KR20230087205A - 아토피 피부염 개선을 위한 항염 유기농 녹차 발효 여과물 및 이를 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

아토피 피부염 개선을 위한 항염 유기농 녹차 발효 여과물 및 이를 함유하는 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 아토피 피부염 개선을 위한 항염 유기농 녹차 발효 여과물 및 이를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 아토피 개선용 화장료 조성물은 한방 항염 유기농 발표 녹차를 유효 성분으로 적용한 화장품 소재로서, 아토피 피부염의 예방 또는 개선 효과가 현저히 우수하다.

Description

아토피 피부염 개선을 위한 항염 유기농 녹차 발효 여과물 및 이를 함유하는 화장료 조성물{Anti-inflammatory Korean medicinal green tea ferment filtrate for improving atopic dermatitis and cosmetic composition containing the same}
본 발명은 아토피 피부염 개선을 위한 항염 유기농 녹차 발효 여과물 및 이를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
아토피 피부염(atopic dermatitis)은 면역 기능의 불균형을 주된 원인으로, 사회적, 환경적, 심리적 및 유전적 요인 등이 복합적으로 작용하여 증상의 호전과 악화를 반복하는 만성 염증성 피부 질환이다.
염증은 세포 또는 조직이 어떠한 원인에 의해 손상되면 그 반응을 최소화하고, 손상된 부위를 원상 회복시키려는 일련의 방어 목적으로 나타나는 증상이며, 신경, 혈관 및 세포 반응 등을 일으켜 통증, 부종 및 발열 등에 의한 기능 장애를 초래한다.
상기와 같은 문제를 개선하기 위해 항염 화장료 등이 개발되어 사용되고 있지만, 피부 안전성 또는 화장료 배합시 안정성 면에서 부족하여, 새로운 항염 소재의 탐색 및 연구가 절실한 상황이다.
대한민국 등록특허공보 제2156898호.
상기와 같은 문제점의 해결을 위해 본 발명자는 아토피 피부염 개선 효과를 갖는 천연 물질에 대해 경의 연구하던 중, 피부에 좋은 효과가 있는 녹차를 이용하여, 녹차 발효여과물이 우수한 항염효과와 함께 LPS 자극된 대식세포에서 아토피 피부염 억제 효과를 갖는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 한방 항염 유기농 발효 녹차를 유효 성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물 및 이의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 따른 염증 예방 또는 개선용 녹차 잎 유산균 발효액의 제조방법은, 녹차 잎의 용매 추출물을 유산균 발효하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일 예에 따른 염증 예방 또는 개선용 녹차 잎 유산균 발효액의 제조방법에 있어서, 상기 용매는 물 또는 탄소수 1 내지 4의 저가 알코올을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 예에 따른 염증 예방 또는 개선용 녹차 잎 유산균 발효액의 제조방법에 있어서, 상기 유산균은 락토바실러스(Lactobacillus) 또는 바실러스(Bacillus)일 수 있다.
본 발명의 일 예에 따른 염증 예방 또는 개선용 녹차 잎 유산균 발효액의 제조방법에 있어서, 상기 락토바실러스는 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei B2-16), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플렌타룸 (Lactobacillus plantarum P23), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis A164) 및 바실러스 코아귤런스(Bacillus coagulance)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상일 수 있다.
본 발명의 일 예에 따른 염증 예방 또는 개선용 녹차 잎 유산균 발효액의 제조방법에 있어서, 상기 바실러스는 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis), 바실러스 푸미루스(Bacillus pumilus), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis), 및 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상일 수 있다.
본 발명에 따른 염증 예방 또는 개선용 화장료 조성물은, 상기 녹차 잎 유산균 발효액의 제조방법에 의해 제조된 녹차 잎 유산균 발효액을 함유한다.
본 발명의 일 예에 따른 염증 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물은 전체 중량에 대하여, 상기 녹차 잎 유산균 발효액을 0.001 내지 90 중량% 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 예에 따른 염증 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 있어서, 상기 화장료 조성물의 제형은 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밤, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 파운데이션, 영양에센스, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있다.
본 발명의 아토피 개선용 화장료 조성물은 한방 항염 유기농 발표 녹차를 유효 성분으로 적용한 화장품 소재로서, 아토피 피부염의 예방 또는 개선 효과가 현저히 우수하다.
도 1은 LPS 처리 후 세포 생존률을 측정한 것이고,
도 2는 녹차 추출물과 본 발명의 발효 녹차 추출물 각각에 대해, LPS 처리 후 NO 생성율을 백분율로 계산한 결과이다.
이하 첨부한 표 또는 도면들을 참조하여 본 발명에 대해 상세히 설명한다.
