KR20090121950A - 참나도히초미 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화 및주름개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 참나도히초미(Polystichum ovatopaleaceum var. coraiense (H. Christ) Sa.Kurata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화 및 주름개선용 피부 외용 약학적 조성물 및 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 따른 참나도히초미 추출물은 세포 보호 작용, 엘라스타제 저해 효과, MMP-1 유전자 발현 억제 효과, 피부 탄력도 개선 효과 및 피부 상태 개선 효과를 나타내어 궁극적으로 항노화 및 주름개선용 피부외용 약학 조성물 및 화장료 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

참나도히초미 추출물, 세포 보호, 엘라스타제, MMP-1, 콜라겐, 엘라스틴, 주름완화, 피부 탄력 개선, 항노화

Description

참나도히초미 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화 및 주름개선용 조성물{A composition comprising extract of Polystichum ovatopaleaceum var. coraiense (H. Christ) Sa.Kurata having anti-aging and anti-wrinkle activity}

본 발명은 참나도히초미 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화 및 주름개선용 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 세포 보호, 엘라스타제 활성 억제, 메탈로프로티나아제(MMP, matrix metallo-proteinase)-1 유전자 발현 억제, 피부 탄력도 개선 및 피부 상태 개선을 통해 항노화 및 주름개선 작용을 하는 피부 외용 약학적 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부는 신체의 최외각을 이루고 있는 기관으로 항상 대기 중에 노출되어 있어서 태양광선, 산소, 세균, 각종 공해물질 등에 직접적인 영향을 받고 있다. 또한 대기 중 21%를 산소가 차지하고 있으며 지구상의 호기성 생물들은 이러한 대기 중의 풍부한 산소를 호흡하여 체내전자수용체를 통해 에너지를 확보하여 생명을 유지하고 있다. 그러나 생명유지에 절대적으로 필요한 산소들이 체내 효소계, 환원대사, 화학약품, 공해물질, 광화학반응 등의 물리적, 화학적, 환경적 요일들로 인하여 슈퍼옥시드(superoxide) 음이온 라디칼(O₂˙-), 하이드록시 라디칼(?OH), 과산화수소(H₂O₂)나 싱글릿 옥시젠(singlet oxygene(1O₂))과 같은 반응성이 매우 큰 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)으로 전환되면 프리라디칼 반응에 의해 지질을 포함하는 세포의 주요 거대분자를 파괴하고 세포 구성 물질 및 세포막과 반응하여 대사과정에 이상을 초래하는 것으로 알려져 있다 (Harman, D., Ann. N. Y. Acade. Sci., 673, pp126-141, 1992).

또한 노화란 지구상의 생명체가 시간이 경과함에 따라 겪게 되는 신체의 모든 생리적 변화를 통칭하는 것으로 개체에 따라 수많은 요인에 의해 매우 다양하게 일어나는 생명현상을 말하며 수많은 연구들을 통해 노화에 대한 여러 가지 가설이 제기되었는데 하르맨(Harman)의 프리라디칼이론에 의하면 이러한 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)에 대한 생체 내 항산화 방어기작이 있지만 지질, 단백질, 핵산 등의 생체분자들이 계속적으로 프리라디칼에 의해 산화적 손상을 받게 되면 산화와 항산화의 불균형이 야기되고 산화반응 산물들이 나이가 들어감에 따라 축적되어 노화의 원인이 된다고 하고 있다(Harman, D., J. Gerontol., 11, pp298-300, 1596 ; Richter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, pp6465-6467, 1988 ; Oliver et al., J. Biol. Chem., 262, pp5488-5491, 1987 ; Brunk et al., Mutat. Res., 275, 396-403, 1992).

