BR112020026617A2

BR112020026617A2 - Fosfato de cálcio amorfo estabilizado dopado com íons de fluoreto e um processo para a produção do mesmo

Info

Publication number: BR112020026617A2
Application number: BR112020026617-5A
Authority: BR
Inventors: Michele Iafisco; Anna Tampieri
Original assignee: Curasept A.D.S. S.R.L.
Priority date: 2018-06-28
Filing date: 2019-06-27
Publication date: 2021-03-30
Also published as: AR120965A1; MA55429B1; DK3813762T3; HRP20220157T1; EP3813762A1; IL279585B2; CN112384187B; MD3813762T2; PH12020552250A1; EA039099B1; US11377353B2; AU2019295211A1; IL279585B1; NZ772246A; UA127460C2; MA55429A; JP2021529719A; EP3813762B1; IT201800006753A1; RS62957B1

Abstract

fosfato de cálcio amorfo estabilizado dopado com íons de fluoreto e um processo para a produção do mesmo. a invenção refere-se a um processo para a preparação de uma nanopartícula de fosfato de cálcio amorfo revestida de citrato que compreende as seguintes etapas: 1) prover uma primeira solução de um sal de cálcio e um sal de citrato em que a razão molar de íon de citrato para íon de cálcio está na faixa de 1 a 2, desse modo obtendo uma primeira solução clara; 2) prover uma segunda solução de um sal capaz de fornecer ânion de fosfato e um sal de carbonato; 3) misturar juntas a primeira solução clara e a segunda solução em um ph na faixa de 8 a 11; 4) precipitar a nanopartícula; e 5) secar a nanopartícula obtida a partir da etapa 4). preferivelmente e vantajosamente a invenção provê a adição de um composto de fluoreto na etapa 2) para obter uma nanopartícula de fosfato de cálcio revestida de citrato dopado com flúor ou um aglomerado de nanopartículas. a nanopartícula/aglomerado de nanopartículas da invenção tem uma área superficial peculiar e um diâmetro que permite usar o mesmo como um biomaterial para aplicação de odontologia.

Description

“FOSFATO DE CÁLCIO AMORFO ESTABILIZADO DOPADO COM ÍONS DE FLUORETO E UM PROCESSO PARA A PRODUÇÃO DO MESMO” CAMPO DA INVENÇÃO

[001] A presente invenção refere-se a biomateriais a serem usados em medicina, de preferência em odontologia. Especificamente, a invenção refere-se a partículas de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato, de preferência dopado com íons de fluoreto e um processo para a produção do mesmo. A invenção também se refere ao uso da partícula da invenção como um biomaterial em medicina, de preferência em odontologia como biomaterial para remineralização de dente e dessensibilizador de dentina.

TÉCNICA ANTERIOR

[002] Fosfato de cálcio amorfo (ACP) é um das fases mais importantes de fosfato de cálcio (CaP) em ciência de biomineralização bem como no campo de materiais biomédicos. ACP ocorre em muitos sistemas biológicos, especialmente em organismos primitivos, principalmente como reservatório de íons de PO43 e Ca2+. ACP é a primeira fase precipitada a partir de uma solução aquosa supersaturada contendo íons PO43- e Ca2+ devido a sua energia de superfície mais baixa que aquela de hidroxiapatita (HA) e fosfato de octacálcio (OCP). ACP é uma fase mineral com uma ordem de curto alcance, ao invés de ordem cristalina de longo alcance. A unidade estrutural básica de ACP, como proposto por Betts e Posner, é um cluster aproximadamente esférico de íons tendo um diâmetro médio de 9,5 nm consistente com a composição química Cag(P04)6.

[003] É sabido que ACP é um material instável e se transforma em fases de CaP mais termodinamicamente estáveis (isto é, HA e OCP) em solução bem como em estado seco, reagindo com água na atmosfera exacerbando desse modo evidentemente o problema da estabilidade do ACP quando usado como biomaterial final.

[004] ACP é atualmente estudado para fabricar vários biomateriais graças a sua excelente bioatividade, alta adesão de célula, biodegradação moldável e boa osteocondutividade. É usado, por exemplo, na preparação de revestimentos sobre próteses metálicas, cimentos injetáveis self-settings e compósitos híbridos com polímeros. ACP é um material particularmente atraente em odontologia como agentes de remineralização de esmalte devido a sua capacidade de liberar quantidade significativa de íons PO43- e Ca2+, em comparação com outra fase de CaP cristalina. Esses agentes podem ser adicionados a materiais de restauração ou diretamente aplicados na superfície de dente para penetrar nas lesões subsuperficiais de esmalte. ACP foi proposto para ser uma fase de precursor essencial durante a formação de tecido mineralizado. Portanto, o uso de ACP pode fornecer uma estratégia de remineralização biomimétrica por simular os processos de biomineralização que formam nova fase mineral.

[005] A desmineralização de tecidos duros dentais (esmalte e dentina) é o principal responsável por cáries dentais e hipersensibilidade de dentina. É causado por um ambiente de pH baixo que, por sua vez, tem três causas principais: ingestão de bebidas ou alimentos ácidos,

a presença de doença de refluxo gastroesofágico ou a atividade acidogênica de um biofilme oral patogênico. Quando o valor de pH da saliva cai abaixo de 5.5, hidroxiapatita (HA), que é o principal constituinte mineral dos tecidos dentais representando em esmalte e dentina 95% em peso e 75% em peso, respectivamente, começa a se dissolver.

[006] A desmineralização é um processo reversível se o tecido danificado for exposto ao ambiente oral que favorece remineralização. Por exemplo, as cavidades de esmalte causadas por processos de desmineralização são naturalmente remineralizadas pelo crescimento epitaxial de cristais residuais atuando como sítios de nucleação, com a saliva fornecendo um ambiente supersaturado de íons PO43’ e Ca2+ em relação a HA. Entretanto, a remineralização de esmalte por saliva é raramente totalmente obtida, especialmente quando há um desequilíbrio em duração e extensão de fases de desmineralização/remineralização. Para reverter eficientemente desmineralização e reforçar a remineralização, pode ser útil o uso de uma fonte externa fornecendo íons PO43’ e Ca2+ possivelmente nas lesões de cristal e espaços vazios para aumentar a supersaturação de HA e produzir um ganho mineral líquido. Portanto, várias formulações contendo formas diferentes de CaP (isto é, HA, flúor-hidroxiapatita (FHA), fosfato de tetracálcio (TTCP), fosfato de beta-tricálcio (b-TCP), ACP etc.) foram reportadas como agentes de recuperação para desmineralização de esmalte. Entretanto, o principal problema com a aplicação de uma fase de CaP cristalina na cavidade oral para promover remineralização é sua solubilidade ruim, particularmente na presença de íons de fluoreto, de modo que os íons PO43’ e Ca2+ estejam indisponíveis.

