BRPI0612745A2 - composições farmacêuticas estáveis, tamponadas que incluem peptìdeos tipo motilina - Google Patents

Abstract

COMPOSIçõES FARMACêUTICAS ESTáVEIS, TAMPONADAS QUE INCLUEM PEPTìDEOS TIPO MOTILINA. A presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica estável que inclui um peptídeo sintético tipo motilina em uma solução tampanada. A composição proporciona um peptídeo que permanece estável e retém substancialmente sua potência inicial durante armazenamento prolongado e após esterilização a vapor.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS ESTÁVEIS, TAMPONADAS QUE INCLUEM PEPTÍDEOS TIPO MOTILINA".

REFERÊNCIA CRUZADA AOS PEDIDOS RELACIONADOS

Este pedido reivindica o benefício de Pedido Provisório No. U.S.60/691.555, depositado em 17 de junho de 2005, cujo conteúdo está incor-porado à guisa de referência.

A presente invenção refere-se a composições farmacêuticas queincluem um peptídeo tipo motilina. Mais particularmente, a presente inven-ção refere-se a composições farmacêuticas que incluem um peptídeo tipomotilina que permanece estável e mantém sua potência e afinidade de liga-ção após períodos prolongados de armazenamento.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

O peptídeo motilina é um hormônio polipeptídeo linear gastroin-testinal, que estimula a atividade motora gastrointestinal em mamíferos. Amotilina exerce uma função no aumento de motilidade gástrica ao regular ocomplexo mioelétrico interdigestivo. A administração de motilina em indiví-duos humanos acelera o trânsito intestinal e aumenta o esvaziamento gástri-co [Christofides et al., Gastroenterology 76, 903-907 (1979)]. Estudos in vitromostraram que a motilina estimula contrações de faixas de músculo liso du-odenal e células do músculo liso gastrointestinal isoladas de ser humano ecoelho. A motilina foi indicada para estimular o esvaziamento de sólidos elíquidos em pacientes com gastroparesia diabética [Peeters et al., Gastroen-terology 100, A480 (1991)], e vem sendo usada para tratar pacientes comíleo paralítico causado por carcinoma do trato gastrointestinal [Meyer et al.,Med. Klin. 86, 515-517 (1991)].

Uma das desvantagens da motilina é sua meia-vida relativamen-te curta in vivo (Christofides, 1979, op. cit.], que torna necessário administraro hormônio por infusão contínua para induzir um efeito terapêutico. Em res-posta a esta desvantagem, peptídeos tipo motilina sintéticos, que imitam aatividade de motilina ao mesmo tempo em que têm estabilidade metabólicaaumentada, foram desenvolvidos. Estes peptídeos estão indicados e descri-tos no Pedido de patente U.S. Ne 5.422.341, incorporada aqui à guisa dereferência.

Os peptídeos tipo motilina sintéticos descritos no Pedido de pa-tente U.S. Nq 5.422.341 foram considerados eficazes na estimulação de ati-vidade gastrointestinal, e mostram estabilidade aumentada à biodegradaçãoem homogenatos de tecido de órgão relativos. Entretanto, conforme commotilina naturalmente ocorrente, os compostos sintéticos tipo motilina sãopotencialmente submetidos à degradação rápida do peptídeo devido à hidró-lise, oxidação, ou outros processos químicos antes da administração. A moti-Iina e compostos sintéticos tipo motilina em soluções que contêm baixasconcentrações podem ser instáveis durante o armazenamento, mesmoquando armazenados em recipientes vedados.

Sabe-se que certos peptídeos normalmente propensos à degra-dação durante o armazenamento podem ser estabilizados e, desta maneira,armazenados durante períodos prolongados sem perda de atividade biológi-ca, ao preparar o peptídeo como uma composição aquosa. Por exemplo, oPedido de patente U.S. Ne 5.482.931 descreve uma composição aquosa pa-ra administração de peptídeos tais como oxitocina, vasopressina e análogose derivados destes, que podem manter a estabilidade ao longo do tempo emtemperatura ambiente. A solução contém um tampão, um conservante deamina quaternária ou desinfetante e um agente de controle osmótico. Deacordo com o Pedido de patente U.S. N5 5.482.931, a composição peptídicaaquosa manteve o prazo de validade útil após algumas semanas de arma-zenamento em temperatura ambiente.

Outros exemplos de formulação peptídica aquosa estável sãodescritos no Pedido de patente U.S. Ne 5.916.582 e 6.068.850. Estes pedi-dos de patente descrevem formulações peptídicas aquosas de hormônioIiberador do hormônio Iuteneizante de alta concentração (LHRH), que podemser armazenadas em temperaturas elevadas (por exemplo, 37°C) durantelongos períodos de tempo.

Um exemplo de uma composição de motilina "estável" é descritoe EP 437,621 A1. As soluções aquosas de motilina e composições secadaspor congelamento mostraram estabilidade em uma solução em um pH de 4,0a 5,5. As motilinas descritas no presente documento incluíram motilina cani-na, motilina suína, motilina humana, e certos derivados de motilina (por e-xemplo, 13motilina suína-leucina). Estas motilinas e derivados de motilinaretiveram aproximadamente 94% de teor de motilina após 7 dias de armaze-namento a 60°C.

