BR112020009973A2

BR112020009973A2 - peptídeos antimicrobianos e métodos de utilização dos mesmos

Info

Publication number: BR112020009973A2
Application number: BR112020009973-2A
Authority: BR
Inventors: Christopher A. Zook; Michael Kuhn; Derek James Sheehan; Eric Baima; Richard Andrew Ewin; Hilary Phelps
Original assignee: Zoetis Services Llc
Priority date: 2017-12-07
Filing date: 2018-12-05
Publication date: 2020-11-03
Also published as: SG11202004661QA; TW202116348A; CL2020001464A1; TW201924712A; MX2020005920A; AU2018378035A1; ZA202003387B; WO2019113181A1; NZ764838A; EP3720875A1; TWI746908B; AU2023229465A1; CO2020006907A2; KR102555177B1; TW202204376A; US20200385429A1; IL275074A; TWI786887B; AU2018378035B2; KR20230110822A

Abstract

A presente invenção refere-se a peptídeos antimicrobianos de fórmula geral X0X1X2C X3X4X5CX6X7X8X9CYX10X11CX12X13. Também são proporcionadas certas formulações contendo esses peptídeos e métodos de utilização desses peptídeos para tratamento de infecções da pele em um animal com necessidade dos mesmos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "PEPTÍDEOS ANTIMICROBIANOS E MÉTODOS DE UTILIZAÇÃO DOS MESMOS".

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] Esta invenção refere-se ao campo de peptídeos antimicrobianos e utilizações de tais peptídeos para tratamento de infecções.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

[002] Antibióticos são substâncias químicas que apresentam a capacidade, em uma solução diluída, de matar ou inibir crescimento de micro-organismos. Antibióticos que são suficientemente não tóxicos ao hospedeiro são utilizados como agentes quimioterapêuticos para tratar doenças infecciosas de humanos, animais e plantas. O termo foi originalmente restrito às substâncias produzidas por micro-organismos, mas se estendeu para incluir compostos sintéticos e semissintéticos de atividade química similar.

[003] Uso extensivo e generalizado de fármacos antimicrobianos levou ao surgimento de cepas de micro-organismos resistentes. Esses micro-organismos não são mais suscetíveis aos fármacos antimicrobianos atualmente disponíveis. A fim de reduzir ou prevenir doenças infecciosas letais e manter a saúde pública, são necessários novos agentes antimicrobianos.

[004] Peptídeos antimicrobianos (PAMs) é um componente essencial do sistema de defesa do hospedeiro de organismos em toda a natureza e oferecem proteção a partir de patógenos invasores. Estes mostram atividade antimicrobiana potente contra bactérias gram- positivas e gram-negativas, fungos, parasitas e vírus. Os PAMs menores (geralmente, cerca de 15 a 40 aminoácidos) agem em grande parte rompendo a estrutura ou função de membranas microbianas celulares; não têm como alvo estruturas moleculares únicas definidas.

Portanto, ao contrário dos antibióticos convencionais, são eficazes independentemente da atividade metabólica de bactérias. PAMs humanos, tais como defensinas e catelicidina (LL-37), estão presentes em leucócitos e secretadas por vários epitélios nas superfícies da pele e da mucosa. Além de sua atividade antimicrobiana, os PAMs são importantes moléculas efetoras na inflamação, ativação imune e cicatrização de feridas. Os PAMs são bastante diversos na sequência e na estrutura secundária, mas compartilham algumas propriedades comuns. São geralmente catiônicos, anfipáticos e exercem seu efeito microbicida comprometendo a integridade da membrana bacteriana. A interação dos PAMs com a superfície da membrana aniônica dos micróbios alvo leva à permeabilização da membrana, lise e morte celular.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[005] No primeiro aspecto, a invenção proporciona uma sequência de aminoácidos de 17-22 aminoácidos de comprimento e compreendendo, em seu N-terminal, SEQ ID Nº: 12. (X0X1X2CX3X4X5CX6X7X8X9CYX10X11CX12X13) em que X0 está ausente ou prolina; X1 é lisina, arginina, glicina ou prolina; X2 é fenilalanina, triptofano ou arginina; X3 é fenilalanina, valina ou triptofano; X4 é arginina, tirosina ou fenilalanina; X5 é valina ou alanina; X6 é tirosina ou arginina ou lisina ou triptofano; X7 é arginina, fenilalanina ou glicina; X8 é arginina, fenilalanina ou glicina; X9 é isoleucina, alanina, fenilalanina, tirosina ou valina; X10 é arginina ou histidina; X11 é arginina ou lisina; X12 é arginina, lisina ou asparagina; X13 é um polipeptídio de 0 a 4 aminoácidos de comprimento; com a condição de que, se X0 é prolina, então X1 não é prolina; se a sequência de aminoácidos compreende a SEQ ID Nº: 13 (KWCFRVCYRGICYRRCR), ou SEQ ID Nº: 28 (KWCFRVCYRGICYRKCR), então X13 é 1 a 4 aminoácidos de comprimento; se X13 é 1 aminoácido de comprimento ou mais longo,

então o aminoácido N-terminal em X13 é ácido aspártico ou ácido glutâmico; se o aminoácido na posição correspondente à posição 1 de SEQ ID Nº: 1 for glicina, então a glicina não é modificada por ácido acílico ou palmítico; se o aminoácido for X11 lisina, então X6X7X8X9 (SEQ ID Nº: 14) não é RRRF (SEQ ID Nº: 15); e se o aminoácido for GFCWYVCYRGICYRRCN (SEQ ID Nº: 16), então a asparagina C- terminal é amidada.

[006] Em certas modalidades, X0 está ausente e X6 é arginina ou lisina; e/ou X7 é arginina ou lisina; X6X7X8X9 (SEQ ID Nº: 14) é selecionada do grupo que consiste em YRGI (SEQ ID Nº: 17), YRGV (SEQ ID Nº: 18), YRGF (SEQ ID Nº: 19); e/ou X10 é arginina; e/ou X3X4X5 (SEQ ID Nº: 20) é FRV (SEQ ID Nº: 21), WYV (SEQ ID Nº: 22); e/ou X13 é 1 aminoácido de comprimento ou mais longo, e o aminoácido N- terminal em X13 é ácido aspártico.

[007] Em um conjunto particular de modalidades, a sequência de aminoácidos é 17-21 aminoácidos de comprimento e compreendem em seu N-terminal, SEQ ID Nº: 12 (X0X1X2C X3X4X5CX6X7X8X9CYX10X11CX12X13) em que X0 está ausente; X1 é lisina, arginina ou glicina; X2 é fenilalanina, triptofano ou arginina; X3 é fenilalanina, valina ou triptofano; X4 é tirosina ou fenilalanina; X5 é valina ou alanina; X6 é tirosina ou arginina; X7 é arginina ou glicina; X8 é arginina, fenilalanina ou glicina; X9 é alanina, fenilalanina, tirosina ou valina; X10 é arginina ou histidina; X11 é arginina ou lisina; X12 é arginina, lisina ou asparagina; X13 é um polipeptídio de 0 a 4 aminoácidos de comprimento.

[008] Em um outro conjunto de modalidades de acordo com o primeiro aspecto, a sequência de aminoácidos é de 18-21 aminoácidos de comprimento e compreendem, em seu N-terminal, SEQ ID Nº: 1 (KWCFRVCYRGICYRRCRD) ou um peptídeo que difere da SEQ ID Nº: 1 por um, dois, três ou quatro aminoácidos, em que os aminoácidos que diferem dos aminoácidos da SEQ ID Nº: 1 são selecionados independentemente do grupo que consiste em arginina ou glicina na posição correspondente à posição 1 de SEQ ID Nº: 1; fenilalanina ou arginina na posição correspondente à posição 2 de SEQ ID Nº: 1; valina ou triptofano na posição correspondente à posição 4 de SEQ ID Nº: 1; tirosina na posição correspondente à posição 5 de SEQ ID Nº: 1; arginina na posição correspondente à posição 8 de SEQ ID Nº: 1; glicina na posição correspondente à posição 9 de SEQ ID Nº: 1; arginina na posição correspondente à posição 10 de SEQ ID Nº: 1; alanina, fenilalanina ou valina na posição correspondente à posição 11 de SEQ ID Nº: 1; histidina na posição correspondente à posição 14 de SEQ ID Nº: 1; lisina na posição correspondente à posição 15 de SEQ ID Nº: 1; asparagina na posição correspondente à posição 17 de SEQ ID Nº: 1.

[009] Mais especificamente, a sequência de aminoácidos compreende ácido aspártico na posição correspondente à posição 18 de SEQ ID Nº: 1; e/ou asparagina na posição correspondente à posição 17 de SEQ ID Nº: 1; e/ou glicina na posição correspondente à posição 1 de SEQ ID Nº: 1; alanina na posição correspondente à posição 11 de SEQ ID Nº: 1; e/ou arginina na posição correspondente à posição 14 de SEQ ID Nº: 1, na posição correspondente à posição 15 de SEQ ID Nº: 1, ou ambas.