[007] Foi recentemente reportado que citrato desempenha um papel dual principal na cristalização de HA: acionar uma via de crescimento através de um precursor amorfo e controlar o tamanho de nanopartículas pelo mecanismo de crescimento de cristal de agregação orientado não clássico. Além disso, fluoreto é o agente profilático mais amplamente empregado para reduzir e evitar desmineralização de esmalte, permanecendo até agora como o agente mais eficaz para prevenção de cárie. Pensa-se que fluoreto funciona por dois mecanismos diferentes: i) substituição dos grupos de hidroxila do novo FIA formado, resultando em fluorapatita [FFIA, Ca5(PO4)3F], que é menos solúvel e desse modo mais resistente a ataque ácido do que FIA; ii) inibição das vias metabólica e fisiológica de microorganismos no biofilme cariogênico que produzem ácidos orgânicos para desmineralizar tecido dental. Um primeiro objetivo da presente invenção é, consequentemente a aplicação de Ca2+, PO43’ e F- nas lesões de esmalte levando a um efeito de remineralização melhorado, e ao mesmo tempo a oclusão dos túbulos de dentinas.

[008] Em WO2016/012452A1 é descrito um processo para obter nanopartículas de fosfato de cálcio amorfo revestidas com citrato dopado com fluoreto, que podem ser aplicadas em medicina e em produtos para odontologia como colutórios, pastas de dente, gomas de mascar como um agente de remineralização de esmalte e dentina.

[009] Especificamente, o processo descrito na presente invenção compreende as seguintes etapas: - a preparação de uma solução de CaCF em uma concentração compreendida entre 0.08 M e 0.12 M e citrato de sódio em uma concentração compreendida entre 0.35 M e

0.50 M; - a preparação de uma segunda solução formada por Na2p1PO4 em uma concentração compreendida entre 0.10 M e 0.15 M com Na2CO3 0.2 M e um composto de fluoreto; - mistura sob agitação das duas soluções preparadas nos estágios anteriores na proporção 1:1 v/v em um pFH compreendido entre 8.3 e 8.7 (ajustado, por exemplo, com FlCl) e em temperatura ambiente por um período de tempo menor que 2 minutos; - três ciclos de sedimentação sucessivos por centrifugação, remoção do sobrenadante e lavagem do precipitado com água ultrapura; e - liofilização do precipitado úmido.

[010] Esse processo permite a obtenção de nanopartículas que resultaram em ter uma resposta biológica em células de osteoblasto, especificamente uma proliferação de células foi observada em concentrações de nanopartículas diferentes, enquanto sendo totalmente biocompatível em contato com a célula osteoblasto.

[011] Mesmo se as nanopartículas de WO2016/012452 resultaram como um biomaterial bom adaptado para remineralização do esmalte, há ainda necessidade de ter biomateriais que sejam eficazes e capazes de atuar como um agente de remineralização em um período breve de tempo.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[012] Os inventores da presente invenção descobriram surpreendentemente um processo para a preparação de uma nanopartícula de fosfato de cálcio amorfo revestida com citrato que compreende as seguintes etapas: 1) prover uma primeira solução de um sal de cálcio e um sal de citrato em que a razão molar de íon de citrato para íon de cálcio está na faixa de 1 a 2, desse modo obtendo uma primeira solução clara; 2) prover uma segunda solução de um sal capaz de fornecer ânion de fosfato e um sal de carbonato; 3) misturar juntas a primeira solução clara e a segunda solução em um pH na faixa de 8 a 11; 4) precipitar a nanopartícula; e 5) secar a nanopartícula obtida a partir da etapa 4).

[013] No processo da invenção a primeira solução é clara antes da etapa de mistura ser realizada. A expressão “primeira solução clara” significa que a primeira solução está substancialmente isenta de qualquer tipo de particulado.

[014] Vantajosamente, a etapa 5) é uma etapa de liofilização.

[015] Em outro aspecto a invenção se refere a uma nanopartícula de fosfato de cálcio amorfo revestida com citrato obtenível pelo processo de acordo com a invenção, em que a etapa de secagem 5) é uma etapa de liofilização, sendo a nanopartícula caracterizada por uma área superficial de 250 m2g-1 a 360 m2g-1 como medido com método de adsorção de gás Brunauer-Emmett-Teller (BET) e tendo uma morfologia de formato redondo com diâmetro na faixa de 30 a 80 nm como medido por imagens de microscopia de elétron de transmissão (TEM).

[016] Em uma primeira modalidade da presente invenção, a área superficial da nanopartícula está na faixa de 250 m2g-1 a 360 m2g-1 - como medido com método de adsorção de gás Brunauer-Emmett-Teller (BET) usando amostras em pó e um Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milão Itália) e a nanopartícula tem preferivelmente uma morfologia no formato redondo com um diâmetro na faixa de 30 a 80 nm. Todos os instrumentos usados para determinar o diâmetro são instrumentos capazes de ter imagens de microscopia de elétron de transmissão (TEM).

[017] Vantajosamente a etapa 5) é uma etapa de secagem por pulverização.

[018] Em outro aspecto a invenção se refere a um aglomerado de nanopartículas de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato obtenível pelo processo de acordo com a invenção, em que a etapa de secagem 5) é uma etapa de secagem por pulverização, sendo o aglomerado de nanopartículas caracterizado por uma área superficial de 3 m2g-1 a 10 m2g-1 como medido com o método de adsorção de gás Brunauer-Emmett-Teller (BET) e tendo um formato esférico com diâmetro na faixa de 2 a 25 µm como medido por microscopia de elétron de varredura (SEM).

[019] Como será evidente também pela parte experimental abaixo quando a etapa 5) consiste em uma etapa de secagem por pulverização, o produto final é um aglomerado de nanopartículas correspondendo a uma micropartícula tendo um diâmetro na faixa de 2 a 25 µm.

[020] Em uma segunda modalidade da presente invenção, a área superficial do aglomerado de 2 1 nanopartículas está compreendida na faixa de 3 m g- a 10 2 1 m g- como medido com o método de adsorção de gás Brunauer-Emmett-Teller (BET) usando amostras em pó e um Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milão Itália) e o aglomerado de nanopartículas tem preferivelmente um formato esférico e um diâmetro na faixa de 2 a 25 µm. Todos os instrumentos usados para determinar o diâmetro são instrumentos para microscopia de elétron de varredura (SEM).

