BR112020012554A2 - anticorpos de cadeia pesada que se ligam a cd22 - Google Patents

Abstract

A presente invenção refere-se a anticorpos de cadeia pesada anti-CD22 (por exemplo, UniAbsTM), juntamente com métodos para fabricar tais anticorpos, composições, incluindo composições farmacêuticas que compreendem tais anticorpos, e seu uso para tratar distúrbios de célula B que são caracterizados pela expressão de CD22.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANTI- CORPOS DE CADEIA PESADA QUE SE LIGAM A CD22".

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[001] Este pedido reivindica a prioridade da data de depósito do Pedido de Patente Provisório nº U.S. 62/609.759, depositado em sex- ta-feira, 22 de dezembro de 2017, cuja divulgação está incorporada no presente documento a título de referência em sua totalidade.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

[002] O presente pedido contém uma Listagem de Sequências que foi enviada eletronicamente em formato ASCII e é incorporada ao presente documento a título de referência, em sua totalidade. A dita cópia ASCII, criada em 7 de fevereiro de 2019, é nomeada TNO-0009- WO_SL.txt e tem 80.329 bytes em tamanho.

CAMPO DA INVENÇÃO

[003] A presente invenção refere-se a anticorpos humanos de cadeia pesada (por exemplo, UniAbsTM) que se ligam a CD22. A in- venção se refere adicionalmente a métodos para fabricar tais anticor- pos, composições, que incluem composições farmacêuticas, que com- preendem tais anticorpos, e seu uso para tratar distúrbios de célula B que são caracterizados pela expressão de CD22.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO CD22

[004] CD22, também conhecido como SIGLEC-2 (UniProt P20273), é um receptor de superfície celular que é expressado em cé- lulas B maduras. CD22 contém múltiplos domínios de Ig e é um mem- bro da superfamília de imunoglobulina. O domínio extracelular de CD22 interage com porções químicas de ácido siálico, incluindo aque- las presentes na proteína de superfície celular CD45. CD22 é conside- rado por funcionar como um receptor inibidor para sinalização de re- ceptor de célula B. Juntamente com CD20 e CD19, a expressão de célula B restrita de CD22 torna o mesmo um alvo atraente para o tra- tamento terapêutico de malignidades de célula B. Os anticorpos mo- noclonais específicos para CD22 foram descritos na literatura (por exemplo, Jabbour, Elias, et al. "Monoclonal antibodies in acute lym- phoblastic leukemia". Blood 125.26 (2015): 4010-4016) e têm sido usados terapeuticamente como monoclonais padrão (por exemplo, epratuzumab) assim como conjugados anticorpo-fármaco (inotuzumab ozogamicina). Além disto, as células T receptoras de antígeno quimé- rico anti-CD22 têm sido usadas na clínica para tratar leucemia (Fry, Terry J., et al. "CD22-targeted CAR T cells induce remission in B-ALL that is naive or resistant to CD19-targeted CAR immunotherapy". Natu- re medicine (2017)).

ANTICORPOS DE CADEIA PESADA

[005] Num anticorpo de IgG convencional, a associação da ca- deia pesada e cadeia leve ocorre devido, em parte, a uma interação hidrofóbica entre a região constante de cadeia leve e o domínio cons- tante de CH1 da cadeia pesada. Há resíduos adicionais nas regiões de framework 2 (FR2) e framework 4 (FR4) de cadeia pesada que tam- bém contribuem para esta interação hidrofóbica entre as cadeias pe- sada e leve.

[006] Sabe-se, no entanto, que os soros de camelídeos (subclas- se Tylopoda que inclui camelos, dromedários e lamas) contêm um tipo principal de anticorpos compostos apenas por cadeias H pareadas (anticorpos somente de cadeia pesada ou UniAbsTM). Os UniAbsTM de Camelidae (Camelus dromedarius, Camelus bactrianus, Lama glama, Lama guanaco, Lama alpaca e Lama vicugna) têm uma estrutura úni- ca consistindo num único domínio variável (VHH), uma região de do- bradiça e dois domínios constantes (CH2 e CH3), que são altamente homólogos aos domínios CH2 e CH3 dos anticorpos clássicos. Estes UniAbsTM não possuem o primeiro domínio da região constante (CH1)

que está presente no genoma, mas é separado durante o processa- mento do mRNA. A ausência do domínio CH1 explica a ausência da cadeia leve nos UniAbsTM, uma vez que este domínio é o local de an- coragem para o domínio constante da cadeia leve. Tais UniAbsTM na- turalmente evoluíram para conferir especificidade de ligação a antíge- no e alta afinidade por três CDRs a partir de anticorpos convencionais ou fragmentos dos mesmos (Muyldermans, 2001; J Biotechnol 74:277–302; Revets et al., 2005; Expert Opin Biol Ther 5:111–124). Os peixes cartilaginosos, como tubarões, também desenvolveram um tipo distinto de imunoglobulina, designada como IgNAR, que é desprovida das cadeias polipeptídicas leves e é composta inteiramente por cadei- as pesadas. As moléculas IgNAR podem ser manipuladas por enge- nharia molecular para produzir o domínio variável de um único polipep- tídeo de cadeia pesada (vNARs) (Nuttall et al. Eur. J. Biochem. 270, 3543-3554 (2003); Nuttall et al. Function and Bioinformatics 55, 187- 197 (2004); Dooley et al., Molecular Immunology 40, 25-33 (2003)).

[007] A capacidade dos anticorpos apenas de cadeia pesada, desprovidos de cadeia leve, para se ligarem ao antígeno foi estabele- cida na década de 1960 (Jaton et al. (1968) Biochemistry, 7, 4185- 4195). A imunoglobulina de cadeia pesada fisicamente separada da cadeia leve reteve 80% da atividade de ligação ao antígeno em rela- ção ao anticorpo tetramérico. Sitia et al. (1990) Cell, 60, 781-790 de- monstraram que a remoção do domínio CH1 de um gene de camun- dongo μ rearranjado resulta na produção de um anticorpo apenas de cadeia pesada, desprovido de cadeia leve, em cultura de células de mamífero. Os anticorpos produzidos retiveram a especificidade de li- gação a VH e as funções efetoras.

[008] Os anticorpos de cadeia pesada com alta especificidade e afinidade podem ser gerados contra uma variedade de antígenos atra- vés da imunização (van der Linden, R. H., et al. Biochim. Biophys. Ac-

ta. 1431, 37-46 (1999)) e a porção VHH pode ser prontamente clonada e expressa em levedura (Frenken, L. G. J., et al. J. Biotechnol. 78, 11- 21 (2000)). Seus níveis de expressão, solubilidade e estabilidade são significativamente maiores que aqueles dos fragmentos clássicos F(ab) ou Fv (Ghahroudi, M. A. et al. FEBS Lett. 414, 521-526 (1997)).

[009] Os camundongos em que o locus de cadeia leve (L) λ (lambda) e/ou os loci de cadeia L λ e κ (capa) foram funcionalmente silenciados e os anticorpos produzidos por tais camundongos são des- critos nos documentos de Patente nº U.S. 7.541.513 e 8.367.888. Pro- dução recombinante de anticorpos apenas de cadeia pesada em ca- mundongos e ratos foi relatada, por exemplo, no documento nº WO2006008548; na Publicação de Pedido de Patente nº U.S. 20100122358; Nguyen et al., 2003, Immunology; 109(1), 93-101; Brüggemann et al., Crit. Rev. Immunol.; 2006, 26(5):377-390; e Zou et al., 2007, J Exp Med; 204(13): 3271–3283. A produção de ratos knockout por meio de microinjeções de embriões de nucleases de de- do de zinco é descrita em Geurts et al., 2009, Science, 325(5939):433. Os anticorpos apenas de cadeia pesada solúveis e roedores transgê- nicos que compreendem um locus de cadeia pesada heterólogo que produz tais anticorpos são descritos nos documentos de Patente no U.S. 8.883.150 e 9.365.655. As estruturas CAR-T que compreendem anticorpos de domínio único como domínio de ligação (alvejamento) são descritas, por exemplo, em Iri-Sofla et al., 2011, Experimental Cell Research 317:2630-2641 e Jamnani et al., 2014, Biochim Biophys Ac- ta, 1840:378-386.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0010] Os aspectos da invenção se referem a anticorpos de cadeia pesada, incluindo, mas sem limitação, UniAbsTM, com afinidade de li- gação a CD22. Os aspectos adicionais da invenção se referem a mé- todos para fabricar tais anticorpos, composições que compreendem tais anticorpos e seu uso no tratamento de distúrbios de célula B que são caracterizados pela expressão de CD22.

[0011] Em algumas modalidades, a anticorpo apenas de cadeia pesada que se liga a CD22 compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende: (a) uma CDR1 que tem duas ou menos substituições em qualquer uma das sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 1 a 10; e/ou (b) uma CDR2 que tem duas ou menos substituições em qualquer uma das sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 11 a 17; e/ou (c) uma CDR3 que tem duas ou menos substituições em qualquer uma das sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 18 a 23. Em algumas modalidades, as sequências CDR1, CDR2 e CDR3 estão presentes num framework humano. Em algumas modalidades, um anticorpo apenas de cadeia pesada com- preende adicionalmente uma sequência de região constante de cadeia pesada na ausência de uma sequência CH1.

[0012] Em algumas modalidades, um anticorpo apenas de cadeia pesada compreende: (a) uma sequência de CDR1 selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 1 a 10; e/ou (b) uma sequência de CDR2 selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 11 a 17; e/ou (c) uma sequência de CDR3 selecionada a partir do gru- po consistindo em SEQ ID NOs: 18 a 23. Em algumas modalidades, um anticorpo apenas de cadeia pesada compreende: (a) uma sequên- cia de CDR1 selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 1 a 10; e (b) uma sequência de CDR2 selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 11 a 17; e (c) uma sequência de CDR3 selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 18 a

23.

[0013] Em algumas modalidades, um anticorpo apenas de cadeia pesada compreende: (a) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 11 e uma sequência de

CDR3 de SEQ ID NO: 18; ou (b) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 12 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 19; ou (c) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 12 e uma sequên- cia de CDR3 de SEQ ID NO: 20. Em algumas modalidades, um anti- corpo apenas de cadeia pesada compreende uma região variável de cadeia pesada que tem pelo menos 95% de identidade de sequência com qualquer uma das sequências das SEQ ID NOs: 24 a 84. Em al- gumas modalidades, um anticorpo apenas de cadeia pesada compre- ende uma sequência de região variável de cadeia pesada selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 24 a 84. Em algumas modalidades, um anticorpo apenas de cadeia pesada compreende uma sequência de região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO:

24.

[0014] Em algumas modalidades, um anticorpo apenas de cadeia pesada que se liga a CD22 compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende uma cadeia pesada variável que compreende (a) uma sequência de CDR1 da fórmula: G X1 S I X2 X3 X4 X5 X6 Y (SEQ ID NO: 85) onde X1 é D ou G; X2 é S, T, I ou N; X3 é S ou D; X4 é G, S ou N; X5 é D, G ou S; e X6 é Y ou H; e (b) uma sequência de CDR2 da fórmula: X7 X8 Y X9 G X10 X11 (SEQ ID NO: 86) onde X7 é I ou V; X8 é Y ou H; X9 é S ou T; X10 é A, V ou S; e X11 é T ou A; e (c) uma sequência de CDR3 da fórmula: X12 R X13 D S S X14 W R S (SEQ ID NO: 87) onde X12 é T, A ou K; X13 é D ou E; e X14 é N ou S.

[0015] Em algumas modalidades, um anticorpo apenas de cadeia pesada que se liga a CD22 compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 num framework de VH humano, em que as sequências de CDR são uma sequência que têm duas ou menos substituições numa sequência de CDR selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs:1 a

23.

[0016] Numa modalidade, o anticorpo apenas de cadeia pesada compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 num framework de VH humano, em que as sequências de CDR são selecionadas do grupo que consis- te em SEQ ID NOs:1 a 23.

[0017] Em algumas modalidades, a anticorpo apenas de cadeia pesada que se liga a CD22 compreende uma região variável de cadeia pesada que compreende: (a) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 11 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 18; ou (b) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 12 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 19; ou (c) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 12 e uma sequên- cia de CDR3 de SEQ ID NO: 20, num framework de VH humano.

