BR112020007983A2 - pró-fármacos de derivados de triazol substituído e usos dos mesmos - Google Patents

Abstract

  A presente invenção se refere a pró-fármacos de 3-({3-(4-clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2-hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1-il}metil)-1-[3-(trifluorometil)-piridin-2-il]-1H-1,2,4-triazol-5-carboxamida, 3-({3-(4-clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2-hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1-il}metil)-1-[2-(trifluorometil)-fenil]-1H-1,2,4-triazol-5-carboxamida e 3-({3-(4-clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2-hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1-il}metil)-1-(3-cloropiridin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-5-carboxamida, a processos para a preparação de tais compostos, a composições farmacêuticas contendo tais compostos, e ao uso de tais compostos ou composições para o tratamento e/ou a prevenção de doenças, em particular, para o tratamento e/ou a prevenção de doenças renais e cardiovasculares.

Description

“PRÓ-FÁRMACOS DE DERIVADOS DE TRIAZOL SUBSTITUÍDO E USOS DOS MESMOS”

[0001] A presente invenção se refere a pró-fármacos de 3-({3-(4-clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2- hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1-il}metil)-1- [3-(trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4-triazol-5- carboxamida, 3-({3-(4-clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3- trifluoro-2-hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1- il}metil)-1-[2-(trifluorometil)fenil]-1H-1,2,4-triazol-5- carboxamida e 3-({3-(4-clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3- trifluoro-2-hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1- il}metil)-1-(3-cloropiridin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-5- carboxamida, a processos para a preparação de tais compostos, a composições farmacêuticas contendo tais compostos, e ao uso de tais compostos ou composições para o tratamento e/ou a prevenção de doenças, em particular, para o tratamento e/ou a prevenção de doenças renais e cardiovasculares.

[0002] Os pró-fármacos são derivados de um ingrediente ativo que é submetido in vivo a uma biotransformação enzimática e/ou química em um ou mais estágios antes de o ingrediente ativo real ser liberado. Um resíduo de pró- fármaco é comumente usado a fim de aprimorar o perfil de propriedades do ingrediente ativo subjacente [P. Ettmayer et al., J. Med. Chem. 47, 2393 (2004)]. A fim de alcançar um perfil ideal de efeitos, é necessário que, a esse respeito, o projeto do resíduo de pró-fármaco assim como o mecanismo desejado de liberação se conformem muito precisamente com o ingrediente ativo individual, a indicação, o sítio de ação e a via de administração. Um grande número de medicamentos é administrado como pró- fármacos que exibem uma biodisponibilidade pela comparação com o ingrediente ativo subjacente, por exemplo, alcançado pelo aprimoramento do perfil físico-químico, especificamente a solubilidade, as propriedades de absorção ativas ou passivas ou a distribuição específica de tecido. Um exemplo que pode ser mencionado a partir da literatura de amplo escopo sobre os pró-fármacos é: H. Bundgaard (Ed.), Design of Prodrugs: Bioreversible derivatives for various functional groups and chemical entities, Elsevier Science Publishers B.V., 1985.

[0003] 3-({3-(4-clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3- trifluoro-2-hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1- il}metil)-1-[3-(trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4- triazol-5-carboxamida (Exemplo 4A), 3-({3-(4-clorofenil)-5- oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2-hidroxipropil]-4,5-di-hidro- 1H-1,2,4-triazol-1-il}metil)-1-[2-(trifluorometil)fenil]- 1H-1,2,4-triazol-5-carboxamida (Exemplo 6A) e 3-({3-(4- clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2-hidroxipropil]- 4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1-il}metil)-1-(3- cloropiridin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-5-carboxamida (Exemplo 8A) são antagonistas altamente potentes e seletivos do receptor V1a, como revelado nos documentos WO 2017/191102- A1 (Exemplos 1 e 2) e WO 2017/191107-A1 (Exemplo 1).

[0004] A vasopressina é um neuro-hormônio que basicamente regula a homeostase da água e o tônus vascular. É produzido em neurônios endócrinos especializados no Nucleus supraopticus e N. paraventricularis na parede do terceiro ventrículo (hipotálamo) e é transportado a partir daí ao longo dos processos neurais para os lobos posteriores da hipófise (neuro-hipófise). Ali, o hormônio é liberado na corrente sanguínea em resposta a diferentes estímulos fisiológicos e fisiopatológicos. Uma regulação neuro-hormonal perturbada se manifesta essencialmente em uma elevação do tônus simpático e ativação inapropriada do sistema renina-angiotensina-aldosterona (RAAS). Embora a inibição desses componentes por bloqueadores de beta- receptor por um lado por inibidores de ACE ou bloqueadores de receptor de angiotensina por outro lado é agora uma parte inerente do tratamento farmacológico de doenças cardiovasculares, a elevação inapropriada de secreção de vasopressina é, atualmente, não adequadamente tratável.

[0005] A vasopressina exerce sua ação principalmente através da ligação a três receptores, que são classificados como receptores V1a, V1b e V2 e que pertencem à família de receptores acoplados à proteína G.

[0006] Os receptores V2 estão localizados no epitélio tubular distal e no epitélio dos túbulos coletores no rim. Sua ativação torna esses epitélios permeáveis à água. Esse fenômeno é devido à incorporação de aquaporinas (canais especiais de água) na membrana luminal das células epiteliais. Consequentemente, a inibição farmacológica da ação da vasopressina no receptor V2 resulta em aumento da excreção de urina. Assim, os fármacos com atividade antagonista de V2 parecem particularmente adequados para o tratamento de todas as condições de doença que estão associadas a um excesso de carga do corpo com água.

[0007] Os receptores V1b (também denominados receptores V3) são detectáveis principalmente no sistema nervoso central. Juntamente com o hormônio liberador de corticotropina (CRH), a vasopressina regula a secreção basal e induzida por estresse do hormônio adrenocorticotrófico (ACTH) através do receptor V1b.

[0008] Os receptores V1a estão localizados principalmente em células musculares lisas vasculares (VSMC), mas também em cardiomiócitos, fibroblastos e células renais especializadas como células mesangiais glomerulares ou células da mácula densa que controlam a liberação de renina [Wasilewski MA, Myers VD, Recchia FA, Feldman AM, Tilley DG, Cell Signal., 28(3), 224-233, (2016)]. A ativação do receptor VSMC V1a pela vasopressina dá origem à liberação de cálcio intracelular e de acordo com a vasoconstrição. Portanto, a estimulação dos receptores V1a de VSMC causa aumento da resistência vascular e aumento da pós-carga cardíaca. O débito cardíaco é adversamente afetado pela vasoconstrição mediada por V1a. O aumento da carga e estimulação direta dos receptores V1a nos cardiomiócitos pode levar à hipertrofia e remodelação cardíaca, incluindo fibrose. Os camundongos com superexpressão específica cardíaca de receptor V1a desenvolvem hipertrofia cardíaca que leva à dilação e à disfunção ventricular esquerda, sugerindo um papel essencial para receptor V1a no desenvolvimento de insuficiência cardíaca [Li X, Chan TO, Myers V, Chowdhury

I, Zhang XQ, Song J, Zhang J, Andrel J, Funakoshi H, Robbins J, Koch WJ, Hyslop T, Cheung JY, Feldman AM, Circulation.; 124, 572-581 (2011)].

[0009] O receptor V1a também é expresso na vasculatura medular e cortical renal, onde medeia a vasoconstrição de vasos renais e afeta o fluxo sanguíneo renal global. Assim, a ativação do receptor V1a pode diminuir o fluxo de sangue medular renal, induzindo outros processos patológicos como hipóxia tecidual, teor reduzido de oxigénio e consequentemente o fornecimento de energia para os processos de transporte tubular, bem como danos diretos de células mesangiais e mácula densa. Foi demonstrado que a ativação do receptor V1a mesangial medeia a sinalização de TGFβ e causa um aumento na produção de colágeno IV. Embora essa sinalização contribua para o acúmulo e remodelamento da matriz extracelular no rim, acredita-se que ocorram vias de sinalização semelhantes em células cardíacas, especialmente após infarto do miocárdio, o que enfatiza o papel central do receptor V1a no desenvolvimento de processos hipertróficos e fibróticos em resposta a níveis fisiopatológicos elevados de vasopressina [Wasilewski MA, Myers VD, Recchia FA, Feldman AM, Tilley DG. Arginine vasopressin receptor signaling and functional outcomes in heart failure. Cell Signal., 28(3), 224-233 (2016)].

[0010] Como os receptores V1a são principalmente expressos nas VSMCs e, portanto, participam da função vascular, é concebível uma ligação com doenças vasculares como doença arterial periférica (PAD) incluindo claudicação e isquemia crítica do membro, bem como disfunção microvascular coronária (CMD).

[0011] Além disso, os receptores V1a também são expressos em plaquetas humanas e no fígado. O significado dos receptores V1a de plaquetas não está totalmente compreendido, embora a vasopressina induza a agregação de plaquetas humanas através do receptor V1a em altas concentrações ex vivo. Portanto, a inibição da agregação plaquetária induzida pela vasopressina pelos antagonistas do receptor V1a é um ensaio farmacológico ex vivo útil que faz uso do tecido humano que expressa endogenamente o receptor V1a [Thibonnier M, Roberts JM, J Clin Invest.; 76:1857-1864, (1985)].

[0012] A vasopressina estimula a gliconeogênese e a glicogenólise via ativação do receptor V1a hepático. Estudos em animais mostraram que a vasopressina prejudica a tolerância à glicose que pode ser inibida por um antagonista do receptor V1a, proporcionando assim uma ligação do receptor V1a da vasopressina a diabetes mellitus. [Taveau C, Chollet C, Waeckel L, Desposito D, Bichet DG, Arthus MF, Magnan C, Philippe E, Paradis V, Foufelle F, Hainault I, Enhorning S, Velho G, Roussel R, Bankir L, Melander O, Bouby N. Vasopressin and hydration play a major role in the development of glucose intolerance and hepatic steatosis in obese rats. Diabetologia, 58(5), 1081-1090, (2015)]. A vasopressina demonstrou contribuir no desenvolvimento da albuminúria e na nefropatia induzida pela diabetes em modelos animais, o que é consistente com os achados epidemiológicos em seres humanos.

[0013] Constatou-se recentemente que a vasopressina também parece desempenhar um papel causal no desenvolvimento da pré-eclâmpsia. A infusão crônica de vasopressina durante a gravidez em camundongos é suficiente para induzir todos os principais fenótipos maternos e fetais associados à pré-eclâmpsia humana, incluindo a hipertensão específica da gravidez [Santillan MK, Santillan DA, Scroggins SM, Min JY, Sandgren JA, Pearson NA, Leslie KK, Hunter SK, Zamba GK, Gibson-Corley KN, Grobe JL. Vasopressin in preeclampsia: a novel very early human pregnancy biomarker and clinically relevant mouse model. Hypertension. 64(4), 852-859, (2014)].

[0014] Os níveis de vasopressina podem estar elevados em mulheres com dismenorreia (um transtorno ginecológico que é caracterizado por dor pélvica cíclica de cólicas) durante a menstruação, que parecem aumentar a contração do músculo liso miometrial. Constatou-se recentemente que um antagonista seletivo do receptor V1a da vasopressina (relcovaptan/SR-49059) pode reduzir as contrações intrauterinas provocadas pela vasopressina.

[0015] Por essas razões, os agentes que inibem a ação da vasopressina no receptor V1a parece adequado para o tratamento de várias doenças cardiovasculares. Em particular, os agentes que inibem a ação da vasopressina seletivamente no receptor V1a oferecem um perfil especialmente ideal para o tratamento de pacientes de outro modo normovolêmicos, isto é, aqueles que não são elegíveis para o descongestionamento, por exemplo, pelas doses elevadas de diuréticos de alça ou antagonistas de V2, e onde pode ser desejada a aquarese induzida através da inibição de V2.

[0016] Foi descrito que certos derivados de 4-fenil- 1,2,4-triazol-3-ila foram descritos nos documentos WO

2005/063754-A1 e documento WO 2005/105779-A1 atuam como antagonistas do receptor de vasopressina V1a que são úteis para o tratamento de transtornos ginecológicos, notadamente transtornos menstruais, tal como dismenorreia.

[0017] No documento WO 2011/104322-A1, um grupo particular de 1,2,4-triazol-3-onas bis-aril-ligadas, incluindo derivados de 5-fenil-1,2,4-triazol-3-ila e 1- fenil-1,2,3-triazol-4-ila dos mesmos, foi revelado como antagonistas de receptores V2 e/ou V1a de vasopressina que são úteis para o tratamento e/ou prevenção de doenças cardiovasculares. Os compostos descritos, no entanto, não mostram seletividade suficiente para o receptor V1a e mostram principalmente atividade combinada em ambos os receptores V1a e V2 de vasopressina. No entanto, como delineado acima, uma alta afinidade bem como seletividade para o receptor V1a é um pré-requisito desejável para o tratamento de condições de doença em que um descongestionamento não é desejado e pode levar a uma homeostase de fluido corporal desregulada, incluindo diminuição da osmolalidade plasmática no sangue em indivíduos de outra forma normovolêmicos.

[0018] No documento WO 2016/071212-A1, foi revelado que certos derivados de 5-(hidroxialquil)-1-fenil-1,2,4-triazol atuam como antagonistas potentes dos receptores V1a e V2 de vasopressina e, adicionalmente, exibem potência aquarética significativamente aumentada in vivo após a aplicação oral. Os compostos são descritos como sendo úteis para o tratamento e/ou prevenção de doenças cardiovasculares e renais. No entanto, como delineado acima, uma alta afinidade bem como seletividade para o receptor V1a é um pré-requisito desejável para o tratamento de condições de doença em que um descongestionamento não é desejado e pode levar a uma homeostase de fluido corporal desregulada, incluindo diminuição da osmolalidade plasmática no sangue em indivíduos de outra forma normovolêmicos.

[0019] Nos documentos WO 2017/191107-A1 e WO 2017/191102-A1, certos derivados de 5-(carboxamida)-1- fenil-1,2,4-triazol assim como no documento WO 2017/191114- A1 derivados de 5-(hidroxialquil)-1-heteroaril-1,2,4- triazol específicos foram descritos, os quais representam antagonistas seletivos e altamente potentes do receptor V1a e são particularmente úteis para o tratamento e/ou a prevenção de doenças renais e cardiovasculares em indivíduos que não sofrem de sobrecarga de fluido e que, portanto, não devem ser decongestionados.

[0020] Derivados inovadores adicionais de 1,2,4-triazol substituída por 5-(carboxamida), substituída por 5- (fluoroalquil) e substituída por 3-(hidroxialquil) foram revelados como antagonistas de receptores V2 e/ou V1a de vasopressina nos documentos WO 2017/191105-A1, WO 2017/191112-A1, WO 2017/191115-A1 e WO 2018/073144-A1.

[0021] Um perfil de atividade com alta seletividade para o receptor V1a tem um baixo potencial de causar efeitos colaterais indesejáveis e também ajuda a reduzir a quantidade de substância que será necessária para alcançar e manter o efeito terapêutico desejado, limitando assim o potencial para efeitos colaterais inaceitáveis e/ou interações medicamentosas indesejáveis durante o tratamento de pacientes que já podem estar em alto risco, tais como, por exemplo, em doenças cardíacas e renais agudas ou crônicas.

[0022] Um problema técnico a ser resolvido de acordo com a presente invenção pode, portanto, ser visto na identificação e fornecimento de novos compostos que atuam como potentes antagonistas do receptor V1a de vasopressina. Um outro objetivo da invenção é identificar e fornecer compostos inovadores com alta afinidade e seletividade vis- à-vis ao receptor V1a de vasopressina. Os compostos são destinados a evitar a indução de aquarese através da inibição de V2. Pretende-se ainda que os compostos tenham um perfil terapêutico semelhante ou melhorado em comparação com os compostos conhecidos da técnica anterior, por exemplo, no que diz respeito às suas propriedades in vivo, por exemplo, as suas características farmacocinéticas e farmacodinâmicas e/ou o seu perfil metabólico e/ou relação dose-atividade.

[0023] Entretanto, os compostos do Exemplo 4A, do Exemplo 6A e do Exemplo 8A que são antagonistas altamente potentes e seletivos do receptor V1a têm uma solubilidade limitada em água e meios fisiológicos, tornando, por exemplo, a administração intravenosa dos compostos dos Exemplo 4A, Exemplo 6A e Exemplo 8A difícil. Adicionalmente, a biodisponibilidade dos compostos após administração oral dos compostos deve ser aprimorada. Portanto, um outro objetivo da presente invenção foi identificar derivados ou pró-fármacos dos compostos dos Exemplo 4A, Exemplo 6A e Exemplo 8A que têm uma solubilidade aprimorada nos meios mencionados e, ao mesmo tempo, permitem liberação controlada dos compostos dos Exemplo 4A, Exemplo 6A e Exemplo 8A no corpo do paciente após a administração e/ou que têm uma boa biodisponibilidade após administração oral.

[0024] Surpreendentemente, foi constatado que certos pró-fármacos dos compostos dos Exemplo 4A, Exemplo 6A e Exemplo 8A têm esse perfil específico e tornam os compostos da presente invenção úteis para o tratamento e/ou a prevenção de doenças, que são associadas à ativação de receptor V1a. Os compostos da presente invenção são particularmente úteis para o tratamento e/ou prevenção de doenças renais e cardiovasculares em indivíduos que não sofrem sobrecarga de líquidos e que, portanto, não devem ser descongestionados.

[0025] A invenção fornece compostos da fórmula geral (I) (I), em que R1 representa um grupo da fórmula em que # representa o ponto de fixação ao anel de 1,2,4- triazolila,

e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, solvatos dos mesmos e os solvatos dos sais dos mesmos.

[0026] Os termos como mencionado no presente texto têm os seguintes significados:

[0027] O termo “que compreende” quando usado no relatório descritivo inclui “que consiste em”.

[0028] Nas fórmulas do grupo que representam R1, o ponto de extremidade da linha marcada por # não representa um átomo de carbono ou um grupo CH2, mas é parte da ligação ao átomo ao qual R1 é fixado.

[0029] É possível que os compostos da fórmula geral (I) existam como variantes isotópicas. Portanto, a invenção inclui uma ou mais variantes isotópicas dos compostos da fórmula geral (I), particularmente compostos contendo deutério da fórmula geral (I).

[0030] O termo “Variante isotópica” de um composto ou um reagente é definido como um composto que exibe uma proporção não natural de um ou mais dos isótopos que constituem tal composto.

[0031] O termo “Variante isotópica do composto de fórmula geral (I)” é definido como um composto da fórmula geral (I) que exibe uma proporção não natural de um ou mais dos isótopos que constituem tal composto.

[0032] A expressão “proporção não natural” significa uma proporção desse isótopo que é maior do que a sua abundância natural. As abundâncias naturais de isótopos a serem aplicadas neste contexto são descritas em “Isotopic Compositions of the Elements 1997”, Pure Appl. Chem., 70(1), 217-235, 1998.

[0033] Exemplos de tais isótopos incluem isótopos estáveis e radioativos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, enxofre, flúor, cloro, bromo e iodo, como 2H (deutério), 3H (trítio), 11C, 13C, 14C, 15N, 17O, 18O, 32P, 33P, 33S, 34S, 35S, 36S, 18F, 36Cl, 82Br, 123I, 124I, 125I, 129I e 131I, respectivamente.

[0034] Em relação ao tratamento e/ou prevenção dos transtornos especificados no presente documento, a(s) variante(s) isotópica(s) dos compostos da fórmula geral (I) contém/contêm, de preferência, deutério (“compostos contendo deutério de fórmula geral (I)”). As variantes isotópicas dos compostos da fórmula geral (I) em que um ou mais isótopos radioativos, como 3H ou 14C, são incorporados, são úteis em fármacos e/ou estudos de distribuição de tecido de substrato. Esses isótopos são particularmente preferenciais para a facilidade de sua incorporação e sua detectabilidade. Os isótopos de emissão de pósitron como 18F ou 11C podem ser incorporados em um composto de fórmula geral (I). Essas variantes isotópicas dos compostos de fórmula geral (I) são úteis para aplicações de imagiologia in vivo. Os compostos da fórmula geral (I) que contêm deutério e que contêm 13C podem ser usados em análises de espectrometria de massa (H. J. Leis et al., Curr. Org. Chem., 1998, 2, 131) no contexto de estudos pré-clínicos ou clínicos.

[0035] As variantes isotópicas dos compostos da fórmula geral (I) podem ser preparadas, em geral, por modos conhecidos por um técnico no assunto, tais como aqueles descritos nos esquemas e/ou exemplos no presente documento, substituindo um reagente por uma variante isotópica do dito reagente, de preferência, para um reagente contendo deutério.

Dependendo dos sítios desejados de deuteração, em alguns casos, o deutério de D2O pode ser incorporado diretamente nos compostos ou nos reagentes que são úteis para sintetizar tais compostos (Esaki et al., Tetrahedron, 2006, 62, 10954; Esaki et al., Chem.

Eur.

J., 2007, 13, 4052). O gás deutério é também um reagente útil para incorporar deutério nas moléculas.

A deuteração catalítica de ligações olefínicas (H.

J.

Leis et al., Curr.

Org.

Chem., 1998, 2, 131; J.

R.

Morandi et al., J.

Org.

Chem., 1969, 34 (6), 1889) e ligações acetilênicas (N.

H.

Khan, J.

Am.

Chem.

Soc., 1952, 74 (12), 3018; S.

Chandrasekhar et al., Tetrahedron Letters, 2011, 52, 3865) é uma via direta para incorporação de deutério.

Os catalisadores de metal (isto é, Pd, Pt e Rh) na presença de gás deutério podem ser usados para trocar diretamente deutério por hidrogênio em grupos funcionais contendo hidrocarbonetos (J.

G.

Atkinson et al., Patente US 3966781). Uma variedade de reagentes deuterados e blocos de construção sintéticos está comercialmente disponível junto a empresas como, por exemplo, C/D/N Isotopes, Quebec, Canadá; Cambridge Isotope Laboratories Inc., Andover, MA, EUA; e CombiPhos Catalysts, Inc., Princeton, NJ, EUA.

Informações adicionais sobre o estado da técnica em relação à troca de deutério-hidrogênio são dadas, por exemplo, em Hanzlik et al., J.

Org.

Chem. 55, 3992-3997, 1990; R.

P.

Hanzlik et al., Biochem.

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Commun. 160, 844, 1989; P.

J.

Reider et al., J.

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Chem. 52, 3326-3334, 1987; M.

Jarman et al., Carcinogenesis 16(4), 683-688, 1995; J.

Atzrodt et al., Angew.

Chem., Int.

Ed. 2007, 46, 7744; K.

Matoishi et al., Chem.

Commun. 2000, 1519−1520; K.

Kassahun et al.,

WO2012/112363.

[0036] O termo “composto contendo deutério da fórmula geral (I)” é definido como um composto da fórmula geral (I), no qual um ou mais átomos de hidrogênio são substituídos por um ou mais átomos de deutério e no qual a abundância de deutério em cada posição deuterada do composto da fórmula geral (I) é superior à abundância natural de deutério, que é cerca de 0,015 %. Particularmente, em um composto contendo deutério da fórmula geral (I), a abundância de deutério em cada posição deuterada do composto da fórmula geral (I) é mais alta que 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 % ou 80 %, de preferência, mais alta que 90 %, 95 %, 96 % ou 97 %, ainda com mais preferência, mais alta que 98 % ou 99 % na dita posição (ou posições). Entende-se que a abundância de deutério em cada posição deuterada é independente da abundância de deutério em outra(s) posição(ões) deuterada(s).

[0037] A incorporação seletiva de um ou mais átomos de deutério em um composto da fórmula geral (I) pode alterar as propriedades físico-químicas (como, por exemplo, acidez [C. L. Perrin, et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129, 4490; A. Streitwieser et al., J. Am. Chem. Soc., 1963, 85, 2759;], basicidade [C. L. Perrin et al., J. Am. Chem. Soc., 2005, 127, 9641; C. L. Perrin, et al., J. Am. Chem. Soc., 2003, 125, 15008; C. L. Perrin in Advances in Physical Organic Chemistry, 44, 144], lipofilicidade [B. Testa et al., Int. J. Pharm., 1984, 19(3), 271]) e/ou o perfil metabólico da molécula e pode resultar em alterações na razão do composto parental para metabólitos ou nas quantidades de metabólitos formados.

Tais alterações podem resultar em certas vantagens terapêuticas e, portanto, podem ser preferidas em algumas circunstâncias.

Foram relatadas taxas reduzidas de metabolismo e comutação metabólica, em que a proporção de metabolitos é alterada (A.

E.

Mutlib et al., Toxicol.

Appl.

Pharmacol., 2000, 169, 102; D.

