BRPI0300361B1 - Métodos para preparar um produto granulado seco contendo l-lisina - Google Patents

Description

“MÉTODOS PARA PREPARAR UM PRODUTO GRANULADO SECO CONTENDO L-LISINA”.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

Campo da invenção A presente invenção diz respeito a um produto granulado seco contendo L-lisina como um componente principal. A L-lisina é útil como um aditivo para ração animal e assim por diante.

Descrição da Técnica Relacionada Visto que um aditivo para ração animal contendo um aminoácido como um componente principal não é requerido ser tão purificado quando ele é usado como um aditivo para ração, foi tentado produzir tal aditivo secando-se diretamente uma solução de fermentação na qual um aminoácido é acumulado (Publicações da Patente Japonesa Aberta ao Público (Kokai) N~ 59-169454 e 5-192089). De acordo com a Publicação da Patente Japonesa Aberta ao Público N° 5-192089, é salientado que, nos aditivos para ração animal obtidos de tal maneira, o teor de aminoácido livre é mais reduzido em um produto seco contendo um aminoácido básico como um componente principal comparado com um produto seco contendo um aminoácido neutro como um componente principal. É considerado que isto é causado em parte porque os ânions são adicionados a um caldo de cultura durante a cultura para a produção de um produto seco contendo um aminoácido básico como contra ânions do aminoácido básico para manter a neutralidade elétrica do caldo de cultura e a presença dos ânions no produto seco resulta na redução do teor de aminoácido. Este problema também é observado para a L-lisina, que é um dos aminoácidos básicos. O uso de cristais ou produto seco de L-lisina básica não contendo absolutamente contra íons como um aditivo para ração animal pode ser concebido de modo a melhorar o teor de L-lisina na matéria sólida, entretanto, a base de L-lisina sofre de um problema que apresenta propriedade higroscópica e propriedade de aglutinação acentuadas e assim o seu manuseio é difícil.

Como um método de melhorar a propriedade higroscópica e a propriedade de aglutinação de um produto seco, por exemplo, um método de adicionar um agente anti-aglutinação é considerado como divulgado na Publicação da Patente Japonesa Aberta ao Público N2 9-28310. Entretanto, a adição de agente anti-aglutinação resulta na redução do conteúdo no produto final e além disso também é economicamente desvantajoso.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Um objetivo da presente invenção é fornecer um produto granulado seco contendo L-lisina, que tenha um teor de L-lisina melhorado pela redução de contra íons no produto de L-lisina seco e apresente propriedade higroscópica baixa e propriedade de aglutinação baixa.

Os inventores da presente invenção têm feito estudos extensivos de modo a obter o objetivo anteriormente mencionado. Como um resultado, eles descobriram que um produto granulado seco contendo L-lisina tendo um teor de L-lisina alto e apresentando propriedade higroscópica baixa e propriedade de aglutinação baixa podería ser obtido ajustando-se uma relação equivalente de ânion/L-lisina de uma solução de fermentação ou uma solução contendo L-lisina obtida a partir de uma solução de fermentação para ser de 0,68 a 0,95, granulando e secando a solução obtida. Os inventores da presente invenção descobriram ainda que uma quantidade de uma fonte de contra ânions tais como íons sulfato pode ser reduzida usando-se o dióxido de carbono gerado durante a fermentação ao invés dos contra ânions. Os inventores da presente invenção também descobriram que um produto granulado seco tendo um teor de L-lisina alto e que apresente propriedade higroscópica baixa c propriedade de aglutinação baixa também poderia ser obtido pelo uso do método anteriormente mencionado. A presente invenção foi realizada com base nestas verificações e fornece os seguintes. (1) Um produto granulado seco contendo L-lisina e tendo a seguinte composição: teor de L-lisina na matéria sólida: 40 a 85% em peso relação equivalente de ânion/L-lisina: 0,68 a 0,95 teor de umidade: 5% em peso ou menos em que a relação equivalente de ânion/L-lisina é um valor calculado de acordo com a seguinte equação usando-se o teor de L-lisina (L-Lys), teor de íon sulfato, teor de íon cloreto, teor de íon amônio, teor de íon sódio, teor de íon potássio, teor de íon magnésio e teor de íon cálcio na matéria sólida do produto granulado seco: relação equivalente de ânion/L-lisina = (2 x [S042'] + [Cl'] - [ NH4+] - [Na+] - [ K+] - 2 x [Mg2+] - 2 x [Ca2+]) / [L-Lys] onde [ ] significa uma concentração molar. (2) Um método para preparar um produto granulado seco contendo L-lisina e tendo a seguinte composição: teor de L-lisina na matéria sólida: 40 a 85% em peso relação equivalente de ânion/L-lisina: 0,68 a 0,95 teor de umidade: 5% em peso ou menos cujo método compreende as etapas de adicionar ácido clorídrico, ácido sulfurico ou uma solução de L-lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais alta do que 0,95 a uma solução de matéria prima de L-lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais baixa do que 0,68 para ajustar a relação equivalente de ânion/L-lisina da solução de matéria prima para estar na faixa de 0,68 a 0,95 e obter o produto granulado seco a partir da solução de L-lisina obtida ou um concentrado deste. (3) O método de acordo com (2), em que a solução de matéria prima de L-lisina é obtida carregando-sc uma solução aqucsa contendo L-lisina em uma resina trocadora de cátion de modo que a L-lisina seja absorvida na resina e eluindo-se a L-lisina absorvida na resina com solução de amônia aquosa, cloreto de amônio aquosa ou ambas destas. (4) O método de acordo com (2) ou (3), em que a solução de L-lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais alta do que 0,95 é uma solução de fermentação na qual a L-lisina é acumulada. (5) Um método para preparar um produto granulado seco contendo L-lisina, que compreende as etapas de cultivar um microorganismo tendo uma capacidade para produzir L-lisina em um meio líquido sob uma condição aeróbica para produzir e acumular L-lisina no meio e obter o produto granulado seco a partir do meio, em que a cultura é realizada para se obter uma solução de fermentação contendo L-lisina, enquanto o pH do meio é controlado para estar entre 6,5 a 9,0 durante a cultura e para estar entre 7,2 a 9,0 no final da cultura e a pressão em um tanque de fermentação é controlada para ser positiva durante a cultura ou dióxido de carbono ou um gás misto contendo dióxido de carbono são fornecidos no meio de modo que haja um período da cultura onde os íons bicarbonato e/ou carbonato estejam presentes no meio em uma quantidade de 2 g/litro ou mais, se necessário, ácido clorídrico, ácido sulfúrico ou uma solução de L-lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais alta do que 0,95 são adicionados à solução de fermentação de modo que a solução de fermentação tenha uma relação equivalente de ânion/L-lisina na faixa de 0,68 a 0,95, e a solução de fermentação é concentrada sob pressão reduzida e o concentrado obtido é granulado e secado para se obter um produto granulado seco contendo L-lisina e tendo a seguinte composição: teor de L-lisina na matéria sólida: 40 a 85% em peso relação equivalente de ânion/L-lisina: 0,68 a 0,95 teor de umidade: 5% em peso ou menos.

