA-17RC e ILA-17RC/ILA-17RA solúveis para ligar ILA-17A e IL17F é aqui descrita. Os estudos de ligação são realizados comodebatido acima, exceto que os polipeptídeos solúveis adicionais, tais como asSEQ ID NOs: 157 e 158 foram incluídos na reação de ligação. Estepolipeptídeo solúvel inibiu a ligação tanto de ILA-17A quanto de ILA-17Fhumanos às células BHK transfectadas com ILA-17RC no mesmo grau comoa proteína de fusão ILA-17RCxl Fc humana solúvel (SEQ ID NO: 64). Oresto dos polipeptídeos solúveis, incluindo o polipeptídeo solúvel das SEQ IDNos: 157 e 158, são incluídos na Tabela 9 abaixo.

Tabela 9*

<table>table see original document page 218</column></row><table>

* IC50 da Ligação de Competição com Base em Célula (ng/μl); a ordem dosconstrutos dos aglutinantes mais fortes ao mais fracos com base nas IC50'spara cada ligando

EXEMPLO 36

Afinidade de Ligação dos Polipeptídeos ILA-17RC e ILA-17RC/ILA-17RA Solúveis a ILA-17A e ILA-17F

Os polipeptídeos ILA-17RCxl, ILA-17RA e ILA-17RC/ILA-17RA solúveis (SEQ ID Nos: 157 e 158) foram testados quanto a afinidade deligação tanto a ILA-17A quanto a ILA-17F como segue: Anticorpo específicoGt-anti-Hu IgG-Fc (Jackson #109-005-008) foi diluído a 50 μ^ιηΐ no pH 5,0Na Acetato e imobilizado em um chip CM5 Biacore. O protocolo foiotimizado para capturar o receptor em uma máxima de ligação teórica antesde injetar uma série de concentração de cada ligando para observar aassociação e a dissociação. Os receptores solúveis e o polipeptídeo ILA-17RC/ILA-17RA foram testados quanto a ligação de uma série deconcentração de cada ligando. A superfície foi regenerada com injecções 2 χsegundos de glicina pH 1,75 entre ciclos. Os dados foram avaliados usandoo software de avaliação Biacore para definir os valores cinéticos e sãomostrados na Tabela 10 abaixo.

Tabela 10*

<table>table see original document page 219</column></row><table><table>table see original document page 220</column></row><table>

*As constantes de equilíbrio e taxas são mostrados e os valores caem dentrodos limites da máquina.

Chi2 refere-se à soma dos quadrados dos resíduos entre ascurvas de ligação e as curvas de ajuste de avaliação. Quanto mais próximo de0, mais confiança nós temos nos dados data. Estes dados são mostrados comboa confiança.

Estes dados demonstram a ligação de ILA-17A humano e ILA-17F humano a ILA-17RA humano e ILA-17RC humano. Especificamente,ILA-17RC humano demonstra afinidade de ligação similar tanto para ILA-17A humano quanto ILA-17F humano com constantes de equilíbrio dedissociação (KD) na faixa de 400 picomolares (pM). O polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel ligou ILA-17A humano com afinidade levementemais alta, KD- 40 pM, do que o ILA-17F humano, KD- 140 pM. ILA-17RAhumano produziu a discrepância maior de afinidade de ligando com umadiferença de 100 vezes entre a ligação de ILA-17A humano, KD- 300 pM eILA-17F humano, KD- 30 nanomolares (nM).

EXEMPLO 37

Criação de Linhagens de Célula de Ensaio repórter ILA-17RA/NIH3T3/KZ142.8 e ILA-17RCx4/NIH3T3/KZ142.8 HumanosRecombinantes

A linhagem de célula repórter NIH3T3/KZ 142.8 de murinoaqui descrita foi usada para criar novas linhagens de célula de ensaio,recombinantes para ILA-17RA (SEQ ID NO: 21) ou ILA-17RCx4 (SEQ IDNO: 166) humanos. Isto foi realizado pela transfecção destas células comconstruções de expressão contendo cada um destes cDNAs. O vetor deexpressão utilizou, pzmpll, que contém o gene da diidrofoliato redutase.Assim os transfectantes foram selecionados usando 1 μΜ de meio decrescimento corrigido com metotrexato para criar reuniões estáveis. Estaslinhagens de célula de ensaio foram chamadas hILA-17RA/NIH3T3/KZ142.8e hILA-17RCX4/NIH3 T3/KZ142.8.

EXEMPLO 38

Um Polipeptídeo ILA-17RC/ILA-17RA Solúvel Antagoniza a Ativaçãopor ILA-17A Humano de Células ILA-17RA/NIH3T3/KZ142.8

Recombinantes Humanas

A eficácia da competição de polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel (SEQ ID Nos: 157 e 158) quanto a ativação de ILA-17Ahumano de células hILA-17RA/NIH3T3/KZ142.8 recombinantes foi medidacomo segue: O plaqueamento e a preparação de célula para um ensaio deluciferase foram os mesmos como aqueles aqui descritos. No dia do ensaio, aestas células foram primeiro dadas uma série de dose de 2 vezes em triplicatade um volume de receptores solúveis em 2 vezes a concentração finalincluindo o polipeptídeo solúvel acima, ILA-17RA e ILA-17RC começandoem um 2 μg/ml, (que resulta em uma concentração final de 1 μ£/ηι1 uma vezcombinado com o ligando). Em seguida um volume de ILA-17A foi aplicadoa 1 ng/ml, que é 2 vezes a concentração final de 0,5 ng/ml que resulta damistura de receptor-ligandos juntos. A ativação máxima foi determinadausando um conjunto em triplicata que recebeu 0,5 ng/ml de ILA-17A semreceptor. A ativação basal foi determinada usando um conjunto em triplicataque recebeu apenas meio de ensaio que não conteve nem ligando nemreceptor solúvel. A análise de dados revelou que a IC50 para a ativação deILA-17A da linhagem de célula acima pelo polipeptídeo solúvel foi 7 ng/ml.

Não houve potência suficiente de ILA-17RA ou ILA-17RC solúveis paraantagonizar de maneira convincente a ativação de 0,5 ng/ml de hILA-17Adesta linhagem de célula mesmo com receptor solúvel na dose mais alta de 1μg/ml.EXEMPLO 39

Um polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel Antagoniza a Ativaçãode ILA-17F Humano de Células ILA-17RA/NIH3T3/KZ142.8Recombinantes Humanas

A eficácia da competição do polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel (SEQ ID Nos: 157 e 158) quanto a ativação de ILA-17Fhumano de células hILA-17RA/NIH3T3/KZ 142.8 recombinantes (descritasacima) foi medida como segue: O plaqueamento e preparação de célula paraum ensaio de luciferase foram os mesmos como aqueles aqui descritos. Nodia do ensaio, a estas células foram primeiro dadas uma série de dose de 2vezes em triplicata de um volume de polipeptídeo solúvel a 2 vezes aconcentração final incluindo o polipeptídeo solúvel acima, ILA-17RA e ILA-17RC começando a uma dose de 4 μ§/πι1, (que resulta em uma concentraçãofinal de 2 μ^ηιΐ uma vez combinada com o ligando). Em seguida um volumede ILA-17F foi aplicado a 40 ng/ml, que é 2 vezes a concentração final de 20ng/ml que resulta da mistura de receptor-ligandos juntos. A ativação máximafoi determinada usando um conjunto em triplicata que recebeu 20 ng/ml deILA-17F sem receptor. A ativação basal foi determinada usando um conjuntoem triplicata que recebeu apenas meio de ensaio que não conteve nem ligandonem receptor solúvel. A análise de dados revelou IC50 para a ativação deILA-17F da linhagem de célula acima pelo polipeptídeo solúvel ILA-17RC/ILA-17RA de 0,48 μ^πιΐ. Não houve potência suficiente de ILA-17RAou ILA-17RC solúvel para mostrar qualquer antagonismo de 20 ng/ml deativação de ILA-17F desta linhagem de célula mesmo com a dose mais alta de2 μg/ml de receptor solúvel.

EXEMPLO 40

Um polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel Antagoniza a AtivaçãoILA-17F Humano de Células ILA-17RCx4/NIH3T3/KZ142.8Recombinantes HumanasA eficácia da competição do polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel (SEQ ID Nos: 157 e 158) quanto a ativação por ILA-17F decélulas hILA-17RCX4/NIH3 T3/KZ142.8 recombinantes (descrito acima) foimedido como segue: O plaqueamento e preparação de célula para um ensaiode um luciferase foram os mesmos como aqueles aqui descritos. No dia doensaio, estas células foram primeiro dadas em doses en série de 5 vezes emtriplicata de um volume de receptores solúveis em 2 vezes a concentraçãofinal incluindo o polipeptídeo solúvel acima, ILA-17RA e ILA-17RCcomeçando em 4 μg/ml. Em seguida um volume de ILA-17F lote A1275F foiaplicado a 2 ng/ml, que é 2 vezes a concentração final de 1 ng/ml que resultada mistura de receptor-ligandos juntos. A ativação máxima foi determinadausando um conjunto em triplicata que recebeu 1 ng/ml de ILA-17F semreceptor. A ativação basal foi determinada usando um conjunto em triplicataque recebeu apenas meio de ensaio que não conteve nem ligando nemreceptor solúvel. A análise de dados revelou IC50 para a ativação de ILA-17Fdo polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel de 0,8 μg/ml, ILA-17RC foi6 μg/ml e ILA-17RA não teve nenhum antagonismo em nenhuma dose.

EXEMPLO 41

polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel Neutraliza a Atividade deIndução Tanto de ILA-17A Quanto de ILA-17F Humanos de G-CSF,ILA-6 e ILA-8

As células epiteliais das vias aéreas pequenas humanas(SAEC) foram tratadas com ILA-17A humano ou com ILA-17F humano e ossobrenadantes de 48 horas foram coletados. Estes sobrenadantes foramensaiados e mostraram uma indução dependente da dose de G-CSF, ILA-6 eILA-8, como mostrado na Tabela 11 abaixo:Tabela 11

<table>table see original document page 224</column></row><table>

SAEC foram também tratados com doses de 0,01 a 10 μ§/πι1de polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel (SEQ ID Nos: 157 e 158)em combinação com 10 ng/ml de ILA-17A humano ou 50 ng/ml de ILA-17Fhumano (tanto o ligando quanto o polipeptídeo solúvel foram incubadosjuntos por 30 minutos a 37°C antes de adicionar às células) e sobrenadantesde 48 horas coletados. Como mostrado na Tabela 12 abaixo, estessobrenadantes mostraram G-CSF, ILA-6 e ILA-8 diminuídos, demonstrandoque o polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel foi capaz de neutralizareficazmente a atividade de indução tanto de ILA-17A humano quanto de ILA-17F humano destas citocinas. E mencionado que os valores de IC50 nãoforam capazes de serem determinados para a neutralização de ILA-6, porquena dose mais baixa (0,01 μ^ηι!) do polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RAsolúvel testado, a neutralização apenas retornou a aproximadamente 50% damax.).

Tabela 12

<table>table see original document page 224</column></row><table>DLA-6 49% neutralizado a 0,01 μ^πηΐIndução por huELA-17F (50 ng/ml) de 72% neutralizado a 10 μ§/ηι1ILA-6 57% neutralizado a 0,01 μ^ΓηΙ

EXEMPLO 42

Eficácia dos Polipeptídeos de ILA-17RC e ILA-17RC/ILA-17RA Solúveisem Amostras de Esclerose múltipla Humanas

A esclerose múltipla (MS) é uma doença complexa que éconsiderada ser mediada por vários fatores, incluindo a presença de infiltradosde célula inflamatória linfocítica e mononuclear e desmielinação por todo oCNS. Microglia são células equivalentes a macrófago que povoam o sistemanervoso central (CNS) e tornam-se ativados no dano ou infecção. As célulasde microglia e neuronais foram ambas implicadas como desempenhandopapéis críticos em várias doenças do CNS incluindo MS e podem ser usadospara estudar mecanismo(s) de iniciação, progressão e terapia da doença(Nagai et al. Neurobiol Dis 8: 1057-1068; 2001; Olson et al. J NeurosciMethods 128: 33-43; 2003; Giuliani et al. J Neuroimmunol 165: 83 - 91;2005). As culturas de célula neuronal primária, as linhagens de célulamicrogliais humanas imortalizadas e/ou linhagens de célula de astrogliahumanas estabelecidas, portanto, podem ser usadas para estudar alguns dosefeitos de mediadores inflamatórios nestes tipos de célula e seu potencial paraneutralização. Os mediadores inflamatórios (incluindo mas não limitados aILA-lb, ILA-6, ILA-8, ILA-12, ILA-13, ILA-15, ILA-17 AeF, ILA-18,ILA-23, TNF-a, IFN-g, membros da família MIP, RANTES, IP-10, MCP-1,G-e GM-CSF, etc.) podem contribuir para os sintomas e patologia associadoscom MS por intermédio de seu(s) efeito(s) sobre a ativação de caminhosinflamatórios e células efetoras a jusante.

De modo a avaliar as ações pró-inflamatórias de ILA-17A eILA-17F nestes tipos de células e a capacidade dos polipeptídeos solúveis dapresente invenção, tais como os polipeptídeos de ILA-17RC/ILA-17RAsolúveis (SEQ ID NO: 158) para neutralizar ou diminuir estes efeitos, ascélulas neuronais ou gliais cultivadas são tratadas com um dos seguintes:veículo; rhILA-17A; rhILA-17F; rhILA-17A+ILA-17F. Além disso, estes sãotratados com ou sem um polipeptídeo solúvel da presente invenção, tal comoo polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel (SEQ ID NO: 158). Em umconjunto separado de culturas, as células T circulantes isoladas de pacientehumano e ativadas com anti-CD3, são adicionadas às células neuronais egliais cultivadas na ausência de ILA-17A ou IL17-F exógenos, fornecendoassim um método de co-cultura de investigar os efeitos destrutivos de célulasT ativadas nestes tipos de célula. As células T são tratadas com ou sem umpolipeptídeo solúvel da presente invenção, tal como o polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel (SEQ ID NO: 158). Depois de tempos variáveis emcultura (de lha diversos dias), os sobrenadantes e células são coletados eanalisados quanto aos níveis e/ou expressão de mediadores inflamatórios,incluindo aqueles listados acima e também analisados quanto a sobrevivênciade célula. Os níveis de citocinas e quimiocinas inflamatórias e a morte decélulas neuronais, são elevados na presença de rhILA-17A e/ou ILA-17Fcomparado com as culturas tratadas apenas com veículo. A adição de umpolipeptídeo solúvel da presente invenção, tal como o polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel (SEQ ID NO: 158) acentuadamente reduz aprodução e expressão de mediadores inflamatórios nestas culturas e aumenta asobrevivência de célula nas células neuronais.

Portanto, porque estes experimentos ex vivo demonstram queum polipeptídeo solúvel da presente invenção, tal como o polipeptídeo deILA-17RC/ILA-17RA solúvel (SEQ ID NO: 158) pode reduzir as açõesdestrutivas e inflamatórias que são associadas com a patobiologia da MShumana, esperar-se-ia que o tratamento com tais polipeptídeos solúveis seriaeficaz em reduzir os aspectos inflamatórios, a morte neuronal, e/ou adesmielinação associada com a MS humana.

EXEMPLO 43

Eficácia dos Polipeptídeos de ILA-17RC e ILA-17RC/ILA-17RA solúveisem Amostras de Artrite Reumatóide ("RA") e Osteoartrite ("OA")Humanas

Estes modelos são planejados para mostrar que as culturassinoviais humanas (incluindo macrofagos sinoviais, fibroblastos sinoviais econdrócitos articulares) e explantes de pacientes com RA e OA produzemníveis mais altos de mediadores inflamatórios comparados com asculturas/explantes de controles saudáveis, que por sua vez poodem contribuirpara a degradação de componentes da matriz extracelular (por exemplo, osso,cartilagem, etc), que é uma marca distintiva destas doenças. Além disso, osmodelos de co-cultura descritos abaixo são planejados para mostrar que osmediadores inflamatórios presentes no fluido sinovial e/ou células T ativadasde RA/OA também podem resultar em inflamação e degradação de matrizmaiores.

A produção realçada de mediadores inflamatórios (incluindomas não limitadas a oncostatina M, ILA-lb, ILA-6, ILA-8, ILA-12, ILA-15,ILA-17 AeF, ILA-18, ILA-23, TNF-α, IFN-g, IP-10, RANTES, RANKL,membros da família MIP, MCP-1, MMP-9, G- e GM-CSF, óxido nítrico, etc.)contribui para os sintomas e patologia associados com RA e OA porintermédio de seu(s) efeito(s) sobre a ativação de caminhos inflamatórios ecélulas efetoras a jusante. Estes caminhos e componentes depois levam aosinfiltrados inflamatórios, perda/destruição de cartilagem e matriz, perda ósseae super regulagem de metaloproteases de matriz, prostaglandinas eciclooxigenases. Portanto, estes modelos podem simular os aspectosinflamatórios destrutivos da RA e OA em experimentos in vitro e ex vivo.

Além disso, quando explantes e culturas sinoviais de controles saudáveis sãocultivados na presença de componentes inflamatórios exogenamenteadicionados (por exemplo, oncostatina M, TNF-a, ILA-lb, ILA-6, ILA-17A eILA-17F, ILA-15, etc.) ou alternativamente, na presença de fluido sinovial depacientes RA (que podem conter componentes inflamatórios endogenamente),a sinalização dos caminhos inflamatório e degradativo podem ser observados.Os produtos terapêuticos que seriam eficazes na RA humano in vivofuncionariam nos modelos in vitro e ex vivo acima pela inibição e/ouneutralização da produção e/ou presença de mediadores inflamatórios.

Nestes modelos, explantes sinoviais humanos são coletados depacientes com RA3 OA ou de controles saudáveis que passam pelasubstituição de junta ou da coleta de tecido post-mortem e processados usandouma modificação de Wooley e Tetlow (Artrite Res 2: 65-70; 2000) e van 'tHof et al (Rheumatology 39: 1004-1008; 2000). As culturas de fibroblastossinoviais, macrófagos sinoviais e condrócitos articulares também sãoestudados. As amostras em duplicata são tratadas com um dos seguintes:veículo (PBS); ILA-17A recombinante humano (rh); rhILA-17F; ou rhlLA-17 A+rhIL A-17F e algumas amostras contêm várias combinações deoncostatina M, TNF-a, ILA-lb, ILA-6, ILA-17A, ILA-17F e ILA-15. Umconjunto separado de amostras é tratado com células T ativadas humanas oufluido sinovial de controles saudáveis ou pacientes com RA ou OA. Alémdisso, todas estas amostras são tratadas com ou sem um polipeptídeo solúvelda presente invenção, tal como um polipeptídeo de ILA-17RC solúvel ou umpolipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel (SEQ ID NO: 158). Depois detempo variável de cultura (de lha diversos dias), os sobrenadantes e ascélulas são coletados e analisados quanto aos níveis de mediadoresinflamatórios e biomarcadores de cartilagem/osso/ matriz, incluindo aqueleslistados acima. Em amostras de pacientes com RA ou OA ou em amostrastratadas com fluido sinovial de RA/OA, células T ativadas, rhILA-17A e/ourhILA-17F (sozinhas ou em combinação com outras citocinas inflamatórias),níveis de citocinas e quimiocinas inflamatória e marcadores degradativos decartilagem/osso/matriz são elevados comparado com os explantes de controlesaudáveis não tratados ou em culturas de célula não tratadas. A adição de umpolipeptídeo solúvel da presente invenção acentuadamente reduz a produçãode mediadores inflamatórios e degradativos de cartilagem/osso/matriz eassim, esperar-se-ia fossem eficazes na RA e OA humanas.

EXEMPLO 44

Eficácia dos Polipeptídeos de ILA-17RC e ILA-17RC/ILA-17RA Solúveisem Amostras da Doença do Intestino Inflamatório ("IBD") Humana porIntermédio de Culturas de Biópsia Mucósica

Este modelo é planejado para mostrar que tecido intestinalcultivado de pacientes com IBD produz níveis mais altos de mediadoresinflamatórios comparados com tecido de controles saudáveis. Esta produçãorealçada de inflamatória mediadores (incluindo mas não limitadas a ILA-lb,ILA-4, ILA-5, ILA-6, ILA-8, ILA-12, ILA-13, ILA-15, ILA-17 AeF, ILA-18, ILA-23, TNF-a, EFN-g, membros da família MIP, MCP-1, G- e GM-CSF,etc.) contribui para os sintomas e patologia associados com IBD tal como adoença de Crohn (CD) e colite ulcerativa (UC) por via de seu(s) efeito(s) naativação de caminhos inflamatórios e células efetoras a juzante. Estescaminhos e componentes depois leva ao dano/destruição de tecido e célulaobservados in vivo. Portanto, este modelo pode simular este aspecto mediadorinflamatório realçado de IBD. Além disso, quando tecido intestinal decontroles saudáveis ou de linhagens de célula epitelial intestinal humanas(IEC) é cultivada na presença destes componentes inflamatórios, a sinalizaçãodo caminho inflamatório pode ser observada, assim como evidência de danode tecido e célula.

Os produtos terapêuticos que seriam eficazes em IBD humanain vivo funcionariam nos modelos ex vivo ou IEC acima pela inibição e/ouneutralização da produção e/ou presença de mediadores inflamatórios.

Neste modelo, o tecido intestinal humano é coletado depacientes com IBD ou de controles saudáveis que passam pela biópsiaintestinal, ressecção ou coleta de tecido post-mortem e processados usandouma modificação de Alexakis et al (Gut 53: 85-90; 2004). Sob condiçõesassépticas, as amostras são suavemente limpadas com quantidades copiosasde PBS5 seguido pelo cultivo de secções picadas de tecido, na presença demeio de cultura de tecido completa (nais antibióticos para impedir ocrescimento bacteriano excessivo). A amostras dos mesmos grupos de tecidopicado são tratadas com um dos seguintes: veículo (PBS); ILA-17Arecombinante humano (rh); rhILA-17F; ou rhILA-17A+rhILA-17F. Alémdisso, são tratados com ou sem um polipeptídeo solúvel da presente invenção,tal como um polipeptídeo ILA-17RC solúvel ou um polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel (SEQ ID NO: 158). Este protocolo experimental éseguido por estudos com linhagens de IEC humano, com a exceção de que ascélulas são passadas de estoques existentes. Depois de tempos variáveis emcultura (de lha diversos dias), os sobrenadantes são coletados e analisadosquanto aos níveis de mediadores inflamatórios, incluindo aqueles listadosacima. Em amostras de pacientes com IBD ou em amostras tratadas comrhILA-17A e/ou F, os níveis de citocinas e quimiocinas inflamatórias sãoelevados comparado com amostras de tecido de controle saudável nãotratadas. A adição de um polipeptídeo solúvel da presente invençãoacentuadamente reduz a produção de mediadores inflamatórios e assim,esperar-se-ia fossem eficazes na IBD humana.

Um ramo adicional deste estudo pode incluir comparações daprodução de mediadores inflamatórios de biópisas de tecido de pacientes comIBD que passam por tratamento eficaz e aqueles que correntemente nãotomam medicações ou não respondedores considerados para o tratamento.

EXEMPLO 45

Eficácia dos Polipeptídeos de ILA-17RC e ILA-17RC/ILA-17RA Solúveisem Amostras de IBD Humana por intermédio da Função de BarreiraEpitelial

A manutenção da integridade da barreira epitelial é um fatorcrítico na preservação de um trato gastrointestinal saudável. Evidênciaexperimental sugere que o vazamento da barreira epitelial no intestino podecontribuir para o desenvolvimento de IBD. As células imunes localizadas nalâmina própria intestinal no geral interagem com as células epiteliaisintestinais por intermédio do contato de célula para célula ou produção defatores solúveis para manter a imuno vigilância e contribuir para a integridadeda barreira epitelial. Entretanto, a inflamação imuno-mediada prolongada oudesregulada pode contribuir para defeitos na integridade e função celulares dabarreira epitelial. O seguinte estudo é planejado para medir o(s) efeito(s)direto(s) de ILA-17A e/ou ILA-17F derivados de célula T na integridade dabarreira epitelial.

Neste Exemplo, as linhagens de célula epitelial intestinal,como as células Caco-2, são diferenciadas nas membranas semi-permeáveis eco-cultivadas no lado basolateral com células T ou monócitos derivados debiópsias de pacientes IBD ou indivíduos normais. A integridade damonocamada epitlelial é monitorada com o tempo usando a avaliação deresistência elétrica transepitelial ou resistência da monocamada para a difusãode pigmento. As dimnuições na resistência transepiteliais de monocamadasem co-culturas sugerem um rompimento na monocamada induzida pelaatividade das células T ou monócitos na co-cultura. Os inibidores de ILA-17Ae ILA-17F tais como os polipeptídeos solúveis da presente invenção, taiscomo um polipeptídeo de ILA-17RC solúvel ou um polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel (SEQ ID NO: 158) poderiam ser usados paradeterminar a contribuição relativa de ILA-17A e ILA-17F para o rompimentoda monocamada epitelial e testar se os inibidores de ILA-17A e ILA-17Fseriam eficazes na manutenção da integridade da barreira epitelial. Aprevenção do rompimento da monocamada epitelial induzido pelas células Tativadas por tais moléculas sugeriria que os polipeptídeos de ILA-17RC eILA-17RC/ILA-17RA solúveis da presente invenção podem ser eficazes parao tratamento terapêutico de IBD em seres humanos.Os sistemas de co-cultura também podem ser gerados usandomonocamadas formadas pelo epitélio primário de pacientes com IBD paradeterminar se estas células são mais sensíveis a ILA-17A e ILA-17Fcomparadas com as células epiteliais derivadas de indivíduos saudáveis. Seassim, estes dados sugeririam que a inibição de ILA-17A e ILA-17F seriauma estratégia adequada para o tratamento terapêutico de IBD.

EXEMPLO 46

Efeitos de ILA-17A e ILA-17F sobre as células T eMonócitos/Macrófagos da Lâmina Própria de Amostras de Normais e deIBDHumanas

A inflamação imuno-mediada desregulada ou prolongada podecontribuir para os sintomas e patologia associados com IBD por intermédiodo dano de tecido ou distorção permanente para respostas imunesinapropriadas ou prolongadas. Este modelo pode determinar as conseqüênciasa juzante potenciais da exposição de células T e monócitos associados com adoença a ILA-17A e ILA-17F que podem estar presentes no meio de citocinaambiental imediato do tecido intestinal.

Os produtos terapêuticos que seriam eficazes na IBD humanain vivo poderiam funcionar nos modelos ex vivo acima pela inibição e/ouneutralização da produção e/ou presença de mediadores inflamatórios(incluindo mas não limitados a ILA-lb, ILA-4, ILA-5, ILA-6, ILA-8, ILA-12,ILA-13, ILA-15, ILA-17 AeF, ELA-18, ILA-23, TNF-a, IFN-g, membros dafamília MIP, MCP-1, G- e GM-CSF, etc.).

Neste modelo, as células T e monócitos/macrofagos sãoisolados de amostras de biópsia picando-se cuidadosamente biópsias comtesouras em HBSS, tratando com colagense e Dispase II e incubando por 1hora a 37°C em um agitador. A suspensão de célula é filtrada através demalha de náilon para remover fragmentos e grumos de célula e lavadamúltiplas vezes em HBSS. As células T e macrofago/monócitos podem serisolados usando os protocolos de classificação de célula direta ouenriquecimento/esgotamento de pérola. As células isoladas são incubadas napresença de ILA-17A e ILA-17F. Isto induz a produção de mediadoresinflamatórios pelas células T e monócitos/macrofagos ou resulta na distorçãode respostas de célula T subseqüentes para pró-respostas altamenteinflamatórias. As comparações entre os tipos de mediadores inflamatóriosproduzidos pelas células de pacientes IBD e aquelas de células de indivíduosnormais podem ser feitas e podem sugerir que as células T emonócito/macrofagos de pacientes IBD produzem um perfil mais pró-inflamatório na presença de ILA-17A e ILA-17F. A adição de umpolipeptídeo solúvel da presente invenção, tal como um polipeptídeo ILA-17RC solúvel ou um polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel (SEQ IDNO: 158) para neutralizar a produção de mediadores inflamatórios a juzanteinduzidos por ILA-17A e ILA-17F sugere que tais polipeptídeos de ILA-17RC e ILA-17RC/ILA-17RA solúveis podem ser eficazes no tratamentoterapêutico de pacientes com IBD.

EXEMPLO 47

Eficácia dos Polipeptídeos de ILA-17RC e ILA-17RC/ILA-17RA solúveisna Síndrome do Intestino Irritável ("IBS"): Patogênese direcionada ao CNS

Um modelo focalizando na patogênese direcionada ao CNSprimária de IBS que utiliza estímulos de estresse para induzir sintomascaracterísticos de IBS. O modelo de estresse psicossocial neonatal imitaalgumas características clínicas associadas com pacientes IBS incluindohiperalgesia visceral, diarréia e sensibilidade ao estresse. A separação diáriado filhote da sua mãe por 180 minutos a cada dia durante os 4 a 18 dias pósnatal resultará em uma alteração do comportamento maternal esignificantemente reduz o tempo do comportamento de lambeção/ penteação.

O estresse nos neonatos resulta em mudanças permanentes no CNS resultandoem sensibilidade à dor visceral e somática induzida pelo estresse alterada. Afunção motora colônica em resposta ao estresse é realçada nestes animais e osdados preliminares mostram a incidência de permeabilidade intestinalaumentada (Mayer et al., 2002). O tratamento com um polipeptídeo solúvelda presente invenção, tal como um polipeptídeo ILA-17RC solúvel ou umpolipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel (SEQ ID NO: 158) e a análisesubseqüente de função motora colônica, poermeabilidade epitelial e respostaaos estímulos de estresse podem determinar a eficácia neste modelo animal deIBS. Diminuições na incidência de sintomas a seguir do tratamento com estesinibidores sugeriria eficácia potencial no tratamento de IBS.

EXEMPLO 48

Eficácia dos Polipeptídeos de ILA-17RC e ILA-17RC/ILA-17RA solúveisna Síndrome do Intestino Irritável ("IBS"): Indutores direcionados aoIntestino Primários de Estresse

Este é um modelo focalizando nos indutores direcionados aointestino primários de estresse (isto é, inflamação intestinal, infecção ouestresse físico). Os estudos de animal têm indicado que a inflamação de graubaixo ou imuno ativação pode ser uma base para a motilidade alterada, e/oufunção aferente e epitelial do intestino (Mayer et al,. 2002). Neste modelo, airritação do cólon diária é produzida em animais neonatais (dias 8 a 21) naforma de injeção intracolônica diária de óleo de mostarda. O óleo de mostardaé um estimulante neura e foi mostrado induzir a hiperalgesia visceral a seguirda administração intracolônica. Este modelo imita características chave daIBS incluindo a hipersensibilidade visceral e alteração nos hábitos intestinais.Os animais também apresentam-se com diarréia ou constipação, umacaracterística chave dos pacientes com IBS (Mayer et al., 2002; Kimball etal., 2005). Um polipeptídeo solúvel da presente invenção, tal como umpolipeptídeo de ILA-17RC solúvel ou um polipeptídeo de ILA-17RC/ILA-17RA solúvel (SEQ ID NO: 158) podem ser liberados para determinarmudanças no desenvolvimento de sintomas associados com este modelo. Asdiminuições na incidência ou magnitude da hipersensibilidade visceral emotilidade intestinal alterada a seguir do tratamento terapêutico com nossosinibidores sugeriria um potencial para estas moléculas como sendo eficazesno tratamento de IBS.

EXEMPLO 49

Planejamento de um Processo de Produção de Proteína Escalonável paraum Antagonista de ILA-17A e ILA-17F Solúvel

No planejamento de estratégias focalizadas nodesenvolvimento de um processo de produção de proteína escalonável parauma forma solúvel de ILA-17RC, muitas dificuldades foram encontradas coma identificação de um sistema de expressão que possibilitasse concentrações" de proteína de alto nível no meio condicionado. A análise de Western blotdemonstrou níveis baixos de secreção de proteína com acúmulo de proteínana célula. Na descoberta dos polipeptídeos solúveis da presente invenção,mais do que setenta construtos de expressão diferentes foram planejados,gerados e testados para a expressão em células BHK, células CHO ou célulasHEK 293. Diversos foram testados em mais do que uma linhagem de célulahospedeira. Variações de cassete de expressão de ILA-17RC solúvel testadasincluíram:

1) Seqüências de signal alternativas tais como: a) nativo; b)otPA; c) região variável de cadeia pesada de imunoglobulina de camundongo;d) hormônio do crescimento humano; e) IL17RA de camundongo.

2) Duas variantes de junção diferentes ocorrem naturalmente(ILA-17RCxl, SEQ ID NO: 2; e ILA-17RCx4, SEQ ID NO: 166).

3) A adição de seqüências ligadoras entre o domínioextracelular de ILA-17RC (ECD) e a porção Fc, tal como: a) nenhum ligador;b) um ligador de 9 aminoácidos com base em GlyGlyGlySer; e c) um ligadorde 20 aminoácidos com base em GlyGlyGlySer.4) Formas monoméricas alvejadas a His.

5) Proteínas de fusão Fc tanto de terminal amino quantocarboxila.

6) Remoção de sítios de ligação de carboidrato ligados a N.

7) Substituições de aminoácido de Gln no lugar de Asn.

8) Proteínas de fusão híbridas entre IL17RA e IL17RC

Todos os construtos de variante de expressão de ILA-17RCsolúveis foram testados quanto a expressão da proteína pela transfecçãotransitória em células HEK 293. A análise de Western blot foi usada paradetectar a proteína secretada no meio condicionado comparado à proteínaretida na célula pela amostragem de lisados de célula. A maioria dasconstruções de proteína expressadas secretadas no meio condicionado que foiapenas detectável pela Western Blot. Adicionalmente, o sinal foi maior daamostra de lisado de célula em comparação à amostra de meio condicionadoindicando uma incapacidade para a proteína ser eficientemente secretada.

Estes construtos de expressão que resultaram nos sinais mais altos no meiocondicionado foram usados para transfectar reuniões de célula CHO estáveis.Os títulos de proteína foram medidos a partir das reuniões de CHO estáveis eonde possível, a proteína purificada foi analisada quanto a ligação de ILA-17A e ILA-17F em um ensaio de ligação de competição com base em célula.

A tabela seguinte mostra os resultados da expressão de proteína do construtode expressão mais alta nas reuniões estáveis de célula CHO. Onde mediçõesde concentração de proteína absolutas foram abaixo do nível de detecção, otítulo da proteína é indicado como <0,5 mg/ml.

A designação de número aos construtos de expressão daproteína de ILA-17RC e ILA-17RC/RA, a descrição resumida de exonsincluídos, o título de proteína de reuniões de célula CHO estavelmentetransfectadas e a capacidade de ligação de IL17A e ILl 7F. Nem todas asseqüências das variantes incluídas na Tabela 13 foram aqui incluídas.<table>table see original document page 237</column></row><table>

A partir do precedente, será avaliado que, embora as formas derealização específicas da invenção tenham sido aqui descritas com ospropósitos de ilustração, várias modificações podem ser feitas sem desviar doespírito e escopo da invenção.LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA

<110> Levin, Steven D.Rixon, Mark W.Gao, ZerenLewis, Katherine E.Bilsborough, JanineTaft, David W.