특히 피부노화의 경우에는 내인성 노화(intrinsic aging)와 광노 화(photoaging) 두 가지 형태로 구분되는데(EB Doris, Cosmetics ＆ Toiletories., 111, pp31-37, 1996), 내인성 노화는 외부환경과는 무관하게 유전적 요소에 영향을 받아 나이가 들면서 자연스럽게 나타나는 현상으로 인위적인 조절이 어렵지만 광 노화는 외부환경적인 요인에 의해 유발되는 현상으로 인위적인 조절이 비교적 용이하다고 할 수 있다. 외인성노화의 대표적인 인자는 자외선으로 태양광선에 노출된 피부에서 자외선에 의해 과잉의 활성산소종이 생성되고 체내의 항산화효소와 비타민 E, C, 글루타치온 및 유비퀴놀 등의 항산화제가 감소함으로 인해 산화와 항산화의 불균형이 야기된다. 그 결과 지질 과산화, 단백질 산화, 단백질 분해효소의 활성화, 콜라겐과 엘라스틴의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합, 히알루론산 사슬절단, 멜라닌 생성반응 촉진, DNA 산화 등에 의해 생체 구성 성분들의 손상을 가져오고 결국에는 피부탄력감소, 주름 및 기미, 주근깨 생성 등의 피부노화가 일어나게 된다(Oikarinen, A., Photodermatol. Photoimmunol. Photomed., 7(1),pp3-4,1990 ; Yamauchi, M., J. Invest. Dermatol., 97, pp938-941, 1991).

따라서 자외선이나 외부 환경적 요인에 의해 활성산소나 프리라디칼이 생성 되고 생성된 활성산소나, 프리라디칼에 의해 세포막이 공격을 당하게 되면 피부는 염증(inflammation)을 일으키고, 단백질이나 유전자 물질 등이 파괴되어 주름 등을 형성하는 일련의 피부노화 메커니즘을 거쳐 피부노화가 일어나는 것이다. 이에 피부노화 메커니즘의 단계를 모두 억제시켜줄 수 있다면 피부노화를 근본적으로 방지할 수 있을 것이나 아직까지는 그런 이상적인 항노화제를 개발하지는 못하고 있으며 외부요인에 의해 생성되는 활성산소나 프리라디칼을 제거해주는 항산화제와 피 부노화에 관여하는 대표적인 효소중 하나인 엘라스타제의 활성억제물질을 찾는 연구들이 가장 활발히 이뤄지고 있다.

엘라스타제(elastase)는 피부 탄력을 유지해주는 동물 결합조직의 불용성 탄성섬유단백질인 엘라스틴(elastin)을 분해하는 유일한 분해효소로 알려져 있다(Wiedow, O., Schroder, J. M., E. J. Biol. Chem., 265(5), p14791, 1990). 엘라스타제는 연령이 증가하거나 자외선 등의 외부피부자극에 의해 과잉생성 된다. 과잉 생성된 엘라스타제가 엘라스틴을 과도하게 분해하여 콜라겐 간 결합이 약화되고 피부에 주름이 생성된다. 특히 40대 이후에서 엘라스타제의 작용에 의해 피부의 탄력이 급격히 감소하게 되는데 이는 엘라스타제의 작용이 나이가 들어감에 따라 활발해져 엘라스틴 섬유가 일부 소멸되거나 응집현상이 나타나고, 콜라겐섬유가 감소하기 때문이다. 이러한 엘라스타제의 활성을 억제함으로써 피부의 주름생성을 억제할 수가 있다(Bissett, D. L., Photochem. Photobiol., 46, pp367-378, 1987 ; Bizot-Foulon V., Godeat G., W. Int. J. Cos. Sci., 17, pp255-264, 1995).

또한 MMP(matrix metalloproteinase)는 활성중심부에 아연을 가지는 금속단백 분해효소로 생체 내에서 잠재성 전효소(zymogen)형태로 분비된다. 효소활성을 가지기 위해서 구조적 변형이 일어나 아미노 말단 부위가 절단, 활성화되며 활성화된 MMP는 2-마크로 글로불린(macroglobulin)이나 TIMP(tissue inhibitors of metalloproteinase)와 같은 저해제에 의해 활성이 조절되고 피부의 케라티노사이트 (keratinocyte), 섬유아세포 (fibroblast)를 포함한 대다수의 많은 세포들이 MMP를 분비한다(Fisher, G. J. et al., Photochem. Photobiol. 69, 154, 1999). 1회의 자 외선 조사에도 피부 내의 MMP활성이 증가되며 피부내의 콜라겐을 현저하게 붕괴시킴으로써 MMP들이 진피층의 콜라겐 붕괴에 영향을 미치며 광 노화에 매우 중요한 역할을 한다.

