BRPI0610066A2 - compostos que modulam atividade de c-kit e c-fms e usos para estes - Google Patents

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BRPI0610066A2
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Jiazhong Zhang
Prabha N Ibrahim
Clarence R Hurt
Dean R Artis
Ryan Bremer
Rebecca L Zuckerman
Wayne Spevak
Guoxian Wu
Hongyao Zhu
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Abstract

COMPOSTOS QUE MODULAM ATIVIDADE DE C-KIT E C-FMS E USOS PARA ESTES. A presente invenção refere-se a compostos ativos nas proteína tirosina cinases de receptor c-kit e c-fms são fornecidos aqui. Também fornecidos aqui são composições úteis para o tratamento de doenças ou condição mediadas por c-kit e doenças ou condição mediadas por c-fms, e métodos para o uso das mesmas.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSTOS QUE MODULAM ATIVIDADE DE C-KIT E C-FMS E USOS PARA ESTES".
CAMPO DA INVENÇÃO
A presente invenção refere-se aos ligandos para c-kit e c-fms, eaos métodos para uso destes. A informação fornecida é intencionadaunicamente para ajudar a compreensão do leitor. Nenhuma da informaçãofornecida nem referências citadas é admitida ser técnica anterior à presenteinvenção. Cada uma das referências citadas é incorporada aqui em suatotalidade e para qualquer propósito.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
C-kit e c-fms são ambos proteína tirosina cinases de receptor detransmembrana do tipo III (RPTKs) que regulam as cascatas de transduçãode sinal fundamentais que controlam o crescimento e proliferação celulares.Ambos os receptores têm características estruturais similarescompreendendo cinco domínios de imunoglobulina (IG) extracelulares, umdomínio de transmembrana simples, e um domínio de cinase citoplásmicadividido separados por um segmento de inserção de cinase.
c-KIT
O receptor de Fator de Célula-Tronco (SCF), c-kit, desempenhauni papel importante no desenvolvimento de melanócitos e mastócitos,células germinais e hematopoéticas. Fator de Célula-Tronco (SCF) é umaproteína codificada pelo locus S1, e tem também sido chamado de "ligandode kit" (KL) e fator de crescimento de mastócitos (MGF), com base naspropriedades biológicas usadas para identificá-lo (revisado em Tsujimura,Pathol Int 1996, 46:933-938; Loveland, et al, J. Endocrinol 1997, 153:337-344; Vliagoftis, et al, Clin Immunol 1997, 100:435-440; Broudy, Blood 1997,90:1345-1364; Pignon, Hermatol Cell Ther 1997, 39:114-116; e Lyman, et al,Blood 1998, 91:1101-1134.). Aqui a abreviação SCF refere-se ao ligandofisiológico para c-kit.
SCF é sintetizado como uma proteína de transmembrana comum peso molecular de 220 ou 248 Dalton, dependendo do encaixealternativo do mRNA para codificar o éxon 6. A proteína maior pode serproteoliticamente clivada para formar uma proteína solúvel, glicosilada quedimeriza-se não-covalentemente. Ambas as formas solúveis e ligadas àmembrana de SCF podem ligar e ativar c-kit. Por exemplo, na pele, SCF éexpresso predominantemente por fibroblastos, ceratinócitos e célulasendoteliais que modulam a atividade de melanócitos e mastócitosexpressando c-kit. Em osso, células estromais da medula expressam SCF eregulam hematopoiese de células-tronco de expressão de c-kit. No tratogastrointestinal, células epiteliais intestinais expressam SCF e afetam ascélulas intersticiais de Cajal e linfocitos intraepiteliais. Nos testículos, célulasde sertoli e células granulosas expressam SCF que regulamespermatogênese através de interação com c-kit nas células germinais.
c-Fms
C-fms é um membro da família de genes originalmente isoladoda cepa de Susan McDonough dos vírus de sarcoma felinos. O FMS deproto-oncogene celular (c-fms, sarcoma de McDonough felina celular)codifica para o receptor para o fator estimulante de colônia de macrófagos(M-CSF). C-fms é crucial para o crescimento e diferenciação da linhagem demonócitos-macrófagos, e ao ligar M-CSF ao domínio extracelular de c-fms, oreceptor dimeriza e trans-autofosforila os resíduos de tirosina citoplásmica.
M-CSF, descrito primeiro por Robinson e outros (biood. 1969,33:396-9), é uma citocina que controla a produção, diferenciação, e funçãodos macrófagos. M-CSF estimula a diferenciação de células progenitoraspara amadurecer os monócitos, e prolongar a»sbbrevivência dos monócitos.
Além disso, M-CSF intensifica citotoxicidade, produção de superóxido,fagocitose, quimiotaxia, e produção de citocina secundária de fatoresadicionais em monócitos e macrófagos. Exemplos de tais fatores adicionaisincluem fator estimulante de colônia de granulócitos (G-CSF), interleucina-6(IL-6), e interleucina-8 (IL-8). M-CSF estimula hematopoiese, promovediferenciação e proliferação de células progenitoras de osteoclastos, e temefeitos profundos no metabolismo de lipídios. Além disso, M-CSF éimportante em gravidez. Fisiologicamente, quantidades grandes de M-CSFsão produzidas na piacenta, e é acreditado que M-CSF desempenhe umpapel essencial na diferenciação de trofoblastos (Motoyoshi, Int J Hematol.1998, 67:109-22). Os níveis de soro elevados de M-CSF em gravidezprematura podem participar nos mecanismos imunológicos responsáveispela a manutenção da gravidez (Flanagan & Lader, Curr Opin Hematol. 1998, 5:181-5).
Relacionado aos c-fms e c-kit estão dois receptores de fator decrescimento derivados de plaquetas, alfa (isto é, pdgfra) e beta (pdgfrb)(PDGF). O gene que codifica para pdgfra fica localizado no cromossomo4q11-q12 na mesma região do cromossomo 4 como o oncogene quecodifica para c-kit. Os genes que codificam para pdgfra e c-fms parecem terevoluído de um gene ancestral comum através de duplicação de gene, jáque estes dois genes são de modo em tandem ligados no cromossomo 5.Eles são orientados da cabeça-para-cauda com o éxon de iniciador 5 dogene de c-fms localizado apenas 500 bp do último éxon de iniciador 3 dogene que codifica para pdgfra. A maioria dos tumores estromaisgastrointestinais (GISTs) tem mutações de ativação em c-kit, e a maioria dospacientes com GISTs responde bem a Gleevec, que inibe c-kit. Heinrich et al.(Science 2003, 299:708-10) mostrou que aproximadamente 35 % de GISTscarecendo de mutações de c-kit têm mutações de ativação intragênicas nogene que codifica pdgfra, e que tumores que expressam c-kit ou pdgfra sãoindistinguíveis com respeito à ativação dos intermediários de sinalização ajusante e alterações citogenéticas associadas à progressão do tumor. Dessemodo, as mutações de c-kit e pdgfra parecem ser mecanismos deoncogênicos alternativa e mutuamente exclusivos em GISTs.
Similarmente, a observação que produção de M-CSF, o fator decrescimento de macrófagos principal, é aumentada em tecidos duranteinflamação aponta um papel para c-fms em doenças, como por exemplodoenças inflamatórias. Mais particularmente, porque níveis elevados de M-CSF são encontrados no estado de doença, modulação da atividade de c-fms pode melhorar a doença associada a níveis aumentados de M-CSF.
Conseqüentemente, há necessidade na técnica por inibidorespotentes e específicos e moduladores de c-kit e/ou c-fms e métodos paraprojetá-los.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
A presente invenção refere-se aos compostos ativos em c-kit, c-fms, ou ambos c-kit e c-fms. De acordo com um aspecto da presenteinvenção, foi descoberto que no tratamento de doenças tratáveis atratamento por uma quantidade eficaz de um modulador de c-kit ou sozinhoou c-fms sozinho, a eficácia do tratamento pode ser intensificada se os ditoscompostos forem inibidores duais tanto de c-kit como de c-fms. Em particular,a invenção fornece métodos de usar compostos da Fórmula I como descritosabaixo. Desse modo, a invenção fornece métodos de usar compostos quepodem ser usados terapêutica e/ou profilaticamente envolvendo modulaçãode c-kit, c-fms, ou tanto c-kit como c-fms.
Os compostos da Fórmula I têm a estrutura a seguir:
Fórmula I,
<formula>formula see original document page 5</formula>
todos sais, pró-fármacos, tautômeros e isômeros destes,em que:
Xi é N ou CR2, X2 é N ou CR6, Y, é N ou CR4, e Y2 é N ou CR5,porém, contanto que não mais que um de X2, Yi e Y2 seja N;
L1 é selecionado do grupo que consiste em alquileno inferioropcionalmente substituído, -S-, -O-, -C(O)-, -C(S)-, -S(O)-, -S(0)2-, e -NR7-;
L2 é selecionado do grupo que consiste em uma ligação,alquileno inferior opcionalmente substituído, -(alq)a-S-(alq)b-, -(alq)a-0-(alq)b-,-(alq)a-OC(0)-(alq)b-, -(alq)a-C(0)0-(alq)b-, -(alq)a-OC(S)-(alq)b-, -(alq)a-C(S)0-(alq)b-, -(alq)a-C(0)-(alq)b-, (alq)a-C(S)-(alq)b-, -(alq)a-C(0)NR9-(alq)b-,25 -(alq)a-OC(0)NR9-(alq)b-, -(alq)a-OC(S)NR9-(alq)b-, -(alq)a-C(S)NR9-(alq)b-, -(alq)a-S(0)-(alq)b-, -(alq)a-S(0)2-(alq)b-, -(alq)a-S(0)2NR9-(alq)b-, -(alq)a-NR9-(alq)b-, -(alq)a-NR9C(0)-(alq)b-, -(alq)a-NR9C(S)-(alq)b-, -(alq)a-NR9C(0)NR9-(alq)b-, -(alq)a-NR9C(S)NR9-(alq)b-,-(alq)a-NR9C(0)0-(alq)b-, -(alq)a-NR9C(S)0-(alq)b-, -(alq)a-NR9S(0)2-(alq)b-, e -(alq)a-NR9S(0)2NR9-(alq)b-,em que alq é C-\.3 alquileno opcionalmente substituído e a e b sãoindependentemente 0 ou 1;
R1 é selecionado do grupo que consiste em alquila inferioropcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída,heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída,e heteroarila opcionalmente substituída;
R2, R4, R5 e R6 são independentemente selecionados do grupoque consiste em hidrogênio, halogênio, alquila inferior opcionalmentesubstituída, alquenila inferior opcionalmente substituída, alquinila inferioropcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída,heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída,heteroarila opcionalmente substituída, -OH, -NH2, -N02, -CN, -C(0)OH, -C(S)OH, -C(0)NH2, -C(S)NH2, -S(0)2NH2, -NHC(0)NH2, -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -NR10R11, -NHR3, -OR3, -SR3, -C(0)R3, -C(S)R3, -S(0)R3, -S(0)2R3, -C(0)OR3, -C(S)OR3, -C(0)NHR3, -C(0)NR3R3, -C(S)NHR3, -C(S)NR3R3, -S(0)2NHR3, -S(0)2NR3R3, -NHC(0)R3, -NR3C(0)R3, -NHC(S)R3,-NR3C(S)R3, -NHS(0)2R3, -NR3S(0)2R3, -NHC(0)OR3, -NR3C(0)OH, -NR3C(0)OR3, -NHC(S)OR3,-NR3C(S)OH, -NR3C(S)OR3, -NHC(0)NHR3, -NHC(0)NR3R3, -NR3C(0)NH2, -NR3C(0)NHR3, -NR3C(0)NR3R3, -NHC(S)NHR3, -NHC(S)NR3R3, -NR3C(S)NH2, -NR3C(S)NHR3,NR3C(S)NR3R3, -NHS(0)2NHR3, -NHS(0)2NR3R3, -NR3S(0)2NH2, - NR3S(0)2NHR3, e -NR3S(0)2NR3R3;
An é um heteroarileno de 5 ou 6 membros opcionalmentesubstituído tendo a estrutura
em que * indica o ponto de ligação de L1 e ??" indica o ponto de ligaçãode L2, e em que o N indicado ou é um =N- ou -N=;n é 0 ou 1;
F e J são ambos C ou um de F e J é C e o outro de F e J é N;P e Q são independentemente selecionados de CR, N, NR, O ouS;
T é selecionado de CR ou N;
em que
quando n for 1, F e J são C, e P, T e Q são CR, ou qualquer umde P, T e Q é N e os outros dois de P, T e Q são CR,quando n for 0 e F e J forem ambos C, depois um de P e Q é CR,
N ou NR e o outro dePeQéC, N, NR, O ou S, contanto que P e Q nãosejam CR,
quando n for 0, um de F e J for N e o outro de F e J for C, depoisumdePeQéNeo outro de P e Q é CR ou P e Q são ambos CR, e
Ré hidrogênio ou um substituinte opcional como definido aquipara heteroarileno opcionalmente substituído que fornece um compostoestável;
R3 em cada ocorrência é independentemente selecionado dogrupo que consiste em alquila inferior opcionalmente substituída, alquenilainferior opcionalmente substituída, porém, contanto que nenhum carbono dealqueno deste esteja ligado a qualquer um de -C(O)-, -C(S)-, -S(O)-, -S(0)2-,-O-, -S-, ou -N- de qualquer um de -OR3, -SR3, -C(0)R3, -C(S)R3, -S(0)R3, -S(0)2R3, -C(0)OR3, -C(S)OR3, -C(0)NHR3, -C(0)NR3R3, -C(S)NHR3, -C(S)NR3R3, -S(0)2NHR3, -S(0)2NR3R3, -NHR3, -NHC(0)R3, -NR3C(0)R3, - NHC(S)R3, -NR3C(S)R3, -NHS(0)2R3, -NR3S(0)2R3, -NHC(0)OR3, -NR3C(0)OH, -NR3C(0)OR3, -NHC(S)OR3, -NR3C(S)OH, -NR3C(S)OR3, -NHC(0)NHR3, -NHC(0)NR3R3, -NR3C(0)NH2, -NR3C(0)NHR3, -NR3C(0)NR3R3, -NHC(S)NHR3, -NHC(S)NR3R3, -NR3C(S)NH2,NR3C(S)NHR3, -NR3C(S)NR3R3, -NHS(0)2NHR3, -NHS(0)2NR3R3, -NR3S(0)2NH2, -NR3S(0)2NHR3, ou -NR3S(0)2NR3R3, alquinila inferioropcionalmente substituída, porém, contanto que nenhum carbono de alquinodeste esteja ligado a qualquer um de -C(O)-, -C(S)-, -S(O)-, -S(0)2-, -O-, -S-,ou -N- de qualquer um de -OR3, -SR3, -C(0)R3, -C(S)R3, -S(0)R3, -S(0)2R3, -C(0)OR3, -C(S)OR3, -C(0)NHR3, -C(0)NR3R3, -C(S)NHR3, -C(S)NR3R3, -S(0)2NHR3, -S(0)2NR3R3, -NHR3, -NHC(0)R3, -NR3C(0)R3, -NHC(S)R3, -NR3C(S)R3, -NHS(0)2R3, -NR3S(0)2R3, -NHC(0)OR3, -NR3C(0)OH, -NR3C(0)OR3, -NHC(S)OR3, -NR3C(S)OH, -NR3C(S)OR3, -NHC(0)NHR3, -NHC(0)NR3R3, -NR3C(0)NH2, -NR3C(0)NHR3, -NR3C(0)NR3R3, -NHC(S)NHR3, -NHC(S)NR3R3, -NR3C(S)NH2, -NR3C(S)NHR3,NR3C(S)NR3R3, -NHS(0)2NHR3, -NHS(0)2NR3R3, -NR3S(0)2NH2) -NR3S(0)2NHR3, ou -NR3S(0)2NR3R3, cicloalquila opcionalmente substituída,heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída,e heteroarila opcionalmente substituída;
R7 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquilainferior opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída,heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída,heteroarila opcionalmente substituída, -C(0)R8, e -S(0)2R8;
R8 é selecionado do grupo que consiste em alquila inferioropcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída,heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituídae heteroarila opcionalmente substituída;
R9 em cada ocorrência é independentemente selecionado dogrupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior, e alquila inferiorsubstituída com um ou mais substituintes selecionados do grupo queconsiste em flúor, -OH, -NH2, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído porflúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino,monoalquilamino substituído por flúor, dialquilamino, dialquilaminosubstituído por flúor, e -NR12R13, porém, contanto que quando R9 for alquilainferior substituída, qualquer substituição no carbono de alquila ligado ao -N-de -NR9- seja flúor;
R10 e R11 em cada ocorrência são independentementeselecionados do grupo que consiste em alquila inferior opcionalmentesubstituída, alquenila inferior opcionalmente substituída, porém, contantoque nenhum carbono de alqueno deste esteja ligado ao nitrogênio de -NR10R11, alquinila inferior opcionalmente substituída, porém, contanto quenenhum carbono de alquino deste esteja ligado ao nitrogênio de -NR10R11,cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmentesubstituída, arila opcionalmente substituída, e heteroarila opcionalmentesubstituída; ou
R10 e R11 juntos com o nitrogênio ao qual eles estão ligadosformam uma heterocicloalquila monocíclica de 5-7 membros opcionalmentesubstituída ou um nitrogênio monocíclico de 5 ou 7 membros opcionalmentesubstituído contendo heteroarila; e
R12 e R13 combinam com o nitrogênio ao qual eles estão ligadospara formar uma heterocicloalquila de 5-7 membros ou heterocicloalquila de5-7 membros substituída com um ou mais substituintes selecionados dogrupo que consiste em flúor, -OH, -NH2) alquila inferior, alquila inferiorsubstituída por flúor, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído por flúor,alquiltio inferior, e alquiltio inferior substituído por flúor;
porém, contanto que quando os compostos tiverem a estruturae L1a for -CH2-, -CH(OH)-, ou -C(O)-, depois R1a não seja fenila, 4-trifluorometil-fenila, 4-metóxi-fenila, 4-cloro-fenila, 4-flúor-fenila, 4-metil-fenila,3-flúor-fenila ou tiofen-2-ila e os compostos não tenham a estrutura
<formula>formula see original document page 9</formula>Em referência à fórmula I, uma estrutura de núcleo mostradaacima com X-i, X2, Yi e Y2 como CH e com L'-ArrL2-R1 substituído com H éreferida como o "núcleo de azaindol". Para aquele núcleo de azaindol,referência aos átomos do anel ou posições do anel é como mostrada naestrutura a seguir:
<formula>formula see original document page 10</formula>
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula I, os compostostêm uma estrutura selecionada da seguinte:
<formula>formula see original document page 10</formula>
em que L1, An, L2, R1, R2, R4, R5 e R6 são como definidos para a fórmula I.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula I, Xi e X2 são Nou CH. Em outra modalidade, X1( X2 e Y1 são N ou CH onde em uma outramodalidade, Y2 é CR5 e R5 é diferente de hidrogênio. Em outra modalidade,Xl X2 e Y2 são N ou CH onde em uma outra modalidade Yi é CR4 e R4 sãodiferentes de hidrogênio. Em outra modalidade, Xi, X2 e Yi são CH onde emuma outra modalidade, Y2 é CR5 e R5 é diferente de hidrogênio. Em outramodalidade, X,, X2e Y2 são CH onde em uma outra modalidade Yi é CR4 eR4 é diferente de hidrogênio.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula I, em que X-i, X2,Yt e Y2 são independentemente CR2, CR6, CR4 e CR5 respectivamente, umde R4 ou R5 é diferente de hidrogênio, preferivelmente onde R2 e R6 foremhidrogênio. Em uma modalidade, em que Xi, X2, Y1 e Y2 sãoindependentemente CR2, CR6, CR4 e CR5 respectivamente, R2, R5 e R6 sãohidrogênio e R4 é diferente de hidrogênio. Em uma modalidade, em que X1,X2, e Y2 são independentemente CR2, CR6, CR4 e CR5 respectivamente,R2, R4 e R6 são hidrogênio e R5 é diferente de hidrogênio.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula I, X-i e X2 são Nou CH, preferivelmente em que e X2 são CH.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula I, L éselecionado do grupo que consiste em -S-, -O-alquileno inferior, -C(O)-, -C(S)-, -S(O)-, -S(0)2-, e -NR7-, em que alquileno inferior é opcionalmentesubstituído com flúor, e em que quando L2 for alquileno inferioropcionalmente substituído ou compreender C1.3 alquileno opcionalmentesubstituído, o alquileno é opcionalmente substituído com flúor ou alquilainferior. Em uma modalidade, L1 é selecionado do grupo que consiste em -S-,-O-, -CH2-, -CF2-, -C(O)-, -C(S)-, -S(O)-, -S(0)2-, e -NH-.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula I, L2 éselecionado do grupo que consiste em uma ligação, alquileno inferioropcionalmente substituído, -0-(alq)b-, -OC(0)-(alq)b-, -C(0)0-(alq)b-, -OC(S)-(alq)b-, -C(S)0-(alq)b-, -C(0)-(alq)b-, -C(S)-(alq)b-, -C(0)NR9-(alq)b-, -OC(0)NR9-(alq)b-, -OC(S)NR9-(alq)b-, -C(S)NR9-(alq)b-, -S(0)-(alq)b-, -S(0)2-(alq)b-, S(0)2NR9-(alq)b-, -NR9-(alq)b-, -NR9C(0)-(alq)b-, -NR9C(0)0-(alq)b-, -NR9C(S)-(alq)b-, -NR9C(S)0-(alq)b-, -NR9C(0)NR9-(alq)b-, -NR9C(S)NR9-(alq)b-, -NR9S(0)2-(alq)b- e -NR9S(0)2NR9-(alq)b-.
Também em qualquer uma das modalidades acima da Fórmula I,quando L1 for alquileno inferior substituído ou quando L2 for alquileno inferiorsubstituído ou compreender C1-3 alquileno substituído, o alquileno ésubstituído com um ou mais, preferivelmente 1, 2, ou 3 substituintesselecionados do grupo que consiste em flúor, -OH, -NH2, alcóxi inferior,alquiltio inferior, monoalquilamino, dialquilamino, e -NR12R13, em que a(s)cadeia(s) de alquila de alcóxi inferior é/são alquiltio inferior, monoalquilaminoou dialquilamino opcionalmente substituído com um ou mais, preferivelmente1, 2, ou 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em flúor, -OH, -NH2, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferior,alquiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino, dialquilamino, oucicloalquilamino.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula I, as variáveis P,J, Q, T, F, e n são selecionadas para fornecer estruturas de An selecionadasdo grupo que consiste em<formula>formula see original document page 13</formula>
e, onde cada R é independentemente hidrogênio ou um substituinte opcionalcomo definido aqui para heteroarila opcionalmente substituída.
Os compostos da Fórmula I, e todas as submodalidadesdetalhadas aqui, podem ser usados para tratar um indivíduo sofrendo ou emrisco de uma doença ou condição mediada por Kit e/ou Fms proteína cinase,como aqueles descritas neste pedido de patente.
Em uma modalidade, um composto da Fórmula I tem umaestrutura de acordo com a estrutura subgenérica a seguir, Fórmula Ia,
<formula>formula see original document page 13</formula>
todos os sais, pró-fármacos, tautômeros, e isômeros destes,
em que L1, Ar^ R1, R2, R4, R5 e R6 são como definidos para a fórmula I;
L3 é selecionado do grupo que consiste em uma ligação, -O-(alq)b-alquileno inferior opcionalmente substituído, -S-(alq)b-, -NR14-(alq)b-, -C(0)-(alq)b-, -C(S)-(alq)b-, -S(0)-(alq)b-, -S(0)2-(alq)b-, -NR14C(0)-(alq)b-, -C(0)NR14-(alq)b-, -S(0)2NR14-(alq)b-, -NR14S(0)2-(alq)b-, -NR14C(0)NR14-(alq)b-, -NR14C(S)NR14-(alq)b-, e -NR14S(0)2NR14-(alq)b-;
alq é alquileno inferior opcionalmente substituído;
b é 0 ou 1; e
R14 é hidrogênio ou alquila inferior.
Em outra modalidade dos compostos da Fórmula Ia, R2, R5 e R6são hidrogênio, também em que R4 é diferente de hidrogênio. Em outramodalidade, R2, R4 e R6 são hidrogênio, também em que R5 é diferente dehidrogênio.
Os compostos da Fórmula Ia, e todas as submodalidadesdetalhadas aqui, podem ser usados para tratar um indivíduo sofrendo ou emrisco de uma doença ou condição mediada por Kit e/ou Fms proteína cinase,como aquelas descritas neste pedido de patente.
Em modalidades particulares o composto da Fórmula I tem umaestrutura de acordo com a estrutura subgenérica a seguir, Fórmula Ib,
<formula>formula see original document page 14</formula>
todos os sais, pró-fármacos, tautômeros, e isômeros destes,em que:
V e W são independentemente selecionados do grupo queconsiste em N e CH;
U e Z são independentemente selecionados do grupo queconsiste em N e CR18, porém, contanto que não mais que um de W, U e Z seja N;
A é selecionado do grupo que consiste em -CR19R20-, -C(O)-, -C(S)-, -S-, -3(0)-, -S(0)2-, -NR21-, e -0-;
n é O ou 1;
F e J são ambos C ou,um deFeJéCeo outro de F e J é N;
E e K são selecionados de C, N, O ou S;
G é selecionado de C ou N;
em que quando n for 1, F e J são C, e E, G e K são C, ouqualquer um de E, G e K é N e os outros dois de E, G e K são C, contantoque quando E, G ou K for N, R15, R17 e R16, respectivamente, estejam ausentes,
quando n for O e F e J forem ambos C, depois um de E e K é Cou N e o outro de E e K é C, N, O ou S, contanto que E e K não sejam C, econtanto que quando E e K forem N, um de R15 e R16 esteja ausente, econtanto que quando um de E e K for N e o outro for O ou S, R15 e R16estejam ausentes,
quando n for 0, um de F e J for N e o outro de F e J for C, depoisumdeEeKéNeo outro de E e K é C, ou E e K são C, contanto quequando E for N, R15 esteja ausente e quando K for N, R16 esteja ausente;
R1 é selecionado do grupo que consiste em alquila inferioropcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída,heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituídae heteroarila opcionalmente substituída;
R15 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquilainferior opcionalmente substituída, -OR22, -SR22 e halogênio quando E for C,está ausente quando E for O ou S ou quando n=1 e E for N, e está ausenteou selecionado do grupo que consiste em hidrogênio e alquila inferioropcionalmente substituída quando n=0 e E for N;
R16 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquilainferior opcionalmente substituída, -OR22, -SR22 e halogênio quando K for C,está ausente quando K for O ou S ou quando n=1 e K for N, e está ausenteou selecionado do grupo que consiste em hidrogênio e alquila inferioropcionalmente substituída quando n=0 e K for N;
R17 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquilainferior opcionalmente substituída, -OR22, -SR22 e halogênio quando G for C,ou está ausente quando G for N;
R18 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,halogênio, alquila inferior opcionalmente substituída, arila opcionalmentesubstituída, heteroarila opcionalmente substituída, -OH, -NH2, -NO2, -CN, -NHC(0)NH2( -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -NR24R25, -NHR23, -OR23, -SR23, -NHC(0)R23, -NR23C(0)R23, -NHC(S)R23, -NR23C(S)R23, -NHS(0)2R23, -NR23S(0)2R23, -NHC(0)NHR23, -NR23C(0)NH2, -NR23C(0)NHR23, -NHC(0)NR23R23, -NR23C(0)NR23R23, -NHC(S)NHR23, -NR23C(S)NH2, -NR23C(S)NHR23, -NHC(S)NR23R23, -NR23C(S)NR23R23, -NHS(0)2NHR23, -NR23S(0)2NH2, -NR23S(0)2NHR23, -NHS(0)2NR23R23, e -NR23S(0)2NR23R23;
M é selecionado do grupo que consiste em uma ligação, -(CR19R20)U-, -(CR19R20),-C(O)-(CR19R20)s-. -(CR19R20)t-C(S)-(CR19R20)s-. -(CR19R20)rC(O)O-(CR19R20)s-, -(CR19R20)t-C(S)O-(CR19R20)s-. (CR19R20),-C(O)NR26-(CR19R20)s-. -(CR19R20)t-C(S)NR26-(CR19R20)s-. -(CR19R20)t-S(O)-(CR19R2V. (CR19R2)t-S(0)2-(CR19R2)s-, -(CR19R20)t-S(O)2NR26-(CR19R20)s-. "(CR19R2)t-O-(CR19R20)s-, (CR19R20)rOC(O)-(CR19R20)s-> -(CR19R20)t-OC(S)-(CR19R20)s-,-(CR19R2),-OC(O)NR26-(CR19R20)s-) (CR19R20)t-OC(S)NR26-(CR19R20)S-. -(CR19R20)r(CR19R2)S) -(CR19R20)t-NR26-(CR19R20)s-. -(CR19R20)»-NR26C(O)-(CR19R20)s-. -(CR19R20),-NR26C(S)-(CR19R20)s-> -(CR19R20)»-NR26C(O)O-(CR19R20)s - (CR19R20),-NR26C(S)O-(CR19R20)s-. -(CR19R20),-NR26C(0)NR26-(CR19R2V> (CR19R20)t-NR26C(S)NR26-(CR19R20)s,(CR19R20)t-NR26S(O)2-(CR19R20)s e -(CR19R20)rNR26S(O)2NR26-(CR19R20)s-;
em que R19 e R20 em cada ocorrência são independentementeselecionados do grupo que consiste em hidrogênio, flúor, -OH, -NH2, alquilainferior, alcóxi inferior, alquiltio inferior, monoalquilamino, dialquilamino, e -NR27R28, em que a(s) cadeia(s) de alquila de alquila inferior, alcóxi inferior,alquiltio inferior, monoalquilamino, ou dialquilamino são opcionalmentesubstituídas com um ou mais substituintes selecionados do grupo queconsiste em flúor, -OH, -NH2, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído porflúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino,dialquilamino, e cicloalquilamino; ou
qualquer um de dois de R19 e R20 nos mesmos carbonos oudiferentes combinam para formar uma cicloalquila monocíclica de 3-7membros ou heterocicloalquila monocíclica de 5-7 membros e quaisqueroutros de R19 e R20 são independentemente selecionados do grupo queconsiste em hidrogênio, flúor, -OH, -NH2, alquila inferior, alcóxi inferior,alquiltio inferior, monoalquilamino, dialquilamino, e -NR27R28, em que a(s)cadeia(s) de alquila de alquila inferior, alcóxi inferior, alquiltio inferior,monoalquilamino, ou dialquilamino é/são opcionalmente substituída(s) comum ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em flúor, -OH,-NH2, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferior,alquiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino, dialquilamino, ecicloalquilamino, e em que a cicloalquila monocíclica ou heterocicloalquilamonocíclica são opcionalmente substituídas com um ou mais substituintesselecionados do grupo que consiste em halogênio, -OH, -NH2, alquila inferior,alquila inferior substituída por flúor, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituídopor flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído por flúor,monoalquilamino, dialquilamino, e cicloalquilamino;
R21 e R22 em cada ocorrência são independentementehidrogênio ou alquila inferior opcionalmente substituída;
R23 em cada ocorrência é independentemente selecionado dogrupo que consiste em alquila inferior opcionalmente substituída, alquenilainferior opcionalmente substituída, porém, contanto que nenhum carbono dealqueno deste esteja ligado a qualquer um de -C(O)-, -C(S)-, -S(0)2-, -O-, -S-,ou -N- de qualquer um de -NHR23, -OR23, -SR23, -NHC(0)R23, -NR23C(0)R23,-NHC(S)R23, -NR23C(S)R23, -NHS(0)2R23, -NR23S(0)2R23, -NHC(0)NHR23, -NR23C(0)NH2, -NR23C(0)NHR23, -NHC(0)NR23R23, -NR23C(0)NR23R23, -NHC(S)NHR23, -NR23C(S)NH2, -NR23C(S)NHR23, -NHC(S)NR23R23, -NR23C(S)NR23R23, -NHS(0)2NHR23, -NR23S(0)2NH2, -NR23S(0)2NHR23, -NHS(0)2NR23R23, ou -NR23S(0)2NR23R23, alquinila inferior opcionalmentesubstituída, porém, contanto que nenhum carbono de alquino deste estejaligado a qualquer um de -C(O)-, -C(S)-, -S(O)-, -S(0)2-, -O-, -S-, ou -N- dequalquer um de -NHR23, -OR23, -SR23, -NHCÍOJR25, -NR23C(0)R23, -NHC(S)R23, -NR23C(S)R23, -NHS(0)2R23, -NR23S(0)2R23, -NHC(0)NHR23, -NR23C(0)NH2, -NR23C(0)NHR23, -NHC(0)NR23R23, -NR23C(0)NR23R23, -NHC(S)NHR23, -NR23C(S)NH2, -NR23C(S)NHR23, -NHC(S)NR23R23, -NR23C(S)NR23R23, -NHS(0)2NHR23, -NR23S(0)2NH2, -NR23S(0)2NHR23, -NHS(0)2NR23R23, ou -NR23S(0)2NR23R23, cicloalquila opcionalmentesubstituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmentesubstituída, e heteroarila opcionalmente substituída; R24 e R25 em cadaocorrência são independentemente selecionados do grupo que consiste emalquila inferior opcionalmente substituída, alquenila inferior opcionalmentesubstituída, porém, contanto que nenhum carbono de alqueno deste estejaligado ao nitrogênio de -NR24R25, alquinila inferior opcionalmente substituída,porém, contanto que nenhum carbono de alquino deste esteja ligado aonitrogênio de -NR24R25, cicloalquila opcionalmente substituída,heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída,e heteroarila opcionalmente substituída; ou
R24 e R25 juntos com o nitrogênio ao qual eles estão ligadosformam uma heterocicloalquila monocíclica de 5-7 membros opcionalmentesubstituída ou um nitrogênio monocíclico de 5 ou 7 membros opcionalmentesubstituído contendo heteroarila;
R26 em cada ocorrência é independentemente selecionado dogrupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior, e alquila inferiorsubstituída com um ou mais substituintes selecionados do grupo queconsiste em flúor, -OH, -NH2, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído porflúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino,monoalquilamino substituído por flúor, dialquilamino, dialquilaminosubstituído por flúor, e -NR27R28, porém, contanto que quando R26 for alquilainferior substituída, qualquer substituição no carbono de alquila inferiorligado ao -N- de -NR26- seja flúor;
R27 e R28 combinam com o nitrogênio ao qual eles estão ligadospara formar uma heterocicloalquila de 5-7 membros ou heterocicloalquila de5-7 membros substituída com um ou mais substituintes selecionados dogrupo que consiste em flúor, -OH,"-NH2, alquila inferior, alquila inferiorsubstituída por flúor, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído por flúor,alquiltio inferior, e alquiltio inferior substituído por flúor;
u é 1-6;
t é 0-3; e
s é 0-3;
contanto que
quando V, W, U e Z forem CH, n=1, E, F, G, J. e K forem C, R15,R16 e R17 forem H, A for -CH2-, -CH(OH)-, ou -C(O)-, e M for -NHCH2-,depois R1 não seja fenila, 4-trifluorometil-fenila, 4-metóxi-fenila, 4-cloro-fenila,4-flúor-fenila, 4-metil-fenila, 3-flúor-fenila ou tiofen-2-ila,
quando V, W.UeZ forem CH, n=1, E, F, G, J. e K forem C, R15,R16 e R17 forem H, e A for -CH2-, depois M-R1 não seja -NHCH2CH(CH3)2,
quando V, W, e U forem CH, n=1, E, F, G, J. e K forem C, R15,R16 e R17 forem H, A for -CH2-, M-R1 for -OCH3) e Z for CR18, depois R18 nãoseja tiofen-3-ila, e
quando V, W, e U forem CH, n=0, F, J. e K forem C, E for N, R15for CH3) R16 for H, A for -C(O)-, M-R1 for -CH(CH3)3, e Z for CR18, depois R18não seja 3-((E)-2-carbóxi-vinil)fenila.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, E, J. K, G, F,n, R15, R16 e R17 são selecionados para fornecer estruturas selecionadas dogrupo que consiste em
<formula>formula see original document page 19</formula>e, em que R15, R16 e R17 são como definidos para os compostos da Fórmula
Ib e em que ^ indica o ponto de ligação de A e ^ indica o ponto deligação de M.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, M éselecionado do grupo que consiste em -O-(CR19R20)s-, -S-(CR19R2)S-, -OC(O)-(CR19R20)s-, -OC(S)-(CR19R2V, -OC(O)NR26-(CR19R20)s-. -OC(S)NR26-(CR19R20)S-. -C(O)NR26-(CR19R20)s-. -C(S)NR26-(CR19R20)S-. -S(O)2NR26-(CR19R20)s-> -NR26-(CR19R2V. -NR26C(O)-(CR19R20)s, -NR26C(S)-(CR19R20)S-. -NR26C(O)O-(CR19R20)s-. -NR26C(S)O-(CR19R20)s->NR26C(O)NR26-(CR19R20)s-, ' -NR26C(S)NR26-(CR19R20)s-> -NR26S(0)2-(CR19R20)S-, e -NR26S(O)2NR26-(CR19R20)s-
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, R26 em cadaocorrência é independentemente selecionado do grupo que consiste emhidrogênio, alquila inferior, ou alquila inferior substituída com 1, 2, ou 3substituintes selecionados do grupo que consiste em flúor, -OH, -NHc, alcóxi,alquiltio inferior, monoalquilamino, dialquilamino e cicloalquilamino, contantoque qualquer substituição no carbono que está ligado ao nitrogênio de -NR26seja flúor.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, R1 éselecionado do grupo que consiste em arila opcionalmente substituída eheteroarila opcionalmente substituída.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, Z é N ou CH,n é 1, E-R15 é N ou CH, K-R16 é N ou CH, e G-R17 é N ou CH, contanto quenão mais que um de E-R15, K-R16 e G-R17 seja N. Em uma modalidade, Z éN ou CH, n é 1, e E-R15, K-R16 e G-R17 são CH.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, V, W e Zsão CH, U é CR18, n é 1, E-R15 é N ou CH, K-R16 é N ou CH, e G-R17 é N ouCH, contanto que não mais que um de E-R15, K-R16 e G-R17 seja N. Emoutra modalidade, V, W e Z são CH, U é CR18, n é 1, e E-R15, K-R16 e G-R17são CH.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, Z é N ou CH,n é 1, E-R15, K-R16 e G-R17 são CH, A é -CH2-, M é -NHCH2-, também emque R1 é fenila opcionalmente substituída. Em outra modalidade, V, Z, U e Wsão CH, n é 1, E-R15 é N ou CH, K-R16 é N ou CH, e G-R17 é N ou CH,contanto que não mais que um de E-R15, K-R16 e G-R17 seja N.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, Z é N ou CH,n é 1, E-R15 é N ou CH, K-R16 é N ou CH, e G-R17 é N ou CH, contanto quenão mais que um de E-R15, K-R16 e G-R17 seja N, e R1 é fenilaopcionalmente substituída com um ou mais substituintes selecionados dogrupo que consiste em halogênio, -OH, -NH2, -N02, -CN, alquila inferioropcionalmente substituída e -OR29 onde R29 é selecionado do grupo queconsiste em alquila inferior opcionalmente substituída, cicloalquilaopcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arilaopcionalmente substituída e heteroarila opcionalmente substituída.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, V, Z, U e Wsão CH, n é 1, E-R15, K-R16 e G-R17 são CH, A é -CH2-, M é -NHCH2, e R1 éfenila opcionalmente substituída, também em que R1 é fenila opcionalmentesubstituída com um ou mais substituintes selecionados do grupo queconsiste em halogênio, -OH, -NH2, -N02, -CN, alquila inferior opcionalmentesubstituída e -OR29 onde R29 é selecionado do grupo que consiste em alquilainferior opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída,heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituídae heteroarila opcionalmente substituída.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, V, W e Zsão CH, U é CR18, n é 1, E-R15, K-R16 e G-R17 são CH, A é -CH2-, M é -NHCH2, e R1 é fenila opcionalmente substituída, também em que R1 é fenilaopcionalmente substituída com um ou mais substituintes selecionados dogrupo que consiste em halogênio, -OH, -NH2, -N02, -CN, alquila inferioropcionalmente substituída e -OR onde R é selecionado do grupo queconsiste em alquila inferior opcionalmente substituída, cicloalquilaopcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arilaopcionalmente substituída e heteroarila opcionalmente substituída.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, quando n for1, e E, K e G forem C, pelo menos um de R15, R16 e R17 seja diferente dehidrogênio. Em outra modalidade, n é 1, um de E, K, e G é N e os outrosdois de E, K, e G são C e pelo menos um de R15, R16 e R17 é diferente dehidrogênio. Em outra modalidade, né1,E, KeGéC, e pelo menos um deR15, R16 e R17 é diferente de hidrogênio.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, n é 1, V e Wsão CH, U e Z são independentemente CR18, um de E, K, e G é N e osoutros dois de E, K, e G são C e pelo menos um de R15, R16 e R17 é diferentede hidrogênio. Em outra modalidade, n é 1, V e W são CH, U e Z sãoindependentemente CR18, E, K e G é C, e pelo menos um de R15, R16 e R17é diferente de hidrogênio.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, n é 1, um deE, K, e G é N e os outros dois de E, K, e G são C, pelo menos um de R15,R16 e R17 é diferente de hidrogênio, A é -CH2-, M é -NHCH2-, também emque R1 é fenila opcionalmente substituída. Em outra modalidade, n é 1, E, K,e G são C, pelo menos um de R15, R16 e R17 é'diferente de hidrogênio, A é -CH2-, M é -NHCH2-, também em que R1 é fenila opcionalmente substituída.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, n é 1, V, Z,U e W são CH, um de E, K, e G é N e os outros dois de E, K, e G são C epelo menos um de R15, R16 e R17 é diferente de hidrogênio. Em outramodalidade, V, Z, U e W são CH, E, K e G são C, e pelo menos um de R15,R16 e R17 é diferente de hidrogênio.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, Z é CR18,em que R18 é diferente de hidrogênio, n é 1, E-R15 é N ou CH, K-R16 é N ouCH e G-R17 é N ou CH. Em outra modalidade, Z é CR18, em que R18 édiferente de hidrogênio, n é 1, e E-R15, K-R16 e G-R17 são CH. Em outramodalidade, Z é CR18, em que R18 é diferente de hidrogênio, U é CR18, V eW são CH, n é 1, e E-R15, K-R16 e G-R17 são CH, também em que U é CH.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, Z é CR18,em que R18 é diferente de hidrogênio, n é 1, E-R15, K-R16 e G-R17 são CH, Aé -CH2-, M é -NHCH2-, também em que R1 é fenila opcionalmentesubstituída. Em uma outra modalidade, Z é CR18, em que R18 é diferente dehidrogênio, U é CR18, V e W são CH, n é 1, E-R15, K-R16 e G-R17 são CH, Aé -CH2-, M é -NHCH2-, também em que R1 é fenila opcionalmentesubstituída. Em uma outra modalidade, Z é CR18, em que R18 é diferente dehidrogênio, V, U e W são CH, n é 1, E-R15, K-R16 e G-R17 são CH, A é -CH2-,M é -NHCH2-, também em que R1 é fenila opcionalmente substituída.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, U é CR18,em que R18 é diferente de hidrogênio, n é 1, E-R15 é N ou CH, K-R16 é N ouCH e G-R17 é N ou CH. Em outra modalidade, U é CR18, em que R18 édiferente de hidrogênio, n é 1, e E-R15, K-R16 e G-R17 são CH. Em outramodalidade, U é CR18, em que R18 é diferente de hidrogênio, Z é CR18, V eW são CH, n é 1, e E-R15, K-R16 e G-R17 são CH, também em que Z é CH.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, U é CR18,em que R18 é diferente de hidrogênio, n é 1, E-R15, K-R16 e G-R17 são CH, Aé -CH2-, M é -NHCH2-, também em que R1 é fenila opcionalmentesubstituída. Em uma outra modalidade, U é CR18. Em que R18 é diferente dehidrogênic.-Z é CR18, V e W aso CH, n é 1, E-R15, K-R16 e G-R17 são CH, A é-CH2-, M é -NHCH2-, também em que R1 é fenila opcionalmente substituída.Em uma outra modalidade, U é CR18, em que R18 é diferente de hidrogênio,V, Z e W são CH, n é 1, E-R15, K-R16 e G-R17 são CH, A é -CH2-„ M é -NHCH2-, também em que R1 é fenila opcionalmente substituída.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, também emqualquer uma das modalidades acima, R15, R16 e R17 sãoindependentemente selecionados do grupo que consiste em halogênio, -OH,alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, alcóxi inferior, e alcóxiinferior substituído por flúor. Também em qualquer uma destas modalidades,R1 é fenila opcionalmente substituída com um ou mais substituintesselecionados do grupo que consiste em halogênio, -OH, -NH2, -N02, -CN,alquila inferior opcionalmente substituída e -OR onde R é selecionado dogrupo que consiste em alquila inferior opcionalmente substituída, cicloalquilaopcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arilaopcionalmente substituída e heteroarila opcionalmente substituída.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ib, também emqualquer uma das modalidades acima, R18 é selecionado do grupo queconsiste em halogênio, -OH, alquila inferior opcionalmente substituída e -OR29 onde R29 é selecionado do grupo que consiste em alquila inferioropcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída,heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituídae heteroarila opcionalmente substituída. Também em qualquer uma destasmodalidades, R1 é fenila opcionalmente substituída com um ou maissubstituintes selecionados do grupo que consiste em halogênio, -OH, -NH2, -N02, -CN, alquila inferior opcionalmente substituída e -OR29 onde R29 éselecionado do grupo que consiste em alquila inferior opcionalmentesubstituída, cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquilaopcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída e heteroarilaopcionalmente substituída.
Em outra modalidade dos compostos da Fórmula Ib, M é umaligação e R1 é diferente de tiofenila.
- Em outra modalidade dos compostos da Fórmula Ib, Z é N ouCR18 em que R18 não é hidrogênio. Também para esta modalidade, comopermitido na descrição da Fórmula Ib, E é NR15 ou CR15, K é NR16 ou CR16 eG é CR17, ou combinações destes, em que pelo menos um de R15, R16 e R17não seja hidrogênio.
Os compostos da Fórmula Ib, e todas as submodalidadesdetalhadas aqui, podem ser usados para tratar um indivíduo sofrendo ou emrisco de uma doença ou condição mediada por Kit e/ou Fms proteína cinase,como aquelas descritas neste pedido de patente.
Em uma modalidade, um composto da Fórmula I tem umaestrutura de acordo com a estrutura subgenérica a seguir, Fórmula Ig,<formula>formula see original document page 25</formula>
todos os sais, pró-fármacos, tautômeros, e isômeros destes,em que:
Z-i é selecionado do grupo que consiste em N e CR34;
Ui é selecionado do grupo que consiste em N e CR;
A-\ é selecionado do grupo que consiste em -CH2- e -C(O)-;
M3 é selecionado do grupo que consiste em uma ligação, -NR39-,-S-, -O-, -NR39CH2-, -NR39CH(R40)-, -SCH2-, -OCH2-, -C(0)NR39-, -S(0)2NR39-, -CH2NR39-, -CH(R40)NR39-, -NR39C(0)-, e -NR39S(0)2-;
n é 0 ou 1;
v é 0, 1, 2 ou 3;
F-\ e Ji são ambos C ou um de Fi e Ji é C e o outro de Fi e Ji é
N;
Ei e Kt são ambos selecionados de C, N, O ou S;Gi é selecionado de C ou N;em que
quando n for 1, F, e ^ são C, e E-i, Gi e Ki são C, ou qualquerum de Ei, Gi e Ki é N e os outros dois de Ei, d e são C, contanto quequando Ei, Gi ou Kt forem N, R36, R37 e R38, respectivamente, estãoausentes;
quando n for 0 e Ft e Ji forem ambos C, depois um de Ei e K: éC ou N e o outro de Ei e Ki é C, N, O ou S, contanto que Ei e K-i não sejamambos C, e contanto que quando Ei e forem N, um de R36 e R37 estejaausente, e contanto que quando um de Et e ^ for N e o outro for O ou S,R36 e R estejam ausentes,
quando n for 0, um de Fi e Jt for N e o outro de Fi e Ji for C,depois um de E1 e K-i é N e o outro de E-i e Ki é C, ou E-[ e são ambos C,contanto que quando Ei for N, R36 esteja ausente e quando Ki for N, R37esteja ausente;
Cy é selecionado do grupo que consiste em cicloalquila,heterocicloalquila, arila e heteroarila;
R34 e R35 são independentemente selecionados do grupo queconsiste em hidrogênio, -OR41, -SR41, -NHR41, -NR41R41, -NR39C(0)R41, -NR39S(0)2R41, halogênio, alquila inferior, cicloalquila, heterocicloalquila, arilae heteroarila, em que alquila inferior é opcionalmente substituída com um oumais substituintes selecionados do grupo que consiste em flúor, alcóxiinferior, alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferiorsubstituído por flúor, monoalquilamino, dialquilamino, cicloalquila,heterocicloalquila, arila, e heteroarila, em que cicloalquila, heterocicloalquila,arila, e heteroarila como R34 ou R35, ou como substituintes de alquila inferiorsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes selecionadosdo grupo que consiste em -OH, -NH2, -CN, -N02, -S(0)2NH2, -C(0)NH2, -OR42, -SR42, -NHR42, -NR42R42, -NR39C(0)R42, -NR39S(0)2R42, -S(0)2R42,halogênio, alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, ecicloalquilamino;
R45 em cada ocorrência é independentemente selecionado dogrupo que consiste em -OR41, -SR41, -NHR41, -NR41R4\ -NR39C(0)R41, -NR39S(0)2R4\ halogênio, alquila inferior, cicloalquila, heterocicloalquila, arilae heteroarila, em que alquila inferior é opcionalmente substituída com um oumais substituintes selecionados do grupo que consiste em flúor, alcóxiinferior, alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferiorsubstituído por flúor, monoalquilamino, dialquilamino, cicloalquila,heterocicloalquila, arila, e heteroarila, em que cicloalquila, heterocicloalquila,arila, e heteroarila como R45, ou como substituintes de alquila inferior éopcionalmente substituída com um ou mais substituintes selecionados dogrupo que consiste em -OH, -NH2, -CN, -N02, -S(0)2NH2, -C(0)NH2, -OR42, -SR42, -NHR42, -NR42R42, -NR39C(0)R42, -NR39S(0)2R42, -S(0)2R42, halogênio,alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, e cicloalquilamino;R é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,halogênio, alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, alcoxi inferior,e alcoxi inferior substituído por flúor quando Ei for C, está ausente quandoEi for O ou S ou quando n=1 e Ei for N, e está ausente ou selecionado dogrupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior, e alquila inferiorsubstituída por flúor quando n=0 e Ei for N;
R37, é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,halogênio, alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, alcoxi inferior,e alcoxi inferior substituído por flúor quando Ki for C, está ausente quandoKi for O ou S ou quando n=1 e Ki for N, e está ausente ou selecionado dogrupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior, e alquila inferiorsubstituída por flúor quando n=0 e Ki for N;
R38 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio,halogênio, alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, alcoxi inferior,e alcoxi inferior substituído por flúor quando Gi for C, ou está ausentequando Gi for N;
R39 em cada ocorrência é independentemente selecionado dogrupo que consiste em hidrogênio e alquila inferior;
R40 é selecionado do grupo que consiste em alquila inferior, ealquila inferior substituída por flúor;
R41 é seiecionado do grupo que consiste em alquila inferior,cicloalquila, heterocicloalquila, arila e heteroarila, em que alquila inferior éopcionalmente substituída com um ou mais substituintes selecionados dogrupo que consiste em flúor, alcoxi inferior, alcoxi inferior substituído porflúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino,dialquilamino, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, e heteroarila, em quecicloalquila, heterocicloalquila, arila, e heteroarila como R41 ou comosubstituintes de alquila inferior é opcionalmente substituído com um ou maissubstituintes selecionados do grupo que consiste em -OH, -NH2, -CN, -N02,-S(0)2NH2, -C(0)NH2) -OR42, -SR42, -NHR42, -NR42R42, -NR39C(0)R42, -NR39S(0)2R42, -S(0)2R42, halogênio, alquila inferior, alquila inferiorsubstituída por flúor, e cicloalquilamino; eR em cada ocorrência é independentemente selecionado dogrupo que consiste em alquila inferior, heterocicloalquila e heteroarila, emque alquila inferior é opcionalmente substituída com um ou maissubstituintes selecionados do grupo que consiste em flúor, alcóxi inferior,alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferiorsubstituído por flúor, monoalquilamino, dialquilamino, e cicloalquilamino.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ig, n é 1, Gi eKi são C, e E é N ou C, preferivelmente em que E é C.
Ém uma modalidade dos compostos da Fórmula Ig, M3 éselecionado do grupo que consiste em -NR39-, -O-, -NR39CH2-, -NR39CH(R40)-, -SCH2-, -OCH2-, -CH2NR39-, -NR39C(0)-, e -NR39S(0)2-,preferivelmente em que M3 é -NR39CH2-, -NR39CH(R40)-, -SCH2-, -OCH2-, ou -CH2NR39-.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ig, n é 1, Gi eKi são C, e E é N ou C, preferivelmente em que E é C, e M3 é selecionadodo grupo que consiste em -NR39-, -O-, -NR39CH2-, -NR39CH(R40)-, -SCH2-, -OCH2-, -CH2NR39-, -NR39C(0)-, e -NR39S(0)2-, preferivelmente em que M3 é-NR39CH2-, -NR39CH(R40)-, -SCH2-, -OCH2-, ou -CH2NR39-.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ig, cada R45 éselecionado do grupo que consiste em -OH, -NH2, -CN, -N02, halogênio,aiquiia inferior, alqüüa inferior substituída por flúor, alcóxi inferior, alcóxiinferior substituído por flúor, tioalquila inferior, tioalquila inferior substituídapor flúor, monoalquilamino, dialquilamino e cicloalquilamino, preferivelmenteem que v é 0, 1, ou 2, também 0 ou 1.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ig, n é 1, G1 eKi são C, e E é N ou C, preferivelmente em que E é C, M3 é selecionado dogrupo que consiste em -NR39-, -O-, -NR39CH2-, -NR39CH(R40)-, -SCH2-, -OCH2-, -CH2NR39-, -NR39C(0)-, e -NR39S(0)2-, preferivelmente em que M3 é-NR39CH2-, -NR39CH(R40)-, -SCH2-, -OCH2-, ou -CH2NR39-, e cada R45 éselecionado do grupo que consiste em -OH, -NH2) -CN, -N02, halogênio,alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, alcóxi inferior, alcóxiinferior substituído por flúor, tioalquila inferior, tioalquila inferior substituídapor flúor, monoalquilamino, dialquilamino e cicloalquilamino, preferivelmenteem que v é 0, 1, ou 2, também 0 ou 1.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ig, Zi é CR34,Ui é CR35, e R34 e R35 são ambos hidrogênio. Em uma modalidade, Z\ éCR34, Ui é CR35, e R34 e R35 são independentemente selecionados do grupoque consiste em hidrogênio, -OR41, halogênio, alquila inferior, cicloalquila,heterocicloalquila, arila e heteroarila, em que cicloalquila, heterocicloalquila,arila e heteroarila são opcionalmente substituídas com um ou maissubstituintes selecionados do grupo que consiste em -OH, -NH2) -CN, -N02,-S(0)2NH2, -C(0)NH2, -OR42, -SR42, -NHR42, -NR42R42, -NR39C(0)R42, -NR39S(0)2R42, -S(0)2R42, halogênio, alquila inferior, alqüila inferiorsubstituída por flúor, e cicloalquilamino, e em que alquila inferior éopcionalmente substituída com um ou mais substituintes selecionados dogrupo que consiste em flúor, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído porflúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino,dialquilamino, e cicloalquilamino. Em uma outra modalidade, um de R34 e R35é hidrogênio, e o outro de R34 e R35 é selecionado do grupo que consiste emhidrogênio, halogênio, alquila inferior, alcóxi inferior, arila e heteroarila, emque arila e heteroarila são opcionalmente substituídas com um ou maissubstituintes selecionados do grupo que consiste em -OH, -NH2, -CN, -N02,-S(0)2NH2, -C(0)NH2, -OR42, -SR42, -NHR42, -NR42R42, -NR2CC(Ü)R42, -NR39S(0)2R42, -S(0)2R42, halogênio, alquila inferior, alquila inferiorsubstituída por flúor, e cicloalquilamino, e em que alquila inferior e alcóxiinferior são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintesselecionados do grupo que consiste em flúor, alcóxi inferior, alcóxi inferiorsubstituído por flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído por flúor,monoalquilamino, dialquilamino, e cicloalquilamino, também em que o outrode R34 e R35 é selecionado do grupo que consiste em halogênio, alquilainferior, e alcóxi inferior, em que alquila inferior e alcóxi inferior sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes selecionados dogrupo que consiste em flúor, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído porflúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino,dialquilamino, e cicloalquilamino.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ig, cada R45 éindependentemente selecionado do grupo que consiste em -OH, -NH2) -CN,-N02, halogênio, alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, alcóxiinferior, alcóxi inferior substituído por flúor, tioalquila inferior, tioalquila inferiorsubstituída por flúor, monoalquilamino, dialquilamino e cicloalquilamino,preferivelmente em que v é 0, 1, ou 2, também 0 ou 1, Z-i é CR34, U1 é CR35,e R34 e R35 são independentemente selecionados do grupo que consiste emhidrogênio, -OR41, halogênio, alquila inferior, cicloalquila, heterocicloalquila,arila e heteroarila, em que cicloalquila, heterocicloalquila, arila e heteroarilasão opcionalmente substituídas com um ou mais substituintes selecionadosdo grupo que consiste em -OH, -NH2, -CN, -N02, -S(0)2NH2, -C(0)NH2, -OR42, -SR42, -NHR42, -NR42R42, -NR39C(0)R42, -NR39S(0)2R42, -S(0)2R42,halogênio, alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, ecicloalquilamino, e em que alquila inferior é opcionalmente substituída comum ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em flúor, alcóxiinferior, alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferior, alquiltío inferiorsubstituído por flúor, monoalquilamino, dialquilamino, e cicloalquilamino. Emuma outra modalidade, ambos R34 e R35 são hidrogênio.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ig, cada R45 éselecionado do grupo que consiste em -OH, :NH2, -CN, -N02, "halogênio,alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, alcóxi inferior, alcóxiinferior substituído por flúor, tioalquila inferior, tioalquila inferior substituídapor flúor, monoalquilamino, dialquilamino e cicloalquilamino, preferivelmenteem que v é 0, 1, ou 2, também 0 ou 1, Z, é CR34, U1 é CR35, um de R34 e R35é hidrogênio, e o outro de R34 e R35 é selecionado do grupo que consiste emhidrogênio, halogênio, alquila inferior, alcóxi inferior, arila e heteroarila, emque arila e heteroarila são opcionalmente substituídas com um ou maissubstituintes selecionados do grupo que consiste em -OH, -NH2, -CN, -N02,-S(0)2NH2, -C(0)NH2, -OR42, -SR42, -NHR42, -NR42R42, -NR39C(0)R42, -NR39S(0)2R42, -S(0)2R42, halogênio, alquila inferior, alquila inferiorsubstituída por flúor, e cicloalquilamino, e em que alquila inferior e alcóxiinferior são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintesselecionados do grupo que consiste em flúor, alcoxi inferior, alcoxi inferiorsubstituído por flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído por flúor,monoalquilamino, dialquilamino, e cicloalquilamino, também em que o outrode R34 e R35 é selecionado do grupo que consiste em halogênio, alquilainferior, e alcoxi inferior, em que alquila inferior e alcoxi inferior sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes selecionados dogrupo que consiste em flúor, alcoxi inferior, alcoxi inferior substituído porflúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino,dialquilamino, e cicloalquilamino.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ig, n é 1, G-i eKi são C, e E é N ou C, preferivelmente em que E é C, M3 é selecionado dogrupo que consiste em -NR39-, -O-, -NR39CH2-, -NR39CH(R40)-, -SCH2-, -OCH2-, -CH2NR39-, -NR39C(0)-, e -NR39S(0)2-, preferivelmente em que M3 é-NR39CH2-, -NR39CH(R40)-, -SCH2-, -OCH2-, ou -CH2NR39-, cada R45 éselecionado do grupo que consiste em -OH, -NH2, -CN, -N02, halogênio,alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, alcoxi inferior, alcoxiinferior substituído por flúor, tioalquila inferior, tioalquila inferior substituídapor flúor, monoalquilamino, dialquilamino e cicloalquilamino, preferivelmenteem que v é 0, 1, ou 2, também 0 ou 1, é CR34, Ui é CR35, e R34 e R35 sãoambos hidrogênio.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula Ig, n é 1, Gi eKt são C, e E é N ou C, preferivelmente em que E é C, M3 é selecionado dogrupo que consiste em -NR39-, -O-, -NR39CH2-, -NR39CH(R40)-, -SCH2-, -OCH2-, -CH2NR39-, -NR39C(0)-, e -NR39S(0)2-, preferivelmente em que M3 é-NR39CH2-, -NR39CH(R40)-, -SCH2-, -OCH2-, ou -CH2NR39-, cada R45 éselecionado do grupo que consiste em -OH, -NH2, -CN, -N02, halogênio,alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, alcoxi inferior, alcoxiinferior substituído por flúor, tioalquila inferior, tioalquila inferior substituídapor flúor, monoalquilamino, dialquilamino e cicloalquilamino, preferivelmenteem que v é 0, 1, ou 2, também 0 ou 1, Zi é CR34 e Ui é CR35, e R34 e R35são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio,-OR , halogênio, alquila inferior, cicloalquila, heterocicloalquila, arila eheteroarila, em que cicloalquila, heterocicloalquila, arila e heteroarila sãoopcionalmente substituídas com um ou mais substituintes selecionados dogrupo que consiste em -OH, -NH2> -CN, -N02, -S(0)2NH2, -C(0)NH2l -OR42, -SR42, -NHR42, -NR42R42, -NR39C(0)R42, -NR39S(0)2R42, -S(0)2R42, halogênio,alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, e cicloalquilamino, e emque alquila inferior é opcionalmente substituída com um ou maissubstituintes selecionados do grupo que consiste em flúor, alcóxi inferior,alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferiorsubstituído por flúor, monoalquilamino, dialquilamino, e cicloalquilamino. Emuma outra modalidade, um de R34 e R35 é hidrogênio, e o outro de R34 e R35é selecionado do grupo que consiste em halogênio, alquila inferior, alcóxiinferior, arila e heteroarila, em que arila e heteroarila são opcionalmentesubstituídas com um ou mais substituintes selecionados do grupo queconsiste em -OH, -NH2, -CN, -N02, -S(0)2NH2, -C(0)NH2, -OR42, -SR42, -NHR42, -NR42R42, -NR39C(0)R42, -NR39S(0)2R42, -S(0)2R42, halogênio,alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, e cicloalquilamino, e emque alquila inferior e alcóxi inferior são opcionalmente substituídos com umou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em flúor, alcóxiinferior, alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferiorsubstituído por flúor, monoalquilamino, dialquilamino, e cicloalquilamino,também em que o outro de R34 e R35 é selecionado do grupo que consisteem halogênio, alquila inferior, e alcóxi inferior, em que alquila inferior e alcóxiinferior são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintesselecionados do grupo que consiste em flúor, alcóxi inferior, alcóxi inferiorsubstituído por flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído por flúor,monoalquilamino, dialquilamino, e cicloalquilamino, também em que R34 éhidrogênio.
Os compostos da Fórmula Ig, e todas as submodalidadesdetalhadas aqui, podem ser usados para tratar um indivíduo sofrendo ou emrisco de uma doença ou condição mediada por Kit e/ou Fms proteína cinase,como aquelas descritas neste pedido de patente.Em certas modalidades dos compostos acima, compostos sãoexcluídos onde N (exceto onde N for um átomo do anel de heteroarila), O, ouS está ligado a um carbono que está também ligado a N (exceto onde N forum átomo do anel de heteroarila), O, ou S; ou onde N (exceto onde N for umátomo do anel de heteroarila), O, C(S), C(O), ou S(0)n (n é 0-2) está ligado aum carbono de alqueno de um grupo alquenila ou ligado a um carbono dealquino de um grupo alquinila; conseqüentemente, em certas modalidadesos compostos que incluem ligações como os seguintes são excluídos dapresente invenção: -NR-CH2-NR-, -0-CH2-NR-, -S-CH2-NR-, -NR-CH2-0-, -0-CH2-0-, -S-CH2-0 - -NR-CH2-S-, -O-CHz-S-, -S-CH2-S-, -NR-CH=CH-, -CH=CH-NR-, -NR-C=C-, -CsC-NR-, -0-CH=CH-, -CH=CH-0-, -0-C=C-, -C=C-0-, -S(O)0-2-CH=CH-, -CH=CH-S(0)o-2-, -S(0)0-2-OC-, -C=C-S(O)0-2-, -C(0)-CH=CH-, -CH=CH-C(0)-, -C=C(0)-, ou -C(0)-C=C-, -C(S)-CH=CH-, -CH=CH-C(S)-, -C=C-C(S)-, ou -C(S)-OC-.
Em outro aspecto, a invenção prove métodos para tratar umadoença ou condição mediada por c-kit em um indivíduo animal (por exemploum mamífero como um ser humano, outros primatas, animais esportivos,animais de interesse comercial como gado, animais de fazenda comocavalos, ou animais de estimação como cachorros e gatos), por exemplo,uma doença ou condição caracterizada por atividade de c-kit anormal (porexemplo atividade de cinase). Métodos de invenção envolvem administrar aóindivíduo sofrendo ou em risco de uma doença ou condição mediada por c-kit uma quantidade eficaz de um composto da Fórmula I, Fórmula Ia,Fórmula Ib, ou Fórmula Ig, e todas as submodalidades deste. Em umamodalidade, a doença mediada por c-kit é selecionada do grupo queconsiste em malignidades, incluindo tumores de mastócitos, câncer dopulmão de célula pequena, câncer testicular, tumores estromaisgastrointestinais (GISTs), glioblastoma, astrocitoma, neuroblastoma,carcinomas do trato genital feminino, sarcomas de origem neuroectodérmica,carcinoma colorretal, carcinoma in situ, neoplasia de células de Schwannassociada à neurofibromatose, leucemia mielocítica aguda, leucemialinfocítica aguda, leucemia mielogenosa crônica, mastocitose, melanoma, etumores de mastócitos caninos, e doenças inflamatórias, incluindo asma,artrite reumatoide, rinite alérgica, esclerose múltipla, síndrome inflamatoriado intestino, rejeição de transplante, e hipereosinofilia.
Em um aspecto relacionado, compostos da Fórmula I, Fórmulala, Fórmula Ib, ou Fórmula Ig, e todas as submodalidades destas, podem serusados na preparação de um fármaco para o tratamento de uma doença oucondição mediada por c-kit selecionada do grupo que consiste emmalignidades, incluindo tumores de mastócitos, câncer do pulmão de célulapequena, câncer testicular, tumores estromais gastrointestinais (GISTs),glioblastoma, astrocitoma, neuroblastoma, carcinomas do trato genitalfeminino, sarcomas de origem neuroectodérmica, carcinoma colorretal,carcinoma in situ, neoplasia de células de Schwann associada àneurofibromatose, leucemia mielocítica aguda, leucemia linfocítica aguda,leucemia mielogenosa crônica, mastocitose, melanoma, e tumores demastócitos caninos, e doenças inflamatórias, incluindo asma, artritereumatoide, rinite alérgica, esclerose múltipla, síndrome inflamatoria dointestino, rejeição de transplante, e hipereosinofilia.
Em um aspecto adicional, à invenção prove métodos para trataruma doença ou condição mediada por c-fms em um indivíduo animal (porexemplo um mamífero como um humano, outros primatas, animaisesportivos, animais de interesse comercial como gado, animais de fazendacomo cavalos, ou animais de estimação como cachorros e gatos), porexemplo, uma doença ou condição caracterizada por atividade de c-fmsanormal (por exemplo atividade de cinase). Métodos da invenção envolvemadministrar ao indivíduo sofrendo ou em risco de uma doença ou condiçãomediada por c-fms uma quantidade eficaz do composto da Fórmula I,Fórmula Ia, Fórmula Ib, ou Fórmula Ig, e todas as submodalidades deste.Em uma modalidade, a doença mediada por c-fms é selecionada do grupoque consiste em distúrbios imunes, incluindo artrite reumatoide, eritematosede lúpus sistêmico (SLE), granulomatose de Wegener, e rejeição detransplante, doenças inflamatórias incluindo Doença Pulmonar ObstrutivaCrônica (COPD), enfisema, e aterosclerose, distúrbios metabólicos, incluindoresistência à insulina, hiperglicemia, e lipólise, distúrbios de estrutura ósseaou mineralização, incluindo osteoporose, risco aumentado de fratura,hipercalcemia, e metástase óssea, doenças de rim, incluindo nefrite (porexemplo glomerulonefrite, nefrite intersticial, nefrite de Lúpus), necrosetubular, complicações renais associadas a diabetes, e hipertrofia e cânceres,incluindo mieloma múltiplo, leucemia mielóide aguda, leucemia mielóidecrônica (CML), câncer de mama, e câncer ovariano.
Em um aspecto relacionado, os compostos da Fórmula I,Fórmula Ia, Fórmula Ib, ou Fórmula Ig, e todas as submodalidades destas,podem ser usados na preparação de um fármaco para o tratamento de umadoença ou condição mediada por c-fms selecionada do grupo que consisteem distúrbios imunes, incluindo artrite reumatóide, eritematose de lúpussistêmico (SLE), granulomatose de Wegener, e rejeição de transplante,doenças inflamatórias incluindo Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica(COPD), enfisema, e aterosclerose, distúrbios metabólicos, incluindoresistência à insulina, hiperglicemia, e lipólise, distúrbios de estrutura ósseaou mineralização, incluindo osteoporose, risco aumentado de fratura,hipercalcemia, e metástase óssea, doenças de rim, incluindo nefrite (porexemplo glomerulonefrite, nefrite intersticial, nefrite de Lúpus), necrosetubular, complicações renais associadas a diabetes, e hipertrofia e cânceres,incluindo mieloma múltiplo, leucemia mielóide aguda.^ieucemia mielóidecrônica (CML), câncer de mama, e câncer ovariano.
Em um aspecto adicional, a invenção prove métodos para trataruma doença ou condição mediada por c-fms e/ou c-kit em um indivíduoanimal (por exemplo um mamífero como um ser humano, outros primatas,animais esportivos, animais de interesse comercial como gado, animais defazenda como cavalos, ou animais de estimação como cachorros e gatos),por exemplo, uma doença ou condição caracterizada por atividade de c-fmsanormal e/ou atividade de c-kit (por exemplo atividade de cinase). Métodosde invenção envolvem administrar ao indivíduo sofrendo ou em risco de umadoença ou condição mediada por c-fms e/ou c-kit uma quantidade eficaz docomposto da Fórmula I, Fórmula Ia, Fórmula Ib, ou Fórmula Ig, e todas assubmodalidades deste. Em uma modalidade, a doença mediada por c-fmse/ou c-kit é selecionada do grupo que consiste em tumores de mastócitos,câncer do pulmão de célula pequena, câncer testicular, tumores estromaisgastrointestinais, glioblastoma, astrocitoma, neuroblastoma, carcinomas dotrato genital feminino, sarcomas de origem neuroectodérmica, carcinomacolorretal, carcinoma in situ, neoplasia de células de Schwann associada àneurofibromatose, leucemia mielóide aguda, leucemia linfocítica aguda,leucemia mielogenosa crônica, mieloma múltiplo, mastocitose, melanoma,câncer de mama, câncer ovariano, tumores de mastócitos caninos,hipertrofia, asma, artrite reumatóide, rinite alérgica, esclerose múltipla,síndrome inflamatória do intestino, rejeição de transplante, eritematose delúpus sistêmico, granulomatose de Wegener, Doença Pulmonar ObstrutivaCrônica, enfisema, aterosclerose, resistência à insulina, hiperglicemia,lipólise, hipereosinofllia, osteoporose, risco aumentado de fratura,hipercalcemia, metástase óssea, glomerulonefrite, nefrite intersticial, nefritede Lúpus, necrose tubular, e complicações renais associadas a diabetes.
Em um aspecto relacionado, os compostos da Fórmula I, Ia,Fórmula Ib, ou Fórmula Ig, e todas as submodalidades destas, podem serusados na preparação de um fármaco para o tratamento de uma doença oucondição mediada por c-fms e/ou c-kit selecionada do grupo que consisteem tumores de masiúdtos, câncer do pulmão de célula pequena, câncertesticular, tumores estromais gastrointestinais, glioblastoma, astrocitoma,neuroblastoma, carcinomas do trato genital feminino, sarcomas de origemneuroectodérmica, carcinoma colorretal, carcinoma in situ, neoplasia decélulas de Schwann associada à neurofibromatose, leucemia mielóide aguda,leucemia linfocítica aguda, leucemia mielogenosa crônica, mieloma múltiplo,mastocitose, melanoma, câncer de mama, câncer ovariano, tumores demastócitos caninos, hipertrofia, asma, artrite reumatóide, rinite alérgica,esclerose múltipla, síndrome inflamatória do intestino, rejeição de transplante,eritematose de lúpus sistêmico, granulomatose de Wegener, DoençaPulmonar Obstrutiva Crônica, enfisema, aterosclerose, resistência à insulina,hiperglicemia, lipólise, hipereosinofllia, osteoporose, risco aumentado defratura, hipercalcemia, metástase óssea, glomerulonefrite, nefrite intersticial,nefrite de Lúpus, necrose tubular, e complicações renais associadas adiabetes.
Em outro aspecto, a invenção fornece métodos de usar oscompostos da Fórmula I, Fórmula Ia, Fórmula Ib, ou Fórmula Ig, e todas assubmodalidades destas, como descritos aqui (por exemplo compostos tendoníveis vantajosos de atividade e/ou seletividade em c-kit, c-fms ou tanto c-kitcomo c-fms). Em certas modalidades, os compostos são substituídos naposição 3 da estrutura do anel bicíclico de núcleo (núcleo de azaindol) comum grupo de substituinte que em ordem inclui um primeiro ligador ligado aum primeiro grupo arila ou heteroarila que está ligado a um ligador de 1 a 3átomos ligados a um segundo grupo arila ou heteroarila. Em certasmodalidades incluindo o grupo de substituinte na posição 3 recém descrito, oprimeiro ligador é metileno, etileno, -C(O)-, -C(S)-, -O-, -S-, ou -S(0)2-; oprimeiro grupo arila ou heteroarila é piridinila, pirimidinila, pirazinila,piridazinila, pirrolila, imidazolila, triazolila, tiazolila, ou oxazolila; o segundoligador é metil amino (NHCH2), etil amino (NHCH2CH2), amida (NHC(O)), ousulfonamida (NHS02); o segundo grupo arila ou heteroarila é fenila, piridinila,pirimidinila, pirazinila, piridazinila, pirrolila, imidazolila, triazolila, tiazolila,furanila, ou oxazolila; o segundo grupo arila ou heteroarila é opcionalmentesüuaütuído com urrrgrupo alquila inferior (por exemplo um grupo metila, umgrupo etila, um grupo propila, ou um grupo butila), um grupo alcóxi (porexemplo grupo metóxi, um grupo etóxi, um grupo propóxi, ou um grupobutóxi), um alquila inferior substituída por halo (por exemplo -CH2F, -CHF2)ou -CF3), ou halo (por exemplo F ou Cl). Em modalidades particulares, osegundo grupo arila ou heteroarila é um anel de 6 membros; o anel de 6membros é substituído na posição para; o anel de 6 membros é substituídona posição meta; o anel de 6 membros é substituído na posição orto; ou oanel de 6 membros é substituído nas posições meta e para. Em modalidadesparticulares, o segundo grupo arila ou heteroarila é um anel de 5 membros; oanel de 5 membros é substituído em uma posição adjacente ao átomo ligadoao segundo ligador; ou o anel de 5 membros não é substituído em umaposição adjacente ao átomo ligado ao segundo ligador. Em modalidadesparticulares, o grupo de substituinte na posição 3 é o único substituinte denão-hidrogênio no núcleo de azaindol.
Em modalidades particulares, o composto tem uma IC5o demenos que 100 nM, menos que 50 nM, menos que 20 nM, menos que 10 nM,ou menos que 5 nM como determinado em um ensaio de atividade de cinaseem geral aceito. Em certas modalidades, a seletividade do composto é demodo que o composto seja pelo menos 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, ou 100vezes mais ativo em c-kit que em Ret, PDGF, ou tanto Ret como PDGF. Emcertas modalidades, a seletividade do composto é de modo que o compostoseja pelo menos 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, ou 100 vezes mais ativo em c-kit que em c-fms. Em certas modalidades, a seletividade do composto é demodo que o composto seja pelo menos 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, ou 100vezes mais ativo em c-fms que em c-kit. Em certas modalidades, o compostotem em combinação cada pareamento de atividade (por exemplo IC50) e/ouseletividade como especificadas neste parágrafo.
Em modalidades particulares, o composto tem uma IC50 demenos que 100 nM, menos que 50 nM, menos que 20 nM, menos que 10 nM,ou menos que 5 nM como determinado em um ensaio de atividade de cinaseem geral aceito para atividade de c-kit, c-fms, ou tanto c-kit como c-fmsctr.ase. Em certas modalidades, a seletividade do composto é de modo queo composto seja pelo menos 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes, ou 100 vezes maisativo em c-kit, c-fms, ou c-kit e c-fms que em Ret, PDGF, ou Ret e PDGF.
Um aspecto adicional desta invenção refere-se às composiçõesque incluem uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto daFórmula I (incluindo Fórmula Ia, Ib, Ig e todas as submodalidades destas) epelo menos um veículo, excipiente, e/ou diluente farmaceuticamenteaceitável. A composição pode incluir uma pluralidade de compostosfarmacologicamente ativos diferentes que podem incluir uma pluralidade decompostos da Fórmula I (incluindo Fórmula Ia, Ib, Ig e todas assubmodalidades destas).
Em um aspecto relacionado, a invenção fornece kits que incluemuma composição como descrita aqui. Em modalidades particulares, acomposição é acondicionada, por exemplo, em um frasco, garrafa, frasco,que podem ser também empacotados, por exemplo, dentro de uma caixa,envelope, ou saco; a composição é aprovada pela U. S. Food and DrugAdministration ou órgão fiscalizador similar para administração a ummamífero, por exemplo, um ser humano; a composição é aprovada paraadministração a um mamífero, por exemplo, um ser humano, para umadoença ou condição mediada por c-kit e/ou c-fms; o kit da invenção incluiinstruções escritas sobre o uso e/ou outra indicação que a composição éadequada ou aprovada para administração a um mamífero, por exemplo, umser humano, para uma doença ou condição mediada por c-kit e/ou por c-fms;a composição é empacotada em dose de unidade ou forma de dose simples,por exemplo, pílulas de dose simples, cápsulas, ou outros.
A invenção também prove um método para identificar oudesenvolver compostos adicionais ativos em c-kit e c-fms, por exemplo,moduladores melhorados, determinando se qualquer um de uma pluralidadede compostos de teste da Fórmula I, Fórmula Ia, Fórmula Ib, ou Fórmula Ig,e todas as submodalidades destas, ativos em c-kit e c-fms fornece umamelhoria em uma ou mais propriedades farmacológicas desejadas comrelação a um composto de referência ativo em c-kit e c-fms, e selecionandoum composto, se houver, que tem uma melhoria na propriedadefarmacológica desejada assim fornecendo um modulador melhorado.
Em aspectos particulares de desenvolvimento do modulador, apropriedade farmacológica desejada é meia-vida de soro mais longa que 2 hou mais longo que 4 h ou mais longo que 8 h, solubilidade aquosa,biodisponibilidade oral mais que 10 %, ou biodisponibilidade oral mais que20%.
Além disso, em aspectos particulares de desenvolvimento domodulador, o processo pode ser repetido múltiplas vezes, isto é, rodadasmúltiplas de preparação de derivados e/ou seleção de compostosrelacionados adicionais e avaliação de tais derivados adicionais decompostos relacionados podem ser realizadas, por exemplo, 1,2,3, 4, 5, 6,7, 8, 9, 10 ou mais rodadas adicionais.
Em outro aspecto, a presente invenção também prove ummétodo para modular atividade de c-kit ou c-fms contatando c-kit ou c-fmscom uma quantidade eficaz de um composto da Fórmula I (incluindoFórmula Ia, Ib, Ig e todas as submodalidades destas) ativo em c-kit e/ou c-fms (como compostos desenvolvidos usando métodos descritos aqui). Ocomposto é preferivelmente fornecido a um nível suficiente para modular aatividade do c-kit ou c-fms em pelo menos 10 %, mais preferivelmente pelomenos 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, ou maior que 90%. Em muitas modalidades, o composto estará a uma concentração decerca de 1 uM, 100 uM, ou 1 mM, ou em uma faixa de 1-100 nM, 100-500nM, 500-1000 nM, 1-100 uM, 100-500 uM, óu 500-1000 uM. Emmodalidades particulares, o contato é realizado in vitro.
