KR20090130044A - Ｇｈｒｈ 분자의 약제 제형 - Google Patents

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KR20090130044A
KR20090130044A KR1020097021319A KR20097021319A KR20090130044A KR 20090130044 A KR20090130044 A KR 20090130044A KR 1020097021319 A KR1020097021319 A KR 1020097021319A KR 20097021319 A KR20097021319 A KR 20097021319A KR 20090130044 A KR20090130044 A KR 20090130044A
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trans
ghrh
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헬렌 러프리
병 창
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쎄러테크놀로지스 인코포레이티드
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Abstract

활성 성분으로서 GHRH 분자, 및 더욱 특히 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드를 포함하는 안정화된 고체 및 액체 약제 제형이 기술된다. 제형은 음이온 계면활성제 및 비환원당을 포함하며, pH가 약 4.0 내지 약 7.5이다. 또한, 다양한 병태를 치료하기 위한 제형의 용도, 제형의 제조 방법 및 이를 함유 키트에 대해서 기술된다.

Description

ＧＨＲＨ 분자의 약제 제형 {PHARMACEUTICAL FORMULATIONS OF GHRH MOLECULES}
관련 출원에 대한 상호-참조
본 출원은 35 U.S.C. § 119 (e)에 따라 그 전체가 본원에 참조로서 통합된 2007년 4월 4일 출원된 미국 가출원 일련번호 60/909,985의 권리를 주장한다.
발명의 분야
본 발명은 GHRH 분자의 액체 약제 제형 및 고체 약제 제형을 포함하는 약제 제형에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 이러한 GHRH 분자의 약제 제형을 제조하는 방법 및 이의 용도에 관한 것이다.
성장 호르몬 (GH) 또는 소마토트로핀(somatotropin)은 뇌하수체에 의해 분비된다. 이의 활성은 어린 유기체의 선형 성장 및 또한 이의 성인 상태에서 완전성을 유지하는데 기본이 된다. GH는 성장 인자 (인슐린형 성장 인자-I 또는 IGF-I) 또는 이들의 수용체 (말초 성장 인자 또는 EGF)의 합성을 자극함으로써 말초 기관에 직접적으로 또는 간접적으로 작용한다. GH의 직접 작용은 항-인슐린으로서 언 급된 유형이며, 이는 지방 조직의 수준에서 지방분해를 지지한다. IGF-I (소마토메딘 C) 합성 및 분비에 대한 이의 작용을 통해, GH는 근육 및 피부를 포함하는 다중 말초 기관에서 연골과 뼈의 성장 (구조적 성장), 단백질 합성 및 세포 증식을 자극한다. 성인에서, GH는 단백질 합성대사 상태의 유지에 관여하며, 트라우마 후 조직 재생 현상에 주요 역할을 수행한다.
뇌하수체에 의한 GH의 분비는 두개의 시상하부 펩티드, 소마토스타틴 및 성장 호르몬 방출 호르몬 (GHRH; 또는 성장 호르몬 방출 인자 또는 GRF로서 공지됨)에 의해 주로 조종된다. 소마스타틴은 이의 분비를 억제하는 반면, GHRH는 이를 자극한다.
모든 공지된 GHRH 분자중에서, 본 발명에 규정된 바와 같은 소수성 테일을 함유하는 GHRH 유사체는 생물학적 환경에서 더 높은 단백질분해 안정성을 갖는 것으로 나타난 인간 GHRH의 변형된 버젼 또는 유사체로 구성되며, 그 결과, 이들 유사체는 더 긴 기간의 작용을 나타내어 성장 호르몬 분비 및 인슐린형 성장 인자-1 합성을 향상시키는 것으로 입증되었다 (U.S. 특허 5,861,379 및 5,939,386). 천연 GHRH (1-44) 아미드와 비교하여 이들의 뛰어난 혈장 안정성 및 약리학적 특성으로 인해, 이러한 GHRH 유사체는 여러 의학적 병태, 예를 들어, 낭성 섬유증 및 COPD와 관련된 소모(wasting) (국제 출원 WO 05/037307), 고관절 골절후 회복, 노인층의 허약함, 향상된 면역 반응 및 HIV-관련 지방이영양증 (U.S. 특허 7,316,997)에서의 치료학적 효능에 기여하는 것으로 나타났다.
실제로, 약제학적 대상의 펩티드 또는 단백질의 물리적 및 화학적 고유성을 이의 제조 공정, 후속 조작 및 저장 동안 보존하는 것은 매우 중요하다. 생물학적 효능 및 효력의 손실은 물리적 (예를 들어, 응집, 변성, 이차 및 더 고등의 배열 구조의 변화) 및 화학적 (예를 들어, 개별 아미노산의 산화, 탈아미드화, 이성질체화) 고유성의 변화와 관련있다.
단백질 및 펩티드는 특히, 증가된 온도에서 분해되는 경향이 있다. 저온은 일반적으로 펩티드/단백질 분해를 저하시킨다. 그러나, 단백질을 실온 즉, 약 20 내지 25℃에서 저장하는 것이 더욱 경제적이다. 일반적으로, 제형 안정도는 실온 (약 20℃ 내지 약 25℃) 또는 냉장온도 (약 2℃ 내지 약 8℃)로 저장하는 것이 바람직하다.
또한, 제조 동안 조작, 장기간 저장 및 투여전의 조작과 관련된 안정성 문제가 있다. 장기간 저장은 동결, 동결-건조(freeze-drying)(동결건조(lyophilization)), 건조 또는 탈수화에 의해 달성될 수 있다. 생물학적 단백질의 이러한 장기간 저장 방법은 천연 구조의 분해, 응집, 변성, 언폴딩(unfolding) 및/또는 비특이적 흡착을 억제한다. 그러나, 동결건조 공정 자체가 어렵다. 액체의 부피가 동결 과정 동안 저하됨에 따라, 유효 염 농도가 극적으로 증가하며, 이는 단백질을 변성시키고, 재구성시 유효 치료 활성을 저하시킨다. 또한, 동결 과정 동안 결빙의 형성은 변성을 초래할 수 있으며, 또한, 이용가능한 생활성 펩티드 또는 단백질의 유효량을 저하시킬 수 있다.
일부 변성 문제 예컨대, 단백질분해, 효소 분해, 산화, pH-관련 변성 등은 특정 아미노산 또는 일부 아미노산 서열에 특이적이다. GHRH의 아미노산 서열은 액체 상태에서 장기간 저장시, 동결건조 동안 또는 다른 고체화 처리 과정동안 변성되는 것으로 공지되어 있다.
따라서, GHRH 분자의 개선된 제형을 제공하고, 장기간 저장후 이의 생활성의 보유를 개선시킬 필요가 있다.
본 발명은 GHRH 분자의 약제 제형 또는 조성물, 이의 제조 방법 및 이의 용도에 관한 것이다.
따라서, 본 양태에서, 본 발명은 GHRH 분자, 음이온성 계면활성제 및 비환원 당을 포함하는 건조된 또는 고체 약제 제형에 관한 것이다. 구체예에서, 제형은 물중에 현탁시 측정할 경우 약 4.0 내지 약 7.5의 pH를 갖는다. 추가의 구체예에서, 제형은 물중에 현탁액시 측정할 경우 약 4.0 내지 약 7.0의 pH를 갖는다. 구체예에서, 고체 제형은 동결건조된 제형이다. 구체예에서, 고체 제형은 탈수화된 제형이다. 본 발명에 있어서, 용어 "고체"는 비제한적으로, 동결건조된, 탈수화된, 동결된 및 기타 고체 형태를 포함한다.
본 발명은 또한, GHRH 분자, 음이온성 계면활성제 및 비환원 당을 포함하며, pH가 약 4.0 내지 7.5인 액체 약제 제형에 관한 것이다. 구체예에서, 제형의 pH는 약 4.0 내지 약 7.0이다.
본 발명은 또한, 상기 언급된 액체 제형을 동결건조시키거나 탈수화시킴으로써 제조된 동결건조된 또는 탈수화된 약제 제형에 관한 것이다.
본 발명의 액체 약제 제형은 동결건조 또는 탈수화에 적합하며, 제형이 동결건조, 건조 또는 고체 형태로 장기간 동안 예컨대, 1주 이상, 2주 이상, 3주 이상, 1달 이상, 2달 이상, 3달 이상, 4달 이상 또는 6달 이상 동안 저장되는 경우 높은 안정도의 GHRH 분자를 제공한다. 본 발명의 액체 약제 제형은 동결건조 또는 탈수화에 적합하며, 제형이 다양한 온도 조건 예컨대, 약 2℃ 내지 약 8℃, 약 20℃ 내지 약 25℃, 약 40℃ 또는 약 40℃ 미만에서 동결건조/건조된 형태로 저장되는 경우 더 높은 안정도의 GHRH 분자를 제공한다.
구체예에 따라, GHRH 분자는 하기 구조식 A의 GHRH 유사체이다:
X-GHRH 펩티드 (A)
상기 식에서,
GHRH 펩티드는 하기 구조식 B의 펩티드이며;
A1-A2-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-A8-Ser-Tyr-Arg-Lys-A13-Leu-A15-Gln-Leu-A18-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-A24-A25-Ile-A27-A28-Arg-A30-RO (B) (SEQ ID NO:1)
여기서,
A1은 Tyr 또는 His이며;
A2는 Val 또는 Ala이며;
A8은 Asn 또는 Ser이며;
A13은 Val 또는 Ile이며;
A15는 Ala 또는 Gly이며;
A18은 Ser 또는 Tyr이며;
A24는 Gln 또는 His이며;
A25는 Asp 또는 Glu이며;
A27은 Met, Ile 또는 Nle이며;
A28은 Ser 또는 Asn이며;
A30은 결합 또는 1 내지 15개 잔기의 아미노산 서열이고;
R0은 NH2 또는 NH-(CH2)n-CONH2이며, 여기서, n=1 내지 12이며;
X는 펩티드의 N-말단에 아미드 결합을 통해 고정된 소수성 테일 (tail)이며, 이러한 소수성 테일은 5 내지 7개 원자의 주쇄(backbone)로 규정되며;
여기서, 상기 주쇄는 C1-6 알킬, C3-6 시클로알킬, 또는 C6-12 아릴로 치환될 수 있으며, 상기 주쇄는 주쇄의 2개 이상의 원자에 연결된 하나 이상의 고정된 부분을 포함하며; 상기 부분은 이중 결합, 삼중 결합, 포화되거나 불포화된 C3-9 시클로알킬, 또는 C6-12 아릴이다.
추가의 구체예에서, 화학식 A의 X는
Figure 112009062555578-PCT00001
1 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스
Figure 112009062555578-PCT00002
2 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
Figure 112009062555578-PCT00003
3 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스, 둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
Figure 112009062555578-PCT00004
4 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스, 둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
Figure 112009062555578-PCT00005
5 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스 (R ≠H인 경우)
Figure 112009062555578-PCT00006
6 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스, 둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
Figure 112009062555578-PCT00007
7 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스, (R ≠H인 경우)
둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
Figure 112009062555578-PCT00008
8 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스, 둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
Figure 112009062555578-PCT00009
9 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스, (R ≠H인 경우)
둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
Figure 112009062555578-PCT00010
10 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스, (R ≠H인 경우)
Figure 112009062555578-PCT00011
11 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
Figure 112009062555578-PCT00012
12 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
Figure 112009062555578-PCT00013
13 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3) 또는
Figure 112009062555578-PCT00014
14이다.