참나도히초미(학명: Polystichum ovatopaleaceum var. coraiense (H.Christ) Sa.Kurata)는 제주도에서 자라는 다년초로 엽병의 길이가 20-40㎝로서 중축과 더불어 표면에 홈이 있으며 인편이 밀생하고 엽병에 달린 작은 인편은 길이 2-4mm이다. 엽신은 2회 우상복엽이고, 난상은 긴 타원형이며, 길이 40-100㎝, 폭 15-30㎝로 밑 부분이 좁아지지 않거나 약간 좁아지고, 중축 뒷면에 인편이 밀생하고, 표면은 밝은 녹색이며, 뒷면은 연한 녹색이고, 중축 뒷면의 인편은 난상 피침형 또는 피침형으로 끝이 꼬리처럼 길어진다. 우편은 선형이고, 대가 없고 끝이 뾰족하다. 소우편은 난상 긴 타원형이고, 끝이 둔하지만 가시 같은 톱니로 그치며, 가장자리에도 가시 같거나 부드러운 톱니가 있고 짧은 대가 있다(국가 생물종 지식정보시스템).

한편 참나도히초미 추출물에 관한 선행발명은 그 예가 없으며, 또한 항산화 및 주름개선 효과를 갖는 참나도히초미 추출물을 함유한 조성물에 대한 내용은 그 어디에도 게재되거나 공지된 바 없다.

이에 본 발명자들은 천연물 및 피부노화와 관련하여 프리라디칼을 소거능에 의한 항산화 효과와 엘라스타제 억제활성을 동시에 지니고 있고, 피부주름 개선에 도움이 되는 물질을 탐색하기 위하여 예의 연구노력한 결과, 참나도히초미 추출물로부터 우수한 항산화효과 및 주름개선효과를 확인하고 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 주된 목적은 우수한 세포 보호 작용, 엘라스타제 저해 효과, MMP-1 유전자 발현 억제 효과, 피부 탄력도 개선 효과 및 피부 상태 개선 효과를 갖는 참나도히초미 추출물을 함유하는 항노화 및 주름개선용 피부외용 약학 조성물 또는 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 참나도히초미(Polystichum ovatopaleaceum var. coraiense (H.Christ) Sa.Kurata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화 및 주름개선용 피부 외용 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명은 세포 대사 활성, 피부 탄력 및 피부노화에 효능이 있는 물질을 찾고자하여 자연의 여러 가지 천연물질들 중에서 유효한 물질을 검색한 결과, 참나도히초미 추출물이 매우 우수한 세포 보호 효과, 세포 대사 활성 및 세포 증식 작용, 항주름 작용, 피부탄력도 개선 등의 효능을 나타냄을 발견하였다.

본 발명의 상기 약학적 조성물에서, 상기 참나도히초미 추출물은 조성물 총 중량을 기준으로 0.01 내지 50 중량% 로 함유될 수 있으나, 바람직하게는 0.01 내지 20 중량% 로 함유된 것이 좋다.

본 발명의 상기 약학적 조성물에서, 상기 참나도히초미 추출물은 엘라스타제(Elastase) 활성 억제 및 매트릭스 메탈로프로티나아제(MMP, Matrix metallo- proteinase)-1의 발현을 억제하여 항노화 및 주름개선 작용을 한다. 본 발명의 실시예에서는 상기 추출물의 우수한 엘라스타제 저해 효과, MMP-1 유전자 발현 억제 효과, 피부 주름 개선 및 피부 탄력 증진 효과를 확인하였고, 또한 피부에 적용시 안전성에도 문제가 없음을 확인할 수 있었다.

본 발명의 상기 약학적 조성물에서, 상기 참나도히초미 추출물은 당업계에서 통상적으로 사용하는 식물 추출방법을 사용하여 추출할 수 있으며, 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜 및 글리세린으로 구성된 군으로부터 선택된 용매 또는 그 혼합용매로 추출하여 조추출물(crude extract)의 형태로 추출할 수 있다. 또한 상기 조추출물의 고형분을 정제수에 용해시킨 후 헥산, 초산에틸, 부탄올, 및 물로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나의 용매로 추출하여 가용 추출물의 형태로 추출할 수 있다.

상기 추출물은 참나도히초미의 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 포함한다. 상기 조추출물은 정제수를 포함한, 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜 및 글리세린으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매, 바람직하게는 물, 에탄올, 메탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 글리세린에 가용한 추출물을 포함한다.

