BR112020026167A2 - lactobacillus plantarum para cuidados com a pele - Google Patents

Abstract

A presente invenção está relacionada a microrganismos para uso no tratamento e/ou prevenção de condições da pele por aplicação tópica. Em particular, os microrganismos são para uso no tratamento e/ou prevenção da perda da função de barreira da pele, condições inflamatórias da pele e/ou crescimento de microrganismos patogênicos. A invenção está relacionada adicionalmente a composições ou produtos farmacêuticos ou cosméticos compreendendo os microrganismos. Também é fornecido um uso cosmético dos microrganismos ou composições para aplicação na pele e um método cosmético, em particular para melhorar a aparência da pele.

Description

LACTOBACILLUS PLANTARUM PARA CUIDADOS COM A PELE

[001] A presente invenção se refere a microrganismos para uso no tratamento e/ou prevenção de condições da pele por aplicação tópica, em que os microrganismos são selecionados a partir do grupo que consiste em Lactobacillus plantarum HEAL 19 (DSM 15313) e Lactobacillus plantarum HEAL 99 (DSM 15316). Em particular, os microrganismos são para uso no tratamento e/ou prevenção da perda da função de barreira da pele, condições inflamatórias da pele e/ou crescimento de microrganismos patogênicos. A invenção está relacionada ainda a uma preparação particulada compreendendo o(s) microrganismo(s) e um carreador, bem como composições farmacêuticas ou cosméticas ou produtos compreendendo os microrganismos. Também é fornecido um uso cosmético dos microrganismos ou composições para aplicação na pele e um método cosmético, em particular para melhorar a aparência da pele e/ou prevenir o odor corporal.

[002] Os probióticos são bem conhecidos por melhorar o bem-estar intestinal, atribuído ao aumento das correlações do eixo intestino-cérebro, aliviar a intolerância à lactose, são benéficos no tratamento de infecções vaginais ou urogenitais ou prevenir doenças inflamatórias intestinais. Especialmente Lactobacillus sp. tem uma longa e segura tradição em processos de fermentação de alimentos. Ao contrário do intestino, pouco se sabe sobre as interações entre a epiderme, a microbiota da pele e os microrganismos ambientais.

[003] Atualmente, mais e mais estudos mostram que os probióticos exercem outros efeitos de promoção da saúde, incluindo a saúde da pele. Bifidobactérias e bactérias de ácido lático são os tipos mais comuns de probióticos usados e a área de cuidados com a pele que os utiliza tem sido ativamente desenvolvida nos últimos anos.

[004] No entanto, nem todas as cepas de probióticos apresentam efeitos benéficos na pele e cepas únicas raramente são mencionadas. E mesmo assim, o equilíbrio entre um anti-inflamatório ou outros efeitos como um componente ativo em uma composição cosmética e a não causa de quaisquer efeitos colaterais pró-inflamação pelo próprio microrganismo precisa ser dado.

[005] A pele está continuamente exposta a bactérias, microrganismos e patógenos potenciais. Para evitar infecções ou invasão dessas bactérias patogênicas, a pele desenvolveu estratégias de defesa multifacetadas. Ao lado da barreira física e química do estrato córneo esta inclui a barreira constitutiva e indutiva AMP, que é essencial neste contexto (Harder et al. 2013, Wiesner e Vilcinskas 2010).

[006] Os peptídeos antimicrobianos (AMP) são um grupo diverso e abundante de moléculas. As características são o pequeno tamanho, composição de aminoácidos, anfipaticidade e/ou carga catiônica. Com base em sua composição de aminoácidos, eles são frequentemente divididos em subgrupos característicos. Sua diversidade de potencial antimicrobiano e mecanismo de ação é tão diversa quanto sua estrutura e composição. Eles podem ser detectados em vários tecidos e tipos de células de invertebrados, espécies animais e plantas (Brogden 2005, Zasloff 2002). Na pele humana, eles atuam como primeira linha de defesa, pois são ativos contra um amplo espectro de bactérias Gram positivas e Gram negativas, fungos, parasitas e/ou vírus eucarióticos (Brown e Hancock 2006).

[007] A expressão do AMP pode ser regulada positivamente em resposta a vários estímulos ambientais, como contato com patógenos ou vias de inflamação intracelular. Bactérias comensais e patogênicas diferem em sua capacidade de induzir a expressão de AMP e ativar diferentes vias de sinalização na pele humana para a imunidade humana inata. Pouco se sabe sobre as interações específicas entre ambos. As beta-defensinas, por exemplo, são reguladas positivamente por vários estímulos de inflamação e/ou infecções, como a interleucina 1 ou o lipopolissacarídeo bacteriano (Chung e Dale 2004). Mahe et al. (US2009/0035294 A1) divulgam que LPS de Vitreoscilla filiformes compreendendo Lipídeo A tem a capacidade de estimular a expressão de AMPs em queratinócitos sem ter atividade patogênica.

[008] Sabe-se que o microbioma cutâneo pode desempenhar um papel fundamental em várias doenças cutâneas e/ou condições de saúde. A complexidade e a variedade inter/intra-individual do microbioma, bem como as dificuldades em caracterizar, categorizar e analisar são os desafios para entender as interações e desenvolver aplicações terapêuticas e/ou diagnósticas e/ou tratamentos tópicos que ajudem a influenciar, interagir e/ou apoiar o microbioma. No entanto, o microbioma e as doenças relacionadas ao microbioma tornaram-se um aspecto cada vez mais importante e induzem a necessidade de desenvolver tratamentos relacionados ao microbioma para doenças e condições de saúde.

[009] A dermatite atópica (AD), por exemplo, é um distúrbio complexo multifuncional com vários fatores de risco genéticos, mas desencadeadores ambientais significativos. A AD está associada a defeitos de barreira física e/ou disbioses (desequilíbrio microbiano). Os pacientes apresentam supressão de vários AMPs, como catelicidina ou ß-defensina, ou alternâncias na homeostase das células T. A combinação de defeitos de barreira antimicrobiana e física provavelmente empurra a disbiose, levando a uma maior interrupção do equilíbrio da imunidade celular, que é novamente necessário para estabelecer o equilíbrio com o ambiente externo (Ong et al. 2002, Palmer et al 2006, Sakaguchi et al. 2010).

[010] Além disso, outras doenças comuns da pele humana, como rosácea ou psoríase, também estão associadas à expressão desregulada de AMP. Por manipulação e indução específicas desses peptídeos endógenos, um microbioma balanceado da pele pode ser restaurado, mantido e/ou melhorado. Isso representa uma nova estratégia para criar benefícios para a pele em uma ampla variedade de campos de aplicação.

[011] Adicionalmente, sabe-se que Staphylococcus aureus é frequentemente encontrado em lesões cutâneas eczêmicas de pacientes com AD e parece ser importante e responsável por agravar o quadro da doença. A pele inflamada ou danificada por arranhões, queimaduras de sol ou outro trauma tem maior probabilidade de infeccionar. A pele seca, por exemplo, também se danifica facilmente. A prevenção desse tipo de infecção mostra um segundo ponto de partida altamente relevante no desenvolvimento de tratamentos terapêuticos alternativos.

[012] A partir do estado da técnica, algumas publicações são conhecidas por tratarem de vários efeitos benéficos dos probióticos para o cuidado e a saúde da pele. Preparações de Lactobacillus têm sido usadas em aplicações cosméticas para diversos fins. Baseiam-se principalmente em benefícios para a saúde da pele, corpo, cabelo ou unhas, mas também se relacionam com a aplicação técnica. A maioria das composições descritas contém uma mistura de diferentes cepas probióticas vivas ou não viáveis, preferencialmente usadas em combinação com plantas fermentadas, alimentos ou agentes químicos. Por outro lado, os efeitos benéficos de cepas de cultura puras únicas raramente foram demonstrados.

[013] No WO2013153358, é descrita a utilização de Lactobacillus reuteri, Lactobacillus rhamnosus e Bifidobacterium longum para aplicação cosmética e tratamento tópico da pele.

[014] O documento WO2015048511 divulga composições de loção aquosa para aplicação tópica que contêm um extrato da fermentação de microrganismos probióticos, incluindo os gêneros Lactobacillus ou Bifidobacterium.

[015] Os efeitos benéficos dos microrganismos para a função de barreira da pele foram descritos no WO2009031106. É divulgado o uso cosmético de pelo menos um/frações de microrganismo probióticos em combinação com hesperidina para prevenir uma redução e/ou reforçar a função de barreira da pele.

[016] A possibilidade de indução de β-Defensina em células da pele por duas cepas L. plantarum é descrita no WO2005091933. Os efeitos antimicrobianos são mostrados na pele, bem como melhora na acne e pele sensível.

[017] O US2014186409 descreve o uso cosmético de bactérias de ácido lático e/ou composições contendo-as para tratamento tópico e/ou prevenção de infecções de pele, feridas crônicas ou doenças de pele causadas por microrganismos patogênicos como S. aureus ou Pseudomonas aeruginosa. A eficácia é causada pela co-agregação bacteriana específica de bactérias láticas com patógenos.

[018] No WO2010056198, é divulgada uma preparação farmacêutica compreendendo uma combinação de diversas cepas viáveis alfa-Streptococcus e Lactobacillus que é útil para o tratamento de infecções induzidas por Staphylococcus na pele humana.

[019] O WO2005077391 divulga uma formulação compreendendo pelo menos duas cepas de bactérias de ácido lático, selecionadas a partir de um pool que inclui L. plantarum para tratamento e/ou prevenção de distúrbio inflamatório induzido por estresse. Os efeitos reivindicados para aplicação tópica são restritos à pele gravemente ferida, ou seja, feridas devido a ulcerações ou queimaduras.

[020] A aplicação tópica de Lactobacillus plantarum em queimaduras humanas graves foi descrita para melhorar a reparação de tecidos e prevenir infecções (Peral et al. 2009).

[021] O KR2011134151 divulga uma grande variedade de bactérias de ácido lático, incluindo Lactobacillus plantarum, que produzem substâncias ativas, especialmente bacteriocina ou substâncias semelhantes a bacteriocina. As cepas são sugeridas para serem usadas na prevenção e tratamento de infecções de pele causadas por bactérias ou doenças inflamatórias da pele, como dermatite atópica ou acne.

[022] O WO2016023688 descreve composições para uso na prevenção ou tratamento de infecções de pele compreendendo Lactobacillus plantarum CNCM 1-4026. Em particular, verificou-se que o sobrenadante concentrado coletado após a fermentação de Lactobacillus inibiu ou retardou o crescimento de diferentes bactérias Gram positivas e Gram negativas, inter alia Staphylococcus aureus ou Staphylococcus epidermidis. Apenas os componentes bacterianos solúveis obtidos do meio de crescimento foram usados, mas não as células bacterianas inteiras.

[023] Os efeitos de inibição de Staphylococcus aureus com diferentes bactérias láticas, incluindo Lactobacillus plantarum, foram observados usando sobrenadantes livres de células, bem como extratos (Yong et al 2015).

[024] O WO2017125447A1 está relacionado a microrganismos para uso no tratamento e prevenção de inflamação na cavidade oral, em particular para tratar ou prevenir gengivite e periodontite. Entre os microrganismos divulgados, Lactobacillus plantarum HEAL 19 mostrou ter um efeito anti-inflamatório nos monócitos. No entanto, não pode ser concluído a partir do WO2017125447A1 que tais efeitos se estendem às células epidérmicas da pele fora da cavidade oral, isto é, queratinócitos não mucosos. Uma vez que a pele não mucosa tem uma estrutura completamente diferente, em particular no que diz respeito às camadas protetoras (por exemplo, estrato córneo) e a forte função de barreira associada, não se pode esperar que os mesmos efeitos que foram observados nos monócitos se apliquem à pele. Além disso, a epiderme é um tecido não vascularizado que não contém quaisquer monócitos ou formas celulares relacionadas.

[025] Era um objetivo da presente invenção fornecer cepas bacterianas probióticas que são úteis no tratamento e/ou prevenção de condições da pele, em particular perda da função de barreira da pele, condições inflamatórias da pele e crescimento de microrganismos patogênicos.

[026] Era um objetivo adicional da presente invenção era fornecer cepas bacterianas probióticas que são úteis para aplicações cosméticas, em particular capazes de melhorar a aparência da pele e prevenir o odor corporal.

[027] Em particular, era também um objetivo, que as cepas fornecidas pela presente invenção tenham um ou preferencialmente dois, vários ou todos os efeitos selecionados de fortalecimento da barreira da pele, relaxando a pele e reduzindo ou prevenindo a inflamação, aumentando a defesa imunológica da pele ao regular os AMPs, retardando o envelhecimento da pele, inibindo o crescimento de microrganismos patogênicos na pele e prevenindo infecções.

[028] Além disso, as cepas fornecidas não devem ter efeitos colaterais indesejáveis, como efeitos pró-inflamatórios, quando usadas na pele.

[029] Os objetivos acima são alcançados por um microrganismo ou mistura compreendendo ou que consiste em dois microrganismos para uso no tratamento e/ou prevenção de condições da pele por aplicação tópica, em que o(s) microrganismo()s são selecionados a partir do grupo que consiste em Lactobacillus plantarum HEAL 19 (DSM 15313) e Lactobacillus plantarum HEAL 99 (DSM 15316).

[030] De acordo com a presente invenção, em qualquer modalidade, uma ou uma mistura de ambas as cepas HEAL 19 e HEAL 99 de Lactobacillus plantarum e podem ser usadas. A expressão “microrganismo ou mistura compreendendo ou que consiste em dois microrganismos”, portanto, refere-se a qualquer uma das duas cepas estando presente ou ambas as cepas estando presentes.