Aspectos e modalidades adicionais serão evidentes daDescrição Detalhada a seguir e das reivindicações.
DESCRICÀO DETALHADA DAS MODALIDADES PREFERIDAS
Como aqui usado as definições a seguir aplicam-se:
"Halo" e "halogênio" referem-se a todos os halógenos, ou seja,cloro (Cl), flúor (F), bromo (Br), ou iodo (I).
"Hidroxila" e "hidróxi" referem-se ao grupo -OH.
"Tiol" refere-se ao grupo -SH.
"Alquila inferior" sozinha ou em combinação significa um radicalderivado de alcano contendo de 1 a 6 átomos de carbono (a menos queespecificamente definido) que inclui uma alquila de cadeia reta ou alquilaramificada. O grupo alquila de cadeia reta ou ramificada é ligado emqualquer ponto disponível para produzir um composto estável. Em muitasmodalidades, uma alquila inferior é um grupo alquila reta ou ramificadacontendo de 1-6, 1-4, ou 1-2, átomos de carbono, como metila, etila, propila,isopropila, butila, t-butila, e outros. "Alquila inferior opcionalmentesubstituída" denota alquila inferior que é independentemente substituída, amenos que do contrário indicado, com um ou mais, preferivelmente 1, 2, 3, 4ou 5, também 1, 2, ou 3 substituintes, ligados a qualquer átomo disponívelpara produzir um composto estável, em que os substituintes sãoselecionados do grupo que consiste em -F, -OH, -NH2, -NO2, -CN, -C(0)OH,-C(S)OH, -C(0)NH2, -C(S)NH2, -S(0)2NH2) -NHC(0)NH2, -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -C(NH)NH2, -ORa, -SRa, -OC(0)Ra, -OC(S)Ra, -C(0)Ra, -C(S)Ra, -C(0)ORa, -C(S)ORa, -S(0)Ra, -S(0)2Ra, -C(0)NHRa, -C(S)NHRa, -C(0)NRaRa, -C(S)NRaRa, -S(0)2NHRa, -S(0)2NRaRa, -C(NH)NHRa, -C(NH)NRbRc, -NHC(0)Ra, -NHC(S)Ra, -NRaC(0)Ra, -NRaC(S)Ra, -NHS(0)2Ra, -NRaS(0)2Ra, -NHC(0)NHRa, -NHC(S)NHRa, -NRaC(0)NH2> -NRaC(S)NH2, -NRaC(0)NHRa, -NRaC(S)NHRa, -NHC(0)NRaRa, -NHC(S)NRaRa, -NRaC(0)NRaRa, -NRaC(S)NRaRa, -NHS(0)2NHR3, -NRaS(0)2NH2, -NRaS(0)2NHR3, -NHS(0)2NRaRa, -NR3S(0)2NRaRa, -NHRa, -NRaRa, -Re, -Rf, e -R9. Também, substituições possíveis incluemsubconjuntos destas substituições, como são indicadas aqui, por exemplo,na descrição dos compostos da Fórmula I (incluindo Fórmulas Ia, Ib, Ig etodas as submodalidades destas), ligados em qualquer átomo disponívelpara produzir um composto estável. Por exemplo "alquila inferior substituídapor flúor" denota um grupo alquila inferior substituída com um ou maisátomos de flúor, como perfluoroalquila onde preferivelmente a alquila inferioré substituída com 1, 2, 3, 4 ou 5 átomos de flúor, também 1, 2, ou 3 átomosde flúor. Embora seja entendido que as substituições estão ligadas emqualquer átomo disponível para produzir um composto estável, quandoalquila opcionalmente substituída for um grupo R de uma metade como -OR,-NHR, -C(0)NHR, e outros, substituição do grupo alquila R é de modo que asubstituição do carbono de alquila ligado a qualquer -O-, -S-, ou -N- dametade (exceto onde -N- for um átomo do anel de heteroarila) excluisubstituintes que resultariam em qualquer -O-, -S-, ou -N- do substituinte(exceto onde -N- for um átomo do anel de heteroarila) estando ligado aocarbono de alquila ligado a qualquer -O-, -S-, ou -N- da mistura.
"Alquileno inferior" refere-se a um radical derivado de alcanodivalente contendo 1-6 átomos de carbono, cadeia reta ou ramificada, dosquais dois átomos de hidrogênio são tirados do mesmo átomo de carbono oude átomos de carbono diferentes. Exemplos de alquileno inferior incluem,mas não são limitados a, metileno -CH2-, etileno -CH2CH2-, propileno -CH2CH2CH2-, isopropileno -CH(CH3)CH-, e outros. Alquileno inferioropcionalmente substituído" denota alquileno inferior que éindependentemente substituído, a menos que do contrário indicado, com umou mais, preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5, também 1, 2, ou 3 substituintes,ligados a qualquer átomo disponível para produzir um composto estável, emque os substituintes são selecionados do grupo que consiste em -F, -OH, -NH2, -N02, -CN, -C(0)OH, -C(S)OH, -C(0)NH2, -C(S)NH2, -S(0)2NH2, -NHC(0)NH2, -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -C(NH)NH2, -ORa, -SRa, -OC(0)Ra,-OC(S)Ra, -C(0)Ra, -C(S)Ra, -C(0)ORa, -C(S)ORa, -S(0)Ra, -S(0)2Ra, -C(0)NHRa, -C(S)NHRa, -C(0)NRaRa, -C(S)NRaRa, -S(0)2NHRa, -S(0)2NRaRa,-C(NH)NHRa, -C(NH)NRbRc, -NHC(0)Ra, -NHC(S)Ra, -NRaC(0)Ra, -NRaC(S)Ra, -NHS(0)2Ra, -NRaS(0)2Ra, -NHC(0)NHRa, -NHC(S)NHRa, -NRaC(0)NHRa, -NRaC(0)NH2, -NRaC(S)NH2( -NRaC(S)NHRa,NHC(0)NRaRa, -NHC(S)NRaRa, -NRaC(0)NRaRa, -NRaC(S)NRaRa, -NHS(0)2NHRa, -NRaS(0)2NH2, -NRaS(0)2NHRa, -NHS(0)2NRaRa, -NRaS(0)2NRaRa, -NHRa, -NRaRa, -Re, -Rf, e -R9, ou dois substituintes emqualquer um carbono ou um substituinte em cada um de quaisquer doiscarbonos na cadeia de alquileno podem se unir para formar uma cicloalquilamonocíclica de 3-7 membros ou heterocicloalquila monocíclica de 5-7membros -em que a cicloalquila monocíclica ou heterocicloalquilamonocíclica são opcionalmente substituídas com um ou mais substituintesselecionados do grupo que consiste em halogênio, -OH, -NH2, alquila inferior,alquila inferior substituída por flúor, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituídoflúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino,dialquilamino, e cicloalquilamino.
"Alquenila inferior" sozinha ou em combinação significa umhidrocarboneto reto ou ramificado contendo 2-6 átomos de carbono (amenos que especificamente definido) e pelo menos um, preferivelmente 1-3,mais preferivelmente 1-2, o mais preferivelmente um, carbono para ligaçãodupla de carbono. Carbono para ligações duplas de carbono pode estarcontido dentro de uma porção cadeia ou reta ou ramificada. Exemplos degrupos alquenila inferior incluem etenila, propenila, isopropenila, butenila, eoutros. "Alquenila inferior substituída" denota alquenila inferior que éindependentemente substituída, a menos que do contrário indicado, com umou mais, preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5, também 1, 2, ou 3 substituintes,ligados a qualquer átomo disponível para produzir um composto estável, emque os substituintes são selecionados do grupo que consiste em -F, -OH, -NH2, -N02, -CN, -C(0)OH, -C(S)OH, -C(0)NH2, -C(S)NH2, -S(0)2NH2, -NHC(0)NH2, -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -C(NH)NH2, -ORa, -SR3, -OC(0)Ra,-OC(S)Ra, -C(0)Ra, -C(S)Ra, -C(0)ORa, -C(S)ORa, -S(0)Ra, -S(0)2Ra, -C(0)NHRa, -C(S)NHRa, -C(0)NRaRa, -C(S)NRaRa, -S(0)2NHRa, -S(0)2NRaRa,-C(NH)NHRa, -C(NH)NRbRc, -NHC(0)Ra, -NHC(S)Ra, -NRaC(0)Ra, -NRaC(S)Ra, -NHS(0)2Ra, -NRaS(0)2Ra, -NHC(0)NHRa, -NHC(S)NHRa, -NRaC(0)NH2, -NRaC(S)NH2, -NRaC(0)NHRa, -NRaC(S)NHRa,NHC(0)NRaRa, -NHC(S)NRaRa, -NRaC(0)NRaRa, -NRaC(S)NRaRa, -NHS(0)2NHRa, -NRaS(0)2NH2, -NRaS(0)2NHRa, -NHS(0)2NRaRa, -NRaS(0)2NRaRa, -NHRa, -NRaRa, -Rd, -Rf, e -R9. Também, possíveissubstituições incluem subconjuntos destas substituições, como sãoindicados aqui, por exemplo, na descrição dos compostos da Fórmula I(incluindo Fórmulas Ia, Ib, Ig e todas as submodalidades destas), ligados aqualquer átomo disponível para produzir um composto estável. Por exemplo"alquenila inferior substituída por flúor" denota um grupo alquenila inferiorsubstituída com um ou mais átomos de flúor onde preferivelmente aalquenila inferior é substituída com 1, 2, 3, 4 ou 5 átomos de flúor, também 1,2, ou 3 átomos de flúor. Embora seja entendido que as substituições estãoligadas a qualquer átomo disponível para produzir um composto estável,substituição de grupos alquenila é de modo que -F, -C(O)-, -C(S)-, -C(NH)-, -S(O)-, -S(0)2-, -O-, -S-, ou -N- (exceto onde -N- for um átomo do anel deheteroarila), não esteja ligado a um carbono de alqueno deste. Também,onde alquenila for um substituinte de outra metade ou um grupo R de umametade como -OR, -NHR, -C(0)R, e outros, substituição da metade é demodo que qualquer -C(O)-, -C(S)-, -S(O)-, -S(0)2-, -O-, -S-, ou -N- destes(exceto onde -N- for um átomo do anel de heteroaril) não esteja ligado a umcarbono de alqueno do substituinte de alquenila ou grupo R. Também, ondealquenila for um substituinte de outra metade ou um grupo R de uma metadecomo -OR, -NHR, -C(0)NHR, e outros, substituição do grupo R de alquenilaé de modo que a substituição do carbono de alquenila ligado a qualquer -O-,-S-, ou -N- da metade (exceto onde -N- for um átomo do anel de heteroarila)exclui substituintes que resultariam em qualquer -O-, -S-, ou -N- dosubstituinte (exceto onde -N- for um átomo do anel de heteroarila) estandoligado ao carbono de alquenila ligada a qualquer -O-, -S-, ou -N- da metade.Um "carbono de alquenila" refere-se a qualquer carbono dentro de um grupoalquenila, quer saturado ou parte do carbono para ligação dupla de carbono.Um "carbono de alqueno" refere-se a um carbono dentro de um grupoalquenila que faz parte de um carbono para ligação dupla de carbono.
"Alquinila inferior" sozinha ou em combinação significa umhidrocarboneto reto ou ramificado contendo 2-6 átomos de carbono (amenos que especificamente definido) contendo pelo menos um,preferivelmente um, carbono para ligação tripla de carbono. Exemplos degrupos alquinila incluem etinila, propinila, butinila, e outros. "Alquinila inferiorsubstituída" denota alquinila inferior que é independentemente substituída, amenos que do contrário indicado, com um ou mais, preferivelmente 1,2, 3, 4ou 5, também 1, 2, ou 3 substituintes, ligados a qualquer átomo disponívelpara produzir um composto estável, em que os -substituintes sãoselecionados do grupo que consiste em -F, -OH, -NH2, -N02, -CN, -C(0)OH,-C(S)OH, -C(0)NH2, -C(S)NH2, -S(0)2NH2, -NHC(0)NH2, -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -C(NH)NH2, -ORa, -SRa, -OC(0)Ra, -OC(S)Ra, -C(0)Ra, -C(S)Ra, -C(0)ORa, -C(S)ORa, -S(0)Ra, -S(0)2Ra, -C(0)NHRa, -C(S)NHRa, -C(0)NRaRa, -C(S)NRaRa, -S(0)2NHRa, -S(0)2NRaRa, -C(NH)NHRa, -C(NH)NRbRc, -NHC(0)Ra, -NHC(S)Ra, -NRaC(0)Ra, -NRaC(S)Ra, -NHS(0)2Ra, -NRaS(0)2Ra, -NHC(0)NHRa, -NHC(S)NHRa, -NRaC(0)NH2, -NRaC(S)NH2, -NRaC(0)NHRa, -NRaC(S)NHRa, -NHC(0)NRaRa, -NHC(S)NRaRa, -NRaC(0)NRaRa, -NRaC(S)NRaRa, -NHS(0)2NHRa, -NRaS(0)2NH2, -NRaS(0)2NHRa, -NHS(0)2NRaRa, -NRaS(0)2NRaRa, -NHRa, -NRaR3, -Rd, -Re, e -R9. Também, possíveis substituições incluemsubconjuntos destas substituições, como são indicados aqui, por exemplo,na descrição dos compostos da Fórmula I (incluindo Fórmulas Ia, Ib, Ig etodas as submodalidades destas), ligados a qualquer átomo disponível paraproduzir um composto estável. Por exemplo "alquinila inferior substituído porflúor" denota um grupo alquinila inferior substituída com um ou mais átomosde flúor onde preferivelmente a alquinila inferior é substituída com 1, 2, 3, 4ou 5 átomos de flúor, também 1, 2, ou 3 átomos de flúor. Embora sejaentendido que as substituições estão ligadas a qualquer átomo disponívelpara produzir um composto estável, substituição de grupos alquinila é demodo que -F, -C(O)-, -C(S)-, -C(NH)-, -S(O)-, -S(0)2-, -O-, -S-, ou -N- (excetoonde -N- é um átomo do anel de heteroarila), não esteja ligado a um carbonode alquino deste. Também, onde alquinila for um substituinte de outrametade ou um grupo R de uma metade como -OR, -NHR, -C(0)R, e outros,substituição da metade é de modo que qualquer -C(O)-, -C(S)-,-S(0)-, -S(0)2-, -O-, -S-, ou -N- destes (exceto onde -N- for um átomo do anel deheteroarila) não esteja ligado a um carbono de alquino do substituinte dealquinila ou grupo R. Também, onde alquinila for um substituinte de outrametade ou um grupo R de uma metade como -OR, -NHR, -C(0)NHR, eoutros, substituição do grupo R de alquinila é de modo que a substituição docarbono de alquinila ligado a qualquer -O-, -S-, ou -N- da metade (excetoonde -N- for um átomo do anel de-iieteroarila) exclui substituintes queresultariam em qualquer -O-, -S-, ou -N- do substituinte (exceto onde -N- forum átomo do anel de heteroarila) estando ligado ao carbono de alquinilaligado a qualquer -O-, -S-, ou -N- da metade. Um "carbono de alquinila"refere-se a qualquer carbono dentro de um grupo alquinila, quer saturado ouparte do carbono para ligação tripla de carbono. Um "carbono de alquino"refere-se a um carbono dentro de um grupo alquinila que faz parte de umaligação tripla de carbono a carbono.
"Cicloalquila" refere-se aos sistemas de anel de carbonomonocíclicos, bicíclicos ou tricíclicos não-aromáticos, saturados ouinsaturados de 3-10, também 3-8, mais preferivelmente 3-6, membros noanel por anel, como ciclopropila, ciclopentila, cicloexila, adamantila, e outros."Cicloalquileno" é uma cicloalquila divalente. Uma "cicloalquila substituída" éuma cicloalquila que é independentemente substituída, a menos que docontrário indicado, com um ou mais, preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5, também1, 2, ou 3 substituintes, ligados a qualquer átomo disponível para produzirum composto estável, em que os substituintes são selecionados do grupoque consiste em halogênio, -OH, -NH2, -N02, -CN, -C(0)OH, -C(S)OH, -C(0)NH2, -C(S)NH2, -S(0)2NH2, -NHC(0)NH2, -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -C(NH)NH2, -ORa, -SRa, -OC(0)Ra, -OC(S)Ra, -C(0)Ra, -C(S)Ra, -C(0)ORa, -C(S)ORa, -S(0)Ra, -S(0)2Ra, -C(0)NHRa, -C(S)NHRa, -C(0)NRaRa, -C(S)NRaRa, -S(0)2NHRa, -S(0)2NRaRa, -C(NH)NHRa, -C(NH)NRbRc, -NHC(0)Ra, -NHC(S)Ra, -NRaC(0)Ra, -NRaC(S)Ra, -NHS(0)2Ra, -NRaS(0)2Ra,-NHC(0)NHRa, -NHC(S)NHRa, -NRaC(0)NH2, -NRaC(S)NH2, -NRaC(0)NHRa,-NRaC(S)NHRa, -NHC(0)NRaRa, -NHC(S)NRaRa, -NRaC(0)NRaRa, -NRaC(S)NRaRa, -NHS(0)2NHRa, -NRaS(0)2NH2, -NRaS(0)2NHRa, -NHS(0)2NRaRa, -NRaS(0)2NRaRa, -NHRa, -NRaRa, -Rd, -Re, -Rf, e -R9."Cicloalquileno substituído" é uma cicloalquila substituída divalente.
"Heterocicloalquila" refere-se a um grupo cicloalquila não-aromático saturado ou insaturado tendo de 5 a 10 átomos em que de 1 a 3átomos de carbono no anel são substituídos por heteroátomos de O, S ou N,e são opcionalmente fundidos com benzo ou heteroarila de 5-6 membros noaifci. Heterocicloalquila é também intencionada incluir S ou N oxidados,como sulfinila, sulfonila e N-óxido de um nitrogênio de anel terciário.Heterocicloalquila é também intencionada incluir compostos em que um doscarbonos do anel é oxo substituído, isto é o carbono do anel é um grupocarbonila, como lactonas e lactamas. O ponto de ligação do anel deheterocicloalquila é em um átomo de carbono ou nitrogênio de modo que umanel estável é retido. Exemplos de grupos heterocicloalquila incluem, masnão são limitados a, morfolino, tetraidrofuranila, diidropiridinila, piperidinila,pirrolidinila, pirrolidonila, piperazinila, diidrobenzofurila, e diidroindolila."Heterocicloalquileno" é um heterocicloalquila divalente. Uma"heterocicloalquila substituída" é um heterocicloalquila que éindependentemente substituída, a menos que do contrário indicado, com umou mais, preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5, também 1, 2, ou 3 substituintes,ligados em qualquer átomo disponível para produzir um composto estável,em que os substituintes são selecionados do grupo que consiste emhalogênio, -OH, -NH2> -N02) -CN, -C(0)OH, -C(S)OH, -C(0)NH2, -C(S)NH2, -S(0)2NH2, -NHC(0)NH2, -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -C(NH)NH2) -ORa, -SRa, -OC(0)Ra, -OC(S)Ra, -C(0)Ra, -C(S)Ra, -C(0)ORa, -C(S)ORa, -S(0)Ra,-S(0)2Ra, -C(0)NHRa, -C(S)NHRa, -C(0)NRaRa, -C(S)NRaRa, -S(0)2NHRa, -S(0)2NRaRa, -C(NH)NHRa, -C(NH)NRbRc, -NHC(0)Ra, -NHC(S)Ra, -NRaC(0)Ra, -NRaC(S)Ra, -NHS(0)2Ra, -NRaS(0)2Ra, -NHC(0)NHRa, -NHC(S)NHRa, -NRaC(0)NH2, -NRaC(S)NH2) -NRaC(0)NHRa, -NRaC(S)NHRa,-NHC(0)NRaRa, -NHC(S)NRaRa, -NRaC(0)NRaRa, -NRaC(S)NRaRa, -NHS(0)2NHRa, -NRaS(0)2NH2, -NRaS(0)2NHRa, -NHS(0)2NRaRa, -NRaS(0)2NRaRa, -NHRa, -NRaRa, -Rd, -Re, -Rf, e -R9. "Heterocicloalquilenosubstituído" é uma heterocicloalquila substituída divalente.
"Arila" sozinha ou em combinação refere-se a um sistema deanel monocíclico ou bicíclico contendo hidrocarbonetos aromáticos comofenila ou naftila que podem ser opcionalmente fundidos com uma cicloalquilade preferivelmente 5-7, mais preferivelmente 5-6, membros no anel. "Arileno"é um arila divalente. Uma "arila substituída" é uma arila que éindependentemente substituída, a menos que do contrário indicado, com umou mais, preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5, também 1, 2, ou 3 substituintes,ligados a qualquer átomo disponível para produzir um composto estável, emque os substituintes são selecionados do grupo que consiste em halogênio, -OH, -NH2, -N02, -CN, -C(0)OH, -C(S)OH, -C(0)NH2, -C(S)NH2, -S(0)2NH2, -NHC(0)NH2, -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -C(NH)NH2, -ORa, -SRa, -OC(0)Ra,-OC(S)Ra, -C(0)Ra, -C(S)Ra, -C(0)ORa, -C(S)ORa, -S(0)Ra, -S(0)2Ra, -C(0)NHRa, -C(S)NHRa, -C(0)NRaRa, -C(S)NRaRa, -S(0)2NHRa, -S(0)2NRaRa,-C(NH)NHRa, -C(NH)NRbR°, -NHC(0)Ra, -NHC(S)Ra, -NRaC(0)Ra, -NRaC(S)Ra, -NHS(0)2Ra, -NRaS(0)2Ra, -NHC(0)NHRa, -NHC(S)NHRa, -NRaC(0)NH2, -NRaC(S)NH2, -NRaC(0)NHRa, -NRaC(S)NHRa,NHC(0)NRaRa, -NHC(S)NRaRa, -NRaC(0)NRaRa, -NRaC(S)NRaRa, -NHS(0)2NHRa, -NRaS(0)2NH2l -NRaS(0)2NHRa, -NHS(0)2NRaRa, -NRaS(0)2NRaRa, -NHRa, -NRaRa, -Rd, -Re, -Rf, e -R9. Um "arileno substituído"é uma arila substituída divalente.
"Heteroarila" sozinha ou em combinação refere-se a umaestrutura de anel aromática monocíclica contendo 5 ou 6 átomos de anel, ouum grupo aromático bicíclico tendo 8 a 10 átomos, contendo um ou mais,preferivelmente 1-4, mais preferivelmente 1-3, até mesmo maispreferivelmente 1-2, heteroátomos independentemente selecionados dogrupo que consiste em O, S, e N. Heteroarila é também intencionada incluirS ou N oxidados, como sulfinila, sulfonila e N-óxido de um nitrogênio de anelterciário. Um átomo de carbono ou de nitrogênio é o ponto de ligação daestrutura de anel de heteroarila de modo que um composto estável éproduzido. Exemplos de grupos heteroarila incluem, mas não são limitados a,piridinila, piridazinila, pirazinila, quinaoxalila, indolizinila, benzo[b]tienila,quinazolinila, purinila, indolila, quinolinila, pirimidinila, pirrolila, oxazolila,tiazolila, tienila, isoxazolila, oxatiadiazoliía, isotiazolila, tetrazolila, imidazolila,triazinila, furanila, benzofurila, e indolila. "Heteroarila contendo nitrogênio"refere-se à heteroarila em que quaisquer heteroátomos são N."Heteroarileno" é uma heteroarila divalente. Uma "heteroarila substituída" éum heteroarila que é independentemente substituída, a menos que docontrário indicado, com um ou mais, preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5, também1, 2, ou 3 substituintes, ligados a qualquer átomo disponível para produzirum composto estável, em que os substituintes são selecionados do grupoque consiste em halogênio, -OH, -NH2, -N02, -CN, -C(0)OH, -C(S)OH, -C(0)NH2, -C(S)NH2, -S(0)2NH2, -NHC(0)NH2, -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -C(NH)NH2, -ORa, -SRa, -OC(0)Ra, -OC(S)Ra, -C(0)Ra, -C(S)Ra, -C(0)ORa, -C(S)ORa, -S(0)Ra, -S(0)2Ra, -C(0)NHRa, -C(S)NHRa, -C(0)NRaRa, -C(S)NRaRa, -S(0)2NHRa, -S(0)2NRaRa, -C(NH)NHRa, -C(NH)NRbRc, -NHC(0)Ra, -NHC(S)Ra, -NRaC(0)Ra, -NRaC(S)Ra, -NHS(0)2Ra, -NRaS(0)2Ra,-NHC(0)NHRa, -NHC(S)NHRa, -NRaC(0)NH2, -NRaC(S)NH2) -NRaC(0)NHRa,-NRaC(S)NHRa, -NHC(0)NRaRa, -NHC(S)NRaRa, -NRaC(0)NRaRa, -NRaC(S)NRaRa, -NHS(0)2NHRa, -NRaS(0)2NH2, -NRaS(0)2NHRa, -NHS(0)2NRaRa, -NRaS(0)2NRaRa, -NHRa, -NRaRa, -Rd, -Re, -Rf, e -R9."Heteroarileno substituído" é uma heteroarila substituída divalente.
As variáveis R3, Rb, Rc, -Rd, -Re, -Rf e -R9 como usadas nadescrição de substituintes opcionais para alquila, alquileno, alquenila,alquinila, cicloalquila, heterocicloalquila, arila e heteroarila são definidascomo segue:
cada Ra, Rb, e Rc são independentemente selecionados dogrupo que consiste em -Rd, -Re, -Rf, e -R9, ou Rb e Rc combinam com onitrogênio ao qual eles estão ligados para formar uma heterocicloalquila de5-7 membros ou uma heteroarila contendo nitrogênio de 5 ou 7 membros,em que a heterocicloalquila de 5-7 membros ou heteroarila contendonitrogênio de 5 ou 7 membros são opcionalmente substituídas com um oumais, preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5, também 1, 2, ou 3 substituintesselecionados do grupo que consiste em halogênio, -N02, -CN, -OH, -NH2, -ORu, -SRU, -NHRU, -NRURU, -Rx, e -Ry;
cada -Rd é independentemente alquila inferior, em que alquilainferior é opcionalmente substituída com um ou mais, preferivelmente 1, 2, 3,4 ou 5, também 1, 2 ou 3 substituintes selecionados do grupo que consisteem flúor, -OH, -NH2, -N02, -CN, -C(0)OH, -C(S)OH, -C(0)NH2, -C(S)NH2, -S(0)2NH2, -NHC(0)NH2, -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2) -C(NH)NH2, -ORk, -SRk, -OC(0)Rk, -OC(S)Rk, -C(0)Rk, -C(S)Rk, -C(0)ORk, -C(S)ORk, -S(0)Rk, -S(0)2Rk, -C(0)NHRk, -C(S)NhRk, -C(0)NRkRk," -C(S)NRkRk, -S(0)2NHRk, -S(0)2NRkRk, -C(NH)NHRk, -C(NH)NRmRn, -NHC(0)Rk, -NHC(S)Rk, -NRkC(0)Rk, -NRkC(S)Rk, -NHS(0)2Rk, -NRkS(0)2Rk, -NHC(0)NHRk, -NHC(S)NHRk, -NRkC(0)NH2) -NRkC(S)NH2, -NRkC(0)NHRk, -NRkC(S)NHRk,-NHC(0)NRkRk, -NHC(S)NRkRk, -NRkC(0)NRkRk, -NRkC(S)NRkRk, -NHS(0)2NHRk, -NRkS(0)2NH2, -NRkS(0)2NHRk, -NHS(0)2NRkRk, -NRkS(0)2NRkRk, -NHRk, -NRkRk, -R', e -Ro-çada -Re é independentemente alquenila inferior, em quealquenila inferior é opcionalmente substituída com um ou mais,preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5, também 1, 2 ou 3 substituintes selecionadosdo grupo que consiste em flúor, -OH, -NH2, -N02l -CN, -C(0)OH, -C(S)OH, -C(0)NH2, -C(S)NH2, -S(0)2NH2, -NHC(0)NH2l -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -C(NH)NH2) -0Rk, -SRk, -OC(0)Rk, -OC(S)Rk, -C(0)Rk, -C(S)Rk, -C(0)ORk,C(S)ORk, -S(0)Rk, -S(0)2Rk, -C(0)NHRk, -C(S)NHRk, -C(0)NRkRk, -C(S)NRkRk, -S(0)2NHRk, -S(0)2NRkRk, -C(NH)NHRk, -C(NH)NRmRn, -NHC(0)Rk, -NHC(S)Rk, -NRkC(0)Rk, -NRkC(S)Rk, -NHS(0)2Rk, -NRkS(0)2Rk,-NHC(0)NHRk, -NHC(S)NHRk, -NRkC(0)NH2, -NRkC(S)NH2, -NRkC(0)NHRk,-NRkC(S)NHRk, -NHC(0)NRkRk, -NHC(S)NRkRk, -NRkC(0)NRkRk, -NRkC(S)NRkRk, -NHS(0)2NHRk, -NRkS(0)2NH2) -NRkS(0)2NHRk, -NHS(0)2NRkRk, -NRkS(0)2NRkRk, -NHRk, -NRkRk, -Rh, e -Ro-çada -Rf é independentemente alquinila inferior, em que alquimiainferior é opcionalmente substituída com um ou mais, preferivelmente 1, 2, 3,4 ou 5, também 1, 2 ou 3 substituintes selecionados do grupo que consisteem flúor, -OH, -NH2, -N02, -CN, -C(0)OH, -C(S)OH, -C(0)NH2, -C(S)NH2, -S(0)2NH2, -NHC(0)NH2, -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -C(NH)NH2, -ORk, -SRk, -OC(0)Rk, -OC(S)Rk, -C(0)Rk, -C(S)Rk, -C(0)ORk, -C(S)ORk, -S(0)Rk, -S(0)2Rk, -C(0)NHRk, -C(S)NHRk, -C(0)NRkRk, -C(S)NRkRk, -S(0)2NHRk, -S(0)2NRkRk, -C(NH)NHRk, -C(NH)NRmRn, -NHC(0)Rk, -NHC(S)Rk, -NRkC(0)Rk, -NRkC(S)Rk, -NHS(0)2Rk, -NRkS(0)2Rk, -NHC(0)NHRk, -NHC(S)NHRk, -NRkC(0)NH2, -NRkC(S)NH2, -NRkC(0)NHRk, -NRkC(S)NHRk,-NHC(0)NRkRk, -NHC(S)NRkRk, -NRkC(0)NRkRk, -NRkC(S)NRkRk, -NHS(0)2NHRk, -NRkS(0)2NH2, -NRkS(0)2NHRk, -NHS(0)2NRkRk, -NRkS(0)2NRkr!k, -NHRk, -NRkRk, -Rh, e -Rj;
cada -R9 é independentemente selecionado do grupo queconsiste em cicloalquila, heterocicloalquila, arila, e heteroarila, em quecicloalquila, heterocicloalquila, arila, e heteroarila são opcionalmentesubstituídas com um ou mais, preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5, também 1, 2ou 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em halogênio, -OH, -NH2, -N02, -CN, -C(0)OH, -C(S)OH, -C(0)NH2, -C(S)NH2, -S(0)2NH2, -NHC(0)NH2, -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -C(NH)NH2, -ORk, -SRk, -OC(0)Rk,-OC(S)Rk, -C(0)Rk, -C(S)Rk, -C(0)ORk, -C(S)ORk, -S(0)Rk, -S(0)2Rk, -C(0)NHRk, -C(S)NHRk, -C(0)NRkRk, -C(S)NRkRk, -S(0)2NHRk, -S(0)2NRkRk,-C(NH)NHRk, -C(NH)NRmRn, -NHC(0)Rk, -NHC(S)Rk, -NRkC(0)Rk, -NRkC(S)Rk, -NHS(0)2Rk, -NRkS(0)2Rk, -NHC(0)NHRk, -NHC(S)NHRk, -NRkC(0)NH2> -NRkC(S)NH2, -NRkC(0)NHRk, -NRkC(S)NHRk, -NHC(0)NRkRk,-NHC(S)NRkRk, -NRkC(0)NRkRk, -NRkC(S)NRkRk, -NHS(0)2NHRk, -NRkS(0)2NH2) -NRkS(0)2NHRk, -NHS(0)2NRkRk, -NRkS(0)2NRkRk, -NHRk, -NRkRk, -Rh, -R', e -Rj;
em que Rk, Rm, e Rn em cada ocorrência sãoindependentemente selecionados do grupo que consiste em -Rh, -R1, e -RJ,ou Rm e Rn combinam com o nitrogênio ao qual eles estão ligados paraformar uma heterocicloalquila de 5-7 membros ou uma heteroarila contendonitrogênio de 5 ou 7 membros, em que a heterocicloalquila de 5-7 membrosou heteroarila contendo nitrogênio de 5 ou 7 membros são opcionalmentesubstituídas com um ou mais, preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5, também 1, 2,ou 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em halogênio, -N02, -CN, -OH, -NH2, ORu, -SRU, -NHRU, -NRURU, -Rx, e -Ry;
em que cada -Rh é independentemente alquila inferioropcionalmente substituída com um ou mais, preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5,também 1, 2, ou 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em flúor,-OH, -NH2, -N02, -CN, -C(0)OH, -C(S)OH, -C(0)NH2, -C(S)NH2, -S(0)2NH2,-NHC(0)NH2, -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -C(NH)NH2, -ORr, -SRr, -OC(0)Rr,-OC(S)Rr, -C(0)Rr, -C(S)Rr, -C(0)ORr, -C(S)ORr, -S(0)Rr, -S(0)2Rr, -C(0)NHRr, -C(S)NHRr, -C(0)NRrRr, -C(S)NRrRr, -S(0)2NHRr, -S(0)2NRrRr, -CÍNf-ONHR* -C(NH)NRsRt, -NHC(0)Rr, -NHC(S)Rr, -NRrC(0)Rr, -NRrC(S)hr;-NHS(0)2Rr, -NRrS(0)2Rr, -NHC(0)NHRr, -NHC(S)NHRr, -NRrC(0)NH2, -NRrC(S)NH2) -NRrC(0)NHRr, -NRrC(S)NHRr, -NHC(0)NRrRr, -NHC(S)NRrRr,-NRrC(0)NRrRr, -NRrC(S)NRrRr, ' -NHS(0)2NHRr, -NRrS(0)2NH2, -NRrS(0)2NHRr, -NHS(0)2NRrRr, -NRrS(0)2NRrRr, -NHRr, -NRrRr, -R' e -Rj;
em que cada -R1 é independentemente selecionado do grupoque consiste em alquenila inferior e alquinila inferior, em que alquenilainferior ou alquinila inferior são opcionalmente substituídas com um ou mais,preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5, também 1, 2 ou 3 substituintes selecionadosdo grupo que consiste em flúor, -OH, -NH2, -N02, -CN, -C(0)OH, -C(S)OH, -C(0)NH2, -C(S)NH2> -S(0)2NH2, -NHC(0)NH2, -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -C(NH)NH2, -ORr, -SRr, -OC(0)Rr, -OC(S)Rr, -C(0)Rr, -C(S)Rr, -C(0)ORr, -C(S)ORr, -S(0)Rr, -S(0)2Rr, -C(0)NHRr, -C(S)NHRr, -C(0)NRrRr, -C(S)NRrRr,-S(0)2NHRr, -S(0)2NRrRr, -C(NH)NHRr, -C(NH)NRsRt, -NHC(0)Rr, -NHC(S)Rr, -NRrC(0)Rr, -NRrC(S)Rr, -NHS(0)2Rr, -NRrS(0)2Rr, -NHC(0)NHRr, -NHC(S)NHRr, -NRrC(0)NH2l -NRrC(S)NH2, -NRrC(0)NHRr, -NRrC(S)NHRr, -NHC(0)NRrRr, -NHC(S)NRrRr, -NRrC(0)NRrRr, -NRrC(S)NRrRr, -NHS(0)2NHR1, -NR1S(0)2NH2, -NRrS(0)2NHRr, -NHS(0)2NRrRr, -NRrS(0)2NRrRr, -NHRr, -NRrRr, e -Rj;
em que cada -Rj é independentemente selecionado do grupoque consiste em cicloalquila, heterocicloalquila, arila, e heteroarila, em quecicloalquila, heterocicloalquila, arila, e heteroarila são opcionalmentesubstituídas com um ou mais, preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5, também 1, 2ou 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em halogênio, -OH, -NH2, -N02, -CN, -C(0)OH, -C(S)OH, -C(0)NH2, -C(S)NH2, -S(0)2NH2, -NHC(0)NH2l -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -C(NH)NH2) -ORr, -SRr, -OC(0)Rr,-OC(S)Rr, -C(0)Rr, -C(S)Rr, -C(0)ORr, -C(S)ORr, -S(0)Rr, -S(0)2Rr, -C(0)NHRr, -C(S)NHRr, -C(0)NRrRr, -C(S)NRrRr, -S(0)2NHRr, -S(0)2NRrRr, -C(NH)NHRr, -C(NH)NRRr, -NHC(0)Rr, -NHC(S)Rr, -NRrC(0)Rr, -NRrC(S)Rr,-NHS(0)2Rr, -NRrS(0)2Rr, -NHC(0)NHRr, -NHC(S)NHRr, -NRrC(0)NH2, -NRrC(S)NH2> -NRrC(0)NHRr, -NRrC(S)NHRr, -NHC(0)NRrRr, -NHC(S)NRrRr,-NRrC(0)NRrRr, -NRrC(S)NRrRr, -NHS(0)2NHRr, -NRrS(0)2NH2, -NRrS(0)2NHRr, -NHS(0)2NRrRr, -NRrS(0)2NRrRr, -NHRr, -NRrRr,cicloalquilamino, e -R';
em que cada Rr, Rs, e Rl em cada ocorrência sãoindependentemente selecionados do grupo que consiste em alquila inferior,C3-6 alquenila, C3-6 alquinila, cicloalquila, heterocicloalquila, arila e heteroarila,em que alquila inferior é opcionalmente substituída com um ou mais,preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5, também 1, 2, ou 3 substituintes selecionadosdo grupo que consiste em -Ry, flúor, -OH, -NH2, alcóxi inferior, alcóxi inferiorsubstituído com flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído com flúor,monoalquilamino, dialquilamino, e cicloalquilamino, contanto que qualquersubstituição do carbono da alquila inferior ligue a qualquer -O-, -S-, ou -N-,de -ORr, -SRr, -C(0)ORr, -C(S)ORr, -C(0)NHRr, -C(S)NHRr, -C(0)NRrRr, -C(S)NRrRr, -S(0)2NHR\ -S(0)2NRrRr, -C(NH)NHRr, -NRrC(0)Rr, -NRrC(S)Rr,-NRrS(0)2Rr, -NHC(0)NHRr, -NHC(S)NHRr, -NRrC(0)NH2) -NRrC(S)NH2> -NRrC(0)NHRr, -NRrC(S)NHRr, -NHC(0)NRrRr, -NHC(S)NRrRr, -NRrC(0)NRrRr, -NRrC(S)NRrRr, -NHS(0)2NHRr, -NRrS(0)2NH2j -NRrS(0)2NHRr, -NHS(0)2NRrRr, -NRrS(0)2NRrRr, -NHRr, ou -NRrRr éselecionado do grupo que consiste em flúor e -Ry, e em que C3-6 alquenila ouC3-6 alquinila é opcionalmente substituída com um ou mais, preferivelmente1, 2, 3, 4 ou 5, também 1, 2, ou 3 substituintes selecionados do grupo queconsiste em -Ry, flúor, alquila inferior, alquila inferior substituída com flúor,alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído com flúor, alquiltio inferior, alquiltioinferior substituído com flúor, monoalquilamino, dialquilamino, ecicloalquilamino, contanto que qualquer substituição do carbono de C3-6alquenila ou C3.6 alquinila ligue a qualquer um de -O-, -S-, ou -N-, de -ORr, -SRr, -C(0)ORr, -C(S)ORr, -C(0)NHRr, -C(S)NHRr, -C(0)NRrRr, -C(S)NRrRr, -
S(0)2NHRr, -S(0)2NRrRr, -C(NH)NHRr, -NRrC(0)Rr, -NRrC(S)Rr, -NRrS(0)2Rr,-NHC(0)NHRr, -NHC(S)NHRr, -NRrC(0)NH2, -NRrC(S)NH2, -NRrC(0)NHRr, -NRrC(S)NHRr, -NHC(0)NRrRr, -NHC(S)NRrRr, -NRrC(0)NRrRr,NRrC(S)NRrRr, -NHS(0)2NHRr, -NRrS(0)2NH2, -NRrS(0)2NHRr, -NHS(0)2NRrRr, -NRrS(0)2NRrRr, -NHRr, ou -NRrRr é selecionado do grupoque consiste em flúor, alquila inferior, alquila inferior substituída com flúor, ou-Ry, e em que cicloalquila, heterocicloalquila, arila, e heteroarila sãoopcionalmente substituídas com um ou mais, preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5,também 1, 2, ou 3 substituintes selecionados do grupo que consiste emhalogênio, -OH, -NH2, -N02, -CN, alquila inferior, alquila inferior substituídacom flúor, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído com flúor, alquiltio inferior,alquiltio inferior substituído com flúor, monoalquilamino, dialquilamino, ecicloalquilamino, ou Rs e R1 combinam com o nitrogênio ao qual eles estãoligados para formar uma heterocicloalquila de 5-7 membros ou umaheteroarila contendo nitrogênio de 5 ou 7 membros, em que aheterocicloalquila de 5-7 membros ou heteroarila contendo nitrogênio de 5ou 7 membros são opcionalmente substituídas com um ou mais,preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5, também 1, 2, ou 3 substituintes selecionadosdo grupo que consiste em halogênio, -NÜ2, -CN, -OH, -NH2, ORu, -SRU, -NHRU, -NRURU, -Rx, e -Ry;
em que cada Ru é independentemente selecionado do grupo queconsiste em alquila inferior, C3-6 alquenila, C3-6 alquinila, cicloalquila,heterocicloalquila, arila, e heteroarila, em que alquila inferior éopcionalmente substituída com um ou mais, preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5,também 1, 2, ou 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em -Ry,flúor, -OH, -NH2, alcoxi inferior, alcoxi inferior substituído por flúor, alquiltioinferior, alquiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino, dialquilamino,e cicloalquilamino, contanto que qualquer substituição do carbono da alquilainferior ligado a -O- de - ORu, -S- de - SRU, ou -N- de -NHRU seja flúor ou -Ry,e em que C3-6 alquenila ou C3-6 alquinila são opcionalmente substituídas comum ou mais, preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5, também 1, 2, ou 3 substituintesselecionados do grupo que consiste em -Ry, flúor, -OH, -NH2, alquila inferior,alquila inferior substituída por flúor, alcoxi inferior, alcoxi inferior substituídopor flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído por flúor,monoalquilamino, dialquilamino, e cicloalquilamino, contanto que qualquersubstituição do carbono da C3-6 alquenila ou C3-6 alquinila ligado a -O- de -ORu, -S- de -SRÜ, ou -N- de -NHRU seja flúor, alquila inferior, alquila inferiorsubstituída por flúor, ou -Ry, e em que a cicloalquila, heterocicloalquila, arila,e heteroarila são opcionalmente substituídas com um ou mais,preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5, também 1, 2, ou 3 substituintes selecionadosdo grupo que consiste em halogênio, -OH, -NH2, -N02, -CN, alquila inferior,alquila inferior substituída por flúor, alcoxi inferior, alcoxi inferior substituídopor flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído por flúor,monoalquilamino, dialquilamino, e cicloalquilamino;
em que cada -Rx é selecionado do grupo que consiste em alquilainferior, alquenila inferior e alquinila inferior, em que alquila inferior éopcionalmente substituída com um ou mais, preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5,também 1, 2, ou 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em -Ry,flúor, -OH, -NH2, alcoxi inferior, alcoxi inferior substituído por flúor, alquiltioinferior, alquiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino, dialquilamino,e cicloalquilamino, e em que alquenila inferior ou alquiníla inferior sãoopcionalmente substituídas com um ou mais, preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5,também 1, 2, ou 3 substituintes selecionados do grupo que consiste em -Ry,flúor, -OH, -NH2, alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, alcóxiinferior, alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferiorsubstituído por flúor, monoalquilamino, dialquilamino, e cicloalquilamino;
em que cada -Ry é selecionado do grupo que consiste emcicloalquila, heterocicloalquila, arila, e heteroarila, em que cicloalquila,heterocicloalquila, arila, e heteroarila são opcionalmente substituídas comum ou mais, preferivelmente 1, 2, 3, 4 ou 5, também 1, 2, ou 3 substituintesselecionados do grupo que consiste em halogênio, -OH, -NH2, -N02, -CN,alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, alcóxi inferior, alcóxiinferior substituído por flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído porflúor, monoalquilamino, dialquilamino, e cicloalquilamino.
"Alcóxi inferior" denota o grupo -ORz onde Rz é alquila inferior.
"Alcóxi inferior substituído" denota alcóxi inferior em que Rz é alquila inferiorsubstituída com um ou mais substituintes como indicados aqui, por exemplo,na descrição dos compostos da Fórmula I (incluindo Fórmulas Ia, Ib, Ig etodas as submodalidades destas), incluindo descrições de cicloalquilasubstituída, cicloéteroalquila, arila e heteroarila, ligados a qualquer átomodisponível para produzir um composto estável. Preferivelmente, substituiçãode alcóxi inferior é com 1, 2, 3, 4, ou 5 substituintes, também 1, 2, ou 3substituintes. Por exemplo "alcóxi inferior substituído por flúor" denota alcóxiinferior em que a alquila inferior é substituída com um ou mais átomos deflúor onde preferivelmente o alcóxi inferior é substituído com 1, 2, 3, 4 ou 5átomos de flúor, também 1, 2, ou 3 átomos de flúor. Embora seja entendidoque as substituições em alcóxi estão ligadas a qualquer átomo disponívelpara produzir um composto estável, substituição de alcóxi é de modo que -O-, -S-, ou -N- (exceto onde N for um átomo do anel de heteroarila), nãoesteja ligado ao carbono de alquila ligado a alcóxi-O-. Também, onde alcóxifor descrito como um substituinte de outra metade, o oxigênio de alcóxi nãoestá ligado a um átomo de carbono ao qual está ligado um -O-, -S-, ou -N-da outra metade (exceto onde N for um átomo do anel de heteroarila), ou aum carbono de alqueno ou de alquino da outra metade.
"Alquiltio inferior" denota o grupo -SRaa onde Raa é alquila inferior."Alquiltio inferior substituído" denota alquiltio inferior em que Raa é alquilainferior substituída com um ou mais substituintes como indicado aqui, porexemplo, na descrição dos compostos da Fórmula I (incluindo Fórmulas Ia,Ib, Ig e todas as submodalidades destas), incluindo descrições decicloalquila substituída, cicloéteroalquila, arila e heteroarila, ligados aqualquer átomo disponível para produzir um composto estável.
Preferivelmente, substituição de alquiltio inferior é com 1, 2, 3, 4, ou 5substituintes, também 1, 2, ou 3 substituintes. Por exemplo "alquiltio inferiorsubstituído por flúor" denota alquiltio inferior em que a alquila inferior ésubstituída com um ou mais átomos de flúor onde preferivelmente o alquiltioinferior é substituído com 1, 2, 3, 4 ou 5 átomos de flúor, também 1, 2, ou 3átomos de flúor. Embora seja entendido que as substituições em alquiltioestão ligadas a qualquer átomo disponível para produzir um compostoestável, substituição de alquiltio é de modo que -O-, -S-, ou -N- (exceto ondeN for um átomo do anel de heteroarila), não esteja ligado ao carbono dealquila ligado ao alquiltio -S-. Também, onde alquiltio for descrito como umsubstituinte de outra metade, o enxofre de alquiltio não está ligado a umátomo de carbono ao qual está ligado um -O-, -S-, ou -N- da outra metade(exceto onde N for um átomo do anel de heteroarila), ou a um carbono dealqueno ou de alquino da outra metade.
"Amino" ou "amina" denota o grupo -NH2. "Monoalquilamino"denota o grupo -NHRbb onde Rbb é alquila inferior. "Dialquilamino" denota ogrupo -NRbbRcc onde Rbb e Rcc são independentemente alquila inferior."Cicloalquilamino" denota o grupo -NRddRee onde Rdd e Ree combinam com onitrogênio para formar uma heterocicloalquila de 5-7 membros onde aheterocicloalquila pode conter um heteroátomo adicional dentro do anel,como -O-, -N-, ou -S-, e pode também ser ainda substituída com alquilainferior. Exemplos de heterocicloalquila de 5-7 membros incluem, mas nãosão limitados a, piperidina, piperazina, 4-metilpiperazina, morfolina etiomorfolina. Embora seja entendido que quando monoalquilamino,dialquilamino, ou cicloalquilamino forem substituintes em outras metadesque estão ligadas a qualquer átomo disponível para produzir um compostoestável, o nitrogênio de monoalquilamino, dialquilamino, ou cicloalquilaminocomo substituintes não está ligado a um átomo de carbono ao qual estáligado um -O-, -S-, ou -N- da outra metade.
Como aqui usado, o termo doença ou condição mediada por c-kit refere-se a uma doença ou condição em que a função biológica de c-kitafeta o desenvolvimento e/ou curso da doença ou condição, e/ou em que amodulação de c-kit altera o desenvolvimento, curso, e/ou sintomas. Porexemplo, mutações no gene de c-kit como as mutações W42, Wv, e W41relatadas por Herbst et al (J. Biol. Chem, 1992, 67:13210-13216) conferemcaracterísticas severas, intermediárias, e fenotípicas moderadas,respectivamente. Estas mutações atenuam a atividade de tirosina cinaseintrínseca do receptor em graus diferentes e são modelos para o efeito demodulação da atividade de c-kit. Uma doença ou condição mediada por c-kitinclui uma doença ou condição para a qual inibição de c-kit prove umbenefício terapêutico, por exemplo em que o tratamento com inibidores de c-kit, incluindo compostos descritos aqui, fornece um benefício terapêutico aoindivíduo sofrendo ou em risco da doença ou condição.
Como aqui usado, o termo doença ou condição mediada por c-fms refere-se a uma doença ou condição em que a função biológica de c-fmsafeta o desenvolvimento e/ou curso da doença ou condição, e/ou em quemodulação de c-fms altera o desenvolvimento, curso, e/ou sintomas. Porexemplo, o camundongo mutante Csflf/Csflf de Dai et al (Blood, 2002,99:111-120) que carece de c-fms é um modelo animal para doenças oucondições em que a atividade de c-fms foi abolida. Umas doença oucondição mediada por c-fms inclui uma doença ou condição para as quaisinibição de c-fms prove um benefício terapêutico, por exemplo em quetratamento com inibidores de c-fms, incluindo compostos descritos aqui,fornece um benefício terapêutico ao indivíduo sofrendo ou em risco dadoença ou condição.Como aqui usado, o termo "composição" refere-se a umaformulação adequada para administração a um indivíduo animalintencionada para propósitos terapêuticos contendo pelo menos umcomposto farmaceuticamente ativo e pelo menos um veículo ou excipientefarmaceuticamente aceitável.
O termo "farmaceuticamente aceitável" indica que o materialindicado não tem propriedades que fariam um médico razoavelmenteprudente evitar administração do material a um paciente, levando em conta adoença ou condições a ser tratadas e a respectiva rota de administração.
Por exemplo, é comumente requerido que uma tal material sejaessencialmente estéril, por exemplo, para injetáveis.
No contexto presente, os termos "terapeuticamente eficaz" e"quantidade eficaz" indicam que os materiais ou quantidade de material sãoeficazes para impedir, aliviar, ou melhorar um ou mais sintomas de umadoença ou condição médica, e/ou prolongar a sobrevivência do sujeito sendotratado.
Referência a resíduos de aminoácidos particulares empolipeptídeo de c-kit humano é definida pela numeração que corresponde àseqüência de Kit em GenBank NP_000213 (SEQ ID NO: 1). Referência àsposições de nucleotídeos particulares em uma seqüência de nucleotídeo quecodifica toda ou uma porção de c-kit é definida pela numeração quecorresponde à seqüência fornecida em GenBank NM_000222 (SEQ ID NO:2). Referência a resíduos de aminoácidos particulares em polipeptídeo de c-fms humano é definida pela numeração que corresponde à seqüênciaprecursora de FMS em GenBank NP_005202 (SEQ ID NO: 3). Referência àsposições de nucleotídeos particulares em uma seqüência de nucleotídeo quecodifica toda ou uma porção de c-fms é definida pela numeração quecorresponde à seqüência fornecida em GenBank NM_005211 (SEQ ID NO: 4).
Os termos "kit", "c-kit" e "c-kit" significam uma cinaseenzimaticamente ativa contendo uma porção com mais que 90 % deidentidade de seqüência de aminoácido para resíduos de aminoácidoincluindo o sítio de ligação de ATP de c-kit de comprimento total (porexemplo, c-kit humano, por exemplo, a seqüência NP_000213, SEQ ID NO:1), em um alinhamento máximo em um segmento de comprimento igual; ouque contém uma porção com mais que 90 % de identidade de seqüência deaminoácido para pelo menos 200 aminoácidos contíguos de c-kit nativo eretém atividade de cinase. Preferivelmente a identidade de seqüência é pelomenos 95, 97, 98, 99, ou até mesmo 100 %. Preferivelmente o nívelespecificado de identidade de seqüência está em cima de uma seqüência depelo menos 100-500, pelo menos 200-400, ou pelo menos 300 resíduos deaminoácido contíguos em comprimento. A menos que do contrário indicado,o termo inclui referência a c-kit do tipo selvagem, variantes alélicas, e formasmutadas (por exemplo, tendo mutações de ativação).
Os termos "fms", "c-fms", "FMS", e "c-Fms" significam umacinase enzimaticamente ativa contendo uma porção com mais que 90 % deidentidade de seqüência de aminoácido para resíduos de aminoácidoincluindo o sítio de ligação de ATP de c-fms de comprimento total (porexemplo, c-fms humano, por exemplo resíduos 20-972 da seqüência deGenBank NP 005202, SEQ ID NO: 3), a um alinhamento máximo em umsegmento de comprimento igual; ou que contém uma porção com mais que90 % de identidade de seqüência de aminoácido para pelo menos 200aminoácidos contíguos de c-fms nativo e retém atividade de cinase.Preferivelmente a identidade de seqüência é pelo menos 95, 97, 98, 99, ou100 %. Preferivelmente o nível especificado de identidade de seqüência estáem cima de uma seqüência de pelo menos 100-150, pelo menos 200-400,ou pelo menos 300 resíduos de aminoácido contíguos em comprimento. Amenos que do contrário indicado, o termo inclui c-fms do tipo selvagem,variantes alélicas, e formas mutadas (por exemplo tendo mutações deativação). O termo "pFMS" refere-se a c-fms fosforilado. O termo "atividadede c-fms" refere-se a uma atividade biológica de c-fms, particularmenteincluindo atividade de cinase. A abreviação "M-CSF" refere-se ao ligandopara o RPTK de c-fms, e a abreviação "SCF" refere-se ao ligando para oRPTK de c-kit.O termo "domínio de c-kit cinase" refere-se a um c-kit decomprimento reduzido (isto é, mais curto que um c-kit de comprimento totalem pelo menos 100 aminoácidos) que inclui a região catalítica de cinase emc-kit. O termo "domínio de cinase de c-fms" refere-se a um c-fms decomprimento reduzido (isto é, mais curto que um de comprimento total c-fmsem pelo menos 100 aminoácidos) que inclui a região catalítica de cinase dec-fms. Altamente preferivelmente para uso nesta invenção, o domínio decinase retém atividade de cinase, preferivelmente pelo menos 60, 70, 80, 90,ou 100 % da atividade de c-fms cinase nativa. O termo "a cinase" ou termosde importação similar dizem respeito a c-kit ou c-fms.
Como aqui usado, os termos "ligando" e "modulador" sãoequivalentemente usados para referir-se a um composto que altera (isto é,aumenta ou diminui) a atividade de uma biomolécula alvo, por exemplo, umaenzima como uma cinase ou cinase. Em geral um ligando ou modulador seráuma molécula pequena onde "molécula pequena" refere-se a um compostocom um peso molecular de 1500 dáltons ou menos, ou preferivelmente 1000dáltons ou menos, 800 dáltons ou menos, ou 600 dáltons ou menos.
O termo "liga" com relação à interação entre um alvo e umcomposto de ligação potencial indica que o composto de ligação potencialassocia-se com o alvo a um grau estatisticamente significativo quandocomparado à associação com proteínas em geral (isto é, ligação não-específica). Desse modo, o termo "composto de ligação" refere-se a umcomposto que tem uma associação estatisticamente significativa com umamolécula alvo. Preferivelmente um composto de ligação interage com umalvo especificado com uma constante de dissociação (KD) de 1 mM oumenos. Um composto de ligação pode ligar com "afinidade baixa", "afinidademuito baixa", "afinidade extremamente baixa", "afinidade moderada","afinidade moderadamente alta", ou "afinidade alta" como descritas aqui.
No contexto de compostos que ligam a um alvo, o termo"afinidade maior" indica que o composto liga mais firmemente que umcomposto de referência, ou que o mesmo composto em uma condição dereferência, isto é, com uma constante de dissociação inferior. Emmodalidades particulares, a afinidade maior é pelo menos 2, 3, 4, 5, 8, 10, 50,100, 200, 400, 500, 1000, ou 10.000 vezes afinidade maior.
Também no contexto de compostos que ligam a um alvobiomolecular, o termo "especificidade maior" indica que um composto liga aum alvo especificado a uma maior extensão que a outra biomolécula oubiomoléculas que podem estar presentes sob condições de ligaçãorelevantes, onde ligação a tais outras biomoléculas produz uma atividadebiológica diferente que ligação ao alvo especificado. Tipicamente, aespecificidade é com referência a um conjunto limitado de outrasbiomoléculas, por exemplo, no caso de c-kit ou c-fms, outras tirosina cinasesou até mesmo outro tipo de enzimas. Em modalidades particulares, aespecificidade maior é pelo menos 2, 3, 4, 5, 8, 10, 50, 100, 200, 400, 500,ou 1000 vezes especificidade maior.
Como aqui usado com relação aos compostos de ligação ouligandos, o termo "específico para c-kit cinase", "específico para c-kit", etermos de importação parecidos significam que um composto particular ligaa c-kit a uma extensão estatisticamente maior que a outras cinases quepodem estar presentes em uma amostra particular. Também, onde atividadebiológica diferente de ligação for indicada, o termo "específico para c-kit"indica que um composto particular tem maior efeito biológico associado àligação de c-kit que às outras tirosina cinases, por exemplo, inibição daatividade de cinase. Preferivelmente, a especificidade é também comrespeito às outras biomoléculas (não limitadas às tirosina cinases) quepodem estar presentes em uma amostra particular. O termo "específico parac-fms cinase", "específico para c-fms", e termos de importação parecidossignificam que um composto particular liga c-fms a uma extensãoestatisticamente maior que às outras cinases que podem estar presentes emuma amostra particular. Também, onde atividade biológica diferente deligação for indicada, o termo "específico para c-fms" indica que um compostoparticular tem maior efeito biológico associado à ligação de c-fms que àsoutras tirosina cinases, por exemplo, inibição da atividade de cinase.
Preferivelmente, a especificidade é também com respeito às outrasbiomoléculas (não limitadas às tirosina cinases) que podem estar presentesem uma amostra particular.
Como aqui usado com relação aos compostos de teste,compostos de ligação, e moduladores (ligandos), o termo "sintetizar" etermos parecidos significam síntese química de um ou mais materiaisprecursores.
Por "ensaio" é significado a criação de condições experimentaise o ajuntamento de dados com relação a um resultado particular dascondições experimentais. Por exemplo, enzimas podem ser ensaiadas combase em sua capacidade de agir em um substrato detectável. Um compostoou ligando pode ser ensaiado com base em sua habilidade de ligar a umamolécula ou moléculas alvo particulares.
Como aqui usado, o termo "modulação" ou "modular" refere-se aum efeito de alterar uma atividade biológica, especialmente uma atividadebiológica associada a uma biomolécula particular como c-kit ou c-fms. Porexemplo, um agonista ou antagonista de uma biomolécula particular modulaa atividade daquela biomolécula, por exemplo, uma enzima.
O termo "atividade de c-kit" refere-se a uma atividade biológicade c-kit, particularmente incluindo atividade de cinase. O termo "atividade dec-fms" refere-se a uma atividade biológica de c-fms, particularmenteincluindo atividade de cinase.
No contexto do uso, testagem, ou triagem de compostos que sãoou podem ser moduladores, o termo "contatar" significa que o(s) composto(s)é(são) causado(s) para estar em proximidade suficiente a uma moléculaparticular, complexo, célula, tecido, organismo, ou outro materialespecificado cujas interações de ligação potenciais e/ou reação químicaentre o composto e outro material especificado podem ocorrer.
Como aqui usado com relação à seqüência de aminoácido ou deácido nucleico, o termo "isolar" indica que a seqüência é separada de pelomenos uma porção das seqüências de aminoácido e/ou de ácido nucleicocom a qual normalmente estará associada.
Com relação às seqüências de aminoácido ou nucléicas, o termo"purificado" indica que a molécula particular constitui uma proporçãosignificativamente maior das biomoléculas em uma composição que em umacomposição anterior, por exemplo, em uma cultura de células. A proporçãomaior pode ser 2 vezes, 5 vezes, 10 vezes maior ou mais.
I. GERAL
Em um aspecto, a presente invenção refere-se aos compostosda Fórmula I, Fórmula Ia, Fórmula Ib, ou Fórmula Ig e todas assubmodalidades destas, que são inibidores de c-kit, c-fms, ou c-kit e c-fms, eo uso dos compostos para tratar doenças que são mediadas através de c-kit,c-fms, ou c-kit e c-fms.
Compostos exemplares da Fórmula I, Fórmula Ia, Fórmula Ib ouFórmula Ig preparados pelos métodos a seguir descritos nos Exemplos aquisão como segue:
Benzil-[5-(1 H-pirol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-000I),
(6-Benzilamino-piridin-3-il)-(1H-pirol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona(P-0002),
[5-(1H-Pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0003),
(4-Metóxi-benzil)-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0004),
(4-Cloro-benzil)-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0005),
(4-Flúor-benzil)-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0006),
(4-Metil-benzil)-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0007),
[5-(1H-Pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-tiofen-2-ilmetil-amina (P-0008),
(4-Cloro-benzil)-[5-(4-cloro-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0009),
(4-Cloro-benzil)-[5-(4-metóxi-1H-pirol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-OOIO),
[5-(4-Metóxi-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-00111),
[6-Metóxi-5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0012),
[6-Metil-5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0013),
(4-Cloro-benzil)-[6-metil-5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0014),
[6-(4-Flúor-benzilamino)-piridin-3-il]-(1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona(P-0015),
[6-(3-Flúor-benzilamino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (P-0016),
(1H-Pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-[6-(4-trifluorometil-benzilamino)-piridin-3-il]-metanona (P-0017),
(1H-Pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-{6-[(tiofen-2-ilmetil)-amino]-piridin-3-il}-metanona (P-0018),
3-(6-lsopropil-piridin-3-ilmetil)-1 H-pirrol[2,3-b]piridina (P-0019),
3-(6-terc-Butóxi-piridin-3-ilmetil)-1H-pirol[2,3-b]piridina (P-0020),
Dimetil-[5-(1 H-pirol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0021),
3-(6-Metóxi-piridin-3-ilmetil)-4-tiofen-3-il-1H-pirol[2,3-b]piridina(P-0022),
(6-Fenilamino-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona(P-0023),
(6-lsopropilammo-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (P-0024),
(6-lsobutilamino-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona(P-0025),
[6-(3-Benzilóxi-fenilamino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (P-0026),
[6-(3-Hidróxi-fenilamino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona(P-0027),
lsobutil-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0028),
(6-lsobutilamino-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanol (P-0029),
[6-(Ciclopropilmetil-amino)-piridin-3-il]-(1 H-pirrol^^-bjpiridin-S-il)-metanona (P-0030),
[6-(Cicloexilmetil-amino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (P-0031),
Ciclopropilmetil-[5-(1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0032),
Cicloexilmetil-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0033),
[6-(Ciclopropilmetil-amino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanol (P-0034),
[6-(Cicloexilmetil-amino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanol (P-0035),
(1H-Pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-[6-(4-trifluorometil-benzilamino)-piridin-3-il]-metanol (P-0036),
[6-(4-Cloro-benzilamino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanol (P-0037),
[5-(5-Bromo-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-(4-cloro-benzil)-amina (P-0038),
(4-Cloro-benzil)-{5-[metóxi-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metil]-piridin-2-il}-amina (P-0039),
(4-Cloro-3-trifluorometil-benzil)-{5-[metóxi-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metil]-piridin-2-il}-amina (P-0040),
(4-Cloro-benzil)-{5-[metóxi-(5-piridin-3-il-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metil]-piridin-2-il}-amina (P-0041),
(4-Cloro-benzil)-(5-{[5-(3-metanossulfonil-fenil)-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il]-metóxi-metil}-piridin-2-il)-amina (P-0042),
{5-[Metóxi-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metil]-piridin-2-il}-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0043),
[6-(4-Cloro-benzilamino)-2-metil-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanol (P-0046),
[2-Cloro-6-(4-cloro-benzilamino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (P-0048),
[2,6-Bis-(4-cloro-benzilamino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (P-0049),
[2-Cloro-6-(4-cloro-benzilamino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanol (P-0050),
6-(4-Cloro-benzilamino)-3-(1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin2-ol (P-0051),
3-(2-Etilsulfanil-4,6-dimetil-pirimidin-5-ilmetil)-1H-pirrol[2,3-b]piridina (P-0052),
[5-(5-Metóxi-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0053),
[5-(5-Cloro-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0054),
3-[6-(3-Cloro-benzilóxi)-piridin-3-ilmetil]-1H-pirrol[2,3-b]piridina(P-0055),
3-[6-(4-Cloro-benzilóxi)-piridin-3-ilmetil]-1H-pirrol[2,3-b]piridina(P-0056),
3-[6-(3-Trifluorometil-benzilóxi)-piridin-3-ilmetil]-1H-pirrol[2,3-bjpiridina (P-0057),
(4-Cloro-benzil)-[5-(5-metóxi-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0058),
(4-Cloro-benzil)-[5-(5-cloro-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin2-il]-amina (P-0059),
{5-[5-(2-Dietilamino-etóxi)-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil]-piridin-2-il}-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0060),
3-[6-(4-Trifluorometil-benzilamino)-piridin-3-ilmetil]-1H-pirrol[2,3-b]piridin-5-ol (P-0061),
3-[6-(4-Cloro-benzilamino)-piridin-3-ilmetil]-1H-pirrol[2,3-b]piridin-5-ol (P-0062),
(4-Cloro-benzil)-{5-[5-(2-morfolin-4-il-etóxi)-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil]-piridin-2-il}-amina (P-0063),
{5-[5-(2-Pirrolidin-1-il-etóxi)-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil]-piridin-2-il}-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0064),
{5-[5-(2-Morfolin-4-il-etóxi)-1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil]-piridin-2-il}-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0065),
{5-[5-(3-Dietilamino-propóxi)-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil]-piridin-2-il}-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0066),
N-[5-(1 H-Pirrol[2,3-b]piridino-3-carbonil)-piridin-2-il]-4-trifluorometil-benzamida (P-0067),
N-[5-(1H-Pirrol[2,3-b]piridino-3-carbonil)-piridin-2-il]-4-trifluorometil-benzenossulfonamida (P-0068),
(4-Cloro-benzil)-{5-[5-(3-dietilammo-propóxi)-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil]-piridin-2-il}-amina (P-0069),
[6-(4-Cloro-benzilamino)-2-trifluorometil-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (P-0070),
N-[5-(1H-Pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-4-trifluorometil-benzenossulfonamida (P-0071),
N-[5-(1H-Pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-4-trifluorometil-benzamida (P-0072),
4-Flúor-N-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-benzamida (P-0073),
4-Cloro-N-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-benzamida (P-0074),
[(S)-1 -(4-Cloro-f enil)-etil]-[5-( 1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0075),
(4-cloro-fenil)-amida de ácido 5-(1 H-Pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridino-2-carboxílico (P-0076),
[2-(4-Cloro-benzilamino)-tiazol-5-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (P-0077),
(4-Cloro-fenil)-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-ilmetil]-amina (P-0078),
3-[(5-Cloro-3-metil-1 -fenil-1 H-pirazol-4-il)-metóxi-metil]-1 H-pirrol[2,3-b]piridina (P-0079),
3-(5-Cloro-3-metil-1 -fenil-1 H-pirazol-4-ilmetil)-1 H-pirrol[2,3-b]piridina(P-0080),
(4-Cloro-benzil)-[6-metóxi-5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0081),
(4-Cloro-benzil)-[6-flúor-5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0082), e
(4-Cloro-benzil)-[4-cloro-5-(1 H-pirrol[2,3-b]-piridin-3-ilmetil)-tiazol-2-il]-amina (P-0083),
benzilamida de ácido 3,5-Dimetil-4-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-pirazol-1 -carboxílico (P-0084),
fenilamida de ácido 3,5-Dimetil-4-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-pirazol-1-carboxílico (P-0085),
[3,5-Dimetil-4-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-pirazol-1-il]-fenil-metanona (P-0086),
l-[3,5-Dimetil-4-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-pirazol-1-il]-3-fenil-propan-1-ona (P-0087),
3-(3,5-Dimetil-1 -fenilmetanossulfonil-1 H-pirazol-4-ilmetil)-1 H-pirrol[2,3-b]piridina (P-0088),
3-[1 -(Butano-1 -sulfonil)-3,5-dimetil-1 H-pirazol-4-ilmetil]-1 H-pirrol[2,3-b]piridina (P-0089), e
butilamida de ácido 3,5-Dimetil-4-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-pirazol-1-carboxílico (P-0090).
DOENÇAS EXEMPLARES ASSOCIADAS A c-kit.
Os compostos descritos aqui são úteis para tratar distúrbiosrelacionados a c-kit por exemplo, doenças relacionadas à transdução desinal de cinase desregulada, incluindo distúrbios proliferativos celulares,distúrbios fibroticos e distúrbios metabolicos, entre outros. Como descrito emmais detalhes abaixo e em Lipson et al, U. S. 20040002534 (Pedido dePatente U. S. 10/600.868, depositado em 23 de junho de 2003) que éincorporado aqui por referência em sua totalidade, distúrbios proliferativoscelulares que podem ser tratados pela presente invenção incluem cânceres,e distúrbios proliferativos de mastócitos.
A presença de c-kit tem também estado associada a vários tiposdiferentes de cânceres, como descritos abaixo. Além disso, a associaçãoentre as anormalidades em c-kit e doença não está restringida a câncer.Como tal, c-kit foi associado às malignidades, incluindo tumores demastócitos, câncer do pulmão de célula pequena, câncer testicular, tumoresestromais gastrointestinais (GISTs), glioblastoma, astrocitoma,neuroblastoma, carcinomas do trato genital feminino, sarcomas de origemneuroectodérmica, carcinoma colorretal, carcinoma in situ, neoplasia decélulas de Schwann associada à neurofibromatose, leucemia mielocíticaaguda, leucemia linfocítica aguda, leucemia mielogenosa crônica,mastocitose, melanoma, e tumores de mastócitos caninos, e doençasinflamatórias, incluindo asma, artrite reumatóide, rinite alérgica, esclerosemúltipla, síndrome inflamatória do intestino, rejeição de transplante, ehipereosinofilia.
DOENÇAS MALIGNAS EXEMPLARES ASSOCIADAS A c-kit
Expressão e/ou ativação aberrante de c-kit têm sido implicadaem uma variedade de cânceres. Evidência para uma contribuição de c-kitpara patologia neoplástica inclui sua associação com leucemias e tumoresde mastócitos, câncer do pulmão de célula pequena, câncer testicular, ealguns cânceres do trato gastrointestinal e sistema nervoso central. Alémdisso, c-kit tem estado implicado em desempenhar um papel emcarcinogênese do trato genital feminino (Inoue, et al, 1994, Câncer Res.54(11):3049-3053), sarcomas de origem neuroectodérmica (Ricotti, et al,1998, Blood 91:2397-2405), e neoplasia de células de Schwann associada àneurofibromatose (Ryan, et al, 1994, J. Neuro. Res. 37:415-432). Foidescoberto que mastócitos estão envolvidos em modificar o microambientedo tumor e intensificando o crescimento do tumor (Yang et al, 2003, J ClinInvest. 112: 1851 -1861; Viskochila, 2003, J Clin Invest. 112:1791-1793).Desse modo, c-kit é um alvo útil em tratar neurofibromatose como tambémtumores malignos.
Carcinoma pulmonar de célula pequena: receptor de c-kit cinasefoi descoberto ser aberrantemente expresso em muitos casos de células decarcinoma pulmonar de célula pequena (SCLC) (Hibi, et al, 1991, Oncogene6:2291-2296). Desse modo, como um exemplo, inibição de c-kit cinase podeser benéfica em tratamento de SCLC, por exemplo, para melhorar asobrevivência a longo prazo de pacientes com SCLC.
Leucemias: SCF ligando ao c-kit protege tronco hematopoético ecélulas progenitora de apoptose (Lee, et al, 1997, J. Immunol. 159:3211-3219), assim contribuindo para a formação de colônias e hematopoiese.Expressão de c-kit freqüentemente é observada em leucemia mielocíticaaguda (AML), e em alguns casos de leucemia linfocítica aguda (ALL) (pararevisões, vide Sperling, et al, 1997, Haemat 82:617-621; Escribano, et al,1998, Leuk. Lymph. 30:459-466). Embora c-kit seja expresso na maior partede células de AML, sua expressão não parece ser prognóstico deprogressão de doença (Sperling, et al, 1997, Haemat 82:617-621). Porém,SCF protegeu as células de AML de apoptose induzida por agentesquimioterapêuticos (Hassan, et al, 1996, Acta. Hem. 95:257-262). Inibição dec-kit pela presente invenção intensificará a eficácia destes agentes e podeinduzir apoptose de células de AML.
O crescimento clonal de células de pacientes com síndromemielodisplástica (Sawada, et al, 1996, Blood 88:319-327) ou leucemiamielogenosa crônica (CML) (Sawai, et al, 1996, Exp. Hem. 2:116-122) foidescoberto ser intensificado significativamente por SCF em combinação comoutras citocinas. CML é caracterizado por expansão de células positivas decromossomo de Filadélfia da medula (Verfaillie, et al, Leuk. 1998, 12:136-138) que parece ser o resultado primariamente da inibição de morteapoptótica (Jones, Curr. Opin. Onc. 1997, 9:3-7). O produto do cromossomode Filadélfia, p210BCRABL, foi relatado mediar inibição de apoptose (Bedi, etal, Blood 1995, 86:1148-1158). Uma vez que p210BCR"ABL e c-kit inibemapoptose e p62dok foi sugerido como um substrato (Carpino, et al, Cell 1997,88:197-204), expansão clonal mediada por estas cinases pode ocorreratravés de uma via de sinalização comum. Porém, c-kit tem também sidorelatado interagir diretamente com p210BCR"ABL (Hallek, et al, Brit. J Haem.1996, 94:5-16) que sugere que c-kit tem um papel mais causativo empatologia de CML. Portanto, inibição de c-kit será útil no tratamento dosdistúrbios acima.
Cânceres gastrointestinais: mucosa colorretal normal nãoexpressa c-kit (Bellone, et al, 1997, J. Cell Physiol. 172:1-11). Porém, c-kitfreqüentemente é expresso em carcinoma colorretal (Bellone, et al, 1997, J.Cell Physiol. 172: 1-11), e foram observadas alças autócrinas de SCF e c-kitem várias linhagens celulares de carcinoma do cólon (Toyota, et al, 1993,Turn Biol 14:295-302; Lahm, et al, 1995, Cell Growth & Differ 6:1111-1118;Bellone, et al, 1997, J. Cell Physiol. 172:1-11). Além disso, rompimento daalça autócrina pelo uso de anticorpos neutralizadores (Lahm, et al, 1995,Cell Growth & Differ. 6:1111-1118) e sub-regulação de c-kit e/ou SCF inibeproliferação celular significativamente (Lahm, et al, 1995, Cell Growth &Differ 6:1111-1118; Bellone, et al, 1997, J. Cell Physiol. 172:1-11).
Alças autócrinas de SCF/c-kit foram observadas em linhagenscelulares de carcinoma gástrico (Turner, et al, 1992, Blood 80:374-381;Hassan, et al, 1998, Digest. Dis. Science 43:8 - 14), e ativação de c-kitconstitutiva também parece ser importante para tumores estromaisgastrointestinais (GISTs). GISTs são tumor mesenquimal mais comum dosistema digestivo. Mais de 90 % de GISTs expressam c-kit, que éconsistente com a origem putativa destas células tumorais de célulasintersticiais de Cajal (ICCs) (Hirota, et al, 1998, Science 279:577-580). ICCssão supostas regular contração do trato gastrointestinal, e pacientescarecendo de c-kit em suas ICCs exibiram uma forma miopática de pseudo-obstrução intestinal idiopática crônica (Isozaki, et al, 1997, Amer. J. of Gast.9 332-334). O c-kit expresso em GISTs de vários pacientes diferentes foiobservado ter mutações no domínio de justamembrana intracelular que levaà ativação constitutiva de c-kit (Hirota, et al, 1998, Science 279:577-580).Conseqüentemente, inibição de c-kit cinase será um meio eficaz para otratamento destes cânceres.Cânceres testiculares: tumores de célula germinal masculinaforam histologicamente categorizados em seminomas que retémcaracterísticas de célula germinal e não-seminomas que podem exibircaracterísticas de diferenciação embrionária. Seminomas e não-seminomassão supostos iniciar de um estágio pré-invasivo designado carcinoma in situ(CIS) (Murty, et al, 1998, Sem. Oncol. 25:133-144). c-kit e SCF foramrelatados ser essenciais para o desenvolvimento gonádico normal durante aembriogênese (Loveland, et al, 1997, J. Endocrinol 153:337-344). Perda doreceptor ou o ligando resultou em animais destituídos de células germinais.
Em testes pós-natais, c-kit foi descoberto ser expresso em células de Leydige espermatogonia, enquanto SCF foi expresso em células de Sertoli(Loveland, et al, 1997, J. Endocrinol 153:337-344). Tumores testicularesdesenvolvem de células de Leydig com freqüência alta em camundongostransgênicos que expressam oncogenes do vírus do papiloma humano 16(HPV16) E6 e E7 (Kondoh, et al, 1991, J. Virol. 65:3335-3339; Kondoh, et al,1994, J. Urol. 152:2151-2154). Estes tumores expressam c-kit e SCF, e umaalça autócrina pode contribuir para a tumorigênese (Kondoh, et al, 1995,Oncogene 10:341-347) associada à perda celular de p53 funcional e oproduto de gene de retinoblastoma por associação com E6 e E7 (Dyson, etal, 1989, Science 243:934-937; Werness, et al, 1990, Science 248:76-79;Scheffher, et al, 1990, Cell 63:1129-1136). Mutantes de sinalizaçãodefeituosos de SCF (Kondoh, et al, 1995, Oncogene 10:341-347) ou c-kit (Li,et al, 1996, Canc. Res. 56:4343-4346) inibiram a formação de tumorestesticulares em camundongos que expressam HPV16 E6 e E7. A ativaçãode c-kit cinase é pivotante para tumorigênese nestes animais e desse modomodulação da via de c-kit cinase pela presente invenção impedirá ou tratarátais distúrbios.
Expressão de c-kit em tumores de célula germinal mostra que oreceptor é expresso pela maior parte de carcinomas in situ e seminomas,mas c-kit é expresso em apenas uma minoria de não-seminomas(Strohmeyer, et al, 1991, Canc. Res. 51:1811-1816; Rajpert-de Meyts, et al,1994, Int. J. Androl. 17:85-92; Izquierdo, et al, 1995, J. Pathol. 177:253-258;Strohmeyer, et al, 1995, J. Urol. 153:511-515; Bokenmeyer, et al, 1996, J.Câncer Res. Clin. Oncol. 122:301-306; Sandlow, et al, 1996, J. Androl.17:403-408). Portanto, inibiçãp de c-kit cinase prove um meio para tratarestes distúrbios.