FORMAS DF RF ALIZACÃO PREFERIDAS DA INVENÇÃO A seguir, a presente invenção será explicada em detalhes. O produto granulado seco contendo L-lisina da presente invenção tem a seguinte composição. (1) teor de L-lisina na matéria sólida: 40 a 85% em peso (2) relação equivalente de ânion/L-lisina: 0,68 a 0,95 (3) teor de umidade: 5% em peso ou menos Os produtos granulados secos convencionais contendo L-lisina como um componente principal sofrem de um problema de redução do teor de L-lisina livre. Por outro lado, uma das características do produto granulado seco da presente invenção é que um teor de L-lisina livre é alto enquanto um teor de L-lisina alto é mantido, visto que uma quantidade excessiva de ânions como contra íons de L-lisina está ausente. O teor de L- lisina do produto granulado seco da presente invenção é de 40 a 85%, preferivelmente de 50 a 85%, mais preferivelmente de 60 a 85% em peso, com base na matéria sólida no produto granulado seco. Tal teor de L-lisina pode ser obtido granulando-se e secando-se uma solução de L-lisina depois que a relação equivalente de ânion/L-lisina da solução de L-lisina descrita abaixo é ajustada a um valor pré determinado.

Um produto granulado seco contendo L-lisina em uma quantidade na faixa definida acima pode ser obtida ajustando-se a relação equivalente de ânion/L-lisina de uma solução de fermentação de L-lisina ou uma solução de matéria prima de L-lisina coletada da solução de fermentação de L-lisina para ser de 0,68 a 0,95, preferivelmente de 0,68 a 0,90, mais preferivelmente de 0,68 a 0,86 e obter um produto granulado seco a partir da solução de L-lisina obtida ou um concentrado deste.

Na presente invenção, a relação equivalente de ânion/L-lisina significa um valor calculado de acordo com a seguinte equação usando-se o teor de L-lisina (L-Lys), teor de íon sulfato, teor de íon cloreto, teor de íon amônie, teor de íon sódio, teor de íon potássio, teor dc íon magnésio e teor uc íon cálcio na matéria sólida do produto granulado seco: relação equivalente de ânion/L-lisina = (2 x [S042'] + [Cf] - [NH4+] - [Na+] - [Κ+] - 2 χ [Mg2+] - 2 χ [Ca2+]) / [L-Lys] onde [ ] significa uma concentração molar.

De modo a ajustar a relação equivalente de ânion/L-lisina para estar dentro da faixa anteriormente mencionada, por exemplo, ácido clorídrico, ácido sulfurico ou uma solução de L-lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais alta do que 0,95 podem ser adicionados a uma solução de matéria prima de L-lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais baixa do que 0,68.

Especificamente, pode ser mencionado um método de neutralizar uma solução básica de L-lisina com um ácido, um método de produzir L-lisina pela fermentação e depois adicionar uma solução de L- lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais baixa do que 0,95 a uma solução de fermentação tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais alta do que 0,95, um método de usar carbonato como contra íons de L-lisina durante a produção de L-lisina pela fermentação, depois granular e secar uma solução de fermentação descarboxilada tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais baixa do que 0,95 e assim por diante. A solução de L-lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais alta do que 0,95 aqui aludida significa uma solução de L- lisina tendo pH da região neutra até a região ácida e por exemplo, uma solução de fermentação contendo L-lisina obtida por um método de fermentação usual pode ser usada. Tal solução de fermentação de L-lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais alta do que 0,95 não é adequada para se obter um produto granulado seco tendo um teor de L-lisina alto. Por outro lado, se uma solução de L-lisina tendo uma relação equivalente de anioxi/L-iiòiiict mais baixa do que o,oo c granuiaíia c secaua como tal, o produto apresenta propriedade higroscópica e propriedade de aglutinação acentuadas e assim o seu manuseio é difícil. Entretanto, se a relação equivalente de ânion/L-lisina de tal solução é ajustada para estar dentro da faixa de 0,68 a 0,95 misturando-a com uma solução de fermentação de L-lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais alta do que 0,95 e depois a solução é granulada e seca, um produto granulado seco que apresente propriedade de aglutinação baixa e propriedade higroscópica baixa pode ser obtido.

De modo a obter um produto granulado seco da presente invenção pelo método de neutralizar uma solução básica de L-lisina com ácido, por exemplo, o seguinte procedimento pode ser usado.

Um ácido inorgânico tal como ácido clorídrico ou ácido sulfurico é adicionado a uma solução de matéria prima básica de L-lisina para preparar uma solução da qual a relação equivalente de ânion/L-lisina é ajustada para estar entre 0,68 a 0,95. Depois, a solução depois da concentração ou como tal pode ser granulada e secada para se obter o produto da presente invenção granulado seco.

Como a solução de matéria prima básica de L-lisina usada neste caso, pode ser usada uma solução obtida carregando-se uma solução de L-lisina produzida pela fermentação, síntese química, etc. em uma resina de troca catiônica para permitir que a L-lisina seja absorvida na resina, depois eluindo-a com amônia aquosa e concentrando a solução de L-lisina obtida sob pressão reduzida para remover a amônia.

Como o método de produzir L-lisina pela fermentação, um microorganismo tendo uma capacidade produtora de L-lisina é cultivado em um meio de fermentação contendo pelo menos um tipo de fonte de carbono, pelo menos um tipo de fonte de nitrogênio, sais minerais, aminoácidos, vitaminas, quantidades traço de elementos metálicos, etc. Durante a fermentação, o pH é mantido dentro dc uma faixa neutra c agiiação e oxigênio suficientes são fornecidos.