Embora a técnica anterior reconheça o efeito estabilizante decertas soluções sobre peptídeos selecionados, e EP 437,621 A1 sugira quea motilina nativa (comprimento total) pode ser preparada como composiçõessecadas por congelamento ou aquosas estáveis, os resultados proporciona-dos neste não prevêem o modo que outros derivados de motilina ou peptí-deos tipo motilina se comportam em soluções aquosas similares ou compo-sições liofilizadas. Isto se deve a certas diferenças na estrutura peptídica e apresença ou ausência de grupos funcionais carregados e de ácido/base paraum dado peptídeo que podem afetar significativamente a solubilidade,pH/perfil de solubilidade, ponto isoelétrico, e valores pKa, desta maneira tor-nando um peptídeo suficientemente diferente de outros peptídeos relaciona-dos. Conseqüentemente, uma pessoa não pode prever com certeza se umaformulação aquosa estável ou Iiofilizada de um derivado de motilina pode serpreparada.

Como descrito no Pedido de patente U.S. N9 5.422.341, os pep-tídeos tipo motilina são estruturalmente diferentes da motilina nativa. Estasdiferenças estruturais, que são descritas em mais detalhe abaixo, realizam adeterminação se o peptídeo tipo motilina pode manter sua estabilidade emuma solução aquosa ou Iiofilizada difícil.

Devido às vantagens descritas acima proporcionadas pelos pep-tídeos tipo motilina, poderia ser desejado proporcionar composições farma-cêuticas que incluem tais peptídeos tipo motilina. Também poderia ser dese-jado proporcionar composições que incluem tais peptídeos tipo motilina quepodem ser administrados em um paciente após armazenamento a longoprazo. Ademais, poderia ser desejado proporcionar composições que impe-dem substancialmente a degradação do peptídeo tipo motilina, porém quan-do são mantidos máximos níveis de potência do composto durante o períodode armazenamento.

Também poderia ser desejado proporcionar uma composição depeptídeo aquosa pronta para uso que permaneça estável (e mantenha a po-tência) após o armazenamento em condições de temperatura ambiente, bemcomo após a exposição a temperaturas elevadas, tal como, porém sem cará-ter Iimitativo1 a temperatura de esterilização a vapor. Também poderia serdesejado proporcionar tais peptídeos sintéticos tipo motilina como composi-ções aquosas em concentrações variadas, ou em uma forma liofilizada. Porfim, poderia ser desejado proporcionar uma composição que inclui um peptí-deo sintético tipo motilina que, se necessário, possa ser armazenado e per-maneça estável durante períodos prolongados de tempo em qualquer umdos vários recipientes diferentes.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Em um aspecto, a presente invenção se refere a composiçõesfarmacêuticas que compreendem aproximadamente 0,5 pg/ml a 100 mg/mlde um peptídeo sintético tipo motilina que possui não mais que 16 aminoáci-dos e a estrutura descrita abaixo. Tais composições incluem adicionalmente5 a 250 mM de um tampão, e possuem um pH entre 3 e 9 e uma osmolali-dade de aproximadamente 10 a 500 mOsm/kg.

Em um aspecto adicional, a presente invenção se refere a com-posições que incluem o peptídeo sintético tipo motilina que pode ser esterili-zado por esterilização a vapor a 120°-128°C onde o peptídeo retém pelomenos aproximadamente 95% de sua potência inicial.

Em um aspecto adicional, a presente invenção se refere a com-posições farmacêuticas prontas para uso que incluem o peptídeo sintéticotipo motilina onde o peptídeo pode ser armazenado durante pelo menos 18meses a 4o a 37°C e retém pelo menos aproximadamente 90% de sua po-tência inicial.

Ainda em um aspecto adicional, a presente invenção se refere acomposições que incluem um peptídeo sintético tipo motilina que possui aestrutura descrita abaixo e inclui não mais que 16 aminoácidos, onde a com-posição é proporcionada em uma forma concentrada que inclui uma quanti-dade selecionada de peptídeo e tampão por meio do qual mediante diluiçãoa composição aquosa inclui 0,5 pg/ml a 100 pg/ml do peptídeo, 10 a 100 mMde um tampão, que possui um pH entre 3 a 9 e uma osmolalidade de apro-ximadamente 10 a 500 mOsm/kg.

Ainda em um aspecto adicional, a presente invenção se refere acomposições Iiofilizadas que incluem um peptídeo sintético tipo motilina quepossui a estrutura como descrito abaixo e inclui não mais que 16 aminoáci-dos mediante reconstituição, a composição reconstituída inclui 0,5 pg/ml a100 pg/ml do peptídeo e possui um pH entre 3 a 9 e uma osmolalidade deaproximadamente 10 a 500 mOsm/kg. Opcionalmente, a composição tam-bém pode incluir 10 a 200 mM de um tampão.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

A Figura 1 é um gráfico que mostra a estabilidade do peptídeoem uma composição que concretiza a presente invenção em até 24 mesesde armazenamento.

A Figura 2 é um gráfico que mostra a estabilidade do peptídeoem uma composição que concretiza a presente invenção após a autoclava-gem.

A Figura 3 é um gráfico que mostra o perfil de estabilidade dopeptídeo sintético tipo motilina em uma concentração de 5 pg/ml em umacomposição que concretiza a presente invenção quando esta for armazena-da em um recipiente de vidro selecionado.

A Figura 4 é um gráfico que mostra o perfil de estabilidade dopeptídeo sintético tipo motilina em uma concentração de 30 pg/ml em umacomposição que concretiza a presente invenção quando esta for armazena-da em um recipiente de vidro selecionado.

A Figura 5 é um gráfico que mostra a estabilidade do peptídeoem uma composição que concretiza a presente invenção após o armazena-mento, onde a composição é liofilizada, armazenada em sua forma Iiofiliza-da, e subseqüentemente reconstituída.