구체예에서, 화학식 B의 A30은
(a) 결합;
(b) 천연 GHRH 펩티드의 위치 30-44에 상응하는 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 6); 및
(c) SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열의 C-말단으로부터 1-14개 아미노산이 결실된 아미노산 서열이다.
구체예에서, GHRH 펩티드는
(a) SEQ ID NO: 2 또는 3의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드;
(b) SEQ ID NO: 4 또는 5의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드; 또는
(c) (a)의 폴리펩티드의 C-말단으로부터의 1 내지 14개 아미노산이 결실된 폴리펩티드이다.
구체예에서, GHRH 펩티드는
(a) SEQ ID NO: 2 또는 3의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드;
(b) SEQ ID NO: 4 또는 5의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드; 또는
(c) (a)의 폴리펩티드의 C-말단으로부터의 1 내지 14개 아미노산이 결실된 폴리펩티드이다.
또 다른 구체예에서, GHRH 유사체는 (헥세노일 트랜스-3)hGHRH(1-44)NH2 (SEQ ID NO: 7)이다.
구체예에서, 상기 언급된 고체 제형은 동결건조된 제형이다.
상기 언급된 액체 제형중의 GHRH 분자의 농도는 특정 범위로 제한되지 않는다. 예를 들어, 상기 언급된 액체 제형중의 GHRH 분자의 농도는 약 1 내지 약 20mg/ml (예를 들어, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 또는 20mg/ml)일 수 있다.
본 발명의 구체예에 있어서, 고체 제형 및/또는 액체 제형의 비환원 당은 트레할로오스 또는 수크로오스이다. 비환원 당은 바람직하게는, 안정화에 유효한 양으로 존재한다. 구체예에서, 비환원 당은 트레할로오스이다. 또 다른 구체예에서, 비환원 당은 수크로오스이다. 구체예에서, 비환원 당은 약 0.1 내지 약 5 % (w/w)의 농도로 존재한다. 추가의 구체예에서, 비환원 당은 약 2 % (w/w)의 농도로 존재한다. 비환원 당의 농도 및 본원에 기술된 하기 성분중 임의의 성분의 농도는 액체 제형중의 농도 또는 고체 제형의 현탁으로부터 수득된 용액중의 농도에 상응한다.
본 발명의 구체예에 있어서, 고체 제형 및/또는 액체 제형의 음이온 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 알킬 에스테르이다. 추가의 구체예에서, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 알킬 에스테르는 폴리소르베이트-20이다. 추가의 구체예에서, 음이온 계면활성제는 표면-관련 스트레스를 예방하는데 유효한 양으로 존재한다. 표면 관련 스트레스는 비제한적으로, 응집화, 침전화, 언폴딩 등을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 계면활성제는 약 0.001% (w/w) 내지 약 0.1% (w/w)의 농도로 존재한다. 추가의 구체예에서, 계면활성제는 약 0.01% (w/w)의 농도로 존재한다.
본 발명의 구체예에 있어서, 고체 제형 및/또는 액체 제형은 선택적으로 팽화제(bulking agent)를 추가로 포함한다. 구체예에서, 팽화제는 고체 제형을 현탁함으로써 수득된 용액 또는 액체 제형의 목적하는 장성(tonicity)을 제공하기에 효과적인 양으로 존재한다. 구체예에서, 벌트화제는 만니톨이다. 또 다른 구체예에서, 팽화제는 약 1 내지 약 10% (w/w)의 농도로 존재한다. 추가의 구체예에서, 팽화제는 약 4% (w/w)의 농도로 존재한다.
본 발명의 또 다른 구체예에 따르면, 고체 제형 및/또는 액체 제형은 선택적으로, 항-산화제를 추가로 포함한다. 구체예에서, 항산화제는 메티오닌이다. 구체예에서, 항산화제는 항산화에 유효한 양으로 존재한다. 또 다른 구체예에서, 항산화제는 약 0.1mM 내지 약 10mM의 농도로 존재한다. 추가의 구체예에서, 항산화제는 약 1mM의 농도로 존재한다.
본 발명의 구체예에 따르면, 고체 제형 및/또는 액체 제형에는 폴리에틸렌 글리콜이 실질적으로 존재하지 않는다. 추가의 구체예에서, 고체 제형 및/또는 액체 제형은 폴리에틸렌 글리콜이 존재하지 않는다. 구체예에서, 고체 제형 및/또는 액체 제형중의 폴리에틸렌 글리콜의 농도는 안정화에 유효한 농도 미만으로 존재한다. 구체예에서, 고체 제형 및/또는 액체 제형은 약 0.1% (w/w) 미만의 폴리에틸렌 글리콜을 함유한다. 또 다른 구체예에서, 고체 제형 및/또는 액체 제형은 약 0.01% 미만의 폴리에틸렌 글리콜을 함유한다. 추가의 구체예에서, 고체 제형 및/또는 액체 제형은 약 0.001% (w/w) 미만의 폴리에틸렌 글리콜을 함유한다.
본 발명의 구체예에 따르면, 제형의 pH는 약 5.0 내지 약 6.0이다. 또 다른 구체예에 따르면, 제형의 pH는 약 5.0이다. 추가의 구체예에 따르면, 제형의 pH는 약 5.5이다. 추가의 구체예에 따르면, 제형의 pH는 약 6.0이다. 구체예에서, 제형은 추가로 완충제를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 완충제는 (i) 숙시네이트 완충제, (ii) 히스티딘 완충제, (iii) 포스페이트 완충제 또는 (iv) (i) 내지 (iii)의 임의의 조합물이다. 구체예에서, pH는 동결건조 또는 고체화 전의 액체 제형, 또는 동결건조된 또는 고체 제형의 액체 형태로의 현탁을 통해 제조된 액체 제형의 pH이다.
구체예에 따르면, 제형은 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드, 약 0.01% (w/w)의 폴리소르베이트-20, 약 2% (w/w)의 (i) 트레할로오스, (ii) 수크로오스 또는 (iii) (i)과 (ii)의 임의의 조합물, 약 4% (w/w)의 만니톨; 및 (i) 숙시네이트 완충제, (ii) 히스티딘 완충제 또는 (iii) (i)과 (ii)의 임의의 조합물을 포함하며, 여기서 제형의 pH는 약 5.0 내지 약 6.0이다.
추가의 구체예에 따르면, 제형은 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드, 약 0.01% (w/w)의 폴리소르베이트-20, 약 2% (w/w)의 수크로오스, 약 4% (w/w)의 만니톨, 및 히스티딘 완충제를 포함하며, 여기서 제형의 pH는 약 6.0이다.
추가의 구체예에 따르면, 제형은 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드, 약 0.01% (w/w)의 폴리소르베이트-20, 약 2% (w/w)의 수크로오스, 약 4% (w/w)의 만니톨, 및 숙시네이트 완충제를 포함하며, 여기서 제형의 pH는 약 5.5이다.
추가의 구체예에 따르면, 제형은 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드, 약 0.01% (w/w)의 폴리소르베이트-20, 약 2% (w/w)의 수크로오스, 약 4% (w/w)의 만니톨, 및 숙시네이트 완충제를 포함하며, 여기서 제형의 pH는 약 5.0이다.
추가의 구체예에 따르면, 제형은 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드, 약 0.01% (w/w)의 폴리소르베이트-20, 약 2% (w/w)의 트레할로오스, 약 4% (w/w)의 만니톨; 및 숙시네이트 완충제를 포함하며, 여기서 제형의 pH는 약 5.5이다.
또 발명은 또한, 의약으로서의 또는 의약을 제조하기 위한, (a) 상기 언급된 액체 약제 제형, (b) 상기 언급된 고체 약제 제형을 멸균 수용액으로 현탁하여 제조된 액체 약제 제형 또는 (c) 상기 언급된제 액체 약제 제형을 동결건조하여 수득된 동결건조된 약제 제형을 멸균 수용액으로 현탁하여 제조된 액체 약제 제형의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한, HIV-관련 지방이영양증, HIV-지방과형성증, GH 결핍증, 복부 비만, 노쇠(frailty), 경증 인지 장애, 면역 결핍증, 만성 질환과 관련된 소모, 또는 만성 질환과 관련된 영양 실조를 치료하기 위한, (a) 상기 언급된 액체 약제 제형, (b) 상기 언급된 고체 약제 제형을 멸균 수용액으로 현탁하여 제조된 액체 약제 제형 또는 (c) 상기 언급된제 액체 약제 제형을 동결건조하여 수득된 동결건조된 약제 제형을 멸균 수용액으로 현탁하여 제조된 액체 약제 제형의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 추가로, HIV-관련 지방이영양증, HIV-지방과형성증, 복부 비만, GH 결핍증, 노쇠, 경증 인지 장애, 면역 결핍증, 만성 질환 또는 장기 질환과 관련된 소모, 또는 만성 질환 또는 장기 질환과 관련된 영양 실조중 하나 이상을 치료하기 위한 의약 제조를 위한, (a) 상기 언급된 액체 약제 제형, (b) 상기 언급된 고체 약제 제형을 멸균 수용액으로 현탁하여 제조된 액체 약제 제형 또는 (c) 상기 언급된제 액체 약제 제형을 동결건조하여 수득된 동결건조된 약제 제형을 멸균 수용액으로 현탁하여 제조된 액체 약제 제형의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한, HIV-관련 지방이영양증, HIV-지방과형성증, 복부 비만, GH 결핍증, 노쇠, 경증 인지 장애, 면역 결핍증, 만성 질환 또는 장기 질환과 관련된 소모, 또는 만성 질환 또는 장기 질환과 관련된 영양 실조중 하나 이상의 치료에 사용하기 위한, 상기 언급된 액체 약제 제형, 고체 약제 제형 또는 동결건조된 약제 제형에 관한 것이다.
본 발명은 또한, (a) 상기 언급된 액체 약제 제형, (b) 상기 언급된 고체 약제 제형을 멸균 수용액으로 현탁하여 제조된 액체 약제 제형 또는 (c) 상기 언급된제 액체 약제 제형을 동결건조하여 수득된 동결건조된 약제 제형을 멸균 수용액으로 현탁하여 제조된 액체 약제 제형을 피검체에 투여하는 것을 포함하여, HIV-관련 지방이영양증, HIV-지방과형성증, 복부 비만, GH 결핍증, 노쇠, 경증 인지 장애, 면역 결핍증, 만성 질환 또는 장기 질환과 관련된 소모, 또는 만성 질환 또는 장기 질환과 관련된 영양 실조중 하나 이상을 치료하는 방법에 관한 것이다.
만성 병태는 비제한적으로, HIV 감염, AIDS, 낭성섬유증, 만성 폐색성 폐질환, 고관절 골절, 트라우마 및 대수술을 포함한다.
구체예에서, 멸균 수용액은 pH가 약 4.0 내지 약 7.5인 멸균수 또는 멸균 완충액이며, 구체예에서, pH는 약 4.0 내지 약 7.0이며, 추가의 구체예에서, pH는 약 5.0 내지 약 6.0이다.
본 발명의 구체예에 따르면, 액체 약제 제형 또는 현탁된 고체 약제 제형 또는 동결건조된 약제 제형은 피하내, 근내, 정맥내 또는 복강내로 투여된다.
본 발명은 또한, 멸균 컨테이너에 상기 언급된 고체 약제 제형 또는 동결건조된 약제 제형을 포함하는 GHRH 분자 제형을 현탁시키기 위한 키트 또는 패키지에 관한 것이다. 구체예에서, 키트 또는 패키지는 추가로, 멸균 수용액을 포함한다. 추가의 구체예에서, 멸균 수용액은 멸균수이다. 구체예에서, 키트 또는 패키지는 고체 약제 제형을 액체 형태로 현탁시키거나 재구성시키기 위한 설명서를 추가로 포함한다.
