BR112020001703A2 - formulações de anticorpo anti-c5 em alta concentração - Google Patents

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Abstract

A presente divulgação refere-se a soluções aquosas estáveis que compreendem uma alta concentração de um anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) e métodos para a preparação das soluções. A divulgação também fornece métodos para o tratamento ou prevenção de distúrbios associados ao complemento, tais como hemoglobinúria paroxística noturna (PNH) e síndrome hemolítico-urêmica atípica (aHUS), usando as soluções. Também foram caracterizados kits terapêuticos contendo uma ou mais das soluções e um meio para a administração das soluções a um paciente em necessidade de tal tratamento.

Description

“FORMULAÇÕES DE ANTICORPO ANTI-C5 EM ALTA CONCENTRAÇÃO”
REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS
[0001] Este pedido reivindica o benefício do Pedido Provisório em Série U.S. Nº 62/537,741, depositado em 27 de julho de 2017. Todo o conteúdo do pedido de patente provisória mencionado acima é incorporado neste documento por referência.
LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[0002] O presente pedido contém uma Listagem de Sequências que foi submetida eletronicamente no formato ASCII e está incorporada neste documento a título de referência em sua totalidade. Tal cópia ASCII, criada em 26 de julho de 2018, é denominada AXJ-226PC_SL.txt e possui 32.987 bytes de tamanho.
FUNDAMENTOS
[0003] O sistema complemento atua em conjunto com outros sistemas imunológicos do corpo para defender contra a intrusão de patógenos celulares e virais. Havia pelo menos 25 proteínas de complemento, que foram encontradas como uma coleção complexa de proteínas plasmáticas e cofatores de membrana. As proteínas plasmáticas representam cerca de 10% das globulinas no soro de vertebrados. Os componentes do complemento alcançam suas funções imunológicas defensivas interagindo em uma série de eventos de clivagem enzimática intricados, mas precisos, e eventos de ligação à membrana. A cascata do complemento resultante leva à produção de produtos com funções opsônicas, imunorreguladoras e líticas. Um resumo conciso das atividades biológicas associadas à ativação do complemento é fornecido, por exemplo, em The Merck Manual, 16a Edição.
[0004] Embora um sistema de complemento que funcione adequadamente forneça uma defesa robusta contra a infecção por micróbios, a regulação ou ativação inadequada das vias do complemento foi implicada na patogênese de uma variedade de distúrbios, incluindo hemoglobinúria paroxística noturna (PNH) e síndrome hemolítico-urêmica atípica (aHUS) (consultar, por exemplo, Socié G, et al., Sociedade Francesa de Hematologia. Lancet. 1996;348(9027):573-577; Brodsky, R., Blood. 2014;124(18):2804-2811); Hillmen, P.et al, Am. J. Hematol. 2010;85(8):553-559; Caprioli et al. (2006) Blood 108:1267-1279; e Kavanagh et al. (2006) British Medical
Bulletin 77 e 78:5-22).
[0005] Pacientes com distúrbios associados ao complemento, como PNH ou aHUS, estavam em risco de morbidade e mortalidade substancial. Por conseguinte, é um objetivo da presente invenção fornecer composições e métodos aprimorados para o tratamento de pacientes com distúrbios associados ao complemento.
SUMÁRIO
[0006] Foram fornecidas neste documento soluções estáveis, altamente concentradas, aquosas de anticorpos anti-C5, bem como métodos para fazer e usar as formulações. A divulgação fornece, entre outros aspectos, condições de formulação adequadas para manter, durante um tempo considerável, a estabilidade física e funcional de um anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe, também conhecido como "anticorpo BNJ441" e "ALXN1210") em soluções de alta concentração. Por exemplo, a divulgação fornece condições de formulação capazes de manter um anticorpo anti-C5 na forma predominantemente monomérica por até 2 anos a 2°C a 8°C, mesmo quando o anticorpo é mantido em soluções em concentrações de aproximadamente 100 mg/mL ou mais. Além disso, conforme descrito neste documento e exemplificado nos exemplos de trabalho, essas formulações também minimizam a agregação, fragmentação ou degradação de um anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) nas soluções altamente concentradas. Por exemplo, a divulgação fornece condições de formulação capazes de manter por dois anos um anticorpo anti-C5 em uma forma altamente concentrada, sem produtos detectáveis de fragmentação ou degradação de anticorpos (conforme determinado usando uma técnica de cromatografia por exclusão de tamanho e cromatografia líquida de alta eficiência (SEC-HPLC), como permeação por gel de HPLC) e não mais de 2% de agregado. Também foram neste documento fornecidas condições adequadas para a formulação de soluções de um anticorpo anti-C5, como o ravulizumabe a mais de 200 mg/mL.
[0007] Os benefícios de soluções aquosas estáveis e altamente concentradas de um anticorpo anti-C5 são numerosos. Primeiro, para aplicações terapêuticas que exigem que o anticorpo seja administrado a um paciente em um pequeno volume, a eficácia terapêutica frequentemente ativa a quantidade de anticorpos que podem ser administrados nesse pequeno volume. Na ausência da capacidade de formular um anticorpo anti-C5 para altas concentrações, o uso de, por exemplo, vias de distribuição subcutâneas, intravítreas e/ou intra-articulares seria frequentemente impedido. De maneira semelhante, formulações de anticorpos altamente concentradas permitem mais opções de pacientes em relação à via de administração. Para aplicações terapêuticas que requerem administração frequente e crônica, e/ou auto-distribuição, a administração é possibilitada por formulações de alta concentração e pode ser mais atraente para os pacientes do que a infusão intravenosa. Por exemplo, formulações de alta concentração de um anticorpo anti-C5 podem permitir que um paciente administre o anticorpo, por exemplo, injeção subcutânea ou intravenosa. Portanto, a capacidade de formular o anticorpo em altas concentrações pode aumentar a conformidade da administração, fornecendo uma alternativa fácil de administração doméstica para pacientes com distúrbios associados ao complemento.
[0008] Além disso, os métodos para produzir as soluções aquosas descritas neste documento não requerem uma etapa de liofilização, nem as soluções aquosas de alta concentração apresentadas precisam ser reconstituídas a partir de material liofilizado. As soluções de anticorpos de alta concentração apresentadas instantaneamente oferecem várias vantagens sobre as formulações de anticorpos liofilizadas reconstituídas. Primeiro, os médicos devem reconstituir localmente as soluções de anticorpos liofilizadas assepticamente, o que aumenta a oportunidade de contaminação microbiana da solução antes da administração. Além disso, a reconstituição exige um cuidado considerável para garantir que todos os sólidos contidos no recipiente de reconstituição tenham sido adequadamente dissolvidos em solução. As soluções aquosas de alta concentração fornecidas neste documento fornecem, assim, ao médico, prestador de cuidados e/ou paciente um meio rápido, fácil, seguro e eficiente para distribuir um anticorpo terapêutico a um paciente em necessidade.
[0009] Outros benefícios de formulações de alta concentração incluem, por exemplo, economia de custos de fabricação devido à diminuição do espaço de armazenamento a granel e/ou do número de preenchimentos de produtos. Além disso, a capacidade de produzir um produto com um prazo de validade mais longo exigirá menos execuções de produção, o que reduz o custo para o fabricante e consumidor do anticorpo terapêutico altamente concentrado.
[0010] Um anticorpo anti-C5 exemplificativo é o ravulizumabe (também conhecido como anticorpo BNJ441 e ALXN1210) compreendendo as cadeias pesadas e leves com as sequências mostradas nas SEQ ID NOs: 14 e 11, respectivamente, ou fragmentos de ligação ao antígeno e suas variantes. Em outras modalidades, o anticorpo compreende as regiões determinantes da complementariedade (CDRs) das cadeias pesada e leve ou regiões variáveis (VRs) de ravulizumabe. Por conseguinte, em uma modalidade, o anticorpo compreende os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável da cadeia pesada (VH) do ravulizumabe com a sequência mostrada na SEQ ID NO: 12 e os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável da cadeia leve (VL) de ravulizumabe com a sequência mostrada na SEQ ID NO: 8. Em outra modalidade, o anticorpo compreende sequências de cadeia pesada de CDR1, CDR2 e CDR3, conforme estabelecido nas SEQ ID NOs:19, 18 e 3, respectivamente, e sequências de cadeia leve de CDR1, CDR2 e CDR3, conforme estabelecidas nas SEQ ID NOs:4, 5 e 6, respectivamente.
[0011] Em outra modalidade, o anticorpo compreende regiões VH e VL com as sequências de aminoácidos estabelecidas na SEQ ID NO:12 e SEQ ID NO:8, respectivamente.
[0012] Em outra modalidade, o anticorpo compreende uma região constante da cadeia pesada, conforme estabelecido na SEQ ID NO:13.
[0013] Em outra modalidade, o anticorpo compreende uma região constante Fc humana variante que se liga ao receptor Fc neonatal humano (FcRn), em que a região constante Fc CH3 humana variante compreende substituições Met-429-Leu e Asn- 435-Ser nos resíduos correspondentes à metionina 428 e asparagina 434 de uma região constante de IgG Fc humana nativa, cada uma na numeração EU.
[0014] Em outra modalidade, o anticorpo compreende sequências de cadeia pesada de CDR1, CDR2 e CDR3, conforme estabelecido nas SEQ ID NOs:19, 18 e
3, respectivamente, e sequências de cadeia leve de CDR1, CDR2 e CDR3, conforme estabelecidas nas SEQ ID NOs:4, 5 e 6, respectivamente, e uma região constante Fc humana variante que se liga ao receptor Fc neonatal humano (FcRn), em que a região constante Fc CH3 humana variante compreende substituições Met-429-Leu e Asn- 435-Ser nos resíduos correspondentes a metionina 428 e asparagina 434 de uma região constante de IgG Fc humana nativa, cada uma na numeração EU.
[0015] Em outra modalidade, o anticorpo compete pela ligação com e/ou se liga ao mesmo epítopo em C5 que os anticorpos mencionados acima. Em outra modalidade, o anticorpo tem pelo menos cerca de 90% de identidade de sequência de aminoácidos da região variável com os anticorpos mencionados acima (por exemplo, pelo menos cerca de 90%, 95% ou 99% de identidade de região variável com a SEQ ID NO:12 e a SEQ ID NO:8).
[0016] Em outra modalidade, o anticorpo se liga ao C5 humano com pH 7,4 e a 25oC com uma constante de dissociação de afinidade (KD) que está na faixa de 0,1 nM ≤ KD ≤ 1 nM. Em outra modalidade, o anticorpo se liga ao C5 humano com pH 6,0 e a 25oC com um KD ≥ 10 nM. Em ainda outra modalidade, o [(KD do anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno para o C5 humano com pH 6,0 e a 25 oC)/(KD do anticorpo ou seu fragmento de ligação ao antígeno para C5 humano com pH 7,4 e a 25oC)] do anticorpo é maior que 25.
[0017] Em um aspecto, é fornecida uma solução aquosa estável (por exemplo, uma solução estéril), em que a solução compreende um anticorpo anti-C5 a uma concentração de cerca de 100 mg/mL, em que o anticorpo anti-C5 compreende uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5 e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6. Em outra modalidade, a solução compreende um anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) a uma concentração de ou aproximadamente de 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210, 215, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 250, 255, 260, 265, 270, 275, 280, 285, 290, 295 ou 300 mg/mL.
[0018] Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende um ou mais agentes adicionais (por exemplo, agentes estabilizadores, agentes tampão, surfactantes e/ou conservantes). Por exemplo, em uma modalidade, a solução aquosa estável compreende um estabilizador. Exemplos de estabilizadores incluem, mas não se limitam a poliois, açúcares (por exemplo, sacarose ou trealose), aminoácidos (por exemplo, arginina), aminas e sais de salga. Em uma modalidade, a solução compreende pelo menos um agente estabilizador a uma concentração de 2-10%, inclusive. Em uma modalidade, a solução compreende 5% de sacarose. Em outra modalidade, a solução compreende pelo menos um ou mais agentes estabilizadores a uma concentração de 10 mM a 50 mM, inclusive. Em outra modalidade, o agente estabilizador está presente na solução a uma concentração de pelo menos ou igual a 20 mM. Em outra modalidade, o agente estabilizador está presente na solução a uma concentração de pelo menos ou igual a 25 mM. Em outra modalidade, o agente estabilizador está presente na solução a uma concentração de pelo menos ou igual a 50 mM. Em outra modalidade, a solução compreende 25 mM de arginina.
[0019] Em outra modalidade, a solução compreende pelo menos um ou mais agentes tamponantes. Exemplos não limitativos de tampões típicos que podem ser incluídos na solução (ou soluções) de lavagem incluem Tris (tris(hidroximetil)metilamina), bis-Tris, bis-Tris propano, histidina, trietanolamina, dietanolamina, formato, acetato, MES (ácido 2-(N-morfolino)etanossulfônico), fosfato, HEPES (ácido 4-2-hidroxietil-1-piperazinoetanossulfônico), citrato, MOPS (ácido 3-(N- morfolino)propanossulfônico), TAPS (ácido 3{[tris(hidroximetil)metil]amino}propanossulfônico), Bicina (N,N-bis(2- hidroxietil)glicina), Tricina (N-tris(hidroximetil) metilglicina), TES (ácido 2- {[tris(hidroximetil)metil]amino}etanossulfônico), PIPES (piperazina-N,N'-bis(ácido 2-
etanossulfônico), cacodilato (ácido dimetilarsinico) SSC (citrato de sódio salino) e fosfato de sódio. Em outra modalidade, o agente tampão é um aminoácido. O aminoácido pode ser, por exemplo, um selecionado do grupo que consiste em histidina (por exemplo, L-histidina), serina (por exemplo, L-serina) e glicina (por exemplo, L-glicina). Em outra modalidade, a solução compreende pelo menos dois ou mais agentes tamponantes. Em uma modalidade particular, o agente tampão é fosfato de sódio.
[0020] Em outra modalidade, a solução compreende pelo menos um ou mais agentes tamponantes a uma concentração de 10 mM a 300 mM, inclusive. Em outra modalidade, a solução compreende pelo menos um agente tamponante a uma concentração de 10 mM a 200 mM, inclusive. Em outra modalidade, a solução compreende pelo menos um agente tamponante a uma concentração de 10 mM a 100 mM, inclusive. Em outra modalidade, a solução compreende pelo menos um agente tamponante a uma concentração de 10 mM a 50 mM, inclusive. Em outra modalidade, a solução compreende pelo menos um agente tamponante a uma concentração de 20 mM a 50 mM, inclusive. Em outra modalidade, o agente tamponante está presente na solução a uma concentração de pelo menos ou igual a 20 mM. Em outra modalidade, o agente tamponante está presente na solução a uma concentração de pelo menos ou igual a 25 mM. Em outra modalidade, o agente tamponante está presente na solução a uma concentração de pelo menos ou igual a 50 mM.
[0021] Em outra modalidade, a solução compreende um excipiente de carboidrato a uma concentração de 0,1 a 5%. Em uma modalidade, o excipiente de carboidrato está presente na solução a uma concentração de pelo menos ou igual a 1,5%. Em outra modalidade, o excipiente de carboidrato está presente na solução a uma concentração de pelo menos ou igual a 3%. O excipiente de carboidrato pode ser,por exemplo, um selecionado do grupo que consiste em sorbitol e manitol. Em outra modalidade, a solução compreende dois ou mais excipientes de carboidrato.