Purificando-se a L-lisina usando uma resina de troca catiônica a partir da solução de fermentação obtida como descrito acima, uma solução de L-lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais baixa do que 0,68 pode ser obtida. O microorganismo tendo uma capacidade produtora de L- lisina não é particularmente limitado e qualquer microorganismo tendo uma capacidade produtora de L-lisina pode ser usado. Embora os exemplos do microorganismo usado incluam, por exemplo, bactérias corineformes e bactérias pertencentes ao gênero Escherichia, Serratia ou Bacillus, as bactérias usadas para o método da presente invenção não são limitadas a estas bactérias.

Os exemplos específicos da cepa Escherichia coli tendo capacidade produtora de L-lisina incluem Escherichia coli W3110(tyrA)/pCABD2 (descrita na Publicação de Patente Internacional WO 95/16042) e assim por diante. A Escherichia coli W3110(tyrA)/pCABD2 é uma cepa obtida pela introdução de um plasmídeo pCABD2 contendo genes que codificam as enzimas do caminho biossintético da L-lisina na W3110(tyrA), que é uma cepa deficiente em tyrA da Escherichia coli (ela foi designada como AJ12604, depositada no National Institute of Bioscience and Human-Technology, Agency of Industrial Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry (atualmente, a instituição administrativa independente, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, International Patent Organism Depositary (Endereço: código postal 305-8566, Chuo Dai-6, 1-1 Higashi 1-Chome, Tsukuba-shi, Ibaraki-ken, Japão) em 28 de janeiro de 1991 sob um número de acesso de FERM P-11975 e depois convertido em um depósito internacional sob as condições do Tratado de Budapest em 29 de outubro de 1987 sob um número de acesso de FERM BP-3579). O plasmídeo pCABD2 contém um gene que codifica uma diidrodipicolinato sintase da qual o resíduo de histidina na posição 118 é mutado para um resíduo de tirosina e a inibição da retro alimentação pela L-lisina é dessensibilizada, o gene que codifica uma aspartocinase III mutante da qual o resíduo de treonina na posição 352 é mutado para um resíduo de isoleucina e a inibição da retro alimentação pela L-lisina é dessensibilizada e os genes que codificam a diidrodipicolinato redutase e a diaminopimelato desidrogenase.

Além disso, a cepa W3110(tyrA) da E. coli pode ser obtida como descrito abaixo. Isto é, muitas cepas obtidas pela introdução de um plasmídeo na cepa W3110(tyrA) são divulgadas na Publicação de Patente Européia Aberta ao Público Ns 488424/1992. Por exemplo, uma cepa obtida pela introdução de um plasmídeo pHATerm é designada como E. coli W3110(tyrA)/pHATerm e depositada no National Institute of Bioscience and Human-Technology, Agency of Industrial Science and Technology sob um número de acesso de FERM BP-3653. A cepa W3110(tyrA) pode ser obtida eliminando-se o plasmídeo pHATerm desta cepa W3110(tyrA)/pHATerm da E. coli. A eliminação do plasmídeo pode ser realizada de uma maneira convencional.

Os exemplos de bactérias produtoras de L-lisina pertencentes ao gênero Serratia incluem as bactérias pertencentes ao gênero Serrada transformadas pela introdução de um DNA que codifica a diidrodipicolinato sintase tendo uma mutação que dessensibiliza a inibição de retro alimentação pela L-lisina nas suas células e as bactérias pertencentes ao gênero Serrada contendo aspartocinase da qual a inibição da retro alimentação pela L-lisina é dessensibilizada (Publicação de Patente Internacional WO 96/41871).

Na presente invenção, como o método para obter o produto granulado seco, um método usual para obter um produto granulado seco contendo L-aminoácido pode ser usado sem limitação particular. Os exemplos do método para a secagem por granulação incluem um método de primeiro solidificar a solução de L-lisina descrita acima e granular o produto solidificado, um método de granular diretamente e secar a solução usando uma semente e assim por diante.

No primeiro método, como o método para solidificar a solução de L-lisina, os métodos para secar e solidificar usando um secador por pulverização, secador de tambor, secador relâmpago giratório ou coisa parecida podem ser usados. O sólido obtido contendo L-lisina pode ser granulado pelo uso de vários granuladores tais como um misturador granulador, aparelhos para granulação com leito fluidizado, granulação com rolo, etc. Neste caso, se a solução de L-lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina regulada é usada como um aglutinante para a granulação, a granulação pode ser facilmente atingida.

Por outro lado, como o método de granular e secar diretamente uma solução de L-lisina usando partículas de semente, pode ser usado um método de secar e granular uma solução de L-lisina no qual o produto granulado contendo L-lisina anteriormente mencionado é usado como as partículas de semente na granulação em leito fluidizado e a solução de L- lisina é pulverizada no leito. Como as partículas de semente, o produto granulado contendo L-lisina anteriormente mencionado pode ser usado e por exemplo, uma parte do produto obtido pela granulação com leito fluidizado pode ser moída e usada como as partículas de semente.

Ambos os métodos são realizados de modo que o teor de umidade no produto granulado seco obtido venha a ser de 5% em peso ou menos.

Depois que a solução de matéria prima de L-lisina é produzida pela fermentação, o produto granulado seco da presente invenção é obtido, quando o método de adicionar uma solução básica de L-lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais baixa dc que 0,95 c usado, como segue. Primeiro, a solução básica de L-lisina anteriormente mencionada é adicionada a uma solução de fermentação na qual a L-lisina é acumulada para preparar uma solução tendo uma composição tal que a solução tenha uma relação equivalente pré determinada de ânion/L-lisina. A solução pode ser granulada e secada depois da concentração ou a solução como tal pode ser diretamente granulada e secada para se obter um produto granulado seco da presente invenção.

Para a produção de uma solução básica de L-lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais baixa do que 0,95 pela fermentação, o método anteriormente mencionado de produzir L-lisina pela fermentação pode ser mencionado.

Na produção do produto granulado seco da presente invenção, embora as células no caldo de cultura possam ser removidas ou não, é mais vantajoso que a célula seja removida, visto que a remoção das células melhora o teor de L-lisina no produto granulado seco da presente invenção.

Como o método para remover as células do caldo de cultura, a centrifugação, filtração, precipitação e assim por diante podem ser usadas.

Como o método para secar por granulação usado neste método, os métodos de secagem por granulação anteriormente mencionados também podem ser usados.