본 발명은 또한, (a) 수용액중에서 GHRH 분자, 비환원 당 및 음이온성 계면활성제를 혼합하여, 액체 약제 제형을 수득하는 단계를 포함하여, GHRH 분자의 안정화된 약제 제형을 제조하는 방법에 관한 것이다.
구체예에서, 안정화된 약제 제형을 제조하는 상기 언급된 방법은 (b) 단계 (a)의 액체 제형을 동결건조시키는 단계를 추가로 포함한다.
구체예에서, GHRH 분자의 상기 언급된 안정화된 약제 제형은 1주 이상, 2주 이상, 3주 이상, 1달 이상, 2달 이상, 3달 이상, 4달 이상 또는 6달 이상 동안 안정적이다. 구체예에서, GHRH 분자의 상기 언급된 안정화된 약제 제형은 다양한 온도 조건 예컨대, 약 2℃ 내지 약 8℃, 약 20℃ 내지 약 25℃, 약 40℃ 또는 약 40℃ 미만에서 안정적이다.
또 다른 구체예에서, GHRH 분자의 안정화된 약제 제형을 제조하는 상기 언급된 방법은 (c) 동결건조된 제형을 멸균 수용액으로 현탁시키는 단계를 추가로 포함한다. 구체예에서, 멸균 수용액은 멸균수이다.
본 발명의 다른 목적, 이점 및 특징은 본 발명의 특정 구체예의 하기 비제한적 설명을 숙지한 경우 자명해질 것이며, 이는 첨부된 도면을 참조로 하여 단지 예로서 제공되는 것이다.
본 기술은 그 전체가 본원에 참조로서 통합된 많은 문헌을 참조하고 있다.
첨부된 도면에서:
도 1은 동결건조되고 40℃에서 저장되는 경우 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드의 안정도에 대한 pH 4.0, 5.0 및 6.0의 효과를 나타낸다 (RP-HPLC 데이타).
도 2는 동결건조되고 40℃에서 저장되는 경우 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1- 44) 아미드의 안정도에 대한 항산화제로서 메티오닌의 영향 및 안정화제: 락토오스, 트레할로오스 및 수크로오스의 영향을 나타낸다 (RP-HPLC 데이타).
도 3은 동결건조되고 40℃에서 저장되는 경우 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드의 안정도에 대한 팽화제: 만니톨, 글리신 및 PEG의 영향을 나타낸다 (RP-HPLC 데이타).
도 4는 40℃에서 저장하는 동안 다양한 동결건조된 제형중의 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드의 순도를 나타낸다 (RP-HPLC 데이타).
도 5는 4℃에서 15달에 걸쳐 비안정화된 제형 (5F644)와 비교하여 동결건조된 제형 (F13 및 F14)중의 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드의 순도를 나타낸다 (RP-HPLC 데이타).
도 6은 25℃에서 15달에 걸쳐 비안정화된 제형 (5F644)과 비교하여 동결건조된 제형 (F13 및 F14)중의 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드의 순도를 나타낸다 (RP-HPLC 데이타).
도 7은 분말 형태 및 액체 형태 (200mg/ml의 물로 용해됨)에서 동결건조된 제형 F4, F7 및 F10 및 주요 활성 성분 (API) 단독의 오버레이(overlaid) 비교를 나타내는 FT/IR 분석 결과를 제공한다.
예시적인 구체예의 설명
본 발명은 GHRH 분자, 및 더욱 특히, 하기 더욱 상세히 설명된 구조식 A의 GHRH 유사체를 포함하는 약제 제형을 제공한다. 본원에서 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드의 여러 제형이 예시되고 비교되었다.
본원에 사용된 바와 같은 "생물학적으로 허용되는" (또는 "약제학적으로 허용되는")는 생체내에서 독성 또는 생물학적 부작용의 부재 (또는 제한)를 특징으로 하는 물질을 나타낸다. 이는 철저한 의학적 판단 범위내에서 적당한 유익성/위험 비에 상응하게, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 기타 문제 또는 합병증 없이 피검체 (예를 들어, 인간, 동물)의 체액 및/또는 조직 및/또는 기관과 접촉하기에 적합한 화합물, 제형, 제형들 및/또는 투여 형태를 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "제형" 또는 "약제학적 제형"은 활성제 (예를 들어, GHRH 분자 예컨대, [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드)가 유효성을 띠도록 허용하는 형태로 존재하며, 제형이 투여되는 피검체에 독성인 추가적인 성분을 함유하지 않는 제조물을 나타낸다. 이는 활성제 (예를 들어, GHRH 분자 예컨대, [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드) 및 임의의 완충제, 팽화제, 애주번트, 담체, 안정화제, 계면활성제 및 제조, 저장, 조작 및 사용 동안 활성제의 활성 및 안정도를 허용가능한 수준으로 유지하는데 필요한 것으로 여겨지는 이러한 기타 첨가제의 제형을 나타낸다. 본 발명의 약제 제형은 동결건조에 적합하며, 동결건조된 형태의 활성제 (예를 들어, GHRH 분자 예컨대, [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드)의 장기 저장에 적합하다.
본 발명의 문맥에 사용된 용어 "GHRH-분자"는 비제한적으로, 인간 천연 GHRH (1-44) 및 단편 (1-40), (1-29), 1-29 및 1-44 서열 범위내의 단편, 및 임의의 다 른 단편; 다른 종으로부터의 GHRH 및 이의 단편; 변이체의 아미노산 서열이 천연 아미노산 서열과 약 90% 이상의 상동성을 갖도록, 구체예에서는, 천연 아미노산 서열과 약 95% 이상의 상동성 갖도록 아미노산(들), 치환(들), 첨가(들) 및/또는 결실(들)을 갖는 GHRH 변이체를 포함한다. 구체예에서, 상기 언급된 단편/변이체는 천연 GHRH; 예를 들어, N-말단, C-말단 또는 측쇄에서 GHRH 아미노산 서열에 결합된 유기 기 또는 부분을 갖는 GHRH의 유도체 또는 유사체 또는 이의 단편 또는 변이체; 및 GHRH의 염 (인간 또는 다른 종) 및 GHRH 단편, 변이체, 유사체 및 유도체의 염과 비교하여 GH 분비 자극 활성의 약 10% 이상을 보유한다. 본 발명의 GHRH 분자는 또한, 비제한적으로, 알부민 컨주게이팅된 GHRH (U.S. 특허 7,268,113); 페길화된 GHRH 펩티드 (U.S. 특허 7,256,258 및 6,528,485); 포르신 GHRH (1-40) (U.S. 특허 6,551,996); 카닌 GHRH (U.S. 특허 출원 2005/0064554); 1-29 내지 1-44 아미노산 길이의 GHRH 변이체 (U.S. 특허 5,846,936, 5,696,089, 5,756,458, 및 5,416,073, 및 U.S. 특허 출원 2006/0128615 및 2004/0192593); 및 Pro°-GHRH펩티드 및 이의 변이체 (U.S. 특허 5,137,872)를 포함하는 당해분야에 현재 공지된 GHRH 분자를 포함한다.
GHRH 유사체는 U.S. 특허 5,681,379 및 5,939,386에 기술된 것을 포함하며, 이는 또한 이들의 합성 방법을 기술하고 있다. 더욱 특히, 이러한 GHRH 유사체는 하기 구조식 A에 의해 규정된다:
X-GHRH 펩티드 (A)
GHRH 펩티드는 하기 구조식 B의 펩티드이다; A1-A2-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-A8- Ser-Tyr-Arg-Lys-A13-Leu-A15-Gln-Leu-A18-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-A24-A25-Ile-A27-A28-Arg-A30-RO (B) (SEQ ID NO:1)
여기서,
A1은 Tyr 또는 His이며;
A2는 Val 또는 Ala이며;
A8은 Asn 또는 Ser이며;
A13은 Val 또는 Ile이며;
A15는 Ala 또는 Gly이며;
A18은 Ser 또는 Tyr이며;
A24는 Gln 또는 His이며;
A25는 Asp 또는 Glu이며;
A27은 Met, Ile 또는 Nle이며;
A28은 Ser 또는 Asn이며;
A30은 결합 또는 1 내지 15개 잔기의 아미노산 서열이고;
R0은 NH2 또는 NH-(CH2)n-CONH2이며, 여기서, n=1 내지 12이다.
기 X는 펩티드의 N-말단에 아미드 결합을 통해 고정된 소수성 테일이며, 이러한 소수성 테일은 5 내지 7개 원자의 주쇄로 규정된다. 상기 주쇄는 C1-6 알킬, C3-6 시클로알킬, 또는 C6-12 아릴로 치환될 수 있으며, 상기 주쇄는 주쇄의 2개 이상의 원자에 연결된 하나 이상의 고정된 부분을 포함한다. 이러한 고정 부분은 이중 결합, 삼중 결합, 포화되거나 불포화된 C3-9 시클로알킬, 또는 C6-12 아릴이다.
구체예에서, 기 X는
Figure 112009062555578-PCT00015
1 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스
Figure 112009062555578-PCT00016
2 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
Figure 112009062555578-PCT00017
3 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스, 둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
Figure 112009062555578-PCT00018
4 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스, 둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
Figure 112009062555578-PCT00019
5 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스 (R ≠H인 경우)
Figure 112009062555578-PCT00020
6 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스, 둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
Figure 112009062555578-PCT00021
7 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스, (R ≠H인 경우)
둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
Figure 112009062555578-PCT00022
8 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스, 둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
Figure 112009062555578-PCT00023
9 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스, (R ≠H인 경우)
둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
Figure 112009062555578-PCT00024
10 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
시스 또는 트랜스, (R ≠H인 경우)
Figure 112009062555578-PCT00025
11 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
Figure 112009062555578-PCT00026
12 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
Figure 112009062555578-PCT00027
13 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3) 또는
Figure 112009062555578-PCT00028
14이다.
구체예에서, 구조식 B에서, A30은
(a) 결합;
(b) 천연 GHRH 펩티드의 위치 30-44에 상응하는 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 6); 및
(c) (b) SEQ ID NO: 6의 아미노산 서열의 C-말단으로부터 1-14개 아미노산이 결실된 아미노산 서열이다.
구체예에서, GHRH 펩티드는
(a) SEQ ID NO: 2 또는 3의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드;
(b) SEQ ID NO: 4 또는 5의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드; 또는
(c) (a)의 폴리펩티드의 C-말단으로부터의 1 내지 14개 아미노산이 결실된 폴리펩티드이다.
구체예에서, GHRH 펩티드는
(a) SEQ ID NO: 2 또는 3의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드;
(b) SEQ ID NO: 4 또는 5의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드; 또는
(c) (a)의 폴리펩티드의 C-말단으로부터의 1 내지 14개 아미노산이 결실된 폴리펩티드이다.
구체예에서, GHRH 분자는 (헥세노일 트랜스-3)hGHRH(1-44)NH2 (SEQ ID NO: 7)이다. [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드 (또한, (헥세노일 트랜스-3)hGHRH(1-44)NH2로서 언급됨)는 헥세노일 부분 즉, C6 측쇄가 N-말단의 Tyr1에 고정된 인간 성장 호르몬 방출 인자 (hGHRH)의 44-아미노산 서열을 포함하는 합성 인간 성장 호르몬 방출 인자 유사체이다.
[트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드는 하기 서열을 갖는다:
(트랜스)CH3-CH2-CH=CH-CH2-CO-Tyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-Gln-Gln-Gly-Glu-Ser-Asn-Gln-Glu-Arg-Gly-Ala-Arg-Ala-Arg-Leu-NH2 (SEQ ID NO: 7).