<120> Antagonistas de IL-17A e IL-17F e Métodos de Usar os Mesmos<130> 05-30

<140> Ainda Não Designado

<141> 28-09-2006

<150> 60/721.162

<151> 28-09-2005

<150> 60/753.794

<151> 22-12-2005

<150> 60/772.022

<151> 10-02-2006

<150> 60/782,247

<151> 14-03-2006

<160> 181

<170> FastSEQ para Versão Windows 4.0

<210> 1

<211> 2255

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<220>

<221> CDS

<222> (154)...(2229)<220>

<223> Ativador de Plasminogênio de Tecido Otimizado (otPA)seqüência de sinal pre-pro e exons 7 a 10 de IL-17RCe Fc5 humanos

<400> 1

aactacccag cacagccccc tccgccccct ctggaggctg aagagggatt ccagcccctg 60ccacccacag acacgggctg actggggtgt ctgcccccct tggggggggg cagcacaggg 120cctcaggcct gggtgccacc tggcacctag aag atg cct gtg ccc tgg ttc ttg 174

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu1 5

ttg gca ctg ggc cga age cca gtg gtc ctt tet ctg gag agg 222Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro Val Val Leu Ser Leu Glu Arg10 15 20

ggg cct cag gac gct acc cac tgc tet ccg ggc ctc tcc tgc 270Gly Pro Gln Asp Ala Thr His Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys30 35

tgg gac agt gac ata ctc tgc ctg cct ggg gac ate gtg cct 318Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro45 50 55

ggc ccc gtg ctg gcg cct acg cac ctg cag aca gag ctg gtg 366Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr His Leu Gln Thr Glu Leu Val60 65 70

tgc cag aag gag acc gac tgt gac ctc tgt ctg cgt gtg gct 414Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala75 80 85

ctg tccLeu Ser

ctt gtgLeu Val25

cgc ctcArg Leu40

gct ccgAla Pro

ctg aggLeu Arg

gtc cac ttg gcc gtg cat ggg cac tgg gaa gag cct gaa gat gag gaa

462Val His Leu Ala Val His Gly His Trp Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu

90 95 100

aag ttt gga gga gca gct gac tca ggg gtg gag gag cct agg aat gcc 510

Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala105 110 115

tct ctc cag gcc caa gtc gtg ctc tcc ttc cag gcc tac cct act gcc 558

Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala

120 125 130 135

cgc tgc gtc ctg ctg gag gtg caa gtg cct gct gcc ctt gtg cag ttt 606

Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe

140 145 150

ggt cag tct gtg ggc tct gtg gta tat gac tgc ttc gag gct gcc cta 654

Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu

155 160 165

ggg agt gag gta cga ate tgg tcc tat act cag ccc agg tac gag aag 702

Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys

170 175 180

gaa ctc aac cac aca cag cag ctg cct gcc ctg ccc tgg ctc aac gtg 750

Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val185 190 195

tca gca gat ggt gac aac gtg cat ctg gtt ctg aat gtc tct gag gag 798

Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu

200 205 210 215

cag cac ttc ggc ctc tcc ctg tac tgg aat cag gtc cag ggc ccc cca 846

Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro

220 225 230

aaa ccc cgg tgg cac aaa aac ctg act gga ccg cag ate att acc ttg 894

Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu

235 240 245

aac cac aca gac ctg gtt ccc tgc ctc tgt att cag gtg tgg cct ctg 942

Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu

250 255 260

gaa cct gac tcc gtt agg acg aac ate tgc ccc ttc agg gag gac ccc 990

Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro265 270 275

cgc gca cac cag aac ctc tgg caa gcc gcc cga ctg cga ctg ctg acc 1038

Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr

280 285 290 295

ctg cag age tgg ctg ctg gac gca ccg tgc tcg ctg ccc gca gaa gcg 1086

Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala

300 305 310

gca ctg tgc tgg cgg gct ccg ggt ggg gac ccc tgc cag cca ctg gtc 1134

Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val

315 320 325

cca ccg ctt tcc tgg gag aac gtc act gtg gac aag gtt ctc gag ttc 1182

Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe

330 335 340cca ttg ctg aaa ggc cac cct aac ctc tgt gtt cag gtg aac age tcg 1230Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser345 350 355

gag aag ctg cag ctg cag gag tgc ttg tgg gct gac tcc ctg ggg cct 1278Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro360 365 370 375

ctc aaa gac gat gtg cta ctg ttg gag aca cga ggc ccc cag gac aac 1326Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn380 385 390

aga tcc ctc tgt gcc ttg gaa ccc agt ggc tgt act tca cta ccc age 1374Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser395 400 405

aaa gcc tcc acg agg gea gct cgc ctt gga gag tac tta cta caa gac 1422Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp410 415 420

ctg cag tca ggc cag tgt ctg cag cta tgg gac gat gac ttg gga gcg 1470Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala425 430 435

cta tgg gcc tgc ccc atg gac aaa tac ate cac aag cgc tgg gcc ctc 1518Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Arg Trp Ala Leu440 445 450 455

gtg tgg ctg gcc tgc cta ctc ttt gcc gct gcg ctt tcc ctc ate ctc 1566Val Trp Leu Ala Cys Leu Leu Phe Ala Ala Ala Leu Ser Leu Ile Leu460 465 470

ctt ctc aaa aag gat cac gcg aaa gcg gcc gcc agg ggc cgc gcg gct 1614Leu Leu Lys Lys Asp His Ala Lys Ala Ala Ala Arg Gly Arg Ala Ala475 480 485

ctg ctc ctc tac tca gcc gat gac tcg ggt ttc gag cgc ctg gtg ggc 1662Leu Leu Leu Tyr Ser Ala Asp Asp Ser Gly Phe Glu Arg Leu Val Gly490 495 500

gcc ctg gcg tcg gcc ctg tgc cag ctg ccg ctg cgc gtg gcc gta gac 1710Ala Leu Ala Ser Ala Leu Cys Gln Leu Pro Leu Arg Val Ala Val Asp505 510 515

ctg tgg age cgt cgt gaa ctg age gcg cag ggg ccc gtg gct tgg ttt 1758Leu Trp Ser Arg Arg Glu Leu Ser Ala Gln Gly Pro Val Ala Trp Phe520 525 530 535

cac gcg cag cgg cgc cag acc ctg cag gag ggc ggc gtg gtg gtc ttg 1806His Ala Gln Arg Arg Gln Thr Leu Gln Glu Gly Gly Val Val Val Leu540 545 550

ctc ttc tet ccc ggt gcg gtg gcg ctg tgc age gag tgg cta cag gat 1854Leu Phe Ser Pro Gly Ala Val Ala Leu Cys Ser Glu Trp Leu Gln Asp555 560 565

ggg gtg tcc ggg ccc ggg gcg cac ggc ccg cac gac gcc ttc cgc gcc 1902Gly Val Ser Gly Pro Gly Ala His Gly Pro His Asp Ala Phe Arg Ala570 575 580

tcg ctc age tgc gtg ctg ccc gac ttc ttg cag ggc cgg gcg ccc ggc 1950Ser Leu Ser Cys Val Leu Pro Asp Phe Leu Gln Gly Arg Ala Pro Gly585 590 595age tac gtg ggg gcc tgc ttc gac agg ctg ctc cac ccg gac gcc gta 1998Ser Tyr Val Gly Ala Cys Phe Asp Arg Leu Leu His Pro Asp Ala Val600 605 610 615

ccc gcc ctt ttc cgc acc gtg ccc gtc ttc aca ctg ccc tcc caa ctg 2046Pro Ala Leu Phe Arg Thr Val Pro Val Phe Thr Leu Pro Ser Gln Leu620 625 630

cca gac ttc ctg ggg gcc ctg cag cag cct cgc gcc ccg cgt tcc ggg 2094Pro Asp Phe Leu Gly Ala Leu Gln Gln Pro Arg Ala Pro Arg Ser Gly635 640 645

cgg ctc caa gag aga gcg gag caa gtg tcc cgg gcc ctt cag cca gcc 2142Arg Leu Gln Glu Arg Ala Glu Gln Val Ser Arg Ala Leu Gln Pro Ala650 655 660

ctg gat age tac ttc cat ccc ccg ggg act ccc gcg ccg gga cgc ggg 2190Leu Asp Ser Tyr Phe His Pro Pro Gly Thr Pro Ala Pro Gly Arg Gly665 670 675

gtg gga cca ggg gcg gga cct ggg gcg ggg gac ggg act taaataaagg 2239Val Gly Pro Gly Ala Gly Pro Gly Ala Gly Asp Gly Thr680 685 690

cagacgctgt ttttct 2255

<210> 2<211> 692<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 2

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro

1 5 10 15

Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His

20 25 30

Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys

35 40 45

Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr

50 55 60

His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80

Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp

85 90 95

Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly

100 105 110

Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser

115 120 125

Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val

130 135 140

Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160

Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr

165 170 175

Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro

180 185 190

Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu

195 200 205

Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp

210 215 220

Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr225 230 235 240

Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu245 250 255Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile

260 265 270

Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala

275 280 285

Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro

290 295 300

Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly305 310 315 320

Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr

325 330 335

Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu

340 345 350

Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu

355 360 365

Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu

370 375 380

Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser385 390 395 400

Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu

405 410 415

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420 425 430

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435 440 445

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450 455 460

Ala Ala Leu Ser Leu Ile Leu Leu Leu Lys Lys Asp His Ala Lys Ala465 470 475 480

Ala Ala Arg Gly Arg Ala Ala Leu Leu Leu Tyr Ser Ala Asp Asp Ser

485 490 495

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515 520 525

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610 615 620

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660 665 670

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675 680 685

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690<210> 3<211> 432<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 3

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20 25 30

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85 90 95

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115 120 125

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130 135 140

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165 170 175

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325 330 335

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355 360 365

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370 375 380

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405 410 415

Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Arg420 425 430

<210> 4<211> 1753<212> DNA<213> Homo sapiens<220><221> CDS<222> (2)...(1726)<400> 4

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agg ctc ttg aaa cag gac gtc cgc tcg ggg gcg gcc gcc agg ggc cgc 1105Arg Leu Leu Lys Gln Asp Val Arg Ser Gly Ala Ala Ala Arg Gly Arg355 360 365

gcg gct ctg ctc ctc tac tca gcc gat gac tcg ggt ttc gag cgc ctg 1153Ala Ala Leu Leu Leu Tyr Ser Ala Asp Asp Ser Gly Phe Glu Arg Leu370 375 380

gtg ggc gcc ctg gcg tcg gcc ctg tgc cag ctg ccg ctg cgc gtg gcc 1201Val Gly Ala Leu Ala Ser Ala Leu Cys Gln Leu Pro Leu Arg Val Ala385 390 395 400

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<210> 5<211> 575<212> PRT

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1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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85 90 95

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala

165 170 175

Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys

180 185 190

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195 200 205

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210 215 220

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Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg

245 250 255

Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys

260 265 270

Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu

275 280 285

Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp

290 295 300

Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His305 310 315 320

Lys Arg Trp Ala Leu Val Trp Leu Ala Cys Leu Leu Phe Ala Ala Ala325 330 335Leu Ser Leu Ile 340 Leu Leu Leu Lys Lys 345 Asp His Ala Lys Gly 350 Trp LeuArg Leu Leu 355 Lys Gln Asp Val Arg 360 Ser Gly Ala Ala Ala 365 Arg Gly ArgAla Ala 370 Leu Leu Leu Tyr Ser 375 Ala Asp Asp Ser Gly 380 Phe Glu Arg LeuVal Gly Ala Leu Ala Ser Ala Leu Cys Gln Leu Pro Leu Arg Val Ala385 390 395 400Val Asp Leu Trp Ser 405 Arg Arg Glu Leu Ser 410 Ala Gln Gly Pro Val 415 AlaTrp Phe His Ala 420 Gln Arg Arg Gln Thr 425 Leu Gln Glu Gly Gly 430 Val ValVal Leu Leu 435 Phe Ser Pro Gly Ala 440 Val Ala Leu Cys Ser 445 Glu Trp LeuGln Asp 450 Gly Val Ser Gly Pro 455 Gly Ala His Gly Pro 460 His Asp Ala PheArg Ala Ser Leu Ser Cys Val Leu Pro Asp Phe Leu Gln Gly Arg Ala465 470 475 480Pro Gly Ser Tyr Val 485 Gly Ala Cys Phe Asp 490 Arg Leu Leu His Pro 495 AspAla Val Pro Ala 500 Leu Phe Arg Thr Val 505 Pro Val Phe Thr Leu 510 Pro SerGln Leu Pro 515 Asp Phe Leu Gly Ala 520 Leu Gln Gln Pro Arg 525 Ala Pro ArgSer Gly 530 Arg Leu Gln Glu Arg 535 Ala Glu Gln Val Ser 540 Arg Ala Leu GlnPro Ala Leu Asp Ser Tyr Phe His Pro Pro Gly Thr Pro Ala Pro Gly545 550 555 560Arg Gly Val Gly Pro 565 Gly Ala Gly Pro Gly 570 Ala Gly Asp Gly Thr 575

<210> 6<211> 1725<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência degenerada<220>

<221> misc_feature<222> (1) ... (1725)<223> η = Α,Τ,C ou G<400> 6

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<210> 7<211> 2076<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência degenerada<220>

<221> misc_feature<222> (1)...(2076)<223> η = A,T,C ou G<400> 7

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<210> 8<211> 21<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Iniciador de PCR<400> 8

cggcgtggtg gtcttgctct t 21

<210> 9<211> 16<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo ligador<400> 9

Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10 15

<210> 10<211> 688<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Proteína Zcytorl4 quimérica<4 00> 10

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro

15 10 15

Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His

20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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85 90 95

Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly

100 105 110

Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser

115 120 125

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130 135 140

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Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr

165 170 175

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180 185 190

Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu

195 200 205

Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp

210 215 220

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Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu

245 250 255

Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile

260 265 270

Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala

275 280 285

Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro

290 295 300

Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly305 310 315 320

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325 330 335

Val Asp Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp

340 345 350

Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr

355 360 365

Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly

370 375 380

Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly385 390 395 400Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp 405 410 415 Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile 420 425 430 His Lys Arg Trp Ala Leu Val Trp Leu Ala Cys Leu Leu Phe Ala Ala 435 440 445 Ala Leu Ser Leu Ile Leu Leu Leu Lys Lys Asp His Ala Lys Gly Trp 450 455 460 Leu Arg Leu Leu Lys Gln Asp Val Arg Ser Gly Ala Ala Ala Arg Gly465 470 475 480Arg Ala Ala Leu Leu Leu Tyr Ser Ala Asp Asp Ser Gly Phe Glu Arg 485 490 495 Leu Val Gly Ala Leu Ala Ser Ala Leu Cys Gln Leu Pro Leu Arg Val 500 505 510 Ala Val Asp Leu Trp Ser Arg Arg Glu Leu Ser Ala Gln Gly Pro Val 515 520 525 Ala Trp Phe His Ala Gln Arg Arg Gln Thr Leu Gln Glu Gly Gly Val 530 535 540 Val Val Leu Leu Phe Ser Pro Gly Ala Val Ala Leu Cys Ser Glu Trp545 550 555 560Leu Gln Asp Gly Val Ser Gly Pro Gly Ala His Gly Pro His Asp Ala 565 570 575 Phe Arg Ala Ser Leu Ser Cys Val Leu Pro Asp Phe Leu Gln Gly Arg 580 585 590 Ala Pro Gly Ser Tyr Val Gly Ala Cys Phe Asp Arg Leu Leu His Pro 595 600 605 Asp Ala Val Pro Ala Leu Phe Arg Thr Val Pro Val Phe Thr Leu Pro 610 615 620 Ser Gln Leu Pro Asp Phe Leu Gly Ala Leu Gln Gln Pro Arg Ala Pro625 630 635 640Arg Ser Gly Arg Leu Gln Glu Arg Ala Glu Gln Val Ser Arg Ala Leu 645 650 655 Gln Pro Ala Leu Asp Ser Tyr Phe His Pro Pro Gly Thr Pro Ala Pro 660 665 670 Gly Arg Gly Val Gly Pro Gly Ala Gly Pro Gly Ala Gly Asp Gly Thr 675 680 685 <210> 11 <211> 705 <212> PRT <213> Seqüência Artificial <220> <223> Proteína Zcytorl4 quimérica <4 00> 11 Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His 20 25 30 Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys 35 40 45 Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr 50 55 60 His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp 85 90 95 Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly 100 105 110 Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser 115 120 125 Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val 130 135 140 Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160

Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr

165 170 175

Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro

180 185 190

Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu

195 200 205

Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp

210 215 220

Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr225 230 235 240

Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu

245 250 255

Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile

260 265 270

Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala

275 280 285

Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro

290 295 300

Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly305 310 315 320

Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr

325 330 335

Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu

340 345 350

Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu

355 360 365

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370 375. 380

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405 410 415

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420 425 430

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435 440 445

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450 455 460

Ala Ala Leu Ser Leu Ile Leu Leu Leu Lys Lys Asp His Ala Lys Gly465 470 475 480

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485 490 495

Gly Arg Ala Ala Leu Leu Leu Tyr Ser Ala Asp Asp Ser Gly Phe Glu

500 505 510

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515 520 525

Val Ala Val Asp Leu Trp Ser Arg Arg Glu Leu Ser Ala Gln Gly Pro

530 535 540

Val Ala Trp Phe His Ala Gln Arg Arg Gln Thr Leu Gln Glu Gly Gly545 550 555 560

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565 570 575

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580 585 590

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595 600 605

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610 615 620

Pro Asp Ala Val Pro Ala Leu Phe Arg Thr Val Pro Val Phe Thr Leu625 630 635 640

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Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg385 390 395

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405 410

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420 425

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435 440

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450 455

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485 490

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500 505

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515 520

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530 535

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565 570

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580 585

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595 600

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610 615

Arg Ala Pro Arg Ser Gly Arg Leu Gln Glu Arg625 630 635

Arg Ala Leu Gln Pro Ala Leu Asp Ser Tyr Phe

645 650

Pro Ala Pro Gly Arg Gly Val Gly Pro Gly Ala

660 665

Asp Gly Thr675

<210> 13

<211> 1874

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<4 00> 13

gaattccggc aggcacaaac tcatccatcc ccagttgatt ggaagaaacactgggaagac ctcattggtg tcactgctac tgctgctgag cctggaggcccaggaatcac aatcccacga aatccaggat gcccaaattc tgaggacaagggactgtgat ggtcaacctg aacatccata accggaatac caataccaatcctcagatta ctacaaccga tccacctcac cttggaatct ccaccgcaatagagatatcc ctctgtgatc tgggaggcaa agtgccgcca cttgggctgcatgggaacgt ggactaccac atgaactctg tccccatcca gcaagagatcgcagggagcc tccacactgc cccaactcct tccggctgga gaagatactggctgcacctg tgtcaccccg attgtccacc atgtggccta agagctctggctccccaaag cagttagact atggagagcc gacccagccc ctcaggaaccaaagacagcc tcatttcgga ctaaactcat tagagttctt aaggcagtttagcttcagag gtaacacttg gccaagatat gagatctgaa ttacctttccgaaggaaggt ttgactgagt accaatttgc ttcttgttta cttttttaagtatttatgta tttaatatgc cctgagataa ctttggggta taagattccattacctactt tattttgttt gtctttttaa agaagataag attctgggctattatttaaa aggtaaaacc tgtatttatt tgagctattt aaggatctatgtatttagaa aaaggtgaaa aagcactatt atcagttctg cctaggtaaaaattaaatgg cagtgcaaaa tttctgagtc tttacaacat acggatatagtctttgtttt taaaagttat aacatggctg aaaagaaaga ttaaacctacattaatttaa attttgcaat ttgttgaggt tttacaagag atacagcaag

Leu Leu445His Ala460

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Leu Cys

Glu Leu

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Leu Pro

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Gln Leu415Lys Tyr430

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Gln Leu495Ser Ala

Gly400Trp

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Ala

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Gln

510 Leu Gln GluAla Leu CysHis Gly Pro 560Asp Phe Leu 575 Asp Arg Leu590 Pro Val PheGln Gln ProGln Val Ser 640Pro Gly Thr 655 Gly Ala Gly670

acgatgactcatagtgaaggaacttccccccccaaaaggtgaggaccctgatcaacgctgctggtcctgcgtgtccgtggggagcccacactcatccttcgtccaattaactctttccaaggctttaagtttttaatgaatgggaattttttatgtttaatgtaagatagtatttcctcctttcatatgttctaactctc

601201802403003604204805406006607207808409009601020108011401200tgttccatta aacccttata ataaaatcct tctgtaataa taaagtttca aaagaaaatg 1260

tttatttgtt ctcattaaat gtattttagc aaactcagct cttccctatt gggaagagtt 1320

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cccaaaattc caagttctcg atttcacatg ccttcaagac tgaacaccga ctaaggtttt 1440

catactatta gccaatgctg tagacagaag cattttgata ggaatagagc aaataagata 1500

atggccctga ggaatggcat gtcattatta aagatcatat ggggaaaatg aaaccctccc 1560

caaaatacaa gaagttctgg gaggagacat tgtcttcaga ctacaatgtc cagtttctcc 1620

cctagactca ggcttccttt ggagattaag gcccctcaga gatcaacaga ccaacatttt 1680

tctcttcctc aagcaacact cctagggcct ggcttctgtc tgatcaaggc accacacaac 1740

ccagaaagga gctgatgggg cagaatgaac tttaagtatg agaaaagttc agcccaagta 1800

aaataaaaac tcaatcacat tcaattccag agtagtttca agtttcacat cgtaaccatt 1860

ttcgcccgga attc 1874<210> 14<211> 155<212> PRT

<213> Homo sapiens<4 00> 14

Met Thr Pro Gly Lys Thr Ser Leu Val Ser Leu Leu Leu Leu Leu Ser1 5 10 15 Leu Glu Ala Ile 20 Val Lys Ala Gly Ile 25 Thr Ile Pro Arg Asn 30 Pro GlyCys Pro Asn 35 Ser Glu Asp Lys Asn 40 Phe Pro Arg Thr Val 45 Met Val AsnLeu Asn 50 Ile His Asn Arg Asn 55 Thr Asn Thr Asn Pro 60 Lys Arg Ser SerAsp Tyr Tyr Asn Arg Ser Thr Ser Pro Trp Asn Leu His Arg Asn Glu65 70 75 80Asp Pro Glu Arg Tyr 85 Pro Ser Val Ile Trp 90 Glu Ala Lys Cys Arg 95 HisLeu Gly Cys Ile 100 Asn Ala Asp Gly Asn 105 Val Asp Tyr His Met 110 Asn SerVal Pro Ile 115 Gln Gln Glu Ile Leu 120 Val Leu Arg Arg Glu 125 Pro Pro HisCys Pro 130 Asn Ser Phe Arg Leu 135 Glu Lys Ile Leu Val 140 Ser Val Gly CysThr Cys Val Thr Pro Ile Val His His Val Ala 145 150 155 <210> 15 <211> 923

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<4 00> 15

ggcttcagtt actagctagg ctactgagtt tagttctcag tttggcacct tgataccttt 60aggtgtgagt gttcccattt ccaggtgagg aactgaggtg caaagagaag ccctgatccc 120ataaaaggac aggaatgctg agttccgcca gaccatgcat ctcttgctag taggtgaggc 180gagtctctaa ctgattgcag cgtcttctat tttccaggtc aagtacttgc tgctgtcgat 240attggggctt gcctttctga gtgaggcggc agctcggaaa atccccaaag taggacatac 300ttttttccaa aagcctgaga gttgcccgcc tgtgccagga ggtagtatga agcttgacat 360tggcatcatc aatgaaaacc agcgcgtttc catgtcacgt aacatcgaga gccgctccac 420ctccccctgg aattacactg tcacttggga ccccaaccgg tacccctcgg aagttgtaca 480ggcccagtgt aggaacttgg gctgcatcaa tgctcaagga aaggaagaca tctccatgaa 540ttccgttccc atccagcaag agaccctggt cgtccggagg aagcaccaag gctgctctgt 600ttctttccag ttggagaagg tgctggtgac tgttggctgc acctgcgtca cccctgtcat 660ccaccatgtg cagtaagagg tgcatatcca ctcagctgaa gaagctgtag aaatgccact 720ccttacccag tgctctgcaa caagtcctgt ctgaccccca attccctcca cttcacagga 780ctcttaataa gacctgcacg gatggaaaca taaaatattc acaatgtatg tgtgtatgta 840ctacacttta tatttgatat ctaaaatgtt aggagaaaaa ttaatatatt cagtgctaat 900ataataaagt attaataatg tta 923

<210> 16<211> 153<212> PRT

<213> Homo sapiens<4 00> 16Met Val Lys Tyr Leu Leu Leu Ser Ile Leu Gly Leu Ala Phe Leu Ser1 5 10 15 Glu Ala Ala Ala 20 Arg Lys Ile Pro Lys 25 Val Gly His Thr Phe 30 Phe GlnLys Pro Glu 35 Ser Cys Pro Pro Val 40 Pro Gly Gly Ser Met 45 Lys Leu AspIle Gly 50 Ile Ile Asn Glu Asn 55 Gln Arg Val Ser Met 60 Ser Arg Asn IleGlu Ser Arg Ser Thr Ser Pro Trp Asn Tyr Thr Val Thr Trp Asp Pro65 70 75 80Asn Arg Tyr Pro Ser 85 Glu Val Val Gln Ala 90 Gln Cys Arg Asn Leu 95 GlyCys Ile Asn Ala 100 Gln Gly Lys Glu Asp 105 Ile Ser Met Asn Ser 110 Val ProIle Gln Gln 115 Glu Thr Leu Val Val 120 Arg Arg Lys His Gln 125 Gly Cys SerVal Ser 130 Phe Gln Leu Glu Lys 135 Val Leu Val Thr Val 140 Gly Cys Thr CysVal Thr Pro Val Ile His His Val Gln 145 150

<210> 17

<211> 1172

<212> DNA

<213> Mus musculus

<4 00> 17

gatccacctc acacgaggca caagtgcacc cagcaccagc tgatcaggac gcgcaaacat 60

gagtccaggg agagcttcat ctgtgtctct gatgctgttg ctgctgctga gcctggcggc 120

tacagtgaag gcagcagcga tcatccctca aagctcagcg tgtccaaaca ctgaggccaa 180

ggacttcctc cagaatgtga aggtcaacct caaagtcttt aactcccttg gcgcaaaagt 240

gagctccaga aggccctcag actacctcaa ccgttccacg tcaccctgga ctctccaccg 300

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gtctgccctc cacaatgaaa agaaggtgta aaggggtccc aaactgcttc gtgtttgttt 720

ttctgtggac tttaaattat ttgtgtattt acaatatccc aagatagctt tgaagcgtaa 780

cttattttaa tgaagtatct acattattat tatgtttctt tctgaagaag acaaaattca 840

agactcagaa attttattat ttaaaaggta aagcctatat ttatatgagc tatttatgaa 900

tctatttatt tttcttcagt atttgaagta ttaagaacat gattttcaga tctacctagg 960

gaagtcctaa gtaagattaa atattaatgg aaatttcagc tttactattt gtttatttaa 1020

ggttctctcc tctgaatggg gtgaaaacca aacttagttt tatgtttaat aactttttaa 1080

attattgaag attcaaaaaa ttggataatt tagctcccta ctctgtttta aaaaaaaatt 1140

gtaacaatat ι cactgtaata ataaagtttt • <39 <210> 18 <211> 158 <212> PRT <213> Mus musculus <4 00> 18 Met Ser Pro Gly Arg Ala Ser Ser Val Ser Leu Met Leu Leu Leu Leu1 5 10 15 Leu Ser Leu Ala 20 Ala Thr Val Lys Ala 25 Ala Ala Ile Ile Pro 30 Gln SerSer Ala Cys Pro Asn Thr Glu Ala Lys Asp Phe Leu Gln Asn Val Lys35 40 45 Val Asn Leu Lys Val Phe Asn Ser Leu Gly Ala Lys Val Ser Ser Arg50 55 60 Arg Pro Ser Asp Tyr Leu Asn Arg Ser Thr Ser Pro Trp Thr Leu His65 70 75 80Arg Asn Glu Asp Pro 85 Asp Arg Tyr Pro Ser 90 Val Ile Trp Glu Ala 95 GlnCys Arg His Gln Arg Cys Val Asn Ala Glu Gly Lys Leu Asp His His100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

Val Gly Cys Thr Cys Val Ala Ser Ile Val Arg Gln Ala Ala145 150 155

<210> 19<211> 462<212> DNA<213> Mus musculus<4 00> 19

atggtcaagt ctttgctact gttgatgttg ggacttgcca ttctgaggga ggtagcagct 60cggaagaacc ccaaagcagg ggttcctgcc ttgcagaagg ctgggaactg tcctcccctg 120gaggataaca ctgtgagagt tgacattcga atcttcaacc aaaaccaggg catttctgtc 180ccacgtgaat tccagaaccg ctccagttcc ccatgggatt acaacatcac tcgagacccc 240caccggttcc cctcagagat cgctgaggcc cagtgcagac actcaggctg catcaatgcc 300cagggtcagg aagacagcac catgaactcc gtcgccattc agcaagaaat cctggtcctt 360cggagggagc cccagggctg ttctaattcc ttcaggttgg agaagatgct cctaaaagtt 420ggctgcacct gtgtcaagcc cattgtccac caagcggcct ga 4 62

<210> 20<211> 153<212> PRT

<213> Mus musculus<400> 20

Met Val Lys Ser Leu Leu Leu Leu Met Leu Gly Leu Ala Ile Leu Arg

15 10 15

Glu Val Ala Ala Arg Lys Asn Pro Lys Ala Gly Val Pro Ala Leu Gln

20 25 30

Lys Ala Gly Asn Cys Pro Pro Leu Glu Asp Asn Thr Val Arg Val Asp

35 40 45

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100 105 110

Ile Gln Gln Glu Ile Leu Val Leu Arg Arg Glu Pro Gln Gly Cys Ser

115 120 125

Asn Ser Phe Arg Leu Glu Lys Met Leu Leu Lys Val Gly Cys Thr Cys

130 135 140

Val Lys Pro Ile Val His Gln Ala Ala145 150

<210> 21<211> 320<212> PRT<213> Homo sapien<400> 21

Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala Val Pro Gly Pro Leu Leu

15 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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85 90 95

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Glu Leu Ser Val Leu Gln Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Arg

115 120 125

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130 135 140

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165 170 175

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195 200 205

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210 215 220

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245 250 255

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260 265 270

Leu Lys Gly Cys Cys Arg His Gln Val Gln Ile Gln Pro Phe Phe Ser

275 280 285

Ser Cys Leu Asn Asp Cys Leu Arg His Ser Ala Thr Val Ser Cys Pro

290 295 300

Glu Met Pro Asp Thr Pro Glu Pro Ile Pro Asp Tyr Met Pro Leu Trp305 310 315 320

<210> 22<211> 221<212> PRT<213> Homo sapien<400> 22

Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu

15 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala65 70 75 80

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85 90 95

Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe

100 105 110

Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser

115 120 125

Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro

130 135 140

Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn145 150 155 160

Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser

165 170 175

Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp

180 185 190

Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala

195 200 205

Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Arg

210 215 220

<210> 23<211> 2180<212> DNA<213> Homo sapien<400> 23

aactacccag cacagccccc tccgccccct ctggaggctg aagagggatt ccagcccctg 60

ccacccacag acacgggctg actggggtgt ctgcccccct tggggggggg cagcacaggg 120

cctcaggcct gggtgccacc tggcacctag aagatgcctg tgccctggtt cttgctgtcc 180

ttggcactgg gccgaagccc agtggtcctt tctctggaga ggcttgtggg gcctcaggac 240

gctacccact gctctccggg cctctcctgc cgcctctggg acagtgacat actctgcctg 300

cctggggaca tcgtgcctgc tccgggcccc gtgctggcgc ctacgcacct gcagacagag 360

ctggtgctga ggtgccagaa ggagaccgac tgtgacctct gtctgcgtgt ggctgtccac 420

ttggccgtgc atgcctctct ccaggcccaa gtcgtgctct ccttccaggc ctaccctact 480

gcccgctgcg tcctgctgga ggtgcaagtg cctgctgccc ttgtgcagtt tggtcagtct 540

gtgggctctg tggtatatga ctgcttcgag gctgccctag ggagtgaggt acgaatctgg 600

tcctatactc agcccaggta cgagaaggaa ctcaaccaca cacagcagct gcctgccctg 660

ccctggctca acgtgtcagc agatggtgac aacgtgcatc tggttctgaa tgtctctgag 720

gagcagcact tcggcctctc cctgtactgg aatcaggtcc agggcccccc aaaaccccgg 780

tggcacaaaa acctgactgg accgcagatc attaccttga accacacaga cctggttccc 840

tgcctctgta ttcaggtgtg gcctctggaa cctgactccg ttaggacgaa catctgcccc 900

ttcagggagg acccccgcgc acaccagaac ctctggcaag ccgcccgact gcgactgctg 960

accctgcaga gctggctgct ggacgcaccg tgctcgctgc ccgcagaagc ggcactgtgc 1020

tggcgggctc cgggtgggga cccctgccag ccactggtcc caccgctttc ctgggagaac 1080

gtcactgtgg acaaggttct cgagttccca ttgctgaaag gccaccctaa cctctgtgtt 1140

caggtgaaca gctcggagaa gctgcagctg caggagtgct tgtgggctga ctccctgggg 1200

cctctcaaag acgatgtgct actgttggag acacgaggcc cccaggacaa cagatccctc 1260

tgtgccttgg aacccagtgg ctgtacttca ctacccagca aagcctccac gagggcagct 1320

cgccttggag agtacttact acaagacctg cagtcaggcc agtgtctgca gctatgggac 1380

gatgacttgg gagcgctatg ggcctgcccc atggacaaat acatccacaa gcgctgggcc 1440

ctcgtgtggc tggcctgcct actctttgcc gctgcgcttt ccctcatcct ccttctcaaa 1500

aaggatcacg cgaaagcggc cgccaggggc cgcgcggctc tgctcctcta ctcagccgat 1560

gactcgggtt tcgagcgcct ggtgggcgcc ctggcgtcgg ccctgtgcca gctgccgctg 1620

cgcgtggccg tagacctgtg gagccgtcgt gaactgagcg cgcaggggcc cgtggcttgg 1680

tttcacgcgc agcggcgcca gaccctgcag gagggcggcg tggtggtctt gctcttctct 1740

cccggtgcgg tggcgctgtg cagcgagtgg ctacaggatg gggtgtccgg gcccggggcg 1800

cacggcccgc acgacgcctt ccgcgcctcg ctcagctgcg tgctgcccga cttcttgcag 1860

ggccgggcgc ccggcagcta cgtgggggcc tgcttcgaca ggctgctcca cccggacgcc 1920

gtacccgccc ttttccgcac cgtgcccgtc ttcacactgc cctcccaact gccagacttc 1980

ctgggggccc tgcagcagcc tcgcgccccg cgttccgggc ggctccaaga gagagcggag 2040

caagtgtccc gggcccttca gccagccctg gatagctact tccatccccc ggggactccc 2100

gcgccgggac gcggggtggg accaggggcg ggacctgggg cgggggacgg gacttaaata 2160aaggcagacg ctgtttttct 2180<210> 24<211> 667<212> PRT<213> Homo sapien<400> 24

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His 20 25 30 Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys 35 40 45 Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr 50 55 60 His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Ala Ser Leu 85 90 95 Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys 100 105 110 Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln 115 120 125 Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser 130 135 140 Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu145 150 155 160

Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala

165 170 175

Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His

180 185 190

Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro

195 200 205

Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His

210 215 220

Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro225 230 235 240

Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala

245 250 255

His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln

260 265 270

Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu

275 280 285

Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro

290 295 300

Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu305 310 315 320

Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys

325 330 335

Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys

340 345 350

Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser

355 360 365

Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala

370 375 380

Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln385 390 395 400

Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp

405 410 415

Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Arg Trp Ala Leu Val Trp

420 425 430

Leu Ala Cys Leu Leu Phe Ala Ala Ala Leu Ser Leu Ile Leu Leu Leu

435 440 445

Lys Lys Asp His Ala Lys Ala Ala Ala Arg Gly Arg Ala Ala Leu Leu

450 455 460

Leu Tyr Ser Ala Asp Asp Ser Gly Phe Glu Arg Leu Val Gly Ala Leu465 470 475 480

Ala Ser Ala Leu Cys Gln Leu Pro Leu Arg Val Ala Val Asp Leu Trp

485 490 495

Ser Arg Arg Glu Leu Ser Ala Gln Gly Pro Val Ala Trp Phe His Ala

500 505 510

Gln Arg Arg Gln Thr Leu Gln Glu Gly Gly Val Val Val Leu Leu Phe

515 520 525

Ser Pro Gly Ala Val Ala Leu Cys Ser Glu Trp Leu Gln Asp Gly Val

530 535 540

Ser Gly Pro Gly Ala His Gly Pro His Asp Ala Phe Arg Ala Ser Leu545 550 555 560

Ser Cys Val Leu Pro Asp Phe Leu Gln Gly Arg Ala Pro Gly Ser Tyr

565 570 575

Val Gly Ala Cys Phe Asp Arg Leu Leu His Pro Asp Ala Val Pro Ala

580 585 590

Leu Phe Arg Thr Val Pro Val Phe Thr Leu Pro Ser Gln Leu Pro Asp

595 600 605

Phe Leu Gly Ala Leu Gln Gln Pro Arg Ala Pro Arg Ser Gly Arg Leu

610 615 620

Gln Glu Arg Ala Glu Gln Val Ser Arg Ala Leu Gln Pro Ala Leu Asp625 630 635 640

Ser Tyr Phe His Pro Pro Gly Thr Pro Ala Pro Gly Arg Gly Val Gly645 650 655Pro Gly Ala Gly Pro Gly Ala Gly Asp Gly Thr660 665

<210> 25

<211> 2269

<212> DNA

<213> Mus musculus

<400> 25

aaatcgaaag cactccagct gaaactgggc ctggagtcca ggctcactgg agtggggaag 60catggctgga gaggaattct agcccttgct ctctcccagg gacacggggc tgattgtcag 120caggggcgag gggtctgccc ccccttgggg gggcaggacg gggcctcagg cctgggtgct 180gtccggcacc tggaagatgc ctgtgtcctg gttcctgctg tccttggcac tgggccgaaa 240ccctgtggtc gtctctctgg agagactgat ggagcctcag gacactgcac gctgctctct 300aggcctctcc tgccacctct gggatggtga cgtgctctgc ctgcctggaa gcctccagtc 360tgccccaggc cctgtgctag tgcctacccg cctgcagacg gagctggtgc tgaggtgtcc 420acagaagaca gattgcgccc tctgtgtccg tgtggtggtc cacttggccg tgcatgggca 480ctgggcagag cctgaagaag ctggaaagtc tgattcagaa ctccaggagt ctaggaacgc 540ctctctccag gcccaggtgg tgctctcctt ccaggcctac cccatcgccc gctgtgccct 600gctggaggtc caggtgcccg ctgacctggt gcagcctggt cagtccgtgg gttctgcggt 660atttgactgt ttcgaggcta gtcttggggc tgaggtacag atctggtcct acacgaagcc 720caggtaccag aaagagctca acctcacaca gcagctgcct gtcctgccct ggctcaatgt 780gtctacagat ggtgacaatg tccttctgac actggatgtc tctgaggagc aggactttag 840cttcttactg tacctgcgtc cagtcccgga tgctctcaaa tccttgtggt acaaaaacct 900gactggacct cagaacatta ctttaaacca cacagacctg gttccctgcc tctgcattca 960ggtgtggtcg ctagagccag actctgagag ggtcgaattc tgccccttcc gggaagatcc 1020cggtgcacac aggaacctct ggcacatagc caggctgcgg gtactgtccc caggggtatg 1080gcagctagat gcgccttgct gtctgccggg caaggtaaca ctgtgctggc aggcaccaga 1140ccagagtccc tgccagccac ttgtgccacc agtgccccag aagaacgcca ctgtgaatga 1200gccacaagat ttccagttgg tggcaggcca ccccaacctc tgtgtccagg tgagcacctg 1260ggagaaggtt cagctgcaag cgtgcttgtg ggctgactcc ttggggccct tcaaggatga 1320tatgctgtta gtggagatga aaaccggcct caacaacaca tcagtctgtg ccttggaacc 1380cagtggctgt acaccactgc ccagcatggc ctccacgaga gctgctcgcc tgggagagga 1440gttgctgcaa gacttccgat cacaccagtg tatgcagctg tggaacgatg acaacatggg 1500atcgctatgg gcctgcccca tggacaagta catccacagg cgctgggtcc tagtatggct 1560ggcctgccta ctcttggctg cggcgctttt cttcttcctc cttctaaaaa aggaccgcag 1620gaaagcggcc cgtggctccc gcacggcctt gctcctccac tccgccgacg gagcgggcta 1680cgagcgtctg gtgggagcac tggcgtccgc gttgagccag atgccactgc gcgtggccgt 1740ggacctgtgg agccgccgcg agctgagcgc gcacggagcc ctagcctggt tccaccacca 1800gcgacgccgt atcctgcagg agggtggcgt ggtaatcctt ctcttctcgc ccgcggccgt 1860ggcgcagtgt cagcagtggc tgcagctcca gacagtggag cccgggccgc atgacgccct 1920cgccgcctgg ctcagctgcg tgctacccga tttcctgcaa ggccgggcga ccggccgcta 1980cgtcggggtc tacttcgacg ggctgctgca cccagactct gtgccctccc cgttccgcgt 2040cgccccgctc ttctccctgc cctcgcagct gccggctttc ctggatgcac tgcagggagg 2100ctgctccact tccgcggggc gacccgcgga ccgggtggaa cgagtgaccc aggcgctgcg 2160gtccgccctg gacagctgta cttctagctc ggaagcccca ggctgctgcg aggaatggga 2220cctgggaccc tgcactacac tagaataaaa gccgatacag tattcctaa 2269