J.

Kushner et al., Can.

J.

Physiol.

Pharmacol., 1999, 77, 79). Essas alterações na exposição ao fármaco parental e metabólitos podem ter consequências importantes em relação à farmacodinâmica, à tolerabilidade e à eficácia de um composto contendo deutério de fórmula geral (I). Em alguns casos, a substituição de deutério reduz ou elimina a formação de um metabólito não desejado ou tóxico e melhora a formação de um metabólito desejado (por exemplo, Nevirapine: A.

M.

Sharma et al., Chem.

Res.

Toxicol., 2013, 26, 410; Efavirenz: A.

E.

Mutlib et al., Toxicol.

Appl.

Pharmacol., 2000, 169, 102). Em outros casos, o efeito principal de deuteração é reduzir a taxa de depuração sistêmica.

Como resultado, a meia vida biológica do composto é aumentada.

Os benefícios clínicos potenciais incluiriam a habilidade para manter a exposição sistêmica similar com níveis de pico diminuídos e níveis de mínima aumentados.

Isso poderia resultar em efeitos colaterais inferiores e eficácia aprimorada, dependendo da relação de farmacocinética/farmacodinâmica do composto particular.

ML- 337 (C.

J.

Wenthur et al., J.

Med.

Chem., 2013, 56, 5208) e Odanacatibe (K.

Kassahun et al., documento WO2012/112363) são exemplos para esse efeito de deutério.

Ainda outros casos foram relatados em que taxas reduzidas de metabolismo resultam em um aumento na exposição do fármaco sem alterar a taxa de depuração sistêmica (por exemplo, Rofecoxibe: F. Schneider et al., Arzneim. Forsch. / Drug. Res., 2006, 56, 295; Telaprevir: F. Maltais et al., J. Med. Chem., 2009, 52, 7993). Os fármacos deuterados que mostram esse efeito podem ter exigências de dosagem reduzidas (por exemplo, número inferior de doses ou dosagem inferior para alcançar o efeito desejado) e/ou podem produzir cargas de metabólito inferiores.

[0038] Um composto de fórmula geral (I) pode ter múltiplos sítios de ataque potenciais para metabolismo. Para otimizar os efeitos descritos acima sobre as propriedades físico-químicas e o perfil metabólico, os compostos contendo deutério de fórmula geral (I) que têm um determinado padrão de uma ou mais trocas entre deutério e hidrogênio podem ser selecionados. Particularmente, o átomo de deutério (átomos de deutério) de composto (ou compostos) contendo deutério de fórmula geral (I) é fixado a um átomo de carbono e/ou está situado em tais posições do composto de fórmula geral (I), que são sítios de ataque para metabolizar enzimas como, por exemplo, citocromo P450.

[0039] Onde a forma plural das palavras compostos, sais, polimorfos, hidratos, solvatos e semelhantes, for usada no presente documento, essa é tomada como significando também um único composto, sal, polimorfo, isómero, hidrato, solvato ou semelhantes.

[0040] Por "composto estável" ou "estrutura estável" entende-se um composto que é suficientemente robusto para sobreviver ao isolamento a um grau de pureza útil de uma mistura de reação, e formulação em um agente terapêutico eficaz.

[0041] Os pró-fármacos são derivados de um ingrediente ativo. Os termos “ingrediente ativo subjacente”, “fármaco respectivo subjacente” e “fármaco respectivo” são usados como sinônimos na presente invenção.

[0042] Os compostos da presente invenção contêm opcionalmente um centro assimétrico, dependendo da localização e natureza dos vários substituintes desejados. É possível que um átomo de carbono assimétrico esteja presente na configuração (R) ou (S), o que pode resultar em misturas racêmicas. Em certos casos, é possível que a assimetria também esteja presente devido à rotação restrita em torno de uma determinada ligação, por exemplo, a ligação central adjacente a dois anéis aromáticos substituídos dos compostos especificados. Os compostos preferenciais são aqueles que produzem a atividade biológica mais desejável. Os isómeros e estereoisômeros separados ou parcialmente purificados ou misturas racémicas dos compostos da presente invenção estão também incluídos no escopo da presente invenção. A purificação e a separação de tais materiais podem ser realizadas por técnicas padrão conhecidas no assunto.

[0043] Os isômeros ópticos podem ser obtidos por resolução das misturas racémicas de acordo com processos convencionais, por exemplo, pela formação de sais diastereoisoméricos usando um ácido ou base opticamente ativo ou formação de diastereômeros covalentes. Exemplos de ácidos apropriados são ácido tartárico, diacetiltartárico, ditoluiltartárico e canforsulfônico. As misturas de diastereoisômeros podem ser separadas nos seus diastereoisômeros individuais com base nas suas diferenças físicas e/ou químicas por modos conhecidos na técnica, por exemplo, por cromatografia ou cristalização fracionada. As bases ou ácidos opticamente ativos são então liberados dos sais diastereoméricos separados. Um processo diferente para a separação de isômeros ópticos envolve o uso de cromatografia quiral (por exemplo, colunas de HPLC usando uma fase quiral), com ou sem derivação convencional, otimamente escolhida para maximizar a separação dos enantiômeros. Colunas de HPLC adequadas usando uma fase quiral estão comercialmente disponíveis, tais como as fabricadas pela Daicel, por exemplo, Chiracel OD e Chiracel OJ, por exemplo, entre muitas outras, que são todas rotineiramente selecionáveis. Separações enzimáticas, com ou sem derivatização, também são úteis. Os compostos opticamente ativos da presente invenção podem igualmente ser obtidos por sínteses quirais usando materiais de partida opticamente ativos. De modo a distinguir diferentes tipos de isômeros uns dos outros, é feita referência à Seção E das Regras de IUPAC (Pure Appl Chem 45, 11-30, 1976).

[0044] A presente invenção inclui todos os estereoisômeros possíveis dos compostos da presente invenção como estereoisômeros isolados, ou como qualquer mistura dos ditos estereoisômeros, por exemplo, isômeros (R) ou (S), em qualquer proporção. O isolamento de um único estereoisômero, por exemplo, um único enantiômero ou um único diastereômero, de um composto da presente invenção é conseguido por qualquer método adequado do estado da técnica, como cromatografia, especialmente cromatografia quiral, por exemplo.

[0045] No contexto da presente invenção, o termo "enantiomericamente puro" deve ser entendido como significando que o composto em questão em relação à configuração absoluta do centro quiral está presente em um excesso enantiomérico de mais que 95 %, de preferência, mais que 97 %. O excesso enantiomérico, ee, é calculado no presente documento avaliando-se o cromatograma de HPLC correspondente em uma fase quiral com o uso da fórmula abaixo: ee = [EA (% de área) - EB (% de área)] x 100 % / [EA (% de área) + EB (% de área)] (EA: enantiômero principal, EB: enantiômero secundário)

[0046] A presente invenção também abrange formas úteis dos compostos da presente invenção, como metabolitos, hidratos, solvatos, sais, em particular sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou co-precipitados.

[0047] Os compostos da presente invenção podem existir como um hidrato, ou como um solvato, em que os compostos da presente invenção contêm solventes polares, em particular água, metanol ou etanol, por exemplo, como elemento estrutural da rede cristalina dos compostos. É possível que a quantidade de solventes polares, em particular água, exista em uma relação estequiométrica ou não estequiométrica. No caso dos solvatos estequiométricos, por exemplo, um hidrato, hemi-, (semi-), mono-, sesqui-, di-, tri-, tetra-, penta- etc. solvatos ou hidratos, respectivamente, são possíveis. A presente invenção inclui todos esses hidratos ou solvatos. Hidratos, em particular hemi-hidratos (semi-hidratos), são solvatos preferenciais no contexto da presente invenção.

[0048] Além disso, é possível que os compostos da presente invenção existam na forma livre, por exemplo, como uma base livre, ou como um ácido livre, ou como um zwitteríon ou existam na forma de um sal. O dito sal pode ser qualquer sal, um sal de adição orgânico ou inorgânico, particularmente qualquer sal de adição farmaceuticamente aceitável orgânico ou inorgânico, que é comumente usado em farmácia, ou que é usado, por exemplo, para isolar ou purificar os compostos da presente invenção.

[0049] O termo “sal farmaceuticamente aceitável" se refere a um sal de adição inorgânico ou orgânico de um composto da presente invenção. Por exemplo, consulte S. M. Berge, et al. “Pharmaceutical Salts”, J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1-19.

[0050] Um sal farmaceuticamente aceitável adequado de um composto da presente invenção que é suficientemente ácido, é um sal de metal alcalino, por exemplo, um sal de sódio, sal de potássio ou sal de lítio, um sal de metal alcalinoterroso, por exemplo, um sal de cálcio, sal de magnésio ou sal, de estrôncio, ou um sal de alumínio ou um sal de zinco, ou um sal de amônio derivado de amônia ou de uma amina orgânica primária, secundária ou terciária que tem 1 a 20 átomos de carbono, como etilamina, dietilamina, trietilamina, etildi-isopropilamina, monoetanolamina, dietanolamina, trietanolamina, diciclo-hexilamina, dimetilaminoetanol, dietilaminoetanol, tris(hidroximetil)aminometano, procaína, dibenzilamina, N- metilmorfolina, arginina, lisina, 1,2-etilenodiamina, N- metilpiperidina, N-metil-glucamina, N,N-dimetil-glucamina, N-etil-glucamina, 1,6-hexanodiamina, glucosamina,

sarcosina, serinol, 2-amino-1,3-propanodiol, 3-amino-1,2- propanodiol, 4-amino-1,2,3-butanotriol, ou um sal com um íon de amônio quaternário que tem 1 a 20 átomos de carbono, como tetrametilamônio, tetraetilamônio, tetra(n- propil)amônio, tetra(n-butil)amônio, N-benzil-N,N,N- trimetilamônio, colina ou benzalcônio. É dada preferência a um sal de sódio, sal de potássio, sal de lítio, sal de cálcio ou sal de magnésio, de máxima preferência é um sal de potássio.

[0051] Os sais de metal alcalino e alcalinoterroso de compostos ácidos da presente invenção são preparados pela reação dos compostos da presente invenção com a base apropriada através de uma variedade de métodos conhecidos.

[0052] A presente invenção inclui todos os sais possíveis dos compostos da presente invenção como sais únicos, ou como qualquer mistura dos ditos sais, em qualquer razão.

[0053] No presente texto, em particular na Seção Experimental, para a síntese de intermediários e de exemplos da presente invenção, quando um composto é mencionado como uma forma de sal com a correspondente base ou ácido, a composição estequiométrica exata da dita forma de sal, como obtido pelo respectivo processo de preparação e/ou purificação, é, na maioria dos casos, desconhecido.

[0054] Salvo se especificado de outro modo, os sufixos para os nomes químicos ou fórmulas estruturais e relacionados a sais, como "sal de sódio", “sal de potássio”, ou "x Na+", “x K+”, por exemplo, significam uma forma de sal, cuja estequiometria da forma de sal não é especificada.

[0055] Isto se aplica analogamente a casos em que intermediários de síntese ou compostos exemplificativos ou seus sais foram obtidos, pelos processos de preparação e/ou purificação descritos, como solvatos, tais como hidratos, com composição estequiométrica desconhecida (se definida).

[0056] Além disso, a presente invenção inclui todas as possíveis formas cristalinas, ou polimorfos, dos compostos da presente invenção, como polimorfo único, ou como uma mistura de mais de um polimorfo, em qualquer proporção.

[0057] A preferência é dada aos compostos da fórmula geral (I) nos quais R1 representa um grupo da fórmula em que # representa o ponto de fixação ao anel de 1,2,4- triazolila.

[0058] É dada preferência também a Di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1-[3-(trifluorometil)piridin-2- il]-1H-1,2,4-triazol-3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo- 1,5-di-hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan- 2-ila que tem a fórmula abaixo ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, solvatos dos mesmos e os solvatos dos sais dos mesmos.

[0059] É dada preferência também a Di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1-[3-(trifluorometil)piridin-2- il]-1H-1,2,4-triazol-3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo- 1,5-di-hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan- 2-ila que tem a fórmula abaixo .

[0060] A presente invenção abrange os compostos da fórmula geral (I) que são revelados na Seção de Exemplo desse texto.

[0061] A invenção fornece adicionalmente um processo para preparar os compostos da fórmula geral (I), ou os sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, solvatos dos mesmos ou os solvatos dos sais dos mesmos, em que

[A] os compostos da fórmula

(II), em que R1 tem o significado como definido para os compostos da fórmula geral (I) dados acima, são reagidos na primeira etapa com oxicloreto de fósforo e na segunda etapa são hidrolisados para gerar compostos da fórmula geral (I), ou [B] os compostos da fórmula

(II), em que R1 tem o significado como definido para os compostos da fórmula geral (I) dados acima, são reagidos na primeira etapa com difosfato de tetrabenzila e na segunda etapa os grupos benzila são removidos sob condições redutoras para gerar compostos da fórmula geral (I),

opcionalmente seguido, onde apropriado, pela conversão dos compostos da fórmula geral (I) em seus respectivos sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, solvatos dos mesmos ou os solvatos dos sais dos mesmos pelo tratamento com os solventes e/ou bases correspondentes.

[0062] A primeira etapa na reação [A] é em geral executada pela reação de um composto da fórmula (II) com oxicloreto de fósforo em um solvente inerte na presença de uma base, opcionalmente na presença de um aditivo, de preferência em uma faixa de temperatura de -10 °C a +50 °C, com mais preferência, a 0 °C a +30 °C. As reações podem ser executadas à pressão atmosférica, elevada ou reduzida (por exemplo, de 0,05 MPa a 0,5 MPa (0,5 a 5 bar)); em geral, as reações são executadas à pressão atmosférica.

[0063] Os solventes inertes são, por exemplo, hidrocarbonetos halogenados como diclorometano ou triclorometano, éter como dietil éter ou metil terc-butil éter, hidrocarbonetos como benzeno ou tolueno, ou outros solventes como dioxano, dimetilformamida ou tetra- hidrofurano. É possível também usar misturas dos solventes. É dada preferência a tetra-hidrofurano.

[0064] As bases adequadas são, por exemplo, bases orgânicas como trialquilaminas, por exemplo, trietilamina ou di-isopropiletilamina, ou piridina. É dada preferência à trietilamina.

[0065] Os aditivos adequados são, por exemplo, 4-N,N- dimetilaminopiridina.

[0066] A segunda etapa na reação [A] é em geral executada pela adição de uma base ou água, de preferência, em uma faixa de temperatura de -10 °C a +50 °C, com mais preferência, 0 °C a +30 °C. As reações podem ser executadas à pressão atmosférica, elevada ou reduzida (por exemplo, de 0,05 MPa a 0,5 MPa (0,5 a 5 bar)); em geral, as reações são executadas à pressão atmosférica.

[0067] As bases adequadas são, por exemplo, soluções de hidróxidos de metal alcalino aquoso como hidróxido de sódio aquoso, hidróxido de lítio aquoso ou hidróxido de potássio aquoso, ou hidrogencarbonatos de metal alcalino aquosos como hidrogencarbonato de sódio aquoso ou hidrogencarbonato de potássio aquoso, ou carbonatos de metal alcalino aquosos como carbonato de sódio aquoso ou carbonato de potássio aquoso. É dada preferência à solução de hidrogencarbonato de sódio aquoso.

[0068] A primeira etapa na reação [B] é em geral executada pela reação de um composto da fórmula (II) com difosfato de tetrabenzila em um solvente inerte na presença de uma base, de preferência, em uma faixa de temperatura de -10 °C a +50 °C, com mais preferência, 0 °C a +30 °C. As reações podem ser executadas à pressão atmosférica, elevada ou reduzida (por exemplo, de 0,05 MPa a 0,5 MPa (0,5 a 5 bar)); em geral, as reações são executadas à pressão atmosférica.

[0069] Os solventes inertes são, por exemplo, hidrocarbonetos halogenados como diclorometano ou triclorometano, éter como dietil éter ou metil terc-butil éter, ou outros solventes como dioxano, dimetilformamida ou tetra-hidrofurano. É possível também usar misturas dos solventes. É dada preferência a tetra-hidrofurano.

[0070] As bases adequadas são, por exemplo, terc- butóxido de potássio ou terc-butóxido de sódio, hidreto de sódio, N-butil-lítio, di-isopropilamida de lítio, amida de bis(trimetilsilil)sódio ou amida de bis(trimetilsilil)- lítio, é dada preferência a amida de bis(trimetilsilil)lítio.

[0071] A segunda etapa na reação [B] é em geral executada com um agente redutor em um solvente inerte, de preferência, em uma faixa de temperatura de -10 °C a +50 °C, com mais preferência, 0 °C a +30 °C. As reações podem ser executadas à pressão atmosférica, elevada ou reduzida (por exemplo, de 0,05 MPa a 0,5 MPa (0,5 a 5 bar)); em geral, as reações são executadas à pressão atmosférica.

[0072] Os solventes inertes são, por exemplo, etanol, ou misturas de dioxano e água ou tetra-hidrofurano e água. É dada preferência a etanol.

[0073] Os agentes redutores são, por exemplo, paládio em carbono e hidrogênio, di-hidróxido de paládio, dicloreto de estanho, tricloreto de titânio ou formato de amônio. É dada preferência a paládio em carbono e hidrogênio.

[0074] Os compostos da fórmula (II) estão comercialmente disponíveis, são conhecidos a partir da literatura ou podem ser preparados a partir de materiais de partida prontamente disponíveis pela adaptação de métodos padrão descritos na literatura. Procedimentos detalhados e referências da literatura para preparar os materiais de partida podem também ser encontrados na Parte Experimental na seção na preparação dos materiais de partida e intermediários.

[0075] A presente invenção abrange métodos de preparação de compostos da presente invenção de fórmula geral (I), os ditos métodos compreendendo as etapas como descrito na

Seção Experimental no presente documento.

[0076] Os esquemas e procedimentos descritos abaixo ilustram vias sintéticas para os compostos da fórmula geral (I) da invenção e não pretendem ser limitantes.

[0077] A preparação dos compostos da invenção pode ser ilustrada por meio do seguinte esquema sintético: Esquema 1 POCl3

[0078] Os compostos da fórmula geral (I) da presente invenção podem ser convertidos em qualquer sal, de preferência sais farmaceuticamente aceitáveis, como descrito no presente documento, por qualquer método que é conhecido pelo elemento versado na técnica. De modo similar, qualquer sal de um composto da fórmula geral (I) da presente invenção pode ser convertido em composto livre, por qualquer método que é conhecido pelo elemento versado na técnica.

[0079] Os compostos da presente invenção possuem propriedades farmacológicas valiosas e podem ser usados para a prevenção e/ou tratamento de várias doenças e estados induzidos por doença em seres humanos e outros mamíferos. Os compostos da fórmula geral (I) da presente invenção demonstram um espectro farmacológico valioso de ação e perfil farmacocinético. Os compostos da presente invenção foram constatados surpreendentemente como inibidores eficazes do receptor V1a de vasopressina e, portanto, é possível que os ditos compostos sejam usados para o tratamento e/ou a prevenção de doenças, de preferência, doenças renais e cardiovasculares em humanos e animais.

[0080] No contexto da presente invenção, o termo “tratamento” ou “tratar” inclui inibir, atrasar, aliviar, mitigar, parar, reduzir, ou causar a regressão de uma doença, transtorno, condição ou estado, o desenvolvimento e/ou a sua progressão e/ou os sintomas dos mesmos. O termo "prevenção" ou "prevenir" inclui reduzir o risco de ter, contrair ou experimentar uma doença, transtorno, condição ou estado, o desenvolvimento e/ou a progressão da mesma, e/ou os sintomas da mesma. O termo prevenção inclui profilaxia. Tratamento ou prevenção de um transtorno, doença, condição ou estado pode ser parcial ou completa.

[0081] Ao longo deste documento, por uma questão de simplicidade, é dada preferência ao uso da linguagem singular sobre a linguagem plural, mas geralmente é destinado a incluir o idioma plural se não for de outro modo indicado. Por exemplo, a expressão "um método para tratar uma doença em um paciente, que compreende administrar a um paciente uma quantidade eficaz de um composto da fórmula geral (I)" pretende incluir o tratamento simultâneo de mais de uma doença bem como a administração de mais de um composto da fórmula geral (I).

[0082] Os compostos da presente invenção são altamente potentes e, em particular, antagonistas seletivos do receptor V1a de vasopressina. Portanto, espera-se que os compostos da invenção sejam altamente valiosos como agentes terapêuticos para o tratamento e/ou a prevenção de doenças, em particular, para o tratamento e/ou a prevenção de doenças renais e cardiovasculares.

[0083] Como usado no presente documento, o termo "antagonista do receptor V1a de vasopressina" se refere a um composto que funciona inibindo (parcialmente ou completamente) ou bloqueando o receptor V1a de vasopressina, impedindo assim a ativação do receptor pela vasopressina.

[0084] Em uma modalidade, os fármacos respectivos subjacentes dos compostos descritos no presente documento são ativos no receptor V1a. Em uma outra modalidade, os fármacos respectivos subjacentes dos compostos descritos no presente documento exibem a inibição do receptor V1a de acordo com o estudo em B-4 com um IC50 < 100 nM. Em uma outra modalidade, os fármacos respectivos subjacentes dos compostos descritos no presente documento exibem a inibição do receptor V1a de acordo com o estudo em B-4 com um IC50 < 20 nM. Em uma outra modalidade, os fármacos respectivos subjacentes dos compostos descritos no presente documento exibem a inibição do receptor V1a de acordo com o estudo em B-4 com um IC50 < 10 nM. Em uma outra modalidade, os fármacos respectivos subjacentes dos compostos descritos no presente documento exibem a inibição do receptor V1a de acordo com o estudo em B-4 com um IC50 < 5 nM.

[0085] Em uma modalidade adicional, os fármacos respectivos subjacentes dos compostos descritos no presente documento são seletivamente ativos no receptor V1a e são menos ativos, substancialmente menos ativos e/ou inativos em outros receptores de vasopressina, como os subtipos de V1b e/ou V2. Em uma outra modalidade, os fármacos respectivos subjacentes dos compostos descritos no presente documento são pelo menos 10 vezes seletivos para o receptor V1a em comparação ao receptor V2 como determinado de acordo com o estudo em B-4. Em uma outra modalidade, os fármacos respectivos subjacentes dos compostos descritos no presente documento são pelo menos 15 vezes seletivos para o receptor V1a em comparação ao receptor V2 como determinado de acordo com o estudo em B-4. Em uma outra modalidade, os fármacos respectivos subjacentes dos compostos descritos no presente documento são pelo menos 20 vezes seletivos para o receptor V1a em comparação ao receptor V2 como determinado de acordo com o estudo em B-4. Em uma outra modalidade, os fármacos respectivos subjacentes dos compostos descritos no presente documento são pelo menos 30 vezes seletivos para o receptor V1a em comparação ao receptor V2 como determinado de acordo com o estudo em B-4.

[0086] Os compostos de acordo com a invenção são adequados para o tratamento e/ou prevenção de doenças renais, em particular de doenças agudas e crônicas do rim, doenças diabéticas do rim, e de insuficiência renal aguda e crônica. Os termos gerais 'doença renal' ou 'doença do rim' descrevem uma classe de condições em que os rins não conseguem filtrar e remover os resíduos do sangue. Há duas formas principais de doença de rim: doença de rim aguda (insuficiência renal aguda, AKI) e doença de rim crônica (CKD). Os compostos de acordo com a invenção podem ainda ser usados para o tratamento e/ou prevenção de sequelas de lesão aguda do rim decorrentes de múltiplos insultos, como lesão de isquemia-reperfusão, administração de contraste radiológico, cirurgia de bypass cardiopulmonar, choque e sepse.

