CN101384269B - 乳酸杆菌用于治疗病毒感染的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及至少一种选自乳酸杆菌的益生菌菌株在制备用于治疗和/或预防病毒感染的药物组合物中的用途。

Description

乳酸杆菌用于治疗病毒感染的用途

发明领域

本发明涉及至少一种选自乳酸杆菌的益生菌菌株用于制备用于治疗和/或预防病毒感染的药物组合物的用途。

背景技术

益生菌被定义为当给予足够量时对接受者有益的活微生物。乳酸杆菌(Lactobacilli)和双歧杆菌(bifidobacteria)是益生菌制品中最常用的细菌。这些细菌通常是安全的，基于这些生物体的益生制品也是这样。对于所有年龄组和免疫损伤的个体，都没有致病性。不同的益生菌的摄入显示出其具有对不同的生理学或病理学状态的临床益处。在由抗生素治疗或轮状病毒感染引起的腹泻方面显示了最明确的作用。还有研究显示摄入益生菌之后，在炎性肠疾病，特异性皮炎和血胆固醇过多方面有积极的临床作用。益生菌促成这些临床改善的机理还不清楚。人的体外，以及动物的体内和体外研究，显示不同种的乳酸杆菌通过很多不同的途径影响先天和后天的免疫系统。临床研究主要显示先天细胞免疫系统的刺激作用和针对天然感染和全身或口服免疫的体液免疫反应的加强。关于先天免疫系统的作用，增强的多形核细胞(PMN)的吞噬细胞活性和增强的NK细胞肿瘤杀伤活性已经被报道。根据我们掌握的知识，现在尚没有临床研究显示在摄入益生菌之后，在特定细胞免疫系统中的作用。

本发明全面研究了每日摄入乳酸杆菌或革兰氏阴性菌P.lundensis后，对先天和后天免疫系统的影响。有趣的是，已经观察到接受L.plantarum(胚芽乳酸杆菌)的受试者的特定细胞免疫系统的激活作用以及接受L.paracasei(副干酪乳酸杆菌)的受试者的这种指示。此外，观察了接受不同的乳酸杆菌物种的受试者中，对先天免疫系统的免疫增强作用，例如NKT细胞群的扩张和吞噬细胞活性的增强。无论怎样，革兰氏阴性菌P.lundensis的摄入对根据这里描述的试验测量的不同的免疫参数均没有产生影响。

抗生素耐药性的发展和对感染的不同治疗的失败，使得对益生制品(probiotics)作为可选择的工具的兴趣有所增加。可能有对一种针对普通感冒问题的益生功能性食品产品的需求。每年感冒感染的发病率都非常高，这是清楚的。含有高水平维生素C的食品传统上被用于试着减少普通感冒的发病率。在市场上，有许多不同产品声称其对免疫系统有一定作用。

本申请的目的是研究益生功能食品产品，在按常规给予之后是否可以通过相似的途径影响普通感冒的症状，并且因此可以作为大众解决这些问题的替代性解决方案。

发明概要

本发明的一个目的是选自乳酸杆菌的至少一种益生菌菌株用于制备用于治疗和/或预防病毒感染的药物组合物的用途。

本发明的另一个目的是一种治疗和/或预防病毒感染的方法，其中选自乳酸杆菌的至少一种益生菌菌株被给予个体。

附图简述

图1显示了试验中报告任何小的不良肠胃反应的志愿者数目。

图2显示了每ml血中不同的淋巴细胞的基线数(0天)(平均值±(SEM))。

图3显示了淋巴细胞的基线(0天)百分数或者GMFI(平均值±(SEM))，其对不同的细胞活化和记忆标记为阳性。

图4，随机指定受试者为九个不同的研究组。试验从两周的间歇期开始。其后，接着是活性研究阶段。在该阶段中，受试者每天接受一个剂量的研究产品至14天(L.plantarum Heal 19、L.fermentum、L.paracasei、L.gasseri、L.rhamnosus、P.lundensis组)或35天((L.plantarum 299v和安慰剂组)。每剂量包含10¹⁰细菌群落总数(CFU)(乳酸杆菌组)或者10⁹CFU的杆菌(P.lundensis组)。