[0018] Em algumas modalidades, um anticorpo apenas de cadeia pesada é multiespecífico. Em algumas modalidades, um anticorpo apenas de cadeia pesada é biespecífico. Em algumas modalidades, um anticorpo apenas de cadeia pesada tem afinidade de ligação com duas proteínas de CD22 diferentes. Em algumas modalidades, um an- ticorpo apenas de cadeia pesada tem afinidade de ligação a dois epi- topos diferentes na mesma proteína de CD22. Em algumas modalida- des, o anticorpo apenas de cadeia pesada tem afinidade de ligação com uma célula efetora. Em algumas modalidades, um anticorpo ape- nas de cadeia pesada tem afinidade de ligação com um antígeno de célula T. Em algumas modalidades, um anticorpo apenas de cadeia pesada tem afinidade de ligação com CD3. Em algumas modalidades, um anticorpo apenas de cadeia pesada está num formato CAR-T.

[0019] Os aspectos da invenção se referem a composições farma- cêuticas que compreendem um anticorpo apenas de cadeia pesada descrito no presente documento.

[0020] Os aspectos da invenção se referem a métodos para o tra- tamento de um distúrbio de célula B caracterizado pela expressão de CD22 que compreende administrar a um indivíduo com o dito distúrbio um anticorpo ou uma composição farmacêutica descrita no presente documento. Em certos outros aspectos, a invenção se refere a usos de um anticorpo descrito no presente documento, na preparação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio de célula B caracteri- zado pela expressão de CD22. Em ainda outros aspectos, a invenção se refere a um anticorpo descrito no presente documento, para uso no tratamento de um distúrbio de célula B caracterizado pela expressão de CD22. Em relação a estes aspectos, e em algumas modalidades, o distúrbio é linfoma de célula B grande difusa (DLBCL). Em algumas modalidades, o distúrbio é linfoma não Hodgkin (NHL). Em algumas modalidades, o distúrbio é lúpus eritematoso sistêmico (SLE). Em al- gumas modalidades, o distúrbio é artrite reumatoide (RA). Em algumas modalidades, o distúrbio é esclerose múltipla (MS).

[0021] Os aspectos da invenção se referem a polinucleotídeos que codificam um anticorpo descrito no presente documento, vetores que compreendem tais polinucleotídeos e células que compreendem tais vetores.

[0022] Os aspectos da invenção se referem a métodos para pro- duzir um anticorpo descrito no presente documento que compreende cultivar uma célula descrita no presente documento sob condições permissíveis para a expressão do anticorpo e isolar o anticorpo da cé- lula.

[0023] Aspectos da invenção se referem a métodos para fabricar um anticorpo descrito no presente documento que compreendem imu-

nizar um animal UniRat com CD22 e identificar sequências de cadeia pesada de ligação de CD22.

[0024] Estes e outros aspectos serão adicionalmente explicados no restante da revelação, incluindo os Exemplos.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0025] A Figura 1 mostra sequências de aminoácidos de CDR úni- ca de anticorpo de cadeia pesada anti-CD22.

[0026] A Figura 2 mostra sequências de aminoácidos de domínio variável de anticorpo de cadeia pesada anti-CD22.

[0027] A Figura 3 mostra sequências de aminoácidos de CDR1, CDR2 e CDR3 de anticorpo de cadeia pesada anti-CD22.

[0028] A Figura 4 mostra atividades biológicas de anticorpo de ca- deia pesada anti-CD22.

[0029] A Figura 5A é um gráfico que representa a porcentagem de lise específica como uma função de concentração de anticorpo para células Daudi.

[0030] A Figura 5B é um gráfico que representa a porcentagem de lise específica como uma função de concentração de anticorpo para células Raji.

[0031] A Figura 5C é um gráfico que representa a porcentagem de lise específica como uma função de concentração de anticorpo para células Ramos.

[0032] A Figura 5D é uma ilustração esquemática de um anti- CD22 x anti-CD3 biespecífico de acordo com uma modalidade da in- venção.

[0033] A Figura 6 é uma série de gráficos que mostra o título de soro como uma função de diluição.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS MODALIDADES PREFERENCIAIS

[0034] A prática da presente invenção vai empregar, a menos que indicado o contrário, as técnicas convencionais de biologia molecular

(incluindo técnicas de recombinação), microbiologia, biologia celular, bioquímica e imunologia, as quais encontram-se dentro do estado da técnica. Tais técnicas são descritas por completo na literatura, tal co- mo, "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", segunda edição (Sam- brook et al., 1989); "Oligonucleotide Synthesis" (M. J. Gait, ed., 1984); "Animal Cell Culture" (R. I. Freshney, ed., 1987); "Methods in Enzymo- logy" (Academic Press, Inc.); "Current Protocols in Molecular Biology" (F. M. Ausubel et al., eds., 1987, e atualizações periódicas); "PCR: The Polymerase Chain Reaction", (Mullis et al., ed., 1994); "A Practical Guide to Molecular Cloning" (Perbal Bernard V., 1988); "Phage Dis- play: A Laboratory Manual" (Barbas et al., 2001); Harlow, Lane e Har- low, Using Antibodies: A Laboratory Manual: Portable Protocol No. I, Cold Spring Harbor Laboratory (1998); e Harlow e Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory; (1988).

[0035] Em que uma faixa de valores é fornecida, é compreendido que cada valor interveniente, ao décimo da unidade do limite inferior, a menos que o contexto dite claramente de outra forma, entre os limites superior e inferior desta faixa e qualquer outro valor declarado ou in- terveniente nesta faixa declarada é abrangido pela invenção. Os limi- tes superior e inferior destas faixas menores poderem independente- mente ser incluídos nas faixas menores também é abrangido pela in- venção, sujeito a qualquer limite especificamente excluído na faixa in- dicada. Nos casos em que a faixa mencionada inclui um ou ambos os limites, as faixas que excluem um ou ambos destes limites incluídos também estão incluídas na invenção.

[0036] Exceto onde indicado em contrário, os resíduos de anticor- pos no presente documento são numerados de acordo com o sistema de numeração de Kabat (por exemplo, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest 5ª Edição, Public Health Service, National Insti- tutes of Health, Bethesda, Md. (1991)).

[0037] Na seguinte descrição, inúmeros detalhes específicos são apresentados para fornecer uma compreensão mais completa da pre- sente invenção. No entanto, ficará evidente para aqueles versados na técnica que a presente invenção pode ser praticada sem um ou mais destes detalhes específicos. Em outros casos, características bem co- nhecidas e procedimentos bem conhecidos por aqueles versados na técnica não foram descritos a fim de não obscurecer a invenção.

[0038] Todas referências citadas ao longo da divulgação, incluindo pedidos de patente e publicações, estão incorporadas ao presente do- cumento a título de referência em sua totalidade. I. DEFINIÇÕES

[0039] O termo "compreender" significa que os elementos citados são necessários na composição/método/kit, mas outros elementos po- dem ser incluídos para formar a composição/método/kit etc. dentro do escopo da reivindicação.

[0040] O termo "consistir essencialmente em" significa uma limita- ção do escopo da composição ou método descrito aos materiais ou etapas especificadas que não afetam substancialmente a característi- ca (ou características) básica e nova da presente invenção.

[0041] O termo "consistir em" significa a exclusão da composição, método ou kit de qualquer elemento, etapa ou ingrediente não especi- ficado na reivindicação.

[0042] Os resíduos de anticorpo no presente documento são enu- merados de acordo com o sistema de numeração Kabat e o sistema de numeração EU. O sistema de numeração Kabat é geralmente usa- do em referência a um resíduo no domínio variável (aproximadamente resíduos 1 a 113 da cadeia pesada) (por exemplo, Kabat et al., Se- quences of Immunological Interest. 5ª Edição, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). O "sistema de numeração EU" ou "índice EU" é geralmente usado ao se referir a um resíduo numa região constante de cadeia pesada de imunoglobulina (por exemplo, o índice EU relatado em Kabat et al., supra). O "índice EU como em Kabat" refere-se à numeração de resíduo do anticorpo IgG1 EU humano. Exceto se estabelecido de outro modo no presente documento, as referências aos números de resíduos no domínio variá- vel de anticorpos significam a numeração de resíduos pelo sistema de numeração de Kabat. Exceto se estabelecido de outro modo no pre- sente documento, as referências aos números de resíduos no domínio constante de anticorpos significam a numeração de resíduos pelo sis- tema de numeração de EU.

[0043] O termo "anticorpo monoclonal", como usado neste docu- mento, se refere a um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, isto é, os anticorpos indivi- duais que compreendem a população são idênticos exceto pelas mu- tações de ocorrência natural possíveis podem estar presentes em quantidades menores. Os anticorpos monoclonais são altamente es- pecíficos, sendo diretamente contra a um sítio antigênico único. Adici- onalmente, em contraste com as preparações de anticorpo (policlonal) convencionais que tipicamente incluem diferentes anticorpos dirigidos contra diferentes determinantes (epitopos), cada anticorpo monoclonal é dirigido contra um único determinante no antígeno. Os anticorpos monoclonais de acordo com a presente invenção podem ser produzi- dos pelo método de hibridoma primeiro descritos por Kohler et al. (1975) Nature 256:495, e também podem ser feitos por meio de méto- dos de produção de proteína recombinante (consultar, por exemplo, Patente nº U.S. 4.816.567), por exemplo.

[0044] O termo "variável", como usado em conexão com anticor- pos, se refere ao fato de que certas porções dos domínios variáveis de anticorpo se diferem extensivamente em sequência entre anticorpos e são usadas na ligação e especificidade de cada anticorpo particular para seu antígeno particular. No entanto, a variabilidade não está dis- tribuída uniformemente pelos domínios variáveis de anticorpos. A mesma está concentrada em três segmentos chamados regiões hiper- variáveis tanto nos domínios variáveis de cadeia leve como de cadeia pesada. As porções mais altamente conservadas de domínios variá- veis são chamadas regiões de estrutura (FRs). Os domínios variáveis de cadeias leves e pesadas nativas compreendem, cada um, quatro FRs, que adotam amplamente uma configuração β-folha, conectada por três regiões hipervariáveis, que formam alças que conectam, e em alguns casos, formam parte da estrutura de β-folha. As regiões hiper- variáveis em cada cadeia são mantidas em conjunto em estreita pro- ximidade com as FRs e, com as regiões hipervariáveis da outra ca- deia, contribuem para a formação do sítio de ligação ao antígeno de anticorpos (consulte Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunolo- gical Interest, 5ª Edição Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Os domínios constantes não estão en- volvidos diretamente na ligação de um anticorpo a um antígeno, mas exibem diversas funções efetoras, como a participação do anticorpo na citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC).

[0045] O termo "região hipervariável", quando usado no presente documento, se refere aos resíduos de aminoácido de um anticorpo que são responsáveis pela ligação ao antígeno. A região hipervariável geralmente compreende resíduos de aminoácidos de uma "região de- terminante de complementaridade" ou "CDR" (por exemplo, resíduos 31-35 (H1), 50-65 (H2) e 95-102 (H3) no domínio variável de cadeia pesada; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ª edição, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethes- da, MD. (1991)) e/ou aqueles resíduos de uma "alça hipervariável", resíduos 26-32 (H1), 53-55 (H2) e 96-101 (H3) no domínio variável de cadeia pesada; Chothia e Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). Os resíduos de "região de framework" ou "FR" são aqueles resíduos de domínio variável além dos resíduos de região hipervariável conforme definido no presente documento.

[0046] As designações de CDR exemplificativas são mostradas no presente documento, no entanto, um versado na técnica entenderá que várias definições das CDRs estão comumente em uso, incluindo a definição de Kabat (ver "Zhao et al. A germline knowledge based com- putational approach for determining antibody complementarity determi- ning regions". Mol Immunol. 2010;47:694–700), que é com base na variabilidade de sequência e é mais comumente usada. A definição de Chothia é com base na localização das regiões de alça estruturais (Chothia et al. "Conformations of immunoglobulin hypervariable re- gions". Nature. 1989; 342:877–883). As definições de CDR alternativas de interesse incluem, sem limitação, aquelas divulgadas por Hone- gger, "Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable do- mains: an automatic modeling and analysis tool". J Mol Biol. 2001;309:657–670; Ofran et al. "Automated identification of comple- mentarity determining regions (CDRs) reveals peculiar characteristics of CDRs and B cell epitopes". J Immunol. 2008;181:6230–6235; Alma- gro "Identification of differences in the specificity-determining residues of antibodies that recognize antigens of different size: implications for the rational design of antibody repertoires". J Mol Recognit. 2004;17:132–143; e Padlanet al. "Identification of specificity- determining residues in antibodies". Faseb J. 1995;9:133–139, cada uma destas está especificamente incorporada a título de referência no presente documento.