DESCRIÇÃO DETALHADAAs composições farmacêuticas da presente invenção incluemum peptídeo sintético tipo motilina que pode ser eficaz no tratamento de dis-túrbios gastrointestinais tais como, porém sem caráter limitativo, íleo pós-operatório, gastroparesia diabética e íleo paralítico. As composições farma-cêuticas da presente invenção incluem um peptídeo sintético tipo motilina,ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, em um tampão selecionadoem uma concentração selecionada. As composições farmacêuticas possuemum pH e osmolalidade também selecionados para manter a estabilidade dopeptídeo durante um período prolongado de tempo.

As composições farmacêuticas da presente invenção permane-cem estáveis durante o armazenamento a longo prazo, tal como pelo menos12 meses, e de preferência pelo menos 18 meses, e até 24 meses em tem-peraturas comumente encontradas durante o armazenamento, tal como, po-rém sem caráter limitativo, entre aproximadamente 4°C e aproximadamente30°C. As composições farmacêuticas da presente invenção mostram degra-dação mínima e perda da potência de peptídeo durante tais períodos detempo e em tais temperaturas. O peptídeo tipo motilina das composiçõesfarmacêuticas da presente invenção permanece quimicamente estável e bio-logicamente potente mesmo após a exposição a temperaturas elevadas, talcomo, porém sem caráter limitativo, a temperatura de esterilização a vapor(por exemplo, 1210C). Como usado aqui, as referências à estabilidade sedirigem ao grau de degradação de peptídeo e potência residual do peptídeocomo determinado por análises biológicas.

Por exemplo, um peptídeo tipo motilina que é 95% não-degradado após o armazenamento, como determinado por análise de pure-za química, mantém 95% de potência em análises biológicas. Nas composi-ções farmacêuticas da presente invenção, o peptídeo tipo motilina não sedegrada substancialmente e permanece substancialmente potente e eficazno tratamento de distúrbios gastrointestinais.

As composições farmacêuticas da presente invenção incluem,em geral, uma quantidade selecionada de um polipeptídeo sintético tipo mo-tilina. O peptídeo sintético pode ser um peptídeo tipo motilina que é eficaz notratamento ou estimulação de atividade motora gastrointestinal.

Os peptídeos tipo motilina para estimular a atividade gastrointes-tinal mostram uma alta afinidade com o receptor de motilina. Exemplos detais polipeptídeos tipo motilina são descritos no Pedido de patente U.S. Ne5.422.341, anteriormente incorporada à guisa de referência, que mostra se-qüências de aminoácido de peptídeos sintéticos tipo motilina.

Em uma modalidade preferida da presente invenção, o peptídeosintético tipo motilina contido nas composições da presente invenção estátruncado. De preferência, o peptídeo sintético tipo motilina irá incluir tipica-mente não mais que 16 aminoácidos e, mais preferivelmente, 11 a 16 ami-noácidos.

Em uma modalidade, o peptídeo tipo motilina possui a seguinteestrutura:

<formula>formula see original document page 8</formula>

onde:

A é o L-estereoisômero de um aminoácido Iipofílico alifático;

B é L-prolina ou L-alanina;

D é o L-estereoisômero de um aminoácido lipofílico alifático;

E é o L-estereoisômero de um aminoácido aromático, lipofílico,alifático ou alicíclico;

F é o L-estereoisômero de um aminoácido aromático ou heteroa-romático;

G é glicina ou D-alanina;

H é ácido L-glutâmico ou L-glutamina;

I é L-glutamina;

J é selecionado do grupo que consiste em Z, Z-Leu, Z-Leu- Gln,Z-Leu-Gln-Glu, Z-Leu-Gln-Glu-Lys, onde Z é selecionado do grupo que con-siste em D-arginina, D- homoarginina, D-glutamina, D-asparagina e D-alanina;

R1 é alquila inferior ou alila;

R2 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquilainferior, propargila e alila;

R3 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquilainferior e alila;

R4 é cicloalquila ou arila que pode ser não-substituída ou substi-tuída por um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste emhalogênio, hidróxi e alcóxi inferior;

R5 é selecionado do grupo que consiste em -CH2 CONH2, gru-pos aminoalquila que contêm de 1 a 3 átomos de carbono, e grupos guanidi-noalquila que contêm 2 ou 3 átomos de carbono;

R6 é -COOH ou -CONH2; e

o símbolo * representa um átomo de carbono assimétrico quepode estar na configuração D ou L1 e cada grupo alquila inferior contém de 1a 4 átomos de carbono, com a condição que:

(i) R5 seja -CH2 CONH2 apenas quando J for Z-Leu.

Em uma modalidade preferida, o peptídeo contido na composi-ção farmacêutica da presente invenção pode incluir adicionalmente D-Arginina na posição 12. O peptídeo da presente invenção também pode in-cluir um N-terminal alquilado e, de preferência, trialquilado (por exemplo,metilado). Adicionalmente, o peptídeo sintético tipo motilina pode incluir umgrupo amida (-CONH2) na funcionalidade de ácido carboxílico C terminal dacadeia de polipeptídeo, que altera o perfil de pKa e a carga do peptídeo tipomotilina (como comparado com motilina nativa) e também acredita-se queafeta a solubilidade.