[010] Em um conjunto de modalidades, a sequência de aminoácidos é selecionada do grupo que consiste em sequências de aminoácidos compreendendo, nos respectivos términos N, SEQ ID Nº: 1, SEQ ID Nº: 2 (RWCFRVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 3 (GWCFRVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 4 (KFCFRVCYRGICYRRCRD); SEQ ID Nº: 5 (KWCFYVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 6 (KWCFRVCRRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 7 (KWCFRVCYRGVCYRRCRD), SEQ ID Nº: 8 (KWCFRVCYRGACYRRCRD), SEQ ID Nº: 9 (KWCFRVCYRGFCYRRCRD), SEQ ID Nº: 10 (KWCFRVCYRGICYHRCRD), ou SEQ ID Nº: 11 (KWCFRVCYRGICYRRCND).

[011] Em modalidades adicionais, a sequência de aminoácidos é selecionada do grupo que consiste em SEQ ID Nº: 97 (KRCFRVCYRGICYRRCRD); SEQ ID Nº: 98 (KWCVRVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 99 (KWCFFVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 100 (KWCFWVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 102 (KWCFRACYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 104 (KWCFRVCYFGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 105 (KWCFRVCYRGICYRRCRN), SEQ ID Nº: 106 (KWCWRVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 107 (KWCFRVCWRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 108 (KWCFRVCYGGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 109 (KWCFRVCYRRICYRRCRD), SEQ ID Nº: 110 (KWCFRVCYRGYCYRRCRD), SEQ ID Nº: 112 (KWCFRVCYRGICYRRCKD), SEQ ID Nº: 113 (KWCFRVCYRGICYRRCAD), SEQ ID Nº: 114 (KWCFRVCYRGICYRRCRR), SEQ ID Nº: 115 (GWCFRVCYRGICYRRCND), SEQ ID Nº: 116 (KWCFYVCYRGICYRRCND), SEQ ID Nº: 117 (GWCFYVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 118 (GWCFYVCYRGICYRRCND).

[012] Em modalidades ainda adicionais, a sequência de aminoácidos é selecionada do grupo que consiste em SEQ ID Nº: 28, 29, 30 e 31.

[013] No segundo aspecto, a invenção proporciona um multímero compreendendo uma pluralidade de repetições da sequência de aminoácidos de acordo com o aspecto anterior da invenção, em que adicionalmente, o aminoácido N-terminal da sequência é prolina e o aminoácido C-terminal da sequência é ácido aspártico. Vantajosamente, as repetições da sequência de aminoácidos são unidas diretamente uma com a outra, formando assim ligações D-P. Em certas modalidades, a pluralidade está entre 2 e 20.

[014] A invenção também proporciona um método de produção da sequência de aminoácidos que é adequada para produzir o multímero, conforme descrito no segundo aspecto da invenção. O método compreende sintetizar o multímero e contatar o multímero com um ácido suave (por exemplo, ácido fórmico), por meio do qual ligações D-P são quebradas.

[015] Em um terceiro aspecto, a invenção proporciona um método de tratamento de infecções em um animal com necessidade do mesmo, método este que compreende administrar ao animal uma formulação que compreende a sequência de aminoácidos de acordo com o primeiro aspecto da invenção. Em certas modalidades, a infecção é uma infecção da pele. Em outras modalidades, a infecção é mastite, infecção respiratória, infecção do ouvido, infecção do trato urinário ou infecção do trato reprodutivo.

[016] Em certas modalidades, o animal é um animal de companhia, por exemplo, um cão, gato ou cavalo. Em uma modalidade particular, o animal é um cão. Em certas modalidades, a formulação é formulada para uma aplicação tópica. Em algumas modalidades, a formulação é um gel, creme, uma emulsão ou um spray.

DESCRIÇÃO CONCISA DAS FIGURAS

[017] A Figura 1 ilustra toxicidade de SEQ ID Nºs. 1 e 13 em células vermelhas do sangue humano, cães beagles e ratos.

DESCRIÇÃO DETALHADA Definições

[018] Para um melhor entendimento da invenção, são proporcionadas as seguintes definições não limitativas:

[019] "Cerca de" ou "aproximadamente", quando utilizados juntamente com uma variável numérica mensurável, refere-se ao valor indicado da variável e a todos os valores da variável que se enquadram no erro experimental do valor indicado (por exemplo, dentro do intervalo de confiança de 95% em relação à média) ou dentro de 10% do valor indicado, seja qual for maior, a menos que "cerca de" seja utilizado em referência com intervalos de tempo em semanas em que "cerca de 3 semanas" é de 17 a 25 dias e cerca de 2 a cerca de 4 semanas é de 10 a 40 dias.

[020] "Emulsão" entende-se uma composição de dois líquidos imiscíveis em que gotículas pequenas de um líquido são suspensas em uma fase contínua do outro líquido.

[021] "Administração parenteral" refere-se à introdução de uma substância, tal como uma vacina, no corpo do indivíduo através ou por meio de uma via que não inclui o trato digestivo. Administração parenteral inclui administração subcutânea, intramuscular, transcutânea, intradérmica, intraperitoneal, intraocular e intravenosa.

[022] "Posição [em uma sequência de interesse] correspondente à" uma certa posição de uma sequência de referência é determinada por alinhamento da sequência de referência e da sequência de interesse, de modo que os resíduos de cisteína da sequência de interesse e da sequência de referência sejam emparelhados uns com os outros, e em seguida, determinando a posição na sequência de interesse que corresponde à posição desejada na sequência de referência.

[023] "Farmaceuticamente aceitável" refere-se às substâncias que se enquadram no escopo de um julgamento médico sólido, adequado para uso em contato com os tecidos de indivíduos sem toxicidade indevida, irritação, resposta alérgica e similares, proporcionais a uma razão razoável benefício/risco, e eficaz para seu uso pretendido.

[024] "Quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se a uma quantidade da sequência de aminoácidos e/ou a formulação contendo a mesma que induziria uma resposta em um indivíduo que recebe o aminoácido ou formulação que é adequada para prevenir ou reduzir sinais ou sintomas de infecção.

[025] "Tratamento" refere-se à prevenção de um distúrbio, condição ou doença, incluindo, sem limitações, infecções, às quais tal termo se aplica, ou à prevenção ou redução de um ou mais sintomas de tal distúrbio, condição ou doença.

[026] "Tratamento" refere-se ao ato de "tratamento" conforme definido acima.

Peptídeos

[027] Geralmente, a invenção proporciona uma sequência de aminoácidos de 17-22 aminoácidos de comprimento e compreendendo, em seu N-terminal, SEQ ID Nº: 12 ((X0X1X2C X3X4X5CX6X7X8X9CYX10X11CX12X13) em que: X0 está ausente ou prolina; X1 é lisina, arginina, glicina ou prolina; X2 é fenilalanina, triptofano ou arginina; X3 é fenilalanina, valina ou triptofano; X4 é arginina, tirosina ou fenilalanina; X5 é valina ou alanina; X6 é tirosina ou arginina; X7 é arginina, fenilalanina ou glicina; X8 é arginina, fenilalanina ou glicina; X9 é isoleucina, alanina, fenilalanina, tirosina ou valina; X10 é arginina ou histidina; X11 é arginina ou lisina; X12 é arginina, lisina ou asparagina; X13 é um polipeptídio de 0 a 4 aminoácidos de comprimento; com a condição de que, se X0 é prolina, X1 não é prolina; se a sequência de aminoácidos compreende SEQ ID Nº: 13 (KWCFRVCYRGICYRRCR) ou SEQ ID Nº: 28 (KWCFRVCYRGICYRKCR), então X13 é 1-4 aminoácidos de comprimento; se X13 é 1 aminoácido de comprimento ou maior, então o aminoácido N-terminal em X13 é ácido aspártico ou ácido glutâmico; se o aminoácido na posição correspondente à posição 1 de SEQ ID Nº: 1 for glicina, então a glicina não é modificada por ácido acílico ou palmítico; se o aminoácido é X11 lisina, então X6X7X8X9 (SEQ ID Nº: 14) não é RRRF (SEQ ID Nº: 15); e se o aminoácido é GFCWYVCYRGICYRRCN (SEQ ID Nº: 16), então a asparagina C- terminal é amidada.

[028] Em certas modalidades, X0 está ausente e X6 é arginina ou lisina; e/ou X7 é arginina ou lisina; X6X7X8X9 (SEQ ID Nº: 14) é selecionada do grupo que consiste em YRGI (SEQ ID Nº: 17), YRGV (SEQ ID Nº: 18), YRGF (SEQ ID Nº: 19); e/ou X10 é arginina; e/ou X3X4X5 (SEQ ID Nº: 20) é FRV (SEQ ID Nº: 21), WYV (SEQ ID Nº: 22); e/ou X13 é 1 aminoácido de comprimento ou maior (por exemplo, 1, 2, 3 ou 4 aminoácidos de comprimento), e o aminoácido N-terminal em X13 é ácido aspártico.