Cânceres de CNS: SCF e c-kit são expressos ao longo do CNSde roedores em desenvolvimento, e o padrão de expressão indica um papelno crescimento, migração e diferenciação de células neuroectodérmicas.Expressão de receptor e ligando tem também estado relatado no cérebro deadultos (Hamel, et al, 1997, J. Neuro-Onc. 35:327-333). Expressão de c-kittem também sido observada em tecido do cérebro de humano normal (Tada,et al. 1994, J. Neuro 80:1063-1073). Glioblastoma e astrocitoma que definema maior parte de tumores intracranianos surgem da transformaçãoneoplástica de astrócitos (Levin, et al, 1997, Principies & Practice ofOncology:2022-2082). Expressão de c-kit foi observada em linhagenscelulares de glioblastoma e tecidos (Berdel, et al, 1992, Canc. Res. 52:3498- 3502; Tada, et al. 1994, J. Neuro 80:1063-1073; Stanulla, et al, 1995, ActNeuropath 89:158-165).
Cohen, et al, 1994, Blood 84:3465-3472 relatou que todas as 14linhagens celulares de neuroblastoma examinadas continham alçasautócrinas de c-kit/SCF, e expressão do receptor e ligando foi observada em45 % das amostras de tumor examinadas. Em duas linhagens celulares,anticorpos de anti-c-kit inibiram proliferação celular, sugerindo que a alçaautócrina de SCF/c-kit contribuiu para o crescimento (Will Cohen, et al, 1994,Blood 84:3465-3472). Conseqüentemente, inibidores de c-kit cinase podemser usados para tratar estes cânceres.
DOENÇAS DE MASTOCITOS EXEMPLARES ENVOLVENDO c-kit
Ativação excessiva de c-kit está também associada às doençasque são o resultado de uma sobre-abundância de mastocitos. Mastocitose éo termo usado para descrever um grupo heterogêneo de distúrbioscaracterizado por proliferação excessiva de mastocitos (Metcalfe, 1991, J.Invest. Derm 93:2S-4S; Golkar, et al, 1997, Lancet 349:1379-1385).Expressão de c-kit elevada foi relatada em mastocitos de pacientes commastocitose agressiva (Nagata, etal, 1998, Leukemia 12:175-181).
Adicionalmente, mastócitos e eosinófilos representam célulasfundamentais envolvidas em alergia, inflamação e asma (Thomas, et al,1996, Gen. Pharmacol 27:593-597; Metcalfe, et al, 1997, Physiol Rev77:1033-1079; Naclerio, et al, 1997, JAMA 278:1842-1848; Costa, et al, 1997,JAMA 278:1815-1822). SCF, e conseqüentemente c-kit, direta eindiretamente regula ativação de mastócitos e eosinófilos, assiminfluenciando as células primárias envolvidas em alergia e asma através demecanismos múltiplos. Por causa desta regulação mútua da função demastócitos e eosinófilos, e do papel no qual SCF pode desempenhar sobreesta regulação, inibição de c-kit pode ser usada para tratar rinite crônicaassociada à alergia, inflamação e asma.
Mastocitose: estimulação de SCF (também conhecida comofator de crescimento de mastócito) de c-kit foi relatada ser essencial para ocrescimento e desenvolvimento de mastócitos (Hamel, et al, 1997, J. Neuro-Onc. 35:327-333; Kitamura, et al, 1995, Int. Are. Aller. Immunol. 107:54-56).Camundongos com mutações de c-kit que atenua sua atividade desinalização apresentaram significativamente menos mastócitos em sua pele(Tsujimura, 1996, Pathol Int 46:933 - 938). Ativação excessiva de c-kit podeestar associada às doenças que resultam de uma sobre-abundância demastócitos.
Mastocitose é limitado à pele na maior parte dos pacientes, maspode envolver outros órgãos em 15-20 % dos pacientes (Valent, 1996,Wein/Klin Wochenschr 108:385-397; Golkar, et al, 1997, Lancet 349:1379-1385). Até mesmo entre pacientes com mastocitose sistêmica, a doençapode variar de ter uma prognose relativamente benigna a mastocitoseagressiva e leucemia mastocítica. (Valent, 1996, Wein/Klin Wochenschr108:385-397; Golkar, et al, 1997, Lancet 349:1379-1385). c-kit foi observadoem mastócitos malignos de tumores de mastócitos caninos (London, et al,1996, J. Compar. Pathol. 115:399-414), como também em mastócitos depacientes com mastocitose sistêmico agressivo (Baghestanian, et al, 1996,Leuk.: 116-122; Castells, et al, 1996, J. Aller. Clin. Immunol. 98:831-840).SCF foi mostrado ser expresso em células estromais como umaproteína ligada à membrana, e sua expressão pode ser induzida através defatores de crescimento fibrogênicos como PDGF. Foi também mostrado serexpresso em ceratinócitos como uma proteína ligada à membrana em pelenormal. Porém, na pele de pacientes com mastocitose, foi observada umaquantidade aumentada de SCF solúvel (Longley, et al, 1993, Engl New. J.Med. 328:1302-1307).
Quimase de mastócito foi relatada clivar SCF associado àmembrana em uma forma solúvel e biologicamente ativa. Este processomediado por mastócito pode gerar uma alça de realimentação paraintensificar a proliferação e função dos mastócitos (Longley, et al, 1997, Proc.Natl. Acad. Sei. 94:9017-9021), e talvez importante para a etiologia demastocitose. Camundongos transgênicos que sobre-expressam uma formade SCF que não poderiam ser proteoliticamente liberado de ceratinócitosnão desenvolveram mastocitose, enquanto animais similares que expressamSCF normal em ceratinócitos exibiram um fenótipo que se assemelha àmastocitose cutânea humana (Kunisada, et al, 1998, J. Exp. Med. 187:1565-1573). Formação de quantidades grandes de SCF solúvel pode contribuirpara a patologia associada à mastocitose em alguns pacientes e a presenteinvenção pode tratar ou impedir tais distúrbios modulando a interação entreSCF e c-kit cinase. Foram encontradas várias mutações diferentes de c-kitque resultou em atividade de cinase constitutiva nas linhagens de célulatumoral de mastócito humanas e de roedores (Furitsu, et al, 1993, J. Clin.Invest. 92:1736-1744; Tsujimura, et al, 1994, Blood 9:2619 - 2626; Tsujimura,et al, 1995, Int. Are. Aller. Immunol 106:377-385; Tsujimura, 1996, Pathol Int46:933-938). Além disso, mutações de ativação do gene de c-kit foramobservadas em células mononucleares periféricas isoladas de pacientescom mastocitose e distúrbios hematológicos associados (Nagata, et al, 1998,Mastoctytosis Leuk 12:175-181), e em mastócitos de um paciente comurticária pigmentosa e mastocitose agressiva (Longley, et al, 1996, Nat. Gen.12:312-314). Inibição de c-kit cinase, portanto provará ter um papelterapêutico excelente no tratamento destes distúrbios.Em alguns pacientes, mutações de ativação de c-kit podem serresponsáveis pela patogênese da doença e estes pacientes podem sertratados, ou suas doenças impedidas, por modulação da interação de SCFcom c-kit cinase. Ativação de SCF de c-kit como foi mostrada impedirapoptose de mastócitos que pode ser crítica para manter homeóstase demastócito cutânea (lemura, et al, 1994, Amer. J. Pathol 144:321-328; Yee, etal, 1994, J. Exp. Med. 179:1777-1787; Mekori, et al, 1994, J. Immunol153:2194-2203; Mekori, et al, 1995, Int. Are. Allergy Immunol. 107:137-138).Inibição de apoptose de mastócito pode conduzir à acumulação demastócitos associada à mastocitose. Desse modo, observação da ativaçãode c-kit que é o resultado de sobre-expressão do receptor, formaçãoexcessiva de SCF solúvel, ou mutações do gene de c-kit queconstitutivamente ativam sua cinase, fornecem uma razão que inibição daatividade de c-kit cinase diminuirá o número de mastócitos e proverabenefício para pacientes com mastocitose.
Para células com mutações de c-kit de ativação, foi descobertoque inibidores de c-kit inibem ou até mesmo matam as células (Ma et al,2000, J Invest Dermatol. 114:392-394), particularmente para mutações naregião reguladora (Ma et al, 2002, Blood 99:1741-1744). Ma et al, 2002,também mostrou que para mutações na região catalítica, inibidores STI571(Gleevec) é SU9529 não inibiram as células, de modo que tipos adicionaisde inibidores de c-kit são úteis. Desse modo, inibidores de c-kit podem serusados contra c-kit tanto do tipo selvagem como também c-kit tendomutações, por exemplo, mutações de ativação na região reguladora e/ouregião catalítica.
Asma & Alergia: mastócitos e eosinófilos representam célulasfundamentais em infecção parasitária, alergia, inflamação, e asma (Thomas,et al, 1996, Gen. Pharmacol 27:593-597; Metcalfe, et al, 1997, Physiol Rev77:1033-1079; Holgate, 1997, CIBA Found. Symp; Naclerio, et al, 1997,JAMA 278:1842-1848; Costa, et al, 1997, JAMA 778:1815-1822). SCF foimostrado ser essencial para desenvolvimento de mastócito, sobrevivência ecrescimento (Kitamura, et al, 1995, Int. Are. Aller. Immunol. 107:54-56;Metcalfe, et al, 1997, Physiol Rev 77:1033-1079). Além disso, SCF cooperacom o regulador eosinófilo-específico, IL-5, para aumentar odesenvolvimento de progenitores de eosinófilo (Metcalf, et al, 1998, Proc.Natl. Acad. Sei, USA 95:6408-6412). SCF tem também sido relatado induzirmastócitos para segregar fatores (Okayama, et al, 1997, Lit. Are. Aller.Immunol. 114:75-77; Okayama, et al, 1998, Eur. J. Immunol. 28:708-715)que promove a sobrevivência de eosinófilos (Kay, et al, 1997, Int. Are. Aller.Immunol. 113:196-199) que pode contribuir para inflamação crônica,mediada por eosinófilo (Okayama, et al, 1997, Int. Are. Aller. Immunol.114:75-77; Okayama, et al, 1998, Eur. J. Immunol. 28:708-715). Nestaconsideração, SCF regula ativação de mastócitos e eosinófilos direta eindiretamente.
SCF induz liberação de mediador de mastócitos, como tambémprepara estas células para desgranulação induzida por IgE (Columbo, et al,1992, J. Immunol 149:599-602) e sensibiliza sua responsividade à proteínabásica de grânulo principal derivada de eosinófilo (Furuta, et al, 1998, Blood92:1055-1061). Entre os fatores liberados por mastócitos ativados estão IL-5,GM-CSF e TNF-a, que influencia secreção de proteína de eosinófilo(Okayama, et al, 1997, Int. Are. Aller. Immunol. 114:75-77; Okayama, et al,1998, Eur. J. Immunol. 28:708-715). Além de induzir liberação de histaminade mastócitos (Luckacs, et al, 1996, J. Immunol. 156:3945-3951; Hogaboam,et al, 1998, J. Immunol. 160:6166-6171), SCF promove a produção demastócito do fator quimiotático de eosinófilo, eotaxina (Hogaboam, et al,1998, J. Immunol. 160:6166-6171), e infiltração de eosinófilo (Luckacs, et al,1996, J. Immunol. 156:3945-3951).
SCF também diretamente influencia a adesão tanto dosmastócitos (Dastych, et al, 1994, J. Immunol. 152:213-219; Kinashi, et al,1994, Blood 83:1033-1038) como dos eosinófilos (Yuan, et al, 1997, J. Exp.Med. 186:313-323) que por sua vez, regula infiltração de tecido. Desse modo,SCF pode influenciar as células primárias envolvidas em alergia e asmaatravés de mecanismos múltiplos. Correntemente, corticosteróides são otratamento mais eficaz para rinite crônica e inflamação associado à alergia(Naclerio, et al, 1997, JAMA 278:1842-1848; Meltzer, 1997, Aller. 52:33-40).Estes agentes trabalham mecanismos múltiplos incluindo redução demastócitos e eosinófilos circulantes e infiltrantes, e diminuem sobrevivênciade eosinófilos associada à inibição da produção de citocina (Meltzer, 1997,Aller. 52:33-40). Esteróides têm também sido relatados inibir a expressão deSCF por fibroblastos e células de tecido conjuntivo residente que leva àsobrevivência diminuída de mastócitos (Finotto, et al, 1997, J. Clin. Invest.99 1721-1728). Por causa da regulação mútua da função de mastócito e deeosinófilo, e o papel que SCF pode desempenhar nesta regulação, inibiçãode c-kit cinase fornecerá um meio para tratar rinite crônica associada àalergia, inflamação e asma.
Artrite inflamatória (por exemplo, artrite reumatóide): devido àassociação de mastócitos com o processo artrítico (Lee et al, 2002, Science297:1689-1692), c-kit prove um alvo útil para prevenção, retardo, e/outratamento de artrite inflamatória, como artrite reumatóide.
Esclerose múltipla: mastócitos foram mostrados desempenharum papel extensivo em doenças auto-imunes, como demonstrado no modelode camundongo de esclerose múltipla (MS), encefalomielite alérgicaexperimental (EAE). Mastócitos foram indicados ser requeridos paramanifestação total da doença. Secor et al, 2000, J Exp Med 191:813-821.Desse modo, c-kit também prove um alvo útil para a prevenção, retardo,e/ou tratamento de esclerose múltipla.DOENÇAS EXEMPLARES ASSOCIADAS A c-fms
A presença de c-fms tem estado associada a vários tiposdiferentes de doenças. Como tal, c-fms foi associado aos distúrbios imunes,incluindo artrite reumatóide, eritematose de lúpus sistêmico (SLE),granulomatose de Wegener, e rejeição de transplante, doenças inflamatoriasincluindo Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica (COPD), enfisema, eaterosclerose, distúrbios metabólicos, incluindo resistência à insulina,hiperglicemia, e lipólise, distúrbios de estrutura óssea ou mineralização,incluindo osteoporose, risco aumentado de fratura, hipercalcemia, emetástase óssea, doenças de rim, incluindo nefrite (por exemploglomerulonefrite, nefrite intersticial, nefrite de Lúpus), necrose tubular,complicações renais associadas a diabetes, e hipertrofia e cânceres,incluindo mieloma múltiplo, leucemia mielóide aguda, leucemia mielóidecrônica (CML), câncer de mama, e câncer ovariano.
Expressão e/ou ativação aberrantes de c-fms têm estadoimplicadas em leucemia mielóide aguda, AML (Cume et al, Proc. Nat. Acad.ScL, 1990, 87:1377-1380). É acreditado que mutações no códon 301 leva àtransformação neoplástica por independência de ligação e atividade detirosina cinase constitutiva do receptor. O resíduo de tirosina no códon 969foi mostrado estar envolvido em uma atividade reguladora negativa que érompida através de substituições de aminoácido. Conseqüentemente,mutações de c-fms são muito prevalecentes (20 %) em leucemiamielomonocítica crônica e AML tipo M4 (23 %) ambas destas sãocaracterizadas por diferenciação monocítica.
Uma condição relacionada à AML é leucemia mielóide crônica(CML). Durante a crise de explosão mielóide (BC) de CML, anormalidadesde cromossomos adicionais não-aleatórios ocorrem em 80 % dos pacientes.Porém, estes alterações citogenéticas foram relatadas preceder os sinaisclínicos de CML-BC em vários meses a anos que sugere que outros eventosbiológicos podem participar no processo de multi-etapas de transformaçãoaguda de CML. A produção autócrina de fatores de crescimento foi mostradaocorrer em várias malignidades hematológicas e particularmente em AML.Specchia et al [Br J Haematol. 1992 mar; 80(3):310-6] demonstrou que genebeta de IL-I é expressado em quase todos casos de CML em crise deexplosão mielóide, e que uma proporção alta de casos mostrou expressãoconstitutiva do gene de M-CSF. Muitos dos mesmos pacientes no estudo deSpecchia et al demonstraram co-expressão simultânea de c-fms. Apósexposição de células leucêmicas a acetato de miristato de forbol (PMA),liberação de proteína de M-CSF foi documentada em três de cinco pacientes;porém, nenhuma interleucina-3 significativo (IL-3), fator estimulante decolônia de granulócitos-macrófagos (GM-CSF) ou estimulante de colônia degranulócitos (G-CSF), foi detectado nestes pacientes. Isto demonstra quepadrões diferentes de secreção de fatores de crescimento existem em AMLe CML, e que eventos moleculares distintos estão provavelmente envolvidosno controle de proliferação leucêmica.
A observação que produção de M-CSF, o fator de crescimentode macrófago principal, é aumentada em tecidos durante a inflamação (LeMeur et al, J. Leukocyte Biology. 2002; 72:530-537) fornece um papel parac-fms em certas doenças. Por exemplo, COPD é caracterizado por limitaçãode corrente de ar que não é completamente reversível. A limitação decorrente de ar é usualmente progressiva e associada a uma respostainflamatória anormal dos pulmões às partículas ou gases nocivos. Ainflamação crônica de COPD é observada através das vias aéreas,parênquima, e vasculatura pulmonar. A população de células inflamatóriasconsiste em neutrófilòs, macrófagos, e linfócitos T, juntos com eosinófilos emalguns pacientes. Macrófagos são postulados desempenhar um papelorquestral em inflamação de COPD liberando mediadores como TNF-cc, IL-8e LTB4, que são capazes de prejudicar estruturas pulmonares e/ou sustentarinflamação neutrofílica.
Também, sinalização de M-CSF/Fms é crítica para a formaçãode osteoclastos e sobrevivência de precursores de osteoclastos. Porexemplo, perda de estrogênio em menopausa resulta em M-CSF aumentadoe desse modo número de osteoclastos aumentado e ressorção óssealevando a risco aumentado de fratura e osteoporose. Conseqüentemente,bloqueio deste sinal é um alvo para a inibição de ressorção óssea(Teitelbaum, Science. 2000; 289:1504; Rohan, Science. 2000; 289:1508).
Aterosclerose, uma doença inflamatória das paredes dosrecipientes, está associada à morbidez significativa e mortalidade. Um efeitopara inibição de c-fms no tratamento e prevenção de aterosclerose dependede várias observações (Libby, Nature. 2002; 420: 868-874). Primeiro,monócitos residentes na íntima arterial aumentam a expressão dereceptores descontaminantes e interioriza lipoproteínas modificadas. Osmacrófagos carregados com lipidio resultantes desenvolvem dentro decélulas espumosas características de lesão aterosclerótica. Macrófagos emateroma segregam citocinas e fatores de crescimento envolvidos naprogressão da lesão. Adicionalmente, macrófagos replicam-se dentro daíntima. Através de c-fms, M-CSF ativa a transição de monócito paramacrófago carregado de lipídio e aumenta a expressão de receptordescontaminante A. De fato, placas ateroscleróticas sobre-expressam M-CSF que é crítico para progressão aterosclerótica. Camundongos deficientesem M-CSF foram descobertos experimentar aterosclerose menos severaque camundongos com M-CSF normal (Rajavashisth, et. al, J. Clin. Invest.1998; 101-2702-2710; Qiao, et. al, Am. J. Path. 1997; 150:1687-1699).
Conseqüentemente, inibidores de c-fms rompem sinalização de M-CSF,comprometendo progressão de células espumosas de monócitos paramacrófagos, sobrevivência e replicação de macrófagos, e sinalização decitocina que participam na progressão da lesão.
A granulomatose de Wegener, também conhecida comovasculite, é caracterizada por inflamação granulomatosa dos recipientessangüíneos com necrose. Esta inflamação limita o fluxo sangüíneo paraórgãos com dano conseqüente. Embora a doença possa envolver qualquersistema de órgão, granulomatose de Wegener afeta o trato respiratórioprincipalmente (isto é, seios, nariz, traquéia, e pulmões) e os rins. Oendotélio desempenha um papel central na imunopatologia de váriosdistúrbios vasculares em muitas condições inflamatórias comogranulomatose de Wegener em que o uso de imunoglobulina intravenosa (IgIV) foi mostrado ser benéfico (vide por exemplo, Basta et al, J Clin Invest1994, 94:1729-1735). Foi relatado (Xu et al, J. Am. Path. 1998; 153:1257-1266) que Ig de IV inibe proliferação celular endotelial em uma maneiradose- e tempo-dependente e sub-regula a expressão de mRNA demoléculas de adesão (ICAM-I e VCAM-I), mRNA de quimiocina (MCP-I, M-CSF, e GM-CSF), e mRNA de citocina pró-inflamatória (TNF-a, IL-1p\ e IL-6)induzida por TNF-a: ou IL-1(3. Estes resultados podem explicar, pelo menosem parte, no efeito terapêutico de Ig de IV em distúrbios vasculares einflamatôrios. Adicionalmente, estes resultados sugerem que inibição daatividade de M-CSF no nível de interação com c-fms seja uma estratégia detratamento eficaz.
O papel de M-CSF e c-fms em enfisema parece envolver aregulação de metabolismo de elastina através de controle demetaloproteínas de matriz. M-CSF tem um papel na modulação daacumulação e função de macrófagos alveolares (AMs) in vivo (Shibata et al,Blood 2001, 98: páginas 2845-2852). Camundongos osteopetróticos (Op/Op)não têm nenhum M-CSF detectável e mostram reduções tecido-específicasvariáveis em números de macrófago. Conseqüentemente, foi hipotetizadoque AMs seria diminuída em número e teria função alterada emcamundongos Op/Oppor causa da ausência de M-CSF. Shibata et aldescobre que macrófagos pulmonares identificados nas seções pulmonaresforam diminuídos em número em camundongos Op/Op 20 dias de idade masnão camundongos Op/Op mais velhos que 4 meses comparados com asdescobertas em controles da ninhada da mesma idade. Os números de AMsrestabelecida por lavagem broncoalveolar (BAL) foi também reduzido emcamundongos Op/Op jovens mas não adultos comparados com controles.Importantemente, AMs de camundongos Op/Op espontaneamente liberaníveis mais altos de metaloproteinases de matriz (MMPs) que AMs decontroles. Consistente com uma liberação aumentada de MMP,camundongos Op/Op têm deposição de elastina anormal eespontaneamente desenvolvem enfisema na ausência de evidênciamolecular ou celular de inflamação pulmonar. Conseqüentemente, amodulação da atividade de metaloelastase em macrófagos por M-CSF podecontrolar a degradação de fibras de elastina em pulmões ou recipientessangüíneos.
Células de câncer metastáticas causam destruição óssea, comfratura associada, dor, deformação, e hipercalcemia, devido à produção defatores osteoclasticogênicos incluindo M-CSF através de células tumorais(Clohisy et al, Clin. Orthop. 2000, 373: 104-14). Ligando de M-CSF aoproduto de c-fms estimula a formação de osteoclastos e atividade osteolítica(Kodama et al, J. Exp. Med. 1991, 173: 269-72; Feng et al, Endocrinology2002, 143: 4868-74). Conseqüentemente, inibição da atividade deosteoclastos no nível de c-fms oferece um alvo constrangedor para melhorade metástase óssea.
Acumulação de macrófagos é uma característica proeminenteem mujtas formas de glomerulonefrite. Proliferação local de macrófagosdentro do rim foi descrita na glomerulonefrite humana e experimental e podeter um papel importante aumentando a resposta inflamatória. Isbel et al(Nephrol Dial Transplant 2001, 16: 1638-1647) examinou a relação entre aproliferação local de macrófagos e expressão renal de M-CSF. Expressãoglomerular e túbulo-intersticial de M-CSF foi descoberta ser para sobre-regulada em glomerulonefrite humana, sendo muito proeminente em formasproliferativas da doença. Porque isto correlata com a proliferação local demacrófagos, sugere que produção aumentada de M-CSF renal desempenhaum papel importante na regulação da proliferação local de macrófagos emglomerulonefrite humana. Em um modelo de inflamação renal (UUO -obstrução uretérica unilateral) tratamento de anticorpo de anti-cfms reduziu aacumulação de macrófagos (Le Meur et. al, J Leukocyte Biology, 2002, 72:530-537). Conseqüentemente, inibição de c-fms oferece um alvo paraintervenção terapêutica em glomerulonefrite.
Resistência à insulina e obesidade são conspicuidade dediabetes do tipo II e há uma correlação forte entre a resistência à insulina e aacumulação de gordura visceral abdominal (Bjorntrop., Diabetes Metab. Res.Rev, 1999, 15: 427-441). Evidência atual indica que macrófagos queacumulam em tecido adiposo liberam TNF-a e outros fatores que causamalterações de adipócitos (hipertrofia, lipólise, sensibilidade à insulinareduzida) e também promovem resistência à insulina em tecidoscircunvizinhos. Portanto, acumulação de macrófago em diabetes do tipo 2 éimportante para progressão da doença. Conseqüentemente, inibição de c-fms tem potencial em impedir o desenvolvimento de resistência à insulina ehiperglicemia.
Dewar et al. demonstrou recentemente que o inibidor de cinase,imatinib, também especificamente alveja o receptor de fator estimulante decolônia de macrófagos, c-fms, em concentrações terapêuticas. Embora esteachado tenha implicações importantes com respeito aos efeitos colateraispotenciais em pacientes que recebem terapia de imatinib correntemente,estes resultados sugerem que imatinib possa também ser útil no tratamentode doenças onde c-fms está implicado. Estas incluem câncer de mama eovariano e condições inflamatórias como artrite reumatóide. Dewar et al.também especula que imatinib possa ser usado em doenças ondedestruição óssea ocorre devido à atividade de osteoclastos excessiva, comona malignidade hematológica, mieloma múltiplo (Dewar et al, Cell Cycle2005, 4(7):851-3).
Para determinar a importância de M-CSF em direcionarproliferação de macrófagos durante rejeição aguda, Jose et al. Bloqueou oreceptor de M-CSF, cfms, em um modelo de camundongo de rejeição dealoenxerto renal aguda. Eles observaram que a severidade da rejeiçãotúbulo-intersticial estava reduzida no grupo de tratamento como mostradopor tubulite e proliferação celular tubular diminuídas. Proliferação demacrófagos durante rejeição de aloenxerto aguda é dependente da interaçãode M-CSF com seu receptor c-fms. Eles indicam que esta via desempenheum papel significativo e específico na acumulação de macrófagos dentro deum aloenxerto renal de rejeição (Jose et al, Am J Transplant 2003, 3(3):294-300).
Também, moduladores da função tanto de cfms como de c-kitpodem ser usados contra doenças como aquelas indicadas acima, onde emalgumas circunstâncias, a atividade dual do modulador para ambos c-fms ec-kit fornece vantagens distintas em tratar tais doenças. As atividadescomplementares fornecidas por um composto simples forneceriambenefícios adicionados em compostos que alvejam uma ou outra atividade,ou compostos separados que alvejam estas atividades. Por exemplo,atenuando a liberação de quimioatraentes de macrófagos através demastócitos ou quimioatraentes de mastócitos através de macrófagos, estesefeitos antiinflamatorios sinergizarao com a inibição concomitante da funçãocelular intrínseca. Limitações em co-administração estão ausentes em uminibidor dual. Também, a atividade dual pode resultar em muitas doseseficazes mais baixas para o tratamento.
II. PRODUÇÃO DE POLIPEPTÍDEOS RELACIONADOS c-kit E c-fms
Os polipeptídeos nativos e mutados de cinase descritos aquipodem ser sintetizados quimicamente ao todo ou parte usando técnicas quesão bem-conhecidas na técnica (vide, por exemplo, Creighton (1983)Biopolimers 22(l):49-58).
Alternativamente, métodos que são bem-conhecidos àquelesversados na técnica podem ser usados para construir vetores de expressãocontendo a seqüência de codificação de polipeptídeo de cinase nativa oumutada e sinais de controle transcripcionais/translacionais apropriados.Estes métodos incluem técnicas in vitro de DNA recombinante, técnicassintéticas e recombinação/recombinação genética in vivo. Vide, por exemplo,as técnicas descritas em Maniatis, T (1989). Molecular cloning: A LaboratoryManual, Cold Spring Harbor Laboratory, Nova Iorque. Cold Spring HarborLaboratory Press; e Ausubel, F. M. et al. (1994) Current Protocols inMolecular Biology. John Wiley & Sons, Secaucus, NJ.
Uma variedade de sistemas de vetor de expressão dehospedeiro pode ser utilizada para expressar a seqüência de codificação decinase. Estes incluem mas não são limitados a microorganismos comobactérias transformadas com vetores de expressão de DNA de bacteriófago,DNA de plasmídeo ou DNA de cosmídeo recombinantes contendo aseqüência de codificação de domínio de cinase; levedura transformada comvetores de expressão de levedura recombinantes contendo a seqüência decodificação de domínio de cinase; sistemas de célula de inseto infetadoscom vetores de expressão de vírus recombinantes (por exemplo baculovírus)contendo a seqüência de codificação de domínio de cinase; sistemas decélula de planta infetados com vetores de expressão de vírus recombinantes(por exemplo vírus do mosaico de couve-flor, CaMV; vírus do mosaico detabaco, TMV) ou transformados com vetores de expressão de plasmídeorecombinantes (por exemplo Plasmídeo Ti) contendo a seqüência decodificação de domínio de cinase; ou sistemas de células animais. Oselementos de expressão destes sistemas variam em suas resistência eespecificidades.
Dependendo do sistema hospedeiro/vector utilizado, quaisquerdos vários elementos de transcrição e de translação adequados, incluindo ospromotores constitutivos e induzíveis, podem ser usados no vetor deexpressão. Por exemplo, ao clonar em sistemas bacterianos, promotoresinduzíveis como pL de bacteriófago X, plac, ptrp, ptac (promotor híbrido ptrp-lac) e outros podem ser usados; ao clonar em sistemas de célula de inseto,promotores como o promotor de polihedrina de baculovírus podem serusados; ao clonar em sistemas de célula de planta, promotores derivados dogenoma de células de planta (por exemplo promotores de choque térmico; opromotor para a subunidade pequena de RUBISCO; o promotor para aproteína ligadora de a/b de clorofila) ou de vírus de planta (por exemplo opromotor de RNA de 35S de CaMV; o promotor de proteína de revestimentode TMV) podem ser usados; ao clonar em sistemas de célula mamíferos,promotores derivados do genoma de células mamíferas (por exemplopromotor de metalotioneína) ou de vírus mamíferos (por exemplo o promotortardio de adenovírus; promotor do vírus de vacínia de 7,5K) pode ser usado;quando gerar linhagens celulares que contêm cópias múltiplas do DNA dedomínio de cinase, vetores com base em SV40, BPV e em EBV podem serusados com um rótulo selecionável apropriado.
Métodos exemplares que descrevem os métodos demanipulação de DNA, vetores, vários tipos de células usados, métodos deincorporar os vetores nas células, técnicas de expressão, purificação deproteína e métodos de isolamento, e métodos de concentração de proteínasão descritos em detalhes na publicação de PCT WO 96/18738. Estapublicação é incorporada aqui por referência em sua totalidade, incluindoqualquer desenho. Aqueles versados na técnica apreciarão que taisdescrições são aplicáveis à presente invenção e podem ser facilmenteadaptadas a ela.
III. ENSAIOS DE LIGAÇÃO
Os métodos da presente invenção podem envolver ensaios quepodem detectar a ligação de compostos a uma molécula alvo. Tal ligaçãoestá a um nível estatisticamente significativo, preferivelmente com um nívelde confiança de pelo menos 90 %, mais preferivelmente pelo menos 95, 97,98, 99 % ou maior nível de confiança que o sinal de ensaio representaligando à molécula alvo, isto é, é distinguido dos antecedentes.
Preferivelmente controles são usados para distinguir ligação alvo de ligaçãonão-específica. Uma variedade grande de ensaios indicativos de ligação éconhecida por tipos alvos diferentes e pode ser usada para esta invenção.
Compostos de ligação podem ser caracterizados por seu efeitona atividade da molécula alvo. Desse modo, um composto de "atividadebaixa" tem uma concentração inibidora (IC50) ou concentração eficaz (EC50)de mais que 1 uM sob condições padrões. Por "atividade muito baixa" ésignificado uma IC50 ou EC50 de acima de 100 uM sob condições padrões.Por "atividade extremamente baixa" é significado uma IC50 ou EC50 de acimade 1 mM sob condições padrões. Por "atividade moderada" é significadouma IC5o ou EC50 de 200 nM a 1 uM sob condições padrões. Por "atividademoderadamente alta" é significado uma IC50 ou EC50 de 1 nM a 200 nM. Por"atividade alta" é significado uma IC50 ou EC50 de abaixo de 1 nM sobcondições padrões. A IC50 ou EC50 é definida como a concentração decomposto na qual 50 % da atividade da atividade de molécula alvo (porexemplo enzima ou outra proteína) que é medido são perdidos ou ganhoscom relação à faixa de atividade observada quando nenhum composto estápresente. Atividade pode ser medida usando métodos conhecidos àquelesde habilidade usual na técnica, por exemplo, medindo qualquer produtodetectável ou sinal produzido por ocorrência de uma reação enzimática, ououtra atividade por uma proteína que é medida.
Por "sinal de base" em referência a um ensaio de ligação ésignificado o sinal que é registrado sob condições padrões para o ensaioparticular na ausência de um composto de teste, andaime molecular, ouligação de ligando à molécula alvo. Pessoas de habilidade usual na técnicaperceberão que métodos aceitos existem e estão extensamente disponíveispara determinar o sinal de base.
Por "desvio-padrão" é significado a raiz quadrada da variância. Avariância é uma medida de quão espalhada uma distribuição encontra-se. Écomputado como o desvio quadrada médio de cada número de sua média.
Por exemplo, para os números 1, 2, e 3, a média é 2 e a variância é:
<formula>formula see original document page 88</formula>
RESSONÂNCIA DE PLASMON DE SUPERFÍCIE
Parâmetros de ligação podem ser medidos usando ressonânciade plasmon de superfície, por exemplo, com uma fatia de BlAcore® (Biacore,Japão) revestida com componentes de ligação imobilizados. É usadaressonância de plasmon de superfície para caracterizar a associaçãomicroscópica e constantes de dissociação de reação entre um sFv ou outroligando direcionado contra moléculas alvas. Tais métodos são em geraldescritos nas referências a seguir que são incorporadas aqui por referência.Vely F. et al, (2000) BlAcore® Analysis to test phosphopeptide-SH2 domaininteractions, Methods in Molecular Biology. 121:313-21; ; Liparoto et al.,(1999) Biosensor analysis of the interleukin-2 receptor complex, Journal ofMolecular Recognition. 12:316-21; Lipschultz et al., (2000) Experimentaldesign for analysis of complex kinetics using surface plasmon resonance,Methods. 20(3):310-8; Malmqvist, (1999) BIACORE: an affinity biosensorsystem for characterization of biomolecular interactions, Biochemical SocietyTransactions 27:335-40; Alfthan, (1998) Surface plasmon resonancebiosensors as a tool in antibody engineering, Biosensors & Bioelectronics.13:653-63; Fivash et al., (1998) BlAcore for macromolecular interaction,Current Opinion in Biotechnology. 9:97-101; Price et al.; (1998) Summaryreport on the ISOBM TD-4 Workshop: analysis of 56 monoclonal antibodiesagainst the MUCI mucin. Tumour Biology 19 Supl 1:1-20; Malmqvist et al,(1997) Biomolecular interaction analysis: affinity biosensor technologies forfunctional analysis of proteins, Current Opinion in Chemical Biology. 1:378-83; 0'Shannessy et al., (1996) Interpretation of deviations from pseudo-first-order kinetic behavior in the characterization of ligand binding by biosensortechnology, Analytical Biochemistry. 236:275-83; Malmborg et al., (1995)BlAcore as a tool in antibody engineering, Journal of Immunological Methods.183:7-13; Van Regenmortel, (1994) Use of biosensors to characterizerecombinant proteins, Developments in Biological Standardization. 83:143-51; e 0'Shannessy, (1994) Determination of kinetic rate and equilibriumbinding constants for macromolecular interactions: a critique of the surfaceplasmon resonance literature, Current Opinions in Biotechnology. 5:65-71.
BlAcore® usa as propriedades ópticas de ressonância deplasmon de superfície (SPR) para detectar alterações na concentração deproteína ligada a uma matriz de dextrana que fica na superfície de umainterface da fatia de sensor de ouro/vidro, uma matriz de biossensor dedextrana. Em resumo, as proteínas estão covalentemente ligadas à matrizde dextrana a uma concentração conhecida e um ligando para a proteína éinjetado através da matriz de dextrana. Luz quase infravermelha, direcionadasobre o lado oposto da superfície da fatia de sensor é refletida e tambéminduz uma onda evanescente no filme de ouro que por sua vez, causa umaintensidade profunda na luz refletida a um ângulo particular conhecido comoo ângulo de ressonância. Se o índice refrativo da superfície de fatia desensor for alterado (por exemplo por ligação de ligando à proteína ligada) umdeslocamento ocorre no ângulo de ressonância. Este deslocamento deângulo pode ser medido e expressado como unidades de ressonância (RUs)de modo que 1000 RUs é equivalente a uma alteração em concentração deproteína de superfície de 1 ng/mm. Estas alterações são exibidas comrespeito ao tempo ao longo do eixo geométrico y de um sensorgrama quedescreve a associação e dissociação de qualquer reação.
ENSAIOS DE TRIAGEM DE PROCESSAMENTO ALTO (HTS)
HTS tipicamente usa ensaios automatizados para pesquisaratravés de números grandes de compostos para uma atividade desejada.Tipicamente ensaios de HTS são usados para encontrar fármacos novostriando para químicas que atuam em uma enzima ou molécula particular. Porexemplo, se uma química inativa uma enzima que poderia provar ser eficazem impedir um processo em uma célula que causa uma doença. Métodos deprocessamento alto permitem os investigadores muito rapidamente ensaiarmilhares de químicas diferentes junto a cada molécula alvo usando sistemasde manipulação robóticos e análise automatizada de resultados.
Como aqui usado, "triagem de processamento alto" ou "HTS"refere-se à triagem rápida in vitro de números grandes de compostos(bibliotecas); em geral dezenas a centenas de milhares de compostos,usando ensaios de triagem robóticos. Triagem de processamento ultra-alto(uHTS) em geral refere-se à triagem de processamento alto acelerado paramais que 100.000 testes por dia.
Para alcançar triagem de processamento alto, é vantajoso alojaramostras em veículo ou plataforma de multirrecipientes. Um veículo demultirrecipientes facilita medir as reações de uma pluralidade de compostoscandidatos simultaneamente. Podem ser usados microplaca de Multi-cavidades como o veículo. Tais microplaca de multi-cavidades, e métodospara seu uso em numerosos ensaios, são ambos conhecidos na técnica ecomercialmente disponíveis.
Ensaios de triagem podem incluir controles para propósitos decalibração e confirmação de manipulação apropriada dos componentes doensaio. Cavidades em branco que contêm todos dos reagentes mas nenhummembro da biblioteca química são usualmente inclusos. Como outroexemplo, um inibidor conhecido (ou ativador) de uma enzima para a qualmoduladores são buscados, pode ser incubado com uma amostra do ensaio,e a diminuição resultante (ou aumenta) na atividade de enzima usada comoum comparador ou controle. Será apreciado que moduladores podemtambém ser combinados com os ativadores ou inibidores da enzima paraencontrar moduladores que inibem a ativação de enzima ou repressão que édo contrário causada pela presença da enzima moduladora conhecida.
MEDIÇÃO DE REAÇÕES ENZIMÁTICAS E DE LIGAÇÃO DURANTE OS ENSAIOS DE TRIAGEM
Técnicas para medir a progressão de ligações enzimáticas e deligação, por exemplo, em veículos de multirrecipientes, são conhecidas natécnica e incluem, mas não são limitadas às seguintes.
Ensaios espectrofotométricos e espectrofluorométricos são bemconhecidos na técnica. Exemplos de tais ensaios incluem o uso de ensaioscolorimétricos para a detecção de peróxidos, como descrito em Gordon, A. J.e Ford, R. A, (1972) The Chemisfs Companion: A Handbook Of Practical Dta,Techniques, And References, John Wiley and Sons, N. Y, Página 437.
Espectrometria de fluorescência pode ser usada para monitorara geração de produtos de reação. Metodologia de fluorescência é em geralmais sensível que a metodologia de absorção. O uso de sondasfluorescentes é bem conhecido àqueles versados na técnica. Para revisões,vide Bashford et al, (1987) Spectrophotometry and Spectrofluorometry: APractical Approach, págs. 91-114, IRL Press Ltd.; e Bell, (1981)Spectroscopy In Biochemistry. Vol. I, págs. 155-194, CRC Press.
Em métodos espectrofluorométricos, enzimas são expostas asubstratos que alteram sua fluorescência intrínseca quando processadaspela enzima alvo. Tipicamente, o substrato é não-fluorescente e é convertidoem um fluoroforo através de uma ou mais reações. Como um exemplo não-limitativo, atividade de SMase pode ser detectada usando o reagenteAmplex® Red (Moleculares Probes, Eugene, OR). Para medir atividade deesfingomielinase usando Amplex® Red, as reações a seguir ocorrem.Primeiro, SMase hidrolisa esfingomielina para render ceramida efosforilcolina. Segundo, fosfatase alcalina hidrolisa fosforilcolina para rendercolina. Terceiro, colina é oxidada através de oxidase de colina para betaína.Por fim, H202, na presença de peroxidase de rábano silvestre, reage comAmplex® Red para produzir o produto fluorescente, Resorufina, e o sinaldele é detectado usando espectrofluorometria.
Polarização de fluorescência (FP) é com base em umadiminuição na velocidade de rotação molecular de um fluoroforo que ocorreao ligar a uma molécula maior, como uma proteína de receptor, permitindoemissão fluorescente polarizada pelo ligando ligado. FP é empiricamentedeterminada medindo os componentes verticais e horizontais da emissão defluoroforo seguindo excitação com luz polarizada plana. Emissão polarizadaé aumentada quando a rotação molecular de um fluoroforo for reduzida. Umfluoroforo produz um sinal polarizado maior quando estiver ligado a umamolécula maior (isto é um receptor), reduzindo a rotação molecular dofluoróforo. A magnitude do sinal polarizado correlata quantitativamente àextensão de ligação de ligando fluorescente. Conseqüentemente,polarização do sinal "ligado" depende da manutenção de ligação deafinidade alta.
FP é uma tecnologia homogênea e reações são muito rápidas,levando segundos a minutos para alcançar equilíbrio. Os reagentes sãoestáveis, e bateladas grandes podem ser preparadas, resultando emreprodutibilidade alta. Por causa destas propriedades, FP provou seraltamente automatizável, freqüentemente executada com uma incubaçãosimples com um reagente de investigador-receptor simples, pré-misturado.Para uma revisão, vide Owicki et al, (1997), Application of FluorescencePolarization Assays in High-Throughput Screening, Genetic EngineeringNews, 17:27.
FP é particularmente desejável uma vez que seu estágio deleitura é independente da intensidade de emissão (Checovich, W, J. et al,(1995) Nature 375:254-256; Dandliker, W. B, et al, (1981) Methods inEnzymology 74:3-28) e é desse modo insensível à presença dos compostoscoloridos que extinguem a emissão de fluorescência. FP e FRET (videabaixo) são bem-apropriados para identificar os compostos que bloqueiaminterações entre receptores de esfingolipídeos e seus ligandos. Vide, porexemplo, Parker et al, (2000) Development of high throughput screeningassays using fluorescence polarization: nuclear receptor-ligand-binding andkinase/phosphatase assays, J Biomol Screen 5:77-88.
Fluoróforos derivados de esfingolipídeos que podem ser usadosem ensaios de FP estão comercialmente disponíveis. Por exemplo,Molecular Probes (Eugene, OR) correntemente vende esfingolimielina e umfluróforo de ceramida. Estes são, respectivamente, fosfocolina de N-(4,4-difluoro-5,7-dimetil-4-bora-3a,4a-diaza-s-indaceno-3-pentanoil)esfingosila(BODIPY® FL C5-esfingolimielina); fosfocolina de N-(4,4-difluoro-5,7-dimetil-4-bora-3a,4a-diaza-s-indaceno-3-dodecanoil)esfingosila (BODIPY® FL C12-esfingolimielina); e N-(4,4-difluoro-5,7-dimetil-4-bora-3a,4a-diaza-s-indaceno-3-pentanoil)esfingosina (BODIPY® FL C5-ceramida). Patente U. S. No.4.150.949, (imunoensaio para gentamicina), revela gentamicinas rotuladascom fluoresceína, incluindo gentamicina de fluoresceinatiocarbanila.Fluoróforos adicionais podem ser preparados usando métodos bemconhecidos ao versado.
Leitoras de fluorescência normais-e-polarizadas exemplaresincluem o sistema de polarização de fluorescência de POLARION® (TecanAG, Hombrechtikon, Suíça). Leitoras de placa de multipoços gerais paraoutros ensaios estão disponíveis, como a leitora de VERSAMAX® e oespectrofotômetro de placa de multipoços SPECTRAMAX® (ambos deMolecular Probes).
Transferência de energia por ressonância de fluorescência(FRET) é outro ensaio útil para interação detectora e foi descrito. Vide, porexemplo, Heim et al, (1996) Curr. Biol. 6:178-182; Mitra et al, (1996) Gene173:13-17; e Selvin et al, (1995) Meth. Enzymol. 246:300-345. FRET detectaa transferência de energia entre duas substâncias fluorescentes emproximidade íntima, tendo comprimentos de onda de excitação e de emissãoconhecidos. Como um exemplo, uma proteína pode ser expressa como umaproteína de fusão com proteína fluorescente verde (GFP). Quando duasproteínas fluorescentes estão em proximidade, como quando uma proteínaespecificamente interage com uma molécula alvo, a energia de ressonânciapode ser transferida de uma molécula excitada para a outro. Como resultado,o espectro de emissão da amostra desloca-se, que pode ser medido por umfluorômetro como um fluorômetro de multi-cavidades de fMAX (MolecularProbes, Sunnyvale Calif.).
Ensaio de proximidade de cintilação (SPA) é um ensaioparticularmente útil para detectar uma interação com a molécula alvo. SPA éextensamente usado na indústria farmacêutica e foi descrito (Hanselman etal, (1997) J. Lipid Res. 38:2365-2373; Kahl et al, (1996) Anal. Biochem.243:282-283; Undenfriend et al, (1987) Anal. Biochem. 161:494- 500). Videtambém patentes U. S. Nos. 4.626.513 e 4.568.649, e Patente européia No.0.154.734. Um sistema comercialmente disponível usa FLASHPLATE®placas revestidas cintilantes (NEN Life Science Products, Boston, MA).A molécula alvo pode estar ligada às placas de cintilador poruma variedade de meios bem-conhecidos. Placas cintilantes estãodisponíveis que são derivatizadas para ligar às proteínas de fusão comoGST, His6 ou proteínas de fusão de Flag. Onde a molécula alvo for umaproteína complexa ou um multímero, uma proteína ou subunidade pode serligada primeiro à placa, depois aos outros componentes do complexoadicionado depois sob condições de ligação, resultando em um complexoligado.
Em um ensaio de SPA típico, os produtos de gene no fundogeral de expressão terão sido radiorrotulados e adicionados às cavidades, edeixados interagir com a fase sólida que é a molécula alvo imobilizada erevestimento cintilante nas cavidades. O ensaio pode ser medidoimediatamente ou pode ser deixado alcançar o equilíbrio. De qualquer modo,quando uma radiomarcação se tornar suficientemente perto do revestimentocintilante, produz um sinal detectável por um dispositivo como um contadorde de cintilação de microplaca TOPCOUNT NXT® (Packard BioScience Co,Meriden Conn.). Se um produto de expressão radiorrotulado ligar à moléculaalvo, a radiomarcação permanece em proximidade ao cintilante o suficientepara produzir um sinal detectável.
Em contraste, as proteínas rotuladas que não ligam à moléculaalvo, ou ligam apenas brevemente, não permanecerão próximas do cintilanteo bastante para produzir um sinal acima de base. Qualquer hora gastapróximo do cintilante causado por movimento Browniano aleatório tambémnão resultará em uma quantidade significativa de sinal. Igualmente,radiomarcação não-incorporada residual usada durante a etapa deexpressão pode estar presente, mas não gerará sinal significativo porqueestará na solução ao invés de interagir com a molécula alvo. Estasinterações de não-ligação causarão portanto um certo nível de sinal de baseque pode ser removido matematicamente. Se muitos sinais forem obtidos,sal ou outros modificadores podem ser adicionados diretamente às placasde ensaio até que a especificidade desejada seja obtida (Nichols et al, (1998)Anal. Biochem. 257:112-119).IV. ENSAIOS DE ATIVIDADE DE CINASE
Vários ensaios diferentes para atividade de cinase podem serutilizados para ensaiar moduladores ativos e/ou determinar especificidade deum modulador para uma cinase particular ou grupo ou cinases. Além doensaio mencionado nos Exemplos abaixo, um versado na técnica conheceráoutros ensaios que podem ser utilizados e pode modificar um ensaio parauma aplicação particular. Por exemplo, numerosos documentos relativo àscinases descreveram ensaios que podem ser usados.
Ensaios alternativos adicionais podem empregar determinaçõesde ligação. Por exemplo, este tipo de ensaio pode ser formatado em umformato de transferência de energia por ressonância de fluorescência(FRET), ou usando um formato AlphaScreen (ensaio homogêneo deproximidade luminescente amplificado) variando os reagentes doadores eaceitantes que estão ligados à estreptavidina ou ao anticorpo fosfo-específico.
V. TÉCNICAS SINTÉTICAS ORGÂNICAS
Um amplo arranjo de técnicas sintéticas orgânicas existe natécnica para satisfazer o desafio de construir moduladores potenciais. Muitosdestes métodos sintéticos orgânicos são descritos em detalhes em fontes dereferência padrões utilizadas por aqueles versados na técnica. Um exemplode tal referência é March, 1994, Advanced Organic Chemistry: Reactions,Mechanisms and Structure, Nova Iorque, McGraw Hill. Desse modo, astécnicas úteis em sintetizar um modulador potencial da função de cinaseestão facilmente disponíveis àqueles versados na técnica de síntese químicaorgânica.
Com relação aos exemplos sintéticos descritos aqui, solventesincluem solventes polares e não-polares conhecidos àqueles de habilidadena técnica, incluindo solventes próticos polares e apróticos polares.Solventes polares incluem, sem limitação, solventes próticos como metanol,etanol, álcool isopropílico, t-butanol, n-butanol, ácido acético, ácido fórmicoou água, ou solventes apróticos como tetraidrofurano (THF), acetonitrila,dioxano, cloreto de metileno, dimetilsulfóxido (DMSO), acetona, N,N-dimetilformamida (DMF), N,N-dimetilacetamida (DMA), acetato de etila, 1,2-dimetoxietano, 1,2-dicloroetano, cloroformizam, 1,2-dicloroetano, ou piridina.Solventes polares incluem uma mistura de água com qualquer um dos acima,ou uma mistura de quaisquer dois ou mais dos acima. Solventes apolaresincluem, sem limitação, tolueno, benzeno, clorobenzeno, xilenos e hexanos.
Com relação aos exemplos sintéticos descritos aqui, agenteredutor inclui, sem limitação, um agente redutor como agentes redutorescatalíticos usando hidrogênio e catalisadores de metal de transição comopaládio, platina, ródio, etc. (por exemplo Pt/ácido acético/H2); uma misturade ácido trifluoroacético e trietilsilano, complexo de tetraidrofurano de borano,diborano, complexo de dimetilsulfeto de borano, e uma combinação deboroidreto de sódio e trifluoreto de boro; metais como ferro reduzido, pó dezinco, magnésio etc; complexo de compostos de metal hidrogênio comoboroidretos de metal alcalino (por exemplo, boroidreto de potássio,boroidreto de sódio, boroidreto de lítio, boroidreto de zinco,triacetoxiboroidreto de sódio, etc), hidreto de lítio de alumínio, etc; hidretosde metal como hidreto de sódio, etc; compostos de estanho orgânicos(hidreto de trifenilestanho, etc); e sais de metal como compostos de níquel,compostos de zinco, compostos de estanho (por exemplo cloreto deestanho(ll)), e iodeto de samário/ácido piválico/triamida hexametilfosfórica.
Com relação aos exemplos sintéticos descritos aqui, agenteoxidante inclui, sem limitação, um agente oxidante como reagente de Dess-Martin, TEMPO (2,2,6,6-tetrametilpiperidino-N-óxido), DDQ (2,3-Dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinone), PDC (dicromato de piridínio), PCC (clorocromatode piridínio), Piridina.S03, trióxido de cromo, ácido p-nitroperbenzóico,monoperoxiftalato de magnésio, periodato de sódio, periodato de potássio,peróxido de hidrogênio, peróxido de uréia, bromato de metal alcalino,hidroperóxido de cumeno, peróxido de terc-butila, perácidos como ácidoperfórmico, ácido peracético, ácido pertrifluoroacético, ácido perbenzóico,ácido m-cloroperbenzóico, ácido o-carboxiperbenzóico e outros;metaperiodato de sódio, ácido bicrômico; bicromatos como bicromato desódio, bicromato de potássio; ácido permangânico; permanganatos comopermanganato de potássio, permanganato de sódio; e sais de chumbo comotetraacetato de chumbo.
VI. FORMAS DE COMPOSTO ALTERNATIVAS OU DERIVADOS
(a) Isômeros, Pró-fármacos, e Metabólitos Ativos
Compostos contemplados aqui são descritos com referência àsfórmulas genéricas e compostos específicos. Além disso, os compostos dainvenção podem existir em várias formas ou derivados diferentes, todosdentro do escopo da presente invenção. Estes incluem, por exemplo,tautômeros, estereoisômeros, misturas racêmicas, regioisômeros, sais, pró-fármacos (por exemplo ésteres de ácido carboxílico), formas solvatadas,formas de cristal diferentes ou polimorfos, e metabólitos ativos.
(b) Tautômeros, Estereoisômeros, Regioisômeros, e Formas Solvatadas
É entendido que certos compostos podem exibir tautomerismo.Em tais casos, as fórmulas fornecidas aqui expressamente descrevemapenas uma das possíveis formas tautoméricas. Será entendido portantoque as fórmulas fornecidas aqui são intencionadas a representar qualquerforma tautomérica dos compostos descritos e não será limitadas meramenteà forma tautomérica específica descrita pelos desenhos das fórmulas.
Igualmente, alguns dos compostos de acordo com a presenteinvenção podem existir como estereoisômeros, isto é eles têm a mesmaseqüência de covalentemente átomos ligados e diferem na orientaçãoespacial dos átomos. Por exemplo, os compostos podem serestereoisômeros ópticos que contêm um ou mais centros de quiral e portanto,pode existir em duas ou mais formas estereoisoméricas (por exemploenantiômeros ou diastereômeros). Desse modo, tais compostos podem estarpresentes como estereoisômeros simples (isto é, essencialmente livres deoutros estereoisômeros), racematos, e/ou misturas de enantiômeros e/oudiastereômeros. Como outro exemplo, estereoisômeros incluem isômerosgeométricos, como eis- ou trans- orientação de substituintes em carbonosadjacentes de uma ligação dupla. Todos tais estereoisômeros simples,racematos e misturas destes são intencionados estar dentro do escopo dapresente invenção. A menos que especificado o contrário, todas tais formasesteroisoméricas são incluídas dentro das fórmulas fornecidas aqui.
Em certas modalidades, um composto de quiral da presenteinvenção está em uma forma contendo pelo menos 80 % de um isômerosimples (60 % de excesso enantiomérico ("e.e.") ou excesso diastereomérico("d.e.")), ou pelo menos 85 % (70 % e.e. ou d.e.), 90 % (80 % e.e. ou d.e.),95 % (90 % e.e. ou d.e.), 97,5 % (95 % e.e. ou d.e.), ou 99 % (98 % e.e. oud.e.). Como em geral entendido por aqueles versados na técnica, umcomposto opticamente puro que tem um centro de quiral é um que consisteessencialmente de um dos dois possíveis enantiômeros (isto é, éenantiomericamente puro), e um composto opticamente puro que tem maisque um centro de quiral é um que é tanto diastereomericamente puro comoenantiomericamente puro. Em certas modalidades, o composto estápresente na forma opticamente pura.
Para os compostos em que a síntese envolve adição de umgrupo simples a uma ligação dupla, particularmente uma ligação dupla decarbono-carbono, a adição pode ocorrer em qualquer um dos átomos ligadospor ligação dupla. Para tais compostos, a presente invenção inclui ambostais regioisômeros.
Adicionalmente, é intencionado que as fórmulas abranjamformas soltadas como também não-solvatadas das estruturas identificadas.Por exemplo, as estruturas indicadas incluem formas hidratadas e não-hidratadas. Outros exemplos de solvatos incluem as estruturas emcombinação com isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etila, ácidoacético, ou etanolamina.
(c) Pró-fármacos e Metabólitos
Além das fórmulas e compostos presentes descritos aqui, ainvenção também inclui pró-fármacos (em geral pró-fármacosfarmaceuticamente aceitáveis), derivados metabólicos ativos (metabólitosativos), e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Pró-fármacos são compostos ou sais farmaceuticamenteaceitáveis destes que, quando metabolizados sob condições fisiológicas ouquando convertidos através de solvólise, rendem o composto ativo desejado.Tipicamente, o pró-fármaco é inativo, ou menos ativo que o composto ativo,mas pode fornecer propriedades de manipulação, administração, oumetabólicas vantajosa. Por exemplo, alguns pró-fármacos são ésteres docomposto ativo; durante a metabólise, o grupo éster é clivado para render ofármaco ativo. Também, alguns pró-fármacos são ativados enzimaticamentepara render o composto ativo, ou um composto que, em outra reaçãoquímica, rende o composto ativo.
Como descrito em The Practical of Medicinal Chemistry, Cap.31-32 (Ed. Wermuth, Academic Press, San Diego, CA, 2001), pró-fármacospodem ser divididos conceptualmente em duas categorias não-exclusivas,pró-fármacos bioprecursores e pró-fármacos veiculares. Em geral, pró-fármacos bioprecursores são compostos que são inativos ou têm baixaatividade comparados ao composto de fármaco ativo correspondentecontendo um ou mais grupos protetores e são convertidos em uma formaativa por metabolismo ou solvolise. A forma de fármaco ativo e qualquerproduto metabólico liberado deveriam ter baixa aceitavelmente toxicidade.Tipicamente, a formação do composto de fármaco ativo envolve umprocesso metabólico ou reação que é uma dos tipos a seguir:
REAÇÕES OXIDATIVAS:
Reações oxidativas são exemplificadas sem limitação àsreações como oxidação de álcool, carbonila, e funções de ácido,hidroxilação de carbonos alifáticos, hidroxilação de átomos de carbonoalicíclico, oxidação de átomos de carbono aromático, oxidação de ligaçõesduplas de carbono-carbono, oxidação de grupos funcionais contendonitrogênio, oxidação de silício, fósforo, arsênico, e enxofre, desalquilação N-oxidativa, desalquilação O- e S-oxidativa, desaminação oxidativa, comotambém outras reações oxidativas.
REAÇÕES REDUTORAS:
Reações redutora são exemplificadas sem limitação às reaçõescomo redução de grupos carbonila, redução de grupos hidroxila e ligaçõesduplas de carbono-carbono, redução de grupos de funções contendonitrogênio, e outras reações de redução.REAÇÕES SEM ALTERAÇÃO NO ESTADO DE OXIDACÃO:
Reações sem alteração no estado de oxidação sãoexemplificadas sem limitação às reações como hidrólise de ésteres e éteres,clivagem hidrolítica de ligações de carbono-nitrogênio simples, clivagemhidrolítica de heterociclos não-aromáticos, hidratação e desidratação emligações múltiplas, ligações atômicas novas que são o resultado das reaçõesde desidratação, desalogenação hidrolítica, remoção de molécula de haletode hidrogênio, e outras tais reações.
Pró-fármacos veiculares são compostos de fármaco que contêmuma metade de transporte, por exemplo, que melhora a absorção e/ouliberação localizada em um sítio(s) de ação. Desejavelmente para um talpró-fármaco veicular, a ligação entre a metade de fármaco e a metade detransporte é uma ligação covalente, o pró-fármaco é inativo ou menos ativoque o composto de fármaco, o pró-fármaco e qualquer metade de transportede liberação é aceitavelmente não-tóxico. Para pró-fármacos onde forintencionado que a metade de transporte intensifique a absorção,tipicamente a liberação da metade de transporte deveria ser rápida. Emoutros casos, é desejável utilizar uma metade que forneça liberação lenta,por exemplo, certos polímeros ou outras metades, como ciclodextrinas. (Vide,por exemplo, Cheng et al, Publ. de Patente U. S. No. 2004/0077595, No.10/656.838, incorporada aqui por referência.) Tais pró-medicamedicamentosveiculares são freqüentemente vantajosos para fármacos oralmenteadministrados. Pró-medicamedicamentos veiculares podem, por exemplo,ser usados para melhorar uma ou mais das propriedades a seguir:lipofilicidade aumentada, duração aumentada de efeitos farmacológicos,especificidade de sítio aumentada, toxicidade e reações adversasdiminuídas, e/ou melhoria na formulação do fármaco (por exemploestabilidade, solubilidade em água, supressão de uma propriedadeorganoléptica ou físico-química indesejável). Por exemplo, lipofilicidade podeser aumentada para esterificação de grupos hidroxila com ácidoscarboxílicos lipofílicos, ou de grupos ácido carboxílico com alcoóis, porexemplo, alcoóis alifáticos. Wermuth, The Practice of Medicinal Chemistry,Cap. 31 - 32, Ed. Wermuth, Academic Press, San Diego, CA, 2001.
Pró-fármacos podem proceder de forma de pró-fármaco paraforma ativa em uma etapa simples ou podem ter uma ou mais formasintermediárias que se podem ter atividade ou podem ser inativas.
Metabólitos, por exemplo, metabólitos ativos, sobrepõem compró-fármacos como descrito acima, por exemplo, pró-fármacosbioprecursores. Desse modo, tais metabólitos são compostosfarmacologicamente ativos ou compostos que também metabolizam oscompostos farmacologicamente ativos que são derivados que resultam deprocesso metabólico no corpo de um indivíduo ou paciente. Destes,metabólitos ativos são tais compostos derivados farmacologicamente ativos.Para pró-fármacos, os compostos de pró-fármaco são em geral inativos oude atividade inferior que o produto metabólico. Para metabólitos ativos, ocomposto de origem pode ser um composto ativo ou pode ser um pró-fármaco inativo.
Pró-fármacos e metabólitos ativos podem ser identificadosusando técnicas rotineiras conhecidas na técnica. Vide, por exemplo,Bertolini et al, 1997, J. Med. Chem, 40:2011-2016; Shan et-ai, 1997, J.Pharm Sd 86(7):756-757; Bagshawe, 1995, Drug Dev. Res, 34:220-230;Wermuth, The Pratice of Medicinal Chemistry, Cap. 31-32, Academic Press,San Diego, CA, 2001.
(d) SAIS FARMACEUTICAMENTE ACEITÁVEIS
Compostos podem ser formulados como se encontram oupodem ser na forma de sais farmaceuticamente aceitáveis. Saisfarmaceuticamente aceitáveis são sais não-tóxicos nas quantidades econcentrações nas quais eles são administrados. A preparação de tais saispode facilitar o uso farmacológico alterando as características físicas de umcomposto sem impedí-lo de exercer seu efeito fisiológico. Alterações úteisnas propriedades físicas incluem redução do ponto de fundição para facilitaradministração transmucosal e aumentar a solubilidade para facilitaradministrar concentrações mais altas do fármaco.
Sais farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de adição deácido como aqueles contendo sulfato, cloreto, cloridrato, fumarato, maleato,fosfato, sulfamato, acetato, citrato, lactato, tartarato, metanossulfonato,etanossulfonato, benzenossulfonato, p-toluenossulfonato, cicloexilsulfamatoe quinato. Sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser obtidos de ácidoscomo ácido clorídrico, ácido maléico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácidosulfâmico, ácido acético, ácido cítrico, ácido láctico, ácido tartárico, ácidomalônico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácidobenzenossulfônico, ácido p-toluenossulfônico, ácido cicloexilsulfâmico, ácidofumárico, e ácido quínico.
Sais farmaceuticamente aceitáveis também incluem sais deadição básicos como aqueles contendo benzatina, cloroprocaína, colina,dietanolamina, etilenodiamina, meglumina, procaína, alumínio, cálcio, lítio,magnésio, potássio, sódio, amônio, alquilamina, e zinco, quando gruposfuncionais acídicos, como ácido carboxílico ou fenol estiverem presentes.
Por exemplo, vide Remington's Pharmaceutical Sciences, 19- ed, MackPublishing Co, Easton, PA, Vol. 2, pág., 1457, 1995. Tais sais podem serpreparados usando as bases correspondentes apropriadas.
Sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparadosatravés de técnicas padrões. Por exemplo, a forma de base livre de umcomposto pode ser dissolvida em um solvente adequado, como uma soluçãoaquosa ou aquosa-álcool contendo o ácido apropriado e depois isoladaevaporando a solução. Em outro exemplo, um sal pode ser preparadoreagindo a base livre e o ácido em um solvente orgânico.
Desse modo, por exemplo, se o composto particular for umabase, o sal farmaceuticamente aceitável desejado pode ser preparado porqualquer método adequado disponível na técnica, por exemplo, tratamentoda base livre com um ácido inorgânico, como ácido clorídrico, ácidohidrobrômico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, e outros, ou comum ácido orgânico, como ácido acético, ácido maléico, ácido succínico,ácido mandélico, ácido fumárico, ácido malônico, ácido pirúvico, ácidooxálico, ácido glicólico, ácido salicílico, um ácido piranosidila, como ácidoglucurônico ou ácido galacturonico, um alfa-hidroxi ácido, como ácido cítricoou ácido tartárico, um aminoácido, como ácido aspártico ou ácido glutâmico,um ácido aromático, como ácido benzóico ou ácido cinâmico, um ácidosulfônico, como ácido p-toluenossulfônico ou ácido etanossulfônico, ououtros.
Similarmente, se o composto particular for um ácido, o salfarmaceuticamente aceitável desejado pode ser preparado por qualquermétodo adequado, por exemplo, tratamento do ácido livre com uma baseinorgânica ou orgânica, como uma amina (primária, secundária ou terciária),um hidróxido de metal alcalino ou hidróxido de metal alcalino terroso, ououtros. Exemplos ilustrativos de sais adequados incluem sais orgânicosderivados de aminoácidos, como glicina e arginina, amônia, aminasprimárias, secundárias, e terciárias, e aminas cíclicas, como piperidino,morfolino e piperazina, e sais inorgânicos derivados de sódio, cálcio,potássio, magnésio, manganês, ferro, cobre, zinco, alumínio e lítio.
O sal farmaceuticamente aceitável dos compostos diferentespode estar presente como um complexo. Exemplos de complexos incluemcomplexo 8-cloroteofilina (análogo, por exemplo, ao complexo dedimenidrinato: 8-cloroteofilina de difenidramina (1:1); Dramamina) e várioscomplexos de inclusão de ciclodextrina.
A menos que do contrário especificado, especificação de umcomposto aqui inclui sais farmaceuticamente aceitáveis de tal composto.
(e) FORMAS POLIMÓRFICAS
No caso de agentes que são sólidos, é entendido por aquelesversados na técnica que os compostos e sais podem existir em formas decristal diferentes ou polimórficas todas estas são intencionadas estar dentrodo escopo da presente invenção e fórmulas especificadas.
VII. ADMINISTRAÇÃO
Os métodos e compostos tipicamente serão usados em terapiapara pacientes humanos. Porém, eles podem também ser usados para tratardoenças similares ou idênticas em outros vertebrados, por exemplo,mamíferos como outros primatas, animais de significação comercial, porexemplo, animais de jogo esportivos, animais de fazenda, por exemplo,bovino, eqüinos, porcinos, e ovinos, e animais de estimação como cães egatos.
Formas de dosagem adequadas, em parte, dependem do uso ouda rota de administração, por exemplo, oral, transdérmica, transmucosal,inalante, ou através de injeção (parenteral). Tais formas de dosagemdeveriam permitir o composto alcançar células-alvos. Outros fatores sãobem conhecidos na técnica, e incluem considerações como toxicidade eformas de dosagem que retardam o composto ou composição de exercerseus efeitos. Técnicas e formulações em geral podem ser encontradas emRemington: The Science and Practice of Pharmacy, 21à edição, Lippincott,Williams e Wilquins, Filadélfia, PA, 2005 (por este meio incorporada porreferência aqui).
Compostos da presente invenção (isto é Fórmula I, incluindoFórmulas Ia, Ib, Ig e todas as submodalidades descritas aqui) podem serformulados como sais farmaceuticamente aceitáveis.
Veículos ou excipientes podem ser usados para produzircomposições. Os veículos ou excipientes podem ser selecionados parafacilitar administração do composto. Exemplos de veículos incluemcarbonato de cálcio, fosfato de cálcio, vários açúcares como lactose, glicose,ou sacarose, ou tipos de amido, derivados de celulose, gelatina, óleosvegetais, polietileno glicóis e solventes fisiologicamente compatíveis.Exemplos de solventes fisiologicamente compatíveis incluem soluçõesestéreis de água para injeção (WFI), solução salina, e dextrose.
Os compostos podem ser administrados através de rotasdiferentes incluindo intravenosa, intraperitoneal, subcutânea, intramuscular,oral, transmucosal, retal, transdérmica, ou inalante. Em algumasmodalidades, administração oral é preferida. Para administração oral, porexemplo, os compostos podem ser formulados em formas de dosagem oralconvencionais como cápsulas, comprimidos, e preparações líquidas comoxaropes, elixires, e gotas concentradas.
Preparações farmacêuticas podem ser obtidas para uso oral, porexemplo, combinando os compostos ativos com excipientes sólidos,opcionalmente moendo uma mistura resultante, e processando a mistura degrânulos, após adicionar auxiliares adequados, se desejado, para obtercomprimidos ou núcleos de drágea. Excipientes adequados são, emparticular, enchedores como açúcares, incluindo lactose, sacarose, manitol,ou sorbitol; preparações de celulose, por exemplo, amido de milho, amido detrigo, amido de arroz, amido de batata, gelatina, goma tragacanto, metilcelulose, hidroxipropilmetil-celulose, carboximetilcelulose de sódio (CMC),e/ou polivinilpirrolidona (PVP: povidona). Se desejado, agentesdesintegrantes podem ser adicionados, como o polivinilpirrolidona reticulada,ágar, ou ácido algínico, ou um sal deste como alginato de sódio.
Núcleos de drágea são fornecidos com revestimentosadequados. Para este propósito, soluções de açúcar concentradas podemser usadas que podem opcionalmente conter, por exemplo, goma arábica,talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietileno glicol (PEG), e/oudióxido de titânio, soluções de laca, e solventes orgânicos adequados oumisturas de solventes. Tinturas ou pigmentos podem ser adicionados aoscomprimidos ou revestimentos das drágeas para identificação oucaracterizar combinações diferentes de doses de composto ativo.
Preparações farmacêuticas que podem ser usadas oralmenteincluem cápsulas de encaixe sob pressão feitas de gelatina ("cápsulas degel"), como também cápsulas macias, vedadas feitas de gelatina, e umplasticizante, como glicerol ou sorbitol. As cápsulas de encaixe sob pressãopodem conter os ingredientes ativos em admistão com enchedor comolactose, aglutinantes como amidos, e/ou lubrificantes como talco ouestearato de magnésio e, opcionalmente, estabilizantes. Em cápsulasmacias, os compostos ativos podem ser dissolvidos ou suspendidos emlíquidos adequados, como óleos graxos, óleo de parafina, ou polietilenosglicóis líquidos (PEGs). Além disso, estabilizantes podem ser adicionados.
Alternativamente, injeção (administração parenteral) pode serusada, por exemplo, intramuscular, intravenosa, intraperitoneal, e/ousubcutânea. Para injeção, os compostos da invenção são formulados emsoluções líquidas estéreis, preferivelmente em tampões ou soluçõesfisiologicamente compatíveis, como solução salina, solução de Hank, ousolução de Ringer. Além disso, os compostos podem ser formulados emforma sólida e redissolvidos ou podem ser suspensos imediatamente antesdo uso. Formas liofilizadas podem também ser produzidas.
Administração pode também ser através de meiostransmucosais, tópicos, transdérmicos, ou inalantes. Para administraçãotransmucosal, tópica ou transdérmica, penetrantes apropriados para abarreira ser penetrada são usados na formulação. Tais penetrantes são emgeral conhecidos na técnica, e incluem, por exemplo, para administraçãotransmucosal, sais biliares e derivados de ácido fusídico. Além disso,detergentes podem ser usados para facilitar a permeação. Administraçãotransmucosal, por exemplo, pode ser através de pulverizações nasais ousupositórios (retal ou vaginal).
As composições tópicas desta invenção é formuladapreferivelmente como óleos, cremes, loções, ungüentos, e outros paraescolha de veículos apropriados conhecidos na técnica. Veículos adequadosincluem óleos vegetais ou minerais, petrolato branco (parafina macia branca),gorduras ou óleos de cadeia ramificada, gorduras animais e álcool de pesomolecular alto (maior que C12). Os veículos preferidos são aqueles em queo ingrediente ativo é solúvel. Emulsificantes, estabilizantes, umectantes eantioxidantes podem também ser incluídos como outros agentes que dão corou fragrância, se desejado. Cremes para aplicação tópica sãopreferivelmente formulados de uma mistura de óleo mineral, cera de abelhaauto-emulsificante e água nos quais a mistura do ingrediente ativo,dissolvido em um solvente de quantidade pequena (por exemplo um óleo), émisturada. Adicionalmente, administração através de meios transdérmicospode compreender um emplasto transdérmico ou revestimento como umabandagem impregnada com um ingrediente ativo e opcionalmente um oumais veículos ou diluentes conhecidos na técnica. Para ser administrada naforma de um sistema de liberação transdérmica, a administração dedosagem, claro, será contínua ao invés de intermitente ao longo do regimede dosagem.Para inalantes, os compostos da invenção podem serformulados como pó seco ou uma solução adequada, suspensão, ouaerossol. Pós e soluções podem ser formulados com aditivos adequadosconhecidos na técnica. Por exemplo, pós podem incluir uma base de póadequada como lacatose ou amido, e soluções podem compreenderpropileno glicol, água estéril, etanol, cloreto de sódio e outros aditivos, comoácido, sais alcalinos e tampão. Tais soluções ou suspensões podem seradministradas inalando por meio de pulverização, bomba, atomizador, ounebulizador, e outros. Os compostos da invenção podem também serusados em combinação com outras terapias inaladas, por exemplocorticosteróides como proprionato de fluticasona, dipropionato debeclometasona, acetonida de triancinolona, budesonida, e furoato demometasona; agonistas betas como albuterol, salmeterol, e formoterol;agentes anticolinérgicos como brometo de ipratrópio ou tiotrópio;vasodilatadores como treprostinal e iloprost; enzimas como DNAase;proteínas terapêuticas; anticorpos de imunoglobulina; umoligonucleotídeo,como DNA ou RNA uni ou bifilamentar, siRNA; antibióticos como tobramicina;antagonistas de receptor muscarínico; antagonistas de leucotrieno;antagonistas de citocina; inibidores de protease; sódio de cromolina; sódiode nedocril; e cromoglicato de sódio.
Os compostos da invenção podem também ser usados emcombinação com outras terapias para tratar a mesma doença. Tal uso decombinação inclui administração dos compostos e uma ou mais outrasterapêuticas em tempos diferentes, ou co-administração do composto e umaou mais outras terapias. Em certas modalidades, dosagem pode sermodificada para um ou mais dos compostos da invenção ou outrasterapêuticas usadas em combinação, por exemplo, redução na quantidadedosada com relação a um composto ou terapia usada sozinha, por métodosbem conhecidos àqueles de habilidade usual na técnica.
É entendido que uso em combinação inclui uso com outrasterapias, fármacos, procedimentos médicos etc, onde a outra terapia ouprocedimento pode ser administrado em tempos diferentes (por exemplodentro de pouco tempo, como dentro de horas (por exemplo 1, 2, 3, 4-24horas), ou dentro de um tempo mais longo (por exemplo 1-2 dias, 2-4 dias,4-7 dias, 1-4 semanas)) que um composto da presente invenção, ou aomesmo tempo que um composto da invenção. Uso em combinação tambéminclui uso com uma terapia ou procedimento médico que é administrada umavez ou infreqüentemente, como cirurgia, junto com um composto dainvenção administrado dentro de pouco tempo ou tempo mais longo antes ouapós a outra terapia ou procedimento. Em certas modalidades, a presenteinvenção prove liberação dos compostos da invenção e um ou mais outrasterapêuticas de fármaco liberadas por uma rota diferente de administraçãoou pela mesma rota de administração. O uso em combinação para qualquerrota de administração inclui liberação dos compostos da invenção e uma oumais outras terapêuticas de fármaco liberadas juntos pela mesma rota deadministração em qualquer formulação, incluindo formulações onde os doiscompostos estão ligados quimicamente em um tal modo que eles mantêmsua atividade terapêutica quando administrados. Em um aspecto, a outraterapia de fármaco pode ser co-administrada com um ou mais compostos dainvenção. Uso em combinação através de co-administração incluiadministração de co-formulações ou formulações de compostosquimicamente unido, ou administração de dois ou mais compostos emformulações separadas dentro de pouco tempo um do outro (por exemplodentro de uma hora, 2 horas, 3 horas, até 24 horas), administrados pelasmesmas rotas ou diferentes. Co-administração de formulações separadasinclui co-administração através de liberação por meio de um dispositivo, porexemplo o mesmo dispositivo inalante, a mesma seringa, etc, ouadministração de dispositivos separados dentro de pouco tempo um do outro.Co-formulações de compostos da invenção e ums ou mais terapias defármaco adicionais liberadas pela mesma rota incluem preparação dosmateriais junto de modo que eles possam ser administrados através de umdispositivo, incluindo os compostos separados combinados em umaformulação, ou compostos que são modificados de modo que eles estejamquimicamente unidos, ainda mesmo mantêm sua atividade biológica. Taiscompostos quimicamente unidos podem ter uma ligação que ésubstancialmente mantida in vivo, ou a ligação pode romper-se in vivo,separando os dois componentes ativos.
As quantidades de vários composto a ser administrados comouma quantidade eficaz podem ser determinadas por procedimentos padrõesque levam em conta fatores como o IC50 do composto, a meia-vida biológicado composto, a idade, tamanho, e peso do indivíduo, e o distúrbio associadoao indivíduo. A importância destes e outros fatores são bem conhecidosàqueles de habilidade usual na técnica. Em geral, uma dose será entre cercade 0,01 e 50 mg/kg, preferivelmente 0,1 e 20 mg/kg do sujeito sendo tratado.Doses múltiplas podem ser usadas.
III. MANIPULAÇÃO DE c-kit E c-fms
Visto que a seqüência de codificação de comprimento total e aseqüência de aminoacido de c-kit e c-fms de vários mamíferos incluindo ohomem são conhecidas, clonagem, construção de c-kit e c-fmsrecombinantes, produção e purificação de proteína recombinante, introduçãode c-kit ou c-fms em outros organismos, e outras manipulações biológicasmoleculares de c-kit e c-fms são executadas facilmente.
Técnicas para a manipulação de ácidos nucléicos, como, porexemplo, subclonagem, sondas de marcação (por exemplo marcação deiniciador aleatório usando polimerase de Klenow, translação de corte,amplificação), seqüenciação, hibridação e outras são bem descritos naliteratura científica e de patente, vide, por exemplo, Sambrook, ed., Molecu-lar Cloning: a Laboratory Manual (2- ed.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor La-boratory, (1989); Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel, ed. JohnWiley & Sons, Inc., Nova Iorque (1997); Laboratory Techniques in Biochem-istry and Molecular Biology: Hybridization With Nucleic Acid Probes, Part I.Theory and Nucleic Acid Preparation, Tijssen, ed. Elsevier, N.Y. (1993).
Seqüências de ácido nucléico podem ser amplificadas quandonecessário para outro uso usando métodos de amplificação, como PCR,métodos isotérmicos, métodos de círculos rolantes, etc, são bemconhecidos ao versado. Vide, por exemplo, Saiki, "Amplification of GenomicDNA" em PCR Protocols, Innis et al., Eds., Academic Press, San Diego, CA1990, págs 13-20; Wharam et al., Nucleic Acids Res. 2001 jun 1;29(11):E54-E54; Hafher et al., Biotechniques 2001 abr;30(4):852-6, 858, 860 passim;Zhong et al., Biotechniques 2001 abr;30(4):852-6, 858, 860 passim.
Ácidos nucléicos, vetores, capsídeos, polipeptídeos, e outrospodem ser analisados e quantificados por quaisquer de vários meios geraisbem conhecidos àqueles de habilidade na técnica. Estes incluem, porexemplo, métodos bioquímicos analíticos como espectrofotometria de NMR5,radiografia, eletroforese, eletroforese capilar, cromatografia líquida de altodesempenho (HPLC), cromatografia de camada fina (TLC), e cromatografiade hiperdifusão, vários métodos imunológicos, por exemplo reações de fluidoou de precipitina em gel, imunodifusão, imuno-eletroforese,radioimunoensaios (RIAs), ensaios imunoabsorventes ligados a enzima(ELISAs), ensaios imuno-fluorescentes, análise de Southern, análise deNorthern, análise de mancha, eletroforese em gel (por exemplo SDS-PAGE),métodos de ácido nucléico ou alvo ou de amplificação de sinal,radiomarcação, contagem de cintilação e cromatografia de afinidade.