图5，用流式细胞仪测定的表达活化表型CD8CD25、CD8HLA-DR、CD4CD25和CD4HLA-DR的淋巴细胞的百分数被分析。显示了基于个体比值的各组值(±SEM)，14天/0天以及35天/0天(仅对于L.plantarum和安慰剂组)。

图6，用流式细胞仪测定的表达记忆表型CD8CD45RO和CD4CD45RO的淋巴细胞的百分数被分析。显示了基于个体比值的各组值(±SEM)，14天/0天以及35天/0天(仅对于L.plantarum和安慰剂组)。

图7，用流式细胞仪测定的NKT细胞标记物(CD56CD16CD3)阳性的淋巴细胞的百分数被分析。基于个体比值分组计算(14天/0天)。

图8，通过用FITC-标记的E.coli或S.aureus培养全血细胞，嗜中性粒细胞的吞噬活性被测定。图中显示了分别确定的在14天和0天获得的平均荧光值的比值并分组计算。

图9显示了得自实验2的表达活化表型CD4CD25的淋巴细胞的比值。

图10显示了得自实验2的表达活化表型CD4⁺CD25⁺⁺的淋巴细胞的比值。

图11显示了得自实验2的表达活化表型CD8⁺HLA-DR⁺的淋巴细胞的比值。

图12显示了得自实验2的表达活化表型CD8+CD25+的淋巴细胞的比值。

图13显示了得自实验2的表达活化表型CD4CD45RO的淋巴细胞的比值。

发明详述

本发明所使用的乳酸杆菌可以选自由胚芽乳酸杆菌(Lactobacillusplantarum)、鼠李糖乳酸杆菌(Lactobacillus rhamnsosus)、发酵乳酸杆菌(Lactobacillus fermentum)、副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracasei)和加氏乳酸杆菌(Lactobacillus gasseri)组成的组，但是不限于此。

本发明使用的胚芽乳酸杆菌可以选自由胚芽乳酸杆菌299，DSM 6595，胚芽乳酸杆菌299v，DSM 9843，胚芽乳酸杆菌HEAL 9，DSM 15312，胚芽乳酸杆菌HEAL 19，DSM 15313，和胚芽乳酸杆菌HEAL99，DSM 15316组成的组，但是不限于此。

本发明使用的副干酪乳酸杆菌可以选自由副干酪乳酸杆菌8700:2，DSM13434，和副干酪乳酸杆菌02A，DSM13432组成的组，但是不限于此。本发明使用的加氏乳酸杆菌可以选自加氏乳酸杆菌VPG44，DSM 16737，但是不限于此。

除了本文明确公开的菌株以外，其他益生菌株可以根据本发明自然的被使用，并且在发明的范围之内，只要它能提供预期作用，即，对病毒感染具有预防作用或减轻病毒感染的作用。

在发明的一个实施方式中，药物组合物中至少使用两种益生菌株。所述的至少两种菌株意图按顺序或同时给予。因此，菌株可以以在一种组合物中以混合物的形式被给予或者它们可以按顺序以不同的组合物被分别给予。

依据本发明，治疗病毒感染是可能的。能治疗的病毒感染是那些被选自由单纯性疱疹I病毒、单纯性疱疹II病毒、带状疱疹病毒、普通感冒病毒、鼻病毒、腺病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、肠病毒和冠状病毒组成的组的病毒引起的，但不限于此。这里没有特别提及的任何其他病毒感染，只要益生菌能有作用就在发明的范围之内。已知的，有很多不同的病毒和他们的变型引起普通感冒。所有的这些病毒都在本发明范围之内。

本文中，“治疗和/或预防”一词包括个体的预防治疗，即为了预防疾病/感染，在疾病或病毒感染发生之前开始用益生菌治疗，和已经发生在个体中的疾病/感染的治疗。在后一个情况中，症状的缓解例如是被期望的，或病人的总体状况被加强或者患者更快的从疾病/感染被治愈。因此，个体可以是有或无感染发展风险的人或者在患者体内已经有感染的人。

在发明的一个实施方式中，药物组合物中的每个所述的菌株的量为约1×10⁶至约1×10¹⁴CFU，优选自约1×10⁸至约1×10¹²，且更优选自约1×10⁹至约1×10¹¹，但是不限于此。