[0022] Em outra modalidade, a solução compreende um surfactante. Os surfactantes adequados para uso nas formulações da presente invenção incluem, mas não estão limitados a, ésteres de ácidos graxos (por exemplo, monocaprilato de sorbitano, monolaurato de sorbitano, monopalmitato de sorbitano), trioleato de sorbitano, ésteres de ácido graxo de glicerina (por exemplo, monocaprilato de glicerina, monomiristato de glicerina, monoestearato de glicerina), ésteres de ácido graxo de poliglicerina (por exemplo, monoestearato de decagliceril, distearato de decagliceril, monolinoleato de decagliceril), ésteres de ácido graxo de polioxietileno sorbitano (por exemplo, monolaurato de polietileno sorbitano, mono-oleato de polioxietileno sorbitano, monoestearato de polioxietileno sorbitano, monopalmitato de polioxietileno sorbitano, trioleato de polioxietileno sorbitano, tristearato de polioxietileno sorbitano), ésteres de ácido graxo de polioxietileno sorbitol (por exemplo, tetraestearato de polioxietileno sorbitol, tetraoleato de polioxietileno sorbitol), ésteres de ácido gráxico de polioxietileno glicerina (por exemplo, monoestearato de polioxietileno gliceril), ésteres de ácido graxo de polietilenoglicol (por exemplo, distearato de polietilenoglicol), polioxietileno alquil ésteres (por exemplo, polioxietileno lauril éter), polioxietileno polioxipropileno alquil éteres (por exemplo, polioxietileno polioxipropilenoglicol, polioxietileno polioxipropileno propil éter, polioxietileno polioxipropileno cetil éter), polioxietileno alquilfenil éteres (por exemplo, polioxietileno nonilfenil éter), óleos de rícino hidrogenados de polioxietileno (por exemplo, óleo de rícino de polioxietileno, óleo de rícino hidrogenado de polioxietileno), derivados de cera de abelha de polioxietileno (por exemplo, cera de abelha de polioxietileno sorbitol), derivados de polioxietileno lanolina (por exemplo, polioxietileno lanolina), e amidas de ácido graxo de polioxietileno (por exemplo, amida de ácido esteárico de polioxietileno); sulfatos de C12-C18 alquil (por exemplo, cetil sulfato de sódio, lauril sulfato de sódio, oleil sulfato de sódio), C10-C18 alquil éter sulfato de polioxietileno com uma média de 2 a 4 mols de unidades de óxido de etileno adicionadas (por exemplo, polioxietileno lauril sulfato de sódio) e sais de éster de sulfossuccinato de C10-C18 alquil (por exemplo, lauril éster sulfossuccinato de sódio); e surfactantes naturais, tais como lecitina, glicerofosfolipídeo, esfingofosfolipídeos (por exemplo, esfingomielina) e ésteres de sacarose de ácidos graxos de C12-C18.
[0023] Em uma modalidade, o surfactante na formulação é um surfactante não iônico. Em certas modalidades, o surfactante na formulação é um éster de ácido graxo de polioxietileno sorbitano, por exemplo, polissorbato 20, 40, 60, 80 ou uma combinação de um ou mais destes. Em uma modalidade, o surfactante na formulação é polissorbato 80 (Tween 80). Em outra modalidade, o surfactante na formulação é polissorbato 60. Em outra modalidade, o surfactante na formulação é polissorbato 40. Em outra modalidade, o surfactante na formulação é polissorbato 20 (Tween 20). A concentração do surfactante na solução pode estar, por exemplo, entre 0,001% e 0,02%, inclusive. Por exemplo, o surfactante pode estar presente na formulação em uma quantidade de cerca de 0,001% a cerca de 1%, ou cerca de 0,001% a cerca de 0,5%, ou cerca de 0,01% a cerca de 0,2%. Em uma modalidade, as soluções aquosas contêm um surfactante em uma concentração de pelo menos, ou aproximadamente, 0,001% (por exemplo, pelo menos ou aproximadamente, 0,002, 0,003, 0,004, 0,005, 0,006, 0,007, 0,008, 0,009, 0,01 , 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,11, 0,12, 0,13, 0,14, 0,15, 0,16, 0,17, 0,18, 0,19, 0,2, 0,21, 0,22, 0,23, 0,24, 0,25, 0,26 , 0,27, 0,28, 0,29, 0,3, 0,31, 0,32, 0,33, 0,34, 0,35, 0,36, 0,37, 0,38, 0,39, 0,4, 0,41, 0,42, 0,43, 0,44, 0,45, 0,46, 0,47, 0,48, 0,49 ou 0,5 ou mais). Em outra modalidade, a solução aquosa não contém mais que 0,2% (por exemplo, não mais que 0,19, 0,18, 0,17, 0,16, 0,15, 0,14, 0,13, 0,12, 0,11, 0,10, 0,09, 0,08, 0,07, 0,06, 0,05 , 0,04, 0,03, 0,02, 0,01, 0,009, 0,008, 0,007, 0,006, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002 ou 0,001) de um surfactante farmaceuticamente aceitável. Em uma modalidade específica, o surfactante é 0,05% de polissorbato 80.
[0024] Em outra modalidade, a solução compreende um conservante. Exemplos de conservantes incluem, mas não se limitaram a, álcool benzílico, m-cresol e fenol.
[0025] Em uma modalidade, a solução aquosa estável compreende não mais que cinco agentes além do anticorpo anti-C5. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende não mais que quatro agentes além do anticorpo anti-C5. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende não mais que três agentes além do anticorpo anti-C5. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende não mais que dois agentes além do anticorpo anti-C5. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende não mais que um agentes além do anticorpo anti-C5.
[0026] Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende um anticorpo anti-C5 compreendendo uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5, e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6 a uma concentração de 100 ± 20 (por exemplo, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 ou 120) mg/mL; 50 ± 15 (por exemplo, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55 , 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64 ou 65) mM de tampão fosfato; 5 ± 3 (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8) % de sacarose; e 25 ± 10 (por exemplo, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 ou 35) mM de arginina ; em que a solução possui um pH de 7,4 ± 0,5 (por exemplo, 6,9, 7, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8 ou 7,9).
[0027] Em outra modalidade, a solução aquosa estável consiste em um anticorpo anti-C5 compreendendo uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5, e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6 a uma concentração de 100 ± 20 ( por exemplo, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88 , 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113 , 114, 115, 116, 117, 118, 119 ou 120) mg/mL; 50 ± 15 (por exemplo, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51,
52, 53, 54, 55 , 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64 ou 65) mM de tampão fosfato; 5 ± 3 (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8) % de sacarose; e 25 ± 10 (por exemplo, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 ou 35) mM de arginina; em que a solução tem um pH de 7,4 ± 0,5 (por exemplo, 6,9, 7, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8 ou 7,9).
[0028] Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende um anticorpo anti-C5 compreendendo uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5, e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6 a uma concentração de 100 ± 20 (por exemplo, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 ou 120) mg/mL; 50 ± 15 (por exemplo, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55 , 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64 ou 65) mM de tampão fosfato; 5 ± 3 (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8) % de sacarose; e 25 ± 10 (por exemplo, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 ou 35) mM de arginina ; e 0,05 ± 0,03 (por exemplo, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07 e 0,08)% de polissorbato 80, em que a solução possui um pH de 7,4 ± 0,5 (por exemplo, 6,9, 7, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8 ou 7,9).
[0029] Em outra modalidade, a solução aquosa estável consiste de um anticorpo anti-C5 compreendendo uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5, e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6 a uma concentração de 100 ± 20 (por exemplo, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 ou 120) mg/mL; 50 ± 15 (por exemplo, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55 , 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64 ou 65) mM de tampão fosfato; 5 ± 3 (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8) % de sacarose; e 25 ± 10 (por exemplo, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 ou 35) mM de arginina ; e 0,05 ± 0,03 (por exemplo, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07 e 0,08)% de polissorbato 80, em que a solução possui um pH de 7,4 ± 0,5 (por exemplo, 6,9, 7, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8 ou 7,9).
[0030] Em outra modalidade, é fornecida uma solução aquosa estável (por exemplo, uma solução estéril), em que a solução compreende (a) um anticorpo anti- C5 (por exemplo, ravulizumabe), (b) cerca de 50 mM de Tampão Fosfato; (c) cerca de 5% de sacarose; e (d) cerca de 25 mM de arginina. Em outra modalidade, é fornecida uma solução aquosa estável (por exemplo, uma solução estéril), em que a solução compreende (a) um anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) em uma concentração de cerca de 100 mg/mL, (b) cerca de 50 mM de tampão fosfato; (c) cerca de 5% de sacarose; e (d) cerca de 25 mM de arginina. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende a) um anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe), (b) 50 mM de Tampão Fosfato; (c) 5% de sacarose; e (d) 25 mM de Arginina. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende (a) um anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) a uma concentração de 100 mg/mL, (b) 50 mM de Tampão Fosfato; (c) 5% de sacarose; e (d) 25 mM de Arginina.
[0031] Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende (a) um anticorpo anti-C5, (b) cerca de 50 mM de Tampão Fosfato, (c) cerca de 5% de sacarose, (d) cerca de 0,05% de Polissorbato 80 e (e) cerca de 25 mM de Arginina. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende (a) um anticorpo anti-
C5 a uma concentração de cerca de 100 mg/mL, (b) cerca de 50 mM de Tampão Fosfato, (c) cerca de 5% de sacarose, (d) cerca de 0,05% Polissorbato 80 e (e) cerca de 25 mM de Arginina. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende a) um anticorpo anti-C5, (b) 50 mM de Tampão Fosfato, (c) 5% de sacarose, (d) 0,05% de Polissorbato 80 e (e) 25 mM de Arginina.
[0032] Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende (a) um anticorpo anti-C5, (b) 50 mM de Tampão Fosfato, (c) 5% de sacarose, (d) 0,05% de Polissorbato 80 e (e) 25 mM de Arginina. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL, (b) 50 mM de Tampão Fosfato, (c) 5% de sacarose, (d) 0,05% de Polissorbato 80 e (e) 25 mM de Arginina. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL, (b) 50 mM de Tampão Fosfato, (c) 5% de sacarose, (d) 0,05% de Polissorbato 80 e (e) 25 mM de Arginina.
[0033] Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende não mais que quatro agentes além do anticorpo anti-C5. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende não mais que três agentes além do anticorpo anti-C5. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende não mais que dois agentes além do anticorpo anti-C5. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende não mais que um agentes além do anticorpo anti-C5.
[0034] Em outra modalidade, a solução aquosa estável consiste em (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de cerca de 100 mg/mL, (b) cerca de 50 mM de Tampão Fosfato, (c) cerca de 5% de sacarose e (d) cerca de 25 mM de Arginina. Em outra modalidade, a solução aquosa estável consiste em (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL, (b) 50 mM de Tampão Fosfato; (c) 5% de sacarose e (d) 25 mM de Arginina.
[0035] Em outra modalidade, a solução aquosa estável consiste em (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de cerca de 100 mg/mL, (b) cerca de 50 mM de Tampão Fosfato, (c) cerca de 5% de sacarose, (d) cerca de 0,05% de Polissorbato 80 e (e) cerca de 25 mM de Arginina. Em outra modalidade, a solução aquosa estável consiste em (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL, (b) 50 mM de Tampão Fosfato, (c) 5% de sacarose, (d) 0,05% de Polissorbato 80 e (e) 25 mM de Arginina.
[0036] Em uma modalidade, a solução aquosa estável compreende (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de cerca de 100 mg/mL, em que o anticorpo anti-C5 compreende uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5 e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6, (b) cerca de 50 nM de Tampão Fosfato, (c) cerca de 5% de sacarose e (d) cerca de 25 mM de Arginina.
[0037] Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende: (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL, em que o anticorpo anti-C5 compreende uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5 e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6, (b) 50 mM de Tampão Fosfato, (c) 5% de sacarose; e (d) 25 mM de Arginina.
[0038] Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de cerca de 100 mg/mL, em que o anticorpo anti-C5 compreende uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5 e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6, (b) cerca de 50 nM de Tampão Fosfato, (c) cerca de 5% de sacarose e (d) cerca de 0,05% de Polissorbato 80 e (e) cerca de 25 mM de Arginina.
[0039] Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende: (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL, em que o anticorpo anti-C5 compreende uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5 e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6, (b) 50 mM de Tampão Fosfato, (c) 5% de sacarose, (d) 0,05% de Polissorbato 80 e (e) cerca de 25 mM de Arginina.
[0040] Em outra modalidade, a solução aquosa estável consiste em: (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de cerca de 100 mg/mL, em que o anticorpo anti-C5 compreende uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5 e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na
SEQ ID NO:6, (b) cerca de 50 nM de Tampão Fosfato, (c) cerca de 5% de sacarose e (d) cerca de 0,05% de Polissorbato 80 e (e) cerca de 25 mM de Arginina.
[0041] Em outra modalidade, a solução aquosa estável consiste em: (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL, em que o anticorpo anti-C5 compreende uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5 e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6, (b) 50 mM de Tampão Fosfato, (c) 5% de sacarose, (d) 0,05% de Polissorbato 80 e (e) 25 mM de Arginina.
[0042] Em uma modalidade, o pH é 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8 ou 7,9. Em outra modalidade, o pH da solução está entre 7,0 e 7,4. Em outra modalidade, o pH da solução está entre 7,2 e 7,8. Em outra modalidade, o pH da solução está entre 7,2 e 7,6. Em uma modalidade específica, o pH da solução é 7,4.
[0043] As soluções aqui descritas podem ser formuladas para qualquer modo de administração adequado. Em uma modalidade, a solução é formulada para administração por um modo parentérico (por exemplo, injeção intravenosa, subcutânea, intraperitoneal ou intramuscular). Em uma modalidade particular, a solução é formulada para administração subcutânea. Por exemplo, em uma modalidade, a solução aquosa estável compreende um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL e é formulada para administração subcutânea. Em outra modalidade particular, a solução é formulada para administração intravenosa. Por exemplo, em uma modalidade, a solução aquosa estável compreende um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL e é formulada para administração intravenosa.
[0044] Em uma modalidade de qualquer uma das soluções aqui descritas, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) permanece pelo menos 95% (por exemplo, pelo menos 96, 97, 98 ou 99) monomérico durante o armazenamento entre 2°C a 8°C durante pelo menos seis meses conforme determinado por SEC-HPLC (por exemplo, HPLC de permeação em gel). Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 permanece pelo menos 95% (por exemplo, pelo menos 96, 97, 98 ou 99) monomérico durante o armazenamento entre 2°C a 8°C por pelo menos nove meses, conforme determinado por SEC-HPLC. Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 permanece pelo menos 95% (por exemplo, pelo menos 96, 97, 98 ou 99) monomérico durante o armazenamento entre 2°C a 8°C por pelo menos um ano, conforme determinado por SEC-HPLC. Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 permanece pelo menos 95% (por exemplo, pelo menos 96, 97, 98 ou 99) monomérico durante o armazenamento entre 2°C a 8°C por pelo menos 18 meses, conforme determinado por SEC-HPLC. Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 permanece pelo menos 95% (por exemplo, pelo menos 96, 97, 98 ou 99) monomérico durante o armazenamento entre 2°C a 8°C por pelo menos dois anos, conforme determinado por SEC-HPLC.
[0045] Em outra modalidade de qualquer uma das soluções descritas neste documento, menos de 5% do anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) na solução é agregado conforme determinado por SEC-HPLC (por exemplo, HPLC de permeação em gel). Em outra modalidade, menos de 4% do anticorpo anti-C5 na solução é agregado conforme determinado por SEC-HPLC. Em outra modalidade, menos de 3% do anticorpo anti-C5 na solução é agregado conforme determinado por SEC-HPLC. Em outra modalidade, menos de 2% do anticorpo anti-C5 na solução é agregado conforme determinado por SEC-HPLC. Em outra modalidade, menos de 1% do anticorpo anti-C5 na solução é agregado conforme determinado por SEC-HPLC.
[0046] Em outra modalidade de qualquer uma das soluções aqui descritas, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua atividade de ligação ao C5 durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos seis meses, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento. Em outra modalidade,
o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua atividade de ligação a C5 durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos nove meses, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento. Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua atividade de ligação ao C5 durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos um ano, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento. Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua atividade de ligação a C5 durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos dezoito meses, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento. Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua atividade de ligação ao C5 durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos dois anos, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento. Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua atividade de ligação ao C5 durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos três anos, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento.