Uma modalidade particularmente preferida da presente invençãoinclui o agonista receptor de peptídeo sintético tipo motilina que inclui SEQID NO.: 1 e está representado pela seguinte fórmula:

(Me3N) +Phe-Val-Pro-lle-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-Gln-D-Arg-Leu-Lys-NH2, onde as seguintes abreviações representam os aminoácidos:Phe - L-FenilalaninaTyr - L-TirosinaLeu - L-LeucinaVal - L-ValinaPro - L-Prolina

Ile - L-IsoleucinaThr - L-TreoninaGly - GlicinaGlu - Ácido L-GlutâmicoGln-L-Glutamina

D-Arg - D-ArgininaLys - L-Lisina.

Os peptídeos tipo motilina, que incluem SEQ ID NO.: 1, são par-ticularmente eficazes e apresentam estabilidade aumentada, potência pro-Iongada e adequabilidade à esterilização por autoclavagem (descrita abai-xo), quando tais peptídeos forem incluídos nas composições da presenteinvenção. Também incluídos dentro do escopo da presente invenção estãotodos os sais farmaceuticamente aceitáveis do peptídeo identificado acima.

Outros peptídeos, que incluem aqueles descritos no Pedido depatente U.S. N9 5.422.341, que são substancialmente similares ao peptídeoque incluem SEQ ID NO.: 1 descrito acima, também podem apresentar esta-bilidade aumentada nas composições da presente invenção. Estes podemincluir, por exemplo, outros peptídeos sintéticos tipo motilina descritos nospedidos de patente referidos que possuem homologia substancial (ou seja,mais de 50% e, de preferência, pelo menos 60% a 70%) com a seqüência N-terminal do peptídeo motilina humano.

O peptídeo tipo motilina contido nas composições da presenteinvenção é proporcionado em uma quantidade entre aproximadamente 0,5Mg/ml a 100 mg/ml. Mais preferivelmente, quando a composição for "prontapara uso", (ou seja, que não requer diluição ou reconstituição adicional) aquantidade de peptídeo tipo motilina pode estar entre aproximadamente 1pg/ml e 1 mg/ml, ainda mais preferivelmente 1 pg/ml a 50 pg/ml e tipicamen-te na faixa de 1 pg/ml a 30 pg/ml.

Devido à potência dos peptídeos, as composições de baixa con-centração podem ser vantajosas na administração controlada da quantidadedesejada dos peptídeos. Naturalmente, uma composição mais concentradado peptídeo, que ainda concretiza a presente invenção, pode ser diluída pa-ra produzir uma solução para administração conveniente.

Em uma modalidade, quando a composição for proporcionadaem uma forma "pronta para uso", o peptídeo tipo motilina é dissolvido emuma solução tampão para proporcionar uma composição aquosa. O tampãoé selecionado para manter o pH da composição farmacêutica entre aproxi-madamente 3 e 9, em tal pH o peptídeo mostra estabilidade substancialmen-te aumentada e retenção de potência. Mais preferivelmente, o pH das com-posições farmacêuticas está entre aproximadamente 4 e 6, mais preferivel-mente 4,5 e 5,5 e, mais preferivelmente, entre aproximadamente 4,8 a 5,2.

Nestes níveis de pH, o peptídeo de SEQ. ID. 1, um exemplo preferido de umpeptídeo tipo motilina, mostra apenas degradação mínima durante o arma-zenamento. (O pH preferido da composição também pode ser determinado,em parte, baseado na possibilidade de a composição ser preparada comouma composição aquosa ou uma formulação liofilizada, discutida abaixo).

As soluções tampão adequadas para uso com as composiçõesfarmacêuticas da presente invenção incluem tampões tais como, tampõesacetato de sódio/ácido acético, hidrogênio fosfato de sódio e citrato de só-dio/ácido cítrico. Outros sistemas de tampão conhecidos pelo versado natécnica, tais como, porém sem caráter limitativo, tartarato, succinato, TRIS,histidina e glicina, também podem proporcionar tamponamento adequadodas composições dentro da faixa de pH identificada acima.

Como indicado acima, em uma modalidade, o tampão acetato desódio/ácido acético é combinado com o peptídeo tipo motilina para propor-cionar uma composição aquosa. Quando proporcionado como uma soluçãopronta para uso, a concentração do tampão na composição farmacêuticapode estar entre 5 e 250 mM e, mais preferivelmente, entre 5 e 50 mM, comuma concentração de aproximadamente 5 a 25 mM considerada a mais pre-ferida em muitas modalidades, para atingir e manter o pH preferido.

Quando a composição for proporcionada como uma soluçãoconcentrada que requer diluição, a concentração de tampão pode ser signifi-cativamente maior, tal como, porém sem caráter limitativo, até 10 vezesmaior ou até 2 a 3 M. (Em tais soluções concentradas, a concentração depeptídeo também será correspondentemente maior). As composições con-centradas são então diluídas com um diluente para chegar na concentraçãoe quantidades preferidas de tampão (por exemplo, 5 a 250 mM) e peptídeos(por exemplo, 1 pg/ml a 100 Mg/ml) em uma tonicidade adequada para ad-ministração. Os diluentes farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem,porém sem caráter limitativo, água estéril, solução de cloreto de sódio estéril,soluções estéreis de dextrose (por exemplo, 5%) e outros açúcares, e similares.

As composições farmacêuticas aquosas da presente invençãopodem ser tanto hipotônicas, substancialmente isotônicas como hipertôni-cas, que possuem uma osmolalidade entre 10 a 500 mOsm. Mais preferi-velmente, entretanto, a composição é isotônica, ou suavemente hipotônicaou suavemente hipertônica, embora as composições hipotônicas com umaosmolalidade abaixo de 100 mOsm e ainda abaixo de 50 mOsm tambémpossam ser eficazes. Tipicamente, entretanto, a tonicidade da composiçãofarmacêutica pode estar entre 270 a 320 mOsm. A tonicidade da composi-ção farmacêutica pode ser ajustada utilizando cloreto de sódio (NaCI) ououtros aditivos ajustadores de tonicidade tais como, glicerina, manitol, saca-rose e outros açúcares reduzidos, ou outros agentes conhecidos pelo versa-do na técnica, se necessário.