도면이 기재되어 있을 경우, 이는 당업자에게 본 발명의 사상이 충분히 전달될 수 있도록 하기 위해 예로서 제공되는 것이다. 따라서 본 발명은 제시되는 도면들에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있으며, 상기 도면들은 본 발명의 사상을 명확히 하기 위해 과장되어 도시될 수 있다.
이때, 사용되는 기술 용어 및 과학 용어에 있어서 다른 정의가 없다면, 이 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 통상적으로 이해하고 있는 의미를 가지며, 하기의 설명 및 첨부 도면에서 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있는 공지 기능 및 구성에 대한 설명은 생략한다.
또한 본 발명의 명세서에서 사용되는 단수 형태는 문맥에서 특별한 지시가 없는 한 복수 형태도 포함하는 것으로 의도할 수 있다.
또한 본 발명의 명세서에서 특별한 언급 없이 사용된 단위는 중량을 기준으로 하며, 일 예로 % 또는 비의 단위는 중량% 또는 중량비를 의미한다.
또한 본 발명의 명세서에서, “포함한다”는 표현은 “구비한다”, “함유한다”, “가진다” 또는 “특징으로 한다” 등의 표현과 등가의 의미를 가지는 개방형 기재이며, 추가로 열거되어 있지 않은 요소, 재료 또는 공정을 배제하지 않는다. 또한 “실질적으로…로 구성된다”는 표현은 특정된 요소, 재료 또는 공정과 함께 열거되어 있지 않은 다른 요소, 재료 또는 공정이 발명의 적어도 하나의 기본적이고 신규한 기술적 사상에 허용할 수 없을 만큼의 현저한 영향을 미치지 않는 양으로 존재할 수 있는 것을 의미한다. 또한 “구성된다”는 표현은 기재된 요소, 재료 또는 공정만이 존재하는 것을 의미한다.
본 발명의 명세서에서 사용된 용어, "성분", "조성물", "화합물의 조성물", "화합물", "약물", "약학적 활성제", "활성제", "치유" "치료법" "치료" 또는 "약제"는 대상체(인간 또는 동물)에 투여될 때 국소 및/또는 전신 작용에 의해 원하는 약학적 및/또는 생리학적 효과를 유도하는 화합물 또는 화합물(들) 또는 물질의 조성물을 의미하기 위해 상호교환적으로 사용된다.
본 발명의 명세서에서 사용된 용어 "치료" 또는 "치료법"(뿐만 아니라 그의 상이한 형태)는 예방적 (예: 예방적 치료), 치유적 또는 경감성 치료를 포함한다. 본원에서 사용된 용어 "치료하는"은 상태, 질환 또는 장애의 적어도 하나의 유해 또는 부정적 효과 또는 증상을 경감시키거나 감소시키는 것을 포함한다. 본 발명의 용어 "예방", “개선” 및 "치료"는 최광의의 개념으로 해석되어야 하며, "예방"이란, 질환에 노출되거나 질환에 걸리기 쉬울 수 있으나 질환의 증상을 아직 경험하거나 드러내지 아니한 환자에게서 질환의 임상적 증상 중 하나 이상이 진행되지 아니하도록 하는 것을 의미한다. "치료"란, 질환 또는 이의 하나 이상의 임상적 증상의 발달을 저지 또는 감소시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에 있어 “샘플” 또는 “시료”는 분석을 위한 대상을 나타내는 것으로, 명세서에 걸쳐 동일한 의미로 사용되었다.
이하 본 발명의 염증 예방 또는 개선용 녹차 잎 유산균 발효액의 제조방법에 대해 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 염증 예방 또는 개선용 녹차 잎 유산균 발효액 (혼합물)의 제조방법은, 녹차 잎의 용매 추출물을 유산균 발효하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일 예에 따른 염증 예방 또는 개선용 녹차 잎 유산균 발효액의 제조방법에 있어서, 상기 용매는 물 또는 탄소수 1 내지 4의 저가 알코올을 포함하는 것일 수 있으며, 일예로, 증류수를 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 유산균을 이용한 발효시 온도는 통상적으로 유산균이 생존할 수 있는 온도 범위에서 수행하는 것이 좋으며, 일예로 25 내지 40℃, 좋게는 30 내지 35℃가 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다. 만일 온도가 물의 끓는점과 같이 과도하게 높거나 물의 어는점과 같이 과도하게 낮은 경우, 효소의 활성이 없어져, 녹차 잎에 대한 유효 성분 추출이 제대로 이루어지지 않을 가능성이 있다.