본 발명의 제형의 문맥에서 본원에 사용된 용어 "고체"는 실질적으로 수분이 없는 예를 들어, 고체 (예컨대, 분말) 형태의 제형 형태를 나타낸다. 이러한 고체 제형은 수분 제거 방법 예를 들어, 동결건조, 탈수화 또는 기타 건조 방법에 의해 제조될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 "현탁"은 문맥에 따라 현탁, 재현탁, 재구성 및/또는 용해를 나타낸다. 일관성을 위해, 용어 "현탁"은 고체 제형에 적합한 액체를 첨가하는 것을 일반적으로 나타내고자 본원에 사용된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "팽화제"는 고체 제형의 현탁으로부터 생성된 적당한 또는 목적하는 장성의 용액을 제공하는데 사용되는 화합물을 나타낸다. 바람직하게는, 용액의 적합한 또는 목적하는 장성은 용액이 투여되는 피검체의 생리학적 유체와 동일하거나 근접한 등장성을 띤다. 예를 들어, 하나 이상의 당이 팽화제로서 사용될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 당은 비제한적으로, 모노사카라이드, 올리고사카라이드 및 폴리사카라이드를 포함한다. 적합한 당의 예로는 비제한적으로, 만노오스, 소르보스, 크실로오스, 말토오스, 락토오스, 수크로오스 및 덱스트란을 포함한다. 당은 또한 당 알코올 예컨대, 만니톨, 이노시톨, 덜시톨, 크실리톨 및 아라비톨을 포함한다. 당의 혼합물이 또한, 본 발명에 따라 사용될 수 있다. 구체예에서, 팽화제는 만니톨이다. 예를 들어, 하나 이상의 아미노산 예컨대, 글리신이 팽화제로서 사용될 수 있다. 팽화제는 제형중에 약 1 내지 약 10 % (w/w)의 농도로 존재한다. 구체예에서, 팽화제는 약 3 내지 약 5% (w/w)의 농도로 존재한다. 추가의 구체예에서, 팽화제는 약 4% (w/w)의 농도로 존재한다.
구체예에서, 본 발명의 약제 제형은 약 4.0 내지 약 7.5의 pH를 갖는다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 약제 제형은 약 4.0 내지 약 7.0의 pH를 갖는다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 약제 제형은 약 5.0 내지 약 6.0의 pH를 갖는다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 약제 제형은 약 6.0의 pH를 갖는다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 약제 제형은 약 5.5의 pH를 갖는다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 약제 제형은 약 5.0의 pH를 갖는다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 약제 제형은 5.0을 초과하는 pH를 갖는다.
구체예에서, 본 발명의 제형은 완충제를 추가로 포함한다. 적합한 양의 완충제는 사용되는 유형의 완충제 및 이의 완충 능력에 따라 변화될 것이다. 완충제는 제형의 최종 pH를 상기 언급된 pH 범위내에 유지시키기에 적합한 유형이며, 이를 유지시키기에 충분한 양으로 제형중에 존재해야 한다. 구체예에서, 완충제는 나트륨 숙시네이트(숙시네이트)이다. 또 다른 구체예에서, 완충제는 L-히스티딘(히스티딘)이다. 또 다른 구체예에서, 완충제는 나트륨 포스페이트(포스페이트)이다. 이들 완충제는 염으로서 종종 입수가능하다. 구체예에서, 본 발명의 약제 제형중의 완충제의 농도는 약 0.1mM 내지 약 50mM이다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 약제 제형중의 완충제의 농도는 약 1mM 내지 약 30mM이다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 약제 제형중의 완충제의 농도는 약 5mM 내지 약 20mM이다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 약제 제형중의 완충제의 농도는 약 10mM이다.
본 발명의 약제 제형중에 함유된 주요 활성 성분 (예를 들어, GHRH 분자, 예컨대, [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44)아미드)의 양은 치료할 질환의 특성 및/또 는 중증도, 환자의 특징(연령, 체중 등), 및 다른 요인에 따라 결정될 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 약제 제형은 약 1 내지 약 40000㎍/ml의 활성 주요 성분 (예를 들어, GHRH 분자, 예컨대, [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44)아미드)을 포함한다. 구체예에서, 본 발명의 약제 제형은 약 1000 내지 약 8000㎍/ml (약 0.099 중량% 내지 약 0.792 중량%)의 활성 주요 성분 (예를 들어, GHRH 분자, 예컨대, [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44)아미드)을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 약제 제형은 약 1000 내지 약 4000㎍/ml (약 0.099 중량% 내지 약 0.396 중량%)의 활성 주요 성분 (예를 들어, GHRH 분자, 예컨대, [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44)아미드)을 포함한다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 약제 제형은 약 1000㎍/ml (약 0.099 중량%)의 활성 주요 성분 (예를 들어, GHRH 분자, 예컨대, [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44)아미드)을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 약제 제형은 약 4000㎍/ml (약 0.396 중량%)의 활성 주요 성분 (예를 들어, GHRH 분자, 예컨대, [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44)아미드)을 포함한다. 구체예에서, 제형은 약 1mg 또는 이 보다 많은; 추가의 구체예에서, 약 1mg; 추가의 구체예에서, 약 2mg; 추가의 구체예에서, 약 2mg 또는 이 보다 많은 주요 활성 성분 (예를 들어, GHRH 분자, 예컨대, [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44)아미드)의 투여량을 투여하기 위한 양의 주요 활성 성분 (예를 들어, GHRH 분자, 예컨대, [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44)아미드)을 포함한다. 높은 농도의 주요 활성 성분 (예를 들어, GHRH 분자, 예컨대, [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44)아미드)에서, 완충제는 더 높은 농도로 사용될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 연구에서, 10 또는 30mg/ml 의 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44)아미드를 함유하는 제형의 pH는 30mM의 히스티딘 완충제로 유지되었다.
구체예에서, 본 발명의 약제 제형은 하나 이상의 계면활성제를 추가로 포함할 수 있다. 계면활성제의 전형적인 예로는 하기를 포함한다:
A) 비이온성 계면활성제, 예를 들어, 소르비탄 지방산 에스테르 예컨대, 소르비탄 모노카프릴레이트, 소르비탄 모노라우레이트, 소르비탄 모노팔미테이트; 글리세린 지방산 에스테르 예컨대, 글리세린 모노카프릴레이트, 글리세린 모노미리스테이트, 글리세린 모노스테아레이트; 폴리글리세린 지방산 에스테르 예컨대, 데카글리세릴 모노스테아레이트, 데카글리세릴 디스테아레이트, 데카글리세릴 모노리놀레이트; 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르 예컨대, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노팔미테이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 트리올레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 트리스테아레이트; 폴리옥시에틸렌 소르비톨 지방산 에스테르 예컨대, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 테트라스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 테트라올레이트; 폴리옥시에틸렌 글리세린 지방산 에스테르 예컨대, 폴리옥시에틸렌 글리세릴 모노스테아레이트; 폴리에틸렌 글리콜 지방산 에스테르 예컨대, 폴리에틸렌 글리콜 디스테아레이트; 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 예컨대, 폴리옥시에틸렌 라우릴 에테르; 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 알킬 에테르 예컨대, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 글리콜 에테르, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 프로필 에테르, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 세틸 에 테르; 폴리옥시에틸렌 알킬 페닐 에테르 예컨대, 폴리옥시에틸렌 노닐 페닐 에테르; 폴리옥시에틸렌 경화된 캐스터 오일 예컨대, 폴리옥시에틸렌 캐스터 오일, 폴리옥시에틸렌 경화된 캐스터 오일 (폴리옥시에틸렌 수소화된 캐스터 오일); 폴리옥시에틸렌 비스왁스 유도체 예컨대, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 비스왁스; 폴리옥시에틸렌 라놀린 유도체 예컨대, 폴리옥시에틸렌 라놀린; 폴리옥시에틸렌 지방산 아미드 예컨대, 폴리옥시에틸렌 스테아르산 아미드;
B) 음이온성 계면활성제, 예를 들어, C10-18 알킬기를 갖는 알킬 설페이트 예컨대, 나트륨 세틸 설페이트, 나트륨 라우릴 설페이트, 나트륨 올레일 설페이트; 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 설페이트 예컨대, 나트륨 폴리옥시에틸렌 라우릴 설페이트; C8-18 알킬기를 갖는 알킬 설포숙신산 에스테르 염 예컨대, 나트륨 라우릴설포숙시네이트; 및
C) 천연 계면활성제, 예를 들어, 레시틴; 글리세로포스포리피드; 스핑고포스포리피드 예컨대, 스핑고미엘린; C12-18 지방산의 수크로오스 지방산 에스테르. 이러한 계면활성제중 하나 이상이 본 발명의 제형에 혼합되어 첨가될 수 있다.
구체예에서, 본 발명의 약제 제형의 계면활성제는 음이온성 계면활성제이다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 약제 제형의 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 알킬 에스테르이다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 약제 제형의 계면활성제는 폴리소르베이트-20 (T20 또는 트윈-20TM)이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 약제 제형의 계면활성제의 양은 약 0.0001% 내지 약 10% (w/w)이다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 약제 제형중의 계면활성제의 양은 약 0.001% 내지 약 5% (w/w)이다. 추가의 구체예에서, 본 발명의 약제 제형중의 계면활성제의 양은 약 0.01% (w/w)이다.
구체예에서, 본 발명의 약제 제형은 하나 이상의 안정화제 또는 안정제를 추가로 포함할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "안정제"는 치료제의 치료 활성을 저하시킬 물리적, 화학적 및/또는 생화학적 과정에 대해 치료제를 안정화시키는데 사용되는 화합물을 의미한다. 적합한 안정제는 예를 들어, 비제한적으로, 수크로오스 (또는 사카로오스) 및 트레할로오스를 포함하는 비환원 당; 및 예를 들어, 비제한적으로, 소르비톨, 만니톨, 말티톨, 크실리톨, 글리콜, 글리세롤 및 에틸렌 글리콜을 포함하는 비환원 폴리올이 있다. 폴리에틸렌 글리콜의 시중의 공급원은 이들이 종종 GHRH 분자의 분해를 초래할 수 있는 오염물을 포함하기 때문에 적합하지 않다. 구체예에서, 상기 언급된 제형은 폴리에틸렌 글리콜을 실질적으로 함유하지 않는다. 추가의 구체예에서, 상기 언급된 제형은 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지 않는다.
구체예에서, 본 발명의 약제 제형은 비환원 당을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 "비환원 당"은 헤미아세탈을 함유하지 않는 당 (예를 들어, 모노사카라이드 또는 폴리사카라이드), 예를 들어, 당 단위의 환원 말단부 사이에는 형성되고, 하나의 당 단위의 환원 말단부와 다른 당 단위의 비환원 말단부 사이에는 형성되지 않는 글리코시드 결합을 가짐을 특징으로 하는 카보히드레이트 또는 당을 나 타낸다. 추가의 구체예에서, 상기 언급된 비환원 당은 트레할로오스 또는 수크로오스이다. 추가의 구체예에서, 상기 언급된 비환원 당은 수크로오스이다. 또 다른 추가의 구체예에서, 상기 언급된 비환원 당은 트레할로오스이다. 비환원 당은 본 발명의 제형중에 약 0.1 내지 약 5% (w/w)의 농도로 존재한다. 구체예에서, 비환원 당은 약 1 내지 약 3% (w/w)의 농도로 존재한다. 추가의 구체예에서, 비환원 당은 약 2% (w/w)의 농도로 존재한다.