[031] Já era conhecido a partir do estado da técnica que algumas bactérias probióticas são capazes de melhorar certos aspectos das condições da pele e da aparência da pele, mas nem todas as cepas bacterianas proporcionam efeitos benéficos na pele e algumas podem até ser prejudiciais. Além disso, foram demonstrados efeitos benéficos para a aplicação de microrganismos na pele gravemente ferida ou queimada, bem como na mucosa da cavidade oral. No entanto, esses efeitos não podem ser transferidos ou comparados com aplicações em pele não mucosa, que tem uma forte função de barreira. Para induzir os efeitos descritos na presente invenção, a existência de uma barreira para a pele é um pré-requisito.

[032] Foi agora descoberto que Lactobacillus plantarum HEAL 19 e HEAL 99 oferecem uma combinação única e um campo de atividade abrangente, que ajuda a melhorar de forma decisiva os sintomas clínicos e a aparência cosmética da pele, mas também auxilia na saúde da pele e na prevenção de anormalidades. É demonstrado que a aplicação tópica dessas cepas proporciona uma combinação de suporte à barreira da pele por indução de vários AMPs, mas também fortalece a barreira física da pele por uma série de vias, além de sua capacidade anti-inflamatória. Adicionalmente, os efeitos de inibição do crescimento de Staphylococcus aureus também podem ser demonstrados para as cepas de Lactobacillus plantarum descritas.

[033] Foi demonstrado que, em particular, o tratamento térmico de

Lactobacillus spp., incluindo componentes solúveis em água e insolúveis em água, são capazes de melhorar a saúde da pele. As suspensões de bactérias têm o potencial de fortalecer a barreira física da pele, reduzindo a perda de água transepidérmica (TEWL) e/ou aumentando os componentes relacionados ao fator de hidratação natural. Ao mesmo tempo, a produção de vários AMPs na pele é induzida, aumentando a autodefesa da pele. As infecções potenciais da pele podem ser evitadas inibindo o crescimento de patógenos, como S. aureus. Além disso, L. plantarum HEAL 19 e HEAL 99 revelaram efeitos anti- inflamatórios.

[034] Em conclusão, as cepas L. plantarum HEAL 19 e 99 apresentam alto e abrangente potencial como agentes para modificar as propriedades dérmicas e a saúde da pele quando aplicadas topicamente.

[035] No contexto da presente invenção, o termo “pele” refere-se à pele que não é pele de mucosa. Em particular, a mucosa encontrada em cavidades do corpo como, por exemplo, a cavidade oral, a mucosa gástrica, intestinal, brônquica, anal ou vaginal não é coberta pelo termo “pele”. Consequentemente, o termo “aplicação tópica” refere-se à aplicação de um agente e/ou formulação na pele e exclui quaisquer aplicações no interior das cavidades corporais, que são cobertas por mucosa. Preferencialmente, a pele ainda retém uma função protetora que não foi significativamente comprometida, por exemplo, por ferimentos graves ou queimaduras.

[036] “Por aplicação tópica”, no contexto da presente invenção, significa que o(s) microrganismo(s), ou a(s) preparação(ões), as composições farmacêuticas ou cosméticas ou produto(s) compreendendo o(s) microrganismo(s) conforme descrito(s) na presente invenção, são administrados diretamente por aplicação tópica na pele, ou seja, diretamente na superfície da pele.

[037] “Condição da pele”, no contexto da presente invenção, refere-se a qualquer estado da pele que está associado a condições médicas da pele, preferencialmente diferentes de ferimentos ou queimaduras. “Condição da pele” refere-se preferencialmente a um estado caracterizado por desconforto, como coceira, ou representa um problema cosmético, como descamação, secura, vermelhidão, erupções cutâneas, acne, oleosidade ou odor corporal devido ao crescimento bacteriano. Exemplos de condições da pele são fornecidos abaixo.

[038] A cepa Lactobacillus plantarum HEAL 19 foi depositada sob o Tratado de Budapeste no Leibniz Institut Deutsche Sammlung für Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ), Inhoffenstr. 7B, 38124 Braunschweig, Alemanha, sob o número de acesso DSM 15313 por Probi AB, Sölvegatan 41, 223 70 Lund, Suécia em 27 de novembro de 2002. A cepa Lactobacillus plantarum HEAL 99 foi depositada sob o Tratado de Budapeste no Leibniz Institut Deutsche Sammlung für Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ), Inhoffenstr. 7B, 38124 Braunschweig, Alemanha, sob o número de acesso DSM 15316 por Probi AB, Sölvegatan 41, 223 70 Lund, Suécia em 27 de novembro de 2002.

[039] Em uma modalidade preferencial, o(s) microrganismo(s) foi/foram submetidos a um tratamento térmico, que preferencialmente levou à inativação, atenuação ou morte dos microrganismos. Preferencialmente, o(s) microrganismo(s) tratado(s) termicamente têm uma estrutura física intacta.

[040] O tratamento térmico pode ser realizado por ultrassom, irradiação UV ou aquecimento. Preferencialmente, é realizado por aquecimento a uma temperatura de 60 a 121°C durante 1 segundo a 120 minutos, tal como de 20 segundos a 120 minutos. Em uma modalidade preferencial, o tratamento térmico é realizado entre 70 e 100°C durante 20 segundos a 15 minutos, preferencialmente usando um pasteurizador industrial. Preferencialmente, o(s)

microrganismo(s) está/estão morto(s) e, portanto, não pode mais ser propagado(s). Preferencialmente, os microrganismos tratados termicamente ainda têm uma estrutura física intacta, o que significa que as estruturas celulares não são destruídas pelo tratamento térmico e os microrganismos podem ser entregues contendo metabólitos. Vantajosamente, durante o tratamento térmico, os microrganismos tipicamente mantêm sua capacidade de conferir efeitos benéficos para o tratamento de condições da pele como descrito na presente invenção e, devido ao fato de que nenhum microrganismo viável é necessário para o propósito da presente invenção, é possível combiná-los com conservantes. Isso é muito importante para a maioria das aplicações, pois os produtos farmacêuticos e cosméticos geralmente contêm conservantes para evitar o crescimento de bactérias ou fungos no produto durante as repetidas aberturas e fechamentos do recipiente enquanto o produto é usado.

[041] A(s) condição(ões) da pele a serem tratadas e/ou prevenidas é/são preferencialmente perda da função de barreira da pele, condições inflamatórias da pele e/ou crescimento de microrganismos patogênicos.

[042] “Barreira da pele”, no contexto da presente invenção, refere-se, por um lado, à barreira física e química do estrato córneo, que impede que as substâncias entrem no corpo e protege contra o ressecamento, mas, por outro lado, também o indutivo Barreira AMP, que junto com outras propriedades químicas como pH fornece defesa contra a colonização ou invasão de patógenos microbianos. Consequentemente, uma “perda da função de barreira da pele”, que também compreende uma “redução da função de barreira da pele”, implica que a estrutura e/ou função da pele normal ou saudável é interrompida de modo que não pode mais fornecer a proteção ou defesa mencionada acima a um grau satisfatório. Preferencialmente, no entanto, tal interrupção não é uma lesão, como um corte ou uma queimadura grave.

[043] “Condições inflamatórias da pele” são condições que são causadas pela resposta biológica da pele a estímulos prejudiciais (noxae), como irritantes ou microrganismos patogênicos e geralmente levam a vermelhidão, inchaço, calor e/ou dor na área afetada. Mediadores inflamatórios, como citocinas inflamatórias ou quimiocinas, por exemplo, Interleucina 8 (IL-8), podem ser medidos no tecido afetado para avaliar o estado inflamatório.

[044] “O crescimento de microrganismos patogênicos”, como bactérias ou fungos, na pele pode levar à infecção e/ou inflamação, mas também pode causar problemas cosméticos, como erupções cutâneas, acne ou odor corporal. Em particular, “crescimento de microrganismos patogênicos” refere-se a um aumento da quantidade de microrganismos patogênicos de modo que exceda um nível, que está associado a um microbioma saudável, na pele ou na pele. Especialmente se refere a infecções microbianas.

[045] Os três aspectos descritos acima estão intimamente ligados; por exemplo, uma perda da função de barreira pode levar à intrusão de microrganismos patogênicos ou substâncias nocivas, que por sua vez causam inflamação.

[046] Em uma modalidade preferencial, o(s) microrganismo(s) são usados como agente para (a) fortalecer a função de barreira da pele e/ou (b) reduzir a perda de água transepidérmica, e/ou (c) induzir a expressão de filagrina, e/ou (d) aumentar os componentes relacionados ao fator de hidratação natural, e/ou (e) fornecer atividade anti-inflamatória, em particular reduzir e/ou inibir parâmetros inflamatórios, e/ou (f) fornecer atividade anti-inflamatória induzida por quimiocinas, e/ou

(g) fornecer atividade anti-inflamatória induzida por noxas externas, tais como microrganismos patogênicos, em particular Staphylococcus aureus, e/ou poluentes do ar e/ou radiação ultravioleta e/ou surfactantes, e/ou (h) inibir o crescimento e/ou invasão e/ou infecção por microrganismos patogênicos, em particular Staphylococcus aureus, e/ou (i) induzir a expressão de peptídeos antimicrobianos (AMPs), e/ou (j) manter e/ou estabelecer e/ou restaurar um estado saudável do microbioma da pele, e/ou (k) melhorar a resposta imunológica da pele.

[047] Verificou-se que as cepas HEAL 19 e HEAL 99 de Lactobacillus plantarum são capazes de fortalecer a barreira cutânea de diferentes maneiras. Por exemplo, elas podem reduzir a perda de água transepidérmica (TEWL) induzindo a expressão de filagrina, que é essencial para a regulação da homeostase epidérmica, em particular a retenção de água. Além disso, foi demonstrado que as cepas aumentam os componentes relacionados ao fator de hidratação natural, que também desempenha um papel importante na hidratação adequada do estrato córneo e na homeostase da barreira. Por outro lado, em outro aspecto que contribui para o fortalecimento da função de barreira cutânea, a cepa pode induzir a expressão de peptídeos antimicrobianos (AMPs) resultando em um aumento da proteção contra a invasão de microrganismos patogênicos, como bactérias e fungos.

[048] A expressão “indução” ou regulação positiva de um gene no contexto da presente invenção pode ser determinada usando um gene de referência, por exemplo, um gene chamado de referência, cuja expressão não varia significativamente em diferentes tecidos ou sob diferentes condições. Os genes que são adequados como genes de referência em células humanas são conhecidos pelo técnico no assunto. A determinação de uma indução ou regulação positiva da expressão usando um gene de referência para padronização é explicada nos procedimentos experimentais abaixo.

[049] Foi ainda encontrado que as cepas HEAL 19 e HEAL 99 de Lactobacillus plantarum podem reduzir mediadores de inflamação, como IL-8 na pele, que são liberados em resposta a diferentes estímulos, como nozes externas, por exemplo, microrganismos patogênicos ou poluentes. Assim, eles podem reduzir as reações inflamatórias e os sintomas associados.

[050] Adicionalmente, as cepas HEAL 19 e HEAL 99 de Lactobacillus plantarum mostraram ter um efeito inibitório sobre o crescimento de microrganismos patogênicos, em particular Staphylococcus aureus. Eles induzem a expressão de peptídeos antimicrobianos (AMPs) e, assim, aumentam a resposta imunológica da pele e são capazes de manter ou estabelecer um microbioma cutâneo saudável. Um microbioma saudável é representado por uma colonização equilibrada de (quantidades de) certos microrganismos não prejudiciais ou mesmo benéficos. Quando esse equilíbrio muda para um estado conhecido como disbiose microbiana, podem ocorrer efeitos prejudiciais.

[051] Devido aos vários efeitos interligados descritos acima, as cepas HEAL 19 e HEAL 99 de Lactobacillus plantarum são úteis para a prevenção e/ou tratamento de uma série de condições médicas, mas também melhoram a aparência da pele e outros aspectos cosméticos, como odor corporal.

[052] Em uma modalidade preferencial, a condição da pele é selecionada a partir do grupo que consiste em dermatite atópica, infecção microbiana, pele seca, pele com coceira, pele sensível, pele atópica, inflamação da pele, disbiose microbiana, rosácea, psoríase, erupção cutânea e acne.

[053] A presente invenção também está relacionada a uma preparação que compreende ou consiste em um ou uma mistura de dois microrganismos selecionados a partir do grupo que consiste em Lactobacillus plantarum HEAL 19

(DSM 15313) e Lactobacillus plantarum HEAL 99 (DSM 15316) e um carreador, em que a preparação é uma preparação particulada, preferencialmente um granulado ou um pó.

[054] Verificou-se que é particularmente vantajoso distribuir o(s) microrganismo(s) para o propósito da presente invenção na forma de uma preparação particulada com um carreador. Uma preparação particulada, especialmente um granulado seco ou pó, é mais estável do que, por exemplo, uma suspensão e tem uma vida útil significativamente mais longa quando armazenada antes da aplicação. Consequentemente, não são necessários conservantes para estabilizar a preparação e não são necessárias medidas especiais de armazenamento, como o arrefecimento. Mesmo durante longos períodos de armazenamento, a preparação não mostra descoloração ou outros sinais de deterioração. Além disso, a preparação particulada é homogênea no que diz respeito à distribuição do(s) microrganismo(s) e nenhum efeito indesejado como precipitação ou aglomeração afeta a homogeneidade. A preparação particulada pode, portanto, também ser fácil e eficientemente trabalhada em composições ou produtos farmacêuticos ou cosméticos.

[055] Uma “preparação particulada” no contexto da presente invenção é uma preparação, que consiste em partículas distintas. Preferencialmente, as partículas têm um tamanho homogêneo e uma distribuição uniforme de microrganismo(s) e carreador e são secas e fluem sem a tendência de formar grumos. Em particular, uma preparação particulada pode ser um granulado ou um pó. Tal preparação particulada ou, respectivamente, o granulado ou pó, pode compreender ou consistir em partículas com um tamanho médio de partícula na faixa de 0,1 a 200 µM, preferencialmente 1 a 100 µM.