[021] Em um aspecto adicional e preferido da invenção permite obter uma nanopartícula de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato dopado com flúor por fornecer a adição de um composto de fluoreto na segunda solução da etapa 2).

[022] Portanto, em outro aspecto preferido a invenção se refere a uma nanopartícula de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato dopado com flúor obtenível pelo processo de acordo com a invenção e compreendendo a adição de um composto de fluoreto na etapa 2), em que a etapa de secagem 5) é uma etapa de liofilização, sendo a nanopartícula caracterizada por uma área superficial de 50 m2g-1 a 370 m2g-1 como medido com método de absorção de gás Brunauer-Emmett-Teller (BET) e tendo morfologia de formato redondo com diâmetro na faixa de 30 a 80 nm como medido por imagens de microscopia de elétron de transmissão (TEM).

[023] Em uma primeira modalidade da presente invenção, a área superficial de nanopartícula de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato dopado com flúor está na faixa de 250 m2g-1 a 370 m2g-1 como medido pelo método de adsorção de gás Brunauer-Emmett-Teller (BET) usando amostras em pó e um Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milão Itália) e a nanopartícula tem preferivelmente um formato redondo com um diâmetro na faixa de 30 a 80 nm. Todos os instrumentos usados para determinar o diâmetro são instrumentos capazes de ter imagens de microscopia de elétron de transmissão (TEM).

[024] Em outro aspecto preferido a invenção se refere a um aglomerado de nanopartícula de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato dopado com flúor obtenível pelo processo de acordo com a invenção e compreendendo a adição de um composto de fluoreto na etapa 2), em que a etapa de secagem 5) é uma etapa de secagem por pulverização, sendo o aglomerado de nanopartícula caracterizado por uma área superficial de 3 m2g-1 a 10 m2g- 1 como medido por método de adsorção de gás Brunauer- Emmett-Teller (BET) e tendo um diâmetro na faixa de 2 a 25 µm como medido por microscopia de elétron de varredura (SEM).

[025] A área superficial é medida com método de adsorção de gás Brunauer-Emmett-Teller (BET) usando amostras em pó e um Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milão Itália).

[026] Em um aspecto adicional a invenção se refere ao uso da nanopartícula ou o aglomerado de nanopartícula da invenção como um biomaterial no tratamento da cavidade oral, em geral em odontologia. De preferência, o biomaterial é usado como um agente de remineralização, de preferência para a remineralização de tecidos duros dentais, ou como dessensibilizador de dentina, onde nesse caso mencionado por último sua ação é preferivelmente para encher e fechar os túbulos de dentinas.

[027] Especificamente, o biomaterial é um agente de remineralização, de preferência no caso de abfração, erosão, cavidade, abrasão, ponto branco e hipomineralização.

[028] Em um aspecto ainda adicional a invenção se refere ao uso de uma partícula da invenção como um biomaterial em aplicações ortopédicas.

[029] De modo surpreendente, a nanopartícula estabilizada por citrato e a nanopartícula estabilizada por citrato dopado com flúor da invenção têm uma área superficial elevada que resultou como sendo capaz de aplicar íons Ca2+ e Fl- em um modo muito rápido, certamente mais rápido que as nanopartículas do estado da técnica como aquelas descritas em WO2016/012452.

[030] Sem ser limitado por qualquer teoria específica e como será mais explicado na parte experimental, os inventores deem que a propriedade surpreendente de aplicar em modo muito rápido os íons Ca2+ e Fl- é devido ao processo, isto é, a razão molar de íon de citrato para íon de cálcio na faixa de 1 a 2.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[031] A figura 1A mostra micrografia TEM de ACP4 preparado no exemplo 1; (inserção: padrão SAED correspondente)

[032] A figura 1B mostra padrões XRD de ACP4 preparado no exemplo 1;

[033] A figura 1C mostra espectros FT-IR de

ACP4 preparado no exemplo 1;

[034] A figura 2A mostra micrografia TEM de F-ACP4 preparado no exemplo 1; (inserção: padrão SAED correspondente)

[035] A figura 2B mostra padrão XRD de F- ACP4 preparado no exemplo 1;

[036] A figura 2C mostra espectros FT-IR de F-ACP4 preparado no exemplo 1;

[037] A figura 3A mostra micrografia TEM de ACP1, preparado no exemplo 2; (inserção: padrão SAED correspondente)

[038] a figura 3B mostra padrões XRD de ACP2, ACP1, F- ACP1, F- ACP2 preparado no exemplo 2;

[039] A figura 3C mostra espectros FT-IR de ACP2, ACP1, F- ACP1, F- ACP2 preparados no exemplo 2;

[040] A figura 4A reporta liberação de Ca2+ cumulativa a partir de amostras ACP preparadas no exemplo 1 e exemplo 2; os dados são expressos como média ± desvio padrão (n = 5);

[041] A figura 4B reporta liberação de Ca2+ cumulativa a partir de amostras F-ACP preparadas no exemplo 1 e exemplo 2; os dados são expressos como média ± desvio padrão (n = 5);

[042] A figura 4C reporta F- cumulativo das amostras F-ACP preparadas no exemplo 1 e exemplo 2; os dados são expressos como média ± desvio padrão (n = 5);

[043] A figura 5 mostra padrão XRD de F- ACP1 seco por pulverização do exemplo 8;

[044] A figura 6 mostra micrografias SEM em ampliação diferente de F- ACP1 seco por pulverização do exemplo 8;

[045] A figura 7 mostra padrões XRP de ACP2, ACP1, F- ACP2, F- ACP1 preparados no Exemplo 2, um ano após síntese, armazenado em temperatura ambiente do exemplo 9; a figura 8 mostra padrões XRD de SrF- ACP2, MgF- ACP2, SrMgF- ACP2, SrF- ACP1, MgF- ACP1, SrMgF- ACP1 preparados no exemplo 2bis;

[046] A figura 9 mostra espectros FT-IR de SrF- ACP2, MgF- ACP2, SrMgF- ACP2, SrF- ACP1, MgF- ACP1, SrMgF- ACP1 preparado no exemplo 2bis;

[047] A figura 10A reporta liberação de Ca2+ cumulativa a partir de amostras SrF- ACP2, MgF- ACP2, SrMgF- ACP2, SrF- ACP1, MgF- ACP1, SrMgF- ACP1 preparadas no exemplo 2bis; os dados são expressos como média ± desvio padrão (n = 5); e

[048] A figura 10B reporta liberação F- cumulativa a partir das amostras SrF- ACP2, MgF- ACP2, SrMgF- ACP2, SrF- ACP1, MgF- ACP1, SrMgF- ACP1 preparadas no exemplo 2bis; os dados são expressos como média ± desvio padrão (n = 5).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[049] Portanto, a invenção refere-se a um processo para a preparação de uma nanopartícula de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato, que compreende as seguintes etapas: 1) prover uma primeira solução de um sal de cálcio e um sal de citrato em que a razão molar de íon de citrato para íon de cálcio está na faixa de 1 a 2, desse modo obtendo uma primeira solução clara; 2) prover uma segunda solução de um sal capaz de fornecer ânion de fosfato e um sal de carbonato; 3) misturar juntas a primeira solução clara e a segunda solução em um pH na faixa de 8 a 11; 4) precipitar a nanopartícula; e 5) secar a nanopartícula obtida a partir da etapa 4).