<210> 26<211> 683<212> PRT

<213> Mus musculus<400> 26

Met Pro Val Ser Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Asn Pro1 5 10 15 Val Val Val Ser Leu Glu Arg Leu Met Glu Pro Gln Asp Thr Ala Arg 20 25 30 Cys Ser Leu Gly Leu Ser Cys His Leu Trp Asp Gly Asp Val Leu Cys 35 40 45 Leu Pro Gly Ser Leu Gln Ser Ala Pro Gly Pro Val Leu Val Pro Thr 50 55 60 Arg Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Pro Gln Lys Thr Asp Cys65 70 75 80Ala Leu Cys Val Arg Val Val Val His Leu Ala Val His Gly His Trp 85 90 95 Ala Glu Pro Glu Glu Ala Gly Lys Ser Asp Ser Glu Leu Gln Glu Ser100 105 110

Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe Gln Ala Tyr

115 120 125

Pro Ile Ala Arg Cys Ala Leu Leu Glu Val Gln Val Pro Ala Asp Leu

130 135 140

Val Gln Pro Gly Gln Ser Val Gly Ser Ala Val Phe Asp Cys Phe Glu145 150 155 160

Ala Ser Leu Gly Ala Glu Val Gln Ile Trp Ser Tyr Thr Lys Pro Arg

165 170 175

Tyr Gln Lys Glu Leu Asn Leu Thr Gln Gln Leu Pro Val Leu Pro Trp

180 185 190

Leu Asn Val Ser Thr Asp Gly Asp Asn Val Leu Leu Thr Leu Asp Val

195 200 205

Ser Glu Glu Gln Asp Phe Ser Phe Leu Leu Tyr Leu Arg Pro Val Pro

210 215 220

Asp Ala Leu Lys Ser Leu Trp Tyr Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Asn225 230 235 240

Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val

245 250 255

Trp Ser Leu Glu Pro Asp Ser Glu Arg Val Glu Phe Cys Pro Phe Arg

260 265 270

Glu Asp Pro Gly Ala His Arg Asn Leu Trp His Ile Ala Arg Leu Arg

275 280 285

Val Leu Ser Pro Gly Val Trp Gln Leu Asp Ala Pro Cys Cys Leu Pro

290 295 300

Gly Lys Val Thr Leu Cys Trp Gln Ala Pro Asp Gln Ser Pro Cys Gln305 310 315 320

Pro Leu Val Pro Pro Val Pro Gln Lys Asn Ala Thr Val Asn Glu Pro

325 330 335

Gln Asp Phe Gln Leu Val Ala Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val

340 345 350

Ser Thr Trp Glu Lys Val Gln Leu Gln Ala Cys Leu Trp Ala Asp Ser

355 360 365

Leu Gly Pro Phe Lys Asp Asp Met Leu Leu Val Glu Met Lys Thr Gly

370 375 380

Leu Asn Asn Thr Ser Val Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Pro385 390 395 400

Leu Pro Ser Met Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Glu Leu

405 410 415

Leu Gln Asp Phe Arg Ser His Gln Cys Met Gln Leu Trp Asn Asp Asp

420 . 425 430

Asn Met Gly Ser Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Arg

435 440 445

Arg Trp Val Leu Val Trp Leu Ala Cys Leu Leu Leu Ala Ala Ala Leu

450 455 460

Phe Phe Phe Leu Leu Leu Lys Lys Asp Arg Arg Lys Ala Ala Arg Gly465 470 475 480

Ser Arg Thr Ala Leu Leu Leu His Ser Ala Asp Gly Ala Gly Tyr Glu

485 490 495

Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Ser Ala Leu Ser Gln Met Pro Leu Arg

500 505 510

Val Ala Val Asp Leu Trp Ser Arg Arg Glu Leu Ser Ala His Gly Ala

515 520 525

Leu Ala Trp Phe His His Gln Arg Arg Arg Ile Leu Gln Glu Gly Gly

530 535 540

Val Val Ile Leu Leu Phe Ser Pro Ala Ala Val Ala Gln Cys Gln Gln545 550 555 560

Trp Leu Gln Leu Gln Thr Val Glu Pro Gly Pro His Asp Ala Leu Ala

565 570 575

Ala Trp Leu Ser Cys Val Leu Pro Asp Phe Leu Gln Gly Arg Ala Thr

580 585 590

Gly Arg Tyr Val Gly Val Tyr Phe Asp Gly Leu Leu His Pro Asp Ser595 600 605al Pro Ser Pro Phe Arg Val Ala Pro Leu Phe Ser Leu Pro Ser Gln

610 615 620

Leu Pro Ala Phe Leu Asp Ala Leu Gln Gly Gly Cys Ser Thr Ser Ala625 630 635 640

Gly Arg Pro Ala Asp Arg Val Glu Arg Val Thr Gln Ala Leu Arg Ser

645 650 655

Ala Leu Asp Ser Cys Thr Ser Ser Ser Glu Ala Pro Gly Cys Cys Glu

660 665 670

Glu Trp Asp Leu Gly Pro Cys Thr Thr Leu Glu675 680

<210> 27<211> 449<212> PRT

<213> Mus musculus<400> 27

Met Pro Val Ser Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Asn Pro

15 10 15

Val Val Val Ser Leu.Glu Arg Leu Met Glu Pro Gln Asp Thr Ala Arg

20 25 30

Cys Ser Leu Gly Leu Ser Cys His Leu Trp Asp Gly Asp Val Leu Cys

35 40 45

Leu Pro Gly Ser Leu Gln Ser Ala Pro Gly Pro Val Leu Val Pro Thr

50 55 60

Arg Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Pro Gln Lys Thr Asp Cys65 70 75 80

Ala Leu Cys Val Arg Val Val Val His Leu Ala Val His Gly His Trp

85 90 95

Ala Glu Pro Glu Glu Ala Gly Lys Ser Asp Ser Glu Leu Gln Glu Ser

100 105 110

Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe Gln Ala Tyr

115 120 125

Pro Ile Ala Arg Cys Ala Leu Leu Glu Val Gln Val Pro Ala Asp Leu

130 135 140

Val Gln Pro Gly Gln Ser Val Gly Ser Ala Val Phe Asp Cys Phe Glu145 150 155 160

Ala Ser Leu Gly Ala Glu Val Gln Ile Trp Ser Tyr Thr Lys Pro Arg

165 170 175

Tyr Gln Lys Glu Leu Asn Leu Thr Gln Gln Leu Pro Val Leu Pro Trp

180 185 190

Leu Asn Val Ser Thr Asp Gly Asp Asn Val Leu Leu Thr Leu Asp Val

195 200 205

Ser Glu Glu Gln Asp Phe Ser Phe Leu Leu Tyr Leu Arg Pro Val Pro

210 215 220

Asp Ala Leu Lys Ser Leu Trp Tyr Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Asn225 230 235 240

Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val

245 250 255

Trp Ser Leu Glu Pro Asp Ser Glu Arg Val Glu Phe Cys Pro Phe Arg

260 265 270

Glu Asp Pro Gly Ala His Arg Asn Leu Trp His Ile Ala Arg Leu Arg

275 280 285

Val Leu Ser Pro Gly Val Trp Gln Leu Asp Ala Pro Cys Cys Leu Pro

290 295 300

Gly Lys Val Thr Leu Cys Trp Gln Ala Pro Asp Gln Ser Pro Cys Gln305 310 315 320

Pro Leu Val Pro Pro Val Pro Gln Lys Asn Ala Thr Val Asn Glu Pro

325 330 335

Gln Asp Phe Gln Leu Val Ala Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val

340 345 350

Ser Thr Trp Glu Lys Val Gln Leu Gln Ala Cys Leu Trp Ala Asp Ser

355 360 365

Leu Gly Pro Phe Lys Asp Asp Met Leu Leu Val Glu Met Lys Thr Gly370 375 380Leu Asn Asn Thr Ser Val Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Pro385 390 395 400

Leu Pro Ser Met Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Glu Leu

405 410 415

Leu Gln Asp Phe Arg Ser His Gln Cys Met Gln Leu Trp Asn Asp Asp

420 425 430

Asn Met Gly Ser Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Arg435 440 445

Arg

<210> 28<211> 222<212> PRT

<213> Mus musculus<400> 28

Lys Ser Leu Trp Tyr Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Asn Ile Thr Leu1 5 10 15 Asn His Thr Asp 20 Leu Val Pro Cys Leu 25 Cys Ile Gln Val Trp 30 Ser LeuGlu Pro Asp 35 Ser Glu Arg Val Glu 40 Phe Cys Pro Phe Arg 45 Glu Asp ProGly Ala 50 His Arg Asn Leu Trp 55 His Ile Ala Arg Leu 60 Arg Val Leu SerPro Gly Val Trp Gln Leu Asp Ala Pro Cys Cys Leu Pro Gly Lys Val65 70 75 80Thr Leu Cys Trp Gln 85 Ala Pro Asp Gln Ser 90 Pro Cys Gln Pro Leu 95 ValPro Pro Val Pro 100 Gln Lys Asn Ala Thr 105 Val Asn Glu Pro Gln 110 Asp PheGln Leu Val 115 Ala Gly His Pro Asn 120 Leu Cys Val Gln Val 125 Ser Thr TrpGlu Lys 130 Val Gln Leu Gln Ala 135 Cys Leu Trp Ala Asp 140 Ser Leu Gly ProPhe Lys Asp Asp Met Leu Leu Val Glu Met Lys Thr Gly Leu Asn Asn145 150 155 160Thr Ser Val Cys Ala 165 Leu Glu Pro Ser Gly 170 Cys Thr Pro Leu Pro 175 SerMet Ala Ser Thr 180 Arg Ala Ala Arg Leu 185 Gly Glu Glu Leu Leu 190 Gln AspPhe Arg Ser 195 His Gln Cys Met Gln 200 Leu Trp Asn Asp Asp 205 Asn Met GlySer Leu 210 Trp Ala Cys Pro Met 215 Asp Lys Tyr Ile His 220 Arg Arg

<210> 29

<211> 2287

<212> DNA

<213> Mus musculus

<400> 29

aaatcgaaag cactccagct gaaactgggc ctggagtcca ggctcactgg agtggggaag 60catggctgga gaggaattct agcccttgct ctctcccagg gacacggggc tgattgtcag 120caggggcgag gggtctgccc ccccttgggg gggcaggacg gggcctcagg cctgggtgct 180gtccggcacc tggaagatgc ctgtgtcctg gttcctgctg tccttggcac tgggccgaaa 240ccctgtggtc gtctctctgg agagactgat ggagcctcag gacactgcac gctgctctct 300aggcctctcc tgccacctct gggatggtga cgtgctctgc ctgcctggaa gcctccagtc 360tgccccaggc cctgtgctag tgcctacccg cctgcagacg gagctggtgc tgaggtgtcc 420acagaagaca gattgcgccc tctgtgtccg tgtggtggtc cacttggccg tgcatgggca 480ctgggcagag cctgaagaag ctggaaagtc tgattcagaa ctccaggagt ctaggaacgc 540ctctctccag gcccaggtgg tgctctcctt ccaggcctac cccatcgccc gctgtgccct 600gctggaggtc caggtgcccg ctgacctggt gcagcctggt cagtccgtgg gttctgcggt 660atttgactgt ttcgaggcta gtcttggggc tgaggtacag atctggtcct acacgaagcc 720caggtaccag aaagagctca acctcacaca gcagctgcct gactgcaggg gtcttgaagt 780ccgggacagc atccagagct gctgggatgg tgacaatgtc cttctgacac tggatgtctc 840tgaggagcag gactttagct tcttactgta cctgcgtcca gtcccggatg ctctcaaatc 900cttgtggtac aaaaacctga ctggacctca gaacattact ttaaaccaca cagacctggt 960

tccctgcctc tgcattcagg tgtggtcgct agagccagac tctgagaggg tcgaattctg 1020

ccccttccgg gaagatcccg gtgcacacag gaacctctgg cacatagcca ggctgcgggt 1080

actgtcccca ggggtatggc agctagatgc gccttgctgt ctgccgggca aggtaacact 1140

gtgctggcag gcaccagacc agagtccctg ccagccactt gtgccaccag tgccccagaa 1200

gaacgccact gtgaatgagc cacaagattt ccagttggtg gcaggccacc ccaacctctg 1260

tgtccaggtg agcacctggg agaaggttca gctgcaagcg tgcttgtggg ctgactcctt 1320

ggggcccttc aaggatgata tgctgttagt ggagatgaaa accggcctca acaacacatc 1380

agtctgtgcc ttggaaccca gtggctgtac accactgccc agcatggcct ccacgagagc 1440

tgctcgcctg ggagaggagt tgctgcaaga cttccgatca caccagtgta tgcagctgtg 1500

gaacgatgac aacatgggat cgctatgggc ctgccccatg gacaagtaca tccacaggcg 1560

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tctaaaaaag gaccgcagga aagcggcccg tggctcccgc acggccttgc tcctccactc 1680

cgccgacgga gcgggctacg agcgtctggt gggagcactg gcgtccgcgt tgagccagat 1740

gccactgcgc gtggccgtgg acctgtggag ccgccgcgag ctgagcgcgc acggagccct 1800

agcctggttc caccaccagc gacgccgtat cctgcaggag ggtggcgtgg taatccttct 1860

cttctcgccc gcggccgtgg cgcagtgtca gcagtggctg cagctccaga cagtggagcc 1920

cgggccgcat gacgccctcg ccgcctggct cagctgcgtg ctacccgatt tcctgcaagg 1980

ccgggcgacc ggccgctacg tcggggtcta cttcgacggg ctgctgcacc cagactctgt 2040

gccctccccg ttccgcgtcg ccccgctctt ctccctgccc tcgcagctgc cggctttcct 2100

ggatgcactg cagggaggct gctccacttc cgcggggcga cccgcggacc gggtggaacg 2160

agtgacccag gcgctgcggt ccgccctgga cagctgtact tctagctcgg aagccccagg 2220

ctgctgcgag gaatgggacc tgggaccctg cactacacta gaataaaagc cgatacagta 2280ttcctaa 2287<210> 30<211> 689<212> PRT

<213> Mus musculus<400> 30

Met Pro Val Ser Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Asn Pro

1 5 10 15 Val Val Val Ser Leu Glu Arg Leu Met Glu Pro Gln Asp Thr Ala Arg 20 25 30 Cys Ser Leu Gly Leu Ser Cys His Leu Trp Asp Gly Asp Val Leu Cys 35 40 45 Leu Pro Gly Ser Leu Gln Ser Ala Pro Gly Pro Val Leu Val Pro Thr 50 55 60 Arg Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Pro Gln Lys Thr Asp Cys65 70 75 80Ala Leu Cys Val Arg Val Val Val His Leu Ala Val His Gly His Trp 85 90 95 Ala Glu Pro Glu Glu Ala Gly Lys Ser Asp Ser Glu Leu Gln Glu Ser 100 105 110 Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe Gln Ala Tyr 115 120 125 Pro Ile Ala Arg Cys Ala Leu Leu Glu Val Gln Val Pro Ala Asp Leu 130 135 140 Val Gln Pro Gly Gln Ser Val Gly Ser Ala Val Phe Asp Cys Phe Glu145 150 155 160Ala Ser Leu Gly Ala Glu Val Gln Ile Trp Ser Tyr Thr Lys Pro Arg 165 170 175 Tyr Gln Lys Glu Leu Asn Leu Thr Gln Gln Leu Pro Asp Cys Arg Gly 180 185 190 Leu Glu Val Arg Asp Ser Ile Gln Ser Cys Trp Asp Gly Asp Asn Val 195 200 205 Leu Leu Thr Leu Asp Val Ser Glu Glu Gln Asp Phe Ser Phe Leu Leu 210 215 220 Tyr Leu Arg Pro Val Pro Asp Ala Leu Lys Ser Leu Trp Tyr Lys Asn225 230 235 240Leu Thr Gly Pro Gln Asn Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro 245 250 255 Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Ser Leu Glu Pro Asp Ser Glu Arg Val

260 265 270Glu Phe Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Gly Ala His Arg Asn Leu Trp

275 280 285

His Ile Ala Arg Leu Arg Val Leu Ser Pro Gly Val Trp Gln Leu Asp

290 295 300

Ala Pro Cys Cys Leu Pro Gly Lys Val Thr Leu Cys Trp Gln Ala Pro305 310 315 320

Asp Gln Ser Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Val Pro Gln Lys Asn

325 330 335

Ala Thr Val Asn Glu Pro Gln Asp Phe Gln Leu Val Ala Gly His Pro

340 345 350

Asn Leu Cys Val Gln Val Ser Thr Trp Glu Lys Val Gln Leu Gln Ala

355 360 365

Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Phe Lys Asp Asp Met Leu Leu

370 375 380

Val Glu Met Lys Thr Gly Leu Asn Asn Thr Ser Val Cys Ala Leu Glu385 390 395 400

Pro Ser Gly Cys Thr Pro Leu Pro Ser Met Ala Ser Thr Arg Ala Ala

405 410 415

Arg Leu Gly Glu Glu Leu Leu Gln Asp Phe Arg Ser His Gln Cys Met

420 425 430

Gln Leu Trp Asn Asp Asp Asn Met Gly Ser Leu Trp Ala Cys Pro Met

435 440 445

Asp Lys Tyr Ile His Arg Arg Trp Val Leu Val Trp Leu Ala Cys Leu

450 455 460

Leu Leu Ala Ala Ala Leu Phe Phe Phe Leu Leu Leu Lys Lys Asp Arg465 470 475 480

Arg Lys Ala Ala Arg Gly Ser Arg Thr Ala Leu Leu Leu His Ser Ala

485 490 495

Asp Gly Ala Gly Tyr Glu Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Ser Ala Leu

500 505 510

Ser Gln Met Pro Leu Arg Val Ala Val Asp Leu Trp Ser Arg Arg Glu

515 520 525

Leu Ser Ala His Gly Ala Leu Ala Trp Phe His His Gln Arg Arg Arg

530 535 540

Ile Leu Gln Glu Gly Gly Val Val Ile Leu Leu Phe Ser Pro Ala Ala545 550 555 560

Val Ala Gln Cys Gln Gln Trp Leu Gln Leu Gln Thr Val Glu Pro Gly

565 570 575

Pro His Asp Ala Leu Ala Ala Trp Leu Ser Cys Val Leu Pro Asp Phe

580 585 590

Leu Gln Gly Arg Ala Thr Gly Arg Tyr Val Gly Val Tyr Phe Asp Gly

595 600 605

Leu Leu His Pro Asp Ser Val Pro Ser Pro Phe Arg Val Ala Pro Leu

610 615 620

Phe Ser Leu Pro Ser Gln Leu Pro Ala Phe Leu Asp Ala Leu Gln Gly625 630 635 640

Gly Cys Ser Thr Ser Ala Gly Arg Pro Ala Asp Arg Val Glu Arg Val

645 650 655

Thr Gln Ala Leu Arg Ser Ala Leu Asp Ser Cys Thr Ser Ser Ser Glu

660 665 670

Ala Pro Gly Cys Cys Glu Glu Trp Asp Leu Gly Pro Cys Thr Thr Leu675 680 685

Glu

<210> 31<211> 21<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 31

tcccgtcccc cgccccaggt c<210> 32<211> 25

<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 32

ctctccatcc ttatctttca tcaac<210> 33<211> 24<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 33

ctctctgctg gctaaacaaa acac<210> 34<211> 26<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 34

ctcatattgc tcaactgtgt gaaaag<210> 35<211> 25<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 35

tagaagccac ctgaacacaa atctg<210> 36<211> 28<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 36

atcttgcgtt gtatgttgaa aatcaatt<210> 37<211> 25<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 37

ttctccacca ggtaaacaag tctac<210> 38<211> 24<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 38

ctctccaggc ccaagtcgtg ctct<210> 39<211> 24<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 39

ttgtcctggg ggcctcgtgt ctcc<210> 40

<211> 24

<212> DNA

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> iniciador de nucleotideo

<400> 40

acgaagccca ggtaccagaa agag 24

<210> 41

<211> 24

<212> DNA

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> iniciador de nucleotideo

<400> 41

aaaagcgccg cagccaagag tagg 24

<210> 42

<211> 1293

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 42

ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 60ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 120ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 180gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 240gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 300ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 360gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 420gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 480tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgccc tgccctggct caacgtgtca 540gcagatggtg acaacgtgca tctggttctg aatgtctctg aggagcagca cttcggcctc 600tccctgtact ggaatcaggt ccagggcccc ccaaaacccc ggtggcacaa aaacctgact 660ggaccgcaga tcattacctt gaaccacaca gacctggttc cctgcctctg tattcaggtg 720tggcctctgg aacctgactc cgttaggacg aacatctgcc ccttcaggga ggacccccgc 780gcacaccaga acctctggca agccgcccga ctgcgactgc tgaccctgca gagctggctg 840ctggacgcac cgtgctcgct gcccgcagaa gcggcactgt gctggcgggc tccgggtggg 900gacccctgcc agccactggt cccaccgctt tcctgggaga acgtcactgt ggacaaggtt 960ctcgagttcc cattgctgaa aggccaccct aacctctgtg ttcaggtgaa cagctcggag 1020aagctgcagc tgcaggagtg cttgtgggct gactccctgg ggcctctcaa agacgatgtg 1080ctactgttgg agacacgagg cccccaggac aacagatccc tctgtgcctt ggaacccagt 1140ggctgtactt cactacccag caaagcctcc acgagggcag ctcgccttgg agagtactta 1200ctacaagacc tgcagtcagg ccagtgtctg cagctatggg acgatgactt gggagcgcta 1260tgggcctgcc ccatggacaa atacatccac aag 1293

<210> 43

<211> 431

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 43

Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His Cys Ser Pro Gly1 5 10 15 Leu Ser Cys Arg 20 Leu Trp Asp Ser Asp 25 Ile Leu Cys Leu Pro 30 Gly AspIle Val Pro 35 Ala Pro Gly Pro Val 40 Leu Ala Pro Thr His 45 Leu Gln ThrGlu Leu 50 Val Leu Arg Cys Gln 55 Lys Glu Thr Asp Cys 60 Asp Leu Cys LeuArg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp Glu Glu Pro Glu65 70 75 80Asp Glu Glu Lys Phe 85 Gly Gly Ala Ala Asp 90 Ser Gly Val Glu Glu 95 ProArg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe Gln Ala Tyr 100 105 110 Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro Ala Ala Leu115 120

Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val

130 135

Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser145 150 155

Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu

165 170

Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His

180 185

Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr

195 200

Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu

210 215

Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys225 230 235

Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn

245 250

Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln

260 265

Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala

275 280

Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly

290 295

Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val305 310 315

Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn

325 330

Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys

340 345

Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu

355 360

Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro

370 375

Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg385 390 395

Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln

405 410

Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys420 425

<210> 44

<211> 699

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 44

gagcccagag ggcccacaat caagccctgt cctccatgcattgggtggac catccgtctt catcttccct ccaaagatcactgagcccca tagtcacatg tgtggtggtg gatgtgagcgatcagctggt ttgtgaacaa cgtggaagta cacacagctcgattacaaca gtactctccg ggtggtcagt gccctccccaagtggcaagg agttcaaatg caaggtcaac aacaaagaccaccatctcaa aacccaaagg gtcagtaaga gctccacagggaagaagaga tgactaagaa acaggtcact ctgacctgcagaagacattt acgtggagtg gaccaacaac gggaaaacaggaaccagtcc tggactctga tggttcttac ttcatgtacaaagaactggg tggaaagaaa tagctactcc tgttcagtggcaccacacga ctaagagctt ctcccggact ccgggtaaa<210> 45<211> 233<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 45

Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro15 10

125Tyr Asp140

Tyr Thr

Pro Ala

Leu Val

Trp Asn205Thr Gly220

Leu Cys

Ile Cys

Ala Ala

Pro Cys285Gly Asp300

Thr Val

Leu Cys

Leu Trp

Glu Thr365Ser Gly380

Leu GlyLeu TrpTyr Ile

Cys Phe GluGln Pro Arg 160Leu Pro Trp 175 Leu Asn Val190 Gln Val GlnPro Gln IleIle Gln Val 240Pro Phe Arg 255 Arg Leu Arg270 Ser Leu ProPro Cys GlnAsp Lys Val 320Val Gln Val 335 Ala Asp Ser350 Arg Gly ProCys Thr SerGlu Tyr Leu 400Asp Asp Asp 415 His Lys 430

aatgcccagcaggatgtactaggatgacccagacacaaactccagcaccatcccagcgcctatatgtctttggtcacagaagctaaactagcaagctgagtccacgaggg

acctaacctc 60catgatctcc 120agatgtccag 180ccatagagag 240ggactggatg 300catcgagaga 360gcctccacca 420cttcatgcct 480caagaacact 540agtggaaaag 600tctgcacaat 660699

Pro Cys Lys Cys Pro15Ala Pro Asn Leu 20 Leu Gly Gly Pro Ser 25 Val Phe Ile Phe Pro 30 Pro LysIle Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val 35 40 45 Val Val 50 Asp Val Ser Glu Asp 55 Asp Pro Asp Val Gln 60 Ile Ser Trp PheVal Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu65 70 75 80Asp Tyr Asn Ser Thr 85 Leu Arg Val Val Ser 90 Ala Leu Pro Ile Gln 95 HisGln Asp Trp Met 100 Ser Gly Lys Glu Phe 105 Lys Cys Lys Val Asn 110 Asn LysAsp Leu Pro 115 Ala Pro Ile Glu Arg 120 Thr Ile Ser Lys Pro 125 Lys Gly SerVal Arg 130 Ala Pro Gln Val Tyr 135 Val Leu Pro Pro Pro 140 Glu Glu Glu MetThr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro145 150 155 160Glu Asp Ile Tyr Val 165 Glu Trp Thr Asn Asn 170 Gly Lys Thr Glu Leu 175 AsnTyr Lys Asn Thr 180 Glu Pro Val Leu Asp 185 Ser Asp Gly Ser Tyr 190 Phe MetTyr Ser Lys 195 Leu Arg Val Glu Lys 200 Lys Asn Trp Val Glu 205 Arg Asn SerTyr Ser 210 Cys Ser Val Val His 215 Glu Gly Leu His Asn 220 His His Thr ThrLys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys 225 230

<210> 46<211> 69<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 46

gtttcgctca gccaggaaat ccatgccgag ttgagacgct tccgtagact ggagaggctt 60gtggggcct 69

<210> 47<211> 36<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 47

tgtgggccct ctgggctcct tgtggatgta tttgtc 36

<210> 48<211> 36<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 48

gacaaataca tccacaagga gcccagaggg cccaca 36

<210> 49<211> 55<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 49

caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagattattt acccggagtc cggga 55

<210> 50<211> 76<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 50

caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagattattc catgggcatg tattcttcct 60tgtggatgta tttgtc 76

<210> 51<211> 10<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> rótulo his de terminal C<400> 51

Gly Ser Gly Gly His His His His His His

15 10

<210> 52<211> 10<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> C-terminal FLAG tag<400> 52

Gly Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys

15 10

<210> 53<211> 7<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> rótulo Glu-Glu<400> 53

Glu Glu Tyr Met Pro Met Glu

1 5

<210> 54<211> 85<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 54

caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagattagtg atggtgatgg tgatgtccac 60cagatccctt gtggatgtat ttgtc 85

<210> 55<211> 85<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 55

caaccccaga gctgttttaa ggcgcgcctc tagattactt atcatcatca tccttataat 60cggatccctt gtggatgtat ttgtc 85

<210> 56<211> 24<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 56

acgaagccca ggtaccagaa agag 24

<210> 57<211> 24<212> DNA<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 57

aaaagcgccg cagccaagag tagg 24

<210> 58<211> 20<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 58

cgtaagcggt ggcggttttc 20

<210> 59<211> 20<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 59

tgggcagggc acagtcacag 20

<210> 60<211> 24<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 60

acttgccatt ctgagggagg tagc 24

<210> 61<211> 24<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 61

cacaggtgca gccaactttt agga 24

<210> 62<211> 20<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 62

gtgggccgct ctaggcacca 20

<210> 63<211> 25<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> iniciador de nucleotideo<400> 63

cggttggcct tagggttcag ggggg 25

<210> 64

<211> 2127

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 64

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagactgga gaggcttgtg 120gggcctcagg acgctaccca ctgctctccg ggcctctcct gccgcctctg ggacagtgac 180atactctgcc tgcctgggga catcgtgcct gctccgggcc ccgtgctggc gcctacgcac 240ctgcagacag agctggtgct gaggtgccag aaggagaccg actgtgacct ctgtctgcgt 300gtggctgtcc acttggccgt gcatgggcac tgggaagagc ctgaagatga ggaaaagttt 360ggaggagcag ctgactcagg ggtggaggag cctaggaatg cctctctcca ggcccaagtc 420gtgctctcct tccaggccta ccctactgcc cgctgcgtcc tgctggaggt gcaagtgcct 480gctgcccttg tgcagtttgg tcagtctgtg ggctctgtgg tatatgactg cttcgaggct 540gccctaggga gtgaggtacg aatctggtcc tatactcagc ccaggtacga gaaggaactc 600aaccacacac agcagctgcc tgccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc 900tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 960tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 1020ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggaca aggttctcga gttcccattg 1080ctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag gtgaacagct cggagaagct gcagctgcag 1140gagtgcttgt gggctgactc cctggggcct ctcaaagacg atgtgctact gttggagaca 1200cgaggccccc aggacaacag atccctctgt gccttggaac ccagtggctg tacttcacta 1260cccagcaaag cctccacgag ggcagctcgc cttggagagt acttactaca agacctgcag 1320tcaggccagt gtctgcagct atgggacgat gacttgggag cgctatgggc ctgccccatg 1380gacaaataca tccacaaggg aggaagtggc ggaggaacag gaagtttggt ccctcgtgga 1440agcgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 1500gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 1560acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 1620gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 1680taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 1740aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 1800aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 1860aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 1920gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 1980tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 2040gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 2100agcctctccc tgtctccggg taaataa 2127

<210> 65<211> 708<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 65

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly1 5 10 15 Ala Val Phe Val 20 Ser Leu Ser Gln Glu 25 Ile His Ala Glu Leu 30 Arg ArgPhe Arg Arg 35 Leu Glu Arg Leu Val 40 Gly Pro Gln Asp Ala 45 Thr His CysSer Pro 50 Gly Leu Ser Cys Arg 55 Leu Trp Asp Ser Asp 60 Ile Leu Cys LeuPro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr His65 70 75 80Leu Gln Thr Glu Leu 85 Val Leu Arg Cys Gln 90 Lys Glu Thr Asp Cys 95 AspLeu Cys Leu Arg 100 Val Ala Val His Leu 105 Ala Val His Gly His 110 Trp GluGlu Pro Glu 115 Asp Glu Glu Lys Phe 120 Gly Gly Ala Ala Asp 125 Ser Gly ValGlu Glu 130 Pro Arg Asn Ala Ser 135 Leu Gln Ala Gln Val 140 Val Leu Ser PheGln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro145 150 155 160Ala Ala Leu Val Gln 165 Phe Gly Gln Ser Val 170 Gly Ser Val Val Tyr 175 AspCys Phe Glu Ala 180 Ala Leu Gly Ser Glu 185 Val Arg Ile Trp Ser 190 Tyr ThrGln Pro Arg 195 Tyr Glu Lys Glu Leu 200 Asn His Thr Gln Gln 205 Leu Pro AlaLeu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val210 215 220

Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn225 230 235 240

Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly

245 250 255

Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys

260 265 270

Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys

275 280 285

Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala

290 295 300

Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys305 310 315 320

Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp

325 330 335

Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val

340 345 350

Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys

355 360 365

Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp

370 375 380

Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr385 390 395 400

Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly

405 410 415

Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly

420 425 430

Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp

435 440 445

Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile

450 455 460

His Lys Gly Gly Ser Gly Gly Gly Thr Gly Ser Leu Val Pro Arg Gly465 470 475 480

Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu

485 490 495

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

500 505 510

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

515 520 525

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

530 535 540

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr545 550 555 560

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

565 570 575

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

580 585 590

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

595 600 605

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val

610 615 620

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val625 630 635 640

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

645 650 655

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

660 665 670

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

675 680 685

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

690 695 700

Ser Pro Gly Lys705<210> 66<211> 1416<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> inserto sintético<400> 66

agccaggaaa

caggacgcta

tgcctgcctg

acagagctgg

gtccacttgg

gcagctgact

tccttccagg

cttgtgcagt

gggagtgagg

acacagcagc

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aaagcctcca

cagtgtctgc

tacatccaca

aaaactcaca1

<210> 67

<211> 2154

<212> DNA

<213> Homo

<400> 67

atggatgcaa

tcgctcagcc

gggcctcagg

atactctgcc

ctgcagacag

gtggctgtcc

ggaggagcag

gtgctctcct

gctgcccttg

gccctaggga

aaccacacac

gtgcatctgg

caggtccagg

accttgaacc

gactccgtta

tggcaagccg

tcgctgcccg

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gagtgcttgt

cgaggccccc

cccagcaaag

tcaggccagt

gacaaataca

tcggggggcg

ccagcacctg

accctcatga

tccatgccgacccactgctcgggacatcgttgctgaggtgccgtgcatggcaggggtggacctaccctacttggtcagtctacgaatctgtgcctgccctatgtctctgacaaaaccccgacctggttccacatctgccctgcgactgctcggcactgtgcctgggagaaacctctgtgtactccctgggacagatccctcgagggcagcagctatgggaagggaggaagcatgcccacc

sapiens

tgaagagaggaggaaatccaacgctacccatgcctggggaagctggtgctacttggccgtctgactcaggtccaggcctatgcagtttgggtgaggtacgagcagctgccttctgaatgtgccccccaaaacacagacctggacgaacatcccgactgcgcagaagcggccgctttcctgaccctaacctgggctgactcaggacaacagcctccacgaggtctgcagcttccacaaggggaggtagtgaaactcctgggtctcccggac

gttgagacgctccgggcctcgcctgctccgccagaaggaggcactgggaaggagcctaggtgcccgctgctgtgggctctgtcctatactgccctggctcggagcagcacgtggcacaaactgcctctgtcttcagggaggaccctgcagctggcgggctcgtcactgtgtcaggtgaacgcctctcaaactgtgccttgtcgccttggacgatgacttgtggcggaggagtgcccagca

ttccgtagactcctgccgccggccccgtgcaccgactgtggagcctgaagaatgcctctcgtcctgctgggtggtatatgcagcccaggtaacgtgtcagttcggcctctaacctgactgattcaggtgtgacccccgcgagctggctgcccgggtgggggacaaggttcagctcggagagacgatgtgcgaacccagtggagtacttacggagcgctatacaggaagttcctgaa

tggagaggcttctgggacagtggcgcctacacctctgtctatgaggaaaatccaggcccaaggtgcaagtactgcttcgaacgagaaggacagatggtgaccctgtactggaccgcagatggcctctggacacaccagaatggacgcaccacccctgccatcgagttcccagctgcagcttactgttggagctgtacttctacaagacctgggcctgccctggtccctcg

tgtggggccttgacatactcgcacctgcaggcgtgtggctgtttggaggaagtcgtgctcgcctgctgccggctgccctaactcaaccaccaacgtgcatgaatcaggtccattaccttgacctgactcccctctggcaagtgctcgctggccactggtcattgctgaaagcaggagtgcgacacgaggcactacccagcgcagtcaggccatggacaaatggaagcgac

gctctgctgttgccgagttgctgctctccgcatcgtgcctgaggtgccaggcatgggcacggtggaggagccctactgcctcagtctgtgaatctggtcctgccctgcccctctgaggagaccccggtggggttccctgcctgccccttcactgctgaccactgtgctggggagaacgtcctgtgttcagcctggggcctatccctctgtggcagctcgcatgggacgataggtgggggcgcccaaatctgggaccgtcaccctgaggtc

gtgctgctgcagacgcttccggcctctcctgctccgggccaaggagaccgtgggaagagccctaggaatgcgctgcgtccggctctgtggtatactcagctggctcaacgcagcacttcgcacaaaaaccctctgtattcagggaggaccctgcagagctcgggctccggactgtggacagtgaacagctctcaaagacggccttggaaccttggagagtgacttgggagtccggcggggtcagacaaaagtcttcctctacatgcgtgg

tgtgtggcgcgtagactggagccgcctctgccgtgctggcactgtgacctctgaagatgacctctctccatgctggaggttatatgactgccaggtacgatgtcagcagagcctctcccttgactggaccaggtgtggcccccgcgcacaggctgctggagtggggacccaggttctcgacggagaagctatgtgctactccagtggctgacttactacacgctatgggcgtggaagcggctcacacatgtccccccaaatggtggacgt

cgtcttcgttgaggcttgtgggacagtgacgcctacgcacctgtctgcgtggaaaagtttggcccaagtcgcaagtgcctcttcgaggctgaaggaactctggtgacaacgtactggaatgcagatcatttctggaacctccagaacctccgcaccgtgcctgccagccagttcccattggcagctgcaggttggagacatacttcactaagacctgcagctgccccatgtggaggcgggcccaccgtgcacccaaggacgagccacgaa