[0047] Em outra modalidade de qualquer uma das soluções descritas neste documento, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua capacidade de inibir a hemólise durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos nove meses, em comparação com um anticorpo anti-
C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento.
Em outra modalidade de qualquer uma das soluções descritas neste documento, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80% (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99) de sua habilidade de inibir a hemólise durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos seis meses, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento.
Em outra modalidade de qualquer uma das soluções descritas neste documento, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua capacidade de inibir a hemólise durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos um ano, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento.
Em outra modalidade de qualquer uma das soluções descritas neste documento, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, Pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua capacidade de inibir a hemólise durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos 18 meses, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento.
Em outra modalidade de qualquer uma das soluções descritas neste documento, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua capacidade de inibir a hemólise durante o armazenamento de 2°C a 8°C por pelo menos dois anos, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento.
Em outra modalidade de qualquer uma das soluções descritas neste documento, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua capacidade de inibir a hemólise durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos três anos, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento.
[0048] Em outro aspecto, os métodos para a produção de uma solução de anticorpo concentrado estável compreendendo um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL, 50 mM de Tampão Fosfato, 5% de sacarose; e 25 mM de Arginina foram fornecidos, o método compreendendo: i) fornecer uma primeira solução aquosa compreendendo o anticorpo anti- C5, a primeira solução aquosa tendo uma primeira formulação e compreendendo não mais que 10mg/mL do anticorpo anti-C5; ii) submeter a primeira solução aquosa a diafiltração em uma formulação compreendendo 50 mM de Tampão Fosfato, 5% de sacarose e 25 mM de Arginina, em pH 7,4 para, desse modo, produzir uma segunda solução aquosa, em que a segunda solução aquosa tem uma segunda formulação como resultado da diafiltração; e iii) concentrar a segunda solução aquosa para produzir uma solução de anticorpo concentrada estável compreendendo 100 mg/mL do anticorpo anti-C5, 50 mM de Tampão Fosfato, 5% de sacarose; e 25 mM de Arginina.
[0049] Em outra modalidade, é fornecido um método para a produção de uma solução de anticorpo concentrada estável compreendendo um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL, 50 mM de Tampão Fosfato, 5% de sacarose; 25 mM de Arginina e 0,05% de Polissorbato 80 , o método compreendendo: i) fornecer uma primeira solução aquosa compreendendo o anticorpo anti- C5, a primeira solução aquosa tendo uma primeira formulação e compreendendo não mais que 10mg/mL do anticorpo anti-C5; ii) submeter a primeira solução aquosa a diafiltração em uma formulação compreendendo 50 mM de Tampão Fosfato, 5% de sacarose, 25 mM de Arginina e 0,05% de Polissorbato 80, em pH 7,4 para, desse modo, produzir uma segunda solução aquosa, em que a segunda solução aquosa tem uma segunda formulação como resultado da diafiltração; e iii) concentrar a segunda solução aquosa para produzir uma solução de anticorpo concentrada estável compreendendo 100 mg/mL do anticorpo anti-C5, 50 mM de Tampão Fosfato, 5% de sacarose, 25 mM de Arginina e 0,05% de Polissorbato 80.
[0050] Também foram fornecidos métodos de tratamento de um paciente humano com uma condição associada ao complemento, compreendendo a administração ao paciente de uma solução aquosa estável (por exemplo, por via subcutânea ou intravenosa) como descrito neste documento, em uma quantidade eficaz para tratar a condição associada ao complemento. Exemplos de condições associadas ao complemento incluem, mas não estão limitadas a, artrite reumatoide, síndrome do anticorpo antifosfolípide, nefrite lúpica, lesão de isquemia-reperfusão, síndrome hemolítico-urêmica atípica (aHUS), síndrome hemolítico-urêmica típica, hemoglobinúria paroxística noturna (PNH), doença do depósito denso, neuromielite óptica, neuropatia motora multifocal, esclerose múltipla, degeneração macular, síndrome HELLP, aborto espontâneo, púrpura trombocitopênica trombótica, vasculite Pauci-imune, epidermólise bolhosa, aborto recorrente, lesão cerebral traumática, miocardite, um distúrbio cerebrovascular, um distúrbio vascular periférico, um distúrbio renovascular, um distúrbio vascular mesentérico/entérico, vasculite, nefrite na púrpura de Henoch-Schönlein, vasculite associada ao lúpus eritematoso sistêmico, vasculite associada à artrite reumatoide, vasculite por imunocomplexos, doença de Takayasu, cardiomiopatia dilatada, angiopatia diabética, doença de Kawasaki, embolia gasosa venosa, reestenose após colocação de stent, aterectomia rotacional, angioplastia coronária transluminal percutânea, miastenia gravis, doença por aglutininas a frio, dermatomiosite, hemoglobinúria paroxística ao frio, síndrome antifosfolípide, doença de Graves, aterosclerose, mal de Alzheimer, sepse por resposta inflamatória sistêmica, choque séptico, lesão da medula espinhal, glomerulonefrite, rejeição de transplante, tireoidite de Hashimoto, diabetes tipo I, psoríase, pênfigo, anemia hemolítica autoimune, púrpura trombocitopênica idiopática, síndrome de Goodpasture, doença de Degos, e síndrome antifosfolípide catastrófica. Em uma modalidade específica, a condição associada ao complemento é a síndrome hemolítica urêmica atípica (aHUS). Em outra modalidade, a condição associada ao complemento é a hemoglobinúria paroxística noturna (PNH).
[0051] Além disso, foram fornecidos kits que incluem uma solução aquosa estável como descrito neste documento em uma quantidade terapeuticamente eficaz adaptada para uso nos métodos descritos neste documento. Em uma modalidade, o kit compreende: (i) qualquer uma das soluções descritas neste documento; e (ii) um meio para distribuir a solução a um paciente que necessite desta (por exemplo, uma seringa). Em uma modalidade, os meios são adequados para a distribuição subcutânea da solução ao paciente. Em uma modalidade, os meios são adequados para a distribuição intravenosa da solução ao paciente. Em outra modalidade, os kits compreendem ainda pelo menos um agente ativo adicional para uso no tratamento de um distúrbio associado ao complemento em um sujeito.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0052] A Figura 1 mostra os resultados do espalhamento dinâmico de luz para uma titulação de sal do ravulizumabe com tampão trocado de histidina (ALXN1210) a 50 mg/mL.
[0053] A Figura 2 representa os resultados do espalhamento dinâmico de luz para uma titulação de L-Arginina de ravulizumabe com tampão trocado (ALXN1210) a 50 mg/mL.
[0054] A Figura 3 mostra os resultados do espalhamento dinâmico de luz para uma titulação de sal do ravulizumabe com tampão trocado de fosfato (ALXN1210) a 50 mg/mL.
[0055] A Figura 4 representa os resultados da fluorescência de varredura diferencial do ravulizumabe com tampão trocado (ALXN1210) a 50 mg/mL.
[0056] A Figura 5 mostra os resultados do espalhamento dinâmico de luz para o ravulizumabe (ALXN1210) a 10 mg/mL e 114 mg/mL sem L-Arginina e 114 mg/mL com adição de L-Arginina.
[0057] A Figura 6 mostra os dados de estabilidade do ravulizumabe (ALXN1210) (T=0 a T=2; Semanas a 2-8°C).
[0058] A Figura 7 mostra os dados de estabilidade do ravulizumabe (ALXN1210) (T=3 Semanas a T=2; Meses a 2-8°C).
[0059] A Figura 8 mostra os dados de estabilidade do ravulizumabe (ALXN1210)
(T=0 a T=3; Semanas a 23-27°C).
[0060] A Figura 9 mostra os dados de estabilidade do ravulizumabe (ALXN1210) (T=1 Mês a T=2; Meses a 23-27°C).
[0061] A Figura 10 mostra os dados de estabilidade do ravulizumabe (ALXN1210) (T=1 Semana a T=3 Semanas a 37°C).
[0062] A Figura 11 mostra os dados de estabilidade do ravulizumabe (ALXN1210) (T=1 Mês a T=2 Meses a 37°C).
[0063] A Figura 12 mostra os dados de estabilidade da cromatografia por exclusão de tamanho (SEC), % de Monômero do ravulizumabe (ALXN1210) (T=0 a T=2 Meses 2-8 ° C).
[0064] A Figura 13 mostra os dados de estabilidade da cromatografia por exclusão de tamanho (SEC), % de Monômero do ravulizumabe (ALXN1210) (T=0 a T=2 Meses 23-27°C).
[0065] A Figura 14 mostra os dados de estabilidade da cromatografia por exclusão de tamanho (SEC), % de Monômero do ravulizumabe (ALXN1210) (T=0 a T=2 Meses 37°C).
[0066] A Figura 15 mostra os dados de estabilidade do espalhamento dinâmico de luz do ravulizumabe (ALXN1210) e amostras de histidina (T = 0).
[0067] A Figura 16 mostra os dados de estabilidade do espalhamento dinâmico de luz das Amostras de histidina AS do ravulizumabe (ALXN1210) (T=0).
[0068] A Figura 17 mostra os dados de estabilidade do espalhamento dinâmico de luz das Amostras de Fosfato do ravulizumabe (ALXN1210) (T=0).
[0069] A Figura 18 mostra os dados de estabilidade do espalhamento dinâmico de luz das Amostras de Fosfato do ravulizumabe (ALXN1210) (T=2 Meses 2-8°C).
[0070] A Figura 19 mostra os dados de estabilidade para Congelamento/Descongelamento do ravulizumabe (ALXN1210) (T=0 ao Ciclo 2 a T=1M -20°C).
[0071] A Figura 20 mostra os dados de estabilidade para Congelamento/Descongelamento do ravulizumabe (ALXN1210) Ciclo 3 ao Ciclo 5 a T=1M -20°C.
[0072] A Figura 21 mostra os dados de estabilidade da cromatografia por exclusão de tamanho (SEC), % de Monômero do ravulizumabe (ALXN1210) (Congelamento/Descongelamento a T=1 Mês -20°C).
[0073] A Figura 22 mostra os dados de estabilidade do protótipo do ravulizumabe (ALXN1210) (T=0 a T=2 Meses a 2-8°C).
[0074] A Figura 23 mostra os dados de estabilidade do protótipo do ravulizumabe (ALXN1210) (T=3 Meses a T=6 Meses a 2-8°C).
[0075] A Figura 24 mostra os dados de estabilidade do protótipo do ravulizumabe (ALXN1210) (T=9 Meses a T=12 Meses a 2-8°C).
[0076] A Figura 25 mostra os dados de estabilidade do protótipo do ravulizumabe (ALXN1210) (T=1 Meses a T=2 Meses a 23-27°C).
[0077] A Figura 26 mostra os dados de estabilidade do protótipo do ravulizumabe (ALXN1210) (T=3 Meses a T=6 Meses a 23-27°C.
[0078] A Figura 27 mostra os dados de estabilidade do protótipo do ravulizumabe (ALXN1210) (T=9 Meses a T=12 Meses a 23-27°C).
[0079] A Figura 28 mostra os dados de estabilidade do protótipo do ravulizumabe (ALXN1210) (T=2 semanas a T=2 meses a 37 ° C.
[0080] A Figura 29 mostra os dados de estabilidade do protótipo do ravulizumabe (ALXN1210) (T=1 Mês a T=3 Meses a -20°C).
[0081] A Figura 30 mostra os dados de estabilidade do protótipo do ravulizumabe (ALXN1210) (T=6 Meses a T=12 Meses a -20°C).
[0082] A Figura 31 mostra os resultados do estudo de estabilidade do protótipo do ravulizumabe (ALXN1210) (T=3 Meses a T=6 Meses a -80°C).
[0083] A Figura 32 mostra os resultados do estudo de estabilidade do protótipo do ravulizumabe (ALXN1210) (T=12 Meses a -80°C).
[0084] A Figura 33 mostra os dados de estabilidade da cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) do protótipo, % de Monômero do ravulizumabe (ALXN1210) (T=0 a T=12 Meses 2-8°C).
[0085] A Figura 34 mostra os dados de estabilidade da cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) do protótipo, % de Monômero do ravulizumabe (ALXN1210) (T=0 a T=12 Meses 23-27°C).
[0086] A Figura 35 mostra os dados de estabilidade da cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) do protótipo, % de Monômero do ravulizumabe (ALXN1210) (T=0 a T=12 Meses 37°C).
[0087] A Figura 36 mostra os dados de estabilidade da cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) do protótipo, % de Monômero do ravulizumabe (ALXN1210) (T=0 a T=12 Meses -20°C).
[0088] A Figura 37 mostra os dados de estabilidade da cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) do protótipo, % de Monômero do ravulizumabe (ALXN1210) (T=0 a T=12 Meses -80°C).
[0089] A Figura 38 mostra os dados de estabilidade do espalhamento dinâmico de luz do protótipo das Amostras de Fosfato do ravulizumabe (ALXN1210) a 75 mg/mL (T=0).
[0090] A Figura 39 mostra os dados de estabilidade do espalhamento dinâmico de luz do protótipo das Amostras de Fosfato do ravulizumabe (ALXN1210) a 75 mg/mL (T=1 Mês 2-8°C).
[0091] A Figura 40 mostra os dados de estabilidade do espalhamento dinâmico de luz do protótipo das Amostras de Fosfato do ravulizumabe (ALXN1210) a 100 mg/mL (T=1 Mês 2-8°C).
[0092] A Figura 41 mostra os dados de estabilidade da cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) do protótipo, % de Monômero do ravulizumabe (ALXN1210) - Congelamento/Descongelamento Ciclos 1-3 a T=1 Mês -20°C.
[0093] A Figura 42 mostra os dados de estabilidade da cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) do protótipo, % de Monômero do ravulizumabe (ALXN1210) - Congelamento/Descongelamento Ciclos 4-5 a T=1 Mês -20°C.
[0094] A Figura 43 mostra os dados de estabilidade da cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) do protótipo, % de Monômero do ravulizumabe (ALXN1210) - Congelamento/Descongelamento Ciclos 1-3 a T=3 Meses -80°C.
[0095] A Figura 44 mostra os dados de estabilidade da cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) do protótipo, % de Monômero do ravulizumabe (ALXN1210) -
Congelamento/Descongelamento Ciclos 4-5 a T=3 Meses -80°C.
[0096] A Figura 45 mostra os dados de estabilidade da cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) do protótipo, % de Monômero do ravulizumabe (ALXN1210) - Congelamento/Descongelamento Ciclos 1-5 a T=1 Mês -20°C.
[0097] A Figura 46 mostra os dados de estabilidade da cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) do protótipo, % de Monômero para o congelamento/descongelamento do ravulizumabe (ALXN1210) Ciclo 1-5 a T=3 Meses -80°C.
[0098] A Figura 47 mostra que o desenho geral é de um estudo de Fase 1 projetado para avaliar a segurança, tolerabilidade, PK, PD e imunogenicidade de uma dose única de 400 mg de ravulizumabe (ALXN1210) administrada por via subcutânea em comparação com uma dose única de 400 mg de ravulizumabe (ALXN1210) administrada por via intravenosa ou placebo por administrado por via subcutânea em 42 sujeitos saudáveis.
[0099] A Figura 48 fornece uma visão geral da disposição de todos os sujeitos.
[0100] A Figura 49 é um gráfico que representa as concentrações séricas individuais do ALXN1210 versus o tempo nominal usando uma escala linear
[0101] A Figura 50 é um gráfico que representa as concentrações séricas individuais do ALXN1210 versus o tempo nominal usando uma escala log-linear
[0102] A Figura 51 é um gráfico que representa a alteração média (± SD) percentual na concentração sérica de C5 livre a partir da avaliação inicial ao longo do tempo para os sujeitos que receberam placebo SC, ALXN1210 SC e ALXN1210 IV.