A Tabela I, abaixo, resume os constituintes e condições preferi-das das composições farmacêuticas da presente invenção em formas prontapara uso e concentrada.

Tabela I

<table>table see original document page 12</column></row><table>Tabela I

<table>table see original document page 13</column></row><table>

Em uma modalidade pronta para uso preferida, as composiçõesfarmacêuticas aquosas da presente invenção incluem 1 pg/ml a 100 pg/mldo peptídeo sintético tipo motilina de SEQ. ID. No. 1 em aproximadamente10 mM de tampão acetato de sódio/ácido acético em um pH de aproxima-damente 4,8 a 5,2 e uma osmolaridade de aproximadamente 300±20 mOsm.

Além das composições aquosas, prontas para uso ou concen-tradas que requerem diluição, a composição da presente invenção tambémpode ser armazenada em uma forma Iiofilizada (secada por congelamento).A composição, em sua forma liofilizada, pode incluir as quantidades relativasde peptídeo e tampão estabelecidas na Tabela I acima (bem como outrosagentes). Será avaliado que quando a composição foi armazenada em umaforma liofilizada, a administração da composição pode ocorrer imediatamen-te mediante reconstituição, tornando a estabilidade de armazenamento alongo prazo da composição reconstituída menos crucial, desta maneira, apresença de um tampão, opcional. Em qualquer caso, em uma modalidadeda formulação liofilizada, o tampão opcional pode ser citrato/ácido cítrico emum pH preferido de aproximadamente 4,7 e mais preferivelmente, 6,0. Ade-mais, a formulação liofilizada pode incluir adicionalmente um ou mais agen-tes de volume, porém sem caráter limitativo, sacarose, manitol e glicina e/oucombinações destes. Os agentes de volume podem estar incluídos em umaconcentração de 0,5 a 15% p/v.

As composições farmacêuticas aquosas da presente invençãoproporcionam benefícios anteriormente desconhecidos. O peptídeo tipo moti-lina de composições farmacêuticas da presente invenção permanece estávelquando armazenado sobre uma ampla faixa de temperaturas durante perío-dos prolongados de tempo. Por exemplo, quando armazenado em tempera-tura ambiente ou em sua temperatura de armazenamento inferior preferidade 4°C a 5°C, a estabilidade substancial é mantida durante períodos signifi-cativos de tempo. Por exemplo, em uma temperatura de armazenamento deaproximadamente 25°C, o peptídeo contido na composição da presente in-venção permanece estável durante pelo menos 12 meses, e mais preferi-velmente pelo menos aproximadamente 18 meses e, ainda mais preferivel-mente, até e ainda além de aproximadamente 24 meses, retendo uma po-tência de 90% ou mais como mostrado, por exemplo, na Figura 1. Em umatemperatura de armazenamento de 5°C, o armazenamento apenas com de-gradação mínima (e uma potência de pelo menos 90 a 95%) de até pelomenos 18 meses é regularmente observado.

Uma vantagem adicional da composição farmacêutica da pre-sente invenção é sua estabilidade peptídica quando a composição for sub-metida a temperaturas elevadas tal como a temperatura de esterilização avapor. Muitos peptídeos são inerentemente instáveis e, quando submetidosao calor, são conhecidos por se degradarem muito rapidamente, tipicamenteem poucos minutos ou menos. Ao contrário, em composições da presenteinvenção, o peptídeo mantém substancialmente sua estabilidade (ou seja,permanece substancialmente não-degrado e retém uma porcentagem subs-tancial de sua potência inicial), mesmo após a composição ser (1) submetidaà esterilização a vapor (durante pelo menos 10 minutos e até 60 minutos emtemperaturas de aproximadamente IOO0C a 128°C e tipicamente 1210C), e(2) subseqüentemente armazenada em um recipiente adequado (descritoabaixo) em temperaturas inferiores tipicamente encontradas por uma com-posição farmacêutica, tal como cerca de 4°C a 5°C até cerca de 25°C. Comomostrado na Figura 2 e descrito no Exemplo 1 abaixo, em amostras de umacomposição farmacêutica da presente invenção que foram submetidas à es-terilização a vapor em um recipiente de vidro Tipo I, e subseqüentementearmazenadas em tal recipiente, o peptídeo reteve uma porcentagem signifi-cativa de sua potência inicial (e afinidade de ligação) após períodos prolon-gados de armazenamento a 5°C, 25°C, 40°C, e ainda a 55°C.

A prevenção da degradação do peptídeo e, desse modo, reten-ção de potência e afinidade de ligação podem ser adicionalmente aumenta-das ao armazenar as composições da presente invenção em um recipienteadequado. Embora muitos tipos diferentes de vidro e alguns plásticos te-nham provado ser satisfatórios, para armazenamento a longo prazo, os fras-cos de silício tratados a vapor são preferidos. Tais frascos de silício tratadosa vapor Tipo 1 Plus estão disponíveis, por exemplo, junto a Schott of Leba-non, Pennsylvania, sob o nome de produto frascos cobertos com sílica S-chott Tipo 1 Plus. Outros recipientes de armazenamento adequados incluemfrascos Tipo 1 USP, ampola de vidro Tipo I e seringas de vidro pré-embaladas.