상기 유산균발효에 사용되는 유산균은 락토바실러스(Lactobacillus), 바실러스(Bacillus) 등을 포함할 수 있으나 바람직하게는 락토바실러스를 포함하며, 이에 제한되는 것은 아니다. 균주는 순수하게 분리하여 배양한 세균이나 균류를 의미하는 것으로, 상기 락토바실러스에 락토바실러스 속 균주가 이용될 수 있으며, 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei B2-16), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플렌타룸(Lactobacillus plantarum P23), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis A164), 바실러스 코아귤런스(Bacillus coagulance)로 이루어진 군에서 하나 이상 선택될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 바실러스에 바실러스 속 균주가 이용될 수 있으며, 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis), 바실러스 푸미루스(Bacillus pumilus), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis), 및 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로 이루어진 군에서 하나 이상 선택될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 바람직하게는 락토바실러스 플렌타룸(Lactobacillus plantarum P23)을 사용할 수 있으며, 상기 균주를 이용하여 발효물을 생산하는 경우, 항염 활성이 높고, 녹차의 활성 성분의 추출이 보다 많은 비율로 이루어질 수 있어 바람직하다.
상기 혼합물은 유산균으로 발효시켜 제조된 발효 혼합물일 수 있다. 발효는 유산균이 갖고 있는 효소를 이용하여 유기물을 분해시키는 과정을 의미하는 것으로, 유산균, 발효 균주 등을 통한 발효과정을 거친 원료는 발효 전과 비교하여 다양한 효과가 증대되는 것으로 알려져 있다. 발효 과정을 거친 물질은 피부에 좋은 각종 아미노산, 유기산, 항산화물질을 함유할 수 있고, 발효 과정을 통해 입자가 작아지고 독성이 분해되어 흡수율을 높이거나 부작용을 완화할 수 있다.
본 발명에 따른 염증 예방 또는 개선용 화장료 조성물은, 상기 녹차 잎 유산균 발효액의 제조방법에 의해 제조된 녹차 잎 유산균 발효액을 함유한다.
상기 염증의 경우 그 종류는 제한되는 것은 아니나, 피부 상에 염증을 원인으로 발생하는 질환이라면 제한없이 고려할 수 있으며, 일예로, 아토피 피부염 등을 들 수 있다.
상기 화장료 조성물은 전체 중량에 대하여, 상기 녹차 잎 유산균 발효액을 0.001 내지 90 중량% 포함하는 것일 수 있다.
상기 화장료 조성물의 제형은 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밤, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 파운데이션, 영양에센스, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있다.
본 발명에 따른 화장료　조성물은 유산균발효 혼합물을 0.001 내지 90 중량%의 양을 포함한다. 유산균발효 혼합물이 전체 중량 대비 0.001 내지 90 중량% 범위 이내로 포함된 것이 바람직한데, 0.001 중량% 미만이면 유산균발효 혼합물의 유효한 효과를 달성할 수 없는 문제가 있을 수 있고, 90 중량%를 초과하는 경우 효과가 증대되지 않으면서도 제형화의 어려운 문제, 사용자의 사용감 저하, 피부 자극에 대한 증가 등의 부작용만 발생하는 문제가 있을 수 있다.
본 발명에 따른 유산균발효 혼합물은 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밤, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 파운데이션, 영양에센스, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나의 제형에 적용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 화장료　조성물은 통상적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며, 예컨대 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 허용 가능한 담체는 제형에 따라 달리할 수 있다. 예컨대, 연고, 페이스트, 크림 또는 젤로 제형화될 때 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있다.
상기 화장료　조성물은 파우더 또는 스프레이로 제형화될 때, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있고, 스프레이의 경우 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 더 포함할 수 있다.
상기 화장료　조성물은 용액 또는 유탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-브틸글리콜 오일이 사용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 사용될 수 있다.
상기 화장료　조성물은 현탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 사용될 수 있다.
상기 화장료　조성물이 비누로 제형화될 때, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 사용될 수 있다.
상기 화장료　조성물은 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다.
다만, 상기 보조제 및 그 혼합 비율은 본 발명에 따른 화장료　조성물의 바람직한 성질에 영향을 미치지 않도록 적절히 선택할 수 있다.
상기 화장료　조성물은 각각의 제형에 있어서 상기 필수성분 외에 제형의 종류 또는 사용 목적, 원하는 피부 개선 효과 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.