또한 본원에서 정의되는 극성용매 가용 추출물은 물, 메탄올, 부탄올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택되어진 용매, 바람직하게는 물 또는 부탄올에 가용한 추출물이고, 비극성용매 가용추출물은 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로라이드 및 초산에틸로부터 선택되어진 용매, 바람직하게는 헥산 또는 초산에틸에 가용한 추출물 을 포함한다.

본 발명의 상기 약학적 조성물에서, 상기 피부 외용 약학적 조성물은 당업계에서 사용가능한 어떠한 피부 외용 제형으로 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 및 카타플라스마제에서 선택된 어느 하나의 제형인 것이 좋다.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 참나도히초미(Polystichum ovatopaleaceum var. coraiense (H.Christ) Sa.Kurata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화 및 주름개선용 피부 외용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 실시예에서는 본 발명의 참나도히초미 추출물을 배합하여 사람 피부에 직접 도포한 결과, 뚜렷한 피부 탄력 및 노화로 인한 피부상태가 개선되는 효과를 관찰하였다. 본 발명의 화장료 조성물은 세포 보호 작용으로서 피부 탄력을 증가시키고, 항주름 작용 효과를 갖고, 피부노화를 근본적으로 막을 수 있는 참나도히초미 추출물을 함유하기 때문에 기능성 화장품의 원료로 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물에서, 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저에서 선택된 어느 하나의 제형인 것이 바람직하다.

이하, 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.

먼저, 참나도히초미 추출물의 제조는, 참나도히초미를 세절하여 추출용매로서 정제수를 포함한, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매, 바람직하게는 물, 에탄올, 메탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 글리세린에 가용한 추출물을 1 내지 30배, 바람직하게는 5 내지 25배, 더욱 바람직하게는 10 내지 20배 부피의 양을 넣고 상온 또는 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 교반 추출, 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출, 가열추출 등의 추출방법, 바람직하게는 교반추출 또는 가열추출의 추출방법으로 추출하고, 여과하여 1 내지 10℃에서 1 내지 15일 동안 침적시켜 제조할 수 있다. 상기 과정을 1 내지 7회, 바람직하게는 1 내지 3회 반복하여 추출한 후 감압 농축하고 건조하여 본 발명의 참나도히초미 조추출물(crude extract)을 수득할 수 있다.

또한, 본 발명의 극성용매 및 비극성용매 가용 추출물은 상기에서 얻은 참나도히초미 조추출물 중량의 2 내지 30배, 바람직하게는 8 내지 25배, 더욱 바람직하게는 10 내지 20배 부피의 물을 분산시킨 후, 헥산, 초산에틸, 클로로포름 등의 비극성 용매 또는 부탄올, 에탄올 등의 극성용매를 사용하여 순차적으로 물과 동량 부피를 가하여 1 내지 5회, 바람직하게는 2 내지 4회 분획하여 본 발명의 참나도히초미 극성용매의 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 수득할 수 있다.

본 발명의 항노화 및 주름개선용 피부외용 약학조성물 또는 화장료 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 조 추출물 또는 이로부터 분획하여 추출한 가용 추출물을 0.1 내지 50 중량 %로 포함한다.

상기 참나도히초미의 조 추출물 또는 이로부터 분획하여 추출한 가용 추출물은 우수한 항산화 효과, 주름 개선 효과 및 피부탄력 효과를 나타내었으며, 또한 피부에 적용시 안전성에도 문제가 없음을 확인할 수 있었다.

본 발명은 상기의 제조방법으로 얻어진 참나도히초미의 조 추출물 또는 이로부터 분획하여 추출한 가용 추출물을 유효성분으로 하여 항노화 및 주름개선용 피부외용 약학조성물을 제조하였다.

본 발명의 조 추출물 또는 이로부터 분획하여 추출한 가용 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부외용 약학조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 참나도히초미의 조 추출물 또는 이로부터 분획하여 추출한 가용 추출물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

본 발명의 조성물은 피부에 적용할 수 있는 피부 외용제 제형으로서 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 약학조성물로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 외용투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.