[056] Uma preparação particulada de acordo com a invenção pode ser obtida por liofilização, secagem por pulverização ou granulação do(s)

microrganismo(s) com o carreador.

[057] Em uma modalidade preferencial da preparação descrita acima, o(s) microrganismo(s) foi/foram submetidos a um tratamento térmico e são preferencialmente microrganismo(s) atenuado(s) ou morto(s). No entanto, como explicado acima, preferencialmente o(s) microrganismo(s) tratado(s) termicamente ainda tem uma estrutura física intacta.

[058] Vantajosamente, os microrganismos mantêm as suas propriedades benéficas no que diz respeito ao tratamento tópico de condições da pele durante o tratamento térmico. Consequentemente, uma vez que não são necessários microrganismos viáveis, a preparação pode ser utilizada em produtos farmacêuticos ou cosméticos que contenham conservantes.

[059] O carreador utilizado na preparação de acordo com a invenção é um material que é adequado para ser fornecido na forma de partículas, por exemplo, por liofilização, secagem por pulverização ou granulação. Além disso, é importante que o carreador seja um material farmaceuticamente e cosmeticamente aceitável.

[060] Em uma preparação como descrito acima, o carreador pode ser selecionado do grupo que consiste em polissacarídeos, preferencialmente inulina, amido, goma arábica, proteínas do soro de leite, leite em pó desnatado e maltodextrina, bem como combinações dos mesmos, preferencialmente maltodextrina.

[061] Verificou-se no contexto da presente invenção que a proporção entre o(s) microrganismo(s) e o carreador é decisiva para as propriedades da preparação. Se menos carreador, por exemplo, maltodextrina, for usado, a preparação tipicamente se torna higroscópica, o que pode afetar negativamente a estabilidade e aumentar a tendência para formar grumos.

[062] Em uma modalidade preferida, na preparação descrita acima, a proporção de microrganismo(s) para carreador está na faixa de 1:9 a 3:7, preferencialmente 1,5:8,5 a 2,5 a 7,5 e/ou a preparação compreende 10 a 30 % em peso de microrganismo(s) e 70 a 90% em peso do carreador, preferencialmente 15 a 25% em peso de microrganismo(s) e 75 a 85% em peso do carreador, em cada caso em relação ao peso total da preparação.

[063] A presente invenção também está relacionada a uma preparação de acordo com qualquer uma das modalidades descritas acima para uso no tratamento e/ou prevenção de condições da pele por aplicação tópica. Em particular, a(s) condição(ões) da pele a ser tratada e/ou evitada é/são perda da função de barreira da pele, condições inflamatórias da pele e/ou crescimento de microrganismos patogênicos, preferencialmente a(s) condição(ões) da pele é/são selecionadas a partir do grupo que consiste em dermatite atópica, infecção microbiana, pele seca, pele com coceira, pele sensível, pele atópica, inflamação da pele, disbiose microbiana, rosácea, psoríase, erupção cutânea e acne.

[064] A presente invenção também está relacionada a um método para produzir uma preparação compreendendo ou que consiste em um ou uma mistura de dois microrganismos selecionados a partir do grupo que consiste em Lactobacillus plantarum HEAL 19 (DSM 15313) e Lactobacillus plantarum HEAL 99 ( DSM 15316) e um carreador, preferencialmente uma preparação de acordo com qualquer uma das modalidades descritas acima, compreendendo a(s) etapa(s): (i) fornecer um ou uma mistura de dois microrganismos selecionados a partir do grupo que consiste em Lactobacillus plantarum HEAL 19 (DSM 15313) e Lactobacillus plantarum HEAL 99 (DSM 15316); (ii) opcionalmente, submeter o(s) microrganismo(s) da etapa (i) a um tratamento térmico, preferencialmente a uma temperatura na faixa de 60 a

121°C por 1 segundo a 120 minutos; e (iii) combinar o(s) microrganismo(s) da etapa (i) ou (ii) com um carreador e processar adicionalmente a combinação para obter um granulado ou um pó, preferencialmente por liofilização, secagem por pulverização ou granulação.

[065] O método descrito acima representa uma forma altamente vantajosa de processar o(s) microrganismo(s) para o propósito da presente invenção porque a preparação resultante é muito estável como descrito acima e pode ser facilmente e eficientemente trabalhada em uma ampla faixa de produtos farmacêuticos ou cosméticos.

[066] De acordo com um aspecto adicional, a presente invenção também está relacionada a uma composição farmacêutica ou cosmética ou produto farmacêutico ou cosmético para aplicação tópica na pele compreendendo um ou uma mistura de dois microrganismos selecionados a partir do grupo que consiste em Lactobacillus plantarum HEAL 19 (DSM 15313) e Lactobacillus plantarum HEAL 99 (DSM 15316) ou compreendendo uma preparação de acordo com qualquer uma das modalidades descritas acima, em que a quantidade total do(s) microrganismo(s) é suficiente para tratar e/ou prevenir condições da pele, em particular, condições inflamatórias da pele, perda da função de barreira da pele e/ou crescimento de microrganismos patogênicos, preferencialmente em que a quantidade total do(s) microrganismo(s) está na faixa de 0,01 a 5% em peso seco, preferencialmente de 0,02 a 1% em peso seco, tal como 0,1 a 1% em peso seco, em cada caso em relação ao peso total da composição e/ou em que a quantidade total do(s) microrganismo(s) é pelo menos 10^8, preferencialmente 5 x 10^8 células ou pelo menos 10^10 células por grama, preferencialmente 10^11 células por grama da composição total (dependendo do tipo de composição, por exemplo, dependendo se a composição é um produto semi-acabado ou um produto final), tal como na faixa de 10^8 a 5 x

10^10, preferencialmente de 10^9 a 10^10 células por grama da composição total.

[067] Surpreendentemente, foi descoberto que Lactobacillus plantarum HEAL 19 e Lactobacillus plantarum HEAL 99 são capazes de fornecer os efeitos descritos na presente invenção já em concentração tão baixa quanto 0,01 ou 0,02% do peso seco da composição ou produto farmacêutico ou cosmético.

[068] Por exemplo, uma suspensão Lactobacillus ou, mais preferencialmente, uma preparação particulada como descrito acima pode ser usada como ingrediente ativo para várias aplicações farmacêuticas ou cosméticas, tais como formulações tópicas sem enxágue ou com enxágue. As composições contendo quantidades eficazes podem ser úteis para reduzir a sensibilidade da pele ou no tratamento de condições da pele como pele seca e com coceira ou dermatite atópica. As composições são adequadas para o tratamento contínuo da pele atópica, bem como para a aplicação em áreas específicas da pele afetadas, como lesões, arranhões ou feridas. Além disso, as composições podem ser usadas diariamente para manter uma barreira intacta, bem como um estado saudável do microbioma da pele.

[069] Em uma modalidade preferencial da composição ou produto farmacêutico ou cosmético, o(s) microrganismo(s) foi/foram submetidos a um tratamento térmico e são preferencialmente microrganismos atenuados ou mortos, mas ainda com uma estrutura física intacta. Para as condições do tratamento térmico, os parâmetros definidos acima se aplicam em conformidade.

[070] Vantajosamente, uma vez que os microrganismos tipicamente mantêm suas propriedades benéficas em relação ao tratamento tópico de condições da pele durante o tratamento térmico e nenhum microrganismo viável é necessário, os produtos farmacêuticos ou cosméticos podem compreender conservantes.

[071] Em uma modalidade preferencial, a composição farmacêutica ou cosmética ou produto de acordo com qualquer uma das modalidades descritas na presente invenção, portanto, compreende pelo menos um conservante.

[072] Um “conservante”, no contexto da presente invenção, refere-se a uma substância que inibe ou suprime o crescimento microbiano.

[073] A invenção também está relacionada a uma composição ou produto farmacêutico ou cosmético como descrito acima para uso no tratamento e/ou prevenção de condições da pele por aplicação tópica, em particular perda da função de barreira da pele, condições inflamatórias da pele e/ou crescimento de microrganismos patogênicos.

[074] Como as cepas HEAL 19 e HEAL 99 de Lactobacillus plantarum fornecem os efeitos de a) a k) descritos acima quando aplicados topicamente na pele, composições e produtos compreendendo uma quantidade eficaz de uma ou ambas as cepas são eficazes para tratar e/ou prevenir várias condições da pele e melhorar a aparência da pele conforme descrito acima.

[075] As composições e produtos de acordo com a invenção destinam-se a aplicação tópica na pele e, portanto, estão preferencialmente em uma formulação adequada para aplicação tópica na pele. Tais formulações podem ser formulações sem enxágue ou com enxágue.

[076] Em modalidade preferencial adicional, a composição ou produto farmacêutico ou cosmético como descrito acima é selecionado a partir do grupo que consiste em óleo em água ou água em emulsão de óleo, unguento, creme, loção e gel.

[077] As composições e produtos podem compreender outros ingredientes que fornecem propriedades adequadas para aplicação na pele. Portanto, é preferencial uma composição farmacêutica ou cosmética ou produto compreendendo ainda um ou mais componente(s) selecionado(s) do grupo que consiste em veículos, excipientes e ingredientes ativos adicionais, preferencialmente selecionados de maltodextrina, inulina, emolientes e óleos vegetais.

[078] A presente invenção também está relacionada a um método para produzir uma composição ou produto farmacêutico ou cosmético, preferencialmente uma composição ou produto farmacêutico ou cosmético de acordo com qualquer uma das modalidades aqui descritas, compreendendo as etapas: (i) fornecer um ou uma mistura de dois microrganismo(s) selecionados a partir do grupo que consiste em Lactobacillus plantarum HEAL 19 (DSM 15313) e Lactobacillus plantarum HEAL 99 (DSM 15316), preferencialmente em que o(s) microrganismo(s) foi/foram submetidos a um tratamento térmico e são preferencialmente microrganismos atenuados ou mortos com uma estrutura física intacta, ou fornecendo uma preparação de acordo com qualquer uma das modalidades descritas acima ou uma preparação produzida por um método conforme descrito acima, e (ii) combinar o(s) microrganismo(s) ou a preparação da etapa (i) com uma ou mais substâncias selecionadas a partir de carreadores, excipientes e ingredientes ativos adicionais para obter uma composição ou produto farmacêutico ou cosmético.

[079] Em uma modalidade preferencial do método, na etapa (ii), pelo menos um conservante é combinado com o(s) microrganismo(s) ou a preparação da etapa (i).

[080] De acordo com a presente invenção, os óleos vegetais podem ser selecionados a partir do grupo que consiste em óleo de Argan, óleo de Arônia (semente), óleo de abacate, óleo de pêssego (caroço), óleo de canola, óleo de

Nigella, óleo de abóbora (semente de abóbora), óleo de rosa selvagem (sementes), óleo de sementes de romã, óleo de jojoba (cera líquida), manteiga de cacau/cacau, óleo de broto de trigo, manteiga de coco/coco, óleo de cártamo, óleo de milho, óleo de camelina, óleo de linhaça, óleo de macadâmia, óleo de semente de framboesa, Óleo de sementes de Meadowfoam, Óleo de sementes de Passiflora, Óleo de amêndoa, Óleo de Neem, Óleo de Moringa, Óleo de Borragem, Azeite, Óleo de amendoim, Óleo de avelã, Óleo de noz, Óleo de palma, Óleo de semente de mamão, Óleo de semente de Salsa, Óleo de espinheiro, Óleo de rícino, Arroz óleo, óleo de gergelim, manteiga de karité/manteiga de karité, óleo de girassol, óleo de soja, óleo de Tamanu, óleo de prímula, óleo de semente de uva, óleo de semente de cranberry.

[081] De acordo com a presente invenção, outros corpos oleosos adequados podem ser selecionados a partir do grupo que consiste em álcoois Guerbet com base em álcoois graxos tendo 6 a 18, preferencialmente 8 a 10, átomos de carbono, ésteres lineares C6-C22-ácidos graxos com C6-C22-álcoois graxos lineares ou ramificados ou ésteres de C6-C 13-carboxílicos lineares ou ramificados C6-C 22-álcoois gordurosos, tais como, por exemplo, miristato de miristila, palmitato de miristila, estearato de miristila, isostearato de miristila, oleato de miristila, behenato de miristila, erucato de miristila, miristato de cetila, palmitato de cetila, estearato de cetila, isostearato de cetila, oleato de cetila, behenato de cetila, erucato de cetila, miristato de esteralila, palmitato de estearila, estearato de estearila, isostearato de estearila, oleato de estearila, behenato de estearila, erucato de estearila, miristato de isostearila, palmitato de isostearila, estearato de isostearila, isostearato de isostearila, oleato de isostearila, behenato de isostearila, oleato de isostearila, miristato de oleila, palmitato de oleila, estearato de oleila, isostearato de oleila, oleato de oleila, behenato de oleila, erucato de oleila, miristato de behenila, palmitato de behenila, estearato de behenila, isostearato de behenila, oleato de behenila, behenato de behenila, erucato de behenila, miristato de erucila, palmitato de erucila, estearato de erucila, isostearato de erucila, oleato de erucila, behenato de erucila e erucato de erucila. Também adequados são os ésteres de C6-C22- ácidos graxos lineares com álcoois ramificados, em particular 2-etilhexanol, ésteres de C18-C38- ácidos alquil-hidroxicarboxílicos com C6-C22-álcoois graxos lineares ou ramificados, em particular Maleato de Dioctila, ésteres de ácidos graxos lineares e/ou ramificados com álcoois poli-hídricos (tais como, por exemplo, propilenoglicol, dimerdiol ou trimertriol) e/ou álcoois de Guerbet, à base de triglicerídeos em C6-C10-ácidos graxos, misturas de mono-/di- /triglicerídeos líquidos com base em C6-C18-ácidos graxos, ésteres de C6-C22- álcoois graxos e/ou álcoois de Guerbet com ácidos carboxílicos aromáticos, em particular ácido benzóico, ésteres de C2-C12-ácidos dicarboxílicos com álcoois lineares ou ramificados tendo 1 a 22 átomos de carbono ou polióis tendo 2 a 10 átomos de carbono e 2 a 6 grupos hidroxila, óleos vegetais, álcoois primários ramificados, ciclohexanos substituídos, C6C22-carbonatos de álcool graxo linear e ramificado, tais como, por exemplo, Carbonato de Dicaprilil (Cetiol® CC), carbonatos de Guerbet, com base em álcoois graxos tendo 6 a 18, preferencialmente 8 a 10, átomos de carbono, ésteres de ácido benzóico com éteres dialquílicos lineares e/ou ramificados C6-C22(por exemplo, Finsolv® TN), lineares ou ramificados, éteres dialquílicos simétricos ou assimétricos com 6 a 22 carbonos átomos por grupo alquil, como, por exemplo, éter dicaprilílico (Cetiol® OE), produtos de abertura de anel de ésteres de ácidos graxos epoxidados com polióis, óleos de silicone (ciclometicones, graus de meticona de silicone, etc.), hidrocarbonetos alifáticos ou naftênicos, tais como, por exemplo, esqualano, esqualeno ou dialquilciclohexanos e/ou óleos minerais.