6012018024030036042048054060066072078084090096010201080114012001260132013801416

6012018024030036042048054060066072078084090096010201080114012001260132013801440150015601620gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 1680aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 1740caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1800gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1860accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1920aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1980aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 2040ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 2100gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaa 2154

<210> 68<211> 718<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 68

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly1 5 10 15 Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg 20 25 30 Phe Arg Arg Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His Cys 35 40 45 Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys Leu 50 55 60 Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr His65 70 75 80Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys Asp 85 90 95 Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp Glu 100 105 110 Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly Val 115 120 125 Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe 130 135 140 Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro145 150 155 160Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp 165 170 175 Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr 180 185 190 Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Ala 195 200 205 Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val 210 215 220 Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn225 230 235 240Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly 245 250 255 Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys 260 265 270 Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys 275 280 285 Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala 290 295 300 Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys305 310 315 320Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp 325 330 335 Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val 340 345 350 Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys 355 360 365 Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp 370 375 380 Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr385 390 395 400Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly 405 410 415 Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly 420 425 430 Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp 435 440 445 Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile 450 455 460 His Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly465 470 475 480Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr 485 490 495 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 500 505 510 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 515 520 525 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 530 535 540 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr545 550 555 560Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 565 570 575 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 580 585 590 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 595 600 605 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 610 615 620 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val625 630 635 640Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 645 650 655 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 660 665 670 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 675 680 685 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 690 695 700 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

705 710 715

<210> 69

<211> 2052

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 69

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 24 0gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgccc tgccctggct caacgtgtca 600gcagatggtg acaacgtgca tctggttctg aatgtctctg aggagcagca cttcggcctc 660tccctgtact ggaatcaggt ccagggcccc ccaaaacccc ggtggcacaa aaacctgact 720ggaccgcaga tcattacctt gaaccacaca gacctggttc cctgcctctg tattcaggtg 780tggcctctgg aacctgactc cgttaggacg aacatctgcc ccttcaggga ggacccccgc 840gcacaccaga acctctggca agccgcccga ctgcgactgc tgaccctgca gagctggctg 900ctggacgcac cgtgctcgct gcccgcagaa gcggcactgt gctggcgggc tccgggtggg 960gacccctgcc agccactggt cccaccgctt tcctgggaga acgtcactgt ggacaaggtt 1020ctcgagttcc cattgctgaa aggccaccct aacctctgtg ttcaggtgaa cagctcggag 1080aagctgcagc tgcaggagtg cttgtgggct gactccctgg ggcctctcaa agacgatgtg 1140ctactgttgg agacacgagg cccccaggac aacagatccc tctgtgcctt ggaacccagt 1200ggctgtactt cactacccag caaagcctcc acgagggcag ctcgccttgg agagtactta 1260ctacaagacc tgcagtcagg ccagtgtctg cagctatggg acgatgactt gggagcgcta 1320tgggcctgcc ccatggacaa atacatccac aaggagccca aatcttcaga caaaactcac 1380acatgcccac cgtgcccagc acctgaagcc gagggggcac cgtcagtctt cctcttcccc 1440ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg 1500gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 1560cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc 1620gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 1680aacaaagccc tcccatcctc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccga 1740gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc 1800ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1860gggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc tggactccga cggctccttc 1920ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1980tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 2040ccgggtaaat aa 2052

<210> 70<211> 683<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 70

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His 20 25 30 Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys 35 40 45 Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr 50 55 60 His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp 85 90 95 Glu Glii Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly 100 105 110 Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser 115 120 125 Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val 130 135 140 Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr 165 170 175 Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro 180 185 190 Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu 195 200 205 Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp 210 215 220 Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr225 230 235 240Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu 245 250 255 Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile 260 265 270 Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala 275 280 285 Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro 290 295 300 Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly

305 310 315 320Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr 325 330 335 Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu 340 345 350 Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu 355 360 365 Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu 370 375 380 Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser385 390 395 400Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu 405 410 415 Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu 420 425 430 Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr 435 440 445 Ile His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 450 455 460 Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro465 4 70 475 480Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 485 490 495 Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 500 505 510 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 515 520 525 Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 530 535 540 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser545 550 555 560Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 565 570 575 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp 580 585 590 Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 595 600 605 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 610 615 620 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe625 630 635 640Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 645 650 655 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 660 665 670 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

675 680

<210> 71<211> 2130<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de murino e exons de 1 a 6 de IL-17RA demurino, exons de 8 a 16 de IL-17RC humano, ligador eFclO<400> 71

atggcgattc ggcgctgctg gccacgggtc gtccccgggc ccgcgctggg atggctgctt 60ctgctgctga acgttctggc cccgggccgc gcctccccgc gcctcctcga cttcccggct 120ccggtctgcg cgcaggaggg gctgagctgc agagtcaaga atagtacttg tctggatgac 180agctggatcc accccaaaaa cctgaccccg tcttccccaa aaaacatcta tatcaatctt 240agtgtttcct ctacccagca cggagaatta gtccctgtgt tgcatgttga gtggaccctg 300cagacagatg ccagcatcct gtacctcgag ggtgcagagc tgtccgtcct gcagctgaac 360accaatgagc ggctgtgtgt caagttccag tttctgtcca tgctgcagca tcaccgtaag 420cggtggcggt tttccttcag ccactttgtg gtagatcctg gccaggagta tgaagtgact 480gttcaccacc tgccgaagcc catccctgat ggggacccaa accacaaatc caagatcatc 540tttgtgcctg actgtgagga cagcaagatg aagatgacta cctcatgcgt gagctcagcc 600ctgccctggc tcaacgtgtc agcagatggt gacaacgtgc atctggttct gaatgtctct 660gaggagcagc acttcggcct ctccctgtac tggaatcagg tccagggccc cccaaaaccc 720cggtggcaca aaaacctgac tggaccgcag atcattacct tgaaccacac agacctggtt 780ccctgcctct gtattcaggt gtggcctctg gaacctgact ccgttaggac gaacatctgc 840cccttcaggg aggacccccg cgcacaccag aacctctggc aagccgcccg actgcgactg 900ctgaccctgc agagctggct gctggacgca ccgtgctcgc tgcccgcaga agcggcactg 960tgctggcggg ctccgggtgg ggacccctgc cagccactgg tcccaccgct ttcctgggag 1020aacgtcactg tggacaaggt tctcgagttc ccattgctga aaggccaccc taacctctgt 1080gttcaggtga acagctcgga gaagctgcag ctgcaggagt gcttgtgggc tgactccctg 1140gggcctctca aagacgatgt gctactgttg gagacacgag gcccccagga caacagatcc 1200ctctgtgcct tggaacccag tggctgtact tcactaccca gcaaagcctc cacgagggca 1260gctcgccttg gagagtactt actacaagac ctgcagtcag gccagtgtct gcagctatgg 1320gacgatgact tgggagcgct atgggcctgc cccatggaca aatacatcca caagggaggt 1380gggggctccg gcgggggtgg aagcggtgga ggcgggtcgg ggggcggagg tagtgagccc 1440aaatcttcag acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 1500ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 1560gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 1620tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 1680agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 1740gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1800aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 1860ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1920gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1980ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 2040cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 2100cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 2130

<210> 72<211> 710<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptídeo de sinal de murino e exons de 1 a

a 16 de IL-17RC humano,

exons de

6 de IL-17RA deligador e

munno,FclO<400> 72

Met Ala Ile Arg Arg Cys Trp Pro Arg Val Val Pro Gly Pro Ala Leu

15 10 15

Gly Trp Leu Leu Leu Leu Leu Asn Val Leu Ala Pro Gly Arg Ala Ser

20 25 30

Pro Arg Leu Leu Asp Phe Pro Ala Pro Val Cys Ala Gln Glu Gly Leu

35 40 45

Ser Cys Arg Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His

50 55 60

Pro Lys Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asn Ile Tyr Ile Asn Leu65 70 75 80

Ser Val Ser Ser Thr Gln His Gly Glu Leu Val Pro Val Leu His Val

85 90 95

Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Ala Ser Ile Leu Tyr Leu Glu Gly Ala

100 105 110

Glu Leu Ser Val Leu Gln Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Lys

115 120 125

Phe Gln Phe Leu Ser Met Leu Gln His His Arg Lys Arg Trp Arg Phe

130 135 140

Ser Phe Ser His Phe Val Val Asp Pro Gly Gln Glu Tyr Glu Val Thr145 150 155 160

Val His His Leu Pro Lys Pro Ile Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Lys

165 170 175

Ser Lys Ile Ile Phe Val Pro Asp Cys Glu Asp Ser Lys Met Lys Met

180 185 190

Thr Thr Ser Cys Val Ser Ser Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala195 200 205Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His

210 215 220

Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro225 230 235 240

Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His

245 250 255

Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro

260 265 270

Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala

275 280 285

His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln

290 295 300

Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu305 310 315 320

Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro

325 330 335

Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu

340 345 350

Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys

355 360 365

Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys

370 375 380

Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser385 390 395 400

Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala

405 410 415

Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln

420 425 430

Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp

435 440 445

Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly

450 455 460

Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro465 470 475 480

Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

485 490 495

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

500 505 510

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

515 520 525

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp.Tyr Val Asp Gly

530 535 540

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn545 550 555 560

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

565 570 575

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

580 585 590

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

595 600 605

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

610 615 620

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile625 630 635 640

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

645 650 655

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

660 665 670

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

675 680 685

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

690 695 700

Ser Leu Ser Pro Gly Lys705 710

<210> 73<211> 1638<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de otPA (Ativador de Plasminogênio de Tecido

Otimizado)e exons de 8 a 16 de IL-17RC humano,ligador e FclO<400> 73

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagagccct gccctggctc 120aacgtgtcag cagatggtga caacgtgcat ctggttctga atgtctctga ggagcagcac 180ttcggcctct ccctgtactg gaatcaggtc cagggccccc caaaaccccg gtggcacaaa 240aacctgactg gaccgcagat cattaccttg aaccacacag acctggttcc ctgcctctgt 300attcaggtgt ggcctctgga acctgactcc gttaggacga acatctgccc cttcagggag 360gacccccgcg cacaccagaa cctctggcaa gccgcccgac tgcgactgct gaccctgcag 420agctggctgc tggacgcacc gtgctcgctg cccgcagaag cggcactgtg ctggcgggct 480ccgggtgggg acccctgcca gccactggtc ccaccgcttt cctgggagaa cgtcactgtg 540gacaaggttc tcgagttccc attgctgaaa ggccacccta acctctgtgt tcaggtgaac 600agctcggaga agctgcagct gcaggagtgc ttgtgggctg actccctggg gcctctcaaa 660gacgatgtgc tactgttgga gacacgaggc ccccaggaca acagatccct ctgtgccttg 720gaacccagtg gctgtacttc actacccagc aaagcctcca cgagggcagc tcgccttgga 780gagtacttac tacaagacct gcagtcaggc cagtgtctgc agctatggga cgatgacttg 840ggagcgctat gggcctgccc catggacaaa tacatccaca agggaggtgg gggctccggc 900gggggtggaa gcggtggagg cgggtcgggg ggcggaggta gtgagcccaa atcttcagac 960aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc 1020ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 1080gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 1140gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 1200gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 1260aaggtctcca acaaagccct cccagccccc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1320cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1380caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1440gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1500ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1560gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1620tccctgtctc cgggtaaa 1638

<210> 74<211> 546<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de otPA (Ativador de Plasminogênio de TecidoOtimizado)e exons de 8 a 16 de IL-17RC humano,ligador e FclO<400> 74

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

15 10 15

Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg

20 25 30

Phe Arg Arg Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn

35 40 45

Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser

50 55 60

Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys65 70 75 80

Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val

85 90 95

Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg

100 105 110

Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu

115 120 125

Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu130 135 140 Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala145 150 155 160Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu 165 170 175 Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His 180 185 190 Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln 195 200 205 Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu 210 215 220 Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu225 230 235 240Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala 245 250 255 Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys 260 265 270 Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met 275 280 285 Asp Lys Tyr Ile His Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 290 295 300 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp305 310 315 320Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 325 330 335 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 340 345 350 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 355 360 365 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 370 375 380 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg385 390 395 400Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 405 410 415 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 420 425 430 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 435 440 445 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 450 455 460 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp465 470 475 480Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 485 490 495 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 500 505 510 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 515 520 525 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 530 535 540 Gly Lys

545

<210> 75

<211> 622

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 75

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 24 0gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctctctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctggaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatatgactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccaggtacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctggaacagcatcc cgagctgctg gg<210> 76<211> 207<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 76

360420480540600622

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His 20 25 30 Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys 35 40 45 Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr 50 55. 60 His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp 85 90 95 Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly 100 105 110 Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser

115

120

125

Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val 130 135 140 Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr 165 170 175 Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro 180 185 190 Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp

200

205

195<210> 77<211> 1318<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 7 de

IL-17RC humano e Fc5<400> 77

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttctctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgcctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtgctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgtgacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaagatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctctctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctggaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatatgactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccaggtacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctggaacagcatcc cgagctgctg gggagcccaa atcttcagac aaaactcaca catgcccaccgtgcccagca cctgaagccg agggggcacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaaggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagccacgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaagacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgtcctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccctcccatcctcc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggtgtacaccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct

6012018024030036042048054060066072078084090096010201080ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga 1140gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctctacag 1200caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat 1260gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggtaaa 1318<210> 78<211> 439<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptídeo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 7 de

IL-17RC humano e Fc5<400> 78

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His 20 25 30 Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys 35 40 45 Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr 50 55 60 His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp 85 90 95 Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly 100 105 110 Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser 115 120 125 Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val 130 135 140 Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr 165 170 175 Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro 180 185 190 Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Glu 195 200 205 Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 210 215 220 Glu Ala Glu' Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys225 230 235 240Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 245 250 255 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 260 265 270 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 275 280 285 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 290 295 300 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu305 310 315 320Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 325 330 335 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 340 345 350 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 355 360 365 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 370 375 380 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser385 390 395 400Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser415

Tyr Thr Gln Lys Ser430

gaagcccagtctccgggccttgcctgctccgccagaaggaggcactgggaaggagcctagctgcccgctgctgtgggctcggtcctatacgcagggggcttgtcagcagagcctctcccttg

405 410

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

420 425

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys435

<210> 79<211> 762<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 79

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggccctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgctctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcgctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggtgacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatggatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtggctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctaccctagaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagtgactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatcttacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgactaacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacggtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcgcaggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc<210> 80<211> 254<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 80

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala

15 10

Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro

20 25

Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp

35 40

Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro

50 55

His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln65 70 75

Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala

85 90

Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly

100 105

Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala

115 120

Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu

130 135

Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val145 150 155

Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val

165 170

Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His

180 185

Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile

195 200

Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp

210 215

Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu225 230 235

Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu

ggtcctttct 60ctcctgccgc 120gggccccgtg 180gaccgactgt 240agagcctgaa 300gaatgcctct 360cgtcctgctg 420tgtggtatat 480tcagcccagg 540cgaagtctgg 600tggtgacaac 660gtactggaat 720762

Leu Gly Arg

Gln Asp Ala30

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Val His Gly

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Gln Val Val

125Leu Glu Val140

Gly Ser Val

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Ser Pro15

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Leu Cys

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Leu Ser

Gln Val

Val Tyr160Ser Tyr175

Leu Pro

Trp Ala

Leu Val

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245

250

<210> 81<211> 1458<212> DNA<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptídeo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 8 de

IL-17RC humano e Fc5<400> 81atgcctgtgcctggagaggcctctgggacactggcgcctagacctctgtcgatgaggaaactccaggcccgaggtgcaaggactgcttcgtacgagaaggaacagcatccgtgcatctggcaggtccaggaaaactcacactcttcccccgtggtggtgggtggaggtgcgtggtcagcgaaggtctccacagccccgagcaggtcagccgagagcaatgggctccttctgtcttctcattccctgtctc<210> 82<211> 486<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo ι de sinal de IL-17RC < e exons ι de 1 a 8 de IL-17RC humano e : Fc5 <400> 82 Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His 20 25 30 Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys 35 40 45 Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr 50 55 60 His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp 85 90 95 Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly 100 105 110 Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser 115 120 125 Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val 130 135 140 Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr 165 170 175 Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro 180 185 190 Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala

cctggttcttttgtggggccgtgacatactcgcacctgcatgcgtgtggcagtttggaggaagtcgtgcttgcctgctgcaggctgccctaactcaaccacgagctgctgttctgaatgtgccccccaaacatgcccacccaaaacccaaacgtgagccaataatgccaatcctcaccgtacaaagccctaaccacaggttgacctgcctggcagccggatcctctacaggctccgtgatcgggtaaa

gctgtccttgtcaggacgctctgcctgcctgacagagctgtgtccacttgagcagctgacctccttccagccttgtgcagagggagtgagcacacagcagggccctgcccctctgaggagaccccggtgggtgcccagcaggacaccctccgaagaccctgacaaagccgcctgcaccagcccatcctccgtacaccctgggtcaaaggcgaacaactaccaagctcaccgcatgaggct

gcactgggccacccactgctggggacatcggtgctgaggtgccgtgcatgtcaggggtgggcctaccctatttggtcagtgtacgaatctctgcctgacttggctcaacgcagcacttcgcacaaaaacccctgaagccgatgatctcccgaggtcaagtcgggaggagcgactggctgaatcgagaaaacccccatcccttctatcccaaagaccacgcgtggacaagactgcacaacc

gaagcccagtctccgggccttgcctgctccgccagaaggaggcactgggaaggagcctagctgcccgctgctgtgggctcggtcctatacgcagggggcttgtcagcagagcctctcccttggagcccaaagggggcaccggacccctgatcaactggtaagtacaacagatggcaaggaccatctccaagggatgagctgcgacatcgcctcccgtgctgcaggtggcaactacacgca

ggtcctttctctcctgccgcgggccccgtggaccgactgtagagcctgaagaatgcctctcgtcctgctgtgtggtatattcagcccaggcgaagtctggtggtgacaacgtactggaatatcttcagacgtcagtcttcggtcacatgccgtggacggccacgtaccgtgtacaagtgcagccaaaggggaccaagaaccgtggagtggggactccgacgcaggggaacgaagagcctc

60120180240300360420480540600660720780840900960102010801140120012601320138014401458195 200

Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp

210 215

Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu

205Asn Val His220

Ser Leu Tyr

225

230

235

Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu

245

250

Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

260

265

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275

280

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290

295

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305

310

Phe Asn315

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Pro Lys Pro

285Cys Val Val300

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Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

325

330

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

340

345

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

355

360

Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

370

375

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp

Leu His Gln350

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365Gly Gln Pro380

Glu Leu Thr

385

390

395

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

405

410

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

420 425

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435 440

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

450 455

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr465 470 475

Ser Leu Ser Pro Gly Lys485

<210> 83

<211> 822

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 83

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggccctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgctctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcgctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggtgacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatggatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtggctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctaccctagaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagtgactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatcttacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgactaacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacggtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcgcaggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaaccaccttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc<210> 84<211> 274<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 84

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Phe Leu Tyr445

Asn Val Phe460

Thr Gln Lys

Leu Val

Trp Asn240Glu Pro255

Pro Glu

Lys Asp

Val Asp

Asp Gly320Tyr Asn335

Asp Trp

Leu Pro

Arg Glu

Lys Asn400Asp Ile415

Lys Thr

Ser Lys

Ser Cys

Ser Leu480

gaagcccagtctccgggccttgcctgctccgccagaaggaggcactgggaaggagcctagctgcccgctgctgtgggctcggtcctatacgcagggggcttgtcagcagagcctctcccttgactggaccag

ggtcctttct 60ctcctgccgc 120gggccccgtg 180gaccgactgt 240agagcctgaa 300gaatgcctct 360cgtcctgctg 420tgtggtatat 480tcagcccagg 540cgaagtctgg 600tggtgacaac 660gtactggaat 720gcagatcatt 780822

Leu Gly Arg Ser Pro15Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His 20 25 30 Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys 35 40 45 Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr 50 55 60 His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp 85 90 95 Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly 100 105 110 Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser 115 120 125 Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val 130 135 140 Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr 165 170 175 Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro 180 185 190 Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala 195 200 205 Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val 210 215 220 Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn225 230 235 240Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly 245 250 255 Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys 260 265 270 Ile Gln

<210> 85<211> 1518<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<2 2 0>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 9 de

IL-17RC humano e Fc5<400> 85

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120ctctgggaca. gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 24 0gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600aacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggagcccaa atcttcagac 840aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg agggggcacc gtcagtcttc 900ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc 960gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc 1020gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt 1080gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgc 1140aaggtctcca acaaagccct cccatcctcc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg 1200cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaac 1260caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1320gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac 1380ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac 1440gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc 1500tccctgtctc cgggtaaa 1518

<210> 86<211> 506<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 9 de

IL-17RC humano e Fc5<400> 86

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435 440

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450

455

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg465 470 475

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

485 490

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<210> 87

<211> 873

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 87

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggccctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgctctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcgctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggtgacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatggatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtggctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctaccctagaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagtgactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatcttacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgactaacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacggtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcgcaggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaaccaccttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattcgactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agg<210> 88<211> 291<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 88

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala

1 5 10

Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro

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Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp

35 40

Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro

50 55

His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln65 70 75

Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala

85 90

Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly

100 105

Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala

115 120

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130 135

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ggtcctttct 60ctcctgccgc 120gggccccgtg 180gaccgactgt 240agagcctgaa 300gaatgcctct 360cgtcctgctg 420tgtggtatat 480tcagcccagg 540cgaagtctgg 600tggtgacaac 660gtactggaat 720gcagatcatt 780tctggaacct 840873

Leu Gly ArgGlnSer

Val60Lys

Val

Ala

Gln

Leu140Gly

Arg

Thr

Asp Ala

30Asp Ile45

Leu Ala

Glu Thr

His Gly

Ala Asp110Val Val125

Glu Val

Ser Val

Ile Trp

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Leu Cys

Pro Thr

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Ser Gly

Leu Ser

Gln Val

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195 200 205

Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val

210 215 220

Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn225 230 235 240

Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly

245 250 255

Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys

260 265 270

Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys

275 280 285

Pro Phe Arg

290<210> 89<211> 1569<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 10 de

IL-17RC humano e Fc5<400> 89

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttctctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgcctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtgctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgtgacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaagatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctctctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctggaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatatgactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccaggtacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctggaacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaacgtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaatcaggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcattaccttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacctgactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggagccca aatcttcaga caaaactcacacatgcccac cgtgcccagc acctgaagcc gagggggcac cgtcagtctt cctcttccccccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtggacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtgcataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagcgtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctccaacaaagccc tcccatcctc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg gcagccccgagaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagcctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaatgggcagccgg agaacaacta caagaccacg cctcccgtgc tggactccga cggctccttcttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctcatgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtctccgggtaaa<210> 90<211> 523<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 10 de

IL-17RC humano e Fc5<400> 90

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro

15 10 15

Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His

20 25 30

Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys35 40 45

6012018024030036042048054060066072078084090096010201080114012001260132013801440150015601569Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr 50 55 60 His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp 85 90 95 Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly 100 105 110 Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser 115 120 125 Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val 130 135 140 Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr 165 170 175 Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro 180 185 190 Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala 195 200 205 Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val 210 215 220 Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn225 230 235 240Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly 245 250 255 Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys 260 265 270 Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys 275 280 285 Pro Phe Arg Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 290 295 300 Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro305 310 315 320Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 325 330 335 Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 340 345 350 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 355 360 365 Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 370 375 380 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser385 390 395 400Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 405 410 415 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp 420 425 430 Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 435 440 445 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 450 455 460 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe465 470 475 480Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 485 490 495 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 500 505 510 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 515 520 <210> 91

<211> 1059

<212> DNA<213> Homo sapiens<400> 91

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60

ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120

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<210> 92<211> 353<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 92

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser 20 Leu Glu Arg Leu Val 25 Gly Pro Gln Asp Ala 30 Thr HisCys Ser Pro 35 Gly Leu Ser Cys Arg 40 Leu Trp Asp Ser Asp 45 Ile Leu CysLeu Pro 50 Gly Asp Ile Val Pro 55 Ala Pro Gly Pro Val 60 Leu Ala Pro ThrHis Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg 85 Val Ala Val His Leu 90 Ala Val His Gly His 95 TrpGlu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly 100 105 110 Val Glu Glu 115 Pro Arg Asn Ala Ser 120. Leu Gln Ala Gln Val 125 Val Leu SerPhe Gln 130 Ala Tyr Pro Thr Ala 135 Arg Cys Val Leu Leu 140 Glu Val Gln ValPro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160Asp Cys Phe Glu Ala 165 Ala Leu Gly Ser Glu 170 Val Arg Ile Trp Ser 175 TyrThr Gln Pro Arg 180 Tyr Glu Lys Glu Leu 185 Asn His Thr Gln Gln 190 Leu ProAsp Cys Arg 195 Gly Leu Glu Val Trp 200 Asn Ser Ile Pro Ser 205 Cys Trp AlaLeu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val 210 215 220 Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn225 230 235 240Gln Val Gln Gly Pro 245 Pro Lys Pro Arg Trp 250 His Lys Asn Leu Thr 255 GlyPro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys 260 265 270 Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys 275 280 285 Pro Phe 290 Arg Glu Asp Pro Arg 295 Ala His Gln Asn Leu 300 Trp Gln Ala AlaArg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys305 310 315 320

Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp

325 330 335

Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val340 345 350

Asp

<210> 93<211> 1755<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 11 de

IL-17RC humano e Fc5<400> 93

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120ctctgggaca gtgacatact ctgcctgc.ct .ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600aacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc 900tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 960tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 1020ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggacg agcccaaatc ttcagacaaa 1080actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagccgagg gggcaccgtc agtcttcctc 1140ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 1200gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 1260gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 1320gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 1380gtctccaaca aagccctccc atcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1440ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg atgagctgac caagaaccag 1500gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1560agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1620tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1680ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1740ctgtctccgg gtaaa 1755

<210> 94<211> 585<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 11 de

IL-17RC humano e Fc5<400> 94

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser 20 Leu Glu Arg Leu Val 25 Gly Pro Gln Asp Ala 30 Thr HisCys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys 35 40 45 Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr 50 55 60 His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp 85 90 95 Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly 100 105 110 Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser 115 120 125 Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val 130 135 140 Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr 165 170 175 Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro 180 185 190 Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala 195 200 205 Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val 210 215 220 Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn225 230 235 240Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly 245 250 255 Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys 260 265 270· Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys 275 280 285 Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala 290 295 300 Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys305 310 315 320Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp 325 330 335 Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val 340 345 350 Asp Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 355 360 365 Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 370 375 380 Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val385 390 395 400Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr 405 410 415 Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 420 425 430 Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 435 440 445 Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 450 455 460 Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln465 470 475 480Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu 485 490 495 Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 500 505 510 Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn 515 520 525 Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 530 535 540 Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val545 550 555 560Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

565 570 575Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys580 585

<210> 95

<211> 303

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 95

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60gactccctgg ggcctctcaa agacgatgtg ctactgttgg agacacgagg cccccaggac 120aacagatccc tctgtgcctt ggaacccagt ggctgtactt cactacccag caaagcctcc 180acgagggcag ctcgcçttgg agagtactta ctacaagacc tgcagtcagg ccagtgtctg 240cagctatggg acgatgactt gggagcgcta tgggcctgcc ccatggacaa atacatccac 300aag 303

<210> 96<211> 101<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 96

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser 20 Asp Ser Leu Gly Pro 25 Leu Lys Asp Asp Val 30 Leu LeuLeu Glu Thr 35 Arg Gly Pro Gln Asp 40 Asn Arg Ser Leu Cys 45 Ala Leu GluPro Ser 50 Gly Cys Thr Ser Leu 55 Pro Ser Lys Ala Ser 60 Thr Arg Ala AlaArg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu65 70 75 80Gln Leu Trp Asp Asp 85 Asp Leu Gly Ala Leu 90 Trp Ala Cys Pro Met 95 AspLys Tyr Ile His 100 Lys

<210> 97<211> 999<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 14 a 16 de

IL-17RC humano e Fc5<400> 97

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60gactccctgg ggcctctcaa agacgatgtg ctactgttgg agacacgagg cccccaggac 120aacagatccc tctgtgcctt ggaacccagt ggctgtactt cactacccag caaagcctcc 180acgagggcag ctcgccttgg agagtactta ctacaagacc tgcagtcagg ccagtgtctg 240cagctatggg acgatgactt gggagcgcta tgggcctgcc ccatggacaa atacatccac 300aaggagccca aatcttcaga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaagcc 360gagggggcac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 420cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 480ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 540cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 600aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccatcctc catcgagaaa 660accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 720cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 780agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 840cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 900agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 960cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaa 999

<210> 98<211> 333<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 14 a 16 deIL-17RC humano e Fc5<400> 98

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro

1 5 10 15

Val Val Leu Ser Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu

20 25 30

Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu

35 40 45

Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala

50 55 60

Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu65 70 75 80

Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp

85 90 95

Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys

100 105 110

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu

115 120 125

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

130 135 140

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys145 150 155 160

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

165 170 175

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

180 185 190

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

195 200 205

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

210 215 220

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser225 230 235 240

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

245 250 255

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

260 265 270

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

275 280 285

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

290 295 300

Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn305 310 315 320

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys325 330

<210> 99

<211> 585

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 99

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60gaggaccccc gcgcacacca gaacctctgg caagccgccc gactgcgact gctgaccctg 120cagagctggc tgctggacgc accgtgctcg ctgcccgcag aagcggcact gtgctggcgg 180gctccgggtg gggacccctg ccagccactg gtcccaccgc tttcctggga gaacgtcact 240gtggacaagg ttctcgagtt cccattgctg aaaggccacc ctaacctctg tgttcaggtg 300aacagctcgg agaagctgca gctgcaggag tgcttgtggg ctgactccct ggggcctctc 360aaagacgatg tgctactgtt ggagacacga ggcccccagg acaacagatc cctctgtgcc 420ttggaaccca gtggctgtac ttcactaccc agcaaagcct ccacgagggc agctcgcctt 480ggagagtact tactacaaga cctgcagtca ggccagtgtc tgcagctatg ggacgatgac 540ttgggagcgc tatgggcctg ccccatggac aaatacatcc acaag 585

<210> 100<211> 195<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 100 Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser 20 Glu Asp Pro Arg Ala 25 His Gln Asn Leu Trp 30 Gln AlaAla Arg Leu 35 Arg Leu Leu Thr Leu 40 Gln Ser Trp Leu Leu 45 Asp Ala ProCys Ser 50 Leu Pro Ala Glu Ala 55 Ala Leu Cys Trp Arg 60 Ala Pro Gly GlyAsp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr65 70 75 80Val Asp Lys Val Leu 85 Glu Phe Pro Leu Leu 90 Lys Gly His Pro Asn 95 LeuCys Val Gln Val 100 Asn Ser Ser Glu Lys 105 Leu Gln Leu Gln Glu 110 Cys LeuTrp Ala Asp 115 Ser Leu Gly Pro Leu 120 Lys Asp Asp Val Leu 125 Leu Leu GluThr Arg 130 Gly Pro Gln Asp Asn 135 Arg Ser Leu Cys Ala 140 Leu Glu Pro SerGly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu145 150 155 160Gly Glu Tyr Leu Leu 165 Gln Asp Leu Gln Ser 170 Gly Gln Cys Leu Gln 175 LeuTrp Asp Asp Asp 180 Leu Gly Ala Leu Trp 185 Ala Cys Pro Met Asp 190 Lys TyrIle His Lys 195

<210> 101<211> 1281<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 11 a 16 de

IL-17RC humano e Fc5<400> 101

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60gaggaccccc gcgcacacca gaacctctgg caagccgccc gactgcgact gctgaccctg 120cagagctggc tgctggacgc accgtgctcg ctgcccgcag aagcggcact gtgctggcgg 180gctccgggtg gggacccctg ccagccactg gtcccaccgc tttcctggga gaacgtcact 240gtggacaagg ttctcgagtt cccattgctg aaaggccacc ctaacctctg tgttcaggtg 300aacagctcgg agaagctgca gctgcaggag tgcttgtggg ctgactccct ggggcctctc 360aaagacgatg tgctactgtt ggagacacga ggcccccagg acaacagatc cctctgtgcc 420ttggaaccca gtggctgtac ttcactaccc agcaaagcct ccacgagggc agctcgcctt 480ggagagtact tactacaaga cctgcagtca ggccagtgtc tgcagctatg ggacgatgac 540ttgggagcgc tatgggcctg ccccatggac aaatacatcc acaaggagcc caaatcttca 600gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaag ccgagggggc accgtcagtc 660ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 720tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 780ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 840cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 900tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccatcc tccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 960gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 1020aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1080tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1140gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1200aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1260ctctccctgt ctccgggtaa a 1281

<210> 102<211> 427<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 11 a 16 deIL-17RC humano e Fc5<4 00> 102

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala 20 25 30 Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro 35 40 45 Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly 50 55 60 Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr65 70 75 80Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu 85 90 95 Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu 100 105 110 Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu 115 120 125 Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser 130 135 140 Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu145 150 155 160Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu 165 170 175 Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr 180 185 190 Ile His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro 195 200 205 Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 210 215 220 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr225 230 235 240Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn 245 250 255 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 260 265 270 Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 275 280 285 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 290 295 300 Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys305 310 315 320Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp 325 330 335 Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 340 345 350 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 355 360 365 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 370 375 380 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly385 390 395 400Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 405 410 415 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

420 425

<210> 103<211> 882<212> DNA<213> Homo sapiens<4 00> 103

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60gactgcaggg ggctcgaagt ctggaacagc atcccgagct gctgggccct gccctggctc 120aacgtgtcag cagatggtgattcggcctct ccctgtactgaacctgactg gaccgcagatattcaggtgt ggcctctggagacccccgcg cacaccagaaagctggctgc tggacgcaccccgggtgggg acccctgccagacaaggttc tcgagttcccagctcggaga agctgcagctgacgatgtgc tactgttggagaacccagtg gctgtacttcgagtacttac tacaagacctggagcgctat gggcctgccc<210> 104<211> 294<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 104

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser 20 Asp Cys Arg Gly Leu 25 Glu Val Trp Asn Ser 30 Ile ProSer Cys Trp Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn 35 40 45 Val His 50 Leu Val Leu Asn Val 55 Ser Glu Glu Gln His 60 Phe Gly Leu SerLeu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys65 70 75 80Asn Leu Thr Gly Pro 85 Gln Ile Ile Thr Leu 90 Asn His Thr Asp Leu 95 ValPro Cys Leu Cys 100 Ile Gln Val Trp Pro 105 Leu Glu Pro Asp Ser 110 Val ArgThr Asn Ile 115 Cys Pro Phe Arg Glu 120 Asp Pro Arg Ala His 125 Gln Asn LeuTrp Gln 130 Ala Ala Arg Leu Arg 135 Leu Leu Thr Leu Gln 140 Ser Trp Leu LeuAsp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala145 150 155 160Pro Gly Gly Asp Pro 165 Cys Gln Pro Leu Val 170 Pro Pro Leu Ser Trp 175 GluAsn Val Thr Val 180 Asp Lys Val Leu Glu 185 Phe Pro Leu Leu Lys 190 Gly HisPro Asn Leu 195 Cys Val Gln Val Asn 200 Ser Ser Glu Lys Leu 205 Gln Leu GlnGlu Cys 210 Leu Trp Ala Asp Ser 215 Leu Gly Pro Leu Lys 220 Asp Asp Val LeuLeu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu225 230 235 240Glu Pro Ser Gly Cys 245 Thr Ser Leu Pro Ser 250 Lys Ala Ser Thr Arg 255 AlaAla Arg Leu Gly 260 Glu Tyr Leu Leu Gln 265 Asp Leu Gln Ser Gly 270 Gln CysLeu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met 275 280 285 Asp Lys 290 Tyr Ile His Lys

<210> 105<211> 1578<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 7 a 16 deIL-17RC humano e Fc5

63

caacgtgcat ctggttctga atgtctctga ggagcagcac 180gaatcaggtc cagggccccc caaaaccccg gtggcacaaa 240cattaccttg aaccacacag acctggttcc ctgcctctgt 300acctgactcc gttaggacga acatctgccc cttcagggag 360cctctggcaa gccgcccgac tgcgactgct gaccctgcag 420gtgctcgctg cccgcagaag cggcactgtg ctggcgggct 480gccactggtc ccaccgcttt cctgggagaa cgtcactgtg 540attgctgaaa ggccacccta acctctgtgt tcaggtgaac 600gcaggagtgc ttgtgggctg actccctggg gcctctcaaa 660gacacgaggc ccccaggaca acagatccct ctgtgccttg 720actacccagc aaagcctcca cgagggcagc tcgccttgga 780gcagtcaggc cagtgtctgc agctatggga cgatgacttg 840catggacaaa tacatccaca ag 882<400> 105