[0047] Os termos "anticorpo apenas de cadeia pesada", e "anti- corpo de cadeia pesada" são usados de modo intercambiável no pre- sente documento e se referem, no sentido mais amplo, a anticorpos desprovidos da cadeia leve de um anticorpo convencional. Os termos incluem especificamente, sem limitação, anticorpos homodiméricos que compreendem o domínio de ligação ao antígeno VH e os domínios constantes CH2 e CH3, na ausência do domínio CH1; variantes funci- onais (ligação ao antígeno) de tais anticorpos, variantes VH solúveis, Ig-NAR que compreende um homodímero de um domínio variável (V- NAR) e cinco domínios constantes do tipo C (C-NAR) e fragmentos funcionais dos mesmos; e anticorpos solúveis de domínio único (sUni- DabsTM). Numa modalidade, o anticorpo apenas de cadeia pesada é composto do domínio de ligação ao antígeno de região variável com- posto da estrutura 1, CDR1, estrutura 2, CDR2, estrutura 3, CDR3, e estrutura 4. Numa outra modalidade, o anticorpo apenas de cadeia pe- sada é composto de um domínio de ligação ao antígeno, pelo menos parte de uma região de dobradiça e domínios CH2 e CH3. Numa outra modalidade, o anticorpo apenas de cadeia pesada é composto de um domínio de ligação ao antígeno, pelo menos parte de uma região de dobradiça e um domínio CH2. Numa modalidade adicional, o anticorpo apenas de cadeia pesada é composto de um domínio de ligação ao antígeno, pelo menos parte de uma região de dobradiça e um domínio CH3. Os anticorpos apenas de cadeia pesada em que o domínio CH2 e/ou CH3 estão truncados também estão incluídos no presente docu- mento.

Numa modalidade adicional, a cadeia pesada é composta de um domínio de ligação ao antígeno e pelo menos um domínio CH (CH1, CH2, CH3 ou CH4), mas nenhuma região de dobradiça.

O anti- corpo apenas de cadeia pesada pode ser sob a forma de um dímero, em que duas cadeias pesadas são ligadas umas às outras por dissul- feto ou, de outro modo, covalentemente ou não covalentemente.

O an- ticorpo apenas da cadeia pesada pode pertencer à subclasse de IgG, mas os anticorpos que pertencem a outras subclasses, como a sub- classe IgM, IgA, IgD e IgE, também estão incluídos no presente docu- mento.

Numa modalidade particular, o anticorpo de cadeia pesada é do subtipo IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4, em particular, o subtipo IgG1. Numa modalidade, os anticorpos apenas de cadeia pesada no presen- te documento são usados como um domínio de ligação (alvejamento) de um receptor de antígeno quimérico (CAR). A definição especifica- mente inclui anticorpos humanos apenas de cadeia pesada produzidos por ratos transgênicos de imunoglobulina humana (UniRatTM), chama- do UniAbsTM. As regiões variáveis (VH) de UniAbsTM são chamadas UniDabsTM e são blocos de construção versáteis que podem ser liga- dos a regiões Fc ou albumina de soro para o desenvolvimento de agentes terapêuticos inovadores com multiespecificidade, potência aumentada e meia vida estendida. Uma vez que os UniAbsTM homo- diméricos são desprovidos de uma cadeia leve e, desta forma, um domínio VL, o antígeno é reconhecido por um único domínio, isto é, o domínio variável da cadeia pesada de um anticorpo de cadeia pesada (VH).

[0048] Os termos "CD22" e "agrupamento de diferenciação 22", conforme usado no presente documento, se referem a uma molécula que pertence à família SIGLEC de lectinas, encontrada na superfície de células B maduras, e a um menor grau em algumas células B ima- turas. O termo "CD22" inclui uma proteína de CD22 de qualquer espé- cie animal humana e não humana, e especificamente inclui CD22 hu- mana assim como CD22 de mamíferos não humanos.

[0049] O termo "CD22 humana" como usado no presente docu- mento inclui quaisquer variantes, isoformas e espécies homólogas de CD22 humana (UniProt P20273), independentemente de sua fonte ou modo de preparação. Assim, a "CD22 humana" inclui CD22 humana naturalmente expressada por células e CD22 expressada em células transfectadas com o gene de CD22 humana.

[0050] Os termos "anticorpo anti-CD22 apenas de cadeia pesada", "anticorpo de CD22 apenas de cadeia pesada", "anticorpo anti-CD22 de cadeia pesada" e "anticorpo de CD22 de cadeia pesada" são usa- dos no presente documento de modo intercambiável para fazer refe- rência a um anticorpo apenas de cadeia pesada como definido acima no presente documento, que se liga de modo imunoespecífico a CD22, incluindo CD22 humana, como definido acima no presente documento. A definição inclui, sem limitação, anticorpos humanos de cadeia pesa- da produzidos por animais transgênicos, como ratos transgênicos ou camundongos transgênicos que expressam imunoglobulina humana, incluindo UniRatsTM produzindo anticorpos de UniAbTM anti-CD22 hu- manos, como definido acima no presente documento.

[0051] A "porcentagem (%) de identidade de sequência de amino- ácidos" no que diz respeito a uma sequência de polipeptídeos de refe- rência é definida como a porcentagem de resíduos de aminoácidos numa sequência candidata que são idênticos aos resíduos de aminoá- cidos na sequência de polipeptídeos de referência, após alinhamento das sequências e introdução de intervalos, se necessário, para se al- cançar a máxima identidade de percentagem de sequência, e não considerando quaisquer substituições conservativas como parte da identidade de sequência. O alinhamento para propósitos de determi- nação da porcentagem de identidade de sequência de aminoácidos pode ser alcançado de vários modos que estão dentro da habilidade na técnica, por exemplo, usando um software de computador comerci- almente disponível tal como o software BLAST, BLAST-2, ALIGN ou Megalign (DNASTAR). Aqueles versados na técnica podem determinar os parâmetros apropriados para alinhar as sequências, incluindo quaisquer algoritmos necessários para alcançar o alinhamento máximo ao longo do comprimento total das sequências sendo comparadas. Para os propósitos no presente documento, entretanto, a % de valores de identidade de sequência de aminoácidos é gerada com o uso do programa de computador de comparação de sequências ALIGN-2.

[0052] Um anticorpo "isolado" é um que foi identificado e separado e/ou recuperado de um componente de seu ambiente natural. Os componentes contaminantes de seu ambiente natural são materiais que interfeririam nos usos de diagnóstico ou terapêuticos para o anti- corpo, e podem incluir enzimas, hormônios e outros solutos proteicos ou não proteicos. Em modalidades preferenciais, o anticorpo será puri- ficado (1) a mais de 95% em peso do anticorpo, conforme determinado pelo método de Lowry e, mais preferencialmente, mais de 99% em pe- so, (2) a um grau suficiente para obter pelo menos 15 resíduos de se- quência de aminoácidos N-terminal ou interna através do uso de um sequenciador de copo giratório ou (3) à homogeneidade por SDS- PAGE sob condições de redução ou não redução usando corante azul de Coomassie ou, preferencialmente, prata. O anticorpo isolado inclui o anticorpo in situ em células recombinantes visto que pelo menos um componente do ambiente natural de anticorpo não estará presente. Normalmente, no entanto, o anticorpo isolado será preparado por pelo menos uma etapa de purificação.

[0053] Os anticorpos da invenção incluem anticorpos multiespecí- ficos. Os anticorpos multiespecíficos possuem mais de uma especifici- dade de ligação. O termo "multiespecífico" inclui especificamente "bi- específico" e "triespecífico", bem como afinidades de ligação específi- ca independentes de ordem superior, como especificidade poliepitópi- ca de ordem superior, bem como anticorpos tetravalentes e fragmen- tos de anticorpos. Os anticorpos "multiespecíficos" incluem especifi- camente anticorpos que compreendem uma combinação de diferentes entidades de ligação, bem como anticorpos que compreendem mais do que uma da mesma entidade de ligação. Os termos "anticorpo mul- tiespecífico", anticorpo multiespecífico apenas de cadeia pesada", "an- ticorpo de cadeia pesada multiespecífico" e "UniAbTM multiespecífico" são usados no presente documento no sentido mais amplo e cobrem todos os anticorpos com mais de uma especificidade de ligação. Os anticorpos anti-CD22 multiespecíficos de cadeia pesada da presente invenção incluem especificamente anticorpos que se ligam de modo imunoespecífico a mais de um epitopos sem sobreposição numa pro- teína de CD22, como uma CD22 humana.

[0054] Um "epitopo" é o sítio sobre a superfície de uma molécula de antígeno ao qual uma única molécula de anticorpo se liga. Geral- mente, um antígeno tem vários ou muitos epitopos diferentes e reage com muitos anticorpos diferentes. O termo inclui especificamente epi- topos lineares e epitopos conformacionais.

[0055] "Mapeamento de epitopo" é o processo de identificar os sí- tios de ligação ou epitopos de anticorpos em seus antígenos-alvo. Os epitopos de anticorpo podem ser epitopos lineares ou epitopos con- formacionais. Os epitopos lineares são formados por uma sequência contínua de aminoácidos numa proteína. Os epitopos conformacionais são formados por aminoácidos que são descontínuos na sequência proteica, mas que são reunidos após o enovelamento da proteína em sua estrutura tridimensional.

[0056] "Especificidade poliepitópica" se refere à capacidade de se ligar especificamente a dois ou mais epitopos diferentes no mesmo alvo ou em alvo (ou alvos) diferente. Conforme observado acima, a presente invenção inclui especificamente anticorpos de cadeia pesada anti-CD22 com especificidades poliepitópicas, isto é, anticorpos de ca- deia pesada anti-CD22 que se liga a dois ou mais epitopos não sobre- postos numa proteína de CD22, como um CD22 humano. O termo "epitopo não sobreposto (ou epitopos não sobrepostos)" ou "epitopo não competitivo (ou epitopos não competitivos)" de um antígeno é de- finido no presente documento para significar epitopo (ou epitopos) que é reconhecido por um membro de um par de anticorpos específicos de antígeno, mas não o outro membro. Pares de anticorpos, ou região de ligação a antígeno que alvejam o mesmo antígeno num anticorpo mul- tiespecífico, reconhecendo epitopos sem sobreposição não competem pela ligação a tal antígeno e são capazes de ligarem tal antígeno si- multaneamente.

[0057] Um anticorpo liga "essencialmente o mesmo epitopo" como um anticorpo de referência, quando os dois anticorpos reconhecem epitopos idênticos ou sobreponíveis estereoquimicamente. Os méto- dos mais amplamente utilizados e rápidos para determinar se dois epi- topos se ligam a epitopos idênticos ou estereotipados são ensaios de competição, que podem ser configurados em todos os diferentes for- matos, usando antígeno marcado ou anticorpo marcado. Normalmen- te, o antígeno é imobilizado numa placa de 96 poços e a capacidade de anticorpos não marcados para bloquear a ligação de anticorpos marcados é medida usando marcadores radioativos ou enzimáticos.

[0058] O termo "valente", tal como aqui utilizado, refere-se a um número especificado de sítio de ligação numa molécula de anticorpo.

[0059] Um anticorpo "multivalente" tem dois ou mais sítios de liga- ção. Desta forma, os termos "bivalente", "trivalente" e "tetravalente" se referem à presença de dois sítios de ligação, três sítios de ligação e quatro sítios de ligação, respectivamente. Desta forma, um anticorpo biespecífico de acordo com a invenção é pelo menos bivalente e pode ser trivalente, tetravalente ou de outro modo multivalente.

[0060] Uma grande variedade de métodos e configurações protei- cas é conhecida e usada para a preparação de anticorpos monoclo- nais biespecíficos (BsMAB), anticorpos triespecíficos e similares.