本发明的药物组合物可以是例如液体制剂或者固体制剂。

当药物组合物是固体制剂时，它可以被制造为片剂，含片，糖果，咀嚼片，口香糖，胶囊，小药囊，粉剂，颗粒剂，包衣微粒，肠包衣片，肠包衣胶囊，溶条或薄膜。

当药物组合物是液体制剂时，它可以被制造为口服溶液，混悬液，乳液或糖浆。所述组合物可以进一步包括载体材料，独立的选自由燕麦粥(oat mealgruel)、乳酸发酵食品、抗性淀粉、膳食纤维、碳水化合物、蛋白质和糖基化蛋白组成的组，但是不限于此。

本发明的实施方式中，所述的药物组合物是药用食品、功能食品、食品添加剂、营养品或食物制品(food preparation)。

根据发明使用或生产的本发明的药物组合物，还可以包括其他物质，例如本领域技术人员已知的惰性载体，或者药学上可接受的辅剂、载体、防腐剂等。

“药物组合物”一词不是必须是标准意义上的药物组合物，可以被制造为食品组合物、食品添加剂、功能食品、药用食品或营养品的形式，只要能达到所要的效果，即治疗或预防病毒感染的效果。所述的食品组合物可以选自由饮料、酸乳酪、果汁、冰淇淋、面包、饼干、谷类、健康棒(health bars)、糊(spreads)和营养品组成的组。食品组合物可以进一步包含载体材料，其中所述的载体材料选自由燕麦粥、乳酸发酵食品、抗性淀粉(resistant starch)、膳食纤维、碳水化合物、蛋白质和糖基化蛋白组成的组。

因此，本发明组合物的用途可以是在对在病毒感染发展之前的预防有用的意义上非常有益。因为使用的药物组合物不一定是标准意义上的药物组合物，还可以是食品添加剂或功能食品，所以对普通的健康的个体而言，服用本发明组合物用于预防是非常方便的。

实施例

实施例1

受试者和试验标准

选择年龄范围为18-55岁(中值26岁)的五十七名表观健康志愿者，作盲安慰剂对照研究。受试者被随机指定为八个小组，接受下列的革兰氏阳性菌中的一种：L.plantarum 299v(n＝7)，L.plantarum Heal 19(n＝7)，L.fermentum 35D(n＝7)，L.paracasei 8700:2(n＝7)，L.gasseri VPG44(n＝7)，L.rhamnosus 271(n＝7)，或革兰氏阴性菌，P.lundensis(n＝7)或安慰剂(n＝10)。菌的剂量为对于乳酸杆菌10¹⁰菌/天和P.lundensis 10⁹菌/天。对照组用脱脂奶粉(1g)。根据组，研究持续6或9周，包括两周间歇期(wash out period)，2或5周活跃研究期和2周追踪期(图4)。每个受试者被供给包括益生产品的一组产品，在整个研究期间应该没有耗尽。从受试者通过在两个或三个时间点，0天，14天和35天静脉穿刺抽取外周血样品。在试验过程中每日记录每个受试者所述的不良反应，健康状况和确认摄入的研究产品。

流式细胞术

全血中淋巴细胞表型的分析通过流式细胞术实现。下列的抗人单克隆抗体用作不同细胞群的表面标志：CD3FITC(SK7)、CD4APC(SK3)、CD8PerCP(SK1)、CD19PerCP(SJ25C1)、CD56PE(MY31)、CD16PE(B73.1)和CD5 FITC(L17F12)。下列的抗人单克隆抗体用于检测不同的激活和记忆标记：CD25 FITC(2A3)、HLA-DR PE(L243)、CD45RO PE(UCHL-1)、CD38 PE(HB7)、CD27 PE(L128)和CD11b PE(D12)。所有的抗体购买自Becton-Dickinson(Erembodegum，BeIgium)。全血(100μl)用抗体(10μl/抗体)在4℃黑暗中培养30min。然后加入2ml FACS溶解溶液(lysing solution)(Becton-Dickinson)并在20℃暗室中培养15min。用3ml FACSFlow冲洗细胞并在300x g离心5min。冲洗过的细胞重悬浮在200μl FACSFlow中并用CellQuest软件在FacsCalibur(Becton-Dickinson)分析。