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttctgactgcaggg ggctcgaagt ctggaacagc atcccgagct gctgggccct gccctggctcaacgtgtcag cagatggtga caacgtgcat ctggttctga atgtctctga ggagcagcacttcggcctct ccctgtactg gaatcaggtc cagggccccc caaaaccccg gtggcacaaaaacctgactg gaccgcagat cattaccttg aaccacacag acctggttcc ctgcctctgtattcaggtgt ggcctctgga acctgactcc gttaggacga acatctgccc cttcagggaggacccccgcg cacaccagaa cctctggcaa gccgcccgac tgcgactgct gaccctgcagagctggctgc tggacgcacc gtgctcgctg cccgcagaag cggcactgtg ctggcgggctccgggtgggg acccctgcca gccactggtc ccaccgcttt cctgggagaa cgtcactgtggacaaggttc tcgagttccc attgctgaaa ggccacccta acctctgtgt tcaggtgaacagctcggaga agctgcagct gcaggagtgc ttgtgggctg actccctggg gcctctcaaagacgatgtgc tactgttgga gacacgaggc ccccaggaca acagatccct ctgtgccttggaacccagtg gctgtacttc actacccagc aaagcctcca cgagggcagc tcgccttggagagtacttac tacaagacct gcagtcaggc cagtgtctgc agctatggga cgatgacttgggagcgctat gggcctgccc catggacaaa tacatccaca aggagcccaa atcttcagacaaaactcaca catgcccacc gtgcccagca cctgaagccg agggggcacc gtcagtcttcctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc ggacccctga ggtcacatgcgtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggcgtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgtgtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag gactggctga atggcaagga gtacaagtgcaaggtctcca acaaagccct cccatcctcc atcgagaaaa ccatctccaa agccaaagggcagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggatgagct gaccaagaaccaggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgggagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgacggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaacgtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca gaagagcctctccctgtctc cgggtaaa<210> 106<211> 526<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptídeo de sinal de IL-17RC e exons de 7 a 16 de

IL-17RC humano e Fc5<400> 106

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro

1 5 10 15

Val Val Leu Ser Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro

20 25 30

Ser Cys Trp Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val' Ser Ala Asp Gly Asp Asn

35 40 45

Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser

50 55 60

Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys65 70 75 80

Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val

85 90 95

Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg

100 105 110

Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu

115 120 125

Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu

130 135 140

Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala145 150 155 160

Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu

165 170 175

Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His

180 185 190

Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln

195 200 205

Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu

6012018024030036042048054060066072078084090096010201080114012001260132013801440150015601578210 215

Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln225 230

Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu245

Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu260

Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu

Asp Asn Arg235

Pro Ser Lys

250Gln Asp Leu265

Gly Ala Leu

275

280

Asp Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro Lys Ser Ser

290

295

Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu305 310

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp325

Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp340

Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly355 360

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

370 375

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp385 390

Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro405

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu420

Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn435 440

Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

450 455

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr465 470

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys485

Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys500

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu515 520

<210> 107<211> 864<212> DNA<213> Homo sapiens<4 00> 107

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttgctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgctctctgggaca gtgacatact ctgcctgcctctggcgccta cgcacctgca gacagagctggacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttggatgaggaaa agtttggagg agcagctgacctccaggccc aagtcgtgct ctccttccaggaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcaggactgcttcg aggctgccct agggagtgagtacgagaagg aactcaacca cacacagcagaacagcatcc cgagctgctg ggactccctggagacacgag gcccccagga caacagatcctcactaccca gcaaagcctc cacgagggcactgcagtcag gccagtgtct gcagctatggcccatggaca aatacatcca caag<210> 108<211> 288<212> PRT

<213> Homo sapiens

Ala Glu Gly315

Thr Leu Met

330Val Ser His345

Val Glu Val

Ser Thr Tyr

Leu Asn Gly395

Ser Ser Ile

410Pro Gln Val425

Gln Val Ser

Ala Val Glu

Thr Pro Pro475

Leu Thr Val

490Ser Val Met505

Ser Leu Ser

220Ser

Ala

Gln

Trp

Asp300Ala

Ile

Glu

His

Arg380Lys

Glu

Tyr

Leu

Trp460Val

Asp

His

Pro

Leu Cys

Ser Thr

Ser Gly270Ala Cys285

Lys Thr

Pro Ser

Ser Arg

Asp Pro350Asn Ala365

Val Val

Glu Tyr

Lys Thr

Thr Leu430Thr Cys445

Glu Ser

Leu Asp

Lys Ser

Glu Ala510Gly Lys525

Ala Leu240Arg Ala255

Gln Cys

Pro Met

His Thr

Val Phe320Thr Pro335

Glu Val

Lys Thr

Ser Val

Lys Cys400Ile Ser415

Pro Pro

Leu Val

Asn Gly

Ser Asp480Arg Trp495

Leu His

gcactgggccacccactgctggggacatcggtgctgaggtgccgtgcatgtcaggggtgggcctaccctatttggtcagtgtacgaatctctgcctgactgggcctctcactctgtgcctgctcgccttggacgatgact

gaagcccagtctccgggccttgcctgctccgccagaaggaggcactgggaaggagcctagctgcccgctgctgtgggctcggtcctatacgcagggggctaagacgatgttggaacccaggagagtactttgggagcgct

ggtcctttct 60ctcctgccgc 120gggccccgtg 180gaccgactgt 240agagcctgaa 300gaatgcctct 360cgtcctgctg 420tgtggtatat 480tcagcccagg 540cgaagtctgg 600gctactgttg 660tggctgtact 720actacaagac 780atgggcctgc 840864<400> 108 Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His 20 25 30 Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys 35 40 45 Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr 50 55 60 His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp 85 90 95 Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly 100 105 110 Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser 115 120 125 Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val 130 135 140 Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr 165 170 175 Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro 180 185 190 Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Asp 195 200 205 Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly 210 215 220 Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr225 230 235 240Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr 245 250 255 Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp 260 265 270 Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys 275 280 285

<210> 109<211> 1560<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 7 e de 14 a 16 de

IL-17RC humano e Fc5<4 00> 109

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600aacagcatcc cgagctgctg ggactccctg gggcctctca aagacgatgt gctactgttg 660gagacacgag gcccccagga caacagatcc ctctgtgcct tggaacccag tggctgtact 720tcactaccca gcaaagcctc cacgagggca gctcgccttg gagagtactt actacaagac 780ctgcagtcag gccagtgtct gcagctatgg gacgatgact tgggagcgct atgggcctgc 840cccatggaca aatacatcca caaggagccc aaatcttcag acaaaactca cacatgccca 900ccgtgcccag cacctgaagc cgagggggca ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 960aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc 1020cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc 1080aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc 1140gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc 1200ctcccatcct ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag 1260gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 1320ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 1380gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac 1440agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg 1500atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1560<210> 110<211> 520<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptídeo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 7 e de 14 a 16 de

IL-17RC humano e Fc5<4 00> 110

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His 20 25 30 Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys 35 40 45 Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr 50 55 60 His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp 85 90 95 Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly 100 105 110 Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser 115 120 125 Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val 130 135 140 Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr 165 170 175 Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro 180 185 190 Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Asp 195 200 205 Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly 210 215 220 Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr225 230 235 240Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr 245 250 255 Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp 260 265 270 Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys 275 280 285 Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 290 295 300 Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro305 310 315 320Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 325 330 335 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 340 345 350 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 355 360 365 Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln370 375 380

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala385 390 395 400Leu Pro Ser Ser Ile 405 Glu Lys Thr Ile Ser 410 Lys Ala Lys Gly Gln 415 ProArg Glu Pro Gln 420 Val Tyr Thr Leu Pro 425 Pro Ser Arg Asp Glu 430 Leu ThrLys Asn Gln 435 Val Ser Leu Thr Cys 440 Leu Val Lys Gly Phe 445 Tyr Pro SerAsp Ile 450 Ala Val Glu Trp Glu 455 Ser Asn Gly Gln Pro 460 Glu Asn Asn TyrLys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr465 470 475 480Ser Lys Leu Thr Val 485 Asp Lys Ser Arg Trp 490 Gln Gln Gly Asn Val 495 PheSer Cys Ser Val 500 Met His Glu Ala Leu 505 His Asn His Tyr Thr 510 Gln LysSer Leu Ser 515 Leu Ser Pro Gly Lys 520

<210> 111<211> 1146<212> DNA<213> Homo sapiens<4 00> 111

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600aacagcatcc cgagctgctg ggaggacccc cgcgcacacc agaacctctg gcaagccgcc 660cgactgcgac tgctgaccct gcagagctgg ctgctggacg caccgtgctc gctgcccgca 720gaagcggcac tgtgctggcg ggctccgggt ggggacccct gccagccact ggtcccaccg 780ctttcctggg agaacgtcac tgtggacaag gttctcgagt tcccattgct gaaaggccac 840cctaacctct gtgttcaggt gaacagctcg gagaagctgc agctgcagga gtgcttgtgg 900gctgactccc tggggcctct caaagacgat gtgctactgt tggagacacg aggcccccag 960gacaacagat ccctctgtgc cttggaaccc agtggctgta cttcactacc cagcaaagcc 1020tccacgaggg cagctcgcct tggagagtac ttactacaag acctgcagtc aggccagtgt 1080ctgcagctat gggacgatga cttgggagcg ctatgggcct gccccatgga caaatacatc 1140cacaag 1146

<210> 112<211> 382<212> PRT<213> Homo sapiens<4 00> 112

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His 20 25 30 Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys 35 40 45 Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr 50 55 60 His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp 85 90 95 Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly

100 105 110Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser 115 120 125 Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val 130 135 140 Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr 165 170 175 Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro 180 185 190 Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Glu 195 200 205 Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu 210 215 220 Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala225 230 235 240Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro 245 250 255 Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu 260 265 270 Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn 275 280 285 Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu 290 295 300 Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln305 310 315 320Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu 325 330 335 Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu 340 345 350 Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu 355 360 365 Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys 370 375 380 <210> 113

<211> 1842<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptídeo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 7 e de 11 a 16 de

IL-17RC humano e Fc5<4 00> 113

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600aacagcatcc cgagctgctg ggaggacccc cgcgcacacc agaacctctg gcaagccgcc 660cgactgcgac tgctgaccct gcagagctgg ctgctggacg caccgtgctc gctgcccgca 720gaagcggcac tgtgctggcg ggctccgggt ggggacccct gccagccact ggtcccaccg 780ctttcctggg agaacgtcac tgtggacaag gttctcgagt tcccattgct gaaaggccac 840cctaacctct gtgttcaggt gaacagctcg gagaagctgc agctgcagga gtgcttgtgg 900gctgactccc tggggcctct caaagacgat gtgctactgt tggagacacg aggcccccag 960gacaacagat ccctctgtgc cttggaaccc agtggctgta cttcactacc cagcaaagcc 1020tccacgaggg cagctcgcct tggagagtac ttactacaag acctgcagtc aggccagtgt 1080ctgcagctat gggacgatga cttgggagcg ctatgggcct gccccatgga caaatacatc 1140cacaaggagc ccaaatcttc agacaaaact cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa 1200gccgaggggg caccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc 1260tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc 1320aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag 1380gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg 1440ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccatc ctccatcgag 1500aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca 1560tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat 1620cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc 1680acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac 1740aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac 1800aaccactaca cgcagaagag cctctccctg tctccgggta aa 1842

<210> 114<211> 614<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo ι de sinal de IL-17RC - e exons < de 1 a 7 e de 11 a 1 IL-17RC humano e Fc5 <4 00> 114 Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His 20 25 30 Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys 35 40 45 Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr 50 55 60 His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp 85 90 95 Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly 100 105 110 Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser 115 120 125 Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val 130 135 140 Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr 165 170 175 Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro 180 185 190 Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Glu 195 200 205 Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu 210 215 220 Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala225 230 235 240Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro 245 250 255 Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu 260 265 270 Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn 275 280 285 Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu 290 295 300 Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln305 310 315 320Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu 325 330 335 Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu 340 345 350 Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu355 360 365 Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro 370 375 380 Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu385 390 395 400Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 405 410 415 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 420 425 430 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 435 440 445 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 450 455 460 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp465 470 475 480Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 485 490 495 Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 500 505 510 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn 515 520 525 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 530 535 540 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr545 550 555 560Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 565 570 575 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 580 585 590 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 595 600 605 Ser Leu Ser Pro Gly Lys

610<210> 115<211> 1524<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 13 deIL-17RC humano e exons de 7 a 9 de IL-17RA humano<400> 115

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagtctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcctctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctccctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaaggagacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactgggagatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctagctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctggaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctcgactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatactacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggctaacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcagagtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccctcaggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggaccaccttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggccgactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcacatggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctggatcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggacccctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggaca aggttctcgactgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag gtgaacagct cggagaagctgagtgcttgt gggctggcag cctttgggat cccaacatca ctgtggagaccagcatctgc gagtggactt caccctgtgg aatgaatcca ccccctaccagaaagtttct ccgactcaga gaaccacagc tgctttgatg tcgttaaaca

ggtcctttct 60ctcctgccgc 120gggccccgtg 180gaccgactgt 240agagcctgaa 300gaatgcctct 360cgtcctgctg 420tgtggtatat 480tcagcccagg 540cgaagtctgg 600tggtgacaac 660gtactggaat 720gcagatcatt 780tctggaacct 840ccagaacctc 900cgcaccgtgc 960ctgccagcca 1020gttcccattg 1080gcagctgcag 1140cttggacaca 1200ggtcctgctg 1260aatatttgcg 1320cccaggcaag aagaattcca tcagcgagct aatgtcacat tcactctaag caagtttcac 1380tggtgctgcc atcaccacgt gcaggtccag cccttcttca gcagctgcct aaatgactgt 1440ttgagacacg ctgtgactgt gccctgccca gtaatctcaa ataccacagt tcccaagcca 1500gttgcagact acattcccct gtgg 1524

<210> 116<211> 508<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 13 deIL-17RC humano e exons de 7 a 9 de IL-17RA humano<4 00> 116

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His 20 25 30 Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys 35 40 45 Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr 50 55 60 His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp 85 90 95 Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly 100 105 110 Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser 115 120 125 Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val 130 135 140 Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr 165 170 175 Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro 180 185 190 Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala 195 200 205 Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val 210 215 220 Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His- Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn225 230 '235 240Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly 245 250 255 Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys 260 265 270 Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys 275 280 285 Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala 290 295 300 Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys305 310 315 320Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp 325 330 335 Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val 340 345 350 Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys 355 360 365 Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp 370 375 380 Ala Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn Ile Thr Val Glu Thr Leu Asp Thr385 390 395 400Gln His Leu Arg Val Asp Phe Thr Leu Trp Asn Glu Ser Thr Pro Tyr405

Gln Val Leu Leu Glu Ser Phe Ser Asp Ser Glu Asn His Ser Cys Phe

Asp Val Val Lys Gln Ile Phe Ala Pro Arg Gln Glu Glu Phe His Gln

445

Gln Val LeuAsp Val Val 435Arg Ala Asn 450 His His Val465 Leu Arg His

420

170

485

500

410Phe Ser Asp Ser 425 Phe Ala Pro Arg 440 Thr Leu Ser Lys455 Pro Phe Phe SerVal Pro Cys Pro 490Asp Tyr Ile Pro 505

415

430

Arg Ala Asn Val Thr Phe Thr Leu Ser Lys Phe His Trp Cys Cys His

460

His His Val Gln Val Gln Pro Phe Phe Ser Ser Cys Leu Asn Asp Cys

475

480

Leu Arg His Ala Val Thr Val Pro Cys Pro Val Ile Ser Asn Thr Thr

495

<210> 117<211> 2220<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 13 de

IL-17RC humano e exons de 7 a 9 de IL-17RA humano e Fc5<4 00> 117

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240gacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600aacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc 900tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 960tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 1020ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggaca aggttctcga gttcccattg 1080ctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag gtgaacagct cggagaagct gcagctgcag 1140gagtgcttgt gggctggcag cctttgggat cccaacatca ctgtggagac cttggacaca 1200cagcatctgc gagtggactt caccctgtgg aatgaatcca ccccctacca ggtcctgctg 1260gaaagtttct ccgactcaga gaaccacagc tgctttgatg tcgttaaaca aatatttgcg 1320cccaggcaag aagaattcca tcagcgagct aatgtcacat tcactctaag caagtttcac 1380tggtgctgcc atcaccacgt gcaggtccag cccttcttca gcagctgcct aaatgactgt 1440ttgagacacg ctgtgactgt gccctgccca gtaatctcaa ataccacagt tcccaagcca 1500gttgcagact acattcccct gtgggagccc aaatcttcag acaaaactca cacatgccca 1560ccgtgcccag cacctgaagc cgagggggca ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 1620aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc 1680cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc 1740aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc 1800gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc 1860ctcccatcct ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag 1920gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 1980ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 2040gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac 2100agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg 2160atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 2220<210> 118<211> 740<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>* <223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 13 de

IL-17RC humano e exons de 7 a 9 de IL-17RA humano e Fc5

<4 00> 118 Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His 20 25 30 Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys .Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys 35 40 45 Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr 50 55 60 His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp 85 90 95 Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly 100 105 110 Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser 115 120 125 Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val 130 135 140 Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr 165 170 175 Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro 180 185 190 Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala 195 200 205 Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val 210 215 220 Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn225 230 235 240Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly 245 250 255 Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys 260 265 270 Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys 275 280 285 Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala 290 295 300 Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys305 310 315 320Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp 325 330 335 Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val 340 345 350 Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys 355 360 365 Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp 370 375 380 Ala Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn Ile Thr Val Glu Thr Leu Asp Thr385 390 395 400Gln His Leu Arg Val Asp Phe Thr Leu Trp Asn Glu Ser Thr Pro Tyr 405 410 415 Gln Val Leu Leu Glu Ser Phe Ser Asp Ser Glu Asn His Ser Cys Phe 420 425 430 Asp Val Val Lys Gln Ile Phe Ala Pro Arg Gln Glu Glu Phe His Gln 435 440 445 Arg Ala Asn Val Thr Phe Thr Leu Ser Lys Phe His Trp Cys Cys His 450 455 460 His His Val Gln Val Gln Pro Phe Phe Ser Ser Cys Leu Asn Asp Cys465 470 475 480Leu Arg His Ala Val Thr Val Pro Cys Pro Val Ile Ser Asn Thr Thr 485 490 495 Val Pro Lys Pro Val Ala Asp Tyr Ile Pro Leu Trp Glu Pro Lys Ser 500 505 510 Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu 515 520 525 Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 530 535 540 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser545 550 555 560His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 565 570 575 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 580 585 590 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 595 600 605 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser 610 615 620 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln625 630 635 640Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val 645 650 655 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 660 665 670 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 675 680 685 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 690 695 700 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val705 710 715 720Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 725 730 735 Ser Pro Gly Lys

740

<210> 119<211> 1500<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RA de murinoIL-17RA de murino, exons 8 a

exons de 1 a 6 de13 de IL-17RC humano, e

exons de 7 a 9 de I1-17RA de murino<4 00> 119

atggcgattc ggcgctgctg gccacgggtc gtccccgggc ccgcgctggg atggctgctt 60ctgctgctga acgttctggc cccgggccgc gcctccccgc gcctcctcga cttcccggct 120ccggtctgcg cgcaggaggg gctgagctgc agagtcaaga atagtacttg tctggatgac 180agctggatcc accccaaaaa cctgaccccg tcttccccaa aaaacatcta tatcaatctt 240agtgtttcct ctacccagca cggagaatta gtccctgtgt tgcatgttga gtggaccctg 300cagacagatg ccagcatcct gtacctcgag ggtgcagagc tgtccgtcct gcagctgaac 360accaatgagc ggctgtgtgt caagttccag tttctgtcca tgctgcagca tcaccgtaag 420cggtggcggt tttccttcag ccactttgtg gtagatcctg gccaggagta tgaagtgact 480gttcaccacc tgccgaagcc catccctgat ggggacccaa accacaaatc caagatcatc 540tttgtgcctg actgtgagga cagcaagatg aagatgacta cctcatgcgt gagctcagcc 600ctgccctggc tcaacgtgtc agcagatggt gacaacgtgc atctggttct gaatgtctct 660gaggagcagc acttcggcct ctccctgtac tggaatcagg tccagggccc cccaaaaccc 720cggtggcaca aaaacctgac tggaccgcag atcattacct tgaaccacac agacctggtt 780ccctgcctct gtattcaggt gtggcctctg gaacctgact ccgttaggac gaacatctgc 840cccttcaggg aggacccccg cgcacaccag aacctctggc aagccgcccg actgcgactg 900ctgaccctgc agagctggct gctggacgca ccgtgctcgc tgcccgcaga agcggcactg 960tgctggcggg ctccgggtgg ggacccctgc cagccactgg tcccaccgct ttcctgggag 1020aacgtcactg tggacaaggt tctcgagttc ccattgctga aaggccaccc taacctctgt 1080gttcaggtga acagctcgga gaagctgcag ctgcaggagt gcttgtgggc tggcagcctt 1140tgggatccca acatcactgt ggagaccttg gacacacagc atctgcgagt ggacttcacc 1200ctgtggaatg aatccacccc ctaccaggtc ctgctggaaa gtttctccga ctcagagaac 1260cacagctgct ttgatgtcgt taaacaaata tttgcgccca ggcaagaaga attccatcag 1320cgagctaatg tcacattcac tctaagcaag tttcactggt gctgccatca ccacgtgcag 1380gtccagccct tcttcagcag ctgcctaaat gactgtttga gacacgctgt gactgtgccc 1440tgcccagtaa tctcaaatac cacagttccc aagccagttg cagactacat tcccctgtgg 1500<210> 120<211> 500<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptídeo de sinal de IL-17RA de murino e exons de 1 a 6 deI1-17RA de murino, exons 8 a 13 de IL-17RC humano, eexons de 7 a 9 de I1-17RA de murino<400> 120

Met Ala Ile Arg Arg Cys Trp Pro Arg Val Val Pro Gly Pro Ala Leu

1 5 10 15

Gly Trp Leu Leu Leu Leu Leu Asn Val Leu Ala Pro Gly Arg Ala Ser

20 25 30

Pro Arg Leu Leu Asp Phe Pro Ala Pro Val Cys Ala Gln Glu Gly Leu

35 40 45

Ser Cys Arg Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His

50 55 60

Pro Lys Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asn Ile Tyr Ile Asn Leu65 70 75 80

Ser Val Ser Ser Thr Gln His Gly Glu Leu Val Pro Val Leu His Val

85 90 95

Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Ala Ser Ile Leu Tyr Leu Glu Gly Ala

100 105 110

Glu Leu Ser Val Leu Gln Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Lys

115 120 125

Phe Gln Phe Leu Ser Met Leu Gln His His Arg Lys Arg Trp Arg Phe

130 135 140

Ser Phe Ser His Phe Val Val Asp Pro Gly Gln Glu Tyr Glu Val Thr145 150 155 160

Val His His Leu Pro Lys Pro Ile Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Lys

165 170 175

Ser Lys Ile Ile Phe Val Pro Asp Cys Glu Asp Ser Lys Met Lys Met

180 185 190

Thr Thr Ser Cys Val Ser Ser Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala

195 200 205

Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His

210 215 220

Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro225 230 235 240

Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His

245 250 255

Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro

260 265 270

Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala

275 280 285

His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln

290 295 300

Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu305 310 315 320

Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro

325 330 335

Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu

340 345 350

Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys

355 360 365

Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn

370 375 380

Ile Thr Val Glu Thr Leu Asp Thr Gln His Leu Arg Val Asp Phe Thr385 390

Leu Trp Asn Glu Ser Thr405

Asp Ser Glu Asn His Ser420

Pro Arg Gln Glu Glu Phe435

Ser Lys Phe His Trp Cys450

Phe Ser Ser Cys Leu Asn465 470

Cys Pro Val Ile Ser Asn485

Ile Pro Leu Trp500

<210> 121<211> 2196<212> DNA<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RA de murino e exons de 1 a 6 deI1-17RA de murino, exons 8 a 13 de IL-17RC humano, eexons de 7 a 9 de I1-17RA de murino e Fc5<4 00> 121

atggcgattc ggcgctgctg gccacgggtc gtccccgggc ccgcgctggg atggctgctt 60ctgctgctga acgttctggc cccgggccgc gcctccccgc gcctcctcga cttcccggct 120ccggtctgcg cgcaggaggg gctgagctgc agagtcaaga atagtacttg tctggatgac 180agctggatcc accccaaaaa cctgaccccg tcttccccaa aaaacatcta tatcaatctt 240agtgtttcct ctacccagca cggagaatta gtccctgtgt tgcatgttga gtggaccctg 300cagacagatg ccagcatcct gtacctcgag ggtgcagagc tgtccgtcct gcagctgaac 360accaatgagc ggctgtgtgt caagttccag tttctgtcca tgctgcagca tcaccgtaag 420cggtggcggt tttccttcag ccactttgtg gtagatcctg gccaggagta tgaagtgact 480gttcaccacc tgccgaagcc catccctgat ggggacccaa accacaaatc caagatcatc 540tttgtgcctg actgtgagga cagcaagatg aagatgacta cctcatgcgt gagctcagcc 600ctgccctggc tcaacgtgtc agcagatggt gacaacgtgc atctggttct gaatgtctct 660gaggagcagc acttcggcct ctccctgtac tggaatcagg tccagggccc cccaaaaccc 720cggtggcaca aaaacctgac tggaccgcag atcattacct tgaaccacac agacctggtt 780ccctgcctct gtattcaggt gtggcctctg gaacctgact ccgttaggac gaacatctgc 840cccttcaggg aggacccccg cgcacaccag aacctctggc aagccgcccg actgcgactg 900ctgaccctgc agagctggct gctggacgca ccgtgctcgc tgcccgcaga agcggcactg 960tgctggcggg ctccgggtgg ggacccctgc cagccactgg tcccaccgct ttcctgggag 1020aacgtcactg tggacaaggt tctcgagttc ccattgctga aaggccaccc taacctctgt 1080gttcaggtga acagctcgga gaagctgcag ctgcaggagt gcttgtgggc tggcagcctt 1140tgggatccca acatcactgt ggagaccttg gacacacagc atctgcgagt ggacttcacc 1200ctgtggaatg aatccacccc ctaccaggtc ctgctggaaa gtttctccga ctcagagaac 1260cacagctgct ttgatgtcgt taaacaaata tttgcgccca ggcaagaaga attccatcag 1320cgagctaatg tcacattcac tctaagcaag tttcactggt gctgccatca ccacgtgcag 1380gtccagccct tcttcagcag ctgcctaaat gactgtttga gacacgctgt gactgtgccc 1440tgcccagtaa tctcaaatac cacagttccc aagccagttg cagactacat tcccctgtgg 1500gagcccaaat cttcagacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaagccgag 1560ggggcaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 1620acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 1680aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 1740tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 1800ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc catcctccat cgagaaaacc 1860atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 1920gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 1980gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 2040cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 2100aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 2160tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 2196

<210> 122<211> 2196

Pro Tyr GlnCysHis

Cys455Asp

Thr

Phe Asp425Gln Arg440

His His

Cys LeuThr Val

Val410Val

Ala

His

Arg

Pro490

395Leu

Val

Asn

Val

His475Lys

Leu

Lys

Val

Gln460Ala

Pro

Glu Ser Phe415

Gln Ile Phe

430Thr Phe Thr445

Val Gln Pro

Val Thr Val

Val Ala Asp495

400Ser

Ala

Leu

Phe

Pro480Tyr<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RA de murino e exons de 1 a 6 deI1-17RA de murino, exons 8 a 13 de IL-17RC humano, e

exons de ' 7 a 9 de Il- 17RA de ι murino e Fc5 <4 00> 122 Ala Thr Gly Gly Cys Gly Ala Thr Thr Cys Gly Gly Cys Gly Cys Thr1 5 10 15 Gly Cys Thr Gly Gly Cys Cys Ala Cys Gly Gly Gly Thr Cys Gly Thr 20 25 30 Cys Cys Cys Cys Gly Gly Gly Cys Cys Cys Gly Cys Gly Cys Thr Gly 35 40 45 Gly Gly Ala Thr Gly Gly Cys Thr Gly Cys Thr Thr Cys Thr Gly Cys 50 55 60 Thr Gly Cys Thr Gly Ala Ala Cys Gly Thr Thr Cys Thr Gly Gly Cys65 70 75 80Cys Cys Cys Gly Gly Gly Cys Cys Gly Cys Gly Cys Cys Thr Cys Cys 85 90 95 Cys Cys Gly Cys Gly Cys Cys Thr Cys Cys . Thr Cys Gly Ala Cys Thr 100 105 110 Thr Cys Cys Cys Gly Gly Cys Thr Cys Cys Gly Gly Thr Cys Thr Gly 115 120 125 Cys Gly Cys Gly Cys Ala Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly 130 135 140 Ala Gly Cys Thr Gly Cys Ala Gly Ala Gly Thr Cys Ala Ala Gly Ala 145 150 155 160Ala Thr Ala Gly Thr Ala Cys Thr Thr Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala 165 170 175 Thr Gly Ala Cys Ala Gly Cys Thr Gly Gly Ala Thr Cys Cys Ala Cys 180 185 190 Cys Cys Cys Ala Ala Ala Ala Ala Cys Cys Thr Gly Ala Cys Cys Cys 195 200 205 Cys Gly Thr Cys Thr Thr Cys Cys Cys Cys Ala Ala Ala Ala Ala Ala 210 215 220 Cys Ala Thr Cys Thr Ala Thr Ala Thr Cys Ala Ala Thr Cys Thr Thr225 230 235 240Ala Gly Thr Gly Thr Thr Thr Cys Cys Thr Cys Thr Ala Cys Cys Cys 245 250 255 Ala Gly Cys Ala Cys Gly Gly Ala Gly Ala Ala Thr Thr Ala Gly Thr 260 265 270 Cys Cys Cys Thr Gly Thr Gly Thr Thr Gly Cys Ala Thr Gly Thr Thr 275 280 285 Gly Ala Gly Thr Gly Gly Ala Cys Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Ala 290 295 300 Cys Ala Gly Ala Thr Gly Cys Cys Ala Gly Cys Ala Thr Cys Cys Thr305 310 315 320Gly Thr Ala Cys Cys Thr Cys Gly Ala Gly Gly Gly Thr Gly Cys Ala 325 330 335 Gly Ala Gly Cys Thr Gly Thr Cys Cys Gly Thr Cys Cys Thr Gly Cys 340 345 350 Ala Gly Cys Thr Gly Ala Ala Cys Ala Cys Cys Ala Ala Thr Gly Ala 355 360 365 Gly Cys Gly Gly Cys Thr Gly Thr Gly Thr Gly Thr Cys Ala Ala Gly 370 375 380 Thr Thr Cys Cys Ala Gly Thr Thr Thr Cys Thr Gly Thr Cys Cys Ala385 390 395 400Thr Gly Cys Thr Gly Cys Ala Gly Cys Ala Thr Cys Ala Cys Cys Gly 405 410 415 Thr Ala Ala Gly Cys Gly Gly Thr Gly Gly Cys Gly Gly Thr Thr Thr 420 425 430 Thr Cys Cys Thr Thr Cys Ala Gly Cys Cys Ala Cys Thr Thr Thr Gly

435 440 445Thr Gly Gly Thr Ala Gly Ala Thr 450 455 Gly Gly Ala Gly Thr Ala Thr Gly

465 470 Gly Thr Thr Cys Ala Cys Cys Ala 485 Ala Gly Cys Cys Cys Ala Thr Cys 500 Gly Gly Ala Cys Cys Cys Ala Ala 515 520Thr Cys Cys Ala Ala Gly Ala Thr 530 535 Thr Gly Cys Cys Thr Gly Ala Cys545 550 Cys Ala Gly Cys Ala Ala Gly Ala 565 Ala Cys Thr Ala Cys Cys Thr Cys 580 Gly Cys Thr Cys Ala Gly Cys Cys 595 600Gly Cys Thr Cys Ala Ala Cys Gly 610 615 Gly Ala Thr Gly Gly Thr Gly Ala625 630 Ala Thr Cys Thr Gly Gly Thr Thr 645 Cys Thr Cys Thr Gly Ala Gly Gly 660 Thr Thr Cys Gly Gly Cys Cys Thr 675 680Ala Cys Thr Gly Gly Ala Ala Thr 690 695 Gly Gly Gly Cys Cys Cys Cys Cys705 710 Cys Gly Gly Thr Gly Gly Cys Ala 725 Thr Gly Ala Cys Thr Gly Gly Ala 740 Cys Ala Thr Thr Ala Cys Cys Thr 755 760Ala Cys Ala Gly Ala Cys Cys Thr 770 775 Gly Cys Cys Thr Cys Thr Gly Thr785 790 Gly Thr Gly Gly Cys Cys Thr Cys 805 Gly Ala Cys Thr Cys Cys Gly Thr 820 Ala Cys Ala Thr Cys Thr Gly Cys 835 840Gly Gly Ala Gly Gly Ala Cys Cys 850 855 Cys Ala Cys Cys Ala Gly Ala Ala865 870 Ala Ala Gly Cys Cys Gly Cys Cys 885 Ala Cys Thr Gly Cys Thr Gly Ala 900 Ala Gly Cys Thr Gly Gly Cys Thr 915 920Cys Ala Cys Cys Gly Thr Gly Cys 930 935 Cys Gly Cys Ala Gly Ala Ala Gly

79

Cys Cys Thr Gly Gly Cys Cys Ala 460 Ala Ala Gly Thr Gly Ala Cys Thr 475 480Cys Cys Thr Gly Cys Cys Gly Ala 490 495 Cys Cys Thr Gly Ala Thr Gly Gly505 510 Ala Cys Cys Ala Cys Ala Ala Ala 525 Cys Ala Thr Cys Thr Thr Thr Gly 540 Thr Gly Thr Gly Ala Gly Gly Ala 555 560Thr Gly Ala Ala Gly Ala Thr Gly 570 575 Ala Thr Gly Cys Gly Thr Gly Ala 585 590 Cys Thr Gly Cys Cys Cys Thr Gly 605 Thr Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala 620 Cys Ala Ala Cys Gly Thr Gly Cys 635 640Cys Thr Gly Ala Ala Thr Gly Thr 650 655 Ala Gly Cys Ala Gly Cys Ala Cys665 670 Cys Thr Cys Cys Cys Thr Gly Thr 685 Cys Ala Gly Gly Thr Cys Cys Ala 700 Cys Ala Ala Ala Ala Cys Cys Cys 715 720Cys Ala Ala Ala Ala Ala Cys Cys 730 735 Cys Cys Gly Cys Ala Gly Ala Thr745 750 Thr Gly Ala Ala Cys Cys Ala Cys 765 Gly Gly Thr Thr Cys Cys Cys Thr 780 Ala Thr Thr Cys Ala Gly Gly Thr 795 800Thr Gly Gly Ala Ala Cys Cys Thr 810 815 Thr Ala Gly Gly Ala Cys Gly Ala 825 830 Cys Cys Cys Thr Thr Cys Ala Gly 845 Cys Cys Cys Gly Cys Gly Cys Ala 860 Cys Cys Thr Cys Thr Gly Gly Cys 875 880Cys Gly Ala Cys Thr Gly Cys Gly 890 895 Cys Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly905 910 Gly Cys Thr Gly Gly Ala Cys Gly 925 Thr Cys Gly Cys Thr Gly Cys Cys 940 Cys Gly Gly Cys Ala Cys Thr Gly945 950 955 960

Thr Gly Cys Thr Gly Gly Cys Gly Gly Gly Cys Thr Cys Cys Gly Gly

965 970 975

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980 985 990

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995 1000 1005

Cys Thr Thr Thr Cys Cys Thr Gly Gly Gly Ala Gly Ala Ala Cys Gly

1010 1015 1020

Thr Cys Ala Cys Thr Gly Thr Gly Gly Ala Cys Ala Ala Gly Gly Thr1025 1030 1035 1040

Thr Cys Thr Cys Gly Ala Gly Thr Thr Cys Cys Cys Ala Thr Thr Gly

1045 1050 1055

Cys Thr Gly Ala Ala Ala Gly Gly Cys Cys Ala Cys Cys Cys Thr Ala

1060 1065 1070

Ala Cys Cys Thr Cys Thr Gly Thr Gly Thr Thr Cys Ala Gly Gly Thr

1075 1080 1085

Gly Ala Ala Cys Ala Gly Cys Thr Cys Gly Gly Ala Gly Ala Ala Gly

1090 1095 1100

Cys Thr Gly Cys Ala Gly Cys Thr Gly Cys Ala Gly Gly Ala Gly Thr1105 1110. 1115 1120

Gly Cys Thr Thr Gly Thr Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Cys Ala Gly

1125 1130 1135

Cys Cys Thr Thr Thr Gly Gly Gly Ala Thr Cys Cys Cys Ala Ala Cys

1140 1145 1150

Ala Thr Cys Ala Cys Thr Gly Thr Gly Gly Ala Gly Ala Cys Cys Thr

1155 1160 1165

Thr Gly Gly Ala Cys Ala Cys Ala Cys Ala Gly Cys Ala Thr Cys Thr

1170 1175 1180

Gly Cys Gly Ala Gly Thr Gly Gly Ala Cys Thr Thr Cys Ala Cys Cys1185 1190 1195 1200

Cys Thr Gly Thr Gly Gly Ala Ala Thr Gly Ala Ala Thr Cys Cys Ala

1205 1210 1215

Cys Cys Cys Cys Cys Thr Ala Cys Cys Ala Gly Gly Thr Cys Cys Thr

1220 1225 1230

Gly Cys Thr Gly Gly Ala Ala Ala Gly Thr Thr Thr Cys Thr Cys Cys

1235 1240 1245

Gly Ala Cys Thr Cys Ala Gly Ala Gly Ala Ala Cys Cys Ala Cys Ala

1250 1255 1260

Gly Cys Thr Gly Cys Thr Thr Thr Gly Ala Thr Gly Thr Cys Gly Thr1265 1270 1275 1280

Thr Ala Ala Ala Cys Ala Ala Ala Thr Ala Thr Thr Thr Gly Cys Gly

1285 1290 1295

Cys Cys Cys Ala Gly Gly Cys Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Ala Thr

1300 1305 1310

Thr Cys Cys Ala Thr Cys Ala Gly Cys Gly Ala Gly Cys Thr Ala Ala

1315 1320 1325

Thr Gly Thr Cys Ala Cys Ala Thr Thr Cys Ala Cys Thr Cys Thr Ala

1330 1335 1340

Ala Gly Cys Ala Ala Gly Thr Thr Thr Cys Ala Cys Thr Gly Gly Thr1345 1350 1355 1360

Gly Cys Thr Gly Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys Cys Ala Cys Gly Thr