Obter e manipular ácidos nucléicos usados para praticar osmétodos da invenção podem ser executados clonando as amostrasgenômicas, e, se desejado, triando e re-clonando as inserções isoladas ouamplificadas, por exemplo, de clones genômicos ou clones de cDNA. Fontesde ácido nucléicos usadas nos métodos da invenção incluem bibliotecasgenômicas ou de cDNA contidas, por exemplo, em cromossomos artificiaismamíferos (MACs), vide, por exemplo, Patentes U. S. Nos. 5.721.118;6.025.155; cromossomos artificiais humanos, vide, por exemplo, Rosenfeld(1997) Nat. Genet. 15:333-335; cromossomos artificiais de levedura (YAC);cromossomos artificiais bacterianos (BAC); cromossomos artificiais de P1,vide, por exemplo, Woon (1998) Genomics 50:306-316; vetores derivados deP1 (PACs), vide, por exemplo, Kern (1997) Biotechniques 23:120-124;cosmídeos, vírus recombinantes, fagos ou plasmídeos.
Os ácidos nucléicos da invenção podem ser operativamenteligados a um promotor. Um promotor pode ser um motivo ou um arranjo deseqüências de controle de ácido nucléico que transcrição direta de um ácidonucléico. Um promotor pode incluir seqüências de ácido nucléiconecessárias próximas do sítio de começo da transcrição, como, no caso deum promotor de polimerase do tipo II, um elemento de TATA. Um promotortambém opcionalmente inclui intensificador distai ou elementos repressoresque podem ser localizados até vários mil pares de base desde sítio decomeço de transcrição. Um promotor "constitutivo" é um promotor que éativo sob condições mais ambientais e desenvolventes. Um promotor"induzível" é um promotor que está sob regulação ambiental oudesenvolvente. Um promotor "tecido específico" é ativo em certos tipos detecido de um organismo, mas não em outros tipos de tecido do mesmoorganismo. O termo "operavelmente ligado" refere-se a uma ligaçãofuncional entre uma seqüência de controle de expressão de ácido nucléico(como um promotor, ou arranjo de sítios de ligação de fator de transcrição) euma segunda seqüência de ácido nucléico, em que a seqüência de controlede expressão direciona transcrição do ácido nucléico que corresponde àsegunda seqüência.
Os ácidos nucléicos da invenção podem também ser fornecidosem vetores de expressão e veículos de clonagem, por exemplo, seqüênciasque codificam os polipeptídeos da invenção. Vetores de expressão eveículos de clonagem da invenção podem compreender partículas virais,baculovírus, fago, plasmídeos, fagemídeos, cosmídeos, fosmídeos,cromossomos artificiais bacterianos, DNA viral (por exemplo vacínia,adenovírus, vírus de varíola, pseudo-raivas e derivados de SV40),cromossomos artificiais com base em P1, plasmídeos de levedura,cromossomos artificiais de levedura, e qualquer outro vetor específico parahospedeiros específicos de interesse (como bacilo, Aspergillus e levedura).Vetores da invenção podem incluir seqüências de DNA cromossomicas, não-cromossômicas e sintéticas. Números grandes de vetores adequados sãoconhecidos àqueles de habilidade na técnica, e estão comercialmentedisponíveis.
Os ácidos nucléicos da invenção podem ser clonados, sedesejado, em qualquer de uma variedade de vetores usando métodosbiológicos moleculares de rotina; métodos para clonar ácidos nucléicosamplificados in vitro são descritos, por exemplo, Pat. U. S. No. 5.426.039.Para facilitar clonagem das seqüências amplificadas, sítios de enzima derestrição podem ser "construídos" em um par de iniciadores de PCR.Vetores podem ser introduzidos em um genoma ou no citoplasma ou umnúcleo de uma célula e expresso por uma variedade de técnicasconvencionais, bem descritas na literatura científica e de patente. Vide, porexemplo, Roberts (1987) Nature 328:731; Schneider (1995) Protein Expr.Purif. 6435:10; Sambrook, Tijssen ou Aursubel. Os vetores podem serisolados de fontes naturais, obtidas de tais fontes como bibliotecas de ATCCou de GenBank, ou podem ser preparados através de métodos sintéticos ourecombinantes. Por exemplo, os ácidos nucléicos da invenção podem serexpressados em cassetes de expressão, vetores ou vírus que são estável outransientemente expressos em células (por exemplo sistemas de expressãoepissomal). Rótulos de seleção podem ser incorporados em cassetes deexpressão e vetores para conferir um fenótipo selecionável em célulastransformadas e seqüências. Por exemplo, rótulos de seleção podemcodificar para manutenção epissomal e replicação de modo que integraçãono genoma hospedeiro não é requerido.
Em um aspecto, os ácidos nucléicos da invenção sãoadministrados in vivo para expressão in situ dos peptídeos ou polipeptídeosda invenção. Os ácidos nucléicos podem ser administrados como "DNA nu"(vide, por exemplo, Patente U. S. No. 5.580.859) ou na forma de um vetor deexpressão, por exemplo, um vírus recombinante. Os ácidos nucléicos podemser administrados por qualquer rota, incluindo peri- ou intra-tumoralmente,como descrita abaixo, vetores administrados in vivo podem ser derivados degenomas virais, incluindo DNA envelopado ou não-envelopado recombinantemodificado e vírus de RNA, preferivelmente selecionados de baculoviridiae,parvoviridiae, picornoviridiae, herpesveridiae, poxviridae, adenoviridiae, oupicornnaviridiae. Vetores quiméricos podem também ser empregados queexploram méritos vantajosos cada uma das propriedades de vetor de origem(Vide por exemplo, Feng (1997) Nature Biotechnology 15:866-870). Taisgenomas virais podem ser modificados através de técnicas de DNArecombinantes para incluir os ácidos nucléicos da invenção; e podem sertambém criados para ser deficientes de replicação, condicionalmentereplicando ou replicação competente. Em aspectos alternativos, vetores sãoderivados dos genomas adenovirais (por exemplo vetores incompetentes dereplicação derivados do genoma de adenovírus humano, vide, por exemplo,Patentes U. S. Nos. 6.096.718; 6.110.458; 6.113.913; 5.631.236); adeno-associados virais e retrovirais. Vetores retrovirais podem incluir aqueles combase em vírus de leucemia murina (MuLV), vírus de leucemia de macacogibbon (GaLV), vírus da imunodeficiência de Símio (SIV), vírus daimunodeficiência humana (HIV), e combinações destes; vide, por exemplo,Patentes U. S. Nos. 6.117.681; 6.107.478; 5.658.775; 5.449.614; Buchscher(1992) J. Virol. 66:2731-2739; Johann (1992) J. Virol. 66:1635- 1640).
Vetores com base em Vírus Adeno-associado (AAV) podem ser usados paratransduzir células com ácidos nucléicos alvos, por exemplo, na produção deácidos nucléicos e peptídeos in vitro, e em procedimentos de terapia degene in vivo e ex vivo; vide, por exemplo, Patentes U. S. Nos. 6.110.456;5.474.935; Okada (1996) Gene Ther. 3:957-964.
A presente invenção também refere-se às proteínas de fusão, eácidos nucléicos que as codificam. Um polipeptídeo da invenção pode serfundido em um peptídeo ou polipeptídeo heterólogo, como peptídeos deidentificação N-terminais que dão características desejadas, comoestabilidade aumentada ou purificação simplificada. Peptídeos epolipeptídeos da invenção podem também ser sintetizados e expressoscomo proteínas de fusão com um ou mais domínios adicionais ligados a estepara, por exemplo, produzir um peptídeo mais imunogenico, isolar maisfacilmente um peptídeo recombinantemente sintetizado, identificar e isolaranticorpos e células B de expressão de anticorpo, e outros. Domínios defacilidade de detecção e purificação incluem, por exemplo, peptídeosquelantes de metal como tratos de polihistidina e módulos de histidino-triptofano que permitem purificação em metais imobilizados, domínios deproteína A que permitem purificação em imunoglobulina imobilizada, e odomínio utilizado no sistema de extensão de FLAGS/purificação de afinidade(Immunex Corp., Seattle WA). A inclusão de umas seqüências ligadorascliváveis como Fator Xa ou enterocinase (Invitrogen, San Diego CA) entreum domínio de purificação e o peptídeo ou polipeptídeo compreendendo omotivo facilita a purificação. Por exemplo, um vetor de expressão podeincluir uma seqüência de ácido nucléico de codificação de epítopo ligada aseis resíduos de histidina seguidos por um sítio de clivagem de tioredoxina eum de enterocinase (vide por exemplo, Williams (1995) Biochemistry34:1787-1797; Dobeli (1998) Protein Expr. Purif. 12:404- 414). Os resíduosde histidina facilitam a detecção e purificação enquanto o sítio de clivagemde enterocinase prove um meio para purificar o epítopo do restante daproteína de fusão. Um ácido nucléico que codifica um polipeptídeo dainvenção é montado em fase apropriada com uma seqüência líder capaz dedirecionar secreção do polipeptídeo transladado ou fragmento em umaspecto deste. Tecnologia pertinente aos vetores que codificam proteínas defusão e aplicação de proteínas de fusão é bem descrita na literaturacientífica e de patente, vide por exemplo, Kroll (1993) DNA Cell. Biol. 12:441-53.
Os ácidos nucléicos e polipeptídeos da invenção podem serligados a um suporte sólido, por exemplo, para uso nos métodos de triageme diagnósticos. Suportes sólidos podem incluir, por exemplo, membranas(por exemplo nitrocelulose ou náilon), um prato de microtitulação (porexemplo PVC, polipropileno, ou poliestireno), um tubo de teste (vidro ouplástico), um bastão de imersão (por exemplo vidro, PVC, polipropileno,poliestireno, látex e outros), um tubo de microfuga, ou um vidro, sílica,plástico, metálico ou conta de polímero ou outro substrato como papel. Umsuporte sólido usa uma coluna compreendendo metal (por exemplo cobaltoou níquel) que liga com especificidade a um rótulo de histidina criado sobreum peptídeo.
Adesão das moléculas a um suporte sólido pode ser direta (istoé, a molécula contata o suporte sólido) ou indireta (um "ligador" é ligado aosuporte e a molécula de interesse liga este ligador). Moléculas podem serimobilizadas ou covalentemente (por exemplo grupos tiol reativo simplesutilizando de resíduos de cisteína (vide, por exemplo, Colliuod (1993)Bioconjugate Chem. 4:528-536) ou não-covalentemente mas de modoespecífico (por exemplo por meio de anticorpos imobilizados (vide, porexemplo, Schuhmann (1991) Adv. Mater. 3:388-391; Lu (1995) Anal. Chem.67:83-87; o sistema de biotina/estrepavidina (vide, por exemplo, Iwane (1997)Biophys. Biochem. Res. Comm. 230:76-80); quelante de metal, por exemplo,filmes de Langmuir-Blodgett (vide, por exemplo, Ng (1995) Langmuir11:4048-55); monocamadas auto-montadas quelantes de metal (vide, porexemplo, Sigal (1996) Anal. Chem. 68:490-497) para ligação de fusões depolihistidina.
Ligação indireta pode ser alcançada usando uma variedade deligadores que estão comercialmente disponíveis. As terminações reativaspodem ser qualquer de uma variedade de funcionalidades incluindo, masnão limitadas a: terminações de reação de amino que reagem como ésteresativos de N-hidroxissuccinimida (NHS), imidoésteres, aldeídos, epóxidos,haletos de sulfonila, isocianato, isotiocianato, e haletos de nitroarila; eterminações de reação de tiol como dissulfetos de piridila, maleimidas,tioftalimidas, e halógenos ativos. Os reagentes de reticulaçãoheterobifuncionais têm duas terminações reativas diferentes, por exemplo,uma terminação amino-reativa e uma terminação tiol-reativa, enquanto osreagentes homobifuncionais têm duas terminaçãos reativas similares, porexemplo, bismaleimidoexano (BMH) que permite a reticulação doscompostos contendo sulfidrila. O espaçador pode ser de comprimentovariado e pode ser alifático ou aromático. Exemplos de reagentes dereticulação homobifuncionais comercialmente disponíveis incluem, mas nãosão limitados a, os imidoésteres como diidrocloreto de adipimidato dedimetila (DMA); diidrocloreto de pimelimidato de dimetila (DMP); ediidrocloreto de suberimidato de dimetila (DMS). Reagentesheterobifuncionais incluem agentes de acoplamento de halogênio ativo-ésteres ativos de NHS comercialmente disponíveis como bromoacetato deN-succinimidila e (4-iodoacetil)aminobenzoato de N-succinimidila (SIAB) e osderivados de sulfossuccinimidila como sulfossuccinimidil(4-iodoacetil)aminobenzoato (sulfo-SIAB) (Pierce). Outro grupo de agentes deacoplamento são os agentes heterobifuncionais e cliváveis de tiol como 3-(2-pirididitio)propionato de N-succinimidila (SPDP) (Pierce Chemicals, Rockford,IL).
Anticorpos podem também ser usados para ligar polipeptídeos epeptídeos da invenção a um suporte sólido. Isto pode ser feito diretamenteligando anticorpos peptídeo-específico à cadeia principal ou criandoquimeras de proteína de fusão compreendendo peptídeos contendo motivoligados, por exemplo, a um epítopo conhecido (por exemplo um rótulo (porexemplo FLAG, myc) ou uma seqüência de domínio constante deimunoglobulina apropriada (uma "imunoadesina" vide, por exemplo, Capon(1989) Nature 377:525-531 (1989).
Ácidos nucléicos ou polipeptídeos da invenção podem serimobilizados ou aplicados a um arranjo. Arranjos podem ser usados paratriar ou monitorar bibliotecas de composições (por exemplo moléculaspequenas, anticorpos, ácidos nucléicos, etc.) para sua habilidade de ligar oumodular a atividade de um ácido nucléico ou um polipeptídeo da invenção.
Por exemplo, em um aspecto da invenção, um parâmetro monitorado éexpressão de transcrição de um gene que compreende um ácido nucléico dainvenção. Uma ou mais, ou, todas as transcrições de uma célula podem sermedidas por hibridação de uma amostra que compreende transcrições dacélula, ou, ácidos nucléicos representativos ou complementares àstranscrições de uma célula, por hibridação para ácidos nucléicosimobilizados em um arranjo, ou "biofatia". Usando um "arranjo" de ácidosnucléicos em uma microfatia, algumas ou todas as transcrições de umacélula podem ser quantificadas simultaneamente. Alternativamente, arranjosque compreendem ácido nucléico genômico podem também ser usados paradeterminar o genótipo de uma cepa recentemente criada feita pelos métodosda invenção. "Arranjos" de polipeptídeo podem também ser usados paraquantificar uma pluralidade de proteínas simultaneamente.Os termos "arranjo" ou "microarranjo" ou "biofatia" ou "fatia"como aqui usados são uma pluralidade de elementos alvos, cada elementoalvo compreendendo uma quantidade definida de um ou mais polipeptídeos(incluindo anticorpos) ou ácidos nucléicos imobilizados sobre uma áreadefinida de uma superfície de substrato. Praticando os métodos da invenção,qualquer arranjo e/ou método conhecidos de fazer e usar os arranjos podemser incorporados ao todo ou em parte, ou variações destes, como descritos,por exemplo, na patente U. S. Nos. 6.277.628; 6.277.489; 6.261.776;6.258.606; 6.054.270; 6.048.695; 6.045.996; 6.022.963; 6.013.440;5.965.452; 5.959.098; 5.856.174; 5.830.645; 5.770.456; 5.632.957;5.556.752; 5.143.854; 5.807.522; 5.800.992; 5.744.305; 5.700.637;5.556.752; 5.434.049; vide também, por exemplo, WO 99/51773; WO99/09217; WO 97/46313; WO 96/17958; vide também, por exemplo,Johnston (1998) Curr. Biol. 8:R171-R174; Schummer (1997) Biotechniques23:1087-1092; Kern (1997) Biotechniques 23:120-124; Solinas-Toldo (1997)Genes, Chromosomes & Câncer 20:399-407; Bowtell (1999) Nature GeneticsSupl. 21:25-32. Vide também pedidos de patente publicados U. S. Nos.20010018642; 20010019827; 20010016322; 20010014449; 20010014448;20010012537; 20010008765.
CÉLULAS HOSPEDEIRAS E CÉLULAS TRANSFORMADAS
A invenção também fornece uma célula transformada quecompreende uma seqüência de ácido nucléico da invenção, por exemplo,uma seqüência que codifica um polipeptídeo da invenção, ou um vetor dainvenção. A célula hospedeira pode ser quaisquer das células hospedeirasfamiliares àqueles versados na técnica, incluindo células procarióticas,células eucarióticas, como células bacterianas, células fúngicas, células delevedura, células mamíferas, células de inseto, ou células de planta. Célulasbacterianas exemplares incluem E. coli, Streptomyces, Bacillus subtilis,Salmonela typhimurium e várias espécies dentro dos gêneros Pseudomonas,Streptomyces, e Staphylococcus. Células de inseto exemplares incluemDrosophila S2 e Spodoptera Sf9. Células animais exemplares incluem CHO,COS ou melanoma de Bowes ou qualquer linhagem celular de camundongoou humana. A seleção de um hospedeiro apropriado está dentro dashabilidades daqueles versados na técnica.
Vetores podem ser introduzidos nas células hospedeiras usandoqualquer de uma variedade de técnicas, incluindo transformação,transfecção, transdução, infecção viral, disparo de gene, ou transferência degene mediada por Ti. Métodos particulares incluem transfecção de fosfato decálcio, transfecção mediada por DEAE-dextrana, lipofecção, oueletroporação.
Células hospedeiras criadas podem ser cultivadas em meiosnutrientes convencionais modificados como apropriado para ativar ospromotores, selecionar transformantes ou amplificar os genes da invenção.Seguindo transformação de uma cepa hospedeira adequada e crescimentoda cepa hospedeira para uma densidade de célula apropriada, o promotorselecionado pode ser induzido através de meios apropriados (por exemplodeslocamento de temperatura ou indução química) e as células podem sercultivadas durante um período adicional para lhes permitir produzir opolipeptídeo desejado ou fragmento deste.
Células podem ser colhidas por centrifugação, rota por meiosfísicos ou químicos, e o extrato bruto resultante é retido para purificaçãoadicional. Células microbianas empregadas para expressão de proteínaspodem ser rompidas por qualquer método conveniente, incluindo ciclismo decongelação-descongelação, sonicação, rompimento mecânico, ou uso deagentes de lise de célula. Tais métodos são bem conhecidos àquelesversados na técnica. O polipeptídeo ou fragmento expresso pode serrestabelecido e purificados de culturas de célula recombinantes através demétodos incluindo precipitação de sulfato de amônio ou de etanol, extraçãode ácido, cromatografia de permuta de ânion ou cátion, cromatografia defosfocelulose, cromatografia de interação hidrofóbica, cromatografia deafinidade, cromatografia de hidroxilapatite e cromatografia de lectina. Etapasde redobragem de proteína podem ser usadas, conforme necessário, paracompletar a configuração do polipeptídeo. Se desejado, cromatografialíquida de alto desempenho (HPLC) pode ser empregada para etapas depurificação finais.
Vários sistemas de cultura de célula mamífera podem tambémser empregados para expressar proteína recombinante. Exemplos desistemas de expressão mamífera incluem as linhagens de COS-7 defibroblastos de rim de macaco e outras linhagens celulares capazes deexpressar proteínas de um vetor compatível, como as linhagens celulares deC127, 3T3, CHO, HeLa e BHK.
As construções em células hospedeira podem ser usadas deuma maneira convencional para produzir o produto de gene codificado pelaseqüência recombinante. Dependendo do hospedeiro empregado em umprocedimento de produção recombinante, os polipeptídeos produzidos porcélulas hospedeiras contendo o vetor podem ser glicosilados ou não-glicosilados. Polipeptídeos da invenção podem ou não também incluir umresíduo de aminoácido de metionina inicial.
Sistemas de translação livres de célula podem também serempregados para produzir um polipeptídeo da invenção. Sistemas detranslação livres de célula podem usar mRNAs transcrito de uma construçãode DNA que compreende um promotor operavelmente ligado a um ácidonucléico que codifica o polipeptídeo ou fragmento destes. Em algunsaspectos, a construção de DNA pode ser linearizada antes de conduzir umareação de transcrição in vitro. O mRNA transcrito é depois incubado com umextrato de translação livre de célula apropriado, como um reticulócito deextrato de coelho, para produzir o polipeptídeo desejado ou fragmento deste.
Os vetores de expressão podem conter um ou mais genesrótulos selecionáveis para prover um traço fenotípico para seleção de célulashospedeiras transformadas como diidrofolato reductase ou resistência àneomicina por cultura de célula eucariótica, ou como resistência àtetraciclina ou à ampicilina em E. coli.
Para expressão transiente em células mamíferas, cDNA quecodifica um polipeptídeo de interesse pode ser incorporado em um vetor deexpressão mamífero, por exemplo pcDNAI, que está comercialmentedisponível de Invitrogen Corporation (San Diego, Calif, U.S.A; número decatálogo V490-20). Este é um vetor de plasmídeo multifuncional de 4,2 kbprojetado para expressão de cDNA em sistemas eucarióticos, e análise decDNA em procariotos, incorporados no vetor estão o promotor eintensificador de CMV, segmento de encaixe e sinal de poliadenilação, umaorigem de replicação de SV40 e vírus de Polioma, e origem de M13 parasalvar DNA de filamento simples para seqüenciação e mutagênese,promotores de RNA de Sp6 e T7 para a produção de transcrições de RNAsense e anti-sentido e uma origem de plasmídeo de cópia alta semelhante aCol E1. Um poliligador está localizado apropriadamente a jusante dopromotor de CMV (e 3' do promotor de T7).
A inserção de cDNA pode ser liberada primeiro do fagemídeoacima incorporado nos sítios de restrição apropriados no poliligador depcDNAI. Seqüenciação ao longo das junções pode ser executada paraconfirmar orientação inserida apropriada em pcDNAI. O plasmídeoresultante pode depois ser introduzido para expressão transiente em umhospedeiro de célula mamífera selecionando, por exemplo, as célulassemelhantes a fibroblasto derivadas de macaco como da linhagem de COS-I(disponível da American Type Culture Collection, Rockville, Md. como ATCCCRL 1650).
Para expressão transiente do DNA de codificação de proteína,por exemplo, células COS-I podem ser transfeccionadas comaproximadamente 8 ug de DNA por 106 células COS, através de transfecçãode DNA mediada por DEAE e tratadas com cloroquina de acordo com osprocedimentos descritos por Sambrook et al, Molecular Cloning: A Labora-tory Manual, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring HarborN.Y, págs. 16.30-16.37. Método exemplar é como segue. Brevemente,células de COS-I são banhadas a uma densidade de 5 x 106 células/prato edepois crescidas durante 24 horas em meio de DMEM/F12 suplementadocom FBS. Meio é depois removido e as células são lavadas em PBS edepois em meio. Uma solução de transfecção contendo dextrana de DEAE(0,4 mg/ml), 100 uM cloroquina, 10 % NuSerum, DNA (0,4 mg/ml) em meiode DMEM/F12 é depois aplicada nas células 10 ml de volume. Apósincubação durante 3 horas a 37e C, as células são lavadas em PBS e meiocomo recém descrito e depois chocadas durante 1 minuto com 10 % DMSOem meio de DMEM/F12. As células são deixadas crescer durante 2-3 diasem 10 % de meio suplementado com FBS, e ao término da incubação ospratos são colocados em gelo, lavados com PBS esfriado em gelo e depoisremovidas raspando. Células são depois colhidas através de centrifugação a1000 rpm durante 10 minutos e o pelota celular é congelado em nitrogêniolíquido, para uso subseqüente na expressão de proteína. Análise deNorthern blot de uma alíquota descongelada das células congeladas podeser usada para confirmar a expressão de cDNA de codificação de receptorem células sob armazenamento.
De uma maneira igual, linhagens celulares estavelmentetransfeccionadas podem também ser preparadas, por exemplo, usando doistipos de célula diferentes como hospedeiro: CHO Kl e CHO Pro5. Paraconstrução destas linhagens celulares, cDNA que codificam para a proteínarelevante pode ser incorporado no vetor de expressão mamífero pRC/CMV(Invitrogen) que permite expressão estável. Inserção neste sítio coloca ocDNA sob o controle de expressão do promotor de citomegalovírus e amontante do sítio de poliadenilação e terminador do gene de hormônio decrescimento bovino, e em uma base de vetor compreendendo o gene deresistência à neomicina (direcionado pelo promotor prematuro de SV40)como rótulo selecionável.
Um protocolo exemplar para introduzir plasmídeos construídoscomo descritos acima é como segue. As células CHO hospedeiras sãoprimeiro semeadas a uma densidade de 5x10 em 10 % de meio de MEMsuplementado com FBS. Após crescimento durante 24 horas, meio fresco éadicionado às placas e três horas depois, as células são transfeccionadasusando o procedimento de co-precipitação de DNA de fosfato de cálcio(Sambrook et ai, supra). Brevemente, 3 ug de DNA são misturados eincubados com solução de cálcio tamponada durante 10 minutos emtemperatura ambiente. Um volume igual de solução de fosfato tamponada éadicionado e a suspensão é incubada durante 15 minutos em temperaturaambiente. Em seguida, a suspensão incubada é aplicada às células durante4 horas, removida e as células foram chocadas com meio contendo 15 % deglicerol. Três minutos depois, células são lavadas com meio e incubadasdurante 24 horas em condições de crescimento normais. Células resistentesà neomicina são selecionadas em 10 % de meio de alfa-MEM suplementadocom FBS contendo G418 (1 mg/ml). Colônias individuais de célulasresistentes a G418 são depois isoladas cerca de 2-3 semanas, clonalmenteselecionadas e depois propagadas para propósitos de ensaio.
EXEMPLOS
Vários exemplos ilustrativos da presente invenção são descritosabaixo. Na maioria dos casos, técnicas alternativas poderiam também serusadas. Os exemplos são intencionados ser ilustrativos e não limitativos ourestritivos ao escopo da invenção. A menos que especificamente observadoao contrário, em casos onde um número do composto não for por um "P-"(por exemplo, "P-0001") na seção de Exemplos, nomeação e/ouenumeração do composto está relacionada à nomeação e/ou enumeraçãoempregada(s) em outras seções deste relatório descritivo. Similarmente,estrutura e nomeação e enumeração de substituinte dentro dos Exemplossão independentes da estrutura e nomeação e enumeração de substituintenas seções acima deste pedido de patente a menos que claramenteindicado o contrário.
Exemplo 1: Síntese do composto da Fórmula I, onde Xi, X?, Yi e Y? são CHe L1 é -CH2-:
Compostos da Fórmula I onde X1f X2, Y-\ e Y2 são CH e L1 é -CH2- ou -CO- podem ser sintetizados de 7-azaindol de acordo com um dosEsquemas 1 - 3 a seguir, onde R24 é consistente com Ar! que pode sertambém substituído para fornecer os compostos onde R24 é An-L2-R1 comodescrito para a fórmula I.Esquema 1
<formula>formula see original document page 123</formula>
Etapa 1 - Síntese do composto 2.
Composto 2 é sintetizado de 7-azaindol comercialmentedisponível seguindo o procedimento da literatura (Robinson, J AM. Chem.Soe, 1955, 77, pág., 457).
Etapa 2 - Síntese do composto da Fórmula II
Composto da Fórmula II é sintetizado através de desprotonaçãousando base (por exemplo BuLi, NaH) em solvente aprótico comotetraidrofurano ou éter e reagindo o ânion com um cloreto de silila (porexemplo TIPS) ou um anidrido (por exemplo Anidrido de Boc). O composto éisolado seguindo procedimento padrão (extinguindo com salmoura esfriadaem gelo, processamento, e purificação através de cromatografia instantâneade sílica-gel).
Etapas 3 e 4 - Síntese do composto da Fórmula 1
Compostos da Fórmula I, em que R24 é Ari como definido nafórmula I, é sintetizado através da reação dos compostos da Fórmula II comcloroformato de isopropila (ou cloroformato de etila) em temperaturaambiente em tolueno para dar um intermediário 3 de clorometila. Esteintermediário é esfriado para -78e C e imediatamente reagido com umreagente de organocobre que é gerado da reação entre um reagente deGrignard (ou reagente de organolítio) e uma solução de cianeto de cobre eLiCI. A mistura é agitada a -789 C durante uma hora e deixada aquecer emtemperatura ambiente. A reação é extinta com uma solução de 4:1 cloreto deamônio: hidróxido de amônio. A reação trabalhada da maneira usual epurificada através de cromatografia instantânea de sílica-gel para dar ocomposto nitrogênio-protegido. O composto final pode ser realizado atravésda desproteção do grupo de proteção (Boc, TIPS) usando condiçõespadrões (TFA ou NH4F) em temperatura ambiente.Esquema 2
<formula>formula see original document page 124</formula>
Etapa 1 - Síntese do composto 3
Composto 3 é sintetizado reagindo 7-azaindol comercialmentedisponível, composto 1, com hexametiltetramina e ácido acético em águacom aquecimento a refluxo durante duas horas. Após esfriar, o compostodesejado é precipitado e colhido através de filtração.
Etapa 2 - Síntese do composto da Fórmula III
Composto da Fórmula III, onde P é um grupo de proteção, ésintetizado reagindo o composto 3 com um reagente apropriado paraintroduzir um grupo de proteção (por exemplo dianidrido de terc-butiloxicarbonila) e uma base (por exemplo hidreto de sódio) em um solventeapropriado (por exemplo tetraidrofurano) tipicamente em temperaturaambiente durante 12-18 horas. O composto pode ser isolado através demeios convencionais (por exemplo extração).
Etapa 3 - Síntese do composto da Fórmula IV
Composto da Fórmula IV, em que R24 é Ar-i, é sintetizadoreagindo o composto da Fórmula III em um solvente apropriado (porexemplo 1,2-dimetoxietano) com um reagente de Grignard da FórmulaR24MgCI ou R24MgBr (por exemplo brometo de magnésio de piridinila) ou umnucleófilo equivalente em um solvente apropriado (por exemplotetraidrofurano) sob atmosfera inerte esfriada tipicamente para -10s C. Areação é tipicamente deixada aquecer em temperatura ambiente e agitadadurante 12-18 horas. O composto desejado é purificado através decromatografia líquida de fase reversa de pressão alta.
Etapas 4 e 5 - Síntese de um intermediário do composto da Fórmula I
Um intermediário do composto da Fórmula I é sintetizadoreagindo o composto da Fórmula IV com um agente redutor (por exemploboroidreto de sódio) em um solvente polar (por exemplo etanol) tipicamentecom aquecimento a 80e C durante 1-4 horas. A reação é extinta com aadição de metanol e concentrada e purificada através de cromatografialíquida de alto desempenho de fase reversa. Composto da Fórmula I ondeR24 é An é sintetizado reagindo este intermediário com um reagenteapropriado para remover o grupo de proteção, P, (por exemplo ácidoclorídrico) em um solvente apoiar (por exemplo dioxano). O composto final éisolado através de procedimentos padrões (por exemplo cromatografialíquida preparativa de fase reversa de pressão alta).
Esquema 3
<formula>formula see original document page 125</formula>
Etapa 1 - Síntese do composto da Fórmula I'
Composto da Fórmula I' onde R24 é An, é sintetizado reagindo ocomposto 1 com um agente de ativação (por exemplo brometo de magnésiode metila e dicloreto de zinco ou cloreto de alumínio anidro) e um cloreto deácido heteroarila (por exemplo cloreto de ácido nicotínico) em um solventenão-reativo (por exemplo diclorometano), sob atmosfera inerte (por exemploargônio), em temperatura ambiente ou com aquecimento a refluxo durante18-24 horas. O composto é isolado através de procedimentos padrões (porexemplo extração e cromatografia de sílica-gel).
Exemplo 2: Síntese de intermediário 3-(6-Cloro-piridin-3-ilmetil)-1-triisopropilsilanil-1H-pirroir2.3-blpiridina (6) e (3-(6-Bromo-piridin-3-ilmetil)-1-triisopropilsilanil-1 H-pirrolí2.3-blpiridina) (6a)
Composto 6, um intermediário para os compostos da Fórmula Ionde X1f X2, Yi e Y2 são CH, n é 1, P, Q e T são CH e L1 é -CH2-, pode sersintetizado em quatro etapas de 7-azaindol de acordo com o Esquema 4 aseguir.
Esquema 4<formula>formula see original document page 126</formula>
Etapa 1 - Síntese de dimetil-(1H-pirrol[2,3-blpiridin-3-ilmetil)-amina (2)
Em um frasco de fundo redondo de 3 gargalos foi adicionadoálcool isopropílico (320,0 ml) seguido pela adição de 1 H-pirrol[2,3-b]piridina1 (7,10 g, 60,1 mmols), cloridrato de dimetilamina (5,4 g, 0,066 mol), eformaldeído (2,0 g, 0,066 mol). A mistura de reação foi agitada emtemperatura ambiente durante 12 horas, e depois refluxada durante 30minutos. A solução de suspensão foi evaporada à secura a vácuo. Aoresíduo foi adicionada água (60,0 ml, 3,33 rnols) e ácido clorídricoconcentrado (6,0 ml, 0,20 mol). A camada de água foi extraída com éter e acamada aquosa foi neutralizada com carbonato de potássio. A camadaaquosa foi extraída com diclorometano, secada em sulfato de sódio econcentrada para dar o composto que foi depois também lavado com éter esecado para fornecer o composto 2 (7,1 g, rendimento = 67,4 %), como umsólido branco.
Etapa 2 - Síntese de dimetil-(1 -triisopropilsilanil-1 H-pirroir2,3-b1piridin-3-ilmetin-amina (4)
Em um frasco de fundo redondo 7-Azagramina 2 (5,38 g, 30,7mmols), N,N-dimetilformamida (25,0 ml), e hidreto de sódio (1,35 g, 33,8rnols) foram combinados. Na reação foi adicionado cloreto de triisopropilsilila(6,8 ml, 0,032 mol). A reação foi agitada a 20e C durante 12 horas. A misturade reação foi vertida em água e extraída com acetato de etila. A camadaorgânica foi lavada com salmoura, secada em sulfato de sódio, concentradae purificada com biotage para dar o composto 4 (6,0 g, rendimento = 58,8 %)como um óleo incolor.Etapa 3 - Síntese de 3-clorometil-1-triisoproDilsilanil-1H-pirrolf2,3-blpiridina (5)Em um frasco de fundo redondo foram adicionados composto 4(500,0 mg, 1,51 mmol) e tolueno (5,0 ml, 0,047 mol) sob uma atmosfera denitrogênio. Na mistura de reação 1,0 M cloroformato de isopropila emtolueno (1,6 ml) foi adicionado lentamente em temperatura ambiente. Amistura de reação foi agitada durante outras 2 horas para dar o composto 5desejado usado para próxima etapa sem purificação.
Etapa 4 - Síntese de 3-(6-Cloro-piridin-3-ilmetil)-1 -triisopropilsilanil-1 H-pirroir2.3-blpiridina (6)
Em um frasco de fundo redondo foram adicionados 5-iodo-2-cloro-piridina (315,0 mg, 1,32 mmol) e tetraidrofurano (12,0 ml, 0,15 mol) a -40e C sob uma atmosfera de nitrogênio. Na reação 2,0 M de cloreto deisopropilmagnésio em tetraidrofurano (0,72 ml, 1,44 mmol) foramadicionados. A mistura de reação foi agitada durante 40 minutos a -40- C.TLC (hexano/acetato de etila 2:1) não indicou nenhum material de partida.Na mistura de reação 0,6 M de CuCN.2LiCI em tetraidrofurano (2,4 ml, 1,44mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi deixada vir para temperaturaambiente por 5 minutos e fosfito de trimetila (0,29 ml, 2,4 mmols) foiadicionado. Após 10 minutos, esta solução foi adicionada em um frasco defundo redondo contendo o composto 5 (315,0 mg) e tolueno (8,0 ml). Areação foi agitada a 209 C durante 40 horas. A mistura de reação foi vertidaem água e o composto extraído com acetato de etila. A camada orgânica foilavada com salmoura, secada em sulfato de sódio, concentrada e purificadacom biotage (diclorometano/metanol 1:10) para dar o composto 6 (230 mg,rendimento = 59,0 %) como um sólido branco. Composto 6a (3-(6-Bromo-piridin-3-ilmetil)-1 -triisopropilsilanil-1 H-pirrol[2,3-b]piridina) (MS (ESI) [M+H+]+= 288,1, 290,1) foi preparado substituindo 5-iodo-2-cloro-piridina com 5-iodo-2-bromo-piridina na Etapa 4, com condições de reação e procedimento deprocessamento igual ao para a síntese do composto 6.
Exemplo 3: Síntese de intermediário (6-Cloro-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-blpiridin-3-il)-metanona (7)
Composto 7, um intermediário para os compostos da Fórmula Ionde Xl X2, V'i e Y2 são CH, n é 1, P, Q e T são CH e L1 é -CO-, pode sersintetizado em uma etapa de 7-azaindol de acordo com o Esquema 5 aseguir.
Esquema 5
<formula>formula see original document page 128</formula>
Em um frasco de fundo redondo r\foram adicionados tricloreto dealumínio (16,0 g, 0,12 mol) e diclorometano (100,0 ml) sob uma atmosferade nitrogênio. Na mistura de reação 1H-Pirrol[2,3-b]piridina 1 (3,2 g, 0,027mol) em diclorometano (20,0 ml) foi adicionado. A reação foi agitada emtemperatura ambiente por 70,0 minutos e cloreto de 6-Cloropiridino-3-carbonila 8 (5,4 g, 0,031 mol) em diclorometano (10,0 ml) foi adicionado. Amistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 3 horas.Metanol (10 ml) foi adicionado à mistura de reação e o solvente foievaporado a vácuo. O resíduo foi vertido em água e o composto precipitadofoi removido através de filtração. A camada aquosa foi extraída com acetatode etila e a camada orgânica foi secada e concentrada e combinada com osólido isolado por filtração para dar 7 (6,2 g, rendimento = 88,6 %) como umsólido branco. MS (ESI) [M+H+]+ = 258.
Exemplo 4: Síntese de benzil-f5-(1H-pirroir2,3-blpiridin-3-ilmetil)-piridin-2-ill-amina (P-000I)
Benzil-[5-(1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-000I) foi preparada em duas etapas de 3-(6-Cloro-piridin-3-ilmetil)-1-triisopropilsilanil-1 H-pirrol[2,3-b]piridina (6) de acordo com o Esquema 6.
Esquema 6
<formula>formula see original document page 128</formula>
Etapa 1 - Síntese de benzil-í5-(1-triisopropilsilanil-1H-pirrol[2,3-b1piridin-3-ilmetil)-piridin-2-in-amina (10):
Em um frasco de fundo redondo foi adicionado 3-(6-Cloro-piridin-3-ilmetil)-1-triisopropilsilanil-1H-pirrol[2,3-b]piridina 6 (160,0 mg, 0,40 mmol,preparado como descrito no Exemplo 2), benzilamina (32, 0,1 ml, 0,90 mmol),acetato de paládio (17,0 mg, 0,076 mmol), tolueno (10,0 ml), terc-butóxidode potássio (80,0 mg, 0,71 mmol) e 2-(di-t-butilfosfino)bifenila (31,4 mg, 0,11mmol) sob uma atmosfera de nitrogênio. A reação foi agitada sob refluxodurante 3 horas. TLC e MS não indicaram nenhum material de partida. Amistura de reação foi vertida em água e extraída com acetato de etila. Acamada orgânica foi lavada com salmoura, secada em sulfato de sódio,concentrada e purificada com biotage (diclorometano/metanol 1 :20) para daro composto 10 (110 mg, rendimento = 58,5 %) como um sólido branco. MS(ESI) [M+HT = 471.
Etapa 2 - Síntese de benzil-r5-(1H-pirroir2,3-blpiridin-3-ilmetil)-piridin-2-ill-amina (P-000I):
Em um frasco de fundo redondo foi adicionado benzil-[5-(1-triisopropilsilanil-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina 10 (400,0mg, 0,85 mmol), tetraidrofurano (20,0 ml) e fluoreto de tetra-n-butilamônio(240 mg, 0,93 mmol). A mistura de reação foi agitada a 20°C durante 30minutos. TLC não indicou nenhum material de partida. A mistura de reaçãofoi vertida em água e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foilavada com salmoura, secada em sulfato de sódio, concentrada e purificadacom biotage (diclorometano/metanol 1:10) para dar Composto P-0001 (220mg, Rendimento = 82,4 %) como um sólido branco. MS (ESI) [MH-HT = 315.
Compostos adicionais foram preparados seguindo o protocolo doEsquema 6, substituindo benzil amina com uma amina adequada na Etapa 1,e usando ou 3-(6-Cloro-piridin-3-ilmetil)-1-triisopropilsilanil-1H-pirrol[2,3-b]piridina 6 ou 3-(6-Bromo-piridin-3-ilmetil)-1-triisopropilsilanil-1H-pirrol[2,3-b]piridina 6a, na Etapa 1. Os compostos a seguir foram feitos seguindo esteprocedimento:
Dimetil-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0021),(4-metóxi-benzil)-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0004),
(4-cloro-benzil)-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0005),
(4-flúor-benzil)-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0006),
(4-metil-benzil)-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0007), e
[5-(1 H-pirrol[2]3-b]piridin-3-ilmetH)-piridin-2-il]-tiofen-2-ilrnetil-amina (P-0008).
A tabela a seguir indica a amina usada na Etapa 1 no lugar debenzil amina na Coluna 2, e ou 3-(6-Cloro-piridin-3-ilmetil)-1-triisopropilsilanil-1 H-pirrol[2,3-b]piridina ou 3-(6-Bromo-piridin-3-ilmetil)-1 -triisopropilsilanil-1H-pirrol[2,3-b]piridina foi usada na Etapa 1 na Coluna 3 (Clou Br, respectivamente), com a estrutura de composto na Coluna 4,resultado de espectrometria de massa experimental na Coluna 5, e númerodo composto na Coluna 1.
<table>table see original document page 130</column></row><table><table>table see original document page 131</column></row><table>
Exemplo 5: Síntese de (6-Benzilamino-piridin-3-il)-(1H-pirroir2,3-blpiridin-3-il)-metanona (P-0002)
(6-Benzilamino-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona(P-0002) foi preparada em uma etapa de (6-Cloro-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (7) de acordo com o Esquema 7.
Esquema 7
<formula>formula see original document page 131</formula>
Em um tubo de pressão foram adicionados (6-Cloro-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona 7 (270,0 mg, 1,05 mmol, preparadacomo descrito no Exemplo 3), e benzilamina (32, 0,7 ml, 0,006 mol) etetraidrofurano (25,0 ml) sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura dereação foi aquecida para 185Q C durante 60 horas. A mistura de reação foiconcentrada para remover a maioria do solvente e o resíduo foi vertido emágua e extraído com acetato de etila. A camada orgânica foi secada emsulfato de sódio, concentrada e purificada com biotage(diclorometano/metanol 1 :20) para dar o composto P-0002 (30 mg,rendimento = 8,7 %) como um sólido branco. MS (ESI) [M+H+]+ = 329.Compostos adicionais foram preparados seguindo o protocolo doEsquema 7, substituindo benzilamina com uma amina adequada. Oscompostos a seguir foram feitos seguindo este procedimento:
[6-(4-Flúor-benzilamino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (P-0015),
[6-(3-Flúor-benzilamino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona(P-0016),
(1H-Pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-[6-(4-trifluorometil-benzilamino)-piridin-3-il]-metanona (P-0017),
(1 H-Pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-{6-[(tiofen-2-ilmetil)-amino]-piridin-3-il}-metanona (P-0018),
(6-Fenilamino-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona(P-0023),
(6-lsopropilamino-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (P-0024),
(6-lsobutilamino-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona(P-0025),
[6-(3-Benzilóxi-fenilamino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (P-0026),
[6-(Ciclopropilmetil-amino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (P-0030),
[6-(Cicloexilmetil-amino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (P-0031).
A tabela a seguir indica a amina substituída no lugar de benzilamina na coluna 2, para fornecer estes compostos, mostrados pelaestrutura na coluna 3. Coluna 1 fornece o número do composto e coluna 4dá o resultado da espectrometria de massa experimental.
<table>table see original document page 132</column></row><table><formula>formula see original document page 133</formula>
Exemplo 6: Síntese de lsobutil-r5-(1H-pirroir2,3-blpiridin-3-ilmetil)-Diridin-2-ill-amina P-0028
Composto P-0028 foi sintetizado na etapa 1 de 6-lsobutilamino-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona P-0025 como mostrado no
Esquema 8.<formula>formula see original document page 134</formula>
Etapa 1 - Síntese de lsobutiK5-(1H-pirrolf2,3-blpiridin-3-ilrnetin-piridin-2-ill-amina (P-0028).
À (6-lsobutilamino-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (P-0025, 60,0 mg, 0,20 mmol, preparada como descrita noExemplo 5) em 1,2-etanodiol (5,0 nada) foram adicionados hidrazina (1,0 ml,0,032 mol) e hidróxido de potássio (200,0 mg, 3,56 mmols). A mistura dereação foi aquecida para 180e C durante a noite. A mistura de reação foivertida em água e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foilavada com salmoura, secada em sulfato de sódio, concentrada e purificadapor cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 10 % de metanol emdiclorometano para dar o composto (P-0028, 10 mg, 16,7 %). MS (ESI)[M+H+]+ = 281.
Ciclopropilmetil-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0032)
<formula>formula see original document page 134</formula>
foi preparada seguindo o protocolo do Esquema 8, substituindo (6-lsobutilamino-piridin-3-il)-(1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona P-0025 com[6-(Ciclopropilmetil-amino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanonaP-0030 (preparada como descrito no Exemplo 5). MS (ESI) [M+H+]+ = 279.
Cicloexilmetil-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0033)
<formula>formula see original document page 134</formula>
foi preparada seguindo o protocolo do Esquema 8, substituindo (6-lsobutilamino-piridin-3-il)-(1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona P-0025 com[6-(Cicloexilmetil-amino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona P-0031, (preparada como descrito no Exemplo 5). MS (ESI) [M+H+]+ = 321.
Exemplo 7: 3-(6-lsoproDil-piridin-3-ilmetil)-1H-pirroir2,3-blpiridina P-0019
3-(6-lsopropil-piridin-3-ilmetil)-1H-pirrol[2,3-b]piridina P-0019 foisintetizada em 2 etapas de 3-(6-Cloro-piridin-3-ilmetil)-1 -triisopropilsilanil-1 H-pirrol[2,3-b]piridina 6 como mostrado no Esquema 9.
Esquema 9
<formula>formula see original document page 135</formula>
Etapa de síntese de 3-(6-lsopropil-piridin-3-ilmetil)-1 -triisopropilsilanil-1 H-1-pirrolí2,3-blpiridina (39)
À 3-(6-Cloro-piridin-3-ilmetil)-1 -triisopropilsilanil-1 H-pirrol[2,3-b]piridina (6, 54,0 mg, 0,000135 mol, preparada como descrito no Exemplo 2)em Tetraidrofurano (4,0 ml) foi adicionado [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]-dicloropaládio(ll) (23,0 mg) e Cloreto de Isopropilmagnésio (0,15 ml, 2,0 Mem Tetraidrofurano). A reação foi agitada a 20e C sob uma atmosfera deNitrogênio durante 3 horas. A mistura de reação foi vertida em água eextraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura,secada em sulfato de sódio, concentrada e purificada por cromatografia decoluna de sílica-gel eluindo com 10 % de metanol em diclorometano para daro composto 39 (38 mg, 70,4 %).
Etapa de síntese de 3-(6-lsopropil-piridin-3-ilmetil)-1H-pirroir2-2.3-b1piridina(P-0019)
À 3-(6-lsopropil-piridin-3-ilmetil)-1 -triisopropilsilanil-1 H-pirrol[2,3-b]piridina (39, 35,0 mg, 0,086 mmol) em tetraidrofurano (3,0 ml) foiadicionado fluoreto de tetra-n-butilamônio (29 mg, 0,11 mmol). A reação foiagitada a 20e C durante 30 minutos. A mistura de reação foi vertida em águae extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura,secada em sulfato de sódio, concentrada e purificada por cromatografia decoluna de sílica-gel eluindo com 10 I em diclorometano para dar o composto(P-0019, 18,0 mg, 81,9 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 252.
Exemplo 8: Síntese de r5-(1H-Pirroir2.3-blDiridin-3-ilmetil)-piridin-2-ill-(4-trifluorometil-benziQ-amina (P-0003)
[5-(1H-Pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0003) foi preparada em três etapas de (6-Cloro-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (7) de acordo com o Esquema 10.
Esquema 10
<formula>formula see original document page 136</formula>
Etapa 1 - Síntese de (1H-Pirrolf2,3-b1piridin-3-il)-r6-(4-trifluorometil-benzilamino)-piridin-3-il1-metanona (P-0017)
Em um frasco de pressão foram adicionados (6-Cloro-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona 7 (3,5 g, 0,014 mol, preparada comodescrito no Exemplo 3), 4-(trifluorometil)benzilamina (30, 9,0 g, 0,051 mol),tetraidrofurano (30,0 ml, 0,37 mol), acetato de paládio (200,0 mg, 0,890mmol) e 2-(di-t-butilfosfino)bifenila (200,0 mg, 0,67 mmol). A mistura dereação foi agitada a 180e C durante a noite, vertida em água e extraída comacetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada emsulfato de sódio e concentrada. Ao resíduo foram adicionados ácido acético(15,0 ml) e H20 (5,0 ml). A mistura de reação foi agitada a 1009 C durante 5horas e concentrada para remover o ácido acético. O resíduo foi depoistratado com Na2HC03 aquoso e extraído com acetato de etila. A camadaorgânica foi lavada, secada, concentrada e purificada para dar o compostoP-0017 (1,0 g, rendimento = 18,5 %) como um sólido de amarelo-claro. MS(ESI) [M+HT = 397.
Etapa 2 - Síntese de (1 H-Pirroir2.3-blpiridin-3-il)-r6-(4-trifluorometil-benzilamino)-piridin-3-ifl-metanol (14)
Em um frasco de fundo redondo foram adicionados (1H-Pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-[6-(4-trifluorometil-benzilamino)-piridin-3-il]-metanonaP-0017 (210,0 mg, 0,53 mmol) e tetraidroborato de sódio (80,0 mg, 2,11mmols), dissolvidos em N,N-dimetilformamida (5,0 ml) e etanol (20,0 ml). Areação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, vertida emágua e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada comsalmoura, secada em sulfato de sódio, concentrada e purificada com biotage(diclorometano/metanol 1 :20) para dar o composto 14 (63 mg, rendimento =30 %) como um sólido branco. MS (ESI) [M+H+]+ = 399.
Etapa 3 - Síntese de f5-( 1 H-Pirroir2,3-blpiridin-3-ilmetih-piridin-2-ill-(4-trifluorometil-benziD-amina (P-0003)
Em um frasco de fundo redondo foi adicionado (1H-Pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-[6-(4-trifluorometil-benzilamino)-piridin-3-il]-metanol 14 (200,0mg, 0,50 mmol), ácido trifluoroacético (5,0 ml, 0,065 mol) e trietilsilano (3,0ml, 0,019 mol). A reação foi agitada em temperatura ambiente por 30 min,vertida em bicarbonato de sódio aquoso, e extraída com acetato de etila. Acamada orgânica foi lavada com salmoura, secada em sulfato de sódio,concentrada e purificada para dar o composto puro P-0003 (120,0 mg,rendimento = 62,8 %) como um sólido branco. MS (ESI) [M+H+]+ = 383.
Exemplo 9. Síntese dos compostos da Fórmula I onde n é 1, P, Q e T sãoCH Xi. Xp e Yp são CH. Y-, é CR4, L1 é -CHp-, L2 é -NHCHp-, e R1 é 4 fenilasubstituída (Fórmula Ic).
Compostos da Fórmula Ic, onde R4 é como definido para afórmula I e Z é um substituinte como definido para arila opcionalmentesubstituída, podem ser sintetizados em cinco Etapas de 2-amino-5-bromopiridinas como mostrado no Esquema geral 11 a seguir.
Esquema 11<formula>formula see original document page 138</formula>
Etapa 1 - Preparação dos compostos da Fórmula V
A uma solução de um benzaldeído apropriadamente substituído(por exemplo, benzaldeído de p-trifluorometila) em um solvente não-reativo(por exemplo tetraidrofurano) é adicionado uma 2-amino-5-bromo-piridinaapropriada 15, seguido por reagentes apropriados para realizar a redução(por exemplo dicloreto de dibutilestanho e fenilsilano). Tipicamente a reaçãoé aquecida (por exemplo 50°C) durante a noite. O solvente foi removido àpressão reduzida aquecendo para 50g C durante a noite. Isolamento atravésde meios convencionais (por exemplo extração) fornece os compostos daFórmula V.
Etapa 2 - Preparação dos compostos da Fórmula VI
Composto da Fórmula V é dissolvido em um solvente não-reativo (por exemplo tetraidrofurano) e tipicamente esfriado para -78e C sobuma atmosfera inerte. A esta mistura é adicionado um reagente de organolítio (por exemplo lítio de metila). A mistura de reação é tipicamente agitadaa -789 C durante várias horas. A esta mistura é adicionado um reagente deorgano lítio (por exemplo lítio de terc-butila), e a mistura é agitada durantevárias horas. A mistura de reação é mantida a -78°C, e um reagente deformilação apropriado (por exemplo carboaldeído de 1-piperidina) éadicionado. Tipicamente, a reação é deixada agitar a -78°C durante umasvárias horas adicionais e lentamente aquecida em temperatura ambiente.Isolamento através de meios convencionais (por exemplo extração) forneceos compostos da Fórmula VI.
Etapa 3 - Preparação dos compostos da Fórmula VII
Composto da Fórmula VI é dissolvido em um solvente não-reativo (por exemplo tetraidrofurano) e agitado sob uma atmosfera inerte. Aesta solução são adicionados uma base (por exemplo trietilamina) etipicamente um catalisador (por exemplo 4-dimetilaminopiridina).Tipicamente, a mistura é agitada durante alguns minutos e depois umreagente apropriado para a introdução de um grupo de proteção (porexemplo di-terc-butildicarbonato) é adicionado. Tipicamente, a reação éagitada durante a noite. Isolamento através de meios convencionais (porexemplo extração) fornece os compostos da Fórmula VII.
Etapa 4 - Preparação dos compostos da Fórmula VIII e IX
1H-pirrol[2,3-b]piridina 4-substituído XXX é adicionado a umasolução de agitação de base (por exemplo hidróxido de potássio) em umsolvente prótico polar apropriado (por exemplo metanol). Composto daFórmula VII é adicionado, e a mistura é tipicamente agitada em temperaturaambiente durante vários dias. O solvente é evaporado, e 1 M HCI éadicionado ao resíduo. Isolamento através de meios convencionais (porexemplo extração, cromatografia de sílica-gel) fornece os compostos da
Fórmula VIII e IX.
Etapa 5 - Preparação dos compostos da Fórmula Ic
Tipicamente, compostos da Fórmula VIII e IX são combinados edissolvidos em um solvente aprótico polar apropriado (por exemploacetonitrila). Reagentes apropriados para realizar a redução (por exemplotrietilsilano e ácido trifluoroacetico) é adicionado. Tipicamente, as reaçõessão agitadas em temperatura ambiente durante vários dias. Isolamentoatravés de meios convencionais (por exemplo extração, cromatografia desílica-gel) fornece os compostos da Fórmula Ic.
Exemplo 10. Síntese de r5-(4-Metóxi-1 H-pirroir2.3-b1piridin-3-ilmetil)-piridin-2-in-(4-trifluorometil-benzin-amina (P-0011)<formula>formula see original document page 140</formula>
[5-(4-Metóxi-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-ilÍ-(4-trifluorometil-benzil)-amina P-0011 foi sintetizada como mostrado noEsquema 12:
Esquema 12
<formula>formula see original document page 140</formula>
Etapa 1: Preparação de (5-Bromo-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benzil)-amina(17)
Em um frasco de fundo redondo provido com agitador econdensador de refluxo foram adicionados 2-amino-5-bromopiridina (15,1,73 mol, 300 g) e p-trifluorometilbenzaldeído (16, 1,723 mol, 300 g) a umasolução de ácido trifluoroacético (400 ml), trietilsilano (825 ml) e acetonitrila(7500 ml). A reação foi aquecida a refluxo durante a noite (24 horas).Solventes foram removidos e o resíduo foi vertido em K2C03 aquoso eextraídos com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura,secada em sulfato de sódio, e concentrada. O composto bruto foi cristalizadocom éter dietílico/hexano para fornecer o composto 17, 420 g (73,6 %) comosólido esbranquiçado. MS (ESI) [M+H+]+ = 331,1 e 333,1 (1:1 razão).
Etapa 2: Preparação de 6-(4-Trifluorometil-benzilamino)-piridino-3-carbaldeído (18)
Em um frasco de fundo redondo de 5 L foram adicionados ocomposto 17 (0,6 mol, 198,6 g,) e tetraidrofurano (2,5 L) sob uma atmosferade argônio a -78Q C. Na mistura de reação 1,7 M de terc-butillítio foiadicionado em pentano (800 ml) por 60 mins. Duas horas após a adição deterc-butillítio, N,N-dimetilformamida (100 ml) foi adicionada. A mistura dereação foi agitada a -78Q C durante 2 horas, depois deixada repousar emtemperatura ambiente outra 1 hora. A mistura de reação foi vertida emsolução de cloreto de amônio saturada e extraída com acetato de etila. Acamada orgânica foi lavada com salmoura, secada em sulfato de sódio,concentrada e triturada com hexano/éter isopropílico (1:1) para dar o aldeídocomposto 18.
Etapa 3: Preparação de éster de terc-butila de ácido (5-Formil-piridin-2-ilH4-trifluorometil-benziD-carbâmico (19)
Em um frasco de fundo redondo de 2 L foram adicionados di-terc-butildicarbonato (90 g), aldeído 18 (75 g), diisopropil etil amina (60 g), 4-dimetilaminopiridina (2,0 g,) e diclorometano (1000,0 ml). A reação foiagitada em temperatura ambiente durante a noite (18 horas) e o solvente foievaporado para dar o composto 19 (94 g).
Etapas 4 e 5: Preparação de r5-(4-Metóxi-1H-pirrolf2,3-blpiridin-3-ilmetil)-piridin-2-in-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0011)
Etapa 4: Em uma solução de metanol (20 ml, 0,5 mol) foiadicionado hidróxido de sódio (0,62 g, 0,016 mol), seguido por 4-metóxi-7-azaindol (20, 600 mg, 4 mmols, preparado como descrito no Exemplo 12).Uma vez a mistura estava homogênea, o composto 19 (1,7 g, 4,46 mmols)foi adicionado e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 48horas. O solvente foi evaporado e HCI diluído foi adicionado ao resíduo. Oresíduo foi extraído com acetato de etila e lavado com 10 % de bicarbonatode sódio, seguido por salmoura. A camada orgânica foi secada em MgS04,filtrada e evaporada para dar para uma mistura de compostos brutos 21 e 22que foram usados na próxima etapa.
Etapa 5: A mistura de 21 e 22 da Etapa 4 (2,36 g, 4,46 mmol) foidissolvida em diclorometano (60 ml, 0,9 mol) ao qual trietilsilano (3,6 ml,0,022 mol) e ácido trifluoroacetico (2,1 ml, 0,027 mol) foram adicionados. Amistura resultante foi agitada durante 48 horas em temperatura ambiente. Osolvente foi evaporado e a mistura foi extraída com diclorometano:metanol(3:1). A camada orgânica foi lavada com bicarbonato saturado seguido porsalmoura. A camada orgânica foi secada em MgS04, filtrada e evaporadapara dar o composto bruto como um resíduo. O resíduo foi purificado atravésde cromatografia instantânea de sílica-gel para dar 1,15 g de P-0011 sólido aum rendimento de 60 %. MS (ESI) [M+H+]+ = 413,24.
[5-(4-Metóxi-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-(4-cloro-benzil)-amina P-0010
<formula>formula see original document page 142</formula>
foi preparada seguindo o protocolo do Esquema 12, substituindo 4-trifluoro-benzilamina com 4-cloro-benzilamina na Etapa 1, MS (ESI) [M+H+]+ = 379,2e 381,2 (3:1 razão).
[5-(4-cloro-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-(4-cloro-benzil)-amina P-0009
<formula>formula see original document page 142</formula>
foi preparada seguindo o protocolo do Esquema 12, substituindo 4-trifluoro-benzilamina com 4-cloro-benzilamina na Etapa 1 e 4-metóxi-7-azaindol com4-cloro-7-azaindol (24, preparado como descrito no Exemplo 11) na Etapa 4,MS (ESI) [M+HT = 381,1 e 383,0.
Exemplo 11: Síntese de 4-cloro-7-azaindol (24)
4-cloro-7-azaindol 24 foi sintetizado em duas Etapas de 7-azaindol de acordo com o protocolo do Esquema 13.
Esquema 13<formula>formula see original document page 143</formula>
Etapa 1 - Síntese de 7-óxido de 1H-Pirroir2,3-blpiridina (23)
7-óxido de 1H-Pirrol[2,3-b]piridina 23 foi sintetizado reagindo 7-azaindol comercialmente disponível 1 com um agente oxidante (por exemplom-CPBA) em um solvente não-reativo (por exemplo dimetoxietano) comodescrito por Schneller, S. W; Luo, Jiann-Kuan. J. Org. Chem. 1980, 45:4045-4048. O composto foi isolado por filtração do sólido resultante que forma sobrepouso a 5e C por tipicamente 1-3 h.
Etapa 2 - Síntese de 4-cloro-7-azaindol (24)
4-cloro-7-azaindol 24 foi sintetizado reagindo 7-óxido de 1H-Pirrol[2,3-b]piridina 23 com um agente de cloração (por exemplo POCI3) purocomo descrito por Schneller, S. W; Luo, Jiann-Kuan. J. Org. Chem. 1980,45:4045-4048. A solução resultante após aquecer por 3-5 h em temperaturaselevadas (100-1509 C) foi neutralizada com base (por exemplo NH4OH) atéque um sólido precipitasse. O sólido foi isolado por filtração.
Exemplo 12: Síntese de 4-metóxi-7-azaindol (20)
4-metóxi-7-azaindol 20 foi sintetizado em uma Etapa de 4-cloro-7-azaindol de acordo com o protocolo do Esquema 14.
Esquema 14
<formula>formula see original document page 143</formula>
4-metóxi-7-azaindol 20 foi preparado reagindo 4-cloro-7-azaindol24 (preparado como descrito no Exemplo 9) com hidróxido de sódio emmetanol como descrito por Girgis, N. et al, J. Heterocyclic. Chem. 1989,26:317-325.
Exemplo 13: Síntese dos compostos da Fórmula I onde n é 1, P é CR30, Q, T,Xi, X2) Y, e Y2 são CH, L1 é -CH2-, L2 é -NHCH2-, e R1 é fenila substituída(Fórmula Id).
Compostos da Fórmula Id onde R30 é um substituinte comodefinido para heteroarileno opcionalmente substituído (também definido noEsquema 13 abaixo) e R31 é um substituinte como definido para arilaopcionalmente substituída, podem ser sintetizados em seis Etapas de 2-halopiridinas apropriadamente substituídas como mostrado no Esquema 15geral a seguir.
Esquema 15
<formula>formula see original document page 144</formula>
Etapa 1 - Preparação dos compostos da Fórmula XI
A uma 2-halopiridina apropriadamente substituída X (porexemplo 2-cloro-6-metoxipiridina), onde Y é um halogênio, preferivelmentecloro ou bromo, e R30 é um grupo apropriado para direcionar a litiação aseguir para a posição 5 (por exemplo R30 = metóxi), em um solvente não-reativo (por exemplo tetraidrofurano) tipicamente esfriado em um banho a -78e C de acetona/gelo seco é adicionada uma solução de reagente deorganolítio (por exemplo terc-butillítio). A reação é deixada agitar durante umperíodo, tipicamente 1 hora. Um agente de formilação apropriado (porexemplo dimetilformamida) é adicionado e a reação é deixada agitar esfriadadurante um período e depois aquecida em temperatura ambiente durante umperíodo, tipicamente 30 minutos. A reação pode ser colocada de volta nobanho de gelo seco e ser extinta com 6 N HCI (1,5 ml) seguido por água edeixada aquecer em temperatura ambiente. Isolamento através de meiosconvencionais (por exemplo extração) fornece os compostos da Fórmula XI.
Etapa 2 - Preparação dos compostos da Fórmula XII
À 1 H-pirrol[2,3-b]piridina 1 e um composto da Fórmula XI éadicionado um solvente polar apropriado (por exemplo metanol) seguido poruma base apropriada (por exemplo hidróxido de potássio). A reação étipicamente deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite.Isolamento através de meios convencionais (por exemplo extração, lavageme filtração) fornece os compostos da Fórmula XII.
Etapa 3 - Preparação dos compostos da Fórmula XIII
A um composto da Fórmula XII em um solvente polar apropriado(por exemplo acetonitrila) é adicionado um agente redutor (por exemploácido trifluoroacético e trietilsilano). Tipicamente, a reação é deixada agitarem temperatura ambiente durante a noite. Isolamento através de meiosconvencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel) forneceos compostos da Fórmula XIII.
Etapa 4 - Preparação dos compostos da Fórmula XIV
A uma solução do composto da Fórmula XIII em um solventepolar apropriado (por exemplo dimetilformamida) é adicionada uma base(por exemplo hidreto de sódio). Tipicamente, a reação é agitada emtemperatura ambiente durante 30 minutos, e depois um reagente apropriadopara introduzir um grupo de proteção ("P") é adicionado (por exemplo cloretode triisopropilsilila). A reação tipicamente é agitada em temperaturaambiente durante várias horas. Isolamento através de meios convencionais(por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece os compostosda Fórmula XIV.
Etapa 5 - Preparação dos compostos da Fórmula XVI
A um composto da Fórmula XIV, uma benzilamina XVapropriadamente substituída (por exemplo 4-(trifluorometil)benzilamina), umabase (por exemplo terc-butóxido de sódio), um catalisador (por exemplotris(dibenzilidenoacetona)dipaládio(0)), e ligando (por exemplo 2,2'-Bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftil) são adicionados a um solvente não-reativo(por exemplo tolueno) sob uma atmosfera inerte. Tipicamente, a reação éaquecida (por exemplo 809 C) durante várias horas. Isolamento através demeios convencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel)fornece os compostos da Fórmula XVI.
Etapa 6 - Preparação dos compostos da Fórmula Id
Ao composto da Fórmula XVI é adicionado um solvente polarapropriado (por exemplo tetraidrofurano) seguido por um reagenteapropriado para remover o grupo de proteção (por exemplo fluoreto de tetra-n-butilamônio). Tipicamente, a reação é deixada agitar em temperaturaambiente durante várias horas. Isolamento através de meios convencionais(por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece os compostosda Fórmula Id.
Exemplo 14: Síntese dos compostos da Fórmula I onde n é 1, P é CR32, Q, T,Xi, X2, Yi e Y2 são CH, L1 é -CH2-, L2 é -NHCH2-, e R1 é fenila substituída(Fórmula le).
Compostos da fórmula Id onde R32 é um substituinte comodefinido para heteroarileno opcionalmente substituído e R33 é um substituintecomo definido para arila opcionalmente substituída, podem ser sintetizadosem cinco Etapas de 2-amino-5-bromopiridinas apropriadamente substituídascomo mostrado no Esquema geral a seguir 16.
Esquema 16
<formula>formula see original document page 146</formula>le
<formula>formula see original document page 147</formula>
Etapa 1 - Preparação dos compostos da Fórmula XIX
A uma solução de um benzaldeído apropriadamente substituídoXVIII (por exemplo benzaldeído de p-trifluorometila) em um solvente não-reativo (por exemplo tetraidrofurano) pode ser adicionado uma 2-amino-5-bromo-piridina apropriada XVII (por exemplo 2-amino-5-bromo-6-metilpiridina), seguido por reagentes apropriados para realizar a redução(por exemplo dicloreto de dibutilestanho e fenilsilano). Tipicamente a reaçãoé aquecida (por exemplo 50s C) durante a noite. Isolamento através demeios convencionais (por exemplo extração) fornece os compostos da
Fórmula IXI.
Etapa 2 - Preparação dos compostos da Fórmula XX
Composto da Fórmula XIX é dissolvido em um solvente não-reativo (por exemplo tetraidrofurano) e tipicamente esfriado para -78Q C sobuma atmosfera inerte. A esta mistura é adicionado um reagente deorganolítio (por exemplo metillítio). A mistura de reação é tipicamenteagitada a -789 C durante várias horas. A esta mistura é adicionado umreagente de organolítio (por exemplo terc-butillítio) e a mistura é agitadadurante várias horas. A mistura de reação é mantida a -789 C, e um reagentede formilação apropriado (por exemplo carboxaldeído de 1-piperidina) éadicionado. Tipicamente, a reação é deixada agitar a -78Q C durante umasvárias horas adicionais e lentamente aquecida em temperatura ambiente.Isolamento através de meios convencionais (por exemplo extração) forneceos compostos da Fórmula XX.
Etapa 3 - Preparação dos compostos da Fórmula XXI
Composto da Fórmula XX é dissolvido em um solvente não-reativo (por exemplo tetraidrofurano) e agitado sob uma atmosfera inerte. Aesta solução é adicionada base (por exemplo trietilamina) e tipicamente umcatalisador (por exemplo 4-dimetilaminopiridina). Tipicamente, a mistura éagitada durante alguns minutos, e depois um reagente apropriado para aintrodução de um grupo de proteção (por exemplo di-terc-butildicarbonato) éadicionado. Tipicamente, a reação é agitada durante a noite. Isolamentoatravés de meios convencionais (por exemplo extração) fornece oscompostos da Fórmula XXI.
Etapa 4 - Preparação dos compostos da Fórmula XXII e XXIII
1H-Pirrol[2,3-b]piridina 1 é adicionada a uma solução agitada debase (por exemplo hidróxido de potássio) em um solvente polar apropriado(por exemplo metanol). Composto da Fórmula XXI é adicionado, e a misturaé tipicamente agitada em temperatura ambiente durante vários dias. Osolvente é evaporado e 1 M HCI é adicionado ao resíduo. Isolamento atravésde meios convencionais (por exemplo extração, cromatografia de sílica-gel)fornece os compostos da Fórmula XXII e XXIII.
Etapa 5 - Preparação dos compostos da Fórmula XIV do Esquema 14
Tipicamente, compostos da Fórmula XII e XIII são combinados edissolvidos em um solvente aprótico polar apropriado (por exemploacetonitrila). Reagentes apropriados para realizar a redução (por exemplotrietilsilano e ácido trifluoro acético) são adicionados. Tipicamente, a reaçãoé agitada em temperatura ambiente durante vários dias. Isolamento atravésde meios convencionais (por exemplo extração, cromatografia de sílica-gel)fornece os compostos da Fórmula le.
Exemplo 15: Síntese de [6-Metóxi-5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0012)
[6-Metóxi-5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-(4-trifluorometil-benzil)-amina P-0012 foi sintetizada em cinco etapas de 2-cloro-6-metoxipiridina e 7-azaindol comercialmente disponíveis comomostrado no Esquema 17.
Esquema 17
<formula>formula see original document page 148</formula><formula>formula see original document page 149</formula>
Etapa 1 - Preparação de 6-cloro-1-metoxipiridina-3-carbaldeído (26)
À 2-Cloro-6-metoxipiridina (25, 0,511 g, 3,56 mmols) emtetraidrofurano (10 ml) esfriada em um banho a -78e C de acetona/gelo secofoi adicionado terc-butillítio (1,7 M em pentano, 5,0 ml, 7,66 mmols). Areação foi deixada agitar durante 1 hora. Dimetilformamida (0,673 ml, 17,4mmols) foi adicionada e a reação foi deixada continuar durante uns 30minutos adicionais a -78- C, depois agitada durante 30 minutos fora dobanho de gelo seco. A reação foi colocada de volta no banho de gelo seco eextinta com 6 N HCI (1,5 ml) seguido por água e deixada aquecer emtemperatura ambiente. A reação foi extraída com éter dietílico e (1 M)bicarbonato de sódio aquoso. A camada orgânica foi separada, secada comsulfato de magnésio anidro, filtrada e os voláteis removidos por evaporaçãorotativa, e o sólido amarelo resultante foi secado sob vácuo para fornecer561 mg do composto 26 (3,27 mmol, 92 % de rendimento). MS(ESI) [M+H+]+ =172,0.
Etapa 2 - Preparação de (6-cloro-2-metoxipiridin-3-il)(1H-pirrolf2,3-blpiridin-3-il)metanol (27)
A 1 H-Pirrol[2,3-b]piridina (1, 0,455 g, 3,85 mmoles) e 6-cloro-2 -metoxipiridina-3-carbaldeído (26, 0,661 g, 3,85 mmoles) foi adicionadometanol (10 ml) seguido por hidróxido de potássio (0,310 g, 5,52 mmols). Areação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. A reaçãofoi extraída com éter de dietila/acetato de etila e água. A camada orgânicafoi separada, secada em sulfato de magnésio anidro, filtrada e os voláteisforam removidos por evaporação rotativa para fornecer um sólido que foitratado com diclorometano e armazenado em um congelador durante a noite.O sólido branco foi coletado por filtração a vácuo e secado a vácuo para dar613 mg do composto 27 (2,12 mmols, 55 %). MS(ESI) [M+H+]+ = 290,1.
Etapa 3 - Preparação 3-(6-cloro-2-metoxipiridin-3-ilmetil)-1H-pirrolf2,3-blpiridina (28)
A (6-cloro-2-metoxipiridin-3-il)(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)metanol(27, 0,613 g, 2,12 mmols) em acetonitrila (10 ml) foi adicionado ácidotrifluoroacético (0,82 ml, 10,0 mmols) seguido por trietilsilano (1,69 ml, 10,6mmols). A reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 2 dias,depois 60- C durante 4 horas. A reação foi extraída com éter dietílico ebicarbonato de sódio aquoso. A camada orgânica foi secada em sulfato demagnésio anidro e filtrada. O material desejado foi isolado do filtrado porcromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 1 % de metanol emdiclorometano para dar 516 mg de um composto 28 sólido branco (1,88mmol, 89 %). MS(ESI) [M+H+]+ = 274,1.
Etapa 4 - Preparação de 3-(6-cloro-2-metoxipiridin-3-ilmetil)-1-(triisopropilsiliD-1 H-pirrolf2,3-blpiridina (29>
A uma solução clara de 3-(6-cloro-2-metoxipiridin-3-ilmetil)-1H-pirrol[2,3-b]piridina (28, 0,516 g, 1,88 mmol) em dimetilformamida (10 ml) foiadicionado hidreto de sódio (60 % dispersão, 0,113 g, 2,82 mmols). Apósagitar em temperatura ambiente durante 30 minutos, cloreto detriisopropilsilila (600 ul, 2,83 mmols) foi adicionado. A reação foi agitada emtemperatura ambiente durante 2 horas, depois vertida em (1 M) bicarbonatode sódio aquoso e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foiseparada, secada (sulfato de magnésio), filtrada e os voláteis foramremovidos por evaporação rotativa para dar um sólido bruto. O composto foipurificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 2 % deacetato de etila em hexanos. Isto forneceu 732 mg do composto desejadocomo um branco, sólido cristalino (29, 1,70 mmol, 90 %). MS(ESI) [M+H+]+ =430,2.
Etapa 5 - Preparação de f6-Metóxi-5-(1-triisopropilsilanil-1 H-pirrolí2.3-blpiridin-3-ilmetil)-piridin-2-ill-(4-trifluorometil-benzil)-amina (31)3-(6-cloro-2-metoxipiridin-3-ilmetil)-1 -(triisopropilsilil)-l H-pirrol[2,3-b]piridina (29, 0,104 g, 0,242 mmol), 4-(Trifluorometil)benzilamina(30, 0,047 g, 0,266 mmol), terc-butóxido de sódio (0,0325 g, 0,338 mmol),Tris(dibenzilidenoacetona)-dipaládio (0) (0,00062 g, 0,0006 mmol), e 2,2'-Bis(difenilfosfino)-1,1 '-binaftila (0,0011 g, 0,0018 mmol) foram adicionados atolueno (2 ml) sob nitrogênio. O frasco de reação foi colocado em um banhode óleo a 809 C durante 3 horas. A reação foi vertida em água e extraídacom acetato de etila. A camada orgânica foi secada (sulfato de magnésio),filtrada, e os voláteis foram removidos por evaporação rotativa. O resíduo foipurificado, por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 2 % deacetato de etila em hexanos. Isto forneceu 34 mg do composto 31 desejado(0,060 mmol, 25 %). MS(ESI) [M+H+]+ = 569,3.
Etapa 6 - Preparação de r6-Metóxi-5-(1H-pirroir2.3-b1piridin-3-ilmetil)-piridin-2-in-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0012)
À [6-Metóxi-5-(1 -triisopropilsilanil-1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-(4-trifluorometil-benzil)-amina (31, 0,0340 g, 0,0598 mmol) foiadicionado tetraidrofurano (5 ml) seguido por fluoreto de tetra-n-butilamônio(solução de 1 M em tetraidrofurano, 66 ul, 0,0658 mmol). A reação foideixada agitar em temperatura ambiente durante 2 horas, depois vertida em1:1 água: bicarbonato de sódio saturado e extraída com acetato de etila. Acamada orgânica foi separada, secada em sulfato de magnésio, filtrada e osvoláteis foram removidos por evaporação rotativa. O resíduo resultante foipurificado através de cromatografia de coluna de sílica-gel, eluindo comdiclorometano seguido por 1 % de metanol em diclorometano e por fim 3 %de metanol em diclorometano. Isto forneceu 20 mg do composto desejadocomo um sólido branco (P-0012, 0,048 mmol, 81 %). MS(ESI) [M+H+]+ =413,2.
Exemplo 16: Síntese de r6-metil-5-(1H-pirroir2,3-blpiridin-3-ilmetil)-piridin-2-ill-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0013)
[6-metil-5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0013) foi sintetizada em cinco etapas de 2-amino-5-bromo-6-metilpiridina e 7-azaindol comercialmente disponíveiscomo mostrado no Esquema 18.
Esquema 18
<formula>formula see original document page 152</formula>
Etapa 1 - Preparação de (5-Bromo-6-metil-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benzil)-amina (34)
A uma solução de p-trifluorometilbenzaldeído (16, 1,00 g, 5,74mmols) em tetraidrofurano (9 nada) foi adicionada 2-amino-5-bromo-6-metilpiridina (33, 1,08 g, 5,77 mmols), seguido por dicloreto de dibutilestanho(40 mg, 0,13 mmol). A mistura foi agitada durante 5 minutos a 25g C efenilsilano (0,69 g, 6,4 mmols) foi adicionado. A reação foi aquecida a 50- Cdurante a noite, depois o solvente foi removido à pressão reduzida. Acetatode etila foi adicionado ao sólido resultante que foi lavado com carbonato desódio saturado, secado em sulfato de magnésio e filtrado. Concentração sobpressão reduzida forneceu um sólido de amarelo claro (34, 1,7 g, 4,93mmols). MS(ESI) [M + H+]+ = 345,1.
Etapa 2 - Preparação de 2-metil-6-(4-trifluorometil-benzilamino)-piridina-3-carbaldeído (35)
(5-Bromo-6-metil-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benzil)-amina (34,1,7 g, 4,93 mmols) foi dissolvida em tetraidrofurano (40 ml) e esfriada para -78e C sob uma atmosfera de nitrogênio. A esta mistura foi adicionadametillítio (1,6 M em éter dietílico, 5,91 mmols) a gotas mais de 20 minutos.Após a adição de metillítio ter sido completada, a mistura de reação foiagitada a -789 C durante 2 horas. A esta mistura foi adicionado terc-butillítio(1,7 M em pentano, 10,85 mmols) e a mistura foi agitada durante 4 horas. Amistura de reação foi mantida a -789 C, e 1-piperidinocarboxaldeído (0,60 ml,5,42 mmols) foi adicionado a gotas. A reação foi deixada agitar a -789 Cdurante umas 2 horas adicionais e aquecimento para 25e C foi alcançado daevaporação lenta do banho refrigerante de gelo/acetona. A reação foi extintacom cloreto de sódio saturado refrigerado em gelo e a mistura resultante foiextraída com acetato de etila. A camada orgânica foi secada em sulfato demagnésio e filtrada. Concentração sob pressão reduzida forneceu um óleolaranja (35, 1,4 g, 4,93 mmols). MS(ESI) [M + H+]+ = 295,1.