[0103] A Figura 52 é um gráfico que representa a alteração percentual média (± SD) nas concentrações séricas totais de C5 a partir da avaliação inicial ao longo do tempo para os sujeitos que receberam placebo SC, ALXN1210 SC e ALXN1210 IV.
[0104] A Figura 53 é um gráfico que representa a alteração média (± SD) percentual de hemólise em glóbulos vermelhos de galinha (cBRC) a partir da avaliação inicial ao longo do tempo para os sujeitos que receberam placebo SC, ALXN1210 SC e ALXN1210 IV.
DESCRIÇÃO DETALHADA
[0105] A divulgação apresenta soluções aquosas estáveis contendo uma alta concentração de anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe). As soluções podem ser usadas em uma variedade de aplicações terapêuticas, como métodos para o tratamento ou prevenção de distúrbios associados ao complemento. Embora de maneira alguma pretenda ser limitativo, exemplos de soluções, formulações, kits terapêuticos e métodos para fazer e usar qualquer um dos anteriores são elaborados abaixo e são exemplificados nos Exemplos de trabalho. I. Definições
[0106] A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos utilizados neste documento têm o mesmo significado que é comumente entendido por aqueles versados na técnica. Embora quaisquer métodos e materiais similares ou equivalentes aos descritos neste documento possam ser usados na prática ou em teste da presente invenção, os métodos e composições preferidos são descritos neste documento.
[0107] A forma singular "um", "uma" e "a/o" inclui referências no plural, a menos que o contexto claramente dite de outra forma.
[0108] O termo “cerca de”, particularmente em referência a uma quantidade ou número, deve abranger desvios dentro de mais ou menos dez por cento (± 10%), (por exemplo, ± 5%).
[0109] O termo "formulação farmacêutica" refere-se a preparações que estão em tal forma a permitir que a atividade biológica dos ingredientes ativos seja inequivocamente eficaz e que não contêm componentes adicionais que sejam significativamente tóxicos para os sujeitos aos quais a formulação seria administrada.
[0110] Como utilizado neste documento, uma composição farmacêutica "aquosa" é uma composição adequada para uso farmacêutico, em que o carreador aquoso é água. Uma composição adequada para uso farmacêutico pode ser estéril, homogênea e/ou isotônica. As composições farmacêuticas aquosas podem ser preparadas diretamente em uma forma aquosa e/ou podem ser reconstituídas a partir de um liofilizado.
[0111] Uma formulação "isotônica" é aquela que possui essencialmente a mesma pressão osmótica do sangue humano. As formulações isotônicas terão geralmente uma pressão osmótica de cerca de 275 a 350 mOsm/kg. O termo "hipotônico" descreve uma formulação com pressão osmótica abaixo da do sangue humano. Correspondentemente, o termo "hipertônico" é usado para descrever uma formulação com uma pressão osmótica acima da do sangue humano. A isotonicidade pode ser medida, por exemplo, usando um osmômetro de pressão de vapor ou de congelamento de gelo. Um "agente de tonicidade" é um composto que torna a formulação isotônica.
[0112] Como utilizado neste documento, a "osmolalidade" de uma solução é o número de osmoles de soluto por quilograma de solvente. A osmolalidade é uma medida do número de partículas presentes na solução e é independente do tamanho ou peso das partículas. Ele pode ser medido apenas pelo uso de uma propriedade da solução que depende apenas da concentração de partículas. Essas propriedades são depressão da pressão de vapor, depressão do ponto de congelamento, elevação do ponto de ebulição e pressão osmótica e são coletivamente chamadas de propriedades coligativas.
[0113] Uma formulação "estéril" é asséptica ou livre ou essencialmente livre de todos os microorganismos vivos e seus esporos.
[0114] Uma formulação "estável", como utilizado neste documento, é aquela em que o anticorpo retém essencialmente sua estabilidade física e/ou estabilidade química e/ou atividade biológica após armazenamento. Várias técnicas analíticas para medir a estabilidade de proteínas estão disponíveis na técnica e são analisadas em Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., Nova York, NY, Pubs. (1991) e Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993). A estabilidade das formulações de anticorpo anti-C5 pode ser medida em temperaturas selecionadas após períodos de tempo selecionados. Por exemplo, um aumento na formação de agregados após o armazenamento é um indicador de instabilidade de uma formulação aquosa de anticorpo anti-C5. Além da formação de agregados, a retenção da clareza, cor e odor originais ao longo da vida útil são indicadores utilizados para monitorar a estabilidade das soluções aquosas de anticorpos anti-C5 descritas neste documento.
[0115] Um anticorpo "retém sua estabilidade física" em uma formulação farmacêutica se não mostrar substancialmente sinais de agregação, precipitação e/ou desnaturação após exame visual de cor e/ou clareza, ou conforme medido por espalhamento de luz UV ou por cromatografia por exclusão de tamanho.
[0116] O termo "agregação" refere-se à montagem de proteínas nativas dobradas a partir de agregados contendo estruturas não nativas. A agregação pode ocorrer mesmo sob condições fisiológicas, não desnaturantes, e geralmente é irreversível, resultando em agregados não nativos que são inativos e, às vezes, imunogênicos e tóxicos.
[0117] A frase "níveis de agregação baixos a indetectáveis", conforme usado neste documento, refere-se a amostras que contêm não mais que cerca de 5%, não mais que cerca de 4%, não mais que cerca de 3%, não mais que cerca de 2%, não mais que cerca de 1 % e não mais do que cerca de 0,5% de agregação em peso de proteína, medida pelas técnicas de cromatografia líquida de alta eficiência de permeação em gel (GP-HPLC), cromatografia por exclusão de tamanho de alta eficiência (HPSEC) ou espalhamento de luz estático (SLS).
[0118] Um anticorpo "retém sua estabilidade química" em uma formulação farmacêutica se a estabilidade química em um determinado momento for tal que se considere que o anticorpo ainda retenha sua atividade biológica como definido abaixo. A estabilidade química pode ser avaliada através da detecção e quantificação de formas quimicamente alteradas do anticorpo. A alteração química pode envolver modificação de tamanho (por exemploclipagem), desamidação, racemização, hidrólise, oxidação, eliminação beta e troca de dissulfeto, que podem ser avaliadas usando técnicas conhecidas, por exemplo, cromatografia por exclusão de tamanho, SDS-PAGE, ionização e dessorção a laser assistida por matriz/espectrometria de massa de tempo de voo (MALDI/TOF MS) e/ou cromatografia de troca iônica.
[0119] Um anticorpo "mantém sua atividade biológica" em uma formulação farmacêutica, se o anticorpo em uma formulação farmacêutica for biologicamente ativo para a finalidade a que se destina. Por exemplo, a atividade biológica é mantida se a atividade biológica do anticorpo na formulação farmacêutica estiver dentro de cerca de 30%, cerca de 20% ou cerca de 10% (dentro dos erros do ensaio) da atividade biológica exibida no momento em que a formulação farmacêutica foi preparada (por exemplo, conforme determinado em um ensaio de ligação ao antígeno). Neste documento, "atividade biológica" de um anticorpo monoclonal refere- se à capacidade do anticorpo de se ligar ao antígeno. Pode ainda incluir a ligação do anticorpo ao antígeno e resultar em uma resposta biológica mensurável que pode ser medida in vitro ou in vivo.
[0120] "Prazo de validade" de um produto farmacêutico, por exemplo, uma solução aquosa compreendendo um anticorpo anti-C5 é o período de tempo em que o produto é armazenado antes da decomposição. Por exemplo, o prazo de validade pode ser definido como o tempo de decomposição de 0,1%, 0,5%, 1%, 5% ou 10% do produto.
[0121] Como utilizado neste documento, o termo "anticorpo" descreve polipeptídeos compreendendo pelo menos um local de ligação ao antígeno derivado de anticorpo (por exemplo, região VH/VL ou Fv ou CDR). Os anticorpos incluem formas conhecidas de anticorpos. Por exemplo, o anticorpo pode ser um anticorpo humano, um anticorpo humanizado, um anticorpo biespecífico ou um anticorpo quimérico. O anticorpo também pode ser um Fab, Fab'2, ScFv, SMIP, AffibodyÒ, nanocorpo ou um anticorpo de domínio. O anticorpo também pode ser de qualquer um dos seguintes isotipos: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgAsec, IgD e IgE. O anticorpo pode ser um anticorpo que ocorre naturalmente ou pode ser um anticorpo que foi alterado por uma técnica de manipulação de proteínas (por exemplo, por mutação, exclusão, substituição, conjugação com uma fração que não seja anticorpo). Por exemplo, um anticorpo pode incluir um ou mais aminoácidos variantes (em comparação com um anticorpo que ocorre naturalmente) que alteram uma propriedade (por exemplo, uma propriedade funcional) do anticorpo. Por exemplo, são conhecidas na técnica várias alterações que afetam, por exemplo, meia-vida, função efetora e/ou respostas imunes ao anticorpo em um paciente. O termo anticorpo também inclui construções polipeptídicas artificiais ou manipuladas que compreendem pelo menos um local de ligação ao antígeno derivado de anticorpo.
[0122] Como utilizado neste documento, os termos "ligação específica", "ligação seletiva", "liga seletivamente" e "liga especificamente", referem-se à ligação de anticorpos a um epítopo em um antígeno predeterminado, mas não a outros antígenos. Normalmente, o anticorpo (i) se liga com uma constante de dissociação de equilíbrio (KD) de aproximadamente menos de 10-7 M, tal como aproximadamente menos de 10-8 M, 10-9 M ou 10-10 M ou até menor quando determinado por, por exemplo, tecnologia de ressonância plasmônica de superfície (SPR) em um instrumento de ressonância plasmônica de superfície BIACORE® 2000 usando o antígeno predeterminado, por exemplo, C5, como analito e o anticorpo como ligante, ou análise de Scatchard da ligação do anticorpo a células positivas para antígeno, e (ii) se liga ao antígeno predeterminado com uma afinidade que é pelo menos duas vezes maior que sua afinidade para a ligação a um antígeno n]ao específico (por exemplo, BSA, caseína) que não seja o antígeno predeterminado ou um antígeno intimamente relacionado. Por conseguinte, a menos que indicado de outra forma, um anticorpo que "se liga especificamente a C5 humano" refere-se a um anticorpo que se liga ao C5 humano solúvel ou ligado a células com um KD de 10-7 M ou menos, como aproximadamente menos que 10-8 M, 10-9 M ou 10-10 M ou ainda menos.
[0123] O termo "ressonância plasmônica de superfície", como utilizado neste documento, refere-se a um fenômeno óptico que permite a análise de interações bioespecíficas em tempo real pela detecção de alterações nas concentrações de proteínas dentro de uma matriz de biossensores, por exemplo, usando o sistema BIAcore (Pharmacia Biosensor AB Uppsala, Suécia e Piscataway, NJ). Para mais descrições, consultar Jonsson, U., et al. (1993) Ann. Biol. Clin. 51:19-26; Jonsson, U., et al. (1991) Biotechniques 11:620-627; Johnsson, B. et al. (1995) J. Mol. Reconhecer. 8:125-131; e Johnnson, B., et al. (1991) Anal. Biochem. 198:268-277.
[0124] O termo "Koff", como utilizado neste documento, pretende referir-se à constante da taxa off para dissociação de um anticorpo do complexo de anticorpo/antígeno.
[0125] O termo "Kd", como utilizado neste documento, pretende referir-se à constante de dissociação de uma interação anticorpo-antígeno específica.
[0126] Conforme utilizado neste documento, os termos "sujeito" ou "paciente" são usados de forma intercambiável neste documento e se referem a um mamífero como humano, camundongo, rato, hamster, porquinho da índia, coelho, gato, cachorro, macaco, vaca, cavalo, porco e similares. Em uma modalidade, o paciente é um paciente humano (por exemplo, um paciente humano que tem uma condição associada ao complemento).
[0127] Os termos "tratar", "tratando" e "tratamento", conforme utilizados neste documento, referem-se a medidas terapêuticas descritas neste documento. Os métodos de "tratamento" empregam administração a um sujeito da combinação divulgada neste documento, a fim de curar, atrasar, reduzir a gravidade ou melhorar um ou mais sintomas da doença ou distúrbio ou doença ou distúrbio recorrente, ou para prolongar a sobrevivência de um sujeito além do esperado na ausência de tal tratamento.
[0128] Como utilizado neste documento, "tratamento eficaz" refere-se ao tratamento que produz um efeito benéfico, por exemplo, melhora de pelo menos um sintoma de uma doença ou distúrbio. Um efeito benéfico pode assumir a forma de uma melhora em relação à avaliação inicial, por exemplo, uma melhora em relação a uma medição ou observação feita antes do início da terapia de acordo com o método. O tratamento eficaz pode se referir ao alívio de pelo menos um sintoma de uma doença ou condição.
[0129] O termo "quantidade eficaz" refere-se a uma quantidade de um agente que fornece o resultado biológico, terapêutico e/ou profilático desejado. Esse resultado pode ser redução, melhora, paliação, diminuição, atraso e/ou alívio de um ou mais dos sinais, sintomas ou causas de uma doença ou condição, ou qualquer outra alteração desejada de um sistema biológico. Em um exemplo, uma "quantidade eficaz" é a quantidade de uma solução aquosa estável para aliviar pelo menos um sintoma de uma doença ou condição. Uma quantidade eficaz pode ser administrada em uma ou mais administrações.
[0130] Conforme utilizado neste documento, os termos "indução" e "fase de indução" são usados de forma intercambiável e se referem à primeira fase do tratamento.
[0131] Conforme utilizado neste documento, os termos "manutenção" e "fase de manutenção" são usados de forma intercambiável e se referem à segunda fase do tratamento. Em certas modalidades, o tratamento é continuado desde que seja observado benefício clínico ou até que ocorra toxicidade incontrolável ou progressão da doença. II. Anticorpos Anti-C5
[0132] Os anticorpos anti-C5 descritos neste documento se ligam ao complemento do componente C5 (por exemplo, C5 humano) e inibem a clivagem de C5 nos fragmentos C5a e C5b. Conforme descrito acima, esses anticorpos também têm, por exemplo, propriedades farmacocinéticas aprimoradas em relação a outros anticorpos anti-C5 (por exemplo, eculizumabe) usados para fins terapêuticos.
[0133] Os anticorpos anti-C5 (ou domínios VH/VL derivados destes) adequados para uso na invenção podem ser gerados usando métodos bem conhecidos na técnica. Alternativamente, podem ser usados anticorpos anti-C5 reconhecidos na técnica. Os anticorpos que competem com qualquer um desses anticorpos reconhecidos na técnica para ligação a C5 também podem ser usados.
[0134] Um anticorpo anti-C5 exemplificativo é o ravulizumabe compreendendo cadeias pesadas e leves com as sequências mostradas nas SEQ ID NOs: 14 e 11, respectivamente, ou fragmentos de ligação ao antígeno e suas variantes. O ravulizumabe (também conhecido como BNJ441 e ALXN1210) é descrito em PCT/US2015/019225 e Patente US N° 9.079.949, os ensinamentos dos quais são incorporados neste documento por referência. Os termos ravulizumabe, BNJ441 e ALXN1210 podem ser usados de forma intercambiável neste documento. O Ravulizumabe se liga seletivamente à proteína C5 de complemento humano, inibindo sua clivagem para C5a e C5b durante a ativação do complemento. Essa inibição impede a liberação do mediador pró-inflamatório C5a e a formação do complexo de ataque à membrana citolítica (MAC) C5b-9, preservando os componentes proximais ou precoces da ativação do complemento (por exemplo, C3 e C3b), essenciais para a opsonização de microrganismos e eliminação de complexos imunes.