[029] Em um conjunto particular de modalidades de acordo com o primeiro aspecto, a sequência de aminoácidos é de 18-21 aminoácidos de comprimento e compreende, em seu N-terminal, SEQ ID Nº: 1 (KWCFRVCYRGICYRRCRD) ou um peptídeo que difere de SEQ ID Nº: 1 por um, dois, três ou quatro aminoácidos, em que os aminoácidos que diferem dos aminoácidos de SEQ ID Nº: 1 são selecionados independentemente do grupo que consiste em arginina ou glicina na posição correspondente à posição 1 de SEQ ID Nº: 1; fenilalanina ou arginina na posição correspondente à posição 2 de SEQ ID Nº: 1; valina ou triptofano na posição correspondente à posição 4 de SEQ ID Nº: 1; tirosina na posição correspondente à posição 5 de SEQ ID Nº: 1; arginina na posição correspondente à posição 8 de SEQ ID Nº: 1; glicina na posição correspondente à posição 9 de SEQ ID Nº: 1; arginina na posição correspondente à posição 10 de SEQ ID Nº: 1; alanina, fenilalanina ou valina na posição correspondente à posição 11 de SEQ ID Nº: 1; histidina na posição correspondente à posição 14 de SEQ ID Nº: 1; lisina na posição correspondente à posição 15 de SEQ ID Nº: 1; asparagina na posição correspondente à posição 17 de SEQ ID Nº: 1.

[030] Em diferentes modalidades, a sequência de aminoácidos difere de SEQ ID Nº: 1 por um, dois, ou três aminoácidos.

[031] Em certas modalidades, a sequência de aminoácidos compreende ácido aspártico na posição correspondente à posição 18 de SEQ ID Nº: 1; e/ou asparagina na posição correspondente à posição 17 de SEQ ID Nº: 1; e/ou glicina na posição correspondente à posição 1 de SEQ ID Nº: 1; alanina na posição correspondente à posição 11 de SEQ ID Nº: 1; e/ou arginina na posição correspondente à posição 14 de SEQ ID Nº: 1, na posição correspondente à posição 15 de SEQ ID Nº: 1 ou ambas.

[032] Em um conjunto de modalidades, a sequência de aminoácidos é selecionada do grupo que consiste em sequências de aminoácidos compreendendo, nos respectivos N-terminais, SEQ ID Nº: 1, SEQ ID Nº: 2 (RWCFRVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 3 (GWCFRVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 4 (KFCFRVCYRGICYRRCRD); SEQ ID Nº: 5 (KWCFYVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 6 (KWCFRVCRRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 7 (KWCFRVCYRGVCYRRCRD), SEQ ID Nº: 8 (KWCFRVCYRGACYRRCRD), SEQ ID Nº: 9 (KWCFRVCYRGFCYRRCRD) SEQ ID Nº: 10 (KWCFRVCYRGICYHRCRD), ou SEQ ID Nº: 11 (KWCFRVCYRGICYRRCND).

[033] Sequências de aminoácidos adicionais podem ser encontradas dentre SEQ ID Nº: 97 (KRCFRVCYRGICYRRCRD); SEQ ID Nº: 98 (KWCVRVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 99 (KWCFFVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 100 (KWCFWVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 101 (KWCFRVYCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 102 (KWCFRACYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 103 (KWCFRVCKRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 104 (KWCFRVCYFGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 105 (KWCFRVCYRGICYRRCRN), SEQ ID Nº: 106 (KWCWRVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 107

(KWCFRVCWRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 108 (KWCFRVCYGGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 109 (KWCFRVCYRRICYRRCRD), SEQ ID Nº: 110 (KWCFRVCYRGYCYRRCRD), SEQ ID Nº: 111 (KWCFRVCYRGICRYRRCRD), SEQ ID Nº: 112 (KWCFRVCYRGICYRRCKD), SEQ ID Nº: 113 (KWCFRVCYRGICYRRCAD), SEQ ID Nº: 114 (KWCFRVCYRGICYRRCRR), SEQ ID Nº: 115 (GWCFRVCYRGICYRRCND), SEQ ID Nº: 116 (KWCFYVCYRGICYRRCND), SEQ ID Nº: 117 (GWCFYVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 118 (GWCFYVCYRGICYRRCND).

[034] Desse modo, a sequência de aminoácidos pode ser selecionada do grupo que consiste em SEQ ID Nº: 97 (KRCFRVCYRGICYRRCRD); SEQ ID Nº: 98 (KWCVRVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 99 (KWCFFVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 100 (KWCFWVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 102 (KWCFRACYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 104 (KWCFRVCYFGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 105 (KWCFRVCYRGICYRRCRN), SEQ ID Nº: 106 (KWCWRVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 107 (KWCFRVCWRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 108 (KWCFRVCYGGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 109 (KWCFRVCYRRICYRRCRD), SEQ ID Nº: 110 (KWCFRVCYRGYCYRRCRD), SEQ ID Nº: 112 (KWCFRVCYRGICYRRCKD), SEQ ID Nº: 113 (KWCFRVCYRGICYRRCAD), SEQ ID Nº: 114 (KWCFRVCYRGICYRRCRR), SEQ ID Nº: 115 (GWCFRVCYRGICYRRCND), SEQ ID Nº: 116

(KWCFYVCYRGICYRRCND), SEQ ID Nº: 117 (GWCFYVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 118 (GWCFYVCYRGICYRRCND).

[035] Os peptídeos de acordo com a invenção podem ser produzidos por métodos que são bem conhecidos no estado da técnica, incluindo, sem limitações, síntese de peptídeos em fase sólida. Os peptídeos podem também ser sintetizados usando técnicas de bioengenharia (por exemplo, fermentação) em sistemas fúngicos, bacterianos ou eucarióticos.

[036] Em certas modalidades, em que o aminoácido N-terminal do peptídeo antimicrobiano é prolina e o aminoácido C-terminal é ácido aspártico, o método de produção do peptídeo antimicrobiano pode envolver sintetização de um multímero do peptídeo antimicrobiano. Em diferentes modalidades, o número de monômeros no multímero pode ser de 1 a cerca de 20, por exemplo, cerca de 5, cerca de 10 ou cerca de 15. Convenientemente, os monômeros do peptídeo antimicrobiano seriam ligados por meio de uma ligação peptídica entre o ácido aspártico de término C de um monômero a montante e a prolina N- terminal do monômero a jusante (ligação D-P). Essa ligação D-P pode ser convenientemente clivada via hidrólise com ácido suave (por exemplo, ácido fórmico ou cítrico). Desse modo, uma molécula abrangida por tal descrição como, por exemplo, (SEQ ID Nº: 29)n ou (SEQ ID Nº: 31)n, em que n é um número inteiro entre 1 e 20, pode ser usada nas composições e métodos da invenção. Formulações

[037] Os peptídeos de acordo com as modalidades acima podem ser formulados para transferência ao sítio-alvo (isto é, o sítio que está infectado ou o sítio que está em risco de ser infectado devido a uma ferida, irritação e similares). Sem limitação, os sítios incluem pele, olhos, ouvidos, glândula mamária, trato reprodutivo, bexiga urinária, cavidades nasais e orais. A composição compreendendo os peptídeos da presente invenção é formulada dependendo do sítio de interesse.

[038] Também são proporcionadas composições que podem ser preparadas misturando um ou mais peptídeos antimicrobianos descritos neste relatório, com veículos, excipientes, ligantes, diluentes farmaceuticamente aceitáveis ou similares, para tratar ou melhorar uma variedade de infecções bacterianas. Uma dose ou quantidade terapeuticamente eficaz refere-se àquela quantidade de um ou mais compostos descritos neste relatório suficiente para resultar na melhoria dos sintomas da infecção. As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser produzidas por meio de métodos bem conhecidos no estado da técnica, tais como processos convencionais de granulação, mistura, dissolução, encapsulação, liofilização ou emulsificação, entre outros. As composições podem ser na forma de, por exemplo, grânulos, pós, comprimidos, xarope para cápsulas, supositórios, injeções, emulsões, elixires, suspensões ou soluções. As presentes composições podem ser formuladas por várias vias de administração, por exemplo, por meio de administração oral, por administração tópica, administração transmucosa, administração retal ou administração subcutânea, bem como injeção por via intratecal, intravenosa, intramamária, intramuscular, intraperitoneal, intranasal, intraocular ou injeção intraventricular. O composto ou compostos da presente invenção podem também ser administrados de maneira local, tal como injeção como uma formulação de liberação sustentada. As seguintes formas de dosagem são dadas a título de exemplo e não devem ser interpretadas como limitativas da presente invenção.

[039] Para administração oral, bucal e sublingual, pós, suspensões, grânulos, comprimidos, pílulas, cápsulas, cápsulas em gel e cápsulas pequenas (caplets) são aceitáveis como formas de dosagem sólidas. Essas podem ser preparadas, por exemplo, misturando um ou mais compostos da presente invenção, ou sais ou tautômeros farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, com pelo menos um aditivo ou excipiente, tal como amido ou outro aditivo. Aditivos ou excipientes adequados são sacarose, lactose, açúcar de celulose, manitol, maltitol, dextrano, sorbitol, amido, ágar, alginatos, quitinas, quitosanos, pectinas, goma tragacanta, goma arábica, gelatinas, colágenos, caseínas, albuminas, polímeros sintéticos ou semissintéticos ou glicerídeos, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose e/ou polivinilpirrolidona. Opcionalmente, as formas de dosagem oral podem conter outros ingredientes para ajudar na administração, tal como um diluente inativo, ou lubrificantes tais como estearato de magnésio, ou conservantes tal como parabeno ou ácido sórbico ou antioxidantes tais como ácido ascórbico, tocoferol ou cisteína, um agente desintegrante, aglutinantes, espessantes, tampões, edulcorantes, agentes aromatizantes ou agentes perfumantes. Adicionalmente, corantes ou pigmentos podem ser adicionados para identificação. Comprimidos e pílulas podem ser tratados adicionalmente com materiais de revestimento adequados conhecidos no estado da técnica.