Etapa 3 - Preparação de éster de terc-butila de ácido (5-Formil-6-met.il-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benzil)-carbâmico (36)
2-metil-6-(4-trifluorometil-benzilamino)-piridina-3-carbaldeído (35,1,4 g, 4,9 mmols) foi dissolvido em tetraidrofurano (22 ml) e agitado sob umaatmosfera de nitrogênio. A esta solução foram adicionados 4-dimetilaminopiridina (150 mg, 1,23 mmol) e trietilamina (0,66 ml, 4,9 mmols).
A mistura foi agitada durante 5 minutos antes de di-terc-butildicarbonatosólido (1,0 g, 4,9 mmols) ter sido adicionado diretamente à mistura dereação. A mistura foi agitada durante a noite a 25g C e diluída com acetatode etila e lavada com bicarbonato de sódio, seguido lavando com cloreto desódio saturado. A camada orgânica resultante foi secada em sulfato demagnésio, filtrada e evaporada para dar um sólido bege (36, 1,8 g, 4,6mmol). MS(ESI) [M + H+]+ = 395,2.
Etapa 4 - Preparação de éster de terc-butila de ácido (5-[Hidróxi-(1H-pirroir2,3-b1piridin-3-il)-metill-6-metil-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benzil)-carbâmico (37) e éster de terc-butila de ácido (5-[Metóxi-(1H-pirrol[2,3-b1piridin-3-il)-metin-6-metil-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benzil)-carbâmico (38)1H-Pirrol[2,3-b]piridina (1, 540 mg, 4,57 mmols) foi adicionada auma solução de agitação de hidróxido de potássio (868 mg, 10,08 mmols)em metanol (33 ml). Uma vez a mistura estava homogênea, éster de terc-butila de ácido (5-formil-6-metil-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benzil)-carbâmico(36, 1,8 g, 4,6 mmols) foi adicionado e a mistura foi agitada a 25e C durante72 horas. O solvente foi evaporado e 1 M HCI foi adicionado ao resíduo. Omaterial orgânico foi extraído com acetato de etila e lavado com 10 % debicarbonato de sódio, seguido lavando com cloreto de sódio saturado. Acamada orgânica foi secada em sulfato de magnésio. Concentração sobpressão reduzida forneceu o material bruto que foi purificado através decromatografia de coluna de sílica-gel (0 - 5 % de metanol em diclorometano)para render os compostos desejados como um sólido de amarelo claro (37 e38 como uma mistura, 294 mg; 13 % de rendimento). MS(ESI) [M + H+]+ =511,2 para 37 e MS(ESI) [M + H+]+ = 525,2 para 38.
Etapa 5 - Preparação de f6-metil-5-(1H-pirrolí2,3-b1bipiridin-3-ilmetil)-piridin-2-ilH4-trifluorometil-benziD-amina (P-0013)
Os materiais combinados de éster de terc-butila de ácido {5-[Hidróxi-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metil]-6-metil-piridin-2-il}-(4-trifluorometil-benzil)-carbâmico (37) e éster de terc-butila de ácido {5-[Metóxi-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metil]-6-metil-piridin-2-il}-(4-trifluorometil-benzil)-carbâmico (38) (194 mg, 0,378 mmol) foram dissolvidos em acetonitrila (3 ml)e trietilsilano (0,30 ml, 1,9 mmol) e ácido trifluoroacético (0,17 ml, 2,3 mmols)foi adicionado. Após agitar a 259 C para durante a noite, análise de TLCindicou que a reação estava aproximadamente 50 % concluída. À mistura dereação foram adicionados trietilsilano (0,30 ml, 1,9 mmol) e ácidotrifluoroacético (0,17 ml, 2,3 mmol). A mistura foi deixada agitar duranteoutras 48 horas a 259 C e o solvente, trietilsilano de excesso e ácidotrifluoroacético foram removidos por evaporação. Acetato de etila foiadicionado e lavado com bicarbonato de sódio saturado. A camada orgânicafoi secada em sulfato de magnésio, filtrada e concentrada à pressãoreduzida para fornecer um óleo marrom. Purificação de 80 mg do materialbruto foi realizada usando cromatografia preparatória (50 % de acetato deetila em hexanos) para fornecer o composto como um sólido esbranquiçado(P-0013, 10 mg, 0,025 mmol). MS(ESI) [M + H+]+ = 397,2.
(4-Cloro-benzil)-[6-metil-5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina P-0014foi preparada seguindo o protocolo do Esquema 18, substituindo 4-trifluorometil benzaldeído com 4-clorobenzaldeído (40) na Etapa 1, MS(ESI)[M + H+]+ = 363,1.
Exemplo 17: Síntese de í5-(5-Bromo-1H-pirrol[2,3-blpiridin-3-ilmetilVDiridin-2-in-(4-cloro-benzilVamina (P-0038)
[5-(5-Bromo-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-(4-cloro-benzil)-amina P-0038 foi sintetizado em 5 etapas de 2-amino-5-bromopiridina15 comercialmente disponível como mostrado no Esquema 19.
Esquema 19
<formula>formula see original document page 155</formula>
Etapa 1 - Síntese de (5-Bromo-piridin-2-il)-(4-cloro-benzil)-amina (41)
À 2-amino-5-bromopiridina (15, 6,10 g, 0,0352 mol) em tolueno(90,0 ml) foram adicionados 4-clorobenzaldeído (40, 5,00 g, 0,0356 mol),ácido trifluoroacético (8,0 ml, 0,10 mol) e trietilsilano (16,5 ml, 0,103 mol). Areação foi aquecida a refluxo durante 48 horas. A reação foi concentrada,vertida em carbonato de potássio aquoso e extraída com acetato de etila. Acamada orgânica foi lavada com salmoura, secada em sulfato de sódio econcentrada. O resíduo bruto foi cristalizado com acetato de etila para dar ocomposto (41, 6,8 g, 65,4 %).
Etapa 2 - Síntese de 6-(4-Cloro-benzilaminoVpiridina-3-carbaldeído deSíntese (42)
À (5-Bromo-piridin-2-il)-(4-cloro-benzil)-amina (41, 10,00 g,0,03360 mol) em tetraidrofurano (400,0 ml) sob uma atmosfera de nitrogênioa -789 C foi adicionado n-butillítio (17,5 ml, 2,00 M em cicloexano). Após 90minutos, terc-butillítio (42,00 ml, 1,70 M em hexano) foi adicionado à reação.Após 80 minutos, N,N-dimetilformamida (6,9 ml, 0,089 mol) foi adicionado àreação. A mistura de reação foi agitada a -78g C durante 2 horas, depoisdeixada aquecer em temperatura ambiente durante 1 hora. A mistura dereação foi vertida em água e extraída com acetato de etila. A camadaorgânica foi lavada com salmoura, secada em sulfato de sódio econcentrada para dar o composto bruto que foi cristalizado de éter de metilade terc-butoxila para fornecer o composto (42, 7,66 g, 92,2 %).
Etapa 3 - Síntese-de éster de terc-butila de ácido (4-Cloro-benzil)-(5-formil-piridin-2-il)-carbâmico (43)
Ao 6-(4-Cloro-benzilamino)-piridina-3-carbaldeído (42, 2,00 g,8,11 mmol) em diclorometano (20,0 ml) foram adicionados trietilamina (1,70ml, 12,2 mmols), di-terc-butildicarbonato (2,00 g, 9,16 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (52,3 mg, 0,43 mmol). A reação foi agitada emtemperatura ambiente durante 48 horas. A reação foi concentrada epurificada por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 20 % deacetato de etila em hexano para dar o composto (43, 2,50 g, 89,3 %).Etapa 4 - Síntese de éster de terc-butila de ácido (5-f(5-Bromo-1H-pirrolí2,3-blpiridin-3-il)-hidróxi-metin-piridin-2-il)-(4-cloro-benzil)-carbâmico (45)
Ao 5-bromo-7-azaindol (44, 198,0 mg, 1,01 mmol) em metanol(30,0 ml, 0,741 mol) foram adicionados éster de terc-butila de ácido (4-Cloro-benzil)-(5-formil-piridin-2-il)-carbâmico (43, 355,0 mg, 1,02 mmol) e hidróxidode potássio (80,0 mg, 1,42 mmol). A reação foi agitada em temperaturaambiente 48 horas. A mistura de reação foi vertida em água e extraída comacetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada emsulfato de sódio, concentrada e purificada por cromatografia de coluna desílica-gel eluindo com 8 % de metanol em diclorometano para dar ocomposto (45, 200,0 mg, 36,8 %).Etapa 5 - Síntese de [5-(5-Bromo-1H-pirroir2,3-blpiridin-3-ilmetil)-piridin-2-in-(4-cloro-benzil)-amina (P-0038)
Ao éster de terc-butila de ácido {5-[(5-Bromo-1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-hidróxi-metil]-piridin-2-il}-(4-cloro-benzil)-carbâmico (45, 180,0mg, 0,33 mmol) em acetonitrila (30,0 ml) foram adicionados ácidotrifluoroacético (2,0 ml, 0,026 mol) e trietilsilano (4,0 ml, 0,025 mol). A reaçãofoi aquecida a refluxo durante 4 horas. A mistura de reação foi vertida emágua e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada comsalmoura, secada em sulfato de sódio, concentrada e purificada porcromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 10 % de metanol emdiclorometano para dar o composto (P-0038, 120 mg, 85,2 %).MS(ESI)[M+H+]+ = 427,2, 429,2.
Exemplo 18: Síntese de 1 -triisopropilsilanil-1 H-pirroir2,3-blpiridina-3^carbaldeído 47.
Composto 47 foi sintetizado em 2 etapas de 7-azaindol 1 comodescrito no Esquema 20.
Esquema 20
<formula>formula see original document page 157</formula>
Etapa 1 - Preparação de 1 H-pirroir2.3-blpiridina-3-carbaldeído (46):
À 1 H-Pirrol[2,3-b]piridina (1, 16,0 g, 135 mmols) em água (110ml), foram adicionados hexametilenotetramina (26,0 g, 185 mmols), e ácidoacético (55,0 ml, 967 mmols). A reação foi refluxada durante 12 horas. Água(329 ml) foi adicionada e a reação foi esfriada em temperatura ambiente. Areação foi filtrada e lavada com água para dar o composto (46, 15,0 g, 76 %).MS(ESI)[M+H+]+= 147.
Etapa 2 - Preparação de 1 -triisopropilsilanil-1 H-pirroir2.3-b1piridino-3-carbaldeído (47):
Ao 1H-Pirrol[2,3-b]piridino-3-carbaldeído (46, 4,05 g, 27,71mmols) em tetraidrofurano (30,0 ml) foram adicionados hidreto de sódio(60% em óleo mineral, 1,5 g, 38 mmols) e cloreto de triisopropilsilila (8,0 ml,38 mmols) sob uma atmosfera de nitrogênio. A reação foi agitada durante 2horas em temperatura ambiente. A reação foi vertida em água e extraída1 com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secadaem sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado e purificadopor cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 10 % de acetato deetila em hexano para dar o composto (47, 3,0 g, 36 %). MS (ESI) [M+H+]+ =303.
1 -(terc-Butil-dimetil-silanil)-3-iodo-1 H-pirrol[2,3-b]piridina 66
<formula>formula see original document page 158</formula>
foi preparada seguindo o protocolo do Esquema 20 Etapa 2, substituindo 1H-Pirrol[2,3-b]piridina-3-carbaldeído 46 com 3-iodo-1H-pirrol[2,3-b]piridina ecloreto de triisopropilsilila com cloreto de terc-Butil-dimetil-silila.
1 -benzenossulfonil-1 H-pirrol[2,3-b]piridina-3-carbaldeído 55
<formula>formula see original document page 158</formula>
foi preparado seguindo o protocolo do Esquema 20, substituindo cloreto detriisopropilsilila com cloreto de benzenossulfonila na Etapa 2.
Exemplo 19: Síntese de N-[5-(1H-Pirroir2,3-b1piridin-3-ilmetil)-piridin-2-ill-4-trifluorometil-benzenossulfonamida (P-0071)
benzenossulfonamida P-0071 foi sintetizado em 3 etapas de 2-amino-5-bromopiridina 15 como mostrado no Esquema 21.
Esquema 21<formula>formula see original document page 159</formula>
Etapa 1 - Síntese de N-(5-Bromo-piridin-2-il)-4-trifluorometil-benzenossulfonamida (49V.
À 2-amino-5-bromopiridina (15, 1,50 g, 8,67 mmols) emacetonitrila (20,0 ml) foram adicionados piridina (6,0 ml, 0,074 mol), 4-dimetilaminopiridina (0,10 g, 0,82 mmol) e cloreto de 4-trifluorometil-benzenossulfonila (48, 2,14 g, 8,75 mmols). A mistura de reação foi agitadaem temperatura ambiente durante a noite. A reação foi concentrada, vertidaem água, acidificada com 1N HCI para pH = 2, e extraída com acetato deetila. A camada orgânica foi lavada com salmoura, secada em sulfato desódio anidro e concentrada. O resíduo foi lavado com acetato de etila paradar um sólido branco como composto desejado (49, 2,80 g, 84,8 %). MS(ESI) [M+HT = 381,0, 383,0.
Etapa 2 - Síntese de N-5-fHidróxi-(1-triisopropilsilanil-1H-pirrolf2.3-blpiridin-3-il)-metin-piridin-2-il-4-trifluorometil-benzenossulfonamida (50):
À N-(5-Bromo-piridin-2-il)-4-trifluorometil-benzenossulfonamida(49, 0,96 g, 2,5 mmols) em tetraidrofurano (50,0 ml) sob uma atmosfera denitrogênio a -78e C, terc-butillítio (4,62 ml, 1,70 M em hexano) foi adicionadolentamente. Após 15 minutos, 1 -triisopropilsilanil-1 H-pirrol[2,3-b]piridina-3-carbaldeído (47, 0,30 g, 0,99 mmol, preparado como descrito no Exemplo 18)em tetraidrofurano (15,0 ml) foi adicionado à reação. Após 30 minutos, areação foi deixada vir para temperatura ambiente durante 10 minutos. Areação foi vertida em água, acidificada com 1N HCI para por volta de pH 2, eextraída com acetato de etila. A camada orgânica foi secada em sulfato desódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado e purificado porcromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 20 % de acetato de etilaem hexano para dar um composto sólido branco (50, 0,55 g, 90,1 %). MS(ESI) [M+H+]+ = 605,3.
Etaoa 3 - Síntese de N-f5-(1H-Pirroir2,3-blpiridin-3-ilmetil)-piridin-2-ill-4-trifluorometil-benzenossulfonamida (P-0071):
À N-5-[Hidróxi-(1 -triisopropilsilanil-1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metil]-piridin-2-il-4-trifluorometil-benzenossulfonamida (50, 0,27 g, 0,45 mmol)em acetonitrila (15,0 ml) foram adicionados ácido trifluoroacético (1,0 ml,0,013 mol) e trietilsilano (2,0 ml, 0,012 mol). A reação foi aquecida para 85QC durante 1 hora. A reação foi concentrada, vertida em água e extraída comacetato de etila. A camada orgânica foi purificada com cromatografia decoluna de sílica-gel eluindo com 50 % de acetato de etila em hexano paradar um composto sólido branco (P-0071, 28,5 mg, 14,7 %). MS (ESI)[M+H+]+ = 433,2.
4-Cloro-N-[5-(1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-benzamida P-0074
<formula>formula see original document page 160</formula>
foi preparada seguindo o protocolo do Esquema 21, substituindo cloreto de4-trifluorometil-benzenossulfonila 48 com cloreto de 4-cloro-benzoíla na
Etapa 1, MS (ESI) [M+H+]+= 363,2.
Exemplo 20: Síntese de N-f5-(1H-Pirroir2,3-blpiridin-3-ilmetil)-piridin-2-in-4-trifluorometil-benzamida (P-0072)
N-[5-(1H-Pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-4-trifluorometil-benzamida P-0072 foi sintetizada em uma etapa de (3-(6-Bromo-piridin-3-ilmetil)-1-triisopropilsilanil-1 H-pirrol[2,3-b]piridina 6a como mostrado no Esquema 22.
Esquema 22<formula>formula see original document page 161</formula>
Etapa 1 - Síntese de N-[5-(1H-Pirrolí2,3-blpiridin-3-ilmetil)-piridin-2-in-4-trifluorometil-benzamida (P-0072):
À 3-(6-Bromo-piridin-3-ilmetil)-1H-pirrol[2,3-b]piridina (6a, 50,0mg, 0,000174 mol, preparada como descrito no Exemplo 2) em 1,4-dioxano(4,0 ml) foram adicionados 4-trifluorometil-benzamida (51, 70,0 mg, 0,37mmol), Xanthphos (15,0 mg, 0,026 mmol), carbonato de césio (130,0 mg,0,40 mmol) e Tris(dibenzilidenoacetona)-dipaládio(0) (25,0 mg, 0,024 mmol)sob uma atmosfera de nitrogênio. A reação foi aquecida para 120- C durante10 minutos em um instrumento de microonda CEM Discover. A reação foivertida em água e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foisecada em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado epurificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 50 % deacetato de etila em hexano para dar um sólido branco (P-0072, 4,7 mg, 6,8%). MS (ESI) [M+HT = 397,2.
4-Flúor-N-[5-(1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-benzamida P-0073
<formula>formula see original document page 161</formula>
foi preparada seguindo o protocolo do Esquema 22, substituindo 4-trifluorometil-benzamida com 4-fluorometil-benzamida. MS (ESI) [M+H+]+ =347,2.
Exemplo 21: Síntese de (4-Cloro-fenil)-[5-(1H-pirroir2,3-blpiridin-3-ilmetiD-piridin-2-ilmetin-amina (P-0078)
(4-Cloro-fenil)-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-ilmetil]-amina P-0078 foi sintetizada em 3 etapas de 5-Bromo-piridino-2-carbaldeído52 como mostrado no Esquema 23.
Esquema 23<formula>formula see original document page 162</formula>
Etapa 1 - Síntese de (5-Bromo-piridin-2-ilmetil)-(4-cloro-fenil)-amina (54):
Ao 5-Bromo-piridina-2-carbaldeído (52, 1,00 g, 5,38 mmol) emacetonitrila (50,0 ml) foram adicionados p-cloroanilina (53, 0,686 g, 5,38mmol), trietilsilano (6,00 nada, 0,0376 mol) e ácido trifluoroacético (3,00 ml,0,0389 mol). A reação foi aquecida a refluxo durante 3 horas. A reação foiconcentrada, vertida em água e depois extraída com acetato de etila. Acamada orgânica foi secada em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtradofoi concentrado e purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindocom 20 % de acetato de etila em hexano para dar um sólido branco (54, 0,75g, 47,0%).
Etapa 2 - Síntese de (1-Benzenossulfonil-1H-pirrolf2,3-b1piridin-3-il)-6-r(4-cloro-fenilamino)-metill-piridin-3-il-metanol (56):
À (5-Bromo-piridin-2-ilmetil)-(4-cloro-fenil)-amina (54, 0,380 g,1,28 mmol) em tetraidrofurano (15,0 ml) sob uma atmosfera de nitrogênio a -78e C foi adicionado n-butillítio (0,850 ml, 1,60 M em hexano). Após 10minutos, l,2-bis-(cloro-dimetil-silanil)-etano (0,135 g, 0,627 mmol) emtetraidrofurano (5,0 ml) foi adicionado à reação. A reação foi deixadaaquecer em temperatura ambiente durante 40 minutos. A reação foi esfriadapara -78e C, seguido por adição de 1,70 M terc-butillítio em hexano (1,58 ml).
Após 30 minutos, 1-benzenossulfonil-1H-pirrol[2,3-b]piridina-3-carbaldeído(55, 0,380 g, 1,33 mmol, preparado como descrito no Exemplo 18) emtetraidrofurano (10,0 ml) foi adicionado à reação. Após 20 minutos, a reaçãofoi deixada aquecer em temperatura ambiente. A reação foi vertida em águae extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi secada em sulfato desódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado e purificado porcromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 50 % de acetato de etilaem hexano para dar o composto (56, 0,30 g, 46,0 %). MS (ESI) [M+H+]+ =505,3.
Etapa 3 - (4-Cloro-fenil)-5-fmetóxi-(1H-pirroir2,3-b1piridin-3-il)-metill-piridin-2-ilmetil-amina (57):
Ao (1 -Benzenossulfonil-1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-6-[(4-cloro-fenilamino)-metil]-piridin-3-il-metanol (56, 120,0 mg, 0,24 mmol) em metanol(20,0 ml) foram adicionados hidróxido de potássio (0,400 g, 7,13 mmols) eágua (5,0 ml, 0,28 mmol). A reação foi aquecida para 50g C durante 10 horas.
A reação foi vertida em água e extraída com acetato de etila. A camadaorgânica foi secada em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foiconcentrado e purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindocom 20 % de acetato de etila em hexano para dar o composto (57, 30 mg,33,0 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 379,4.
Etapa 4 - Síntese de (4-Cloro-fenil)-r5-(1H-pirrol[2.3-b1piridin-3-ilmetil)-piridin-2-ilmetill-amina (P-0078):
À (4-Cloro-fenil)-5-[metóxi-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metil]-piridin-2-ilmetil-amina (57, 20,8 mg, 0,055 mmol) em acetonitrila (10,0 ml)foram adicionados ácido trifluoroacético (0,50 ml, 6,5 mmols) e trietilsilano(1,00 ml, 6,26 mmols). A reação foi aquecida a refluxo durante 3 horas,depois vertida em água e extraída com acetato de etila. A camada orgânicafoi secada em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado epurificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 10 % demetanol em diclorometano para dar o composto (P-0078, 6,1 mg, 32,0 %).MS (ESI) [M+H+]+ = 349,4.
Exemplo 22: Síntese de (4-Cloro-benzilH6-flúor-5-(1H-pirrolí2,3-blpiridin-3-ilmetin-piridin-2-ill-amina (P-0082)
(4-Cloro-benzil)-[6-flúor-5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina P-0082 foi sintetizada em 8 etapas de 2,6-Difluoropiridina 58como mostrado no Esquema 24.<formula>formula see original document page 164</formula>
Esquema 24
Etapa 1 - Síntese de ácido 2,6-Difluoro-nicotínico (59):
À 2,6-difluoropiridina (58, 7,10 g, 0,0617 mol) em tetraidrofurano(150,0 ml_) sob uma atmosfera de nitrogênio a -78e C, n-butillítio (26,0 uJ,2,50 M em hexano) foi adicionado lentamente. Após 30 minutos, gelo seco(3,0 g) foi adicionado à reação. Após 1 hora, a reação foi deixada aquecerem temperatura ambiente, depois vertida em água e extraída com acetato deetila. A camada aquosafoi acidifiçada com 1 N HCI a pH = 4-5 e extraídacom acetato de etila. A camada orgânica foi secada em sulfato de sódioanidro, filtrada e concentrada para dar o composto bruto como um sólido deamarelo claro (59, 5,6 g, 57,0 %).
Etapa 2 - Síntese de éster de metila de ácido 2,6-Difluoro-nicotínico (60):
Ao ácido 2,6-difluoro-nicotínico (59, 5,60 g, 0,0352 mol) emmetanol (60,0 ml) foi adicionado ácido sulfurico concentrado (1,0 ml, 0,019mol). A reação foi aquecida a refluxo durante a noite, depois vertida em água,basificada com 1 M carbonato de potássio para pH por volta de 9, e extraídacom acetato de etila. A camada orgânica foi secada em sulfato de sódioanidro e concentrada para dar um óleo amarelo (60, 3,5 g, 57,0 %).Etapa 3 - Síntese de éster de metila de ácido 6-(4-Cloro-benzilamino)-2-flúor-nicotínico (62):
Ao éster de metila de ácido 2,6-difluoro-nicotínico (60, 2,00 g,0,0116 mol) em N,N-dimetilformamida (20,0 ml), sob uma atmosfera denitrogênio a -40Q C, foram adicionados p-clorobenzilamina (61, 2,60 ml,0,0214 mol). A reação foi agitada a -409 C a -209 C durante 2 horas, depoisvertida em água e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foisecada em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado epurificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 25 % deacetato de etila em hexano para dar o composto (62, 2,0 g, 58,7 %).
Etapa 4 - Síntese de f6-(4-Cloro-benzilamino)-2-flúor-piridin-3-in-metanol (63):
Ao éster de metila de ácido 6-(4-Cloro-benzilamino)-2-flúor-nicotínico (62, 2,00 g, 6,79 mmols) em tetraidrofurano (100,0 ml) foiadicionado tetraidroaluminato de lítio (13,6 ml, 1,00 M em Tetraidrofurano)sob uma atmosfera de nitrogênio. A reação foi agitada em temperaturaambiente durante a noite. À reação foi adicionada uma quantidade excessivade NaSO4.10H2O, e depois agitada durante 1 hora. Filtração, concentração epurificação com cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 30 % deacetato de etila em hexano forneceram o composto 63 (1,0 g, 55,0 %).
Etapa 5 - Síntese de 6-(4-Cloro-benzilamino)-2-flúor-piridina-3-carbaldeídoÍ64):
Ao [6-(4-Cloro-benzilamino)-2-flúor-piridin-3-il]-metanol (63, 1,0 g,3,7 mmols) em tetraidrofurano (50,0 ml) foi adicionado periodinano de Dess-Martin (1,75 g, 4,12 mmols). A reação foi agitada em temperatura ambientedurante 10 minutos, depois vertida em água e extraída com acetato de etila.
A camada orgânica foi secada em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtradofoi concentrado e purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindocom 20 % de acetato de etila em hexano para dar um sólido branco (64, 0,67g, 68,0 %).
Etapa 6 - Síntese de éster de terc-butila de ácido (4-Cloro-benzil)-(6-flúor-5-formil-piridin-2-il)-carbâmico (65):
Ao 6-(4-Cloro-benzilamino)-2-flúor-piridino-3-carbaldeído (64,670,0 mg, 2,53 mmols) em diclorometano (16,2 ml) foram adicionados di-terc-butildicarbonato (1,23 g, 5,65 mmols) e 4-dimetilaminopiridina (16,2 mg,0,133 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite.A reação foi concentrada e purificada por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 30 % de acetato de etila em hexano para dar um sólidobranco (65, 0,63 g, 68,0 %).
Etapa 7 - Síntese de éster de terc-butila de ácido (5-f 1 -(terc-Butil-dimetil-silanin-1H-pirroir2,3-b1piridin-3-in-hidróxi-metil-6-flúor-piridin-2-il)-(4-cloro-benziO-carbâmico (67V.
À 1-(terc-butil-dimetil-silanil)-3-iodo-1H-pirrol[2,3-b]piridina (66,0,53 g, 0,0015 mol) e tetraidrofurano (15,0 ml), sob uma atmosfera denitrogênio a -20Q C, foi adicionado cloreto de isopropilmagnésio (0,78 ml, 2,0M em tetraidrofurano). A reação foi deixada aquecer para 09 C (por volta de80 minutos), depois esfriada para -209 C, seguido por adição de éster deterc-butila de ácido (4-Cloro-benzil)-(6-flúor-5-formil-piridin-2-il)-carbâmico(65, 0,200 g, 0,55 mmol) em tetraidrofurano (6,0 ml). A reação foi deixadaaquecer em temperatura ambiente em 1 hora, depois vertida em água eextraída com acetato de etila. A camada orgânica foi secada em sulfato desódio anidro, e filtrada. O filtrado foi concentrado e purificado porcromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 20 % de acetato de etilaem hexano para dar um sólido amarelo (67, 0,20 g, 61,1 %). MS (ESI)[M+H+]+ =-597,4.
Etapa 8 - Síntese de (4-Cloro-benzil)-f6-flúor-5-(1H-pirrolf2.3-blpiridin-3-ilmetin-piridin-2-in-amina (P-0082):
Ao éster de terc-butila de ácido (5-[1-(terc-Butil-dimetil-silanil)-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il]-hidróxi-metil-6-flúor-piridin-2-il)-(4-cloro-benzil)-carbâmico (67, 0,10 g, 0,17 mmol) em acetonitrila (10,0 ml) foramadicionados trietilsilano (1,00 ml, 6,26 mmols) e ácido trifluoroacético (0,50ml, 6,5 mmols). A reação foi aquecida a refluxo durante 2 horas, depoisvertida em carbonato de potássio aquoso, e extraída com acetato de etila. Acamada orgânica foi secada em sulfato de sódio anidro, e filtrada. O filtradofoi concentrado e purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindocom 30 % de acetato de etila em hexano para dar um sólido branco (P-0082,43,2 mg, 70,0 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 367,4.
Exemplo 23: Síntese de (4-Cloro-benzilH6-metóxi-5-(1H-pirrolf2,3-blpiridin-3-ilmetil)-piridin-2-ill-amina (P-0081).
(4-Cloro-benzil)-[6-metóxi-5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina P-0081 foi sintetizado em 2 etapas de éster de terc-butilade ácido (4-Cloro-benzil)-(6-flúor-5-formil-piridin-2-il)-carbâmico 65 comomostrado no Esquema 25.
Esquema 25
<formula>formula see original document page 167</formula>
Etapa 1 - Síntese de éster de terc-butila de ácido (4-Cloro-benzil)-5-Fhidróxi-(1 H-pirrolf2,3-blpiridin-3-il)-metill-6-metóxi-piridin-2-il-carbâmico (68):
À 1H-Pirrol[2,3-b]piridina (1, 90,0 mg, 0,76 mmol) em metanol(30,0 [ú) foram adicionados éster de terc-butila de ácido (4-cloro-benzil)-(6-flúor-5-formil-piridin-2-il)-carbâmico (65, 300,0 mg, 0,82 mmol) e hidróxido depotássio (720,0 mg, 12,83 mmols) sob uma atmosfera de nitrogênio. Areação foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas, depois vertidaem água e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foi secada emsulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado e purificado porcromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 20 % de acetato de etilaem hexano para dar o composto (68, 60 mg, 15,9 %). MS (ESI) [M+H+]+ =495,3.
Etapa 2 - Síntese de (4-Cloro-benzil)-[6-metóxi-5-(1H-pirrol[2,3-b1piridin-3-ilmetin-piridin-2-in-amina (P-0081).
Ao éster de terc-butila de ácido (4-Cloro-benzil)-5-[hidróxi-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metil]-6-metóxi-piridin-2-il-carbâmico (68, 40,0 mg,0,081 mmol) em acetonitrila (10,0 ml) foram adicionados ácidotrifluoroacético (0,30 ml, 0,0039 mol) e trietilsilano (0,60 ml, 0,0038 mol). Areação foi aquecida a refluxo durante 3 horas. A reação foi concentrada pararemover os solventes, depois purificada com cromatografia de coluna desílica-gel eluindo com 40 % de acetato de etila em hexano para dar ocomposto (P-0081, 10 mg, 32,7 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 379,4.
Exemplo 24: Síntese de (4-cloro-feniP-amida de ácido 5-(1H-Pirrolf2.3-b1piridin-3-ilmetil)-piridina-2-carboxílico (P-0076)
(4-cloro-fenil)-amida de ácido 5-(1H-Pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridina-2-carboxílico P-0076 foi sintetizado em 3 Etapas de cloreto de 5-Bromo-piridina-2-carbonila 69 como mostrado no Esquema 26.
Esquema 26
<formula>formula see original document page 168</formula>
Etapa 1 - Síntese de (4-cloro-fenil)-amida de ácido S-Bromo-piridina-carboxílico (70):
Ao cloreto de 5-bromo-piridina-2-carbonila (69, 0,76 g, 3,4mmols) em acetonitrila (29,0 ml) foram adicionados p-cloroanilina (53, 0,702g, 5,50 mmols), 4-dimetilamino-piridina (0,12 g, 0,96 mmol) e piridina (2,9 ml,0,036 mol). A reação foi agitada a 68Q C durante a noite, depois vertida emágua, acidificada com 1 N HCI por volta de pH 1 e extraída com acetato deetila. A camada orgânica foi secada em sulfato de sódio anidro e filtrada. Ofiltrado foi concentrado e purificado por cromatografia de coluna de sílica-geleluindo com diclorometano para dar um sólido branco (70, 0,75 g, 70,0 %).
Etapa 2 - Síntese de (4-cloro-fenil)-amida de ácido 5-[Hidróxi-(1-triisopropilsilanil-1 H-pirrolf2,3-blpiridin-3-il)-metill-piridino-2-carboxílico (71):
À (4-cloro-fenil)-amida de ácido 5-Bromo-piridina-2-carboxílico(70, 0,50 g, 1,60 mmol) em tetraidrofurano (20,0 ml), sob uma atmosfera denitrogênio a -78e C, terc-butillítio (3,02 ml, 1,70 M em Hexano) foi adicionado.Após 20 minutos, 1 -triisopropilsilanil-1 H-pirrol[2,3-b]piridino-3-carbaldeído(47, 0,39 g, 1,3 mmol, preparado como descrito no Exemplo 18) emtetraidrofurano (10,0 ml) foi adicionado à reação. A reação foi agitada a -789C durante 1 hora, depois deixada aquecer em temperatura ambiente durante10 minutos. A reação foi vertida em água e extraída com acetato de etila. Acamada orgânica foi secada em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtradofoi concentrado e purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindocom 20 % de acetato de etila em hexano para dar o composto como óleoincolor (71, 100 mg, 14 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 535,3.
Etapa 3 - Síntese de (4-cloro-fenil)-amida de ácido 5-(1H-Pirroir2,3-blpiridin-3-ilmetil)-piridino-2-carboxílico (P-0076).
À (4-cloro-fenil)-amida de ácido 5-[Hidróxi-(1 -triisopropilsilanil-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metil]-piridina-2-carboxílico (71, 100,0 mg, 0,19mmol) em acetonitrila (10,0 ml) foram adicionados ácido trifluoroacético (0,20ml, 2,6 mmols) e trietilsilano (0,40 ml, 2,5 mmols). A reação foi agitada a80°C durante 2 horas. A reação foi concentrada e purificada porcromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 20 % de acetato de etilaem hexano para dar um composto sólido amarelo (P-0076, 5,5 mg, 8,1 %).
MS (ESI) [M-H+]- = 361,1.
Exemplo 25: Síntese de f6-(3-Hidróxi-fenilamino)-piridin-3-in-(1H-pirroir2.3-b1piridin-3-il)-metanona (P-0027)
[6-(3-Hidróxi-fenilamino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona P-0027 foi sintetizado em 1 Etapa de [6-(3-Benzilóxi-fenilamino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona P-0026 como mostrado noEsquema 27.
Esquema 27
<formula>formula see original document page 169</formula>
À [6-(3-Benzilóxi-fenilamino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (P-0026, 12,0 mg, 0,0285 mmol) em metanol (5,0 ml) foramadicionados 20 % de hidróxido de paládio em carbono (10,0 mg) sob umaatmosfera de hidrogênio. A reação foi agitada em temperatura ambientedurante 5 horas. Filtração e concentração deram o composto (P-0027, 3,5mg, 37 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 331.
Exemplo 26: Síntese de 3-f6-(3-Trifluorometil-benzilóxi)-piridin-3-ilmetill-1H-pirrolf2.3-blpiridina P-0057
3-[6-(3-Trifluorometil-benzilóxi)-piridin-3-ilmetil]-1H-pirrol[2,3-b]piridina P-0057 foi sintetizada em 4 etapas de 7-azaindol comercialmentedisponível como mostrado no Esquema 28.
Esquema 28
<formula>formula see original document page 170</formula>
Etapa 1 - Preparação de (6-Cloro-piridin-3-il)-(1H-pirrolf2.3-b1piridin-3-il)-metanona (7):
Ao 7-azaindol 1 em diclorometano foi adicionado cloreto de 6-cloronicotinoíla 8, seguido por cloreto de alumínio, sob uma atmosfera denitrogênio a -10e C. A reação foi agitada e deixada aquecer em temperaturaambiente durante a noite. A reação foi extinta com 3 N ácido clorídrico eácido clorídrico concentrado foi adicionado até que todos os sólidosdissolvessem. A mistura foi extraída com diclorometano e as porçõesorgânicas combinadas foram secadas com sulfato de magnésio, filtradas, e ofiltrado foi concentrado. O material sólido resultante foi recristalizado declorofórmio/hexano para fornecer (6-Cloro-piridin-3-il):(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona 7 e usado na próxima etapa sem outra purificação.
Etapa 2 - Preparação de (1 H-pirrolí2.3-blpiridin-3-il)-f6-(3-trifluorometil-benzilóxi)-piridin-3-ill-metanona (73):
À (6-Cloro-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona 7 emDMSO foi adicionado (3-trifluorometil-fenil)-metanol 72. Hidreto de sódio foiadicionado e a reação foi aquecida para 60g C durante duas horas. A reaçãofoi extinta com água e extraída com acetato de etila. A porção orgânica foisecada com sulfato de magnésio e concentrada para fornecer (1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-[6-(3-trifluorometil-benzilóxi)-piridin-3-il]-metanona 73 que foiusada na próxima etapa sem purificação adicional.
Etapa 3 - Preparação (1H-Pirroir2,3-b1piridin-3-il)-r6-(3-trifluorometil-benzilóxi)-piridin-3-il1-metanol (74):
À (1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-[6-(3-trifluorometil-benzilóxi)-piridin-3-il]-metanona 73 em etanol foram adicionados boroidreto de sódio. Apósuma hora, a reaçãoJoi extinta com água e extraída com acetato de etila. Aporção orgânica foi secada com sulfato de magnésio e concentrada parafornecer (1 H-Pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-[6-(3-trifluorometil-benzilóxi)-piridin-3-il]-metanol 74 que foi usado na próxima etapa sem purificação adicional.Etapa 4 - Preparação de 3-[6-(3-Trifluorometil-benzilóxi)-piridin-3-ilmetin-1 H-pirroir2.3-blpiridina. P-0057.
(1H-Pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-[6-(3-trifluorometil-benzilóxi)-piridin-3-il]-metanol 74 foi dissolvido em 9:1 ácido trifluoroacético: trietilsilano. Areação foi agitada em temperatura ambiente durante 15 horas. A reação foidiluída com água e extraída com acetato de etila e concentrada. O materialbruto foi purificado através de HPLC de fase reversa para fornecer 3-[6-(3-Trifluorometil-benzilóxi)-piridin-3-ilmetil]-1 H-pirrol[2,3-b]piridina P-0057. MS(ESI) [M+HT = 384,3
Compostos adicionais podem ser preparados usando as etapas2-4 do Esquema 28, substituindo (3-trifluorometil-fenil)-metanol com umálcool de benzila apropriado. Os compostos a seguir foram feitos seguindoeste procedimento:
3-[6-(4-Cloro-benzilóxi)-piridin-3-ilmetil]-1H-pirrol[2,3-b]piridina(P-0056)
3-[6-(3-Cloro-benzilóxi)-piridin-3-ilmetil]-1H-pirrol[2,3-b]piridina(P-0055)
Os alcoóis de benzila usados na Etapa 2 deste procedimentosão indicados na coluna 2 da tabela a seguir, com a estrutura de compostoindicada na coluna 3. Coluna 1 prove o número do composto e Coluna oresultado da espectrometria de massa medida
<table>table see original document page 172</column></row><table> Exemplo 27: Síntese de f2-Cloro-6-(4-cioro-benzilamino)-Diridin-3-ilH1H-pirrolí2,3-blpiridin-3-il)-metanona P-0048
[2-Cloro-6-(4-cloro-benzilamino)-piridin-3-il]-(1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona P-0048 foi sintetizada em 3 etapas de ácido 2,6-dicloropiridino-3-carboxílico comercialmente disponível 75 como mostrado noEsquema 29.
Esquema 29
<formula>formula see original document page 172</formula>
Etapa 1 - Preparação de cloreto de 2,6-dicloropiridina-3-carbonila (76):
Ao ácido 2,6-dicloropiridina-3-carboxílico (75, 1,00 g, 0,00521mol) em diclorometano (75 ml) foram adicionados 2 M cloreto de oxalila(2,61 ml, 0,727 g, 0,00573 mol). A solução começou a mostrar evolução degás vigorosa que reduziu mas continuou durante cerca de 2 horas. A reaçãofoi deixada continuar em temperatura ambiente durante umas 3 horasadicionais. A reação foi concentrada para dar o composto como um óleomarrom que cristalizou-se sob repouso (76,1,09 g, 99 %).
Etaoa 2 - Preparação de (2,6-dicloropirídin-3-ilH1H-pirrolf2,3-b1piridin-3-il)metanona (77):
Ao tricloreto de alumínio (4,18 g, 0,0314 mol) e diclorometano(97,5 ml, 1,52 mol) sob uma atmosfera de nitrogênio foi adicionado 1H-Pirrol[2,3-b]piridina (15 828,5 mg, 0,0070 mol) em diclorometano (5,0 ml). Areação foi agitada em temperatura ambiente durante 60 minutos, depoisadicionado cloreto de 2,6-dicloropiridina-3-carbonila (76, 1,09 g, 0,00523 mol)em diclorometano (6,0 ml). A reação foi agitada em temperatura ambientedurante 2 horas. Um precipitado formou-se, e nitrometano foi adicionadosem porções de -1 ml até que quase todos sólido dissolvessem (8 ml). Apósuns 60 minutos adicionais em temperatura ambiente, a reação foi lentamentevertida em água e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foisecada em sulfato de magnésio anidro e filtrada. O filtrado foi concentradopara dar 1,54 g de sólido que ficou púrpuro escuro sob repouso durante anoite. O sólido foi tratado com diclorometano, e o material insolúvel foicolhido através de filtração a vácuo para dar o composto (77, 863 mg, 57 %).MS (ESI) [M+H+]+ = 292,2.
Etapa 3 - Preparação de' r2-Cloro-6-(4-cloro-benzilamino)-piridin-3-ill-(1H-pirrolf2,3-b1piridin-3-il)-metanona (P-0048):
À (2,6-dicloropiridin-3-il)(1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)metanona (77,0,0570 g, 0,195 mmol) foi adicionado 2-propanol (1,5 ml) seguido por p-clorobenzilamina (61, 49,8 ul, 0,410 mmol). A reação foi submetida àmicroonda a 300 watts, 100g C durante 10 minutos, a 120Q C durante 10minutos, e por fim a 150e C durante 10 minutos. P-clorobenzilamina adicional(50 ul, 0,410 mmol) foi adicionado e a reação continuou a 1509 C durante 20minutos. A reação foi extraída com acetato de etila e 1 M de bicarbonato desódio. A camada orgânica foi secada em sulfato de magnésio anidro efiltrada. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia de colunade sílica-gel eluindo com diclorometano seguida por 1 % de metanol paradar o composto (P-0048, 47 mg, 61 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 397,3.
Compostos adicionais podem ser preparados de acordo com oEsquema 29, substituindo ácido 2,6-dicloropiridina-3-carboxílico com umácido carboxílico apropriado. (6-(4-clorobenzilaminò)-2-(trifluorometil)piridin-3-il)(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)metanona P-0070foi feita seguindo este protocolo, usando ácido 6-Cloro-2-trifluorometil-nicotínico como o ácido carboxílico (preparado em duas etapas de 2-cloro-6-(trifluorometil)piridina comercialmente disponível de acordo com Cottet, F. e10 Schlosser, M. Eur. J. Org. Chem. 2004, 3793-3798). MS (ESI) [M+H+]+ =431,2.
Exemplo 28: Síntese de 3-((1H-pirrolí2.3-b1piridin-3-il)metil)-6-(4-ciorobenzilamino)piridin-2-ol P-0051
3-((1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)metil)-6-(4-clorobenzilamino)piridin-2-ol P-0051 foi sintetizado em 2 etapas de [2-Cloro-6-(4-cloro-benzilamino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona P-0048 como mostrado noEsquema 30.
Esquema 30
<formula>formula see original document page 174</formula>
Etapa 1 - Preparação de (6-(4-clorobenzilamino)-2-cloropiridin-3-il)(1H-pirrolí2.3-blpiridin-3-inmetanol (P-0050):
À [2-Cloro-6-(4-cloro-benzilamino)-piridin-3-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (P-0048, 0,045 g, 0,00011 mol, preparada comodescrito no Exemplo 27) foram adicionados metanol (10 ml) e boroidreto desódio (0,00428 g, 0,000113 mol). A reação foi deixada agitar a 50°C durantea noite. Os voláteis foram removidos da reação, e o material resultante foiextraído com acetato de etila e 1 M bicarbonato de sódio aquoso. A camadaorgânica foi secada em sulfato de magnésio e filtrada. O filtrado foiconcentrado e purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindocom diclorometano seguido por 1 % de metanol em diclorometano para dar ocomposto (P-0050, 31 mg, 68 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 399,2.
Etapa 2 - Preparação de 3-((1 H-pirroir2.3-b1piridin-3-il)metil)-6-(4-clorobenzilamino)piridin-2-ol (P-0051):
(6-(4-clorobenzilamino)-2-cloropiridin-3-il)(l H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)metanol (P-0050, 0,028 g, 0,000070 mol) dissolvido emacetonitrila (1 ml) foram adicionados trietilsilano (42,6 uL, 0,000266 mol) eácido trifluoroacético (28,4 uL, 0,000368 mol). A reação foi aquecida para85Q C durante a noite. A reação foi extraída com acetato de etila ebicarbonato de sódio saturado. A camada orgânica foi separada, secada emsulfato de magnésio e filtrada. O filtrado foi concentrado e purificado porcromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com diclorometano, 3 %, 5 % epor fim 10 % de metanol em diclorometano para dar o composto como umsólido branco (P-0051, 20 mg, 78 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 365,3.
Exemplo 29: Síntese de intermediários substituídos de 5 7-azaindol5-(2-Morfolin-4-il-etóxi)-1H-pirrol[2,3-b]piridina 79 foi sintetizadaem 1 Etapa de 5-bromo-azaindol comercialmente disponível como mostradono Esquema 31.
Esquema 31
<formula>formula see original document page 175</formula>
Etapa 1 - 5-(2-Morfolin-4-il-etóxi)-1 H-pirrolf2,3-blpiridina (79):
Ao 4-morfolinoetanol (30 ml, 0,2 mol) em N,N-dimetilformamida(30 ml) foi lentamente adicionado hidreto de sódio (7 g, 60 % dispersão emóleo mineral, 0,2 mol). Após a solução ter ficado clara, uma solução de 5-bromo-7-azaindol (44, 1,0 g, 0,0051 mol) em N,N-dimetilformamida (5 ml) ebrometo de cobre(l) (1,4 g, 0,0098 mol) foi adicionada. A mistura de reaçãofoi agitada a 120Q C sob nitrogênio durante 2 horas. A mistura de reação foiconcentrada e o resíduo foi dissolvido em acetato de etila e água. A camadaorgânica foi colhida, lavada com uma solução de cloreto de amônio ehidróxido de amônio (4:1), salmoura, e secada em sulfato de magnésio.Após remoção do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia decoluna de sílica-gel eluindo com acetato de etila em hexano para fornecer ocomposto como um sólido esbranquiçado (79, 0,62 g, 50 %). MS (ESI)[M+H+]+ = 248,25.
7-azaindóis 5-substituídos adicionais foram preparados seguindoo protocolo do Esquema 31, substituindo 4-morfolinoetanol com qualquer umde 2-dietilamino-etanol, 3-dietilamino-propan-1-ol, 2-piperidin-1 -il-etanol, ou2-pirrolidin-1 -il-etanol para fornecer dietil-[2-(l H-pirrol[2,3-b]piridin-5-ilóxi)-etil]-amina, Dietil-[3-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-5-ilóxi)-propil]-amina, 5-(2-piperidin-1 -il-etóxi)-1 H-pirrol[2,3-b]piridina, e 5-(2-pirrolidin-1 -il-etóxi)-1 H-pirrol[2,3-b]piridina, respectivamente.
Exemplo 30: Síntese de (5-í5-(2-Morfolin-4-il-etóxi)-1H-pirrolí2.3-61piridin-3-ilmetin-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benzil)-amina P-0065:{5-[5-(2-Morfolin-4-il-etóxi)-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil]-piridin-2-il}-(4-trifluorometil-benzil)-amina P-0065 foi sintetizada em 4 Etapas de (5-bromo-piridin-2-il)-(4-trifluorometilbenzil)-amina 17 como mostrado noEsquema 32.
Esquema 32
<formula>formula see original document page 176</formula><formula>formula see original document page 177</formula>
Etapa 1 - Preparação de 6-(4-Trifluorometil-benzilamino)-piridino-3-carbaldeído (18):
A uma solução de (5-bromo-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benzil)-amina (17, 3,55 g, 0,0107 mol, comercialmente disponível, ou preparadacomo descrito no Exemplo 10) em tetraidrofurano (150 ml) foi adicionadoterc-butillítio (13,2 ml, 1,70 M em pentano, 0,0224 mol) lentamente sob umaatmosfera de nitrogênio a -78Q C mais de 10 minutos. A mistura de reação foiagitada a -78Q C durante 90 minutos. N,N-Dimetilformamida (2,2 ml, 0,028mol) foi adicionada lentamente na mistura de reação. A mistura de reação foi agitada a -78Q C durante 2 horas, depois deixada aquecer em temperaturaambiente. Após agitar em temperatura ambiente durante 2 horas, a misturade reação foi vertida em água de gelo e extraída com acetato de etila. A faseorgânica foi lavada com bicarbonato de sódio saturado, salmoura, e secadaem sulfato de magnésio. Após remoção do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com acetato de etila emhexano para fornecer o composto como um sólido de amarelo-claro (18,1,67g, 56 %).
Etapa 2 - Preparação de éster de terc-butila de ácido (5-Formil-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benzil)-carbâmico (19):
A uma solução de 6-(4-tifluorometil-benzilamino)-piridina-3-carbaldeído (18, 3,7 g, 0,013 mol) e di-terc-butildicarbonato (3,4 g, 0,016 mol)em diclilorometano (100 ml) foram adicionados N,N-diisopropiletilamina (4,6ml, 0,026 mol) e 4-dietilaminopiridina (0,2 g, 0,002 mol). A mistura de reaçãofoi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foiconcentrada e depois dissolvida em acetato de etila. A solução foi lavadacom ácido clorídrico (10 %), bicarbonato de sódio saturado, salmoura, esecada em sulfato de magnésio. Após remoção do solvente, o resíduo foipurificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com acetato deetila em hexano para fornecer o composto como um sólido branco (19, 4,38g, 87 %).
Etapa 4 - Preparação de éster de terc-butila de ácido (5-(Hidróxi-[5-(2-morfolin-4-il-etóxi)-1H-pirroir2,3-blpiridin-3-ill-metil)-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benziQ-carbâmico (80):
Uma mistura de éster de terc-butila de ácido (5-Formil-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benzil)-carbâmico (19, 315 mg, 0,828 mmol), 5-(2-morfolin-4-il-etóxi)-1H-pirrol[2,3-b]piridina (79, 205 mg, 0,829 mmol,preparado como descrito no Exemplo 29), e hidróxido de potássio (70 mg, 1mmol) em metanol (25 ml) foi agitada em temperatura ambiente durante anoite. A mistura de reação foi vertida em água de gelo, extraída com acetatode etila, lavada com salmoura, e secada em sulfato de sódio. Após remoçãodo solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica-geleluindo com metanol em diclorometano para fornecer o composto como umsólido amarelo (80, 0,2 g, 40 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 628,42.Etapa 5 - Preparação de (5-r5-(2-Morfolin-4-il-etóxi)-1H-pirroir2,3-blpiridin-3-ilmetill-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0065):
Uma mistura de éster de terc-butila de ácido (5-{Hidróxi-[5-(2-morfolin-4-il-etóxi)-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il]-metil}-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benzil)-carbâmico (80, 0,2 g, 0,3 mmol), trietilsilano (4 ml, 0,02mol), e ácido trifluoroacético (2 ml, 0,02 mol) em acetonitrila (30 ml) foirefluxada durante 2 horas. Após remoção do solvente, o resíduo foidissolvido em acetato de etila, lavado com bicarbonato de sódio saturado,salmoura, e secado em sulfato de magnésio. Após remoção do solvente, oresíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo commetanol em diclorometano para fornecer o composto como um sólido deamarelo-claro (P-0065, 17 mg, 10 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 512,42.
Compostos adicionais podem ser preparados usando etapas 3 e4 do Esquema 32, usando éster de terc-butila de ácido (5-Formil-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benzil)-carbâmico 19 ou substituindo-o com éster de terc-butila de ácido (5-Formil-piridin-2-il)-(4-cloro-benzil)-carbâmico (43,preparado como descrito no Exemplo 17) e substituindo 5-(2-Morfolin-4-il-etóxi)-1H-pirrol[2,3-b]piridina 79 com um azaindol apropriado, preparadocomo no Exemplo 29 ou 5-metóxi-7-azaindol (preparado como descrito noExemplo 31) ou com 5-cloro-7-azaindol comercialmente disponível. Oscompostos a seguir foram feitos seguindo este procedimento:
[5-(5-Metóxi-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0053),
[5-(5-Cloro-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0054),
(4-Cloro-benzil)-[5-(5-metóxi-1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (P-0058),
(4-Cloro-benzil)-[5-(5-cloro-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2- il]-amina(P-0059),
{5-[5-(2-Dietilamino-etóxi)-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil]-piridin-2-il}-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0060),
(4-Cloro-benzil)-{5-[5-(2-morfolin-4-il-etóxi)-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3- ilmetil]-piridin-2-il}-amina (P-0063),
{5-[5-(2-Pirrolidin-1-il-etóxi)-1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil]piridin-2-il}-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0064),
{5-[5-(3-Dietilamino-propóxi)-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil]-piridin-2-il}-(4-trifluorometil-benzil)-amina (P-0066),
(4-Cloro-benzil)-{5-[5-(3-dietilamino-propóxi)-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil]-piridin-2-il}-amina (P-0069).
O aldeído e azaindol usados na Etapa 4 deste procedimento estão indicados nas colunas 2 e 3 da tabela a seguir, respectivamente, coma estrutura de composto indicada na coluna 4. Coluna 1 fornece o númerode referência do composto e Coluna 5 o resultado de espectrometria demassa experimental.<table>table see original document page 180</column></row><table><table>table see original document page 181</column></row><table>
Exemplo 31: Síntese de 3-r6-(4-Trifluorometil-benzilamino)-piridin-3-ilmetil1-1 H-pirrolf2,3-blpiridin-5-ol P-0061:
3-[6-(4-Trifluorometil-benzilamino)-piridin-3-ilmetil]-1H-pirrol[2,3-b]piridin-5-ol P-0061 foi sintetizado em 6 Etapas de 5-bromo-7-azaindol 44como descrito no Esquema 33.
Esquema 33
<formula>formula see original document page 181</formula>
Etapa 1 - Preparação de 5-Metóxi-1H-pirrol[2.3-blpiridina (81):
A uma mistura de 5-bromo-7-azaindol (1 g, 0,005 mol) em N,N-Dimetilformamida (20 ml) e metanol (20 ml) foram adicionados metóxido desódio (13 g, 0,24 mol) e brometo de cobre(l) (0,7 g, 0,0048 mol) emtemperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada a 120e C sobnitrogênio durante 3 horas. A mistura de reação foi concentrada e o resíduofoi dissolvido em acetato de etila e água. A camada orgânica foi colhida,lavada com uma solução de cloreto de amônio e hidróxido de amônio (4:1),salmoura, e secada em sulfato de magnésio. Após remoção do solvente, oresíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo comacetato de etila em hexano para fornecer o composto como um sólidobranco (81, 0,4 g, 50 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 149,09.
Etapa 2 - Preparação de 1 H-Pirroir2,3-blpiridin-5-ol (82):
A uma solução de 5-metóxi-1H-pirrol[2,3-b]piridina (81, 0,5 g, 3mmol) em tetraidrofurano (20 ml) foram adicionados tribrometo de boro (1,5g, 6,0 mmols) a 0°C. A mistura de reação foi deixada aquecer emtemperatura ambiente, depois agitada em temperatura ambiente durante 3horas. A mistura de reação foi extinta através de metanol. Após adiçãorepetida de metanol e remoção do solvente, a mistura de reaçãoconcentrada foi dissolvida em acetato de etila e água. A camada orgânica foicolhida, lavada com salmoura, e secada em sulfato de magnésio. Apósremoção do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna desílica-gel eluindo com acetato de etila em hexano para fornecer o compostocomo um sólido esbranquiçado (82, 0,18 g, 40 %).
Etapa 3 - Preparação de 5-Triisopropilsilanilóxi-1H-pirrolf2.3-blpiridina (83):
A uma solução de 1H-Pirrol[2,3-b]piridin-5-ol (0,5 g, 0,004 mol) e1H-imidazol (0,98 g, 0,014 mol) em N,N-dimetilformamida (5 ml) foiadicionado cloreto de triisopropilsilila (1 ml, 0,005 mol). A mistura de reaçãofoi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Diclorometano (10 ml)foi adicionado e a solução foi lavada com salmoura e secada em sulfato desódio. Após remoção do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografiade coluna de sílica-gel eluindo com acetato de etila em hexano para fornecero composto como um líquido viscoso (83, 0,4 g, 40 %).
Etapa 4 - Preparação de éster de terc-butila de ácido (5-fHidróxi-(5-triisopropilsilanilóxi-1H-pirrolf2,3-b1piridin-3-il)-metill-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benziO-carbâmico (84):
Uma mistura de éster de terc-butila de ácido (5-Formil-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benzil)-carbâmico (19, 41 mg, 0,11 mmol, preparado comodescrito no Exemplo 30), 5-triisopropilsilanilóxi-1H-pirrol[2,3-b]piridme (83, 34mg, 0,12 mmol) e hidróxido de potássio (9,8 mg, 0,17 mmol) em metanol (10ml) foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura dereação foi vertida em água, extraída com acetato de etila, lavada comsalmoura e secada em sulfato de sódio. Após remoção do solvente, oresíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo comacetato de etila em hexano para fornecer o composto como um líquidoviscoso (84, 0,05 g, 70 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 671,38.
Etapa 5 - Preparação de (4-Trifluorometil-benzilH5-(5-triisopropilsilanilóxi-1 H-Dirroir2,3-blpiridin-3-ilmetil)-piridin-2-in-amina (85):
Uma mistura de éster de terc-butila de ácido {5-[hidróxi-(5-triisopropilsilanilóxi-1H-pirrol[2,3 -b]piridin-3-il)-metil]-piridin-2-il}-(4-trifluorometil-benzil)-carbâmico (84, 0,05 g, 0,07 mmol), ácido trifluoroacético(0,5 ml, 0,006 mol), e trietilsilano (1 ml, 0,006 mol) em acetonitrila (10 ml) foirefluxada durante 2 horas. A mistura de reação foi vertida em água de gelo,extraída com acetato de etila, lavada com bicarbonato de sódio saturado,salmoura, e secada em sulfato de sódio. Após remoção do solvente, oresíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo comacetato de etila em hexano para fornecer o composto como um líquidoviscoso (85, 0,04 g, 97 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 555,38.
Etapa 6 - Preparação de 3-f6-(4-Trifluorometil-benzilamino)-piridin-3-ilmetill-1 H-pirroir2,3-blpiridin-5-ol (P-0061V.
À (4-Trifluorometil-benzil)-[5-(5-triisopropilsilanilóxi-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina (85, 0,13 g, 0,23 mmol) emtetraidrofurano (10 ml) foi adicionado fluoreto de tetrabutilamônio (3 ml, 1,0M em tetraidrofurano, 3 mmol). A mistura de reação foi agitada emtemperatura ambiente durante a noite, e depois agitada a 659 C durante 48horas. A mistura de reação foi concentrada e purificada por cromatografia decoluna de sílica-gel eluindo com acetato de etila em hexano para fornecer ocomposto como um líquido viscoso (P-0061, 0,062 g, 66 %). MS (ESI)[M+H+]+ = 399,19.
3-[6-(4-Cloro-benzilamino)-piridin-3-ilmetil]-1H-pirrol[2,3-b]piridin-5-ol P-0062<formula>formula see original document page 184</formula>
foi preparado seguindo o protocolo do Esquema 33, substituindo éster deterc-butila de ácido (5-Formil-piridin-2-il)-(4-trifluorometil-benzil)-carbâmico19 com éster de terc-butila de ácido (5-Formil-piridin-2-il)-(4-cloro-benzil)-carbâmico (43, preparado como descrito no Exemplo 17). MS (ESI) [M+H+]+=365,2.
Exemplo 32: Síntese de N-r5-(1H-Pirrol[2,3-b1piridina-3-carbonil)piridin-2-ill-4-trifluorometil-benzamida P-0067
N-[5-(1H-Pirrol[2,3-b]piridina-3-carbonil)-piridin-2-il]-4-trifluorometil-benzamida P-0067 foi sintetizada em 2 Etapas de 7-azaindol 1como descrito no Esquema 34.
Esquema 34
Etapa 1 - Preparação de (6-Bromo-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-blpiridin-3-il)-metanona (87):
A uma solução de 1H-Pirrol[2,3-b]piridina (1, 1,2 g, 0,010 mol)em diclorometano (50 ml) foi adicionado cloreto de 6-bromo-nicotinoíla (86,2,6 g, 0,012 mol) a -109 C. Após a solução ter ficado clara, tricloreto dealumínio (10,2 g, 0,0765 mol) foi adicionado em uma porção com agitaçãovigorosa. A mistura de reação foi agitada a -10g C durante 30 minutos,depois deixada aquecer em temperatura ambiente e agitada em temperaturaambiente durante a noite. A reação foi extinta com água de gelo eneutralizada com bicarbonato de sódio. A solução foi extraída comdiclorometano, lavada com salmoura, e secada em sulfato de sódio. Apósremoção do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna desílica-gel eluindo com metanol em diclorometano para fornecer o compostocomo um sólido branco (87, 0,35 g, 11 %).
Etapa 2 - Preparação de N-í5-(1H-Pirrolf2.3-b1piridina-3-carbonil)-piridin-2-in-4-trifluorometil-benzamida (P-0067):
Uma mistura de (6-bromo-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (87, 160 mg, 0,53 mmol), benzamida de 4-trifluorometila (51, 130mg, 0,69 mmol), xanthphos (9 mg, 0,02 mmol), carbonato de césio (245 mg,0,752 mmol), e tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio (0) (5 mg, 0,005 mmol)em tolueno (2 ml) em um tubo vedado foi agitada a 110Q C durante 1 hora. Areação foi. extinta com água e extraída com diclorometano. A camadaorgânica foi colhida, lavada com salmoura e secada em sulfato de sódio.
Após remoção do solvente, o resíduo foi purificado com cromatografia decoluna de sílica-gel eluindo com acetato de etila em hexano para fornecer ocomposto como um sólido esbranquiçado (P-0067, 0,42 mg, 19 %). MS (ESI)[M+H+]+ = 411,17.
N-[5-(1H-Pirrol[2,3-b]piridina-3-carbonil)-piridin-2-il]-4-trifluorometil-benzenossulfonamida P-0068
foi preparada seguindo o protocolo do Esquema 34, substituindo 4-trifluorometil benzamida 51 com 4-trifluorometil-benzenossulfonamida naEtapa 2. MS (ESI) [M+H+]+= 445,1.
Exemplo 33: Síntese de f(S)-1-(4-Cloro-fenil)-etilH5-(1H-pirroir2.3-b)-piridin-2-il1piridin-3-ilmetil-amina P-0075
[(S)-1-(4-Cloro-fenil)-etil]-[5-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-piridin-2-il]-amina P-0075 foi sintetizada em 3 Etapas de 7-azaindol 1 comodescrito no Esquema 35.<formula>formula see original document page 186</formula>
Esquema 35
Etapa 1 - Preparação de (6-Bromo-piridin-3-il)-(1H-pirroir2,3-blpiridin-3-il)-metanol (89):
Uma mistura de 1H-Pirrol[2,3-b]piridina (1, 1,2 g, 0,010 mol), 6-bromo-piridino-3-carbaldeído (88, 1,8 g, 0,0097 mol), e hidróxido de potássio(1,8 g, 0,032 mol) em metanol (25 ml) foi agitada em temperatura ambientedurante a noite. A mistura de reação foi vertida em água de gelo, extraídacom acetato de etila, lavada com salmoura, e secada em sulfato de sódio.Após remoção do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia decoluna de sílica-gel eluindo com metanol em diclorometano para fornecer ocomposto como um sólido branco (89, 1,4 g, 45 %), ou pode ser usada comomistura de 89 e 90 na Etapa 2.
Etapa 2 - Preparação de 3-(6-Bromo-piridin-3-ilmetil)-1H-pirroir2.3-blpiridina Í91}:
Uma mistura de (6-bromo-piridin-3-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanol (89, 1 g, 0,003 mol) e 3-[(6-bromo-piridin-3-il)-metóxi-metil]-1H-pirrol[2,3-b]piridina (90, 2 g, 0,006 mol), trietilsilano (1 ml, 0,006 mol), e ácidotrifluoroacético (0,5 ml, 0,006 mol) em acetonitrila (25 ml) foi refluxadadurante 2 horas. A mistura de reação foi concentrada e o resíduo foidissolvido em acetato de etila e água. A camada orgânica foi colhida, lavadacom bicarbonato de sódio saturado, salmoura, e secada em sulfato de sódio.Após remoção do solvente, o resíduo foi purificado com cromatografia decoluna de sílica-gel eluindo com acetato de etila em hexano para fornecer ocomposto como um sólido esbranquiçado (91, 0,75 g, 60 %). MS (ESI)[M+H+]+ = 288,06, 290,00.
Etapa 3 - Preparação de r(S)-1-(4-Cloro-fenil)-etin-r5-(1H-pirrolf2.3-b1piridin-3-ilmetil)-piridin-2-ill-amina P-0075:
Uma mistura de 3-(6-bromo-piridin-3-ilmetil)-1H-pirrol[2,3-b]piridina (91, 100 mg, 0,0003 mol) e (S)-1-(4-cloro-fenil)-etilamina (92, 0,5 g,0,003 mol) em N-metilpirrolidina (3 ml) foi agitada a 150- C em microondadurante 100 minutos. A mistura de reação foi concentrada sob vácuo e oresíduo foi purificado com cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo comacetato de etila em hexano para fornecer o composto como um sólidobranco (P-0075, 0,03 g, 20 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 363,18.
Exemplo 34: Síntese de (4-Cloro-benzilH4-cloro-5-(1H-pirroir2.3-blpiridin-3-ilmetin-tiazol-2-ill-amina P-0083
(4-Cloro-benzil)-[4-cloro-5-(l H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-tiazol-2-il]-amina P-0083 foi sintetizada em 4 etapas de 2,4-Dicloro-tiazol-5-carbaldeído 93 como descrito no Esquema 36.
Esquema 36
<formula>formula see original document page 187</formula>
Etapa 1 - Preparação de 4-Cloro-2-(4-cloro-benzilamino)-tiazol-5-carbaldeídoÍ94):
A uma solução de p-clorobenzilamina (61, 283 mg, 2,00 mmols)e N,N-Diisopropiletilamina (0,697 ml) em tetraidrofurano (20mL) foilentamente adicionado 2,4-Dicloro-tiazol-5-carbaldeído (93, 364 mg, 2,00mmol) em tetraidrofurano (10 ml_) em temperatura ambiente. A reação foiagitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foivertida em água gelada, extraída com acetato de etila, lavada com salmoura,e secada em sulfato de sódio. Após remoção do solvente, o resíduo foipurificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com acetato deetila em hexano para fornecer o composto como um sólido amarelo (94, 0,3g, 50 %). MS (ESI) [M-H+] = 286,97.
Etapa 2 - Preparação de éster de terc-butila de ácido (4-Cloro-benzil)-(4-cloro-5-formil-tiazol-2-il)-carbâmico (95):
A uma solução de 4-Cloro-2-(4-cloro-benzilamino)-tiazol-5-carbaldeído (94, 0,32 g, 0,0011 mol) em diclorometano (20 ml) foilentamente adicionada N,N-diisopropiletilamina (0,4 ml, 0,002 mol), 4-dimetilaminopiridina (27 mg, 0,22 mmol), e uma solução de di-terc-Butildicarbonato (290 mg, 0,0013 mol) em diclorometano (5 ml) emtemperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada em temperaturaambiente durante a noite, depois vertida em água gelada, extraída comdiclorometano, lavada com salmoura, e secada em sulfato de sódio. Apósremoção do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna desílica-gel eluindo com acetato de etila em hexano para fornecer o compostocomo um sólido de marrom-claro (95, 0,32 g, 74 %). MS (ESI) [M+H+] =387,26.
Etapa 3 - Preparação de éster de terc-butila de ácido (4-Cloro-benzil)-(4-cloro-5-fhidróxi-(1-triisopropilsilanil-1H-pirroir2,3-blpiridin-3-il)-metilí-tiazol-2-il)-carbâmico (97):
A uma solução de 3-lodo-1-triisopropilsilanil-1H-pirrol[2,3-b]piridina (96, 99 mg, 0,25 mmol) em tetraidrofurano (5 ml) a -20g C sobnitrogênio 2,0 M de solução isopropilmagnésio cloreto foram adicionados emtetraidrofurano (0,2 ml, 0,31 mmol). A mistura de reação foi agitada durante1,5 hora, depois deixada aquecer para 59 C. Após a mistura de reação tersido esfriada para -20- C, uma solução de éster de terc-butila de ácido (4-Cloro-benzil)-(4-cloro-5-formil-tiazol-2-il)-carbâmico (95, 80 mg, 0,2 mmol)em tetraidrofurano (5 ml) foi lentamente adicionada. A mistura de reação foiagitada por 2,5 h, depois deixada aquecer para 59 C. A mistura de reação foivertida em água gelada, extraída com acetato de etila, lavada com salmoura,e secada em sulfato de magnésio. Após remoção do solvente, o resíduo foipurificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com acetato deetila em hexano para fornecer o composto como um sólido esbranquiçado(97, 76 mg, 50 %). MS (ESI) [M+H+] = 661,32, 663,32.
Etapa 4 - Preparação de (4-Cloro-benzil)-í4-cloro-5-(1 H-pirrolf2.3-blpiridin-3-ilmetilHiazol-2-in-amina (P-0083):
Uma mistura de éster de terc-butila de ácido (4-Cloro-benzil)-{4-cloro-5-[hidróxi-(1 -triisopropilsilanil-1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metil]-tiazol-2-il}-carbâmico (97, 16 mg, 0,11 mmol), trietilsilano (0,5 ml, 3 mmols), e ácidotrifluoroacético (0,25 ml, 3,2 mmols) em acetonitrila (5 ml) foi refluxadadurante 3 horas. A mistura de reação foi vertida em água gelada, extraídocom acetato de etila, lavada com bicarbonato de sódio, salmoura, e secadaem sulfato de sódio. Após remoção do solvente, o resíduo foi purificado porcromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com acetato de etila emhexano para fornecer o composto como um sólido amarelo (P-0083, 5,6 mg,14 %). MS (ESI) [M+H+] = 389,35, 390,36.
Exemplo 35: Síntese de r2-(4-Cloro-benzilamino)-tiazol-5-in-(1H-pirrol[2,3-blpiridin-3-il)-metanona P-0077:
[2-(4-Cloro-benzilamino)-tiazol-5-il]-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona P-0077 foi sintetizado em 2 etapas de ácido 2-Bromo-tiazol-5-carboxílico 98 e 1H-pirrol[2,3-b]piridina 1 como mostrado no Esquema 37.
Esquema 37
<formula>formula see original document page 189</formula>
Etapa 1 - Preparação Síntese de (2-Bromo-tiazol-5-il)-(1H-pirroir2.3-blpiridin-3-il)-metanona (99):
Uma suspensão de ácido 2-Bromo-tiazol-5-carboxílico (98, 0,5 g,0,002 mol) em cloreto de oxalila (3 ml) foi agitada em temperatura ambienteaté que transformasse em uma solução clara. Solvente foi removido e oresíduo foi secado a vácuo. Um sólido amarelo claro foi obtido e dissolvidoem diclorometano (10 ml) e lentamente adicionado a uma solução de 1H-Pirrol[2,3-b]piridina (1, 0,34 g, 0,0029 mol) em diclorometano (30 ml) a -10gC. À mistura foi depois adicionado tricloreto de alumínio (2,6 g, 0,019 mol)em uma porção com agitação vigorosa. A reação foi mantida a -109 Cdurante 30 minutos, depois deixada aquecer em temperatura ambiente. Amistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Areação foi extinta com gelo-água e acidifiçada com ácido clorídrico (10 %)para pH 4. A solução foi depois extraída com diclorometano. A camadaorgânica foi colhida, lavada com salmoura, e secada em sulfato de magnésio.Após remoção do solvente, o resíduo foi purificado por cromatografia decoluna de sílica-gel eluindo com acetato de etila em hexano para fornecer ocomposto como um sólido branco (99, 12 mg, 2 %). MS (ESI) [M-H+] =369,09.
Etaoa 2 - Preparação de r2-(4-Cloro-benzilamino)-tiazol-5-ilH1H-pirrolf2,3-b1piridin-3-il)-metanona (P-0077):
Uma mistura de (2-Bromo-tiazol-5-il)-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-il)-metanona (99, 5 mg, 0,02 mmol), p-clorobenzilamina (61, 10 mg, 0,08 mmol),e N,N-Diisopropiletilamina (10 ul, 0,08 mmol) em tetraidrfurano (10 ml), emum recipiente de reação vedado, foi agitada em temperatura ambientedurante a noite. A mistura de reação foi vertida em água gelada, extraídacom acetato de etila, lavada com salmoura, e secada em sulfato demagnésio. Após remoção do solvente, o resíduo foi purificado porcromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com acetato de etila emhexano para fornecer o composto como um sólido de amarelo-claro (P-0077,2 mg, 30 %). MS (ESI) [M+H+] = 305,90, 307,88.
Exemplo 36: Síntese de 3-((5-cloro-3-metil-1-fenil-1H-pirazol-4-il)metil)-1H-pirrolí2,3-b1piridina P-0080
3-((5-cloro-3-metil-1 -fenil-1 H-pirazol-4-il)metil)-1 H-pirrol[2,3-b]piridina P-0080 foi sintetizado em 2 etapas de 5-clorò-3-metil-1 -fenil-1 H-pirazol-4-carbaldeído 100 e 7-azaindol 1 como mostrado no Esquema 38.
Esquema 38
<formula>formula see original document page 191</formula>
Etapa 1 - Preparação de 3-((5-cloro-3-metil-1-fenil-1H-pirazol-4-il)(metóxi)metil)-1 H-pirroir2.3-blpiridina (P-0079):
À 1H-Pirrol[2,3-b]piridina (1, 0,100 g, 0,846 mmol) e 5-cloro-3-metil-1-fenil-1H-pirazol-4-carbaldeído (100, 0,205 g, 0,931 mmol) foramadicionados 2 ml de metanol para dar uma solução. Hidróxido de potássio(0,0475 g, 0,846 mmol) foi adicionado e a reação foi deixada agitar emtemperatura ambiente durante 48 horas. A reação foi extraída com acetatode etila e água. A camada orgânica foi secada em sulfato de magnésioanidro e filtrada. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia decoluna de sílica-gel eluindo com um gradiente de 0-5 % de metanol emdiclorometano para dar o composto (P-0079, 32 mg, 11 %). MS (ESI)[M+H+]+ = 353,2.
Etapa 2 - Preparação de 3-((5-cloro-3-metil-1-fenil-1H-pirazol-4-il)metil)-1H-pirroir2.3-b1piridina (P-0080):
À 3-((5-cloro-3-metil-1 -fenil-1 H-pirazol-4-il)(metóxi)metil)-1 H-pirrol[2,3-b]piridina (P-0079, 0,030 g,. 0,085 mmol) foi adicionada acetonitrila(10 ml, 0,2 mol). Ácido trifluoroacético (500 uL, 0,006 mol) e trietilsilano (500uL, 0,003 mol) foram adicionados e a reação deixada agitar em temperaturaambiente durante 16 horas. A reação foi extraída com acetato de etila eágua. A camada orgânica foi secada em sulfato de magnésio anidro efiltrada. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia de colunade sílica-gel eluindo com diclorometano seguido 5 % de metanol emdiclorometano para dar o composto como uma espuma amarelada (P-0080,29 mg, 98 %).
Exemplo 37: Domínio de cKit Cinase e Construção de seqüências de c-kit
Seqüência de cDNA de c-kit está disponível de NCBI, porexemplo, como número de acesso de GenBank NM_000222. Usando estaseqüência, seqüências de DNA de c-kit podem ser clonadas de bibliotecascomercialmente disponíveis (por exemplo bibliotecas de cDNA) ou podemser sintetizadas através de métodos de clonagem convencionais.
Usando os métodos de clonagem convencionais, constructosque codificam três polipeptídeos de c-kit foram preparadas, e usadas paraexpressar polipeptídeos de domínio de c-kit cinase. Uma tal seqüência dedomínio de c-kit cinase ativa incluiu os resíduos P551-S948, com a deleçãodos resíduos Q694-T753.
Exemplo 38: Expressão e Purificação do domínio de c-kit cinase
Domínio de c-kit cinase purificado pode ser obtido usandométodos de expressão e de purificação convencionais. Métodos exemplares,por exemplo, são descritos em Lipson et al, U. S. 20040002534 (pedido depatente U. S. 10/600.868, depositado em 23 de junho de 2003) que éincorporado aqui por referência em sua totalidade.
Exemplo 39: Ensaios de ligação
Ensaios de ligação podem ser executados em uma variedade demodos, incluindo uma variedade de modos conhecidos na técnica. Porexemplo, como indicado acima, ensaios de ligação podem ser executadosusando formato de transferência de energia por ressonância defluorescência (FRET), ou usando um AlphaScreen.
Alternativamente, qualquer método que possa medir ligação deum ligando ao sítio de ligação de ATP pode ser usado. Por exemplo, umligando fluorescente pode ser usado. Quando ligado ao c-kit, a fluorescênciaemitida é polarizada. Uma vez deslocado pela ligação de inibidor, apolarização diminui.
Determinação de IC50 para os compostos através de ensaios deligação competitivos. (Note que Ki é a constante de dissociação para ligaçãode inibidor; KD é a constante de dissociação para ligação de substrato). Paraeste sistema, a IC5o, constante de ligação de inibidor e constante de ligaçãode substrato podem ser interrelacionadas de acordo com a Fórmula a seguir:Quando usar substrato radiorrotulado<formula>formula see original document page 193</formula>
o IC50 ~ K1 quando houver uma quantidade pequena de substrato rotulado.Exemplo 40: Ensaios com base em célula de atividade de c-fms cinase ouatividade de c-kit cinase.
Células de RAW264,7 dependentes de M-CSF foram semeadasem uma placa de 12 cavidades, 2,5x105 células/cavidade e as células foramdeixadas ligar durante a noite a 37e C, 5 % de C02. As células foram depoisdesprovidas de meio livre de soro durante a noite a 379 C, 5 % de CO2. Ascélulas foram tratadas com composto durante 1 hora em meios livres de soro(1 % de concentração final de DMSO); e depois estimuladas com 20 ng/mlde M-CSF durante 5 minutos. Após estimulação as células foram lisadas emgelo, e os lisados foram centrifugados a 13.000 rpm durante 1 minuto. Aquantidade de proteína na amostra foi quantificada, tampão de amostra foiadicionado, e as amostras foram fervidas a 95- C durante 10 minutos. Asamostras foram depois centrifugadas a 13.000 rpm durante 1 minuto. Asamostras (15-20 ug/rota) foram carregadas e operadas em 4-12 % de gel detris-glicina a 75V, e depois transferidas sobre uma membrana de PVDF. Amembrana foi bloqueada durante 1 hora com 5 % de BSA em PBS/1 %Tween-20 (PBST); ou 5 % de leite, dependendo do anticorpo primário usado.
Depois os borrões foram incubados com anticorpo primário durante a noite a4 graus com agitação suave. Após incubação com o anticorpo de captura, asmembranas foram lavadas 3x10 minutos com PBST; depois incubadas comanticorpo de detecção de Anti-coelho-HRP de Cabra durante 1 hora, comagitação suave. As membranas foram lavadas 3 x novamente 10 minutoscom PBST. substrato ECL Plus foi depois adicionado aos borrões, a imagemcapturada com câmera quimioluminescencia, e as bandas quantificadas paraníveis de pFMS e de FMS.