또한, 본 발명은 참나도히초미의 조 추출물 또는 이로부터 분획하여 추출한 가용 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 추출물 또는 이로부터 분획된 분획물은 피부 노화 방지 및 주름 완화 효과를 갖는 화장품 또는 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함할 수 있다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것도 될 수 있으나, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것도 될 수 있으나, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체 (팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것도 될 수 있으나, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것도 될 수 있으나, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로 이틴 황산 또는 그 염 (나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것도 될 수 있으나, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것도 될 수 있으나, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합할 수 있다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

상기 유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

상기 에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데 실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

상기 탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.

상기 실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

상기 불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

상기 동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛 脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

상기 보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

상기 수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

상기 지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

상기 수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

상기 지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

상기 에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

상기 계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

상기 비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

상기 음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

상기 양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.

상기 양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

상기 유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료 ; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

상기 유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누 ; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염 기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

상기 자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

상기 살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

상기 산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

상기 pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

상기 알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01 - 5 % 중량 백분율, 보다 바람직하게는 0.01 - 3 % 중량 백분율로 배합된다.

본 발명의 상기 참나도히조미 추출물을 함유하여 제조된 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명의 상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 화합물 이외에 약학 조성물 및 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.

실시예 1. 참나도히초미 조추출물의 제조

실시예 1-1. 참나도히초미 뿌리 95% 에탄올 가용 조추출물(POC-1)의 제조

건조된 참나도히초미 뿌리 1 kg을 95%(질량%) 에탄올 10L에 넣고 추출기로 환류하며 3시간 추출한 후, 실온까지 서서히 냉각하였다. 냉각 후에 여과지를 이용하여 여과하고(Whatman No.5, Whatman International Ltd, 영국), 여과액은 회전감압농축기로 농축하여 추출물(POC-1) 95.6 g을 수득하였다.

실시예 1-2. 내지 1-11.

하기 표 1의 용매를 사용하고 실시예 1-1 과 동읠한 방법으로 추출하여 그 결과를 하기 표 1에 기술하였다.

[표 1]

실시예 1-12. 참나도히초미 가지 95% 에탄올 가용 조추출물(POC-12)의 제조

건조된 참나도히초미 가지 1 kg을 95%(질량%) 에탄올 10L에 넣고 추출기로 환류하며 3시간 추출한 후, 실온까지 서서히 냉각하였다. 냉각 후에 여과지를 이용하여 여과하고(Whatman No.5, Whatman International Ltd, 영국), 여과액은 회전감압농축기로 농축하여 추출물(POC-12) 76.4 g을 수득하였다.

실시예 1-13. 내지 1-17.

하기 표 2에 기술한 용매를 사용하고 실시예 1-12와 동일한 방법으로 추출하여 그 결과를 하기 표 2에 기술하였다.

[표 2]

실시예 2. 참나도히초미 비극성 용매 가용 추출물의 제조

2-1. 참나도히초미 n- 헥산 가용 추출물( POC -18)의 제조

상기 실시예 1-6에서 얻어진 추출물(POC-6) 고형분 중 30g을 500ml 정제수에 분산시킨 후, n-헥산 500ml을 넣어 진탕하여 실온에서 2~3시간정도 방치한 후, 상층과 하층으로 나누고, 상층액(n-헥산)을 회수한다. 동일한 방법으로 3회 실시하여 얻어진 추출액을 감압 농축하여 가루형태의 추출 분획물(POC-18) 4.8g을 얻었다.

2-2. 참나도히초미 초산에틸 가용 추출물( POC -19)의 제조

상기 실시예 2-1에서 얻어진 하층액(물층)에 초산에틸 500ml을 넣고 진탕하여 실온에서 2~3시간정도 방치한 후, 상층과 하층으로 나누고, 상층액(초산에틸)을 회수한다. 동일한 방법으로 3회 실시하여 얻어진 추출액을 감압 농축하여 가루형태의 추출 분획물(POC-19) 6.3g을 얻었다.

실시예 3. 참나도히초미 극성용매 가용 추출무의 제조

3-1. 참나도히초미 n- 부탄올 가용 추출물( POC -20)의 제조

상기 실시예 2-2에서 얻어진 하층액(물층)에 n-부탄올 500ml을 넣고 진탕하여 실온에서 2~3시간정도 방치한 후, 상층과 하층으로 나누고, 상층액(부탄올)을 회수한다. 동일한 방법으로 3회 실시하여 얻어진 추출액을 감압농축하여 가루형태의 추출 분획물(POC-20) 12.8g을 얻었다.