[050] A etapa 10 do processo consiste em prover uma primeira solução de um sal de cálcio e de um sal de citrato, em que a razão molar de íon de citrato para íon de cálcio está na faixa de 1 a 2. A primeira solução assim obtida é clara.

[051] O sal de cálcio é preferivelmente feito de um ânion selecionado do grupo que consiste em cloreto, nitrato, hidróxido, acetato, oxalato, lactato, mais preferivelmente o ânion é cloreto.

[052] O sal de citrato é feito de preferência de um cátion selecionado do grupo que consiste em sódio e potássio, mais preferivelmente o cátion é sódio.

[053] Mais preferivelmente, a razão molar de íon de citrato para íon de cálcio é aproximadamente 1.

[054] Ainda mais preferivelmente, a razão molar de íon de citrato para íon de cálcio é aproximadamente 2. Em uma modalidade preferida, a primeira solução da etapa 1) do processo de acordo com a invenção compreende pelo menos um sal adicional selecionado do grupo de: sal de estrôncio e sal de magnésio.

[055] O sal de estrôncio é feito de preferência de um ânion selecionado do grupo que consiste em cloreto, nitrato, hidróxido, acetato, oxalato, lactato, mais preferivelmente o ânion é cloreto.

[056] O sal de magnésio é feito de preferência de um ânion selecionado do grupo que consiste em cloreto, nitrato, hidróxido, acetato, oxalato, lactato, mais preferivelmente o ânion é cloreto.

[057] A etapa 2) consiste em prover uma segunda solução de um sal capaz de fornecer ânion de fosfato e um sal de carbonato.

[058] De preferência, a razão entre o ânion de carbonato e fosfato está na faixa de 1 a 1.66.

[059] De preferência, o sal capaz de fornecer ânion de fosfato é um sal de fosfato, fosfato de hidrogênio ou fosfato de hidrogênio. O sal capaz de fornecer ânion de fosfato é preferivelmente feito de um cátion selecionado do grupo que consiste em sódio, potássio e amônio, mais preferivelmente o cátion é sódio.

[060] A etapa 3) consiste em misturar juntas a primeira e a segunda solução em um pH na faixa de 8 a 11, de preferência 8.5 - 10.7.

[061] Em um aspecto vantajoso a razão da primeira e da segunda solução está na faixa 1 : 1 a 1:1.5.

[062] De acordo com a invenção a etapa de mistura 3) é realizada após a primeira solução estar clara. De preferência, a segunda solução é adicionada à primeira solução clara para a etapa de mistura.

[063] A etapa 4) consiste em precipitar a nanopartícula.

[064] A etapa de precipitação pode ser vantajosamente realizada por prover ciclos de sedimentação por centrifugação, após o que a remoção de sobrenadante pode ser realizada de acordo com métodos bem conhecidos. Assim que o precipitado é coletado, pode ser lavado com água preferivelmente ultrapura. O precipitado úmido é então seco de acordo com métodos de secagem conhecidos na técnica.

[065] A etapa 5) consiste em uma etapa de secagem da nanopartícula precipitada da invenção.

[066] A etapa de secagem pode ser realizada com qualquer meio adequado conhecido na técnica. De preferência, a etapa de secagem pode ser selecionada entre liofilização, secagem por pulverização e secagem em forno ventilado. Esse último é preferivelmente realizado após lavagem com etanol e a uma temperatura de aproximadamente 40ºC.

[067] Em um aspecto preferido a etapa de secagem 5) é uma etapa de liofilização.

[068] Em outro aspecto a invenção se refere a uma nanopartícula de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato obtenível pelo processo de acordo com a invenção, em que a etapa de secagem 5) é uma etapa de liofilização, sendo a nanopartícula caracterizada por uma área superficial de 50 m2g-1 a 360 m2g_1, de preferência de 270 m2g-1 a 360 m2g-1, como medido com método de adsorção de gás Brunauer-Emmett-Teller (BET) e tendo uma morfologia no formato redondo com um diâmetro na faixa de 30 a 80 nm como medido por imagens de microscopia de elétron de transmissão (TEM).

[069] Em uma primeira modalidade da presente invenção, a área superficial da nanopartícula está compreendida na faixa de 250 m2g-1 a 360 m2g-1, de preferência de 270 m2g-1 a 360 m2g-1, como medido com método de adsorção de gás Brunauer-Emmett-Teller (BET) usando amostras em pó e um Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milan Itália) e a nanopartícula tem preferivelmente um formato esférico com um diâmetro na faixa de 30 a 80 nm. Todos os instrumentos usados para determinar o diâmetro são instrumentos capazes de ter imagens de microscopia de elétron de transmissão (TEM).

[070] Em um aspecto vantajoso adicional a etapa de secagem 5) é uma etapa de secagem por pulverização.

[071] Em outro aspecto a invenção se refere a um aglomerado de nanopartícula de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato obtenível pelo processo de acordo com a invenção, em que a etapa de secagem 5) é uma etapa de secagem por pulverização, sendo o aglomerado de nanopartícula caracterizado por uma área superficial a partir de 3 m2g-1 a 10 m2g-1 como medido com o método de adsorção de gás Brunauer-Emmett-Teller (BET) e tendo uma morfologia no formato redondo com um diâmetro na faixa de 2 a 25 µm como medido por microscopia de elétron de varredura (SEM).

[072] Em uma primeira modalidade da presente invenção, a área superficial do aglomerado de nanopartícula está compreendida na faixa de 3 m2g-1 a 10 m2g-1 como medido com o método de adsorção de gás Brunauer-Emmett- Teller (BET) usando amostras em pó e um Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milão Itália) e o aglomerado de nanopartículas tem de preferência um formato esférico e um diâmetro na faixa de 2 a 25 µm. Todos os instrumentos usados para determinar o diâmetro são instrumentos para microscopia de elétron de varredura (SEM).