[082] Nas composições e produtos de acordo com a invenção, de preferência, as cepas HEAL19 e HEAL99 de Lactobacillus plantarum são utilizadas em combinação com uma ou mais (adicionais) substâncias para prevenir, reduzir ou aliviar a(s) condição(ões) de pele seca e/ou coceira e/ou um ou mais agentes redutores da irritação da pele, em particular uma ou mais substâncias selecionadas do grupo que consiste em agentes anti-inflamatórios, agentes de arrefecimento fisiológico e compostos que aliviam a vermelhidão, preferencialmente em que uma ou mais substâncias adicionais são selecionadas a partir grupo que consiste em: (i) compostos anti-coceira, (ii) substâncias anti-inflamatórias esteroides do tipo corticosteróide, em particular hidrocortisona, derivados de hidrocortisona, como hidrocortisona 17- butirato, dexametasona, fosfato de dexametasona, metilprednisolona ou cortisona, (iii) substâncias anti-inflamatórias não esteroidais, em particular oxicams tais como piroxicam ou tenoxicam, salicilatos tais como aspirina, disalcid, solprin ou fendosal, derivados de ácido acético tais como diclofenac, fenclofenac, indometacina, sulindac, tolmetina ou clindanac, fenamatos tais como mefenâmico, meclofenâmico, flufenâmico ou niflúmico, derivados de ácido propiônico, como ibuprofeno, naproxeno ou benoxaprofeno, pirazóis, como fenilbutazona, oxifenilbutazona, febrazona ou azapropazona, (iv) substâncias anti-inflamatórias naturais ou de ocorrência natural ou substâncias que aliviam a vermelhidão e/ou coceira, em particular extratos ou frações de camomila, Aloe vera, espécies de Commiphora, espécies de Rubia, salgueiro, salgueiro, aveia, calêndula, arnica, Erva de São João, madressilva, alecrim, Passiflora incarnata, hamamélis, gengibre ou Echinacea, ou compostos ativos individuais dos mesmos, (v) alfa-bisabolol, apigenina, apigenina-7-glicosídeo, gingeróis, shogaóis,

dióis de gengibre, desidrogingerdionas, paradóis, avenantramidas naturais, avenantramidas não naturais, preferencialmente diidroavenantramida D, ácido boswellico, fitoesteróis, glicirrizina, glabridrina e licochalcona A, preferencialmente na forma de substâncias puras, (vi) agentes de cuidado da pele, preferencialmente reguladores de retenção de umidade da pele ou agentes de reparo da pele, preferencialmente selecionados a partir do grupo que consiste em lactato de sódio, ureia e derivados, glicerol, propilenoglicol, 1,2-pentanodiol, 1,2-hexanodiol e 1,2- octanodiol, colágeno, elastina ou ácido hialurônico, adipatos de diacil, petrolatum, ácido urocânico, lecitina, alantoína, pantenol, fitantriol, licopeno, (pseudo-)ceramidas (preferencialmente Ceramida 2, hidroxipropil bispalmitamida MEA, cetiloxipropil gliceril metoxipropil miristamida, éster N-(1- hexadecanoil)-4-hidroxi-L-prolina (1-hexadecil), hidroxietil palmitil oxihidroxipropil palmitamida), glicoesfingolipídeos, colesterol, fitoesteróis, quitosana, sulfato de condroitina, lanolina, ésteres de lanolina, aminoácidos, vitamina E e derivados (preferencialmente tocoferol, acetato de tocoferila), alfa- hidroxiácidos (preferencialmente ácido cítrico, ácido lático, ácido málico) e derivados dos mesmos, mono-, di- e oligossacarídeos, preferencialmente glicose, galactose, frutose, manose, laevulose e lactose, polissacarídeos, tais como β-glucanos, em particular 1,3-1,4-β-glucano de aveia, alfa-hidroxi-ácidos graxos, ácidos triterpênicos, tais como ácido betúlico ou ácido ursólico e extratos de algas ou compostos ativos únicos dos mesmos, (vii) agentes de arrefecimento fisiológico, preferencialmente selecionados a partir do grupo que consiste em mentona glicerol acetal, lactato de mentila, preferencialmente lactato de l-mentila, em particular l-lactato de l-mentila), mentil etil oxamato, amidas de ácido mentil-3-carboxílico substituídas (por exemplo, ácido mentil-3-carboxílico N-etilamida, éster etílico de Nα-(L-

mentanocarbonil)glicina, 2-isopropil-N-2,3-trimetilbutanamida, amidas de ácido ciclohexanocarboxílico substituídas, 3-mentoxipropano-1,2-diol, carbonato de 2-hidroxietil mentil, carbonato de 2-hidroxipropil mentil, N-acetilglicina mentil éster, isopulegol, ésteres de ácido mentil hidroxicarboxílico (por exemplo, mentil 3-hidroxibutirato), monomentil succinato, monomentil glutarato, 2- mercaptociclodecanona, metil 2-pirrolidin-5-onecarboxilato, 2,3-dihidroxi-p- mentano, 3,3,5-trimetilciclohexanona glicerol cetal, 3-mentil 3,6-di- e -trioxaalcanoatos, 3-mentil metoxiacetato e icilina, e (viii) antagonistas do receptor de histamina, inibidores de serina protease, antagonistas de TRPV1, antagonistas de NK1, agonistas de receptores de canabinóides e antagonistas de TRPV3.

[083] De acordo com um outro aspecto, a presente invenção também está relacionada a um uso cosmético de um microrganismo ou mistura compreendendo ou que consiste em dois microrganismos para aplicação tópica na pele, em particular para melhorar a aparência da pele e/ou prevenir o odor corporal, em que o(s) microrganismo(s) é/são selecionados a partir do grupo que consiste em Lactobacillus plantarum HEAL 19 (DSM 15313) e Lactobacillus plantarum HEAL 99 (DSM 15316), preferencialmente em que o(s) microrganismo (s) foi/foram submetidos a um tratamento térmico e/ou são microrganismos atenuados ou mortos com uma estrutura física intacta.

[084] Um “uso cosmético” é um uso não terapêutico, ou seja, um uso na pele, cuja aparência é afetada por, por exemplo, irritação, vermelhidão, secura, descamação, erupção cutânea, sinais de envelhecimento ou casos leves de acne, que representam um problema cosmético ou um leve desconforto, mas não seria caracterizado como patológico. Outro “uso cosmético” é a prevenção ou redução do odor corporal, que está associado ao crescimento de certos microrganismos na pele, que causam mau cheiro, mas não representam um perigo iminente para a saúde da pessoa afetada.

[085] Consequentemente, o uso cosmético descrito acima é preferencialmente para reduzir ou prevenir irritação da pele, pele seca, erupção cutânea, acne, odor corporal e/ou envelhecimento da pele.

[086] No uso cosmético de acordo com a invenção, o(s) microrganismo(s) são usados como agente para (a) fortalecer a função de barreira da pele e/ou (b) reduzir a perda de água transepidérmica, e/ou (c) induzir a expressão de filagrina, e/ou (d) aumentar os componentes relacionados ao fator de hidratação natural, e/ou (e) fornecer atividade anti-inflamatória, em particular reduzir e/ou inibir parâmetros inflamatórios, e/ou (f) fornecer atividade anti-inflamatória induzida por quimiocinas, e/ou (g) fornecer atividade anti-inflamatória induzida por noxas externas, tais como microrganismos patogênicos, em particular Staphylococcus aureus, e/ou poluentes do ar e/ou radiação ultravioleta e/ou surfactantes, e/ou (h) inibir o crescimento e/ou invasão e/ou infecção por microrganismos patogênicos, em particular Staphylococcus aureus, e/ou (i) induzir a expressão de peptídeos antimicrobianos (AMPs), e/ou (j) manter e/ou estabelecer e/ou restaurar um estado saudável do microbioma da pele, e/ou (k) melhorar a resposta imunológica da pele.

[087] Os efeitos descritos nos itens (a) a (k) e explicados em mais detalhes acima também representam uma combinação adequada para abordar uma série de questões exclusivamente cosméticas. Por exemplo, a perda da função de barreira da pele pode levar ao aumento da perda de água transepidérmica, o que resulta em pele seca que mostra sinais de irritação, como vermelhidão ou descamação, e assim afeta a aparência da pele. A regulação positiva da filagrina e o aumento dos componentes relacionados ao fator hidratante natural previnem ou amenizam esses problemas. A atividade anti-inflamatória reduz os sinais de inchaço ou vermelhidão causados pela reação da pele a certos estímulos, que afetam a aparência da pele, mas não representam uma condição patológica. A inibição do crescimento de microrganismos patogênicos, por exemplo, induzindo a expressão de AMPs, pode resolver casos leves de acne ou prevenir e reduzir o odor corporal.

[088] Em uma modalidade preferencial do uso cosmético descrito acima, o(s) microrganismo(s) são usados na forma de uma preparação de acordo com qualquer uma das modalidades descritas acima.

[089] Em um aspecto adicional, a presente invenção também está relacionada a um método cosmético para melhorar a aparência da pele e/ou prevenir o odor corporal, em particular para reduzir ou prevenir irritação da pele, pele seca, erupção cutânea, acne, odor corporal e/ou envelhecimento da pele, compreendendo a etapa i) aplicar um microrganismo ou mistura compreendendo ou que consiste em dois microrganismos topicamente na pele, em que o(s) microrganismo(s) é/são selecionados a partir do grupo que consiste em Lactobacillus plantarum HEAL 19 (DSM 15313) e Lactobacillus plantarum HEAL 99 (DSM 15316), ou aplicar uma preparação ou uma composição cosmética ou produto conforme descrito acima na pele, preferencialmente em que o(s) microrganismo (s) foi/foram submetidos a um tratamento térmico e/ou são microrganismos atenuados ou mortos com uma estrutura física intacta.

[090] Um “método cosmético” é um método não terapêutico para resolver problemas cosméticos, mas não para tratar condições patológicas conforme explicado em mais detalhes no contexto do uso cosmético acima. Em um método cosmético de acordo com a presente invenção, o(s) microrganismo(s) agem como agente para fornecer os efeitos descritos acima nos itens (a) a (k) e são, portanto, capazes de resolver uma série de questões cosméticas, conforme explicado no contexto do uso cosmético acima. Breve descrição das figuras:

[091] A Figura 1 mostra a indução de peptídeos antimicrobianos por L. plantarum HEAL 19 em queratinócitos HaCaT. Genes significativamente induzidos são β-Defensina 3, β-Defensina 4, inibidor de Peptidase 3, RNase 7, Psoriasina, Lactotransferrina e Inibidor de peptidase de leucócito secretor. A expressão gênica de peptídeos antimicrobianos em queratinócitos HaCaT foi medida após 24 h de tratamento com 0,05% de L. plantarum HEAL 19 usando matrizes de genes; indução foi definida como um valor RQ calculado de >2.

[092] A Figura 2 mostra a indução dependente da concentração de β- Defensina 3 por L. plantarum HEAL 19 em queratinócitos HaCaT. Os queratinócitos HaCaT foram tratados por 24 horas com várias concentrações de L. plantarum HEAL 19. Isso resulta em valores RQ calculados de 243,6 (por 0,1% de L. plantarum HEAL 19) a 2,3 (0,0125% de L. plantarum HEAL 19).

[093] A Figura 3 mostra várias induções de genes codificadores de AMP após 24 h de tratamento. RNase 7, inibidor de β-Defensina 3 Peptidase 3, Fosfolipase A2 e inibidor de peptidase de leucócito secretor são induzidos de forma dependente da concentração (0,1 e 0,05% foram testados) com L. plantarum HEAL 99.

[094] A Figura 4 mostra o efeito anti-inflamatório de L. plantarum HEAL 19 e 99 e dexametasona, que foi incluído como um controle positivo. Os queratinócitos HaCaT confluentes foram pré-tratados com o material de teste L. plantarum HEAL 99 com 0,1 mg/mL, L. plantarum HEAL 19 com 0,25 mg/mL e dexametasona em 30 µM. Após 48 horas de incubação, os queratinócitos foram estimulados usando 30 ng/mL de IL-1alfa pró-inflamatória por 8 horas. A liberação subsequente de Interleucina-8 a partir de queratinócitos HaCaT devido à estimulação de IL-1alfa após pré-tratamento com L. plantarum HEAL 19 e HEAL 99 foi medida no meio de cultura celular usando ELISA. A comparação é mostrada para controle positivo dexametasona e queratinócitos não pré- tratados (controle de IL-1alfa).