[0061] O termo "molécula semelhante a anticorpo biespecífico de três cadeias" ou "TCA" é usado no presente documento para se referir a moléculas semelhantes a anticorpo que compreendem, consistem essencialmente em ou consistem em três subunidades polipeptídicas, duas das quais compreendem, consistem essencialmente em, ou con-

sistem numa cadeia pesada e uma cadeia leve de um anticorpo mono- clonal, ou fragmentos funcionais de ligação ao antígeno de tais cadei- as de anticorpo, que compreendem uma região de ligação ao antígeno e pelo menos um domínio CH. Este par de cadeia pesada/cadeia leve tem especificidade de ligação para um primeiro antígeno. A terceira subunidade polipeptídica compreende, consiste essencialmente em ou consiste num anticorpo apenas de cadeia pesada que compreende uma porção Fc que compreende domínios CH2 e/ou CH3 e/ou CH4, na ausência de um domínio CH1, e um domínio de ligação ao antígeno que se liga a um epitopo de um segundo antígeno ou um epitopo dife- rente do primeiro antígeno, em que tal domínio de ligação é derivado de ou tem identidade de sequência com a região variável de uma ca- deia pesada ou leve de anticorpo. Parte de tal região variável podem ser codificadas por segmentos de gene de VH e/ou VL, segmentos de gene D e JH ou segmentos de gene de JL. A região variável pode ser codificada por segmentos de gene redispostos de VHDJH, VLDJH, VHJL ou VLJL. Uma proteína TCA usa um anticorpo apenas de cadeia pesa- da conforme definido acima no presente documento.

[0062] O termo "receptor de antígeno quimérico" ou "CAR" é usa- do no presente documento no sentido mais amplo para se referir a um receptor modificado geneticamente, que enxerta uma especificidade de ligação desejada (por exemplo, a região de ligação ao antígeno de um anticorpo monoclonal ou outro ligando) e domínios de sinalização intracelular e de espalhamento de membrana. Tipicamente, o receptor é usado para enxertar a especificidade de um anticorpo monoclonal numa célula T para criar um receptor de antígeno quimérico (CAR). (J Natl Cancer Inst, 2015; 108(7):dvj439; e Jackson et al., Nature Revi- ews Clinical Oncology, 2016; 13:370–383.)

[0063] O termo "anticorpo humano" é usado no presente docu- mento para incluir anticorpos que têm regiões variáveis e constantes derivadas de sequências de imunoglobulina de linha germinativa hu- mana. Os anticorpos humanos no presente documento podem incluir resíduos de aminoácido não codificados por sequências de imunoglo- bulina de linha germinativa humana, por exemplo, mutações introduzi- das por mutagênese aleatória ou específica de sítio in vitro ou por mu- tação somática in vivo. O termo "anticorpo humano" especificamente inclui anticorpos apenas de cadeia pesada que têm sequências de re- gião variável de cadeia pesada humanas, produzidas por animais transgênicos, como ratos transgênicos ou camundongos, em UniAbsTM particulares produzidos por UniRatsTM, como definido acima.

[0064] Por "anticorpo quimérico" ou "imunoglobulina quimérica" entende-se uma molécula de imunoglobulina compreendendo sequên- cias de aminoácidos de pelo menos dois loci de Ig diferentes, por exemplo, um anticorpo transgênico compreendendo uma porção codi- ficada por um locus de Ig humana e uma porção codificada por um lo- cus de Ig de rato. Os anticorpos quiméricos incluem anticorpos trans- gênicos com regiões Fc não humanas ou regiões Fc artificiais, e idioti- pos humanos. Tais imunoglobulinas podem ser isoladas dos animais da invenção que foram modificados geneticamente para produzir tais anticorpos quiméricos.

[0065] Como usado no presente documento, o termo "célula efeto- ra" se refere a uma célula imune que está envolvida na fase efetora de uma resposta imune, em oposição às fases cognitiva e de ativação de uma resposta imune. Algumas células efetoras expressam receptores de Fc específicos e executam funções imunes específicas. Em algu- mas modalidades, uma célula efetora como uma célula assassina na- tural é capaz de induzir citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC). Por exemplo, monócitos e macrófagos, que expressam FcR, são envolvidos em morte específica de células-alvo e apresentação de antígenos a outros componentes do sistema imunológico, ou ligação a células que apresentam antígenos. Em algumas modalidades, uma célula efetora pode realizar fagocitose de um antígeno-alvo ou célula- alvo.

[0066] "Células efetoras humanas" são leucócitos que expressam receptores como receptores de célula T ou FcRs e realizam funções efetoras. Preferencialmente, as células expressam pelo menos FcγRIII e realizam a função efetora de ADCC. Os exemplos de leucócitos hu- manos que mediam ADCC incluem células assassinas naturais (NK), monócitos, células T citotóxicas e neutrófilos; com células NK sendo preferenciais. As células efetoras podem ser isoladas a partir de uma fonte nativa das mesmas, por exemplo, de sangue ou PBMCs, con- forme descrito no presente documento.

[0067] O termo "célula imune" é usado no presente documento no sentido mais amplo, incluindo, sem limitação, células de origem mie- loide ou linfoide, por exemplo, linfócitos (como células B e células T incluindo células T citolíticas (CTLs)), células assassinas, células as- sassinas naturais (NK), macrófagos, monócitos, eosinófilos, células polimorfonucleares, como neutrófilos, granulócitos, células de masto e basófilos.

[0068] As "funções efetoras" de anticorpo se referem àquelas ati- vidades biológicas atribuíveis à região Fc (uma região Fc de sequência nativa ou região Fc variante de sequência de aminoácidos) de um an- ticorpo. Os exemplos de funções efetoras de anticorpo incluem a liga- ção de C1q, a citotoxicidade dependente de complemento; a ligação de receptor de Fc; a citotoxicidade mediata por célula dependente de anticorpo (ADCC); a fagocitose; a regulação descendente de recepto- res de superfície celular (por exemplo, receptor de célula B; BCR), etc.

[0069] "Citotoxicidade mediada por célula dependente de anticor- po" e "ADCC" se referem a uma reação mediada por células na qual células citotóxicas não específicas que expressam receptores Fc

(FcRs) (por exemplo, células Exterminadoras Naturais (NK), neutrófilos e macrófagos) reconhecem anticorpo ligado numa célula-alvo e sub- sequentemente causam lise da célula-alvo. As células primárias para mediar ADCC, células NK, expressam FcγRIII apenas, enquanto que monócitos expressam FcγRI, FcγRII e FcγRIII. A expressão de FcR em células hematopoiéticas é sumarizada na Tabela 3 na página 464 de Ravetch e Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991). Para avaliar a atividade de ADCC de uma molécula de interesse, pode ser realiza- do um ensaio ADCC in vitro, como aquele descrito na patente US no

5.500.362 ou 5.821.337. As células efetoras úteis para tais ensaios incluem células mononucleares de sangue periférico (PBMC) e células exterminadoras naturais (NK). Alternativa ou adicionalmente, a ativida- de de ADCC da molécula de interesse pode ser avaliada in vivo, por exemplo, num modelo animal, tal como aquele divulgado em Clynes et al. PNAS (USA) 95:652-656 (1998).

[0070] "Citotoxicidade dependente de complemento" ou "CDC" se refere à capacidade de uma molécula para lisar um alvo na presença de complemento. A via de ativação de complemento é iniciada pela ligação do primeiro componente do sistema complemento (C1q) a uma molécula (por exemplo, um anticorpo) complexada com um antígeno cognato. Para avaliar a ativação de complemento, pode ser realizado um ensaio de CDC, por exemplo, conforme descrito em Gazzano- Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996), pode ser realiza- do.

[0071] "Afinidade de ligação" se refere, de modo geral, à intensi- dade do total de soma de interações não covalentes entre um único sítio de ligação de uma molécula (por exemplo, um anticorpo) e seu parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno). A não ser que indica- do de outro modo, conforme usado no presente documento, "afinidade de ligação" se refere à afinidade de ligação intrínseca que reflete uma interação a 1:1 entre membros de um par de ligação (por exemplo, an- ticorpo e antígeno). A afinidade de uma molécula X com seu parceiro Y pode geralmente ser representada pela constante de dissociação (Kd). Afinidade pode ser medida por métodos comuns conhecidos na técnica. Os anticorpos de baixa afinidade geralmente se ligam ao antí- geno lentamente e tendem a se dissociar prontamente, enquanto que os anticorpos de alta afinidade geralmente se ligam ao antígeno mais rapidamente e tendem a permanecer ligados.

[0072] Como usado aqui, a "Kd" ou "valor de Kd" se refere a uma constante de dissociação determinada por Interferometria BioLayer, usando um instrumento Octet QK384 (Fortebio Inc., Menlo Park, CA) no modo cinético. Por exemplo, os sensores Fc anticamundongo são carregados com antígeno fundido a Fc de camundongo e, então, mer- gulhados em poços contendo anticorpos para medir as taxas de asso- ciação dependentes de concentração (kon). As taxas de dissociação do anticorpo (koff) são medidas na etapa final, em que os sensores são mergulhados em poços contendo apenas tampão. A Kd é a razão de koff/kon. (Para mais detalhes ver Concepcion, J, et al., Comb Chem High Throughput Screen, 12(8), 791-800, 2009).

[0073] Os termos "tratamento", "tratar" e similares são usados no presente documento para significar, de modo geral, obter um efeito farmacológico e/ou fisiológico desejado. O efeito pode ser profilático em termos de prevenir completa ou parcialmente uma doença ou sin- toma da mesma e/ou pode ser terapêutico em termos de cura parcial ou completa para uma doença e/ou efeito adverso atribuível à doença. "Tratamento", como usado no presente documento, abrange qualquer tratamento de uma doença num mamífero e inclui: (a) a prevenção da ocorrência da doença num sujeito que pode estar predisposto à doen- ça, mas ainda não foi diagnosticado como tendo a mesma; (b) inibição da doença, isto é, impedindo seu desenvolvimento; ou (c) alívio da do-

ença, isto é, provocando a regressão da doença. O agente terapêutico pode ser administrado antes, durante ou após o início da doença ou lesão. O tratamento de doença em curso, em que o tratamento estabi- liza ou reduz os sistemas clínicos indesejáveis do paciente é de inte- resse particular. Tal tratamento é desejavelmente realizado antes da perda completa de função nos tecidos afetados. A terapia em questão pode ser administrada durante o estágio sintomático da doença e, em alguns casos, após o estágio sintomático da doença.

[0074] Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" se destina a uma quantidade de agente ativo que é necessário para conferir bene- fício terapêutico para um sujeito. Por exemplo, uma "quantidade tera- peuticamente eficaz" é uma quantidade que induz, melhora ou de ou- tro modo causa uma melhoria nos sintomas patológicos, progressão da doença ou condições fisiológicas associadas a uma doença ou que melhora a resistência a um distúrbio.

[0075] Os termos "neoplasmos de célula B" ou "neoplasmos de célula B maduros" no contexto da presente invenção incluem linfoma linfocítico pequeno, linfoma prolimorfocítico de célula B, leucemia linfo- cítica crônica de célula B, linfoma de célula de manto, linfoma de Bur- kitt, linfoma folicular, linfoma de célula B grande difusa (DLBCL), mi- eloma múltiplo, linfoma linfoplasmacítico, linfoma de zona marginal es- plênica, neoplasmos de célula de plasma, como mieloma de célula de plasma, plasmacitoma, doença de deposição de imunoglobulina mo- noclonal, doença de cadeia pesada, linfoma de MALT, linfoma de célu- la B marginal nodal, linfoma de célula B grande intravascular, linfoma de efusão primária, granulomatose linfomatoide, linfoma não Hodgkins, linfoma de Hodgkins, leucemia de célula capilar, linfoma de efusão primária e linfoma não Hodgkins relacionado à AIDS.

[0076] Os termos "sujeito", "indivíduo" e "paciente" são usados in- tercambiavelmente no presente documento para se referir a um mamí-

fero que é avaliado acerca do tratamento e/ou que é tratado. Numa modalidade, o mamífero é um ser humano. Os termos "sujeito", "indi- víduo" e "paciente" abrangem, sem limitação, indivíduos que têm cân- cer, indivíduos com doenças autoimunes, com infecções por patóge- nos e similares. Os sujeitos podem ser humanos, mas também inclu- em outros mamíferos, particularmente aqueles mamíferos úteis como modelos de laboratório para doenças humanas, por exemplo, camun- dongo, rato, etc.

[0077] O termo "formulação farmacêutica" se refere a uma prepa- ração que está em tal forma para permitir que a atividade biológica do ingrediente ativo seja eficaz e que não contém nenhum componente adicional que seja inaceitavelmente tóxico a um indivíduo ao qual a formulação seria administrada. Tais formulações são estéreis. Excipi- entes "farmaceuticamente aceitáveis" (veículos, aditivos) são aqueles que podem ser razoavelmente administrados a um indivíduo mamífero para fornecer uma dose eficaz do ingrediente ativo empregado.

[0078] Uma formulação "estéril" é asséptica ou livre ou essencial- mente livre de todos os micro-organismos vivos e seus esporos. Uma formulação "congelada" é uma numa temperatura abaixo de 0°C.