또 다른 구체예에서, 비환원 당은 약제 제형중에 약 1% (w/w) 내지 약 5% (w/w)의 양으로 존재한다. 추가의 구체예에서, 비환원 당은 상기 제형중에 약 2% (w/w)의 양으로 존재한다.
본 발명의 약제 제형은 희석제, 가용화제, 부형제, pH-조절제, 진정제, 완충제, 황-함유 환원제, 항산화제 등을 필요에 따라 추가로 함유할 수 있다. 예를 들어, 황-함유 환원제는 N-아세틸시스테인, N-아세틸호모시스테인, 치옥트산, 티오디글리콜, 티오에탄올아민, 티오글리세롤, 티오소르비톨, 티오글리콜산 및 이의 염, 나트륨 티오설페이트, 글루타티온, 메티오닌 및 설프히드릴-함유 화합물 예컨대, 탄소 원자수가 1 내지 7개인 티오알칸산을 포함한다. 항산화제는 메티오닌, 에리트로브산, 디부틸히드록시톨루엔, 부틸히드록시아니솔, α-토코페롤, 토코페롤 아세테이트, L-아스코르브산 및 이의 염, L-아스코르빌 팔미테이트, L-아스코르빌 스테아레이트, 나트륨 비설파이트, 나트륨 설파이트, 트리아밀 갈레이트, 프로필 갈레이트 또는 킬레이트화제 예컨대, 이나트륨 에틸렌디아민 테트라아세테이트 EDTA), 나트륨 피로포스페이트, 나트륨 메타포스페이트를 포함한다. 기타 통상적 으로 첨가되는 화합물로는 또한, 예를 들어, 무기염 예컨대, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 인산나트륨, 인산칼륨, 중탄산나트륨; 및 유기염 예컨대, 시트르산나트륨, 시트르산칼륨, 아세트산나트륨이 포함될 수 있다.
안정한 제형은 제형중의 주요 활성 성분 즉, GHRH 분자 (예를 들어, [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드)가 본질적으로 저장시 이의 물리적 및 화학적 안정성 및 고유성을 유지하는 제형이다. 단백질 또는 펩티드 안정도를 측정하는 다양한 분석 기법이 당해분야에서 이용가능하며, 문헌 [Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) and Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993)]이 참조된다. 안정도는 선택된 기간 동안 선택된 온도에서 측정될 수 있다. 신속한 스크리닝을 위해, 제형은 예를 들어, 2주 내지 1달 (및 6개월 이하) 동안 약 40℃에서 유지될 수 있으며, 최종 시점에서 안정도가 측정된다. 제형은 또한, 예를 들어, 약 2℃ 내지 약 8℃ (예를 들어, 약 4℃) 또는 실온 조건 (약 15℃ 내지 약 30℃, 바람직하게는, 약 20℃ 내지 약 25℃)에서 6달 이상 동안 유지될 수 있으며, 최종 시점에서 안정도가 측정된다. 본 발명의 제형은 더욱 우수한 안정도의 이의 액체 또는 고체 형태에서 GHRH 분자를 제공하며, 또한, 상승된 온도 (예를 들어, 40℃), 실온 (즉, 20-25℃), 냉장 온도 (즉, 2-8℃)에서의 저장 기간 동안 고체 또는 동결건조된 형태의 GHRH 분자의 안정성을 보전하는데 적합하다. 저장 기간은 예를 들어, 주, 달 또는 년으로 나타낼 수 있으며, 이는 1주 이상, 2주 이상, 4주 이상, 6주 이상, 8주 이상, 3달 이상, 4달 이상 또는 6달 이상이 될 수 있다. 예를 들어, "안정한" 제형은 약 80% 초과, 약 90% 초과, 약 95% 초과, 약 96% 초과, 약 97% 초과, 약 98% 초과, 또는 약 99% 초과의 비분해된 활성제가 제형중에 존재하는 제형일 수 있다. 본 발명의 제형의 안정도는 RP-HPLC (예를 들어, 하기 실시예 참조)를 사용하여 측정될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "안정화 유효량 또는 농도"는 약 80% 초과, 약 90% 초과, 약 95% 초과, 약 96% 초과, 약 97% 초과, 약 98% 초과, 또는 약 99% 초과의 비분해된 활성제가 제형중에 존재하는 안정한 제형을 수득하는데 유효한 양 또는 농도를 나타내기 위한 것이다.
본 발명의 제형은 치료학적 적용 예를 들어, 지방이영양증 (예를 들어, HIV-관련 지방이영양증), 지방과형성증, GH 결핍증, 복부 비반, 이상지혈증, 고글리세리드혈증, 증후군 X, 삶의 질 개선, 노쇠, 주간 불면증, 생각, 논리력, 문제 해결력 및 기억력을 포함하는 경증 인지 장애, 면역 결핍증, 만성 또는 장기 질환과 관련된 근육 소모, 또는 만성 또는 장기 질환과 관련된 영양 실조의 치료를 위한 의약으로서 유용하다. 만성 또는 장기간 질환은 비제한적으로, HIV 감염, AIDS, 낭성 섬유증, 만성 폐색성 폐질환, 고관절 골절, 트라우마 및 대수술을 포함한다. 구체예에서, 본 발명의 제형은 HIV-관련 지방이영양증의 치료에 유용하다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제형은 만성 폐색성 폐질환의 치료에 유용하다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 제형은 낭성 섬유증의 치료에 유용하다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "피검체" 또는 "환자"는 가온 동물 예컨대, 포유동물 예를 들어, 고양이, 개, 마우스, 기니아 피그, 말, 소, 양 및 인간을 의미한다. 구체예에서, 피검체는 포유동물이다. 추가의 구체예에서, 상기 언급된 피검체는 인간이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "치료"는 질병/질환, 질병/질환의 증상 또는 질병/질환에 대한 소인을 치료, 회복, 완화, 지연, 경감, 변형, 교정, 개선, 호전 또는 작용시키기 위한 목적으로 피검체에 치료제를 적용 또는 투여, 또는 피검체로부터의 분리된 조직 또는 세포주에 치료제의 적용 또는 투여로서 규정되며, 상기 피검체는 질병, 질환, 질병 또는 질환의 증상, 또는 질병 또는 질환에 대한 소인을 갖고 있다.
본 발명은 추가로, 본원에 기술된 제형을 제조하는 방법을 제공한다. 본 방법은 목적하는 제형 (예를 들어, 제형, 농도, pH 등과 관련하여)을 수득하기 위한 조건하에서 성분을 함께 제형화 또는 배합 (예를 들어, 용해, 혼합)시키는 것을 포함한다. 예를 들어, pH에 있어서는, 제형의 pH가 측정되고, 목적하는 범위내에 오도록 이에 맞게 (필요에 따라) 조절될 수 있다. 이러한 방법의 예는 하기 실시예에 기술되어 있다.
본 발명은 하기 비제한적인 실시예에 의해 더욱 상세히 기술된다.
실시예 1: 재료 및 방법
[트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드의 합성.
[트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드를 라메이지 트리시클릭 아미드 레진 (Ramage Tricyclic Amide Resin)으로 출발하여 FMOC 고체상 펩티드 합성법으로 합성하였다. 보호된 아미노산 및 트랜스-3-헥세노일산을 결합에 사용하여, 각 보 호된 아미노산 및 트랜스-3-헥세노일산을 산화알루미늄으로 처리된 DMF에 라세미체화 감소를 보조하기 위한 TBTU 및 결합전에 활성을 증진시키기 위한 DIPEA와 용해시켰다. 결합의 완료는 카이저 닌히드린 테스트 (Kaiser ninhydrin test) (E. Kaiser et al. Anal. Biochem. "Color Test for Detection of Free Terminal Amino Groups in the Solid Phase Synthesis of Peptides") 및 TNBS 테스트 (Means and Feeney, 1971, Holden-Day Inc. San Francisco "Chemical Modification of Proteins" p. 217)에 의해 모니터링하였다.
측쇄 보호기 및 펩티드-수지 결합을 90% TFA, 5% EDT 및 5% 물로 이루어진 절단 칵테일에서 보호된 펩티드-수지를 교반함으로써 절단하였다. 미정제 펩티드를 하기 완충제, 0.1% MSA, TEAP ph 6.5 및 2% HOAc를 사용하여 3단계 정제 요법을 통해 HPLC에 의해 정제하여 순수한 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드 (≥98.5%)를 제공하였다. 정제된 펩티드 롯 (lot)을 풀링시키고, 0.5% 아세트산에 재구성시키고, 동결건조하였다.
동결건조 공정.
샘플을 -50℃에서 냉동시키고, 유지하고, -10℃로 어닐링시키고, 유지시키고, 100mTorr하에 -10℃에서 일차 건조시키고, 100mTorr하에 25℃에서 이차 건조시킴으로써 동결건조시켰다.
제형화.
표 I은 활성 성분으로서 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드의 여러 시험된 제형의 구성을 설명하고 있다. [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드는 활성 성분이 8mg/ml의 농도로 존재하는 제형 F12를 제외하고는 표 I에 기록된 모든 제형에서 4mg/ml의 농도로 존재한다.
표 I: 다양한 제형의 구성
번호 완충제 pH 팽화제 (% w/w) 안정제 (% w/w) 항산화제 계면활성제
F1 10mM 숙시네이트 5 만니톨 (4%) 트레할로오스 (2%) 없음 0.01% T20
F3 10mM 숙시네이트 4 만니톨 (4%) 트레할로오스 (2%) 없음 0.01% T20
F4 10mM 히스티딘 6 만니톨 (4%) 트레할로오스 (2%) 없음 0.01% T20
F5 10mM 포스페이트 6 만니톨 (4%) 트레할로오스 (2%) 없음 0.01% T20
F6 10mM 숙시네이트 5 글리신 (2.5%) 트레할로오스 (2%) 없음 0.01% T20
F7 10mM 숙시네이트 5 PEG 4K (10%) 트레할로오스 (2%) 없음 0.01% T20
F8 10mM 숙시네이트 5 만니톨 (2%) + PEG (5%) 트레할로오스 (2%) 없음 0.01% T20
F9 10mM 숙시네이트 5 만니톨 (4%) 락토오스 (2%) 없음 0.01% T20
F10 10mM 숙시네이트 5 만니톨 (4%) 수크로오스 (2%) 없음 0.01% T20
F11 10mM 숙시네이트 5 만니톨 (4%) 트레할로오스 (2%) 1mM 메티오닌 0.01% T20
F12 10mM 숙시네이트 5 만니톨 (4%) 트레할로오스 (2%) 없음 0.01% T20
F13 10mM 히스티딘 6 만니톨 (4%) 수크로오스 (2%) 없음 0.01% T20
F14 10mM 숙시네이트 5.5 만니톨 (4%) 수크로오스 (2%) 없음 0.01% T20
* T20은 폴리소르베이트-20을 의미하며, 히스티딘은 L-히스티딘을 의미한다.
제형을 제조하기 위한 공정
성분을 배합하고, 혼합하고 적합하게 pH를 조절함으로써 제형을 제조하였다. 예를 들어, 제형 13 및 14 (F13 및 F14; 표 I 참조)의 제조에 대한 상세한 내용은 하기 제공되어 있다.
F13을 하기와 같이 제조하였다:
하기 표준원액(stock solution)을 제조하였다:
0.1M HCL 표준원액;
10mM 히스티딘 표준원액; 및
1% 폴리소르베이트 20 표준원액 (1g의 폴리소르베이트 20을 10mM 히스티딘 표준원액과 혼합하여 100mL의 부피에 도달하게 하였다).