[073] Em um aspecto adicional e preferido da invenção permite obter uma nanopartícula de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato dopado com flúor por fornecer a adição de um composto de fluoreto na segunda solução da etapa 2).

[074] De preferência, o composto de fluoreto é um fluoreto de um cátion selecionado do grupo que consiste em sódio e potássio.

[075] Portanto, em outro aspecto preferido a invenção se refere a uma nanopartícula de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato dopado com flúor obtenível pelo processo de acordo com a invenção e compreendendo a adição de um composto de fluoreto na etapa 2), em que a etapa de secagem 5) é uma etapa de liofilização, sendo a nanopartícula caracterizada por uma área superficial de 250 m2g-1 a 370 m2g-1, de preferência de 270 m2g-1 a 370 m2g-1, como medido com o método de adsorção de gás Brunauer- Emmett-Teller (BET) e tendo um formato redondo com um diâmetro na faixa de 30 a 80 nm como medido por imagens de microscopia de elétron de transmissão (TEM).

[076] Em uma primeira modalidade da presente invenção, a área superficial de nanopartícula de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato dopado com flúor está compreendida na faixa de 250 m2g-1 a 370 m2g-1, de preferência de 270 m2g-1 a 370 m2g-1, como medido com método de adsorção de gás Brunauer- Emmett-Teller (BET) usando amostras em pó e um Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milão Itália) e a nanopartícula tem de preferência um formato esférico com um diâmetro na faixa de 30 a 80 nm. Todos os instrumentos usados para determinar o diâmetro são instrumentos capazes de ter imagens de microscopia de elétron de transmissão (TEM).

[077] Em outro aspecto preferido a invenção se refere a um aglomerado de nanopartículas de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato dopado com flúor obtenível pelo processo de acordo com a invenção e compreendendo o acréscimo de um composto de fluoreto na etapa 2), em que a etapa de secagem 5) é uma etapa de spray-secagem, sendo o aglomerado de nanopartículas caracterizado por uma área superficial de 3 m2g-1 a 10 m2g- 1 como medido com método de adsorção de gás Brunauer- Emmett-Teller (BET) e tendo um formato redondo com um diâmetro na faixa de 2 a 25 µm como medido por microscopia de elétron de varredura (SEM).

[078] A área superficial é medida com método de adsorção de gás Brunauer-Emmett-Teller (BET) usando amostras em pó e um Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milão Itália).

[079] Em um aspecto adicional a invenção se refere ao uso de uma partícula da invenção como um biomaterial para uso em aplicações de odontologia. Preferivelmente, o biomaterial é usado para a remineralização dos tecidos duros dentais ou como dessensibilizador de dentina, onde nesse caso mencionado por último sua ação é preferivelmente preencher e fechar os túbulos de dentinas.

[080] Em um aspecto ainda adicional a invenção se refere ao uso de uma partícula da invenção como um biomaterial em aplicações ortopédicas.

PARTE EXPERIMENTAL Materiais

[081] Diidrato de cloreto de cálcio (CaCl2- 2H20, >99,0% puro), diidrato tribásico de citrato sódico (Na3(C6H507)-2H20, >99,0% puro (a seguir denominado Na3(Cit)), diidrato dibásico de fosfato de sódio (Na2HP04- 2H20, >99,0% puro), hexaidrato de cloreto de estrôncio (SrCI2-6H20, >99,0% puro), hexaidrato de cloreto de magnésio (MgCI2-6H20, >99,0% puro), monoidrato de carbonato de sódio (Na2C03-2H20, >99,0% puro), fluoreto de sódio (NaF, >99,0% puro), cloreto de potássio (KCI >99,5% puro), tiocianato de potássio (KSCN >98,0% puro), monobásico de carbonato de sódio (NaHC03, >99,7% puro) e ácido láctico (C3H6O3 >90,0% puro) foram adquiridos da Sigma Aldrich (St. Louis, MO, EUA). Todas as soluções foram preparadas com água ultrapura (0.22 pS, 25 °C, MilliQ©, Millipore). Instrumentos e métodos de avaliação

[082] Padrões de difração de raios-X (XRD) das amostras reportadas na Tabela 1 foram registrados em um difratômetro D8 Advance (Bruker, Karlsruhe, Alemanha) equipado com um detector sensível à posição Lynx-eye usando radiação Cu Ka (l = 1.54178 A) gerada a 40 kV e 40 mA. Espectros foram registrados na faixa 20 de 10 a 60º com um tamanho de etapa (20) de 0.021 e um tempo de contagem de 0,5 s.

[083] Análises de espectroscopia infravermelha de transformada Fourier (FT-IR) foram realizadas em um espectrômetro Nicolet 5700 (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, EUA) com uma resolução de 2 cm-1 por acúmulo de 64 varreduras cobrindo a faixa de 4000 a 4000 cm-1, usando o método de pellet KBr.

[084] A avaliação de microscopia de elétron de transmissão (TEM) e difração de elétron de área selecionada (SAED) foi realizada com microscópio Tecnal F20 (Fei Corp., Hillsboro, OR, EUA) operando a 120 kV. As amostras de pó foram dispersas por meio ultrassônico em água ultrapura e então algumas gotículas da pasta foram depositadas em grades de TEM de cobre de malha 200 cobertas com filmes de carbono amorfo e incubadas por vários minutos.

[085] Quantificação de Ca e P, Mg e Sr foi realizada por espectrômetro de emissão atômica de plasma acoplado de modo indutivo (ICP-0RD) (Agilent Technologies 5100 ICP-OES, Santa Clara, CA, EUA) enquanto F foi quantificado com um eletrodo de íon de fluoreto (Intellical™ ISEF121 , Flach Lange, Loveland, CO, EUA). As amostras foram preparadas dissolvendo uma alíquota de pó em uma solução de HNO3 a 1% em peso.

[086] As análises de termogravimetria (TGA) foram realizadas usando um aparelho STA 449 Jupiter (Netzsch GmbH, Selb, Alemanha). Cerca de 10 mg de amostra foram pesados em um cadinho de platina e aquecidos da temperatura ambiente até 1200ºC sob fluxo de ar com uma taxa de aquecimento de 10ºC/min.

[087] O método de adsorção de gás Brunauer- Emmett-Teller (BET) foi empregado para medir a área de superfície específica (SSA) de amostras em pó usando um Sorpty 1750 (Carlo Erba, Milão Itália).