3-2. 참나도히초미 물 가용 추출물( POC -21)의 제조

상기 실시예 3-1에서 얻어진 하층액(물층)을 감압농축하여 가루형태의 추출 분획물(POC-21) 11.3g을 얻었다.

실험예 1. 참나도히초미 추출물의 세포 독성 측정

상기 참나도히초미 추출물의 세포 독성을 측정하기 위하여 사람 섬유아세포 (Human skin fibroblast)를 배양하여 문헌에 기재된 MTT assay법 (A. A. Van de Loosdrecht, E. Nennie, G. J. Ossenkoppele, and R. H. Beelen, Langenhuijsen MM. J. Immunol. Methods, 141(1), 15, 1991)을 이용하여 하기와 같이 실험하였다.

MTT assay는 세포 증식이나 독성 측정에 사용되는 실험법으로, 살아있는 세포의 미토콘드리아에서 숙신산탈수소효소 (succinate dehydrogenase 또는 mitochondrial dehydrogenase)에 의해 황색 수용성염인 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)가 불수용성인 자주색의 포르마잔 유도체로 환원되는 원리를 이용한 방법으로 생성된 포르마잔 유도체는 용해제(DMSO 또는 2-propanol) 를 넣고 용해시킨 후 흡광도를 측정하였다.

사람 섬유아세포 (CRL-2076, ATCC, 미국)를 1×105 cells/well의 농도로 하여 24웰 배양판에 접종하였다. 배지는 우태아혈청 10%를 함유한 IMDM (Iscove's Modified Dulbecco's Medium; GIBCO, 미국)을 사용하였다. 접종 24시간 후 혈청이 첨가되지 않은 IMDM으로 교체하고, 참나도히초미 추출물을 농도별로 첨가한 후 1일 동안 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 배양하였다. MTT 용액 (2.5 mg/mL)을 웰당 0.1 mL씩 첨가하여 4시간 반응 후 MTT 용액을 제거하고 DMSO를 웰당 1 mL씩 첨가하였다. 실온에서 포르마잔 유도체를 녹인 후 570 nm에서 흡광도를 측정하고 음성대조군과 흡광도 차이를 비교하여 그 결과를 표 3에 나타내었다.

[표 3]

상기 표 3.의 결과에서 나타나는 바와 같이 참나도히초미 추출물은 섬유아세포에 대해서 독성이 없음을 확인하였다.

실험예 2. 프리라디칼 소거능

상기 실시예 1~21 의 참나도히초미 추출물 및 분획물에 대하여 프리라디칼 소거 효과를 푸지타(Fujita) 등의 방법을 개선한 방법으로 안정한 DPPH(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl)를 사용하여 하기와 같이 측정 하였다(M. S. Blois, Antioxidant determinations by the use of a stable free radical, Nature, 29, pp1199-1200, 1958).

0.2 mM 의 DPPH용액 (SIGMA, D9132) 1mL 에 참나도히초미 추출물 및 이로부터 분획된 분획물들을 각 농도별로 2mL 을 첨가하고, 상온에서 10 분간 반응 시킨 후, 525nm 에서 흡광도를 측정하여 프리라디칼 소거효과 (%)를 구한다. 이때 블랑크(Blank)는 DPPH 대신 에탄올을 사용하며, 대조군은 실험군과 동일한 농도의 아스코르브산용액 2mL 을 첨가한다.

프리라디칼 소거활성 SC50 은 프리라디칼을 50% 소거하는데 요구되는 추출물 및 화합물의 농도(㎍/㎖)로써 표시하였고, 참나도히초미 추출물에 대한 결과는 하기 표 1에 나타내었으며, 참나도히초미 추출물로부터분획된 분획물에 대한 결과는 하기 표 4에 나타내었다.

[표 4]

실험결과, 상기 표 4에 나타난 바와 같이, 본 발명의 참나도히초미 추출물과 분획물은 대조구로 사용된 강력한 항산화제인 아스크로브산보다는 낮은 항산화력을 보였지만 그와 유사한 수치를 보여주거나 항산화성을 갖는다고 인정될 수 있는 프리라디칼 소거능을 나타내어 우수한 항산화 효과를 확인하였다.