No sentido da presente invenção, o termo falha renal ou insuficiência renal compreende manifestações de insuficiência renal tanto agudas quanto crônicas, bem como doenças renais subjacentes ou relacionadas, como hipoperfusão renal, hipotensão intradialítica, uropatia obstrutiva, glomerulopatias, nefropatia por IgA, glomerulonefrite, glomerulonefrite aguda, glomerulosclerose, doenças tubulointersticiais, doenças nefropáticas, como doença renal primária e congênita, nefrite, síndrome de Alport, inflamação renal, doenças renais imunológicas, como rejeição de transplante de rim, doenças renais induzidas por complexo imune, nefropatia induzida por substâncias tóxicas, nefropatia induzida por meio de contraste; glomerulonefrite de alteração mínima (lipoide); Glomerulonefrite membranosa; glomerulonefrite focal segmental (FSGS); síndrome hemolítico-urêmica (HUS), amiloidose, síndrome de Goodpasture, granulomatose de Wegener, Púrpura de Henoch-Schönlein, nefropatia diabética e não diabética, pielonefrite, cistos renais, nefrosclerose, nefrosclerose hipertensiva e síndrome nefrótica, que podem ser caracterizadas diagnosticamente, por exemplo, por creatinina anormalmente reduzida e/ou excreção de água, concentrações sanguíneas anormalmente aumentadas de ureia, nitrogênio, potássio e/ou creatinina, atividade alterada de enzimas renais como, por exemplo, glutamil sintetase, osmolaridade de urina alterada ou volume de urina, microalbuminuria aumentada, macroalbuminuria, lesões glomerulares e lesões arteriolares, dilatação tubular, hiperfosfatemia e/ou a necessidade por diálise. A presente invenção também compreende o uso dos compostos de acordo com a invenção para o tratamento e/ou prevenção de sequelas de insuficiência renal, por exemplo, edema pulmonar, insuficiência cardíaca, uremia, anemia, distúrbios de eletrólitos (por exemplo, hipercalemia, hiponatraemia) e distúrbios no metabolismo dos ossos e carboidratos. Os compostos de acordo com a invenção são também adequados para o tratamento e/ou prevenção de doença policística do rim (PCKD) e da síndrome de secreção inadequada de ADH (SIADH).

[0087] As doenças cardiovasculares nesse contexto que podem ser tratadas e/ou prevenidas com os compostos da invenção incluem, porém sem limitação, o mencionado a seguir: insuficiência cardíaca aguda e crônica incluindo agravamento da insuficiência cardíaca crônica (ou hospitalização para insuficiência cardíaca) e incluindo insuficiência cardíaca congestiva, hipertensão arterial, hipertensão resistente, hipertensão pulmonar arterial, doença cardíaca coronária, angina pectoris instável e estável, arritmia atrial e ventricular, distúrbios de atrial e distúrbios do ritmo atrial e ventricular e distúrbios de condução, por exemplo, bloqueios atrioventriculares de grau I-III (AVB I-III), taquiarritmia supraventricular, fibrilação atrial, flutter atrial, fibrilação ventricular, flutter ventricular, taquiarritmia ventricular, taquicardia de torção das pontas, extra- sístoles atrial e ventricular, extra-sístoles de junção por AV, síndrome do nó sinusal, síncopes, taquicardia de reentrada no nó AV e síndrome de Wolff-Parkinson-White, síndrome coronária aguda (ACS), doenças cardíacas autoimunes (pericardite, endocardite, valvulite, aortite, cardiomiopatia), choque, como choque cardiogênico, choque séptico e choque anafilático, aneurismas, cardiomiopatia do Boxer (contração ventricular prematura), além disso, doenças tromboembólicas e isquemias, como distúrbios de perfusão periférica, lesão por reperfusão, trombose arterial e venosa, insuficiência miocárdica, disfunção endotelial, danos micro e macrovasculares (vasculite) e para prevenir restenose, como após as terapias de trombólise, angioplastia transluminal percutânea (ATP), angioplastia coronária transluminal percutânea (PTCA), transplante cardíaco e operações de derivação, arteriosclerose, distúrbios do metabolismo lipídico, hipolipoproteinemia, dislipidemias, Hipertrigliceridemias, hiperlipidemias e hiperlipidemias combinadas, hipercolesterolemias, abetalipoproteinaemia, sitosterolemia, xantomatosis, doença de Tangier, adipositas, obesidade, síndrome metabólica, ataques transitórios e isquêmicos, derrame, doenças cardiovasculares inflamatórias, doenças vasculares periféricaa e cardíacas, transtornos de circulação periférica, espasmos das artérias coronárias e artérias periféricas e edema, como, por exemplo, edema pulmonar, edema cerebral, edema renal e edema relacionado à insuficiência cardíaca.

[0088] No sentido da presente invenção, o termo insuficiência cardíaca também inclui formas de doença mais específicas ou relacionadas tais como insuficiência cardíaca direita, insuficiência cardíaca esquerda, insuficiência global, cardiomiopatia isquêmica, cardiomiopatia dilatada, malformações cardíacas congênitas, defeitos nas válvulas do coração, insuficiência cardíaca com defeitos nas válvulas do coração, estenose da válvula mitral, insuficiência da válvula mitral, estenose da válvula aórtica, insuficiência da válvula aórtica, estenose tricúspide insuficiência de tricúspide, estenose da válvula pulmonar, insuficiência da válvula pulmonar, defeitos de válvula cardíaca combinados, inflamação do músculo cardíaco (miocardite), miocardite crônica, miocardite aguda, miocardite viral, insuficiência cardíaca diabética, cardiomiopatia álcool-tóxica, doenças de armazenamento cardíacas, insuficiência cardíaca com fração de ejeção preservada (HFpEF ou insuficiência cardíaca diastólica), e insuficiência cardíaca com fração de ejeção reduzida (HFrEF ou insuficiência cardíaca sistólica).

[0089] Os compostos da presente invenção podem ser particularmente úteis para o tratamento e/ou prevenção da síndrome cardiorrenal (CRS) e seus vários subtipos. Esse termo abrange certos transtornos do coração e rins em que a disfunção aguda ou crônica em um órgão pode induzir disfunção aguda ou crônica do outro.

[0090] Além disso, os compostos de acordo com a invenção podem ser usados para o tratamento e/ou a prevenção de doença arterial periférica (PAD) incluindo claudicação e incluindo isquemia crítica de membros bem como disfunção microvascular coronária (CMD) incluindo CMD tipo 1-4, fenômeno de Raynaud primário e secundário, distúrbios de microcirculação, claudicação, neuropatias periféricas e autonômicas, microangiopatias diabéticas, retinopatia diabética, úlceras de membros diabéticos, gangrena, síndrome de CREST, transtornos eritematosos, doenças reumáticas e para promover cicatrização de feridas.

[0091] Além disso, os compostos da invenção são adequados para tratar doenças urológicas e doenças do sistema urogenital masculino e feminino como, por exemplo, síndrome prostática benigna (BPS), hiperplasia prostática benigna (BPH), aumento prostático benigno (BPE), obstrução da saída da bexiga (BOO), síndromes do trato urinário inferior (LUTS), bexiga neurogênica hiperativa (OAB), cistite intersticial (IC), incontinência urinária (IU), como, por exemplo, incontinência urinária mista, de urgência, de estresse e por transbordamento (MUI, UUI, SUI, OUI), dores pélvicas, disfunção erétil, dismenorreia e endometriose.

[0092] Os compostos de acordo com a invenção podem também ser usados para o tratamento e/ou prevenção de doenças inflamatórias, doenças asmáticas, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), síndrome do desconforto respiratório agudo (ARDS), lesão pulmonar aguda (ALI), deficiência de alfa-1-antitripsina (AATD), fibrose pulmonar, enfisema pulmonar (por exemplo, enfisema pulmonar induzido pelo fumo) e fibrose cística (CF). Além disso, os compostos da invenção podem ser usados para o tratamento e/ou prevenção de hipertensão arterial pulmonar (PAH) e outras formas de hipertensão pulmonar (PH), incluindo hipertensão pulmonar associada a doença ventricular esquerda, infecção por HIV, anemia falciforme, tromboembolismo (CTEPH), sarcoidose, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD) ou fibrose pulmonar.

[0093] Adicionalmente, os compostos de acordo com a invenção podem ser usados para o tratamento e/ou prevenção de cirrose do fígado, ascites, a diabetes mellitus e complicações diabéticas, tais como, por exemplo, neuropatia e nefropatia.

[0094] Além disso, os compostos da invenção são adequados para o tratamento e/ou prevenção de transtornos do sistema nervoso central, tais como estados de ansiedade, depressão, glaucoma, câncer, tais como em tumores pulmonares particulares, e desalinhamento do ritmo circadiano, tais como o jet lag e trabalho por turnos.

[0095] Além disso, os compostos de acordo com a invenção podem ser úteis para o tratamento e/ou prevenção de condições de dor, doenças das adrenais tais como, por exemplo, feocromocitoma e apoplexia suprarrenal, doenças do intestino tais como, por exemplo, doença de Crohn e diarreia, transtornos menstruais como, por exemplo, dismenorreia, endometriose, prematuridade e tocólise.

[0096] Acredita-se que, devido ao seu perfil de atividade e seletividade, os compostos da presente invenção sejam particularmente adequados para o tratamento e/ou prevenção de doenças renais agudas e crônicas incluindo nefropatia diabética, insuficiência cardíaca aguda e crônica, pré-eclâmpsia, doença arterial periférica (PAD), disfunção microvascular coronária (CMD), síndrome de Raynaud e dismenorreia.

[0097] As doenças mencionadas acima têm sido bem caracterizadas em seres humanos, mas também existem com uma etiologia comparável em outros mamíferos, e podem ser tratadas em aqueles com os compostos e métodos da presente invenção.

[0098] Assim, a presente invenção se refere ainda ao uso dos compostos de acordo com a invenção para o tratamento e/ou prevenção de doenças, especialmente das doenças mencionadas anteriormente.

[0099] A presente invenção se refere ainda ao uso dos compostos de acordo com a invenção para preparar uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou prevenção de doenças, especialmente das doenças mencionadas anteriormente.

[0100] A presente invenção se refere ainda ao uso dos compostos de acordo com a invenção em um método para o tratamento e/ou prevenção de doenças, especialmente das doenças mencionadas anteriormente.

[0101] A presente invenção se refere ainda a um método para o tratamento e/ou prevenção de doenças, especialmente das doenças mencionadas anteriormente, usando uma quantidade eficaz de pelo menos um dos compostos de acordo com a invenção.

[0102] De acordo com um outro aspecto, a presente invenção abrange combinações farmacêuticas, em particular medicamentos, compreendendo pelo menos um composto de fórmula geral (I) da presente invenção e pelo menos um ou mais ingredientes ativos adicionais, em particular para o tratamento e/ou prevenção de doenças, especialmente das doenças mencionadas anteriormente.

[0103] Particularmente, a presente invenção abrange uma combinação farmacêutica, que compreende: • um ou mais primeiros ingredientes ativos, em particular, compostos da fórmula geral (I) como definido acima, e • um ou mais ingredientes ativos adicionais, em particular, para o tratamento e/ou a prevenção de doenças, especialmente das doenças mencionadas acima.

[0104] O termo “combinação” na presente invenção é usado como conhecido para os técnicos no assunto, sendo possível que a dita combinação seja uma combinação fixa, uma combinação não fixa ou um kit de partes.

[0105] Uma “combinação fixa” na presente invenção é usada como conhecido para os técnicos no assunto e é definida como uma combinação em que, por exemplo, um primeiro ingrediente ativo, tal como um ou mais compostos de fórmula geral (I) da presente invenção, e um ingrediente ativo adicional estão presentes juntos em uma dosagem unitária ou em uma única entidade. Um exemplo de uma “combinação fixa” é uma composição farmacêutica em que um primeiro ingrediente ativo e um ingrediente ativo adicional estão presentes em mistura por adição para administração simultânea, tal como em uma formulação. Um outro exemplo de uma “combinação fixa” é uma combinação farmacêutica em que um primeiro ingrediente ativo e um ingrediente ativo adicional estão presentes em uma unidade sem ser em mistura por adição.

[0106] Uma combinação não fixa ou “kit de partes” na presente invenção é usada como conhecido para os técnicos no assunto e é definida como uma combinação em que um primeiro ingrediente ativo e um ingrediente ativo adicional estão presentes em mais de uma unidade. Um exemplo de uma combinação não fixa ou kit de partes é uma combinação em que o primeiro ingrediente ativo e o ingrediente ativo adicional estão presentes separadamente. É possível que os componentes da combinação não fixa ou kit de partes sejam administrados separadamente, sequencialmente, simultaneamente, concorrentemente ou cronologicamente escalonados.

[0107] Os compostos da presente invenção podem ser administrados como o único agente farmacêutico ou em combinação com um ou mais outros ingredientes farmaceuticamente ativos onde a combinação não cause efeitos adversos inaceitáveis. A presente invenção também abrange tais combinações farmacêuticas. Por exemplo, os compostos da presente invenção podem ser combinados com conhecidos agentes para o tratamento e/ou prevenção de doenças, especialmente das doenças mencionadas anteriormente.

[0108] Em particular, os compostos da presente invenção podem ser usados em combinação fixa ou separada com • agentes antitrombóticos, por exemplo, e de preferência do grupo de inibidores de agregação de plaqueta, anticoagulantes e substâncias profibrinolíticas; • agentes redutores de pressão arterial, por exemplo, e de um modo preferido a partir do grupo de antagonistas de cálcio, antagonistas de angiotensina AII, inibidores de ACE, inibidores de NEP, inibidores de vasopeptidase, antagonistas de endotelina, inibidores de renina, alfa- bloqueadores, beta-bloqueadores, antagonistas do receptor de mineralocorticoides e diuréticos; • agentes antidiabéticos (agentes hipoglicêmicos ou anti- hiperglicêmicos), tais como, por exemplo, e de preferência insulina e derivados, sulfonilureias, biguanidas, tiazolidinadionas, acarbose, inibidores de DPP4, análogos de GLP-1 ou inibidores de SGLT (gliflozinas); • nitratos orgânicos e doadores de NO, por exemplo, nitroprusseto de sódio, nitroglicerina, mononitrato de isossorbeto, dinitrato de isossorbeto, molsidomina ou SIN-1 e NO inalacional; • compostos que inibem a degradação de monofosfato de guanosina cíclica (cGMP), por exemplo, inibidores de fosfodiesterase (PDE) 1, 2, 5 e/ou 9, em particular, inibidores de PDE-5, como sildenafila, vardenafila, tadalafila, udenafila, dasantafila, avanafila, mirodenafila, lodenafila, CTP-499 ou PF-00489791; • agentes inotrópicos positivos, como, por exemplo, glicosídeos cardíacos (digoxina) e agonistas beta- adrenérgicos e dopaminérgicos, como isoproterenol, adrenalina, noradrenalina, dopamina ou dobutamina; • peptídeos natriuréticos, como, por exemplo, peptídeo natriurético atrial (ANP, anaritida), peptídeo natriurético tipo B ou peptídeo natriurético cerebral (BNP, nesiritida), peptídeo natriurético tipo C (CNP) ou urodilatina; • sensibilizadores de cálcio, como, por exemplo, e, de preferência, levosimendan; • ativadores independentes de NO e heme de guanilato ciclase solúvel (sGC), por exemplo, e, com preferência, os compostos descritos nos documentos WO 01/19355, WO 01/19776, WO 01/19778, WO 01/19780, WO 02/070462 e WO 02/070510;

• estimuladores dependentes de heme, mas independentes de NO de guanilato ciclase solúvel (sGC), por exemplo, e, com preferência, os compostos descritos nos documentos WO 00/06568, WO 00/06569, WO 02/42301, WO 03/095451, WO 2011/147809, WO 2012/004258, WO 2012/028647 e WO 2012/059549; • agentes, que estimulam a síntese de cGMP, por exemplo, e, com preferência, moduladores de sGC, por exemplo, e, com preferência, riociguat, cinaciguat, vericiguat ou BAY 1101042; • inibidores de elastase de neutrófilos humanos (HNE), como, por exemplo, sivelestate ou DX-890 (Reltran); • compostos que inibem a cascata de transdução de sinal, em particular, inibidores de tirosina e/ou serina/treonina cinase, tais como, por exemplo, nintedanibe, dasatinibe, nilotinibe, bosutinibe, regorafenibe, sorafenibe, sunitinibe, cediranibe, axitinibe, telatinibe, imatinibe, brivanibe, pazopanibe, vatalanibe, gefitinibe, erlotinibe, lapatinibe, canertinibe, lestaurtinibe, pelitinibe, semaxanibe ou tandutinibe; • compostos que influenciam o metabolismo energético do coração, como, por exemplo, e, de preferência, etomoxir, dicloroacetato, ranolazina ou trimetazidina, ou agonistas de receptor de adenosina A1 completo ou parcial como GS‐9667 (anteriormente conhecido como CVT‐3619), capadenosona e bilanato de neladenosona (BAY 1067197); • compostos que influenciam a taxa cardíaca, como, por exemplo, e, de preferência, ivabradina; • ativadores de miosina cardíaca, como, por exemplo, e, de preferência, omecamtiv mecarbil (CK-1827452);

• fármacos anti-inflamatórios, como fármacos anti- inflamatórios não esteroidais (NSAIDs) incluindo ácido acetilsalicílico (aspirina), ibuprofeno e naproxeno, glucocorticoides, como, por exemplo, e, de preferência, prednisona, prednisolona, metilprednisolona, triamcinolona, dexametasona, beclometasona, betametasona, flunisolida, budesonida ou fluticasona, ou derivados de ácido 5-aminossalicílico, antagonistas de leucotrieno, inibidores de TNF-alfa e antagonistas de receptor de quimiocina, como CCR1, 2 e/ou 5 inibidores; • agentes de alteração de metabolismo de gordura, por exemplo, e, de preferência, do grupo de do grupo dos agonistas de receptor de tireoide, inibidores de síntese de colesterol, como por exemplo, e de preferência, HMG- CoA-redutase ou inibidores de síntese de esqualeno, inibidores de ACAT, inibidores de CETP, inibidores de MTP, agonistas de PPAR-alfa, PPAR-gama e/ou PPAR-delta, inibidores de absorção de colesterol, inibidores de lipase, absorventes de ácido biliar poliméricos, inibidores de reabsorção de ácido biliar e antagonistas de lipoproteína(a).

[0109] Os agentes antitrombóticos devem, de preferência, ser entendidos como compostos do grupo de inibidores da agregação de plaquetas, anticoagulantes e substâncias profibrinolíticas.

[0110] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de agregação de plaquetas, por exemplo, e, de preferência, aspirina, clopidogrel, ticlopidina ou dipiridamol.

[0111] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de trombina, por exemplo, e, de preferência, ximelagatrana, dabigatrana, melagatrana, bivalirudina ou enoxaparina.

[0112] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um antagonista de GPIIb/IIIa, por exemplo, e, de preferência, tirofibano ou abciximabe.

[0113] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de fator Xa, por exemplo, e, de preferência, rivaroxabana, apixaban, otamixabana, fidexabana, razaxabana, fondaparinux, idraparinux, DU-176b, PMD-3112, YM-150, KFA-1982, EMD-503982, MCM-17, MLN-1021, DX 9065a, DPC 906, JTV 803, SSR-126512 ou SSR-128428.

[0114] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com heparina ou um derivado de heparina de baixo peso molecular (LMW).

[0115] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um antagonista de vitamina K, por exemplo, e, de preferência, coumarina.

[0116] Os agentes de diminuição de pressão sanguínea devem, de preferência, ser entendidos como compostos do grupo de antagonistas de cálcio, antagonistas de angiotensina AII, inibidores de ACE, inibidores de NEP, inibidores de vasopeptidase, antagonistas de endotelina, inibidores de renina, alfa-bloqueadores, beta-bloqueadores,

antagonistas de receptor de mineralocorticoide e diuréticos.

[0117] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um antagonista de cálcio, por exemplo, e, de preferência, nifedipina, amlodipina, verapamila ou diltiazem.

[0118] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um bloqueador de alfa-1-receptor, por exemplo, e, de preferência, prazosina ou tamsulosina.

[0119] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um beta-bloqueador, por exemplo, e, de preferência, propranolol, atenolol, timolol, pindolol, alprenolol, oxprenolol, penbutolol, bupranolol, metipranolol, nadolol, mepindolol, carazolol, sotalol, metoprolol, betaxolol, celiprolol, bisoprolol, carteolol, esmolol, labetalol, carvedilol, adaprolol, landiolol, nebivolol, epanolol ou bucindolol.

[0120] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um antagonista de receptor de angiotensina AII, por exemplo, e, de preferência, losartana, candesartana, valsartana, telmisartana, irbesartana, olmesartana, eprosartana, embursartana ou azilsartana.

[0121] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de vasopeptidase ou inibidor de endopeptidase neutra (NEP), como, por exemplo, e, de preferência, sacubitril, omapatrilat ou AVE-7688.

[0122] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um antagonista de receptor de angiotensina dupla AII/inibidor de NEP (ARNI), por exemplo, e, de preferência, LCZ696.

[0123] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de ACE, por exemplo, e, de preferência, enalapril, captopril, lisinopril, ramipril, delapril, fosinopril, quinopril, perindopril, benazepril ou trandopril.

[0124] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um antagonista de endotelina, por exemplo, e, de preferência, bosentana, darusentana, ambrisentana, tezosentana, sitaxsentano, avosentana, macitentana ou atrasentana.

[0125] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de resina, por exemplo, e, de preferência, aliscireno, SPP-600 ou SPP-800.

[0126] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um antagonista de receptor de mineralocorticoide, por exemplo, e, de preferência, finerenona, espironolactona, canrenona, canrenoato de potássio, eplerenona, esaxerenona (CS-3150) ou apararenona (MT-3995), CS-3150, ou MT-3995.

[0127] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um diurético, como, por exemplo, e, de preferência, furosemida, bumetanida, piretanida, torsemida, bendroflumetiazida, clorotiazida, hidroclorotiazida, xipamida, indapamida, hidroflumetiazida, meticlotiazida, politiazida, triclorometiazida, clorotalidona, metolazona, quinetazona, acetazolamida, diclorofenamida, metazolamida, glicerina, isosorbida, manitol, amilorida ou triamtereno.

[0128] Os agentes de alteração de metabolismo de gordura devem, de preferência, ser entendidos como compostos do grupo de inibidores de CETP, agonistas do receptor de tireoide, inibidores de síntese de colesterol, como inibidores de HMG-CoA redutase ou inibidores de síntese de esqualeno, os inibidores de ACAT, inibidores de MTP, agonistas de PPAR-alfa, PPAR-gama e/ou PPAR-delta, inibidores de absorção de colesterol, absorventes de ácido biliar poliméricos, inibidores de reabsorção de ácido biliar, inibidores de lipase e antagonistas de lipoproteína(a).

[0129] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de CETP, por exemplo, e, de preferência, dalcetrapib, anacetrapib, vacina BAY 60-5521 ou CETP (Avant).

[0130] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um agonista do receptor de tireoide, por exemplo, e, de preferência, D-tiroxina, 3,5,3'-tri- iodotironina (T3), CGS 23425 ou axitiroma (CGS 26214).

[0131] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de HMG-CoA-redutase da classe de estatinas, por exemplo, e, de preferência, lovastatina, sinvastatina, pravastatina, fluvastatina, atorvastatina, rosuvastatina ou pitavastatina.

[0132] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de síntese de esqualeno, por exemplo, e, de preferência, BMS-188494 ou TAK-475.

[0133] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de ACAT, por exemplo, e, de preferência, avasimiba, melinamida, pactimiba, eflucimiba ou SMP-797.

[0134] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de MTP, por exemplo, e, de preferência, implitapida, R-103757, BMS-201038 ou JTT-130.

[0135] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um agonista de PPAR-gama, por exemplo, e, de preferência, pioglitazona ou rosiglitazona.

[0136] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um agonista de PPAR-delta, por exemplo, e, de preferência, GW 501516 ou BAY 68-5042.

[0137] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de absorção de colesterol, por exemplo, e, de preferência, ezetimiba, tiquesida ou pamaquesida.

[0138] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de lipase, por exemplo, e, de preferência, orlistato.

[0139] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um adsorvente polimérico de ácido de bile, por exemplo, e, de preferência, colestiramina, colestipol, colesolvam, CholestaGel ou colestimida.

[0140] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de reabsorção de ácido biliar, por exemplo, e, de preferência, inibidores de ASBT (= IBAT), como AZD-7806, S-8921, AK-105, BARI-1741, SC-435 ou SC-635.

[0141] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um antagonista de lipoproteína(a), por exemplo, e, de preferência, gencabeno cálcio (CI-1027) ou ácido nicotínico.

[0142] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um antagonista de TGFbeta, a título de exemplo, e, com preferência, pirfenidona ou fresolimumabe.

[0143] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com inibidores de HIF-PH, a título de exemplo, e, com preferência, molidustat ou roxadustat.

[0144] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um antagonista de CCR2, a título de exemplo, e, com preferência, CCX-140.

[0145] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um antagonista de TNF-alfa, a título de exemplo, e, com preferência, adalimumabe.

[0146] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de galectina-3, a título de exemplo, e, com preferência, GCS-100.

[0147] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um agonista de BMP-7, a título de exemplo, e, com preferência, THR-184.

[0148] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um modulador de p53, a título de exemplo, e, com preferência, QPI-1002.

[0149] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de NOX1/4, a título de exemplo, e, com preferência, GKT-137831.

[0150] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um medicamento que afeta o metabolismo de vitamina D, a título de exemplo, e, com preferência, colecalciferol ou paracalcitol.

[0151] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um agente citostático, a título de exemplo, e, com preferência, ciclofosfamida.