성분을 표 II에 따라 배합하였다:
표 II. 성분 - F13
성분 kg 당 양
만니톨 40 g
수크로오스 20 g
폴리소르베이트 1% 원액 10 ml
히스티딘, 유리 염기 1.55 g
[트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드 4 g
성분을 하기와 같이 배합하였다:
ㆍ 컨테이너에 0.90kg 멸균수를 충전시켰다;
ㆍ 1.55g의 히스티딘 (유리 염기)을 혼합하면서 컨테이너에 첨가한 후, 실온에서 10분 동안 완만하게 교반하였다;
ㆍ 40g의 만니톨을 혼합하면서 컨테이너에 첨가한 후, 실온에서 10분 동안 완만하게 교반하였다;
ㆍ 20g의 수크로오스를 혼합하면서 컨테이너에 첨가한 후, 실온에서 10분 동안 완만하게 교반하였다;
ㆍ 10ml의 폴리소르베이트 1% 표준원액을 첨가한 후, 실온에서 15분 동안 완 만하게 교반하였다;
ㆍ 제형의 pH를 측정하고, 적합하게 0.1M HCl 표준원액 또는 10mM 히스티딘 표준원액을 사용하여 제형을 필요에 따라 pH 6.6±0.2로 적정하였다;
ㆍ 4g의 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드를 첨가하고, 혼합물을 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드가 완전히 용해될 때 까지 또는 실온에서 30분 이상 동안 완만하게 교반하였다;
ㆍ 제형의 pH를 측정하고, 적합하게 0.1M HCl 표준원액 또는 10mM 히스티딘 표준원액을 사용하여 제형을 필요에 따라 pH 6.0±0.2로 적정하였다;
ㆍ 용액을 1kg 멸균수로 처리하고, 0.22㎛ 막을 통해 여과하였다.
F14를 하기와 같이 제조하였다:
하기 표준원액을 제조하였다:
0.1M NaOH 표준원액;
10mM 나트륨 숙시네이트 표준원액; 및
1% 폴리소르베이트 20 표준원액 (1g의 폴리소르베이트 20을 10mM 나트륨 숙시네이트 표준원액과 혼합하여 100mL의 부피에 도달하게 하였다).
그 후, 성분을 표 III에 따라 배합하였다:
표 III: 성분 - F14
성분 kg 당 양
만니톨 40 g
수크로오스 20 g
폴리소르베이트 1% 원액 10 ml
나트륨 숙시네이트 2.70 g
[트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드 4 g
성분을 하기와 같이 배합하였다:
ㆍ 컨테이너에 0.90kg 멸균수를 충전시켰다;
ㆍ 2.70g의 나트륨 숙시네이트를 혼합하면서 컨테이너에 첨가한 후, 실온에서 10분 동안 완만하게 교반하였다;
ㆍ 40g의 만니톨을 혼합하면서 컨테이너에 첨가한 후, 실온에서 10분 동안 완만하게 교반하였다;
ㆍ 20g의 수크로오스를 혼합하면서 컨테이너에 첨가한 후, 실온에서 10분 동안 완만하게 교반하였다;
ㆍ 10ml의 폴리소르베이트 1% 표준원액을 첨가한 후, 실온에서 15분 동안 완만하게 교반하였다;
ㆍ 제형의 pH를 측정하고, 적합하게 0.1M NaOH 표준원액 또는 10mM 나트륨 숙시네이트 표준원액을 사용하여 제형을 필요에 따라 pH 6.1±0.2로 적정하였다;
ㆍ 4g의 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드를 첨가하고, 혼합물을 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드가 완전히 용해될 때까지 또는 실온에서 30분 이상 동안 완만하게 교반하였다;
ㆍ 제형의 pH를 측정하고, 적합하게 0.1M NaOH 표준원액 또는 10mM 나트륨 숙시네이트 표준원액을 사용하여 제형을 필요에 따라 pH 5.5±0.2로 적정하였다;
ㆍ 용액을 1kg 멸균수로 처리하고, 0.22㎛ 막을 통해 여과하였다.
역상 고성능 액체 크로마토그래피 (RP-HPLC). HPLC 분석을 애질런트 (Agilent) 1100TM HPLC 시스템, 워터스 델타팍 (Waters DeltaPakTM) HPI C18 칼럼, 이동상 (아세노니트릴/밀리-Q 물 (Acetonitrile/Milli-Q water))을 사용하여 1.0ml/min 및 214nm에서의 UV 검출하에 수행하였다.
역상 HPLC를 사용한 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드의 확인 및 정량. [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드의 확인 및 정량을 동일한 롯으로부터의 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드로부터 바로 제조된 표준 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드 용액의 측정된 각각의 보유시간과 샘플의 보유 시간을 비교함으로써 확립하였다. 샘플중의 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드의 양을 공지된 농도의 연속 희석으로 달성된 표준 곡선과 비교하여 계산하였다.
실시예 2: 결과
도 1은 3개의 다양한 완충제 (포스페이트, 히스티딘 및 숙시네이트)를 이용하고, 3개의 다양한 pH (4.0, 5.0 및 6.0)를 갖도록 제조된 제형 조합물의 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드의 순도를 40℃에서 동결건조된 형태로 저장한 후 비교하였다. 샘플을 동결건조 전에 시험하고, 동결건조 기간 후 40℃에서 1주, 2주, 4주, 6주, 8주, 3달, 4달 및 6달에서 재구성시 시험하였다. pH 6.0의 포스페이트 완충제 (F5), pH 6.0의 히스티딘 완충제 (F4) 및 pH 5의 숙시네이트 완충제 (F1)의 사용 결과 제형은 40℃에서 우수한 안정도를 갖는 것으로 관찰되었다. pH 4의 숙시네이트 완충제 (F3)는 40℃에서 저장시 덜 안정적이기는 하나, 여전히 적합한 제형을 제공할 수 있다.
도 2는 40℃에서 동결건조된 형태로 저장 후 다양한 안정화제 (트레할로오스, 락토오스 및 수크로오스) 및 항산화제 (메티오닌)의 존재를 비교하였다. 샘플 을 동결건조 전에 시험하고, 동결건조 기간 후 40℃에서 1주, 2주, 4주, 6주, 8주, 3달, 4달 및 6달에서 재구성시 시험하였다. 비환원당 트레할로오스 (F1 및 F11) 및 수크로오스 (F10)은 40℃에서 우수한 안정도를 제공하는 것으로 관찰되었다. 항산화제로서 메티오닌의 첨가 (F11)는 메티오닌이 없는 동일한 제형 (F1)과 비교하여 안정도에 약간의 긍정적인 영향을 끼쳤다. 반대로, 환원당 락토오스 (F9)는 40℃에서 안정적이지 않았다.
도 3은 40℃에서 동결건조된 형태로 저장한 후 다양한 팽화제 (만니톨, 글리신, PEG, 만니톨과 PEG)를 비교하였다. 샘플을 동결건조 전에 시험하고, 동결건조 기간 후 40℃에서 1주, 2주, 4주, 6주, 8주, 3달, 4달 및 6달에서 재구성시 시험하였다. 만니톨 (단독으로 사용) (F1) 및 글리신 (F6)은 40℃에서 우수한 안정도의 제형을 제공하는 것으로 관찰되었다.
40℃에서 동결건조된 형태로 1주, 2주, 4주, 6주, 8주, 3달, 4달 및 6달의 저장 후 제형 F1, F3, F4, F5, F6, F7, F8, F9, F10, F11 및 F12의 RP-HPLC 결과를 도 4에 나타내었다. 스트레스 환경을 나타내는 40℃에서의 6달의 저장 후, 가장 안정적인 제형은 F1, F4, F5, F6, F10, F11 및 F12이었다.
도 1, 2, 3 및 4의 결과에 기초하여, 제형 F13 및 F14에 상응하는 구성의 조합물을 설계하였으며, 이는 히스티딘 완충제중의 4% 만니톨, 2% 수크로오스, 0.01% 폴리소르베이트 20 pH 6.0 (F13); 및 나트륨 숙시네이트 완충제중의 4% 만니톨, 2% 수크로오스, 0.01% 폴리소르베이트 20 pH 5.5 (F14)이다.
도 5는 4℃에서 15달 기간에 걸친, 동결건조된 형태의 비안정화된 제형 (5F644)과 함께 제형 F13 및 F14의 안정도 프로필을 나타낸다. 멸균수와의 재구성은 순도 시험 직전에 수행하였다. 비안정화된 제형 (5F644)는 4% 만니톨, 1mg/ml의 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드를 함유하며, NaOH 첨가 없이 pH 6.0이 달성되었다. 도 5는 순도 프로필이 4℃에서 제형 F13 및 F14, 및 비안정화된 제형 (5F644)에 대해 유사함을 보여준다. 표 I의 나머지 제형 모두는 4℃에서의 비안정화된 제형 (5F644)과 유사한 순도 프로필을 갖는다 (미도시됨).
도 6은 25℃에서 15달 기간에 걸쳐 동결건조된 형태의 비안정화된 제형과 함께 제형 F13 및 F14의 안정도 프로필을 나타낸다. 멸균수와의 재구성은 순도 시험 직전에 수행하였다. 비안정화된 제형 (5F644)는 6개월에 현저한 분해를 나타낸 반면, 제형 F13 및 F14는 15개월 후에도 안정적으로 유지되었다.
2개월째에서 모든 동결건조된 제형에 대한 수분 함량은 칼 피셔 모이스쳐 어날리시스 (Karl Fisher Moisture Analysis)에 따른 경우 유리하게는 1% 미만이었다. 칼 피셔 모이스쳐 어날리시스 (KF)는 생성물 또는 조성물의 수분 함량을 측정하기 위한 널리 공지된 표준 시험이다.
도 7은 분말 형태 및 액체 형태 (200mg/ml로 물로 용해됨)에서 주요 활성 성분 (API) 단독과 비교하여 제형 F4, F7 및 F10의 동결건조된 샘플의 FT/IR 분석치를 비교하였다. 이러한 경우, API는 (헥세노일 트랜스-3)hGHRH (1-44)NH2이다. 일반적으로, FT/IR 분석은 활성 성분의 이차 구조에 대한 정보를 제공한다. 더욱 특히, 도 7은 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드 펩티드가 시험된 제형중에서 이의 천연 구조를 유지함을 보여준다. 1660cm-1의 시그널은 [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드 펩티드의 보존된 α-헬릭스 구조를 나타낸다.