Quando o método de usar carbonato para contra íons de L-lisina durante a produção de L-lisina pela fermentação e depois realizar a descarboxilação é usado, o produto granulado seco da presente invenção é obtido, por exemplo, como segue. A fermentação na qual uma cepa tendo uma capacidade para produzir L-lisina é cultivada em um meio sob uma condição aeróbica é realizada utilizando-se íons carbonato ou íons bicarbonato como contra íons principais de L-lisina e a solução de fermentação obtida é usada como uma matéria prima e submetida à descarboxilação para se obter urna solução de L- lisina tendo uma relação equivalente reduzida de ânion/L-lisina. Sob as condições preferidas, a solução de L-lisina obtida como descrito acima deve ter uma relação equivalente de ânion/L-lisina na faixa de 0,68 a 0,95. Se a relação equivalente de ânion/L-lisina é mais alta ou mais baixa do que esta faixa, ácido clorídrico, ácido sulfurico ou uma solução de L-lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais alta do que 0,95 ou mais baixa do que 0,68 pode ser adicionada à solução de matéria prima de L-lisina, como requerido, para ajustar a relação equivalente de ânion/L-lisina para estar dentro da faixa pré determinada.

No método anteriormente mencionado, o microorganismo tendo uma capacidade produtora de L-lisina não é particularmente limitado e qualquer microorganismo tendo uma capacidade produtora de L-lisina pode ser usado. Por exemplo, os microorganismos descritos acima podem ser mencionados.

Quando um microorganismo tendo uma capacidade produtora de L-lisina é cultivado em um meio sob uma condição aeróbica no método da presente invenção, especificamente, íons carbonato, íons bicarbonato ou ambos podem ser usados como contra íons principais de L-lisina, por exemplo, como segue.

Isto é, o pH do meio é controlado para estar entre 6,5 a 9,0, preferivelmente de 6,5 a 8,0, durante a cultura e para estar entre 7,2 a 9,0 no final da cultura. Altemativamente, a pressão em um tanque de fermentação é controlada para ser positiva durante a cultura ou dióxido de carbono ou um gás misto contendo dióxido de carbono são fornecidos no meio de modo que haja um período da cultura onde os íons bicarbonato e/ou carbonato estejam presentes no meio em uma quantidade de 2 g/L ou mais. A expressão “haja um período da cultura onde os íons bicarbonato e/ou carbonato estejam presentes no meio em uma quantidade de 2 g/L ou mais” aqui usada não significa necessariamente que 2 g/L ou mais dos íons devam cxistii uurante todo o período da cultura, mas significa que é suficiente que 2 g/L ou mais dos íons existam durante um certo período parcial durante o período da cultura. O período onde os íons estão presentes em uma quantidade de 2 g/L ou mais preferivelmente existam no período da fase de desenvolvimento logarítmico da fase estacionária.

Na presente invenção, se o pH controlado é aumentado, o equilíbrio é mudado de modo que o ânion monovalente no caldo de cultura, HCO3-, seja convertido em um ânion bivalente, CO32' e assim o íon toma-se mais eficaz como o contra íon. Além disso, quando o pH é controlado com amônia, aumento do pH leva ao fornecimento de amônia e ela pode ser uma fonte de nitrogênio da fermentação de L-lisina. Como cátions outros que não L-lisina, K, Na, Mg, Ca, etc. derivados dos componentes do meio são mencionados. Estes cátions constituem 50% ou menos dos cátions totais.

De modo a obter pressão positiva em um tanque de fermentação durante a fermentação, por exemplo, uma pressão de gás de entrada maior do que a pressão do gás de evacuação pode ser usada. Usando- se uma pressão positiva em um tanque de fermentação, o dióxido de carbono gerado pela fermentação é dissolvido no caldo de cultura para gerar íons bicarbonato ou carbonato e estes podem servir como os contra íons de L-lisina. A pressão no tanque de fermentação é especificamente de 0,03 a 0,2 MPa, preferivelmente de 0,05 a 0,15 MPa.

Além disso, 0 dióxido de carbono pode ser dissolvido no caldo de cultura pelo fornecimento de dióxido de carbono ou de um gás misto contendo dióxido de carbono no caldo de cultura. Além disso, a pressão no tanque de fermentação pode ser controlado para ser positivo enquanto se fornece dióxido de carbono ou um gás misto contendo dióxido de carbono no caldo de cultura.

De modo a controlar a pressão em um tanque de fermentação para ser positivo, por exemplo, uma pressão de gás de entrada maior do que a pressão de gás de evacuação pode ser usada. Quando o dióxido de carbono é fornecido ao caldo de cultura, por exemplo, dióxido de carbono ou um gás misto contendo 5% em volume ou mais de dióxido de carbono pode ser borbulhado no caldo de cultura. O meio líquido usado para a cultura não é particularmente limitado e meios convencionais conhecidos contendo nutrientes orgânicos e inorgânicos tais como uma fonte de carbono e fonte de nitrogênio assim como nutrientes de quantidade traço podem ser adequadamente usados dependendo do microorganismo usado. A fonte de carbono pode ser qualquer fonte de carbono que possa ser assimilada pelo microorganismo.

Os exemplos destes incluem sacarídeos tais como sacarose, glicose, frutose, melaços e hidrolisado de amido, ácidos orgânicos tais como ácido acético e álcoois tais como etanol e metanol. Os exemplos da fonte de nitrogênio incluem substâncias inorgânicas tais como íon amônio, hidrolisado de proteína e extrato de levedura. Os exemplos dos nutrientes de quantidade traço incluem aminoácidos, vitaminas e elementos metálicos de quantidade traço. O esquema de fermentação não também é particularmente limitado e qualquer uma dentre cultura em batelada na qual o meio não é adicionalmente alimentado, cultura de alimentação na qual o meio é ainda alimentado quando inicialmente o sacarídeo estocado é consumido e cultura contínua na qual o meio é extraído quando o volume do meio excede a capacidade de um tanque de fermentação podem ser usadas.

Embora a temperatura da cultura possa ser adequadamente selecionada de acordo com o microorganismo usado, ela é usualmente de 25 a 45° C, preferivelmente de 30 a 40° C. Além disso, agitação suficiente e oxigênio suficiente são fornecidos durante a fermentação.