[040] Formas de dosagem líquidas para administração oral podem ser na forma de emulsões, xaropes, elixires, suspensões, pastas e soluções farmaceuticamente aceitáveis, as quais podem conter um diluente inativo, tal como água. Formulações farmacêuticas podem ser preparadas como suspensões líquidas ou soluções usando um líquido estéril, tais como, mas não se limitam as mesmas, óleo, água, álcool e combinações destes. Tensoativos, agentes de suspensão, agentes emulsificantes farmaceuticamente adequados, podem ser adicionados para administração oral ou parenteral.

[041] Conforme observado acima, suspensões podem incluir óleos. Tais óleos incluem óleo de amendoim, óleo de gergelim, óleo de semente de algodão, óleo de milho, óleo de oliva e misturas de óleos. A preparação de suspensão pode também conter ésteres de ácidos graxos, tais como oleato de etila, miristato de isopropila, glicerídeos de ácidos graxos e glicerídeos de ácidos graxos acetilados. As formulações de suspensão podem incluir álcoois, tais como, mas não se limitam aos mesmos, etanol, álcool isopropílico, álcool hexadecílico, glicerol e propilenoglicol. Éteres, tais como, mas sem se limitar aos mesmos, poli(etilenoglicol), hidrocarbonetos de petróleo, tais como óleo mineral e petrolato; e água pode também ser utilizados em formulações de suspensão.

[042] Para certas vias de administração, as formulações farmacêuticas podem ser um spray ou aerossol contendo solventes apropriados e, opcionalmente, outros compostos tais como, mas não se limitam aos mesmos, estabilizadores, agentes antimicrobianos, antioxidantes, modificadores de pH, tensoativos, modificadores de biodisponibilidade e combinações destes. Um propulsor para uma formulação em aerossol pode incluir ar comprimido, nitrogênio, dióxido de carbono ou um solvente de baixo ponto de ebulição à base de hidrocarboneto. O composto ou compostos da presente invenção são convenientemente transferidos na forma de uma apresentação em spray de aerossol a partir de um nebulizador ou similar.

[043] Formas de dosagem injetáveis geralmente incluem suspensões aquosas ou suspensões em óleo que podem ser preparadas usando um agente dispersante ou umectante adequado e um agente de suspensão. As formas injetáveis podem ser na fase de solução ou na forma de uma suspensão, a qual é preparada com um solvente ou diluente. Solventes ou veículos aceitáveis incluem água esterilizada, solução do Ringer ou uma solução salina aquosa isotônica. Alternativamente, óleos estéreis podem ser empregados como solventes ou agentes de suspensão. Geralmente, o óleo ou ácido graxo não são voláteis, incluindo, óleos naturais ou sintéticos, ácidos graxos, mono, di ou triglicerídeos.

[044] Para injeção, a formulação farmacêutica pode ser um pó adequado para reconstituição com uma solução apropriada, como descrita acima. Exemplos desses incluem pós liofilizados, secos por rotação ou secos por pulverização, pós amorfos, grânulos, precipitados ou particulados. Para injeção, as formulações podem opcionalmente conter estabilizadores, modificadores de pH, tensoativos, modificadores de biodisponibilidade e combinações desses. Os compostos podem ser formulados para administração parentérica por meio de injeção, tal como por injeção em bolus ou infusão contínua. Uma forma de dosagem unitária para injeção pode ser em ampolas ou em recipientes de doses múltiplas.

[045] Para administração retal, as formulações farmacêuticas podem ser na forma de supositório, pomada, enema, comprimido ou um creme para liberação do composto no intestino, flexão sigmoide e/ou reto. Supositórios retais são preparados misturando um ou mais compostos da presente invenção, ou sais ou tautômeros farmaceuticamente aceitáveis do composto, com veículos aceitáveis, por exemplo, manteiga de cacau ou polietileno glicol, que está presente em uma fase sólida sob temperaturas normais de armazenamento, e presente em uma fase líquida sob essas temperaturas adequadas para liberar um fármaco no corpo, tal como no reto. Também podem ser empregados óleos na preparação de formulações do tipo gelatina mole e supositórios. Água, solução salina, dextrose aquosa e soluções de açúcar relacionadas e gliceróis podem ser empregados na preparação de formulações de suspensão que podem também conter agentes de suspensão, tais como pectinas, carbômeros, metilcelulose, hidroxipropilcelulose ou carboximetilcelulose, bem como tampões e conservantes.

[046] Além dessas formas de dosagem representativas descritas acima, excipientes e veículos farmaceuticamente aceitáveis são geralmente conhecidos daqueles versados no estado da técnica e são, portanto, incluídos na presente invenção. Tais excipientes e veículos são descritos, por exemplo, em "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Pub. Co., Nova Jérsei (1991).

[047] As formulações da invenção podem ser elaboradas para serem de ação curta, liberação rápida, ação longa e liberação sustentada. Desse modo, as formulações farmacêuticas podem também ser formuladas para liberação controlada ou liberação lenta.

[048] As presentes composições podem também compreender, por exemplo, micelas ou lipossomas, ou alguma outra forma encapsulada, ou podem ser administradas em uma forma de liberação prolongada para proporcionar um armazenamento prolongado e/ou efeito de transferência. Portanto, as formulações farmacêuticas podem ser comprimidas em peletes ou cilindros e implantadas intramuscular ou subcutaneamente como injeções de depósito ou como implantes, tais como stents. Tais implantes podem empregar materiais conhecidos, tais como silicones e polímeros biodegradáveis.

[049] A composição pode também conter medicamentos antipruriginosos, incluindo, sem limitações, oclatinib e sais dos mesmos (por exemplo, APOQUEL® e anticorpos anti-IL-31 (por exemplo, CYTOPOINTTM).

[050] A composição pode também compreender um esteroide ou um medicamento antifúngico. Esteroides adequados incluem, sem limitações, betametasona, acetonida de triancinolona, aceponato de hidrocortisona, hidrocortisona, triancinolona, acetato de metilprednisolona e similares. Medicamentos antifúngicos adequados incluem, sem limitações, clotrimazol, econazol, itraconazol, cetoconazol, miconazol.

[051] As composições podem conter, por exemplo, de cerca de 0,1% em peso, a cerca de 90% ou mais em peso, do peptídeo antimicrobiano, dependendo do método de administração. Em que as composições compreendem unidades de dosagem, cada unidade pode conter, por exemplo, de cerca de 0,5 mg a cerca de 10 mg por dose do peptídeo antimicrobiano. Por exemplo, uma dose da composição pode conter cerca de 1 mg, 1,5 mg, 2 mg, 2,5 mg, 3 mg, 3,5 mg, 4 mg, 4,5 mg, 5 mg, 5,5 mg, 6 mg, 6,5 mg, 7 mg, 7,5 mg, 8 mg, 8,5 mg, 9 mg, 9,5 mg. A composição pode conter cerca de 1 a cerca de 5 mg do peptídeo antimicrobiano por dose, ou cerca de 1,5 a cerca de 5 mg do peptídeo antimicrobiano por dose, ou cerca de 2,5 mg a cerca de 7,5 mg por dose, ou cerca de 1,5 mg a cerca de 2,5 mg por dose, dependendo da gravidade da ferida e do tamanho do animal. Métodos

[052] Em ainda outro aspecto, a invenção também proporciona métodos de tratamento ou prevenção de uma infecção bacteriana em um indivíduo, métodos estes que compreendem administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um ou mais compostos descritos neste relatório. Indivíduos adequados que podem ser tratados incluem cães, gatos, cavalos, gado, ovelhas, porcos, aves, primatas (por exemplo, macacos rhesus e macacos cinomolgos (também conhecidos como comedores de caranguejo ou de cauda longa), saguis, tamarindos, chimpanzés, macacos), coelhos e roedores (ratos, camundongos, porquinhos-da-índia e similares). Em certa modalidade, o indivíduo é um cão, e o peptídeo antimicrobiano da invenção é transferido por via tópica, intranasal, intraocular ou intra-auricularmente. O peptídeo antimicrobiano pode ser transferido em uma forma de gotas, spray, creme, gel, pomada e similares.

[053] Infecções que podem ser tratadas com os compostos descritos incluem infecções externas do ouvido, infecções do ouvido médio, tais como otite média aguda, infecções dos seios cranianos, infecções oculares, infecções da cavidade oral, tais como infecções dos dentes, gengivas e mucosa, infecções do trato respiratório superior, infecções do trato respiratório inferior, infecções geniturinárias,

infecções gastrintestinais, infecções ginecológicas, septicemia, infecções ósseas e articulares, infecções da pele e da estrutura da pele, queimaduras, profilaxia antibacteriana de cirurgia e profilaxia antibacteriana em indivíduos imunossuprimidos, tais como pacientes que recebem quimioterapia para câncer ou pacientes com transplante de órgão. Essas infecções podem ser tratadas em ambientes hospitalares ou comunitários por várias vias de administração, conforme descritas neste relatório.