1365 1370 1375

Gly Cys Ala Gly Gly Thr Cys Cys Ala Gly Cys Cys Cys Thr Thr Cys

1380 1385 1390

Thr Thr Cys Ala Gly Cys Ala Gly Cys Thr Gly Cys Cys Thr Ala Ala

1395 1400 1405

Ala Thr Gly Ala Cys Thr Gly Thr Thr Thr Gly Ala Gly Ala Cys Ala

1410 1415 1420

Cys Gly Cys Thr Gly Thr Gly Ala Cys Thr Gly Thr Gly Cys Cys Cys1425 1430 1435 1440

Thr Gly Cys Cys Cys Ala Gly Thr Ala Ala Thr Cys Thr Cys Ala Ala1445 1450 1455Ala Thr Ala Cys Cys Ala Cys Ala Gly Thr Thr Cys Cys Cys Ala Ala

1460 1465 1470

Gly Cys Cys Ala Gly Thr Thr Gly Cys Ala Gly Ala Cys Thr Ala Cys

1475 1480 1485

Ala Thr Thr Cys Cys Cys Cys Thr Gly Thr Gly Gly Gly Ala Gly Cys

1490 1495 1500

Cys Cys Ala Ala Ala Thr Cys Thr Thr Cys Ala Gly Ala Cys Ala Ala1505 1510 1515 1520

Ala Ala Cys Thr Cys Ala Cys Ala Cys Ala Thr Gly Cys Cys Cys Ala

1525 1530 1535

Cys Cys Gly Thr Gly Cys Cys Cys Ala Gly Cys Ala Cys Cys Thr Gly

1540 1545 1550

Ala Ala Gly Cys Cys Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly Cys Ala Cys Cys

1555 1560 1565

Gly Thr Cys Ala Gly Thr Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Thr Thr Cys

1570 1575 1580

Cys Cys Cys Cys Cys Ala Ala Ala Ala Cys Cys Cys Ala Ala Gly Gly1585 1590 1595 1600

Ala Cys Ala Cys Cys Cys Thr Cys Ala Thr Gly Ala Thr Cys Thr Cys

1605 1610 1615

Cys Cys Gly Gly Ala Cys Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Thr Cys

1620 1625 1630

Ala Cys Ala Thr Gly Cys Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly

1635 1640 1645

Ala Cys Gly Thr Gly Ala Gly Cys Cys Ala Cys Gly Ala Ala Gly Ala

1650 1655 1660

Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Gly Thr Cys Ala Ala Gly Thr Thr Cys1665 1670 1675 1680

Ala Ala Cys Thr Gly Gly Thr Ala Cys Gly Thr Gly Gly Ala Cys Gly

1685 1690 1695

Gly Cys Gly Thr Gly Gly Ala Gly Gly Thr Gly Cys Ala Thr Ala Ala

1700 1705 1710

Thr Gly Cys Cys Ala Ala Gly Ala Cys Ala Ala Ala Gly Cys Cys Gly

1715 1720 1725

Cys Gly Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Cys Ala Gly Thr Ala Cys Ala

1730 1735 1740

Ala Cys Ala Gly Cys Ala Cys Gly Thr Ala Cys Cys Gly Thr Gly Thr1745 1750 1755 1760

Gly Gly Thr Cys Ala Gly Cys Gly Thr Cys Cys Thr Cys Ala Cys Cys

1765 1770 1775

Gly Thr Cys Cys Thr Gly Cys Ala Cys Cys Ala Gly Gly Ala Cys Thr

1780 1785 1790

Gly Gly Cys Thr Gly Ala Ala Thr Gly Gly Cys Ala Ala Gly Gly Ala

1795 1800 1805

Gly Thr Ala Cys Ala Ala Gly Thr Gly Cys Ala Ala Gly Gly Thr Cys

1810 1815 1820

Thr Cys Cys Ala Ala Cys Ala Ala Ala Gly Cys Cys Cys Thr Cys Cys1825 1830 1835 1840

Cys Ala Thr Cys Cys Thr Cys Cys Ala Thr Cys Gly Ala Gly Ala Ala

1845 1850 1855

Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys Thr Cys Cys Ala Ala Ala Gly Cys Cys

1860 1865 1870

Ala Ala Ala Gly Gly Gly Cys Ala Gly Cys Cys Cys Cys Gly Ala Gly

1875 1880 1885

Ala Ala Cys Cys Ala Cys Ala Gly Gly Thr Gly Thr Ala Cys Ala Cys

1890 1895 1900

Cys Cys Thr Gly Cys Cys Cys Cys Cys Ala Thr Cys Cys Cys Gly Gly1905 1910 1915 1920

Gly Ala Thr Gly Ala Gly Cys Thr Gly Ala Cys Cys Ala Ala Gly Ala

1925 1930 1935

Ala Cys Cys Ala Gly Gly Thr Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Ala Cys

1940 1945 1950

Cys Thr Gly Cys Cys Thr Gly Gly Thr Cys Ala Ala Ala Gly Gly Cys1955 1960 1965

Thr Thr Cys Thr Ala Thr Cys Cys Cys Ala Gly Cys Gly Ala Cys Ala

1970 1975 1980

Thr Cys Gly Cys Cys Gly Thr Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Gly Ala1985 1990 1995 2000

Gly Ala Gly Cys Ala Ala Thr Gly Gly Gly Cys Ala Gly Cys Cys Gly

2005 2010 2015

Gly Ala Gly Ala Ala Cys Ala Ala Cys Thr Ala Cys Ala Ala Gly Ala

2020 2025 2030

Cys Cys Ala Cys Gly Cys Cys Thr Cys Cys Cys Gly Thr Gly Cys Thr

2035 2040 2045

Gly Gly Ala Cys Thr Cys Cys Gly Ala Cys Gly Gly Cys Thr Cys Cys

2050 2055 2060

Thr Thr Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Thr Ala C-ys Ala Gly Cys Ala2065 2070 2075 2080

Ala Gly Cys Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr Gly Gly Ala Cys Ala Ala

2085 2090 2095

Gly Ala Gly Cys Ala Gly Gly Thr Gly Gly Cys Ala Gly Cys Ala Gly

2100

2105

2110

Gly Gly Gly Ala Ala Cys Gly Thr Cys Thr Thr Cys Thr Cys Ala Thr

2115

2120

2125

Gly Cys Thr Cys Cys Gly Thr Gly Ala Thr Gly Cys Ala Thr Gly Ala

2130

2135

2140

Gly Gly Cys Thr Cys Thr Gly Cys Ala Cys Ala Ala Cys Cys Ala Cys

2145

2150

2155

2160

Thr Ala Cys Ala Cys Gly Cys Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Cys Cys

2165

2170

2175

Thr Cys Thr Cys Cys Cys Thr Gly Thr Cys Thr Cys Cys Gly Gly Gly

2185

2190

<210><211><212>

2180Thr Ala Ala Ala21951231272DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 6 de

IL-17RC humano e Fc5<4 00> 123

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttctctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgcctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtgctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgtgacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaagatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctctctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctggaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatatgactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccaggtacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgagc ccaaatcttc agacaaaactcacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa gccgaggggg caccgtcagt cttcctcttccccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtggtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggaggtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtcagcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtctccaacaaag ccctcccatc ctccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccccgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtcagcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagcaatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg tgctggactc cgacggctccttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttctcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctgtctccgggta aa<210> 124<211> 424

60120180240300360420480540600660720780840900960102010801140120012601272<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 6 de

IL-17RC humano e Fc5<4 00> 124

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro

15 10 15

Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His

20 25 30

Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys

35 40 45

Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr

50 55 60

His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80

Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp

85 90 95

Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly

100 105 110

Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser

115 120 125

Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val

130 135 140

Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160

Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr

165 170 175

Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro

180 185 190

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

195 200 205

Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

210 215 220

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val225 230 235 240

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

245 250 255

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

260 265 270

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

275 280 285

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

290 295 300

Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro305 310 315 320

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr

325 330 335

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

340 345 350

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

355 360 365

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

370 375 380

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe385 390 395 400

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

405 410 415

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys420

<210> 125<211> 1794<212> DNA<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 6 e de 11 a 16 de

IL-17RC humano e Fc5<400> 125atgcctgtgcctggagaggcctctgggacactggcgcctagacctctgtcgatgaggaaactccaggcccgaggtgcaaggactgcttcgtacgagaaggtggcaagccgtcgctgcccgctggtcccacctgaaaggccgagtgcttgtcgaggccccccccagcaaagtcaggccagtgacaaatacaccagcacctgaccctcatgagaccctgaggaagccgcgggcaccaggacttcctccatcgaccctgccccaaaggcttctaactacaagactcaccgtgggaggctctgc<210> 126<211> 598<212> PRT<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 6 e de 11 a 16 de

IL-17RC humano e Fc5<400> 126

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser 20 Leu Glu Arg Leu Val 25 Gly Pro Gln Asp Ala 30 Thr HisCys Ser Pro 35 Gly Leu Ser Cys Arg 40 Leu Trp Asp Ser Asp 45 Ile Leu CysLeu Pro 50 Gly Asp Ile Val Pro 55 Ala Pro Gly Pro Val 60 Leu Ala Pro ThrHis Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg 85 Val Ala Val His Leu 90 Ala Val His Gly His 95 TrpGlu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly 100 105 110 Val Glu Glu 115 Pro Arg Asn Ala Ser 120 Leu Gln Ala Gln Val 125 Val Leu SerPhe Gln 130 Ala Tyr Pro Thr Ala 135 Arg Cys Val Leu Leu 140 Glu Val Gln ValPro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160

cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540aactcaacca cacacagcag ctgcctgacc cccgcgcaca ccagaacctc 600cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 660cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 720cgctttcctg ggagaacgtc actgtggaca aggttctcga gttcccattg 780accctaacct ctgtgttcag gtgaacagct cggagaagct gcagctgcag 840gggctgactc cctggggcct ctcaaagacg atgtgctact gttggagaca 900aggacaacag atccctctgt gccttggaac ccagtggctg tacttcacta 960c.ctccacgag ggcagctcgc cttggagagt acttactaca agacctgcag 1020gtctgcagct atgggacgat gacttgggag cgctatgggc ctgccccatg 1080tccacaagga gcccaaatct tcagacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 1140aagccgaggg ggcaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 1200tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 1260tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 1320aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 1380ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1440agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1500catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1560atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1620ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1680acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1740acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaa 1794Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr

165 170 175

Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro

180 185 190

Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu

195 200 205

Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala

210 215 220

Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro225 230 235 240

Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu

245 250 255

Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn

260 265 270

Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu

275 280 285

Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln

290 295 300

Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu305 310 315 320

Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu

325 330 335

Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu

340 345 350

Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro

355 360 365

Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

370 375 380

Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp385 390 395 400

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

405 410 415

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

420 425 430

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

435 440 445

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

450 455 460

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro465 470 475 480

Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

485 490 495

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn

500 505 510

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

515 520 525

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

530 535 540

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys545 550 555 560

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

565 570 575

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

580 585 590

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

595<210> 127<211> 1515<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 6 e de 14 a 16 deIL-17RC humano e Fc5<4 00> 127

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggccctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgctctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcgctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggtgacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatggatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtggctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctaccctagaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagtgactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatcttacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgactgatgtgctac tgttggagac acgaggcccc caggacaacacccagtggct gtacttcact acccagcaaa gcctccacgatacttactac aagacctgca gtcaggccag tgtctgcagcgcgctatggg cctgccccat ggacaaatac atccacaaggactcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagccgaggttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccggagtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttcagaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagtgtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatggtctccaaca aagccctccc atcctccatc gagaaaaccaccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggggtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcgagcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctctccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagcattctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccactctgtctccgg gtaaa<210> 128

gaagcccagtctccgggccttgcctgctccgccagaaggaggcactgggaaggagcctagctgcccgctgctgtgggctcggtcctatacccctggggccgatccctctggggcagctcgtatgggacgaagcccaaatcgggcaccgtccccctgaggtactggtacgtacaacagcacgcaaggagtatctccaaagcatgagctgacacatcgccgtccgtgctggaggtggcagcaacacgcagaa

ggtcctttctctcctgccgcgggccccgtggaccgactgtagagcctgaagaatgcctctcgtcctgctgtgtggtatattcagcccaggtctcaaagactgccttggaaccttggagagtgacttgggattcagacaaaagtcttcctccacatgcgtgggacggcgtggtaccgtgtgcaagtgcaagcaaagggcagcaagaaccagggagtgggagctccgacggcggggaacgtcgagcctctcc

<211><212>

505PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RC

IL-17RC humano e Fc5<4 00> 128

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser1 5

20

25

35

40

50

55

65

70

85

100

105

115

120

130

135

145

150

165

180

185

195

200

e exons de 1 a 6 e ι de 14 a Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro10 15 Gly Pro Gln Asp Ala Thr His 30 Trp Asp Ser Asp Λ R Ile Leu CysGly Pro Val Leu Ala Pro Thr 60 Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys 75 80Leu Ala Val His Gly His Trp90 95 Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly 110 Gln Ala Gln Val Val Leu Ser 125 Val Leu Leu Glu Val Gln Val 140 Ser Val Gly Ser Val Val Tyr 155 160Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr170 175 Asn His Thr Gln Gln Leu Pro 190 Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg 205 Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys

601201802403003604204805406006607207808409009601020108011401200126013201380144015001515

de

210

215

220Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu225 230 235 240Tyr Leu Leu Gln Asp 245 Leu Gln Ser Gly Gln 250 Cys Leu Gln Leu Trp 255 AspAsp Asp Leu Gly 260 Ala Leu Trp Ala Cys 265 Pro Met Asp Lys Tyr 270 Ile HisLys Glu Pro 275 Lys Ser Ser Asp Lys 280 Thr His Thr Cys Pro 285 Pro Cys ProAla Pro 290 Glu Ala Glu Gly Ala 295 Pro Ser Val Phe Leu 300 Phe Pro Pro LysPro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val305 310 315 320Val Val Asp Val Ser 325 His Glu Asp Pro Glu 330 Val Lys Phe Asn Trp 335 TyrVal Asp Gly Val 340 Glu Val His Asn Ala 345 Lys Thr Lys Pro Arg 350 Glu GluGln Tyr Asn 355 Ser Thr Tyr Arg Val 360 Val Ser Val Leu Thr 365 Val Leu HisGln Asp 370 Trp Leu Asn Gly Lys 375 Glu Tyr Lys Cys Lys 380 Val Ser Asn LysAla Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln385 390 395 400Pro Arg Glu Pro Gln 405 Val Tyr Thr Leu Pro 410 Pro Ser Arg Asp Glu 415 LeuThr Lys Asn Gln 420 Val Ser Leu Thr Cys 425 Leu Val Lys Gly Phe 430 Tyr ProSer Asp Ile 435 Ala Val Glu Trp Glu 440 Ser Asn Gly Gln Pro 445 Glu Asn AsnTyr Lys 450 Thr Thr Pro Pro Val 455 Leu Asp Ser Asp Gly 460 Ser Phe Phe LeuTyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val465 470 475 480Phe Ser Cys Ser Val 485 Met His Glu Ala Leu 490 His Asn His Tyr Thr 495 GlnLys Ser Leu Ser 500 Leu Ser Pro Gly Lys 505

<210> 129<211> 1335<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal pre-pro do Ativador de Plasminogênio de TecidoOtimizado (otPA) e exons 8 a 13 de IL-17RC humano e Fc5

<4 00> 129

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagagccct gccctggctc 120aacgtgtcag cagatggtga caacgtgcat ctggttctga atgtctctga ggagcagcac 180ttcggcctct ccctgtactg gaatcaggtc cagggccccc caaaaccccg gtggcacaaa 240aacctgactg gaccgcagat cattaccttg aaccacacag acctggttcc ctgcctctgt 300attcaggtgt ggcctctgga acctgactcc gttaggacga acatctgccc cttcagggag 360gacccccgcg cacaccagaa cctctggcaa gccgcccgac tgcgactgct gaccctgcag 420agctggctgc tggacgcacc gtgctcgctg cccgcagaag cggcactgtg ctggcgggct 480ccgggtgggg acccctgcca gccactggtc ccaccgcttt cctgggagaa cgtcactgtg 540gacaaggttc tcgagttccc attgctgaaa ggccacccta acctctgtgt tcaggtgaac 600agctcggaga agctgcagct gcaggagtgc ttgtgggctg agcccaaatc ttcagacaaa 660actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaagccgagg gggcaccgtc agtcttcctc 720ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 780gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 840gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 900gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 960gtctccaaca aagccctccc atcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1020ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg atgagctgac caagaaccag 1080gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1200tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320ctgtctccgg gtaaa 1335

<210> 130<211> 445<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal pre-pro de Ativador de Plasminogênio de TecidoOtimizado (otPA)e exons 8 a 13 de IL-17RC humano e Fc5

<4 00> 130

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

15 10 15

Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg

20 25 30

Phe Arg Arg Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn

35 40 45

Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser

50 55 60

Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys65 70 75 80

Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val

85 90 95

Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg

100 105 110

Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu

115 120 125

Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu

130 135 140

Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala145 150 155 160

Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu

165 170 175

Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His

180 185 190

Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln

195 200 205

Glu Cys Leu Trp Ala Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys

210 215 220

Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu225 230 235 240

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

245 250 255

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys

260 265 270

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

275 280 285

Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

290 295 300

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys305 310 315 320

Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

325 330 335

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

340 345 350

Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

355 360 365

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly385 390 395 400Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

440

445

<210><211><212>

4351311299DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal pre-pro Ativador de Plasminogênio de TecidoOtimizado (otPA) e exons de 8 a 10 e de 14 a 16 de IL-17RChumano e Fc5

<400> 131

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgttcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttgaacgtgtcag cagatggtga caacgtgcatttcggcctct ccctgtactg gaatcaggtcaacctgactg gaccgcagat cattaccttgattcaggtgt ggcctctgga acctgactccgactccctgg ggcctctcaa agacgatgtgaacagatccc tctgtgcctt ggaacccagtacgagggcag ctcgccttgg agagtacttacagctatggg acgatgactt gggagcgctaaaggagccca aatcttcaga caaaactcacgagggggcac cgtcagtctt cctcttcccccggacccctg aggtcacatg cgtggtggtgttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtgcagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagcaatggcaagg agtacaagtg caaggtctccaccatctcca aagccaaagg gcagccccgacgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagcagcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaatcctcccgtgc tggactccga cggctccttcagcaggtggc agcaggggaa cgtcttctcacactacacgc agaagagcct ctccctgtct<210> 132<211> 433<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal pre-proOtimizado (otPA) e exons deIL-17RC humano e Fc5

gtgctgctgcagacgcttccctggttctgacagggcccccaaccacacaggttaggacgactactgttggggctgtacttctacaagacctgggcctgccacatgcccacccaaaacccagacgtgagcccataatgccagtcctcaccgaacaaagcccgaaccacaggctgacctgccgggcagccggttcctctacatgctccgtgaccgggtaaa

tgtgtggcgcgtagagccctatgtctctgacaaaaccccgacctggttccacatctgcccagacacgaggcactacccagtgcagtcaggccatggacaacgtgcccagcaggacaccctacgaagacccagacaaagcctcctgcaccatcccatcctctgtacacccttggtcaaaggagaacaactagcaagctcactgcatgaggc

cgtcttcgttgccctggctcggagcagcacgtggcacaaactgcctctgtcttcagggagcccccaggaccaaagcctccccagtgtctgatacatccacacctgaagcccatgatctcctgaggtcaaggcgggaggagggactggctgcatcgagaaagcccccatcccttctatccccaagaccacgcgtggacaagtctgcacaac

60120180240300360420480540600660720780840900960102010801140120012601299

Ativador de Plasminogênio de Tecidoa 10 e de 14 a 16 de

<4 00> 132

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly1 5 10 15 Ala Val Phe Val 20 Ser Leu Ser Gln Glu 25 Ile His Ala Glu Leu 30 Arg ArgPhe Arg Arg 35 Ala Leu Pro Trp Leu 40 Asn Val Ser Ala Asp 45 Gly Asp AsnVal His 50 Leu Val Leu Asn Val 55 Ser Glu Glu Gln His 60 Phe Gly Leu SerLeu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys65 70 75 80Asn Leu Thr Gly Pro 85 Gln Ile Ile Thr Leu 90 Asn His Thr Asp Leu 95 ValPro Cys Leu Cys 100 Ile Gln Val Trp Pro 105 Leu Glu Pro Asp Ser 110 Val ArgThr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp 115 120 125 Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu 130 135 140 Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser145 150 155 160Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser 165 170 175 Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala 180 185 190 Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys 195 200 205 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro 210 215 220 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser225 230 235 240Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 245 250 255 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 260 265 270 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 275 280 285 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 290 295 300 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys305 310 315 320Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 325 330 335 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 340 345 350 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 355 360 365 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 370 375 380 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys385 390 395 400Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 405 410 415 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

420 425 430

Lys

<210> 133<211> 1056<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal pre-pro de Ativador de Plasminogênio de TecidoOtimizado (otPA) e exons de 8 a 10 de IL-17RC humano e Fc5

<4 00> 133

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagagccct gccctggctc 120aacgtgtcag cagatggtga caacgtgcat ctggttctga atgtctctga ggagcagcac 180ttcggcctct ccctgtactg gaatcaggtc cagggccccc caaaaccccg gtggcacaaa 240aacctgactg gaccgcagat cattaccttg aaccacacag acctggttcc ctgcctctgt 300attcaggtgt ggcctctgga acctgactcc gttaggacga acatctgccc cttcagggag 360gagcccaaat cttcagacaa aactcacaca tgcccaccgt gcccagcacc tgaagccgag 420ggggcaccgt cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg 480acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc 540aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag 600tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat 660ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc catcctccat cgagaaaacc 720atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg 780gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc 840gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct 900cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc 960aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac 1020tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaa 1056

<210> 134<211> 352<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal pre-pro de Ativador de Plasminogênio de TecidoOtimizado (otPA)e exons de 8 a 10 de IL-17RC humano e Fc5

<400> 134

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg

20 25 30

Phe Arg Arg Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn

35 40 45

Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser

50 55 60

Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys65 70 75 80

Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val

85 90 95

Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg

100 105 110

Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr

115 120 125

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser

130 135 140

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg145 150 155 160

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

165 170 175

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

180 185 190

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

195 200 205 .

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

210 215 220

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr225 230 235 240

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

245 250 255

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

260 265 270

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

275 280 285

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

290 295 300

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser305 310 315 320

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

325 330 335

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys340 345 350

<210> 135<211> 1080<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal pre-pro de Ativador de Plasminogênio de TecidoOtimizado (otPA) e exons de 11 a 13 de IL-17RC humano e Fc5

<4 00> 135

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgttcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttgcagaacctct ggcaagccgc ccgactgcgagcaccgtgct cgctgcccgc agaagcggcatgccagccac tggtcccacc gctttcctggttcccattgc tgaaaggcca ccctaacctccagctgcagg agtgcttgtg ggctgagcccccgtgcccag cacctgaagc cgagggggcaaaggacaccc tcatgatctc ccggacccctcacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactggaagacaaagc cgcgggagga gcagtacaacgtcctgcacc aggactggct gaatggcaagctcccatcct ccatcgagaa aaccatctccgtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgagctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatcgagaacaact acaagaccac gcctcccgtgagcaagctca ccgtggacaa gagcaggtggatgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg<210> 136<211> 360<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal pre-proOtimizado (otPA) e exons de

gtgctgctgcagacgcttccctgctgacccctgtgctggcgagaacgtcatgtgttcaggaaatcttcagccgtcagtctgaggtcacattacgtggacgagcacgtaccgagtacaagtaaagccaaagctgaccaagagccgtggagtctggactccgcagcaggggacagaagagcc

tgtgtggcgcgtagagaccctgcagagctggggctccgggctgtggacaatgaacagctcacaaaactcatcctcttcccgcgtggtggtgcgtggaggtgtgtggtcaggcaaggtctcggcagccccgaccaggtcagggçfagagcaaacggctccttacgtcttctctctccctgtc

cgtcttcgttccgcgcacacgctgctggactggggaccccggttctcgagggagaagctgcacatgcccacccaaaacccggacgtgagcgcataatgcccgtcctcacccaacaaagccagaaccacagcctgacctgctgggcagccgcttcctctacatgctccgtgtccgggtaaa

6012018024030036042048054060066072078084090096010201080

de Ativador de Plasminogênio de Tecido11 a 13 de IL-17RC humano e Fc5

<400> 136 Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu1 5 Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln 20 Phe Arg Arg Asp Pro Arg Ala His 35 40Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser 50 55 Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys65 70 Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu 85 Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu 100 Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu 115 120Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr 130 135 Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser145 150 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 165 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 180 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 195 200Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 210 215 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr225 230 Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr

Cys Cys 10 Val Leu Leu Leu Cys 15 GlyGlu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg25 30 Gln Asn Leu Trp Gln 45 Ala Ala ArgTrp Leu Leu Asp 60 Ala Pro Cys SerTrp Arg Ala 75 Pro Gly Gly Asp Pro 80Ser Trp 90 Glu Asn Val Thr Val 95 AspLys Gly His Pro Asn Leu Cys Val105 110 Gln Leu Gln Glu Cys 125 Leu Trp AlaHis Thr Cys Pro 140 Pro Cys Pro AlaVal Phe Leu 155 Phe Pro Pro Lys Pro 160Thr Pro 170 Glu Val Thr Cys Val 175 ValGlu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val185 190 Lys Thr Lys Pro Arg 205 Glu Glu GlnSer Val Leu Thr 220 Val Leu His GlnLys Cys Lys 235 Val Ser Asn Lys Ala 240

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro245 250 255 Arg Glu Pro Gln 260 Val Tyr Thr Leu Pro 265 Pro Ser Arg Asp Glu 270 Leu ThrLys Asn Gln 275 Val Ser Leu Thr Cys 280 Leu Val Lys Gly Phe 285 Tyr Pro SerAsp Ile 290 Ala Val Glu Trp Glu 295 Ser Asn Gly Gln Pro 300 Glu Asn Asn TyrLys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr305 310 315 320Ser Lys Leu Thr Val 325 Asp Lys Ser Arg Trp 330 Gln Gln Gly Asn Val 335 PheSer Cys Ser Val 340 Met His Glu Ala Leu 345 His Asn His Tyr Thr 350 Gln LysSer Leu Ser 355 Leu Ser Pro Gly Lys 360

<210> 137<211> 1164<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüênciaOtimizado

de sinal pre-pro de Ativador de Plasminogênio de Tecido(otPA) e exons de 7 a 10 de IL-17RC humano e Fc5

<4 00> 137

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgttcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttgcccaacatca ccgtggagac cctggaggccaacgaatcta cccattacca gatcctgctgtgctttgagc acatgcacca catacctgcgaacgtcacac tcactctacg caaccttaaacccttcttca gcagctgcct caatgactgcgaaatgccag acactccaga accaattccgtcagacaaaa ctcacacatg cccaccgtgcgtcttcctct tccccccaaa acccaaggacacatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaagacggcgtgg aggtgcataa tgccaagacataccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctgaagtgcaagg tctccaacaa agccctcccaaaagggcagc cccgagaacc acaggtgtacaagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtcgagtgggaga gcaatgggca gccggagaactccgacggct ccttcttcct ctacagcaaggggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcatagcctctccc tgtctccggg taaa<210> 138<211> 388<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal pre-proOtimizado (otPA) e exons de

gtgctgctgcagacgcttcccaccagctgcaccagttttccccagaccaggggtgctgtcctcagacactgactacatgcccagcacctgaccctcatgagaccctgaggaagccgcgggcaccaggacttcctccatcgaccctgccccaaaggcttctaactacaagactcaccgtgggaggctctgc

tgtgtggcgcgtagaggcaggtgtgagcttcgcacatggaaagagttccagccaccaagtccgcgactgtccctgtgggaaagccgagggtctcccggactcaagttcaaaggagcagtaggctgaatggagaaaaccatcatcccgggaatcccagcgaccacgcctccacaagagcagacaaccacta

cgtcttcgttcctgtgggaccaccctgtgggaaccacagtccagcgatccgcagatccagttcctgcccagcccaaatctggcaccgtcaccctgaggtcctggtacgtgcaacagcacgcaaggagtacctccaaagcctgagctgacccatcgccgtgcgtgctggacgtggcagcagcacgcagaag

601201802403003604204805406006607207808409009601020108011401164

de Ativador de Plasminogênio de Tecido7 a 10 de IL-17RC humano e Fc5

<400> 138

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

15 10 15

Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg

20 25 30

Phe Arg Arg Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn Ile Thr Val Glu Thr Leu

35 40 45

Glu Ala His Gln Leu Arg Val Ser Phe Thr Leu Trp Asn Glu Ser Thr

50 55 60

His Tyr Gln Ile Leu Leu Thr Ser Phe Pro His Met Glu Asn His Ser65 70 75 80Cys Phe Glu His Met His His Ile Pro Ala Pro

85 90

His Gln Arg Ser Asn Val Thr Leu Thr Leu Arg

100 105

Cys Arg His Gln Val Gln Ile Gln Pro Phe Phe

115 120

Asp Cys Leu Arg His Ser Ala Thr Val Ser Cys

130 135

Thr Pro Glu Pro Ile Pro Asp Tyr Met Pro Leu145 150 155

Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

165 170

Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

180 185

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

195 200

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

210 215

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu225 230 235

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

245 250

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

260 265

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

275 280

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

290 295

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro305 310 315

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

325 330

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

340 345

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

355 360

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

370 375

Ser Pro Gly Lys385

<210> 139<211> 2433<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal de IL-17RA e exonse exons de 8 a 16 de IL-17RC humano e

Arg

Asn

Ser

Pro140Trp

Ala

Pro

Val

Val220Gln

Gln

Ala

Pro

Thr300Ser

Tyr

Phe

Lys380

Pro

Leu

Ser125Glu

Glu

Pro

Lys

Val205Asp

Tyr

Asp

Leu

Arg285Lys

Asp

Lys

Ser

Ser365Ser

Glu Glu Phe95

Lys Gly Cys110

Cys Leu Asn

Met Pro Asp

Pro Lys Ser160

Glu Ala Glu175

Asp Thr Leu190

Asp Val Ser

Gly Val Glu

Asn Ser Thr240

Trp Leu Asn

255Pro Ser Ser270

Glu Pro Gln

Asn Gln Val

Ile Ala Val320

Thr Thr Pro

335Lys Leu Thr350

Cys Ser ValLeu Ser Leu

de 1 a 10 de IL-17RAFc5

<4 00> 139

atgggggccg

ctgctcctgg

ctggtctgct

agctggattc

cactttgccc

cagacagacg

accaatgaac

cggtggcgtt

gttcaccacc

cttgtgcctg

agcctgtggg

ttcaccctgt

gagaaccaca

caccagcgat

cacgcagcccgcgtgctggccccagccgggaccctcgaaaacacccaacaccagcatcctgtttgtgcgtttaccttcagtgcccaagccactgtgagcaaccccaacatggaacgaatcgttgctttgaccaacgtcac

gccgtccgctcccgggtggcgctaaactgccctgacccccaggagacctggtacctcgagcaggtttgagccactttgtgcatccctgatcgccaggatgcaccgtggagtacccattacgcacatgcacactcactcta

gtcccggggcgcctccctgcacggtcaagatcctccccaattccccgtggggtgcagagttttctgtccagttgaccctgggggacccaaaaggtaaccaaccctggaggcagatcctgccacatacctgcgcaacctta

ccctgctggggactcctggaatagtacctgaggacctgcactcacatcgatatctgtcctaactgaggcaaccaggaataaccaccagtccgccatgcatcccaccagcttgaccagtttcgcccagaccaagggtgctg

gctgctcctg 60ccaccgggcg 120cctggatgac 180gatccagctg 240atggacactg 300gcagctgaac 360tcaccacagg 420tgaggtgacc 480caagaatttc 540gagctcaggc 600gcgtgtgagc 660tccgcacatg 720agaagagttc 780tcgccaccaa 840gtgcagatccgtttcctgccgccctgcccttctgaggagcccccggtggcgttccctgcctgccccttcactgctgacccctgtgctggcgagaacgtcatgtgttcaggctggggcctctccctctgtggcagctcgcctgggacgatgcccaaatcttgcaccgtcagcctgaggtcatggtacgtggaacagcacgtaaggagtacatccaaagccagagctgaccaatcgccgtgggtgctggacttggcagcaggacgcagaaga<210> 140<211> 811<212> PRT<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal de IL-17RA e exons de 1 a 10 de IL-17RAe exons de 8 a 16 de IL-17RC humano e Fc5

<4 00> 140

Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala Val Pro Gly Pro Leu Leu1 5 10 15 Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala Ser 20 25 30 Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu Val Cys Ser Gln Pro Gly Leu 35 40 45 Asn Cys Thr Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His 50 55 60 Pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asp Leu Gln Ile Gln Leu65 70 75 80His Phe Ala His Thr Gln Gln Gly Asp Leu Phe Pro Val Ala His Ile 85 90 95 Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Ala Ser Ile Leu Tyr Leu Glu Gly Ala 100 105 110 Glu Leu Ser Val Leu Gln Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Arg 115 120 125 Phe Glu Phe Leu Ser Lys Leu Arg His His His Arg Arg Trp Arg Phe 130 135 140 Thr Phe Ser His Phe Val Val Asp Pro Asp Gln Glu Tyr Glu Val Thr145 150 155 160Val His His Leu Pro Lys Pro Ile Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Gln 165 170 175 Ser Lys Asn Phe Leu Val Pro Asp Cys Glu His Ala Arg Met Lys Val 180 185 190 Thr Thr Pro Cys Met Ser Ser Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn Ile Thr 195 200 205 Val Glu Thr Leu Glu Ala His Gln Leu Arg Val Ser Phe Thr Leu Trp

agcccttcttcagaaatgccggctcaacgtagcacttcggacaaaaaccttctgtattcagggaggaccctgcagagctggggctccgggctgtggacaatgaacagctctcaaagacgaccttggaaccttggagagtaacttgggagccagacaaaactcttcctcttcatgcgtggtacggcgtggaaccgtgtggtagtgcaaggtaagggcagccagaaccaggtagtgggagagccgacggctcggaacgtcttgcctctccct

cagcagctgcagacactccagtcagcagatcctctccctggactggaccgggtgtggcctccgcgcacacgctgctggactggggaccccggttctcgagggagaagctgtgtgctactgcagtggctgtcttactacaagctatgggcctcacacatgcccccccaaaaggtggacgtgggtgcataatcagcgtcctcctccaacaaaccgagaaccacagcctgacccaatgggcagcttcttcctcctcatgctccgtctccgggt

ctcaatgactgaaccaattcggtgacaacgtactggaatccagatcattactggaacctgcagaacctctgcaccgtgcttgccagccacttcccattgccagctgcaggttggagacacacttcactacgacctgcagttgccccatggccaccgtgcccccaaggacaagccacgaaggccaagacaaaccgtcctgcgccctcccatcaggtgtacatgcctggtcaccggagaacatacagcaagcgtgatgcatgaaa

gcctcagacacggactacattgcatctggtaggtccagggccttgaaccaactccgttagggcaagccgccgctgcccgctggtcccacctgaaaggccaagtgcttgtggaggcccccaccagcaaagccaggccagtgacaaatacatcagcacctgaccctcatgataccctgaggtagccgcgggaaccaggactgcctccatcgaccctgcccccaaggcttctaactacaagactcaccgtggaaggctctgca

ctccgcgactgcccctgtggtctgaatgtcccccccaaaacacagacctggacgaacatcccgactgcgaagaagcggcagctttcctggccctaacctcggctgactccggacaacagactccacgaggtctgcagctaccacaaggagagccgaggggctcccggacccaagttcaacggagcagtacgctgaatggcgaaaaccatcatcccgggattcccagcgaccacgcctccccaagagcaggcaaccactac

9009601020108011401200126013201380144015001560162016801740180018601920198020402100216022202280234024002433210 215 220

Asn Glu Ser Thr His Tyr Gln Ile Leu Leu Thr Ser Phe Pro His Met225 230 235 240

Glu Asn His Ser Cys Phe Glu His Met His His Ile Pro Ala Pro Arg

245 250 255

Pro Glu Glu Phe His Gln Arg Ser Asn Val Thr Leu Thr Leu Arg Asn

260 265 270

Leu Lys Gly Cys Cys Arg His Gln Val Gln Ile Gln Pro Phe Phe Ser

275 280 285

Ser Cys Leu Asn Asp Cys Leu Arg His Ser Ala Thr Val Ser Cys Pro

290 295 300

Glu Met Pro Asp Thr Pro Glu Pro Ile Pro Asp Tyr Met Pro Leu Trp305 310 315 320

Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu

325 330 335

Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp

340 345 350

Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr

355 360 365

Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu

370 375 380

Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile385 390 395 400

Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala

405 410 415

Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro

420 425 430

Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly

435 440 445

Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr

450 455 460

Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu465 470 475 480

Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu

485 490 495

Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu

500 505 510

Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser

515 520 525

Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu

530 535 540

Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu545 550 555 560

Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr

565 570 575

Ile His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro

580 585 590

Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

595 600 605

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

610 615 620

Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn625 630 635 640

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

645 650 655

Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

660 665 670

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

675 680 685

Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

690 695 700

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp705 710 715 720Glu Leu Thr Lys Asn725

Tyr Pro Ser Asp Ile740

Asn Asn Tyr Lys Thr755

Phe Leu Tyr Ser Lys770

Asn Val Phe Ser Cys785

Thr Gln Lys Ser Leu805

<210> 141<211> 2190<212> DNA<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal de IL-17RA e exons de 1 a 6 de IL-17RAe exons 8 a 13 de IL-17RC humano e exons de 7 a 10 deIL-17RA e Fc5