Alguns plásticos também provaram ser eficazes para auxiliar naestabilização da composição peptídica. Sob este aspecto, os plásticos prefe-ridos são copolímeros de olefina cíclicos, disponíveis, por exemplo, junto aWest Pharmaceuticals sob o nome de produto frascos de resina CZ, ou juntoa Schott sob o nome de produto frascos TopPac, ou junto a Alcan packagingsob o nome de produto frascos de soro Ticona Topas. As composições dapresente invenção também podem ser armazenadas em PVC, bem comosacos flexíveis de não-PVC. Quando armazenadas nos recipientes de vidroou plástico descritos acima, os tempos de armazenamento descritos acimanas temperaturas de armazenamento descritas acima podem ser atingidos,embora durante períodos de armazenamento de pelo menos 18 meses,frascos Tipo I Plus (silício tratado a vapor) e ampolas de vidro Tipo I Plussão preferidos. Como mostrado, por exemplo nas Figuras 3 e 4, o armaze-namento de uma composição aquosa da presente invenção que incluiu a-proximadamente 5 pg/ml (Figura 3) ou 30 pg/ml (Figura 4) do peptídeo sinté-tico tipo motilina de seqüência SEQ ID 1 em frascos Schott Tipo 1 mostrouestabilidade (e manutenção de altos níveis de potência) durante diversosmeses quando armazenada em temperaturas de 5°C a 55°C. Será avaliadopelo versado na técnica que a estabilidade medida de composições farma-cêuticas em temperaturas elevadas, tal como 40°C ou mais, pode servir co-mo a base de previsão de estabilidade durante períodos mais longos emtemperaturas de armazenamento típicas, tal como 20°-25°C ou 4°-8°C, porexemplo. Tais estudos de "armazenamento acelerado" são comuns no cam-po da presente invenção.Exemplo 1

Estabilidade de Peptídeo tipo Motilina após Autoclavaaem e Armazenamento

O peptídeo tipo motilina de SEQ ID NO. : 1 foi dissolvido emuma concentração de 30 pg/ml em 10 mM de tampão acetato de sódio, pH5,0. As amostras da solução peptídica armazenadas em frascos de vidroTipo I foram autoclavadas a 1210C durante 15 minutos e as amostras auto-clavadas foram incubadas a 5°C, 25°C, 40°C, ou 55°C. A potência do peptí-deo após o armazenamento em cada temperatura foi medida ao longo dotempo ao testar amostras após incubação de uma semana, duas semanas,três semanas, um mês e três meses. A potência foi determinada utilizandoHPLC para medir a quantidade de peptídeo não-degradado que permaneceem cada amostra.

Como mostrado na Figura 2, o peptídeo reteve mais de 90% depotência após a autoclavagem e armazenamento durante 3 meses mesmoem uma temperatura de armazenamento elevada de 55°C. A composiçãofarmacêutica da presente invenção mostra estabilidade excelente durante operíodo de armazenamento mesmo em temperatura de armazenamento ele-vada. Será avaliado pelo versado na técnica que os dados de estabilidadeobtidos em tais temperaturas elevadas (ou seja, condições de armazena-mento aceleradas) podem ser usados para prever a estabilidade em tempe-raturas de armazenamento inferiores mais típicas durante períodos prolon-gados de tempo.

Exemplo 2

Estabilidade de Formulações Liofilizadas de Composições de Peptídeo TipoMotilina

O peptídeo tipo motilina que inclui SEQ ID NO. : 1 foi dissolvidoem uma concentração de 30 pg/ml em 10 mM de tampão citrato e 1% p/v desacarose (agente de volume) em pH 6,0. A composição foi Iiofilizada por téc-nicas padrão e armazenada em um frasco de 20 ml a 40°C. A potência dopeptídeo tipo motilina foi medida nos intervalos de tempo indicados na Figu-ra 5, ao reconstituir a composição em água. A potência foi determinada utili-zando HPLC para medir a quantidade de peptídeo não-degradado que per-manece em cada amostra. Como mostrado na Figura 5, o peptídeo tipo moti-lina Iiofilizado reteve um nível significativo de potência (ou seja, mais de90%) durante diversos meses. Resultados similares foram obtidos quando oagente de volume sacarose foi substituído por um agente de volume de0,04% p/v de glicina e 0,4% p/v de manitol combinado. Novamente, será a-valiado pelo versado na técnica que a estabilidade de composições farma-cêuticas em temperaturas elevadas, tal como 40°C como na Figura 5, podeservir como a base de previsão de estabilidade durante períodos mais lon-gos em temperaturas de armazenamento mais típicas, tal como aproxima-damente 20°C-25°C ou 4°C-8°C, por exemplo.

Se preparadas e armazenadas como uma solução aquosa tam-ponada, composição pronta para uso ou concentrada, ou Iiofilizada que ésubseqüentemente reconstituída, as composições farmacêuticas da presen-te invenção permanecem potentes durante o armazenamento durante perío-dos prolongados de tempo. A potência de peptídeo mantida em torno de 90a 100%, e em alguns casos, mais de 95% durante o armazenamento a 5, 25,40 e 55°C durante pelo menos 18 meses, torna a composição farmacêuticada presente invenção um meio preferido para a entrega terapêutica de pep-tídeos tipo motilina.

Embora a presente invenção seja descrita no contexto de suasmodalidades preferidas, inúmeras modificações em tais modalidades sãopossíveis sem que se abandone o espírito da presente invenção, que estáestabelecido nas reivindicações em anexo.LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA<110> Baxter International Inc.