[054] Os compostos ou composições descritas neste relatório podem também ser utilizados profilaticamente. Consequentemente, um ou mais dos presentes compostos ou composições podem ser administrados a um indivíduo considerado estar sob risco de desenvolver uma infecção microbiana. Os indivíduos em risco de desenvolver uma infecção microbiana incluem indivíduos que foram expostos a um micro-organismo específico, tais como uma espécie bacteriana patogênica; indivíduos apresentando um sistema imunológico comprometido ou indivíduos que são particularmente vulneráveis às infecções devido às defesas naturais comprometidas (por exemplo, em que a pele é comprometida devido à queimaduras ou cortes).

[055] Os peptídeos antimicrobianos descritos neste relatório podem ser utilizados para o tratamento ou prevenção de distúrbios infecciosos causados por uma variedade de organismos bacterianos, incluindo, infecções por espécies bacterianas patogênicas. Exemplos não limitativos de infecção bacteriana incluem bactérias aeróbias e anaeróbias Gram-positivas e Gram-negativas, tais como Estafilococos, por exemplo, S. aureus; Enterococos, por exemplo, E. faecalis; Estreptococos, por exemplo, S. pyogenes e S. pneumoniae; Espécies de Escherichia, por exemplo, E. coli, incluindo, estirpes de Escherichia coli enterotoxigênicas, enteropatogênicas, enteroinvasivas, entero-

hemorrágicas e enteroagregativas; Estirpes de Propionibacterium, por exemplo, P. acnes; Haemophilus, por exemplo, H. influenza; Moraxella, por exemplo, M. catarrhalis. Outros exemplos incluem Micobactérias, por exemplo, M. tuberculosis, M. aviária-intracelular, M. kansasii, M. bovis, M. africanum, M. genavense, M. leprae, M. xenopi, M. simiae, M. scrofulaceum, M. malmoense, M. celatum, M. abscessus, M. chelonae, M. szulgai, M. gordonae, M. haemophilum, M. fortuni e M. marinum; Corynebacteria, por exemplo, C. diphtheriae; Espécies de Pseudomonas, por exemplo, P. aeruginosa; Espécies de Borrelia, por exemplo, B. burgdorferi; Espécies de Listeria, por exemplo, L. monocytogenes; Espécies de Bacillus, por exemplo, B. cereus; Espécies de Bordetella, por exemplo, B. bronchiseptica; Espécies de Klebsiella, espécies de Clostridium, por exemplo, C. perfringens, C. tetani; Espécies de Clamídia, por exemplo, C. psittaci; Espécies de Rickettsia, por exemplo, R. rickettsii e R. prowazekii; Espécies de Salmonella, por exemplo, S. typhimurium; Espécies de Yersinia, por exemplo, Y. enterocolitica e Y. pseudotuberculosis; Espécies de Klebsiella, por exemplo, K. pneumoniae; e Mycoplasma, por exemplo, M. pneumonia, espécies de Actinobacilo, H. parasuis; e Trueperella pyogenes.

[056] Em certos aspectos, as bactérias são selecionadas de Estafilococos, por exemplo, S. pseudintermedius, S. aureus, S. schleiferi, S. chromogenes, S. simulans, S. xylosus. As bactérias podem também ser selecionadas de Estreptococos, por exemplo, S. uberis, S. agalactiae, S. dysgalactiae, S. suis. Adicionalmente, as bactérias da família Pasteurellaceae são adequadas para o tratamento com as composições descritas neste relatório. Bactérias Pasteurellaceae adequadas incluem M. haemolytica, P. multocida, H. somni, espécies de Escherichia, por exemplo, Escherichia coli e espécies de Klebsiella.

[057] Em certas modalidades, as bactérias são S. pseudintermedius e/ou P. aeruginosa.

[058] As composições descritas neste relatório podem ser administradas em diferentes regimentos de frequência. Por exemplo, regimes adequados incluem 4 vezes ao dia a uma vez por semana, por exemplo, três vezes ao dia, duas vezes ao dia, uma vez ao dia, a cada dois dias, a cada três dias, duas vezes por semana, a cada cinco dias e assim por diante. Similarmente, as invenções descritas neste relatório podem ser administradas em diferentes regimes de duração, por exemplo, em uma única administração, por dois dias, durante três dias, durante quatro dias, por uma semana, durante duas semanas, por um mês, durante seis semanas, e assim por diante. A duração, a frequência e a quantidade do peptídeo antimicrobiano por dose, bem como as espécies e o estado da ferida e/ou estado da infecção, podem ser considerados juntamente na determinação do regime adequado dose- tempo-frequência para administração das composições antimicrobianas reivindicadas neste relatório.

[059] Os exemplos seguintes são apresentados como modalidades ilustrativas, mas não devem ser levados como limitativos do escopo da invenção. Muitas alterações, variações, modificações e outras utilizações e aplicações desta invenção serão evidentes àqueles versados no estado da técnica.

EXEMPLOS Exemplo 1. Atividade antimicrobiana e segurança in vitro

[060] Peptídeos de acordo com SEQ ID Nºs: como listados na Tabela 1 foram preparados por um fabricante comercial (CS Bio, Menlo Park, Califórnia) usando síntese de fase sólida. Avaliou-se atividade antimicrobiana determinando a Concentração Inibitória Mínima (CIM) contra S. aureus e E. coli. Resumidamente, as CIMs do microcaldo foram realizadas usando metodologia CLSI (VET01-S2). Em relação às cepas ATCC de S. aureus e E. coli, utilizou-se TSA com ágar de sangue de cavalo lisado a 5% para cultura da noite para o dia sob ar ambiente a 37°C. Um estoque de 0,5 mM para cada peptídeo foi produzido com água de cultura celular, ácido acético a 0,01% e diluído em série e manchado (10 µL) em uma placa de 96 poços para uma concentração de titulação de dose em ensaio de 50 µM a 0,05 µM. Padrão 0,5 de McFarland de cada estirpe foi diluído 1:250 em Caldo de Mueller-Hinton (CMH). 90 µL de suspensão de cultura foram então adicionados ao fármaco na placa de 96 poços para incubação durante a noite por 18- 20 horas. A CIM foi determinada visualmente no primeiro poço sem crescimento visível na concentração correspondente.

[061] Os resultados desses experimentos são proporcionados na Tabela 1. TABELA 1 S. aureus E.coli SEQ ID Nº: Estrutura ATCC 29213 ATCC 25922 µM µM SEQ ID Nº: 23 KFCVYVCYRGICYRRCK 1,6 0,4 SEQ ID Nº: 24 KWCFRVCYRGVCYRRCR 1,6 0,4 SEQ ID Nº: 1 KWCFRVCYRGICYRRCRD 1,6 0,4 SEQ ID Nº: 13 KWCFRVCYRGICYRRCR 3,1 0,8 SEQ ID Nº: 91 GFCWYVCYRGFCYRRCN 3,1 0,8 SEQ ID Nº: 92 RGGRLCYCRRRFCVCVGR 3,1 3,1 SEQ ID Nº: 93 RRWCFRVCYRGFCYRKCR 3,1 1,6 SEQ ID Nº: 28 KWCFRVCYRGICYRKCR 3,1 1,6 SEQ ID Nº: 94 GFCWYVCRRRFCYRRCN 3,1 0,4 SEQ ID Nº: 25 KWCFRVCRRRFCYRRCR 3,1 0,8 SEQ ID Nº: 26 GFCWYVCYRGICYRRCN-NH2 3,1 0,8 SEQ ID Nº: 27 GFCWYVCYRGFCYRRCN-NH2 3,1 0,8 SEQ ID Nº: 95 GFCWYVCRRRFCYRRCN 6,2 0,4 SEQ ID Nº: 33 PGFCWYVCRRRFCYRRCN 6,2 0,4 SEQ ID Nº: 34 PFCWYVCRRRFCYRRCN 6,2 0,4