Gln Val Ser Leu Thr730

Ala Val Glu Trp Glu745

Thr Pro Pro Val Leu760

Leu Thr Val Asp Lys775

Ser Val Met His Glu790

Ser Leu Ser Pro Gly810

Cys Leu Val Lys Gly Phe735

Ser Asn Gly Gln Pro Glu750

Asp Ser Asp Gly Ser Phe765

Ser Arg Trp Gln Gln Gly780

Ala Leu His Asn His Tyr795 800

Lys

<400> 141

atgggggccg cacgcagccc gccgtccgct gtcccggggc ccctgctggg gctgctcctg 60ctgctcctgg gcgtgctggc cccgggtggc gcctccctgc gactcctgga ccaccgggcg 120ctggtctgct cccagccggg gctaaactgc acggtcaaga atagtacctg cctggatgac 180agctggattc accctcgaaa cctgaccccc tcctccccaa aggacctgca gatccagctg 240cactttgccc acacccaaca aggagacctg ttccccgtgg ctcacatcga atggacactg 300cagacagacg ccagcatcct gtacctcgag ggtgcagagt tatctgtcct gcagctgaac 360accaatgaac gtttgtgcgt caggtttgag tttctgtcca aactgaggca tcaccacagg 420cggtggcgtt ttaccttcag ccactttgtg gttgaccctg accaggaata tgaggtgacc 480gttcaccacc tgcccaagcc catccctgat ggggacccaa accaccagtc caagaatttc 540cttgtgcctg actgtgagca cgccaggatg aaggtaacca cgccatgcat gagctcagcc 600ctgccctggc tcaacgtgtc agcagatggt gacaacgtgc atctggttct gaatgtctct 660gaggagcagc acttcggcct ctccctgtac tggaatcagg tccagggccc cccaaaaccc 720cggtggcaca aaaacctgac tggaccgcag atcattacct tgaaccacac agacctggtt 780ccctgcctct gtattcaggt gtggcctctg gaacctgact ccgttaggac gaacatctgc 840cccttcaggg aggacccccg cgcacaccag aacctctggc aagccgcccg actgcgactg 900ctgaccctgc agagctggct gctggacgca ccgtgctcgc tgcccgcaga agcggcactg 960tgctggcggg ctccgggtgg ggacccctgc cagccactgg tcccaccgct ttcctgggag 1020aacgtcactg tggacaaggt tctcgagttc ccattgctga aaggccaccc taacctctgt 1080gttcaggtga acagctcgga gaagctgcag ctgcaggagt gcttgtgggc tggcagcctg 1140tgggacccca acatcaccgt ggagaccctg gaggcccacc agctgcgtgt gagcttcacc 1200ctgtggaacg aatctaccca ttaccagatc ctgctgacca gttttccgca catggagaac 1260cacagttgct ttgagcacat gcaccacata cctgcgccca gaccagaaga gttccaccag 1320cgatccaacg tcacactcac tctacgcaac cttaaagggt gctgtcgcca ccaagtgcag 1380atccagccct tcttcagcag ctgcctcaat gactgcctca gacactccgc gactgtttcc 1440tgcccagaaa tgccagacac tccagaacca attccggact acatgcccct gtgggagccc 1500aaatcttcag acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaagc cgagggggca 1560ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 1620gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 1680tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 1740agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 1800gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccatcct ccatcgagaa aaccatctcc 1860aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 1920ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1980gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 2040ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 2100cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 2160cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 2190

<210> 142<211> 730<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<400> 142

Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala Val Pro Gly Pro Leu Leu

15 10 15

Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala Ser

20 25 30

Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu Val Cys Ser Gln Pro Gly Leu

35 40 45

Asn Cys Thr Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His

50 55 60

Pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asp Leu Gln Ile Gln Leu65 70 75 80

His Phe Ala His Thr Gln Gln Gly Asp Leu Phe Pro Val Ala His Ile

85 90 95

Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Ala Ser Ile Leu Tyr Leu Glu Gly Ala

100 105 110

Glu Leu Ser Val Leu Gln Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Arg

115 120 125

Phe Glu Phe Leu Ser Lys Leu Arg His His His Arg Arg Trp Arg Phe

130 135 140

Thr Phe Ser His Phe Val Val Asp Pro Asp Gln Glu Tyr Glu Val Thr145 150 155 160

Val His His Leu Pro Lys Pro Ile Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Gln

165 170 175

Ser Lys Asn Phe Leu Val Pro Asp Cys Glu His Ala Arg Met Lys Val

180 185 190

Thr Thr Pro Cys Met Ser Ser Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala

195 200 205

Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His

210 215 220

Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro225 230 235 240

Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His

245 250 255

Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro

260 265 270

Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala

275 280 285

His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln

290 295 300

Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu305 310 315 320

Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro

325 330 335

Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu

340 345 350

Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys

355 360 365

Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Gly Ser Leu Trp Asp Pro Asn

370 375 380

Ile Thr Val Glu Thr Leu Glu Ala His Gln Leu Arg Val Ser Phe Thr385 390 395 400

Leu Trp Asn Glu Ser Thr His Tyr Gln Ile Leu Leu Thr Ser Phe Pro

405 410 415

His Met Glu Asn His Ser Cys Phe Glu His Met His His Ile Pro Ala

420 425 430

Pro Arg Pro Glu Glu Phe His Gln Arg Ser Asn Val Thr Leu Thr Leu

435 440 445

Arg Asn Leu Lys Gly Cys Cys Arg His Gln Val Gln Ile Gln Pro Phe450 455 460 Phe Ser Ser Cys Leu Asn Asp Cys Leu Arg His Ser Ala Thr Val Ser465 470 475 480Cys Pro Glu Met Pro Asp Thr Pro Glu Pro Ile Pro Asp Tyr Met Pro 485 490 495 Leu Trp Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 500 505 510 Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 515 520 525 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 530 535 540 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp545 550 555 560Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 565 570 575 Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 580 585 590 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 595 600 605 Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 610 615 620 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu625 630 635 640Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 645 650 655 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 660 665 670 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 675 680 685 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 690 695 700 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr705 710 715 720Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

725 730

<210> 143<211> 2124<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal de IL-17RA e exons de 1 a 3 de IL-17RAe exons de 4 a 16 de IL-17RC humano e Fc5

<400> 143

atgggggccg cacgcagccc gccgtccgct gtcccggggc ccctgctggg gctgctcctg 60ctgctcctgg gcgtgctggc cccgggtggc gcctccctgc gactcctgga ccaccgggcg 120ctggtctgct cccagccggg gctaaactgc acggtcaaga atagtacctg cctggatgac 180agctggattc accctcgaaa cctgaccccc tcctccccaa aggacctgca gatccagctg 240cactttgccc acacccaaca aggagacctg ttccccgtgg ctcacatcga atggacactg 300cagacagacg ggcactggga agagcctgaa gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac 360tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag 420gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag 480tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat gactgcttcg aggctgccct agggagtgag 540gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg tacgagaagg aactcaacca cacacagcag 600ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg aattccatcc cgagctgctg ggccctgccc 660tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag 720cagcacttcg gcctctccct gtactggaat caggtccagg gccccccaaa accccggtgg 780cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt accttgaacc acacagacct ggttccctgc 840ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc 900agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc 960ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg 1020cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc 1080actgtggaca aggttctcga gttcccattg ctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag 1140gtgaacagct cggagaagct gcagctgcag gagtgcttgtctcaaagacg atgtgctact gttggagaca cgaggcccccgccttggaac ccagtggctg tacttcacta cccagcaaagcttggagagt acttactaca agacctgcag tcaggccagtgacttgggag cgctatgggc ctgccccatg gacaaatacatcagacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctggtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatgaacatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagggacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcgggtaccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggactaagtgcaagg tctccaacaa agccctccca tcctccatcgaaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgccccaagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttctgagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaagatccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgggggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgcagcctctccc tgtctccggg taaa<210> 144<211> 708<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal de IL-17RA e exonse exons de 4 a 16 de IL-17RC humano e

gggctgactcaggacaacagcctccacgaggtctgcagcttccacaaggaaagccgagggtctcccggactcaagttcaaaggagcagtaggctgaatggagaaaaccatcatcccgggaatcccagcgaccacgcctccacaagagcagacaaccacta

cctggggcctatccctctgtggcagctcgcatgggacgatgcccaaatctggcaccgtcaccctgaggtcctggtacgtgcaacagcacgcaaggagtacctccaaagcctgagctgacccatcgccgtgcgtgctggacgtggcagcagcacgcagaag

12001260132013801440150015601620168017401800186019201980204021002124

de 1 a 3 de IL-17RAFc 5

<400> 144

Met Gly Ala Ala Arg1 5

Ser Pro Pro Ser Ala Val Pro Gly Pro Leu Leu

10

15

Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala Ser 20 25 30 Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu Val Cys Ser Gln Pro Gly Leu 35 40 45 Asn Cys Thr Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His 50 55 60 Pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asp Leu Gln Ile Gln Leu65 70 75 80His Phe Ala His Thr Gln Gln Gly Asp Leu Phe Pro Val Ala His Ile 85 90 95 Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Gly His Trp Glu Glu Pro Glu Asp Glu 100 105 110 Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly Val Glu Glu Pro Arg Asn 115 120 125 Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe Gln Ala Tyr Pro Thr 130 135 140 Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro Ala Ala Leu Val Gln145 150 155 160Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp Cys Phe Glu Ala Ala 165 170 175 Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr Gln Pro Arg Tyr Glu 180 185 190 Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Asp Cys Arg Gly Leu Glu 195 200 205 Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val 210 215 220 Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu225 230 235 240Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro 245 250 255 Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu 260 265 270 Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu 275 280 285 Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro290 295 300

Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr305 310 315 320

Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala

325 330 335

Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val

340 345 350

Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe

355 360 365

Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser

370 375 380

Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro385 390 395 400

Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn

405 410 415

Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser

420 425 430

Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp

435 440 445

Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala

450 455 460

Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro Lys Ser465 470 475 480

Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu

485 490 495

Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

500 505 510

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

515 520 525

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

530 535 540

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr545 550 555 560

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

565 570 575

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser

580 585 590

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

595 600 605

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val

610 615 620

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val625 630 635 640

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

645 650 655

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

660 665 670

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

675 680 685

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

690 695 700

Ser Pro Gly Lys705

<210> 145<211> 2127<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal de IL-17RA e exon 1 de IL-17RA eexons de 2 a 16 de IL-17RC humano e Fc5

<4 00> 145

atgggggccg cacgcagccc gccgtccgct gtcccggggc ccctgctggg gctgctcctgctgctcctgg gcgtgctggc cccgggtggcctggtctgct cccagccggg cctctcctgc

gcctccctgc gactcctggacgcctctggg acagtgacat

cctggggaca tcgtgcctgc tccgggcccc gtgctggcgc ctacgcacctctggtgctga ggtgccagaa ggagaccgac tgtgacctct gtctgcgtgtttggccgtgc atgggcactg ggaagagcct gaagatgagg aaaagtttgggactcagggg tggaggagcc taggaatgcccaggcctacc ctactgcccg ctgcgtcctgagtctgtggg ctctgtggtatctggtccta tactcagcccactgcagggg gctcgaagtcacgtgtcagc agatggtgactcggcctctc

cagtttggtcgaggtacgaacagctgcctgccctggctcagagcagcacttggcacaaaatgcctctgtattcagggaggaccctgcagatggcgggctcgtcactgtggcaggtgaacacctctcaaagtgtgccttggcgccttggaggatgacttggtcttcagacatcagtcttccgtcacatgcggtggacggcgacgtaccgtgtacaagtgcagccaaagggcaccaagaaccgtggagtggggactccgacgcaggggaacgaagagcctct<210> 146

tctctccagg cccaagtcgtctggaggtgc aagtgcctgctatgactgct tcgaggctgcaggtacgaga aggaactcaatggaattcca tcccgagctgaacgtgcatc tggttctgaa

cctgtactgg aatcaggtcc agggccccccacctgactgg accgcagatc attaccttga accacacagattcaggtgtg gcctctggaa cctgactccg ttaggacgaaacaccagaac ctctggcaag ccgcccgactggacgcaccg tgctcgctgc ccgcagaagccccctgccag ccactggtcc caccgctttccgagttccca ttgctgaaag gccaccctaa

acccccgcgcgctggctgctcgggtggggaacaaggttctgctcggagaaacgatgtgctaacccagtggagtacttact

gctgcagctgactgttggagctgtacttcaacaagacctg

gagcgctatg ggcctgccccaaactcacac atgcccaccgtcttcccccc aaaacccaag

caggagtgct tgtgggctgaacacgaggcc cccaggacaactacccagca aagcctccaccagtcaggcc agtgtctgcaatggacaaat acatccacaatgcccagcac ctgaagccgagacaccctca tgatctcccg

tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtttggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagcatggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaaaggtctccaa caaagccctc ccatcctcca tcgagaaaacagccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccgaggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccagagagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgccgctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagagtcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaaccaccctgtctcc gggtaaa

ccaccgggcgactctgcctggcagacagagggctgtccacaggagcagctgctctccttctgcccttgtgcctagggagtccacacacagctgggccctgtgtctctgagaaaaccccggcctggttccccatctgccccgcgactgctgggcactgtgcctgggagaaccctctgtgttctccctggggcagatccctcgagggcagctgctatgggacggagcccaaagggggcaccggacccctgagcaactggtacgtacaacagctggcaaggagcatctccaaaggatgagctgcgacatcgcctcccgtgctgcaggtggcagctacacgcag

<211><212><213><220><223>

709PRT

Seqüência Artificial

seqüência de sinal deexons de 2 a 16 de IL-

12018024030036042048054060066072078084090096010201080114012001260132013801440150015601620168017401800186019201980204021002127

IL-17RA e exon 1 de IL-17RA17RC humano e Fc5

<4 00> 146Met Gly Ala1

Gly Leu Leu

Leu Arg Leu35

Ser Cys Arg50

Val Pro Ala65

Leu Val Leu

Val Ala Val

Glu Glu Lys115

Asn Ala Ser

130Thr Ala Arg

Ala Arg5

Leu Leu20

Leu Asp

Leu Trp

Pro Gly

Arg Cys85

His Leu100

Phe GlyLeu GlnCys Val

Ser

Leu

His

Asp

Pro

70

Gln

Ala

Gly

Ala

Leu

Pro Pro Ser Ala 10 Val Pro Gly Pro Leu 15 LeuLeu Gly Val 25 Leu Ala Pro Gly Gly 30 Ala SerArg Ala 40 Leu Val Cys Ser Gln 45 Pro Gly LeuSer Asp Ile Leu Cys Leu Pro Gly Asp Ile55 60 Val Leu Ala Pro Thr 75 His Leu Gln Thr Glu 80Lys Glu Thr Asp 90 Cys Asp Leu Cys Leu 95 ArgVal His Gly 105 His Trp Glu Glu Pro 110 Glu AspAla Ala 120 Asp Ser Gly Val Glu 125 Glu Pro ArgGln Val Val Leu Ser Phe Gln Ala Tyr Pro135 140 Leu Glu Val Gln Val Pro Ala Ala Leu Val145 150 155 160

Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp Cys Phe Glu Ala

165 170 175

Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr Gln Pro Arg Tyr

180 185 190

Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Asp Cys Arg Gly Leu

195 200 205

Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala Leu Pro Trp Leu Asn

210 215 220

Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu225 230 235 240

Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro

245 250 255

Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr

260 265 270

Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro

275 280 285

Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp

290 295 300

Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu305 310 315 320

Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu

325 330 335

Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu

340 345 350

Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu

355 360 365

Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser

370 375 380

Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly385 390 395 400

Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp

405 410 415

Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro

420 425 430

Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln

435 440 445

Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly

450 455 460

Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro Lys465 470 475 480

Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala

485 490 495

Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

500 505 510

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

515 520 525

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

530 535 540

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser545 550 555 560

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

565 570 575

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser

580 585 590

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

595 600 605

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln

610 615 620

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala625 630 635 640

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr645 650 655Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

660 665 670

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

675 680 685

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

690 695 700

Leu Ser Pro Gly Lys705

<210> 147<211> 2094<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 16 de

IL-17RCx4 com as substituições Cysl94Ser e Cys202Sere exons de 2 a 16 de IL-17RC humano e Fc5

<4 00> 147

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggccctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgctctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcgctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggtgacctctgtc tgcgtgtggc tgtccacttg gccgtgcatggatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtggctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctaccctagaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagtgactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatcttacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgactaattccatcc cgagctcctg ggccctgccc tggctcaacggtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcgcaggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaaccaccttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattcgactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacctggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagcttcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccggctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggacactgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag gtgaacagctgagtgcttgt gggctgactc cctggggcct ctcaaagacgcgaggccccc aggacaacag atccctctgt gccttggaaccccagcaaag cctccacgag ggcagctcgc cttggagagttcaggccagt gtctgcagct atgggacgat gacttgggaggacaaataca tccacaagga gcccaaatct tcagacaaaaccagcacctg aagccgaggg ggcaccgtca gtcttcctctaccctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgggaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtggaagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtggcaccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaaggtcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagcaccctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccaggaaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggagaaactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggctctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtctgaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc

<210> 148<211> 698<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal de IL-17RC e exonsIL-17RCx4 com substituições Cysl94Sere exons de 2 a 16 de IL-17RC humano e

gaagcccagtctccgggccttgcctgctccgccagaaggaggcactgggaaggagcctagctgcccgctgctgtgggctcggtcctatacccagggggcttgtcagcagagcctctcccttgactggaccaggtgtggcccccgcgcacaggctgctggagtggggacccaggttctcgacggagaagctatgtgctactccagtggctgacttactacacgctatgggcctcacacatgtccccccaaatggtggacgtaggtgcataatcagcgtccttctccaacaacccgagaacctcagcctgacgcaatgggcaccttcttccttctcatgctctgtctccggg

ggtcctttctctcctgccgcgggccccgtggaccgactgtagagcctgaagaatgcctctcgtcctgctgtgtggtatattcagcccaggcgaagtctggtggtgacaacgtactggaatgcagatcatttctggaacctccagaacctccgcaccgtgcctgccagccagttcccattggcagctgcaggttggagacatacttcactaagacctgcagctgccccatgcccaccgtgcacccaaggacgagccacgaatgccaagacacaccgtcctgagccctcccaacaggtgtacctgcctggtcgccggagaacctacagcaagcgtgatgcattaaa

601201802403003604204805406006607207808409009601020108011401200126013201380144015001560162016801740180018601920198020402094

de 1 a 16 dee Cys202SerFc5

<4 00> 148Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro

1 5 10 15

Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His

20 25 30

Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys

35 40 45

Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr

50 55 60

His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80

Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp

85 90 95

Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly

100 105 110

Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser

115 120 125

Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val

130 135 140

Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160

Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr

165 170 175

Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro

180 185 190

Asp Ser Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Ser Trp Ala

195 200 205

Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val

210 215 220

Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn225 230 235 240

Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly

245 250 255

Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys

260 265 270

Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys

275 280 285

Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala

290 295 300

Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys305 310 315 320

Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp

325 330 335

Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val

340 345 350

Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys

355 360 365

Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp

370 375 380

Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr385 390 395 400

Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly

405 410 415

Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly

420 425 430

Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp

435 440 445

Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile

450 455 460

His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys465 470 475 480

Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

485 490 495

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys500 505 510

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

515 520 525

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

530 535 540

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu545 550 555 560

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

565 570 575

Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

580 585 590

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

595 600 605

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

610 615 620

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn625 630 635 640

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

645 650 655

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

660 665 670

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

675 680 685

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

690 695

<210> 149<211> 2061<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal de IL-17RC e exons de 1 a 6 e de 8 a 16 deIL-17RC com ligador GlyGlyGlySer entre os exons 6 e 8 e Fc5

<4 00> 149

atgcctgtgc

ctggagaggc

ctctgggaca

ctggcgccta

gacctctgtc

gatgaggaaa

ctccaggccc

gaggtgcaag

gactgcttcg

tacgagaagg

ctcaacgtgt

cacttcggcc

aaaaacctga

tgtattcagg

gaggaccccc

cagagctggc

gctccgggtg

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ggagagtact

ttgggagcgc

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tgcgtggtgg

ggcgtggagg

cgtgtggtca

tgcaaggtct

cctggttcttttgtggggccgtgacatactcgcacctgcatgcgtgtggcagtttggaggaagtcgtgcttgcctgctgcaggctgccctaactcaaccacagcagatggtctccctgtactggaccgcatgtggcctctgcgcacaccatgctggacgcgggacccctgttctcgagttagaagctgcatgctactgttgtggctgtactactacaagatatgggcctgacacatgcccccccaaaacctggacgtgagtgcataatgcgcgtcctcacccaacaaagc

gctgtccttgtcaggacgctctgcctgcctgacagagctgtgtccacttgagcagctgacctccttccagccttgtgcagagggagtgagcacacagcagtgacaacgtgctggaatcaggatcattaccggaacctgacgaacctctggaccgtgctcgccagccactgcccattgctggctgcaggagggagacacgattcactaccccctgcagtcaccccatggacaccgtgcccacaaggacaccccacgaagaccaagacaaagcgtcctgcaccctcccatcc

gcactgggccacccactgctggggacatcggtgctgaggtgccgtgcatgtcaggggtgggcctaccctatttggtcagtgtacgaatctctgcctggagcatctggttcgtccagggccttgaaccacatccgttaggacaagccgcccctgcccgcaggtcccaccgcaaaggccacctgcttgtgggggcccccaggagcaaagcctggccagtgtcaaatacatccgcacctgaagctcatgatctcctgaggtcaccgcgggaggcaggactggctccatcgaga

gaagcccagtctccgggccttgcctgctccgccagaaggaggcactgggaaggagcctagctgcccgctgctgtgggctcggtcctatacgaggatccgctgaatgtctcccccaaaacccagacctggtcgaacatctggactgcgactaagcggcacttttcctgggactaacctctgctgactccctacaacagatcccacgagggctgcagctatgacaaggagccccgagggggccccggaccccagttcaactgagcagtacaatgaatggcaaaaaccatctc

ggtcctttctctcctgccgcgggccccgtggaccgactgtagagcctgaagaatgcctctcgtcctgctgtgtggtatattcagcccaggcctgccctggtgaggagcagccggtggcactccctgcctcccccttcagggctgaccctggtgctggcgggaacgtcacttgttcaggtgggggcctctccctctgtgccagctcgccttggacgatgaccaaatcttcaaccgtcagtctgaggtcacagtacgtggaccagcacgtacggagtacaagcaaagccaaa

601201802403003604204805406006607207808409009601020108011401200126013201380144015001560162016801740gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggatga gctgaccaag 1800aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 1860tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 1920gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1980aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 2040ctctccctgt ctccgggtaa a 2061

<210> 150<211> 687<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<400> 150

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro

15 10 15

Val Val Leu Ser Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His

20 25 30

Cys Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys

35 40 45

Leu Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr

50 55 60

His Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80

Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp

85 90 95

Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly

100 105 110

Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser

115 120 125

Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val

130 135 140

Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160

Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr

165 170 175

Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro

180 185 190

Gly Gly Gly Ser Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp

195 200 205

Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu

210 215 220

Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His225 230 235 240

Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu

245 250 255

Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val

260 265 270

Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn

275 280 285

Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu

290 295 300

Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg305 310 315 320

Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp

325 330 335

Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly

340 345 350

His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu

355 360 365

Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val370 375 380Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala385 390 395 400Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg 405 410 415 Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln 420 425 430 Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro 435 440 445 Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His 450 455 460 Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val465 470 475 480Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 485 490 495 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 500 505 510 Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 515 520 525 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 530 535 540 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys545 550 555 560Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 565 570 575 Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 580 585 590 Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 595 600 605 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 610 615 620 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser625 630 635 640Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 645 650 655 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 660 665 670 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 675 680 685

<210> 151

<211> 2094<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal pre-pro de otPA e exons de 1 a 6 ede 8 a 16 de IL-17RC com uma substituição Leu21Ala, eFc5

<4 00> 151

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagagcaga gaggcttgtg 120gggcctcagg acgctaccca ctgctctccg ggcctctcct gccgcctctg ggacagtgac 180atactctgcc tgcctgggga catcgtgcct gctccgggcc ccgtgctggc gcctacgcac 240ctgcagacag agctggtgct gaggtgccag aaggagaccg actgtgacct ctgtctgcgt 300gtggctgtcc acttggccgt gcatgggcac tgggaagagc ctgaagatga ggaaaagttt 360ggaggagcag ctgactcagg ggtggaggag cctaggaatg cctctctcca ggcccaagtc 420gtgctctcct tccaggccta ccctactgcc cgctgcgtcc tgctggaggt gcaagtgcct 480gctgcccttg tgcagtttgg tcagtctgtg ggctctgtgg tatatgactg cttcgaggct 540gccctaggga gtgaggtacg aatctggtcc tatactcagc ccaggtacga gaaggaactc 600aaccacacac agcagctgcc tgccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc 900tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 960tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 1020ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggaca aggttctcga gttcccattg 1080ctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag gtgaacagct cggagaagct gcagctgcag 1140gagtgcttgt gggctgactc cctggggcct ctcaaagacg atgtgctact gttggagaca 1200cgaggccccc aggacaacag atccctctgt gccttggaac ccagtggctg tacttcacta 1260cccagcaaag cctccacgag ggcagctcgc cttggagagt acttactaca agacctgcag 1320tcaggccagt gtctgcagct atgggacgat gacttgggag cgctatgggc ctgccccatg 1380gacaaataca tccacaagga gcccaaatct tcagacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 1440ccagcacctg aagccgaggg ggcaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 1500accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 1560gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 1620aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 1680caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1740tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1800accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1860aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1920aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1980ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 2040gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaa 2094

<210> 152<211> 698<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<4 00> 152

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly1 5 10 15 Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg 20 25 30 Phe Arg Arg Ala Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His Cys 35 40 45 Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys Leu 50 55 60 Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr His65 70 75 80Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys Asp 85 90 95 Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp Glu 100 105 110 Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly Val 115 120 125 Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe 130 135 140 Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro145 150 155 160Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp 165 170 175 Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr 180 185 190 Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Ala 195 200 205 Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val 210 215 220 Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn225 230 235 240Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly 245 250 255 Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys260 265 270

Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys

275 280 285

Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala

290 295 300

Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys305 310 315 320

Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp

325 330 335

Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val

340 345 350

Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys

355 360 365

Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp

370 375 380

Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr385 390 395 400

Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly

405 410 415

Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly

420 425 430

Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp

435 440 445

Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile

450 455 460

His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys465 470 475 480

Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

485 490 495

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

500 505 510

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

515 520 525

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

530 535 540

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu545 550 555 560

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

565 570 575

Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

580 585 590

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

595 600 605

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

610 615 620

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn625 630 635 640

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

645 650 655

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

660 665 670

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

675 680 685

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

690 695

<210> 153<211> 2097<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Exons de 1 a 6 e de 8 a 16 de IL17RC com substituiçõesSer215Thr e Ser228Thr<400> 153

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgttcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttggggcctcagg acgctaccca ctgctctccgatactctgcc tgcctgggga catcgtgcctctgcagacag agctggtgct gaggtgccaggtggctgtcc acttggccgt gcatgggcacggaggagcag ctgactcagg ggtggaggaggtgctctcct tccaggccta ccctactgccgctgcccttg tgcagtttgg tcagtctgtggccctaggga gtgaggtacg aatctggtccaaccacacac agcagctgcc tgccctgcccgtgcatctgg ttctgaatgt cacagaggagcaggtccagg gccccccaaa accccggtggaccttgaacc acacagacct ggttccctgcgactccgtta ggacgaacat ctgccccttctggcaagccg cccgactgcg actgctgacctcgctgcccg cagaagcggc actgtgctggctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtcctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcaggagtgcttgt gggctgactc cctggggcctcgaggccccc aggacaacag atccctctgtcccagcaaag cctccacgag ggcagctcgctcaggccagt gtctgcagct atgggacgatgacaaataca tccacaagga gcccaaatctccagcacctg aagccgaggg ggcaccgtcaaccctcatga tctcccggac ccctgaggtcgaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtgaagccgcggg aggagcagta caacagcacgcaccaggact ggctgaatgg caaggagtactcctccatcg agaaaaccat ctccaaagccaccctgcccc catcccggga tgagctgaccaaaggcttct atcccagcga catcgccgtgaactacaaga ccacgcctcc cgtgctggacctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcaggaggctctgc acaaccacta cacgcagaag<210> 154<211> 698<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Exons de 1 a 6 e de 8 a 16Ser215Thr e Ser228Thr e Fc5

gtgctgctgcagacgcttccggcctctcctgctccgggccaaggagaccgtgggaagagccctaggaatgcgctgcgtccggctctgtggtatactcagctggctcaacgcagcacttcgcacaaaaaccctctgtattcagggaggaccctgcagagctcgggctccggactgtggacagtgaacagctctcaaagacggccttggaaccttggagagtgacttgggagtcagacaaaagtcttcctctacatgcgtgggacggcgtggtaccgtgtggaagtgcaaggaaagggcagcaagaaccagggagtgggagatccgacggctgggaacgtctagcctctccc

tgtgtggcgcgtagactggagccgcctctgccgtgctggcactgtgacctctgaagatgacctctctccatgctggaggttatatgactgccaggtacgatgacagcagagcctctcccttgactggaccaggtgtggcccccgcgcacaggctgctggagtggggacccaggttctcgacggagaagctatgtgctactccagtggctgacttactacacgctatgggcctcacacatgtccccccaaatggtggacgtaggtgcataatcagcgtccttctccaacaacccgagaacctcagcctgacgcaatgggcaccttcttccttctcatgctctgtctccggg

cgtcttcgttgaggcttgtgggacagtgacgcctacgcacctgtctgcgtggaaaagtttggcccaagtcgcaagtgcctcttcgaggctgaaggaactctggtgacaacgtactggaatgcagatcatttctggaacctccagaacctccgcaccgtgcctgccagccagttcccattggcagctgcaggttggagacatacttcactaagacctgcagctgccccatgcccaccgtgcacccaaggacgagccacgaatgccaagacacaccgtcctgagccctcccaacaggtgtacctgcctggtcgccggagaacctacagcaagcgtgatgcattaaataa

601201802403003604204805406006607207808409009601020108011401200126013201380144015001560162016801740180018601920198020402097

de IL17RC com substituições

<4 00> 154

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

15 10 15

Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg

20 25 30

Phe Arg Arg Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His Cys

35 40 45

Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys Leu

50 55 6.0

Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr His65 70 75 80

Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys Asp

85 90 95

Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp Glu

100 105 110

Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly Val

115 120 125

Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe130 135 140Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro145 150 155 160

Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp

165 170 175

Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr

180 185 190

Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Ala

195 200 205

Leu Pro Trp Leu Asn Val Thr Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val

210 215 220

Leu Asn Val Thr Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn225 230 235 240

Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly

245 250 255

Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys

260 265 270

Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys

275 280 285

Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala

290 295 300

Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys305 310 315 320

Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp

325 330 335

Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val

340 345 350

Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys

355 360 365

Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp

370 375 380

Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr385 390 395 400

Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly

405 410 415

Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly

420 425 430

Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp

435 440 445

Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile

450 455 460

His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys465 470 475 480

Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

485 490 495

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

500 505 510

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

515 520 525

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

530 535 540

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu545 550 555 560

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

565 570 575

Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

580 585 590

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

595 600 605

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

610 615 620

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn625 630 635 640

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe645 650 655

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

660 665 670

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

675 680 685

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

690 695

<210> 155<211> 2094<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Exons de 1 a 6 e de 8 a 16 de IL17RC com substituiçõesSer a Thr e nos resíduos 120, 215, 228, 374,e 408 e Fc5

<4 00> 155

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggcgc cgtcttcgtt 60tcgctcagcc aggaaatcca tgccgagttg agacgcttcc gtagactgga gaggcttgtg 120gggcctcagg acgctaccca ctgctctccg ggcctctcct gccgcctctg ggacagtgac 180atactctgcc tgcctgggga catcgtgcct gctccgggcc ccgtgctggc gcctacgcac 240ctgcagacag agctggtgct gaggtgccag aaggagaccg actgtgacct ctgtctgcgt 300gtggctgtcc acttggccgt gcatgggcac tgggaagagc ctgaagatga ggaaaagttt 360ggaggagcag ctgactcagg ggtggaggag cctaggaatg ccacactcca ggcccaagtc 420gtgctctcct tccaggccta ccctactgcc cgctgcgtcc tgctggaggt gcaagtgcct 480gctgcccttg tgcagtttgg tcagtctgtg ggctctgtgg tatatgactg cttcgaggct 540gccctaggga gtgaggtacg aatctggtcc tatactcagc ccaggtacga gaaggaactc 600aaccacacac agcagctgcc tgccctgccc tggctcaacg tgacagcaga tggtgacaac 660gtgcatctgg ttctgaatgt cacagaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840gactccgtta'ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc 900tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 960tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 1020ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggaca aggttctcga gttcccattg 1080ctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag gtgaacagca cagagaagct gcagctgcag 1140gagtgcttgt gggctgactc cctggggcct ctcaaagacg atgtgctact gttggagaca 1200cgaggccccc aggacaacag aacactctgt gccttggaac ccagtggctg tacttcacta 1260cccagcaaag cctccacgag ggcagctcgc cttggagagt acttactaca agacctgcag 1320tcaggccagt gtctgcagct atgggacgat gacttgggag cgctatgggc ctgccccatg 1380gacaaataca tccacaagga gcccaaatct tcagacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 1440ccagcacctg aagccgaggg ggcaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 1500accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 1560gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 1620aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 1680caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1740tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1800accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1860aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1920aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1980ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 2040gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaa 2094

<210> 156<211> 698<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Exons de 1 a 6 e de 8 a 16 de IL17RC com substituiçõesSer a Thr nos resíduos 120, 215, 228, 374, e408 e Fc5

<4 00> 156

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly1 5 10 15 Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg 20 25 30 Phe Arg Arg Leu Glu Arg Leu Val Gly Pro Gln Asp Ala Thr His Cys 35 40 45 Ser Pro Gly Leu Ser Cys Arg Leu Trp Asp Ser Asp Ile Leu Cys Leu 50 55 60 Pro Gly Asp Ile Val Pro Ala Pro Gly Pro Val Leu Ala Pro Thr His65 70 75 80Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys Asp 85 90 95 Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp Glu 100 105 110 Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly Val 115 120 125 Glu Glu Pro Arg Asn Ala Thr Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser Phe 130 135 140 Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val Pro145 150 155 160Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr Asp 165 170 175 Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr Thr 180 185 190 Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro Ala 195 200 205 Leu Pro Trp Leu Asn Val Thr Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val 210 215 220 Leu Asn Val Thr Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn225 230 235 240Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly 245 250 255 Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys 260 265 270 Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys 275 280 285 Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala 290 295 300 Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys305 310 315 320Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp 325 330 335 Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val 340 345 350 Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys 355 360 365 Val Gln Val Asn Ser Thr Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp 370 375 380 Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr385 390 395 400Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Thr Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly 405 410 415 Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly 420 425 430 Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp 435 440 445 Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile 450 455 460 His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys465 470 475 480Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 485 490 495 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 500 505 510Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val

515 520

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr530 535 540

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val545 550 555

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

565 570

Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

580 585

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

595 600

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val610 615 620

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly625 630 635

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

645 650

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

660 665

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

675 680

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

690 695

<210> 157<211> 2070<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de IL-17RA e exons de 1e exons de 8 a 16 de IL-17RC e Fc5

Lys Phe Asn Trp525 Lys Pro Arg GluLeu Thr Val Leu 560Lys Val Ser Asn 575 Lys Ala Lys Gly 590 Ser Arg Asp Glu605 Lys Gly Phe TyrGln Pro Glu Asn 640Gly Ser Phe Phe 655 Gln Gln Gly Asn 670 Asn His Tyr Thr685

a 6 de IL-17RA

<4 00> 157

atgggggccg

ctgctcctgg

ctggtctgct

agctggattc

cactttgccc

cagacagacg

accaatgaac

cggtggcgtt

gttcaccacc

cttgtgcctg

ctgccctggc

gaggagcagc

cggtggcaca

ccctgcctct

cccttcaggg

ctgaccctgc

tgctggcggg

aacgtcactg

gttcaggtga

gggcctctca

ctctgtgcct

gctcgccttg

gacgatgact

aaatcttcag

ccgtcagtct

gaggtcacat

tacgtggacg

agcacgtacc

gagtacaagt

aaagccaaag

cacgcagcccgcgtgctggccccagccgggaccctcgaaaacacccaacaccagcatcctgtttgtgcgtttaccttcagtgcccaagccactgtgagcatcaacgtgtcacttcggcctaaaacctgacgtattcaggtaggacccccgagagctggctctccgggtggtggacaaggtacagctcggaaagacgatgttggaacccaggagagtactttgggagcgctacaaaactcatcctcttcccgcgtggtggtgcgtggaggtgtgtggtcaggcaaggtctcggcagccccg

gccgtccgctcccgggtggcgctaaactgccctgacccccaggagacctggtacctcgagcaggtttgagccactttgtgcatccctgatcgccaggatgagcagatggtctccctgtactggaccgcaggtggcctctgcgcacaccaggctggacgcaggacccctgctctcgagttcgaagctgcaggctactgttgtggctgtactactacaagacatgggcctgccacatgcccacccaaaacccggacgtgagcgcataatgcccgtcctcacccaacaaagccagaaccacag

gtcccggggcgcctccctgcacggtcaagatcctccccaattccccgtggggtgcagagttttctgtccagttgaccctgggggacccaaaaggtaaccagacaacgtgctggaatcaggatcattacctgaacctgactaacctctggcccgtgctcgccagccactggccattgctgactgcaggagtgagacacgagtcactacccactgcagtcagcccatggacaccgtgcccagaaggacaccccacgaagaccaagacaaagcgtcctgcaccctcccatcctgtgtacaccc

ccctgctggggactcctggaatagtacctgaggacctgcactcacatcgatatctgtcctaactgaggcaaccaggaataaccaccagtccgccatgcatatctggttcttccagggccctgaaccacacccgttaggacaagccgcccgtgcccgcagatcccaccgctaaggccacccgcttgtgggcgcccccaggagcaaagcctcgccagtgtctaatacatccacacctgaagctcatgatctcctgaggtcaacgcgggaggaaggactggctccatcgagaatgcccccatc

gctgctcctgccaccgggcgcctggatgacgatccagctgatggacactggcagctgaactcaccacaggtgaggtgacccaagaatttcgagctcagccgaatgtctctcccaaaacccagacctggttgaacatctgcactgcgactgagcggcactgttcctgggagtaacctctgttgactccctgcaacagatcccacgagggcagcagctatggcaaggagccccgagggggcaccggacccctgttcaactgggcagtacaacgaatggcaagaaccatctccccgggatgag