[0135] Em outras modalidades, o anticorpo compreende as CDRs das cadeias pesada e leve ou regiões variáveis de ravulizumabe. Em conformidade, em uma modalidade, o anticorpo compreende os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável da cadeia pesada (VH) do ravulizumabe com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 12 e os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região variável da cadeia leve (VL) de ravulizumabe com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 8. Em outra modalidade, o anticorpo compreende domínios de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada tendo as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 19, 18 e 3, respectivamente, e domínios CDR1, CDR2 e CDR3 tendo as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 4, 5 e 6, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo compreende regiões VH e VL com as sequências de aminoácidos estabelecidas na SEQ ID NO:12 e SEQ ID NO:8, respectivamente.
[0136] Outro anticorpo anti-C5 exemplificativo é o anticorpo BNJ421 compreendendo cadeias pesada e leve tendo as sequências mostradas nas SEQ ID NOs: 20 e 11, respectivamente, ou fragmentos de ligação ao antígeno e variantes deste. O BNJ421 (também conhecido como ALXN1211) é descrito em PCT/US2015/019225 e Patente US N° 9.079.949, os ensinamentos dos quais são incorporados neste documento por referência.
[0137] Em outras modalidades, o anticorpo compreende as CDRs de cadeias pesada e leve ou regiões variáveis de BNJ421. Em conformidade, em uma modalidade, o anticorpo compreende os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região VH de BNJ421 tendo a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 12 e os domínios CDR1, CDR2 e CDR3 da região VL de BNJ421 tendo a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 8. Em outra modalidade, o anticorpo compreende domínios de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada tendo as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 19, 18 e 3, respectivamente, e domínios CDR1, CDR2 e CDR3 tendo as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 4, 5 e 6, respectivamente. Em outra modalidade, o anticorpo compreende regiões VH e VL com as sequências de aminoácidos estabelecidas na SEQ ID NO:12 e SEQ ID NO:8, respectivamente.
[0138] Os limites exatos das CDRs foram definidos diferentemente de acordo com métodos diferentes. Em algumas modalidades, as posições das CDRs ou regiões de framework dentro de um domínio variável de cadeia leve ou pesada podem ser conforme definidas por Kabat et al. (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” Publicação NIH Nº 91-3242, Department of Health and Human Services, Bethesda, MD]. Nesses casos, as CDRs podem ser referidas como "CDRs de Kabat" (, por exemplo, "LCDR2 de Kabat" ou "HCDR1 de Kabat"). Em algumas modalidades, as posições das CDRs de uma região variável de cadeia leve ou pesada podem ser conforme definido por Chothia et al. (1989) Nature 342:877-883. Consequentemente, essas regiões podem ser chamadas de "CDRs de Chothia" (por exemplo, "LCDR2 de Chothia" ou "HCDR3 de Chothia"). Em algumas modalidades, as posições das CDRs das regiões variáveis de cadeia leve e pesada podem ser conforme definido por uma definição combinada de Kabat-Chothia. Nestas modalidades, estas regiões podem ser referidas como CDRs de Kabat-Chothia combinadas". Thomas et al. [(1996)Mol Immunol 33(17/18):1389-1401] exemplifica os limites de CDR para definições de Kabat e Chothia.
[0139] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-C5 descrito neste documento compreende uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo ou consistindo na seguinte sequência de aminoácidos: GHIFSNYWIQ (SEQ ID NO: 19). Em algumas modalidades, um anticorpo anti-C5 descrito neste documento compreende uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo ou consistindo na seguinte sequência de aminoácidos: EILPGSGHTEYTENFKD (SEQ ID NO:18). Em algumas modalidades, um anticorpo anti-C5 descrito neste documento compreende uma região variável de cadeia pesada compreendendo a seguinte sequência de aminoácidos:
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGHIFSNYWIQWVRQAPGQGLEWMGEILPG
SGHTEYTENFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARYFFGSSPNWYF DVWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:12).
[0140] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-C5 descrito neste documento compreende uma região variável de cadeia leve compreendendo a seguinte sequência de aminoácidos:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCGASENIYGALNWYQQKPGKAPKLLIYGATNLADG VPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNVLNTPLTFGQGTKVEIK (SEQ ID NO:8).
[0141] Um anticorpo anti-C5 descrito neste documento pode, em algumas modalidades, compreender uma região constante Fc humana variante que se liga ao receptor Fc neonatal humano (FcRn) com maior afinidade do que a da região constante Fc nativa a partir da qual a região constante Fc humana variante foi derivada. Por exemplo, a região constante Fc pode compreender uma ou mais (por exemplo, duas, três, quatro, cinco, seis, sete ou oito ou mais) substituições de aminoácidos em relação à região constante Fc humana nativa a partir da quaol a região constante Fc humana variante foi derivada. As substituições podem aumentar a afinidade de ligação de um anticorpo IgG contendo a região constante Fc variante para FcRn a pH 6,0, enquanto mantendo a dependência de pH da interação. Os métodos para testar se uma ou mais substituições na região constante Fc de um anticorpo aumenta a afinidade da região constante Fc para FcRn a pH 6,0 (enquanto mantendo a dependência de pH da interação) são conhecidos na técnica e exemplificados nos exemplos trabalhados. Vide, por exemplo, PCT/US2015/019225 e Patente U.S. Nº 9.079949, as divulgações das quais são, cada uma, incorporadas neste documento por referência em sua totalidade.
[0142] As substituições que aumentam a afinidade de ligação de uma região constante de anticorpo Fc para FcRn são conhecidas na técnica e incluem, por exemplo, (1) a substituição tripla M252Y/S254T/T256E descrita por Dall'Acqua et al. (2006) J Biol Chem 281: 23514-23524; (2) as substituições M428L ou T250Q/M428L descritas em Hinton et al. (2004) J Biol Chem 279:6213-6216 e Hinton et al. (2006) J Immunol 176:346-356; e (3) the N434A ou substituições T307/E380A/N434A descritas em Petkova et al. (2006) Int Immunol 18(12):1759-69. Os pares de substituição adicionais: P257I/Q311I, P257I/N434H e D376V/N434H são descritos em, por exemplo, Datta-Mannan et al. (2007) J. Biol Chem 282(3):1709-1717, a divulgação da qual é incorporada neste documento por referênica em sua totalidade.
[0143] Em algumas modalidades, a região constante variante tem uma substituição no resíduo de aminoácido EU 255 por valina. Em algumas modalidades, a região constante variante tem uma substituição no resíduo de aminoácido EU 309 por asparagina. Em algumas modalidades, a região constante variante tem uma substituição no resíduo de aminoácido 312 EU para isoleucina. Em algumas modalidades, a região constante variante tem uma substituição no resíduo de aminoácido 386 EU.
[0144] Em algumas modalidades, a região constante Fc variante compreende não mais do que 30 (por exemplo, não mais do que 29, 28, 27, 26. 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, nove, oito, sete, seis, cinco quatro, três ou duas) substituições, inserções ou deleções de aminoácidos em relação à região constante nativa a partir da qual foi derivada. Em algumas modalidades, a região constante Fc variante compreende uma ou mais substituições de aminoácidos selecionada dentre o grupo que consiste em: M252Y, S254T, T256E, N434S, M428L, V259I, T250I e V308F. Em algumas modalidades, a região constante Fc compreende uma metionina na posição 428 e uma aspargina na posição 434, cada uma na numeração EU. Em algumas modalidades, a região constante Fc variante compreende uma substituição dupla de 428L/434S conforme descrito em, por exemplo, Patente U.S. Nº 8.088.376.
[0145] Em algumas modalidades, o local preciso destas mutações pode ser deslocado a partir da posição da região constante Fc humana nativa devido à manipulação do anticorpo. Por exemplo, a substituição dupla de 428L/434S quando usada em um Fc quimérico IgG2/4 pode corresponder a 429L e 435S como as variantes M429L e N435S encontradas em ravulizumabe (BNJ441) e descritas na Patente U.S. Número 9.079.949, a divulgação da qual é incorporada neste documento por referência em sua totalidade.
[0146] Em algumas modalidades, a região constante variante compreende uma substituição na posição de aminoácido 237, 238, 239, 248, 250, 252, 254, 255, 256, 257, 258, 265, 270, 286, 289, 297, 298, 303, 305, 307, 308, 309, 311, 312, 314, 315, 317, 325, 332, 334, 360, 376, 380, 382, 384, 385, 386, 387, 389, 424, 428, 433, 434 ou 436 (numeração EU) em relação à região constante Fc humana nativa. Em algumas modalidades, a substituição é selecionada dentre o grupo que consiste em:
metionina para glicina na posição 237; alanina para prolina na posição 238; lisina para serina na posição 239; isoleucina para lisina na posição 248; alanina, fenilalanina, isoleucina, metionina, glutamina, serina, valina, triptofano ou tirosina para treonina na posição 250; fenilalanina, triptofano ou tirosina para metionina na posição 252; treonina para serina na posição 254; ácido glutâmico para arginina na posição 255; ácido aspártico, ácido glutâmico ou glutamina para treonina na posição 256; alanina, glicina, isoleucina, leucina, metionina, asparagina, serina, treonina ou valina para prolina na posição 257; histidina para ácido glutâmico na posição 258; alanina para ácido aspártico na posição 265; fenilalanina para ácido aspártico na posição 270; alanina, ou ácido glutâmico para asparagina na posição 286; histidina para treonina na posição 289; alanina para asparagina na posição 297; glicina para serina na posição 298; alanina para valina na posição 303; alanina para valina na posição 305; alanina, ácido aspártico, fenilalanina, glicina, histidina, isoleucina, lisina, leucina, metionina, asparagina, prolina, glutamina, arginina, serina, valina, triptofano ou tirosina para treonina na posição 307; alanina, fenilalanina, isoleucina, leucina, metionina, prolina, glutamina ou treonina para valina na posição 308; alanina, ácido aspártico, ácido glutâmico, prolina ou arginina para leucina ou valina na posição 309; alanina, histidina ou isoleucina para glutamina na posição 311; alanina ou histidina para ácido aspártico na posição 312; lisina ou arginina para leucina na posição 314; alanina ou histidina para asparagina na posição 315; alanina para lisina na posição 317; glicina para asparagina na posição 325; valina para isoleucina na posição 332; leucina para lisina na posição 334; histidina para lisina na posição 360; alanina para ácido aspártico na posição 376; alanina para ácido glutâmico na posição 380; alanina para ácido glutâmico na posição 382; alanina para asparagina ou serina na posição 384; ácido aspártico ou histidina para glicina na posição 385; prolina para glutamina na posição 386; ácido glutâmico para prolina na posição 387; alanina ou serina para asparagina na posição 389; alanina para serina na posição 424; alanina, ácido aspártico, fenilalanina, glicina, histidina, isoleucina, lisina, leucina, asparagina, prolina, glutamina, serina, treonina, valina, triptofano ou tirosina para metionina na posição 428; lisina para histidina na posição 433; alanina, fenilalanina, histidina, serina,
triptofano ou tirosina para asparagina na posição 434; e histidina para tirosina ou fenilalanina na posição 436, todas em numeração EU.
[0147] Os anticorpos anti-C5 adequados para uso os métodos descritos neste documento, em algumas modalidades, compreendem um polipeptídeo de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO: 14 e/ou um polipeptídeo de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO: 11. Alternativamente, os anticorpos anti-C5 para uso nos métodos descritos neste documento, em algumas modalidades, compreendem um polipeptídeo de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO: 20 e/ou um polipeptídeo de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO: 11.
[0148] Em algumas modalidades, o anticorpo se liga a C5 a pH 7,4 a 25 ºC (e, de outro modo, sob condições fisiológicas) com uma constante de dissociação de afinidade (KD) que é de pelo menos 0,1 (por exemplo, pelo menos 0,15, 0,175, 0,2, 0,25, 0,275, 0,3, 0,325, 0,35, 0,375, 0,4, 0,425, 0,45, 0,475, 0,5, 0,525, 0,55, 0,575, 0,6, 0,625, 0,65, 0,675, 0,7, 0,725, 0,75, 0,775, 0,8, 0,825, 0,85, 0,875, 0,9, 0,925, 0,95 ou 0,975) nM. Em algumas modalidades, o KD do anticorpo anti-C5, ou fragmento de ligação ao antígeno deste, não é maior do que 1 (por exemplo, não maior que 0,9, 0,8, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3 ou 0,2) nM.
[0149] Em outras modalidades, [(KD do anticorpo para C5 a pH 6,0 em C)/(KD do anticorpo para C5 a pH 7,4 a 25ºC)] é maior do que 21 (por exemplo, maior do que 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500, 7000, 7500 ou 8000).
[0150] Os métodos para determinar se um anticorpo se liga a um antígeno proteico e/ou a afinidade para um anticorpo para um antígeno proteico são conhecidos na técnica. Por exemplo, a ligação de um anticorpo a um antígeno proteico pode ser detectada e/ou quantificada usando uma variedade de técnicas, tais como, mas não limitadas a, Western blot, dot blot, método de ressonância de plasmon de superfície
(SPR) (por exemplo, sistema BIAcore; Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Suécia e Piscataway, N.J.), ou ensaio imunossorvente ligado à enzima (ELISA). Vide, por exemplo, Benny K. C. Lo (2004) "Antibody Engineering: Methods and Protocols,” Humana Press (ISBN: 1588290921); Johne et al. (1993) J Immunol Meth 160:191- 198; Jonsson et al. (1993) Ann Biol Clin 51:19-26; e Jonsson et al. (1991) Biotechniques 11:620-627. Além disso, os métodos para medir a afinidade (por exemplo, dissociação e constantes de associação) são apresentados nos exemplos.
[0151] Conforme usado neste documento, o termo "ka" refere-se à constante de taxa para associação de um anticorpo a um antígeno. O termo "kd" refere-se à constante de taxa para dissociação de um anticorpo a partir do complexo anticorpo/antígeno. E o termo "KD" refere-se à constante de dissociação de equilíbrio de uma interação anticorpo-antígeno. A constante de dissociação de equilíbrio é deduzida a partir da razão das constantes de taxa cinética, KD = ka/kd. Estas determinações são preferencialmente medidas a 25° C ou 37°C (vide os exemplos). Por exemplo, a cinética de ligação de anticorpo a C5 humano pode ser determinada a pH 8,0, 7,4, 7,0, 6,5 e 6,0 através de ressonância de plasmon de superfície (SPR) em um instrumento BIAcore 3000 usando um método de captura anti-Fc para imobilizar o anticorpo.
[0152] Em uma modalidade, o anticorpo anti-C5 ou fragmento de ligação ao antígeno deste, bloqueia a geração ou atividade dos fragmentos ativos de C5a e/ou C5b de uma proteína C5 (por exemplo, uma proteína C5 humana). Através deste efeito de bloqueio, os anticorpos inibem, por exemplo, os efeitos pró-inflamatórios ou C5a e a geração do complexo de ataque à membrana (MAC) C5b-9 na superfície de uma célula.
[0153] Os métodos para determinar se um anticorpo específico descrito neste documento inibe a clivagem de C5 são conhecidos na técnica. A inibição do componente de complemento humano C5 pode reduzir a capacidade de lise celular do complemento nos fluidos corporais de um sujeito. Estas reduções da capacidade de lise celular do complemento presentes nos fluidos corporais podem ser medidas por métodos bem conhecidos na técnica, tais como, por exemplo, por um ensaio hemolítico convencional, tal como o ensaio de hemólise descrito por Kabat e Mayer (eds.), "Experimental Immunochemistry, 2a Edição,” 135-240, Springfield, IL, CC Thomas (1961), páginas 135-139, ou uma variação convencional deste ensaio como o método de hemólise de eritrócitos de galinha, conforme descrito em, por exemplo, Hillmen et al. (2004) N Engl J Med 350(6):552. Os métodos para determinar se um composto candidato inibe a clivagem de C5 humano nas formas C5a e C5b são conhecidos na técnica e descritos em Evans et al. (1995)Mol Immunol 32(16):1183-
95. Por exemplo, a concentração e/ou atividade fisiológica de C5a e C5b em um fluido corporal pode ser medida por métodos bem conhecidos na técnica. Para C5b, os ensaios hemolíticos ou ensaios para C5b-9 solúvel conforme discutido neste documento podem ser usados. Outros ensaios conhecidos na técnica também podem ser usados. Ao usar ensaios destes ou de outros tipos adequados, os agentes candidatos capazes de inibir o componente de complemento humano C5 podem ser triados.