[0079] Uma formulação "estável" é uma na qual a proteína na mesma retém, essencialmente, sua estabilidade física e/ou estabilida- de química e/ou atividade biológica mediante armazenamento. Prefe- rencialmente, a formulação retém, essencialmente, sua estabilidade física e química, bem como sua atividade biológica mediante armaze- namento. O período de armazenamento é geralmente selecionado com base na vida útil desejada da formulação. Várias técnicas analíti- cas para medir estabilidade de proteína estão disponíveis na arte e são revisados em Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301. Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) e Jones. A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90) (1993), por exemplo. Estabilidade pode ser medida numa temperatura selecionada por um período de tempo selecionado. Estabilidade pode ser avaliada qualitativa e/ou quantitativamente numa variedade de maneiras diferentes, que inclu- em avaliação de formação de agregado (por exemplo, com o uso de cromatografia de exclusão de tamanho, medindo-se turbidez e/ou através de inspeção visual); avaliando-se heterogeneidade de carga com o uso de cromatografia de troca catiônica, focalização isoelétrica capilar de imagem (icIEF) ou eletroforese de zona capilar; análise de sequência amino-terminal ou carboxi-terminal; análise espectrométrica de massa; análise de SDS-PAGE para comparar anticorpo reduzido e intacto; análise de mapa peptídico (por exemplo, tríptico ou LYS-C); avaliando-se a atividade biológica ou função de ligação ao antígeno do anticorpo; etc. Instabilidade pode envolver qualquer um ou mais den- tre: agregação, desamidação (por exemplo, desamidação de Asn), oxidação (por exemplo, oxidação de Met), isomerização (por exemplo, isomerização de Asp), clipagem/hidrólise/fragmentação (por exemplo, fragmentação de região de dobradiça), formação de succinimida, ciste- ínas não pareadas, extensão de N-terminal, processamento de C- terminal, diferenças de glicosilação, etc. II. DESCRIÇÃO DETALHADA ANTICORPOS ANTI-CD22

[0080] A presente invenção fornece uma família de anticorpos apenas de cadeia pesada proximamente relacionados que se ligam a CD22 humano. Os anticorpos desta família compreendem um conjunto de sequências de CDR, conforme definido no presente documento, e mostrado na Figura 1, e são exemplificados pelas sequências de regi- ão variável de cadeia pesada (VH) fornecidas de SEQ ID NOs: 24 a 84 apresentadas na Figura 2. As famílias de anticorpos fornecem vários benefícios que contribuem para utilidade como agente clinicamente terapêutico (ou agentes clinicamente terapêuticos). Os anticorpos in-

cluem membros com uma faixa de afinidades de ligação, permitindo a seleção de uma sequência específica com uma afinidade de ligação desejada.

[0081] Um anticorpo adequado pode ser selecionado a partir da- queles fornecidos no presente documento para desenvolvimento e uso terapêutico ou diferente, incluindo, sem limitação, o uso como um anti- corpo biespecífico, por exemplo, conforme mostrado na Figura 5B, ou anticorpo triespecífico, ou parte de uma estrutura CAR-T.

[0082] A determinação da afinidade para uma proteína candidata pode ser realizada usando métodos conhecidos na técnica, como me- dições Biacore. Os membros da família de anticorpos podem ter uma afinidade para CD22 com uma Kd de cerca de 10-6 a cerca de 10-11, incluindo, sem limitação: de cerca de 10-6 a cerca de 10-10; de cerca de 10-6 a cerca de 10-9; de cerca de 10-6 a cerca de 10-8; de cerca de 10-8 a cerca de 10-11; de cerca de 10-8 a cerca de 10-10; de cerca de 10-8 a cerca de 10-9; de cerca de 10-9 a cerca de 10-11; de cerca de 10-9 a cer- ca de 10-10; ou qualquer valor dentro destas faixas. A seleção de afini- dade pode ser confirmada com uma avaliação biológica para modular, por exemplo, o bloqueio, uma atividade biológica de CD22, incluindo ensaios in vitro, modelos pré-clínicos e ensaios clínicos, bem como a avaliação de toxicidade potencial.

[0083] Membros da família de anticorpo no presente documento não são reativos de forma cruzada com a proteína de CD22 de maca- co Cynomolgus, porém, podem ser modificados geneticamente para fornecer reatividade cruzada com a proteína de CD22 de macaco Cynomolgus, ou com o CD22 de qualquer outra espécie animal, se for desejado.

[0084] A família de anticorpos específicos de CD22 no presente documento compreende um domínio de VH que compreende sequên- cias de CDR1, CDR2 e CDR3 num framework de VH humano. As se-

quências de CDR podem estar situadas, como um exemplo, na região em torno dos resíduos de aminoácidos 26-35; 53-59; e 98-117 para CDR1, CDR2 e CDR3, respectivamente, das sequências de região va- riável exemplificativas fornecidas apresentadas na SEQ ID NOs: 24 a

84. Será entendido por um indivíduo de habilidade comum na técnica que as sequências de CDR podem estar em posições diferentes se for selecionada uma sequência de estrutura diferente, embora geralmente a ordem das sequências permaneça a mesma.

[0085] As sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 dos anticorpos an- ti-CD22 da presente invenção podem ser abrangidas pelas seguintes fórmulas estruturais, em que um X indica um aminoácido variável, que pode ser aminoácidos específicos conforme indicado abaixo. CDR1 G X1 S I X2 X3 X4 X5 X6 Y (SEQ ID NO: 85) onde X1 é D ou G; X2 é S, T, I ou N; X3 é S ou D; X4 é G, S ou N; X5 é D, G ou S; e X6 é Y ou H. CDR2 X7 X8 Y X9 G X10 X11 (SEQ ID NO: 86) onde X7 é I ou V; X8 é Y ou H; X9 é S ou T; X10 é A, V ou S; e X11 é T ou A. CDR3 X12 R X13 D S S X14 W R S (SEQ ID NO: 87) onde X12 é T, A ou K;

X13 é D ou E; e X14 é N ou S.

[0086] As sequências representativas de CDR1, CDR2 e CDR3 são mostradas na Figura 1 e na Figura 3.

[0087] Em algumas modalidades, um anticorpo apenas de cadeia pesada anti-CD22 da invenção compreende uma sequência de CDR1 de qualquer uma de SEQ ID NOs: 1 a 10. Numa modalidade particular, a sequência de CDR1 é SEQ ID NO: 1.

[0088] Em algumas modalidades, um anticorpo apenas de cadeia pesada anti-CD22 da invenção compreende uma sequência de CDR2 de qualquer uma de SEQ ID NOs: 11 a 17. Numa modalidade particu- lar, a sequência de CDR2 é SEQ ID NO: 11.

[0089] Em algumas modalidades, um anticorpo apenas de cadeia pesada anti-CD22 da invenção compreende uma sequência de CDR3 de qualquer uma de SEQ ID NOs: 18 a 23. Numa modalidade particu- lar, a sequência de CDR2 é SEQ ID NO: 18.

[0090] Numa modalidade adicional, o anticorpo apenas de cadeia pesada anti-CD22 da invenção compreende a sequência de CDR1 de SEQ ID NO:1; a sequência de CDR2 de SEQ ID NO: 11; e a sequên- cia de CDR3 de SEQ ID NO: 18.

[0091] Em modalidades adicionais, um anticorpo apenas de cadeia pesada anti-CD22 da invenção compreende qualquer uma a partir das sequências de aminoácidos de região variável de cadeia pesada de SEQ ID NOs: 24 a 84 (Figura 2).

[0092] Ainda numa modalidade adicional, um anticorpo apenas de cadeia pesada anti-CD22 da presente invenção compreende a se- quência de região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 24.

[0093] Em algumas modalidades, uma sequência de CDR num anticorpo apenas de cadeia pesada anti-CD22 da invenção compreen- de uma ou duas substituições de aminoácidos em relação a uma se-

quência de CDR1, CDR2 e/ou CDR3 ou conjunto de sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 em qualquer uma de SEQ ID NOs:1 a 23 (FIG. 1). Em algumas modalidades, a dita substituição (ou substituições) de aminoácido é uma ou duas dentre as posições de aminoácido 4 a 6 de CDR1, e/ou uma ou duas dentre as posições de aminoácido 2, 4 a 7 de CDR2, e/ou uma ou duas posições de aminoácido 5 e 12 de CDR3, com relação às fórmulas fornecidas acima. Em algumas modalidades, os anticorpos apenas de cadeia pesada anti-CD22 no presente docu- mento compreenderão uma sequência de região variável de cadeia pesada com pelo menos cerca de 85% de identidade, pelo menos 90% de identidade, pelo menos 95% de identidade, pelo menos 98% de identidade, ou pelo menos 99% de identidade com qualquer uma das sequências de região variável de cadeia pesada de SEQ ID NOs: 24 a 84 (mostrado na Figura 2).

[0094] Em algumas modalidades, os anticorpos biespecíficos ou multiespecíficos são fornecidos, os quais podem ter qualquer uma das configurações discutidas no presente documento, incluindo, sem limi- tação, uma molécula do tipo anticorpo de três cadeias biespecífico. Em algumas modalidades, um anticorpo biespecífico pode compreender pelo menos uma região variável de cadeia pesada que tem especifici- dade de ligação para CD22, e pelo menos uma região variável de ca- deia pesada que tem especificidade de ligação para uma proteína dife- rente de CD22. Em algumas modalidades, um anticorpo biespecífico pode compreender um par de cadeia pesada/cadeia leve que tem es- pecificidade de ligação para um primeiro antígeno, e uma cadeia pe- sada de um anticorpo apenas de cadeia pesada, que compreende uma porção Fc que compreende domínios de CH2 e/ou CH3 e/ou CH4, na ausência de um domínio de CH1, e um domínio de ligação a antígeno que se liga a um epitopo de um segundo antígeno ou um epi- topo diferente do primeiro antígeno. Numa modalidade particular, um anticorpo biespecífico compreende um par de cadeia pesada/cadeia leve que tem especificidade de ligação para um antígeno numa célula efetora (por exemplo, uma proteína de CD3 numa célula T), e uma ca- deia pesada de um anticorpo apenas de cadeia pesada que compre- ende um domínio de ligação a antígeno que tem especificidade de li- gação para CD22.

[0095] Em algumas modalidades, quando uma proteína da inven- ção é um anticorpo biespecífico, um braço do anticorpo (uma porção química de ligação) é específico para CD22 humano, enquanto o outro braço pode ser específico para células-alvo, antígenos associados a tumor, antígenos-alvo, por exemplo, integrinas, etc., antígenos de pa- tógeno, proteínas de ponto de verificação, e semelhantes. As células- alvo incluem especificamente células de câncer, incluindo, sem limita- ção, células de tumores hematológicos, por exemplo, tumores de célu- la B, conforme discutido abaixo.

[0096] Diversos formatos de anticorpos biespecíficos estão dentro do âmbito da invenção, incluindo, sem limitação, polipeptídeos de ca- deia única, polipeptídeos de duas cadeias, polipeptídeos de três ca- deias, polipeptídeos de quatro cadeias e múltiplos dos mesmos. Os anticorpos biespecíficos no presente documento incluem especifica- mente anticorpos biespecíficos de célula T que se ligam a CD22, o que é seletivamente expressado em células B maduras, e CD3 (anticorpos anti-CD22 x anti-CD3). Tais anticorpos induzem ao extermínio media- do por célula T potente de células que expressam CD22. PREPARAÇÃO DE ANTICORPOS DE CADEIA PESADA ANTI-CD22

[0097] Os anticorpos de cadeia pesada da presente invenção po- dem ser preparados por métodos conhecidos na técnica. Numa moda- lidade preferencial, os anticorpos de cadeia pesada no presente do- cumento são produzidos por animais transgênicos, incluindo camun- dongos e ratos transgênicos, preferencialmente ratos, em que os ge-

nes de imunoglobulina endógena são submetidos a knockout ou desa- bilitados. Numa modalidade preferencial, os anticorpos de cadeia pe- sada no presente documento são produzidos em UniRat™. UniRat™ têm seus genes de imunoglobulina endógena silenciados e usam uma translócus de cadeia pesada de imunoglobulina humana para expres- sar um repertório diverso naturalmente otimizado de HCAbs totalmente humanos. Embora loci de imunoglobulina endógena em ratos possam ser submetidos a knockout ou silenciados usando uma variedade de tecnologias, em UniRat™ a tecnologia de (endo)nuclease de dedo de zinco (ZNF) foi usada para a desativar o J-locus de cadeia pesada de rato endógena, locus de Cκ de cadeia leve e locus de Cλ de cadeia leve. Os construtos de ZNF para microinjeção em oócitos podem pro- duzir linhagens de knockout (KO) de IgH e IgL. Para detalhes consul- tar, por exemplo, Geurts et al., 2009, Science 325:433. A caracteriza- ção de ratos knockout de cadeia pesada de Ig foi relatada por Menoret et al., 2010, Eur. J. Immunol. 40:2932-2941. As vantagens da tecnolo- gia de ZNF são que junção de extremidade não homóloga para silen- ciar um gene ou locus por meio de deleções até vários kb também po- de fornecer um sítio-alvo para integração homóloga (Cui et al., 2011, Nat Biotechnol 29:64-67). Os anticorpos humanos de cadeia pesada produzidos em UniRat™ são chamados de UniAbsTM e podem ligar epitopos que não podem ser atacados com anticorpos convencionais. Sua alta especificidade, afinidade e tamanho pequeno os torna ideais para aplicações monoespecíficas e poliespecíficas.