6012018024030036042048054060066072078084090096010201080114012001260132013801440150015601620168017401800ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1860gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1920ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1980cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 2040cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 2070

<210> 158<211> 690<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo ■ de sinal de IL-17RA e exons < de 1 a 6 de IL-17RA e exons de 8 , a 16 de IL-17RC e Fc5 <400> 158 Met Gly Ala Ala Arg Ser Pro Pro Ser Ala Val Pro Gly Pro Leu Leu1 5 10 15 Gly Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Val Leu Ala Pro Gly Gly Ala Ser 20 25 30 Leu Arg Leu Leu Asp His Arg Ala Leu Val Cys Ser Gln Pro Gly Leu 35 40 45 Asn Cys Thr Val Lys Asn Ser Thr Cys Leu Asp Asp Ser Trp Ile His 50 55 60 Pro Arg Asn Leu Thr Pro Ser Ser Pro Lys Asp Leu Gln Ile Gln Leu65 70 75 80His Phe Ala His Thr Gln Gln Gly Asp Leu Phe Pro Val Ala His Ile 85 90 95 Glu Trp Thr Leu Gln Thr Asp Ala Ser Ile Leu Tyr Leu Glu Gly Ala 100 105 110 Glu Leu Ser Val Leu Gln Leu Asn Thr Asn Glu Arg Leu Cys Val Arg 115 120 125 Phe Glu Phe Leu Ser Lys Leu Arg His His His Arg Arg Trp Arg Phe 130 135 140 Thr Phe Ser His Phe Val Val Asp Pro Asp Gln Glu Tyr Glu Val Thr145 150 155 160Val His His Leu Pro Lys Pro Ile Pro Asp Gly Asp Pro Asn His Gln 165 170 175 Ser Lys Asn Phe Leu Val Pro Asp Cys Glu His Ala Arg Met Lys Val 180 185 190 Thr Thr Pro Cys Met Ser Ser Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala 195 200 205 Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His 210 215 220 Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro225 230 235 240Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His 245 250 255 Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro 260 265 270 Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala 275 280 285 His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln 290 295 300 Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu305 310 315 320Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro 325 330 335 Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu 340 345 350 Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys 355 360 365 Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys 370 375 380 Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser385 390 395 400

Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala

405 410 415

Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln

420 425 430

Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp

435 440 445

Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile His Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp

450 455 460

Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Glu Gly Ala465 470 475 480

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

485 490 495

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

500 505 510

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

515 520 525

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

530 535 540

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys545 550 555 560

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ser Ser Ile Glu

565 570 575

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

580 585 590

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

595 600 605

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

610 615 620

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val625 630 635 640

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

645 650 655

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

660 665 670

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro675 680 685

Gly Lys690<210> 159<211> 252<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Domínio 1

<4 00> 159

gccctgccct ggctcaacgt gtcagcagat ggtgacaacg tgcatctggt tctgaatgtc 60tctgaggagc agcacttcgg cctctccctg tactggaatc aggtccaggg ccccccaaaa 120ccccggtggc acaaaaacct gactggaccg cagatcatta ccttgaacca cacagacctg 180gttccctgcc tctgtattca ggtgtggcct ctggaacctg actccgttag gacgaacatc 240tgccccttca gg 252

<210> 160<211> 84<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Domínio 1<400> 160

Ala Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu

15 10 15

Val Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp20

Asn Gln Val Gln35

Gly Pro Gln Ile50

Cys Ile Gln Val65

Cys Pro Phe Arg

Gly Pro Pro Lys40

Ile Thr Leu Asn55

Trp Pro Leu Glu70

25

Pro Arg Trp His

His Thr Asp Leu60

Pro Asp Ser Val75

30

Lys Asn Leu Thr45

Val Pro Cys Leu

Arg Thr Asn Ile80

<210> 161<211> 282<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Domínio 2<400> 161

gaggaccccc gcgcacacca gaacctctgg caagccgccc gactgcgact gctgaccctg 60cagagctggc tgctggacgc accgtgctcg ctgcccgcag aagcggcact gtgctggcgg 120gctccgggtg gggacccctg ccagccactg gtcccacegc tttcctggga gaacgtcact 180gtggacaagg ttctcgagtt cccattgctg aaaggccacc ctaacctctg tgttcaggtg 240aacagctcgg agaagctgca gctgcaggag tgcttgtggg ct 282

<210> 162<211> 94<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Domínio 2<4 00> 162

Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala Arg Leu Arg

15 10 15

Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys Ser Leu Pro

20 25 30

Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp Pro Cys Gln

35 40 45

Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val Asp Lys Val

50 55 60

Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys Val Gln Val65 70 75 80

Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp Ala85 90

<210> 163<211> 231<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Domínio 3

<4 00> 163

gactccctgg ggcctctcaa agacgatgtg ctactgttgg agacacgagg cccccaggac 60aacagatccc tctgtgcctt ggaacccagt ggctgtactt cactacccag caaagcctcc 120acgagggcag ctcgccttgg agagtactta ctacaagacc tgcagtcagg ccagtgtctg 180cagctatggg acgatgactt gggagcgcta tgggcctgcc ccatggacaa a 231

<210> 164<211> 77<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Domínio 3<4 00> 164

Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr Arg1 5 10 15 Gly Pro Gln Asp 20 Asn Arg Ser Leu Cys 25 Ala Leu Glu Pro Ser 30 Gly CysThr Ser Leu 35 Pro Ser Lys Ala Ser 40 Thr Arg Ala Ala Arg 45 Leu Gly GluTyr Leu 50 Leu Gln Asp Leu Gln 55 Ser Gly Gln Cys Leu 60 Gln Leu Trp AspAsp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys

65 70 75

<210> 165

<211> 2124

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 165

atgcctgtgc cctggttctt gctgtccttg gcactgggcc gaagcccagt ggtcctttct 60ctggagaggc ttgtggggcc tcaggacgct acccactgct ctccgggcct ctcctgccgc 120ctctgggaca gtgacatact ctgcctgcct ggggacatcg tgcctgctcc gggccccgtg 180ctggcgccta cgcacctgca gacagagctg gtgctgaggt gccagaagga gaccgactgt 240gacctctgtc tgcg.tgtggc tgtccacttg gccgtgcatg ggcactggga agagcctgaa 300gatgaggaaa agtttggagg agcagctgac tcaggggtgg aggagcctag gaatgcctct 360ctccaggccc aagtcgtgct ctccttccag gcctacccta ctgcccgctg cgtcctgctg 420gaggtgcaag tgcctgctgc ccttgtgcag tttggtcagt ctgtgggctc tgtggtatat 480gactgcttcg aggctgccct agggagtgag gtacgaatct ggtcctatac tcagcccagg 540tacgagaagg aactcaacca cacacagcag ctgcctgact gcagggggct cgaagtctgg 600aacagcatcc cgagctgctg ggccctgccc tggctcaacg tgtcagcaga tggtgacaac 660gtgcatctgg ttctgaatgt ctctgaggag cagcacttcg gcctctccct gtactggaat 720caggtccagg gccccccaaa accccggtgg cacaaaaacc tgactggacc gcagatcatt 780accttgaacc acacagacct ggttccctgc ctctgtattc aggtgtggcc tctggaacct 840gactccgtta ggacgaacat ctgccccttc agggaggacc cccgcgcaca ccagaacctc 900tggcaagccg cccgactgcg actgctgacc ctgcagagct ggctgctgga cgcaccgtgc 960tcgctgcccg cagaagcggc actgtgctgg cgggctccgg gtggggaccc ctgccagcca 1020ctggtcccac cgctttcctg ggagaacgtc actgtggaca aggttctcga gttcccattg 1080ctgaaaggcc accctaacct ctgtgttcag gtgaacagct cggagaagct gcagctgcag 1140gagtgcttgt gggctgactc cctggggcct ctcaaagacg atgtgctact gttggagaca 1200cgaggccccc aggacaacag atccctctgt gccttggaac ccagtggctg tacttcacta 1260cccagcaaag cctccacgag ggcagctcgc cttggagagt acttactaca agacctgcag 1320tcaggccagt gtctgcagct atgggacgat gacttgggag cgctatgggc ctgccccatg 1380gacaaataca tccacaagcg ctgggccctc gtgtggctgg cctgcctact ctttgccgct 1440gcgctttccc tcatcctcct tctcaaaaag gatcacgcga aagcggccgc caggggccgc 1500gcggctctgc tcctctactc agccgatgac tcgggtttcg agcgcctggt gggcgccctg 1560gcgtcggccc tgtgccagct gccgctgcgc gtggccgtag acctgtggag ccgtcgtgaa 1620ctgagcgcgc aggggcccgt ggcttggttt cacgcgcagc ggcgccagac cctgcaggag 1680ggcggcgtgg tggtcttgct cttctctccc ggtgcggtgg cgctgtgcag cgagtggcta 1740caggatgggg tgtccgggcc cggggcgcac ggcccgcacg acgccttccg cgcctcgctc 1800agctgcgtgc tgcccgactt cttgcagggc cgggcgcccg gcagctacgt gggggcctgc 1860ttcgacaggc tgctccaccc ggacgccgta cccgcccttt tccgcaccgt gcccgtcttc 1920acactgccct cccaactgcc agacttcctg ggggccctgc agcagcctcg cgccccgcgt 1980tccgggcggc tccaagagag agcggagcaa gtgtcccggg cccttcagcc agccctggat 2040agctacttcc atcccccggg gactcccgcg ccgggacgcg gggtgggacc aggggcggga 2100cctggggcgg gggacgggac ttaa 2124

<210> 166<211> 707<212> PRT

<213> Homo sapiens<4 00> 166

Met Pro Val Pro Trp Phe Leu Leu Ser Leu Ala Leu Gly Arg Ser Pro1 5 10 15 Val Val Leu Ser 20 Leu Glu Arg Leu Val 25 Gly Pro Gln Asp Ala 30 Thr HisCys Ser Pro Gly 35 Leu Ser Cys Arg 40 Leu Trp Asp Ser Asp 45 Ile Leu CysLeu Pro 50 Gly Asp Ile Val Pro 55 Ala Pro Gly Pro Val 60 Leu Ala Pro ThrHis Leu Gln Thr Glu Leu Val Leu Arg Cys Gln Lys Glu Thr Asp Cys65 70 75 80Asp Leu Cys Leu Arg Val Ala Val His Leu Ala Val His Gly His Trp 85 90 95 Glu Glu Pro Glu Asp Glu Glu Lys Phe Gly Gly Ala Ala Asp Ser Gly 100 105 110 Val Glu Glu Pro Arg Asn Ala Ser Leu Gln Ala Gln Val Val Leu Ser 115 120 125 Phe Gln Ala Tyr Pro Thr Ala Arg Cys Val Leu Leu Glu Val Gln Val 130 135 140 Pro Ala Ala Leu Val Gln Phe Gly Gln Ser Val Gly Ser Val Val Tyr145 150 155 160Asp Cys Phe Glu Ala Ala Leu Gly Ser Glu Val Arg Ile Trp Ser Tyr 165 170 175 Thr Gln Pro Arg Tyr Glu Lys Glu Leu Asn His Thr Gln Gln Leu Pro 180 185 190 Asp Cys Arg Gly Leu Glu Val Trp Asn Ser Ile Pro Ser Cys Trp Ala 195 200 205 Leu Pro Trp Leu Asn Val Ser Ala Asp Gly Asp Asn Val His Leu Val 210 215 220 Leu Asn Val Ser Glu Glu Gln His Phe Gly Leu Ser Leu Tyr Trp Asn225 230 235 240Gln Val Gln Gly Pro Pro Lys Pro Arg Trp His Lys Asn Leu Thr Gly 245 250 255 Pro Gln Ile Ile Thr Leu Asn His Thr Asp Leu Val Pro Cys Leu Cys 260 265 270 Ile Gln Val Trp Pro Leu Glu Pro Asp Ser Val Arg Thr Asn Ile Cys 275 280 285 Pro Phe Arg Glu Asp Pro Arg Ala His Gln Asn Leu Trp Gln Ala Ala 290 295 300 Arg Leu Arg Leu Leu Thr Leu Gln Ser Trp Leu Leu Asp Ala Pro Cys305 310 315 320Ser Leu Pro Ala Glu Ala Ala Leu Cys Trp Arg Ala Pro Gly Gly Asp 325 330 335 Pro Cys Gln Pro Leu Val Pro Pro Leu Ser Trp Glu Asn Val Thr Val 340 345 350 Asp Lys Val Leu Glu Phe Pro Leu Leu Lys Gly His Pro Asn Leu Cys 355 360 365 Val Gln Val Asn Ser Ser Glu Lys Leu Gln Leu Gln Glu Cys Leu Trp 370 375 380 Ala Asp Ser Leu Gly Pro Leu Lys Asp Asp Val Leu Leu Leu Glu Thr385 390 395 400Arg Gly Pro Gln Asp Asn Arg Ser Leu Cys Ala Leu Glu Pro Ser Gly 405 410 415 Cys Thr Ser Leu Pro Ser Lys Ala Ser Thr Arg Ala Ala Arg Leu Gly 420 425 430 Glu Tyr Leu Leu Gln Asp Leu Gln Ser Gly Gln Cys Leu Gln Leu Trp 435 440 445 Asp Asp Asp Leu Gly Ala Leu Trp Ala Cys Pro Met Asp Lys Tyr Ile 450 455 460 His Lys Arg Trp Ala Leu Val Trp Leu Ala Cys Leu Leu Phe Ala Ala465 470 475 480Ala Leu Ser Leu Ile Leu Leu Leu Lys Lys Asp His Ala Lys Ala Ala 485 490 495 Ala Arg Gly Arg Ala Ala Leu Leu Leu Tyr Ser Ala Asp Asp Ser Gly 500 505 510 Phe Glu Arg Leu Val Gly Ala Leu Ala Ser Ala Leu Cys Gln Leu Pro 515 520 525 Leu Arg Val Ala Val Asp Leu Trp Ser Arg Arg Glu Leu Ser Ala Gln 530 535 540 Gly Pro Val Ala Trp Phe His Ala Gln Arg Arg Gln Thr Leu Gln Glu545 550 555 560Gly Gly Val Val Val Leu Leu Phe Ser Pro Gly Ala Val Ala Leu Cys565 570 575

Ser Glu Trp Leu Gln Asp Gly Val Ser Gly Pro Gly Ala His Gly Pro

580 585 590 His Asp Ala 595 Phe Arg Ala Ser Leu 600 Ser Cys Val Leu Pro 605 Asp Phe LeuGln Gly 610 Arg Ala Pro Gly Ser 615 Tyr Val Gly Ala Cys 620 Phe Asp Arg LeuLeu His Pro Asp Ala Val Pro Ala Leu Phe Arg Thr Val Pro Val Phe625 630 635 640Thr Leu Pro Ser Gln 645 Leu Pro Asp Phe Leu 650 Gly Ala Leu Gln Gln 655 ProArg Ala Pro Arg 660 Ser Gly Arg Leu Gln 665 Glu Arg Ala Glu Gln 670 Val SerArg Ala Leu 675 Gln Pro Ala Leu Asp 680 Ser Tyr Phe His Pro 685 Pro Gly ThrPro Ala 690 Pro Gly Arg Gly Val 695 Gly Pro Gly Ala Gly 700 Pro Gly Ala GlyAsp Gly Thr 705

<210> 167

<211> 3120

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 167

ggggccgagc cctccgcgac gccacccggg ccatgggggc cgcacgcagc ccgccgtccg 60ctgtcccggg gcccctgctg gggctgctcc tgctgctcct gggcgtgctg gccccgggtg 120gcgcctccct gcgactcctg gaccaccggg cgctggtctg.ctcccagccg gggctaaact 180gcacggtcaa gaatagtacc tgcctggatg acagctggat tcaccctcga aacctgaccc 240cctcctcccc aaaggacctg cagatccagc tgcactttgc ccacacccaa caaggagacc 300tgttccccgt ggctcacatc gaatggacac tgcagacaga cgccagcatc ctgtacctcg 360agggtgcaga gttatctgtc ctgcagctga acaccaatga acgtttgtgc gtcaggtttg 420agtttctgtc caaactgagg catcaccaca ggcggtggcg ttttaccttc agccactttg 480tggttgaccc tgaccaggaa tatgaggtga ccgttcacca cctgcccaag cccatccctg 540atggggaccc aaaccaccag tccaagaatt tccttgtgcc tgactgtgag cacgccagga 600tgaaggtaac cacgccatgc atgagctcag gcagcctgtg ggaccccaac atcaccgtgg 660agaccctgga ggcccaccag ctgcgtgtga gcttcaccct gtggaacgaa tctacccatt 720accagatcct gctgaccagt tttccgcaca tggagaacca cagttgcttt gagcacatgc 780accacatacc tgcgcccaga ccagaagagt tccaccagcg atccaacgtc acactcactc 840tacgcaacct taaagggtgc tgtcgccacc aagtgcagat ccagcccttc ttcagcagct 900gcctcaatga ctgcctcaga cactccgcga ctgtttcctg cccagaaatg ccagacactc 960cagaaccaat tccggactac atgcccctgt gggtgtactg gttcatcacg ggcatctcca 1020tcctgctggt gggctccgtc atcctgctca tcgtctgcat gacctggagg ctagctgggc 1080ctggaagtga aaaatacagt gatgacacca aatacaccga tggcctgcct gcggctgacc 1140tgatcccccc accgctgaag cccaggaagg tctggatcat ctactcagcc gaccaccccc 1200tctacgtgga cgtggtcctg aaattcgccc agttcctgct caccgcctgc ggcacggaag 1260tggccctgga cctgctggaa gagcaggcca tctcggaggc aggagtcatg acctgggtgg 1320gccgtcagaa gcaggagatg gtggagagca actctaagat catcgtcctg tgctcccgcg 1380gcacgcgcgc caagtggcag gcgctcctgg gccggggggc gcctgtgcgg ctgcgctgcg 1440accacggaaa gcccgtgggg gacctgttca ctgcagccat gaacatgatc ctcccggact 1500tcaagaggcc agcctgcttc ggcacctacg tagtctgcta cttcagcgag gtcagctgtg 1560acggcgacgt ccccgacctg ttcggcgcgg cgccgcggta cccgctcatg gacaggttcg 1620aggaggtgta cttccgcatc caggacctgg agatgttcca gccgggccgc atgcaccgcg 1680taggggagct gtcgggggac aactacctgc ggagcccggg cggcaggcag ctccgcgccg 1740ccctggacag gttccgggac tggcaggtcc gctgtcccga ctggttcgaa tgtgagaacc 1800tctactcagc agatgaccag gatgccccgt ccctggacga agaggtgttt gaggagccac 1860tgctgcctcc gggaaccggc atcgtgaagc gggcgcccct ggtgcgcgag cctggctccc 1920aggcctgcct ggccatagac ccgctggtcg gggaggaagg aggagcagca gtggcaaagc 1980tggaacctca cctgcagccc cggggtcagc cagcgccgca gcccctccac accctggtgc 2040tcgccgcaga ggagggggcc ctggtggccg cggtggagcc tgggcccctg gctgacggtg 2100ccgcagtccg gctggcactg gcgggggagg gcgaggcctg cccgctgctg ggcagcccgg 2160gcgctgggcg aaatagcgtc ctcttcctcc ccgtggaccc cgaggactcg ccccttggca 2220gcagcacccc catggcgtct cctgacctcc ttccagagga cgtgagggag cacctcgaag 2280gcttgatgct ctcgctcttc gagcagagtc tgagctgcca ggcccagggg ggctgcagta 2340gacccgccat ggtcctcaca gacccacaca cgccctacga ggaggagcag cggcagtcag 2400

tgcagtctga ccagggctac atctccagga gctccccgca gccccccgag ggactcacgg 24 60

aaatggagga agaggaggaa gaggagcagg acccagggaa gccggccctg ccactctctc 2520

ccgaggacct ggagagcctg aggagcctcc agcggcagct gcttttccgc cagctgcaga 2580

agaactcggg ctgggacacg atggggtcag agtcagaggg gcccagtgca tgagggcggc 2640

tccccaggga ccgcccagat cccagctttg agagaggagt gtgtgtgcac gtattcatct 2700

gtgtgtacat gtctgcatgt gtatatgttc gtgtgtgaaa tgtaggcttt aaaatgtaaa 27 60

tgtctggatt ttaatcccag gcatccctcc taacttttct ttgtgcagcg gtctggttat 2820

cgtctatccc caggggaatc cacacagccc gctcccagga gctaatggta gagcgtcctt 2880

gaggctccat tattcgttca ttcagcattt attgtgcacc tactatgtgg cgggcatttg 2940

ggataccaag ataaattgca tgcggcatgg ccccagccat gaaggaactt aaccgctagt 3000

gccgaggaca cgttaaacga acaggatggg ccgggcacgg tggctcacgc ctgtaatccc 3060

agcacactgg gaggccgagg caggtggatc actctgaggt caggagtttg agccagcctg 3120<210> 168<211> 78<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptídeo de sinal do hormônio do crescimento humano

<220><221> CDS<222> (1)...(78)<4 00> 168

atg gct aca ggc tcc cgg acg tcc ctg ctc ctg gct ttt ggc ctg ctcMet Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu15 10 15

48

tgc ctg ccc tgg ctt caa gag ggc agt gccCys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala20 25

78

<210> 169<211> 26<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal do hormônio do crescimento humano<400> 169

Met Ala Thr Gly Ser Arg Thr Ser Leu Leu Leu Ala Phe Gly Leu Leu

1 · 5 10 15.

Cys Leu Pro Trp Leu Gln Glu Gly Ser Ala20 25

<210> 170<211> 57<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo de Sinal da Região Variável de Cadeia Pesada deImunoglobulina de Camundongo VH 2 6-10)

<220><221> CDS<222> (1) ... (57)<4 00> 170

atg gga tgg age tgg ate ttt ctc ttt ctt ctg tca gga act gea ggtMet Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly15 10 15

48

gtc ctc tetVal Leu Ser

57

<210> 171<211> 19<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo de Sinal da Região Variável de Cadeia Pesada deImunoglobulina de Camundongo (VH 26-10)

<400> 171

Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly

1 5 10 15

Val Leu Ser

<210> 172<211> 48<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo de Sinal de CD33 Humano

<220><221> CDS<222> (1)...(48)<4 00> 172

atg ccg ctg ctg cta ctg ctg ccc ctg ctg tgg gca ggg gcc ctg gct 48Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala15 10 15

<210> 173<211> 16<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Peptideo de Sinal de CD33 Humano<400> 173

Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala

15 10 15

<210> 174<211> 696<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Região constante de cadeia pesada de imunoglobulina FclO<220><221> CDS<222> (O)...(696)<4 00> 174

gag ccc aaa tct tca gac aaa act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca 48Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala15 10 15

cct gaa ctc ctg ggg gga ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc 96Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro20 25 30

aag gac acc ctc atg ate tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg 144Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val35 40 45

gtg gac gtg age cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg 192Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val50 55 60

gac ggc gtg gag gtg cat aat

gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag 240Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 65 70 75 80

tac aac age acg tac cgt gtg gtc age gtc ctc acc gtc ctg cac cag 288Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln85 90 95

gac tgg ctg aat ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc 336Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala100 105 110

ctc cca gcc ccc ate gag aaa acc ate tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc 384Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro115 120 125

cga gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc cca tcc cgg gat gag ctg acc 432Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr130 135 140

aag aac cag gtc age ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc age 480Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser145 150 155 160

gac ate gccAsp Ile Ala

aag acc acgLys Thr Thr

age aag ctcSer Lys Leu195

tca tgc tccSer Cys Ser210

age ctc tccSer Leu Ser225

<210> 175<211> 232<212> PRT<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Região constante de cadeia pesada de imunoglobulina FclO<400> 175

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala1 5 10 15 Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln65 70 75 80Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

gtg gag tgg gag age aat ggg cag ccg gag aac aac tac 528Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr165 170 175

cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac 576Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr180 185 190

acc gtg gac aag age agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc 624Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe200 205

gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag 672Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys215 220

ctg tet ccg ggt aaa 696

Leu Ser Pro Gly Lys230Leu Pro Ala115

Arg Glu Pro130

Lys Asn Gln145

Asp Ile Ala

Lys Thr Thr

Ser Lys Leu195

Ser Cys Ser210Ser Leu Ser225

<210> 176<211> 60<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> ligador<220><221> CDS<222> (1)...(60)<400> 176

gga ggt ggg ggc tccGly Gly Gly Gly Ser1 5

ggc gga ggt agtGly Gly Gly Ser20

<210> 177<211> 20<212> PRT<213> Seqüência Artificial<220>

<223> ligador<400> 177

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser20

<210> 178<211> 35<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> seqüência de sinal pre-pro de otPA<400> 178

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Leu Ser Gln Glu Ile His Ala Glu Leu Arg Arg20 25 30

Phe Arg Arg35

<210> 179<211> 696<212> DNA

<213> Seqüência Artificial

100 105 110 Pro Ile Glu Lys Thr 120 Ile Ser Lys Ala Lys 125 Gly Gln ProGln Val Tyr Thr 135 Leu Pro Pro Ser Arg 140 Asp Glu Leu ThrVal Ser Leu 150 Thr Cys Leu Val Lys 155 Gly Phe Tyr Pro Ser 160Val Glu 165 Trp Glu Ser Asn Gly 170 Gln Pro Glu Asn Asn 175 TyrPro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr180 185 190 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 200 205 Val Met His Glu 215 Ala Leu His Asn His 220 Tyr Thr Gln LysLeu Ser Pro 230 Gly Lys

ggc ggg ggt gga age ggt gga ggc ggg tcg ggg 4 8Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly10 15

60<220>

<223> Região constante de cadeia pesada de imunoglobulina Fc5

<220>

<221> CDS

<222> (1)...(696)

<400> 179

gag ccc aaa tct tca gac aaa act cac aca tgc cca ccg tgc cca gca 48Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala1 5 10 15

cct gaa gcc gag ggg gca ccg tca gtc ttc ctc ttc ccc cca aaa ccc 96Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro20 25 30

aag gac acc ctc atg ate tcc cgg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg 14 4Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val35 40 45

gac ggc gtg gag gtg cat aat gcc aag aca aag ccg cgg gag gag cag 240Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln65 70 75 80

ctc cca tcc tcc ate gag aaa acc ate tcc aaa gcc aaa ggg cag ccc 384Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro115 120 125

gac ate gcc gtg gag tgg gag age aat ggg cag ccg gag aac aac tac 528Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr165 170 175

aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc ctc tac 576Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr180 185 190

age aag ctc acc gtg gac aag age agg tgg cag cag ggg aac gtc ttc 624Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe195 200 205

tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac acg cag aag 672Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys210 215 220

age ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa

696Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys225 230

<210> 180<211> 232<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> Região constante de cadeia pesada de imunoglobulina Fc5<400> 180

Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala1 5 10 15 Pro Glu Ala Glu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 20 25 30 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 35 40 45 Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 50 55 60 Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln65 70 75 80Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln 85 90 95 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 100 105 110 Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 115 120 125 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 130 135 140 Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser145 150 155 160Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr 165 170 175 Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 180 185 190 Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe 195 200 205 Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys 210 215 220 Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230

<210> 181<211> 31<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> peptideo de sinal de I1-17RA de murino<4 00> 181

Met Ala Ile Arg Arg Cys Trp Pro Arg Val Val Pro Gly Pro Ala Leu

15 10 15

Gly Trp Leu Leu Leu Leu Leu Asn Val Leu Ala Pro Gly Arg Ala20 25 30

Claims

1. Polipeptídeo solúvel isolado, caracterizado pelo fato de quecompreende pelo menos um exon de IL-17RA (SEQ ID NO:21) e pelo menosum exon de IL-17RC.

2. Polipeptídeo solúvel isolado de acordo com a reivindicação-1, caracterizado pelo fato de que a seqüência de polipeptídeo de IL-17RC éselecionada do grupo que consiste de:SEQ ID NO:2, SEQ ID NO: 166, SEQID NO:4 e SEQ ID NO:24.

3. Polipeptídeo solúvel isolado de acordo com a reivindicação-1, caracterizado pelo fato de que o dito receptor solúvel se liga a IL-17F.

4. Polipeptídeo solúvel isolado de acordo com a reivindicação-3, caracterizado pelo fato de que o dito polipeptídeo solúvel liga-se ainda aIL-17A.

5. Polipeptídeo solúvel isolado de acordo com a reivindicação-1, caracterizado pelo fato de que o dito polipeptídeo solúvel especificamentese liga tanto a IL-17F quanto a IL-17A.

6. Polipeptídeo solúvel isolado de acordo com a reivindicação-1, caracterizado pelo fato de que o dito polipeptídeo solúvel compreendeainda um polipeptídeo selecionado do grupo que consiste da:SEQ ID NO: 175e SEQ ID NO: 180.

7. Polipeptídeo isolado de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo compreende ainda PEGuilação.

8. Polipeptídeo solúvel isolado, caracterizado pelo fato de quecompreende exons de 8 a 16 de IL-17RC (resíduos de aminoácido de 193 a-447 da SEQ ID NO:2), em que o dito polipeptídeo solúvel especificamente seliga a IL-17A e IL-17F.

9. Polipeptídeo solúvel isolado de acordo com a reivindicação-8, caracterizado pelo fato de que o dito polipeptídeo compreende ainda pelomenos o exon 1 de IL-17RA.

10. Polipeptídeo solúvel isolado de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o dito polipeptídeo solúvel compreendeexons de 1 a 6 de IL-17RA.

11. Polipeptídeo solúvel isolado de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o dito polipeptídeo compreende opolipeptídeo representado na figura 1.

12. Polipeptídeo solúvel isolado de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o dito polipeptídeo solúvel compreendeainda um polipeptídeo selecionado do grupo que consiste da:SEQ ID NO: 175e SEQ ID NO: 180.

13. Polipeptídeo isolado de acordo com a reivindicação 8,caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo compreende ainda PEGuilação.

14. Polipeptídeo solúvel isolado, caracterizado pelo fato deque compreende resíduos de aminoácido de 1 a 458 da SEQ ID NO: 158.

15. Polipeptídeo solúvel isolado de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo compreende a SEQ IDNO:158.

16. Polipeptídeo solúvel isolado de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo consiste dos resíduos deaminoácido de 1 a 458 da SEQ ID NO: 158.

17. Polipeptídeo solúvel isolado de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo consiste da SEQ ID NO: 158.

18. Polipeptídeo solúvel isolado de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo compreende aindaPEGuilação.

19. Polipeptídeo solúvel isolado de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo compreende aindaPEGuilação.

20. Polipeptídeo isolado, caracterizado pelo fato de quecompreende uma seqüência de aminoácido selecionada do grupo que consistede: resíduos de aminoácido de 193 a 276 da SEQ ID NO:2, resíduos deaminoácido de 208 a 291 da SEQ ID NO: 166, resíduos de aminoácido de 277a 370 da SEQ ID NO:2, resíduos de aminoácido de 292 a 385 da SEQ IDNO: 166, resíduos de aminoácido de 371 a 447 da SEQ ID NO:2 e resíduos deaminoácido de 386 a 462 da SEQ ID NO: 166.

21. Polipeptídeo isolado de acordo com a reivindicação 20,caracterizado pelo fato de que o dito polipeptídeo compreende uma seqüênciade aminoácido selecionado do grupo que consiste de:SEQ ID NO: 160, SEQID NO: 162 e SEQ ID NO: 164.

22. Polipeptídeo isolado, caracterizado pelo fato de quecompreende uma seqüência de aminoácido selecionada do grupo que consistede:SEQ ID NO:68, SEQ ID N0:70, SEQ ID NO:72, SEQ ID NO:74, SEQ IDNO:78, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:86, SEQ ID N0:90, SEQ ID NO:94,SEQ ID NO:98, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO:l 10, SEQ IDNO: 114, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 140 e SEQ IDNO: 152.

23. Polipeptídeo isolado de acordo com a reivindicação 22,caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo compreende ainda PEGuilação.

24. Método para produzir um anticorpo para um polipeptídeo,caracterizado pelo fato de que compreende: inocular um animal com umpolipeptídeo selecionado do grupo que consiste da SEQ ID NO: 160, SEQ IDNO: 162 e SEQ ID NO: 164; e em que o polipeptídeo evoca uma respostaimune no animal para produzir o anticorpo; e isolar o anticorpo a partir doanimal; e em que o anticorpo especificamente se liga a um polipeptídeo de IL--17RC; e reduz a atividade de IL-17A e/ou IL-17F.

25. Método de acordo com a reivindicação 24, caracterizadopelo fato de que o anticorpo produzido pelo método reduz a atividade pró-inflamatória de IL-17A e/ou IL-17F.

26. Método de acordo com a reivindicação 24, caracterizadopelo fato de que o anticorpo produzido pelo método neutraliza a interação deIL-17A e/ou IL-17F com IL-17RC ou IL-17RA.

27. Método de acordo com a reivindicação 26, caracterizadopelo fato de que a neutralização pelo anticorpo é medida mostrando-se aneutralização de IL-17A e/ou IL-17F em um ensaio de neutralização combase em célula in vitro.

28. Método de acordo com a reivindicação 24, caracterizadopelo fato de que o anticorpo produzido pelo método reduz a atividade pró-inflamatória tanto de IL-17A quanto de IL-17F.

29. Método de acordo com a reivindicação 24, caracterizadopelo fato de que o anticorpo produzido pelo método neutraliza a interaçãotanto de IL-17A quanto de IL-17F com IL-17RC.

30. Método de acordo com a reivindicação 26, caracterizadopelo fato de que a neutralização pelo anticorpo é medida mostrando-se aneutralização tanto de IL-17A quanto de IL-17F em um ensaio deneutralização com base me célula in vitro.

31. Método para reduzir ou inibir a inflamação induzida pelaIL-17A ou induzida pela IL-17F, caracterizado pelo fato de que compreendeadministrar a um mamífero com inflamação uma quantidade de umpolipeptídeo solúvel como definido em qualquer uma das reivindicações de 1,-8, 14 ou 15 suficiente para reduzir a inflamação.

32. Método para reduzir a inflamação induzida pela IL-17A einduzida pela IL-17F, caracterizado pelo fato de que compreende administrara um mamífero com inflamação uma quantidade de um polipeptídeo solúvelcomo definido em qualquer uma das reivindicações de 1, 8, 14 ou 15suficiente para reduzir a inflamação.

33. Método para tratar um mamífero afligido com uma doençainflamatória em que a IL-17A ou IL-17F desempenha um papel, caracterizadopelo fato de que compreende: a) administrar um antagonista de IL-17A ou IL-- 17F ao mamífero tal que a inflamação seja reduzida, em que o antagonistacompreende um polipeptídeo solúvel como definido na reivindicação 1 e emque a atividade inflamatória de IL-17A ou IL-17F é reduzida.

34. Método de acordo com a reivindicação 33, caracterizadopelo fato de que a doença é a asma.

35. Método de acordo com a reivindicação 33, caracterizadopelo fato de que a doença é uma doença inflamatória crônica.

36. Método de acordo com a reivindicação 35, caracterizadopelo fato de que a doença é uma doença inflamatória crônica que compreendea doença do intestino inflamatório, colite ulcerativa, doença de Crohn, artrite,dermatite atópica ou psoríase.

37. Método de acordo com a reivindicação 33, caracterizadopelo fato de que a doença é IBS.

38. Método de acordo com a reivindicação 33, caracterizadopelo fato de que a doença é uma doença inflamatória aguda.

39. Método de acordo com a reivindicação 38, caracterizadopelo fato de que a doença é uma doença inflamatória aguda que compreendeendotoxemia, septicemia, síndrome do choque tóxico ou doença infecciosa.

40. Método para tratar um mamífero afligido com uma doençainflamatória em que IL-17A e IL-17F desempenham um papel, caracterizadopelo fato de que compreende: a) administrar um antagonista de IL-17A e IL-- 17F ao mamífero tal que a inflamação seja reduzida, em que o antagonistacompreende um polipeptídeo solúvel como definido na reivindicação 1 e emque a atividade inflamatória de cada um de IL-17A e IL-17F seja reduzida.

41. Método de acordo com a reivindicação 40, caracterizadopelo fato de que a doença é a asma.

42. Método de acordo com a reivindicação 40, caracterizadopelo fato de que a doença é uma doença inflamatória crônica.

43. Método de acordo com a reivindicação 42, caracterizadopelo fato de que a doença é uma doença inflamatória crônica que compreendea doença do intestino inflamatório, colite ulcerativa, doença de Crohn, artrite,dermatite atópica ou psoríase.

44. Método de acordo com a reivindicação 40, caracterizadopelo fato de que a doença é a EB S.

45. Método de acordo com a reivindicação 40, caracterizadopelo fato de que a doença é uma doença inflamatória aguda.

46. Método de acordo com a reivindicação 45, caracterizadopelo fato de que a doença é uma doença inflamatória aguda que compreendeendotoxemia, septicemia, síndrome do choque tóxico ou doença infecciosa.

47. Método de acordo com a reivindicação 33, caracterizadopelo fato de que a doença é a esclerose múltipla.

48. Método de acordo com a reivindicação 40, caracterizadopelo fato de que a doença é a esclerose múltipla.

49. Método de acordo com a reivindicação 33, caracterizadopelo fato de que a doença é a artrite reumatóide.

50. Método de acordo com a reivindicação 40, caracterizadopelo fato de que a doença é a artrite reumatóide.

51. Método de acordo com a reivindicação 33, caracterizadopelo fato de que a doença é a osteoartrite.

52. Método de acordo com a reivindicação 40, caracterizadopelo fato de que a doença é a osteoartrite.