Os inibidores de Fms podem também ser avaliados usandolinhagem celular de leucemia mielogenosa de camundongo de M-NFS-60(catálogo ATCC #CRL-1838). Esta proliferação de linhagem celular éestimulada por M-CSF, que liga e ativa o receptor de fms tirosina cinase.Inibidores de atividade de fms cinase reduzem ou eliminam a atividade decinase estimulada por M-CSF, resultando em proliferação celular reduzida.Esta inibição é medida como uma função de concentração de composto paraavaliar os valores de !C5o. Células de M-NFS-60 foram semeadas a 5 x 104células por cavidade de uma placa de cultura de célula de 96 cavidades em50 ul de meio de cultura de célula de RPMI 1640 (catálogo de CelIGroMediatech #10-040-CV) suplementado com 10 % de FBS (catálogo deHyClone #SH30071,03). Os compostos foram dissolvidos em DMSO a umaconcentração de 1 mM e foram serialmente diluídos 1:3 a um total de oitopontos e adicionados às células em concentrações finais de 10, 3,3, 1,1,0,37, 0,12, 0,041, 0,014 e 0,0046 uM em 100 ul de meio de cultura de célula(concentração final 0,2 % de DMSO). Células foram também tratadas comestaurosporina como um controle positivo. As células foram estimuladasadicionando 20 ul de 372 ng/mlde M-CSF a uma concentração final de 62ng/ml (catálogo de R&D Systems #216-MC). As células foram incubadas a37e C, 5 % de C02 durante três dias. Tampão de CelITiter-GIo (catálogo deEnsaio de Viabilidade Celular de Promega #G7573) e substrato foiequilibrado em temperatura ambiente, e enzima/substrato Luciferase deVaga-lume Recombinante/Luciferina de Besouro foi reconstituído. As placasde célula foram equilibradas em temperatura ambiente durante 30 minutos,depois lisadas por adição de um volume equivalente do Reagente deCelltiter-Glo. A placa foi misturada durante 2 minutos em um agitador deplaca para lisar as células, depois incubada durante 10 minutos emtemperatura ambiente. As placas foram lidas em um Victor Wallac II usandoprotocolo de Luminescência modificado para ler 0,1 s por cavidade. A leiturade luminescência avalia o conteúdo de ATP, que correlata diretamente comnúmero de célula de modo que a leitura como uma função de concentraçãode composto foi usada para determinar o valor de IC5o.
Os inibidores de c-kit foram avaliados usando linhagem celularde M-07e (catálogo de DSMZ #ACC 104). A proliferação de M-07e éestimulada por SCF (Fator de Célula-tronco) que liga e ativa receptor de c-kittirosina cinase. Inibidores de c-kit cinase reduzem ou eliminam a ativação decinase mediada por SCF, resultando em proliferação celular reduzida decélulas estimuladas por SCF. Esta inibição é medida pelo efeito daconcentração de composto em crescimento de célula para avaliar os valoresde IC5o. Células de M-07e foram semeadas a 5 x 104 células por cavidade deuma placa de cultura de célula de 96 cavidades em 50 ul de meio de culturade célula do Meio de Iscove IX (MOD, catálogo de CelIGro Mediatech #15-016-CV) suplementado com 10 % de FBS (catálogo de HyClone#SH30071,03). Os compostos foram dissolvidos em DMSO a umaconcentração de 0,1 mM e serialmente diluídos 1:3 a um total de oito pontose adicionados às células em concentrações finais de 1, 0,33, 0,11, 0,037,0,012, 0,0041, 0,0014 e 0,00046 uM em 100 ul de meio de cultura de célula(concentração final 0,2 % de DMSO). Células foram também tratadas comestaurosporina como um controle positivo. Células foram estimuladasadicionando 20 ul de 600 ng/ml de SCF a uma concentração final de 100ng/ml (catálogo de ligando de kit de SCF de Biosource International#PHC2115) em meio de cultura de célula. As células foram incubadas a 37gC, 5 % de C02 durante três dias. Tampão de CelITiter-GIo (catálogo deEnsaio de Viabilidade Celular de Promega #G7573) e substrato foramequilibrados em temperatura ambiente, e enzima/substrato Luciferase deVaga-lume Recombinante/Luciferina de Beetle foram reconstituídos. Asplacas de célula foram equilibradas em temperatura ambiente durante 30minutos, depois lisadas por adição de um volume equivalente do Reagentede Celltiter-Glo. A placa foi misturada durante 2 minutos em um agitador deplaca para lisar as células, depois incubada durante 10 minutos emtemperatura ambiente. As placas foram lidas em um Victor Wallac II usandoprotocolo de Luminescência modificado para ler 0,1s por cavidade. A leiturade luminescência avalia o conteúdo de ATP, que correlata diretamente comnúmero de célula de modo que a leitura como uma função de concentraçãode composto é usada para determinar o valor de IC50.
Este ensaio com base em célula foi também usado para avaliarfosforilação. Amostras foram preparadas com compostos como descritospara o ensaio de inibição de crescimento apenas células de M-07e foramsemeadas a 2 x 105 células por cavidade em uma placa de filtro de 96cavidades. As células foram incubadas durante 1 hora a 37e C com oscompostos como descritos acima, e depois estimuladas adicionando SCF auma concentração final de 50 ng/ml e incubadas durante 10 minutos a 379 C.O meio de cultura foi removido por centrifugação e as células foram lisadaspor adição de 30 ul de tampão de lise (25 mM Tris HCI pH 7,5, 150 mM NaCI,5 mM EDTA, 1 % Triton Xi00, 5 mM NaF, 1 mM NaVanadato, 10 mM Beta-glicerofosfato, nenhum EDTA (catálogo de Boehringer-Roche #1873580) ecolocado em gelo durante 30 minutos. Uma alíquota de 15 ul do lisado foitirada e ensaiada de acordo com o Kit de Imunoensaio de Biosource: c-kitHumano [pY823] (Catálogo #KHO0401) diluindo a alíquota com 85 ul detampão de diluição na placa de ensaio, incubando durante 2 horas emtemperatura ambiente e lavando a placa 4 vezes com tampão de lavagem.
Anticorpo de detecção (100 ul) foram adicionados à placa e amostrasincubadas durante 1 hora em temperatura ambiente, depois lavadas 4 vezescom tampão de lavagem. Anticorpo de anti-coelho de HRP (100 ul) foramadicionados e as amostras incubadas durante 30 minutos em temperaturaambiente, depois lavadas 4 vezes com tampão de lavagem. Cromógenoestabilizado (100 ul) foi adicionado e as amostras incubadas durante 15-25minutos em temperatura ambiente, depois lavadas 4 vezes com tampão delavagem. Solução de parada (100 ul) foi adicionada e as amostrasprosseguidas lendo com uma leitora de Wallac Victor a 450 nm. Aabsorbância foi representada em gráfico contra a concentração de compostoe a concentração de IC50 foi determinada.
Exemplo 41: Ensaios de Atividade de c-kit e c-Fms
O efeito dos moduladores potenciais de atividade de c-kit cinasee outras cinases pode ser medido em uma variedade de ensaios diferentesconhecidos na técnica, por exemplo, ensaios bioquímicos, ensaios com baseem célula e testagem in vivo (por exemplo testagem de sistema modelo).
Tais ensaios e testes in vitro e/ou in vivo podem ser usados na presenteinvenção. Como um ensaio de cinase exemplar, a atividade de c-kit cinaseou Fms é medida em AlphaScreening (Packard BioScience).
Ensaio Bioquímico de c-kit ExemplarO c-kit (ou domínio de cinase deste) é uma cinase ativa emAlphaScreen. Valores de IC5o são determinados com respeito à inibição deatividade de c-kit cinase onde a inibição de fosforilação de um substrato depeptídeo é medida como uma função de concentração do composto.
Compostos a ser testados foram dissolvidos em DMSO para umaconcentração de 20 mm. Estes foram diluídos 30 ul em 120 ul de DMSO (4mM) e 1 ul foi adicionado a uma placa de ensaio. Este foi depois serialmentediluído 1:3 (50 ul para 100 ul de DMSO) a um total de 8 pontos. Placasforam preparadas de modo que cada reação de cinase fosse 20 ul em 1x tampão de cinase (50 mM de HEPES, pH 7,2, 5 mM de MgCI2, 5 mM deMnCI2, 0,01 % de NP-40, 0,2 % de BSA), 5 % DMSO e 10 uM de ATP.Substrato foi 100 nM de biotina-(E4Y)3 (Open Source Biotech, Inc.). Cinasede C-kit foi a 0,1 ng por amostra. Após incubação da reação da cinasedurante 1 hora em temperatura ambiente, 5 pi de contas de doador (contasrevestidas com Estreptavidina (Perkin Elmer Life Science) concentração final1 ug/ml) em tampão de parada (50 mM de EDTA em 1x tampão de cinase)foram adicionados, a amostra foi misturada e incubada durante 20 minutosem temperatura ambiente antes de adicionar 5 ul de contas aceitantes(contas revestidas com PY20 (Perkin Elmer Life Science) concentração final1 pg/ml) em tampão de parada. As amostras foram incubadas durante 60minutos em temperatura ambiente e o sinal por cavidade foi lido em leitorade AlphaQuest. Substrato fosforilado resulta na ligação do anticorpo dePY20 e associação das contas doadoras e aceitantes de modo que o sinalcorrelate com a atividade de cinase. O sinal vs. concentração do compostofoi usado para determinar a IC5o.
Compostos foram também testados usando um ensaio similarcom uma concentração de ATP 10 vezes mais alta. A estas amostras, oscompostos a ser testados foram dissolvidos em DMSO para umaconcentração de 20 mm. Estes foram diluídos 30 ul em 120 ul de DMSO (4mM) e 1 ul foi adicionado a uma placa de ensaio. Este foi depois serialmentediluído 1:3 (50 ul para 100 ul de DMSO) a um total de 8 pontos. Placasforam preparadas de modo que cada reação de cinase fosse 20 ul em 1xtampão de cinase (8 mM MOPs pH 7,0, 1 mM de MgCI2, 2 mM de MnCI2,0,01 % de Tween-20, 1 mM de DTT, e 0,001 % de BSA), 5 % de DMSO e100 uM de ATP. Substrato foi 30 nM de biotina-(E4Y)10 (Upstate Biotech,Cat #12-440). Cinase do C-kit foi a 1 ng por amostra. Após incubação dareação de cinase durante 1 hora em temperatura ambiente, 5 ul de contasde doador (contas revestidas com Estreptavidina (Perkin Elmer Life Science)concentração final 10 ug/ml) em tampão de parada (8 mM de MOPs pH 7,0,100 mM de EDTA, 0,3 % de BSA) foram adicionadas, a amostra foimisturada e incubada durante 20 minutos em temperatura ambiente antes deadicionar 5 ul de contas aceitantes (contas revestidas com PY20 (PerkinElmer Life Science) concentração final 10 ug/ml) em tampão de parada. Asamostras foram incubadas durante 60 minutos em temperatura ambiente e osinal por cavidade foi lido em leitora de AlphaQuest. Substrato fosforiladoresulta na ligação do anticorpo de PY20 e associação das contas doadoras eaceitantes de modo que o sinal correlate com a atividade de cinase. O sinalvs. concentração do composto foi usada para determinar a IC5o.
A enzima de c-kit usada no ensaio acima era qualquer umaobtida de Tecnologia de Sinalização de Célula (Cat. #7754) ou foi preparadacomo segue: Um kit de codificação de plasmídeo (seqüências de proteína deDNA e codificadas mostradas abaixo) foi criado usando métodos comuns dereação em cadeia de polimerase (PCR). DNA complementar clonado devários tecidos humanos foi comprado de Invitrogen, e este foi usado comosubstratos nas reações de PCR. Iniciadores de oligonucleotídeo sintético decostume específicos foram projetados para iniciar o produto de PCR, etambém prover os sítios de restrição de clivagem enzima apropriados paraligação com os plasmídeos. A seqüência inteira que codifica a enzima foifeita através de um procedimento de síntese de gene, usandooligonucleotídeos sintéticos de costume cobrindo a seqüência de codificaçãointeira (Invitrogen, vide abaixo).
O plasmídeo usado para ligação com as inserções decodificação de cinase foi derivado de pET (Novagen) para expressão usandoE. coli. A cinase do Kit foi criada para incluir um rótulo de Histidina parapurificação usando cromatografia de afinidade de metal. O plasmídeo decodificação de cinase foi criado como mRNA bicistrônico para co-expressaruma segunda proteína que modifica a proteína de cinase durante suaexpressão na célula hospedeira. Fosfatase de tirosina de proteína IB (PTP)foi co-expressada para desfosforilação das fosfo-tirosinas.
Para a expressão da proteína, o plasmídeo contendo o gene deKit foi transformado em cepas de E. coli BL21(DE3)RIL e transformantesselecionados para crescimento em placas de LB ágar contendo antibióticosapropriados. Colônias simples foram crescidas durante a noite a 37- C em200 ml de meio de TB (meio de cultura Terrific). 16x1 L de meios de TBfresco em frascos de 2,8 L foram inoculados com 10 ml de cultura durante anoite e crescidos com agitação constante a 379 C. Uma vez as culturasalcançaram uma absorbância de 1,0 a 600 nm, IPTG foi adicionada e asculturas foram deixadas crescer por um adicional de 12 a 18 h emtemperatura variando de 12-30Q C. Células foram colhidas por centrifugaçãoe pelotas geladas a -80- C até pronto para lise.
Para a Purificação da proteína; péletes de célula de E. colicongeladas foram ressuspensas em tampão de lise e lisadas usandométodos mecânicos padrões. Proteína foi purificada por meio de rótulos depoli-Histidina usando purificação de afinidade de metal imobilizado IMAC. Acinase do Kit foi purificada usando um processo de purificação de 3 etapasutilizando: IMAC, cromatografia de exclusão por tamanho e cromatografia depermuta de íons. O rótulo de poli-histidina foi removido usando Trombina(Calbiochem).
Compostos foram ensaiados usando um ensaio similar àquelesdescritos acima, usando em um volume de reação final de 25 fil: c-kit (h) (5-10 mU) em 8 mM de MOPs, pH 7,0, 0,2 mM de EDTA, 10 mM de MnCI2, 0,1mg/ml de poli (Glu, Tyr) 4:1, 10 mM de MgAcetato e y-33P-ATP(aproximadamente 500 cpm/pmol), com concentrações apropriadas docomposto. Incubado durante 40 minutos em temperatura ambiente e paradopor adição de 5 ul de 3 % de ácido fosfórico. Tingido 10 ul de cada amostrasobre Papel de filtro A e lavado 3x com 75 mM de ácido fosfórico, uma vezcom metanol, secado e medido em contador de cintilação (executado emUpstate USA, Charlottesville, VA).
Compostos P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006,P-0007, P-0008, P-0009, P-0010, P-0011, P-0012, P-0013, P-0014, P-0015,P-0016, P-0017, P-0018, P-0020, P-0022, P-0024, P-0025, P-0026, P-0027,P-0028, P-0030, P-0031, P-0032, P-0033, P-0038, P-0053, P-0054, P-0055,P-0056, P-0057, P-0058, P-0059, P-0060, P-0061, P-0062, P-0063, P-0064,P-0065, P-0066, P-0069, P-0071, P-0072, P-0073, P-0074, P-0075, P-0078,e P-0082 tiveram IC50 de menos que 1 uM em pleo menos um dos ensaiosde c-kit descritos acima nos Exemplos 40 e 41.
Kit
Iniciadores de PCR
<table>table see original document page 200</column></row><table><table>table see original document page 201</column></row><table><table>table see original document page 202</column></row><table><table>table see original document page 203</column></row><table>KIT DE PTP DE P1332.N6 BI M552K948-X COD
(Ácido nucléico SEQ ID NO:_) (Proteína SEQ ID NO:_)
taatacgactcactataggggaattgtgagcggataacaatecccctctagaaataattttgtttaactttaagaaggagatataccatgggtcaccaccatcaccatcatatgtacgaa
•MGHHHHHHMYEgttcagtggaaagttgttgaagaaatçaacggtaacaactacgtttacatcgacccgacc
VQ WKVVBE I NGNNYVY ID P Tcagctgccgtacgaccacaaatgggagttcccgcgtaaccgtctgtctttcggtaaaacc
Q L P Y D H K W EFPRNRLS F G K Tctgggtgcgggtgcgttcggtaaagttgttgaagcgaccgcgtacggtctgatcaaatct
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KADKRRSVRIGSYIERDVTPgcgatcatggaagacgacgaactggcgctggacctggaagacctgctgtctttctcttac
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QVAKGMAFLAS KNCIHRDLAgcgcgtaacatcctgctgacccacggtcgtatcaccaaaatctgcgacttcggtctggcg
A RN I Li L T H GRI T K I CD FGLAcgtgacatcaaaaacgactctaactacgttgttaaaggtaacgcgcgtctgccggttaaa
RDIKNDSNYVVKGNARLPVKtggatggcgccggaatctatcttcaactgcgtttacaccttcgaatctgacgtttggtct
WMAPESIFNCVYTFESDVWStacggtatcttcctgtgggaactgttctctctgggttcttctccgtacccgggtatgccg
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Ensaios bioquímicos e baseados em célula adicionais
Em geral, qualquer ensaio de proteína cinase pode ser adaptado5 para uso com o c-kit. Por exemplo, ensaios (por exemplo ensaiosbioquímicos e com base em célula) como descritos em Lipson et al, Publ. dePatente U. S. 20040002534 (incorporada aqui por referência em suatotalidade) podem ser usados na presente invenção.
Testaaem de sistema de modelo in vivo
Para a testagem in vivo, um sistema de modelo animaladequado pode ser selecionado para o uso. Por exemplo, para escerosemúltipla, a encefalomielite alérgica experimental (EAE) de roedor écomumente usada. Este sistema é bem conhecido, e é descrito, por exemplo,em Steinman, 1996, Cell 85:299-302 e Secor et al, 2000, J Exp. Med 5:813-821 que estão incorporados aqui por referência em suas totalidades.
Similarmente, outros sistemas modelos podem ser selecionadose usados na presente invenção.
Ensaio Bioquímico de Fms Exemplar
Valores de IC5o foram determinados com respeito à inibição deatividade de Fms cinase onde inibição de fosforilação de um substrato depeptídeo é medida como uma função de concentração do composto.
Compostos a ser testados, dissolvidos em DMSO (1 ul), foram adicionadosem uma placa de 384 cavidade em branco (Co-Star #3705). Matérias-primasde trabalho de Fms cinase (Upstate Bioteeh, #14-551), substrato de biotina-(E4Y)i0 (Upstate Bioteeh, Cat #12-440), e ATP (Sigma, Cat#A-3377) foipreparado em 8 mM de MOPs pH 7,4, 2 mM de MgCI2, 8 mM de MnCI2, 2mM de DTT, e 0,01 % de Tween-20. Todos os componentes foramadicionados à placa de 384 cavidades para uma concentração final de 0,5ng/cavidade de Fms, 30 nM de biotina-(E4Y)10 (Upstate Biotechnology) e 10uM de ATP em um volume de 20 ul. Cada amostra foi a 5 % de DMSO. Aplaca foi depois incubada durante 60 minutos em temperatura ambiente.Logo antes do uso, matérias-primas de trabalho de contas doadoras eaceitantes do kit de Detecção de AlphaScreen PY20 (PerkinElmer,Cat#676601M) foram preparadas em 8 mM de MOPs, pH 7,4, 100 mM deEDTA, 0,3 % de BSA. Para parar a reação, a placa foi descoberta naescuridão e 5 ul de solução de Contas Doadoras (contas de Estreptavidina)foram adicionados a cada cavidade. A placa foi incubada em temperaturaambiente durante 20 minutos. Cinco microlitros de solução de ContasAceitantes (contas revestidas com PY20) foram depois adicionados a cadacavidade. A concentração final de cada conta foi 20 ug/mL As placas foramincubadas em temperatura ambiente durante 60 minutos. Sinal defluorescência foi registrado na leitora Fusion Aipha ou leitora AlphaQuest.Substrato fosforilado resulta na ligação do anticorpo de PY20 e associaçãodas contas doadoras e aceitantes de modo que o sinal correlate com aatividade de cinase. O sinal vs. concentração do composto foi usado paradeterminar a IC5o.
Compostos foram também testados usando um ensaio similarcom uma concentração de ATP de 10 vezes mais alta. Compostos a sertestados, dissolvidos em DMSO (1 ul), foram adicionados a uma placa 384cavidades em branco (Co-Star #3705). Matérias-primas de trabalho de Fmscinase (Upstate Biotech, #14-551), substrato de biotina-(E4Y)10 (UpstateBiotech, Cat #12-440), e ATP (Sigma, Cat#A-3377) foram preparadas em 8mM de MOPs pH 7,0, 2 mM de MgCI2, 8 mM de MnCI2, 2 mM de DTT, 50mM de NaCI, 0,01 % de BSA, e 0,01 % de Tween-20. Todos oscomponentes foram adicionados à placa de 384 cavidades a umaconcentração final de 0,5 ng/cavidade de Fms, 30 nM de biotina-(E4Y)10(Upstate Biotechnology) e 100 uM de ATP em um volume de 20 ul. Cadaamostra estava a 5 % de DMSO. A placa foi depois incubada durante 20minutos a 30Q C. Logo antes do uso, as matérias-primas de trabalho dascontas doadoras e aceitantes do Kit de Detecção AlphaScreen PY20(PerkinElmer, Cat#676601M) foram preparadas em 8 mM de MOPs, pH 7,0,100 mM de EDTA, 0,01 % de BSA. Para parar a reação, a placa foidescoberta na escuridão e 5 ul de solução de Contas Doadoras (contas deEstreptavidina) foram adicionados a cada cavidade. A placa foi incubada emtemperatura ambiente durante 20 minutos. Cinco microlitros de solução deContas Aceitantes (contas revestidas com PY20) foram depois adicionados acada cavidade. A concentração final de cada conta foi 10 ug/mL. As placasforam incubadas em temperatura ambiente durante 60 minutos. Sinal defluorescência foi registrado na leitora Fusion Alpha ou leitora AlphaQuest.Substrato fosforilado resulta na ligação do anticorpo de PY20 e associaçãodas contas doadoras e aceitantes de modo que o sinal correlate com aatividade de cinase. O sinal vs. concentração do composto foi usado paradeterminar a IC50.
Compostos foram ensaiados usando um ensaio similar àqueledescrito acima, usando em um volume de reação final de 25 Fms (h) (5-10 mU) em 8 mM de MOPs pH 7,0, 0,2 mM de EDTA, 250 mM deKKKSPGEYVNIEFG (SEQ ID NO: _), 10 mM de MgAcetato e y-33P-ATP(aproximadamente 500 cpm/pmol), com concentrações apropriadas docomposto. As amostras foram incubadas durante 40 minutos emtemperatura ambiente e paradas mediante adição de 5 ul de 3 % de ácidofosfórico. 10 ul de cada amostra foram tingidos sobre um papel de filtro P30e lavados 3x com 75 mM de ácido fosfórico, uma vez com metanol, secadose medidos em contador de cintilação (Upstate USA, Charlottesville, VA).
Compostos P-0001, P-0002, P-0003, P-0004, P-0005, P-0006,P-0007, P-0008, P-0009, P-00IO5 P-0011, P-0013, P-0014, P-0015, P-0016,P-0028, P-0032, P-0033, P-0038, P-0053, P-0054, P-0055, P-0056, P-0057,P-0058, P-0059, P-0060, P-0061, P-0062, P-0063, P-0064, P-0065, P-0066,P-0069, P-0072, P-0073, P-0074, P-0075, P-0076, P-0078, P-0081, e P-0082 tiveram IC50 de menos de 1 uM em pelo menos um dos ensaios deFms descritos acima nos Exemplos 40 ou 41.
Exemplo 42: Mutagenese loco-direcionada de c-kit, c-Fms e outras CinasesMutagenese de c-kit e outras cinases (como também outrasseqüências de interesse) pode ser realizada de acordo com o procedimentoa seguir como descrito em Molecular Biology: Current Inovations and FutureTrends. Eds. A. M. Griffin e H. G. Griffin (1995) ISBN 1-898486-01-8, HorizonScientific Press, PO Box 1, Wymondham, Norfolk, U.K, entre outros.
Mutagenese direcionada in vitro é uma técnica inestimável paraestudar relações de estrutura-função das proteínas, expressão de gene emodificação de vetor. Vários métodos apareceram na literatura, mas muitosdestes métodos requerem DNA unifilamentar como o modelo. A razão paraisso, historicamente, foi a necessidade de separar os filamentoscomplementares para impedir reannealamento. Uso de PCR emmutagenese direcionada realiza separação de filamento usando uma etapade desnaturação para separar os filamentos complementando e permitindopolimerização eficiente dos iniciadores de PCR. Métodos de PCR loco-direcionada desse modo permitem incorporar mutações sítio-específicas emvirtualmente qualquer plasmídeo bifilamentar; eliminando a necessidade porvetores com base em M13 ou salvamento unifilamentar.
É freqüentemente desejável reduzir o número de ciclos durantea PCR ao executar mutagênese direcinada com base em PCR para impedirexpansão clonal de quaisquer mutações de segundo-sítio (indesejadas).Ciclismo limitado que resultaria em rendimento de produto reduzido, écompensado aumentando a concentração do modelo de partida. Umaseleção é usada para reduzir o número de moléculas parentais que passampela reação. Também para usar um conjunto de iniciadores de PCR simples,é desejável otimizar o método de PCR longo. Também, por causa daatividade de extendase de algumas polimerases termoestávéis, éfreqüentemente necessário incorporar uma etapa de polimento final noprocedimento antes de ligação de terminação-a-terminação do produtogerado por PCR contendo as mutações incorporadas em um ou ambosiniciadores de PCR.
O protocolo a seguir prove um método fácil para mutagêneseloco-direcionada e realiza as características desejadas acima pelaincorporação das etapas a seguir: (i) aumentar a concentração de modeloaproximadamente 1000 vezes em condições de PCR convencionais; (ii)reduzir o número de ciclos de 25-30 a 5-10; (iii) adicionar a endonuclease derestrição Dpnl (seqüência de reconhecimento alvo: 5-Gm6ATC-3, onde oresíduo A é metilado) para selecionar contra DNA parental (note: DNAisolado de quase todas as cepas comuns de E. coli é metilado com Dam naseqüência 5-GATC-3); (iv) usar Extensor de Taq na mistura de PCR paraconfiança aumentada para PCR para 10 kb; (v) usar Pfu DNA polimerasepara polir as terminações do produto de PCR, e (vi) ligação intramoleculareficiente na presença de DNA T4 ligase.
Dna modelo de plasmídeo (aproximadamente 0,5 pmol) éadicionado a um PCR coquetel contendo, em 25 ul de 1x tampão demutagênese: (20 mM de Tris HCI, pH 7,5; 8 mM de MgCI2; 40 ug/ml de BSA);12-20 pmole de cada iniciador (um destes tem que conter um fosfato de 5-iniciador), 250 uM cada dNTP, 2,5 U de Taq DNA polimerase, 2,5 U deExtensor de Taq (Stratagene).
Os parâmetros de ciclismo PCR são 1 ciclo de: 4 min a 94e C, 2min a 509 C e 2 min a 12- C; seguido por de 5-10 ciclos de 1 min a 94Q C, 2min a 54Q C e 1 min a 729 C (etapa 1).
O DNA de modelo parental e o iniciador de mutagênese linearincorporando o DNA recentemente sintetizado é tratado com Dpnl (10 U) eDNA polimerase de Pfu (2,5U). Isto resultou na digestão de Dpnl do modeloparental metilado in vivo e DNA híbrido e na remoção, através de Pfu DNApolimerase, da(s) base(s) extendida(s) de Taq DNA polimerase no produtode PCR linear.
A reação é incubada a 379 C por 30 min e depois transferidapara 729 C a um adicional de 30 min (etapa 2).
Tampão de mutagênese (1x, 115 ul, contendo 0,5 mM de ATP) éadicionado aos produtos de PCR polidos com Pfu DNA polimerase, digeridoscom Dpnl.
A solução é misturada e 10 ul são removidos em um tubo demicrofuga novo e DNA T4 ligase (2-4 U) adicionada.
A ligação é incubada por mais que 60 min a 37e C (etapa 3).
A solução tratada é transformada em E. coli competente (etapa 4).
Além do mutagênese direcionada baseada em PCR descritaacima, outros métodos estão disponíveis. Exemplos incluem aquelesdescritos em Kunkel (1985) Proc. Natl. Acad. Sei. 82:488-492; Eckstein et al.(1985) Nucl. Acids Res. 13:8764-8785; e usando o GeneEditor™ Site-Directed Mutageneis Sytem de Promega.
Nos Exemplos a seguir, como também acima, nos Exemplos 1-36 é entendido que os solventes e reagentes usados ou sugeridos nãosejam limitativos, e podem ser substituídos apropriadamente com ossolventes e reagentes conhecidos àqueles versados na técnica. Produtos dereação podem ser isolados por meios conhecidos na técnica, como extraçãocom um solvente adequado, precipitação de um solvente adequado,cromatografia usando um sistema de solvente adequado, incluindocromatografia de coluna de sílica-gel, HPLC, TLC preparativa, e outros.
Vias sintéticas disponíveis para a Fórmula
<formula>formula see original document page 210</formula>
Fórmula I
em que Xi, X2, Yi, Y2, L1, An, L2 e R1 são como definidos na fórmula I deou Fórmula Ib
<formula>formula see original document page 210</formula>
Fórmula Ib
em que U, V, W, Z, R1, R15, R16, R17, A, M, E, G, J. K, F e n são comodefinidos na fórmula Ib de [0025] são descritos nos esquemas e exemplosabaixo. Embora os métodos descritos abaixo sejam mostrados em termos daFórmula Ib, estaria claro a alguém versado na técnica que os métodospodem ser usados para preparar compostos da Fórmula I ou Fórmula Ib.Com referência aos esquemas e exemplos abaixo, a menos que claramenteespecificado do contrário, Fórmula e enumeração de composto são definidaspara cada esquema ou exemplo independentemente de tal enumeração norelatório descritivo acima, embora referência geral à fórmula I e Ib indiquemas Fórmulas acima descritas em [0012] e [0026], respectivamente.
Compostos da Fórmula Ib podem ser preparados dos compostosda Fórmula III e fórmula X como descritos no Esquema 39.
Esquema 39:<formula>formula see original document page 211</formula>
Formula III
<formula>formula see original document page 211</formula>
Formula Ib
Composto da Fórmula III, onde R41 é hidrogênio ou um grupo deproteção P (por exemplo fenilsulfona, t-butiloxicarbonila, triisopropilsilila) eR40 é hidrogênio ou um grupo funcional apropriado para o acoplamento (porexemplo Br, SH, OH, CHO etc.) é reagido com o composto da Fórmula Xonde R42 é um grupo funcional apropriadamente escolhido, com base em R40,para formar a ligação A usando condições de acoplamento padrõesconhecidas a alguém versado na técnica para fornecer um composto daFórmula Ib.
Compostos da Fórmula Ib podem ser preparados dos compostosda Fórmula III e Fórmula Xa, onde R43 é um grupo funcional apropriado paraintrodução de M-R, são descritos no Esquema 40.
Esquema 40:
<formula>formula see original document page 211</formula>
Formula Ib
Composto da Fórmula III, onde R41 é hidrogênio ou um grupo deproteção P (por exemplo fenilsulfona, t-butiloxicarbonila, triisopropilsilila) eR40 é hidrogênio ou um grupo funcional apropriado para o acoplamento (porexemplo Br, SH, OH, CHO etc.,) é reagido com o composto da Fórmula Xaonde R42 é um grupo funcional apropriadamente escolhido, com base em R40,e R43 é um grupo funcional apropriado para introduzir M-R1, para formar aligação A usando condições de acoplamento padrões conhecidas a alguémversado na técnica para fornecer o composto da Fórmula II. Composto daFórmula II é funcionalizado também para introduzir M-R1 usando condiçõesconhecidas a alguém versado na técnica para fornecer o composto daFórmula Ib.
Etapas 1 e 2 do Esquema 40 podem ser invertidas de modo queos compostos da Fórmula X sejam preparados dos compostos da FórmulaXa pelos métodos da Etapa 2, seguido acoplando os compostos resultantesda Fórmula X aos compostos da Fórmula III seguindo os métodos da Etapa1.
Muitos compostos da Fórmula X ou Xa do Esquema 39 ou 40estão comercialmente disponíveis ou podem ser preparados em muitas rotasdiferentes conhecidas na literatura, dependendo do sistema de anelespecífico e padrão de substituição que for desejado, incluindo substituiçãode heterociclos contendo nitrogênio, como também síntese de novo doheterociclo aromático.
Síntese geral do composto da Fórmula III do Esquema 39 ou 40onde R40 é H ou um grupo funcional apropriado para acoplar os compostosda Fórmula X ou Xa (por exemplo aldeído, ácido carboxílico, amina) édescrita no Esquema 41.
Esquema 41:
<formula>formula see original document page 212</formula>
Formula lila Formulam
Compostos da Fórmula IIIa, onde U ou Z é C-Br, C-CI, C-NO2 ouC-NH2, podem ser em geral preparados dos compostos heterocíclicos deanel simples ou heterocíclicos de dois anéis fundidos comercialmentedisponíveis apropriados usando métodos conhecidos a alguém versado natécnica. Composto da Fórmula Mia é também submetido à modificação parafornecer compostos apropriadamente substituídos da Fórmula III, onde U ouZ é C-Br, C-CI, C-N02 ou C-NH2, e R41 é H ou grupo de proteção P, usandométodos conhecidos a alguém versado na técnica.
Síntese geral do composto da Fórmula III do Esquema 39 ou 40do composto da Fórmula lllb onde R40 é H, é descrito no Esquema 42.
Esquema 42:
<formula>formula see original document page 213</formula>
Compostos da Fórmula III, onde R41 é hidrogênio ou um grupode proteção P e R40 é apropriado para acoplar os compostos da Fórmula Xou Xa do Esquema 39 ou 40 (por exemplo aldeído, ácido carboxílico, amina)ou apropriado para modificação para tais substituintes (por exemplo éster,nitro) podem também ser preparados dos compostos da Fórmula lllb (aquiR40 é H) usando métodos sintético conhecidos a alguém versado na técnica,por exemplo como descrito por Merour e Joseph em Curr. Org. Chem. 2001,5:471-506.
Além destes esquemas, as reações mostradas nos Exemplos aseguir podem ser combinadas em seqüências diferentes para fornecer oscompostos da Fórmula Ib. Deveria ser considerado que as transformaçõesmostradas nos Esquemas 39-42 e nos Esquemas a seguir e Exemplos comouma etapa simples representam a transformação geral, visto que algunscasos específicos podem requerer mais que uma etapa de reação pararealizar o composto desejado.
Na preparação dos compostos da Fórmula Ib, fórmula II efórmula III pode ser freqüentemente vantajoso substituir o hidrogênio do N-Hno 7-azaindol ou seu análogo com um grupo de proteção comoexemplificado no Esquema 43, Etapa 1. O grupo de proteção pode depoisser removido quando apropriado para revelar o N-H de acordo com a Etapa2.
Esquema 43:<formula>formula see original document page 214</formula>
Etapa 1 - Preparação da Fórmula lllc onde R é um grupo de proteção P
Composto da Fórmula lllc onde R41 é um grupo de proteção Ppode ser preparado dissolvendo o composto da Fórmula llla onde R41 éhidrogênio em um solvente não-reativo (por exemplo dimetilformamida,tetraidrofurano) e adicionando uma base (por exemplo hidróxido de sódioaquoso, hidreto de sódio) e possivelmente um catalisador (por exemplosulfato de hidrogênio de tetrabutilamonio). Um reagente apropriado para aintrodução do grupo de proteção (por exemplo cloreto de fenilsulfònila,cloreto de triisopropilsilila, anidrido de Boc) é depois adicionado e a reação édeixada agitar em uma a várias horas. Isolamento e purificação através demeios convencionais (por exemplo extração, cromatografia de sílica-gel)fornece os compostos da Fórmula lllc onde R43 é um grupo de proteção.
Etapa 2 - Preparação da Fórmula llla onde R41 é hidrogênio
Composto da Fórmula llla onde R41 é hidrogênio pode serpreparado dissolvendo o composto da Fórmula lllc onde R41 é um grupo deproteção P em um solvente adequado (por exemplo etanol, tetraidrofurano,diclorometano) e adicionando um reagente apropriado para a remoção dogrupo de proteção (por exemplo hidróxido de potássio, fluoreto detetrabutilamonio, ácido trifluoroacético). A reação é deixada agitar durante 30minutos a várias horas com aquecimento. Isolamento e purificação atravésde meios convencionais (por exemplo extração, cromatografia de sílica-gel)fornece os compostos da Fórmula llla onde R43 é hidrogênio.
Compostos da Fórmula II acima são similares aos compostos daFórmula Ib como mostrado, onde R43 é definido como M-R1 ou umsubstituinte apropriado para substituição adicional para fornecer M-R1, e R41é hidrogênio ou um grupo de proteção P.<formula>formula see original document page 215</formula> Fórmula II
Compostos da Fórmula II onde U, V, W, Z, J. E, F, G, K são C en é 1 formam os compostos da Fórmula Ha abaixo.
<formula>formula see original document page 215</formula>
Os exemplos providos para a síntese dos compostos da FórmulaIIa são também aplicáveis a muitos compostos que satisfazem outrasdefinições da Fórmula Ib e fórmula II. Por exemplo, 7-azaindol, Composto 1,podem ser substituídos nestas sínteses pelos compostos onde U, V, W, e Zsão diferente de C-H.
Exemplo 43: Síntese dos compostos da Fórmula Ha onde A é CH? ou C(O)
Compostos da Fórmula lia onde A é CH2 ou C(O) podem sersintetizados dos compostos da Fórmula Xb (Fórmula Xa em que R éC(0)H, J. E, F, G e K são C e n é 1) e composto 1 em duas Etapas deacordo com o Esquema 100.
Esquema 100
<formula>formula see original document page 215</formula><formula>formula see original document page 216</formula>
Etapa 1 - Preparação da Fórmula XI onde R44 é hidrogênio ou metila
Ao 7-azaindol 1 e um composto da Fórmula Xb é adicionado umsolvente apropriado (por exemplo solventes polares como • metanol,tetraidrofurano, e acetonitrila, ou solventes apolares como tolueno) seguidopor um hidróxido apropriado ou base de alcóxido (por exemplo hidróxido depotássio, metóxido de sódio). A reação é tipicamente deixada agitar emtemperatura ambiente durante a noite. Isolamento através de meiosconvencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel) forneceos compostos da Fórmula XI onde R44 é hidrogênio ou compostos daFórmula XI onde R44 é metila quando metanol for usado como um solvente,ou uma mistura dos compostos da Fórmula XI onde R44 é hidrogênio oumetila quando metanol for usado como um solvente. Uma mistura resultantepode ser separada através de cromatografia ou usada como uma mistura naEtapa 2.
Etapa 2a - Preparação da Fórmula Ma onde A é CHp
A um composto da Fórmula XI onde R44 é hidrogênio ou metila,em um solvente polar apropriado, (por exemplo acetonitrila) é adicionado umagente redutor (por exemplo ácido trifluoroacético e trietilsilano). Tipicamente,a reação é deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite.
Isolamento através de meios convencionais (por exemplo extração ecromatografia de sílica-gel) fornece os compostos da Fórmula lia onde A éCH2 e R41 é H.
Etaoa 2b - Preparação da Fórmula Ha onde A é C(O)
Composto da Fórmula lia onde A é C(O) é preparado oxidandoum composto da Fórmula XI onde R44 é hidrogênio com um agente oxidanteapropriado (por exemplo Reagente de Dess - Martin, TEMPO) em umsolvente não-reativo (por exemplo tetraidrofurano). Isolamento através demeios convencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel)fornece o composto da Fórmula Ma onde A é C(O) e R41 é H.
A reação do Esquema 100 pode ser aplicada em geral para oscompostos da Fórmula Xa, e também substituindo 7-azaindol 1, com 7-azaindóis substituídos nas posições 4, 5, ou 6, preferível nas posições 4 ou5, para fornecer o compostos da Fórmula I em que é CH e X2, e Y2 sãoCR6, CR4 e CR5, respectivamente, ou Fórmula Ib em que V e W são CH e U e Z são independentemente CR18 O composto da Fórmula Xa pode sercomercialmente disponível, ou pode ser sintetizado seguindo os protocolosdos Exemplos aqui. Como tal, um composto da Fórmula lia onde A é CH2(ou análogo fórmula I, Fórmula Ib) é preparado reagindo um composto de 7-azaindol, opcionalmente substituído na posição 4, 5 ou 6, com um aldeído deheteroarila adequado (Fórmula Xa em que R42 é C(O)H) em um solventeapropriado (por exemplo metanol, tetraidrofurano, acetonitrila, tolueno) comum hidróxido ou base de alcóxido (por exemplo hidróxido de potássio,metóxido de sódio). O composto resultante é reagido em um solvente polar(por exemplo acetonitrila) sob condições redutoras para fornecer o compostodesejado. Um composto da Fórmula Ma onde A é C(O) (ou análogo fórmula I,Fórmula Ib) é preparado reagindo um composto de 7-azaindol,opcionalmente substituído na posição 4, 5 ou 6, com um aldeído deheteroarila adequado (Fórmula Xa em que R42 é C(O)H) em um solventeapropriado (por exemplo metanol, tetraidrofurano, acetonitrila, tolueno) comum hidróxido ou base de alcóxido (por exemplo hidróxido de potássio,metóxido de sódio). Do composto resultante, o intermediário de álcool (porexemplo Fórmula XI onde R44 é OH) é isolado e reagido em um solventenão-reativo (por exemplo tetraidrofurano) sob condições oxidantes parafornecer o composto desejado.
Exemplo 44: Síntese dos compostos da Fórmula Ma onde A é CH? ou C(O)também ser sintetizados dos compostos da Fórmula Xc (Fórmula Xa em queJ, E, F, G e K são C, n é 1, e R42 é um substituinte organometálico T) ecomposto Xc (fórmula III em que U, V, W e Z são CH, R40 é C(0)H e R41 é P)em quatro Etapas de acordo com o Esquema 101.
Esquema 101
<formula>formula see original document page 218</formula>
Etapa 1 - Preparação da Fórmula llld
7-azaindol 1 é tratado com hexametiltetramina e ácido acéticoem água com aquecimento a refluxo durante alguns horas para introduzir umaldeído na posição 3. Este intermediário é isolado por concentração eextração. Um grupo de proteção P é adicionado na posição N-1 dointermediário como descrito no Esquema 43, Etapa 1 para fornecer ocomposto da Fórmula llld.
Etapa 2 - Preparação da Fórmula Xc - onde R42 é T
Composto da Fórmula Xc onde R42 é um substituinteorganometálico T (por exemplo lítio, MgBr) é obtido tratando o composto daFórmula Xc onde R42 é bromo, com um reagente de organolítio (por exemplobutillítio) ou magnésio, ou por meio de ortolitiação com um reagente deorganolítio (por exemplo butillítio) quando R42 for hidrogênio, em um solventenão-reativo (por exemplo tetraidrofurano), tipicamente em temperaturareduzida (por exemplo -78e C) e usado na Etapa 3 sem isolamento.
Etapa 3 - Preparação da Fórmula Xla
Composto da Fórmula Xc onde R42 é T é adicionado aocomposto da Fórmula Xc em um solvente não-reativo (por exemplotetraidrofurano) em temperatura reduzida (por exemplo -78Q C) e agitadodurante várias horas. Após aquecer em temperatura ambiente, isolamentoatravés de meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia desílica-gel) fornece o composto da Fórmula Xla.
Etapa 4a - Preparação da Fórmula Ha onde A é CH
A um composto da Fórmula Xla, em um solvente polarapropriado, (por exemplo acetonitrila) é adicionado um agente redutor (porexemplo ácido trifluoroacético e trietilsilano). Tipicamente, a reação édeixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. Isolamento atravésde meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel),seguido por desproteção do N-P de acordo com o Esquema 43, Etapa 2fornece os compostos da Fórmula lia onde A é CH2 e R41 é H.
Etapa 4b - Preparação da Fórmula Ma onde A é C(O)
Composto da Fórmula Ma onde A é C(O) é preparado docomposto da Fórmula Xla seguindo o protocolo de Exemplo 43, Etapa 2b,seguido por desproteção de acordo com o Esquema 43, Etapa 2 parafornecer o composto onde R41 é H.
Exemplo 45: Síntese dos compostos da Fórmula Ma onde A é C(O) ou CH2
Compostos da Fórmula lia onde A é C(O) ou CH2, podem sersintetizados dos compostos da Fórmula Xd (Fórmula Xa em que J, E, F, G eK são C, n é 1, e R42 é C(O)CI) e composto 1 em uma e duas Etapas,respectivamente, de acordo com o Esquema 102.
Esquema 102<formula>formula see original document page 220</formula>
Etapa 1 - Preparação da Fórmula Ha onde A é C=Q
Composto da Fórmula lia onde A é um carbonila é preparadoreagindo o composto 1 com um cloreto de ácido da Fórmula Xd na presençade um ácido de Lewis (por exemplo tricloreto de alumínio) em um solventenão-reativo (por exemplo diclorometano) com agitação em temperaturaambiente durante várias horas. A reação pode ser extinta com metanol eisolamento através de meios convencionais (por exemplo extração ecromatografia de sílica-gel) fornece o composto da Fórmula lia onde A éC=0 e R41 é H.
Etapa 2 - Preparação da Fórmula Ha onde A é CH?
Composto da Fórmula lia onde A é CH2 pode ser preparadoreagindo o composto lia onde A é C(O) com um agente redutor (por exemplohidreto de alumínio de lítio) em um solvente não-reativo (por exemplotetraidrofurano) durante várias horas. Isolamento através de meiosconvencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece ocomposto da Fórmula Ha onde A é CH2 e R41 é H.
Exemplo 46: Síntese dos compostos da Fórmula Ha onde A é CH?
Compostos da Fórmula lia onde A é CH2 podem ser sintetizadosdo composto 1 em duas Etapas de acordo com o Esquema 103.
Esquema 103<formula>formula see original document page 221</formula>
Etapa 1 - Preparação da Fórmula IIIe
Composto da Fórmula Ilie (fórmula III onde U, V, W e Z são CH,R41 é P e R40 é CH2N(CH3)2) é sintetizado do composto 1 seguindo oprocedimento da literatura (Robinson, J. Am. Chem. Soe, 1955, 77, pág.,457), seguido por proteção do N-H de acordo com o Esquema 43, Etapa 1.
Etapa 2 - Preparação da Fórmula Ma onde A é CH2
Compostos da Fórmula Ma onde A é CH2 é sintetizado atravésda reação dos compostos da Fórmula Mie com formato de cloro de isopropila(ou cloroformiato de etila) em temperatura ambiente em tolueno para dar umintermediário 3-clorometila. Este intermediário, esfriado para -789 C, éreagido com um reagente de organocobre da Fórmula Xc onde R42 é o metal(preparado como descrito no Exemplo 44, etapa 2) e uma solução de cianetode cobre e cloreto de lítio. A reação pode ser agitada a -78e C durante umahora depois deixada aquecer em temperatura ambiente e extinta com umasolução de 4:1 cloreto de amônio: hidróxido de amônio. Isolamento atravésde meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel)fornece o composto da Fórmula Ha onde A é CH2 e R41 é P que pode serremovido de acordo com o Esquema 43 Etapa 2 para fornecer o compostoonde R41 é H.
Exemplo 47: Síntese dos compostos da Fórmula Ha onde A é O
Compostos da Fórmula lia onde A é O podem ser sintetizadosdo composto 1 em duas Etapas de acordo com o Esquema 104, Esquema104<formula>formula see original document page 222</formula>
Etapa 1 - Preparação do Composto 400
3-bromo-7-azaindol 400 pode ser preparado dissolvendo 7-azaindol 1 em clorofórmio e lentamente adicionando Br2 em tetracloreto decarbono a 0g C. Após agitar durante 1-2 horas, a reação pode ser extinta emácido clorídrico aquoso. Isolamento através de meios convencionais (porexemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece o composto 400.
Etapa 2 - Preparação da Fórmula Ha onde A é O
Composto da Fórmula lia onde A é O é preparado reagindo 3-bromo-7-azaindol 400, protegido em N-H de acordo com o Esquema 43,Etapa 1, com composto da Fórmula Xe (Fórmula Xa em que J. E, F, G e Ksão C, n é 1, e R42 é OH) na presença de uma base (por exemplo hidreto desódio) e um catalisador de cobre (por exemplo brometo de cobre) em umsolvente não-reativo (por exemplo dimetilformamida) com aquecimento (porexemplo 120e C) durante várias horas. Isolamento através de meiosconvencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel), seguidopor remoção do grupo de proteção de acordo com o Esquema 43, Etapa 2fornece os compostos da Fórmula lia onde A é O e R41 é H.
Exemplo 48: Síntese de intermediário 1-(3-Hidróxi-pirroir2,3-b1piridin-1-il)-etanona (503)
1-(3-Hidróxi-pirrol[2,3-b]piridin-1-il)-etanona 503 pode sersintetizada em três Etapas de ácido 2-amino-nicotínico 500 como descrito noEsquema 105. O composto é um composto exemplar da Fórmula III em queU, V, W e Z são CH, R40 é OH e R41 é P (por exemplo acetila).
Esquema 105<formula>formula see original document page 223</formula>
Etapa 1 - Preparação de ácido 2-(Carboximetil-amino)-nicotínico (501)
Ácido 2-(Carboximetil-amino)-nicotínico 501 é preparadoreagindo ácido 2-Amino-nicotínico 500 comercialmente disponível com ácido2-cloroacético na presença de base (por exemplo carbonato de sódio)tipicamente em temperatura ambiente durante 1-4 horas seguido porpurificação e isolamento através de meios convencionais (por exemploextração de base de ácido e recristalização).
Etapa 2 - Preparação de éster de 1-acetil-1H-pirroir2,3-blpiridin-3-ila de ácidoacético (502)
Éster de 1-acetil-1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ila de ácido acético 502é preparado reagindo ácido 2-(Carboximetil-amino)-nicotínico 501 comacetato de sódio em anidrido acético refluxante durante várias horas,seguido por purificação e isolamento através de meios convencionais (porexemplo recristalização) (Su & Tsou; J. Am. Chem. Soe, 82, 1960, 1187).
Etapa 3 - Preparação de 1-(3-Hidróxi-pirrolf2,3-blpiridin-1-il)-etanona (503)
1-(3-Hidróxi-pirrol[2,3-b]piridin-1-il)-etanona 503 é preparada deéster de 1 -acetil-1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ila de ácido acético 502 porremoção seletiva do acetato na posição 3 mediante reação com sódio emmetanol em temperatura ambiente tipicamente durante 30 minutos a umahora, seguido por purificação e isolamento através de meios convencionais(por exemplo extração e recristalização).
Exemplo 49: Síntese dos compostos da Fórmula Ha onde A é O
Compostos da Fórmula Ma onde A é O podem ser sintetizadosdo composto da Fórmula lllf (fórmula III onde U, V, W e Z são CH, R41 é P e
R40 é OH) e composto da Fórmula Xf (Fórmula Xa em que J. E, F, G e K sãoC, n é 1, e R42 é grupo de partida L) em uma Etapa de acordo com oEsquema 106.
Esquema 106<formula>formula see original document page 224</formula>
Etapa 1 - Preparação da Fórmula Ma onde A é O
Fórmula lia onde A é O é preparada dissolvendo o composto daFórmula Xf onde L é um grupo de partida (por exemplo halogênio ou triflato),em um solvente não-reativo (por exemplo dimetilformamida) na presença deuma base (por exemplo hidreto de sódio). Composto da Fórmula lllf éadicionado na presença de um catalisador de cobre (por exemplo brometode cobre) com aquecimento durante várias horas. Remoção do grupo deproteção de acordo com o Esquema 43, Etapa 2 seguido por isolamentoatravés de meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia desílica-gel) fornece os compostos da Fórmula Ha onde A é O e R41 é H.
Exemplo 50: Síntese dos compostos da Fórmula Ha, quando A for NH ou N-R45
Compostos da Fórmula lia onde A é NH ou NR45 (R45consistente com a definição de A para os compostos da Fórmula Ib ou L1para os compostos da Fórmula I) podem ser sintetizados de 3-bromo-7-azaindol 400 e um composto da Fórmula Xg (Fórmula Xa em que J. E, F, Ge K são C, n é 1, e R42 é NH2) em duas Etapas de acordo com o Esquema107.
Esquema 107
<formula>formula see original document page 224</formula>
Etapa 1 - Preparação da Fórmula Ha onde A é NH
Composto da Fórmula lia onde A é NH é preparado reagindo 3-bromo-7-azaindol 400 com composto puro da Fórmula Xg com aquecimentodurante várias horas (por exemplo 150g C). Alternativamente, 400 pode serreagido com o composto da Fórmula Xg usando condições catalisadas compaládio de Buchwald-Hartwig (isto é um catalisador de paládio (por exemploTris(dibenzilidenoacetona)dipaládio(0)), um ligando (por exemplo tri-t-butilfosfina), e uma base (por exemplo t-butóxido de sódio) em um solventenão-reativo (por exemplo tolueno) com aquecimento (por exemplo 809 C)durante várias horas). Isolamento através de meios convencionais (porexemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece o composto daFórmula lia onde A é NH e R41 é P. Remoção do grupo de proteção deacordo com o Esquema 43, Etapa 2 fornece os compostos da Fórmula Maonde A é NH e R41 é H.
Etapa 2 - Preparação da Fórmula Ma onde A é N-R
Composto da Fórmula lia onde A é N-R45 é preparado reagindoo composto da Fórmula Ma onde R41 é P e A é NH, com um reagenteapropriado com um grupo de saída (por exemplo iodeto de metila, cloreto deacetila) na presença de uma base (por exemplo carbonato de potássio,diisopropiletilamina) em um solvente não-reativo (por exemplodimetilformamida) durante várias horas em temperatura ambiente. Remoçãodo grupo de proteção de acordo com o Esquema 43, Etapa 2 e isolamentoatravés de meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia desílica-gel) fornece o composto da Fórmula Ma onde A é N-R45 e R41 é H.
Exemplo 51: Síntese de intermediário da Fórmula Mlh onde R40 é NH1
Compostos da Fórmula Mlh (fórmula III onde U, V, W e Z são CH,R41 é H e R40 é NH2) podem ser sintetizados de 7-azaindol 1 em três Etapasde acordo com o Esquema 108.
Esquema 108
<formula>formula see original document page 225</formula>
Etapa 1 - Preparação de 3-nitro-7-azaindol (504)3-nitro-7-azaindol 504 é preparado adicionando 7-azaindol 1 aoácido nítrico defumado enquanto esfriando (por exemplo O9 C). Após agitar auma a várias horas, água é adicionada cuidadosamente e a misturaneutralizada com bicarbonato de sódio saturado. Os sólidos são colhidosatravés de filtração e secados para fornecer 3-nitro-7-azaindol 504.
Etapa 2 - Preparação da Fórmula lllg
Composto de lllg (fórmula III onde U, V.WeZ são CH, R41 é H eisNH2 de R40) é preparado de 3-nitro-7-azaindol 504 de acordo com oEsquema 43, Etapa 1.
Etapa 3 - Preparação da Fórmula lllh
Composto da Fórmula lllh é preparado do composto da Fórmulalllg por redução do grupo nitro (por exemplo gás de hidrogênio e paládio emcarbono em metanol). A mistura é filtrada e concentrada para fornecer ocomposto da Fórmula lllh.
Exemplo 52: Síntese dos compostos da Fórmula Ha onde A é NH ou NR45
Compostos da Fórmula Ma onde A é NH ou NR45 (R45consistente com a definição de A para os compostos da Fórmula Ib ou L1para os compostos da Fórmula I) podem ser sintetizados de um compostoda Fórmula lllh e um composto da Fórmula Xh (Fórmula Xa em que J. E, F,G e K são C, n é 1, e R42 é Br) em duas Etapas como descritas no Esquema109.
Esquema 109
<formula>formula see original document page 226</formula>
Etapa 1 - Preparação da Fórmula lia onde A é NH
Composto da Fórmula Ma onde A é NH é preparado reagindo ocomposto da Fórmula Xh com o composto da Fórmula lllh (preparado comodescrito no Exemplo 51) com aquecimento durante várias horas (porexemplo 1009 C). Alternativamente, composto da Fórmula lllh é reagido como composto da Fórmula Xh usando condições catalisadas com paládio deBuchwald-Hartwig (isto é um catalisador de paládio (por exemploTris(dibenzilidenoacetona)dipaládio(0)), um ligando (por exemplo tri-t-butilfosfina), e uma base (por exemplo t-butóxido de sódio) em um solventenão-reativo (por exemplo tolueno) com aquecimento (por exemplo 809 C)durante várias horas). Isolamento através de meios convencionais (porexemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece o composto daFórmula lia onde A é NH e R41 é P. Remoção do grupo de proteção deacordo com o Esquema 43, Etapa 2 fornece os compostos da Fórmula liaonde A é NH e R41 é H.
Etapa 2 - Preparação da Fórmula Ma onde A é N-R45
Composto da Fórmula lia onde A é N-R45 é preparado comodescrito no Exemplo 50, Etapa 2.
Exemplo 53: Síntese dos compostos da Fórmula lia onde A é S
Compostos da Fórmula Ma onde A é S podem ser sintetizadosde 7-azaindol 1 e um composto da Fórmula Xi (Fórmula Xa em que J. E, F,G e K são C, n é 1, e R42 é um dissulfeto de arila) em uma Etapa comodescrita no Esquema 110.
Esquema 110
<formula>formula see original document page 227</formula>
Etapa 1 - Preparação da Fórmula Ha onde A é S
Composto da Fórmula Ma onde A é S é preparado dissolvendo 7-azaindol 1 em um solvente apropriado (por exemplo dimetilformamida) comuma base (por exemplo hidreto de sódio), seguido pela adição de umdissulfeto de arila simétrico da Fórmula Xi. Após agitar em temperaturaambiente durante várias horas, a reação é extinta com água, seguido porisolamento através de meios convencionais (por exemplo extração ecromatografia de sílica-gel) para fornecer os compostos da Fórmula Ma ondeA é S e R41 é H.
Exemplo 54: Síntese dos compostos da Fórmula Ma onde A é S
Compostos da Fórmula Ma onde A é S podem ser sintetizadosde 3-bromo-7-azaindol 400 e um composto da Fórmula Xj (Fórmula Xa emque J, E, F, G e K são C, n é 1, e R42 é um SH) em uma Etapa comodescrita no Esquema 111.
Esquema 111
<formula>formula see original document page 228</formula>
Etapa 1 - Preparação da Fórmula Ma onde A é S
Composto da Fórmula lia onde A é S é preparado reagindo 3-bromo-7-azaindol 400 com o composto da Fórmula Xj na presença de umabase (por exemplo hidreto de sódio) em um solvente apropriado (porexemplo dimetilformamida) com aquecimento durante várias horas (porexemplo 1009 C). Isolamento através de meios convencionais (por exemploextração e cromatografia de sílica-gel) fornece o composto da Fórmula Maonde A é S e R é H.
Exemplo 55: Síntese dos compostos da Fórmula Ma onde A é S(O)?
Compostos da Fórmula lia onde A é S(0)2 podem sersintetizados de um composto da Fórmula Ma onde A é S e R41 é H em umaEtapa como descrita no Esquema 112.
Esquema 112
<formula>formula see original document page 228</formula>
Etapa 1 - Preparação da Fórmula Ma onde A é S(O)?Composto da Fórmula Ma onde A é S(0)2 é preparado reagindoum composto da Fórmula Ma onde A é S (preparado como descrito noExemplo 53 ou 54) com um agente oxidante (por exemplo ácido meta-cloro-peroxibenzóico, peróxido de hidrogênio) em um solvente aprótico apropriado(por exemplo diclorometano). Isolamento através de meios convencionais(por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece o composto daFórmula Ma onde A é S(0)2 e R41 é H.
Exemplo 56: Síntese dos compostos da Fórmula Ha onde A é S(Q)p
Compostos da Fórmula Ha onde A é S(0)2 podem sersintetizados de 7-azaindol 1 e um composto da Fórmula Xk (Fórmula Xa emque J. E, F, G e K são C, n é 1, e R42 é um S(0)2CI) em uma Etapa comodescrita no Esquema 113.
Esquema 113
<formula>formula see original document page 229</formula>
Etapa 1 - Preparação da Fórmula lia onde A é S(O)?
Composto da Fórmula lia onde A é S(0)2 é preparado reagindo7-azaindol 1 com um cloreto de sulfonila da Fórmula Xk dissolvido em ácidotrifluoroacetico, na presença de um catalisador (por exemplo tricloreto deíndio) e ácido trifluorossulfônico com aquecimento (por exemplo 709 C)durante algumas horas. Neutralização com hidróxido de sódio e isolamentoatravés de meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia desílica-gel) fornece o composto da Fórmula lia onde A é S(0)2 e R41 é H(Garzya et al, Tetrahedron Lett. 2004, 45:1499-1501).
Exemplo 57: Síntese dos compostos da Fórmula Ha onde A é CF?
Compostos da Fórmula lia onde A é CF2 podem ser sintetizadosde um composto da Fórmula Ha onde A é C(O) e R41 é P em uma Etapacomo descrita no Esquema 1.14.
Esquema 114<formula>formula see original document page 230</formula>
Etapa 1 - Preparação da Fórmula Ma onde A é CF2
Composto da Fórmula Ma onde A é CF2 é preparado reagindoum composto da Fórmula Ha onde A é C(O) e R41 é P (preparado comodescrito no Exemplo 44) com um agente de fluoração (por exemplo(trifluoreto de dietilamino)enxofre) com aquecimento durante várias horas.
Isolamento através de meios convencionais (por exemplo extração ecromatografia de sílica-gel) fornece o composto da Fórmula Ma onde A é CF2e R41 é H.
Exemplo 58: Síntese dos compostos da Fórmula Ma onde A é C(S)
Compostos da Fórmula Ma onde A é C(S) podem sersintetizados de um composto da Fórmula Ha onde A é C(O) e R41 é H emuma Etapa como descrita no Esquema 115.
Esquema 115
<formula>formula see original document page 230</formula>
Etapa 1 - Preparação da Fórmula lia onde A é C(S)
Composto da Fórmula Ma onde A é C(S) é preparado reagindoum composto da Fórmula Ma onde A é C(O) e R41 é H (preparado comodescrito no Exemplo 43, 44 ou 45) com o reagente de Lawesson, (1, 3, 2,4-ditiadifosfetano-2,3-dissulfeto), em um solvente apropriado (por exemplotetraidrofurano) com aquecimento durante várias horas. Isolamento atravésde meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel)fornece o composto da Fórmula lia onde A é C(S) e R é H.
Exemplo 59: Síntese dos compostos da Fórmula lia onde A é S(Q)
Compostos da Fórmula lia onde A é S(O) podem sersintetizados de um composto da Fórmula lia onde A é S e R41 é H em umaEtapa como descrita no Esquema 116.
Esquema 116
<formula>formula see original document page 231</formula>
Etaoa 1 - Preparação da Fórmula Ha onde A é S(Q)
Composto da Fórmula Na onde A é S(O) é preparado reagindo ocomposto da Fórmula lia onde A é S e R41 é H (preparado como descrito noExemplo 53 ou 54) com um equivalente de um agente oxidante (por exemploácido meta-cloro-peroxibenzóico, peróxido de hidrogênio, oxona) em umsolvente aprótico apropriado (por exemplo diclorometano). Isolamentoatravés de meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia desílica-gel) fornece o composto da Fórmula Ha onde A é S(O) e R41 é H.
Compostos da Fórmula III podem ser usados na preparação doscompostos da Fórmula Ib ou lia como descrito no Exemplos 43-59substituindo o 7-azaindol ou análogo mostrado no exemplo com umcomposto da Fórmula III. R40 é o substituinte na posição 3 usado no exemploapropriado para acoplar nos compostos da Fórmula X (por exemplohidrogênio, C(0)H, CH2N(CH3)2, C(0)CI, bromo, amino, hidróxi, tio) e R41 éhidrogênio ou grupo de proteção P.
<formula>formula see original document page 231</formula> Fórmula III
Compostos da Fórmula llli, isto é Fórmula III onde V e W são CH,pelo menos um de U e Z é CR , preferivelmente um de U e Z é CR e ooutro de U e Z é CH onde R46 é como definido para R18, excluindohidrogênio, na fórmula Ib de [0025], podem ser usados na síntese doscompostos da Fórmula Ib e Ma como descrita para os compostos para afórmula III.
<formula>formula see original document page 232</formula>
Os exemplos providos para a síntese dos compostos da Fórmulallli são também aplicáveis a muitos compostos satisfazendo outrasdefinições da Fórmula III ou compostos da Fórmula llli podem ser tambémsubstituídos, particularmente na posição 3, para fornecer os compostos daFórmula III, ou compostos relacionados que podem ser usados parasintetizar os compostos da Fórmula I.
Adicionalmente, as técnicas usadas para a preparação doscompostos da Fórmula III e llli podem ser aplicadas aos compostos daFórmula Ib onde R5 é bromo, cloro, ou amino, para fornecer outroscompostos da Fórmula Ib.
Exemplo 60: Síntese de Intermediário da Fórmula IVa
Compostos da Fórmula IVa podem ser sintetizados de 3-metil-5-nitro-piridin-2-ilamina 505 em três Etapas como descritas no Esquema 117.
Esquema 117
<formula>formula see original document page 232</formula>
Etapa 1 - Preparação de 5-Nitro-1H-pirroir2,3-b1piridina (506)
5-Nitro-1H-pirrol[2,3-b]piridina 506 é preparada reagindo 3-metil-,-nitro-piridin-2-ilamina 505 com anidrido de t-butiloxicarbonila em umsolvente apropriado (por exemplo acetato de etila e hexanos). Concentraçãoe extração fornecem um intermediário Boc-protegido que é depois reagidocom 2 equivalentes de butillítio em um solvente polar apropriado (porexemplo tetraidrofurano) com esfriamento (por exemplo 0e C), seguido pelaadição de dimetilformamida e agitando durante 30 minutos a uma hora,seguido por adição de 5,5 M de HCI. Isolamento através de meiosconvencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece506. (Hands et. al, Synthesis 1996, 877-882).
Etapa 2 - Preparação da Fórmula XIII
Composto da Fórmula XIII é preparado reagindo 5-Nitro-1H-pirrol[2,3-b]piridina 506 como descrito no Esquema 43, Etapa 1.
Etapa 3 - Preparação da Fórmula IVa
Composto da Fórmula IVa é preparado do composto da FórmulaXIII pela redução do grupo nitro (por exemplo gás de hidrogênio e paládioem carbono em metanol). A mistura é filtrada e concentrada para fornecer ocomposto da Fórmula IVa.
Exemplo 61: Síntese de Intermediário da Fórmula IVb
Compostos da Fórmula IVa podem ser sintetizados de 7-azaindol 1 em quatro Etapas como descritas no Esquema 118.
Esquema 118
<formula>formula see original document page 233</formula>
Etapa 1 - Preparação de 7-óxido de 1 H-Pirrolí2.3-blPiridina (507)
7-óxido de 1H-Pirrol[2,3-b]piridina 507 é preparado reagindo 7-azaindol 1 com um agente oxidante (por exemplo ácido m-cloro-peroxibenzóico) em um solvente apropriado (por exemplo diclorometano).
Após agitar em temperatura ambiente durante 30 minutos a uma hora,composto 507 é colhido por filtração.
Etapa 2 - Preparação de 7-óxido de 4-Nitro-1H-pirrolf2.3-blpiridina (508)
7-óxido de 4-Nitro-1H-pirrol[2,3-b]piridina 508 é preparadodissolvendo 7-óxido de 1H-Pirrol[2,3-b]piridina 507 em ácido nítrico, seguidopela adição de ácido sulfúrico. Aquecimento (por exemplo 709 C) duranteuma hora, seguido vertendo em água fornece o composto 508 que é isoladoatravés de filtração. (Schneller et. al, J. Org. Chem. 1980, 45:4045)
Etapa 3 - Preparação do composto da Fórmula XIV
Composto da Fórmula XIV é preparado de 7-óxido 4-Nitro-1H-pirrol[2,3-b]piridina 508 por adição de tricloreto fosforoso em um solventeapropriado (por exemplo acetato de etila) e aquecendo (por exemplo 809 C)durante vários minutos. Neutralização com base (por exemplo carbonato depotássio) seguido por extração fornece o intermediário que pode depois serprotegido no hidrogênio de N-l de acordo com o Esquema 43, Etapa 1, parafornecer o composto da Fórmula XIV.
Etapa 4 - Preparação da Fórmula IVb
Composto de IVb é preparado do composto da Fórmula XIV porredução do grupo nitro (por exemplo gás de hidrogênio e paládio emcarbono em metanol). A mistura pode ser filtrada e concentrada parafornecer o composto da Fórmula IVb.
Exemplo 62: Síntese dos compostos da Fórmula llli onde R46 é NHR47 e R40 é H
Compostos da Fórmula llli onde R46 é NHR47 e R40 é H podemser sintetizados de um composto da Fórmula IVa ou IVb em uma Etapacomo descrita no Esquema 119.
Esquema 119
<formula>formula see original document page 234</formula>Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula llli onde R é NHR e R é
Composto da Fórmula llli onde R46 é NHR47 e R40 é H (R47 éalquila inferior opcionalmente substituída, alquenila inferior opcionalmentesubstituída, alquinila inferior opcionalmente substituída, cicloalquilaopcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arilaopcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída) épreparado da Fórmula do intermediário IVa (Exemplo 60) ou IVb (Exemplo61) mediante reação com R47-X onde X é um grupo de partida, (por exemploagente de alquilação como metiliodeto) na presença de base (por exemplocarbonato de potássio) em um solvente apropriado (por exemplodimetilformamida) durante várias horas em temperatura ambiente.
Isolamento através de meios convencionais (por exemplo extração ecromatografia de sílica-gel) fornece os compostos da Fórmula llli onde R46 éNHR47, R40 é H e R41 é P.
Exemplo 63: Síntese dos compostos da Fórmula llli onde R46 é NHCHpR48 eR40 é H
Compostos da Fórmula llli onde R46 é NHCH2R48 e R40 é Hpodem ser sintetizados de um composto da Fórmula IVa ou IVb em umaEtapa como descrita no Esquema 120.
Esquema 120
<formula>formula see original document page 235</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula lllc onde R46 é NHCHpR48 eR40 é H
Composto da Fórmula llli onde R46 é NHCH2R48 e R40 é H (R48 éconsistente com a alquila inferior opcionalmente substituída) é preparado dointermediário fórmula IVa (Exemplo 60) ou IVb (Exemplo 61) por aminaçãoredutora usando um aldeído da Fórmula R -C(0)H na presença de umaquantidade catalítica de ácido (por exemplo ácido acético) e um agenteredutor (por exemplo triacetoxiboroidreto de sódio) em um solvente não-reativo (por exemplo dicloroetano). Após agitar durante várias horas,isolamento através de meios convencionais (por exemplo extração ecromatografia de sílica-gel) fornece os compostos da Fórmula llli onde R46 éNHCH2R48, R40 é H e R41 é P.
Exemplo 64: Síntese dos compostos da Fórmula llli onde R46 é NHC(Q)R49 eR40ÉH
Compostos da Fórmula llli onde R46 é NHC(0)R49 e R40 é Hpodem ser sintetizados de um composto da Fórmula IVa ou IVb em umaEtapa como descrita no Esquema 121.
Esquema 121
<formula>formula see original document page 236</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula llli onde R46 é NHC(Q)R49 eR40é H
Composto da Fórmula llli onde R46 é NHC(0)R49 e R40 é H (R49é alquila inferior opcionalmente substituída, alquenila inferior opcionalmentesubstituída, alquinila inferior opcionalmente substituída, cicloalquilaopcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arilaopcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída) épreparado do intermediário fórmula IVa (Exemplo 60) ou IVb (Exemplo 61)por reação com um ácido carboxílico ativado da Fórmula R49-C(0)X onde Xé um grupo de partida como cloro (por exemplo cloreto de benzoila) napresença de base (por exemplo N,N-diisopropiletilamina (DIEA)) em umsolvente não-reativo (por exemplo diclorometano). Após agitar durante váriashoras, isolamento através de meios convencionais (por exemplo extração ecromatografia de sílica-gel) fornece os compostos da Fórmula llli onde R éNHC(0)R49, R40 é H e R41 é P.
Exemplo 65: Síntese dos compostos da Fórmula llli onde R46 éNHC(Q)NHR50 e R40 é H
Compostos da Fórmula llli onde R46 é NHC(0)NHR50 e R40 é Hpodem ser sintetizados de um composto da Fórmula IVa ou IVb em umaEtapa como descrita no Esquema 122.
Esquema 122
<formula>formula see original document page 237</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula llli onde R46 é NHC(Q)NHR50e R40 é H
Composto da Fórmula llli onde R46 é NHC(0)NHR50 e R40 é H(R50 é alquila inferior opcionalmente substituída, alquenila inferioropcionalmente substituída, alquinila inferior opcionalmente substituída,cicloalquila opcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmentesubstituída, arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmentesubstituída) é preparado do intermediário da Fórmula IVa (Exemplo 60) ouIVb (Exemplo 61) por reação com um isocianato da Fórmula R50-NCO (porexemplo propilisocianato) na presença de uma base (por exemplo DIEA) emum solvente não-reativo (por exemplo diclorometano). Após agitar durantevárias horas, isolamento através de meios convencionais (por exemploextração e cromatografia de sílica-gel) fornece os compostos da Fórmula lllionde R46 é NHC(0)NHR50, R40 é H e R41 é P.
Exemplo 66: Síntese dos compostos da Fórmula llli onde R46 éNHC(S)NHR51 e R40 é H
Compostos da Fórmula llli onde R46 é NHC(S)NHR51 e R40 é Hpodem ser sintetizados de um composto da Fórmula IVa ou IVb em umaEtapa como descrita no Esquema 123.
Esquema 123
<formula>formula see original document page 238</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula llli onde R46 é NHC(S)NHR51e R40 é H
Composto de llli onde R46 é NHC(S)NHR51 e R40 é H (R51 éalquila inferior opcionalmente substituída, alquenila inferior opcionalmentesubstituída, alquinila inferior opcionalmente substituída, cicloalquilaopcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arilaopcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída) épreparado do intermediário da Fórmula IVa (Exemplo 60) ou IVb (Exemplo61) por reação com um isotiocianato da Fórmula R51-NCS (por exemplopropilisotiocianato) na presença de uma base (por exemplo DIEA) em umsolvente não-reativo (por exemplo diclorometano). Após agitar durante váriashoras, isolamento através de meios convencionais (por exemplo extração ecromatografia de sílica-gel) fornece os compostos da Fórmula llli onde R46 éNHC(S)NHR51, R40 é H e R41 é P.
Exemplo 67: Síntese dos compostos da Fórmula llli onde R46 é NHS(0)pR52e R40 é H
Compostos da Fórmula llli onde R46 é NHS(0)2R52 e R40 é Hpodem ser sintetizados de um composto da Fórmula IVa ou IVb em umaEtapa como descrita no Esquema 124.
Esquema 124<formula>formula see original document page 239</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula llli onde R46 é NHS(Q)pR52 e
Composto da Fórmula llli onde R é NHS(0)2R52 e R é H (Ré alquila inferior opcionalmente substituída, alquenila inferior opcionalmentesubstituída, alquinila inferior opcionalmente substituída, cicloalquilaopcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arilaopcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída) épreparado do intermediário da Fórmula IVa (Exemplo 60) ou IVb (Exemplo61) por reação com um cloreto de sulfonila da Fórmula R52-S(0)2C1 (porexemplo cloreto de propilsulfonila) na presença de uma base (por exemploDIEA, piridina) em um solvente não-reativo (por exemplo diclorometano).
Após agitar durante várias horas, isolamento através de meiosconvencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel) forneceos compostos da Fórmula llli onde R é NHS(0)2R, R é H e R41 é P.
Exemplo 68: Síntese de Intermediário da Fórmula Va
Compostos da Fórmula Va podem ser sintetizados de 7-azaindol1 entre duas Etapas como descritas no Esquema 125.
Esquema 125
<formula>formula see original document page 239</formula>
Etapa 1 - Preparação de 5-bromo-7-azaindol (44)5-bromo-7-azaindol 44 é preparado de 7-azaindol 1 comodescrito em Mazeas et. al, Heterocycles 1999, 50:1065-1080.
Etapa 2 - Preparação do intermediário da Fórmula VaIntermediário da Fórmula Va é preparado protegendo 5-bromo-7-azaindol 44 como descrito no Esquema 43, Etapa 1.
Exemplo 69: Síntese de Intermediário da Fórmula Vb
Compostos da Fórmula Vb podem ser sintetizados de 7-óxido de1H-Pirrol[2,3-b]piridina 507 em duas Etapas como descritas no Esquema126.
Esquema 126
<formula>formula see original document page 240</formula>
Etapa 1 - Preparação de 4-bromo-7-azaindol (509)
4-bromo-7-azaindol 509 é preparado de 7-óxido de 1 H-Pirrol[2,3-b]piridina 507 (preparada como descrita no Exemplo 61) como descrita emThibault. et al, Org. Lett. 2003,5:5023-5025.
Etapa 2 - Preparação do intermediário da Fórmula Vb
Intermediário da Fórmula Vb é preparado protegendo 4-bromo-7-azaindol 509 como descrito no Esquema 43, Etapa 1.
Exemplo 70: Síntese dos compostos da Fórmula llli onde R46 é umhaloqênio e R40 é H
Compostos da Fórmula llli onde R46 é um halogênio é R40 é Hpodem ser sintetizados de um composto da Fórmula Va ou Vb em umaEtapa como descrita no Esquema 127.
Esquema 127
<formula>formula see original document page 240</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula llli onde R46 é F ou Cl e R40 é H
Composto da Fórmula llli onde R46 é halogênio R53(preferivelmente flúor ou cloro) e R40 é hidrogênio é preparado dissolvendoos intermediários de bromo correspondentes da Fórmula Va (Exemplo 68)ou Vb (Exemplo 69) em um solvente apropriado (por exemplo tetraidrofurano)com esfriamento (por exemplo -789 C) e reagindo com um reagente deorganolítio para realizar a permuta de lítio-halogênio do bromo (por exemplot-butillítio), seguido por adição de uma fonte de flúor (por exemplo p-fluorobenzenossulfimida) ou cloro (por exemplo hexacloroetano), similaràquele descrito por Thibault. et. al, Org. Lett. 2003, 5:5023-5025. Isolamentoatravés de meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia desílica-gel) fornece os compostos da Fórmula llli onde R é F ou Cl, R40 é H eR41éP.
Exemplo 71: Síntese dos compostos da Fórmula llli onde R46 é NHR47 e R40é H
Compostos da Fórmula llli onde R46 é NHR47 e R40 é H podemser sintetizados de um composto da Fórmula Va ou Vb em uma Etapa comodescrita no Esquema 128.
Esquema 128
<formula>formula see original document page 241</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula llli onde R é NHR e R éH
Composto da Fórmula llli onde R46 é NHR47 e R40 é H (R47 comodefinido no Exemplo 62) é preparado reagindo a Fórmula do intermediárioVa (Exemplo 68) ou Vb (Exemplo 69) com uma amina da Fórmula R47-NH2usando condições de Buchwald-Hartwig catalisadas por paládio (isto é umcatalisador de paládio (por exemplo acetato de paládio(ll)), um ligando (porexemplo dicicloexil(o-bifenil)fosfina), e uma base (por exemplo t-butóxido desódio) em um solvente não-reativo (por exemplo 1,4-dioxano) comaquecimento (por exemplo 100Q C) durante várias horas). Isolamento atravésde meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel)fornece o composto da Fórmula llli onde R46 é NHR47, R40 é H e R41 é P.
Exemplo 72: Síntese dos compostos da Fórmula MM onde R46 é OR54 e R40 é H
Compostos da Fórmula llli onde R46 é OR54 e R40 é H podem sersintetizados de um composto da Fórmula Va ou Vb em uma Etapa comodescrita no Esquema 129.
Esquema 129
<formula>formula see original document page 242</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula llli onde R46 é OR54 e R40 é H
Composto da Fórmula llli onde R46 é OR54 e R40 é H (R54 éalquila inferior opcionalmente substituída, alquenila inferior opcionalmentesubstituída, alquinila inferior opcionalmente substituída, cicloalquilaopcionalmente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arilaopcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída) épreparado reagindo intermediário da Fórmula Va (Exemplo 68) ou Vb(Exemplo 69) com um álcool da Fórmula R^-OH na presença de base (porexemplo hidreto de sódio) e um catalisador de cobre (por exemplo brometode cobre) em um solvente não-reativo (por exemplo dimetilformamida) comaquecimento (por exemplo 120- C) durante várias horas. Isolamento atravésde meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel),fornece os compostos da Fórmula llli onde R46 é OR54, R40 é H e R41 é P.
Exemplo 73: Síntese dos compostos da Fórmula llli onde R46 é alquilainferior opcionalmente substituída e R40 é H
Compostos da Fórmula llli onde R46 é alquila inferioropcionalmente substituída e R40 é H podem ser sintetizados de umcomposto da Fórmula Va ou Vb em uma Etapa como descrita no Esquema130.