<120> COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS ESTÁVEIS, TAMPONADAS QUE

INCLUEM PEPTÍDEOS TIPO MOTILINA<130> CPANA 6214-PCt

<150> US 11/196,326<151> 2005-08-04

<160> 1

<170> Patentln versão 3.3

<210> 1

<211> 14

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> Peptídeo relacionado a Motilina<220>

<221> misc_feature

<223> Sintetizado quimicamente

<220>

<221> M0D_RES

<222> C12)..C12)

<223> Xaa ^ D-arginina

<400> 1

Phe Val Pro Ile Phe Thr Tyr Gly Glu Leu Gln Xaa Leu Lys15 10

Claims (24)

1. Composição farmacêutica que compreende:(a) aproximadamente 0,5 pg/ml a 100 mg/ml de um peptídeosintético tipo motilina que possui não mais que 16 aminoácidos e possui aseguinte estrutura: <formula>formula see original document page 19</formula> em que:A é o L-estereoisômero de um aminoácido lipofílico alifático;B é L-prolina ou L-alanina;D é o L-estereoisômero de um aminoácido lipofílico alifático;E é o L-estereoisômero de um aminoácido aromático, lipofílico,alifático ou alicíclico;F é o L-estereoisômero de um aminoácido aromático ou heteroa-romático;G é glicina ou D-alanina;H é ácido L-glutâmico ou L-glutamina;I é L-glutamina ou L-alanina;J é selecionado do grupo que consiste em Z1 Z-Leu1 Z-Leu- Gln1Z-Leu-GIn-GIu, Z-Leu-Gln-Glu-Lys, em que Z é selecionado do grupo queconsiste em D-arginina, D- homoarginina, D-glutamina, D-asparagina e D-alanina;R1 é alquila inferior ou alila;R2 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, aquilainferior, propargil e alila;R3 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquilainferior e alila;R4 é cicloalquila ou arila que pode ser não-substituída ou substi-tuída por um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste emhalogênio, hidróxi e alcóxi inferior;R5 é selecionado do grupo que consiste em -CH2 CONH2, gru-pos aminoalquila que contêm de 1 a 3 átomos de carbono, e grupos guanidi-noalquila que contêm 2 ou 3 átomos de carbono;R6 é -COOH ou -CONH2; eo símbolo * representa um átomo de carbono assimétrico quepode estar na configuração D ou L1 e cada grupo alquila inferior contém de 1a 4 átomos de carbono, com a condição que:(i) R5 seja -CH2 CONH2 apenas quando J for Z-Leu ou Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly;(b) 5 a 250 mM de um tampão,sendo que a dita composição possui um pH entre 3 e 9 e possuiuma osmolalidade de aproximadamente 10 a 500 mOsm/kg.

2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, em que o ditopeptídeo sintético tipo motilina possui 14 aminoácidos.

3. Composição, de acordo com a reivindicação 1, em que o ditopeptídeo sintético tipo motilina é (Me3N) +Phe-Val-Pro-lle-Phe-Thr-Tyr-Gly-Glu-Leu-GIn-D-Arg-Leu-Lys-NH2.

4. Composição, de acordo com a reivindicação 1, em que o ami-noácido na posição 12 de dito peptídeo tipo motilina é D-Arginina.

5. Composição, de acordo com a reivindicação 1, em que o ditotampão compreende acetato de sódio/ácido acético.

6. Composição, de acordo com a reivindicação 1, que compreende:(a) entre 1 pg/ml e 100 pg/ml microgramas por mililitro do ditopeptídeo sintético tipo motilina; e(b) 10 a 100 mM de dito tampão, sendo que a dita composiçãopossui um pH de aproximadamente 4,5 a 5,5.

7. Composição, de acordo com a reivindicação 1, em que o ditopeptídeo sintético tipo motilina permanece estável durante pelo menos 18meses quando armazenado a 4°C a 5°C.

8. Composição, de acordo com a reivindicação 1, que foi esterili-zada por autoclavagem em uma temperatura de aproximadamente 1210C a 128°C.

9. Composição, de acordo com a reivindicação 6, em que a ditacomposição pode ser armazenada em um frasco Tipo I a 55°C durante pelomenos 3 meses e retém pelo menos 90% de sua potência peptídica.

10. Composição farmacêutica aquosa, que compreende um pep-tídeo sintético tipo motilina que possui não mais que 16 aminoácidos em umtampão acetato de sódio/ácido acético esterilizado por esterilização a vapora 120-128°C em que o dito peptídeo retém pelo menos aproximadamente-95% de sua potência inicial após a dita esterilização.

11. Composição, de acordo com a reivindicação 10, em que adita composição pode ser armazenada a uma temperatura de até 55°C du-rante até aproximadamente 3 meses e retém pelo menos 90% de sua potên-cia inicial após o dito armazenamento.

12. Composição farmacêutica aquosa estável, que compreendeum peptídeo sintético tipo motilina que possui não mais que 16 aminoácidosem um tampão acetato de sódio/ácido acético, em que a dita composiçãopode ser armazenada durante pelo menos 9 meses a aproximadamente 5°Ca 37°C e retém pelo menos aproximadamente 90% de sua potência inicial.

13. Composição, de acordo com a reivindicação 12, que inclui 1μς/ιτιΙ a 100 μς/ιτιΙ de dito peptídeo tipo motilina em aproximadamente 10mM de dito tampão.