Nos métodos convencionais, uma quantidade suficiente de sulfato de amônio, cloreto de amônio, produto de decomposição com ácido sulfurico ou produtos de decomposição com ácido clorídrico de proteínas e outros são usualmente adicionados ao meio. De modo a usar a L-lisina produzida como contra íons e íons sulfato e íons cloreto fornecidos por estas substâncias estão contidos no meio. Portanto, a concentração de íons carbonato ffacamente ácidos toma-se um nível extremamente baixo da ordem de ppm durante a cultura. Entretanto, a presente invenção é caracterizada pela redução destes íons sulfato e íons cloreto de modo que o dióxido de carbono excretado dos microorganismos durante a fermentação seja dissolvido no meio para produzir contra íons. Portanto, na presente invenção, é desnecessário adicionar íons sulfato ou íons cloreto excedendo a quantidade requerida para o desenvolvimento do microorganismo. Preferivelmente, uma quantidade ótima de sulfato de amônio ou coisa parecida é adicionada ao meio durante um estágio precoce da cultura e a adição é terminada no curso da cultura. Altemativamente, sulfato de amônio ou coisa parecida podem ser adicionados enquanto se mantém o equilíbrio com a quantidade de íons carbonato ou íons bicarbonato dissolvidos no meio. Além disso, a amônia pode ser adicionada ao meio como uma fonte de nitrogênio de L-lisina.

Se sulfato de amônio é adicionado ao meio como uma fonte de contra íons de L-lisina, o dióxido de carbono no caldo de cultura é usualmente eliminado pelos íons sulfato. Ao contrário, na presente invenção, uma quantidade excessiva de sulfato de amônio não necessita ser adicionada ao meio e portanto o dióxido de carbono pode ser facilmente dissolvido na solução de fermentação. A solução de fermentação contendo L-lisina obtida pela presente invenção contém de 5 a 80% de íons carbonato ou íons bicarbonato em relação à normalidade de L-lisina produzida pela fermentação. Estes íons carbonato ou íons bicarbonato são facilmente eliminados como dióxido de carbono se aquecimento é aplicado, o caldo de cultura é colocado sob uma condição de pressão reduzida ou o caldo de cultura é aquecido sob uma condição de pressão reduzida. Como um resultado, o conteúdo de L-lisina na matéria sólida na solução de fermentação é aumentado. A temperatura de aquecimento pode ser 40° C ou mais, preferivelmente de 60° C a 90° C. A pressão reduzida pode ser 600 kPa ou menos, preferivelmente 0,04 MPa a 0,2 MPa.

Isto resulta na redução da relação equivalente de ânion/L-lisina no caldo de cultura entre 0,20 a 0,95. Estes contra íons remanescentes consistem de íons sulfato e íons cloreto adicionados ao meio.

Depois, a relação equivalente de ânion/L-lisina é ajustada entre 0,68 a 0,95 adicionando-se um ácido inorgânico tal como ácido clorídrico e ácido sulfurico ou uma solução de L-lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais alta do que 0,95.

Depois que a relação equivalente de ânion/L-lisina é ajustada, a solução de L-lisina pode ser granulada e secada para se obter um produto granulado seco. Também neste método de secagem por granulação, os métodos de secagem por granulação anteriormente mencionados podem ser usados.

De acordo com a presente invenção, um produto granulado seco contendo L-lisina que contenha L-lisina em uma concentração mais alta e que apresente propriedade higroscópica e propriedade de aglutinação favoráveis pode ser obtido.

EXEMPLOS A seguir, a presente invenção será explicada mais especificamente com referência aos seguintes exemplos.

Exemplo 1 A relação equivalente de ânion/L-lisina de uma solução básica de matéria prima de L-lisina foi ajustada pelo uso de ácido sulfurico e um produto granulado seco foi produzido. A fermentação foi realizada pelo uso de uma bactéria produtora de L-lisina, a Escherichia coli W3110(tyrA)/pCABD2 (Publicação de Patente Internacional WO 95/16042) em um meio tendo a seguinte composição. Glicose 100 g/litro, sulfato de amônio 60 g/litro, KH2PO4 1 g/litro, MgS04 · 7H20 0,4 g/litro, FeS04 · 7H20 10 mg/litro, MnS04 · 4H20 8,1 mg/litro, biotina 300 pg/litro, cloridreto de tiamina 200 pg/litro, hidrolisado de proteína de soja (teor de nitrogênio total: 3,2%) 35 ml/litro, L-metionina 200 mg/litro, carbonato de cálcio 50 g/litro, pH 7,0. A cepa produtora de L-lisina foi inoculada ao meio anteriormente mencionado e cultivada a 36° C durante 72 horas. Depois do completamento da cultura, 10 litros do caldo de cultura contendo L-lisina foram obtidos. O caldo de cultura foi ajustado até o pH 3,0 com a adição de ácido sulfurico e depois carregado em uma resina de troca catiônica, DIAION SK1BL (Mitsubishi Chemical) de modo que a L-lisina fosse absorvida na resina. Depois da absorção da L-lisina, a resina foi lavada com água e a L-lisina foi eluída com amônia aquosa. O eluente contendo a L-lisina foi depois concentrado em um evaporador rotativo até que a concentração de L-lisina veio a ser 50% em peso para se obter uma solução básica de L-lisina.

Depois, ácido sulfurico (98%, reagente de grau especial) foi adicionado à solução básica de L-lisina para ajustar a relação equivalente de ânion/L-lisina para ser 0,6984. Assim, uma solução de alimentação de secagem por granulação foi obtida.

Uma parte da solução de alimentação de secagem por granulação em um volume de 1 litro foi secada pelo uso de um secador por pulverização (Pulvis GB22, Yamato Scientific) para se obter um pó. O pó obtido como partículas de semente e a solução de alimentação de secagem por granulação remanescente que não foi usada na secagem no secador por pulverização como uma solução aglutinadora foi alimentada em um secador por granulação (SPIR-A-FLOW, Freund) e a secagem por granulação foi realizada para se obter um produto granulado seco.

Exemplo 2 A relação equivalente de ânion/L-lisina de uma solução básica de matéria prima de L-lisina foi ajustada pelo uso de ácido clorídrico e um produto granulado seco foi produzido. Ácido clorídrico (36%, reagente de grau especial) foi adicionado a uma solução básica de L-lisina obtida da mesma maneira como no Exemplo 1 para ajustar a relação equivalente de ânion/L-lisina para ser 0,6903. Depois, a secagem por granulação foi realizada da mesma maneira como no Exemplo 1 para se obter um produto granulado seco.