[0154] As técnicas imunológicas tais como, mas não limitadas a, ELISA podem ser usadas para medir a concentração proteica de C5 e/ou seus produtos divididos para determinar a capacidade de um anticorpo anti-C5, ou fragmento de ligação ao antígeno deste, de inibir a conversão de C5 em produtos biologicamente ativos. Em algumas modalidades, a geração de C5a é medida. Em algumas modalidades, anticorpos específicos ao neopeptídeo C5b-9 são usados para detectar a formação do complemento terminal.
[0155] Os ensaios hemolíticos podem ser usados para determinar a atividade inibidora de um anticorpo anti-C5, ou fragmento de ligação ao antígeno deste, na ativação do complemento. Para determinar o efeito de um anticorpo anti-C5, ou fragmento de ligação ao antígeno deste, na hemólise mediada por via de complemento em uma solução sérica de teste in vitro, por exemplo, eritrócitos de ovelha revestidos com hemolisina ou eritrócitos de galinha sensibilizados com eritrócito antigalinha são usados como células alvo. A porcentagem de lise é normalizada considerando 100% de lise igual à lise que ocorre na ausência do inibidor. Em algumas modalidades, a via de complemento clássica é ativada por um anticorpo
IgM humano, por exemplo, conforme utilizado no Classical Pathway Complement Kit de Wieslab® (Wieslab® COMPL CP310, Euro-Diagnostica, Suécia). Resumidamente, o soro de teste é incubado com um anticorpo anti-C5, ou fragmento de ligação ao antígeno deste, na presença de um anticorpo IgM humano. A quantidade de C5b-9 que é gerada é medida ao colocar em contato a mistura com um anticorpo anti-C5b- 9 conjugado à enzima e um substrato fluorogênico e ao medir a absorbância no comprimento de onda apropriado. Como um controle, o soro de teste é incubado na ausência do anticorpo anti-C5, ou fragmento de ligação ao antígeno deste. Em algumas modalidades, o soro de teste é um soro deficiente de C5 reconstituído com um polipeptídeo C5.
[0156] Para determinar o efeito de um anticorpo anti-C5, ou fragmento de ligação ao antígeno deste, ou hemólise mediada por via alternativa, eritrócitos de coelho ou porquinho-da-Índia podem ser usados como células alvo. Em algumas modalidades, a solução sérica de teste é um soro deficiente de C5 reconstituído com um polipeptídeo C5. A porcentagem de lise é normalizada considerando 100% de lise igual à lise que ocorre na ausência do inibidor. Em algumas modalidades, a via de complemento alternativa é ativada por moléculas de lipopolissacarídeo, por exemplo, conforme utilizado no Alternative Pathway Complement Kit de Wieslab® (Wieslab® COMPL AP330, Euro-Diagnostica, Suécia). Resumidamente, o soro de teste é incubado com um anticorpo anti-C5, ou fragmento de ligação ao antígeno deste, na presença de lipopolissacarídeo. A quantidade de C5b-9 que é gerada é medida ao colocar em contato a mistura com um anticorpo anti-C5b-9 conjugado à enzima e um substrato fluorogênico e ao medir a fluorescência no comprimento de onda apropriado. Como um controle, o soro de teste é incubado na ausência do anticorpo anti-C5, ou fragmento de ligação ao antígeno deste.
[0157] Em algumas modalidades, a atividade de C5, ou a inibição deste, é quantificada usando um ensaio de CH50eq. O ensaio de CH50eq é um método para medir a atividade de complemento clássico total no soro. Este teste é um ensaio lítico, que usa eritrócitos sensibilizados por anticorpo como os ativadores da via de complemento clássica e várias diluições do soro de teste para determinar a quantidade necessária para obter-se 50% de lise (CH50). A porcentagem de hemólise pode ser determinada, por exemplo, usando um espectrofotômetro. O ensaio de CH50eq fornece uma medida indireta da formação do complexo de complemento terminal (TCC), uma vez que os próprios TCCs são diretamente responsáveis pela hemólise que é medida.
[0158] O ensaio é bem conhecido e comumente praticado por aqueles versados na técnica. Resumidamente, para ativar a via de complemento clássica, as amostras séricas não diluídas (por exemplo, amostras séricas humanas reconstituídas) são adicionadas a poços de microensaio contendo os eritrócitos sensibilizados para o anticorpo para, portanto, gerar TCC. Em seguida, os soros ativados são diluídos em poços de microensaio, que são revestidos com um reagente de captura (por exemplo, um anticorpo que se liga a um ou mais componentes do TCC). O TCC presente nas amostras ativadas se liga aos anticorpos monoclonais que revestem a superfície dos poços de microensaio. Os poços são lavados e, a cada poço, é adicionado um reagente de detecção que é marcado de forma detectável e reconhece o TCC ligado. A marcação detectável pode ser, por exemplo, uma marcação fluorescente ou uma marcação enzimática. Os resultados do ensaio são expressos em equivalentes de unidades de CH50 por mililitro (CH50 U Eq/mL).
[0159] A inibição, por exemplo, uma vez que se refere à atividade de complemento terminal, inclui pelo menos 5 (por exemplo, pelo menos 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 ou 60)% de diminuição na atividade do complemento terminal em,por exemplo, um ensaio hemolítico ou ensaio de CH50eq em comparação com o efeito de um anticorpo de controle (ou fragmento de ligação ao antígeno deste) sob condições semelhantes e a uma concentração equimolar. A inibição substancial, conforme usada neste documento, refere-se à inibição de uma dada atividade (por exemplo, atividade de complemento terminal) de pelo menos 40% (por exemplo, pelo menos 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 ou 95 ou maior). Em algumas modalidades, um anticorpo anti-C5 descrito neste documento contém uma ou mais substituições de aminoácidos em relação às CDRs de eculizamabe (ou seja, SEQ ID NOs: 1-6), porém retém pelo menos 30 (por exemplo, pelo menos 31, 32, 33, 34, 35,
36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 ou 95)% da atividade inibidora de complemento de eculizumabe em um ensaio hemolítico ou ensaio CH50eq.
[0160] Um anticorpo anti-C5 descrito neste documento tem uma meia-vida sérica em humanos que é de pelo menos 20 (por exemplo, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54 ou 55) dias. Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 descrito neste documento tem uma meia-vida sérica em humanos que é de pelo menos 40 dias. Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 descrito neste documento tem uma meia-vida sérica em humanos que é de aproximadamente 43 dias. Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 descrito neste documento tem uma meia-vida sérica em humanos que é dentre 39-48 dias. Os métodos para medir a meia-vida sérica de um anticorpo são conhecidos na técnica. Em algumas modalidades, um anticorpo anti-C5, ou fragmento de ligação ao antígeno deste, descrito neste documento tem uma meia-vida sérica que é de pelo menos 20 (por exemplo, pelo menos 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 400, 500)% maior do que a meia-vida sérica de eculizumabe, por exemplo, conforme medido em um dos sistemas de modelo de camundongo descritos nos exemplos (por exemplo, o sistema de modelo de camundongo transgênico com deficiência de C5/NOD/camundongo scid ou hFcRn).
[0161] Em uma modalidade, o anticorpo compete pela ligação com e/ou se liga ao mesmo epítopo em C5 que os anticorpos descritos neste documento. O termo "liga- se ao mesmo epítopo", com referência a dois ou mais anticorpos, significa que os anticorpos ligam-se ao mesmo segmento de resíduos de aminoácidos, conforme determinado por um dado método. As técnicas para determinar se os anticorpos se ligam ao "mesmo epítopo em C5" com os anticorpos descritos neste documento incluem, por exemplo, métodos de mapeamento de epítopos, como análises de raios X de cristais de antígeno: complexos de anticorpos que fornecem resolução atômica do epítopo e espectrometria de massa de troca de hidrogênio/deutério (HDX-MS). Outros métodos monitoram a ligação do anticorpo aos fragmentos de antígeno peptídico ou variações mutadas do antígeno, em que a perda de ligação devido a uma modificação de um resíduo de aminoácidos dentro da sequência de antígeno é geralmente considerada uma indicação de um componente de epítopo. Além disso, os métodos combinatórios computacionais para mapeamento de epítopos também podem ser usados. Estes métodos dependem da capacidade do anticorpo de interesse de isolar por afinidade peptídeos curtos específicos de bibliotecas de peptídeos de exibição de fagos combinatórias. Espera-se que os anticorpos que têm os mesmos VH e VL ou as mesmas sequências CDR1, 2 e 3 se liguem ao mesmo epítopo.
[0162] Os anticorpos que "competem com outro anticorpo para ligação a um alvo" referem-se a anticorpos que inibem (parcialmente ou completamente) a ligação do outro anticorpo ao alvo. Se dois anticorpos competem uns com os outros para ligação a um alvo, ou seja, se e até que ponto um anticorpo inibe a ligação do outro anticorpo ao alvo, pode ser determinado usando experimentos de competição conhecidos. Em certas modalidades, um anticorpo compete com, e inibe a ligação de outro anticorpo a um alvo em pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou 100%. O nível de inibição ou competição pode ser diferente dependendo de qual anticorpo é o "anticorpo bloqueador" (ou seja, o anticorpo resfriado que é incubado primeiro com o alvo). Os anticorpos em competição se ligam ao mesmo epítopo, um epítopo de sobreposição ou a epítopos adjacentes (por exemplo, conforme evidenciado por obstrução estérica).
[0163] Os anticorpos anti-C5, ou fragmentos de ligação ao antígeno destes, usados nos métodos descritos neste documento podem ser gerados usando uma variedade de técnicas reconhecidas na técnica. Os anticorpos monoclonais podem ser obtidos por várias técnicas familiares aos versados na técnica. Resumidamente, as células do baço de um animal imunizado com um antígeno desejado são imortalizadas, comumente por fusão com uma célula de mieloma (vide Kohler & Milstein, Eur. J. Immunol. 6: 511-519 (1976)). Métodos alternativos de imortalização incluem transformação com vírus Epstein Barr, oncogenes ou retrovírus, ou outros métodos bem conhecidos na técnica. As colônias resultantes de células imortalizadas únicas são triadas para produção de anticorpos da especificidade desejada e afinidade ao antígeno, e o rendimento dos anticorpos monoclonais produzidos por estas células podem ser potencializados por várias técnicas, incluindo injeção na cavidade peritoneal de um hospedeiro vertebrado. Alternativamente, pode-se isolar as sequências de DNA que codificam um anticorpo monoclonal ou um fragmento de ligação deste ao triar uma biblioteca de DNA a partir de células B humanas de acordo com o protocolo geral destacado por Huse, et al., Science 246: 1275-1281 (1989). III. Soluções de Anticorpo Anti-C5 Altamente Concentradas
[0164] São fornecidas neste documento soluções aquosas estáveis compreendendo um anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe). As soluções aquosas descritas neste documento podem ser composições estéreis, de grau farmacêutico, por exemplo, para administração a um sujeito para o tratamento ou prevenção de um distúrbio associado ao complemento, tal como PNH ou aHUS. As soluções descritas neste documento podem ser formuladas de acordo com os métodos padrão. A formulação farmacêutica é uma técnica bem estabelecida e é adicionalmente descrita em, por exemplo, Gennaro (2000) "Remington: The Science and Practice of Pharmacy,” 20ª Edição, Lippincott, Williams & Wilkins (ISBN: 0683306472); Ansel et al. (1999) “Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,” 7ª Edição, Lippincott Williams & Wilkins Publishers (ISBN: 0683305727); e Kibbe (2000) “Handbook of Pharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association,” 3ª Edição (ISBN: 091733096X). Os métodos de formulação adequados para as soluções de anticorpos de alta concentração descritos neste documento são exemplificados nos exemplos.
[0165] As soluções aquosas descritas neste documento compreendem uma alta concentração de um anticorpo que se liga ao componente de complemento humano C5, tal como ravulizumabe. Tais soluções são algumas vezes referidas neste documento como "soluções de anticorpos de alta concentração". Conforme usado neste documento, uma "concentração alta" de um anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) em uma solução aquosa é uma concentração do anticorpo que é pelo menos igual a, ou maior do que, 40 (por exemplo, pelo menos, igual a, ou maior do que, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210, 215, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 250, 255, 260, 265, 270, 275, 280, 285, 290, 295 ou 300) mg/mL. Em uma modalidade, o anticorpo anti-C5 está presente na solução em uma concentração de mais do que 100 (por exemplo, mais do que 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190 ou 195) mg/mL. Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 está presente na solução em uma concentração de mais do que 200 (por exemplo, mais do que 200, 205, 210, 215, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 250, 255, 260, 265, 270, 275, 280, 285, 290 ou 295) mg/mL. Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 está presente na solução em uma concentração de mais do que 300 mg/mL. Em outra modalidade, o anticorpo está presente na solução em uma concentração de, por exemplo, 40 mg/mL a 200 mg/mL, 50 mg/mL a 200 mg/mL, 60 mg/mL a 200 mg/mL, 70 mg/mL a 200 mg/mL, 80 mg/mL a 200 mg/mL, 90 mg/mL a 200 mg/mL, 100 mg/mL a 200 mg/mL, 110 mg/mL a 200 mg/mL, 120 mg/mL a 200 mg/mL, 130 mg/mL a 200 mg/mL, 140 mg/mL a 200 mg/mL, 150 mg/mL a 200 mg/mL, 40 mg/mL a 100 mg/mL, 50 mg/mL a 100 mg/mL, 60 mg/mL a 100 mg/mL, 70 mg/mL a 100 mg/mL, 80 mg/mL a 100 mg/mL, 90 mg/mL a 100 mg/mL, 40 mg/mL a 150 mg/mL, 50 mg/mL a 150 mg/mL, 60 mg/mL a 150 mg/mL, 70 mg/mL a 150 mg/mL, 80 mg/mL a 150 mg/mL, 90 mg/mL a 150 mg/mL, 100 mg/mL a 150 mg/mL, 110 mg/mL a 150 mg/mL, 120 mg/mL a 150 mg/mL, 40 mg/mL a 50 mg/mL, 40 mg/mL a 250 mg/mL, 50 mg/mL a 250 mg/mL, 60 mg/mL a 250 mg/mL, 70 mg/mL a 250 mg/mL, 80 mg/mL a 250 mg/mL, 90 mg/mL a 250 mg/mL, 100 mg/mL a 250 mg/mL, 110 mg/mL a 250 mg/mL, 120 mg/mL a 250 mg/mL, 130 mg/mL a 250 mg/mL, 140 mg/mL a 250 mg/mL, 150 mg/mL a 250 mg/mL, 160 mg/mL a 250 mg/mL, 170 mg/mL a 250 mg/mL, 180 mg/mL a 250 mg/mL, 190 mg/mL a 250 mg/mL, 200 mg/mL a 250 mg/mL, maior do que 200 mg/mL (por exemplo, pelo menos 201 mg/mL) a 250 mg/mL, ou maior do que 200 mg/mL (por exemplo, 201 mg/mL ou maior) a 300 mg/mL.