실험예 3. 엘라스타제 억제 효과 측정

상기 참나도히초미 추출물의 엘라스타제 저해 효과를 측정하기 위하여 하기와 같이 실험하였다(James A.E.K., Timothy D.W. and Gordon L. Biochemistry., 35, 9090-9096, 1996). 0.267 M 트리스 용액은 pH 8.0으로 제조하였고, 엘라스타제 기질은 Succ-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide 표준품을 8.8 mM 농도로 하여 기질액을 제조하였으며, 돼지 췌장 엘라스타제 (Porcine Pancreatic Elastase) 표준품을 10 μg/mL 농도로 하여 효소액을 제조하였다. 시료 대신 정제수 100 μL를 가지고 검액과 같은 방법으로 조작하여 얻은 액을 공시험액으로 하여 그 흡광도 A를 측정하였고, 효소액 및 검액 대신 정제수 120 μL를 넣어 검액과 같은 방법으로 조작하여 얻은 액을 색보정액으로 하여 그 흡광도 D를 측정하였다.

상기에서 제조한 완충액 60 μL에 기질액 20 μL, 참나도히초미 추출물의 시료 100 μL를 넣어 섞은 뒤, 효소액 20 μL를 넣어 25℃에서 15분 반응시켰고, p-니트로아닐린의 생성량을 410 nm에서 흡광도 B를 측정하였다. 완충액 60 μL에 기질액 20 μL, 정제수 20 μL, 시료 100 μL를 넣어 위와 같은 방법으로 조작하여 얻은 액을 대조액으로 하여 흡광도 C를 측정하였다.

[수학식 1]

엘라스타제 저해율(%) =[1 - (각 농도 혼합 식물 추출물의 효소 활성도/대조군의 효소 활성도)] X 100

엘라스타제 저해활성 IC50 은 엘라스타제의 활성을 50% 저해하는데 요구되는 추출물 및 화합물의 농도(㎍/㎖)로써 표시하였고, 엘라스타제 억제율은 하기의 수 학식 1로 계산하였으며, 그 결과를 표 5에 나타내었다.

[표 5]

실험결과, 상기 표 5에 나타난 바와 같이, 본 발명의 참나도히초미 추출물은 대조구과 비교하여 유사하거나 더 탁월한 엘라스타제 저해효과를 나타내어 주름개선에 효과적임을 확인하였다.

실험예 4. 참나도히초미 추출물 및 분획물에 의한 MMP -1 mRNA 발현 저해 효과 측정

피부내의 콜라겐 붕괴를 촉진하는 MMP-1 (Matrix Metallo- Proteinase-1)은 UVA에 의해 발현이 촉진되며 MMP-1의 유전자 발현 저해 효과를 보기 위해 RT-PCR (Reverse transcription polymerase chain reaction)을 실시하였다. 사람 섬유아세포를 60 mm 세포 배양 접시에 1× 10⁶의 밀도로 접종한 후 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 24시간 배양하였다. UVA 6J을 조사한 후 참나도히초미 추출물을 농도별, 분획별로 첨가하여 24시간 배양하고, 세포에 트리졸 (Trizol, invitrogen, 미국) 1 mL을 첨가하여 인비트로젠 社의 RNA 분리법에 따라 분리하였다. 자외선 검출기를 이용하여 260nm에서 RNA를 정량한 후, RT-PCR을 실시하였다. RT-PCR은 RT-PCR Kit (All-in-one RT-PCR Kit, SuperBio, Korea)를 사용하였고, 프라이머와 반응 조건은 하기의 표 6 및 7과 같고, kit의 방법에 의해 실험을 수행하였다.

[표 6]. MMP-1 프라이머

[표 7]. Actin 프라이머

MMP-1 발현 억제 효과를 측정한 결과는 actin 유전자에 대해 보정을 하여 나타내었고, 활성비교를 위해 대조구로 EGCG (Epigallocatechin-3-gallate)을 사용하였다. 하기 표 8에서 결과를 나타내었다.

[표 8]

제조예 1. 유연 화장수( 스킨 )의 제조

참나도히초미 추출물을 함유한 유연 화장수(스킨)의 제조예를 하기 표 9에 나타내었다.

[표 9]

제조예 2. 영양화장수(로션)의 제조

참나도히초미 추출물을 함유한 로션의 제제예를 하기 표 10에 나타내었다.

[표 10]

제조예 3. 영양크림의 제조

참나도히초미 추출물을 함유한 영양크림의 제제예는 하기 표 11에 나타내었다.