[0152] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um agente imunossupressor, a título de exemplo, e, com preferência, ciclosporina.

[0153] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um ligante de fosfato, a título de exemplo, e, com preferência, sevelamer ou carbonato de lantânio.

[0154] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um calcimimético para terapia de hiperparatiroidismo.

[0155] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com agentes para terapia de déficit de ferro, a título de exemplo, e, com preferência, produtos de ferro.

[0156] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com os agentes para a terapia de hiperuricemia, a título de exemplo, e, com preferência, alopurinol ou rasburicase.

[0157] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com hormônio de glicoproteína para a terapia de anemia, a título de exemplo, e, com preferência, eritropoietina.

[0158] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com produtos biológicos para terapia imune, a título de exemplo, e, com preferência, abatacepte, rituximabe, eculizumabe ou belimumabe.

[0159] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com os inibidores de Jak, a título de exemplo, e, com preferência, ruxolitinibe, tofacitinibe, baricitinibe, CYT387, GSK2586184, lestaurtinibe, pacritinibe (SB1518) ou TG101348.

[0160] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com análogos de prostaciclina para terapia de microtrombos.

[0161] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com uma terapia alcalina, a título de exemplo, e, com preferência, bicarbonato de sódio.

[0162] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de mTOR, a título de exemplo, e, com preferência, everolimo ou rapamicina.

[0163] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de NHE3, a título de exemplo, e, com preferência, AZD1722.

[0164] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de eNOS, a título de exemplo, e, com preferência, sapropterina.

[0165] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com um inibidor de CTGF, a título de exemplo, e, com preferência, FG-3019.

[0166] Em uma modalidade preferencial da invenção, os compostos de acordo com a invenção são administrados em combinação com antidiabéticos (agentes hipoglicêmicos ou anti-hiperglicêmicos), como, por exemplo, e preferivelmente, insulina e derivados, sulfonilureias como tolbutamida, carbutamida, acetohexamida, clorpropamida, glipizida, gliclazida, glibenclamida, gliburida, glibornurida, gliquidona, glisoxepida, gliclopiramida, glimepirida, JB253 e JB558, meglitinidas como repaglinida e nateglinida, biguanidas como metformina e buformina, tiazolidinadionas como rosiglitazona e pioglitazona, inibidores de alfa-glicosidase tais como miglitol, acarbose e voglibose, inibidores de DPP4 como vildagliptina, sitagliptina, saxagliptina, linagliptina, alogliptina, septagliptina e teneligliptina, análogos de GLP-1 como exenatide (também exendina-4, liraglutida, lixisenatida e taspoglutida ou inibidores de SGLT (gliflozinas) como canagliflozina, dapagliflozina e empagliflozina.

[0167] Em uma modalidade particularmente preferencial, os compostos da presente invenção são administrados em combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais selecionados a partir do grupo que consiste em diuréticos, antagonistas de angiotensina AII, inibidores de ACE, bloqueadores de beta-receptor, antagonistas de receptor de mineralocorticoide, antidiabéticos, nitratos orgânicos e doadores de NO, ativadores e estimuladores do guanilato ciclase solúvel (sGC) e agentes inotrópicos positivos.

[0168] Em uma modalidade particularmente preferencial adicional, os compostos da presente invenção são administrados em combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais selecionados a partir do grupo que consiste em diuréticos, antagonistas de angiotensina AII, inibidores de ACE, bloqueadores de beta-receptor, antagonistas de receptor de mineralocorticoide, antibiabéticos, nitratos orgânicos e doadores, ativadores e estimuladores de NO do guanilato ciclase solúvel (sGC), agentes inotrópicos positivos, agentes anti-inflamatórios, agentes imunossupressores, aglutinantes de fosfato e/ou compostos que modulam o metabolismo de vitamina D.

[0169] Desse modo, em uma modalidade adicional, a presente invenção se refere a composições farmacêuticas que compreendem pelo menos um dos compostos de acordo com a invenção e um ou mais agentes terapêuticos adicionais para o tratamento e/ou a prevenção de doenças, especialmente das doenças mencionadas acima.

[0170] Além disso, os compostos da presente invenção podem ser utilizados, como tal ou em composições, em pesquisa e diagnóstico ou como padrões de referência analítica e similares, que são bem conhecidos no assunto.

[0171] Quando os compostos da presente invenção são administrados como agentes farmacêuticos, a seres humanos e outros mamíferos, podem ser dados per se ou como uma composição farmacêutica contendo, por exemplo, 0,1 % a 99,5 % (mais preferivelmente, 0,5 % a 90 %) de ingrediente ativo em combinação com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

[0172] Assim, em um outro aspecto, a presente invenção se refere a composições farmacêuticas compreendendo pelo menos um dos compostos de acordo com a invenção, convencionalmente juntamente com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis inertes não tóxicos, e ao uso das mesmas para o tratamento e/ ou prevenção de doenças, especialmente das doenças mencionadas anteriormente.

[0173] É possível que os compostos de acordo com a invenção tenham atividade sistêmica e/ou local. Para esse propósito, eles podem ser administrados de maneira adequada, como, por exemplo, via oral, parenteral, pulmonar, nasal, sublingual, lingual, bucal, retal, vaginal, dérmica, transdérmica, conjuntival, ou como um implante ou stent.

[0174] Para estas vias de administração, é possível que os compostos de acordo com a invenção sejam administrados em formas de administração adequadas.

[0175] Para administração oral, é possível formular os compostos de acordo com a invenção para formas farmacêuticas conhecidas na técnica que liberam os compostos da invenção rapidamente e/ou de um modo modificado, tal como, por exemplo, comprimidos (comprimidos não revestidos ou revestidos, por exemplo, com revestimentos de liberação entérica ou controlada que se dissolvem com um atraso ou são insolúveis), comprimidos de desintegração oral, filmes/bolachas, filmes/liofilizados, cápsulas (por exemplo, cápsulas de gelatina dura ou mole), comprimidos revestidos de açúcar, grânulos, péletes, pós, emulsões, suspensões, aerossóis ou soluções. É possível incorporar os compostos de acordo com a invenção na forma cristalina e/ou amorfisada e/ou dissolvida nas ditas formas farmacêuticas.

[0176] A administração parenteral pode ser efetuada evitando uma etapa de absorção (por exemplo, intravenosa, intra-arterial, intracardíaca, intraespinal ou intralombar) ou com inclusão de absorção (por exemplo, intramuscular, subcutânea, intracutânea, percutânea ou intraperitoneal). As formas de administração que são adequadas para administração parenteral são, entre outros, preparações para injeção e infusão na forma de soluções, suspensões, emulsões, liofilizados ou pós estéreis.

[0177] Os exemplos que são adequados para outras vias de administração são formas farmacêuticas para inalação [entre outros, inaladores de pó, nebulizadores], gotas nasais, soluções nasais, aspersores nasais; comprimidos/filmes/pastilhas/cápsulas para administração lingual, sublingual ou bucal; supositórios; colírios, pomadas para os olhos, banhos nos olhos, insertos oculares, gotas auriculares, aspersores auriculares, pós auriculares, enxágues auriculares, tampões auriculares; cápsulas vaginais, suspensões aquosas (loções, mixturae agitandae), suspensões lipofílicas, emulsões, pomadas, cremes, sistemas terapêuticos transdérmicos (como, por exemplo, emplastros), leite, pastas, espumas, pós pulverulentos, implantes ou stents.

[0178] Os compostos de acordo com a invenção podem ser incorporados nas formas de administração indicadas. Isto pode ser efetuado de um modo conhecido por si mesmo por meio da mistura com excipientes farmaceuticamente adequados. Excipientes farmaceuticamente adequados incluem, entre outros,

• cargas e carreadores (por exemplo, celulose, celulose microcristalina (como, por exemplo, Avicel®), lactose, manitol, amido, fosfato de cálcio (como, por exemplo, Di-Cafos®)), • bases de pomada (por exemplo, vaselina, parafinas, triglicerídeos, ceras, cera de lã, álcoois de cera de lã, lanolina, pomada hidrofílica, polietilenoglicóis), • bases para supositórios (por exemplo, polietileno glicóis, manteiga de cacau, gordura dura), • solventes (por exemplo, água, etanol, iso-propanol, glicerol, propileno glicol, óleos de ácido graxo de triglicerídeos de comprimento de cadeia média, polietileno glicóis líquidos, parafinas), • tensoativos, emulsificantes, dispersantes ou umidificantes (por exemplo, dodecil sulfato de sódio), lecitina, fosfolipídeos, álcoois graxos (como, por exemplo, Lanette®), ésteres de ácido graxo de sorbitano (como, por exemplo, Span®), ésteres de ácido graxo de polioxietileno sorbitano (como, por exemplo, Tween®), glicerídeos de ácido graxo de polioxietileno (como, por exemplo, Cremophor®), ésteres de ácido graxo de polioxetileno, éteres de álcool graxo de polioxietileno, ésteres de ácido graxo de glicerol, poloxâmeros (como, por exemplo, Pluronic®), • tampões, ácidos e bases (por exemplo, fosfatos, carbonatos, ácido cítrico, ácido acético, ácido clorídrico, solução de hidróxido de sódio, carbonato de amônio, trometamol, trietanolamina), • agentes de isotonicidade (por exemplo, glicose, cloreto de sódio),

• agentes absorventes (por exemplo, sílicas altamente dispersas), • agentes de aumento de viscosidade, formadores de gel, espessantes e/ou ligantes (por exemplo, polivinilpirrolidona, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, hidroxipropilcelulose, carboximetilcelulose sódica, amido, carbômeros, ácidos poliacrílicos (como, por exemplo, Carbopol®); alginatos, gelatina), • desintegrantes (por exemplo, amido modificado, carboximetilcelulose sódica, amido glicolato sódico (como, por exemplo, Explotab®), polivinilpirrolidona reticulada, croscarmelose sódica (como, por exemplo, AcDiSol®)), • reguladores de fluxo, lubrificantes, deslizantes e agentes de liberação de bolor (por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico, talco, sílicas altamente dispersas (como, por exemplo, Aerosil®)), • materiais de revestimento (por exemplo, açúcar, goma- laca) e formadores de filme para filmes ou membranas de difusão que se dissolvem rapidamente ou de uma maneira modificada (por exemplo polivinilpirrolidonas (como, por exemplo, Kollidon®), álcool polivinílico, hidroxipropilmetilcelulose, hidroxipropilcelulose, etilcelulose, ftalato de hidroxipropilmetilcelulose, acetato de celulose, ftalato de acetato de celulose, poliacrilatos, polimetacrilatos, como, por exemplo, Eudragit®)), • materiais de cápsula (por exemplo, gelatina, hidroxipropilmetilcelulose),

• polímeros sintéticos (por exemplo, polilactídeos, poliglicolídeos, poliacrilatos, polimetacrilatos (como, por exemplo, Eudragit®), polivinilpirrolidonas (como, por exemplo, Kollidon®), álcoois polivinílicos, acetatos de polivinila, óxidos de polietileno, polietileno glicóis e seus copolímeros e copolímeros em bloco), • plastificantes (por exemplo, polietilenoglicóis, propilenoglicol, glicerol, triacetina, citrato de triacetila, ftalato de dibutila), • melhoradores de penetração, • estabilizantes (por exemplo, antioxidantes, como, por exemplo, ácido ascórbico, palmitato de ascorbila, ascorbato de sódio, butil-hidroxianisol, butil- hidroxitolueno, galato de propila), • conservantes (por exemplo, parabenos, ácido sórbico, tiomersal, cloreto de benzalcônio, acetato de clorexidina, benzoato de sódio), • corantes (por exemplo, pigmentos inorgânicos, como, por exemplo, óxidos de ferro, dióxido de titânio), • aromatizantes, adoçantes, agentes de mascaramento de sabores e/ou odores.

[0179] A presente invenção se refere adicionalmente a uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um composto de acordo com a invenção, convencionalmente em conjunto com um ou mais excipientes (ou excipiente) farmaceuticamente adequados, e a seu uso de acordo com a presente invenção.

[0180] Baseado em técnicas laboratoriais padrão conhecidas para avaliar compostos úteis para o tratamento de doenças cardiovasculares e renais, por testes padrão de toxicidade e por ensaios farmacológicos padrão para a determinação do tratamento das condições identificadas acima em mamíferos, e pela comparação destes resultados com os resultados de ingredientes ativos conhecidos ou medicamentos que são usados para tratar estas condições, a dosagem eficaz dos compostos da presente invenção pode ser prontamente determinada para o tratamento de cada indicação desejada. A quantidade do ingrediente ativo a ser administrado no tratamento de uma destas condições pode variar amplamente de acordo com considerações tais como o composto particular e a unidade de dosagem utilizada, o modo de administração, o período de tratamento, a idade e o sexo do paciente tratado, e a natureza e extensão da condição tratada.

[0181] A quantidade total do ingrediente ativo a ser administrado variará geralmente desde cerca de 0,001 mg/kg até cerca de 200 mg/kg de peso corporal ao dia, e preferivelmente, desde cerca de 0,01 mg/kg até cerca de 20 mg/kg de peso corporal ao dia. Os esquemas de dosagem clinicamente úteis variarão de uma dosagem de uma a três vezes ao dia a uma vez a cada quatro semanas. Além disso, é possível que “férias de remédios”, em que um paciente não é dosado com um fármaco durante um certo período de tempo, sejam benéficas para o equilíbrio global entre o efeito farmacológico e a tolerabilidade. É possível que uma dosagem unitária contenha desde cerca de 0,5 mg até cerca de 1500 mg de ingrediente ativo, e possa ser administrada uma ou mais vezes ao dia ou menos de uma vez ao dia. A dose diária média para administração por injeção, incluindo injeções intravenosas, intramusculares, subcutâneas e parenterais, e o uso de técnicas de infusão será preferivelmente desde 0,01 até 200 mg/kg de peso corporal total. Ilustrativamente, o composto da presente invenção pode ser administrado parenteralmente em uma dose de cerca de 0,001 mg/kg a cerca de 10 mg/kg, preferivelmente de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 1 mg/kg de peso corporal. Na administração oral, uma faixa de dose exemplar é de cerca de 0,01 a 100 mg/kg, preferivelmente cerca de 0,01 a 20 mg/kg, e mais preferivelmente cerca de 0,1 a 10 mg/kg de peso corporal. Faixas intermediárias para os valores ditos acima, também se destinam a ser parte da invenção.

[0182] Claro que o regime específico de dosagem inicial e continuada para cada paciente variará de acordo com a natureza e gravidade da condição, conforme determinado pelo médico assistente, a atividade do composto específico utilizado, a idade e condição geral do paciente, tempo de administração, via de administração, taxa de excreção do fármaco, combinações de fármacos e semelhantes. O modo de tratamento desejado e o número de doses de um composto da presente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster ou composição do mesmo podem ser averiguados pelos técnicos no assunto usando testes de tratamento convencionais.

[0183] As seguintes modalidades exemplificativas ilustram a invenção. A invenção não está restrita aos exemplos.

[0184] As porcentagens nos seguintes testes e exemplos são, exceto se indicado de outro modo, em peso; são partes em peso. As razões de solvente, razões de diluição e concentrações relatadas para soluções líquido/líquido são baseadas em volume.

SEÇÃO EXPERIMENTAL SEÇÃO EXPERIMENTAL - PARTE GERAL

[0185] As formas de pico de RMN são indicadas como aparecem nos espectros, possíveis efeitos de ordem superior não foram considerados.

[0186] Os nomes químicos foram gerados com uso do software ACD/Nome de ACD/labs. Em alguns casos, os nomes geralmente aceitos de reagentes comercialmente disponíveis foram usados no lugar de nomes gerados por ACD/Nome.

[0187] A seguinte tabela 1 lista as abreviaturas usadas nesse parágrafo e na seção de Exemplos desde que não sejam explicadas no corpo do texto. Outras abreviaturas têm seus significados comuns per se à pessoa versada. Tabela 1: Abreviaturas

[0188] A seguinte tabela lista as abreviaturas usadas no presente documento. Abreviatura Significado abs absoluto l largo (sinal de 1H-RMN) conc. concentrado CI ionização química d dupleto (sinal de 1H-RMN) d dia(s) DAD detector de arranjo de diodo DCM diclorometano dd duplo-dupleto Periodinano de 1,1,1-Triacetoxi-1,1-di-hidro-1,2- Dess-Martin benziodoxol-3(1H)-ona

DMSO dimetilsulfóxido ESI Ionização por eletropulverização (ES) h hora(s) HATU 3-Óxido hexafluorofosfato de 1- [bis(dimetilamino)metileno]-1H-1,2,3- triazolo[4,5-b]piridínio HPLC cromatografia líquida de alta eficiência LC-MS espectrometria de massa e cromatografia líquida m multipleto (sinal de 1H-RMN)

min minuto(s) MS espectrometria de massa MTBE metil-terc-butiléter NMR espectroscopia por ressonância magnética nuclear: desvios químicos (δ) são determinados em ppm.

Os desvios químicos foram corrigidos pela definição do sinal de DMSO para 2,50 ppm salvo se indicado de outro modo. teórico de teoria PDA Matriz de Fotodiodo Rt tempo de retenção (como medido com HPLC ou UPLC) em minutos s singleto (sinal de 1H-RMN)

SFC Cromatografia de Fluido Supercrítica SQD Detector Quadrupolar Único t tripleto (sinal de 1H-RMN)

td triplo-dupleto (sinal de 1H-RMN)

TFA ácido trifluoroacético THF tetra-hidrofurano UPLC cromatografia líquida de ultra desempenho

[0189] Os vários aspectos da invenção descritos neste pedido são ilustrados pelos seguintes exemplos que não pretendem limitar a invenção de qualquer forma.

[0190] Os experimentos de teste de exemplo no presente documento descritos servem para ilustrar a presente invenção e a invenção não está limitada aos exemplos dados.

[0191] Todos os reagentes, para os quais a síntese não é descrita na parte experimental, estão comercialmente disponíveis, ou são compostos conhecidos ou podem ser formados a partir de compostos conhecidos por métodos conhecidos por um técnico no assunto.

[0192] Os compostos e intermediários produzidos de acordo com os métodos da invenção podem requerer purificação. A purificação de compostos orgânicos é bem conhecida para o técnico no assunto e pode haver diversas formas de purificar o mesmo composto. Em alguns casos, nenhuma purificação pode ser necessária. Em alguns casos, os compostos podem ser purificados por cristalização. Em alguns casos, as impurezas podem ser retiradas por agitação usando um solvente adequado. Em alguns casos, os compostos podem ser purificados por cromatografia, particularmente cromatografia de coluna flash, com uso, por exemplo, de cartuchos de gel de sílica pré-embalados, por exemplo, cartuchos Biotage SNAP KP-Sil® ou KP-NH® em combinação com um sistema de autopurificador de Biotage (SP4® ou Isolera Four®) e eluentes como gradientes de acetato de etila/hexano ou DCM/metanol. Em alguns casos, os compostos podem ser purificados por HPLC preparativa com uso, por exemplo, de um autopurificador Waters equipado com um detector de matriz de diodo e/ou espectrômetro de massa de ionização por eletropulverização on-line em combinação com uma coluna de fase inversa pré-embalada adequada e eluentes, como gradientes de água e acetonitrila que podem conter aditivos, como ácido trifluoroacético, ácido fórmico ou amônia aquosa.

[0193] Em alguns casos, os métodos de purificação descritos acima podem proporcionar aqueles compostos da presente invenção que possuem uma funcionalidade suficientemente básica ou ácida na forma de um sal, tal como, no caso de um composto da presente invenção que é suficientemente básico, um sal de trifluoroacetato ou formato, por exemplo, ou, no caso de um composto da presente invenção que é suficientemente ácido, um sal de amônio, por exemplo. Um sal desse tipo pode ser transformado na sua forma de base livre ou ácido livre, respectivamente, por vários métodos conhecidos do técnico no assunto, ou ser usado como sais em ensaios biológicos subsequentes. Deve ser entendido que a forma específica (por exemplo, sal, base livre, etc.) de um composto da presente invenção conforme isolado e como no presente documento descrito não é necessariamente a única forma em que o dito composto pode ser aplicado a um ensaio biológico a fim de quantificar a atividade biológica específica.

[0194] No caso dos intermediários de síntese e dos exemplos de trabalho da invenção descritos doravante no presente documento, qualquer composto especificado na forma de um sal da base ou ácido correspondente é em geral um sal de composição estequiométrica exata desconhecida, como obtido pelo respectivo processo de preparação e/ou purificação. Salvo se especificado em maiores detalhes, as adições aos nomes e fórmulas estruturais, como “cloridrato”, “trifluoroacetato”, “sal de sódio”, “sal de potássio”, "sal de dipotássio", "fosfato de hidrogênio", "fosfato" ou “x HCl”, “x CF3COOH”, “x Na+”, “x K+”, “x Ca2+”, “x Mg2+” não devem ser, portanto, entendidas em um sentido estequiométrico no caso de tais sais, mas não têm caráter meramente descritivo em relação aos componentes de formação de sal presentes no presente documento.

[0195] Isso se aplica correspondentemente se intermediários de síntese ou exemplos de trabalho ou sais dos mesmos foram obtidos na forma de solvatos, por exemplo hidratos, de composição estequiométrica desconhecida (se os mesmos forem de um tipo definido) pelos processos de preparação e/ou purificação descritos. Métodos HPLC e LC-MS: Método 1 (LC-MS)

[0196] Instrumento: Sistema Waters ACQUITY SQD UPLC; Coluna: Waters Acquity UPLC HSS T3 1,8 µ 50 x 1 mm; eluente A: 1 l de água + 0,25 ml de ácido fórmico a 99 %, eluente B: 1 l de acetonitrila + 0,25 ml de ácido fórmico a 99 %; gradiente: 0,0 min 90 % de A → 1,2 min 5 % de A → 2,0 min 5 % de A; forno: 50 °C; taxa de fluxo: 0,40 ml/min; detecção UV: 208-400 nm. Método 2 (LC-MS):

[0197] Instrumento MS: Thermo Scientific FT-MS; Tipo de instrumento UHPLC+: Thermo Scientific UltiMate 3000;

Coluna: Waters, HSST3, 2,1 x 75 mm, C18 1,8 µm; eluente A: 1 l de água + ácido fórmico a 0,01 %; eluente B: 1 l de acetonitrila + 0,01 % de ácido fórmico; gradiente: 0,0 min 10 % de B → 2,5 min 95 % de B → 3,5 min 95 % de B; forno: 50 °C; taxa de fluxo: 0,90 ml/min; detecção UV: 210 nm/ caminho de integração ótimo 210-300 nm. Método 3 (LC-MS):

[0198] Instrumento: Agilent MS Quad 6150; HPLC: Agilent 1290; Coluna: Waters Acquity UPLC HSS T3 1,8 µ 50 x 2,1 mm; eluente A: 1 l de água + 0,25 ml de ácido fórmico a 99 %, eluente B: 1 l de acetonitrila + 0,25 ml de ácido fórmico a 99 %; gradiente: 0,0 min 90 % de A → 0,3 min 90 % de A → 1,7 min 5 % de A → 3,0 min 5 % de A; forno: 50 °C; fluxo: 1,20 ml/min; detecção UV: 205 – 305 nm. Método 4 (HPLC preparativa):

[0199] Coluna: Chromatorex ou Reprosil C18 10 µm, 125 x 30 mm; eluente A: água + 0,1 % de ácido fórmico, eluente B: acetonitrila + 0,1 % de ácido fórmico; gradiente: 3 min 10 % de B, 17,5 min 95 % de B, 19,5 min 100 % de B, 20 min 10 % de B; fluxo: 75 ml/min; tempo de execução: 20 min; detecção a 210 nm. Método 5 (LC-MS):

[0200] Instrumento: Sistam Waters Single Quad MS; Instrument Waters UPLC Acquity; Coluna: Waters BEH C18 1,7 µm 50 x 2,1 mm; eluente A: 1 l de água + 1,0 ml (solução de amônia aquosa, 25 %)/l, eluente B: 1 l de acetonitrila; gradiente: 0,0 min 92 % de A → 0,1 min 92 % de A → 1,8 min 5 % de A → 3,5 min 5 % de A; forno: 50 °C; fluxo: 0,45 ml/min; detecção UV: 210 nm (208-400 nm). Micro-ondas

[0201] O reator de micro-onda usado foi um sistema de micro-onda de Iniciador+ com robô sessenta de Biotage®. Difratometria de raios X

[0202] Difratômetro de transmissão PANalytical X`Pert PRO com contador PIXcel (multicanal): radiação: cobre, K alfa Monocromador primário: foco em espelho de raios X comprimento de onda (K1): 1,5406 Å comprimento de onda (K2): 1,5444 Å parâmetros de gerador: 40 kV, 40 mA faixa de medição: 2-38° condições de ambiente: 25 °C, 40 – 60 % de ur Termogravimetria

[0203] TGA 7 Analisador Termogravimétrico; fabricante: Perkin-Elmer; taxa de aquecimento: 10 Kmin-1; gás de purga: nitrogênio, 20-30 ml/min; cadinho: cadinho de Alumínio aberto; preparação de amostra: nenhuma. Espectros Infravermelhos

[0204] Espectrômetro Bruker Tensor 37; resolução espectral 2 cm-1; número de medições individuais 64; faixa de número de onda 4000-550 cm-1; preparação de amostra: nenhuma. SEÇÃO EXPERIMENTAL - MATERIAIS DE PARTIDA E INTERMEDIÁRIOS Exemplo 1A {3-(4-Clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2- hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1- il}acetonitrila

O HO F N N F F

N N Cl

[0205] Em um vaso de reação de 2 l, 100 g (273 mmol) de ácido {3-(4-clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2- hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1-il}acético (síntese descrita como Exemplo 8A no documento WO 2010/105770-A1), 43,3 g (547 mmol) de piridina e 33 mg (0,3 mmol) de 4-dimetilaminopiridina foram dissolvidos em 300 ml de THF. A solução resultante foi tratada a 5 °C com 52,8 g (438 mmol) de 2,2-dimetilpropanoilcloreto por 15 minutos e a mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente por 2,5 horas. Após o resfriamento a 0 °C, 183 ml de 28 % de solução de amônia aquosa foram adicionados por 1 h enquanto a temperatura de solução foi mantida entre 10 °C e 20 °C e na mistura resultante, desse modo, agitada a 5 °C por um período de tempo adicional de 1 h. 500 ml de metil terc-butiléter e 300 ml de ácido cítrico aquoso a 20 % foram, desse modo, adicionados enquanto mantêm a temperatura interna entre 10 °C e 20 °C. As fases foram separadas e a fase orgânica foi lavada com 300 ml de ácido cítrico aquoso a 20 % seguido de 300 ml de solução de hidrogenocarbonato de sódio aquosa saturada e, por fim, com 300 ml de solução de cloreto de sódio aquoso a 10 %. A fase orgânica foi evaporada a 60 °C sob pressão reduzida até um resíduo oleoso ser obtido. 300 ml de THF foram, então,

adicionados e a solução foi evaporada novamente até uma solução oleosa ter sido obtida. Essa operação foi repetida uma segunda vez. O resíduo oleoso foi retomado em 360 ml de THF e tratado com 172 g (820 mmol) de anidrido de ácido trifluoroacético por 20 min a uma temperatura entre 10 °C e 20 °C. A solução resultante foi, desse modo, agitada à temperatura ambiente por 1 h. 720 ml de 4-metil-2-pentanona e 650 ml de solução de hidróxido de sódio aquosa a 7,5 % foram adicionados a uma temperatura entre 10 °C e 20 °C. Por fim, o valor de pH foi ajustado para pH = 9,5 com uso da solução de hidróxido de sódio aquosa a 7,5 %. Após a separação de fase, a fase orgânica foi lavada duas vezes com 450 ml de solução aquosa de cloreto de sódio a 10 %. A fase orgânica foi evaporada a uma temperatura de 80 °C sob pressão reduzida enquanto 1200 ml de n-heptano foi adicionado. A suspensão formada foi resfriada a 20 °C e um sólido formado que foi filtrado e lavado com 200 ml de n- heptano e, então, seco sob pressão reduzida (50 °C, 0,003 MPa (30 mbar)) produzindo 88 g (93 % teórico) de {3-(4- clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2-hidroxipropil]- 4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1-il}acetonitrila como um sólido.