[095] A Figura 5 mostra a liberação de IL-8 (eixo das ordenadas) após o tratamento do modelo ex vivo de pele humana com placebo e formulação L. plantarum HEAL 19 e estimulação com particulado de diesel 1650b (simulando poluição do ar).

[096] A Figura 6 mostra a liberação de interleucina-8 de queratinócitos HaCaT devido à estimulação de S. aureus após o pré-tratamento com L. plantarum HEAL 19. A comparação é mostrada para queratinócitos não pré- tratados (S. aureus controle).

[097] A Figura 7 mostra os efeitos de inibição do crescimento de S. aureus de uma forma dependente da dose, ou seja, quando tratado com 0,1 e/ou 0,05% de L. plantarum HEAL 19. É feita uma comparação entre um controle de crescimento positivo e um controle negativo (controle de inibição, adição de biocida farnesol).

[098] A Figura 8 mostra a produção de involucrina em modelos ex vivo de pele humana (eixo das ordenadas) após o tratamento com várias concentrações de L. plantarum de HEAL 19 (eixo x). A comparação é mostrada para um controle negativo incluindo apenas o veículo (DMSO).

[099] A Figura 9 mostra a produção de conteúdos de citoqueratina 14 (CK14) em modelos ex vivo de pele humana (eixo das ordenadas) após o tratamento com várias concentrações de L. plantarum HEAL 19 (eixo x). A comparação é mostrada para um controle negativo incluindo apenas o veículo (DMSO).

[0100] A Figura 10 mostra a porcentagem de detecção de Rodamina B (eixo das ordenadas) após o tratamento ex vivo com placebo e L. plantarum HEAL 19 formulação e estimulação com particulado de diesel 1650b.

[0101] A Figura 11 mostra o comprimento das lamelas lipídicas intercelulares (nm) por 1000 nm2 de espaço intercelular medido em sistemas de modelo de epiderme para pele seca em 3D. As lamelas foram perturbadas devido ao tratamento com SDS. O desempenho do reparo da pele foi determinado por microscopia eletrônica de transmissão (TEM) após o tratamento com 0,5% de L. plantarum HEAL 19 em uma formulação para o cuidado da pele.

[0102] A Figura 12 mostra a liberação de ácido hialurônico de modelos de pele HEPKp tridimensionais (eixo das ordenadas) após o tratamento com L. plantarum HEAL 19 e HEAL 99. A comparação é mostrada para um controle negativo incluindo apenas o meio de cultura de células (controle do meio), eixo x.

[0103] A Figura 13 mostra a liberação de filagrina de modelos de pele HEPKp 3 D (eixo das ordenadas) após o tratamento com L. plantarum HEAL 19 e HEAL 99. A comparação é mostrada para um controle negativo incluindo apenas o meio de cultura de células (controle do meio), eixo x.

[0104] A Figura 14 mostra o conteúdo de filagrina em modelos ex vivo de pele humana após o tratamento com L. plantarum HEAL 19 em duas concentrações diferentes. A comparação é mostrada para um controle negativo incluindo apenas o veículo (DMSO).

[0105] A Figura 15 mostra o conteúdo de água conforme determinado pela capacitância em pele humana in vivo após o tratamento com L. plantarum HEAL 19 na concentração de 1% em um creme cosmético. Barras sombreadas cinza representam creme com L. plantarum HEAL 19, barras brancas representam creme de placebo, barras pretas indicam nenhum tratamento.

[0106] A Figura 16 mostra a resistência da barreira da pele conforme determinado pela perda de água transepidérmica (TEWL) em pele humana in vivo após o tratamento com L. plantarum HEAL 19 na concentração de 1% em um creme cosmético. Barras sombreadas cinza representam creme com L. plantarum HEAL 19, barras brancas representam creme de placebo, barras pretas indicam nenhum tratamento.

[0107] A Figura 17 mostra curvas de crescimento para L. plantarum spp. em meio MRS ao longo de 16h; início-OD = 0,1; média de 3 cavidades.

[0108] A invenção é ainda ilustrada pelos exemplos abaixo, que não devem ser entendidos como limitantes do escopo.

[0109] Os seguintes procedimentos experimentais foram usados nos exemplos: Preparação de suspensões de lactobacilos tratadas termicamente

[0110] O crescimento das cepas HEAL 19 e HEAL 99 de L. plantarum pode ser obtido em vários meios de cultura. A fonte de carbono pode ser glicose ou amido. Extrato de carne, extrato de levedura, peptona ou protease peptona (vegetal) etc. podem ser usados como fonte de nitrogênio. O pH do meio de cultura deve ser cerca de 6. A temperatura da cultura é variável, mas preferencialmente 37 °C. A duração da cultura pode ser de cerca de 8 a 24 horas. Agitação ou agitação aerada pode ser adicionada.

[0111] Após o cultivo, um processo de lavagem pode ser adicionado. Isso pode ser feito da maneira a seguir. As células podem ser coletadas primeiro por centrifugação, o sobrenadante decantado e os péletes de células suspensas com PBS líquido, meio de cultura de células ou água purificada. O procedimento descrito pode ser repetido se necessário.

[0112] O tratamento térmico da suspensão de Lactobacilli pode ser feito antes ou depois de um procedimento de lavagem. Isso pode ser obtido por ultrassom, irradiação UV ou calor, enquanto o tratamento térmico é preferencial. Este pode ser realizado com temperaturas de 60 °C a 121 °C. Para temperaturas acima de 100 °C, pode ser usada uma autoclave. A duração do tratamento térmico pode variar de 1s a 120 min, como de 20s a 120 min. O tratamento térmico entre 70 e 100 °C por 20s a 15 min usando um pasteurizador industrial é preferencial. O processamento adicional opcional para os Lactobacilli tratados termicamente pode incluir liofilização, secagem por pulverização, granulação etc. Isso pode servir ao propósito de melhorar a aplicabilidade e/ou estabilidade do próprio produto.

[0113] O produto final pode ser um pó, granulado, suspensão ou solução e é definido para ser aplicado em composições cosméticas na concentração de 0,001 a 10% p/v. Isso se refere a uma concentração de formulação cosmética de 1x107 - 1x1011 células/mL. Mais preferencialmente, o produto final é aplicado em uma concentração de 0,01 a 5% p/v, e ainda mais preferencialmente, em 0,02 a 1% p/v, tal como de 0,1 a 1% p/v. Efeitos de cepas de Lactobacillus na expressão do gene AMP em queratinócitos cultivados como monocamada

[0114] As induções de AMP foram medidas com análise de PCR em tempo real usando placas rápidas de 96 poços Taq-Man® Array.

[0115] Os queratinócitos HaCaT foram cultivados em meio EpiLife, cascade Biologics, Gibco, incl. HKGS, Gibco, tecnologias de vida. As substâncias de teste foram diluídas em meio igual e adicionadas em um volume de 2 mL por poço em placas de 6 poços. Todas as amostras são testadas em células 100% confluentes incubadas a 37 °C, 5% de CO2. Após 24h de incubação, todas as amostras foram removidas e as células lavadas duas vezes com solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco com Ca e Mg, Caprino. O isolamento do RNA foi realizado usando RNeasy® Mini Kit, Qiagen. O procedimento foi executado conforme descrito no RNeasy Mini Handbook.

[0116] As células foram lisadas e precipitadas com etanol, o homogenato foi lavado três vezes usando a coluna de rotação e o mRNA foi eluído com água purificada. Dependendo da amostra, o procedimento foi ligeiramente ajustado.

[0117] A concentração de RNA foi medida usando µCuvetteG 1.0 e BioPhotometer, Eppendorf medindo a absorção a 260 nm. Valores de controle, como E260/280 ou E260/230 foram calculados simultaneamente. A transcrição foi feita com um mínimo de 0,5-1 µg de RNA por amostra.

[0118] A transcrição reversa foi feita usando o Kit RNA-para-cDNA de alta capacidade, Applied Biosystems. O procedimento foi baseado no protocolo fornecido. Todas as amostras foram incubadas em um termociclador PCR, Biometra rodando por 60 min a 37 °C para transcrição reversa, seguido por 5 min a 95 °C (inativação enzimática) e mantendo a temperatura a 4 °C em sala de reação.

[0119] A PCR quantitativa em tempo real foi realizada usando o instrumento StepOne Plus Fast Real Time PCR, da Applied Biosystems. As etapas iniciais do RT-PCR incluíram uma primeira fase de aquecimento mantida por 20s a 95 °C, seguida por 40 ciclos de desnaturação de cDNA por 3 s a 95 °C e emparelhamento/alongamento a 60°C por 30s.

[0120] A análise foi feita pelo Método 2-∆CT - em detalhes:

1. Padronização de valores Ct com geração de referência (HPRT) ΔCTvalorgene = CTvalorgene - CTvalorGene de referência (HPRT)

2. Subtração de ΔCT-valor da amostra de controle (não tratada) e ΔCT- valor (tratada) ΔΔCTvalorgene = ΔCTvalortratado - ΔCTvalorcontrole

3. Cálculo da Razão de RQ (valor de quantificação relativa) RQ - valor = 2-ΔΔCT Um valor RQ de > 2 foi definido como indução relevante de um gene. Efeitos anti-inflamatórios de Lactobacillus plantarum HEAL 19 e HEAL 99

[0121] Os queratinócitos HaCaT foram cultivados em placas de 96 poços usando RPMI-A, meio estéril filtrado com L-Glutamina, Capricorn, suplementado com 10% de soro fetal de bezerro (FCS), Capricorn. As placas foram incubadas a 37 °C e 5% de CO2. Após 24 horas de privação de alimento com meio de cultura de células (RPMI, 1% FCS), as células foram lavadas uma vez. As suspensões de substâncias anti-inflamatórias/bactérias inativadas foram suspensas em meio de privação, aplicadas e incubadas por 24/48h com os parâmetros descritos acima. Dexametasona em uma concentração de 10 µM foi usada como controle positivo. Para remover as células bacterianas após a pré-incubação, todos os poços foram lavados com meio de cultura de células três vezes. IL-1alpha, Gibco, life technologies foi dissolvido em H2Odest, diluído em meio de privação e pipetado para poços, preferencialmente a uma concentração de 30 ng/mL. Alternativamente, uma suspensão de Staphylococcus aureus (DSM799) inativada por calor foi usada como agente pró-inflamatório em uma concentração de 0,1 mg/mL - 1 mg/mL de massa seca. Após 8h de incubação, os sobrenadantes foram separados. Todas as amostras foram armazenadas a -80 °C até análises posteriores.

[0122] As concentrações de IL-8 foram medidas com CXCL8/IL-8 humano, DuoSet ELISA, Development Systems, R&D Systems. O procedimento experimental foi realizado conforme descrito no protocolo fornecido.

[0123] Depois de calcular as médias dos valores duplicados/triplicados e subtração da densidade óptica padrão zero média, o cálculo foi feito usando quatro parâmetros de ajuste de curva logística para criar curvas padrão.

Indução de ácido hialurônico

[0124] Os progenitores de queratinócitos epidérmicos humanos (HEPKp) gerados por modelos de pele humana em 3D foram cultivados e tratados sistemicamente com substâncias de teste. Resumidamente, concentrações definidas de substâncias de teste foram adicionadas ao meio de cultura de células e cada modelo de pele foi tratado em placas de cultura de células por até 9 dias a 37 °C e 5% de CO2. Após o tratamento, os sobrenadantes coletados foram armazenados a -80 °C até análises posteriores. A viabilidade das células foi controlada pelo método padrão MTT.

[0125] As concentrações de ácido hialurônico foram medidas por ácido hialurônico TECOmedical mais ELISA. O procedimento experimental foi realizado conforme descrito no protocolo fornecido. Efeitos antimicrobianos das cepas de Lactobacillus

[0126] As curvas de crescimento de várias bactérias foram medidas fotometricamente a 620 nm. Inibição de Staphylococcus aureus:

[0127] MTP de 96 poços foram preparados de acordo com DIN58940-8 com meio CASO autoclavado (MERCK 1.05459) e substâncias de teste dissolvidas em DMSO ou água destilada. Os poços relevantes foram inoculados com S. aureus (DSM799/ATCC6538) usando culturas de estoque mantidas em glicerina a 10% a -20°C. Um inóculo de 1 - 6 x 106 cfu foi adicionado por poço. As substâncias de teste foram analisadas usando três ou quatro poços replicados durante a incubação a 37 °C durante 16 horas. As curvas de crescimento foram determinadas em cada poço por meio de absorção a 620 nm usando um Fotômetro Sunrise (Tecan, Áustria) e Software Magellan. Uma concentração de 125 ppm de farnesol e 4 ppm de triclosan foi utilizada como controle positivo para inibição do crescimento, ambos pré-dissolvidos em DMSO (Merck 802912).