Esquema 130
<formula>formula see original document page 243</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula llli onde R46 é alauila inferioropcionalmente substituída e R40 é H
Composto da Fórmula llli onde R46 é alquila inferioropcionalmente substituída R55 e R40 é H é preparado dissolvendointermediário da Fórmula Va (Exemplo 68) ou Vb (Exemplo 69) em umsolvente apropriado (por exemplo tolueno) seguido pela adição de umcatalisador de paládio (por exemplo [1,1'-Bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaládio(ll), complexado com diclorometano (1:1)). Após váriosminutos, um reagente de Grignard da Fórmula R55-MgBr pode seradicionado e a reação aquecida (por exemplo 90Q C) a uma a várias horas.
Após filtraçao através de Celite, isolamento através de meios convencionais(por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel), fornece os compostosda Fórmula lllc onde R46 é alquila inferior opcionalmente substituída, R40 é HeR41éP.
Exemplo 74: Síntese dos compostos da Fórmula llli onde R46 é arilaopcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída e R40 é H
Composto da Fórmula llli onde R46 é arila opcionalmentesubstituída ou heteroarila opcionalmente substituída e R40 é H podem sersintetizados de um composto da Fórmula Va ou Vb em uma Etapa comodescrita no Esquema 131.
Esquema 131<formula>formula see original document page 244</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula llli onde R é arilaopcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída e R40 é H
Composto da Fórmula llli onde R é arila opcionalmentesubstituída ou heteroarila opcionalmente substituída R e R é H épreparado reagindo intermediário da Fórmula Va (Exemplo 68) ou Vb(Exemplo 69) com um ácido borônico da Fórmula R56-B(OH)2 ou ésterborônico da Fórmula R56-B(OR)2 sob condições de acoplamento de Suzuki(Muyaura e Suzuki, Chem. Rev. 1995, 95:2457), como na presença de umcatalisador de paládio (por exemplo Tetraquis(trifenilíosfina)paládio(0)) euma base (por exemplo carbonato de potássio aquoso) em um solventeapropriado (por exemplo tetraidrofurano, acetonitrila) com aquecimentotérmico (por exemplo 80°C) de uma até várias horas ou aquecendo com uminstrumento de microonda (por exemplo 120Q C durante 10 minutos).
Isolamento através de meios convencionais (por exemplo extração ecromatografia de sílica-gel) fornece os compostos da Fórmula llli onde R46 éarila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída, R40é H e R41 é P.
Compostos da Fórmula Ib onde V, W, U, e Z são CH, J, E, F, G,e K são C, n é 1, e R15, R16, e R17 são hidrogênio dos compostos da FórmulaVI.
<formula>formula see original document page 244</formula> Fórmula VIOs exemplos providos para a síntese dos compostos da FórmulaVI são também aplicáveis a muitos compostos que satisfazem outrasdefinições da Fórmula I ou Fórmula Ib.
Exemplo 75: Síntese dos compostos da Fórmula VI onde M é NR57 ou O eR1 é arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmentesubstituída
Composto da Fórmula Via (fórmula VI onde M é NR57 ou O (R57é consistente com a definição de M para os compostos da Fórmula Ib ou L2para os compostos da Fórmula I) e R1 é arila opcionalmente substituída ouheteroarila opcionalmente substituída) pode ser sintetizado de um compostoda Fórmula lib em duas Etapas como descritas no Esquema 132.
Esquema 132
<formula>formula see original document page 245</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula Mc
Composto da Fórmula llc (Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H,R41 é P, R43 é M1R58 onde M1 é O ou NR57 e R58 são arila opcionalmentesubstituída ou heteroarila opcionalmente substituída) é preparado reagindo ocomposto da Fórmula llb (Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H, R41 é P,R43 é M1H, onde M1 é O ou NR57) com um composto da Fórmula R58-X ondeX é um grupo de partida apropriado como um halogênio ou triflato, napresença de uma base (por exemplo hidreto de sódio) em um solventeapropriado (por exemplo dimetilformamida) com aquecimento (por exemplo80Q C) durante várias horas. Alternativamente, a reação pode ser catalisadapor um metal (por exemplo acetato de paládio e tri-t-butilfosfina quando M1 éNR57, brometo de cobre quando M1 for O). Isolamento através de meiosconvencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel) forneceos compostos da Fórmula llc.
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula VI onde M é NR57 ou O e R1é arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída
Composto da Fórmula Via (fórmula VI onde M é NR57 ou O (M1),R1 é arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmentesubstituída (R58)) é preparado do composto da Fórmula Mc através deremoção do grupo de proteção de N-l de acordo com o Esquema 43, Etapa 2.
Exemplo 76: Síntese dos compostos da Fórmula VI onde M é NR57 ou O eR1 é arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmentesubstituída
Composto da Fórmula Via (fórmula VI onde M é NR57 ou O (R57consistente com a definição de M para os compostos da Fórmula Ib ou L2para os compostos da Fórmula I) e R1 é arila opcionalmente substituída ouheteroarila opcionalmente substituída) pode ser sintetizado de um compostoda Fórmula Md em duas Etapas como descritas no Esquema 133.
Esquema 133
<formula>formula see original document page 246</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula llc
Composto da Fórmula llc (Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H,R41 é P, R43 é M1R58 onde M1 é O ou NR57 e R58 é arila opcionalmentesubstituída ou heteroarila opcionalmente substituída) é preparado reagindo ocomposto da Fórmula Md (Fórmula Ma onde R15, R16 e R17 são H, R41 é P, eR43 é um halogênio, R59, por exemplo cloro) com um composto da FórmulaR58-OH ou da Fórmula R58-NR57 na presença de uma base (por exemplohidreto de sódio) em um solvente apropriado (por exemplo dimetilformamida)com aquecimento (por exemplo 80e C) durante várias horas.
Alternativamente, a reação pode ser catalisada por um metal (por exemploacetato de paládio e tri-t-butilfosfina quando M1 for NR57, brometo de cobrequando M1 for O). Isolamento através de meios convencionais (por exemploextração e cromatografia de sílica-gel) fornece os compostos da Fórmula Mc.
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula VI onde M é NR57 ou O e R1é arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmente substituída
Composto da Fórmula Via (fórmula VI onde M é NR57 ou O (M1),R1 é arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmentesubstituída (R58)) é preparado do composto da Fórmula llc através deremoção do grupo de proteção de N-l de acordo com o Esquema 43, Etapa2.
Exemplo 77: Síntese dos compostos da Fórmula VI onde M é -Q-alq- ou -NR57-alq-
Composto da Fórmula Vlb (fórmula VI onde M é -O-alq- ou -NR57-alq- (R57 consistente com a definição de M para os compostos daFórmula Ib ou L2 para os compostos da Fórmula I)) pode ser sintetizado deum composto da Fórmula Mb em duas Etapas como descritas no Esquema 134.
Esquema 134
<formula>formula see original document page 247</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula He
Composto da Fórmula Me (Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H,R41 é P, R43 é M1 (CH2)i-3R1 onde M1 é O ou NR57) é preparado reagindo ocomposto da Fórmula llb (Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H, R41 é P,R43 é M1H onde M1 é O ou NR57) com um composto da Fórmula R1-(CH2)i-3-X onde X é um grupo de saída (por exemplo halogênio, mesilato) napresença de uma base (por exemplo hidreto de sódio, carbonato de potássio)em um solvente apropriado (por exemplo dimetilformamida, acetonitrila) comaquecimento (por exemplo 809 C) a uma a várias horas. Isolamento atravésde meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel),fornece os compostos da Fórmula lie.Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula VI onde M é M1(CHg)i.3 e M1é O ou NR57
Composto da Fórmula Vlb (fórmula VI onde M é 0(CH2)i-3 ouNR57(CH2)i-3) é preparado do composto da Fórmula Ib através de remoçãodo grupo de proteção de N-l de acordo com o Esquema 43, Etapa 2.
Exemplo 78: Síntese dos compostos da Fórmula VI onde M é -O-alq- ou -NR57-alq-
Composto da Fórmula Vlb (fórmula VI onde M é -O-alq- ou -NR57-alq- (R57 consistente com definição de M para os compostos daFórmula Ib ou L2 para os compostos da Fórmula I)) pode ser sintetizado deum composto da Fórmula lld em duas Etapas como descritas no Esquema135.
Esquema 135
<formula>formula see original document page 248</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula Me
Composto da Fórmula lie (Fórmula Ma onde R15, R16 e R17 são H,R41 é P, R43 é M1(CH2)i-3R1 onde M1 é O ou NR57) é preparado reagindo ocomposto da Fórmula lld (Fórmula Ma onde R15, R16 e R17 são H, R41 é P, eR43 é um halogênio, R59, por exemplo cloro) com um composto da FórmulaR1-(CH2)i-3-OH ou R1-(CH2)i-3-NR57 na presença de uma base (por exemplohidreto de sódio, carbonato de potássio) em um solvente apropriado (porexemplo dimetilformamida, acetonitrila) com aquecimento (por exemplo 809C) a uma a várias horas. Isolamento através de meios convencionais (porexemplo extração e cromatografia de sílica-gel), fornece o composto daFórmula Me.
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula VI onde M é M1(CH?)i.a e M1é O ou NR57
Composto da Fórmula Vlb (fórmula VI onde M é 0(CH2)i-3 ouNR57(CH2)i-3) é preparado do composto da Fórmula Me através de remoçãodo grupo de proteção de N-l de acordo com o Esquema 43, Etapa 2.
Exemplo 79: Síntese dos compostos da Fórmula VI onde M é NH-alq-
Composto da Fórmula Vlc (fórmula VI onde M é -NH-alq-) podeser sintetizado de um composto da Fórmula Ilf em duas Etapas comodescritas no Esquema 136.
Esquema 136
<formula>formula see original document page 249</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula Mg
Composto da Fórmula llg (Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H,R41 é P, R43 é NH(CH2)i-3R1) é preparado do composto da Fórmula Ilf(Fórmula Ma onde R15, R16 e R17 são H, R41 é P, R43 é NH2) por aminaçãoredutora usando um aldeído da Fórmula R1-(CH2)o-2-CHO na presença deuma quantidade cataiítica de ácido (por exemplo ácido acético) e um agenteredutor (por exemplo triacetoxiboroidreto de sódio) em um solvente não-reativo (por exemplo dicloroetano). Após agitar durante várias horas,isolamento através de meios convencionais (por exemplo extração ecromatografia de sílica-gel) fornece os compostos da Fórmula llg.
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula VI onde M é NHfCHpVug
Composto da Fórmula Vlc (fórmula VI onde M é NH(CH2)-|.3) épreparado do composto da Fórmula llg através de remoção do grupo deproteção de N-l de acordo com o Esquema 43, Etapa 2.
Exemplo 80: Síntese dos compostos da Fórmula VI onde M é NR57C(Q) ouOC(O)
Composto da Fórmula Vld (fórmula VI onde M é NR57C(0) ouOC(O) onde R57 é consistente com definição de M para os compostos daFórmula Ib ou L2 para os compostos da Fórmula I) pode ser sintetizado deum composto da Fórmula lib em duas Etapas como descritas no Esquema137.
Esquema 137
<formula>formula see original document page 250</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula llh
Composto da Fórmula llh (Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H,R41 é P, R43 é M1C(0)R1 onde M1 é O ou NR57) é preparado reagindo ocomposto da Fórmula llb (Fórmula Ma onde R15, R16 e R17 são H, R41 é P,R43 é M1H onde M1 é O ou NR57) com um ácido carboxílico ativado daFórmula R1 - COX onde X é um grupo de partida como cloro (por exemplocloreto de benzoíla) na presença de uma base (por exemplo Dl EA) em umsolvente não-reativo (por exemplo diclorometano). Após agitar durante váriashoras, isolamento através de meios convencionais (por exemplo extração ecromatografia de sílica-gel) fornece o composto da Fórmula llh.
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula VI onde M é OC(O) ou NR57C(Q)
Compostos da Fórmula Vld (fórmula VI onde M é OC(O) ouNR57C(0)) é preparado do composto da Fórmula llh através de remoção dogrupo de proteção de N-l de acordo com o Esquema 43, Etapa 2.
Exemplo 81: Síntese dos compostos da Fórmula VI onde M é NR57S(Q)2
Composto da Fórmula Vle (fórmula VI onde M é NR57S(0)2 ondeR57 é consistente com a definição de M para os compostos da Fórmula Ib ouL2 para os compostos fórmula I) pode ser sintetizado de um composto daFórmula llli em duas Etapas como descritas no Esquema 138.
Esquema 138<formula>formula see original document page 251</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula lli
Composto da Fórmula lli (Fórmula Na onde R15, R16 e R17 são H,R41 é P, R43 é NR57S(0)2R1) é preparado reagindo o composto da Fórmulallh (Fórmula Ma onde R15, R16 e R17 são H, R41 é P, e R43 é NR57H) porreação com um cloreto de sulfonila da Fórmula R57S02CI (por exemplocloreto de fenilsulfonila) na presença de uma base (por exemplo DIEA,piridina) em um solvente não-reativo (por exemplo diclorometano). Apósagitar durante várias horas, isolamento através de meios convencionais (porexemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece os compostos da
Fórmula lli.
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula VI onde M é NR57S(O)2
Composto da Fórmula VI (fórmula VI onde M é NR57S(0)2) épreparado do composto da Fórmula lli através de remoção do grupo deproteção de N-l de acordo com o Esquema 43, Etapa 2.
Exemplo 82: Síntese dos compostos da Fórmula VI onde M é
NR57C(O)NH(CH2)1-3 ou NR57C(S)NH(CHp)1-3
Composto da Fórmula Vlf (fórmula VI onde M éNR57C(0)NH(CH2)i-3 ou NR57C(S)NH(CH2)i-3 onde R57 é consistente com adefinição de M para os compostos da Fórmula Ib ou L2 para os compostosfórmula I) pode ser sintetizado de um composto da Fórmula llh em duas
Etapas como descritas no Esquema 139.
Esquema 139<formula>formula see original document page 252</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula lli
Composto da Fórmula llj (Fórmula Ma onde R15, R16 e R17 são H,R41 é P, R43 é NR57C(L)NH(CH2)i.3R1 onde L é O ou S) é preparado reagindoo composto da Fórmula llh (Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H, R41 é P, eR43 é NR57H) com um composto da Fórmula R1-(CH2)i-3NCL onde L ou é Opara formar um isocianato (por exemplo isocianato de fenila) ou L é S paraformar um tioisocianato (por exemplo isotiocianato de fenila) na presença deuma base (por exemplo DIEA) em um solvente não-reativo (por exemplodiclorometano). Após agitar durante várias horas, isolamento através demeios convencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel)fornece os compostos da Fórmula llj.
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula VI onde B é NR e D é C(=ÜNH(CHp)q
Composto da Fórmula Vlf (fórmula VI onde M éNR57C(0)NH(CH2)i-3 ou NR57C(S)NH(CH2)i-3) é preparado do composto daFórmula llj através de remoção do grupo de proteção de N-l de acordo como Esquema 43, Etapa 2.
Exemplo 83: Síntese dos compostos da Fórmula VI onde M é NR57S(Q)pNH(CHp)i-3
Composto da Fórmula Vlg (fórmula VI onde M éNR57S(0)2NH(CH2)i-3 onde R57 é consistente com a definição de M para oscompostos da Fórmula Ib ou L2 para os compostos da Fórmula I) pode sersintetizado de um composto da Fórmula llh em três Etapas como descritasno Esquema 140.
Esquema 140<formula>formula see original document page 253</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula llk
Composto da Fórmula llk (Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H,R41 é P, R43 é NR57S(0)2CI) é preparado reagindo o composto da Fórmulallh (Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H, R41 é P, e R43 é NR57H) comcloreto de sulfurila em um solvente não-reativo (por exemplo diclorometano)possivelmente com aquecimento (eg. 60Q C). Após agitar durante váriashoras, a reação pode ser concentrada para fornecer o composto da Fórmulallk que é usado sem purificação adicional.
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula Mm
Composto da Fórmula Mm (Fórmula Ha onde R15, R16 e R17 sãoH, R41 é P, R43 é NR57S(0)2NH(CH2)i.3R1) é preparado de composto daFórmula llk através de reação com uma amina da Fórmula NH2(CH2)i-3R1 napresença de uma base (por exemplo DIEA) em um solvente não-reativo (porexemplo diclorometano). Após agitar durante várias horas, isolamentoatravés de meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia desílica-gel) fornece os compostos da Fórmula Mm.
Etapa 3 - Preparação do composto da Fórmula VI onde M éNR57S(0)pNH(CHp)i.3
Composto da Fórmula Vlg (fórmula VI onde M éNR57S(0)2NH(CH2)i.3) é preparado do composto da Fórmula llm através deremoção do grupo de proteção de N-l de acordo com o Esquema 43, Etapa2.
Exemplo 84: Síntese dos compostos da Fórmula VI onde M é SfOMCHgkaou
Composto da Fórmula Vlh (fórmula VI onde M é S(O)2(CH2)0.3 ouS(CH2)o-3) pode ser sintetizado de um composto da Fórmula Md em duasEtapas como descritas no Esquema 141.
Esquema 141
<formula>formula see original document page 254</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula IIn
Composto da Fórmula lln (Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H,R41 é P, R43 é S(CH2)0-3R1) é preparado reagindo o composto da Fórmulalld (Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H, R41 é P, e R43 é um halogênio,R59, por exemplo cloro) com um composto da Fórmula R1-(CH2)o-3-SH napresença de uma base (por exemplo hidreto de sódio, carbonato de potássio)em um solvente apropriado (por exemplo dimetilformamida, acetonitrila) comaquecimento (por exemplo 80Q C) a uma a várias horas. Isolamento atravésde meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel)fornece o composto da Fórmula lln. Este pode ser levado para a próximaetapa, ou o grupo de proteção de N-l P pode ser removido de acordo com oEsquema 43, Etapa 2 para fornecer o composto da Fórmula VI onde M éS(CH2)o-3-
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula VI onde M é SO?(CHpWg
Compostos da Fórmula Vlh (fórmula VI onde M é S(O)2(CH2)0-3)é preparado do composto da Fórmula lln reagindo com um agente oxidante(por exemplo ácido meta-cloro-peroxibenzóico, peróxido de hidrogênio) emum solvente aprótico apropriado (por exemplo diclorometano). Isolamentoatravés de meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia desílica-gel) seguido por remoção do grupo de proteção de N-l de acordo como Esquema 43, Etapa 2 fornece o composto da Fórmula Vlh.
Exemplo 85: Síntese dos compostos da Fórmula VI onde M é C(O)(CH2)0-3
Composto da Fórmula Vli (fórmula VI onde M é C(O)(CH2)0.3)pode ser sintetizado de um composto da Fórmula lld em três Etapas comodescritas no Esquema 142.
Esquema 142
<formula>formula see original document page 255</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula Mo
Composto da Fórmula lio (Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H,R41 é P, R43 é C(OH)(CH2)0-3R1) é preparado reagindo o composto daFórmula lld (Fórmula Ha onde R15, R16 e R17 são H, R41 é P, e R43 é umhalogênio, R59, por exemplo cloro) com um reagente de organolítio (porexemplo butillítio) para realizar a permuta de lítio-halogênio em temperaturareduzida (por exemplo -789 C) em um solvente apropriado (por exemplotetraidrofurano) seguido por adição de um aldeído da Fórmula R1-(CH2)o-3-C(0)H. Após agitar durante várias horas e aquecer em temperaturaambiente, isolamento através de meios convencionais (por exemplo extraçãoe cromatografia de sílica-gel) fornece o composto da Fórmula lio.
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula Md
Composto da Fórmula llp (Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H,R41 é P, R43 é C(0)(CH2)0-3R1) é preparado reagindo o composto daFórmula lio com um agente oxidante (por exemplo periodinano de Dess-Martin), em um solvente apropriado (por exemplo tetraidrofurano). Apósagitar a uma a várias horas, isolamento através de meios convencionais (porexemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece o composto da
Fórmula llp.
Etapa 3 - Preparação do composto da Fórmula VI onde B é C-0 e D é(CHg)ffi
Composto da Fórmula Vli (fórmula VI onde M é C(0)(CH2)o-3) épreparado do composto da Fórmula llf através de remoção do grupo deproteção de N-l de acordo com o Esquema 43, Etapa 2.
Exemplo 86: Síntese dos compostos da Fórmula II
Composto da Fórmula II ((Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H,R41 é P, e R43 é S(0)2CI) pode ser sintetizado de um composto da Fórmulallf em duas Etapas como descritas no Esquema 143.
Esquema 143
<formula>formula see original document page 256</formula>
Etapa I - Preparação do composto da Fórmula Mg
Composto da Fórmula llq ((Fórmula Ma onde R15, R16 e R17 sãoH, R41 é P, e R43 é N2+) é preparado reagindo o composto da Fórmula llf(Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H, R41 é P, e R43 é NH2) com ácidoclorídrico aquoso e nitrito de sódio aquoso. Adição de água e sal resulta emprecipitação do composto e filtração fornece o sal de cloreto do diazônio daFórmula llq.
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula llr
Composto da Fórmula llr (Fórmula Ha onde R15, R16 e R17 são H,R41 é P, e R43 é S(0)2CI) é preparado reagindo o composto da Fórmula llq(Fórmula Ma onde R15, R16 e R17 são H, R41 é P, e R43 é N2+) com umamistura de cloreto cuproso em ácido acético saturado com dióxido deenxofre, esfriando (por exemplo 109 C). Após agitar durante 30 minutos auma hora, a mistura é vertida em água e o composto é isolado por extraçãoe concentração das porções orgânicas secadas para fornecer o composto daFórmula II. (Organic Syntheses, Coll. Vol. 7, pág.508; Vol. 60, pág.121).
Exemplo 87: Síntese dos compostos da Fórmula llt
Composto da Fórmula ((Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H,R41 é P, e R43 é COOH) pode ser sintetizado de um composto da Fórmula lisem uma Etapa como descrita no Esquema 144.
Esquema 144
<formula>formula see original document page 257</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula llt
Composto da Fórmula llt (Fórmula lia onde R15, R16 è R17 são H,R41 é P, e R43 é COOH) é preparado reagindo o composto da Fórmula lis(Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H, R41 é P, e R43 é MgBr) dissolvido emum solvente apropriado (por exemplo tetraidrofurano) com gelo seco. Adiçãode água e extração de ácido-base do composto fornece composto daFórmula llt.
Exemplo 88: Síntese dos compostos da Fórmula VI onde M éC(0)NR57(CH?)n.3 ou S(Q)pNR57(CHp)n-3
Composto da Fórmula Vlj (fórmula VI onde M é C(O)NR57(CH2)0-3 ou S(0)2NR57(CH2)o-3). onde R57 é consistente com definição de M para oscompostos da Fórmula Ib ou L2 para os compostos da Fórmula I) podem sersintetizados de um composto da Fórmula Mu em três Etapas como descritasno Esquema 145.
Esquema 145<formula>formula see original document page 258</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula llv
Composto da Fórmula llv (Fórmula Ma onde R15, R16 e R17 são H,R41 é P, e R43 é M2CI onde M2 é C(O) ou S(0)2) é preparado reagindo ocomposto da Fórmula llu (Fórmula lia onde R15, R16 e R17 são H, R41 é P, eR43 é M2OH onde M2 é C(O) ou S(0)2) com um reagente apropriado pararealizar a formação do cloreto de ácido ou cloreto de sulfonila (por exemplocloreto de tionila) com aquecimento (por exemplo 809 C) durante váriashoras, possivelmente em um solvente (por exemplo tolueno). Concentraçãoda mistura de reação fornece o composto da Fórmula llv que é usado sempurificação adicional.
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula llw
Composto da Fórmula llw (Fórmula Ha onde R15, R16 e R17 são H,R41 é P, e R43 é M2NR57-(CH2)0-3R1 onde M2 é C(O) ou S(0)2) é preparadoreagindo o composto da Fórmula llv com uma amina da FórmulaNR57H(CH2)0-3R1 na presença de base (por exemplo DIEA) em um solventeaprótico apropriado (por exemplo dimetilformamida, diclorometano). Apósagitar de uma a várias horas, isolamento através de meios convencionais(por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece os compostosda Fórmula llw.
Etapa 3 - Preparação do composto da Fórmula VI onde M é C(Q)NR57(CHp)o.2ou S(Q)?NR57(CHpW3Compostos da Fórmula Vlj (fórmula VI onde M éC(O)NR57(CH2)0-3 ou S(0)2NR57(CH2)o-3) são preparados do composto daFórmula llw através de remoção do grupo de proteção de N-l de acordo como Esquema 43, Etapa 2.
Compostos da Fórmula X ou Xa onde R43 é um substituinteapropriado para substituição adicional para fornecer M-R1 (por exemplo cloro,NH2, NHR57, OH, MgBr, C(0)OH, S(0)2OH; como descrito no Exemplos 78-88), e R42 é uma funcionalidade apropriada para acoplar ao anel de 7-azaindol ou seu análogo para formar A ou L, são úteis na síntese doscompostos da Fórmula I ou Ib ou compostos da Fórmula II como descritosno Exemplos 43 - 59.
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Muitos compostos da Fórmula X ou Xa estão comercialmentedisponíveis; por exemplo, muitos heterociclos contendo nitrogênio de 5 e 6membros onde R43 é cloro ou amino e R42 é um ácido carboxílico ou aldeído,estão, comercialmente disponíveis ou podem ser preparados usandométodos conhecidos.
Compostos da Fórmula Xa onde E, F, G, K, L são Cené 1 doscompostos da Fórmula Xi0. Exemplos para a síntese dos compostos daFórmula Xi0 e seu uso na síntese dos compostos da Fórmula I, Ib, e IIpodem também ser aplicados aos outros compostos que encaixam nadefinição da Fórmula X.
<formula>formula see original document page 259</formula>Compostos da Fórmula Xa onde R é um hidrogênio ouhalogênio (R60), e R15, R16 e R17 ou são como definidos para a fórmula Xa ousão substituintes apropriados para modificação adicional para fornecer oscompostos da Fórmula Xi, compostos da Fórmula X2o, que são úteis nasíntese dos compostos da Fórmula Xa.
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Uso dos compostos da Fórmula X10 ou X2o são exemplificadosnos exemplos a seguir como exemplos representativos de reações quepodem também ser úteis nas reações análogas usando os compostos daFórmula X ou Xa.
Exemplo 89: Síntese dos compostos da Fórmula Xin onde R42 é C(Q)H
Composto da Fórmula X10a (Fórmula X10 onde R42 é C(O)H)pode ser sintetizado de um composto da Fórmula X2oa em uma Etapa comodescrita no Esquema 146.
Esquema 146
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Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula X?ob
Composto da Fórmula X10a (Fórmula X10 onde R42 é C(O)H) épreparado reagindo o composto da Fórmula X2oa (Fórmula X20 onde R60 é Br)com um reagente de organolítio (por exemplo butillítio) para realizar apermuta de lítio-halogênio em temperatura reduzida (por exemplo -78g C) emum solvente apropriado (por exemplo tetraidrofurano) seguido por adição deum reagente de formilação (por exemplo dimetilformamida). Após agitardurante várias horas e aquecer em temperatura ambiente, isolamentoatravés de meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia desílica-gel), fornece os compostos da Fórmula Xioa. Compostos preferidos deX2oa para esta reação têm R15 como alquila inferior opcionalmentesubstituída, trifluorometila, CH2CF3) OR, ou SR, em que R é alquila inferioropcionalmente substituída.
Exemplo 90: Síntese dos compostos da Fórmula Xin onde R42 é C(Q)OH
Composto da Fórmula X10b (Fórmula X10 onde R42 é C(O)OH)pode ser sintetizado de um composto da Fórmula X2oa em uma Etapa comodescrita no Esquema 147.
Esquema 147
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Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula X10b
Composto da Fórmula Xi0b (Fórmula X10 onde R42 é C(O)OH) épreparado reagindo o composto da Fórmula X20a (Fórmula X20 onde R60 é Br)com magnésio sólido em um solvente apropriado (por exemplotetraidrofurano) possivelmente com um catalisador (por exemplo iodo) e comaquecimento (por exemplo 80- C) para fornecer o reagente de Grignardcorrespondente. Gelo seco é depois adicionado à reação para extinguir oGrignard e formar o ácido carboxílico em R42. Isolamento por evaporação eextração de ácido-base fornece o composto da Fórmula X10b.
Exemplo 91: Síntese dos compostos da Fórmula Xin onde R15 é alquilainferior opcionalmente substituída e R42 é C(Q)H
Composto da Fórmula Xi0C (Fórmula X10 onde R42 é C(0)H eR15 é alquila inferior opcionalmente substituída) pode ser sintetizado de umcomposto da Fórmula X20b em duas Etapas como descritas no Esquema 148.
Esquema 148<formula>formula see original document page 262</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula X?nC
Composto da Fórmula X2oC (Fórmula X2o onde R60 é H e R15 éalquila inferior opcionalmente substituída R61) é preparado dissolvendo ocomposto da Fórmula X2ob (Fórmula X20 onde R60 é H e R15 é Br) em umsolvente apropriado (por exemplo tolueno), seguido pela adição de umcatalisador de paládio (por exemplo [1,1'-Bis(difenilfosfino)-ferroceno]dicloropaládio(ll), complexo com diclorometano (1:1)). Após vários minutos,um reagente de Grignard da Fórmula R61-MgBr (onde R61 é alquila inferioropcionalmente substituída) pode ser adicionado e a reação aquecida (porexemplo 909 C) a uma a várias horas. Após filtração através de Celite,isolamento através de meios convencionais (por exemplo extração ecromatografia de sílica-gel) fornece o composto da Fórmula X20C.
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula X-mC
Composto da Fórmula X10C (Fórmula Xi0 onde R42 é C(0)H eR15 é alquila inferior opcionalmente substituída) é preparado reagindo ocomposto da Fórmula X2oC com um reagente de organolítio (por exemplodiisopropilamina de lítio) para realizar a litiação na posição de R42 emtemperatura reduzida (por exemplo -78Q C) em um solvente apropriado (porexemplo tetraidrofurano) seguido por adição de um reagente de formilação(por exemplo dimetilformamida). Após agitar durante várias horas e aquecerem temperatura ambiente, isolamento através de meios convencionais (porexemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece o composto daFórmula X10C.
Exemplo 92: Síntese dos compostos da Fórmula Xin onde R15 é OR62 ouSR62 e R42 é C(Q)H
Composto da Fórmula X10d (Fórmula Xi0 onde R42 é C(0)H e R15é OR62 ou SR62 onde R62 é alquila inferior opcionalmente substituída) podeser sintetizado de um composto da Fórmula X20d em duas Etapas comodescritas no Esquema 149
Esquema 149
<formula>formula see original document page 263</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula X?ne
Composto da Fórmula X2oe (Fórmula X2o onde R60 é H e R15 éLR62 onde L é O ou S e R62 é alquila inferior opcionalmente substituída) épreparado reagindo o composto da Fórmula X2od (Fórmula X20 onde R60 é He R15 é Cl) com um composto da Fórmula R62-OH ou R62-SH na presença debase (por exemplo hidreto de sódio) em um solvente apropriado (porexemplo dimetilformamida, tetraidrofurano) com aquecimento (por exemplo809 C). Após agitar durante várias horas, isolamento através de meiosconvencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece ocomposto da Fórmula X20e.
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula Xpnd
Composto da Fórmula X-i0d (Fórmula Xi0 onde R42 é C(0)H e R15é LR62 onde L é O ou S e R62 é alquila inferior opcionalmente substituída) épreparado reagindo o composto da Fórmula X20e com um reagente deorganolítio (por exemplo diisopropilamina de lítio) para realizar a ortolitiaçãona posição de R42 em temperatura reduzida (por exemplo -78g C) em umsolvente apropriado (por exemplo tetraidrofurano) seguido por adição de umreagente de formilação (por exemplo dimetilformamida). Após agitar durantevárias horas e aquecer em temperatura ambiente, isolamento através demeios convencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel)fornece o composto da Fórmula X10d.
Exemplo 93: Síntese dos compostos da Fórmula Xin onde R15 é halogênio e R42 é C(Q)H
Composto da Fórmula Xi0e (Fórmula X10 onde R42 é C(0)H e R15é halogênio) pode ser sintetizado de um composto da Fórmula X20f em duasEtapas como descritas no Esquema 150
Esquema 150
<formula>formula see original document page 264</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula X?og
Composto da Fórmula X2og (Fórmula X2o onde R60 é H e R15 écloro ou bromo (halogênio R63)) é preparado reagindo o composto daFórmula X2of (Fórmula X2o onde R60 é H e R15 é NH2) em ácido acéticoglacial com nitrito de sódio em ácido (por exemplo ácido clorídrico, ácidosulfúrico) para fornecer o intermediário de diazônio. Para formar oscompostos onde R63 é cloro ou bromo, o sal de diazônio é adicionado aocloreto de cuproso ou brometo cuproso, respectivamente, em ácido clorídricocom aquecimento (por exemplo 809 C) durante 30 minutos a uma hora. Sobadição da reação à água, seguido por isolamento através de meiosconvencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel),composto da Fórmula X2og é obtido onde R63 é cloro ou bromo.
Composto da Fórmula X20g (Fórmula X20 onde R60 é H e R15 éflúor (halogênio R63)) é preparado reagindo o composto da Fórmula X20f emum solvente aprótico apropriado (por exemplo tetraidrofurano oudiclorometano) com eterato de trifluoreto de boro. Subseqüentemente, nitritode terc-butila é adicionado enquanto a reação é esfriada (por exemplo -15e C)para fornecer o intermediário de tetrafluoroborato de diazônio como umprecipitado que pode ser colhido através de filtração. Para formar ocomposto onde R63 é flúor, o sal de diazônio é aquecido a seco com umqueimador para iniciar a evolução de borotrifluoreto que subseqüentementeprossegue de modo espontâneo. Após isolamento através de meiosconvencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel)composto da Fórmula X20g é obtido onde R63 é flúor. (Doyle e Bryker, J. Org.Chem. 1979, 44:1572; Schiemann e Winkelmiiller, Org. Syn. Coll. Vol. 2:299).
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula Xine
Composto da Fórmula Xi0e (Fórmula X10 onde R42 é C(0)H e R15é halogênio R63) é preparado reagindo o composto da Fórmula X2og com umreagente de organolítio (por exemplo diisopropilamina de lítio) para realizar aortolitiação na posição R42 em temperatura reduzida (por exemplo -78Q C)em um solvente apropriado (por exemplo tetraidrofurano) seguido por adiçãode um reagente de formilação (por exemplo dimetilformamida). Após agitardurante várias horas e aquecer em temperatura ambiente, isolamentoatravés de meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia desílica-gel) fornece o composto da Fórmula X10e.
Exemplo 94: Síntese dos compostos da Fórmula Xio onde R16 é alquilainferior opcionalmente substituída e R42 é C(Q)H
Composto da Fórmula Xi0f (Fórmula X10 onde R42 é C(0)H e R16é alquila inferior opcionalmente substituída) pode ser sintetizado de umcomposto da Fórmula X2oh em duas Etapas como descritas no Esquema 151.
Esquema 151
<formula>formula see original document page 265</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula X20i
Composto da Fórmula X2oi (Fórmula X2o onde R60 é H e R16 éalquila inferior opcionalmente substituída R64) é preparado dissolvendo ocomposto da Fórmula X20h (Fórmula X20 onde R60 é H e R16 é Br) em umsolvente apropriado (por exemplo tolueno), seguido pela adição de umcatalisador de paládio (por exemplo complexo de [1,1 '-Bis(difenilfosfino)-ferroceno] dicloropaládio(ll) com diclorometano (1:1)). Após vários minutos,um reagente de Grignard da Fórmula R64-MgBr (R64 é alquila inferioropcionalmente substituída) é adicionado e a reação aquecida (por exemplo90Q C) a uma a várias horas. Após filtração através de Celite, isolamentoatravés de meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia desílica-gel) fornece o composto da Fórmula X20i.
Etapa 2 - Preparação do composto de Fórmula X10fComposto da Fórmula X10f (Fórmula X10 onde R42 é C(0)H e R16é alquila inferior opcionalmente substituída R64) é preparado reagindo ocomposto da Fórmula X2oi com um reagente de organolítio (por exemplodiisopropilamina de lítio) para realizar a litiação na posição de R42 emtemperatura reduzida (por exemplo -789 C) em um solvente apropriado (porexemplo tetraidrofurano) seguido pela adição de um reagente de formilação(por exemplo dimetilformamida). Após agitar durante várias horas e aquecerem temperatura ambiente, isolamento através de meios convencionais (porexemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece o composto da Fórmula Xi.
Exemplo 95: Síntese dos compostos da Fórmula Xio onde R16 é halogênio e R42 é C(O)H
Composto da Fórmula Xi0g (Fórmula Xi0 onde R42 é C(0)H e R16é halogênio) pode ser sintetizado de um composto da Fórmula X20J em duasEtapas como descritas no Esquema 152.
Esquema 152
<formula>formula see original document page 266</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula X?ok
Composto da Fórmula X2ok (Fórmula X2o onde R60 é H e R16 écloro ou bromo (halogênio R65)) é preparado reagindo o composto daFórmula X20J (Fórmula X20 onde R60 é H e R16 é NH2) em ácido acéticoglacial com nitrito de sódio em ácido (por exemplo ácido clorídrico, ácidosulfúrico) para fornecer o intermediário de diazônio. Para formar o compostoonde R65 é cloro ou bromo, o sal de diazônio é adicionado ao cloretocuproso ou brometo cuproso, respectivamente, em ácido clorídrico comaquecimento (por exemplo 80e C) durante 30 minutos a uma hora. Sobadição da reação à água, seguido por isolamento através de meiosconvencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel)composto da Fórmula X20k é obtido onde R65 é bromo ou cloro.Composto da Fórmula X2ok (Fórmula X20 onde R é H e R éflúor (halogênio R65)) é preparado reagindo o composto da Fórmula X2oJ ernum solvente aprótico apropriado (por exemplo tetraidrofurano oudiclorometano) com eterato de trifuloreto de boro. Subseqüentemente, nitritode terc-butila pode ser adicionado enquanto a reação é esfriada (porexemplo -15Q C) para fornecer o intermediário de tetrafluoroborato dediazônio como um precipitado que pode ser colhido através de filtração. Paraformar os compostos onde R65 é flúor, o sal de diazônio é aquecido a secocom um queimador para iniciar a evolução de borotrifluoreto quesubseqüentemente prossegue de modo espontâneo. Após isolamentoatravés de meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia desílica-gel), composto da Fórmula X20k onde RI5 é H e R65 é flúor são obtidos.(Doyle e Bryker, J. Org. Chem. 1979, 44:157; Schiemann e Winkelmüller,Org. Syn. Coll. Vol. 2:299).
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula XinP.
Composto da Fórmula X10g (Fórmula Xi0 onde R42 e C(0)H e R16é halogênio R65) é preparado reagindo o composto da Fórmula Xa defórmula X20k com um reagente de organolítio (por exemplo diisopropilaminade lítio) para realizar a litiação na posição de R42 em temperatura reduzida(por exemplo -78g C) em um solvente apropriado (por exemplotetraidrofurano) seguido por adição de um reagente de formilação (porexemplo dimetilformamida). Após agitar durante várias horas e aquecer emtemperatura ambiente, isolamento através de meios convencionais (porexemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece os compostos daFórmula X10g.
Exemplo 96: Síntese dos compostos da Fórmula X10 onde R16 é OR66 e R42é C(Q)H
Composto da Fórmula X10h (Fórmula X10 onde R42 é C(0)H e R16é OR66 onde R66 é alquila inferior opcionalmente substituída) pode sersintetizado de um composto da Fórmula X20h em duas Etapas comodescritas no Esquema 153.
Esquema 153<formula>formula see original document page 268</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula X20m
Composto da Fórmula X2om (Fórmula X2o onde R60 é H e R16 éOR66 onde R66 é alquila inferior opcionalmente substituída) é preparadoreagindo o composto da Fórmula X2oh (Fórmula X20 onde R60 é H e R16 é Br)com o composto da Fórmula R66-OH (R66 é alquila inferior opcionalmentesubstituída) na presença de base (por exemplo hidreto de sódio) e umcatalisador de cobre (por exemplo brometo de cobre) em um solvente não-reativo (por exemplo dimetilformamida) com aquecimento (por exemplo 1209C) durante várias horas. Isolamento através de meios convencionais (porexemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece o composto daFórmula X20m.
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula X-10h
Composto da Fórmula X10h (Fórmula Xi0 onde R42 é C(0)H e R16é OR66 onde R66 é alquila inferior opcionalmente substituída) é preparadoreagindo o composto da Fórmula X2 com com um reagente de organolítio(por exemplo diisopropilamina de lítio) para realizar a ortolitiação na posiçãode R42 em temperatura reduzida (por exemplo -78e C) em um solventeapropriado (por exemplo tetraidrofurano) seguido pela adição de umreagente de formilação (por exemplo dimetilformamida). Após agitar durantevárias horas e aquecer em temperatura ambiente, isolamento através demeios convencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel)fornece o composto da Fórmula Xi0h.
Exemplo 97: Síntese dos compostos da Fórmula X-m onde R17 é halogênio eR42 é C(O)H
Composto da Fórmula X10i (Fórmula X10 onde R42 é C(0)H e R17é halogênio) pode ser sintetizado de um composto da Fórmula X20n em duasEtapas como descritas no Esquema 154.
Esquema 154<formula>formula see original document page 269</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula X20O
Composto da Fórmula X2oO (Fórmula X20 onde R60 é H e R17 écloro ou bromo (halogênio R )) é preparado reagindo o composto daFórmula X2on (Fórmula X2o onde R60 é H e R17 é NH2) em ácido glacial-acético com nitrito de sódio em ácido (por exemplo ácido clorídrico, ácidosulfúrico) para fornecer o intermediário de diazonio. Para formar oscompostos onde R67 é cloro ou bromo, o sal de diazonio é adicionado aocloreto cuproso ou brometo cuproso, respectivamente, em ácido clorídricocom aquecimento (por exemplo 809 C) durante 30 minutos a uma hora. Emadição da reação para água, seguido por isolamento através de meiosconvencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel)composto da Fórmula X20o onde R67 é bromo ou cloro são obtidos.
Composto da Fórmula X20o (Fórmula X20 onde R60 é H e R17 éflúor (halogênio R )) é preparado reagindo o composto da Fórmula X20n emum solvente aprótico apropriado (por exemplo tetraidrofurano oudiclorometano) com eterato de trifuloreto de boro. Subseqüentemente, nitritode terc-butila pode ser adicionado enquanto a reação é esfriada (porexemplo -15g C) para fornecer o intermediário de tetrafluoroborato dediazonio como um precipitado que pode ser colhido através de filtração. Paraformar os compostos onde R67 é flúor, o sal de diazonio é aquecido a secocom um queimador para iniciar a evolução de borontrifluoreto quesubseqüentemente prossegue de modo espontâneo. Após isolamentoatravés de meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia desílica-gel) os compostos da Fórmula X20O onde R67 é flúor são obtidos.(Doyle e Bryker, J. Org. Chem. 1979, 44:1572, Schiemann e Winkelmüller,Org. Syn. Coll. Vol. 2:299).
Etapa 2 - Preparação do composto de Fórmula X10i
O composto da Fórmula X10i (Fórmula X10 onde R42 é C(0)H eR17 é halogênio R67) é preparado reagindo o composto da Fórmula X2oO comum reagente de organolítio (por exemplo diisopropilamina de lítio) pararealizar a litiação na posição de R42 em temperatura reduzida (por exemplo -78Q C) em um solvente apropriado (por exemplo tetraidrofurano) seguido poradição de um reagente de formilação (por exemplo dimetilformamida). Apósagitar durante várias horas e aquecer em temperatura ambiente, isolamentoatravés de meios convencionais (por exemplo extração e cromatografia desílica-gel) fornece os compostos da Fórmula Xioi.
Exemplo 98: Síntese dos compostos da Fórmula Xin onde R17 é QR68 e R42 é C(Q)H
Composto da Fórmula Xioj (Fórmula X10 onde R42 é C(0)H e R17é OR68 onde R68 é alquila inferior opcionalmente substituída) pode sersintetizado de um composto da Fórmula X2oP em duas Etapas comodescritas no Esquema 155.
Esquema 155
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Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula X10d
Composto da Fórmula X2oq (Fórmula X2o onde R60 é H e R17OR68 é onde R68 é alquila inferior opcionalmente substituída) é preparadoreagindo o composto da Fórmula X2oP (Fórmula X20 onde R60 é H e R17 é Br)com o composto da Fórmula R68-OH (R68 é alquila inferior opcionalmentesubstituída) na presença de uma base (por exemplo hidreto de sódio) e umcatalisador de cobre (por exemplo brometo de cobre) em um solvente não-reativo (por exemplo dimetilformamida) com aquecimento (por exemplo 120-C) durante várias horas. Isolamento através de meios convencionais (porexemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece o composto daFórmula X20q.
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula X10i
Composto da Fórmula X10J (Fórmula X10 onde R42 é C(0)H e R17é OR68 onde R68 é alquila inferior opcionalmente substituída) é preparadoreagindo o composto da Fórmula X2oq com um reagente de organolítio (porexemplo diisopropilamina de lítio) para realizar a litiação na posição de R42em temperatura reduzida (por exemplo -789 C) em um solvente apropriado(por exemplo tetraidrofurano) seguido por adição de um reagente deformilação (por exemplo dimetilformamida). Após agitar durante várias horase aquecer em temperatura ambiente, isolamento através de meiosconvencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel) forneceos compostos da Fórmula X10j.
Exemplo 99: Síntese dos compostos da Fórmula X onde n=1; G é N; K, J, Fe E são C; R15 e R16 são alquila inferior opcionalmente substituída; M é NH-D- e R42 é C(0)H
Compostos da Fórmula X onde n=1 e G é N são derivados depirimidina que podem ser preparados através de muitas vias conhecidas naliteratura e usados em reações análogas àquelas descritas para oscompostos da Fórmula Xa, como nos Exemplos 89-98, M é NH-D, onde D éconsistente com a definição de M. A síntese de um tal composto éexemplificada no Esquema 156 como segue.
Esquema 156
Formula XVII Formula Xs0
<formula>formula see original document page 271</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula Xsn
Composto da Fórmula X30 (Fórmula Xa onde n=1, G é N, K, J. Fe E são C, R15 e R16 são alquila inferior opcionalmente substituída (R69 e R70,respectivamente), R43 é S-l e R42 é H) é preparado reagindo tiouréia 510com composto da Fórmula XVII (R69 e R70 são independentemente alquilainferior opcionalmente substituída) na presença de uma base (por exemplohidróxido de sódio) em um solvente não-reativo (por exemplo etanol) durantevárias horas. Subseqüentemente, a adição de iodeto de metila comaquecimento (por exemplo 609 C) durante várias horas, seguido porisolamento através de meios convencionais (por exemplo extração ecromatografia de sílica-gel) fornece o composto da Fórmula X30.
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula X40
Compostos da Fórmula X40 (fórmula X onde n=1, G é N, K, J. F eE são C, R15 e R16 são alquila inferior opcionalmente substituída (R69 e R70,respectivamente), M é NH-D- (D é consistente com definição de M daFórmula Ib ou L2 ou fórmula I) e R42 é H) são preparados reagindo ocomposto da Fórmula X30 com composto da Fórmula NH2-D-R1 (por exemplobenzil amina ou outro nucleófilo adequado) na presença de base (porexemplo hidreto de sódio) em um solvente não-reativo (por exemplodimetilformamida) durante várias horas. Isolamento através de meiosconvencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel) forneceos compostos da Fórmula X40.
Etapa 3 - Preparação do composto da Fórmula XRn
Compostos da Fórmula X50 (fórmula X onde n=1, G é N, K, J, F eE são C, R15 e R16 são alquila inferior opcionalmente substituída (R69 e R70,respectivamente), M é NH-D- (D é consistente com definição de M daFórmula Ib ou L2 ou fórmula I) e R42 é C(O)H) é preparado reagindo ocomposto da Fórmula X4o com um reagente de organolítio (por exemplodiisopropilamina de lítio) para realizar a litiação na posição de R42 emtemperatura reduzida (por exemplo -78e C) em um solvente apropriado (porexemplo tetraidrofurano) seguido por adição de um reagente de formilação(por exemplo dimetilformamida). Após agitar durante várias horas e aquecerem temperatura ambiente, isolamento através de meios convencionais (porexemplo extração e cromatografia de sílica-gel) fornece os compostos daFórmula X50 que pode ser usado na síntese do composto da Fórmula II quepode ser usado na síntese do composto da Fórmula Ib.
Exemplo 100: Síntese dos compostos da Fórmula Xa onde n=0; K é S; J. E,e F são C; R43 é NHP; R15 é alquila inferior opcionalmente substituída ouopcionalmente alcóxi inferior substituído e R42 é COOH
Compostos da Fórmula X onde n=0 são heterociclos de 5membros que podem ser preparados através de muitas rotas conhecidas naliteratura e usados em reações análogas àqueles descritas para oscompostos da Fórmula Xa, como nos Exemplos 89-98. A síntese de um talcomposto é exemplificada no Esquema 157 como segue.
Esquema 157
<formula>formula see original document page 273</formula>
Etapa 1 - Preparação do composto da Fórmula Xgn
Composto da Fórmula X6o (Fórmula Xa onde n=0, K é S, J. E, eF são C, R43 é NH2, R15 é R71 (R71 é alquila inferior opcionalmentesubstituída ou O-R72 onde R72 é alquila inferior opcionalmente substituída) eR42 é CO2R onde R é alquila inferior) é preparado reagindo tiouréia 510 como composto da Fórmula XVI onde R71 é alquila inferior opcionalmentesubstituída ou O-R72 (R72 é alquila inferior opcionalmente substituída) e R éalquila inferior em um solvente não-reativo (por exemplo dimetilformamida,etanol) com aquecimento (por exemplo 609 C) durante várias horas.Isolamento através de meios convencionais (por exemplo extração ecromatografia de sílica-gel) fornece o composto da Fórmula X60.
Etapa 2 - Preparação do composto da Fórmula X™
Composto da Fórmula X?o (Fórmula Xa onde n=0, K é S, J. E, eF são C, R43 é NHP onde P é um grupo de proteção [por exemplotriisopropilsilila, t-butiloxicarbonila]), R15 é R71 e R42 são C02R onde R éalquila inferior) é preparado reagindo o composto da Fórmula X60 com umreagente apropriado para introduzir o grupo de proteção (por exemplocloreto de triisopropilsilila, anidrido de Boc) na presença de uma base (porexemplo hidreto de sódio, diisopropiletilamina) em um solvente não-reativo(por exemplo dimetilformamida) durante várias horas. Isolamento através demeios convencionais (por exemplo extração e cromatografia de sílica-gel)fornece o composto da Fórmula X70.
Etapa 3 - Preparação do composto da Fórmula X»n
Composto da Fórmula X8o (Fórmula Xa onde n=0, K é S, J. E, eF são C, R43 é NHP, R15 é R71 e R42 é C02H) é preparado reagindo ocomposto da Fórmula X70 com uma base (por exemplo hidróxido de lítio) emum solvente apropriado (por exemplo tetraidrofurano e água) durante váriashoras. Isolamento através de meios convencionais (por exemplo extração deácido-base) fornece o composto de X8o que pode ser usado na síntese docomposto da Fórmula II onde R43 é NHP que pode ser usado para fazer ocomposto da Fórmula Ib.
Exemplo 101 Síntese de 3.5-Dimetil-4-(1H-pirrolf2,3-b1piridin-3-ilmetil)-benzilamida de ácido pirazol-1-carboxílico P-0084
Benzilamida de ácido 3,5-Dimetil-4-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-pirazol-1-carboxílico P-0084 foi sintetizado em 6 etapas de dimetil-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-amina 2 como mostrado no esquema 158.
Esquema 158
<formula>formula see original document page 274</formula>
Etapa 1: Preparação de éster de terc-butila de ácido 3-Dimetilaminometil-pirrol[2,3-b1piridina-1-carboxílico (511)
À dimetil-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-amina (2, 2,50 g, 14,3mmois, preparada como descrita no Exemplo 2, Esquema 4, Etapa 1) emtetraidrofurano (200,0 ml) foi adicionado hidreto de sódio (0,685 g, 60 % emóleo mineral, 17,1 mmois). Após 10 minutos, di-terc-butildicarbonato (3,74 g,17,1 mmois) foi adicionado à reação. A reação foi agitada em temperaturaambiente durante a noite. A reação foi vertida em água e extraída comacetato de etila. A camada orgânica foi secada em sulfato de sódio anidro efiltrada. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia de colunade sílica-gel eluindo com 30 % de acetato de etila em hexano para dar comoum sólido branco (511, 3,80 g, 96,7 %). Etapa 2: Preparação de éster deterc-butila de ácido 3-Clorometil-pirrol[2,3-b]piridino-1 -carboxílico (512)
Ao éster de terc-butila de ácido 3-dimetilaminometil-pirrol[2,3-b]piridino-1-carboxílico (511, 2,60 g, 9,44 mmois) em tolueno (50,00 ml)foram adicionados cloroformato de isopropila (11,3 ml, 1,0 M em tolueno)sob uma atmosfera de nitrogênio. A reação foi agitada em temperaturaambiente durante 3 horas. A reação foi vertida em água e extraída comacetato de etila. A camada orgânica foi secada em sulfato de sódio anidro efiltrada. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia de colunade sílica-gel eluindo com 20 % de acetato de etila em hexano para dar umsólido branco (512, 2,0 g, 79,4 %).
Etapa 3 - Preparação de éster de terc-butila de ácido 3-(2-Acetil-3-oxo-butiQ-pirrolí2.3-b1piridina-1 -carboxílico (513):
À acetilacetona (0,563 g, 5,62 mmois) em sulfóxido de dimetila(29,0 ml) foi adicionado hidreto de sódio (0,225 g, 60 % em óleo mineral,5,62 mmois). Após 20 minutos, éster de terc-butila de ácido 3-clorometil-pirrol[2,3-b]piridina-1-carboxílico (512, 1,00 g, 3,75 mmois) foi adicionado àreação. A reação foi agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. Areação foi vertida em água e extraída com acetato de etila. A camadaorgânica foi secada em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foiconcentrado e purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindocom 40 % de acetato de etila em hexano para dar um óleo incolor (513, 0,59g, 48,0 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 331,4.
Etapa 4 - Preparação de éster de terc-butila de ácido 3-(3.5-Dimetil-1H-pirazol-4-ilmetil)-pirrolf2,3-b1piridina-1 -carboxílico (514)
Ao éster de terc-butila de ácido 3-(2-acetil-3-oxo-butil)-pirrol[2,3-b]piridina-1 -carboxílico (513, 1,20 g, 3,63 mmols) em metanol (15,0 ml),esfriado para -209 C sob uma atmosfera de nitrogênio, foi adicionadahidrazina (0,128 g, 4,00 mmols) em diclorometano (6,0 ml). A reação foiagitada durante 2 horas. A reação foi concentrada para remover ossolventes, e o resíduo foi vertido em água e extraído com acetato de etila. Acamada orgânica foi secada em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtradofoi concentrado e purificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindocom 60 % de acetato de etila em hexano para dar um sólido branco (514, 1,0g, 84,4 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 327,4.
Etapa 5 - Preparação de éster de terc-butila de ácido 3-(1-Benzilcarbamoil-3.5-dimetil-1 H-pirazol-4-ilmetil)-pirrol[2,3-b1piridina-1 -carboxílico (515)
Ao éster de terc-butila de ácido 3-(3,5-dimetil-1H-pirazol-4-ilmetil)-pirrol[2,3-b]piridino-1-carboxílico (514, 60,0 mg, 0,18 mmol) emdiclorometano (6,0 ml) foram adicionados 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno(0,033 ml, 0,220 mmol) e isocianato de benzila (29,4 mg, 0,220 mmol) sobuma atmosfera de nitrogênio. A reação foi agitada em temperatura ambientedurante 2 horas. A reação foi concentrada e purificada por cromatografia decoluna de sílica-gel eluindo com 30 % de acetato de etila em hexano paradar o composto bruto (515, aprox. 50 mg) que foi diretamente usado napróxima etapa. MS (ESI) [M+H+]+ = 460,5.
Etapa 6 - benzilamida de ácido 3,5-Dimetil-4-(1 H-pirrol[2,3-b1piridin-3-ilmetil)-pirazol-1-carboxílico (P-0084)
Ao éster de terc-butila de ácido 3-(1-benzilcarbamoil-3,5-dimetil-1H-pirazol-4-ilmetil)-pirrol[2,3-b]piridina-1-carboxílico (515, 50,0 mg, 0,11mmol) em diclorometano (6,0 ml) foi adicionado ácido trifluoroacético (0,20ml, 2,6 mmols) sob uma atmosfera de nitrogênio. A reação foi agitada emtemperatura ambiente durante 20 minutos. A reação foi vertida em carbonatode potássio aquoso e extraída com acetato de etila. A camada orgânica foisecada em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi concentrado epurificado por cromatografia de coluna de sílica-gel eluindo com 30 % deacetato de etila em hexano para dar um sólido branco (P-0084, 11,0 mg,28,1 %). MS (ESI) [M+H+]+ = 360,5.
Compostos adicionais foram perparados seguindo o protocolo doEsquema 158, substituindo isocianato de benzila com um eletrófiloapropriado na Etapa 5. Os compostos a seguir foram feitos seguindo esteprocedimento:
fenilamida de ácido 3,5-Dimetil-4-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-pirazol-1 -carboxílico (P-0085),
[3,5-Dimetil-4-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-pirazol-l-il]-fenil-metanona (P-0086),
1 -[3,5-Dimetil-4-(1 H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-pirazol-1 -il]-3-fenil-propan-1-ona (P-0087),
3-(3,5-Dimetil-1 -fenilmetanossulfonil-1 H-pirazol-4-ilmetil)-1 H-pirrol[2,3-b]piridina (P-0088),
3-[1 -(Butano-1 -sulfonil)-3,5-dimetil-1 H-pirazol-4-ilmetil]-1 H-pirrol[2,3-b]piridina (P-0089),
butilamida de ácido 3,5-Dimetil-4-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-ilmetil)-pirazol-1 -carboxílico (P-0090), e
amida de ácido 3,5-Dimetil-4-(1H-pirrol[2,3-b]piridin-3-fenetil-ilmetil)-pirazol-1-carboxílico (P-0091).
O eletrófilo usado no lugar de isocianato de benzila na Etapa 5 éindicado na Coluna 2 da tabela a seguir, com a estrutura de composto dadana Coluna 3. Coluna 1 fornece o número do composto e a Coluna 4 oresultado da espectrometria de massa experimental.<table>table see original document page 278</column></row><table>
Todas as patentes e outras referências citadas no relatóriodescritivo são indicativas do nível de habilidade daqueles versados natécnica aos quais a invenção refere-se, e são incorporadas por referênciaem suas totalidades, incluindo quaisquer tabelas e figuras, na mesmaproporção como se cada referência tivesse sido incorporada por referênciaem sua totalidade individualmente.
Alguém versado na técnica apreciaria facilmente que a presenteinvenção é bem adaptada para obter as finalidades e vantagensmencionadas, como também aquelas inerentes a ela. Os métodos,variâncias, e composições descritos aqui como presentementerepresentativos das modalidades preferidas são exemplares e não sãointencionados como limitações no escopo da invenção. Alterações nelas eoutros usos ocorrerão àqueles versados na técnica, que estão abrangidosdentro do espírito da invenção, são definidos pelo escopo das reivindicações.
Será facilmente evidente a alguém versado na técnica quesubstituições e modificações variadas podem ser feitas à invenção descritaaqui sem divergir do escopo e espírito da invenção. Por exemplo, variaçõespodem ser feitas para fornecer os compostos adicionais da Fórmula I e/ouvários métodos de administração podem ser usados. Desse modo, taismodalidades adicionais estão dentro do escopo da presente invenção e dasreivindicações a seguir.
A invenção ilustrativa mente descrita aqui adequadamente podeser praticada na ausência de qualquer elemento ou elementos, limitação oulimitações que especificamente não são descritas aqui. Os termos eexpressões que foram empregados são usados como termos de descrição enão de limitação, e não há nenhuma intenção que no uso de tais termos eexpressões exclua quaisquer equivalentes das características mostradas edescritas ou porções destas, mas é reconhecido que várias modificaçõessão possíveis dentro do escopo da invenção reivindicada.
Desse modo, deveria ser entendido que embora a presenteinvenção tenha sido especificamente descrita por modalidades preferidas ecaracterísticas opcionais, modificação e variação dos conceitos aquidescritos podem ser recorridas por aqueles versados na técnica, e que taismodificações e variações são consideradas estar dentro do escopo destainvenção como definida pelas reivindicações em anexo.
Além disso, onde características ou aspectos da invenção sãodescritos em termos de grupos de Markush ou outro agrupamento dealternativas, aqueles versados na técnica reconhecerão que a invenção étambém assim descrita em termos de qualquer membro individual ousubgrupo de membros do grupo de Markush ou outro grupo.
Também, a menos que do contrário indicado, onde váriosvalores numéricos forem providos para modalidades, modalidades adicionaissão descritas tomando quaisquer 2 valores diferentes como os pontos finaisde uma faixa. Tais faixas estão também dentro do escopo da invenção descrita.
Desse modo, modalidades adicionais estão dentro do escopo dainvenção e dentro das reivindicações a seguir.
LISTAGEM DE SEQÜÊNCIAS
SEQ ID NO: 1 Seqüência NP_000213
Met Arg Gly Ala Arg Gly Ala Trp Asp Phe Leu Cys Vai Leu Leu Leu Leu Leu Arg
Vai Gln Thr Gly Ser Ser Gln Pro Ser Vai Ser Pro Gly Glu Pro Ser Pro Pro Ser
He His Pro Gly Lys Ser Asp Leu lie Vai Arg Vai Gly Asp Glu lie Arg Leu Leu
Cys Thr Asp Pro Gly Phe Vai Lys Trp Thr Phe Glu lie Leu Asp Glu Thr Asn Glu
Asn Lys Gln Asn Glu Trp lie Thr Glu Lys Ala Glu Ala Thr Asn Thr Gly Lys Tyr
Thr Cys Thr Asn Lys His Gly Leu Ser Asn Ser lie Tyr Vai Phe Vai Arg Asp Pro
Ala Lys Leu Phe Leu Vai Asp Arg Ser Leu Tyr Gly Lys Glu Asp Asn Asp Thr Leu
Vai Arg Cys Pro Leu Thr Asp Pro Glu Vai Thr Asn Tyr Ser Leu Lys Gly Cys Gln
Gly Lys Pro Leu Pro Lys Asp Leu Arg Phe lie Pro Asp Pro Lys Ala Gly lie Met
lie Lys Ser Vai Lys Arg Ala Tyr His Arg Leu Cys Leu His Cys Ser Vai Asp Gin
Glu Gly Lys Ser Vai Leu Ser Glu Lys Phe lie Leu Lys Vai Arg Pro Ala Phe Lys
Ala Vai Pro Vai Vai Ser Vai Ser Lys Ala Ser Tyr Leu Leu Arg Glu Gly Glu Glu
Phe Thr Vai Thr Cys Thr lie Lys Asp Vai Ser Ser Ser Vai Tyr Ser Thr Trp Lys
Arg Glu Asn Ser Gln Thr Lys Leu Gln Glu Lys Tyr Asn Ser Trp His His Gly Asp
Phe Asn Tyr Glu Arg Gln Ala Thr Leu Thr lie Ser Ser Ala Arg Vai Asn Asp Ser
Gly Vai Phe Met Cys Tyr Ala Asn Asn Thr Phe Gly Ser Ala Asn Vai Thr Thr Thr
Leu Glu Vai Vai Asp Lys Gly Phe lie Asn lie Phe Pro Met lie Asn Thr Thr Vai
Phe Vai Asn Asp Gly Glu Asn Vai Asp Leu lie Vai Glu Tyr Glu Ala Phe Pro Lys
Pr o Glu His Gln Gin Trp lie Tyr Met Asn Arg Thr Phe Thr Asp Lys Trp Glu Asp
Tyr Pro Lys Ser Glu Asn Glu Ser Asn lie Arg Tyr Vai Ser Glu Leu His Leu Thr
Arg Leu Lys Gly Thr Glu Gly Gly Thr Tyr Thr Phe Leu Vai Ser Asn Ser Asp Vai
Asn Ala Ala lie Ala Phe Asn Vai Tyr Vai Asn Thr Lys Pro Glu lie Leu Thr TyrAsp Arg Leu Vai Asn Gly Met Leu Gln Cys Vai Ala Ala Gly Phe Pro Glu Pro Thrlie Asp Trp Tyr Phe Cys Pro Gly Thr Glu Gln Arg Cys Ser Ala Ser Vai Leu ProVai Asp Vai Gin Thr Leu Asn Ser Ser Gly Pro Pro Phe Gly Lys Leu Vai Vai GlnSer Ser lie Asp Ser Ser Ala Phe Lys His Asn Gly Thr Vai Glu Cys Lys Ala TyrAsn Asp Vai Gly Lys Thr Ser Ala Tyr Phe Asn Phe Ala Phe Lys Gly Asn Asn LysGlu Gln lie His Pro His Thr Leu Phe Thr Pro Leu Leu lie Gly Phe Vai Tle VaiAla Gly Met Met Cys lie lie Vai Met lie Leu Thr Tyr Lys Tyr Leu Gln Lys ProMet Tyr Glu Vai Gln Trp Lys Vai Vai Glu Glu lie Asn Gly Asn Asn Tyr Vai Tyrlie Asp Pro Thr Gin Leu Pro Tyr Asp His Lys Trp Glu Phe Pro Arg Asn Arg LeuSer Phe Gly Lys Thr Leu Gly Ala Gly Ala Phe Gly Lys Vai Vai Glu Ala Thr AlaTyr Gly Leu lie Lys Ser Asp Ala Ala Met Thr Vai Ala Vai Lys Met Leu Lys ProSer Ala His Leu Thr Glu Arg Glu Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Vai Leu Ser TyrLeu Gly Asn His Met Asn lie Vai Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr lie Gly Gly ProThr Leu Vai lie Thr Glu Tyr Cys Cys Tyr Gly Asp Leu Leu Asn Phe Leu Arg ArgLys Arg Asp Ser Phe lie Cys Ser Lys Gln Glu Asp His Ala Glu Ala Ala Leu TyrLys Asn Leu Leu His Ser Lys Glu Ser Ser Cys Ser Asp Ser Thr Asn Glu Tyr MetAsp Met Lys Pro Gly Vai Ser Tyr Vai Vai Pro Thr Lys Ala Asp Lys Arg Arg SerVai Arg lie Gly Ser Tyr lie Glu Arg Asp Vai Thr Pro Ala lie Met Glu Asp AspGlu Leu Ala Leu Asp Leu Glu Asp Leu Leu Ser Phe Ser Tyr Gln Vai Ala Lys GlyMet Ala Phe Leu Ala Ser Lys Asn Cys lie His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn lieLeu Leu Thr His Gly Arg lie Thr Lys lie Cys Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp lieLys Asn Asp Ser Asn Tyr Vai Vai Lys Gly Asn Ala Arg Leu Pro Vai Lys Trp MetAla Pro Glu Ser lie Phe Asn Cys Vai Tyr Thr Phe Glu Ser Asp Vai Trp Ser TyrGly lie Phe Leu Trp Glu Leu Phe Ser Leu Gly Ser Ser Pro Tyr Pro Gly Met ProVai Asp Ser Lys Phe Tyr Lys Met lie Lys Glu Gly Phe Arg Met Leu Ser Pro GluHis Ala Pro Ala Glu Met Tyr Asp lie Met Lys Thr Cys Trp Asp Ala Asp Pro LeuLys Arg Pro Thr Phe Lys Gln lie Vai Gln Leu lie Glu Lys Gln lie Ser Glu SerThr Asn His lie Tyr Ser Asn Leu Ala Asn Cys Ser Pro Asn Arg Gln Lys Pro VaiVai Asp His Ser Vai Arg lie Asn Ser Vai Gly Ser Thr Ala Ser Ser Ser Gln ProLeu Leu Vai His Asp Asp Vai
SEQ ID NO: 2 Seqüência NM_000222
1 gatcccatcg cagctaccgc gatgagaggc gctcgcggcg cctgggattt tctctgcgtt61 ctgctcctac tgcttcgcgt ccagacaggc tcttctcaac catctgtgag tccaggggaa121 ccgtctccac catccatcca tccaggaaaa tcagacttaa tagtccgcgt gggcgacgag181 attaggctgt tatgcactga tccgggcttt gtcaaatgga cttttgagat cctggatgaa241 acgaatgaga ataagcagaa tgaatggatc acggaaaagg cagaagccac caacaccggc301 aaatacacgt gcaccaacaa acacggctta agcaattcca tttatgtgtt tgttagagat361 cctgccaagc ttttccttgt tgaccgctcc ttgtatggga aagaagacaa cgacacgctg421 gtccgctgtc ctctcacaga cccagaagtg accaattatt ccctcaaggg gtgccagggg481 aagcctcttc ccaaggactt gaggtttatt cctgacccca aggcgggcat catgatcaaa541 agtgtgaaac gcgcctacca tcggctctgt ctgcattgtt ctgtggacca ggagggcaag601 tcagtgctgt cggaaaaatt catcctgaaa gtgaggccag ccttcaaagc tgtgcctgtt661 gtgtctgtgt ccaaagcaag ctatcttctt agggaagggg aagaattcac agtgacgtgc721 acaataaaag atgtgtctag ttctgtgtac tcaacgtgga aaagagaaaa cagtcagact781 aaactacagg agaaatataa tagctggcat cacggtgact tcaattatga acgtcaggca841 acgttgacta tcagttcagc gagagttaat gattctggag tgttcatgtg ttatgccaat901 aatacttttg gatcagcaaa tgtcacaaca accttggaag tagtagataa aggattcatt961 aatatcttcc ccatgataaa cactacagta tttgtaaacg atggagaaaa tgtagatttg1021 attgttgaat atgaagcatt ccccaaacct gaacaccagc agtggatcta tatgaacaga1081 accttcactg ataaatggga agattatccc aagtctgaga atgaaagtaa tatcagatac 1141gtaagtgaac ttcatctaac gagattaaaa ggcaccgaag gaggcactta cacattccta 1201gtgtccaatt ctgacgtcaa tgctgccata gcatttaatg tttatgtgaa tacaaaacca 1261gaaatcctga cttacgacag gctcgtgaat ggcatgctcc aatgtgtggc agcaggattc 1321ccagagccca caatagattg gtatttttgt ccaggaactg agcagagatg ctctgcttct 1381gtactgccag tggatgtgca gacactaaac tcatctgggc caccgtttgg aaagctagtg 1441gttcagagtt ctatagattc tagtgcattc aagcacaatg gcacggttga atgtaaggct 1501tacaacgatg tgggcaagac ttctgcctat tttaactttg catttaaagg taacaacaaa 1561gagcaaatcc atccccacac cctgttcact cctttgctga ttggtttcgt aatcgtagct 1621ggcatgatgt gcattattgt gatgattctg acctacaaat atttacagaa acccatgtat 1681gaagtacagt ggaaggttgt tgaggagata aatggaaaca attatgttta catagaccca 1741acacaacttc cttatgatca caaatgggag tttcccagaa acaggctgag ttttgggaaa 1801accctgggtg ctggagcttt cgggaaggtt gttgaggcaa ctgcttatgg cttaattaag 1861tcagatgcgg ccatgactgt cgctgtaaag atgctcaagc cgagtgccca tttgacagaa 1921cgggaagccc tcatgtctga actcaaagtc ctgagttacc ttggtaatca catgaatatt 1981gtgaatctac ttggagcctg caccattgga gggcccaccc tggtcattac agaatattgt 2041
tgctatggtg atcttttgaa ttttttgaga agaaaacgtg attcatttat ttgttcaaag 2101
caggaagatc atgcagaagc tgcactttat aagaatcttc tgcattcaaa ggagtcttcc 2161
tgcagcgata gtactaatga gtacatggac atgaaacctg gagtttctta tgttgtccca 2221
accaaggccg acaaaaggag atctgtgaga ataggctcat acatagaaag agatgtgact 2281
cccgccatca tggaggatga cgagttggcc ctagacttag aagacttgct gagcttttct 2341
taccaggtgg caaagggcat ggctttcctc gcctccaaga attgtattca cagagacttg 2401
gcagccagaa atatcctcct tactcatggt cggatcacaa agatttgtga ttttggtcta 2461
gccagagaca tcaagaatga ttctaattat gtggttaaag gaaacgctcg actacctgtg 2521
aagtggatgg cacctgaaag cattttcaac tgtgtataca cgtttgaaag tgacgtctgg 2581
tcctatggga tttttctttg ggagctgttc tctttaggaa gcagccccta tcctggaatg 2641
ccggtcgatt ctaagttcta caagatgatc aaggaaggct tccggatgct cagccctgaa 2701
cacgcacctg ctgaaatgta tgacataatg aagacttgct gggatgcaga tcccctaaaa 2761
agaccaacat tcaagcaaat tgttcagcta attgagaagc agatttcaga gagcaccaat 2821
catatttact ccaacttagc aaactgcagc cccaaccgac agaagcccgt ggtagaccat 2881
tctgtgcgga tcaattctgt cggcagcacc gcttcctcct cccagcctct gcttgtgcac 2941
gacgatgtct gagcagaatc agtgtttggg tcacccctcc aggaatgatc tcttcttttg 3001
gcttccatga tggttatttt cttttctttc aácttgcatc caactccagg atagtgggca 3061
ccccactgca atcctgtctt tctgagcaca ctttagtggc cgatgatttt tgtcatcagc 3121
caccatccta ttgcaaaggt tccaactgta tatattccca atagcaacgt agcttctacc 3181
atgaacagaa aacattctga tttggaaaaa gagagggagg tatggactgg gggccagagt 3241
cctttccaag gcttctccaa ttctgcccaa aaatatggtt gatagtttac ctgaataaat 3301
ggtagtaatc acagttggcc ttcagaacca tccatagtag tatgatgata caagattaga 3361
agctgaaaac ctaagtcctt tatgtggaaa acagaacatc attagaacaa aggacagagt 3421
atgaacacct gggcttaaga aatctagtat ttcatgctgg gaatgagaca taggccatga 3481
aaaaaatgat ccccaagtgt gaacaaaaga tgctcttctg tggaccactg catgagcttt 3541
tatactaccg acctggtttt taaatagagt ttgctattag agcattgaat tggagagaag 3601
gcctccctag ccagcacttg tatatacgca tctataaatt gtccgtgttc atacatttga 3661
ggggaaaaca ccataaggtt tcgtttctgt atacaaccct ggcattatgt ccactgtgta 3721
tagaagtaga ttaagagcca tataagtttg aaggaaacag ttaataccat tttttaagga 3781
aacaatataa ccacaaagca cagtttgaac aaaatctcct cttttagctg atgaacttat 3841
tctgtagatt ctgtggaaca agcctatcag cttcagaatg gcattgtact caatggattt 3901gatgctgttt gacaaagtta ctgattcact gcatggctcc cacaggagtg ggaaaacact 3961gccatcttag tttggattct tatgtagcag gaaataaagt ataggtttag cctccttcgc 4021aggcatgtcc tggacaccgg gccagtatct atatatgtgt atgtacgttt gtatgtgtgt 4081agacaaatat ttggaggggt atttttgccc tgagtccaag agggtccttt agtacctgaa 4141aagtaacttg gctttcatta ttagtactgc tcttgtttct tttcacatag ctgtctagag 4201tagcttacca gaagcttcca tagtggtgca gaggaagtgg aaggcatcag tccctatgta .42 61tttgcagttc acctgcactt aaggcactct gttatttaga ctcatcttac tgtacctgtt 4321ccttagacct tccataatgc tactgtctca ctgaaacatt taaattttac cctttagact 4381gtagcctgga tattattctt gtagtttacc tctttaaaaa caaaacaaaa caaaacaaaa 4441aactccGctt cctcactgcc caatataaaa ggcaaatgtg tacatggcag agtttgtgtg 4501ttgtcttgaa agattcaggt atgttgcctt tatggtttcc cccttctaca tttcttagac 4561tacatttaga gaactgtggc cgttatctgg aagtaaccat ttgcactgga gttctatgct 4621ctcgcacctt tccaaagtta acagattttg gggttgtgtt gtcacccaag agattgttgt 4681ttgccatact ttgtctgaaa aattcctttg tgtttctatt gacttcaatg atagtaagaa 4741aagtggttgt tagttataga tgtctaggta cttcaggggc acttcattga gagttttgtc 4801ttgccatact ttgtctgaaa aattcctttg tgtttctatt gacttcaatg atagtaagaa 4861aagtggttgt tagttataga tgtctaggta cttcaggggc acttcattga gagttttgtc 4921aatgtctttt gaatattccc aagcccatga gtccttgaaa atatttttta tatatacagt 4981aactttatgt gtaaatacat aagcggcgta agtttaaagg atgttggtgt tccacgtgtt 5041ttattcctgt atgttgtcca attgttgaca gttctgaaga attc
SEQ ID NO: 3. Seqüência NP_5202
Met Gly Pro Gly Vai Leu Leu Leu Leu Leu Vai Ala Thr Ala Trp His Gly Gln Glylie Pro Vai lie Glu Pro Ser Vai Pro Glu Leu Vai Vai Lys Pro Gly Ala Thr VaiThr Leu Arg Cys Vai Gly Asn Gly Ser Vai Glu Trp Asp Gly Pro Pro Ser Pro HisTrp Thr Leu Tyr Ser Ásp Gly Ser Ser Ser lie Leu Ser Thr Asn Asn Ala Thr PheGin Asn Thr Gly Thr Tyr Arg Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser AlaAla lie His Leu Tyr Vai Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Vai Leu Ala Gln GluVai Vai Vai Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu Leu Thr Asp Pro VaiLeu Glu Ala Gly Vai Ser Leu Vai Arg Vai Arg Gly Arg Pro Leu Met Arg His ThrAsn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His Gly Phe Thr lie His Arg Ala Lys Phe lie GlnSer Gln Asp Tyr Gln Cys Ser Ala Leu Met Gly Gly Arg Lys Vai Met Ser lie Serlie Arg Leu Lys Vai Gln Lys Vai lie Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Vai ProAla Glu Leu Vai Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gin Ile Vai Cys Ser Ala Ser Ser
Vai Asp Vai Asn Phe Asp Vai Phe Leu Gln His Asn Asn Thr Lys Leu Ala Ile Pro
Gln Gln Ser Asp Phe His Asn Asn Arg Tyr Gin Lys Vai Leu Thr Leu Asn Leu Asp
Gln Vai Asp Phe Gln His Ala Gly Asn Tyr Ser Cys Vai Ala Ser Asn Vai Gln Gly
Lys His Ser Thr Ser Met Phe Phe Arg Vai Vai Glu Ser Ala Tyr Leu Asn Leu Ser
Ser Glu Gln Asn Leu Ile Gln Glu Vai Thr Vai Gly Glu Gly Leu Asn Leu Lys Vai
Met Vai Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gin Gly Phe Asn Trp Thr Tyr Leu Gly Pro Phe
Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala Asn Ala Thr Thr Lys Asp Thr Tyr Arg
His Thr Phe Thr Leu Ser Leu Pro Arg Leu Lys Pro Ser Glu Ala Gly Arg Tyr Ser
Phe Leu Ala Arg Asn Pro Gly Gly Trp Arg Ala Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg
Tyr Pro Pro Glu Vai Ser Vai Ile Trp Thr Phe Ile Asn Gly Ser Gly Thr Leu Leu
Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Vai Thr Trp Leu Gin Cys Ser Gly His
Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Vai Leu Gln Vai Trp Asp Asp Pro Tyr Pro Glu
Vai Leu Ser Gln Glu Pro Phe His Lys Vai Thr Vai Gln Ser Leu Leu Thr Vai Glu
Thr Leu Glu His Asn Gln Thr Tyr Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Vai Gly Ser Gly
Ser Trp Ala Phe Ile Pro Ile Ser Ala Gly Ala His Thr His Pro Pro Asp Glu Phe
Leu Phe Thr Pro Vai Vai Vai Ala Cys Met Ser Ile Met Ala Leu Leu Leu Leu Leu
Leu Leu Leu Leu Leu Tyr Lys Tyr Lys Gln Lys Pro Lys Tyr Gln Vai Arg Trp Lys
Ile Ile Glu Ser Tyr Glu Gly Asn Ser Tyr Thr Phe Ile Asp Pro Thr Gln Leu Pro
Tyr Asn Glu Lys Trp Glu Phe Pro Arg Asn Asn Leu Gln Phe Gly Lys Thr Leu Gly
Ala Gly Ala Phe Gly Lys Vai Vai Glu Ala Thr Ala Phe Gly Leu Gly Lys Glu Asp
Ala Vai Leu Lys Vai Ala Vai Lys Met Leu Lys Ser Thr Ala His Ala Asp Glu Lys
Glu Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Ile Met Ser His Leu Gly Gln His Glu Asn Ile
Vai Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr His Gly Gly Pro Vai Leu Vai Ile Thr Glu Tyr
Cys Cys Tyr Gly Asp Leu Leu Asn Phe Leu Arg Arg Lys Ala Glu Ala Met Leu Gly
Pro Ser Leu Ser Pro Gly Gln Asp Pro Glu Gly Gly Vai Asp Tyr Lys Asn Ile His
Leu Glu Lys Lys Tyr Vai Arg Arg Asp Ser Gly Phe Ser Ser Gln Gly Vai Asp Thr
Tyr Vai Glu Met Arg Pro Vai Ser Thr Ser Ser Asn Asp Ser Phe Ser Glu Gln Asp
Leu Asp Lys Glu Asp Gly Arg Pro Leu Glu Leu Arg Asp Leu Leu His Phe Ser Ser
Gln Vai Ala Gln Gly Met Ala Phe Leu Ala Ser Lys Asn Cys Ile His Arg Asp Vai
Ala Ala Arg Asn Vai Leu Leu Thr Asn Gly His Vai Ala Lys Ile Gly Asp Phe Gly
Leu Ala Arg Asp Ile Met Asn Asp Ser Asn Tyr Ile Vai Lys Gly Asn Ala Arg LeuPro Vai Lys Trp Met Ala Pro Glu Ser lie Phe Asp Cys Vai Tyr Thr Vai Gln Ser
Asp Vai Trp Ser Tyr Gly lie Leu Leu Trp Glu lie Phe Ser Leu Gly Leu Asn Pro
Tyr Pro Gly lie Leu Vai Asn Ser Lys Phe Tyr Lys Leu Vai Lys Asp Gly Tyr Gln
Met Ala Gln Pro Ala Phe Ala Pro Lys Asn lie Tyr Ser lie Met Gln Ala Cys Trp
Ala Leu Glu Pro Thr His Arg Pro Thr Phe Gln Gln lie Cys Ser Phe Leu Gln Glu
Gln Ala Gln Glu Asp Arg Arg Glu Arg Asp Tyr Thr Asn Leu Pro Ser Ser Ser. Arg
Ser Gly Gly Ser Gly Ser Ser Ser Ser Glu Leu Glu Glu Glu Ser Ser Ser Glu His
Leu Thr Cys Cys Glu Gln Gly Asp lie Ala Gln Pro Leu Leu Gln Pro Asn Asn TyrGln Phe Cys
SEQ ID NO: 4 Seqüência NM_005211
1 gaagggcaga cagagtgtcc aaaagcgtga gagcacgaag tgaggagaag gtggagaaga
61 gagaagagga agaggaagag gaagagagga agcggaggga actgcggcca ggctaaaagg
121 ggaagaagag gatcagccca aggaggagga agaggaaaac aagacaaaca gccagtgcag
181 aggagaggaa cgtgtgtcca gtgtcccgat ccctgcggag ctagtagctg agagctctgt
241 gccctgggca ccttgcagcc ctgcacctgc ctgccacttc cccaccgagg ccatgggccc
301 aggagttctg ctgctcctgc tggtggccac agcttggcat ggtcagggaa tcccagtgat
361 agagcccagt gtccctgagc tggtcgtgaa gccaggagca acggtgacct tgcgatgtgt
421 gggcaatggc agcgtggaat gggatggccc cccatcacct cactggaccc tgtactctga
481 tggctccagc agcatcctca gcaccaacaa cgctaccttc caaaacacgg ggacctatcg
541 ctgcactgag cctggagacc ccctgggagg cagcgccgcc atccacctct atgtcaaaga
601 ccctgcccgg ccctggaacg tgctagcaca ggaggtggtc gtgttcgagg accaggacgc
661 actactgccc tgtctgctca cagacccggt gctggaagca ggcgtctcgc tggtgcgtgt
721 gcgtggccgg cccctcatgc gccacaccaa ctactccttc tcgccctggc atggcttcac
781 catccacagg gccaagttca ttcagagcca ggactatcaa tgcagtgccc tgatgggtgg
841 caggaaggtg atgtccatca gcatccggct gaaagtgcag aaagtcatcc cagggccccc
901 agccttgaca ctggtgcctg cagagctggt gcggattcga ggggaggctg cccagatcgt
961 gtgctcagcc agcagcgttg atgttaactt tgatgtcttc ctccaacaca acaacaccaa
1021 gctcgcaatc cctcaacaat ctgactttca taataaccgt taccaaaaag tcctgaccct
1081 caacctcgat caagtagatt tccaacatgc cggcaactac tcctgcgtgg ccagcaacgt
1141 gcagggcaag cactccacct ccatgttctt ccgggtggta gagagtgcct acttgaactt
1201 gagctctgag cagaacctca tccaggaggt gaccgtgggg gaggggctca acctcaaagt 1261
catggtggag gcctacccag gcctgcaagg ttttaactgg acctacctgg gacccttttc 1321tgaccaccag cctgagccca agcttgctaa tgctaccacc aaggacacat acaggcacac
13 81 cttcaccctc tctctgcccc gcctgaagcc ctctgaggct ggccgctact ccttcctggc 1441
cagaaaccca ggaggctgga gagctctgac gtttgagctc acccttcgat accccccaga 1501
ggtaagcgtc atatggacat tcatcaacgg ctctggcacc cttttgtgtg ctgcctctgg 1561
gtacccccag cccaacgtga catggctgca gtgcagtggc cacactgata ggtgtgatga 1621
ggcccaagtg ctgcaggtct gggatgaccc ataccctgag gtcctgagcc aggagccctt 1681
ccacaaggtg acggtgcaga gcctgctgac tgttgagacc ttagagcaca accaaaccta 1741
cgagtgcagg gcccacaaca gcgtggggag tggctcctgg gccttcatac ccatctctgc 1801
aggagcccac acgcatcccc cggatgagtt cctcttcaca ccagtggtgg tcgcctgcat 1861
gtccatcatg gccttgctgc tgctgctgct cctgctgcta ttgtacaagt ataagcagaa 1921
gcccaagtac caggtccgct ggaagatcat cgagagctat gagggcaaca gttatacttt 1981
catcgacccc acgcagctgc cttacaacga gaagtgggag ttcccccgga acaacctgca 2041
gtttggtaag accctcggag ctggagcctt tgggaaggtg gtggaggcca cggcctttgg 2101
tctgggcaag gaggatgctg tcctgaaggt ggctgtgaag atgctgaagt ccacggccca 2161
tgctgatgag aaggaggccc tcatgtccga gctgaagatc atgagccacc tgggccagca 2221
cgagaacatc gtcaaccttc tgggagcctg tacccatgga ggccctgtac tggtcatcac 2281
ggagtactgt tgctatggcg acctgctcaa ctttctgcga aggaaggctg aggccatgct 2341
gggacccagc ctgagccccg gccaggaccc cgagggaggc gtcgactata agaacatcca 2401
cctcgagaag aaatatgtcc gcagggacag tggcttctcc agccagggtg tggacaccta 2461
20 Cgtggagatg aggcctgtct ccacttcttc aaatgactcc ttctctgagc aagacctgga 2 521
caaggaggat ggacggcccc tggagctccg ggacctgctt cacttctcca gccaagtagc 2 581
ccagggcatg gccttcctcg cttccaagaa ttgcatccac cgggacgtgg cagcgcgtaa 2641
cgtgctgttg accaatggtc atgtggccaa gattggggac ttcgggctgg ctagggacat 2701
catgaatgac tccaactaca ttgtcaaggg caatgcccgc ctgcctgtga agtggatggc 2761
cccagagagc atctttgact gtgtctacac ggttcagagc gacgtctggt cctatggcat 2821
cctcctctgg gagatcttct cacttgggct gaatccctac cctggcatcc tggtgaacag 2881caagttctat aaactggtga aggatggata ccaaatggoc cagcctgcat ttgccccaaa
2941 gaatatatac agcatcatgc aggcctgctg ggccttggag cccacccaca gacccacctt
3001 ccagcagatc tgctccttcc ttcaggagca ggcccaagag gacaggagag agcgggacta 3061
taccaatctg ccgagcagca gcagaagcgg tggcagcggc agcagcagca gtgagctgga 3121
ggaggagagc tctagtgagc acctgacctg ctgcgagcaa ggggatatcg cccagccctt 3181
gctgcagccc aacaactatc agttctgctg aggagttgac gacagggagt accactctcc 3241cctcctccaa acttcaactc ctccatggat ggggcgacac ggggagaaca tacaaactct 3301
gccttcggtc atttcactca acagctcggc ccagctctga aacttgggaa ggtgagggat 3361
tcaggggagg tcagaggatc ccacttcctg agcatgggcc atcactgcca gtcaggggct 3421
gggggctgag ccctcacccc cccctcccct actgttctca tggtgttggc ctcgtgtttg 3481
ctatgccaac tagtagaacc ttctttccta atccccttat cttcatggaa atggactgac 3541
tttatgccta tgaagtcccc aggagctaca ctgatactga gaaaaccagg ctctttgggg 3601
ctagacagac tggcagagag tgagatctcc ctctctgaga ggagcagcag atgctcacag 3661
accacactca gctcaggccc cttggagcag gatggctcct ctaagaatct cacaggacct 3721
cttagtctct gccctatacg ccgccttcac tccacagcct cacccctccc acccccatac 3781
tggtactgct gtaatgagcc aagtggcagc taaaagttgg gggtgttctg cccagtcccg 3841
tcattctggg ctagaaggca ggggaccttg gcatgtggct ggccacacca agcaggaagc 3901
acaaactccc ccaagctgac tcatcctaac taacagtcac gccgtgggat gtctctgtcc 3961
acattaaact aacagcatta atgca

Claims (42)

1. Composto tendo a estrutura química<formula>formula see original document page 289</formula>todos os sais, pró-fármacos, tautômeros, e isômeros deste,em que:X, é N ou CR2, X2 é N ou CR6, é N ou CR4, e Y2 é N ou CR5,porém, contanto que não mais que um de X2, Y-i e Y2 seja N;L1 é selecionado do grupo que consiste em alquileno inferior op-cionalmente substituído; -S-, -O-, -C(O)-, -C(S)-, -S(O)-, -S(0)2-, e -NR7-;L2 é selecionado do grupo que consiste em uma ligação, alquile-no inferior opcionalmente substituído, -(alq)a-S-(alq)b-, -(alq)a-0-(alq)b-, -(alq)a-OC(0)-(alq)b-, -(alq)a-C(0)0-(alq)b-, -(alq)a-OC(S)-(alq)b-, -(alq)a-C(S)0-(alq)b-, -(alq)a-C(0)-(alq)b-, -(alq)a-C(S)-(alq)b-, -(alq)a-C(0)NR9-(alq)b-,-(alq)a-OC(0)NR9-(alq)b-, -(alq)a-OC(S)NR9-(alq)b-, -(alq)a-C(S)NR9-(alq)b-, -(alq)a-S(0)-(alq)b-, -(alq)a-S(0)2-(alq)b-, -(alq)a-S(0)2NR9-(alq)b-, -(alq)a-NR9-(alq)b-, -(alq)a-NR9C(0)-(alq)b-, -(alq)a-NR9C(S)-(alq)b-, -(alq)a-NR9C(0)NR9-(alq)b-, -(alq)a-NR9C(S)NR9-(alq)b-, -(alq)a-NR9C(0)0-(alq)b-, -(alq)a-NR9C(S)0-(alq)b-, -(alq)a-NR9S(0)2-(alq)b-, e -(alq)a-NR9S(0)2NR9-(alq)b-, emque alq é Ci.3 alquileno opcionalmente substituído e a e b são independen-temente 0 ou 1;R1 é selecionado do grupo que consiste em alquila inferior op-cionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, heterociclo-alquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída, e heteroa-rila opcionalmente substituída; R2, R4, R5 e R6 são independentemente sele-cionados do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, alquila inferioropcionalmente substituída, alquenila inferior opcionalmente substituída, al-quinila inferior opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substi-tuída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmentesubstituída, heteroarila opcionalmente substituída, -OH, -NH2) -N02, -CN, -C(0)OH, -C(S)OH, -C(0)NH2, -C(S)NH2, -S(0)2NH2, -NHC(0)NH2, -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -NR10R11, -NHR3, -OR3, -SR3, -C(0)R3, -C(S)R3,-S(0)R3, -S(0)2R3, -C(0)OR3, -C(S)OR3, -C(0)NHR3, -C(0)NR3R3, - C(S)NHR3, -C(S)NR3R3, -S(0)2NHR3, -S(0)2NR3R3, -NHC(0)R3, -NR3C(0)R3,-NHC(S)R3, -NR3C(S)R3, -NHS(0)2R3, -NR3S(0)2R3, -NHC(0)OR3, -NR3C(0)OH, -NR3C(0)OR3, -NHC(S)OR3, -NR3C(S)OH, -NR3C(S)OR3, -NHC(0)NHR3, -NHC(0)NR3R3, -NR3C(0)NH2) -NR3C(0)NHR3, -NR3C(0)NR3R3, -NHC(S)NHR3, -NHC(S)NR3R3, -NR3C(S)NH2, - NR3C(S)NHR3, -NR3C(S)NR3R3, -NHS(0)2NHR3, -NHS(0)2NR3R3, -NR3S(0)2NH2, -NR3S(0)2NHR3, e -NR3S(0)2NR3R3;An é um heteroarileno de 5 ou 6 membros opcionalmente substi-tuído tendo a estruturaem que s indica o ponto de ligação de L1 e indica o ponto de liga-ção de L2, e em que o N indicado ou é um =N- ou -N=;n é 0 ou 1;F e J são ambos C ou um de F e J é C e o outro de F e J é N;P e Q são independentemente selecionados de CR, N, NR, O ouS;Té selecionado de CR ou N;em que,quando n for 1, F e J são C, e P, T e Q são CR, ou qualquer umde P, T e Q é N e os outros dois de P, T e Q são CR,quando n for 0 e F e J forem ambos C, então um de P e Q é CR,N ou NR e o outro de P e Q é C, N, NR, O ou S, contanto que ambos de P eQ não sejam CR,quando n for 0, um de F e J for N e o outro de F e J for C, entãoumdePeQéNeo outro de P e Q é CR ou P e Q são ambos CR, eR é hidrogênio ou um substituinte de heteroarileno substituído;R3 em cada ocorrência é independentemente selecionado dogrupo que consiste em alquila inferior opcionalmente substituída, alquenilainferior opcionalmente substituída, porém, contanto que nenhum carbono dealqueno deste esteja ligado a qualquer de -C(O)-, -C(S)-, -S(O)-, -S(0)2-, -O-,-S-, ou -N- de qualquer um de -OR3, -SR3, -C(0)R3, -C(S)R3, -S(0)R3, -S(0)2R3, -C(0)OR3, -C(S)OR3, -C(0)NHR3, -C(0)NR3R3, -C(S)NHR3, -C(S)NR3R3, -S(0)2NHR3, -S(0)2NR3R3, -NHR3, -NHC(0)R3, -NR3C(0)R3, -NHC(S)R3, -NR3C(S)R3, -NHS(0)2R3, -NR3S(0)2R3, -NHC(0)OR3, -NR3C(0)OH, -NR3C(0)OR3, -NHC(S)OR3, -NR3C(S)OH, -NR3C(S)OR3, -NHC(0)NHR3, -NHC(0)NR3R3, -NR3C(0)NH2, -NR3C(0)NHR3,NR3C(0)NR3R3, -NHC(S)NHR3, -NHC(S)NR3R3, -NR3C(S)NH2, -NR3C(S)NHR3, -NR3C(S)NR3R3, -NHS(0)2NHR3, -NHS(0)2NR3R3, -NR3S(0)2NH2, -NR3S(0)2NHR3, ou -NR3S(0)2NR3R3, alquinila inferior opcio-nalmente substituída, porém, contanto que nenhum carbono de alquino des-te esteja ligado a qualquer um de -C(O)-, -C(S)-, -S(O)-, -S(0)2-, -O-, -S-, ou-N- de qualquer um de -OR3, -SR3, -C(0)R3, -C(S)R3, -S(0)R3, -S(0)2R3, -C(0)OR3, -C(S)OR3, -C(0)NHR3, -C(0)NR3R3, -C(S)NHR3, -C(S)NR3R3, -S(0)2NHR3, -S(0)2NR3R3, -NHR3, -NHC(0)R3, -NR3C(0)R3, -NHC(S)R3, -NR3C(S)R3, -NHS(0)2R3, -NR3S(0)2R3, -NHC(0)OR3, -NR3C(0)OH, -NR3C(0)OR3, -NHC(S)OR3, -NR3C(S)OH, -NR3C(S)OR3, -NHC(0)NHR3, -NHC(0)NR3R3, -NR3C(0)NH2, -NR3C(0)NHR3, -NR3C(0)NR3R3, -NHC(S)NHR3, -NHC(S)NR3R3, -NR3C(S)NH2, -NR3C(S)NHR3,NR3C(S)NR3R3, -NHS(0)2NHR3, -NHS(0)2NR3R3, -NR3S(0)2NH2, -NR3S(0)2NHR3, ou -NR3S(0)2NR3R3, cicloalquila opcionalmente substituída,heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída,e heteroarila opcionalmente substituída;R7 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquilainferior opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída,heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída,heteroarila opcionalmente substituída, -C(0)R8, e -S(0)2R8;R8 é selecionado do grupo que consiste em alquila inferior op-cionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, heterociclo-alquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída e heteroa-rila opcionalmente substituída;R9 em cada ocorrência é independentemente selecionado dogrupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior, e alquila inferior substituí-da com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste emflúor, -OH, -NH2, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltioinferior, alquiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino, monoalqui-lamino substituído por flúor, dialquilamino, dialquilamino substituído por flúor,e -NR12R13, porém, contanto que quando R9 for alquila inferior substituída,qualquer substituição no carbono de alquila ligado ao -N- de -NR9- seja flúor;R10 e R11 em cada ocorrência são independentemente selecio-nados do grupo que consiste em alquila inferior opcionalmente substituída,alquenila inferior opcionalmente substituída, porém, contanto que nenhumcarbono de alqueno deste esteja ligado ao nitrogênio de -NR10R11, alquinilainferior opcionalmente substituída, porém, contanto que nenhum carbono dealquino deste esteja ligado ao nitrogênio de -NR10R11, cicloalquila opcional-mente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcio-nalmente substituída, e heteroarila opcionalmente substituída; ouR10 e R11 juntos com o nitrogênio ao qual eles estão ligados for-mam uma heterocicloalquila monocíclica de 5-7 membros opcionalmentesubstituída ou um nitrogênio monocíclico de 5 ou 7 membros opcionalmentesubstituído contendo heteroarila; eR12 e R13 combinam com o nitrogênio ao qual eles estão ligadospara formar uma heterocicloalquila de 5-7 membros ou heterocicloalquila de5-7 membros substituída com um ou mais substituintes selecionados do gru-po que consiste em flúor, -OH, -NH2, alquila inferior, alquila inferior substituí-da por flúor, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferi-or, e alquiltio inferior substituído por flúor;porém, contanto que quando os compostos tiverem a estrutura<formula>formula see original document page 293</formula>e L1a for -CH2-, -CH(OH)-, ou -C(O)-, então R1a não seja fenila, 4-trifluorometil-fenila, 4-metóxi-fenila, 4-cloro-fenila, 4-flúor-fenila, 4-metil-fenila, 3-flúor-fenila ou tiofen-2-ila e compostos não tenham a estrutura<formula>formula see original document page 293</formula>
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que X1 e X2 são CH.