[0206] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 7,78 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 6,91 (d, 1H), 5,17 (s, 2 H), 4,34-4,23 (m, 1 H), 3,98 (dd, 1H), 3,81 (dd, 1H). Exemplo 2A 2-{3-(4-Clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2- hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1- il}etanimidato de metila

[0207] Em um vaso de reação de 4 l, 200 g (576,9 mmol) de {3-(4-clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2- hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1- il}acetonitrila (Exemplo 1A) em 1600 ml de metanol foram tratados com 5,2 g (28 mmol) de metanolato de sódio (30 % em metanol) e a mistura resultante foi agitada a 50 °C por 2,5 horas. A solução foi, então, evaporada a 50 °C sob pressão reduzida até uma solução oleosa ser obtida. 2000 ml de metil terc-butiléter foram adicionados e a solução foi concentrada até um volume de 800 ml ser alcançado. 3000 ml de n-heptano foram, então, adicionados e uma suspensão foi formada. Após o resfriamento a 20 °C, o sólido foi filtrado e lavado com 500 ml de n-heptano e, então, seco sob pressão reduzida (50 °C, 0,003 MPa (30 mbar)) produzindo 175 g (80 % teórico) de 2-{3-(4-clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3- trifluoro-2-hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1- il}etanimidato de metila como um sólido.

[0208] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 8,01 (s, 1H), 7,78 (d, 2H), 7,62 (d, 2H), 6,93 (br. s, 1H), 4,50 (s, 2 H), 4,35-4,23 (m, 1 H), 3,96 (dd, 1H), 3,81 (dd, 1H), 3,67 (s, 3 H). Exemplo 3A 3-({3-(4-Clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2-

hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1-il}metil)-1- [3-(trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4-triazol-5- carboxilato de metila

O HO F O N N N F F N

N H 3C O N

F N F

F Cl

[0209] Uma solução de 1,0 g de 2-{3-(4-clorofenil)-5- oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2-hidroxipropil]-4,5-di-hidro- 1H-1,2,4-triazol-1-il}etanimidato de metila (Exemplo 2A, 2,64 mmol) em 20 ml de 1,4-dioxano foi resfriada a 10 °C e, então, tratada com 388 mg (3,17 mmol) de cloro-oxoacetato de metila e 0,55 ml (3,18 mmol) de N,N-di- isopropiletilamina. A mistura resultante foi, desse modo, agitada por 30 min. Uma solução pré-agitada de 1,10 g (3,17 mmol) de sal de 2-hidrazino-3- (trifluorometil)piridina 4-metilbenzenossulfonato (1:1), 0,65 ml (3,72 mmol) de N,N-di-isopropiletilamina e 506 mg (3,19 mmol) de sulfato de cobre (II) anidro em 10 ml de 1,4-dioxano foram adicionados à mistura de reação e a mistura resultante foi, desse modo, agitada durante a noite à temperatura ambiente. A água foi, então, adicionada e a fase aquosa foi extraída com acetato de etila, as fases orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa de cloreto de sódio, secas com sulfato de magnésio e evaporadas em vácuo produzindo 777 mg (50 % teórico) do composto de título como um sólido.

[0210] LC-MS (Método 1): Rt = 1,00 min; MS (ESIpos): m/z = 592,6 [M+H]+

[0211] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 8,93 (d, 1H), 8,60 (dd, 1H), 7,98 (dd, 1H), 7,75 (d, 2H), 7,67-7,57 (m, 2H), 6,91 (d, 1H), 5,22 (s, 2H), 4,37-4,22 (m, 1H), 4,10-3,97 (m, 1H), 3,85 (dd, 1H), 3,77 (s, 3H). Exemplo 4A 3-({3-(4-clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2- hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1-il}metil)-1- [3-(trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4-triazol-5- carboxamida

O HO F O N N N F F

N N H 2N N

F N F

F Cl

[0212] 1,80 g de 3-({3-(4-Clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)- 3,3,3-trifluoro-2-hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4- triazol-1-il}metil)-1-[3-(trifluorometil)piridin-2-il]-1H- 1,2,4-triazol-5-carboxilato de metila (Exemplo 3A, 3,04 mmol) foram dissolvidos em 10,0 ml de uma solução aquosa (7n em metanol, 70,0 mmol). A mistura resultante foi agitada por 1 h à temperatura ambiente. O solvente foi removido em vácuo e o produto bruto foi purificado por HPLC preparativa (Método 4). A liofilização do produto que contém as frações produziu 1,49 g (85 % teórico) do composto de título como um sólido.

[0213] LC-MS (Método 3): Rt = 1,20 min; MS (ESIpos): m/z = 577 [M+H]+

[0214] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 8,87 (d, 1H), 8,51 (d, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,99 (s, 1H), 7,90 (dd, 1H), 7,82-7,68 (m, 2H), 7,63 (d, 2H), 6,90 (s, 1H), 5,22- 5,07 (m, 2H), 4,29 (s l, 1H), 4,16-3,94 (m, 1H), 3,85 (dd, 1H). Exemplo 5A 3-({3-(4-Clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2- hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1-il}metil)-1- [2-(trifluorometil)fenil]-1H-1,2,4-triazol-5-carboxilato de metila

[0215] Sob argônio, uma solução de 150 mg (0,40 mmol) de metil-2-{3-(4-clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2- hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1- il}etanimidato (Exemplo 2A) em 3 ml THF anidro foi tratada a 0 °C com 75 µl (0,44 mmol) de N,N-di-isopropiletilamina e 40 µl (0,44 mmol) de cloro-oxoacetato de metila e a mistura foi, desse modo, agitada a 0 °C por 30 min. 93 mg (0,44 mmol) de [2-(trifluorometil)fenil]hidrazina foram, desse modo, adicionados, seguido de 145 µl (0,83 mmol) de N,N-di-isopropiletilamina. A mistura resultante foi agitada por 2 h à temperatura ambiente, seguido de 1 h a 120 °C no micro-ondas e, então, evaporada. O resíduo obtido foi purificado por HPLC preparativa (Método 4) produzindo 75 mg

(32 % teórico) do composto de título.

[0216] LC-MS (Método 2): Rt = 2,01 min; MS (ESIpos): m/z = 591,1 [M+H]+

[0217] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 8,07-7,56 (m, 8H), 6,91 (d, 1H), 5,17 (d, 2H), 4,37-4,21 (m, 1H), 4,09-3,80 (m, 2H), 3,74 (s, 3H). Exemplo 6A 3-({3-(4-clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2- hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1-il}metil)-1- [2-(trifluorometil)fenil]-1H-1,2,4-triazol-5-carboxamida

[0218] Uma mistura de 55 mg (0,093 mmol) de 3-({3-(4- clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2-hidroxipropil]- 4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1-il}metil)-1-[2- (trifluorometil)fenil]-1H-1,2,4-triazol-5-carboxilato de metila (Exemplo 5A) em uma solução aquosa (7n em metanol, 0,8 ml, 5,6 mmol) foi agitada durante a noite à temperatura ambiente e a mistura foi, então, evaporada. O resíduo obtido foi purificado por HPLC preparativa (Método 4) produzindo 55 mg (quant.) do composto de título.

[0219] LC-MS (Método 2): Rt = 1,77 min; MS (ESIpos): m/z = 576,1 [M+H]+

[0220] 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 8,23 (s, 1H), 8,00-7,55 (m, 9H), 6,90 (d, 1H), 5,22-5,01 (m, 2H),

4,40-4,18 (m, 1H), 4,10-3,76 (m, 2H). Exemplo 7A 3-({3-(4-Clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2- hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1-il}metil)-1- (3-cloropiridin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-5-carboxilato de metila

[0221] Uma solução de 150 mg de metil-2-{3-(4- clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2-hidroxipropil]- 4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1-il}etanimidato (Exemplo 2A, 26,4 mmol) em 3 ml de THF foi resfriada a 0 °C e, então, tratada com 58,2 mg (0,48 mmol) de cloro-oxoacetato de metila e 275 µl (1,58 mmol) de N,N-di-isopropiletilamina. A mistura resultante foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada por 1 h e resfriada novamente a 0 °C. 62,6 mg (0,436 mmol) de 3-cloro-2-hidrazinopiridina foram, desse modo, adicionados e a mistura de reação foi aquecida até a temperatura ambiente e, então, agitada por 1 h, seguido de 1 h a 120 °C em um frasco vedado sob irradiação de micro- ondas. O produto bruto foi purificado por HPLC preparativa (Método 4). A liofilização das frações contendo produto propiciou 25,3 mg (11 % teórico) do composto do título.

[0222] LC-MS (Método 2): Rt = 1,82 min; MS (ESIpos): m/z = 558,1[M+H]+

[0223] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 8,70-8,24 (m, 2H), 7,89-7,56 (m, 5H), 6,92 (d, 1H), 5,22 (s, 2H), 4,46-4,20 (m, 1H), 3,79 (s, 5H). Exemplo 8A 3-({3-(4-Clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2- hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4-triazol-1-il}metil)-1- (3-cloropiridin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-5-carboxamida

[0224] 5,1 g de 3-({3-(4-Clorofenil)-5-oxo-4-[(2S)- 3,3,3-trifluoro-2-hidroxipropil]-4,5-di-hidro-1H-1,2,4- triazol-1-il}metil)-1-(3-cloropiridin-2-il)-1H-1,2,4- triazol-5-carboxilato de metila (Exemplo 7A, 9,134 mmol) foram dissolvidos em 42,5 ml de uma solução aquosa (7n em metanol, 297 mmol). A mistura resultante foi agitada por 2 h à temperatura ambiente. A solução foi, então, vertida em gelo e a mistura agitada por 10 min. O precipitado foi filtrado e lavado com água, que produziu 3,5 g de produto bruto. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi seca em sulfato de magnésio, filtrada e o solvente foi removido em vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash (gel de sílica, diclorometano/metanol, 97/3), propiciando 4,00 g (81 % teórico) do composto do título como um sólido.

[0225] LC-MS (Método 2): Rt = 1,62 min; MS (ESIpos): m/z

= 543,1 [M+H]+

[0226] 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 8,55 (dd, 1H), 8,39 (s, 1H), 8,25 (dd, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,76 (d, 2H), 7,69 (dd, 1H), 7,62 (d, 2H), 6,90 (d, 1H), 5,18 (d, 2H), 4,36-4,23 (m, 1H), 4,06-3,97 (m, 1H), 3,85 (dd, 1H). SEÇÃO EXPERIMENTAL – EXEMPLOS Exemplo 1 Di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1-[3- (trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4-triazol-3-il}metil)- 3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]- 1,1,1-trifluoropropan-2-ila

[0227] A 0 °C, uma solução de 3-({3-(4-clorofenil)-5- oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2-hidroxipropil]-4,5-di-hidro- 1H-1,2,4-triazol-1-il}metil)-1-[3-(trifluorometil)piridin- 2-il]-1H-1,2,4-triazol-5-carboxamida (Exemplo 4A, 2,00 g, 3,47 mmol) em tetra-hidrofurano (40 ml, 490 mmol) foi tratada com 4-N,N-dimetilaminopiridina (635 mg, 5,20 mmol) e trietilamina (720 µl, 5,2 mmol). O oxicloreto de fósforo (480 µl, 5,2 mmol) foi, então, adicionado em gotas. A mistura resultante foi agitada por 40 min a 0 °C e, então, por 50 min à temperatura ambiente. Portanto, a água (4,0 ml) e uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogênio sódico (24 ml) foram adicionadas e a mistura resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente. Tetra-hidrofurano foi, então, evaporado à temperatura ambiente. A solução resultante foi diluída com água e extraída com acetato de etila. A fase aquosa foi trazida to pH = 1 com uma solução de ácido clorídrico (1N), diluída com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas com sulfato de magnésio e evaporadas. O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (Método 4) produzindo 1,32 g (58 % teórico) do composto de título.

[0228] LC-MS (Método 3): Rt = 0,94 min; MS (ESIpos): m/z = 657,0 [M+H]+

[0229] ¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 8,86 (d, 1H), 8,58-8,29 (m, 2H), 8,07-7,82 (m, 2H), 7,79-7,45 (m, 4H), 5,33-5,00 (m, 2H), 4,95 – 4,77 (m l, 1H), 4,29-3,89 (m, 2H), 3,36 (s l, 2H, sobreposição com o pico de HDO). Exemplo 1-1 Hemi-hidrato de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-({5- carbamoil-1-[3-(trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4- triazol-3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H- 1,2,4-triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila

[0230] Uma suspensão de di-hidrogenofosfato de (2S)-3- [1-({5-carbamoil-1-[3-(trifluorometil)piridin-2-il]-1H- 1,2,4-triazol-3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di- hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (4,46 g, 6,79 mmol) em 446 ml de tolueno foi agitada a 25 °C por sete dias.

O sólido foi filtrado e o filtrado evaporado.

O sólido e o resíduo obtido a partir do filtrado foram misturados juntos e suspensos em uma mistura de diclorometano/n-heptano (200 ml, 55:45). A mistura resultante foi agitada a 40 °C por oito dias.

O material sólido foi filtrado e examinado por difratometria de raios X e corresponde ao composto de título como material cristalino (forma de hemi-hidrato). Tabela 2: Difratometria em pó de raios X do composto obtido como material cristalino no exemplo 1-1 Reflexos [2θ] (pico máximo) 6,2 20,4 7,5 20,6 11,0 21,3 12,8 21,6 13,0 22,4

Reflexos [2θ] (pico máximo) 13,3 23,3 14,6 23,5 14,7 23,8 14,8 23,9 16,0 24,2 16,3 24,6 16,5 25,1 16,9 25,8 17,3 30,2 19,5

Tabela 3: Espectro infravermelho do composto obtido como material cristalino no exemplo 1-1 Faixas [pico máximo em cm-1] 569* 1100 619 1131 642 1137 656 1163* 678 1175 703 1191* 710 1237* 723 1273 727 1321 746 1334 762* 1354 781 1374

Faixas [pico máximo em cm-1] 810 1398* 823 1405 853* 1423 860* 1450 888 1495 944 1582 976 1605 1014 1699 1031 3188 1036 3253* 1045 3305* 1091 3392 As faixas marcadas com * são específicas ao ácido livre. Exemplo 2 Hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-({5-Carbamoil-1-[3- (trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4-triazol-3-il}- metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila de potássio

[0231] Uma solução de Di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-

({5-carbamoil-1-[3-(trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4- triazol-3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H- 1,2,4-triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 1, 104 mg, 158 µmol) em água (3,0 ml) foi tratada com hidrogenocarbonato de potássio (31,6 mg, 316 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 124 mg (quant.) do composto de título.

[0232] LC-MS (Método 1): Rt = 0,67 min; MS (ESIpos): m/z = 657,0 [M+H]+

[0233] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 8,87-8,80 (m, 1H), 8,52 (d, 1H), 7,95 (dd, 1H), 7,72-7,57 (m, 4H), 5,45- 5,36 (m, 1H), 5,35-5,26 (m, 1H), 4,99-4,55 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,20-4,07 (m, 2H). Exemplo 3 Hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-({5-Carbamoil-1-[3- (trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4-triazol-3-il}- metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila de potássio

[0234] Uma solução de Di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- ({5-carbamoil-1-[3-(trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4- triazol-3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H- 1,2,4-triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 1,

35,0 mg, 53,3 µmol) em água (1,0 ml) foi tratada com hidrogenocarbonato de potássio (5,33 mg, 53,3 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 39,5 mg (quant.) do composto de título.

[0235] LC-MS (Método 1): Rt = 0,67 min; MS (ESIpos): m/z = 657,0 [M+H]+

[0236] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 8,87-8,80 (m, 1H), 8,54-8,48 (m, 1H), 7,97-7,91 (m, 1H), 7,71-7,57 (m, 4H), 5,43-5,37 (m, 1H), 5,35-5,28 (m, 1H), 4,90-4,64 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,23-4,10 (m, 2H). Exemplo 4 Hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1-[3- (trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4-triazol-3-il}- metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila de sódio

[0237] Uma solução de Di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- ({5-carbamoil-1-[3-(trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4- triazol-3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H- 1,2,4-triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 1, 35,0 mg, 53,3 µmol) em água (1,0 ml) foi tratada com carbonato dissódico (5,65 mg, 53,3 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo

41,2 mg (quant.) do composto de título.

[0238] LC-MS (Método 1): Rt = 0,68 min; MS (ESIpos): m/z = 657,0 [M+H]+

[0239] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 8,86-8,82 (m, 1H), 8,54-8,49 (m, 1H), 7,98-7,92 (m, 1H), 7,72-7,58 (m, 4H), 5,43-5,37 (m, 1H), 5,34-5,28 (m, 1H), 4,88-4,65 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,20-4,06 (m, 2H). Exemplo 5 Hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1-[3- (trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4-triazol-3-il}- metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila de sódio

[0240] Uma solução de Di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- ({5-carbamoil-1-[3-(trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4- triazol-3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H- 1,2,4-triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 1, 35,0 mg, 53,3 µmol) em água (1,0 ml) foi tratada com hidrogenocarbonato de sódio (4,48 mg, 53,3 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 38,6 mg (quant.) do composto de título.

[0241] LC-MS (Método 1): Rt = 0,68 min; MS (ESIpos): m/z = 657 [M+H]+

[0242] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 8,86-8,81 (m, 1H), 8,53-8,48 (m, 1H), 7,97-7,92 (m, 1H), 7,71-7,58 (m, 4H), 5,42-5,36 (m, 1H), 5,34-5,27 (m, 1H), 4,68 (s, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,22-4,10 (m, 2H). Exemplo 6 Hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1-[3- (trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4-triazol-3-il}- metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila de lítio

[0243] Uma solução de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- ({5-carbamoil-1-[3-(trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4- triazol-3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H- 1,2,4-triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 1, 35,0 mg, 53,3 µmol) em água (1,0 ml) foi tratada com hidrato de hidróxido de lítio (1:1) (4,47 mg, 107 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 38,7 mg (quant) do composto de título.

[0244] LC-MS (Método 1): Rt = 0,67 min; MS (ESIpos): m/z = 657,0 [M+H]+

[0245] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 8,86-8,82 (m, 1H), 8,54-8,49 (m, 1H), 7,98-7,91 (m, 1H), 7,72-7,58 (m,

4H), 5,43-5,37 (m, 1H), 5,34-5,28 (m, 1H), 4,90-4,68 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,21-4,06 (m, 2H). Exemplo 7 Hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1-[3- (trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4-triazol-3-il}- metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila de lítio

[0246] Uma solução de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- ({5-carbamoil-1-[3-(trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4- triazol-3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H- 1,2,4-triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 1, 35,0 mg, 53,3 µmol) em água (1,0 ml) foi tratada com hidrato de hidróxido de lítio (1:1) (2,24 mg, 53,3 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 38,3 mg (quant.) do composto de título.

[0247] LC-MS (Método 1): Rt = 0,67 min; MS (ESIpos): m/z = 657,0 [M+H]+

[0248] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 8,83 (d, 1H), 8,51 (d, 1H), 7,94 (dd, 1H), 7,71-7,58 (m, 4H), 5,42-5,37 (m, 1H), 5,34-5,28 (m, 1H), 4,89-4,65 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,22-4,10 (m, 2H).

Exemplo 8 Fosfato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1-[3- (trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4-triazol-3-il}- metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila de cálcio – O O – 2+ P O Ca

F

O O F H 2N F

N N N N O N N F N F

F Cl

[0249] Uma solução de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- ({5-carbamoil-1-[3-(trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4- triazol-3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H- 1,2,4-triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 1, 100 mg, 152 µmol) em água (1 l) foi tratada com carbonato de cálcio (15,2 mg, 152 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 93,9 mg (quant.) do composto de título.

[0250] LC-MS (Método 1): Rt = 0,69 min; MS (ESIpos): m/z = 657,1 [M+H]+

[0251] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 8,86-8,82 (m, 1H), 8,54-8,49 (m, 1H), 7,98-7,92 (m, 1H), 7,72-7,57 (m, 4H), 5,45-5,37 (m, 1H), 5,35-5,28 (m, 1H), 4,91-4,66 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,21-4,09 (m, 2H). Exemplo 9 Fosfato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1-[3- (trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4-triazol-3-il}-

metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila de magnésio

[0252] Uma solução de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- ({5-carbamoil-1-[3-(trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4- triazol-3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H- 1,2,4-triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 1, 35,0 mg, 53,3 µmol) em água (1,0 ml) foi tratada com carbonato de magnésio (4,49 mg, 53,3 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 40,1 mg (quant.) do composto de título.