[0128] Para o cálculo, as médias das absorções detectadas foram calculadas e normalizadas com valores em branco. Esses valores de OD foram plotados em função do tempo para apresentação gráfica. Indução do fator de hidratação filagrina em modelos de pele em 3D

[0129] Modelos tridimensionais de pele derivados de progenitores de queratinócitos epidérmicos humanos (HEPKp) e foram sistemicamente tratados com substâncias de teste em meio CnT-PR-3D por 4 a 9 dias. A liberação de filagrina foi detectada na mídia por Kit de Ensaio de Imunoabsorção Ligada por Enzima (ELISA) para Filagrina, da Cloud-Clone Corp. Eficácia de melhoria de barreira em modelos de pele 3D danificados por SDS para pele seca

[0130] Para essa finalidade, um estudo in vitro foi realizado em um sistema de modelo de epiderme em 3D para pele seca. O sistema modelo consistia em culturas de células de epiderme maduras com 14 dias de idade que apresentavam uma barreira cutânea epidérmica perturbada devido ao tratamento com SDS. A perturbação da barreira epidérmica foi medida como perda de lamelas lipídicas intercelulares. O desempenho do reparo da pele foi determinado por microscopia eletrônica de transmissão (TEM) após o tratamento com L. plantarum HEAL 19 formulado em uma emulsão cosmética ou emulsão placebo e depois cultivado para observar a reforma das lamelas lipídicas intercelulares. Estudos Ex vivo

[0131] Ensaios ex vivo foram realizados por Cutech Srl, Itália. Os efeitos das cepas de Lactobacillus descritas em vários parâmetros foram analisados em modelos ex vivo de pele. Foi utilizada pele humana de cirurgia plástica abdominal. As aplicações de suspensões de bactérias inativadas por calor foram feitas sistemicamente ou topicamente, em formulação ou resolvidas em meio de cultura de células. As concentrações e os tempos de incubação podem variar.

[0132] Todos os dados foram processados em termos de média, desvio padrão e erro padrão da média (EPM) para cada tratamento. Filagrina epidérmica, involucrina e citoqueratina 14

[0133] Para as análises, os modelos foram imunocorados com o anticorpo selecionado filagrina de coelho policlonal [H-300], involucrina monoclonal de camundongo (SY5) e/ou citoqueratina 14 (CK14) monoclonal de coelho (EPR17350). A quantidade de antígeno presente em cada lâmina foi avaliada estimando a intensidade e a distribuição do corante vermelho na epiderme. Os dados obtidos foram normalizados para o comprimento da lâmina basal. Integridade da barreira da pele (rodamina B)

[0134] Modelos ex vivo de pele foram tratados topicamente com as cepas L. plantarum antes da aplicação do particulado de diesel (ou seja, 1650b). Todas as amostras de pele foram incubadas a 35°C, 5% de CO2 e umidade do ambiente. No final da fase experimental, as amostras de pele foram colhidas coradas com Rhodaminde B, crio-fixadas e cortadas no criostato para consequente aquisição e análise das imagens. A análise da fluorescência da rodamina B foi realizada em duas seções da área da epiderme para cada modelo de pele. As imagens foram analisadas avaliando a fluorescência por meio do aplicativo Image-J (NIH, EUA). Efeitos anti-inflamatórios

[0135] Os modelos ex vivo de pele humana descritos acima foram usados para verificar o potencial anti-inflamatório das cepas L. plantarum. Os modelos foram tratados com uma emulsão cosmética L. plantarum HEAL 19 seguido da aplicação do agente nocivo externo e poluente 1650b, simulando a poluição do ar. Em um ponto final selecionado, o meio de cultura de células de órgãos foi retirado dos poços e analisado para IL-8 usando o conjunto Deluxe Human IL-8 da Biolegend®, Inc.

Estudos In vivo

[0136] Os ensaios in vivo foram realizados na Kosmoscience Ciência & Tecnologia Cosmética Ltda, Brasil. Eles avaliaram os parâmetros relevantes da pele após a aplicação de uma formulação cosmética o/a contendo L. plantarum HEAL 19 liofilizado.

[0137] A emulsão o/a tinha a seguinte composição: Fase Ingredientes INCI Placebo Ativo % % Glyceryl Oleate Citrate, A Dracorin GOC 2 2 Caprylic/Capric/Triglyceride LanetteO Cetearyl Alcohol 3 3 PCL líquido 100 Cetearyl Ethylhexanoate 2,5 2,5 Dragoxat 89 Ethylhexyl Isononanoate 2,2 2,2 Xiameter 200 Fluid Dimethicone 0,3 0,3 350 CS Acrylates/C10-30 alkyl acrylate. B Carbopol EDT 2020 0,2 0,2 Crosspolymer Keltrol CG Xanthan Gum 0,2 0,2 C Água ad 100 ad 100 SymSave H Hydroxyacetophenone 0,5 0,5 2-fenoxietanol Phenoxyethanol 0,5 0,5 EDTA disodium edta 0,1 0,1 D NaOH 10% 0,2 0,2 L. plantarum E - 1,0 HEAL19 - - Total= 100,00 100,00 pH 5,3 5,3

[0138] Vinte e dois indivíduos com pele extra seca participaram do estudo. A aplicação tópica da emulsão foi feita duas vezes ao dia na parte interna do antebraço. As medições ocorreram nos dias 0, 7, 14 e 21. Hidratação da pele por corneometria

[0139] A medição da capacitância foi realizada por meio de uma sonda Corneometer® 825 acoplada a um Adaptador Multi Probe, MPA 5 (CKeletronics, Alemanha). Foi calculada a variação da capacitância e da hidratação da pele fornecida pela formulação de L. plantarum HEAL 19 em relação ao placebo. Eficácia da barreira cutânea por evaporimetria

[0140] A perda de água transepidérmica (TEWL) foi medida usando uma sonda Tewameter® 300 acoplada a um Adaptador Multi Probe, MPA 5 (CKeletronics, Alemanha). Foi calculada a variação dos valores de TEWL e a fortificação da barreira cutânea fornecida pela formulação de L. plantarum HEAL 19 em relação ao placebo. A fortificação da barreira cutânea pode ser observada como diminuição do valor de TEWL.

[0141] Os seguintes resultados demonstram a eficiência da presente invenção. Experiências únicas devem ilustrar, mas não limitar os efeitos da invenção. Exemplo 1: expressão do gene AMP em queratinócitos HaCa

[0142] O L. plantarum HEAL 19 induz a liberação de uma ampla faixa de peptídeos antimicrobianos em queratinócitos humanos. Todos esses peptídeos juntos representam um sistema de defesa complexo da pele humana. Defensinas, por exemplo, que são capazes de matar bactérias Gram positivas, foram reguladas positivamente. Em suma, os peptídeos regulados positivamente são eficazes contra um amplo espectro de bactérias Gram positivas e Gram negativas potencialmente patogênicas, fungos, parasitas eucarióticos e/ou vírus.

[0143] A Figura 1 mostra a expressão gênica de peptídeos antimicrobianos em queratinócitos HaCaT após 24 h de tratamento com 0,05% de L. plantarum HEAL 19. A expressão do gene foi medida usando matrizes de genes; indução foi definida como um valor RQ calculado de >2.

[0144] Os resultados demonstram que AMPs importantes como β- Defensina 1, 3 ou 4 e/ou Psoriasina e/ou Calprotectina são induzidos pelo tratamento com L. plantarum HEAL 19. Este tratamento resulta em maior expressão de AMPs na pele humana, o que está relacionado a uma primeira linha de defesa mais forte na pele humana e, portanto, suporta a barreira de pele. Além disso, a expressão induzida de β-Defensina ou Catelicidina pode equilibrar a impressão digital do AMP em doenças como a dermatite atópica. Assim, o microbioma da pele pode ser restaurado, mantido e/ou melhorado pelo tratamento de L. plantarum HEAL 19.

[0145] As induções de AMPs por L. plantarum HEAL 19 são dependentes da concentração. Na Figura 2, a indução dependente da concentração de β- Defensina 3 é mostrada. Os queratinócitos HaCaT foram tratados por 24 horas com várias concentrações de L. plantarum HEAL 19. Isso resulta em valores RQ calculados de 243,6 (por 0,1% L. plantarum HEAL 19) a 2,3 (0,0125% de L. plantarum HEAL 19).

[0146] Efeitos semelhantes podem ser observados usando L. plantarum HEAL 99 quando os queratinócitos HaCaT são tratados. A Figura 3 mostra exemplarmente várias induções de genes codificadores de AMP após 24 h de tratamento. RNase 7, inibidor de β-Defensina 3 Peptidase 3, Fosfolipase A2 e inibidor de peptidase de leucócito secretor são induzidos de forma dependente da concentração (0,1 e 0,05% foram testados) com L. plantarum HEAL 99. Resultados similares foram encontrados usando L. plantarum Heal 19.

[0147] Em modelos de pele humana em 3D epidérmico, foi demonstrado que vários genes codificadores de AMP são induzidos de forma semelhante (dados não mostrados). Exemplo 2: Efeitos anti-inflamatórios de cepas de Lactobacillus (in vitro/ex vivo)

[0148] As doenças, lesões ou irritações de pele estão principalmente relacionadas a uma inflamação das áreas afetadas da pele. Foi demonstrado que, além dos efeitos benéficos descritos das cepas de Lactobacillus, sua aplicação tópica resulta em um efeito anti-inflamatório. Neste contexto, as cepas de Lactobacillus apoiam a saúde da pele por um mecanismo adicional.

[0149] A Figura 4 mostra o efeito anti-inflamatório de L. plantarum HEAL 19 e 99 e dexametasona, que foi incluído como um controle positivo. Os queratinócitos HaCaT confluentes foram pré-tratados com o material de teste L. plantarum HEAL 99 com 0,1 mg/mL, L. plantarum HEAL 19 com 0,25 mg/mL e dexametasona em 30 µM. Após 48 horas de incubação, os queratinócitos foram estimulados usando 30 ng/mL de IL-1alfa pró-inflamatória por 8 horas. A liberação subsequente de IL-8 no meio de cultura de células foi medida usando ELISA. Por aplicação das cepas de Lactobacilli, a liberação de IL-8 de HaCaTs pode ser reduzida para 12,6% e 5,1% (Heal 99 e Heal 19), respectivamente, em comparação com o controle de IL-1alfa não pré-tratado. Esses efeitos anti- inflamatórios são semelhantes aos da dexametasona (redução para 20,4%), indicando a potência anti-inflamatória dessas duas cepas e reforçando seu potencial para uso em calmantes da pele.

[0150] Foi demonstrado que o efeito anti-inflamatório semelhante de L. plantarum HEAL 19 pode ser observado em modelos ex vivo de pele humana. Conforme mostrado na Figura 5, após a estimulação com particulado de diesel (1650b), simulando a poluição do ar, a detecção de IL-8 no meio de cultura de células é reduzida para 75% em modelos tratados com L. plantarum HEAL 19, em comparação com o controle com placebo. Provocado pelo tratamento tópico com uma formulação cosmética contendo L. plantarum HEAL 19 a integridade da barreira cutânea é melhorada, a pele fica relaxada e suavizada.

[0151] A inflamação na pele não pode ser induzida apenas por citocinas pró-inflamatórias, mas também por bactérias, especificamente bactérias patogênicas para a pele, pelo contato célula a célula. A Figura 6 mostra que os queratinócitos HaCaT pré-tratados com 0,25 mg/mL de L. plantarum HEAL 19 por 48 h reduzem drasticamente a inflamação induzida por S. aureus. A concentração de IL-8 no meio pode ser reduzida para 31% em comparação apenas com controle estimulado de S. aureus.

[0152] O S. aureus é frequentemente encontrado em lesões cutâneas eczemosas de pacientes com AD e é frequentemente responsável por agravar o estado da doença e/ou estimular a inflamação. O tratamento com cepas de L. plantarum na pele resulta em menor inflamação, concomitantemente reduz a vermelhidão e a pele é suavizada e relaxada. Exemplo 3: Efeitos antimicrobianos de Lactobacillus plantarum HEAL 19 e HEAL 99

[0153] Sabe-se que S. aureus é consistentemente encontrado em lesões cutâneas eczemosas de pacientes com AD, por exemplo, e parece ser importante e responsável por agravar o quadro da doença. As infecções potenciais da pele podem ser evitadas pela inibição do crescimento de patógenos, como S. aureus, pela aplicação das cepas L. plantarum na pele.

[0154] As curvas de crescimento de S. aureus foram criadas medindo a densidade óptica durante 16 h de incubação. A Figura 7 mostra os efeitos de inibição do crescimento de S. aureus quando tratado com 0,1 e/ou 0,05% de L. plantarum HEAL 19. Em resumo, o tratamento tópico da pele usando a invenção descrita pode contribuir para reduzir e/ou prevenir a inflamação e infecção ao inibir o crescimento de S. aureus. Exemplo 4: Reforço da barreira A: Indução de involucrina e citoqueratina 14 (CDK14) em estudos ex vivo

[0155] A involucrina é uma proteína que fornece suporte estrutural às células da pele e, portanto, permite que a célula resista à invasão de microrganismos. A citoqueratina 14 é geralmente encontrada como um heterodímero e forma o citoesqueleto das células epiteliais. Ambas as proteínas marcadoras aumentaram por tratamento tópico usando várias concentrações de L. plantarum HEAL 19 em modelos ex vivo de pele humana regenerada, como mostrado na Figura 8 e Figura 9.

[0156] É aqui demonstrado que o tratamento tópico da pele com a invenção descrita conduz diretamente a um fortalecimento da função de barreira da pele. B: Integridade de barreira da pele

[0157] A invenção mostra uma atividade protetora na barreira da pele pela redução da penetração da rodamina B em modelos ex vivo após tratamento com L. plantarum HEAL 19 e estimulação com partículas de diesel (1650b). A avaliação da morfologia da pele permite determinar se um composto afeta a estrutura das amostras de pele tratadas. Para realizar esta avaliação, as seções de pele foram coradas com coloração de rodamina B. Após a coloração para cada amostra de pele, a integridade da epiderme foi avaliada. A Figura 10 mostra que o tratamento com L. plantarum HEAL 19 melhora a integridade da pele e tem uma atividade protetora na função de barreira da pele. C: Eficácia de melhoria da barreira

[0158] As lamelas lipídicas intercelulares no espaço intercelular do estrato córneo, usadas como uma medida de qualidade da barreira epidérmica, foram analisadas e avaliadas quantitativamente. O tratamento tópico com 0,5% de L. plantarum HEAL 19 em uma formulação para o cuidado da pele leva a um desempenho de reparo aumentado do sistema de modelos epidérmicos para pele seca em 3D (Figura 11). A aplicação tópica de uma formulação para o cuidado da pele contendo a invenção fortalece a função de barreira epidérmica e apoia o desempenho de reparo da pele. Exemplo 5: Indução de ácido hialurônico em modelos de pele em 3D

[0159] O ácido hialurônico (HYA) desempenha uma série de papéis importantes na pele. É necessário na pele manter a função de barreira epidérmica e a estrutura do estrato córneo. Além disso, desempenha um papel importante na imobilização de água nos tecidos, na reparação de tecidos ou na influência da diferenciação e proliferação celular (Weindl et al 2004). Tudo isso pode ser realizado com o tratamento das cepas de L. plantarum descritas.