[표 11]

제조예 4. 친수성 연고제의 제조

[표 12]

임상 시험예 1. 피부 탄력도 개선 효과

피부주름에 대한 참나도히초미 추출물의 영향을 실험하기 위해 제조예 2의 실시제형예 2 및 비교제형예 2의 로션을 20세~55세의 여성층으로서 정상, 지성, 건성, 복합성 피부의 소유자 20명에게 안면 왼쪽부분에는 실시제형예 2의 로션을, 안면 오른쪽부분에는 비교제형예 2의 로션을 아침, 저녁으로 1일 2회 도포하여 사용하게 한 후 1주, 2주, 3주 및 4주후, 피부 탄력 측정기기(Ballistometer)를 이용하여 피부의 탄력성을 측정하여 하기 표 13에 나타내었다.

[표 13]

상기 결과, 표 13에 나타난 바와 같이, 본 발명의 참나도히초미 추출물을 함유하는 실시제형예 2의 로션이 비교제형예 2의 로션에 비해 피부상태 개선효과에 의해 피부탄력 효과가 매우 우수함을 알 수 있었다.

임상실험예 2. 피부 상태 개선효과 확인 실험

실시제형예 3과 비교제형예 3의 영양크림에 대한 피부도표시 피부상태 개선효과를 확인하기 위하여 다음과 같은 임상 확인 실험을 하였다. 20~55세의 여성층으로서 정상, 지성, 건성, 복합성 피부의 소유자 50명을 각각 25%씩으로 구성하여 피부상태 개선과 피부의 유수분 상태를 조사하였다. 동일인에게 안면 위쪽 부분에는 제형예 3의 영양크림을, 안면 오른쪽 부분에는 비교예 3의 영양크림을 매일 아침 세안 후 피부에 1일 1회 20일간 도포한 후 피부상태 개선을 확인하기 위하여 피부상태 개선 정도를 측정하였다. 시험결과를 표 14에 나타내었다.

[표 14]

상기 조사결과와 같이 참나도히초미 추출물을 첨가하여 제조한 제형예 3의 화장료가 첨가되지 않고 제조한 비교예 3보다 피부 개선효과가 우수하다는 것을 알 수 있었다.

이상 설명한 바와 같이, 본 발명에 따르면 참나도히초미 추출물은 항산화 작용, 엘라스타제 억제효과, 콜라겐분해효소(MMP-1) 발현억제 및 타이로시나제 억제효과 등의 항산화, 주름개선효능, 미백효능이 우수하며 안정성에 문제가 없는 천연재료임을 알수 있다. 따라서 본 발명의 참나도히초미 추출물을 이용한 약학적 조성물 및 화장료 조성물은 관련 분야에서 다양하게 사용될 수 있을 것이다.

Claims (8)

1. 참나도히초미(Polystichum ovatopaleaceum var. coraiense (H.Christ) Sa.Kurata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화 및 주름개선용 피부 외용 약학적 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 참나도히초미 추출물은 조성물 총 중량을 기준으로 0.01 내지 50 중량% 로 포함된 것을 특징으로 하는 피부 외용 약학적 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 참나도히초미 추출물은 엘라스타제(Elastase) 활성 억제 및 매트릭스 메탈로프로티나아제(MMP, Matrix metallo-proteinase)-1의 발현을 억제하여 항노화 및 주름개선 작용을 하는 것을 특징으로 하는 피부 외용 약학적 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 참나도히초미 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜 및 글리세린으로 구성된 군으로부터 선택된 용매 또는 그 혼합용매로 추출된 조추출물인 것을 특징으로 하는 피부 외용 약학적 조성물.
5. 제4항에 있어서, 상기 약학적 조성물은 상기 조추출물의 고형분을 헥산, 초 산에틸, 부탄올, 및 물로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나의 용매로 추출한 가용 추출물을 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 외용 약학적 조성물.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 피부 외용 약학적 조성물은 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 및 카타플라스마제에서 선택된 어느 하나의 제형임을 특징으로 하는 피부 외용 약학적 조성물.
7. 참나도히초미(Polystichum ovatopaleaceum var. coraiense (H.Christ) Sa.Kurata) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화 및 주름개선용 피부 외용 화장료 조성물.
8. 제 7항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저에서 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.