[0253] LC-MS (Método 1): Rt = 0,68 min; MS (ESIpos): m/z = 657,0 [M+H]+

[0254] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 8,87-8,81 (m, 1H), 8,54-8,48 (m, 1H), 7,98-7,91 (m, 1H), 7,73-7,58 (m, 4H), 5,43-5,37 (m, 1H), 5,35-5,27 (m, 1H), 4,92-4,60 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,20-4,06 (m, 2H). Exemplo 10 Di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-({5-Carbamoil-1-[2- (trifluorometil)fenil]-1H-1,2,4-triazol-3-il}metil)-3-(4- clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]- 1,1,1-trifluoropropan-2-ila

[0255] A 0 °C, uma solução de 3-({3-(4-clorofenil)-5- oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2-hidroxipropil]-4,5-di-hidro- 1H-1,2,4-triazol-1-il}metil)-1-[2-(trifluorometil)fenil]- 1H-1,2,4-triazol-5-carboxamida (Exemplo 6A, 1000 mg, 1,74 mmol) em tetra-hidrofurano (20 ml, 250 mmol) foi tratada com 4-N,N-dimetilaminopiridina (318 mg, 2,60 mmol) e trietilamina (360 µl, 2,6 mmol). O oxicloreto de fósforo (240 µl, 2,6 mmol) foi adicionado em gotas.

A mistura resultante foi agitada por 40 min a 0 °C e, então, por 50 min à temperatura ambiente.

Portanto, a água (2,0 ml) e uma solução de carbonato de hidrogênio sódico aquoso saturado (12 ml) foram adicionadas e a mistura resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente.

Tetra- hidrofurano foi, então, evaporado à temperatura ambiente.

A solução resultante foi diluída com água e extraída com acetato de etila.

A fase aquosa foi trazida to pH = 1 com uma solução de ácido clorídrico (1N), diluída com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e extraída com acetato de etila.

As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução saturada de cloreto de sódio, secas com sulfato de magnésio e evaporadas.

O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (Método 4) produzindo

876 mg (77 % teórico) do composto de título.

[0256] LC-MS (Método 1): Rt = 0,74 min; MS (ESIpos): m/z = 656,0 [M+H]+

[0257] ¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 8,30 (s l, 1H), 7,96-7,50 (m, 8H), 5,25-4,96 (m, 2H), 4,97 – 4,74 (m l, 1H), 4,26-3,91 (m, 2H), 3,57 (s l, 2H, sobreposição com o pico de HDO). Exemplo 11 Hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1-[2- (trifluorometil)fenil]-1H-1,2,4-triazol-3-il}metil)-3-(4- clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]- 1,1,1-trifluoropropan-2-ila de potássio

[0258] Uma solução de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- ({5-carbamoil-1-[2-(trifluorometil)fenil]-1H-1,2,4-triazol- 3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 10, 35,0 mg, 53,4 µmol) em água (1,0 ml) foi tratada com hidrogenocarbonato de potássio (10,7 mg, 107 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 40,4 mg (quant.) do composto de título.

[0259] LC-MS (Método 1): Rt = 0,73 min; MS (ESIpos): m/z = 656,0 [M+H]+

[0260] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 7,97-7,93 (m, 1H), 7,87-7,79 (m, 2H), 7,73-7,59 (m, 5H), 5,38-5,33 (m, 1H), 5,30-5,24 (m, 1H), 4,88-4,66 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,20-4,06 (m, 2H). Exemplo 12 Hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1-[2- (trifluorometil)fenil]-1H-1,2,4-triazol-3-il}metil)-3-(4- clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]- 1,1,1-trifluoropropan-2-ila de potássio

[0261] Uma solução de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- ({5-carbamoil-1-[2-(trifluorometil)fenil]-1H-1,2,4-triazol- 3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 10, 35,0 mg, 53,4 µmol) em água (1,0 ml) foi tratada com hidrogenocarbonato de potássio (5,34 mg, 53,4 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 36,3 mg (quant.) do composto de título.

[0262] LC-MS (Método 1): Rt = 0,73 min; MS (ESIpos): m/z = 656,0 [M+H]+

[0263] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 7,97-7,93 (m, 1H), 7,88-7,79 (m, 2H), 7,71-7,58 (m, 5H), 5,39-5,24 (m, 2H), 4,90-4,67 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,19-

4,09 (m, 2H). Exemplo 13 Hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1-[2- (trifluorometil)fenil]-1H-1,2,4-triazol-3-il}metil)-3-(4- clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]- 1,1,1-trifluoropropan-2-ila hidrogênio de sódio

[0264] Uma solução de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- ({5-carbamoil-1-[2-(trifluorometil)fenil]-1H-1,2,4-triazol- 3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 10, 35,0 mg, 53,4 µmol) em água (1,0 ml) foi tratada com carbonato dissódico (5,66 mg, 53,4 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 37,9 mg (quant.) do composto de título.

[0265] LC-MS (Método 1): Rt = 0,74 min; MS (ESIpos): m/z = 656,1 [M+H]+

[0266] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 7,97-7,93 (m, 1H), 7,89-7,78 (m, 2H), 7,74-7,57 (m, 5H), 5,40-5,22 (m, 2H), 4,92-4,64 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,22- 4,04 (m, 2H). Exemplo 14 Hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1-[2-

(trifluorometil)fenil]-1H-1,2,4-triazol-3-il}metil)-3-(4- clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]- 1,1,1-trifluoropropan-2-ila hidrogênio de sódio

[0267] Uma solução de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- ({5-carbamoil-1-[2-(trifluorometil)fenil]-1H-1,2,4-triazol- 3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 10, 35,0 mg, 53,4 µmol) em água (1,0 ml) foi tratada com hidrogenocarbonato de sódio (4,48 mg, 53,4 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 36,2 mg (quant.) do composto de título.

[0268] LC-MS (Método 1): Rt = 0,47 min; MS (ESIpos): m/z = 656,0 [M+H]+

[0269] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 7,97-7,93 (m, 1H), 7,87-7,79 (m, 2H), 7,72-7,59 (m, 5H), 5,39-5,24 (m, 2H), 4,90-4,65 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,20- 4,09 (m, 2H). Exemplo 15 Fosfato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1-[2- (trifluorometil)fenil]-1H-1,2,4-triazol-3-il}metil)-3-(4- clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]- 1,1,1-trifluoropropan-2-ila de magnésio

[0270] Uma solução de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- ({5-carbamoil-1-[2-(trifluorometil)fenil]-1H-1,2,4-triazol- 3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 10, 35,0 mg, 53,4 µmol) em água (50 ml) foi tratada com carbonato de magnésio (4,50 mg, 53,4 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 37,3 mg (quant.) do composto de título.

[0271] LC-MS (Método 2): Rt = 1,34 min; MS (ESIpos): m/z = 656,1 [M+H]+

[0272] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 7,97-7,93 (m, 1H), 7,88-7,79 (m, 2H), 7,72-7,58 (m, 5H), 5,39-5,24 (m, 2H), 4,92-4,63 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,20- 4,09 (m, 2H). Exemplo 16 Fosfato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1-[2- (trifluorometil)fenil]-1H-1,2,4-triazol-3-il}metil)-3-(4- clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]- 1,1,1-trifluoropropan-2-ila de cálcio

– O O – Ca 2+

P O F

O O F H 2N F

N N N N O N N F F

F Cl

[0273] Uma solução de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- ({5-carbamoil-1-[2-(trifluorometil)fenil]-1H-1,2,4-triazol- 3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 10, 35,0 mg, 53,4 µmol) em água (15 ml) foi tratada com mono- hidrato de acetato de cálcio (9,40 mg, 53,4 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 37,9 mg (quant.) do composto de título.

[0274] LC-MS (Método 2): Rt = 1,33 min; MS (ESIpos): m/z = 656,1 [M+H]+

[0275] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 8,00-7,91 (m, 1H), 7,89-7,77 (m, 2H), 7,73-7,55 (m, 5H), 5,42-5,22 (m, 2H), 4,99-4,50 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,27- 3,99 (m, 2H). Exemplo 17 Di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-{[5-carbamoil-1-(3- cloropiridin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-3-il]metil}-3-(4-cloro- fenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]-1,1,1- trifluoropropan-2-ila

[0276] A 0 °C, uma solução de 3-({3-(4-clorofenil)-5- oxo-4-[(2S)-3,3,3-trifluoro-2-hidroxipropil]-4,5-di-hidro- 1H-1,2,4-triazol-1-il}metil)-1-(3-cloropiridin-2-il)-1H- 1,2,4-triazol-5-carboxamida (Exemplo 8A, 200 mg, 368 µmol) em tetra-hidrofurano (4,2 ml, 52 mmol) foi tratada com 4- N,N-dimetilaminopiridina (67,5 mg, 552 µmol) e trietilamina (77 µl, 550 µmol). O oxicloreto de fósforo (52 µl, 0,55 mmol) foi, então, adicionado em gotas.

A mistura resultante foi agitada por 40 min a 0 °C e, então, por 50 min à temperatura ambiente.

Portanto, a água (420 µl) e uma solução de carbonato de hidrogênio sódico aquoso saturado (2,5 ml) foram adicionadas e a mistura resultante foi agitada durante a noite à temperatura ambiente.

Tetra- hidrofurano foi, então, evaporado à temperatura ambiente.

A solução resultante foi diluída com água e extraída com acetato de etila.

A fase aquosa foi trazida to pH = 1 com uma solução de ácido clorídrico (1N), diluída com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e extraída com acetato de etila.

As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução saturada de cloreto de sódio, secas com sulfato de magnésio e evaporadas.

O resíduo foi purificado por HPLC preparativa (Método 4) produzindo

126 mg (55 % teórico) do composto de título.

[0277] LC-MS (Método 2): Rt = 1,22 min; MS (ESIneg): m/z = 621,0 [M-H]-

[0278] ¹H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 8,64-8,34 (m, 2H), 8,24 (dd, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,80-7,48 (m, 5H), 5,25-5,00 (m, 2H), 4,93 – 4,76 (m l, 1H), 4,20-3,87 (m, 2H), 3,34 (s l, 2H, sobreposição com o pico de HDO). Exemplo 18 Hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-{[5-carbamoil-1-(3- cloropiridin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-3-il]metil}-3-(4- clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]- 1,1,1-trifluoropropan-2-ila de potássio

[0279] Uma solução de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- {[5-carbamoil-1-(3-cloropiridin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-3- il]metil}-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 17, 35,0 mg, 56,2 µmol) em água (2,0 ml) foi tratada com hidrogenocarbonato de potássio (11,2 mg, 112 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 40,2 mg (quant.) do composto de título.

[0280] LC-MS (Método 1): Rt = 0,64 min; MS (ESIpos): m/z = 623,0 [M+H]+

[0281] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 8,54 (dd, 1H), 8,22 (dd, 1H), 7,76-7,58 (m, 5H), 5,42 - 5,29 (m, 2H), 4,92-4,63 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,20-4,07 (m, 2H). Exemplo 19 Hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-{[5-carbamoil-1-(3- cloropiridin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-3-il]metil}-3-(4- clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]- 1,1,1-trifluoropropan-2-ila de potássio

[0282] Uma solução de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- {[5-carbamoil-1-(3-cloropiridin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-3- il]metil}-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 17, 35,0 mg, 56,2 µmol) em água (2,0 ml) foi tratada com hidrogenocarbonato de potássio (5,62 mg, 56,2 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 37,1 mg (quant.) do composto de título.

[0283] LC-MS (Método 1): Rt = 0,65 min; MS (ESIpos): m/z = 623,0 [M+H]+

[0284] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 8,55-8,51 (m, 1H), 8,23-8,18 (m, 1H), 7,75-7,57 (m, 5H), 5,35 (q, 2H), 4,90-4,63 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,22-4,10

(m, 2H). Exemplo 20 Hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-{[5-carbamoil-1-(3- cloropiridin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-3-il]metil}-3-(4- clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]- 1,1,1-trifluoropropan-2-ila de sódio

[0285] Uma solução de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- {[5-carbamoil-1-(3-cloropiridin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-3- il]metil}-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 17, 35,0 mg, 56,2 µmol) em água (2,0 ml) foi tratada com carbonato dissódico (5,95 mg, 56,2 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 38,9 mg (quant.) do composto de título.

[0286] LC-MS (Método 1): Rt = 0,65 min; MS (ESIpos): m/z = 623,0 [M+H]+

[0287] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 8,56-8,53 (m, 1H), 8,25-8,20 (m, 1H), 7,75-7,58 (m, 5H), 5,42-5,28 (m, 2H), 4,90-4,64 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,21- 4,06 (m, 2H). Exemplo 21 Hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-{[5-carbamoil-1-(3-

cloropiridin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-3-il]metil}-3-(4- clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]- 1,1,1-trifluoropropan-2-ila de sódio

[0288] Uma solução de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- {[5-carbamoil-1-(3-cloropiridin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-3- il]metil}-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 17, 35,0 mg, 56,2 µmol) em água (2,0 ml) foi tratada com hidrogenocarbonato de sódio (4,72 mg, 56,2 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 36,4 mg (quant.) do composto de título.

[0289] LC-MS (Método 1): Rt = 0,64 min; MS (ESIpos): m/z = 623,1 [M+H]+

[0290] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 8,56-8,51 (m, 1H), 8,24-8,18 (m, 1H), 7,75-7,56 (m, 5H), 5,43-5,28 (m, 2H), 4,92-4,59 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,25- 4,09 (m, 2H). Exemplo 22 Fosfato de (2S)-3-[1-{[5-carbamoil-1-(3-cloropiridin-2-il)- 1H-1,2,4-triazol-3-il]metil}-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di- hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila de magnésio

[0291] Uma solução de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- {[5-carbamoil-1-(3-cloropiridin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-3- il]metil}-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 17, 35,0 mg, 56,2 µmol) em água (53 ml) foi tratada com carbonato de magnésio (4,74 mg, 56,2 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 37,8 mg (quant.) do composto de título.

[0292] LC-MS (Método 2): Rt = 1,13 min; MS (ESIpos): m/z = 623,0 [M+H]+

[0293] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 8,57-8,52 (m, 1H), 8,26-8,19 (m, 1H), 7,77-7,58 (m, 5H), 5,43-5,28 (m, 2H), 4,95-4,58 (m, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,07 (s, 2H). Exemplo 23 Fosfato de (2S)-3-[1-{[5-carbamoil-1-(3-cloropiridin-2-il)- 1H-1,2,4-triazol-3-il]metil}-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di- hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila de cálcio

[0294] Uma solução de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1- {[5-carbamoil-1-(3-cloropiridin-2-il)-1H-1,2,4-triazol-3- il]metil}-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 17, 35,0 mg, 56,2 µmol) em água (2,0 ml) foi tratada com mono- hidrato de acetato de cálcio (1:1) (9,89 mg, 56,2 µmol), então, agitada por 15 min à temperatura ambiente e liofilizada produzindo 38,5 mg (quant.) do composto de título.

[0295] LC-MS (Método 1): Rt = 0,65 min; MS (ESIpos): m/z = 623,0 [M+H]+

[0296] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 8,56-8,52 (m, 1H), 8,25-8,19 (m, 1H), 7,76-7,58 (m, 5H), 5,42-5,29 (m, 2H), 4,68 (s, 1H, sobreposição com pico de HDO), 4,23-4,10 (m, 2H). Exemplo 24 Fosfato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1-[3- (trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4-triazol-3-il}metil)- 3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]- 1,1,1-trifluoropropan-2-ila de dipotássio

[0297] A 0 °C, uma solução de di-hidrogenofosfato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1-[3-(trifluorometil)piridin-2-il]- 1H-1,2,4-triazol-3-il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di- hidro-4H-1,2,4-triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila (Exemplo 1, 400 mg, 0,609 mmol) em acetonitrila (12 ml) foi tratada com uma solução de hidrogenocarbonato de potássio (1,2 ml, 1 M, 1,2 mmol). A mistura resultante foi agitada por 5 min a 0 °C, 5 min à temperatura ambiente e liofilizada.

[0298] 50 mg do composto liofilizado foram dissolvidos em 2-propanol (3 ml). A solução resultante foi lentamente concentrada sob agitação à temperatura ambiente. Após 3 semanas, o solvente foi completamente evaporado. O sólido obtido foi examinado por Difratometria de raios X e corresponde ao composto de título como material mesomorfo. Uma estequiometria de potássio de 1,9±0,2 foi calculada com base na análise de TGA (9,9 % de solvente residual em massa) e a cromatografia iônica (9,1 % de potássio em massa) de acordo com a fórmula a seguir: Estequiometria = [(%potássio) / (1 - %solvente residual - %potássio)] x [(Mácido livre) / (Mpotássio)]

[0299] LC-MS (Método 5): Rt = 0,67 min; MS (ESIpos): m/z

= 657,1 [M+H]+

[0300] ¹H-RMN (500 MHz, D2O): δ [ppm] = 8,84 (d, 1H), 8,51 (d, 1H), 7,95 (dd, 1H), 7,74-7,56 (m, 4H), 5,47-5,23 (m, 2H), 4,23-4,03 (m, 2H). Tabela 4: Difratometria em pó de raios X do composto obtido no exemplo 24 Reflexos [2θ] (pico máximo) 3,6 20,3 7,3 20,7 11,1 21,4 12,1 21,8 12,5 22,2 12,7 22,9 14,2 25,3 14,5 25,6 15,6 25,9 17,8 26,3 18,1 Tabela 5: Espectro infravermelho do composto obtido no exemplo 24 Faixas [pico máximo em cm-1] 567 1031 578 1046 591* 1089 623 1123* 639 1142*

Faixas [pico máximo em cm-1] 655 1227* 687* 1258 708* 1266 722 1287 727 1320 747 1349* 757* 1373 782 1403 808 1431* 821 1449 835* 1496 883 1579 974 1601 1015 1699 As faixas marcadas com * são específicas ao sal de potássio. SEÇÃO EXPERIMENTAL – ENSAIOS BIOLÓGICOS Abreviaturas e acrônimos:

[0301] nº de Acesso número de acesso AP fosfatase alcalina AVP arginina vasopressina Bmax capacidade de ligação de ligante máxima BSA albumina sérica bovina cAMP monofosfato cíclico de adenosina Nº de Cat. número de catálogo cDNA ácido desoxirribonucleico complementar

CHO Ovário de hamster chinês CRE elemento de resposta a cAMP Ct limite de ciclo DMEM/F12 Meio de Eagle modificado por Dulbecco / meio F12 de Ham (1:1) DNA ácido desoxirribonucleico DMSO dimetilsulfóxido DTT ditiotreitol EC50 metade de concentração eficaz máxima EDTA Ácido etilenodiamina-tetra-acético FAM éster succinimidílico de carboxifluoresceína f.c. concentração final FCS soro bovino fetal HEPES ácido 4-(2-hidroxietil)piperazina-1- etanossulfônico IC50 metade da concentração inibitória máxima Kd constante de dissociação Ki constante de dissociação de um inibidor mRNA ácido ribonucleico mensageiro PBS solução salina tamponada com fosfato PEG polietilenoglicol p.o. per os, via oral RNA ácido ribonucleico RTPCR reação em cadeia da polimerase em tempo real SPA ensaio de proximidade de cintilação TAMRA carboxitetrametilrodamina TRIS; Tris 2-amino-2-hidroximetilpropano-1,3-diol v/v volume/volume; concentração, solução em porcentagem

[0302] A demonstração da atividade dos compostos da presente invenção pode ser conseguida através de ensaios in vitro, ex vivo, e in vivo que são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, para demonstrar a atividade dos compostos da presente invenção, os seguintes ensaios podem ser usados. B-1. Ensaio in vitro celular para determinar a atividade de receptor de vasopressina

[0303] A identificação de agonistas e antagonistas dos receptores V1a e V2 de vasopressina a partir de seres humanos, ratos e cães, bem como a quantificação da atividade dos compostos da invenção é levada a cabo usando linhagens de células recombinantes. Estas linhagens celulares derivam originalmente de uma célula epitelial de ovário de hamster (Chinese Hamster Ovary, CHO K1, ATCC: Coleção Americana de Culturas Celulares, Manassas, VA 20108, EUA). As linhagens de células de teste expressam constitutivamente os receptores V1a ou V2 humano, de rato ou cão. No caso de receptores V1a acoplados a Gαq, as células também são transfectadas de modo estável com uma forma modificada da fotoproteínas de aequorina (V1a de humano e rato) ou obelina (V1a de cão) sensíveis ao cálcio, que, após a reconstituição com o coelenterazina de cofator, emite luz quando há aumentos nas concentrações de cálcio livre [Rizzuto R, Simpson AW, Brini M, Pozzan T, Nature 358, 325-327 (1992); Illarionov BA, Bondar VS, Illarionova VA, Vysotski ES, Gene 153 (2), 273-274 (1995)]. As células de receptor de vasopressina resultantes reagem à estimulação dos receptores V1a recombinantemente expressos por liberação intracelular de íons de cálcio, a qual pode ser quantificada pela luminescência de fotoproteína resultante. Os receptores V2 acoplados a Gs são transfectadas estavelmente em linhagens celulares que expressam o gene para a luciferase de vagalume sob o controle de um promotor responsável por CRE. A ativação de receptores V2 induz a ativação do promotor responsivo a CRE via o aumento de cAMP, deste modo induzindo a expressão de luciferase de vagalume. A luz emitida por fotoproteínas de linhagens celulares de V1a, bem como a luz emitida pela luciferase de vagalume de linhagens celulares V2 corresponde à ativação ou inibição do respectivo receptor de vasopressina. A bioluminescência das linhagens celulares é detectada usando um luminômetro apropriado [Milligan G, Marshall F, Rees S, Trends in Pharmacological Sciences 17, 235-237 (1996)]. Procedimento de teste:

[0304] Linhagens celulares de receptor de vasopressina V1a: No dia anterior ao ensaio, as células são plaqueadas em meio de cultura (DMEM/F12, 2 % de FCS, 2 mM de glutamina, 10 mM de HEPES, 5 µg/ml de coelenterazina) em placas de microtitulação de 384 poços e mantidas em um incubador de células (96 % de umidade, CO2 a 5 % v/v, 37 °C). No dia do ensaio, os compostos de teste em várias concentrações são colocados por 10 minutos nos poços da placa de microtitulação antes do agonista [Arg8]- vasopressina em concentração de EC50 ser adicionado. O sinal de luz resultante é medido imediatamente em um luminômetro.

[0305] Linhagens celulares de receptor de vasopressina V2: No dia anterior ao ensaio, as células são plaqueadas em meio de cultura (DMEM/F12, 2 % de FCS, 2 mM de glutamina, 10 mM de HEPES) em placas de microtitulação de 384 poços e mantidas em um incubador de células (96 % de umidade, CO2 a 5 % v/v, 37 °C). No dia do ensaio, os compostos de teste em várias concentrações e o agonista [Arg8]-vasopressina na concentração de EC50 são adicionados juntos aos poços, e as placas são incubadas por 3 horas em um incubador de células. Após a adição do reagente de lise celular Triton™ e o substrato luciferina, a luminescência de luciferase de vagalume é medida em um luminômetro.

[0306] A Tabela 1A a seguir lista valores individuais de IC50 para os compostos da invenção (incluindo misturas racêmicas bem como enantiômeros separados) que foram obtidos a partir de linhagens celulares transfectadas com o receptor V1a ou V2 humano. Isso significa que esses valores de IC50 são os valores para o pró-fármaco e não para o fármaco respectivo subjacente visto que o pró-fármaco é principalmente estável sob as condições de ensaio. Os dados para o fármaco respectivo subjacente são mostrados nos Experimentos mencionados abaixo. Tabela 1A: Exemplo nº IC50 hV1a [µM] IC50 hV2 [µM] razão IC50 hV2/hV1a 4A 0,00120 0,16966 141,0 6A 0,00058 0,02390 41,4 8A 0,00102 0,03900 38,2 1 0,01572 0,19333 12,3

Exemplo nº IC50 hV1a [µM] IC50 hV2 [µM] razão IC50 hV2/hV1a 2 0,03950 0,62000 15,7 3 0,00615 0,12300 20,0 4 0,01110 0,15000 13,5 5 0,00505 0,08500 16,8 6 0,01550 0,22000 14,2 7 0,00885 0,16000 18,1 8 0,01700 0,14500 8,5 9 0,01400 0,22500 16,1 10 0,01063 0,04700 4,4 11 0,04050 0,03700 0,9 12 0,01650 0,02400 1,5 13 0,01900 0,02650 1,4 14 0,01900 0,01850 1,0 15 0,01950 0,02100 1,1 16 0,02900 0,03050 1,1 17 0,00980 0,13000 13,3 18 0,03350 0,08400 2,5 19 0,02400 0,05100 2,1 20 0,03950 0,08550 2,2 21 0,02100 0,03800 1,8 22 0,04500 0,09000 2,0 23 0,02700 0,07350 2,7 B-2. Ensaio de ligação radioativa

[0307] Os valores de IC50 e Ki podem ser determinados em ensaios de ligação radioativa usando frações de membrana de células de rim embrionário recombinante humano 293 (HEK293) ou linhagens de células CHO-K1 que expressam os respectivos receptores V1a e V2 de vasopressina humana.