Exemplo Comparativo 1 A secagem por granulação foi realizada da mesma maneira como no Exemplo 1 pelo uso de uma solução básica de L-lisina obtida da mesma maneira como no Exemplo 1 como uma matéria prima sem ajustar a relação equivalente de ânion/L-lisina para se obter um produto granulado seco.

Exemplo Comparativo 2 Ácido sulfurico foi adicionado a uma solução básica de L- lisina obtida da mesma maneira como no Exemplo 1 para ajustar a relação equivalente de ânion/L-lisina para ser 0,9622. Depois, a secagem por granulação foi realizada da mesma maneira como no Exemplo 1 para se obter um produto granulado seco. O teor de L-lisina e o teor de umidade em equilíbrio dos produtos granulados secos obtidos foram medidos e os produtos foram avaliados quanto a propriedade de aglutinação.

Como para a medição do teor de umidade em equilíbrio, um teor de umidade de cada produto depois da armazenagem em ambientes de umidades relativas diferentes durante 7 dias sob uma condição de temperatura de 25° C foi usado como o teor de umidade de equilíbrio. Como para a avaliação das propriedades de aglutinação, uma amostra peneirada de antemão para conter partículas tendo um diâmetro de 425 pm a 600 pm foi colocada em um frasco de styrol tendo um diâmetro de 37 mm e armazenado em ambientes de umidades relativas diferentes durante 7 dias sob uma condição de temperatura de 25° C. Depois, a propriedade de aglutinação foi avaliada de acordo com o seguinte critério de avaliação. Os resultados estão apresentados nas Tabelas de 1 a 3. <D : A amostra flui apenas inclinado-se um recipiente. O : Se impacto é levemente dado uma vez, a amostra flui. Δ : Se impacto é dado diversas vezes, a amostra começa a fluir. X : Se impacto é dado continuamente, amostra começa a fluir. XX : Mesmo se impacto é dado continuamente, o bloco permanece.

Pode ser observado que, no Exemplo 1 onde a relação equivalente de ânion/L-lisina foi ajustada para 0,6984, a propriedade higroscópica e a propriedade de aglutinação não foram degradadas e o teor de L-lisina foi melhorado comparado com o Exemplo Comparativo 2. Além disso, no Exemplo Comparativo 1, embora o teor de L-lisina seja melhorado em comparação com o Exemplo 1, a propriedade higroscópica foi forte, a propriedade de aglutinação também é acentuadamente degradada e assim a estabilidade na armazenagem não pôde ser assegurada. Portanto, pode ser julgado que o produto granulado seco do Exemplo 1 é superior quando o teor de L-lisina, a propriedade higroscópica e a propriedade de aglutinação são avaliados juntos.

Além disso, também no Exemplo 2 onde a relação equivalente de ânion/L-lisina foi ajustada para 0,6903, pôde ser confirmado que a propriedade higroscópica e a propriedade de aglutinação não foram degradadas e o teor de L-lisina foi melhorado em comparação com o Exemplo Comparativo 2.

Exemplo 3 A relação equivalente de ânion/L-lisina de uma solução de fermentação de L-lisina foi ajustada pelo uso de uma solução básica de L- lisina e um produto granulado seco foi produzido. A L-lisina foi produzida pelo mesmo método de fermentação como no Exemplo 1 descrito acima. O caldo de cultura foi centrifugado para precipitar as células para se obter um sobrenadante. Depois, o sobrenadante foi concentrado em um evaporador rotativo (EYELA ROTARY VACUUM EVAPORATOR N3NW) até que a concentração de matéria sólida tomou-se 55%.

Além disso, ao concentrado acima, uma solução básica de L- lisina concentrada produzida da mesma maneira como no Exemplo 1 foi adicionada de modo que a relação equivalente de ânion/L-lisina se tomasse 0,8383. A solução obtida foi usada como uma solução de alimentação de secagem por granulação.

Uma parte da solução de alimentação de secagem por granulação em um volume de 1 litro foi secada pelo uso de um secador por pulverização (Pulvis GB22, Yamato Scientific) para se obter um pó. O pó obtido como partículas de semente e a solução de alimentação de secagem por granulação remanescente que não foi usada na secagem no secador por pulverização como uma solução aglutinante foi alimentada a um secador por granulação (SPIR-A-FLOW, Freund) e a secagem por granulação foi realizada para se obter um produto granulado seco.

Exemplo Comparativo 3 Depois de realizar a fermentação, a remoção das células e a concentração da mesma maneira como no Exemplo 3, o concentrado foi adicionado com uma solução básica de L-lisina produzida da mesma maneira como no Exemplo 1 de modo que a relação equivalente de ânion/L-lisina do concentrado permanecesse 0,4302 e usado como uma solução de alimentação de secagem por granulação. Depois, a secagem por granulação foi realizada da mesma maneira como no Exemplo 1 para se obter um produto granulado seco.

Exemplo Comparativo 4 Depois de realizar a fermentação, a remoção das células e a concentração da mesma maneira como no Exemplo 3, o concentrado obtido foi usado para a secagem por granulação sem ajustar a relação equivalente de ânion/L-lisina. A relação equivalente de ânion/L-lisina do produto granulado seco foi de 1,0772.

Os teores de lisina assim como o resultado da medição do teor de umidade em equilíbrio e a avaliação da propriedade de aglutinação dos produtos granulados secos obtidos no Exemplo 3. Exemplos Comparativos 3 e 4 são apresentados nas Tabelas de 4 a 6.

Pode ser observado que o produto do Exemplo 3 teve um teor de umidade em equilíbrio mais baixo e propriedade higroscópica mais baixa, embora tivesse um teor de L-lisina mais baixo, comparado com o produto do Exemplo Comparativo 3. A propriedade de aglutinação do produto do Exemplo 3 também foi mais favorável em comparação com o produto do Exemplo Comparativo 3.

Além disso, o produto do Exemplo 3 teve as características de um teor de L-lisina mais alto, propriedade higroscópica mais baixa e propriedade de aglutinação mais baixa em comparação com o produto do Exemplo Comparativo 4.