[0098] Além dos UniAbsTM, são especificamente incluídos no pre- sente documento anticorpos apenas de cadeia pesada desprovidos do framework e mutações de VHH de camelídeo, e suas regiões de VH funcionais. Tais anticorpos apenas de cadeia pesada, por exemplo, podem ser produzidos em ratos transgênicos ou camundongos que compreendem loci de gene apenas de cadeia pesada totalmente hu-

manos como descrito, por exemplo, no documento nº WO2006/008548, mas outros mamíferos transgênicos, como coelho, cobaia, rato também podem ser usados, ratos e camundongos sendo preferenciais. Os anticorpos apenas de cadeia pesada, incluindo seus fragmentos funcionais de VHH ou VH, também podem ser produzidos por tecnologia de DNA recombinante, por expressão do ácido nucleico de codificação num hospedeiro eucariótico ou procariótico adequado, incluindo, por exemplo, células de mamífero (por exemplo, células CHO), E. coli ou levedura.

[0099] Os domínios de anticorpos apenas de cadeia pesada com- binam vantagens de anticorpos e fármacos de molécula pequena: po- dem ser monovalentes ou multivalentes; têm toxicidade baixa; e são econômicos para fabricar. Devido ao seu tamanho pequeno, estes domínios são fáceis para administrar, incluindo administração oral ou tópica, são caracterizados por alta estabilidade, incluindo estabilidade gastrointestinal; e sua meia vida pode ser adaptada ao uso desejado ou indicação. Além disto, domínios de VH e VHH de HCAbs podem ser fabricados de uma forma econômica.

[00100] Numa modalidade particular, os anticorpos de cadeia pesa- da da presente invenção, incluindo UniAbsTM, têm o resíduo de amino- ácido nativo na primeira posição da região de FR4 (aminoácido posi- ção 101 de acordo com o sistema de numeração Kabat), substituído por outro resíduo de aminoácido, que é capaz de perturbar um em- plastro hidrofóbico exposto à superfície compreendendo ou associado ao resíduo de aminoácido nativo em tal posição. Tais emplastros hi- drofóbicos são normalmente enterrados na interface com a região constante de cadeia leve de anticorpo, porém, se tornam expostos à superfície em HCAbs e são, pelo menos parcialmente, para a agrega- ção indesejada e associação de cadeia leve de HCAbs. O resíduo de aminoácido substituído preferencialmente é carregado, e mais prefe-

rencialmente, é positivamente carregado, como lisina (Lys, K), arginina (Arg, R) ou histidina (His, H), preferencialmente arginina (R). Numa modalidade preferencial, os anticorpos apenas de cadeia pesada deri- vados dos animais transgênicos contêm uma mutação de Trp para Arg na posição 101. Os HCAbs resultantes preferencialmente têm alta afi- nidade de ligação a antígeno e solubilidade sob condições fisiológicas na ausência de agregação.

[00101] Como parte da presente invenção, os anticorpos de cadeia pesada anti-CD22 de IgG humana com sequências únicas de animais UniRatTM (UniAbTM) foram identificados ligando-se a CD22 humano em ensaios de ligação de célula de proteína ELISA (domínio extracelular CD22 recombinante). As sequências de região variável de cadeia pe- sada (VH) identificadas (consultar a Figura 2) são positivas para prote- ína de CD22 humana que se liga e/ou para ligação a células CD22+, e são todas negativas para ligação a células que não expressam CD22.

[00102] Os anticorpos descritos no presente documento se ligam à linhagem celular Duadi de linfoma de Burkitt positivo para CD22 (ATCC® CCL-213TM), e alguns são reativos de modo cruzado com a proteína de CD22 de macaco Cynomolgus. Além disto, os mesmos podem ser geneticamente modificados para fornecer a reatividade cru- zada com a proteína de CD22 de qualquer espécie animal, se for de- sejado.

[00103] Os anticorpos de cadeia pesada anti-CD22, como UniAbsTM no presente documento podem ter uma afinidade para CD22 com uma Kd de cerca de 10-6 a cerca de 10-11, incluindo, sem limitação: de cerca de 10-6 a cerca de 10-10; de cerca de 10-6 a cerca de 10-9; de cerca de 10-6 a cerca de 10-8; de cerca de 10-8 a cerca de 10-11; de cerca de 10-8 a cerca de 10-10; de cerca de 10-8 a cerca de 10-9; de cerca de 10-9 a cerca de 10-11; de cerca de 10-9 a cerca de 10-10; ou qualquer valor dentro destas faixas. A seleção de afinidade pode ser confirmada com uma avaliação biológica para modular, por exemplo, o bloqueio, uma atividade biológica de CD22, incluindo ensaios in vitro, modelos pré- clínicos e ensaios clínicos, bem como a avaliação de toxicidade poten- cial.

[00104] Os anticorpos de cadeia pesada que se ligam a epitopos sem sobreposição numa proteína de CD22, por exemplo, UniAbsTM, podem ser identificados por ensaios de ligação por competição, como imunoensaios de ligação de enzima (ensaios ELISA) ou ensaios de ligação competitiva citométrica de fluxo. Por exemplo, é possível usar a competição entre anticorpos conhecidos que se ligam ao antígeno- alvo e o anticorpo de interesse. Com o uso desta abordagem, é possí- vel dividir um conjunto de anticorpos naqueles que competem com o anticorpo de referência e aqueles que não o fazem. Os anticorpos não competitivos são identificados como de ligação a um epitopo distinto que não se sobrepõe ao epitopo ligado pelo anticorpo de referência. Frequentemente, um anticorpo é imobilizado, o antígeno é ligado e um segundo anticorpo, identificado (por exemplo, biotinilado), é testado num ensaio ELISA quanto à capacidade de ligação ao antígeno captu- rado. Isto pode ser realizado, ainda, com o uso de plataformas de res- sonância plasmônica de superfície (SPR), incluindo ProteOn XPR36 (BioRad, Inc), Biacore 2000 e Biacore T200 (GE Healthcare Life Sci- ences), e imageador MX96 SPR (Ibis tecnologias B.V.), assim como em plataformas de interferometria de biocamada, como Octet Red384 e Octet HTX (ForteBio, Pall Inc). Para detalhes adicionais, consultar os exemplos no presente documento.

[00105] Tipicamente, um anticorpo "compete" com um anticorpo de referência se causar cerca de 15 a 100% de redução na ligação do anticorpo de referência ao antígeno-alvo, como determinado por técni- cas padrão, como pelos ensaios de ligação por competição descritos acima. Em várias modalidades, a inibição relativa é pelo menos cerca de 15%, pelo menos cerca de 20%, pelo menos cerca de 25%, pelo menos cerca de 30%, pelo menos cerca de 35%, pelo menos cerca de 40%, pelo menos cerca de 45%, pelo menos cerca de 50% pelo me- nos cerca de 55%, pelo menos cerca de 60%, pelo menos cerca de 65%, pelo menos cerca de 70%, pelo menos cerca de 75%, pelo me- nos cerca de 80%, pelo menos cerca de 85%, pelo menos cerca de 90%, pelo menos cerca de 95% ou mais. COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS, USOS E MÉTODOS DE TRA-

TAMENTO

[00106] É outro aspecto da presente invenção fornecer composi- ções farmacêuticas que compreendem um ou mais anticorpos da pre- sente invenção em mistura por adição com um carreador farmaceuti- camente aceitável adequado. Os carreadores farmaceuticamente acei- táveis, como usado no presente documento, são exemplificados, mas não limitados a adjuvantes, carreadores sólidos, água, tampões ou ou- tros carreadores usados na técnica para reter componentes terapêuti- cos, ou combinações dos mesmos.

[00107] Numa modalidade, uma composição farmacêutica compre- ende um anticorpo de cadeia pesada (por exemplo, UniAbTM) que se liga a CD22. Em outra modalidade, uma composição farmacêutica compreende um anticorpo de cadeia pesada (por exemplo, UniAbTM) multiespecífico (incluindo biespecífico) com especificidade de ligação por dois ou mais epitopos sem sobreposição numa proteína de CD22. Numa modalidade preferencial, uma composição farmacêutica com- preende um anticorpo de cadeia pesada (por exemplo, UniAbTM) multi- específico (incluindo biespecífico) com especificidade de ligação a CD22 e com especificidade de ligação a um alvo de ligação numa cé- lula efetora (por exemplo, um alvo de ligação numa célula T, como, por exemplo, uma proteína CD3 numa célula T).

[00108] A composição farmacêutica dos anticorpos usados de acordo com a presente invenção é preparada para armazenamento mediante a mistura de proteínas que têm o grau de pureza desejado com carreadores, excipientes ou estabilizantes farmaceuticamente aceitáveis opcionais (ver, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences 16ª edição, Osol, A. Ed. (1980)), como sob a forma de formu- lações liofilizadas ou soluções aquosas. Os carreadores, excipientes ou estabilizantes aceitáveis são não tóxicos aos recebedores nas do- sagens e concentrações empregadas, e incluem tampões, como fosfa- to, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes, incluindo ácido as- córbico e metionina; conservantes (como cloreto de octadecildimetil- benzil amônio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio; fenol, álcool butílico ou benzílico; alquil parabenos, co- mo metil ou propil parabeno; catecol; resorcinol; ciclo-hexanol; 3- pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos que cerca de 10 resíduos); proteínas, como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, como polivinilpirrolidona; aminoácidos, como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, inclu- indo glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes, como EDTA; açúcares, como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contraíons formadores de sal, como sódio; complexos de metal (por exemplo, complexos de Zn-proteína); e/ou tensoativos não iônicos, como TWEEN™,PLURONICS™ ou polietileno glicol (PEG).

[00109] Composições farmacêuticas para administração parenteral são preferencialmente estéreis e substancialmente isotônicas e fabri- cadas sob as condições de Boa Prática de Fabricação (GMP). Com- posições farmacêuticas podem ser fornecidas em forma de dosagem unitária (isto é, a dosagem para uma única administração). A formula- ção depende da rota de administração escolhida. Os anticorpos no presente documento podem ser administrados através de injeção in-

travenosa ou infusão ou por via subcutânea. Para administração por injeção, os anticorpos no presente documento podem ser formulados em soluções aquosas, preferencialmente em tampões fisiologicamente compatíveis para reduzir o desconforto no sítio de injeção. A solução pode conter carreadores, excipientes ou estabilizadores, conforme abordado acima. Alternativamente, anticorpos podem estar em forma liofilizada para constituição com um veículo adequado, por exemplo, água isenta de pirógeno estéril, antes do uso.

[00110] As formulações de anticorpo são divulgadas, por exemplo, na Patente nº U.S. 9.034.324. Formulações similares podem ser usa- das para os anticorpos de cadeia pesada, incluindo UniAbsTM, da pre- sente invenção. As formulações de anticorpo subcutâneas são descri- tas, por exemplo, nos documentos nº US20160355591 e US20160166689.

MÉTODOS DE USO

[00111] Os anticorpos anti-CD22 apenas de cadeia pesada, anti- corpos multiespecíficos e composições farmacêuticas descritas no presente documento podem ser usados para o tratamento de doenças e afecções caracterizadas pela expressão de CD22, incluindo, sem limitação, as afecções e doenças adicionalmente descritas no presente documento. Aspectos da invenção também se referem a usos de um anticorpo descrito no presente documento, na preparação de um me- dicamento para o tratamento de um distúrbio de célula B caracterizado pela expressão de CD22. Aspectos da invenção também se referem a um anticorpo descrito no presente documento para uso no tratamento de um distúrbio de célula B caracterizado pela expressão de CD22.