본 발명은 이의 특정 구체예에 의해 상기에서 기술되어 있지만, 첨부된 청구범위에 규정된 바와 같은 본 발명의 사상 및 특징으로부터 벗어나지 않으면서 변형될 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> Theratechnologies Inc. Loughrey, Helen Chang, Byeong <120> Pharmaceutical formulations of GHRH molecules <130> 780/11718.223 <150> US 60/909,985 <151> 2007-04-04 <160> 7 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 44 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> GRF peptide <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> Xaa = Tyr or His <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> Xaa = Val or Ala <220> <221> VARIANT <222> (8)..(8) <223> Xaa = Asn or Ser <220> <221> VARIANT <222> (13)..(13) <223> Xaa = Val or Ile <220> <221> VARIANT <222> (15)..(15) <223> Xaa = Ala or Gly <220> <221> VARIANT <222> (18)..(18) <223> Xaa = Ser or Tyr <220> <221> VARIANT <222> (24)..(24) <223> Xaa = Gln or His <220> <221> VARIANT <222> (25)..(25) <223> Xaa = Asp or Glu <220> <221> VARIANT <222> (27)..(27) <223> Xaa = Met or Ile or Nle <220> <221> VARIANT <222> (28)..(28) <223> Xaa = Ser or Asn <220> <221> VARIANT <222> (30)..(30) <223> Xaa = any amino acid or is absent <220> <221> VARIANT <222> (31)..(31) <223> Xaa = any amino acid or is absent <220> <221> VARIANT <222> (32)..(32) <223> Xaa = any amino acid or is absent <220> <221> VARIANT <222> (33)..(33) <223> Xaa = any amino acid or is absent <220> <221> VARIANT <222> (34)..(34) <223> Xaa = any amino acid or is absent <220> <221> VARIANT <222> (35)..(35) <223> Xaa = any amino acid or is absent <220> <221> VARIANT <222> (36)..(36) <223> Xaa = any amino acid or is absent <220> <221> VARIANT <222> (37)..(37) <223> Xaa = any amino acid or is absent <220> <221> VARIANT <222> (38)..(38) <223> Xaa = any amino acid or is absent <220> <221> VARIANT <222> (39)..(39) <223> Xaa = any amino acid or is absent <220> <221> VARIANT <222> (40)..(40) <223> Xaa = any amino acid or is absent <220> <221> VARIANT <222> (41)..(41) <223> Xaa = any amino acid or is absent <220> <221> VARIANT <222> (42)..(42) <223> Xaa = any amino acid or is absent <220> <221> VARIANT <222> (43)..(43) <223> Xaa = any amino acid or is absent <220> <221> VARIANT <222> (44)..(44) <223> Xaa = any amino acid or is absent <400> 1 Xaa Xaa Asp Ala Ile Phe Thr Xaa Ser Tyr Arg Lys Xaa Leu Xaa Gln 1 5 10 15 Leu Xaa Ala Arg Lys Leu Leu Xaa Xaa Ile Xaa Xaa Arg Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 35 40 <210> 2 <211> 44 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (44)..(44) <223> Leu residue is capped with an unsubstituted amide moiety <400> 2 Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Asn Ser Tyr Arg Lys Val Leu Gly Gln 1 5 10 15 Leu Ser Ala Arg Lys Leu Leu Gln Asp Ile Met Ser Arg Gln Gln Gly 20 25 30 Glu Ser Asn Gln Glu Arg Gly Ala Arg Ala Arg Leu 35 40 <210> 3 <211> 44 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of human GRF <400> 3 Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Asn Ser Tyr Arg Lys Val Leu Gly Gln 1 5 10 15 Leu Ser Ala Arg Lys Leu Leu Gln Asp Ile Met Ser Arg Gln Gln Gly 20 25 30 Glu Ser Asn Gln Glu Arg Gly Ala Arg Ala Arg Leu 35 40 <210> 4 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> Arg residue is capped with an unsubstituted amide moiety <400> 4 Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Asn Ser Tyr Arg Lys Val Leu Gly Gln 1 5 10 15 Leu Ser Ala Arg Lys Leu Leu Gln Asp Ile Met Ser Arg 20 25 <210> 5 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence of minimum active core of human GRF <400> 5 Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Asn Ser Tyr Arg Lys Val Leu Gly Gln 1 5 10 15 Leu Ser Ala Arg Lys Leu Leu Gln Asp Ile Met Ser Arg 20 25 <210> 6 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Amino acid sequence corresponding to positions 30 to 44 of human GRF <400> 6 Gln Gln Gly Glu Ser Asn Gln Glu Arg Gly Ala Arg Ala Arg Leu 1 5 10 15 <210> 7 <211> 44 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Modified GRF peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Tyr residue is linked to a trans-3-hexenoyl moiety <220> <221> MISC_FEATURE <222> (44)..(44) <223> Leu residue is capped with an unsubstituted amide moiety <400> 7 Tyr Ala Asp Ala Ile Phe Thr Asn Ser Tyr Arg Lys Val Leu Gly Gln 1 5 10 15 Leu Ser Ala Arg Lys Leu Leu Gln Asp Ile Met Ser Arg Gln Gln Gly 20 25 30 Glu Ser Asn Gln Glu Arg Gly Ala Arg Ala Arg Leu 35 40

Claims (69)

  1. - GHRH 분자,
    - 음이온성 계면활성제, 및
    - 비환원 당을 포함하는 고체 약제 제형으로서,
    GHRH 분자가 하기 구조식 A의 GHRH 유사체인 고체 약제 제형:
    X-GHRH 펩티드 (A)
    상기 식에서,
    GHRH 펩티드는 하기 구조식 B의 펩티드이며;
    A1-A2-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-A8-Ser-Tyr-Arg-Lys-A13-Leu-A15-Gln-Leu-A18-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-A24-A25-Ile-A27-A28-Arg-A30-RO (B) (SEQ ID NO:1)
    여기서,
    A1은 Tyr 또는 His이며;
    A2는 Val 또는 Ala이며;
    A8은 Asn 또는 Ser이며;
    A13은 Val 또는 Ile이며;
    A15는 Ala 또는 Gly이며;
    A18은 Ser 또는 Tyr이며;
    A24는 Gln 또는 His이며;
    A25는 Asp 또는 Glu이며;
    A27은 Met, Ile 또는 Nle이며;
    A28은 Ser 또는 Asn이며;
    A30은 결합 또는 1 내지 15개 잔기의 아미노산 서열이고;
    R0은 NH2 또는 NH-(CH2)n-CONH2이며, 여기서, n=1 내지 12이며;
    X는 펩티드의 N-말단에 아미드 결합을 통해 고정된 소수성 테일(tail)이며, 이러한 소수성 테일은 5 내지 7개 원자의 주쇄(backbone)로 규정되며;
    여기서, 상기 주쇄는 C1-6 알킬, C3-6 시클로알킬, 또는 C6-12 아릴로 치환될 수 있으며, 상기 주쇄는 주쇄의 2개 이상의 원자에 연결된 하나 이상의 고정된 부분을 포함하며;
    상기 부분은 이중 결합, 삼중 결합, 포화되거나 불포화된 C3-9 시클로알킬, 또는 C6-12 아릴이다.
  2. 제 1 항에 있어서, X가
    Figure 112009062555578-PCT00029
    1 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스
    Figure 112009062555578-PCT00030
    2 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    Figure 112009062555578-PCT00031
    3 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스, 둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
    Figure 112009062555578-PCT00032
    4 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스, 둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
    Figure 112009062555578-PCT00033
    5 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스 (R ≠H인 경우)
    Figure 112009062555578-PCT00034
    6 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스, 둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
    Figure 112009062555578-PCT00035
    7 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스, (R ≠H인 경우)
    둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
    Figure 112009062555578-PCT00036
    8 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스, 둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
    Figure 112009062555578-PCT00037
    9 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스, (R ≠H인 경우)
    둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
    Figure 112009062555578-PCT00038
    10 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스, (R ≠H인 경우)
    Figure 112009062555578-PCT00039
    11 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    Figure 112009062555578-PCT00040
    12 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    Figure 112009062555578-PCT00041
    13 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3) 또는
    Figure 112009062555578-PCT00042
    14인 제형.
  3. 제 1 항에 있어서, A30이
    (a) 결합;
    (b) 천연 GHRH 펩티드의 위치 30-44에 상응하는 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 6); 및
    (c) SEQ ID NO: 6의 상기 아미노산 서열의 C-말단으로부터 1-14개 아미노산이 결실된 아미노산 서열인 제형.
  4. 제 1 항에 있어서, 상기 GHRH 펩티드가
    (a) SEQ ID NO: 2 또는 3의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드;
    (b) SEQ ID NO: 4 또는 5의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드; 또는
    (c) (a)의 상기 폴리펩티드의 C-말단으로부터의 1 내지 14개 아미노산이 결실된 폴리펩티드인 제형.
  5. 제 1 항에 있어서, 상기 GHRH 유사체가 (헥세노일 트랜스-3)hGHRH(1-44)NH2 (SEQ ID NO: 7)인 제형.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 동결건조된 제형.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비환원 당이 트레할로오스 또는 수크로오스인 제형.
  8. 제 7 항에 있어서, 상기 비환원 당이 트레할로오스인 제형.
  9. 제 7 항에 있어서, 상기 비환원 당이 수크로오스인 제형.
  10. 제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 음이온성 계면활성제가 폴리옥시에틸렌 소르비탄 알킬 에스테르인 제형.
  11. 제 10 항에 있어서, 상기 음이온성 계면활성제가 폴리소르베이트-20인 제형.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 물중의 현탁액으로서 측정시 pH가 약 4.0 내지 약 7.5인 제형.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 팽화제를 추가로 포함하는 제형.
  14. 제 13 항에 있어서, 상기 팽화제가 만니톨인 제형.
  15. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 항산화제를 추가로 포함하는 제형.
  16. 제 15 항에 있어서, 상기 항산화제가 메티오닌인 제형.
  17. - GHRH 분자,
    - 음이온성 계면활성제, 및
    - 비환원 당을 포함하는 액체 약제 제형으로서,
    제형은 약 4.0 내지 약 7.5의 pH를 가지며,
    GHRH 분자는 하기 구조식 A의 GHRH 유사체인 약제 제형:
    X-GHRH 펩티드 (A)
    상기 식에서,
    GHRH 펩티드는 하기 구조식 B의 펩티드이며;
    A1-A2-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-A8-Ser-Tyr-Arg-Lys-A13-Leu-A15-Gln-Leu-A18-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-A24-A25-Ile-A27-A28-Arg-A30-RO (B) (SEQ ID NO:1)
    여기서,
    A1은 Tyr 또는 His이며;
    A2는 Val 또는 Ala이며;
    A8은 Asn 또는 Ser이며;
    A13은 Val 또는 Ile이며;
    A15는 Ala 또는 Gly이며;
    A18은 Ser 또는 Tyr이며;
    A24는 Gln 또는 His이며;
    A25는 Asp 또는 Glu이며;
    A27은 Met, Ile 또는 Nle이며;
    A28은 Ser 또는 Asn이며;
    A30은 결합 또는 1 내지 15개 잔기의 아미노산 서열이고;
    R0은 NH2 또는 NH-(CH2)n-CONH2이며, 여기서, n=1 내지 12이며;
    X는 펩티드의 N-말단에 아미드 결합을 통해 고정된 소수성 테일이며, 이러한 소수성 테일은 5 내지 7개 원자의 주쇄로 규정되며;
    여기서, 상기 주쇄는 C1-6 알킬, C3-6 시클로알킬, 또는 C6-12 아릴로 치환될 수 있으며, 상기 주쇄는 주쇄의 2개 이상의 원자에 연결된 하나 이상의 고정된 부분을 포함하며;
    상기 부분은 이중 결합, 삼중 결합, 포화되거나 불포화된 C3-9 시클로알킬, 또는 C6-12 아릴이다.
  18. 제 17 항에 있어서, X가
    Figure 112009062555578-PCT00043
    1 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스
    Figure 112009062555578-PCT00044
    2 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    Figure 112009062555578-PCT00045
    3 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스, 둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
    Figure 112009062555578-PCT00046
    4 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스, 둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
    Figure 112009062555578-PCT00047
    5 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스 (R ≠H인 경우)
    Figure 112009062555578-PCT00048
    6 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스, 둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
    Figure 112009062555578-PCT00049
    7 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스, (R ≠H인 경우)
    둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
    Figure 112009062555578-PCT00050
    8 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스, 둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
    Figure 112009062555578-PCT00051
    9 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스, (R ≠H인 경우)
    둘 모두는 라세미체 혼합물 또는 순수한 거울상이성질체 쌍임
    Figure 112009062555578-PCT00052
    10 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    시스 또는 트랜스, (R ≠H인 경우)
    Figure 112009062555578-PCT00053
    11 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    Figure 112009062555578-PCT00054
    12 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3)
    Figure 112009062555578-PCT00055
    13 (R = H 또는 CH3 또는 CH2CH3) 또는
    Figure 112009062555578-PCT00056
    14인 제형.