Exemplo 4 Ajuste da relação equivalente de ânion/L-lisina pelas condições de fermentação (1) (1) Cultura de semente da Bactéria produtora de L-lisina Um meio contendo 45 g/litro de glicose, 15 g/litro de melaços, 2 g/litro (como nitrogênio) de hidrolisado de proteína da soja, 2 g/litro de KH2P04, 5,6 g/litro de NaOH, 10 g/litro de sulfato de amônio, 0,8 g/litro de MgS04 · 7H20, 20 mg/litro de FeS04 · 7H20, 20 mg/litro de MnS04 · 4H20, 0,8 mg/litro de cloridreto de tiamina e 0,2 mg/litro de biotina (pH 6,0) foi introduzido no tanque de fermentação de vidro pequeno de 1 litro de volume em um volume de 300 ml e esterilizado por aquecimento a 120° C durante 20 minutos. Depois que o tanque de fermentação foi resfriado a 31,5° C, 5 laços de platina de Brevibacterium lactofermentum ATCC 31269 (aludido na Patente U.S. N° 4.066.501) preliminarmente cultivado em uma placa LB durante 24 horas foram inoculados no meio e cultivados a 31,5° C e pH 7,0 durante 30 horas com aeração e agitação suficientes. (2) Cultura Principal Um meio contendo 30 g/litro de glicose, 45 g/litro de melaços, 2 g/litro (como nitrogênio) de hidrolisado de proteína da soja, 1,4 g/litro de ácido fosfórico, 1,2 g/litro de NaOH, 30 g/litro de sulfato de amônio, 1,5 g/litro de MgS04 · 7H20, 15 mg/litro de FeS04 · 7H20, 15 mg/litro de MnS04 · 4H20, 5 mg/litro de cloridreto de tiamina e 0,75 mg/litro de biotina (pH 5,0) foi introduzido em tanque de fermentação de vidro pequeno de 1 litro de volume em um volume de 300 ml e esterilizado por aquecimento a 120° C durante 20 minutos. Depois que o tanque de fermentação foi resfriado a 31,5° C, 45 ml da cultura de semente acima foram inoculados ao meio e a cultura foi realizada a 34° C com aeração de 1/2 wm e agitação suficiente.

Depois que uma quantidade pré determinada do meio de alimentação apresentado abaixo foi alimentado ao caldo de cultura, a cultura foi terminada quando o sacarídeo no caldo de cultura foi completamente consumido. A cultura foi iniciada no pH 7,0 e 0 pH foi gradualmente mudado para 8,0.

Simultaneamente, a pressão no tanque foi mudada de 0 para 0.12 MPa. [Meio de Alimentação] O meio contendo 530 g/litro de glicose, 1,4 g/litro (como nitrogênio) de hidrolisado de proteína da soja, 1,0 g/litro de KOH, 44 g/litro de cloreto de amônio, 0,3 g/litro de MgSC>4 · 7H20, 0,35 mg/litro de cloridreto de tiamina e 0,35 mg/litro de biotina (pH 5,5).

Depois de completar a cultura, a solução de fermentação teve uma relação equivalente de ânion/L-lisina de 0,7518. O caldo de cultura foi centrifugado para precipitar as células para se obter um sobrenadante e o sobrenadante obtido foi concentrado em um evaporador rotativo (EYELA ROTARY VACUUM EVAPORATOR N-3NW) até que a concentração da matéria sólida tomou-se 55%.

Depois, metade do volume da solução concentrada foi secada por pulverização pelo uso de um secador por pulverização (Pulvis GB22, Yamato Scientific). O pó obtido como partículas de semente e a solução concentrada remanescente que não foi usada na secagem no secador por pulverização como uma solução aglutinante foram alimentados a um secador por granulação (SPIR-AFLOW, Freund) e a secagem por granulação foi realizada para se obter um produto granulado seco.

Os teores de lisina assim como os resultados da medição do teor de umidade em equilíbrio e a avaliação da propriedade de aglutinação dos produtos granulados secos obtidos no Exemplo 4, Exemplos Comparativos 3 e 4 são apresentados nas Tabelas de 7 a 9. O produto granulado seco obtido no Exemplo 4 teve um teor mais alto de L-lisina comparado com o produto do Exemplo Comparativo 4.

Além disso, embora o produto do Exemplo 4 tivesse um teor de umidade em equilíbrio levemente mais alto, ele apresentou propriedade de aglutinação baixa e é considerado não causar nenhum problema no uso prático.

Além disso, embora o produto granulado seco do Exemplo 4 tivesse um teor de L-lisina mais baixo comparado com o produto do Exemplo Comparativo 3, o produto do Exemplo 4 não apresentou propriedade de aglutinação notável mesmo sob uma condição de umidade relativa a 58%, ao passo que o produto do Exemplo Comparativo 3 apresentou propriedade de aglutinação forte.

Exemplo 5 Ajuste da relação equivalente de ânion/L-lisina pelas condições de fermentação (2) (1) Cultura de semente de Bactéria produtora de L-lisina Um meio contendo 40 g/litro de glicose, 0,6 g/litro (como nitrogênio) de hidrolisado de proteína da soja, 1 g/litro de KH2P04, 5,6 g/litro de NaOH, 1,0 g/litro de sulfato de amônio, 10 mg/litro de FeS04 · 7H20 e 10 mg/litro de MnS04 · 4H20 (pH 6,0) foi introduzido em um tanque de fermentação de vidro pequeno de 1 litro de volume em um volume de 300 ml e esterilizado por aquecimento a 120° C durante 20 minutos. Depois que o tanque de fermentação foi resfriado a 31,5° C, 5 iaços de platina de Escherichia coli W3110(tyrA)/pCABD2 (Publicação de Patente Internacional WO 95/16042) preliminarmente cultivada em uma placa LB durante 24 horas foram inoculadas no meio e cultivados a 37° C e pH 6,7 durante 24 horas com aeração e agitação suficientes. (2) Cultura Principal Um meio contendo 30 g/litro de glicose, 0,4 g/litro (como nitrogênio) de hidrolisado de proteína da soja, 0,5 g/litro de KH2P04, 20 g/litro de sulfato de amônio, 1,0 g/litro de MgS04 · 7H20, 30 mg/litro de FeS04 · 7H20 e 30 mg/litro de MnS04 · 4H20 (pH 5,0) foi introduzido no tanque de fermentação de vidro pequeno de 1 litro de volume em um volume de 300 ml e esterilizado por aquecimento a 120° C durante 20 minutos.

Depois o tanque de fermentação foi resfriado a 31,5° C, 50 ml da cultura de semente acima foi inoculada no meio e a cultura foi realizada a 34° C com aeração de 1/2 wm e agitação suficiente.