[00112] CD22 é uma proteína transmembranar de tipo I de 135 kDa que é expressada em baixos níveis em pré-células B e células B ima- turas, de modo máximo em células B maduras, e, finalmente, regulada de modo decrescente em células de plasma. (Por exemplo, Walker et al., Immunology, Mar 2008; 123(3) 314 a 325). CD22 é fortemente ex- pressado em células B foliculares (zonas de célula B primária e se- cundária), de manto e de zona marginal, e foi relatado como presente em 60% a 80% de amostras de pacientes com malignidades de célula B (Alderson et al., Clin. Cancer Res 2009;15(3) 11 de fevereiro de 2009). Devido a esta expressão observada em várias malignidades hematológicas, CD22 é um alvo promissor para produtos terapêuticos à base de anticorpo.

[00113] Num aspecto, os anticorpos de cadeia pesada CD22 (por exemplo, UniAbsTM) e composições farmacêuticas no presente docu- mento podem ser usados para tratar malignidades hematológicas ca- racterizadas pela expressão de CD22, incluindo, sem limitação, linfo- ma de célula B grande difusa (DLBCL), linfoma não Hodgkin, leucemia linfocítica crônica de célula B (CLL), e leucemia linfoblásica aguda de célula B (ALL).

[00114] Linfoma de célula B grande difusa (DLBCL ou DLBL) é a forma mais comum de linfoma não Hodgkin entre adultos (Blood 1997 89 (11): 3909-3918), com uma incidência anual estimada de 7 a 8 ca- sos por 100000 pessoas por ano nos E.U.A. e no Reino Unido. O mesmo é caracterizado como um câncer agressivo que pode surgir em virtualmente qualquer parte do corpo. As causas de DLBCL não são bem entendidas, e podem surgir de células B normais assim como transformação maligna de outros tipos de células de linfoma ou leuce- mia. As abordagens de tratamento envolvem geralmente quimioterapia e radiação, e resultaram numa média de taxa de sobrevivência de cin- co anos geral de aproximadamente 58% para adultos. Embora alguns anticorpos monoclonais tenham se demonstrado promissores para tra- tar DLBCL, a eficácia clínica consistente ainda não foi conclusivamen- te demonstrada. Há, portanto, uma grande necessidade por novas te- rapias, incluindo imunoterapias, para DLBCL.

[00115] Em outro aspecto, os anticorpos de cadeia pesada de CD22 (por exemplo, UniAbsTM) e composições farmacêuticas no pre- sente documento podem ser usados para tratar distúrbios autoimunes caracterizados por células B patogênicas que expressam CD22, inclu- indo, sem limitação, lúpus eritematoso sistêmico (SLE), artrite reuma- toide (RA), e esclerose múltipla (MS).

[00116] As doses eficazes das composições da presente invenção para o tratamento da doença variam dependendo de muitos fatores diferentes que incluem meios de administração, local alvo, estado fisio- lógico do paciente, se o paciente é humano ou um animal, outros me- dicamentos administrados, e se o tratamento é profilático ou terapêuti- co. Normalmente, o paciente é um ser humano, mas os mamíferos não humanos também podem ser tratados, por exemplo, animais de esti- mação como cães, gatos, cavalos, etc., mamíferos de laboratório co- mo coelhos, camundongos, ratos, etc. e similares. As dosagens de tra- tamento podem ser tituladas para otimizar a segurança e a eficácia.

[00117] Os níveis de dosagem podem ser prontamente determina- dos pelo médico normalmente qualificado e podem ser modificados conforme necessário, por exemplo, conforme necessário para modifi- car a resposta de um sujeito à terapia. A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com os materiais carreadores para pro- duzir uma forma de dosagem única varia dependendo do hospedeiro tratado e do modo específico de administração. As formas unitárias de dosagem geralmente contêm entre cerca de 1 mg a cerca de 500 mg de um ingrediente ativo.

[00118] Em algumas modalidades, a dosagem terapêutica do agen- te pode se situar na faixa de cerca de 0,0001 a 100 mg/kg, e mais normalmente, 0,01 a 5 mg/kg, do peso corporal do hospedeiro. Por exemplo, as dosagens podem ser de 1 mg/kg de peso corporal ou de 10 mg/kg de peso corporal ou dentro da faixa de 1 a 10 mg/kg. Um re-

gime de tratamento exemplificativo implica administração uma vez a cada duas semanas ou uma vez por mês ou uma vez a cada 3 a 6 meses. As entidades terapêuticas da presente invenção são normal- mente administradas em múltiplas ocasiões. Os intervalos entre as do- sagens únicas podem ser semanais, mensais ou anuais. Os intervalos também podem ser irregulares, conforme indicado pela medição de níveis sanguíneos da entidade terapêutica no paciente. Alternativa- mente, as entidades terapêuticas da presente invenção podem ser administradas como uma formulação de liberação prolongada, em cujo caso é necessária uma administração menos frequente. A dosagem e frequência variam dependendo da meia-vida do polipeptídeo no paci- ente.

[00119] Tipicamente, as composições são preparadas como injetá- veis, como soluções ou suspensões líquidas; formas sólidas adequa- das para a solução em, ou suspensão em veículos líquidos antes da injeção também podem ser preparadas. As composições farmacêuti- cas no presente documento são adequadas para administração intra- venosa ou subcutânea, diretamente ou após reconstituição de compo- sições sólidas (por exemplo, liofilizadas). A preparação também ser emulsionada ou encapsulada em lipossomas ou micropartículas, como polilactídeo, poliglicolídeo ou copolímero para um efeito adjuvante me- lhorado, conforme discutido acima. Langer, Science 249: 1527, 1990 e Hanes, Advanced Drug Delivery Reviews 28: 97-119, 1997. Os agen- tes desta invenção podem ser administrados na forma de uma injeção de depósito ou preparação de implante que pode ser formulada de modo que permita uma liberação sustentada ou pulsátil do ingrediente ativo. As composições farmacêuticas são geralmente formuladas como estéreis, substancialmente isotônicas e em total conformidade com todos os regulamentos das Boas Práticas de Fabricação (GMP) da Administração de Alimentos e Drogas dos Estados Unidos.

[00120] A toxicidade dos anticorpos e estruturas de anticorpo aqui descritas pode ser determinada por procedimentos farmacêuticos pa- drão em culturas celulares ou animais experimentais, por exemplo, mediante a determinação da LD50 (a dose letal para 50% da popula- ção) ou da LD100 (a dose letal para 100% da população). A razão de dose entre efeito tóxico e terapêutico é o índice terapêutico. Os dados obtidos a partir destes ensaios de cultura celular e estudos em animais podem ser usados na formulação de uma faixa de dosagem que é não tóxica para uso em seres humanos. A dosagem dos anticorpos descri- tos no presente documento se situa, de preferência, dentro de uma faixa de concentrações circulantes que incluem a dose eficaz com pouca ou nenhuma toxicidade. A dosagem pode variar dentro desta faixa, dependendo da forma de dosagem empregada e da via de ad- ministração usada. A formulação, via de administração e dosagem exata podem ser escolhidas pelo médico individual, tendo em vista a condição do paciente.

[00121] As composições para administração irão compreender co- mumente um anticorpo ou outro agente ablativo dissolvido num carre- ador farmaceuticamente aceitável, de preferência, um carreador aquo- so. Uma variedade de carreadores aquosos pode ser usada, por exemplo, solução salina tamponada e similares. Estas soluções são estéreis e geralmente livres de matéria indesejável. Estas composi- ções podem ser esterilizadas por técnicas de esterilização convencio- nais bem conhecidas. As composições podem conter substâncias au- xiliares farmaceuticamente aceitáveis, conforme necessário, para aproximar condições fisiológicas como agentes tamponantes e de ajuste do pH, agentes de ajuste de toxicidade e similares, por exem- plo, acetato de sódio, cloreto de sódio, cloreto de potássio, cloreto de cálcio, lactato de sódio e similares. A concentração de agente ativo nestas formulações pode variar amplamente e será selecionada prin-

cipalmente com base em volumes de fluido, viscosidades, peso corpo- ral e similares de acordo com o modo particular de administração sele- cionado e as necessidades do paciente (por exemplo, Remington's Pharmaceutical Science (15ª edição, 1980) e Goodman & Gillman, The Pharmacological Basis of Therapeutics (Hardman et al., eds., 1996)).

[00122] Também abrangidos pelo escopo da invenção são os kits compreendendo os agentes ativos e formulações dos mesmos, da in- venção e instruções para uso. O kit pode ainda conter pelo menos um reagente adicional, por exemplo, um fármaco quimioterapêutico, etc. Os kits incluem tipicamente um rótulo que indica o uso pretendido do conteúdo do kit. O termo "rótulo", conforme usado no presente docu- mento, inclui qualquer material escrito ou gravado fornecido no ou com um kit ou que, de outra forma, acompanha um kit.

[00123] A invenção agora sendo completamente descrita, ficará evidente para um versado na técnica que várias alterações e modifica- ções podem ser feitas sem se afastar do espírito ou escopo da inven- ção.

EXEMPLOS

MATERIAIS E MÉTODOS LIGAÇÃO DE PROTEÍNA DE CD22

[00124] Os experimentos cinéticos para determinar as afinidades antígeno-anticorpo foram realizados no sistema Octet QK-384 (Forte- Bio) com o uso de interferometria de biocamada. Biossensores de Captura de Fc de IgG anti-humana (AHC) (Forte Bio, nº de Parte: 18- 5064) foram hidratados em tampão de ensaio (1x PBS, 0,1% BSA, 0,02% de Tween-20, pH 7,2) e pré-condicionados em 100 mM de Gli- cina, pH 1,5. Uma linha de base foi estabelecida no tampão de ensaio por 120 segundos. Os biossensores de AHC foram, então, imobiliza- dos com UniAbsTM a uma concentração de 5 μg/ml por 120 segundos. Outra linha de base (120 segundos) foi estabelecida no tampão de en-

saio. Em seguida, os mesmos foram, então, imersos numa série de diluição de 1:2 de 7 pontos da proteína de CD22 humana no tampão de ensaio, a partir de 250 nM. O último poço da coluna de analito con- tinha apenas tampão de ensaio para testar quanto à ligação não espe- cífica entre o tampão e os biossensores carregados, e foi usado como um poço de referência. A associação foi observada por 600 segundos, seguida pela dissociação por 900 segundos. A análise de dados foi realizada com o uso de Octet Data Analysis v9.0 (ForteBio). A cinética de ligação foi analisada com o uso de um modelo de ligação de 1:1 padrão. LIGAÇÃO DE CÉLULA DE CD22

[00125] A ligação às células positivas para CD22 foi avaliada por citometria de fluxo (Guava easiCyte 8HT, EMD Millipore) usando a li- nhagem celular Daudi (ATCC). Brevemente, 100000 células-alvo fo- ram manchadas com uma série de diluição de UniAbsTM purificados por 30 minutos a 4°C. Após a incubação, as células foram lavadas du- as vezes com tampão de citometria de fluxo (1X PBS, 1% BSA, 0,1% de NaN3) e manchadas com IgG anti-humana de F(ab’)2 de cabra con- jugada a R-ficoeritrina (PE) (Southern Biotech, no de cat. 2042-09) pa- ra detectar anticorpos ligados a célula. Após uma incubação de 20 mi- nutos a 4°C, as células foram lavadas duas vezes com tampão de ci- tometria de fluxo e, então, a intensidade de fluorescência média (MFI) foi medida por citometria de fluxo. Os valores de EC50 foram calcula- dos usando GraphPad Prism 7. A ligação às células positivas para CD22 cinomolgo foi determinada usando o mesmo protocolo com as seguintes modificações: as células-alvo foram de células CHO esta- velmente transfectadas para expressar o domínio extracelular de CD22 cinomolgo e cada anticorpo foi testado a uma única concentra- ção (~1,7 μg/ml) de modo que os valores de EC50 não tenham sido calculados.

EXEMPLO 1: RATOS GENETICAMENTE MODIFICADOS QUE EX-

PRESSAM ANTICORPOS APENAS DE CADEIA PESADA

[00126] Um locus de IgH 'humana-rato' foi construído e montado em várias partes. Isto envolveu a modificação e junção de genes de região C de rato a jusante de JHs humano e subsequentemente, a adição a montante da região de segmento de VH6 –D-humano. Dois BACs com agrupamentos separados de genes de VH humanos [BAC6 e BAC3] foram, então, coinjetados com o BAC denominado Georg, codificando a região montada e modificada compreendendo VH6 humano, todos os Ds, todos JHs e C2a/1/2b (CH1) de rato modificado.