  19. 제 17 항에 있어서, A30이
    (a) 결합;
    (b) 천연 GHRH 펩티드의 위치 30-44에 상응하는 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 6); 및
    (c) 상기 SEQ ID NO: 6의 C-말단으로부터 1-14개 아미노산이 결실된 SEQ ID NO: 6인 제형.
  20. 제 17 항에 있어서, 상기 GHRH 펩티드가
    (a) SEQ ID NO: 2 또는 3의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드;
    (b) SEQ ID NO: 4 또는 5의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드; 또는
    (c) (a)의 상기 폴리펩티드의 C-말단으로부터 1 내지 14개 아미노산이 결실된 폴리페티드인 제형.
  21. 제 17 항에 있어서, 상기 GHRH 유사체가 (헥세노일 트랜스-3)hGHRH(1-44)NH2 (SEQ ID NO: 7)인 제형.
  22. 제 17 항 내지 제 21 항중 어느 한 항에 있어서, 상기 비환원 당이 트레할로오스 또는 수크로오스인 제형.
  23. 제 22 항에 있어서, 상기 비환원 당이 트레할로오스인 제형.
  24. 제 22 항에 있어서, 상기 비환원 당이 수크로오스인 제형.
  25. 제 17 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 비환원 당이 약 0.1 내지 약 5 % (w/w)의 농도로 존재하는 제형.
  26. 제 25 항에 있어서, 상기 비환원 당이 약 2% (w/w)의 농도로 존재하는 제형.
  27. 제 17 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 음이온성 계면활성제가 폴리옥시에틸렌 소르비탄 알킬 에스테르인 제형.
  28. 제 27 항에 있어서, 상기 음이온성 계면활성제가 폴리소르베이트-20인 제형.
  29. 제 17 항 내지 제 28 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 계면활성제가 약 0.001% (w/w) 내지 약 0.1% (w/w)의 농도로 존재하는 제형.
  30. 제 29 항에 있어서, 상기 계면활성제가 약 0.01% (w/w)의 농도로 존재하는 제형.
  31. 제 17 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 pH가 약 5.0 내지 약 6.0인 제형.
  32. 제 31 항에 있어서, 상기 pH가 약 5.0인 제형.
  33. 제 31 항에 있어서, 상기 pH가 약 5.5인 제형.
  34. 제 31 항에 있어서, 상기 pH가 약 6.0인 제형.
  35. 제 17 항 내지 제 34 항 중 어느 한 항에 있어서, 완충제를 추가로 포함하며, 상기 완충제는 (i) 숙시네이트 완충제, (ii) 히스티딘 완충제, (iii) 포스페이트 완충제 또는 (iv) (i) 내지 (iii)의 임의의 조합물인 제형.
  36. 제 17 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 팽화제를 추가로 포함하는 제형.
  37. 제 36 항에 있어서, 상기 팽화제가 만니톨인 제형.
  38. 제 36 항 또는 제 37 항에 있어서, 상기 팽화제가 약 1 내지 약 10 % (w/w)의 양으로 존재하는 제형.
  39. 제 38 항에 있어서, 상기 팽화제가 약 4 % (w/w)의 양으로 존재하는 제형.
  40. 제 17 항 내지 제 39 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 항산화제를 추가로 포함하는 제형.
  41. 제 40 항에 있어서, 상기 항산화제가 메티오닌인 제형.
  42. 제 17 항에 있어서,
    - [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드,
    - 약 0.01% (w/w)의 폴리소르베이트-20,
    - 약 2% (w/w)의 (i) 트레할로오스, (ii) 수크로오스 또는 (iii) (i)과 (ii)의 임의의 조합물,
    - 약 4% (w/w)의 만니톨; 및
    - (i) 숙시네이트 완충제, (ii) 히스티딘 완충제, 또는 (iii) (i)과 (ii)의 임의의 조합물을 포함하며;
    pH가 약 5.0 내지 약 6.0인 제형.
  43. 제 17 항에 있어서,
    - [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드,
    - 약 0.01% (w/w)의 폴리소르베이트-20,
    - 약 2% (w/w)의 수크로오스,
    - 약 4% (w/w)의 만니톨, 및
    - 히스티딘 완충제를 포함하며,
    pH가 약 6.0인 제형.
  44. 제 17 항에 있어서,
    - [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드,
    - 약 0.01% (w/w)의 폴리소르베이트-20,
    - 약 2% (w/w)의 수크로오스,
    - 약 4% (w/w)의 만니톨, 및
    - 숙시네이트 완충제를 포함하며,
    pH가 약 5.5인 제형.
  45. 제 17 항에 있어서,
    - [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드,
    - 약 0.01% (w/w)의 폴리소르베이트-20,
    - 약 2% (w/w)의 수크로오스,
    - 약 4% (w/w)의 만니톨, 및
    - 숙시네이트 완충제를 포함하며,
    pH가 약 5.0인 제형.
  46. 제 17 항에 있어서,
    - [트랜스-3-헥세노일]hGHRH (1-44) 아미드,
    - 약 0.01% (w/w)의 폴리소르베이트-20,
    - 약 2% (w/w)의 트레할로오스,
    - 약 4% (w/w)의 만니톨, 및
    - 숙시네이트 완충제를 포함하며,
    pH가 약 5.5인 제형.
  47. 제 17 항 내지 제 46 항 중 어느 한 항의 액체 제형을 동결건조시킴으로써 제조된 동결건조된 약제 제형.
  48. HIV-관련 지방이영양증, HIV-지방과형성증, 복부 비만, GH 결핍증, 노쇠 (frailty), 경증 인지 장애, 면역 결핍증, 만성 질환 또는 장기 질환과 관련된 체력 소모 (wasting), 또는 만성 질환 또는 장기 질환과 관련된 영양 실조중 하나 이상을 치료하기 위한, (a) 제 17 항 내지 제 46 항 중 어느 한 항에 따른 액체 약제 제형 또는 (b) 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 따른 고체 약제 제형을 멸균 수용액으로 현탁하여 제조된 액체 약제 제형 또는 (c) 제 47항에 따른 동결건조된 약제 제형을 멸균 수용액으로 현탁하여 제조된 액체 약제 제형의 용도.
  49. 제 48 항에 있어서, 상기 멸균 수용액이 멸균수인 용도.
  50. 제 48 항 또는 제 49 항에 있어서, 상기 액체 약제 제형 (a), (b) 또는 (c)가 피하내, 근내, 정맥내 또는 복강내로 투여되기 위한 것인 용도.
  51. HIV-관련 지방이영양증, HIV-지방과형성증, 복부 비만, GH 결핍증, 노쇠, 경증 인지 장애, 면역 결핍증, 만성 질환 또는 장기 질환과 관련된 체력 소모, 또는 만성 질환 또는 장기 질환과 관련된 영양 실조중 하나 이상을 치료하기 위한 의약 제조를 위한, (a) 제 17 항 내지 제 46 항 중 어느 한 항에 따른 액체 약제 제형 또는 (b) 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 따른 고체 약제 제형을 멸균 수용액으로 현탁하여 제조된 액체 약제 제형 또는 (c) 제 47 항에 따른 동결건조된 약제 제형을 멸균 수용액으로 현탁하여 제조된 액체 약제 제형의 용도.
  52. 제 51 항에 있어서, 상기 멸균 수용액이 멸균수인 용도.
  53. 제 51 항 또는 제 52 항에 있어서, 상기 액체 약제 제형 (a), (b) 또는 (c)가 피하내, 근내, 정맥내 또는 복강내로 투여되기 위한 것인 용도.
  54. HIV-관련 지방이영양증, HIV-지방과형성증, 복부 비만, GH 결핍증, 노쇠, 경증 인지 장애, 면역 결핍증, 만성 질환 또는 장기 질환과 관련된 체력 소모, 또는 만성 질환 또는 장기 질환과 관련된 영양 실조중 하나 이상을 치료하는데 사용하기 위한, (a) 제 17 항 내지 제 46 항 중 어느 한 항에 따른 액체 약제 제형 또는 (b) 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 따른 고체 약제 제형을 멸균 수용액으로 현탁하여 제조된 액체 약제 제형 또는 (c) 제 47 항에 따른 동결건조된 약제 제형을 멸균 수용액으로 현탁하여 제조된 액체 약제 제형.
  55. 제 54 항에 있어서, 상기 액체 약제 제형 (a), (b) 또는 (c)가 피하내, 근내, 정맥내 또는 복강내로 투여하기 위한 것인 제형.
  56. (a) 제 17 항 내지 제 46 항 중 어느 한 항에 따른 액체 약제 제형 또는 (b) 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 따른 고체 약제 제형을 멸균 수용액으로 현탁하여 제조된 액체 약제 제형 또는 (c) 제 47 항에 따른 동결건조된 약제 제형과 멸균 수용액의 현탁액에 의해 제조된 액체 약제 제형을 피검체에 투여하는 것을 포함하여, 피검체에서 HIV-관련 지방이영양증, HIV-지방과형성증, 복부 비만, GH 결핍증, 노쇠, 경증 인지 장애, 면역 결핍증, 만성 질환 또는 장기 질환과 관련된 체력 소모, 또는 만성 질환 또는 장기 질환과 관련된 영양 실조중 하나 이상을 치료하는 방법.
  57. 제 56 항에 있어서, 상기 투여가 피하내, 근내, 정맥내 또는 복강내를 통해 이루어지는 방법.
  58. 멸균 콘테이너에 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 따른 고체 약제 제형 또는 제 47 항에 따른 동결건조된 제형을 포함하는 키트.
  59. 제 58 항에 있어서, 멸균 수용액을 추가로 포함하는 키트.
  60. 제 59 항에 있어서, 상기 멸균 수용액이 멸균수인 키트.
  61. (a) 수용액중에서 GHRH 분자, 비환원 당 및 음이온성 계면활성제를 혼합하여, 액체 약제 제형을 수득하는 단계를 포함하는, GHRH 분자의 안정화된 동결건조 약제 제형을 제조하는 방법.
  62. 제 61 항에 있어서, 하기 단계 (b)를 추가로 포함하는 방법:
    (b) 단계 (a)의 액체 제형을 동결건조시키는 단계.
  63. 제 62 항에 있어서, 상기 동결건조된 제형이 약 40℃ 이하에서 6개월 이상 동안 안정적인 방법.
  64. 제 62 항에 있어서, 상기 동결건조된 제형이 약 40℃ 이하에서 4개월 이상 동안 안정적인 방법.
  65. 제 62 항에 있어서, 상기 동결건조된 제형이 약 40℃ 이하에서 3개월 이상 동안 안정적인 방법.
  66. 제 62 항에 있어서, 상기 동결건조된 제형이 약 40℃ 이하에서 2개월 이상 동안 안정적인 방법.
  67. 제 61 항에 있어서, 상기 동결건조된 제형이 약 40℃ 이하에서 1개월 이상 동안 안정적인 방법.
  68. 제 62 항 내지 제 67 항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 단계 (c)를 추가로 포함하는 방법:
    (c) 동결건조된 제형을 멸균 수용액으로 현탁시키는 단계.
  69. 제 68 항에 있어서, 멸균 수용액이 멸균수인 방법.
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