[088] A avaliação de microscopia de elétron de varredura (SEM) foi realizada empregando um Sigma NTS

Gmbh (Carl Zeiss, Oberkochen, Alemanha). As amostras de pó foram montadas em pontas de alumínio usando fita de carbono, e antes as análises revestidas por sublimação catódica com ouro em um Sputter Coater E5100 (Polaron Equipment, Watford, Hertfordshire, UK) sob argônio a 10-3 mbar durante 4 minutos com uma corrente de sublimação catódica de 30 mA. Exemplo 1 Preparação da nanopartícula do estado da técnica WO2016/016012452

[089] ACP de pó seco (fosfato de cálcio amorfo) foi sintetizado por misturar duas soluções (1 :1 v/v, 200 ml total) em temperatura ambiente de (i) 100 mM CaCH + 400 mM Na3(Cit) e (ii) 120 mM Na2HP04 + 200 mM Na2CC>3. O pH foi ajustado em 8.5 com solução de HCl. Quando a mistura se tornou leitosa, as partículas foram lavadas três vezes com água ultrapura por centrifugação a 5000 rpm durante 15 min. Termostato a 4ºC e a seguir liofilizada durante a noite a -50ºC sob vácuo de 3 mbar.

[090] Amostras de F-ACP foram preparadas similarmente a ACP enquanto 50 mM de NaF2 foram adicionados à solução (ii). Exemplo 2 Preparação da nanopartícula da invenção

[091] Seguindo o mesmo preparado do exemplo 1, as amostras de ACP e F-ACP (dopadas usando 50 mM NaF2) foram também preparadas diminuindo a razão de Cit/Ca molar inicial para 2 e 1 (a seguir codificado como ACP2, F- ACP2 e ACP1, F-ACPI, respectivamente).

Exemplo 2bis Preparação da nanopartícula da invenção com Mg e Sr

[092] Seguindo o preparado do exemplo 2, amostras de SrF-ACP, MgF-ACP e SrMgF-ACP foram também preparadas similarmente a F-ACP enquanto 5 mM SrCl2 ou 40 mM MgCl2 ou ambos foram adicionados à solução (i). A razão de Cit/Ca molar inicial de 2 e 1 (a seguir codificada como SrF- ACP2, MgF- ACP2, SrMgF- ACP2 e SrF- ACP1, MgF- ACP1, SrMgF- ACP1, respectivamente) foi usada.

[093] Os códigos das amostras e concentração dos reagentes químicos usados para o preparado do exemplo 1 e exemplo 2 são reportados na Tabela 1 que se segue.

[094] As amostras do estado da técnica têm uma razão molar entre citrato e cálcio de 4, enquanto as amostras da presente invenção foram preparadas com uma razão molar na faixa de 1 a 2. Exemplo 3: Avaliação das características físicas e das composições das partículas de ACP4 preparadas no exemplo 1

[095] O pó seco ACP4 preparado no exemplo 1 foi avaliado em relação a propriedades físicas com os instrumentos acima reportados.

[096] Na figura 1 A micrografia TEM de ACP4 é reportada, revelando nanopartículas de formato redondo ao invés de facetado e de formato angular típico de CaP cristalino, com tamanhos variando entre 20 e 50 nm. O padrão SAED coletado para tais nanopartículas (inserção direita de topo na figura 1A) demonstra sua natureza amorfa devido à presença de abas difusas ao invés de pontos.

[097] O padrão XRD de ACP4 (figura 1B) revela uma faixa larga em aproximadamente 30º (2Q) típica de uma fase sem uma regularidade periódica de longo alcance confirmando a estrutura não cristalina de ACP4 e excluindo a presença de FIA e outras fases cristalinas de CAP. Espectro FT-IR (figura 1C) exibe faixas não resolvidas, largas características de CaP tendo estrutura amorfa. Em particular, as faixas de adsorção em aproximadamente 560 e 1050 cm-1 foram associadas aos modos de flexão e estiramento de grupos de fosfato, respectivamente; aqueles em aproximadamente 870 cm-1 e na faixa de 1400-1500 cm-1 foram atribuídos aos íons de carbonato, enquanto a faixa em aproximadamente 1605 cm-1 foi atribuída à água adsorvida bem como o estiramento de COO- de citrato. Portanto, as figuras 1A, 1B, 1C confirmaram o formato esférico de nanopartículas feitas de fosfato de cálcio amorfo. Exemplo 4: Avaliação das características físicas e das composições das partículas de F-ACP preparadas no exemplo 1

[098] Com referência ao exemplo 1, em uma primeira etapa a concentração dos reagentes bem como a razão Cit/Ca foram mantidas constantes em relação ao protocolo usado para a preparação de ACP4, enquanto NaF foi adicionado para dopar ACP4 (a seguir chamado F-ACP4)).

[099] Imagem TEM de F-ACP4 (figura 2A) exibe partículas de formato redondo tendo tamanho e morfologia similares àquela de ACP4. O padrão SAED coletado para tais nanopartículas (inserção direita de topo na figura 2A) demonstra sua natureza amorfa devido à presença de abas difusas ao invés de pontos. Padrões XRD de F-ACP4 (figura 2B) mostram o mesmo pico de difração largo em aproximadamente 30º (2Q) daquele registrado para ACP4 indicando que a presença de íons F- não causou a precipitação de sal de fluoreto ou outras fases CaP cristalinas. Espectros FT-IR de F-ACP4 também exibem faixas não resolvidas largas similares àquelas reportadas no espectro FT-IR de ACP4 (figura 2C). Exemplo 5: Avaliação das características físicas e das composições das partículas de ACP e F-ACP preparadas no exemplo 2

[0100] Como reportado acima, duas amostras de ACP foram preparadas mudando a razão Cit/Ca nominal dos reagentes de acordo com a invenção que foi ajustada em 4 de acordo com o estado da técnica, para 2 ou 1 (a seguir chamado ACP2 e ACP1, respectivamente) de acordo com a invenção a fim de avaliar o efeito da razão molar Cit/Ca sobre as características químico-físicas desses materiais amorfos. Além disso, a mesma quantidade de NaF usada para a síntese de F-ACP4 foi empregada para dopar ACP2 e ACP1, e essas amostras foram chamadas F- ACP2 e F- ACP1, respectivamente.