[0308] Os receptores V1a de vasopressina recombinantes humanos expressados em células HEK293 são usados em tampão de Tris-HCl a 50 mM, pH 7,4, 5 mM de MgCl2, 0,1 % de BSA com uso de técnicas padrão. As alíquotas de membranas preparadas são incubadas com compostos de teste em várias concentrações em duplicatas e 0,03 nM de [125I]fenilacetil- D-Tyr(Me)-Phe-Gln-Asn-Arg-Pro-Arg-Tyr-NH2 por 120 minutos a 25 °C. A ligação não específica é estimada na presença de 1 µM de [Arg8]Vasopressina. Os receptores são filtrados e lavados, os filtros são, então, contados para determinar [125I]fenilacetil-D-Tyr(Me)-Phe-Gln-Asn-Arg-Pro-Arg-Tyr-NH2 especificamente ligada.

[0309] As células CHO-K1 transfectadas estavelmente com um plasmídeo que codifica receptor V2 de vasopressina humana são usadas para preparar membranas em 50 mM de tampão de Tris-HCl, pH 7,4, 10 mM de MgCl2, 0,1 % de BSA usando técnicas padrão. Alíquotas de membrana preparada são incubadas com compostos de teste em várias concentrações em duplicatas e 4 nM de [3H](Arg8)-Vasopressina por 120 minutos a 25 °C. A ligação não específica é estimada na presença de 1 mM de (Arg8)-vasopressina. As membranas são filtradas e lavadas 3 vezes e os filtros foram contados para determinar a [3H](Arg8)-Vasopressina ligada especificamente.

[0310] Os valores de IC50 são determinados por uma análise de regressão de mínimos quadrados não linear usando

MathIQTM (ID Business Solutions Ltd., RU). A constante de inibição Ki é calculada usando a equação de Cheng e Prusoff (Cheng, Y., Prusoff, W.H., Biochem. Pharmacol. 22:3099- 3108, 1973).

[0311] Para verificar a conversão de pró-fármacos nos respectivos fármacos, os pró-fármacos são incubados com e sem fosfatase alcalina. A clivagem da fração de fosfato por fosfatase alcalina converte o pró-fármaco no fármaco respectivo subjacente [Coleman J. E., Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 1992, 21, 441-483]. Visto que o pró-fármaco e o fármaco respectivo subjacente mostram diferentes valores de IC50, o valor do pró-fármaco após o tratamento de fosfatase alcalina se assemelha ao IC50 do fármaco respectivo. B-3. Ensaio celular in vitro para detectar a ação de antagonistas do receptor V1a de vasopressina sobre a regulação de genes pró-fibróticos

[0312] A linhagem de células H9C2 (Coleção Americana de Culturas Celulares Nº de ATCC CRL-1446), descrita como um tipo de cardiomiócito isolado de tecido cardíaco de rato, expressa endogenamente o receptor V1a de vasopressina AVPR1A em um número elevado de cópias, ao passo que a expressão de AVPR2 não pode ser detectada. Do mesmo modo, a linhagem de células NRK49F (Nº de ATCC CRL1570) isolada de tecido renal de rato, mostra um padrão de expressão semelhante de expressão elevada de ARNm de AVPR1A e diminuição da expressão de AVPR2. Para ensaios celulares que detectam a inibição da regulação da expressão gênica dependente do receptor AVPR1A pelos antagonistas do receptor, o procedimento é o seguinte:

[0313] As células H9C2 ou células NRK49F são semeadas em placas de microtitulação de 6 poços para cultura celular a uma densidade celular de 50.000 células/ poço em 2,0 ml de meio Opti-MEM (Invitrogen Corp., Carlsbad, CA, EUA, Nº de Cat. 11058-021) e mantidas em um incubador de células (96 % de umidade, CO2 a 8 % v/v, 37 ºC). Após 24 horas, os conjuntos de três poços (triplicata) são carregados com solução de veículo (controle negativo) e solução de vasopressina ([Arg8]-acetato de vasopressina, Sigma, nº de Cat.

V9879), ou composto de teste (dissolvido em veículo: água com 20 % v/v de etanol) e solução de vasopressina.

Na cultura celular, a concentração de vasopressina final é 1 nM.

A solução de composto de teste é adicionada à cultura celular em pequenos volumes, de modo a que uma concentração final de 0,03 % de etanol no ensaio celular não seja excedida.

Após um tempo de incubação de 5 horas, o sobrenadante da cultura é aspirado sob sucção, as células aderentes são lisadas em 350 µl de tampão RLT (Qiagen, Nº de Cat. 79216), e o RNA é isolado do lisato usando okit RNeasy (Qiagen, Nº de Cat. nº 74104). Isso é seguido de digestão por DNAse (Invitrogen, Nº de Cat. 18068-015), síntese de cDNA (Promaga, ImProm-II Reverse Transcription System, Nº de Cat.

A3800) e Reação em Cadeia da Polimerase de Transcrição Reversa (RTPCR) (pPCR MasterMix RT-QP2X-03- 075, Eurogentec, Seraing, Bélgica). Todos os procedimentos são realizados de acordo com os protocolos de trabalho dos fabricantes dos reagentes de teste.

Os conjuntos de iniciadores para o RTPCR são selecionados com base nas sequências de gene de mRNA (NCBI GenBank Entrez Nucleotide Data Base) usando o programa Primer3Plus com sondas marcadas com TAMRA 6-FAM. A RTPCR para determinar a expressão relativa de RNAm nas células dos vários lotes de ensaio é levada a cabo usando o Detector de Sequência ABI Prism 7700 da Applied Biosystems em um formato de placa de microtitulação de 384 poços de acordo com as instruções de operação do instrumento. A expressão gênica relativa é representada pelo valor delt-delta Ct [Applied Biosystems, Boletim de Usuário Nº 2 ABI Prism 7700 SDS, 11 de dezembro de 1997 (atualizado em 10/2001)] com referência ao nível de expressão do gene L-32 de proteína ribossômica (Nº de Ac. do GenBank NM_013226) e o valor de Ct limiar de Ct = 35.

[0314] Para verificar a conversão de pró-fármacos nos respectivos fármacos, os pró-fármacos são incubados com e sem fosfatase alcalina. A clivagem da fração de fosfato por fosfatase alcalina converte o pró-fármaco no fármaco respectivo subjacente [Coleman J. E., Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 1992, 21, 441-483]. Visto que o pró-fármaco e o fármaco respectivo subjacente mostram diferentes valores de IC50, o valor do pró-fármaco após o tratamento de fosfatase alcalina se assemelha ao IC50 do fármaco respectivo. B-4. Ensaio in vitro celular para verificação de conversão de pró-fármaco em fármaco

[0315] Para verificar a conversão de pró-fármacos nos respectivos fármacos, os pró-fármacos são incubados com e sem fosfatase alcalina. A clivagem da fração de fosfato por fosfatase alcalina converte o pró-fármaco no fármaco respectivo subjacente [Coleman J. E., Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 1992, 21, 441-483]. Visto que o pró-fármaco e o fármaco respectivo subjacente mostram diferentes valores de IC50, o valor do pró-fármaco após o tratamento de fosfatase alcalina se assemelha ao IC50 do fármaco respectivo. A determinação de valores de IC50 de compostos da invenção no receptor V1a humano é executada com uso de uma linhagem celular recombinante. A linhagem celular se deriva originalmente de uma célula epitelial de ovário de hamster (Chinese Hamster Ovary, CHO K1, ATCC: Coleção Americana de Culturas Celulares, Manassas, VA 20108, EUA). A linhagem celular de teste expressa constitutivamente expresses o receptor V1a humano. As células são também transfectadas de modo estável com uma forma modificada da fotoproteína de aequorina sensível ao cálcio que, após a reconstituição com o coelenterazina de cofator, emite luz mediante o aumento da concentração de cálcio livre [Rizzuto R, Simpson AW, Brini M, Pozzan T, Nature 358, 325-327 (1992); Illarionov BA, Bondar VS, Illarionova VA, Vysotski ES, Gene 153 (2), 273-274 (1995)]. A célula de receptor de vasopressina resultante reage ao estímulo do receptor V1a recombinantemente expressado por liberação intracelular de íons de cálcio, que pode ser quantificada pela luminescência resultante de fotoproteína. A bioluminescência da linhagem celular é detectada com uso de um luminômetro adequado [Milligan G, Marshall F, Rees S, Trends in Pharmacological Sciences 17, 235-237 (1996)]. Procedimento de teste:

[0316] No dia antes do ensaio, as células são semeadas em meio de cultura (DMEM/F12, 2 % de FCS, 2 mM de glutamina, 10 mM de HEPES, 5 µg/ml de coelenterazina) em placas de microtitulação de 384 poços e mantidas em um incubador de célula (96 % de umidade, 5 % v/v de CO2,

37 °C). No dia do ensaio, 100 µl de compostos de teste em uma concentração de 100 µM são incubados por 15 minutos com 500 unidades de fosfatase alcalina a 37 °C em tampão de tiroide (20 mM de HEPES, 130 mM de NaCl, 5 mM de KCl, 5 mM de NaHCO3, 2 mM de MgCl2, pH 7,4). Após a incubação, os compostos são imediatamente diluídos e colocados por 10 minutos a 37 °C nas células de V1a previamente semeadas. Para detecção de atividade antagonística dos compostos, a [Arg8]-vasopressina em concentração de EC50 é adicionada e o sinal de luz resultante é medido imediatamente em um luminômetro.

[0317] LC-MS das amostras de composto (Exemplo 4A e Exemplo 1) com e sem fosfatase alcalina (AP) foi realizada. Método 6 (LC-MS):

[0318] Instrumento MS: Instrumento Waters TOF; Tipo de instrumento UPLC: Waters Acquity I-CLASS; Coluna: Waters, HSST3, 2,1 x 50 mm, C18 1,8 µm; eluente A: 1 l de água + ácido fórmico a 0,01 %; eluente B: 1 l de acetonitrila + 0,01 % de ácido fórmico; gradiente: 0,0 min 2 % de B → 0,5 min 2 % de B → 7,5 min 95 % de B → 10,0 min 95 % de B; Forno: 50 °C; Fluxo: 1,00 ml/min; Detecção de UV: 210 nm. Exemplo 4A com AP

[0319] LC-MS (Método 6): Rt = 3,83 min; MS (ESIpos): m/z = 577,1 [M+H]+ Exemplo 4A sem AP

[0320] LC-MS (Método 6): Rt = 3,84 min; MS (ESIpos): m/z = 577,1 [M+H]+ Exemplo 1 com AP

[0321] LC-MS (Método 6): Rt = 3,83 min; MS (ESIpos): m/z = 577,1 [M+H]+

Exemplo 1 sem AP

[0322] LC-MS (Método 6): Rt = 3,19 min; MS (ESIpos): m/z = 657,1 [M+H]+ Tabela 2A: Valores de IC50 de fármacos e seus respectivos pró-fármacos na presença e ausência de fosfatase alcalina (AP) IC50 com IC50 sem Exemplo nº fármaco AP [µM] AP [µM] 1 pró-fármaco 0,00145 0,01310 4A fármaco 0,00135 0,00125 10 pró-fármaco 0,00130 0,01100 6A fármaco 0,00135 0,00135 17 pró-fármaco 0,00103 0,00945 8A fármaco 0,00110 0,00170 B-5. Inibição de agregação induzida por vasopressina de plaquetas humanas para verificação de conversão de pró- fármaco em fármaco

[0323] As plaquetas humanas expressam endogenamente o receptor V1a. Foi constatado que as concentrações de vasopressina de arginina (AVP) relativamente altas (aproximadamente 50-100 nM) estimulam a agregação de plaqueta ex vivo. Portanto, as plaquetas enriquecidas a partir do sangue humano podem servir como um tecido que expressa V1a para estudos farmacológicos com antagonistas de vasopressina.

[0324] Para verificar a conversão de pró-fármacos nos respectivos fármacos, os pró-fármacos são incubados com e sem fosfatase alcalina. A clivagem da fração de fosfato por fosfatase alcalina converte o pró-fármaco no fármaco. Visto que o pró-fármaco e o fármaco respectivo subjacente mostram diferentes valores de IC50, o valor do pró-fármaco após o tratamento de fosfatase alcalina se assemelha ao IC50 do fármaco respectivo.

[0325] 100 µl de composto de teste em uma concentração de 100 µM são incubados por 15 min com 500 unidades de fosfatase alcalina a 37 °C em tampão Tyrode modificado (134 mM de NaCl, 12 mM de NaH2PO4*H2O, 0,34 mM de NaH2PO4*H2O, 2,9 mM de KCl, 5 mM de HEPES, 5 mM de Glicose) e armazenados a 4 °C até o uso adicional no ensaio de agregação de plaqueta.

[0326] O sangue humano é coletado em tubos plásticos que contêm 1/10 volume de 0,106 M citrato trissódico por punção venosa de voluntários saudáveis não fumantes (n=4/grupo) que estão livres de fármaco por pelo menos 1 semana. O plasma rico em plaquetas (PRP) é obtido por centrifugação da amostra sanguínea a 140 g por 20 min à temperatura ambiente. O pélete resultante é descartado e o PRP é adicionalmente centrifugado (11.000 rpm, 1 min) para produzir plasma pobre em plaquetas (PPP). A agregação plaquetária é medida turbidimetricamente usando um agregômetro (APACT 4). A reação é seguida por alterações de monitoração na transmissão de luz em alíquotas de 178 µl de PRP, sob agitação contínua a 37 °C, contra o controle de PPP. Várias concentrações de antagonistas de vasopressina (em 2 µl) são adicionadas ao PRP por 5 min antes da adição de 20 µl de AVP (concentração final de 100 nM). Os efeitos inibidores dos compostos são determinados pela medição da amplitude máxima da curva de agregação em comparação à resposta de controle. Os valores de IC50 são calculados com base em uma curva de inibição de resposta de concentração por um programa iterativo de regressão não linear. Todos os valores são expressos como valores médios (Tabela 3A). Tabela 3A: Efeitos de compostos de teste na agregação em plasma rico em plaquetas humano. IC50 com IC50 sem Exemplo nº fármaco AP [µM] AP [µM] 1 pró-fármaco 0,01274 0,14460 4A fármaco 0,01020 0,02115 B-6. Efeitos sobre a contração de anéis de vasos de rato isolados Aorta isolada

[0327] Os compostos de teste podem ser investigados em anéis aórticos isolados de ratos Wistar machos que expressam endogenamente o receptor V1a. Os ratos Wistar machos são eutanasiados usando dióxido de carbono. A aorta é removida e colocada em tampão de Krebs-Henseleit gelado da seguinte composição (em mmol/l): NaCl 112, KCl 5,9, CaCl2 2,0, MgCl2 1,2, NaH2PO4 1,2, NaHCO3 25, glicose 11,5. A aorta é cortada em anéis de 3 mm e transferida a banhos de órgãos de 20 ml contendo solução de Krebs-Henseleit equilibrada com 95 % de O2, 5 % de CO2 a 37 °C. Para gravação de tensão isométrica, os anéis são montados entre dois ganchos. A tensão de repouso é ajustada para 3 g. Após um período de equilíbrio, cada experimento é iniciado pela exposição da preparação à solução de Krebs-Henseleit de K+ (50 mM). Os anéis aórticos são então pré-contraídos usando 1 nmol/l de Arg-vasopressina. Depois de estabelecida uma contração estável, é construída uma curva cumulativa de resposta à dose do composto de teste. A contração estabilizada induzida pela Arg-vasopressina é definida como 100 % de tensão. O relaxamento é expresso como tensão percentual. A. renalis isolada

[0328] Os ratos Wistar machos (200-250 g) são eutanasiados usando dióxido de carbono. A A. renalis é removida e colocada em tampão de Krebs-Henseleit gelado da seguinte composição (em mmol/l): NaCl 112, KCl 5,9, CaCl2 2,0, MgCl2 1,2, NaH2PO4 1,2, NaHCO3 25, glicose 11,5. Para a medição da tensão isométrica, os segmentos de anel, com 2 mm de comprimento, são montados em um miógrafo de câmara de pequeno vaso (Danish Myo Technology A/S, Dinamarca) usando dois fios de tungstênio fixados nas garras de montagem. Uma garra de montagem é anexada a um micrômetro, permitindo o controle da circunferência do vaso. A outra garra de montagem é conectada a um transdutor de força para medir o desenvolvimento da tensão. Toda a preparação é mantida em uma câmara com solução salina fisiológica a 37 °C, borbulhada com oxigênio. Após um período de equilíbrio de 30 minutos, os vasos são esticados até o seu diâmetro ideal de lúmen para o desenvolvimento da tensão ativa, que é determinada com base na razão de tensão da parede interna da circunferência. A circunferência interna é ajustada para 90 % do que os vasos teriam se fossem expostos a uma tensão passiva equivalente àquela produzida por uma pressão transmural de 100 mmHg.

[0329] Depois disso, os vasos são lavados três vezes com tampão Krebs-Henseleit e deixados a equilibrar durante 30 min. A contractilidade é, então, testada por uma dupla exposição a uma solução com K+ elevado (50 mmol/l de KCl). Após a lavagem com tampão de Krebs-Henseleit os vasos são, então, pré-contraídos usando 1 nmol/l de Arg-vasopressina. Depois de estabelecida uma contração estável, é construída uma curva cumulativa de resposta à dose do composto de teste. A contração estabilizada induzida pela Arg- vasopressina é definida como 100 % de tensão. O relaxamento é expresso como tensão percentual.

[0330] Para verificar a conversão de pró-fármacos nos respectivos fármacos, os pró-fármacos são incubados com e sem fosfatase alcalina. A clivagem da fração de fosfato por fosfatase alcalina converte o pró-fármaco no fármaco respectivo subjacente [Coleman J. E., Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 1992, 21, 441-483]. Visto que o pró-fármaco e o fármaco respectivo subjacente mostram diferentes valores de IC50, o valor do pró-fármaco após o tratamento de fosfatase alcalina se assemelha ao IC50 do fármaco respectivo. B-7. Ensaio in vivo para detectar os efeitos cardiovasculares: medição de pressão sanguínea em ratos anestesiados (modelo de “desafio” de vasopressina)

[0331] Os ratos Sprague-Dawley machos (250-350 g de peso corporal) são usados sob anestesia de injeção de cetamina/ xilazina/ pentobarbital. Os tubos de polietileno (PE-50, Intramedic®), pré-preenchidos com solução de cloreto de sódio isotônico que contém heparina (500 IU/ml), são introduzidos na veia jugular e a veia femoral e, então, atada. Arg-vasopressina (SIGMA) é injetada via um acesso venoso, com o auxílio de uma seringa; a substância de teste é administrada via o segundo acesso venoso. Para a determinação da pressão arterial sistólica, um cateter de pressão (Millar SPR-320 2F) é amarrado na artéria carótida. O cateter arterial é ligado a um transdutor de pressão que alimenta os seus sinais a um computador de gravação equipado com software de gravação apropriado. Em um experimento típico, o animal experimental é administrado com 3-4 injeções sucessivas em bolus em intervalos de 10-15 min com uma quantidade definida de Arg-vasopressina (30 ng/kg) em solução isotônica de cloreto de sódio. Quando a pressão arterial atingiu níveis iniciais de novo, a substância de teste é administrada como um bolus, com subsequente infusão contínua, em um solvente adequado. Depois disso, em intervalos definidos (10-15 min), a mesma quantidade de Arg-vasopressina no início é administrada novamente. Com base nos valores de pressão sanguínea, uma determinação é feita na medida em que a substância de ensaio neutraliza o efeito hipertensivo de Arg- vasopressina. Os animais de controle somente recebem solvente em vez da substância de teste.

[0332] Após a administração intravenosa, os compostos da invenção, em comparação com os controles de solvente, provocam uma inibição do aumento da pressão sanguínea causado por Arg-vasopressina. B-8. Ensaio in vivo para detectar os efeitos mediados por receptor V2 de vasopressina: investigações de diurese em ratos conscientes mantidos em gaiolas de metabolismo

[0333] Os ratos Wistar (400-500 g de peso corporal) são mantidos com acesso livre à alimentação (Altromin) e água potável. Durante o experimento, os animais são mantidos com acesso livre à água potável por 7 horas individualmente em gaiolas de metabolismo adequadas para ratos dessa classe de peso (Tecniplast Deutschland GmbH, D-82383 Hohenpeißenberg). No início do experimento, os animais são administrados à substância de teste em um volume de 1 ml/kg de peso corporal de um solvente adequado (2-hidroxilpropil- beta-ciclodextrina) por aplicação intravenosa. Os animais de controle recebem apenas solvente. Os controles e testes de substância são executados em paralelo no mesmo dia. Os grupos de controle e grupos de dose de substância, cada um, consistem em 6 a 8 animais. Durante o experimento, a urina excretada pelos animais é coletada continuamente em um receptor na base da gaiola. O volume de urina é determinado separadamente para cada animal. Antes do início do experimento, o peso corporal dos animais individuais é determinado.

[0334] Seguindo a administração intravenosa, em comparação com as aplicações de controle de solvente, um composto de bloqueio de receptor V2 de vasopressina provocaria uma excreção aumentada de urina, que tem como base essencialmente uma excreção aumentada de água (aquarese).

[0335] A Tabela 4A abaixo mostra alterações observadas na excreção urinária em relação ao controle de solvente (= 100 %) para compostos exemplificativos da invenção e compostos de comparação em três dosagens diferentes:

Tabela 4A: Exemplo nº Dosagem Volume Dosagem Volume Dosagem Volume [mg/kg] urinário [mg/kg] urinário [mg/kg] urinário [% vs. [% vs. [% vs. controle] controle] controle] Documento 0,3 413 1,0 848 3,0 1416 WO2016/071212 (Exemplo 82) 4A 0,3 95 1,0 154 3,0 134 1 0,3 127 1,0 117 3,0 108

[0336] Os resultados mostrados na Tabela 4A demonstram que os compostos da presente invenção não possuem qualquer atividade de bloqueio de V2 dependente de dose significativa nas doses indicadas in vivo. Isso é o contrário do Exemplo 82 do documento WO2016/071212 que dá origem a um aumento de até quatorze vezes dependente de dose, no volume urinário versus o grupo de controle de veículo em uma dose de 3 mg/kg i.v. B-9. Ensaio in vivo para detectar efeitos renais protetores: Modelo de lesão aguda de isquemia/reperfusão em roedores

[0337] Camundongos C57Bl/6J machos, criados em laboratório, com 6-8 semanas de idade são obtidos da Taconic Biosciences, ratos Sprague Dawley® machos com 6-8 semanas de idade são obtidos de Charles River. Tanto os ratos quanto os camundongos são mantidos em condições laboratoriais padrão, ciclos de claro-escuro de 12 horas com acesso a ração normal e água potável à libitum. Para o modelo de lesão de reperfusão isquêmica, um total de 10-12 ratos ou camundongos é usado em cada grupo de controle e experimental.

[0338] Os animais são anestesiados com isoflurano inalado contínuo. A nefrectomia direita é realizada através de uma incisão no flanco direito 7 dias antes dos procedimentos isquêmicos nos rins contralaterais. Para isquemia renal, é feita uma incisão no flanco esquerdo. Vasos renais são expostos por disseção do pedículo renal esquerdo. Grampos vasculares não traumáticos são usados para interromper o fluxo sanguíneo (artéria e veia) durante 45 min (ratos) ou 25 min (camundongos) de isquemia. A reperfusão é estabelecida pela remoção dos grampos. A parede abdominal (camada muscular e pele) é fechada com suturas de polipropileno 5.0. Temgesic® (Buprenorfina, 0,025 mg/kg s.c.) é aplicado como um analgésico.

[0339] A urina de cada animal é coletada em gaiolas metabólicas durante a noite antes do sacrifício às 24 h após a isquemia. Após o sacrifício, amostras de sangue são obtidas sob anestesia terminal. Após a centrifugação das amostras de sangue, o soro é isolado. Tanto a creatinina sérica como a ureia sérica são medidas através do analisador de bioquímica clínica (Pentra 400). Para a avaliação de biomarcadores de lesões renais séricas e urinárias (Lipocalina associada a gelatinase de neutrófilos [NGAL], molécula de lesão renal- 1 [KIM-1] e Osteopontina), ELISAs são realizadas de acordo com o protocolo do fabricante. Tanto a creatinina urinária quanto a albumina são medidas para determinar a relação albumina/creatinina.

[0340] O RNA total é isolado dos rins. Os rins esquerdos são congelados em nitrogênio líquido no sacrifício. O tecido renal é então homogeneizado e o RNA é obtido. O RNA total é transcrito em cDNA. A expressão de mRNA é analisada em todo o tecido renal usando NGAL renal de PCR em tempo real TaqMan, Osteopontina, KIM-1, Nefrina e Podocina.