[00127] Foram gerados ratos transgênicos que carregam loci de imunoglobulina de cadeia pesada artificial em configuração não rear- ranjada. Os genes IgG2a(ΔCH1)., IgG1(ΔCH1)., IgG2b(ΔCH1) genes eram desprovidos do segmento CH1. Os genes de região constante IgE, IgA e intensificador 3’ foram incluídos em Georg BAC. RT-PCR e análise de soro (ELISA) de ratos transgênicos revelaram rearranjo produtivo de loci de imunoglobulina transgênica e expressão de anti- corpos apenas de cadeia pesada de vários isotipos em soro. Os ratos transgênicos foram cruzados com ratos com loci de cadeia pesada e cadeia leve endógenos mutados anteriormente descritos na publicação de patente US 2009/0098134 A1. A análise de tais animais demons- trou inativação da expressão de cadeia pesada e leve de imunoglobu- lina de rato e expressão de nível alto de anticorpos de cadeia pesada com regiões variáveis codificadas pelos genes V, D e J humanos. A imunização de ratos transgênicos resultou na produção de respostas sérias de alta titulação de anticorpos de cadeia pesada específicos de antígeno. Estes ratos transgênicos que expressam anticorpos de ca- deia pesada com uma região VDJ humana foram denominados de UniRatsTM. EXEMPLO 2: IMUNIZAÇÃO

IMUNIZAÇÃO COM DOMÍNIO EXTRACELULAR RECOMBINANTE DE CD22.

[00128] Doze animais de UniRat (6 HC27, 6 HC28) foram imuniza- dos com proteína de CD22 humano recombinante. Os animais foram imunizados de acordo com o protocolo padrão usando um adjuvante Titermax/Alhydrogel. O domínio extracelular recombinante de CD22 foi adquirido junto à R&D Systems e foi diluído com solução salina esteri- lizada e combinado com adjuvante. O imunógeno foi combinado com adjuvantes Titermax e Alhydrogel. A primeira imunização (priming) com imunógeno em Titermax foi administrada nas pernas esquerda e direita. As imunizações de reforço subsequentes foram feitas na pre- sença de Alhydrogel e três dias antes da coleta foram realizados refor- ços com imunógenos em PBS. O soro foi coletado de ratos no san- gramento final para determinar os títulos de soro.

RESULTADOS DE TÍTULO DE SORO

[00129] As informações de sumário de título de soro são mostradas na Figura 6. Nos gráficos representados na Figura 6, cada linha repre- senta um animal individual. As legendas dos gráficos mostram o nú- mero de ID de cada animal individual. A atividade de ligação para uma série de diluição de 8 pontos de soro foi testada por ELISA contra uma proteína huCD22+Fc, etiqueta huCD22+His, proteína de etiqueta CD22 rhesus+His e uma proteína fora de alvo de etiqueta His. Dentre este grupo de animais, uma faixa de níveis de reatividade de soro tan- to para a proteína de CD22 humana quanto de rhesus foi observada. Uma resposta de soro à etiqueta de proteína His também foi observa- da. EXEMPLO 3: LIGAÇÃO A LINHAGENS CELULARES QUE EX- PRESSAM CD22

[00130] A Figura 4 resume a atividade de ligação a alvo dos anti- corpos apenas de cadeia pesada anti-CD22 descritos no presente do-

cumento. A coluna 1 indica o número de ID de clone do anticorpo ape- nas de cadeia pesada anti-CD22. A coluna 2 indica a afinidade de li- gação à proteína (KD) medida em molaridade. A coluna 3 indica a constante de dissociação de ligação à proteína (taxa K-off) medida em segundos. A coluna 4 indica a ligação a células Daudi medida como vezes sobre sinal de MFI de fundo. A coluna 5 indica a ligação a célu- las CHO que expressam de modo estável CD22 cyno medida como vezes sobre sinal de MFI de fundo. A coluna 6 indica a ligação a célu- las CHO que não expressam proteína CD22 medida como vezes sobre sinal de MFI de fundo. EXEMPLO 4: EXTERMÍNIO MEDIADO POR ANTICORPO BIESPE- CÍFICO DE CÉLULAS DE TUMOR HUMANO ATRAVÉS DE REDI-

RECIONAMENTO DE CÉLULAS T ATIVADAS

[00131] Três linhagens celulares de tumor de linfoma de Burkitt po- sitiva para CD22 diferentes (Daudi, Raji e Ramos) foram rotuladas com corante e incubadas com quantidades crescentes de anticorpo biespe- cífico na presença de células T humanas pré-ativadas. O anticorpo bi- específico foi composto de um braço de ligação anti-CD3 pareado com o domínio de ligação de VH anti-CD22, conforme representado es- quematicamente na Figura 5D. O anticorpo de controle negativo incluiu um domínio de ligação de VH que não se ligou a CD22. As células K562 negativas para CD22 não exibiram lise específica (dados não mostrados). Os dados de três anticorpos biespecíficos que incorporam três domínios de ligação apenas de cadeia pesada anti-CD22 diferen- tes pareados com o mesmo domínio de ligação anti-CD3 são mostra- dos na Figura 5A, em comparação com um controle negativo, e de- monstram extermínio mediado por anticorpo de células de tumor Daudi positivas para CD22 através de redirecionamento de células T ativa- das. Os dados de dois anticorpos biespecíficos que incorporam o mesmo domínio de ligação apenas de cadeia pesada anti-CD22 pare-

ado com dois domínios de ligação anti-CD3 diferentes são mostrados na Figura 5B, em comparação com um controle negativo, e demons- tram extermínio mediado por anticorpo de células de tumor Raji positi- vas para CD22 através de redirecionamento de células T ativadas. Os dados de dois anticorpos biespecíficos que incorporam o mesmo do- mínio de ligação apenas de cadeia pesada anti-CD22 pareado com dois domínios de ligação anti-CD3 diferentes são mostrados na Figura 5C, em comparação com um controle negativo, e demonstram exter- mínio mediado por anticorpo de células de tumor Ramos positivas para CD22 através de redirecionamento de células T ativadas.

[00132] Embora modalidades preferenciais da presente invenção tenham sido mostradas e descritas no presente documento, será óbvio para aqueles versados na técnica que tais modalidades são fornecidas a título de exemplo apenas. Diversas variações, alterações e substitui- ções ocorrerão agora para aqueles versados na técnica sem que se afaste da invenção. Deve-se entender que várias alternativas às mo- dalidades da invenção descritas neste documento podem ser empre- gadas na prática da invenção. Pretende-se que as seguintes reivindi- cações definam o escopo da invenção e que métodos e estruturas in- seridos do escopo destas reivindicações e seus equivalentes estejam cobertos deste modo.

Claims (1)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Anticorpo apenas de cadeia pesada que se liga a CD22, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de ca- deia pesada que compreende: (a) uma CDR1 que tem duas ou menos substituições em qualquer uma das sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 1 a 10; e/ou (b) uma CDR2 que tem duas ou menos substituições em qualquer uma das sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 11 a 17; e/ou (c) uma CDR3 que tem duas ou menos substituições em qualquer uma das sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 18 a

   23.

   2. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que as ditas sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 estão presentes em um framework humano.

   3. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende adicional- mente uma sequência de região constante de cadeia pesada na au- sência de uma sequência de CH1.

   4. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de CDR1 selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 1 a 10; e/ou (b) uma sequência de CDR2 selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 11 a 17; e/ou (c) uma sequência de CDR3 selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 18 a 23.

   5. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de CDR1 selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 1 a 10; e (b) uma sequência de CDR2 selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 11 a 17; e (c) uma sequência de CDR3 selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 18 a 23.

   6. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma se- quência de CDR2 de SEQ ID NO: 11 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 18; ou (b) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma se- quência de CDR2 de SEQ ID NO: 12 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 19; ou (c) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma se- quência de CDR2 de SEQ ID NO: 12 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 20.

   7. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia pesada que tem pelo me- nos 95% de identidade de sequência com qualquer uma das sequên- cias de SEQ ID NOs: 24 a 84.

   8. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que compreende uma se- quência de região variável de cadeia pesada selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 24 a 84.

   9. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que compreende uma se- quência de região variável de cadeia pesada de SEQ ID NO: 24.

   10. Anticorpo apenas de cadeia pesada que se liga a CD22, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de ca- deia pesada que compreende uma cadeia pesada variável compreen- dendo (a) uma sequência de CDR1 da fórmula: G X1 S I X2 X3 X4 X5 X6 Y (SEQ ID NO: 85) onde X1 é D ou G; X2 é S, T, I ou N; X3 é S ou D; X4 é G, S ou N; X5 é D, G ou S; e X6 é Y ou H; e (b) uma sequência de CDR2 da fórmula: X7 X8 Y X9 G X10 X11 (SEQ ID NO: 86) onde X7 é I ou V; X8 é Y ou H; X9 é S ou T; X10 é A, V ou S; e X11 é T ou A; e (c) uma sequência de CDR3 da fórmula: X12 R X13 D S S X14 W R S (SEQ ID NO: 87) onde X12 é T, A ou K; X13 é D ou E; e X14 é N ou S.

   11. Anticorpo apenas de cadeia pesada que se liga a CD22, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de ca- deia pesada que compreende sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 em um framework de VH humano, em que as sequências de CDR são uma sequência que têm duas ou menos substituições numa sequência de CDR selecionada a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs:1 a

   23.

   12. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que compreende uma re- gião variável de cadeia pesada que compreende sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 num framework de VH humano, em que as sequências de CDR são selecionadas a partir do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 1 a 23.

   13. Anticorpo apenas de cadeia pesada que se ligam a CD22, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo: (a) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma se- quência de CDR2 de SEQ ID NO: 11 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 18; ou (b) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma se- quência de CDR2 de SEQ ID NO: 12 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 19; ou (c) uma sequência de CDR1 de SEQ ID NO: 1, uma se- quência de CDR2 de SEQ ID NO: 12 e uma sequência de CDR3 de SEQ ID NO: 20, num framework de VH humano.

   14. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que é multiespecífico.

   15. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que é biespecífico.

   16. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que tem afinidade de liga- ção com duas proteínas de CD22 diferentes.

   17. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que tem afinidade de liga-

   ção com dois epitopos diferentes na mesma proteína de CD22.

   18. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que tem afinidade de liga- ção com uma célula efetora.

   19. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que tem afinidade de liga- ção com um antígeno de célula T.

   20. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que tem afinidade de liga- ção com CD3.

   21. Anticorpo apenas de cadeia pesada, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 20, caracterizado pelo fato de que está num formato de CAR-T.

   22. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um anticorpo apenas de cadeia pesada, como defini- do em qualquer uma das reivindicações 1 a 21.

   23. Método para o tratamento de um distúrbio de célula B, caracterizado pela expressão de CD22 que compreende administrar a um indivíduo com o dito distúrbio um anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 21, ou uma composição farma- cêutica, como definida na reivindicação 22.

   24. Uso de um anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que é destinado à preparação de um medicamento para o tratamento de um distúrbio de célula B distinguido pela expressão de CD22.

   25. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 21, caracterizado pelo uso no tratamento de um distúrbio de célula B distinguido pela expressão de CD22.

   26. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 23 a 25, caracterizado pelo fato de que o distúrbio é linfoma de célula B grande difusa (DLBCL).

   27. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 23 a 25, caracterizado pelo fato de que o distúrbio é linfoma não Hodgkin (NHL).

   28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 23 a 25, caracterizado pelo fato de que o distúrbio é lúpus erite- matoso sistêmico (SLE).

   29. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 23 a 25, caracterizado pelo fato de que o distúrbio é artrite reu- matoide (RA).

   30. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 23 a 25, caracterizado pelo fato de que o distúrbio é esclerose múltipla (MS).

   31. Polinucleotídeo, caracterizado pelo fato de que codifica um anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a

   21.

   32. Vetor, caracterizado pelo fato de que compreende o po- linucleotídeo, como definido na reivindicação 31.

   33. Célula, caracterizada pelo fato de que compreende o vetor, como definido na reivindicação 32.

   34. Método para produzir um anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que compreende cultivar uma célula, como definida na reivindicação 33, sob condições permissivas para expressão do anticorpo e isolar o anticorpo da célula.

   35. Método para fabricar anticorpo, como definido em qual- quer uma das reivindicações 1 a 21, caracterizado pelo fato de que compreende imunizar um animal UniRat com CD22 e identificar se- quências de cadeia pesada de ligação ao CD22.