吞噬作用测定

粒细胞和单核细胞的吞噬活性用

(Orpegen Pharma，Heidelberg，Germany)定量，根据制造厂家的说明，有某些修改。简要的，将20×10⁶FITC标记的大肠杆菌或FITC标记的S.aureus加入预冷的全血(100μl)中。血细胞和菌在37℃培养10FacsCalibur，用CellQuest软件。

计算

不同的免疫参数的个体变化通过计算在14天和0天或者35天和0天获得的各值之间的比值而确定。这些比值用于所有的组的计算和统计。

统计

所有的统计分析使用Statview实现。使用Mann-Whitney U检验法来比较不同的组。

结果

临床观察

57个志愿者之中54人完成了该研究。两人因为感染和抗生素治疗被排除在外(一人在安慰剂组而另一人在接受P.lundensis的组)。一人因为怀孕在16天被排除在外(安慰剂组)。摄入研究产品之后只报告有轻微的肠胃不良的副作用(图1)。

摄入乳酸杆菌激活T细胞

关于在CD4⁺和CD8⁺T细胞上的激活标记，有大的基线(0天)个体变化。图2中显示了表达不同细胞表面标记的细胞的基线百分比。在该时间点上没有观察到不同组之间的显著差别。因为观察到有巨大的个体间差异，选择比较每个个体在14天和35天与0天相比的比值。所有的计算和比较都基于这些比值(14天/0天和35天/0天)做出。摄入含有L.plantarum(胚芽乳酸杆菌)299v的被研究的产品14天之后，在CD8⁺T细胞上激活标记CD25的表达有大约两倍的增长(p＝0.01)(图5)。在摄入L.plantarum 299v之后，有强的CD8⁺T细胞上HLA-DR的增量调节的指示，虽然不显著(p＝0.12)。另外，在摄入L.plantarum.299v之后还可以观察到CD4⁺T细胞激活的趋势。摄入其它包括在本研究之内的乳酸杆菌菌种以及革兰氏阴性菌P.lundensis，没有激活CD8⁺T细胞也没有激活CD4⁺T细胞。但是，有这样的趋势即摄入L.paracasei(副干酪乳酸杆菌)确实增多CD4⁺T细胞上HLA-DR的表达(P＝0.18)。

摄入乳酸杆菌诱发CD4⁺T细胞的记忆表型

将接受不同研究产品的各组之间CD4⁺和CD8⁺T细胞上CD45RO表达的荧光强度(GMFI)的几何平均值进行比较。如上所述，根据各比值(14天/0天和35天/0天)的组计算结果用于比较。摄入包含L.plantarum 299v的研究产品35天之后，CD4⁺T细胞上CD45RO GMFI增长显著(p＝0.03)。在摄入L.plantarum之后，CD8⁺T细胞上表达的CD45RO还有增长的趋势(图6)。此外，摄入L.paracasei似乎对CD8⁺T细胞上CD45RO的增量调节有积极的影响(p＝0.10)(图6)。

摄入研究产品之后对不同的细胞群的影响

摄入L.pararcasei之后，鉴定为NKT细胞的淋巴细胞的百分比有所增长(P＝0.06)(图7)。关于其他细胞群，与0天相比较，没有检测到相对增长/减少，例如CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞、B细胞、B-1细胞(CD19+CD5+)、NK细胞、粒细胞和单核细胞。

吞噬作用活性

在FSC-SSC图中鉴定粒细胞和单核细胞。测定这些细胞吞噬FITC标记的革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌的能力。如图8中所示，从给予L.plantarum 299v(p＝0.064)、L.plantarum Heal 19(p＝0.064)、L.fermentum  (p＝0.064)或L.paracasei(p＝0.05)的志愿者获得的粒细胞比用安慰剂处理的志愿者的粒细胞对革兰氏阴性菌大肠杆菌的吞噬作用更有效。然而，各组对革兰氏阳性菌S.aureus的吞噬作用没有区别。没有检测到单核细胞吞噬活性的区别(数据没有显示)。

讨论

免疫系统的主要任务是对微生物产生快速且强烈的应答从而预防和治愈感染。杀死微生物所使用的强大的机制也会引起对我们自身组织的损伤。因此，不对我们自身组织产生应答，也不对环境中出现的无害物质产生应答是必需的。因此，免疫系统对我们自己身体的组成部分，和食品以及摄入的蛋白质都发展并维持耐受性。如果失败，将出现许多疾病。发展特异性免疫耐受性的手段是免疫系统必要的任务。