특히, 세라마이드(Ceramide)는 피부표피층 중 각질층에 존재하는 성분으로서 각질세포간 지질성분의 약 40 내지 50%를 차지하는 성분이다. 세라마이드는 다른 각질세포간 지질성분과 함께 각질세포 사이에서 다중 라멜라 구조를 형성함으로써 피부로부터의 수분증발을 억제하고 수분을 유지하여 피부를 부드럽게 하고 피부를 건강하게 유지시켜 준다. 또한, 상기 세라마이드는 친수성기 및 친유성기를 동시에 가지고 있어서 피부 속 수분 증발을 억제할 수 있으며, 피부 내 이물질의 침투를 저지하는 피부 장벽으로서 작용하여 염증의 조절이나 상처 회복에도 중요한 기능을 할 수 있다.
이하, 본 발명의 내용을 실시예를 통하여 보다 구체적으로 설명한다. 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 권리범위가 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
[실시예 1] 항염용 조성물의 제조
녹차(종자) 배지의 제조:
시중에서 구입하거나 채취한 녹차 잎을 깨끗이 세척하여 물기를 제거한 후 건조시켰다.
건조된 녹차 잎을 분쇄하여 분쇄물에 증류수와 MRS 배지 소량을 첨가하고, 121℃에서 15분간 멸균하여 녹차(종자) 배지를 제조하였다.
제조한 녹차(종자) 배지에 대해, 중량 당 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) 1%의 비율로 접종한 후, 37℃에서 이틀간 배양하였다.
배양 종료 후, 121℃에서 15분간 멸균한 다음, 동결건조하여 분말화하여 발효 녹차 분말을 제조하였다.
[비교예 1]
상기 실시예 1에서, 락토바실러스 플란타럼을 접종하지 않음으로, 발효를 수행하지 않는 점을 제외하고, 나머지 과정은 동일하게 하여 녹차 분말을 제조하였다.
[비교예 2]
상기 비교예 1에서, 열수 대신 60% 에탄올을 이용하여 추출을 수행하는 것을 제외하고, 나머지 과정은 동일하게 하여 녹차 분말을 제조하였다.
[시험예 1] 세포독성 측정
본 발명의 조성물이 세포독성에 미치는 영향을 평가하기 위해서　MTT　assay를 이용하였다.
MTT　assay는 세포의 생존율을 측정하기 위한 실험실　시험법으로써 표준 비색분석법(standard colorimetric　assay)이라고 할 수 있다.
세포의 증식과 살아있는 세포를 정확하게 측정할 수 있는 기법인　MTT　assay는 생명과학 분야에서 필수적인 기법 중의 하나이다.
상기 제조된 세포주에 시료의 농도를 5, 10, 50, 100, 500, 1000 ㎍/㎖까지 총 6가지 농도로 희석하여(도 1 참조) 각 웰에 첨가하였다. 이후 다시 37℃, 5% CO2　incubator에서 24시간 동안 배양하고 2㎎/㎖　MTT　시약 50 ㎕를 가한 후 37℃ 배양기에서 4시간 동안 방치하였다.
원심분리기를 이용하여 상등액을 제거하고 DMSO 200 ㎕씩을 각 웰에 가해　MTT　염색침전물을 녹인 후 ELISA 판독기로 540 ㎚ 파장에서 OD540　값을 측정하였다.
그 결과를 도 1에 도시하였다.
이로부터, 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 발효된 녹차 추출물의 세포 생존률이 대조군 대비 높게 나타났으며, 100 ug/mL 아래의 농도(AUC, area under curve)에서 95% 이상의 세포 생존율을 나타내는 것을 확인하였다.
시료의 농도가 500 ug/mL인 경우, 90%의 세포 생존율을 나타냄에 따라, 항염증 관련 세포 실험에 대한 최고 농도는 상기 실험 설정 기준으로는 100 ug/mL이며, 500 ug/mL을 넘어가는 경우, 세포 생존성이 감소하는 것을 확인하였다.
[시험예 2] NO 생성량 측정
본 발명의 따른　조성물에 대한　항염　효과를 확인하기 위해, 염증을 일으키는 일산화질소(NO)의 생성 억제능을 분석하였다.
RAW264.7 세포를 96-웰 플레이트에 5 x 104 세포/웰로 넣고 세포의 부착도(confluence)가 80% 정도일 대, PBS로 2회 세척하고, 무혈청 배지를 이용하여 18시간 배양하였다.
각 실험군에 대해, 시료를 농도별로 처리하고, 1시간 배양한 후, LPS(Lipopolysaccharide, 1 μg/mL)를 각각 처리한 후 24시간 배양하였다.
배양액의 상층액을 취하여 그리스(griess) 시약과 반응시킨 후, ELISA 리더기로 540 nm에서흡광도를 측정하여, NO 생성율을 백분율로 표시하였다.