3. Composto de acordo com a reivindicação 2, em que é N ouCH e Y2 é CR5.
4. Composto de acordo com a reivindicação 3, em que Y-i é CHe R5 é diferente de hidrogênio.
5. Composto de acordo com a reivindicação 4, em que Li é - CH2- ou C(O)-.
6. Composto de acordo com a reivindicação 3, em que Yi é CHe R5 é hidrogênio.
7. Composto de acordo com a reivindicação 6, em que Li é - CH2-ouC(0)-.
8. Composto de acordo com a reivindicação 2, em que Y2 é N ouCH e Y1 é CR4.
9. Composto de acordo com a reivindicação 8, em que Y2 é CHe R4 é diferente de hidrogênio.
10. Composto de acordo com a reivindicação 9, em que Li é -CH2- ou C(O)-.
11. Composto de acordo com a reivindicação 8, em que Y2 é CHe R4 é hidrogênio.
12. Composto de acordo com a reivindicação 11, em que Li é -CH2-ou-C(O)-.
13. Composto de acordo com a reivindicação 1 tendo a estruturaquímica <formula>formula see original document page 294</formula> todos os sais, pró-fármacos, tautômeros, e isômeros deste,em que:V e W são independentemente selecionados do grupo que con-siste em N e CH;U e Z são independentemente selecionados do grupo que con-siste em N e CR18, porém, contanto que não mais que um de W, U e Z sejaN;A é selecionado do grupo que consiste em -CR19R20-, -C(O)-, -C(S)-, -S-, -S(O)-, -S(0)2-, -NR21-, e -O-;n é 0 ou 1;F e J são ambos C ou um de F e J é C e o outro de F e J é N;E e K são selecionados de C, N, O ou S;G é selecionado de C ou N;em que,quando n for 1, F e J são C, e E, G e K são C, ou qualquer umde E, G e K é N e os outros dois de E, G e K são C, contanto que quando E,G ou K for N, R15, R17 e R16, respectivamente, estejam ausentes,quando n for 0 e F e J forem ambos C, então um de E e K é Cou N e o outro de E e K é C, N, O ou S, contanto que ambos E e K não se-jam C, e contanto que quando ambos E e K forem N, um de R15 e R16 estejaausente, e contanto que quando um de E e K for N e o outro for O ou S, R15e R16 estejam ausentes,quando n for 0, um de F e J for N e o outro de F e J for C, entãoum de E e K é N e o outro de E e K é C, ou ambos E e K são C, contantoque quando E for N, R15 esteja ausente e quando K for N, R16 esteja ausente;R1 é selecionado do grupo que consiste em alquila inferior op-cionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída, heterociclo-alquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída e heteroa-rila opcionalmente substituída;R15 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquilainferior opcionalmente substituída, -OR22, -SR22 e halogênio quando E for C,e está ausente quando E for O ou S ou quando n=1 e E for N, e está ausen-te ou selecionado do grupo que consiste em hidrogênio e alquila inferior op-cionalmente substituída quando n=0 e E for N;R16 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquilainferior opcionalmente substituída, -OR22, -SR22 e halogênio quando K for C,está ausente quando K for O ou S ou quando n=1 e K for N, e está ausenteou selecionado do grupo que consiste em hidrogênio e alquila inferior opcio-nalmente substituída quando n=0 e K for N;R17 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, alquilainferior opcionalmente substituída, -OR22, -SR22 e halogênio quando G for C,ou está ausente quando G for N;R18 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogê-nio, alquila inferior opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituí-da, heteroarila opcionalmente substituída, -OH, -NH2, -NO2, -CN, -NHC(0)NH2, -NHC(S)NH2, -NHS(0)2NH2, -NR24R25, -NHR23, -OR23, -SR23, -NHC(0)R23, -NR23C(0)R23, -NHC(S)R23, -NR23C(S)R23, -NHS(0)2R23, -NR23S(0)2R23, -NHC(0)NHR23, -NR23C(0)NH2, -NR23C(0)NHR23, -NHC(0)NR23R23, -NR23C(0)NR23R23, -NHC(S)NHR23, -NR23C(S)NH2, -NR23C(S)NHR23, -NHC(S)NR23R23, -NR23C(S)NR23R23, -NHS(0)2NHR23, -NR23S(0)2NH2> -NR^S(0)2NHR^, -NHS(0)2NR23R23, e -NR23S(0)2NR23R23;M é selecionado do grupo que consiste em uma ligação, -(CR19R2V, -(CR19R2VC(O)-(CR19R20)s-, -(CR19R20),-C(S)-(CR19R20)s-( -(CR19R20)rC(O)O-(CR19R20)s-, -(CR19R20)rC(S)O-(CR19R20)s-, (CR19R20)t-C(O)NR26-(CR19R20)s-, -(CR19R20)rC(S)NR26-(CR19R20)s-, -(CR19R20)t-S(O)-(CR19R20)S-. (CR19R2)rS(0)2-(CR19R2)s-, -(CR19R20),-S(O)2NR26-(CR19R20)s-> -(CR19R2),-O-(CR19R20)s-, (CR19R20),-OC(O)-(CR19R20)s-, -(CR19R20),-OC(S)-(CR19R20)s-,-(CR19R2)rOC(O)NR26-(CR19R20)s-. (CR19R20),-OC(S)NR26-(CR19R2V, -(CR19R20)t-(CR19R2)s, -(CR19R20)t-NR26-(CR19R20)s-. -(CR19R20),-NR26C(O)-(CR19R20)s-. -(CR19R20)rNR26C(S)-(CR19R20)s-, -(CR19R20),-NR26C(O)O-(CR19R20)s - (CR19R20)rNR26C(S)O-(CR19R20)s-. -(CR19R20)t-NR26C(O)NR26-(CR19R20)s-, (CR19R20)t-NR26C(S)NR26-(CR19R20)s,(CR19R20)t-NR26S(O)2-(CR19R20)s e -(CR19R20),-NR26S(O)2NR26-(CR19R20)s-;em que R19 e R20 em cada ocorrência são independentementeselecionados do grupo que consiste em hidrogênio, flúor, -OH, -NH2, alquilainferior, alcóxi inferior, alquiltio inferior, monoalquilamino, dialquilamino, e -NR27R28, em que a(s) cadeia(s) de alquila de alquila inferior, alcóxi inferior,alquiltio inferior, monoalquilamino, ou dialquilamino é/são opcionalmentesubstituída(s) com um ou mais substituintes selecionados do grupo que con-siste em flúor, -OH, -NH2, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído por flúor,alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino, dial-quilamino, e cicloalquilamino; ouqualquer um de dois de R19 e R20 nos mesmos carbonos ou dife-rentes combinam para formar uma cicloalquila monocíclica de 3-7 membrosou heterocicloalquila monocíclica de 5-7 membros e quaisquer outros de R19e R20 são independentemente selecionados do grupo que consiste em hi-drogênio, flúor, -OH, -NH2, alquila inferior, alcóxi inferior, alquiltio inferior,monoalquilamino, dialquilamino, e -NR27R28, em que a(s) cadeia(s) de alquilade alquila inferior, alcóxi inferior, alquiltio inferior, monoalquilamino, ou dial-quilamino é/são opcionalmente substituída(s) com um ou mais substituintesselecionados do grupo que consiste em flúor, -OH, -NH2, alcóxi inferior, al-cóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituídopor flúor, monoalquilamino, dialquilamino, e cicloalquilamino, e em que a ci-cloalquila monocíclica ou heterocicloalquila monocíclica são opcionalmentesubstituídas com um ou mais substituintes selecionados do grupo que con-siste em halogênio, -OH, -NH2, alquila inferior, alquila inferior substituída porflúor, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferior, al-quiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino, dialquilamino, e cicloal-quilamino;R21 e R22 em cada ocorrência são independentemente hidrogê-nio ou alquila inferior opcionalmente substituída;R23 em cada ocorrência é independentemente selecionado dogrupo que consiste em alquila inferior opcionalmente substituída, alquenilainferior opcionalmente substituída, porém, contanto que nenhum carbono dealqueno deste esteja ligado a qualquer um de -C(O)-, -C(S)-, -S(0)2-, -O-, -S-,ou -N- de qualquer um de -NHR23, -OR23, -SR23, -NHC(0)R23, -NR23C(0)R23,-NHC(S)R23, -NR23C(S)R23, -NHS(0)2R23, -NR23S(0)2R23, -NHC(0)NHR23, -NR23C(0)NH2, -NR23C(0)NHR23, -NHC(0)NR23R23, -NR23C(0)NR23R23, -NHC(S)NHR23, -NR23C(S)NH2, -NR23C(S)NHR23, -NHC(S)NR23R23, -NR23C(S)NR23R23, -NHS(0)2NHR23, -NR23S(0)2NH2, -NR23S(0)2NHR23, -NHS(0)2NR23R23, ou -NR23S(0)2NR23R23, alquinila inferior opcionalmentesubstituída, porém, contanto que nenhum carbono de alquino deste estejaligado a qualquer um de -C(O)-, -C(S)-, -S(O)-, -S(0)2-, -O-, -S-, ou -N- dequalquer um de -NHR23, -OR23, -SR23, -NHC(0)R23, -NR23C(0)R23, -NHC(S)R23, -NR23C(S)R23, -NHS(0)2R23, -NR23S(0)2R23, -NHC(0)NHR23, -NR23C(0)NH2, -NR23C(0)NHR23, -NHC(0)NR23R23, -NR23C(0)NR23R23, -NHC(S)NHR23, -NR23C(S)NH2, -NR23C(S)NHR23, -NHC(S)NR23R23, -NR23C(S)NR23R23, -NHS(0)2NHR23, -NR23S(0)2NH2, -NR23S(0)2NHR23, -NHS(0)2NR23R23, ou -NR23S(0)2NR23R23, cicloalquila opcionalmente substi-tuída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmentesubstituída, e heteroarila opcionalmente substituída;R24 e R25 em cada ocorrência são independentemente selecio-nados do grupo que consiste em alquila inferior opcionalmente substituída,alquenila inferior opcionalmente substituída, porém, contanto que nenhumcarbono de alqueno deste esteja ligado ao nitrogênio de -NR R , alquinilainferior opcionalmente substituída, porém, contanto que nenhum carbono dealquino deste esteja ligado ao nitrogênio de -NR24R25, cicloalquila opcional-mente substituída, heterocicloalquila opcionalmente substituída, arila opcio-nalmente substituída, e heteroarila opcionalmente substituída; ouR24 e R25 juntos com o nitrogênio ao qual eles estão ligados for-mam uma heterocicloalquila monocíclica de 5-7 membros opcionalmentesubstituída ou um nitrogênio monocíclico de 5 ou 7 membros opcionalmentesubstituído contendo heteroarila;R26 em cada ocorrência é independentemente selecionado dogrupo que consiste em hidrogênio, alquila inferior, e alquila inferior substituí-da com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste emflúor, -OH, -NH2, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltioinferior, alquiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino, monoalqui-lamino substituído por flúor, dialquilamino, dialquilamino substituído por flúor,e -NR27R28, porém, contanto que quando R26 for alquila inferior substituída,qualquer substituição no carbono de alquila inferior ligado ao -N- de -NR26-seja flúor;R27 e R28 combinam com o nitrogênio ao qual eles estão ligadospara formar uma heterocicloalquila de 5-7 membros ou heterocicloalquila de5-7 membros substituída com um ou mais substituintes selecionados do gru-po que consiste em flúor, -OH, -NH2, alquila inferior, alquila inferior substituí-da por flúor, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferi-or, e alquiltio inferior substituído por flúor;u é 1 -6;t é 0-3; es é 0-3;contanto quequando V, W, U e Z forem CH, n=1, E, F, G, J, e K forem C, R15,R16 e R17 forem H, A for -CH2-, -CH(OH)-, ou -C(O)-, e M for -NHCH2-, entãoR1 não seja fenila, 4-trifluorometil-fenila, 4-metóxi-fenila, 4-cloro-fenila, 4-flúor-fenila, 4-metil-fenila, 3-flúor-fenila ou tiofen-2-ila,quando V, W.UeZ forem CH, n=1, E, F, G, J, e K forem C, R15,R16 e R17 forem H, e A for -CH2-, então M-R1 não seja -NHCH2CH(CH3)2,quando V, W, e U forem CH, n=1, E, F, G, J, e K forem C, R15,R16 e R17 forem H, A for -CH2-, M-R1 for -OCH3, e Z for CR18, então R18 nãoseja tiofen-3-ila, equando V, W, e U forem CH, n=0, F, J, e K forem C, E for N, R15for CH3, R16 for H, A for -C(O)-, M-R1 for -CH(CH3)3, e Z for CR18, então R18não seja 3-((E)-2-carbóxi-vinil)fenila.
14. Composto de acordo com a reivindicação 13, em que V e WsãoCH.
15. Composto de acordo com a reivindicação 14, em que U e Zsão independentemente CR18.
16. Composto de acordo com a reivindicação 15, em que n é 1.
17. Composto de acordo com a reivindicação 16, em que G e Ksão C.
18. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que E é N.
19. Composto de acordo com a reivindicação 17, em que E é C.
20. Composto de acordo com a reivindicação 1, tendo a estrutu-ra <formula>formula see original document page 299</formula> todos os sais, pró-fármacos, tautômeros, e isômeros destes,em que:Zt é selecionado do grupo que consiste em N e CR34;Ui é selecionado do grupo que consiste em N e CR35;At é selecionado do grupo que consiste em -CH2- e -C(O)-;M3 é selecionado do grupo que consiste em uma ligação, -NR39-,-S-, -O-, -NR39CH2-, -NR39CH(R40)-, -SCH2-, -OCH2-, -C(0)NR39-, -S(0)2NR39-, -CH2NR39-, -CH(R40)NR39-, -NR39C(0)-, e -NR39S(0)2-;n é O ou 1;v é 0, 1, 2 ou 3;Fi e Ji são ambos C ou um de Fi e Ji é C e o outro de Fi e Ji é N;E-1 e K1 são selecionados de C, N, O ou S;G1 é selecionado de C ou N;em que,quando n for 1, F^ e Ji são C, e Ei, Gi e são C, ou qualquerum de Ei, d e K, é N e os outros dois de E,, Gi e Ki são C, contanto quequando Ei, Gi ou K: for N, R36, R37 e R38, respectivamente, estejam ausentes,quando n for 0 e F-^ e Ji forem ambos C, então um de E<\ e Ki éC ou N e o outro de E-\ e Ki é C, N, O ou S, contanto que ambos Ei e Ki nãosejam C, e contanto que quando ambos Ei e Ki forem N, um de R36 e R37esteja ausente, e contanto que quando um de Et e Ki for N e o outro for Oou S, R36 e R37 estejam ausentes,quando n for 0, um de F^ e J-i for N e o outro de F-i e Ji for C,então um de E^ e Ki é N e o outro de Ei e Ki é C, ou Ei e Ki são C, contantoque quando Ei for N, R36 esteja ausente e quando Ki for N, R37 está ausente;Cy é selecionado do grupo que consiste em cicloalquila, hetero-cicloalquila, arila e heteroarila;R34 e R35 são independentemente selecionados do grupo queconsiste em hidrogênio, -OR41, -SR41, -NHR41, -NR41R41, -NR39C(0)R41, -NR39S(0)2R41, halogênio, alquila inferior, cicloalquila, heterocicloalquila, arilae heteroarila, em que alquila inferior é opcionalmente substituída com um oumais substituintes selecionados do grupo que consiste em flúor, alcóxi inferi-or, alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substi-tuído por flúor, monoalquilamino, dialquilamino, cicloalquila, heterocicloalqui-la, arila, e heteroarila, em que cicloalquila, heterocicloalquila, arila, e heteroa-rila como R34 ou R35, ou como substituintes de alquila inferior são opcional-mente substituídas com um ou mais substituintes selecionados do grupo queconsiste em -OH, -NH2> -CN, -N02, -S(0)2NH2, -C(0)NH2, -OR42, -SR42, -NHR , -NR R , -NR39C(0)R4,2, -NR39S(0)2R4^ -S(0)2R~ halogênio, alqui-la inferior, alquila inferior substituída por flúor, e cicloalquilamino;R45 em cada ocorrência é independentemente selecionado dogrupo que consiste em -OR41, -SR41, -NHR41, -NR41R41, -NR39C(0)R41, -NR39S(0)2R41, halogênio, alquila inferior, cicloalquila, heterocicloalquila, arilae heteróarila, em que alquila inferior é opcionalmente substituída com um oumais substituintes selecionados do grupo que consiste em flúor, alcóxi inferi-or, alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substi-tuído por flúor, monoalquilamino, dialquilamino, cicloalquila, heterocicloalqui-Ia, arila, e heteróarila, em que cicloalquila, heterocicloalquila, arila, e heteróa-rila como R45, ou como substituintes de alquila inferior são opcionalmentesubstituídas com um ou mais substituintes selecionados do grupo que con-siste em -OH, -NH2, -CN, -N02, -S(0)2NH2, -C(0)NH2, -OR42, -SR42, -NHR42,-NR42R42, -NR39C(0)R42, -NR39S(0)2R42, -S(0)2R42, halogênio, alquila inferior,alquila inferior substituída por flúor, e cicloalquilamino;R36 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogê-nio, alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, alcóxi inferior, e alcó-xi inferior substituído por flúor quando Ei for C, está ausente quando E-\ for Oou S ou quando n=1 e E1 for N, e está ausente ou selecionado do grupo queconsiste em hidrogênio, alquila inferior, e alquila inferior substituída por flúorquando n=0 e for N;R37 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogê-nio, alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, alcóxi inferior, e alcó-xi inferior substituído por flúor quando Ki for C, está ausente quando Ki for Oou S ou quando n=1 e K1 for N, e está ausente ou selecionado do grupo queconsiste em hidrogênio, alquila inferior, e alquila inferior substituída por flúorquando n=0 e K, for N;R38 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogê-nio, alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, alcóxi inferior, e alcó-xi inferior substituído por flúor quando Gi for C, ou está ausente quando GiforN;R39 em cada ocorrência é independentemente selecionado dogrupo que consiste em hidrogênio e alquila inferior;R40 é selecionado do grupo que consiste em alquila inferior, ealquila inferior substituída por flúor;R41 é selecionado do grupo que consiste em alquila inferior, ci-cloalquila, heterocicloalquila, arila e heteroarila, em que alquila inferior é op-cionalmente substituída com um ou mais substituintes selecionados do gru-po que consiste em flúor, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído por flúor,alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino, dial-quilamino, cicloalquila, heterocicloalquila, arila, e heteroarila, em que cicloal-quila, heterocicloalquila, arila, e heteroarila como R41 ou como substituintesde alquila inferior são opcionalmente substituídas com um ou mais substitu-intes selecionados do grupo que consiste em -OH, -NH2, -CN, -N02, -S(0)2NH2> -C(0)NH2, -OR42, -SR42, -NHR42, -NR42R42, -NR39C(0)R42, -NR39S(0)2R42, -S(0)2R42, halogênio, alquila inferior, alquila inferior substituí-da por flúor, e cicloalquilamino; eR42 em cada ocorrência é independentemente selecionado dogrupo que consiste em alquila inferior, heterocicloalquila e heteroarila, emque alquila inferior é opcionalmente substituída com um ou mais substituin-tes selecionados do grupo que consiste em flúor, alcóxi inferior, alcóxi inferi-or substituído por flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substituído por flúor,monoalquilamino, dialquilamino, e cicloalquilamino.
21. Composto de acordo com a reivindicação 20,em quecada R45 é selecionado do grupo que consiste em -OH, -NH2, -CN, -N02, halogênio, alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, al-cóxi inferior, alcóxi inferior substituído por flúor, tioalquila inferior, tioalquilainferior substituída por flúor, monoalquilamino, dialquilamino e cicloalquilami-no,Z1 é CR34 e Ui é CR35, eR34 e R35 são independentemente selecionados do grupo queconsiste em hidrogênio, -OR41, halogênio, alquila inferior, cicloalquila, hete-rocicloalquila, arila e heteroarila,em que cicloalquila, heterocicloalquila, arila e heteroarila sãoopcionalmente substituídas com um ou mais substituintes selecionados dogrupo que consiste em -OH, -NH2, -CN, -N02, -S(0)2NH2) -C(0)NH2, -OR42, -SR42, -NHR42, -NR42R42, -NR39C(0)R42, -NR39S(0)2R42, -S(0)2R42, halogênio,alquila inferior, alquila inferior substituída por flúor, e cicloalquilamino, eem que alquila inferior é opcionalmente substituída com um oumais substituintes selecionados do grupo que consiste em flúor, alcóxi inferi-or, alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferior, alquiltio inferior substi-tuído por flúor, monoalquilamino, dialquilamino, e cicloalquilamino.
22. Composto de acordo com a reivindicação 21 em que v é 0, 1,ou 2.
23. Composto de acordo com a reivindicação 22, em que n é 1,e Gi e Ki são C.
24. Composto de acordo com a reivindicação 23, em que Et é N.
25. Composto de acordo com a reivindicação 23, em que Ei é C.
26. Composto de acordo com a reivindicação 25, em que M3 éselecionado do grupo que consiste em -NR39-, -O-, -NR39CH2-, -NR39CH(R40)-, -SCH2-, -OCH2-, -CH2NR39-, -NR39C(0)-, e -NR39S(0)2-.
27. Composto de acordo com a reivindicação 26, em que M3 éselecionado do grupo que consiste em -NR39CH2-, -NR39CH(R40)-, -SCH2-, -OCH2-, e -CH2NR39-.
28. Composto de acordo com a reivindicação 27, em que ambosR34 e R35 são hidrogênio.
29. Composto de acordo com a reivindicação 27,em queum de R34 e R35 é hidrogênio, eo outro de R34 e R35 é selecionado do grupo que consiste emhalogênio, alquila inferior, alcóxi inferior, arila e heteroarila,em que arila e heteroarila são opcionalmente substituídas com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste em -OH, -NH2,-CN, -N02, -S(0)2NH2, -C(0)NH2, -OR42, -SR42, -NHR42, -NR42R42, -NR39C(0)R42, -NR39S(0)2R42, -S(0)2R42, halogênio, alquila inferior, alquilainferior substituída por flúor, e cicloalquilamino, eem que alquila inferior e alcóxi inferior são opcionalmente substi-tuído com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste emflúor, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferior, al-quiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino, dialquilamino, e cicloal-quilamino.
30. Composto de acordo com a reivindicação 29, em que R34 é hidrogênio.
31. Composto de acordo com a reivindicação 29, em que um de R34 e R35 é hidrogênio, eo outro de R34 e R35 é selecionado do grupo que consiste emhalogênio, alquila inferior, e alcóxi inferior,em que alquila inferior e alcóxi inferior são opcionalmente substi-tuídos com um ou mais substituintes selecionados do grupo que consiste emflúor, alcóxi inferior, alcóxi inferior substituído por flúor, alquiltio inferior, al-quiltio inferior substituído por flúor, monoalquilamino, dialquilamino, e cicloal-quilamino.
32. Composto de acordo com a reivindicação 31, em que R34 é hidrogênio.
33. Composição compreendendo:um veículo farmaceuticamente aceitável; eum composto como definido na reivindicação 1.
34. Composição compreendendo:um veículo farmaceuticamente aceitável; eum composto como definido na reivindicação 13.
35. Composição compreendendo:um veículo farmaceuticamente aceitável; eum composto como definido na reivindicação 20.
36. Método para tratar um indivíduo sofrendo ou em risco deuma doença ou condição mediada por c-kit ou c-fms, compreendendo admi-nistrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um composto como definidona reivindicação 1.
37. Método para tratar um indivíduo sofrendo ou em risco deuma doença ou condição mediada por c-kit ou c-fms, compreendendo admi-nistrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um composto como definidona reivindicação 13.
38. Método para tratar um indivíduo sofrendo ou em risco deuma doença ou condição mediada por c-kit ou c-fms, compreendendo admi-nistrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um composto como definidona reivindicação 20.
39. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 36--38, em que o composto é aprovado para administração em um ser humano.
40. Método de acordo com a reivindicação 39, em que a doençaou condição é selecionada do grupo que consiste em tumores de mastocitos,câncer do pulmão de célula pequena, câncer testicular, tumores estromaisgastrointestinais, glioblastoma, astrocitoma, neuroblastoma, carcinomas dotrato genital feminino, sarcomas de origem neuroectodérmica, carcinomacolorretal, carcinoma in situ, neoplasia de células de Schwann associada àneurofibromatose, leucemia mielóide aguda, leucemia linfocítica aguda, leu-cemia mielogenosa crônica, mieloma múltiplo, mastocitose, melanoma, cân-cer de mama, câncer ovariano, tumores de mastocitos caninos, hipertrofia,asma, artrite reumatóide, rinite alérgica, esclerose múltipla, síndrome infla-matória do intestino, rejeição de transplante, eritematose de lúpus sistêmico,granulomatose de Wegener, Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica, enfisema,aterosclerose, resistência à insulina, hiperglicemia, lipólise, hipereosinofilia,osteoporose, risco aumentado de fratura, hipercalcemia, metástase óssea,glomerulonefrite, nefrite intersticial, nefrite de Lúpus, necrose tubular, e com-plicações renais associada a diabetes.
41. Kit compreendendo uma composição como definida em qual-quer uma das reivindicações 33-35.
42. Kit de acordo com a reivindicação 41, em que a composiçãoé aprovada para uma indicação médica selecionada do grupo que consisteem tumores de mastocitos, câncer do pulmão de célula pequena, câncertesticular, tumores estromais gastrointestinais, glioblastoma, astrocitoma,neuroblastoma, carcinomas do trato genital feminino, sarcomas de origemneuroectodérmica, carcinoma colorretal, carcinoma in situ, neoplasia de cé-lulas de Schwann associada à neuroíibromatose, leucemia mielóide aguda,leucemia linfocitica aguda, leucemia mielogenosa crônica, mieloma múltiplo,mastocitose, melanoma, câncer de mama, câncer ovariano, tumores demastócitos caninos, hipertrofia, asma, artrite reumatóide, rinite alérgica, es-clerose múltipla, síndrome inflamatória do intestino, rejeição de transplante,eritematose de lúpus sistêmico, granulomatose de Wegener, Doença Pul-monar Obstrutiva Crônica, enfisema, aterosclerose, resistência à insulina,hiperglicemia, lipólise, hipereosinofilia, osteoporose, risco aumentado de fra-tura, hipercalcemia, metastase óssea, glomerulonefrite, nefrite intersticial,nefrite de Lúpus, necrose tubular, e complicações renais associadas a diabetes.
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US (2) US7846941B2 (pt)
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NZ (1) NZ563444A (pt)
WO (1) WO2007013896A2 (pt)

Families Citing this family (97)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2550361C (en) 2003-12-19 2014-04-29 Prabha Ibrahim Compounds and methods for development of ret modulators
US7498342B2 (en) * 2004-06-17 2009-03-03 Plexxikon, Inc. Compounds modulating c-kit activity
WO2006030826A1 (ja) 2004-09-17 2006-03-23 Eisai R & D Management Co., Ltd. 医薬組成物
CA2608733A1 (en) 2005-05-17 2007-02-01 Plexxikon, Inc. Pyrrol (2,3-b) pyridine derivatives protein kinase inhibitors
SI2395004T1 (sl) * 2005-06-22 2016-05-31 Plexxikon Inc. Derivati piro (2,3-b) piridina kot inhibitorji proteinske kinaze
WO2007015578A1 (ja) 2005-08-02 2007-02-08 Eisai R & D Management Co., Ltd. 血管新生阻害物質の効果を検定する方法
AU2006285673B2 (en) * 2005-09-01 2010-12-02 Eisai R&D Management Co., Ltd. Method for preparation of pharmaceutical composition having improved disintegratability
CA2635899A1 (en) * 2006-01-19 2007-07-26 Osi Pharmaceuticals, Inc. Fused heterobicyclic kinase inhibitors
EP2865381A1 (en) * 2006-05-18 2015-04-29 Pharmacyclics, Inc. ITK inhibitors for treating blood cell malignancies
CN101443009A (zh) 2006-05-18 2009-05-27 卫材R&D管理有限公司 针对甲状腺癌的抗肿瘤剂
WO2008063888A2 (en) * 2006-11-22 2008-05-29 Plexxikon, Inc. Compounds modulating c-fms and/or c-kit activity and uses therefor
WO2008080015A2 (en) 2006-12-21 2008-07-03 Plexxikon, Inc. Compounds and methods for kinase modulation, and indications therefor
WO2008079909A1 (en) * 2006-12-21 2008-07-03 Plexxikon, Inc. Pyrrolo [2,3-b] pyridines as kinase modulators
PE20081581A1 (es) * 2006-12-21 2008-11-12 Plexxikon Inc COMPUESTOS PIRROLO[2,3-b]PIRIDINAS COMO MODULADORES DE QUINASA
JP2010533729A (ja) 2007-07-17 2010-10-28 プレキシコン，インコーポレーテッド キナーゼ調節のための化合物と方法、及びそのための適応
CA2704266A1 (en) 2007-11-02 2009-06-11 Vertex Pharmaceuticals Incorporated [1h- pyrazolo [3, 4-b] pyridine-4-yl] -phenyle or -pyridin-2-yle derivatives as protein kinase c-theta
CA2716947A1 (en) * 2008-02-29 2009-09-11 Array Biopharma Inc. Imidazo [4,5-b] pyridine derivatives used as raf inhibitors
PE20091623A1 (es) 2008-02-29 2009-11-19 Array Biopharma Inc DERIVADOS DE 1H-PIRAZOLO[3,4-b]PIRIDINA COMO INHIBIDORES DE RAF QUINASA
AR070535A1 (es) * 2008-02-29 2010-04-14 Array Biopharma Inc Compuestos inhibidores de raf y metodos para usarlos
WO2009111280A1 (en) 2008-02-29 2009-09-11 Array Biopharma Inc. N- (6-aminopyridin-3-yl) -3- (sulfonamido) benzamide derivatives as b-raf inhibitors for the treatment of cancer
WO2009143018A2 (en) 2008-05-19 2009-11-26 Plexxikon, Inc. Compounds and methods for kinase modulation, and indications therefor
PE20091846A1 (es) * 2008-05-19 2009-12-16 Plexxikon Inc DERIVADOS DE PIRROLO[2,3-d]-PIRIMIDINA COMO MODULADORES DE CINASAS
CN104530052A (zh) * 2008-06-10 2015-04-22 普莱希科公司 用于激酶调节的5h-吡咯[2,3-b]吡嗪衍生物和其适应症
US8110576B2 (en) 2008-06-10 2012-02-07 Plexxikon Inc. Substituted pyrrolo[2,3b]pyrazines and methods for treatment of raf protein kinase-mediated indications
EP2356116A1 (en) * 2008-11-20 2011-08-17 OSI Pharmaceuticals, Inc. Substituted pyrroloý2,3-b¨-pyridines and-pyrazines
BRPI0922937A2 (pt) * 2008-12-05 2019-09-24 Hoffmann La Roche inibidores de pirrolopirazinil uréia quinase
WO2010111527A1 (en) * 2009-03-26 2010-09-30 Plexxikon, Inc. Pyrazolo [ 3, 4 -b] pyridines as kinase inhibitors and their medical use
PE20120876A1 (es) 2009-04-03 2012-08-05 Hoffmann La Roche Composiciones del acido propano-1-sulfonico{3-[5-(4-cloro-fenil)-1h-pirrolo[2,3-b]-piridina-3-carbonil]-2,4-difluoro-fenil}-amida
US8329724B2 (en) 2009-08-03 2012-12-11 Hoffmann-La Roche Inc. Process for the manufacture of pharmaceutically active compounds
EP2470533A4 (en) 2009-08-24 2013-01-23 Ascepion Pharmaceuticals Inc UREA COMPOUNDS CONTAINING A 5,6-BICYCLIC HETEROARYL GROUP
CA2772316A1 (en) 2009-08-28 2011-03-03 Array Biopharma Inc. 1h-pyrazolo [3,4-b] pyridine compounds for inhibiting raf kinase
PE20121327A1 (es) 2009-11-06 2012-10-18 Plexxikon Inc Compuestos y metodos para la modulacion de cinasas, e indicaciones para ello
RU2012125070A (ru) 2009-11-18 2013-12-27 Плексксикон, Инк. Соединения и способы модулирования киназы и показания к их применению
AR079541A1 (es) * 2009-12-21 2012-02-01 Array Biopharma Inc Compuestos sustituidos de n-(1h-indazol-4-il) imidazo (1,2-a) piridin-3-carboxamida como inhibidores de cfms
KR20120112623A (ko) 2009-12-23 2012-10-11 플렉시콘, 인코퍼레이티드 키나제 조절을 위한 화합물 및 방법, 및 그에 대한 적응증
EP2519525A4 (en) 2009-12-30 2013-06-12 Arqule Inc SUBSTITUTED PYRROLO-AMINOPYRIMIDINE COMPOUNDS
TWI510487B (zh) * 2010-04-21 2015-12-01 Plexxikon Inc 用於激酶調節的化合物和方法及其適應症
EP2569315A1 (en) 2010-05-14 2013-03-20 OSI Pharmaceuticals, LLC Fused bicyclic kinase inhibitors
AR081039A1 (es) 2010-05-14 2012-05-30 Osi Pharmaceuticals Llc Inhibidores biciclicos fusionados de quinasa
PL2672967T3 (pl) 2011-02-07 2019-04-30 Plexxikon Inc Związki i sposoby modulacji kinaz i wskazania ku temu
TWI558702B (zh) 2011-02-21 2016-11-21 普雷辛肯公司 醫藥活性物質的固態形式
GEP20156417B (en) * 2011-04-05 2015-12-25 Pfizer Ltd Pyrrolo [2,3-d] pyrimidine derivatives as inhibitors of tropomyosin-related kinases
CA2828946C (en) 2011-04-18 2016-06-21 Eisai R&D Management Co., Ltd. Therapeutic agent for tumor
WO2012158658A1 (en) 2011-05-16 2012-11-22 OSI Pharmaceuticals, LLC Fused bicyclic kinase inhibitors
JP6113151B2 (ja) 2011-05-17 2017-04-12 プレキシコン インコーポレーテッドＰｌｅｘｘｉｋｏｎ Ｉｎｃ． キナーゼ調節およびその適応症
EP3444363B1 (en) 2011-06-03 2020-11-25 Eisai R&D Management Co., Ltd. Biomarkers for prediciting and assessing responsiveness of thyroid and kidney cancer subjects to lenvatinib compounds
SI2797888T1 (sl) 2011-12-31 2017-01-31 BeiGene, Ltd. Mourant Ozannes Corporate Services (Cayman) Limited Zlite triciklične spojine kot inhibitorji kinaze raf
US9358235B2 (en) 2012-03-19 2016-06-07 Plexxikon Inc. Kinase modulation, and indications therefor
US9150570B2 (en) 2012-05-31 2015-10-06 Plexxikon Inc. Synthesis of heterocyclic compounds
KR20180088926A (ko) 2012-07-24 2018-08-07 파마싸이클릭스 엘엘씨 브루톤 티로신 키나제(btk)의 억제제에 대한 내성과 관련된 돌연변이
US10227357B2 (en) 2012-09-06 2019-03-12 Plexxikon Inc. Compounds and methods for kinase modulation, and indications therefor
CA2885259A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 Pfizer Limited Pyrrolo[3,2-c]pyridine tropomyosin-related kinase inhibitors
CA2889866A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Eisai R&D Management Co., Ltd. Amorphous form of quinoline derivative, and method for producing same
EP2935248B1 (en) 2012-12-21 2018-02-28 Plexxikon Inc. Compounds and methods for kinase modulation, and indications therefor
SG11201506687RA (en) 2013-03-15 2015-09-29 Plexxikon Inc Heterocyclic compounds and uses thereof
US20140303121A1 (en) 2013-03-15 2014-10-09 Plexxikon Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
NZ714049A (en) 2013-05-14 2020-05-29 Eisai R&D Man Co Ltd Biomarkers for predicting and assessing responsiveness of endometrial cancer subjects to lenvatinib compounds
MX2015015966A (es) 2013-05-30 2016-04-13 Plexxikon Inc Compuestos para la modulacion de cinasas e indicaciones para los mismos.
WO2014206344A1 (en) 2013-06-28 2014-12-31 Beigene, Ltd. Fused tricyclic amide compounds as multiple kinase inhibitors
US9771369B2 (en) 2014-03-04 2017-09-26 Plexxikon Inc. Compounds and methods for kinase modulation, and indications therefor
WO2016004305A2 (en) 2014-07-02 2016-01-07 Pharmacyclics Llc Inhibitors of bruton's tyrosine kinase
CN106660964B (zh) 2014-08-28 2021-09-03 卫材R&D管理有限公司 高纯度喹啉衍生物及其生产方法
AU2015318233B2 (en) 2014-09-15 2020-03-12 Plexxikon Inc. Heterocyclic compounds and uses thereof
US20180028662A1 (en) 2015-02-25 2018-02-01 Eisai R&D Management Co., Ltd. Method for Suppressing Bitterness of Quinoline Derivative
KR20170122809A (ko) 2015-03-04 2017-11-06 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 암을 치료하기 위한 pd-1 길항제 및 vegfr/fgfr/ret 티로신 키나제 억제제의 조합
US10160755B2 (en) 2015-04-08 2018-12-25 Plexxikon Inc. Compounds and methods for kinase modulation, and indications therefor
JP6946194B2 (ja) 2015-05-06 2021-10-06 プレキシコン インコーポレーテッドＰｌｅｘｘｉｋｏｎ Ｉｎｃ． キナーゼを調節する化合物の固体形態
EP3292122B1 (en) 2015-05-06 2020-01-15 Plexxikon Inc. Synthesis of 1h-pyrrolo[2,3-b]pyridin derivatives that modulate kinases
RU2729936C2 (ru) 2015-06-16 2020-08-13 Эйсай Ар Энд Ди Менеджмент Ко., Лтд. Противораковое средство
CA2993018A1 (en) * 2015-07-20 2017-01-26 Genzyme Corporation Colony stimulating factor-1 receptor (csf-1r) inhibitors
US10829484B2 (en) 2015-07-28 2020-11-10 Plexxikon Inc. Compounds and methods for kinase modulation, and indications therefor
JP6863970B2 (ja) * 2015-09-21 2021-04-21 プレキシコン インコーポレーテッドＰｌｅｘｘｉｋｏｎ Ｉｎｃ． ヘテロ環式化合物およびそれらの使用
JP6862468B2 (ja) 2015-12-07 2021-04-21 プレキシコン インコーポレーテッドＰｌｅｘｘｉｋｏｎ Ｉｎｃ． キナーゼ調節のための化合物及び方法ならびにそのための指示
US9630968B1 (en) 2015-12-23 2017-04-25 Arqule, Inc. Tetrahydropyranyl amino-pyrrolopyrimidinone and methods of use thereof
AU2017232610B2 (en) 2016-03-16 2021-07-22 Plexxikon Inc. Compounds and methods for kinase modulation and indications therefore
KR20190035925A (ko) 2016-08-24 2019-04-03 아르퀼 인코포레이티드 아미노-피롤로피리미디논 화합물 및 이의 사용 방법
EP3512852A1 (en) * 2016-09-16 2019-07-24 Helmholtz Zentrum München - Deutsches Forschungszentrum für Gesundheit und Umwelt (GmbH) Traf 6 inhibitors
TW201815766A (zh) 2016-09-22 2018-05-01 美商普雷辛肯公司 用於ｉｄｏ及ｔｄｏ調節之化合物及方法以及其適應症
CA3047580A1 (en) 2016-12-23 2018-07-26 Plexxikon Inc. Compounds and methods for cdk8 modulation and indications therefor
AU2018237047A1 (en) 2017-03-20 2019-10-17 Plexxikon Inc. Crystalline forms of 4-(1-(1,1-di(pyridin-2-yl)ethyl)-6-(3,5-dimethylisoxazol-4-yl)-1H- pyrrolo[3,2-b]pyridin-3-yl)benzoic acid that inhibits bromodomain
US10428067B2 (en) 2017-06-07 2019-10-01 Plexxikon Inc. Compounds and methods for kinase modulation
US11180495B2 (en) * 2017-06-19 2021-11-23 Abbisko Therapeutics Co., Ltd. Nitrogen heteroaryl derivative having CSF1R inhibitory activity, and preparation method therefor and application thereof
EP3658189A1 (en) 2017-07-25 2020-06-03 Plexxikon Inc. Formulations of a compound modulating kinases
AU2018348241B2 (en) 2017-10-13 2023-01-12 Opna Bio SA Solid forms of a compound for modulating kinases
BR112020007972A2 (pt) 2017-10-27 2020-10-20 Plexxikon, Inc. formulações de composto que modula quinases
CN111788195B (zh) 2018-01-31 2023-11-21 海帕瑞吉尼克斯股份有限公司 用于促进肝脏再生或减少或预防肝细胞死亡的蛋白激酶mkk4抑制剂
WO2019183145A1 (en) 2018-03-20 2019-09-26 Plexxikon Inc. Compounds and methods for ido and tdo modulation, and indications therefor
EP3810139A1 (en) 2018-06-21 2021-04-28 HepaRegeniX GmbH Tricyclic protein kinase inhibitors for promoting liver regeneration or reducing or preventing hepatocyte death
WO2020016243A1 (en) 2018-07-16 2020-01-23 Heparegenix Gmbh Protein kinase inhibitors for promoting liver regeneration or reducing or preventing hepatocyte death
CN112867803A (zh) 2018-10-16 2021-05-28 诺华股份有限公司 单独的或与免疫标志物组合的肿瘤突变负荷作为生物标志物用于预测对靶向疗法的应答
WO2020210366A1 (en) 2019-04-09 2020-10-15 Plexxikon Inc. Condensed azines for ep300 or cbp modulation and indications therefor
WO2021144360A1 (en) 2020-01-17 2021-07-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Small molecule csf-1r inhibitors in therapeutic and cosmetic uses
CN116323588A (zh) 2020-04-23 2023-06-23 奥普纳生物有限公司 用于cd73调节的化合物和方法及其适应症
JP2023542473A (ja) 2020-08-21 2023-10-10 プレキシコン インコーポレーテッド 併用薬抗がん治療
EP4267573A1 (en) 2020-12-23 2023-11-01 Genzyme Corporation Deuterated colony stimulating factor-1 receptor (csf-1r) inhibitors
WO2022195551A1 (en) 2021-03-18 2022-09-22 Novartis Ag Biomarkers for cancer and methods of use thereof
CN115557985B (zh) * 2022-12-06 2023-03-10 成都泰蓉生物科技有限公司 一种选择性裂解硫醚中c-s键合成硅烷的方法

Family Cites Families (134)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US617687A (en) * 1899-01-10 Vapor-burning apparatus
US2234705A (en) * 1940-04-12 1941-03-11 Eastman Kodak Co Cellulose organic derivative composition containing esters of monoalkoxy benzoic acids
US2413258A (en) * 1942-07-07 1946-12-24 United Gas Improvement Co Polystyrene-type resins plasticized with high boiling fatty acid alkyl esters
DE2413258A1 (de) 1974-03-20 1975-10-02 Bayer Ag Alkoxycarbonylphenylharnstoffe, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als herbizide
GB1573212A (en) * 1976-04-15 1980-08-20 Technicon Instr Immunoassay for gentamicin
US4664504A (en) * 1983-01-20 1987-05-12 Tokyo Shibaura Denki Kabushiki Kaisha Image forming apparatus
US4568649A (en) * 1983-02-22 1986-02-04 Immunex Corporation Immediate ligand detection assay
US4626513A (en) * 1983-11-10 1986-12-02 Massachusetts General Hospital Method and apparatus for ligand detection
DE3483099D1 (de) 1984-03-15 1990-10-04 Immunex Corp Test zur sofortigen feststellung von liganden, testsatz und seine herstellung.
US5688655A (en) * 1988-02-10 1997-11-18 Ict Pharmaceuticals, Inc. Method of screening for protein inhibitors and activators
US6054270A (en) 1988-05-03 2000-04-25 Oxford Gene Technology Limited Analying polynucleotide sequences
US5700637A (en) * 1988-05-03 1997-12-23 Isis Innovation Limited Apparatus and method for analyzing polynucleotide sequences and method of generating oligonucleotide arrays
US5658775A (en) * 1988-05-17 1997-08-19 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Double copy retroviral vector
WO1990002806A1 (en) 1988-09-01 1990-03-22 Whitehead Institute For Biomedical Research Recombinant retroviruses with amphotropic and ecotropic host ranges
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
US5527681A (en) 1989-06-07 1996-06-18 Affymax Technologies N.V. Immobilized molecular synthesis of systematically substituted compounds
US5800992A (en) * 1989-06-07 1998-09-01 Fodor; Stephen P.A. Method of detecting nucleic acids
US5744101A (en) * 1989-06-07 1998-04-28 Affymax Technologies N.V. Photolabile nucleoside protecting groups
US5143854A (en) * 1989-06-07 1992-09-01 Affymax Technologies N.V. Large scale photolithographic solid phase synthesis of polypeptides and receptor binding screening thereof
WO1991018088A1 (en) * 1990-05-23 1991-11-28 The United States Of America, Represented By The Secretary, United States Department Of Commerce Adeno-associated virus (aav)-based eucaryotic vectors
DE4022414A1 (de) 1990-07-13 1992-01-16 Bayer Ag Substituierte pyrrolo-pyridine
JPH06509578A (ja) * 1991-07-26 1994-10-27 ユニバーシティ・オブ・ロチェスター 悪性細胞利用による癌治療法
US5632957A (en) 1993-11-01 1997-05-27 Nanogen Molecular biological diagnostic systems including electrodes
FR2687402B1 (fr) * 1992-02-14 1995-06-30 Lipha Nouveaux azaindoles, procedes de preparation et medicaments les contenant.
JPH05236997A (ja) * 1992-02-28 1993-09-17 Hitachi Ltd ポリヌクレオチド捕捉用チップ
GB9226855D0 (en) * 1992-12-23 1993-02-17 Erba Carlo Spa Vinylene-azaindole derivatives and process for their preparation
DE69420394T2 (de) * 1993-03-01 2000-04-13 Merck Sharp & Dohme Pyrrolopyridinderivate als dopaminrezeptor liganden
WO1994020497A1 (en) * 1993-03-01 1994-09-15 Merck Sharp & Dohme Limited Pyrrolo-pyridine derivatives
US5576319A (en) * 1993-03-01 1996-11-19 Merck, Sharp & Dohme Ltd. Pyrrolo-pyridine derivatives
US5840485A (en) * 1993-05-27 1998-11-24 Selectide Corporation Topologically segregated, encoded solid phase libraries
ATE232882T1 (de) * 1993-05-27 2003-03-15 Selectide Corp Topologisch getrennte kodierende festphasen- bibliotheken
US5631236A (en) 1993-08-26 1997-05-20 Baylor College Of Medicine Gene therapy for solid tumors, using a DNA sequence encoding HSV-Tk or VZV-Tk
US5426039A (en) * 1993-09-08 1995-06-20 Bio-Rad Laboratories, Inc. Direct molecular cloning of primer extended DNA containing an alkane diol
US6045996A (en) 1993-10-26 2000-04-04 Affymetrix, Inc. Hybridization assays on oligonucleotide arrays
US5965452A (en) 1996-07-09 1999-10-12 Nanogen, Inc. Multiplexed active biologic array
US6468742B2 (en) 1993-11-01 2002-10-22 Nanogen, Inc. Methods for determination of single nucleic acid polymorphisms using bioelectronic microchip
US5807522A (en) * 1994-06-17 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods for fabricating microarrays of biological samples
US5763198A (en) * 1994-07-22 1998-06-09 Sugen, Inc. Screening assays for compounds
GB9416162D0 (en) 1994-08-10 1994-09-28 Merck Sharp & Dohme Therapeutic agents
GB9416189D0 (en) 1994-08-10 1994-09-28 Merck Sharp & Dohme Therapeutic agents
US5556752A (en) * 1994-10-24 1996-09-17 Affymetrix, Inc. Surface-bound, unimolecular, double-stranded DNA
US5830645A (en) 1994-12-09 1998-11-03 The Regents Of The University Of California Comparative fluorescence hybridization to nucleic acid arrays
US5837815A (en) 1994-12-15 1998-11-17 Sugen, Inc. PYK2 related polypeptide products
GB9503400D0 (en) 1995-02-21 1995-04-12 Merck Sharp & Dohme Therpeutic agents
GB2298199A (en) * 1995-02-21 1996-08-28 Merck Sharp & Dohme Synthesis of azaindoles
US5959098A (en) * 1996-04-17 1999-09-28 Affymetrix, Inc. Substrate preparation process
US6117681A (en) * 1995-03-29 2000-09-12 Bavarian Nordic Research Inst. A/S Pseudotyped retroviral particles
GB9507291D0 (en) * 1995-04-07 1995-05-31 Merck Sharp & Dohme Therapeutic agents
GB2299581A (en) 1995-04-07 1996-10-09 Merck Sharp & Dohme 3-(Tetrahydropyridin-1-yl-methyl)pyrrolo[2,3-b]pyridine derivatives as ligands for dopamine receptor subtypes
US6110456A (en) 1995-06-07 2000-08-29 Yale University Oral delivery or adeno-associated viral vectors
US5856174A (en) 1995-06-29 1999-01-05 Affymetrix, Inc. Integrated nucleic acid diagnostic device
US5866411A (en) 1995-09-08 1999-02-02 Pedersen; Finn Skou Retroviral vector, a replication system for said vector and avian or mammalian cells transfected with said vector
US5747276A (en) * 1995-09-15 1998-05-05 The Scripps Research Institute Screening methods for the identification of novel antibiotics
US5721118A (en) * 1995-10-31 1998-02-24 The Regents Of The University Of California, San Diego Mammalian artificial chromosomes and methods of using same
US6022963A (en) 1995-12-15 2000-02-08 Affymetrix, Inc. Synthesis of oligonucleotide arrays using photocleavable protecting groups
US6013440A (en) 1996-03-11 2000-01-11 Affymetrix, Inc. Nucleic acid affinity columns
US6025155A (en) * 1996-04-10 2000-02-15 Chromos Molecular Systems, Inc. Artificial chromosomes, uses thereof and methods for preparing artificial chromosomes
US5804585A (en) * 1996-04-15 1998-09-08 Texas Biotechnology Corporation Thieno-pyridine sulfonamides derivatives thereof and related compounds that modulate the activity of endothelin
AU3568897A (en) 1996-06-07 1998-01-05 Eos Biotechnology, Inc. Immobilised linear oligonucleotide arrays
US6294330B1 (en) * 1997-01-31 2001-09-25 Odyssey Pharmaceuticals Inc. Protein fragment complementation assays for the detection of biological or drug interactions
CA2283434A1 (en) * 1997-03-07 1998-09-11 Tropix, Inc. Protease inhibitor assay
US6096718A (en) * 1997-06-05 2000-08-01 Gene Targeting Corp. Tissue specific adenovirus vectors for breast cancer treatment
US6235769B1 (en) * 1997-07-03 2001-05-22 Sugen, Inc. Methods of preventing and treating neurological disorders with compounds that modulate the function of the C-RET receptor protein tyrosine kinase
US6826296B2 (en) 1997-07-25 2004-11-30 Affymetrix, Inc. Method and system for providing a probe array chip design database
US6161776A (en) * 1997-08-12 2000-12-19 Nibco Inc. Multi-layered, porous mat turf irrigation apparatus and method
AU8908198A (en) 1997-08-15 1999-03-08 Hyseq, Inc. Methods and compositions for detection or quantification of nucleic acid species
ES2260157T3 (es) 1997-09-11 2006-11-01 Bioventures, Inc., Metodo para ser dispositivos de alta densidad.
US6178384B1 (en) * 1997-09-29 2001-01-23 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method and apparatus for selecting a molecule based on conformational free energy
US6465178B2 (en) 1997-09-30 2002-10-15 Surmodics, Inc. Target molecule attachment to surfaces
JP2002510505A (ja) 1998-04-03 2002-04-09 フィロス インク． 位置特定可能な蛋白質アレイ
US6048695A (en) 1998-05-04 2000-04-11 Baylor College Of Medicine Chemically modified nucleic acids and methods for coupling nucleic acids to solid support
EP1085846A2 (en) * 1998-06-08 2001-03-28 Advanced Medicine, Inc. Multibinding inhibitors of microsomal triglyceride transferase protein
US6113913A (en) * 1998-06-26 2000-09-05 Genvec, Inc. Recombinant adenovirus
US6277628B1 (en) 1998-10-02 2001-08-21 Incyte Genomics, Inc. Linear microarrays
US6277489B1 (en) * 1998-12-04 2001-08-21 The Regents Of The University Of California Support for high performance affinity chromatography and other uses
US6221653B1 (en) * 1999-04-27 2001-04-24 Agilent Technologies, Inc. Method of performing array-based hybridization assays using thermal inkjet deposition of sample fluids
FR2793793B1 (fr) * 1999-05-19 2004-02-27 Adir Nouveaux derives dimeriques substitues, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
US6653151B2 (en) * 1999-07-30 2003-11-25 Large Scale Proteomics Corporation Dry deposition of materials for microarrays using matrix displacement
US20010008765A1 (en) 1999-12-06 2001-07-19 Fuji Photo Film Co., Ltd. DNA chip and reactive solid carrier
MXPA02006263A (es) * 1999-12-22 2004-02-26 Sugen Inc Metodos de modulacion de la funcion de la cinasa de tirosina c-kit de la proteina con compuestos de indolinona.
CA2707827A1 (en) 2001-04-11 2002-10-24 Senju Pharmaceutical Co., Ltd. Visual function disorder improving agents containing rho kinase inhibitors
AU2002258971A1 (en) 2001-04-24 2002-11-05 Wyeth Antidepressant azaheterocyclylmethyl derivatives of 2,3-dihydro-1,4-benzodioxan
GB0114417D0 (en) * 2001-06-13 2001-08-08 Boc Group Plc Lubricating systems for regenerative vacuum pumps
EP1267111A1 (en) 2001-06-15 2002-12-18 Dsm N.V. Pressurized fluid conduit
WO2002102783A1 (en) 2001-06-19 2002-12-27 Merck & Co., Inc. Tyrosine kinase inhibitors
US7291639B2 (en) 2001-06-20 2007-11-06 Wyeth Aryloxy-acetic acid compounds useful as inhibitors of plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1)
UA75425C2 (en) 2001-07-09 2006-04-17 Piperazine oxime derivatives with antagonistic activity to nk-1 receptor, use thereof, a pharmaceutical composition based thereon, a method for producing and a method for producing intermediary compounds
GB0117583D0 (en) 2001-07-19 2001-09-12 Astrazeneca Ab Novel compounds
US6858860B2 (en) * 2001-07-24 2005-02-22 Seiko Epson Corporation Apparatus and method for measuring natural period of liquid
GB0118479D0 (en) 2001-07-28 2001-09-19 Astrazeneca Ab Novel compounds
WO2003028724A1 (en) 2001-10-04 2003-04-10 Smithkline Beecham Corporation Chk1 kinase inhibitors
US20050014942A1 (en) 2001-10-30 2005-01-20 Yasufumi Maruyama Amide derivatives and drugs
US20030236277A1 (en) 2002-02-14 2003-12-25 Kadow John F. Indole, azaindole and related heterocyclic pyrrolidine derivatives
US6884889B2 (en) 2002-03-25 2005-04-26 Bristol-Myers Squibb Co. Processes for the preparation of antiviral 7-azaindole derivatives
CA2480317A1 (en) 2002-03-28 2003-10-09 Eisai Co., Ltd. 7-azaindoles as inhibitors of c-jun n-terminal kinases for the treatment of neurodegenerative disorders
JP2005534619A (ja) 2002-03-28 2005-11-17 エーザイ株式会社 Ｃ−ｊｕｎｎ−末端キナーゼ阻害剤としてのアザインドール
UA78999C2 (en) 2002-06-04 2007-05-10 Wyeth Corp 1-(aminoalkyl)-3-sulfonylazaindoles as ligands of 5-hydroxytryptamine-6
TW200403243A (en) 2002-07-18 2004-03-01 Wyeth Corp 1-Heterocyclylalkyl-3-sulfonylazaindole or-azaindazole derivatives as 5-hydroxytryptamine-6 ligands
TWI329112B (en) 2002-07-19 2010-08-21 Bristol Myers Squibb Co Novel inhibitors of kinases
US6878887B2 (en) * 2002-08-07 2005-04-12 Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. Anti-malfunction mechanism for variable output device
SE0202463D0 (sv) 2002-08-14 2002-08-14 Astrazeneca Ab Novel compounds
AU2003278764C1 (en) 2002-09-06 2010-09-16 Cerulean Pharma Inc. Cyclodextrin-based polymers for therapeutic delivery
WO2004024895A2 (en) * 2002-09-16 2004-03-25 Plexxikon, Inc. Crystal structure of pim-1 kinase
US7696225B2 (en) * 2003-01-06 2010-04-13 Osi Pharmaceuticals, Inc. (2-carboxamido)(3-Amino) thiophene compounds
SE0300120D0 (sv) 2003-01-17 2003-01-17 Astrazeneca Ab Novel compounds
SE0300119D0 (sv) 2003-01-17 2003-01-17 Astrazeneca Ab Novel compounds
US20050085463A1 (en) * 2003-01-23 2005-04-21 Weiner David M. Use of N-desmethylclozapine to treat human neuropsychiatric disease
CA2515571A1 (en) * 2003-02-14 2004-09-02 Wyeth Heterocyclyl-3-sulfonylazaindole or -azaindazole derivatives as 5-hydroxytryptamine-6 ligands
WO2004078923A2 (en) * 2003-02-28 2004-09-16 Plexxikon, Inc. Pyk2 crystal structure and uses
US20050164300A1 (en) * 2003-09-15 2005-07-28 Plexxikon, Inc. Molecular scaffolds for kinase ligand development
DE10357510A1 (de) 2003-12-09 2005-07-07 Bayer Healthcare Ag Heteroarylsubstituierte Benzole
CA2550361C (en) * 2003-12-19 2014-04-29 Prabha Ibrahim Compounds and methods for development of ret modulators
GB0330043D0 (en) * 2003-12-24 2004-01-28 Pharmacia Italia Spa Pyrrolo [2,3-b] pyridine derivatives active as kinase inhibitors process for their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
GB0330042D0 (en) 2003-12-24 2004-01-28 Pharmacia Italia Spa Pyrrolo [2,3-b] pyridine derivatives active as kinase inhibitors process for their preparation and pharmaceutical compositions them
GB0403635D0 (en) 2004-02-18 2004-03-24 Devgen Nv Pyridinocarboxamides with improved activity as kinase inhibitors
GB0405055D0 (en) 2004-03-05 2004-04-07 Eisai London Res Lab Ltd JNK inhibitors
KR101216372B1 (ko) 2004-03-30 2013-01-04 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 Ｊａｋ 및 기타 단백질 키나제의 억제제로서 유용한 아자인돌
WO2005116035A1 (en) * 2004-05-27 2005-12-08 Pfizer Products Inc. Pyrrolopyrimidine derivatives useful in cancer treatment
US20060058339A1 (en) * 2004-06-17 2006-03-16 Ibrahim Prabha N Compounds modulating c-kit activity and uses therefor
US7498342B2 (en) * 2004-06-17 2009-03-03 Plexxikon, Inc. Compounds modulating c-kit activity
EP1765819B1 (en) 2004-06-30 2014-03-12 Vertex Pharmaceuticals Inc. Azaindoles useful as inhibitors of protein kinases
MX2007001126A (es) * 2004-07-27 2007-09-25 Sgx Pharmaceuticals Inc Moduladores de heterociclo cinasa de anillo fusionado.
BRPI0513916A (pt) * 2004-07-27 2008-05-20 Sgx Pharmaceuticals Inc moduladores de pirrol-piridina cinase
US7626021B2 (en) * 2004-07-27 2009-12-01 Sgx Pharmaceuticals, Inc. Fused ring heterocycle kinase modulators
US7709645B2 (en) * 2004-07-27 2010-05-04 Sgx Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolo-pyridine kinase modulators
US7361764B2 (en) * 2004-07-27 2008-04-22 Sgx Pharmaceuticals, Inc. Pyrrolo-pyridine kinase modulators
CA2605738C (en) 2005-04-25 2013-10-01 Merck Patent Gesellschaft Mit Beschraenkter Haftung Novel azaheterocyclic compounds as kinase inhibitors
CA2608733A1 (en) 2005-05-17 2007-02-01 Plexxikon, Inc. Pyrrol (2,3-b) pyridine derivatives protein kinase inhibitors
ZA200710379B (en) 2005-05-20 2009-05-27 Vertex Pharma Pyrrolopyridines useful as inhibitors of protein kinase
SI2395004T1 (sl) 2005-06-22 2016-05-31 Plexxikon Inc. Derivati piro (2,3-b) piridina kot inhibitorji proteinske kinaze
GB0516156D0 (en) 2005-08-05 2005-09-14 Eisai London Res Lab Ltd JNK inhibitors
PE20081581A1 (es) * 2006-12-21 2008-11-12 Plexxikon Inc COMPUESTOS PIRROLO[2,3-b]PIRIDINAS COMO MODULADORES DE QUINASA
WO2008079909A1 (en) * 2006-12-21 2008-07-03 Plexxikon, Inc. Pyrrolo [2,3-b] pyridines as kinase modulators
CL2008001540A1 (es) * 2007-05-29 2009-05-22 Sgx Pharmaceuticals Inc Compuestos derivados de pirrolopiridinas y pirazolopiridinas; composicion farmaceutica; y uso en el tratamiento del cancer.

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Publication number Publication date
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JP2008545652A (ja) 2008-12-18
CR9591A (es) 2008-03-26

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