所有免疫反应中的一个重要角色是T辅助细胞扮演的。当T辅助细胞被它的特异性抗原激活时，将变得有活性，分裂，成熟且生成指导免疫系统中其他类型细胞的作用的一系列细胞因子，例如细胞毒性T细胞和B细胞。T辅助细胞的激活是为了生成大多数类型免疫反应所必须的，包括抗体的生成。相反的，如果T辅助细胞的激活被阻止，那么大多数类型的免疫反应将被阻断。

确保T辅助细胞激活和耐受性维持的机制有几种。一种机制是胸腺中有识别自身组织和对自身组织一起反应的能力的T细胞的清除。然而，这种清除不完全，所以此外，我们还需要发展对外源性抗原的特异性免疫耐受性。否则，我们将对所有类型的吸入和摄入的物质有强烈应答，导致大量炎症和免疫资源浪费。

一种对维持耐受性很重要的细胞类型是调节性T细胞。该细胞类型可以通过某些标记识别，例如CD4和CD25的表面表达，具有细胞内CTLA-4，和核蛋白Foxp3的转录。调节性T细胞有能力当遇见无害物质的时候防止其他T细胞被激活，由此，阻止所有类型的不需要的免疫反应。

本文中，与某标记连用的符号“+”，例如CD4+和CD25+意思是指该标记在T细胞上表达。例如CD4+CD25+T细胞是在其表面表达CD4标记和CD25标记的T细胞。但是没有述及表达的标记的量，只是说它存在。本文中与标记连用的符号“++”，例如CD4++或CD25++意思是指有大量标记被表达。调节性T细胞是那些表面有大量CD25的细胞，即CD4+CD25++细胞。另一方面，CD4+CD25+T细胞是唯一被激活的T细胞。有时，不使用特殊符号“+”和“++”，例如仅仅为CD4CD25细胞，这表示这些细胞是被激活的，例如CD4+CD25+细胞。因此，CD4CD25与CD4+CD25+是一样的。当讨论调节性T细胞的时候，常写作CD4+CD25++细胞。

该盲安慰剂对照研究是独特的，原因在于它是比较了在摄入不同的革兰氏阳性乳酸杆菌或革兰氏阴性菌P.lundensis之后一些免疫参数的影响的第一项研究。有趣的是，摄入P.lundensis没有影响任何测量的参数。相反，摄入乳酸杆菌影响特异性和先天免疫系统不同的组分。该研究中有个新的发现，摄入L.plantarum对激活和诱导T细胞群中的记忆细胞有显著的积极作用。IL-2受体α链(CD25)有显著的增量调节，且有细胞毒性T细胞上HLA-DR增量调节的强烈趋势。这些激活标记增量调节的趋势还可以在摄入L.plantarum之后，在辅助T细胞上观察到。激活标记的表达表明T细胞开始对抗原特异或非特异性刺激作出响应而增殖，且这些细胞与静止性T细胞相比更容易发挥它们的效应功能。L.plantarum诱导的T细胞的激活的机制可能是通过被toll-like受体激活的抗原递呈细胞与微生物化合物相结合。抗原递呈细胞的激活使得它们更加有效地将抗原传递至T细胞。另外，辅助和细胞毒性T细胞都表现出有toll-like受体的不同的表达，这很可能使得这些细胞易于被微生物成分和产品非特异性激活。

与辅助T细胞分隔相类似，CD45RO的表达似乎是标记了一个记忆群，在细胞毒性T细胞中也是。发现在辅助T细胞上的这种记忆细胞标记的表达有显著的增长，且在摄入L.plantarum35天之后，细胞毒性T细胞上有增量调节的趋势。另外，摄入L.paracasei(副干酪乳酸杆菌)也显示了细胞毒性T细胞上CD45RO的增量调节的趋势。与幼稚T细胞(

T cells)相比较，CD45RO+T细胞可以分泌广谱的细胞因子。此外，当CD3-TCR复合物在次最适度的条件下受刺激的时候，CD45RO+T细胞可以增殖并生成IL-2，而幼稚的T细胞需要强的CD3-TCR刺激以实现这些功能。记忆T细胞的生成对于感染和接种疫苗之后诱导有效免疫应答而言是重要的。