이 때, 그리스 반응은 배양 세포로부터 생성되어 배지로 방출된 NO의 양을 정량적으로 분석하는 방법으로 24 시간의 시료 처리 후 세포 배양 배지 100 μL를 96-웰 플레이트에 분주한 후 그리스 반응용액 A(5 % 인산용액에 용해시킨 1 % 설파닐아미드 용액), B(0.1 % 나프틸렌디아민디하이드로클로라이드) 완충액을 1:1로 섞어 96-웰 플레이트에 100μL씩 분주하고 NO 생성에 따른 색의 변화를 멀티-플레이트 리더를 이용하여 540 nm에서의 흡광도로 측정하였으며, 그 값은 5 회 반복 실험의 평균값으로 나타내었다.
그 결과를 도 2에 도시하였다.
이로부터, 본 발명에 따른 발효된 녹차 추출물은 처리한 구간에서 모두 LPS에 의해 증가된 NO의 생성량을 농도 의존적으로 현저히 감소시키는 것을 확인하였으며, 반면 녹차 추출물을 처리한 군에서는 NO 감소 폭이 일정하지 않게 나타났다. 또한, 100 ug/mL 농도로 처리한 구간에서의 NO 생성량은 발효된 녹차 추출물의 효과와 30% 이상 차이가 발생하여, 본 발명에 따른 발효된 녹차 추출물은 LPS로 자극한 RAW264.7 세포에서 염증 물질 NO의 생성을 유의하게 저해한다는 점을 확인하였다.
[제형예 1] 항염용 화장료 조성물 1 (연고제)
전체 화장료 조성물의 중량을 100g이 되도록 하며,
상기 실시예 1에 따른 유산균 발효물: 40.0 g,
밀납: 10.0g,
폴리소르베이트 60 : 1.5g
유동 파라핀: 38.0g
글리세린: 1.0g
방부제: 미량
향료: 미량
정제수: 잔량
상기와 같은 구성으로 통상적인 연고제 제조방법에 따라 항염용 연고제를 제조하였다.
[제형예 2] 항염용 화장료 조성물 2 (크림제)
전체 화장료 조성물의 중량을 100g이 되도록 하며,
상기 실시예 1에 따른 유산균 발효물 32.0g,
글리세릴스테아레이트/PEG-100스테아레이트 3.0g,
폴리소르베이트60: 1.5g
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드: 15.0g
알로에 버터: 4.0g
호호바 오일: 1.5g
글리세린: 3.0g
부틸렌 글리콜: 12.0g
피토스쿠알란: 10.0g
방부제: 미량
향료: 미량
정제수: 잔량
상기와 같은 구성으로 통상적인 크림제 제조방법에 따라 항염용 크림제를 제조하였다.
이상으로 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (8)

  1. 녹차 잎의 용매 추출물을 유산균 발효하는 단계를 포함하는, 염증 예방 또는 개선용 녹차 잎 유산균 발효액의 제조방법.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 용매는 물 또는 탄소수 1 내지 4의 저가 알코올을 포함하는 것인, 염증 예방 또는 개선용 녹차 잎 유산균 발효액의 제조방법.
  3. 제 1항에 있어서,
    상기 유산균은 락토바실러스(Lactobacillus) 또는 바실러스(Bacillus)인, 염증 예방 또는 개선용 녹차 잎 유산균 발효액의 제조방법.
  4. 제 3항에 있어서,
    상기 락토바실러스는 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei B2-16), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플렌타룸 (Lactobacillus plantarum P23), 락토코커스 락티스(Lactococcus lactis A164) 및 바실러스 코아귤런스(Bacillus coagulance)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상인, 염증 예방 또는 개선용 녹차 잎 유산균 발효액의 제조방법.
  5. 제 3항에 있어서,
    상기 바실러스는 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformis), 바실러스 푸미루스(Bacillus pumilus), 바실러스 소노렌시스(Bacillus sonorensis), 및 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상인, 염증 예방 또는 개선용 녹차 잎 유산균 발효액의 제조방법.
  6. 제 1항 내지 제 5항 중 어느 한 항의 염증 예방 또는 개선용 녹차 잎 유산균 발효액의 제조방법에 의해 제조된 녹차 잎 유산균 발효액을 함유하는 염증 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  7. 제 6항에 있어서,
    상기 화장료 조성물은 전체 중량에 대하여, 상기 녹차 잎 유산균 발효액을 0.001 내지 90 중량% 포함하는 것인, 염증 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
  8. 제 6항에 있어서,
    상기 화장료 조성물의 제형은 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밤, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 파운데이션, 영양에센스, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 어느 하나인, 염증 예방 또는 개선용 화장료 조성물.
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