[0166] Conforme descrito neste documento e exemplificado nos exemplos, as soluções aquosas apresentadas fornecem o anticorpo anti-C5 formulado neste documento com estabilidade física e química marcada, bem como estabilidade funcional. Por exemplo, as formulações descritas neste documento são capazes de manter a integridade estrutural de um anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) presente em altas concentrações em uma solução. Em uma modalidade, a solução é adequada para armazenamento a 2-8°C (por exemplo, 4°C). Em outra modalidade, a solução é formulada para armazenamento em uma temperatura abaixo de 0°C (por exemplo, -20°C ou -80°C). Em outra modalidade, a solução é formulada para armazenamento por até três anos (por exemplo, um mês, dois meses, três meses, quatro meses, cinco meses, seis meses, sete meses, oito meses, nove meses, 10 meses, 11 meses, 1 ano, 1½ anos, 2 anos, 2 ½ anos ou 3 anos) a 2-8°C (por exemplo, 4°C). Em outra modalidade, a solução é adequada para armazenamento por pelo menos 1, 2 ou 3 anos a 2-8 ° C (por exemplo, 4°C).
[0167] Conforme exemplificado nos exemplos descritos neste documento, as soluções descritas neste documento são adequadas para manter um anticorpo anti- C5 a aproximadamente 100 mg/mL em forma predominantemente monomérica por até dois anos a aproximadamente 2°C a 8°C. Conforme usado neste documento, um anticorpo anti-C5 formulado em uma alta concentração em uma solução aquosa apresentada é "predominantemente monomérico", ou está em "forma predominantemente monomérica", caso o anticorpo presente na solução seja pelo menos 95% (por exemplo, pelo menos 95,1, 95,2, 95,3, 95,4, 95,5, 95,6, 95,7, 95,8, 95,9, 96, 96,1, 96,2, 96,3, 96,4, 96,5, 96,6, 96,7, 96,8, 96,9, 97, 97,1, 97,2, 97,3, 97,4, 97,5, 97,6, 97,7, 97,8, 97,9, 98, 98,1, 98,2, 98,3, 98,4, 98,5, 98,6, 98,7, 98,8, 98,9, 99, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4, 99,5, 99,6, 99,7, 99,8, ou 99,9 ou maior) monomérico, por exemplo, conforme determinado usando cromatografia por exclusão de tamanho (SEC-HPLC, tal como HPLC de permeação em gel). Em uma modalidade, o anticorpo anti-C5 nas soluções descritas neste documento pode permanecer predominantemente monomérico após armazenamento por pelo menos um mês (por exemplo, pelo menos dois meses, três meses, quatro meses, cinco meses, seis meses, sete meses, oito meses, nove meses, 10 meses, 11 meses, 12 meses, 13 meses, 14 meses, 15 meses, 16 meses, 17 meses, 18 meses, 19 meses, 20 meses, 21 meses, 22 meses, 23 meses, 24 meses ou mais) a aproximadamente 2°C a 8°C
(por exemplo, armazenamento a, por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10°C).
[0168] Em uma modalidade de qualquer uma das soluções aqui descritas, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) permanece pelo menos 95% (por exemplo, pelo menos 96, 97, 98 ou 99) monomérico durante o armazenamento entre 2°C a 8°C durante pelo menos seis meses conforme determinado por SEC-HPLC (por exemplo, HPLC de permeação em gel). Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 permanece pelo menos 95% (por exemplo, pelo menos 96, 97, 98 ou 99) monomérico durante o armazenamento entre 2°C a 8°C por pelo menos nove meses, conforme determinado por SEC-HPLC. Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 permanece pelo menos 95% (por exemplo, pelo menos 96, 97, 98 ou 99) monomérico durante o armazenamento entre 2°C a 8°C por pelo menos um ano, conforme determinado por SEC-HPLC. Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 permanece pelo menos 95% (por exemplo, pelo menos 96, 97, 98 ou 99) monomérico durante o armazenamento entre 2°C a 8°C por pelo menos 18 meses, conforme determinado por SEC-HPLC. Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 permanece pelo menos 95% (por exemplo, pelo menos 96, 97, 98 ou 99) monomérico durante o armazenamento entre 2°C a 8°C por pelo menos dois anos, conforme determinado por SEC-HPLC.
[0169] Em outra modalidade, menos do que 5% (por exemplo, menos do que 4,9, 4,8, 4,7, 4,6, 4,5, 4,4, 4,3, 4,2, 4,1, 4,0, 3,9, 3,8, 3,7, 3,6, 3,5, 3,4, 3,3, 3,2, 3,1, 3,0, 2,9, 2,8, 2,7, 2,6, 2,5, 2,4, 2,3, 2,2, 2,1, 2, 1,9, 1,8, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,2, 1,1, 1, 0,9, 0,8, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2 ou 0,1) do anticorpo na solução é oligomérico, agregado e/ou fragmentado. Conforme usado neste documento, a fragmentação de anticorpos refere-se a constituintes ou produtos de degradação inadequadamente montados de um anticorpo inteiro com um peso molecular menor do que o anticorpo inteiro. Tais formas de fragmentação incluem, mas não estão limitadas a, um polipeptídeo de cadeia pesada monomérica livre, um polipeptídeo de cadeia pesada dimérica (por exemplo, polipeptídeo de cadeia pesada ligada a dissulfeto), um polipeptídeo de cadeia pesada dimérica ligado a um polipeptídeo de cadeia leve, um polipeptídeo de cadeia pesada monomérica ligado a um polipeptídeo de cadeia leve, ou produtos de degradação adicionais ou fragmentos de um polipeptídeo de cadeia leve ou de cadeia pesada. Em algumas modalidades, menos do que 2% (por exemplo, menos do que 1,9, 1,8, 1,7, 1,6, 1,5, 1,4, 1,3, 1,2, 1,1, 1, 0,9, 0,8, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2 ou 0,1) do anticorpo é agregado após armazenamento por pelo menos um mês (por exemplo, pelo menos dois meses, três meses, quatro meses, cinco meses, seis meses, sete meses, oito meses, nove meses, 10 meses, 11 meses, 12 meses, 13 meses, 14 meses, 15 meses, 16 meses, 17 meses, 18 meses, 19 meses, 20 meses, 21 meses, 22 meses, 23 meses, 24 meses ou mais) a 2°C a 8°C. Em algumas modalidades, menos do que 1 (por exemplo, menos do que 0,9, 0,8, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2 ou 0,1)% do anticorpo é fragmentado após armazenamento por pelo menos um mês (por exemplo, pelo menos dois meses, três meses, quatro meses, cinco meses, seis meses, sete meses, oito meses, nove meses, 10 meses, 11 meses, 12 meses, 13 meses, 14 meses, 15 meses, 16 meses, 17 meses, 18 meses, 19 meses, 20 meses, 21 meses, 22 meses, 23 meses, 24 meses ou mais) de 2°C a 8°C. Os métodos para determinar a quantidade de anticorpo monomérico, bem como a quantidade de formas oligoméricas, agregadas ou fragmentadas do anticorpo anti-C5 presente na solução, são descritos neste documento e exemplificados nos exemplos. Por exemplo, um versado na técnica pode determinar a porcentagem de intermediários inteiros, fragmentados, desdobrados e/ou espécies de anticorpos agregados presentes em uma determinada solução usando, por exemplo, cromatografia de exclusão por tamanho cromatografia líquida de alta eficiência (SEC- HPLC, como permeação em gel HPLC), espalhamento de luz estático (SLS), espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier (FTIR), dicroísmo circular (CD), técnicas de desdobramento de proteínas induzidas por ureia, fluorescência intrínseca do triptofano, eletroforese em gel de poliacrilamida não dodecilsulfato de sódio não redutora (SDS-PAGE), e calorimetria de varredura diferencial (DSC).
[0170] Em uma modalidade de qualquer uma das soluções descritas neste documento, menos de 5% do anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) na solução é agregado conforme determinado por SEC-HPLC (por exemplo, HPLC de permeação em gel). Em outra modalidade, menos de 4% do anticorpo anti-C5 na solução é agregado conforme determinado por SEC-HPLC. Em outra modalidade, menos de 3% do anticorpo anti-C5 na solução é agregado conforme determinado por SEC-HPLC. Em outra modalidade, menos de 2% do anticorpo anti-C5 na solução é agregado conforme determinado por SEC-HPLC. Em outra modalidade, menos de 1% do anticorpo anti-C5 na solução é agregado conforme determinado por SEC-HPLC.
[0171] Conforme descrito neste documento e exemplificado nos exemplos, o anticorpo anti-C5 contendo soluções apresentadas neste documento pode reter pelo menos 90 (por exemplo, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou até 100)% de sua atividade biológica/funcional (por exemplo, capacidade de se ligar a C5 humano) após armazenamento por pelo menos um mês (por exemplo, pelo menos dois meses, três meses, quatro meses, cinco meses, seis meses, sete meses, oito meses, nove meses, 10 meses, 11 meses, 12 meses, 13 meses, 14 meses, 15 meses, 16 meses, 17 meses, 18 meses, 19 meses, 20 meses, 21 meses, 22 meses, 23 meses, 24 meses, 25 meses, 26 meses, 27 meses, 28 meses, 29 meses, 30 meses, 31 meses, 32 meses, 33 meses, 34 meses, 35 meses, 36 meses ou mais) a 2°C a 8°C.
[0172] Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) presente em uma solução descrita neste documento pode reter pelo menos 90 (por exemplo, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou até 100)% de sua atividade para inibir hemólise após armazenamento por pelo menos um mês (por exemplo, pelo menos dois meses, três meses, quatro meses, cinco meses, seis meses, sete meses, oito meses, nove meses, 10 meses, 11 meses, 12 meses, 13 meses, 14 meses, 15 meses, 16 meses, 17 meses, 18 meses, 19 meses, 20 meses, 21 meses, 22 meses, 23 meses, 24 meses, 25 meses, 26 meses, 27 meses, 28 meses, 29 meses, 30 meses, 31 meses, 32 meses, 33 meses, 34 meses, 35 meses, 36 meses ou mais a 2°C a 8°C. Os métodos de ensaio hemolítico adequados para determinar se um anticorpo em uma solução apresentada retém sua atividade são descritos neste documento e conhecidos na técnica, por exemplo, ensaios hemolíticos in vitro usando eritrócitos aviários ou suínos. Os métodos adequados para avaliar a capacidade de uma preparação de anticorpo de se ligar ao componente de complemento humano C5 são conhecidos na técnica e descritos neste documento.
[0173] Em outra modalidade de qualquer uma das soluções aqui descritas, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua atividade de ligação ao C5 durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos seis meses, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento.
Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua atividade de ligação a C5 durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos nove meses, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento.
Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua atividade de ligação ao C5 durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos um ano, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento.
Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua atividade de ligação a C5 durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos dezoito meses, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento.
Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua atividade de ligação ao C5 durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos dois anos, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento.
Em outra modalidade, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua atividade de ligação ao C5 durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos três anos, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento.
[0174] Em outra modalidade de qualquer uma das soluções descritas neste documento, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua capacidade de inibir a hemólise durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos nove meses, em comparação com um anticorpo anti- C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento. Em outra modalidade de qualquer uma das soluções descritas neste documento, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80% (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99) de sua habilidade de inibir a hemólise durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos seis meses, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento. Em outra modalidade de qualquer uma das soluções descritas neste documento, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua capacidade de inibir a hemólise durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos um ano, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento. Em outra modalidade de qualquer uma das soluções descritas neste documento, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, Pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua capacidade de inibir a hemólise durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos 18 meses, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento. Em outra modalidade de qualquer uma das soluções descritas neste documento, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua capacidade de inibir a hemólise durante o armazenamento de 2°C a 8°C por pelo menos dois anos, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento. Em outra modalidade de qualquer uma das soluções descritas neste documento, o anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) retém pelo menos 80 (por exemplo, pelo menos 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ou 99)% de sua capacidade de inibir a hemólise durante o armazenamento entre 2°C e 8°C por pelo menos três anos, em comparação com um anticorpo anti-C5 de referência correspondente ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento.
[0175] As soluções aquosas descritas neste documento podem conter um ou mais agentes em comum (por exemplo, um ou mais excipientes e/ou aditivos, tal como agentes de tamponamento, açúcares ou sacarídeos, sais, surfactantes, solubilizantes, diluentes, ligantes, estabilizadores, sais, solventes lipofílicos, aminoácidos, agentes quelantes e/ou conservantes).
[0176] Em uma modalidade, a solução aquosa contém um ou mais agentes de tamponamento. Conforme usado neste documento, o termo "agente de tamponamento" refere-se a um ou mais componentes que, quando adicionados a uma solução aquosa, são capazes de proteger a solução contra variações no pH durante a adição de ácido ou álcali, ou mediante diluição com um solvente. Em uma modalidade, a solução compreende pelo menos um ou mais agentes de tamponamento. Os exemplos não limitativos de tampões típicos que podem ser incluídos nas soluções de lavagem incluem Tris (tris(hidroximetil)metilamina), bis-Tris, bis-Tris propano, histidina, trietanolamina, dietanolamina, formato, acetato, MES (ácido 2-(N-morfolino)etanossulfônico), fosfato, HEPES (ácido 4-2-idroxietil-1- piperazinaetanossulfônico), citrato, MOPS (ácido 3-(N-morfolino)propanossulfônico), TAPS ácido 3{[tris(hidroxymetil)metil]amino}propanossulfônico), Bicina (N,N-bis(2- hidroxietil)glicina), Tricina (N-tris(hidroximetil)metilglicina), TES (ácido 2- {[tris(hidroximetil)metil]amino}etanossulfônico), PIPES (piperazina-N,N'-bis(ácido 2- etanossulfônico), cacodilato (ácido dimetilarsínico), SSC (citrato de sódio salino) e fosfato de sódio.
[0177] Em outra modalidade, o agente tampão é um aminoácido. O aminoácido pode ser, por exemplo, um selecionado do grupo que consiste em histidina (por exemplo, L-histidina), serina (por exemplo, L-serina) e glicina (por exemplo, L-glicina).
Em outra modalidade, a solução compreende pelo menos dois ou mais agentes tamponantes. Em uma modalidade particular, o agente tampão é fosfato de sódio. Em uma modalidade, as soluções apresentadas não incluem um aminoácido livre como um agente de tamponamento. Em outra modalidade, as soluções apresentadas incluem apenas um aminoácido livre (por exemplo, histidina) como um agente de tamponamento. Em outra modalidade, as soluções apresentadas podem incluir dois ou mais (por exemplo, dois, três, quatro, cinco, seis ou sete ou mais) aminoácidos diferentes como agentes de tamponamento, por exemplo, serina e histidina.