S. aureus E.coli SEQ ID Nº: Estrutura ATCC 29213 ATCC 25922 µM µM SEQ ID Nº: 35 GFCWYVCRRRFCHRRCN 6,2 0,4

SEQ ID Nº: 36 GVCVYVCRRRFCYRRCN 6,2 0,4

SEQ ID Nº: 37 GVCVYVCRRRFCYRRCN 6,2 0,4

SEQ ID Nº: 38 GFCWYVCRRRFCYRRCN-NH2 6,2 0,4

SEQ ID Nº: 39 PGFCWYVCRRRFCYRRCND 6,2 0,4

SEQ ID Nº: 40 GFCWYVCRRRHCYRRCN 6,2 0,8

SEQ ID Nº: 41 KFCVYVCRRRFCYRRCK 6,2 0,8

SEQ ID Nº: 42 GHCWYVCRRRFCYRRCN 6,2 0,4

SEQ ID Nº: 43 GFCWYVCRRRFCYRRCS 6,2 0,4

SEQ ID Nº: 44 *GFCWYVCYRGICYRRCN-NH2 6,2 0,4

SEQ ID Nº: 45 *GFCWYVCYRGFCYRRCN-NH2 6,2 0,8

SEQ ID Nº: 16 GFCWYVCYRGICYRRCN 6,25 0,4

SEQ ID Nº: 46 GFCWYVCYRGFCYRRCN 6,25 0,4

SEQ ID Nº: 47 KFCWRVCRRRFCRRRCN 12,5 0,8

SEQ ID Nº: 48 GFCWYVCRRGFCYRRCN 12,5 0,4

SEQ ID Nº: 49 KWCFRVCRNGVCYRRCR 12,5 0,2

SEQ ID Nº: 50 GFCWYTCRRRFCYRRCN 12,5 0,4

SEQ ID Nº: 51 GFCWYVCYRGFCHRRCN 25 6,2

SEQ ID Nº: 52 GFCWYVCRRRFCHRRCN 25 0,8

SEQ ID Nº: 53 **GFCWYVCRRRFCYRRCN 25 50

SEQ ID Nº: 54 KFCWNVCRRRFCHRRCK 25 0,4

SEQ ID Nº: 55 GFCWYVCRRGICYRRCN 25 0,8

SEQ ID Nº: 56 GFCWYVCRRGICYRRCN 25 0,8

SEQ ID Nº: 57 GFCWNVCRRRFCRRRCN 25 0,4

SEQ ID Nº: 58 KFCVNVCYRGICHRRCK 25 0,2

SEQ ID Nº: 59 KFCVNVCRRRFCHRRCK 25 0,8

S. aureus E.coli SEQ ID Nº: Estrutura ATCC 29213 ATCC 25922 µM µM SEQ ID Nº: 60 KFCVNVCRRRFCRRRCK 25 0,4

SEQ ID Nº: 61 GFCWYVCYRGFCYQQCN 25 6,2

SEQ ID Nº: 62 GFCWYVCYRGFCYDDCN 25 50

SEQ ID Nº: 63 GFCWYVCPKGYCYRRCN 50 50

SEQ ID Nº: 64 GFCWYVCKNGFCYRRCN 50 3,1

SEQ ID Nº: 65 RKGCKCKNGFCVCR-NH2 50 6,25

SEQ ID Nº: 66 GFCWNVCRRRFCHRRCN 50 3,1

SEQ ID Nº: 67 GFCWNVCRRRFCHRRCN 50 1,6

SEQ ID Nº: 68 GFCWNVCYRGICHRRCN 50 1,6

SEQ ID Nº: 69 KVCVNVCKQGICRKRCK 50 50

SEQ ID Nº: 70 GCWYVCRNGVCYRRCN 50 25

SEQ ID Nº: 71 GFCWYVCRNGVCYRRCN 50 3,1

SEQ ID Nº: 72 GFCWNVCYRGFCHRRCN 50 3,1

SEQ ID Nº: 73 GFCWYVCYRGFCYHHCN 50 3,1

SEQ ID Nº: 74 NVCVVRCRRGFCNRRCK 50 12,5

SEQ ID Nº: 75 KCVRVCRRRACRRRCK 50 50

SEQ ID Nº: 76 KCVRVCRRGFCNRRCK 50 50

SEQ ID Nº: 77 GFCWYVCKNGYCYRRCN 50 3,1

SEQ ID Nº: 78 GFCWYVCRNGYCYRRCN 50 3,1

SEQ ID Nº: 79 GFCWYVCRNGYCHRRCN 50 6,2

SEQ ID Nº: 80 GFCWYVCYRGICHRRCN 50 1,6

SEQ ID Nº: 81 KCVRVCRRGFCNRRCK 50 50

SEQ ID Nº: 82 GFCRYVCYRGICRRRCN 50 6,2

SEQ ID Nº: 83 KFCVNVCRNGICRRRCK 50 1,6

SEQ ID Nº: 84 GVCVNVCRRRFCHRRCN 50 3,1

SEQ ID Nº: 85 KKVCVNVCKQGICHKRCK 50 50

S. aureus E.coli SEQ ID Nº: Estrutura ATCC 29213 ATCC 25922 µM µM SEQ ID Nº: 86 KKVCVNVCRQGICHRRCK 50 50 SEQ ID Nº: 87 GFCRYVCRRGICRRRCN 50 12,5 SEQ ID Nº: 88 KFCVNVCYRGICRRRCK 50 0,4 SEQ ID Nº: 89 KCRRVCRRGFCYVVCN 50 25 SEQ ID Nº: 90 GHCHHVCRRRHCHRRCN 50 50 * refere-se à acetilação de N ** refere-se à modificação de ácido N-palmítico

[062] Selecionou-se SEQ ID Nº: 1 para pesquisa adicional. Toxicidade de SEQ ID Nº: 1 para células sanguíneas eucarióticas foi comparada com aquela de taquiplesina (SEQ ID Nº: 13). Empregou-se um ensaio padrão de hemólise de células sanguíneas vermelhas bem referenciado contra espécies múltiplas para testar o potencial de lise dos peptídeos. As células sanguíneas vermelhas (RBCs) foram preparadas e isoladas por várias etapas de centrifugação e lavagem para remover a fração plasmática. Uma titulação de dose (50 µM a 0,05 µM) dos peptídeos de teste e melitina do peptídeo de controle foi identificada a partir de estoques de 50 mM em uma placa de 384 poços. As células sanguíneas vermelhas (hemácias) preparadas foram incubadas com peptídeo por uma hora a 37°C. A porcentagem de hemólise foi medida por densidade óptica a 405 nm e utilizando TritonX100 a 1% como efeito cem por cento (ECP) e tampão fosfato isolado como efeito zero por cento (EZP).

[063] Os inventores descobriram surpreendentemente que, a SEQ ID Nº: 1 não apenas melhorou a atividade antimicrobiana, mas também reduziu toxicidade para as células sanguíneas vermelhas. Os resultados dos experimentos usando as células sanguíneas vermelhas de humanos, de cão beagle e ratos são ilustrados na Figura 1. Resumidamente, a SEQ ID Nº: 1 foi 2-4 vezes menos tóxica para as células sanguíneas vermelhas de humanos, de cão beagle ou ratos do que a SEQ ID Nº: 13. Em células sanguíneas vermelhas de camundongo ou de bovino, as diferenças foram insignificantes.

[064] Derivados adicionais de SEQ ID Nº: 1 foram sintetizados por síntese em fase sólida, conforme descrita acima. Avaliou-se a atividade antimicrobiana determinando CIMs contra S. aureus e Escherichia coli, como descrita acima. Os resultados desses experimentos são fornecidos na Tabela 2. TABELA 2 Sequência S. aureus ATCC E. coli 2 ATCC SEQ ID Nº: 29213 µM 5922 µM SEQ ID Nº: 3 GWCFRVCYRGICYRRCRD 6,2 3,1 SEQ ID Nº: 4 KFCFRVCYRGICYRRCRD 3,1 1,6 SEQ ID Nº: 5 KWCFYVCYRGICYRRCRD 6,2 1,6 SEQ ID Nº: 2 RWCFRVCYRGICYRRCRD 12,5 0,8 SEQ ID Nº: 6 KWCFRVCRRGICYRRCRD 12,5 3,1 SEQ ID Nº: 96 KWCFRVCYGRICYRRCRD 3,1 1,6 SEQ ID Nº: 7 KWCFRVCYRGVCYRRCRD 6,2 1,6 SEQ ID Nº: 8 KWCFRVCYRGACYRRCRD 3,1 1,6 SEQ ID Nº: 9 KWCFRVCYRGFCYRRCRD 6,2 3,1 SEQ ID Nº: 10 KWCFRVCYRGICYHRCRD 6,2 1,6 SEQ ID Nº: 11 KWCFRVCYRGICYRRCND 6,2 0,8 SEQ ID Nº: 1 KWCFRVCYRGICYRRCRD 3,1 0,8

[065] Avaliou-se adicionalmente a atividade antimicrobiana dos peptídeos listados na Tabela 2 contra diferentes estirpes de MSSP (Methicillin-Susceptible Staphylococcus pseudintermedius), EPSM (Estafilococo pseudintermedius suscetível à Meticilina) e MRSP (Methicillin-Resistant Staphylococcus pseudintermedius), EPRM (Estafilococo pseudintermedius resistente à Meticilina). Os resultados estão nas Tabelas 3 e 4, respectivamente.