Quando a concentração de sacarídeo no caldo de cultura tomou-se 5 g/litro ou menos, uma solução contendo 760 g/litro de glicose foi alimentada pelo método descrito na Publicação da Patente Japonesa Aberta ao Público Ns 5-30985 da mesma maneira como no Exemplo 1.

Especificamente, o pH e a concentração de oxigênio dissolvido foram medidos para detectar a situação de esgotamento da fonte de carbono com base nas mudanças dos valores medidos e o meio foi alimentado de modo a manter a concentração da fonte de carbono no caldo de cultura para ser de 5 g/litro ou menos.

Depois uma quantidade pré determinada do meio de alimentação foi alimentada, a cultura foi terminada quando o sacarídeo no caldo de cultura foi completamente consumido. A cultura foi iniciada no pH 6.7 e o pH foi gradualmente mudado para 8,0. Simultaneamente, a pressão no tanque foi mudada de 0 para 0,1 MPa.

Depois de completar a cultura, a solução de fermentação leve uma relação equivalente de ânion/L-lisina de 0,8574. O caldo de cultura foi centrifugado para precipitar e separar as células e o sobrenadante obtido foi concentrado em um evaporador rotativo (EYELA ROTARY VACUUM EVAPORATOR N-3NW) até que a concentração de matéria sólida tomou-se 55%. Depois, metade do volume da solução concentrada foi secada por pulverização pelo uso de um secador por pulverização (Pulvis GB22, Yamato Scientific). O pó obtido como partículas de semente e a solução concentrada remanescente que não foi usada na secagem no secador por pulverização como uma solução aglutinante foram alimentados a um secador por granulação (SPIR-A-FLOW, Freund) e a secagem por granulação foi realizada para se obter um produto granulado seco.

Os teores de lisina assim como os resultados da medição do teor de umidade em equilíbrio e da avaliação da propriedade de aglutinação dos produtos granulados secos obtidos no Exemplo 5, Exemplos Comparativos 3 e 4 são apresentados nas Tabelas de 10 a 12. O produto granulado seco obtido no Exemplo 5 teve um teor de L-lisina mais alto comparado com o produto do Exemplo Comparativo 4.

Além disso, embora o produto do Exemplo 4 apresentasse propriedade higroscópica levemente mais forte avaliada com base no teor de umidade em equilíbrio, ao contrário apresentou propriedade de aglutinação favorável.

Além disso, embora o produto do Exemplo 5 tivesse um teor de L-lisina mais baixo comparado com o produto do Exemplo Comparativo 3, ele apresentou capacidade de fluxo favorável mesmo sob uma condição de 58% de umidade relativa, ao passo que o produto do Exemplo Comparativo 3 apresentou propriedade de aglutinação forte.

Claims (3)

1. Método para preparar um produto granulado seco contendo L-lisina e tendo a composição seguinte: teor de L-lisina na matéria sólida: 40 a 85% em peso, relação equivalente de ânion/L-lisina: 0,68 a 0,95, em que a relação equivalente de ânion/L-lisina é um valor calculado de acordo com a seguinte equação pelo uso do teor de L-lisina (L-Lys), teor de íon sulfato, teor de íon cloreto, teor de íon amônio, teor de íon sódio, teor de íon potássio, teor de íon magnésio e teor de íon cálcio na matéria sólida do produto granulado seco: relação equivalente de ânion/L-lisina = (2 x [S04 '] + [Cf] - [NH4+] - [Na+] - [K+] - 2 x [Mg2+] - 2 x [Ca2+]) / [L-Lys] onde [ ] significa uma concentração molar teor de umidade: 5% em peso ou menos o método caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de adicionar ácido clorídrico ou ácido sulfúrico a uma solução de matéria prima de L- lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais baixa do que 0,68 para ajustar a relação equivalente de ânion/L-lisina da solução de matéria prima para estar na faixa de 0,68 a 0,95 e obter o produto granulado seco da solução de L-lisina obtida ou um concentrado deste.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a solução de matéria prima de L-lisina é obtida carregando-se uma solução aquosa contendo L-lisina em uma resina de troca catiônica de modo que a L-lisina seja absorvida na resina e eluindo-se a L-lisina absorvida na resina com amônia aquosa, solução aquosa de cloreto de amônio ou ambas destas.

3. Método para preparar um produto granulado seco contendo L-lisina, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de cultivar um microorganismo tendo uma capacidade para produzir L-lisina em um meio líquido sob uma condição aeróbica para produzir e acumular L-lisina no meio e obter o produto granulado seco a partir do meio, em que a cultura é realizada para se obter uma solução de fermentação contendo L-lisina, enquanto o pH do meio é controlado para estar entre 6,5 a 9,0 durante a cultura e para estar entre 7,2 a 9,0 no final da cultura e a pressão em um tanque de fermentação é controlada para ser positiva durante a cultura ou dióxido de carbono ou um gás misto contendo dióxido de carbono são fornecidos no meio de modo que haja um período da cultura onde os íons bicarbonato e/ou carbonato estejam presentes no meio em uma quantidade de 2 g/litro ou mais, se necessário, ácido clorídrico, ácido sulfúrico ou uma solução de L-lisina tendo uma relação equivalente de ânion/L-lisina mais alta do que 0,95 é adicionada à solução de fermentação de modo que a solução de fermentação tenha uma relação equivalente de ânion/L-lisina na faixa de 0,68 a 0,95 e a solução de fermentação é concentrada sob pressão reduzida e o concentrado obtido é granulado e secado para se obter um produto granulado seco contendo L-lisina e tendo a seguinte composição: teor de L-lisina na matéria sólida: 40 a 85% em peso relação equivalente de ânion/L-lisina: 0,68 a 0,95 teor de umidade: 5% em peso ou menos, em que a relação equivalente de ânion/L-lisina é um valor calculado de acordo com a seguinte equação pelo uso do teor de L-lisina (L-Lys), teor de íon sulfato, teor de íon cloreto, teor de íon amônio, teor de íon sódio, teor de íon potássio, teor de íon magnésio e teor de íon cálcio na matéria sólida do produto granulado seco: relação equivalente de ânion/L-lisina = (2 x [SO4 "] + [Cf] - [NH4+] - [Na+] - [K+] - 2 x [Mg2+] - 2 x [Ca2+]) / [L-Lys] onde [ ] significa uma concentração molar.