14. Composição, de acordo com a reivindicação 1, preparada apartir de uma formulação Iiofilizada de dita composição que foi reconstituída,sendo que a dita composição inclui adicionalmente um agente de volume.

15. Composição, de acordo com a reivindicação 14, que incluiadicionalmente agentes de volume selecionados do grupo que consiste emsacarose, glicina e manitol.

16. Composição, de acordo com a reivindicação 15, em que odito agente de volume está presente em uma concentração de 1% p/v oumenos.

17. Composição, de acordo com a reivindicação 15, que com-preende adicionalmente um agente de volume que inclui a combinação deglicina e manitol.

18. Composição, de acordo com a reivindicação 12, armazenadaem um frasco coberto com sílica tratado a vapor.

19. Composição, de acordo com a reivindicação 12, armazenadaem um recipiente plástico feito de um material que compreende um copolí-mero olefina cíclico.

20. Composição, de acordo com a reivindicação 1, preparada apartir de uma solução concentrada do dito peptídeo sintético tipo motilina edito tampão que foi diluído.

21. Composição, de acordo com a reivindicação 20, em que adita solução concentrada inclui até 10 vezes a quantidade do dito peptídeo edito tampão.

22. Composição farmacêutica aquosa concentrada, que inclui:a) uma quantidade selecionada de um peptídeo sintético tipomotilina que possui não mais que 16 aminoácidos e possui a estrutura: <formula>formula see original document page 22</formula> em que:A é o L-estereoisômero de um aminoácido lipofílico alifático;B é L-prolina ou L-alanina;D é o L-estereoisômero de um aminoácido lipofílico alifático;E é o L-estereoisômero de um aminoácido aromático, lipofílico,alifático ou alicíclico;F é o L-estereoisômero de um aminoácido aromático ou heteroa-romático;G é glicina ou D-alanina;H é ácido L-glutâmico ou L-glutamina;I é L-glutamina ou L-alanina;J é selecionado do grupo que consiste em Z, Z-Leu1 Z-Leu- Gln1Z-Leu-Gln-Glu1 Z-Leu-Gln-Glu-Lys1 em que Z é selecionado do grupo queconsiste em D-arginina, D- homoarginina, D-glutamina, D-asparagina e D-alanina;R1 é alquila inferior ou alila;R2 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, aquilainferior, propargila e alila;R3 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquilainferior e alila;R4 é cicloalquila ou arila que pode ser não-substituída ou substi-tuída por um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste emhalogênio, hidróxi e alcóxi inferior;R5 é selecionado do grupo que consiste em -CH2 CONH2, gru-pos aminoalquila que contêm de 1 a 3 átomos de carbono, e grupos guanidi-noalquila que contêm 2 ou 3 átomos de carbono;R6 é -COOH ou -CONH2; eo símbolo * representa um átomo de carbono assimétrico quepode estar na configuração D ou L, e cada grupo alquila inferior contém de 1a 4 átomos de carbono, com a condição que:(i) R5 seja -CH2 CONH2 apenas quando J for Z-Leu ou Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly;e(b) uma quantidade selecionada de um tampão,que mediante diluição, a dita composição farmacêutica aquosadiluída compreende:i) 0,5 μg/ml a 100 μg/ml do dito peptídeo;ii) 10 a 100 mM do dito tampão;iii) possui um pH entre 3 a 9 e uma osmolalidade de aproxima-damente 10 a 500 mOsm/kg.

23.

Composição farmacêutica liofilizada, que inclui:a) um peptídeo sintético tipo motilina que possui não mais que-16 aminoácidos que possui a estrutura: <formula>formula see original document page 24</formula> em que:A é o L-estereoisômero de um aminoácido lipofílico alifático;B é L-prolina ou L-alanina;D é o L-estereoisômero de um aminoácido lipofílico alifático;E é o L-estereoisômero de um aminoácido aromático, lipofílico,alifático ou alicíclico;F é o L-estereoisômero de um aminoácido aromático ou heteroa-romático;G é glicina ou D-alanina;H é ácido L-glutâmico ou L-glutamina;I é L-glutamina ou L-alanina;J é selecionado do grupo que consiste em Z, Z-Leu1 Z-Leu- Gln,Z-Leu-Gln-Glu, Z-Leu-Gln-Glu-Lys, em que Z é selecionado do grupo queconsiste em D-arginina, D- homoarginina, D-glutamina, D-asparagina e D-alanina;Ri é alquila inferior ou alila;R2 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, aquilainferior, propargila e alila;R3 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquilainferior e alila;R4 é cicloalquila ou arila que pode ser não-substituída ou substi-tuída por um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste emhalogênio, hidróxi e alcóxi inferior;R5 é selecionado do grupo que consiste em -CH2 CONH2, gru-pos aminoalquila que contêm de 1 a 3 átomos de carbono, e grupos guanidi-noalquila que contêm 2 ou 3 átomos de carbono;R6 é -COOH ou -CONH2; eo símbolo * representa um átomo de carbono assimétrico quepode estar na configuração D ou L, e cada grupo alquila inferior contém de 1a 4 átomos de carbono, com a condição que:(i) R5 seja -CH2 CONH2 apenas quando J for Z-Leu ou Z-Leu-Gln-Glu-Lys-Glu-Arg-Asn-Lys-Gly;mediante reconstituição, a dita composição aquosa reconstituídacompreende:i) 0,5 μg/ml a 100 μg/ml do dito peptídeo;ii) 10 a 200 mM de um tampão;iii) possui um pH entre 3 a 9 e uma osmolalidade de aproxima-damente 10 a 500 mOsm/kg.