TABELA 3. CIM contra cepas selecionadas de EPSM

ID SEQ 49051 71990 72036 72191 76986 77378 78032 81923 84250 84658 86000 86001 3 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 0,4 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 4 1,6 1,6 0,8 0,8 0,8 0,4 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 5 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 2 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 1,6 3,1 1,6 1,6 6 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 1,6 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 96 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 7 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 3,1 1,6 1,6 1,6 1,6 9 1,6 1,6 0,8 1,6 0,8 0,4 0,8 1,6 1,6 1,6 0,8 0,8 10 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 11 0,8 1,6 0,8 0,8 0,8 0,4 0,8 1,6 0,8 0,8 0,4 0,8 1 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 TABELA 4. CIM contra cepas selecionadas de EPRM

ID SEQ 71994 72035 72192 76923 79882 80729 81926 86002 87655 3 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 88493 1,6 4 1,6 1,6 1,6 0,8 0,8 0,8 0,8 1,6 1,6 1,6 5 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 2 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 6 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 96 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 7 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 1,6 1,6 9 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 10 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 11 1,6 1,6 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 1,6 1 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6

[066] Peptídeos adicionais foram sintetizados conforme descritos acima. Propriedades antimicrobianas desses peptídeos foram determinadas e são resumidas abaixo.

TABELA 5. Efeito de sequências antimicrobianas selecionadas em cepas de EPSM

ID SEQ 71990 72036 72191 76986 77378 78032 81923 84250 84658 86000 86001 97 3,1 3,1 3,1 1,6 1,6 3,1 3,1 3,1 3,1 1,6 1,6 98 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 99 1,6 1,6 3,1 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 3,1 3,1 1,6 100 1,6 1,6 3,1 1,6 3,1 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 102 1,6 1,6 3,1 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 103 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 6,2 3,1 3,1 3,1 104 1,6 3,1 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 3,1 1,6 3,1 1,6 105 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 3,1 1,6 1,6 106 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 107 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 108 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 109 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 110 1,6 3,1 3,1 1,6 1,6 1,6 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 112 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 113 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 114 1,6 3,1 3,1 1,6 1,6 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 1,6 115 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 116 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 117 1,6 1,6 1,6 0,8 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 118 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 3,1 1,6 1,6 28 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 29 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 0,8 0,8 0,8 1,6 1,6 1,6 30 0,8 0,8 1,6 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 1,6 1,6 1,6 31 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6

TABELA 6. Efeito de peptídeos antimicrobianos em diferentes bactérias. RM = EPRM, SA = S. aureus, EC = Escherichia coli SP = S. pseudintermedius

ID SEQ MR 71994 MR 72035 MR 72192 MR 76923 MR 79882 MR 80279 MR 81926 MR 86002 MR 87665 MR 88493 SA 29213 EC 25922 SP 49051 97 1,6 3,1 3,1 1,6 1,6 3,1 1,6 3,1 3,1 3,1 6,2 3,1 3,1 98 1,6 3,1 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 1,6 1,6 99 1,6 3,1 3,1 1,6 1,6 1,6 3,1 3,1 1,6 1,6 6,2 1,6 3,1 100 1,6 3,1 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 6,2 0,8 1,6 102 3,1 3,1 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 6,2 1,6 1,6 103 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 25 6,2 3,1 104 3,1 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 3,1 6,2 3,1 1,6 105 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 6,2 3,1 1,6 106 1,6 3,1 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 3,1 3,1 1,6 107 1,6 3,1 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 3,1 1,6 108 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 12,5 0,8 3,1 109 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 1,6 1,6 110 3,1 3,1 3,1 3,1 1,6 1,6 3,1 3,1 3,1 3,1 6,2 1,6 3,1 112 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 1,6 1,6 113 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 6,2 1,6 1,6 114 3,1 3,1 3,1 3,1 1,6 1,6 3,1 3,1 3,1 3,1 6,2 1,6 3,1 115 1,6 1,6 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 0,8 1,6 116 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 1,6 1,6 6,2 0,8 1,6 117 1,6 1,6 0,8 1,6 0,8 1,6 1,6 0,8 1,6 1,6 6,2 0,8 1,6 118 3,1 3,1 1,6 3,1 1,6 1,6 3,1 1,6 1,6 1,6 12,5 1,6 3,1 28 1,6 3,1 3,1 1,6 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 6,2 0,8 1,6 29 1,6 1,6 0,8 1,6 0,8 0,8 0,8 1,6 1,6 1,6 3,1 1,6 1,6 30 1,6 0,8 0,8 0,8 0,8 0,8 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 1,6 1,6 31 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 1,6 3,1 1,6 1,6

[067] Determinou-se a segurança dos peptídeos listados na Tabela 2 por meio de medição da viabilidade celular. Células de queratinócitos epiteliais derivadas de caninos (CPEK) foram propagadas para determinar a viabilidade celular na presença de peptídeos.

As células foram cultivadas a partir de um estoque congelado em meios pré-aquecidos CnT-09-5 (com suplementos) em um balão T75 e incubadas da noite para o dia a 37°C, CO2 a 5%. As células foram lavadas com tampão fosfato e reabastecidas com meios pré-aquecidos CnT-05-9 e repetidas por vários dias até que as células atingissem uma densidade de células 6,6 x 104/mL.

As células foram então transferidas para uma placa de 384 poços, deixadas sedimentar-se e dosadas com peptídeos e peptídeo de controle da melitina (50 µM a 0,05 µM) e incubadas durante a noite a 37°C, CO2 a 5%. TritonX100 a 0,1% como (ECP) e tampão fosfato isolado como (EZP) foram adicionados às placas para calcular o efeito percentual após o término do ensaio com 10 µL de reagentes de ensaio CELLTITER-GLO® para uma leitura luminescente.

Os resultados são fornecidos na Tabela 7. TABELA 7

SEQ ID Nº: CPEK (50 µM) cRBC (50 µM)

3 42,1 67,1

4 16,6 67,1

5 28,6 3,1

2 -1,7 64,0 6 4,1 1,1 96 51,9 101,4

7 11,3 84,1

8 24,6 30,2

9 52,3 101,3 10 31,5 101,1

11 22,0 57,8 1 21,5 20,5

[068] Determinou-se a segurança dos peptídeos listados na Tabela 6 por meio de medição da viabilidade celular conforme descrita acima.

Os resultados são fornecidos na Tabela 8. TABELA 8 SEQ ID Nº: cRBC CPEK (50 µM) (50 µM) 97 31,2 12,9 98 35,0 9,3 99 100,0 19,9 100 100,0 29,5 102 23,9 -2,1 103 7,9 -0,5 104 100,6 6,0 105 97,9 8,6 106 101,5 25,2 107 101,8 26,3 108 27,7 9,6 109 99,8 19,2 110 46,3 10,7 112 61,0 14,2 113 86,3 15,7 114 97,9 11,9 115 94,6 5,1 116 87,0 16,0 117 97,8 14,7 118 98,3 9,1 28 94,4 19,4 29 68,2 17,5 30 63,5 17,0 31 43,5 11,0

[069] Esses dados demonstram que os peptídeos antimicrobianos da presente invenção não são apenas eficazes contra as cepas de bactérias testadas, mas também seguros, particularmente, para administração não sistêmica, por exemplo, tópica.

[070] Todas as publicações citadas na especificação, tanto publicações de patentes quanto publicações de não patente, são indicativas do nível de habilidade daqueles versados no estado da técnica a que esta invenção se refere. Todas essas publicações são neste relatório totalmente incorporadas por referência na mesma extensão como se cada publicação individual fosse específica e individualmente indicada como sendo incorporada como referência.

[071] Embora a invenção neste relatório tenha sido descrita com referência às modalidades particulares, deve-se entender que essas modalidades são meramente ilustrativas dos princípios e aplicações da presente invenção. Portanto, deve-se entender que numerosas modificações podem ser feitas para as modalidades ilustrativas e que outros arranjos podem ser elaborados sem desviar-se do espírito e escopo da presente invenção, conforme definidos pelas reivindicações seguintes.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Sequência de aminoácidos de 17-22 aminoácidos de comprimento, caracterizada pelo fato de que compreende, em seu N- terminal, SEQ ID Nº: 12 (X0X1X2CX3X4X5CX6X7X8X9CYX10X11CX12X13), em que: X0 está ausente ou prolina X1 é lisina, arginina, glicina ou prolina; X2 é fenilalanina, triptofano ou arginina; X3 é fenilalanina, valina ou triptofano; X4 é arginina, tirosina ou fenilalanina; X5 é valina ou alanina; X6 é tirosina, arginina, lisina ou triptofano; X7 é arginina, fenilalanina ou glicina; X8 é arginina ou glicina; X9 é isoleucina, alanina, fenilalanina, tirosina ou valina; X10 é arginina ou histidina; X11 é arginina ou lisina X12 é arginina, lisina, alanina ou asparagina; X13 é um polipeptídio de 0-4 aminoácidos de comprimento; com a condição de que: se X0 é prolina, então X1 não é prolina; se a sequência de aminoácidos compreende SEQ ID Nº: 13 (KWCFRVCYRGICYRRCR), ou SEQ ID Nº: 28 (KWCFRVCYRGICYRKCR) então X13 é 1-4 aminoácidos de comprimento; se X13 é 1 aminoácido de comprimento ou mais longo, então o aminoácido N-terminal em X13 é asparagina, arginina, ácido aspártico ou ácido glutâmico; se o aminoácido na posição correspondente à posição 1 de SEQ ID Nº: 1 é glicina, então a glicina não é modificada por ácido acílico ou palmítico;

se o aminoácido é X11 lisina então X6X7X8X9 (SEQ ID Nº: 14) não é RRRF (SEQ ID Nº: 15); e se o aminoácido é GFCWYVCYRGICYRRCN (SEQ ID Nº: 16) então a asparagina C-terminal é amidada.