先天的细胞免疫系统也受益生菌的摄入的影响。已经被证实了，在摄入L.paracasei(副干酪乳酸杆菌)之后，自然杀伤T(NKT)细胞群扩大。NKT细胞构成一个共表达NK细胞标记CD56和T细胞标记CD3-T细胞受体复合物的淋巴细胞亚群。对人和小鼠的研究均证实了NKT细胞在自身免疫性疾病的调节中扮演了重要的角色，例如多发性硬化、I型糖尿病、以及系统性红斑狼疮。NKT细胞还产生对抗肿瘤和病毒感染的细胞的效应功能。因此，NKT细胞的功能多效(pleotropic)。评价了益生菌免疫效应的其他临床研究显示了摄入L.rhamnosus HN001和Bifidobacterium lactis HN019加强了K562细胞的NK(包括NKT)细胞肿瘤杀伤活性。该研究中，通过其它人证实了以下观察结果，多形核细胞的吞噬活性在摄入不同的乳酸杆菌之后有所增长。在本研究中观测到的对不同的免疫参数的影响结果是人们可能推测出细胞毒性T细胞和NKT细胞扩增的同时激活指向对抗病毒感染和/或肿瘤的加强的免疫防御。体外研究发现，乳酸杆菌诱导单核细胞分泌IL-12和IL-18，支持了摄入这些细菌刺激细胞介导活性的理论。

依照本发明，得到摄入L.plantarum(胚芽乳酸杆菌)和L.paracasei(副干酪乳酸杆菌)对特异性和先天细胞免疫系统有大的影响的结论。然而，这里证实的免疫功能的增长目前难于与被证明对人体有健康益处相关联。为了解决这一特殊的问题，需要对患有例如病毒感染或肿瘤的个体完成进一步的临床试验。在这样的研究中，对分别给予L.plantarum(胚芽乳酸杆菌)和L.paracasei(副干酪乳酸杆菌)或组合给予进行比较将是特别感兴趣的。

实施例2

该实施例的目的是为了研究通过更长的时间给予相同种的乳酸杆菌，与按顺序一个个的给予几种乳酸杆菌(不同种)相比较，对免疫系统的影响。

志愿者被给予冻干菌的粉剂14或35天。作为革兰氏阳性菌的益生菌胚芽乳酸杆菌299v被单独使用或与L.rhamnosus，L.fermentum，L.paracasei和L.gasseri联合使用。给予Psedomonas lundensis，作为革兰氏阴性菌。

下列组被研究：

1)胚芽乳酸杆菌35天

2)L.plantarum 7天，L.rhamnosus 7天，L.fermentum 7天，L.paracasei7天，L.gasseri 7天。总共35天。(按顺序)

3)L.plantarum、L.rhamnosus、L.fermentum、L.paracasei、L.gasseri混合物，总共14天

4)L.rhamnosus 14天

5)L.fermentum 14天

6)L.paracasei 14天

7)L.gasseri 14天

8)Pseudomonas lundensis 14天

对照组1)安慰剂35天

对照组2)安慰剂14天

在0天，14天和35天取血样。按照上面的试验1说明的，通过流式细胞术确定每个小组的表达大量CD25的辅助T细胞(CD4+)的量。

结果

在14天，有CD4+CD25++T细胞在按顺序摄入五种不同的乳酸杆菌菌株的个体中扩增的边际显著性(borderline significance)。

讨论

已经表明表达高密度的CD25分子(CD4+CD25++)的T辅助细胞(CD4+)，对提供对抗自身免疫性疾病、变态反应和炎性肠疾病的保护是重要的。发现这些细胞在按顺序摄入不同的乳酸杆菌之后被扩增，表明摄入这些菌可能对有发展上述疾病的风险的个体有益。

实验3

本研究的目的是研究摄入以冻干形式/功能食品产品形式的乳酸菌至少3个月是否会影响普通感冒(common cold)的症状的严重度和发病率以及持续时间。

重要的是，这是在人体体内进行的，因为不管是体外研究还是动物研究都不能反映给予人体时的有效程度。在培养之后直接给予时，这些菌在肠中定居的能力在早期研究中已经被记载。