[0101] Imagens TEM de ACP2 (não mostradas) e ACP1 (figura 3A) exigem partículas de formato redondo tendo tamanho e formato comparáveis com ACP4. O padrão SAED coletado para ACP1 (inserção direita de topo na figura 3A) demonstra sua natureza amorfa devido à presença de abas difusas ao invés de pontos. Também nesse caso a adição de F- não induziu alterações no tamanho e morfologia em comparação com as réplicas não dopadas. Os padrões XRD de ACP2, ACP1, F- ACP2 e F- ACP1 (Fig. 3B) mostraram a mesma faixa de difração larga característica de uma fase amorfa pura. Espectros FT-IR de ACP2, ACP1, F- ACP2 e F- ACP1 (Fig. 3C) também exibiram faixas não resolvidas largas similares àquelas reportadas nos outros espectros FT-IR.

[0102] As partículas de ACP ou F-ACP de acordo com a invenção eram de formato redondo e tinham dimensões similares àquelas do estado da técnica. Exemplo 5 bis

[0103] Os padrões XRD de SrF- ACP2, MgF- ACP2, SrMgF- ACP2, SrF- ACP1, MgF- ACP1, SrMgF- ACP1 (Fig. 8) mostraram a mesma faixa de difração larga característica de uma fase amorfa pura. Espectros FT-IR de SrF- ACP2, MgF-

ACP2, SrMgF- ACP2, SrF- ACP1, MgF- ACP1, SrMgF- ACP1 (Fig. 9) também exibiram faixas não resolvidas largas similares àquelas reportadas nos outros espectros FT-IR. Exemplo 6: Composição química de amostras preparadas no Exemplo 1 e Exemplo 2 e Exemplo 2bis

[0104] A composição química das amostras preparadas no exemplo 2 são resumidas na tabela 2.

[0105] O SSABET foi determinado também para a amostra do estado da técnica como preparado no exemplo 1.

[0106] Os seguintes valores foram obtidos: ACP4 200±20 m2g-1 F-ACP4 213±21 m2g-1

[0107] O valor de SSABET resultou como uma característica diferenciando o ACP e F-ACP obtido com o processo do estado da técnica e o processo da invenção.

[0108] A curva TGA das amostras de acordo com a invenção exibe principalmente quatro perdas de peso, que podem ser atribuídas à água adsorvida (da temperatura ambiente até 150ºC), água estrutural (de 150 a 350ºC), citrato (de 350 a 700ºC) e carbonato (de 700 a 1000ºC). De acordo com essas perdas os teores de citrato e carbonato foram estimados e reportados na Tabela 2.

[0109] A razão de cálcio/fosfato de ACP2 foi similar a ACP1 enquanto F- ACP2 e F- ACP1 mostram teores mais altos de cálcio e razões mais altas de Ca/P do que suas réplicas não dopadas. A razão de cálcio/fosfato de F- ACP2 foi similar a F- ACP1.

[0110] A razão de cálcio+estrôncio+magnésio/fosfato de SrF- ACP , MgF- ACP2, 2 SrMgF- ACP2, SrF- ACP1, MgF- ACP1, SrMgF- ACP1 foi similar ao valor calculado para as amostras F- ACP2 e F- ACP1. O teor de citrato e carbonato não mudou entre as amostras dopadas com Sr e Mg e foi similar ao valor calculado para as amostras F- ACP2 e F- ACP1. De modo interessante, foi descoberto que quando Mg, individualmente ou em combinação com Sr, é incluído na preparação, a quantidade de fluoreto aumentou.

[0111] Sem ser limitado por qualquer teoria os inventores consideram que as áreas superficiais mais altas foram devido ao processo da invenção que provê a razão molar de íon de citrato para íon de cálcio na faixa de 1 a 2.

[0112] Os dados acima demonstram que as partículas revestidas com citrato e partículas revestidas com citrato dopado com flúor obtidas pelo processo da invenção são diferentes e então novas em relação às partículas revestidas de citrato dopado com flúor de WO2016/012452. Exemplo 7: Liberação de íon em saliva artificial de amostras preparadas no Exemplo 1 e Exemplo 2

[0113] A aplicação de ACP em produtos de tratamento dental se baseia no princípio de liberação de íons de fosfato e cálcio a fim de gerar uma supersaturação local para desencadear a remineralização de esmalte. Portanto, esse efeito foi testado in vitro. A liberação de íons in vitro em saliva artificial ácida (uma solução que simula a saliva humana após comer, sem seus componentes macromoleculares) foi testada.

[0114] 200 mg de pós ACP ou F-ACP preparados nos exemplos 1 e 2 foram dispersos em 10 mL de saliva artificial preparada como solução TaniZucchi modificada contendo KCI 20 mM, KSCN 5.3 mM, Na2HP04 1.4 mM, NaHC03 15 mM, e ácido lático 10 mM. A suspensão foi mantida a 37ºC sob agitação. Em tempos programados, 8 ml do sobrenadante

(que foi bem separado da fase sólida por centrifugação a 5000 rpm por 15 min.) foram removidos para quantificação de Ca2+ e F- por ICP-OES e eletrodo de íon de fluoreto, respectivamente. Após isso, as amostras foram enxaguadas com 8 ml de saliva artificial fresca e a suspensão foi mantida a 37ºC sob agitação e tratadas como anteriormente descrito no próximo ponto de tempo.

[0115] Todas as amostras dos exemplos 1 e 2 mostram uma liberação controlada de íons Ca2+ e F- nas duas primeiras horas (figura 4). As amostras com uma razão Cit/Ca de acordo com a invenção mostraram taxas de liberação de íon surpreendentemente mais altas, desse modo se revelando como um produto aperfeiçoado e vantajoso com relação ao estado da técnica.

[0116] Sem ser limitado por qualquer teoria os inventores consideram que esse efeito surpreendente foi provavelmente devido às características peculiares das partículas da invenção que tinham áreas superficiais mais altas, devido à razão molar específica usada no processo para produzir as nanopartículas. Exemplo 7bis

[0117] A liberação de íon in vitro em saliva artificial ácida de SrF- ACP2, MgF- ACP2, SrMgF- ACP2, SrF- ACP1, MgF- ACP1, SrMgF- ACP1 preparada de acordo com o exemplo 2bis foi testada nas mesmas condições do exemplo 7.