[0160] A Figura 12 mostra o aumento da liberação de ácido hialurônico em modelos de pele HEPKp tridimensionais após 8 dias de tratamento com 0,005% de L. plantarum HEAL 19 ou HEAL 99 em meio de cultura de células. Em comparação com o controle do meio, a liberação de ácido hialurônico aumentou para 145 e 115%. Exemplo 6: Hidratação da pele A: Liberação de filagrina de modelos de pele em 3D

[0161] O aumento da liberação da proteína filagrina para o meio pode ser detectado após 3 a 9 dias de incubação. A Figura 13 mostra o aumento da liberação de filagrina (FLG) em meio de modelos de pele tridimensionais HEPKp tratados com Lactobacillus após 8 dias. Com as concentrações utilizadas de 0,05% de L. plantarum HEAL 19 e HEAL 99, o FLG aumentou no meio para 215 e 150%, respectivamente.

[0162] A aplicação tópica da invenção descrita leva à regulação positiva da filagrina na pele humana e, subsequentemente, ao fortalecimento da barreira da pele e efeitos positivos na hidratação da pele. B: Indução de filagrina ex vivo

[0163] A indução de filagrina devido ao tratamento tópico com a invenção foi confirmada em estudos usando modelos de pele humana ex vivo. A Figura 14 mostra a indução dependente da concentração da liberação de filagrina após o tratamento com várias concentrações de L. plantarum HEAL 19. Quanto maior a concentração aplicada, maior a liberação de filagrina de modelos ex vivo de pele humana.

[0164] Efeitos dependentes de concentração similares foram observados em experimentos in vitro investigando modelos de pele humana HEPKp 3D (dados não mostrados). Exemplo 7: dados in vivo

[0165] Para confirmar os efeitos observados em sistemas modelo, um estudo in vivo foi realizado com um painel de indivíduos que sofrem de pele extra seca. O tratamento térmico de L. plantarum HEAL 19 foi incorporado a um creme cosmético e aplicado na parte interna do antebraço dos provadores. Os efeitos na capacidade de retenção de umidade da pele (capacitância) e perda de água transepidérmica (TEWL) foram monitorados após 0, 7, 14 e 21 dias em comparação com áreas não tratadas e tratadas com placebo.

[0166] O estudo in vivo confirmou os efeitos sugeridos por investigações biológicas moleculares: a capacitância aumentou de forma constante ao longo do tempo de tratamento e os efeitos foram significativamente mais fortes do que nos tratamentos com placebo em todos os pontos de tempo. O TEWL diminuiu significativamente nos tratamentos com creme contendo Lactobacilii, enquanto o placebo não teve efeito.

[0167] Estes resultados demonstram a capacidade das cepas de Lactobacilli tratadas termicamente inventadas para aumentar a hidratação e a resistência de barreira da pele, levando a uma melhora significativa da saúde da pele.

[0168] As Figuras 15 e 16 mostram o conteúdo de água e a resistência de barreira da pele conforme determinado pela capacitância e TEWL ao longo do tempo. Exemplo 8: Curvas de crescimento para L plantarum spp.

[0169] Um MTP de 96 poços foi preparado com meio de MRS autoclavado (Oxoid CM0359). Três poços replicados foram inoculados com cada cepa de L. plantarum spp. usando culturas de estoque mantidas em glicerina a 10% em - 20°C. Um inóculo de OD = 0,1 foi adicionado por poço e o MTP de 96 poços incubado a 37°C por 16 horas. As curvas de crescimento foram determinadas em cada poço por meio de absorção a 620 nm usando um Fotômetro Sunrise (Tecan, Áustria) e Software Magelan. A solução salina (solução de cloreto de sódio a 0,9%) foi usada como controle de crescimento negativo.

[0170] Para o cálculo, foram calculadas as médias de absorções detectadas e plotadas em função do tempo de apresentação gráfica. As cepas testadas, bem como as curvas de crescimento obtidas podem ser vistas na Figura 17. Exemplos de Formulação 1 a 15

[0171] Formulações (composições) compreendendo Lactobacilli de acordo com a invenção com efeitos calmantes e fortalecimento de barreira da pele:

1. Creme de dia clareador de pele o/a 2: Loção calmante para a pele 3: Após o protetor solar, redução da coceira 4: Spray corporal calmante 5: Loção de proteção solar (o/a, proteção de ampla faixa) 6: Creme noturno o/a 7: Xampu anti-caspa calmante de couro cabeludo 8: Creme autobronzeador 9: Creme anti-coceira para reparar a barreira 10: Antiperspirante/desodorante roll-on 11: Emulsão com proteção UV-A/B de ampla faixa

12: Spray de proteção solar UV-A/B de ampla faixa com baixo teor de óleo 13: Bálsamo iluminador da pele com proteção UV-A/UV-B 14: Condicionador de cabelo calmante para couro cabeludo com proteção UV-B/UV-A, com enxágue 15: Condicionador anti-coceira, sem enxágue NOME DA % POR PESO/EXEMPLO DE FORMULAÇÃO MATÉRIA-PRIMA/ INCI 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

INCI Lactobacillus plantarum 0,1 0,2 0,3 0,05 0,2 0,5 0,4 0,02 0,6 0,1 0,3 0,01 1 0,1 0,15 HEAL19 (pasteurizado) Lactobacillus plantarum 0,05 0,1 0,1 0,02 0,1 0,1 0,1 0,05 0,2 0,1 0,05 0,02 0,2 0,3 0,15 HEAL99 (pasteurizado) Abil 350 Dimethicone 0,5 2,0 1,0 0,5 0,5 0,3 0,1 Alantoína Allantoin 0,2 0,1 0,25 Gel Water (Aqua). Concentrado Aloe 3,0 3,0 0,45 de Aloe Vera Barbadensis 10/1* Leaf Juice Alpinia Officinarum Leaf Extract. Mistura de Alpinia extrato de conchigera 1,0 0,5 folha de Alpinia Leaf Extract. Alpinia Blepharocalyx Leaf Extract Aluminium Alugel 34 TH 1,0 Stearate Arbutin β-Arbutin 0,2 (-)-alfa Bisabolol 0,15 0,2 0,1 Bisabolol Butilenoglicol Butylene Glycol 5,0 3,0 3,0 Carbopol Carbomer 0,1 0,2 0,2 Ultrez-10

NOME DA % POR PESO/EXEMPLO DE FORMULAÇÃO MATÉRIA-PRIMA/ INCI 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

INCI Cetylhydroxypr Ceramida BIO* oline 0,1 0,2 0,5 Palmitamide Dicaprylyl Cetiol OE 4,0 Ether Butyrospermu Cetiol SB 45 m Parkii (Shea 1,0 Butter) Ácido cítrico Citric Acid 0,4 0,3 0,3 sol. 10% Comperlan 100 Cocamide MEA 0,5 Crinipan AD Climbazole 0,5 Curcuma Extrato de Xanthorrhiza 0,5 Cúrcuma Root Extract Curcuma Extrato de raiz Longa 1,5 de Cúrcuma (Turmeric) Root Extract Dehyquart A Cetrimonium 0,2 0,5 CA Chloride Dehyquart SP Quaternium-52 0,5 4,0 Dihydroxyacet Diidroxiacetona 5,0 one Cyclohexasilox- Fluido Dow ane and 2,0 Corning 246 Cyclopentasilox -ane Fluido Dow Cyclomethicon 0,5 Corning 345 e D-Pantenol Panthenol 1,0 Glyceryl Dracorin® CE * Stearate 5,0 5,0 1,5 1,0 1,0 Citrate Glyceryl Oleate Dracorin® GOC Citrate. 2,0 * Caprylic/Capric Triglyceride

NOME DA % POR PESO/EXEMPLO DE FORMULAÇÃO MATÉRIA-PRIMA/ INCI 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

INCI Water (Aqua). Butylene Glycol Drago-Beta- Glycerin. Avena 0,3 Glucan * Sativa (Oat). Kernel Extract Glycerin. Triticum Vulgare Dragoderm®* 2,0 (Wheat) Gluten. Water (Aqua). Water (Aqua), Glycerin, Avena DragoCalm® 1,0 0,8 Sativa (Oat) Kernel Extract Water (Aqua). Butylene Glycol Drago-Oat- Avena Sativa 1,0 2,0 Active * (Oat) Kernel Extract Sorbitan Isostearate. Hydrogenated Dragosan W/O Castor Oil. 6,0 P* Ceresin. Beeswax (Cera Alba) Dragosantol® Bisabolol 0,3 0,1 0,3 0,2 0,1 0,1 100 * Ethylhexyl Dragoxat® 89 * Ethylisononan- 2,0 0,1 oate EDETA BD Disodium EDTA 0,1 0,1 0,1 0,1 Potassium Cetyl Phosphate. Emulsiphos® * 2,0 1,5 2,0 1,5 0,1 Hydrogenated Palm Glycerides

NOME DA % POR PESO/EXEMPLO DE FORMULAÇÃO MATÉRIA-PRIMA/ INCI 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

INCI 30, Etanol 96% Ethanol 2,0 13,0 5,0 0 Dehydroacetic Acid. Benzoic Acid. Phenoxyethan Euxyl® K702 0,5 ol.Polyaminopr opyl Biguanide. Ethylhexylglyce rin Sodium Benzoate. Euxyl® K712 0,2 0,3 Potassium Sorbate Glycerin. Water Extrapone® (Aqua). Chá Verde GW Camellia 0,2 0,7 * Sinensis Leaf Extract Glycerin. Water (Aqua). Extrapone® Rosmarinus 0,3 0,5 Alecrim GW * officinalis (Rosemary) Leaf Extract Propylene Glycol. Hamamelis Virginiana Extrapone® (Witch Hazel) Hamamélia Water. Water 1,0 Destilado (Aqua). incolor * Hamamelis Virginiana (Witch Hazel) Extract Farnesol * Farnesol 0,5 Fragrância Fragrance 0,3 “Rosa” *

NOME DA % POR PESO/EXEMPLO DE FORMULAÇÃO MATÉRIA-PRIMA/ INCI 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

INCI Fragrância Fragrance 0,3 0,3 0,3 0,2 0,4 0,4 0,5 0,3 0,3 1,0 0,5 0,4 0,5 0,1 “BRANCO” * Frescolat®MGA Menthone 0,5 0,3 * Glycerol Acetal Frescolat®ML Menthyl 0,8 0,2 crist.* Lactate Menthyl Frescolat®X- Ethylamido 1,0 COOL * Oxalate Genapol LRO Sodium 37,0 líquido Laureth Sulfate Glicerol 85% Glycerin 3,0 2,0 4,0 4,7 2,0 1,5 3,0 Estearato de Glyceryl 2,0 2,0 2,0 4,0 glicerila Stearate Pentylene Hydrolite®-5 * 5.0 3.5 Glycol Water. Glycerin. Sodium Lactate. TEA Lactate. Serine. Lactic Acid. Urea. Sorbitol. Hydroviton® 24 Sodium 1,0 4,5 * Chloride. Lauryl Diethylenedi- aminoglycine. Lauryl Aminopropyl- glycine. Allantoin Water. Pentylene Glycol. Hydroviton® Glycerin. 1,0 1,0 PLUS* Fructose. Urea. Citric Acid. Sodium Hydroxide.