因此，目标是研究摄入胚芽乳酸杆菌299v(DSM9843)和副干酪乳酸杆菌8700:2(DSM13434)(1×10⁹cfu/d)的混合物是否会减少患普通感冒的风险。

该研究持续时间为90天，且500个人将参加该项研究。250个人将接受活性产品，250人将被给予安慰剂。

研究将是随机的，双盲的且安慰剂对照的，有两个平行组。

淘汰标准如下：已知对制剂中包含的任何成分不耐受或有变态反应的；变态反应医学治疗的；严重的胃肠道病症正在治疗的；怀孕或哺乳的；近12个月内已接种流行性感冒疫苗的；以及吸烟者。

提供的益生菌：低压冻干的胚芽乳酸杆菌299v和副干酪乳酸杆菌8700:2。蔗糖、麦芽糊精和水解明胶作为抗冻剂被加入。剂量为每日摄入1g冻干的乳酸杆菌(近似1×10⁹cfu/天)。与早餐配合摄取。

该产品将由Probi AB，Lund，Sweden生产、包装并贴标。产品的质量也由Probi AB检查。每个小药囊(sachet)将用研究的名字，最佳日期(the best bydate)，怎样储藏的，制造者的名字，调查负责人的名字和她/他的电话号码标记。除了上述信息之外，将标示受试者的号码加到二级包装上。对溶解和服用的详细说明将放入二级包装。产品将以小药囊的形式提供。

从-14天至104天，受试者可以不摄入包含益生菌的产品。受试者在研究时期将被提供一个不允许摄入的益生菌产品列表。

粪便样品在1天(在摄入研究产品之前)，15天(在摄入之后)，和104天(在摄入之后)上交。样品应该在上交用于分析之前不超过18小时内收集入两根管子中，且在这个期间内储藏在冰箱中。样品将用于分析乳酸杆菌。

血样于第1天和第15天提取。样品将用于分析CD4+和CD8+。

考虑到实验1和2，可以期望，服用益生菌混合物的个体与安慰剂组相比较，将看到对抗普通感冒的更强的保护。

Claims (16)

1.选自胚芽乳酸杆菌299，DSM 6595，胚芽乳酸杆菌299v，DSM 9843，胚芽乳酸杆菌HEAL9，DSM 15312，胚芽乳酸杆菌HEAL 19，DSM 15313，和胚芽乳酸杆菌HEAL99，DSM 15316，副干酪乳酸杆菌8700：2，DSM 13434，和副干酪乳酸杆菌02A，DSM13432的至少一种乳酸杆菌的益生菌菌株用于制备用于增强免疫功能的药物组合物的用途。

2.根据权利要求1的用途，其中使用至少两种益生菌菌株。

3.根据权利要求1或2的用途，其中所述药物组合物是液体制剂或者固体制剂。

4.根据权利要求3的用途，其中所述固体制剂选自片剂，糖果，口香糖，胶囊，小药囊，粉剂，颗粒剂，包衣微粒，以及溶条和薄膜。

5.根据权利要求3的用途，其中所述固体制剂是肠包衣胶囊。

6.根据权利要求4的用途，其中所述片剂选自含片，咀嚼片和肠包衣片。

7.根据权利要求3的用途，其中所述液体制剂选自口服溶液，混悬液，乳液和糖浆。

8.根据权利要求1或2的用途，其中所述的组合物包括载体材料。

9.根据权利要求1或2的用途，其中所述的组合物是一种药用食品、功能食品、食品添加剂、营养品或食物制品。

10.根据权利要求8的用途，其中所述载体材料独立的选自碳水化合物和蛋白质。

11.根据权利要求8的用途，其中所述载体材料是糖基化蛋白。

12.根据权利要求10的用途，其中所述碳水化合物选自抗性淀粉和膳食纤维。

13.根据权利要求9的用途，其中所述食物制品选自饮料、酸乳酪、冰淇淋、面包、饼干、健康棒和糊。

14.根据权利要求1或2的用途，其中所述的每个菌株在所述组合物中以约1×10⁶至约1×10¹⁴CFU的量存在。

15.根据权利要求14的用途，其中所述的每个菌株在所述组合物中以约1×10⁸至约1×10¹²的量存在。

16.根据权利要求15的用途，其中所述的每个菌株在所述组合物中以约1×10⁹至约1×10¹¹的量存在。

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