[0118] Todas as amostras do exemplo 2bis, similares àquelas dos exemplos 1 e 2, mostram uma liberação controlada de íons Ca2+ e F- nas duas primeiras horas (figuras 10A e 10B). As amostras do exemplo 2bis de acordo com a invenção mostraram taxas de liberação de íon comparáveis com as amostras do exemplo 2, desse modo se revelando como um produto aperfeiçoado e vantajoso com relação ao estado da técnica. Exemplo 8: Preparação da nanopartícula da invenção aglomerada em micropartículas (aglomerado de nanopartículas da invenção)

[0119] Para avaliar a exequibilidade de secar as amostras do exemplo 2 por um secador de pulverização sem afetar sua característica amorfa, ACP2, ACP1, F- ACP2 e F- ACP1 após lavagens e como obtido no Exemplo 2 foram suspensos novamente em água a 3,5% peso/v e secos por secagem por pulverização (Mini Spray Dryer B-290, BCichi Labortechnik AG, Suíça) sob as seguintes condições: diâmetro de bocal: 0,7 mm, taxa de alimentação 3 ml/min, taxa de fluxo de argônio 450 I lr1, temperatura de entrada 120 °C e taxa de aspirador 70%. O padrão XRD do pó F- ACP1 seco por pulverização (figura 5) mostrou somente uma faixa larga em aproximadamente 30º (2Q), corroborando o fato de que a fase amorfa é preservada. Micrografias SEM do pó F- ACP1 seco por pulverização (figura 6) revelaram que a amostra consiste em partículas esféricas de cerca de 2-25 µm de diâmetro que, por sua vez, são compostas das nanopartículas aglomeradas independentemente da razão de Cit/Ca e presença de fluoreto. O valor de SSABET do pó seco estava compreendido na faixa de 3-10 m2 g-1 independentemente da razão de Cit/Ca e presença de fluoreto. Exemplo 9: Estabilidade de pó seco de amostras preparadas no Exemplo 2

[0120] ACP é instável em relação a polimorfos cristalinos de CaP, de modo que converte na fase cristalina mesmo em estado seco reagindo com água atmosférica.

Portanto, seu uso e manipulação é difícil a menos que um material estável seja desenvolvido.

A estabilidade de pós ACP2, ACP1, F- ACP2 e F-ACP1 armazenados em temperatura ambiente foi avaliada analisando sua estrutura por coletar XRD até um ano (figura 7). De modo interessante, o padrão XRD permaneceu inalterado, estabelecendo que a natureza amorfa de todas as amostras é preservada durante esse período de tempo.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Processo para a preparação de um nanopartícula de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato que compreende as seguintes etapas: 1) prover uma primeira solução de um sal de cálcio e um sal de citrato em que a razão molar de íon de citrato para íon de cálcio está na faixa de 1 a 2, desse modo obtendo uma primeira solução clara; 2) prover uma segunda solução de um sal capaz de fornecer ânion de fosfato e um sal de carbonato; 3) misturar juntas a primeira solução clara e a segunda solução em um pH na faixa de 8 a 11; 4) precipitar a nanopartícula; e 5) secar a nanopartícula obtida a partir da etapa 4).

2. Processo, de acordo com a reivindicação 1, em que o sal de cálcio é feito de um ânion selecionado do grupo que consiste em cloreto, nitrato, hidróxido, acetato, oxalato, lactato, de preferência o ânion é cloreto.

3. Processo, de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação 2, em que o sal de citrato é feito de um cátion selecionado do grupo que consiste em sódio e potássio, de preferência o cátion é sódio.

4. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-3, em que a razão molar de íon de citrato para íon de cálcio é aproximadamente 2.

5. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-4, em que a primeira solução da etapa 1) compreende pelo menos um sal adicional selecionado do grupo de: sal de estrôncio, e sal de magnésio.

6. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-5, em que o sal capaz de fornecer ânion de fosfato é um sal de fosfato, fosfato de hidrogênio ou fosfato de hidrogênio, de preferência feito de um cátion selecionado do grupo que consiste em sódio, potássio e amônio.

7. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-6, em que o pH da etapa 3) está compreendido na faixa de 8.5 - 10.7.

8. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-7, em que na etapa de mistura 3) a segunda solução é adicionada à primeira solução clara.

9. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-8, em que na etapa 4) a Precipitação é realizada por prover ciclos de sedimentação por remoção de centrifugação de sobrenadante, coleta e lavagem do precipitado.

10. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-9, em que a etapa de secagem 5) é selecionada entre liofilização, secagem por pulverização e secagem em forno ventilado.

11. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-10, em que na etapa 1) um composto de fluoreto é adicionado.

12. Processo, de acordo com a reivindicação 11, em que o composto de fluoreto é um fluoreto de um cátion selecionado do grupo que consiste em sódio e potássio.

13. Nanopartícula de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato obtenível pelo processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-10, em que a etapa de secagem 5) é uma etapa de liofilização, sendo a nanopartícula caracterizada por uma área superficial de 250 m2g-1 a 360 m2g-1 como medido com método de adsorção de gás Brunauer-Emmett-Teller (BET) e tendo uma morfologia de formato redondo com um diâmetro na faixa de 30 a 80 nm como medido por imagens de microscopia de elétron de transmissão (TEM).

14. Aglomerado de nanopartícula de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato obtenível pelo processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-10, em que a etapa de secagem 5) é uma etapa de secagem por pulverização, sendo o aglomerado de nanopartícula caracterizado por uma área superficial de 2 m2g-1 a 10 m2g-1 como medido com método de adsorção de gás Brunauer-Emmett- Teller (BET) e tendo uma morfologia de formato redondo com um diâmetro na faixa de 2 a 25 µm como medido por microscopia de elétron de varredura (SEM).

15. Nanopartícula de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato dopado com flúor obtenível pelo processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1- 12, em que a etapa de secagem 5) é uma etapa de liofilização, sendo a nanopartícula caracterizada por uma área superficial de 250 m2g-1 a 370 m2g-1 como medido com método de adsorção de gás Brunauer-Emmett-Teller (BET) e tendo uma morfologia de formato redondo com um diâmetro na faixa de 30 a 80 nm como medido por imagens de microscopia de elétron de transmissão (TEM).

16. Aglomerado de nanopartículas de fosfato de cálcio amorfo revestido com citrato dopado com flúor obtenível pelo processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-12, em que a etapa de secagem 5) é uma etapa de secagem por pulverização, sendo o aglomerado de Nanopartículas caracterizado por uma área superficial de 3 m2g-1 a 10 m2g-1 como medido com método de adsorção de gás Brunauer-Emmett-Teller (BET) e tendo uma morfologia de formato redondo com um diâmetro na faixa de 2 a 25 µm como medido por microscopia de elétron de varredura (SEM).

17. Uso de uma nanopartícula ou um aglomerado de nanopartículas de acordo com qualquer uma das reivindicações 13-16 como um biomaterial para a fabricação de um medicamento para uso em aplicação de odontologia.

18. Uso da nanopartícula como biomaterial para uso de acordo com a reivindicação 17, em que o biomaterial é usado como agente de remineralização ou como dessensibilizador de dentina.