[0341] As diferenças entre os grupos são analisadas pela ANOVA unidirecional com as correções de Dunnett para comparações múltiplas. A significância estatística é definida como p < 0,05. Todas as análises estatísticas são feitas com uso de GraphPad Prism 7. B-10. Ensaio in vivo para detectar efeitos cardiovasculares: investigações hemodinânicas em cães anestesiados

[0342] Cães beagle machos (Beagle, Marshall BioResources, EUA) com um peso entre 10 e 15 kg são anestesiados com pentobarbital (30 mg/kg iv, Narcoren®, Merial, Alemanha) para as intervenções cirúrgicas e os terminais de investigação hemodinâmicos e funcionais. Brometo de pancurônio (Pancuronium Inresa, Inresa, Alemanha, 2-4 mg/animal iv) serve adicionalmente como relaxante muscular. Os cães são intubados e ventilados com uma mistura de oxigênio/ar ambiente (30/70 %), cerca de 2,5-4 L/min. A ventilação ocorre com um ventilador da GE Healthcare (Avance, Alemanha) e é monitorada com um analisador de dióxido de carbono (-Datex Ohmeda). A anestesia é mantida por infusão de pentobarbital contínua (50 µg/kg/min); fentanil é usado como um analgésico (10 µg/kg/h).

[0343] Em intervenções preparatórias, os cães são equipados com um marca-passo cardíaco. No início do experimento, um marca-passo cardíaco da Biotronik (Logos®, Alemanha) é implantado na bolsa de pele subcutânea e é colocado em contato com o coração através de um eletrodo de marca-passo (Siello S60®, Biotronik, Alemanha) que é avançado através da veia jugular externa, com iluminação, no ventrículo direito.

[0344] Depois disso, os acessos são removidos e o cão acorda espontaneamente da anestesia. Após mais 7 dias, o marca-passo descrito acima é ativado e o coração é estimulado a uma frequência de 220 batimentos por minuto.

[0345] Os experimentos reais de testes de fármacos ocorrem 28 dias após o início da estimulação do marca- passo, usando os seguintes instrumentos: • Introdução de um cateter vesical para alívio da bexiga e para medir o fluxo de urina • Fixação do eletrocardiograma (ECG) leva às extremidades para a medição do ECG • Introdução de um introdutor de bainha preenchido com solução de cloreto de sódio na artéria femoral. Esse tubo é conectado a um sensor de pressão (Braun Melsungen, Melsungen, Alemanha) para medir a pressão sanguínea sistêmica • Introdução de um cateter Millar Tip (tipo 350 PC, Millar Instruments, Houston, EUA) através de uma porta fixada na artéria carótida, para medir a hemodinâmica cardíaca. • Introdução de um cateter de Swan-Ganz (CCOmbo 7.5F, Edwards, Irvine, EUA) através da veia jugular na artéria pulmonar, para medir o débito cardíaco, saturação de oxigênio, pressões arteriais pulmonares e pressão venosa central • Localização de um cateter venoso na veia cefálica,

para infusão de pentobarbital, para reposição líquida e para coleta de sangue (determinação dos níveis plasmáticos da substância ou outros valores sanguíneos clínicos) • Localização de um cateter venoso na veia safena, para infusão de fentanila e para administração de substância • Infusão de vasopressina (Sigma) em doses crescentes, até uma dose de 4 mU/kg/min. As substâncias farmacológicas são então testadas com esta dosagem.

[0346] Os sinais primários são amplificados se necessário (ACQ7700, Data Sciences International, EUA ou Edwards-Vigilance-Monitor, Edwards, Irvine, EUA) e, posteriormente, alimentados no sistema Ponemah (Data Sciences International, EUA) para avaliação. Os sinais são gravados continuamente ao longo do período experimental e são posteriormente processados digitalmente pelo dito software e têm uma média de 30 segundos. B-11. Efeitos graves nas alterações mediadas por vasopressina de hemodinâmica sistêmica, fluxo sanguíneo renal e oxigenação em ratos anestesiados

[0347] Os experimentos são realizados em ratos macho Sprague-Dawley (Charles River, Deutschland; 350-450 g de peso corporal). Na preparação para procedimentos cirúrgicos, os ratos são anestesiados com isoflurano e colocados em uma mesa aquecida para manter a temperatura de corpo principal a 37 °C, avaliados com uso de um termômetro retal inserido. A anestesia por inalação com isoflurano é aplicada com uso de um vaporizador calibrado para induzir e manter a anestesia com 5 % em volume e 2 % em volume de isoflurano, respectivamente.

Uma cânula de PE50 é colocada na artéria femoral direita para monitorar a pressão arterial média (MAP). Um outro cateter PE50 é inserido na veia femoral para infusão intravenosa.

O rim esquerdo é exposto por uma incisão no flanco e separado das fixações perirenais.

A cápsula renal permanece intacta.

Durante a cirurgia e os períodos de controle e equilíbrio subsequentes, os ratos recebem uma infusão intravenosa de solução salina (0,9 % de NaCl) na taxa de 100 µl/min.

As medições renais de fluxo sanguíneo renal (RBF) são registradas com uso de uma sonda de fluxo sanguíneo por laser-Doppler (Oxford Optronix, Reino Unido) que é fixada e estabilizada na superfície do rim.

A sonda é inserida no córtex renal em uma profundidade de 2 mm e um outro na medula renal em 4 mm.

O fluxo sanguíneo renal, oxigênio e temperatura são medidos pela sonda de sensor combinado (Oxford Optronix, Reino Unido). MAP, taxa cardíaca (HR), RBF, temperatura e oxigênio são continuamente registrados.

Após a cirurgia e equilíbrio, as medições de linha de base são determinadas por 20 minutos.

Os ratos são, então, infundidos por via intravenosa com vasopressina na taxa 50 ng/kg/min em 100 µl/kg por 20 minutos.

No terceiro período, o efeito da infusão combinada de vasopressina e um antagonista duplo de receptor de vasopressina (Exemplo 82 do documento WO 2016/071212) ou um antagonista V1a seletivo (Exemplo 1) ou veículo que é aplicado como um bolo em diferente concentração é determinado.

Tabela 5A: Efeitos de antagonista duplo de receptor de vasopressina Exemplo 82 do documento WO2016/071212 em alterações medidas por vasopressina (AVP) de hemodinâmica sistêmica e renal em ratos.

AVP + AVP + Exemplo 82 Veículo Exemplo 82 do Média AVP 50 1 documento WO documento Basal ± [ng/kg/min] [ml/kg] 2016/071212 WO SD Média ± SD Média ± 30 [µg/kg] 2016/071212 SD Média ± SD 96,69 ± 135,20 ± 129,90 ± 100,40 ± MAP [mmHg] 1,18 12,87 0,76 3,22 330,4 ± 276,90 ± 263,30 ± 309,60 ± HR [BPM] 2,33 18,85 0,27 10,79 822,2 ± 668,20 ± 614,50 ± 820,90 ± RBF [U] 14,22 62,58 7,94 20,28 39,05 ± 20,56 ± 7,86 ± pO2 [mmHg] 23,71 ± 0,34 0,98 10,27 2,21 n = 8 animais/grupo.

Os dados são médias ± SD.

MAP = pressão sanguínea arterial média.

HR = Taxa cardíaca.

RBF = fluxo sanguíneo renal. pO2 = pressão parcial de oxigênio renal

Tabela 6A: Efeitos do antagonista seletivo de receptor V1a de vasopressina Exemplo 4A em alterações mediadas por vasopressina (AVP) de hemodinâmica sistêmica e renal em ratos. AVP + AVP + Média AVP 50 Veículo 1 Exemplo Exemplo 4A Basal ± [ng/kg/min] [ml/kg] 4A 30 [µg/kg] SD Média ± SD Média ± Média ± SD

SD MAP 97,44 ± 135,40 ± 130,50 ± 114,80 ± [mmHg] 0,57 12,9 1,09 7,42 HR 334,10 ± 283,40 ± 268,60 ± 270,50 ± [BPM] 1,12 16,69 2,68 2,89 RBF 1060,00 758,30 ± 698,60 ± 878,10 ± [U] ± 8,89 107,40 18,83 96,92 pO2 27,86 ± 17,04 ± 11,32 ± 15,86 ± 4,01 [mmHg] 0,96 4,42 0,87 n = 8 animais/grupo. Os dados são médias ± SD. MAP = pressão sanguínea arterial média. HR = Taxa cardíaca. RBF = fluxo sanguíneo renal. pO2 = pressão parcial de oxigênio renal

Tabela 7A: Efeitos do antagonista de receptor V1a de vasopressina Exemplo 1 em alterações mediadas por vasopressina (AVP) de hemodinâmica sistêmica e renal em ratos. AVP + AVP + Média AVP 50 Veículo 1 Exemplo 1 30 Exemplo 1 Basal ± [ng/kg/min] [ml/kg] [µg/kg] SD Média ± SD Média ± Média ± SD

SD MAP 97,93 ± 124,60 ± 117,70 ± 103,50 ± [mmHg] 1,09 10,04 2,27 4,97 HR 371,20 ± 292,30 ± 272,20 ± 276,20 ± [BPM] 1,73 25,25 1,56 4,46 RBF 924,60 ± 791,90 ± 780,30 ± 877,00 ± [U] 16,72 46,47 13,35 43,01 pO2 20,70 ± 10,54 ± 11,20 ± 14,32 ± 1,13 [mmHg] 0,39 3,391 0,61 n = 8 animais/grupo. Os dados são médias ± SD. MAP = pressão sanguínea arterial média. HR = Taxa cardíaca. RBF = fluxo sanguíneo renal. pO2 = pressão parcial de oxigênio renal B-12. Estabilidade de pH

[0348] 0,15 mg do composto de teste é dissolvido em 0,1 ml de dimetilsulfóxido e 0,4 ml de acetonitrila. Para dissolução completa, o frasco de HPLC com a solução de amostra é agitado e tratado com irradiação ultrassônica. Desse modo, 1,0 ml da respectiva solução tampão é adicionado e a amostra é vertida. A solução de amostra é analisada por HPLC para determinar a quantidade do composto de teste em um tempo particular por um período de 24 h a 37 °C. As áreas de pico em porcentagem são usadas para quantificação. Tampões

[0349] pH 4,0: Tampão Fluka, nº de ordem 33643 (11,76 g de ácido cítrico, 2,57 g de cloreto de sódio e 2,72 g de hidróxido de sódio).

[0350] pH 7,4: 90 g de cloreto de sódio, 13,61 g de di-hidrogenofosfato de potássio e 83,35 g de solução de hidróxido de sódio de 1 M são feitos até 1 litro com água Millipore e, então, diluídos 1:10. Ajuste com ácido fosfórico para pH = 7,4.

[0351] pH 10: Tampão Fluka, nº de ordem 33649 (4,77 g de Borax, 0,73 g de hidróxido de sódio).

[0352] 15 µl de porções da solução de amostra são analisadas por HPLC em tempos diferentes (0 h, 1 h, 2 h, 4 h e 24 h) a 37 °C. As áreas de pico em porcentagem são usadas para quantificação. Método de HPLC

[0353] Eluente: A = 1 ml de ácido trifluoroacético/l em água; B = 1 ml de ácido trifluoroacético/l em acetonitrila Coluna: Nucleodur 100 C18ec, 3 µm, 50 x 2 mm Temperatura: 37 °C Detecção: 214 nm Injeção: 15 µl Gradiente: Tempo A (%) B (%) Fluxo (min) (ml/min) 0,0 98 2 0,75 1,0 98 2 0,75

15,0 5 95 0,75 17,5 5 95 0,75 17,7 98 2 1,50 18,2 98 2 1,50 18,5 98 2 1,00 19,0 98 2 0,75

[0354] As razões da área de pico (F) em tempos diferentes em relação à área de pico no ponto de partida são mostradas na Tabela 8A para exemplos representativos: Tabela 8A: % de composto de % de composto de teste Exemplo pH de teste após 4 h após 24 h nº tampão [F(t=4h)x100/F(t=0h)] [F(t=24h)x100/F(t=0h)] 1 4 100 100 1 7,4 99 99 1 10 99 98 10 4 100 100 10 7,4 100 100 17 4 100 100 17 7,4 100 100 B-13. Solubilidade Procedimento Experimental

[0355] Para cada substância, 0,5 - 0,6 mg são pesados exatamente. Em cada caso, o meio suficiente é adicionado à amostra de modo que uma concentração de c = 500 µg/ml seja obtida. Essa solução de amostra é agitada por 24 h à temperatura ambiente e 1400 rpm.

[0356] Um peso de amostra adicional de 0,5 - 0,6 mg é exigido para a solução de calibração de DMSO. Essa amostra é preenchida com DMSO a uma concentração de c = 600 µg/ml. Duas soluções de calibração são preparadas a partir dessa solução de estoque. Em um frasco de HPLC de 2 ml, 1000 µl de DMSO são inicialmente introduzidos e 34,4 µl da solução de estoque são pipetados (c = 20 µg/ml). 71,4 µl dessa solução (c = 20 µg/ml) são colocados em um frasco de HPLC adicional de 2 ml que contém 500 µl de DMSO (c = 2,5 µg/ml).

[0357] Após agitar as soluções de teste, 230 µl do sobrenadante são transferidos em um tubo de centrífuga e centrifugados em 42 000 rpm (223 000 g) por 30 min. 180 µl do sobrenadante são, então, tomados e diluídas com DMSO (1:5 amostra 1; 1:100 amostra 2), e transferidas para frascos de HPLC. As duas soluções de calibração e as soluções de amostra diluída são analisadas por HPLC. A quantificação é realizada nas áreas de pico correspondentes. Solvente

[0358] Água destilada; ácido trifluoroacético (Merck; 1,08262,0100); acetonitrila (grau em HPLC); DMSO (Merck; 8,02912,2500). Meio

[0359] Tampão de citrato pH4: Tampão Fluka, nº de ordem 33643 (11,76 g de ácido cítrico, 2,57 g de cloreto de sódio e 2,72 g de hidróxido de sódio).

[0360] Tampão pH7: Tampão Fluka, nº de ordem 33646 (3,52 g de di-hidrogenfosfato de potássio, 7,26 g de hidrogenofosfato de sódio).

[0361] Tampão de PBS pH7,4: Solução de 6,18 g de cloreto de sódio e 3,96 g di-hidrogenofosfato de em 1 l de água destilada, ajustar com solução de hidróxido de sódio aquoso de 1 M para pH 7,4.

[0362] Tampão Tris pH8,5: 0,6057 g de TRIS foi dissolvido em 95 ml de água, ajustar para pH 8,5 com ácido clorídrico aquoso, preencher com água até o volume de 100 ml ser alcançado. Equipamento de HPLC

[0363] Agilent 1100 ou aparelho comparável com detecção de UV, comprimento de onda variável (z.B. Matriz de Diodo); banho ultrassônico; Vibromix von Janke & Kunkel; Thermomixer de Eppendorf Método de HPLC

[0364] Eluente A: 1 ml de ácido trifluoracético/l de água; Eluente B: 1 ml de ácido trifluoracético/l de acetonitrila Gradiente: Tempo A (%) B (%) Fluxo (ml/min) (min) 0,0 98 2 1,5 0,2 98 2 1,5 3,3 10 90 1,5 4,0 10 90 1,5 4,1 98 2 2,5 4,7 98 2 2,5 5,0 98 2 1,5 Coluna: Zorbax Extend-c18, 50 x 3,0 mm, 3,5 µm; temperatura de coluna: 30 °C; Fluxo: 1,5 ml/min; detector: 214/254 nm; volume de injeção: 20 µl.

[0365] A solubilidade para exemplos representativos é mostrada na Tabela 9A.

Tabela 9A: Exemplo Solubilidade [mg/l] nº pH = 4 pH = 7,0 pH = 7,4 pH = 8,5 não 4A 8,7 - 6,7 detectável não não 6A - 4,3 detectável detectável 8A 5,9 2,8 - 4,0 1 > 500 > 500 - > 500 4 > 500 - > 500 > 500 6 > 500 - 464 464 7 > 500 - > 500 > 500 9 > 500 - > 500 447 10 454 > 500 - 479 17 > 500 > 500 - > 500 20 > 500 - > 500 > 500 22 > 500 - > 500 > 500 B-14. Determinação dos parâmetros farmacocinéticos após administração intravenosa e oral

[0366] Os parâmetros farmacocinéticos dos compostos de acordo com a invenção são determinados em ratos macho Wistar, cães fêmea da raça Beagle e macacos fêmea Cynomolgus. A administração intravenosa é executada por meio de um veículo de formulação adequado para as respectivas espécies, como uma formulação de plasma/DMSO ou solução salina fisiológica (pH4 ou mais) para ratos, ou uma formulação de água/PEG400/etanol ou solução salina fisiológica (pH4 ou mais) para cães e macacos. Em todas as espécies, a administração oral da substância dissolvida é realizada através de gavagem, com uso de um veículo de formulação adequado, como uma formulação de água/PEG400/etanol ou solução salina fisiológica. A coleta de sangue dos ratos é simplificada pela inserção de um cateter adequado na veia jugular externa direita antes da administração de substância. A operação é levada a cabo pelo menos um dia antes do experimento com anestesia com isoflurano e administração de um analgésico (atropina/Rimadila (3/1) 0,1 ml s.c.). O sangue é coletado (geralmente pelo menos 6 intervalos de tempo) em um período de tempo incluindo intervalos de tempo terminais de pelo menos 7 horas a um máximo de 72 horas após a administração de substância. Quando o sangue é coletado, o mesmo é passado em tubos que contêm um anticoagulante adequado, de preferência, K-EDTA. Então, o plasma sanguíneo é obtido por centrifugação e é, opcionalmente, armazenado a -20 °C até processamento adicional.

[0367] Um padrão interno (que também pode ser uma substância quimicamente não relacionada) é adicionado às amostras dos compostos de acordo com a invenção, amostras de calibração e qualificadores, e segue-se a precipitação de proteína por meio de excesso de acetonitrila. Alternativamente, o padrão interno é adicionado à acetonitrila e a mistura é, desse modo, adicionada em excesso às amostras dos compostos de acordo com a invenção, amostras de calibração e qualificadores para precipitação de proteína. A adição de uma solução tampão compatível com as condições de LC e subsequente vortex é seguida por centrifugação a 2800 g. O sobrenadante é analisado por LC- MS/MS usando colunas de fase reversa de bifenila ou C18 e misturas variáveis de fase móvel. As substâncias são quantificadas através das alturas dos picos ou das áreas dos cromatogramas de íons extraídos de experimentos específicos de monitoramento de íons selecionados.

[0368] Os gráficos de tempo/concentração de plasma determinados são usados para calcular os parâmetros farmacocinéticos como AUC (área sob a curva), Cmax (concentração máxima), t1/2 (meia-vida terminal), F (biodisponibilidade), MRT (tempo de permanência médio) e CL (depuração), com uso de um programa de cálculo farmacocinético validado.

[0369] Uma vez que a quantificação da substância é realizada no plasma, é necessário determinar a distribuição de sangue/plasma da substância para poder ajustar os parâmetros farmacocinéticos de forma correspondente. Para esse propósito, uma quantidade definida de substância é incubada no sangue total das espécies em questão em uma mistura de rolos de oscilação por 20 min. Após centrifugação a 2800 g, a concentração de plasma é medida (por meio de LC-MS/MS com uso de colunas de fase invertida de C18 ou bifenila e misturas de fase móvel variável) e determinada pelo cálculo da razão da concentração total de sangue versus concentração de plasma (valor de Csangue/Cplasma). C. Exemplos de trabalho de composições farmacêuticas

[0370] As substâncias de acordo com a invenção podem ser convertidas em preparações farmacêuticas como a seguir: Comprimido: Composição:

[0371] 100 mg do composto do Exemplo 1, 50 mg de lactose

(monoidrato), 50 mg de amido de maís, 10 mg de polivinilpirrolidona (PVP 25) (da BASF, Alemanha) e 2 mg de estearato de magnésio.

[0372] Peso do comprimido 212 mg. Diâmetro 8 mm, raio de curvatura 12 mm. Produção:

[0373] A mistura do composto do Exemplo 1, lactose e amido é granulada com uma solução a 5 % de potência (m/m) do PVP em água. Após a secagem, os grânulos são misturados com o estearato de magnésio por 5 min. Essa mistura é comprimida em uma prensa de comprimidos convencional (ver acima para o formato do comprimido). Suspensão oral: Composição:

[0374] 1000 mg do composto do Exemplo 1, 1000 mg de etanol (96 %), 400 mg de Rhodigel (goma xantana) (da FMC, EUA) e 99 g de água.

[0375] 10 ml de suspensão oral correspondem a uma única dose de 100 mg do composto da invenção. Produção:

[0376] O Rhodigel é suspenso em etanol e o composto do Exemplo 1 é adicionado à suspensão. A água é adicionada durante a agitação. A mistura é agitada por cerca de 6 h até o inchaço do Rhodigel ser completado. Solução i.v. estéril:

[0377] O composto de acordo com a invenção é dissolvido em uma concentração abaixo da solubilidade da saturação em um solvente fisiologicamente aceitável (por exemplo, solução isotópica de cloreto de sódio, solução de glicose a 5 % e/ou solução de PEG 400 a 30 %). A solução é esterilizada por filtração e introduzida em recipientes de injeção estéreis e isentos de pirogênios.

[0378] Embora a invenção tenha sido revelada com referência a modalidades específicas, é evidente que outras modalidades e variações da invenção podem ser concebidas por outros técnicos no assunto sem se afastarem do verdadeiro espírito e escopo da invenção. Pretende-se que as reivindicações sejam entendidas como incluindo todas essas modalidades e variações equivalentes.

Claims (8)

REIVINDICAÇÕES EMENDADAS

1. Composto caracterizado por ser da fórmula geral (I) (I), em que R1 representa um grupo da fórmula em que # representa o ponto de fixação ao anel de 1,2,4-triazolila, ou um dos sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, solvatos dos mesmos ou solvatos dos sais dos mesmos.

2. Composto da fórmula geral (I), de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 representa um grupo da fórmula em que # representa o ponto de fixação ao anel de 1,2,4-triazolila.

3. Di-hidrogenofostato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1- [3-(trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4-triazol-3-

il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila, de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por ser da fórmula abaixo ou um dos sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, solvatos dos mesmos ou solvatos dos sais dos mesmos.

4. Di-hidrogenofostato de (2S)-3-[1-({5-carbamoil-1- [3-(trifluorometil)piridin-2-il]-1H-1,2,4-triazol-3- il}metil)-3-(4-clorofenil)-5-oxo-1,5-di-hidro-4H-1,2,4- triazol-4-il]-1,1,1-trifluoropropan-2-ila, de acordo com a a reivindicação 1, caracterizado por ser da fórmula abaixo .

5. Processo para preparar um composto da fórmula geral (I) ou um dos sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, solvatos dos mesmos ou solvatos dos sais dos mesmos, conforme definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que [A] um composto da fórmula

(II), em que R1 tem o significado como definido para os compostos da fórmula geral (I) dado na reivindicação 1, é reagido na primeira etapa com oxicloreto de fósforo e na segunda etapa é hidrolisado para gerar um composto da fórmula geral (I), ou [B] um composto da fórmula

(II), em que R1 tem o significado como definido para os compostos da fórmula geral (I) dado na reivindicação 1, é reagido na primeira etapa com difosfato de tetrabenzila e na segunda etapa os grupos benzila são removidos sob condições redutoras para gerar um composto da fórmula geral (I), opcionalmente seguido, onde apropriado, pela conversão do composto da fórmula geral (I) em seus respectivos sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, solvatos dos mesmos ou os solvatos dos sais dos mesmos pelo tratamento com os solventes e/ou bases correspondentes.

6. Uso de um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado por ser para a fabricação de uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou a prevenção de doenças renais crônicas e agudas incluindo nefropatia diabética, insuficiência cardíaca aguda e crônica, pré-eclâmpsia, doença arterial periférica (PAD), disfunção microvascular coronária (CMD), síndrome de Raynaud dismenorreia, síndrome cardiorrenal, hiponatremia hipervolêmica e euvolêmica, cirrose hepática, ascite, edema e a síndrome de secreção de ADH inadequada (SIADH).

7. Composição farmacêutica caracterizada por compreender um composto, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, e um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

8. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada por compreender um ou mais primeiros ingredientes ativos, em particular, compostos da fórmula geral (I), conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 4, e um ou mais ingredientes ativos adicionais, em particular, um ou mais agentes terapêuticos adicionais selecionados a partir do grupo que consiste em diuréticos, antagonistas de angiotensina AII, inibidores de ACE, bloqueadores de beta-receptor, antagonistas de receptor de mineralocorticoide, nitratos orgânicos, doadores de NO, ativadores e estimuladores da guanilato ciclase solúvel e agentes inotrópicos positivos, agentes anti-inflamatórios, agentes imunossupressores, aglutinantes de fosfato e/ou compostos que modulam metabolismo de vitamina D.