2. Sequência de aminoácidos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que X0 é prolina.

3. Sequência de aminoácidos, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que X6 é arginina ou tirosina.

4. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que X7 é arginina ou glicina.

5. Sequência de aminoácidos, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada pelo fato de que X7 é arginina.

6. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 -a 5, caracterizada pelo fato de que X9 é isoleucina, alanina, fenilalanina ou valina.

7. Sequência de aminoácidos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que X9 é isoleucina.

8. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizada pelo fato de que X1 é lisina.

9. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que X12 é arginina, lisina ou asparagina.

10. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizada pelo fato de que X13 é 1 aminoácido de comprimento ou mais longo, e o aminoácido N-terminal é ácido aspártico ou ácido glutâmico.

11. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada pelo fato de que X6X7X8X9 (SEQ ID Nº: 14) é selecionada do grupo que consiste em YRGI (SEQ ID

Nº: 17), YRGV (SEQ ID Nº: 18), YRGF (SEQ ID Nº: 19).

12. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizada pelo fato de que X10 é arginina.

13. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizada pelo fato de que X11 é arginina.

14. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizada pelo fato de que X3X4X5 (SEQ ID Nº: 20) é FRV (SEQ ID Nº: 21), WYV (SEQ ID Nº: 22).

15. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizada pelo fato de que X1 é prolina.

16. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizada pelo fato de que o aminoácido do C-terminal da sequência é ácido aspártico.

17. Multímero, caracterizado pelo fato de que compreende uma pluralidade de repetições da sequência de aminoácidos, como definida na reivindicação 16.

18. Multímero, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que as repetições são unidas umas com as outras, diretamente.

19. Multímero, de acordo com a reivindicação 17 ou 18, caracterizado pelo fato de que a pluralidade está entre 2 e 20.

20. Método de produção da sequência de aminoácidos, como definida na reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que compreende: a) sintetizar um multímero, como definido em qualquer uma das reivindicações 17 a 19; e b) contatar o multímero com um ácido suave, desse modo, quebrando ligações D-P.

21. Sequência de aminoácidos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que é selecionada do grupo que consiste em: KFCVYVCYRGICYRRCK (SEQ ID Nº: 23), KWCFRVCYRGVCYRRCR (SEQ ID Nº: 24), KWCFRVCRRRFCYRRCR (SEQ ID Nº: 25), GFCWYVCYRGICYRRCN-NH2 (SEQ ID Nº: 26), e GFCWYVCYRGFCYRRCN-NH2 (SEQ ID Nº: 27), PKWCFRVCYRGICYRRCR (SEQ ID Nº: 28); PKWCFRVCYRGICYRRCRD (SEQ ID Nº: 29); PWCFRVCYRGICYRRCR (SEQ ID Nº: 30); PWCFRVCYRGICYRRCRD (SEQ ID Nº: 31).

22. Sequência de aminoácidos, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a sequência é de 18-21 aminoácidos de comprimento e compreende, em seu N-terminal, SEQ ID Nº: 1 (KWCFRVCYRGICYRRCRD) ou SEQ ID Nº: 29 (PKWCFRVCYRGICYRRCRD) ou um peptídeo que difere de SEQ ID Nº: 1 ou SEQ ID Nº: 29 por um, dois, três ou quatro aminoácidos, em que os aminoácidos que diferem dos aminoácidos de SEQ ID Nº: 1 ou SEQ ID Nº: 29 são independentemente selecionados do grupo que consiste em: arginina ou glicina na posição correspondente à posição 1 de SEQ ID Nº: 1; fenilalanina ou arginina na posição correspondente à posição 2 de SEQ ID Nº: 1; valina ou triptofano na posição correspondente à posição 4 de SEQ ID Nº: 1; tirosina na posição correspondente à posição 5 de SEQ ID Nº: 1; arginina na posição correspondente à posição 8 de SEQ ID Nº: 1; glicina na posição correspondente à posição 9 de SEQ ID Nº: 1; arginina na posição correspondente à posição 10 de SEQ ID Nº: 1; alanina, fenilalanina ou valina na posição correspondente à posição 11 de SEQ ID Nº: 1;

histidina na posição correspondente à posição 14 de SEQ ID Nº: 1; lisina na posição correspondente à posição 15 de SEQ ID Nº: 1; asparagina na posição correspondente à posição 17 de SEQ ID Nº: 1

23. Sequência de aminoácidos, de acordo com a reivindicação 22, caracterizada pelo fato de que compreende ácido aspártico na posição correspondente à posição 18 de SEQ ID Nº: 1.

24. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 23, caracterizada pelo fato de que compreende asparagina na posição correspondente à posição 17 de SEQ ID Nº: 1.

25. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 24, caracterizada pelo fato de que compreende glicina na posição correspondente à posição 1 de SEQ ID Nº: 1.

26. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 25, caracterizada pelo fato de que compreende alanina na posição correspondente à posição 11 de SEQ ID Nº: 1.

27. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 26, caracterizada pelo fato de que a arginina está presente na posição correspondente à posição 14 de SEQ ID Nº: 1, na posição correspondente à posição 15 de SEQ ID Nº: 1, ou ambas.

28. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 27, caracterizada pelo fato de que compreende arginina na posição correspondente à posição 14 de SEQ ID Nº: 1 e na posição correspondente à posição 15 de SEQ ID Nº: 1.

29. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 28, caracterizada pelo fato de que a sequência é de 18 aminoácidos de comprimento.

30. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 29, caracterizada pelo fato de que o peptídeo difere de SEQ ID Nº: 1 por 3 (três), 2 (dois), ou 1 (um) aminoácido.

31. Sequência de aminoácidos, de acordo com a reivindicação 22, caracterizada pelo fato de que compreende, em seu N-terminal, SEQ ID Nº: 1, SEQ ID Nº: 2 (RWCFRVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 3 (GWCFRVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 4 (KFCFRVCYRGICYRRCRD); SEQ ID Nº: 5 (KWCFYVCYRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 6 (KWCFRVCRRGICYRRCRD), SEQ ID Nº: 7 (KWCFRVCYRGVCYRRCRD), SEQ ID Nº: 8 (KWCFRVCYRGACYRRCRD), SEQ ID Nº: 9 (KWCFRVCYRGFCYRRCRD), SEQ ID Nº: 10 (KWCFRVCYRGICYHRCRD), SEQ ID Nº: 11 (KWCFRVCYRGICYRRCND).

32. Sequência de aminoácidos, de acordo com a reivindicação 31, caracterizada pelo fato de que compreende SEQ ID Nº: 1; SEQ ID Nº: 3 ou SEQ ID Nº: 12.

33. Sequência de aminoácidos, de acordo com a reivindicação 31, caracterizada pelo fato de que compreende SEQ ID Nº: 4 ou SEQ ID Nº: 5, ou SEQ ID Nº: 6 ou SEQ ID Nº: 8.

34. Método de tratamento de infecções da pele em um animal com necessidade deste, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao animal uma formulação compreendendo a sequência de aminoácidos, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, 22 a 23.

35. Método de tratamento de infecções da pele em um animal com necessidade deste, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao animal uma formulação compreendendo a sequência de aminoácidos, como definida em qualquer uma das reivindicações 22 a 23.

36. Método, de acordo com a reivindicação 34 ou 35, caracterizado pelo fato de que a formulação é administrada topicamente.

37. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 33 a 36, caracterizado pelo fato de que o animal é um cão.

38. Método de tratamento de mastite em um animal com necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao animal uma formulação compreendendo a sequência de aminoácidos, como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 16, 22 a 23.

39. Método, de acordo com a reivindicação 38, caracterizado pelo fato de que a formulação é administrada à glândula mamária do animal.

40. Método, de acordo com a reivindicação 38 ou 39, caracterizado pelo fato de que o animal é um bovino, ovino, porcino ou caprino fêmea.

41. Método de tratamento de infecção respiratória em um animal com necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao animal uma formulação compreendendo a sequência de aminoácidos, como definida em qualquer uma das reivindicações 1a 16, 22 a 23.

42. Método, de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que o animal é um animal bovino, ovino, porcino, caprino, equino, felino ou canino.

43. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, 22 a 33, caracterizada pelo fato de que é para tratamento de uma condição médica em um animal.

44. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 22 a 33, caracterizada pelo fato de que é para o tratamento de uma condição médica em um animal.

45. Sequência de aminoácidos, de acordo com a reivindicação 43 ou 44, caracterizada pelo fato de que a condição médica é uma infecção de pele.

46. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 43 a 45, caracterizada pelo fato de que o animal é um cão.

47. Sequência de aminoácidos, de acordo com a reivindicação 43 ou 44, caracterizada pelo fato de que a condição médica é uma infecção respiratória ou mastite.

48. Sequência de aminoácidos, de acordo com qualquer uma das reivindicações 45 a 47, caracterizada pelo fato de que é formulada para uma administração tópica.

49. Sequência de aminoácidos, de acordo com a reivindicação 48, caracterizada pelo fato de que é formulada para um creme, uma pomada, um spray ou uma emulsão.