NOME DA % POR PESO/EXEMPLO DE FORMULAÇÃO MATÉRIA-PRIMA/ INCI 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

INCI Maltose. Sodium PCA. Sodium Chloride. Sodium Lactate. Trehalose. Allantoin. Sodium hyaluronate. Glucose Irgasan DP 300 Triclosan 0,3 Diisopropyl Isoadipate® * 1,0 1,0 Adipate Isodragol® * Triisononanoin 2,0 3,0 1,0 Palmitato de Isopropyl 4,0 4,0 Isopropila Palmitate Karion F Sorbitol 2,0 Keltrol RD Xanthan Gum 0,2 0,1 0,2 0,3 0,2 Ácido kójico Kojic Acid 1,0 0,5 0,2 0,3 Lanette 16 Cetyl Alcohol 1,0 1,0 1,2 Sodium Lanette E Cetearyl 0,7 Sulfate Cetearyl Lanette O 3,0 1,0 2,0 Alcohol Lara Care A- Galactoarabina 0,3 2,5 1,5 200 n Cloreto de Magnesium 0,7 magnésio Chloride Polyquaternium- Merquat 550 0,5 7 Sodium NaOH sol. 10% 0,3 Hydroxide 4'.5.7- Trihydroxyflavo Naringin ne7-O- 0,5 2,0 Neohesperidosi de

NOME DA % POR PESO/EXEMPLO DE FORMULAÇÃO MATÉRIA-PRIMA/ INCI 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

INCI Natrosol 250 Hydroxyethyl- 0,3 HHR cellulose Butyl Methoxy- Neo Heliopan® dibenzoyl- 1,0 357 * methane Disodium Neo Heliopan® Phenyl AP * Dibenzimidazol 10 22,0 1,5 (10% como sal e de sódio) Tetrasulfonate Ethylhexyl Neo Heliopan® Methoxy- 5,0 3,0 25,0 AV * cinnamate Isoamyl p- Neo Heliopan® Methoxycinna 5,0 E1000* mate Neo Heliopan® Homosalate 5,0 5,0 HMS * Neo Heliopan® Phenylbenz- Hydro* imidazole 6,7 (15% como sal Sulfonic Acid de sódio) 4- Neo Heliopan® 33, 10, Methylbenzyl- 1,5 MBC * 3 0 idene Camphor Neo Heliopan® Ethylhexyl 5,0 2,0 OS* Salicylate Trideceth-9. Neo PCL wssl. PEG-5 N* Ethylhexanoat e. Water Caprylic/Capric 10, Óleo neutro 6,0 4,0 2,0 6,0 2,0 1,0 Triglyceride 0 Oxynex 2004 BHT 0,1 Óleo de Mineral Oil 4.0 parafina PCL Líquido Cetearyl 12, 3,0 5,0 7,0 3,0 3,0 0,6 0,3 100* Ethylhexoate 0

NOME DA % POR PESO/EXEMPLO DE FORMULAÇÃO MATÉRIA-PRIMA/ INCI 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

INCI Stearyl Heptanoate. PCL sólido * 2,0 3,0 Stearyl Caprylate Acrylates/C10- 30 Alkyl Pemulen TR-2 0,3 0,2 Acrylate Crosspolymer Polímero JR Polyquaterniu 0,1 400 m-10 Propylene Propileno glicol 5,0 0,8 0,8 0,8 Glycol Palmitato de Retinyl Retinila em 0,2 Palmitate Óleo Polyacrylamide. C13-14 Sepigel 305 1,0 Isoparaffin. Laureth-7 Ascorbil Sodium Fosfato de Ascorbyl 2,0 1,0 Sódio Phosphate Benzoato de Sodium 0,5 Sódio Benzoate Cloreto de Sodium 1,0 sódio Chloride Hidróxido de Sodium 0,3 0,6 0,4 2,8 sódio (10% sol.) Hydroxide PEG-40 Hydrogenated Solubilizador Castor Oil. 2,0 2,2 611674 * Trideceth-9. Water (Aqua). Helianthus Annuus Óleo de girassol 5,0 (Sunflower) Seed Oil Óleo de Prunus dulcis 5,0 amendoa doce

NOME DA % POR PESO/EXEMPLO DE FORMULAÇÃO MATÉRIA-PRIMA/ INCI 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

INCI Pentylene Glycol. Butylene SymCalmin® Glycol. 1,0 1,0 Hydroxyphenyl Propamidoben zoic Acid 2-Methyl 5- SymDeo® Cyclohexylpent 0,5 B125* anol Dimethyl SymDeo® Phenylbutanol 0,5 MPP*

1.2- Symdiol®68* Hexanediol. 0,5 Caprylylglycol.

1.2- Hexanediol. Symdiol®68T* 0,5 Caprylylglycol. Tropolone Aqua, Glycerin, 1,2-Hexandiol, SymGlucan® 5 Caprylyl Glycol, Beta-Glucan Maltodextrin. Rubus SymMatrix® * Fruticosus 0,1 0,3 1,0 (Blackberry) Leaf Extract SymMollient®S Cetearyl 1,5 * Nonanoate Trideceth-9, SymMollient® PEG-5 0,5 2,0 W/S Isononanoate, Water (Aqua) Phenoxyethan ol, SymOcide® PH 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 0,2 1,2 Hydroxyacetop henone,

NOME DA % POR PESO/EXEMPLO DE FORMULAÇÃO MATÉRIA-PRIMA/ INCI 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

INCI Caprylyl Glycol, Aqua Phenoxyethan ol. Decylene SymOcide®PS * 1,0 Glycol. 1,2 Hexanediol Polioxietileno Laureth-9 0,5 1,0 (9) Lauril Eter Bisabolol Zingiber SymRelief® 100 Officinale 0,1 * (Ginger) Root Extract Bisabolol, Hydroxymetho SymRelief® S 0,2 xyphenyl Decanone Hexyldecanol. Bisabolol. Cetylhydroxypr oline SymRepair® Palmitamide. 2,0 100* Stearic Acid. Brassica Campestris (Rapeseed) Sterols Pentylene SymSitive®160 Glycol. 4-t- 1,5 0,5 9* Butylcyclohexa nol Water. Pentylene Glycol. Sodium Lauryl SymSol®PF3 * 1,5 Sulfoacetate. Sodium Oleoyl Sarcosinate. Sodium

NOME DA % POR PESO/EXEMPLO DE FORMULAÇÃO MATÉRIA-PRIMA/ INCI 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

INCI Chloride. Disodium Sulfoacetate. Sodium Oleate. Sodium Sulfate Zingiber SymVital® Officinale 0,1 0,1 AgeRepair* (Ginger) Root Extract SymWhite®377 Phenylethyl 0,5 0,5 1,0 * Resorcinol Cocamidoprop Tego Betain L7 6,0 1,0 1,0 yl Betaine Polyglyceryl 3- Tegosoft PC 31 0,3 Caprate C12-15 Alkyl Tegosoft TN 5,0 5,0 Benzoate Texapon NSO Sodium 4,0 BZ Laureth Sulfate Acetato de Tocopheryl 0,5 0,5 3,0 0,3 0,5 tocoferol Acetate Trietanolamina. Triethanolamin 0,5 0,5 99% e Água. ad 100 Water (Aqua). desmineralizada Extrato de Curcuma Folha de Zedoaria Leaf 2,0 1,5 Zedoaria Extract Aluminium Zirconium Pentachloro- Zirkonal L 450 37,0 hydrate (40 % aqueous solution) Referências citadas:

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Nature, 415: 389-395, 2012.

Claims (15)

REIVINDICAÇÕES

1. Microrganismo ou mistura compreendendo ou consistindo em dois microrganismos para uso no tratamento e/ou prevenção de condições da pele por aplicação tópica, em que o(s) microrganismo(s) é/são selecionados a partir do grupo que consiste em Lactobacillus plantarum HEAL 19 (DSM 15313) e Lactobacillus plantarum HEAL 99 (DSM 15316).

2. Microrganismo ou mistura para uso de acordo com a reivindicação 1, em que o(s) microrganismo(s) foi/foram submetidos a um tratamento térmico e são preferencialmente microrganismos atenuados ou mortos tendo uma estrutura física intacta.

3. Microrganismo ou mistura para uso de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que a(s) condição(ões) da pele é/são perda da função de barreira da pele, condições inflamatórias da pele e/ou crescimento de microrganismos patogênicos, preferencialmente em que a condição da pele é selecionada a partir do grupo que consiste em dermatite atópica, infecção microbiana, pele seca, pele com coceira, pele sensível, pele atópica, inflamação da pele, disbiose microbiana, rosácea, psoríase, erupção cutânea e acne.

4. Preparação compreendendo ou consistindo em um ou uma mistura de dois microrganismos selecionados a partir do grupo que consiste em Lactobacillus plantarum HEAL 19 (DSM 15313) e Lactobacillus plantarum HEAL 99 (DSM 15316) e um carreador, em que a preparação é uma preparação particulada, em particular um granulado ou um pó.

5. Preparação de acordo com a reivindicação 4, em que o(s) microrganismo(s) foi/foram submetidos a um tratamento térmico e são preferencialmente microrganismos atenuados ou mortos tendo uma estrutura física intacta.

6. Preparação de acordo com a reivindicação 4 ou 5, em que o carreador é selecionado a partir do grupo que consiste em inulina, amido, goma arábica, proteínas de soro de leite, leite em pó desnatado e maltodextrina, bem como combinações das mesmas, preferencialmente maltodextrina.

7. Preparação de acordo com qualquer das reivindicações 4 a 6, em que a razão de microrganismo(s) para carreador está na faixa de 1:9 a 3:7, preferencialmente 1,5:8,5 a 2,5 a 7,5 e/ou em que a preparação compreende 10 a 30% em peso de microrganismo(s) e 70 a 90% em peso do carreador, preferencialmente 15 a 25% em peso de microrganismo(s) e 75 a 85% em peso do carreador, em cada caso em relação ao peso total da preparação.

8. Método para produzir uma preparação compreendendo ou consistindo em um ou uma mistura de dois microrganismos selecionados a partir do grupo que consiste em Lactobacillus plantarum HEAL 19 (DSM 15313) e Lactobacillus plantarum HEAL 99 (DSM 15316) e um carreador, preferencialmente uma preparação de acordo com qualquer das reivindicações 4 a 7, compreendendo a(s) etapa(s): (i) fornecer um ou uma mistura de dois microrganismos selecionados a partir do grupo que consiste em Lactobacillus plantarum HEAL 19 (DSM 15313) e Lactobacillus plantarum HEAL 99 (DSM 15316); (ii) opcionalmente, submeter o(s) microrganismo(s) da etapa (i) a um tratamento térmico, preferencialmente a uma temperatura na faixa de 60 a 121°C por 1 segundo a 120 minutos; (iii) combinar o(s) microrganismo(s) da etapa (i) ou (ii) com um carreador e adicionalmente processar a combinação para obter um granulado ou um pó, preferencialmente por liofilização, secagem por pulverização ou granulação.

9. Composição farmacêutica ou cosmética ou produto farmacêutico ou cosmético para aplicação tópica na pele compreendendo um ou uma mistura de dois microrganismo(s) selecionados a partir do grupo que consiste em

Lactobacillus plantarum HEAL 19 (DSM 15313) e Lactobacillus plantarum HEAL 99 (DSM 15316) ou compreendendo uma preparação de acordo com qualquer das reivindicações 4 a 7, em que a quantidade total do(s) microrganismo(s) é suficiente para tratar e/ou prevenir condições da pele, em particular, condições inflamatórias da pele, perda da função de barreira da pele e/ou crescimento de microrganismos patogênicos, preferencialmente em que a quantidade total do(s) microrganismo(s) está na faixa de 0,01 a 5% em peso seco, preferencialmente de 0,02 a 1% em peso seco, em cada caso em relação ao peso total da composição, e/ou em que a quantidade total do(s) microrganismo(s) é pelo menos 10^8, preferencialmente 5 x 10^8 células ou pelo menos 10^11 células por grama da composição total tal como na faixa de 10^8 a 5 x 10^10, preferencialmente de 10^9 a 10^10 células por grama da composição total.

10. Composição farmacêutica ou cosmética ou produto de acordo com a reivindicação 9, em que a composição ou produto é selecionado a partir do grupo que consiste em óleo em água ou água em emulsão de óleo, unguento, creme, loção e gel, preferencialmente em que a composição ou produto compreende, adicionalmente, um ou mais componentes selecionados a partir do grupo que consiste em carreadores, excipientes e ingredientes ativos adicionais.

11. Método para produzir uma composição ou produto farmacêutico ou cosmético, preferencialmente uma composição ou produto farmacêutico ou cosmético de acordo com a reivindicação 9 ou 10, compreendendo as etapas: (i) fornecer um ou uma mistura de dois microrganismo(s) selecionados a partir do grupo que consiste em Lactobacillus plantarum HEAL 19 (DSM 15313) e Lactobacillus plantarum HEAL 99 (DSM 15316), preferencialmente em que o(s) microrganismo(s) foi/foram submetidos a um tratamento térmico e são preferencialmente microrganismos atenuados ou mortos tendo uma estrutura física intacta, ou fornecer uma preparação de acordo com qualquer das reivindicações 4 a 7 ou uma preparação produzida por um método de acordo com a reivindicação 8, e (ii) combinar o(s) microrganismo(s) ou a preparação da etapa (i) com uma ou mais substâncias selecionadas a partir de carreadores, excipientes e ingredientes ativos adicionais para obter uma composição ou produto farmacêutico ou cosmético.

12. Uso cosmético de um microrganismo ou mistura compreendendo ou consistindo em dois microrganismos para aplicação tópica na pele, em particular para melhorar a aparência da pele, em que o(s) microrganismo(s) é/são selecionados a partir do grupo que consiste em Lactobacillus plantarum HEAL 19 (DSM 15313) e Lactobacillus plantarum HEAL 99 (DSM 15316), preferencialmente em que o(s) microrganismo (s) foi/foram submetidos a um tratamento térmico e/ou são microrganismos atenuados ou mortos tendo uma estrutura física intacta.

13. Uso cosmético de acordo com a reivindicação 12 para reduzir ou prevenir a irritação da pele, pele seca, erupção cutânea, acne, e/ou envelhecimento da pele.

14. Uso cosmético de acordo com a reivindicação 12 ou 13, em que o(s) microrganismo(s) é/são usados na forma de uma preparação de acordo com qualquer das reivindicações 4 a 7 ou uma preparação produzida por um método de acordo com a reivindicação 8.

15. Método cosmético para melhorar a aparência da pele, em particular para reduzir ou prevenir a irritação da pele, pele seca, erupção cutânea, acne e/ou envelhecimento da pele, compreendendo a etapa i) aplicar um microrganismo ou mistura compreendendo ou consistindo em dois microrganismos topicamente à pele, em que o(s) microrganismo(s) é/são selecionados a partir do grupo que consiste em Lactobacillus plantarum HEAL 19 (DSM 15313) e Lactobacillus plantarum HEAL 99 (DSM 15316), ou aplicar uma preparação de acordo com qualquer das reivindicações 4 a 7 ou preparação produzida por um método de acordo com a reivindicação 8 ou uma composição ou produto cosmético de acordo com a reivindicação 9 ou 10 na pele, preferencialmente em que o(s) microrganismo(s) foi/foram submetidos a um tratamento térmico e/ou são microrganismos atenuados ou mortos tendo uma estrutura física intacta.