[0178] A concentração do tampão é suficiente para manter o pH desejado e pode também ser variada, por exemplo, para manter a isotonicidade da formulação. As concentrações típicas de agentes de tamponamento convencionais empregadas em formulações parenterais podem ser encontradas em: Pharmaceutical Dosage Form: Parenteral Medications, Volume 1, 2ª Edição, Capítulo 5, p. 194, De Luca e Boylan, "Formulation of Small Volume Parenterals", Tabela 5: Commonly used additives in Parenteral Product. Em uma modalidade, a concentração de um ou mais agentes de tamponamento na formulação é de cerca de 10 mM a 300 mM, inclusiva. Em outra modalidade, a solução compreende pelo menos um agente tamponante a uma concentração de 10 mM a 200 mM, inclusive. Em outra modalidade, a solução aquosa descrita neste documento contém um agente de tamponamento em uma concentração de pelo menos 10 (por exemplo, pelo menos 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290 ou 300 ou mais) mM. Em outra modalidade, a solução aquosa inclui um agente de tamponamento em uma concentração entre cerca de 10 mM a 50 mM, 15 mM a 50 mM, 20 mM a 50 mM, 25 mM a 50 mM, 30 mM a 50 mM, 40 mM a 50 mM, 10 mM a 100 mM, 15 mM a 100 mM, 20 mM a 100 mM, 25 mM a 100 mM, 30 mM a 100 mM, 40 mM a 100 mM, 10 mM a 150 mM, 15 mM a 150 mM, 20 mM a 150 mM, 25 mM a 150 mM, 30 mM a 150 mM, 40 mM a 150 mM, 50 mM a 100 mM, 60 mM a 100 mM, 70 mM a 100 mM, 80 mM a 100 mM, 50 mM a 150 mM, 60 mM a 150 mM, 70 mM a 150 mM, 80 mM a 150 mM, 90 mM a 150 mM, 100 mM a 150 mM, 10 mM a 200 mM, 15 mM a 200 mM, 20 mM a 200 mM, 25 mM a 200 mM,
30 mM a 200 mM, 40 mM a 200 mM, 50 mM a 200 mM, 60 mM a 200 mM, 70 mM a 200 mM, 80 mM a 200 mM, 90 mM a 200 mM, 100 mM a 200 mM, 150 mM a 200 mM, 10 mM a 250 mM, 15 mM a 250 mM, 20 mM a 250 mM, 25 mM a 250 mM, 30 mM a 250 mM, 40 mM a 250 mM, 50 mM a 250 mM, 60 mM a 250 mM, 70 mM a 250 mM, 80 mM a 250 mM, 90 mM a 250 mM, 100 mM a 250 mM, 150 mM a 250 mM, or 200 mM a 250 mM. Em outra modalidade, a concentração do tampão na formulação é de cerca de 20 mM, 25 mM, 30 mM, 35 mM, 40 mM, 45 mM, 50 mM, 55 mM, 60 mM, 65 mM, 70 mM, 75 mM, 80 mM, 90 mM, 95 mM ou cerca de 100 mM. Em outra modalidade, o agente de tamponamento está presente na solução a uma concentração de pelo menos ou igual a 20 mM. Em outra modalidade, o agente tamponante está presente na solução a uma concentração de pelo menos ou igual a 25 mM. Em outra modalidade, o agente tamponante está presente na solução a uma concentração de pelo menos ou igual a 50 mM. Nas modalidades em que uma solução apresentada contém dois ou mais (por exemplo, pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou 10 ou mais) agentes de tamponamento diferentes, cada um dos dois ou mais agentes de tamponamento podem estar independentemente presentes em,por exemplo, uma das concentrações descritas acima.
[0179] Em uma modalidade, a solução aquosa tem, ou pode ser ajustada para ter, um pH neutro. Conforme usado neste documento, "pH neutro" é um pH que está entre, e inclusivo de, 7 e 8. Em conformidade, conforme usado neste documento, pH neutro é inclusivo de valores de pH específicos, tais como 7, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8, 7,9 e 8,0. Em algumas modalidades, pH neutro é pelo menos pH 7 (por exemplo, pelo menos pH 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,7 ou 7,9), mas menos do que pH 8 (por exemplo, menos do que pH 7,9, 7,8, 7,7, 7,6, 7,5, 7,4, 7,3, 7,2 ou 7,1). Ou seja, em algumas modalidades, o pH neutro pode ser, por exemplo, pelo menos pH 7, mas menos do que pH 7,5. Em algumas modalidades, o pH neutro pode estar entre pH 7 e pH 7,5. Em algumas modalidades, o pH neutro pode estar entre pH 7 e pH 7,2. Em outra modalidade, o pH da solução está entre 7,0 e 7,4. Em outra modalidade, o pH da solução está entre 7,2 e 7,8. Em outra modalidade, o pH da solução está entre 7,2 e 7,6. Em algumas modalidades, o pH neutro pode ser,por exemplo, pH 7. Um versado na técnica irá também apreciar que o sangue humano (tal coo sangue humano de um paciente saudável) tem um pH neutro conforme definido neste documento, por exemplo, o pH do sangue humano é aproximadamente pH 7,35 a pH 7,45. Vide, por exemplo, Boron e Boulpaep (2003) “Medical physiology: a cellular and molecular approach,” W.B. Saunders, Nova York (ISBN:0721632564). Em algumas modalidades, o pH de uma solução de anticorpo altamente concentrada descrita neste documento está entre aproximadamente 6,4 e 7,5, inclusive (por exemplo, aproximadamente 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6 ou 7,7). Em uma modalidade, o pH da solução está entre 7,2 e 7,6. Em uma modalidade específica, o pH da solução é 7,4.
[0180] Em uma modalidade, a solução contém um ou mais surfactantes, como um surfactante aniônico, catiônico ou não iônico. Conforme usado neste documento, o termo "surfactante" refere-se a uma molécula tensoativa que contém uma porção hidrofóbica (por exemplo, cadeia alquil) e uma porção hidrofílica (por exemplo, grupos carboxil e carboxilato). Os surfactantes adequados para uso nas formulações da presente invenção incluem, mas não estão limitados a, ésteres de ácidos graxos (por exemplo, monocaprilato de sorbitano, monolaurato de sorbitano, monopalmitato de sorbitano), trioleato de sorbitano, ésteres de ácido graxo de glicerina (por exemplo, monocaprilato de glicerina, monomiristato de glicerina, monoestearato de glicerina), ésteres de ácido graxo de poliglicerina (por exemplo, monoestearato de decagliceril, distearato de decagliceril, monolinoleato de decagliceril), ésteres de ácido graxo de polioxietileno sorbitano (por exemplo, monolaurato de polietileno sorbitano, mono- oleato de polioxietileno sorbitano, monoestearato de polioxietileno sorbitano, monopalmitato de polioxietileno sorbitano, trioleato de polioxietileno sorbitano, tristearato de polioxietileno sorbitano), ésteres de ácido graxo de polioxietileno sorbitol (por exemplo, tetraestearato de polioxietileno sorbitol, tetraoleato de polioxietileno sorbitol), ésteres de ácido gráxico de polioxietileno glicerina (por exemplo, monoestearato de polioxietileno gliceril), ésteres de ácido graxo de polietilenoglicol (por exemplo, distearato de polietilenoglicol), polioxietileno alquil éteres (por exemplo, polioxietileno lauril éter), polioxietileno polioxipropileno alquil éteres (por exemplo,
polioxietileno polioxipropilenoglicol, polioxietileno polioxipropileno propil éter, polioxietileno polioxipropileno cetil éter), polioxietileno alquilfenil éteres (por exemplo, polioxietileno nonilfenil éter), óleos de rícino hidrogenados de polioxietileno (por exemplo, óleo de rícino de polioxietileno, óleo de rícino hidrogenado de polioxietileno), derivados de cera de abelha de polioxietileno (por exemplo, cera abelha de polioxietileno sorbitol), derivados de polioxietileno lanolina (por exemplo, polioxietileno lanolina), e amidas de ácido graxo de polioxietileno (por exemplo, amida de ácido esteárico de polioxietileno); sulfatos de C12-C18 alquil (por exemplo, cetil sulfato de sódio, lauril sulfato de sódio, oleil sulfato de sódio), C10-C18 alquil éter sulfato de polioxietileno com uma média de 2 a 4 mols de unidades de óxido de etileno adicionadas (por exemplo, polioxietileno lauril sulfato de sódio) e sais de éster de sulfossuccinato de C10-C18 alquil (por exemplo, lauril éster sulfossuccinato de sódio); e surfactantes naturais, tais como lecitina, glicerofosfolipídeo, esfingofosfolipídeos (por exemplo, esfingomielina) e ésteres de sacarose de ácidos graxos de C12-C18.
[0181] Em uma modalidade, o surfactante na formulação é um surfactante não iônico. Em certas modalidades, o surfactante na formulação é um éster de ácido graxo de polioxietileno sorbitano, por exemplo, polissorbato 20, 40, 60, 80 ou uma combinação de um ou mais destes. Em uma modalidade, o surfactante na formulação é polissorbato 80 (Tween 80). Em outra modalidade, o surfactante na formulação é polissorbato 60. Em outra modalidade, o surfactante na formulação é polissorbato 40. Em outra modalidade, o surfactante na formulação é polissorbato 20 (Tween 20).
[0182] A quantidade do surfactante adicionado à formulação é suficiente para reduzir a agregação do anticorpo formulado e/ou minimizar a formação de partículas na formulação. Por exemplo, o surfactante pode estar presente na formulação em uma quantidade de cerca de 0,001% a cerca de 1%, ou cerca de 0,001% a cerca de 0,5%, ou cerca de 0,01% a cerca de 0,2%. Em uma modalidade, as soluções aquosas contêm um surfactante em uma concentração de pelo menos, ou aproximadamente, 0,001% (por exemplo, pelo menos ou aproximadamente, 0,002, 0,003, 0,004, 0,005, 0,006, 0,007, 0,008, 0,009, 0,01 , 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07, 0,08, 0,09, 0,1, 0,11, 0,12, 0,13, 0,14, 0,15, 0,16, 0,17, 0,18, 0,19, 0,2, 0,21, 0,22, 0,23, 0,24, 0,25,
0,26 , 0,27, 0,28, 0,29, 0,3, 0,31, 0,32, 0,33, 0,34, 0,35, 0,36, 0,37, 0,38, 0,39, 0,4, 0,41, 0,42, 0,43, 0,44, 0,45, 0,46, 0,47, 0,48, 0,49 ou 0,5 ou mais). Em outra modalidade, a solução aquosa não contém mais que 0,2% (por exemplo, não mais que 0,19, 0,18, 0,17, 0,16, 0,15, 0,14, 0,13, 0,12, 0,11, 0,10, 0,09, 0,08, 0,07, 0,06, 0,05 , 0,04, 0,03, 0,02, 0,01, 0,009, 0,008, 0,007, 0,006, 0,005, 0,004, 0,003, 0,002 ou 0,001) de um surfactante farmaceuticamente aceitável.
[0183] Em outra modalidade, as formulações compreendem polissorbato em uma concentração de cerca de 0,001% a cerca de 0,5%, de cerca de 0,005% a cerca de 0,2%, de cerca de 0,01% a cerca de 0,1% ou de cerca de 0,02% a cerca de 0,06%, ou cerca de 0,03% a cerca de 0,05% (p/v). Em certas modalidades, a formulação compreende um polissorbato em uma concentração de 0,01% ou 0,02% ou 0,03% ou 0,04% ou 0,05% ou 0,06% ou 0,07% ou 0,08% ou 0,09% ou 0,1 % ou 0,15% ou 0,2% (p/v). Em certas modalidades, o surfactante está presente na formulação em uma quantidade de 0,02% ou cerca de 0,04% (p/v). Em uma modalidade, o surfactante está presente na formulação em uma quantidade de 0,05% (p/v).
[0184] Em uma modalidade, a formulação compreende pelo menos cerca de 0,01%, pelo menos cerca de 0,02%, pelo menos cerca de 0,05%, pelo menos cerca de 0,1%, pelo menos cerca de 0,2%, pelo menos cerca de 0,3%, pelo menos cerca de 0,4% ou pelo menos cerca de 0,5% de Polissorbato 80. Em certa modalidade, a formulação compreende entre cerca de 0,01% e cerca de 0,5%, entre cerca de 0,01% e cerca de 0,3%, entre cerca de 0,001% e cerca de 0,2%, entre cerca de 0,02% e cerca de 0,5%, entre cerca de 0,02% e cerca de 0,3 %, entre cerca de 0,02% e cerca de 0,2%, entre cerca de 0,05% e cerca de 0,5%, entre cerca de 0,05% e cerca de 0,3%, entre cerca de 0,05% e cerca de 0,2%, entre cerca de 0,075% e cerca de 0,5%, entre cerca de 0,075% e cerca de 0,3%, ou entre cerca de 0,075% e cerca de 0,2% de Polissorbato 80. Em uma modalidade adicional, a formulação compreende cerca de 0,01%, cerca de 0,02%, cerca de 0,05%, cerca de 0,1%, cerca de 0,2%, cerca de 0,3%, cerca de 0,4% ou cerca de 0,5% de Polissorbato 80. Em uma modalidade, a formulação compreende cerca de 0,05% de polissorbato 80. Em uma modalidade, a formulação compreende cerca de cerca de 0,04% de polissorbato 80. Em uma modalidade, a formulação compreende cerca de 0,03% de polissorbato 80. Em uma modalidade, a formulação compreende cerca de 0,02% de polissorbato 80. Em uma modalidade, a formulação compreende cerca de 0,01% de polissorbato 80.
[0185] Em uma modalidade, a solução aquosa contém um ou mais sais, por exemplo, cloreto de sódio, cloreto de potássio ou cloreto de magnésio. Em algumas modalidades, uma solução aquosa descrita neste documento contém um sal em uma concentração de pelo menos 10 (por exemplo, pelo menos 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290 ou 300 ou mais) mM. Em algumas modalidades, uma solução aquosa descrita neste documento pode incluir um sal em uma concentração menor que ou aproximadamente 200 (por exemplo, menos do que ou aproximadamente 190, 180, 170, 160, 150, 140, 130, 120, 110, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 25, 20, 15 ou 10) mM. Em algumas modalidades, uma solução aquosa descrita neste documento pode incluir um sal em uma concentração dentre cerca de 10 mM a 50 mM, 15 mM a 50 mM, 20 mM a 50 mM, 25 mM a 50 mM, 30 mM a 50 mM, 40 mM a 50 mM, 10 mM a 100 mM, 15 mM a 100 mM, 20 mM a 100 mM, 25 mM a 100 mM, 30 mM a 100 mM, 40 mM a 100 mM, 10 mM a 150 mM, 15 mM a 150 mM, 20 mM a 150 mM, 25 mM a 150 mM, 30 mM a 150 mM, 40 mM a 150 mM, 50 mM a 100 mM, 60 mM a 100 mM, 70 mM a 100 mM, 80 mM a 100 mM, 50 mM a 150 mM, 60 mM a 150 mM, 70 mM a 150 mM, 80 mM a 150 mM, 90 mM a 150 mM, 100 mM a 150 mM, 10 mM a 200 mM, 15 mM a 200 mM, 20 mM a 200 mM, 25 mM a 200 mM, 30 mM a 200 mM, 40 mM a 200 mM, 50 mM a 200 mM, 60 mM a 200 mM, 70 mM a 200 mM, 80 mM a 200 mM, 90 mM a 200 mM, 100 mM a 200 mM, 150 mM a 200 mM, 10 mM a 250 mM, 15 mM a 250 mM, 20 mM a 250 mM, 25 mM a 250 mM, 30 mM a 250 mM, 40 mM a 250 mM, 50 mM a 250 mM, 60 mM a 250 mM, 70 mM a 250 mM, 80 mM a 250 mM, 90 mM a 250 mM, 100 mM a 250 mM, 150 mM a 250 mM, ou 200 mM a 250 mM. Em algumas modalidades em que uma solução apresentada contém dois ou mais (por exemplo, pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou 10 ou mais) sais diferentes, cada um dos dois ou mais sais podem estar independentemente presentes em, por exemplo, uma das concentrações descritas acima.
[0186] Em uma modalidade, a solução aquosa contém um ou mais excipientes de carboidratos. Excipientes adequados de carboidratos estão descritos em, por exemplo, Katakam e Banga (1995)J Pharm Pharmacol 47(2):103-107; Andya et al. (2003)AAPS PharmSci 5(2): Artigo 10; e Shire (2009) “Current Trends in Monoclonal Antibody Development and Manufacturing,” Volume 11, Springer, 354 páginas. Os excipientes de carboidratos adequados para uso nas soluções descritas neste documento incluem, sem limitação, monossacarídeos como frutose, maltose, galactose, glicose, D-manose e sorbose; dissacáridos tais como lactose, sacarose, trealose e celobiose; polissacarídeos como maltodextrinas, dextranos e amidos; e álcoois de açúcar como manitol, xilitol, maltitol, lactitol e sorbitol. Em uma modalidade, um excipiente de carboidrato está presente em uma solução apresentada neste documento a uma concentração de pelo menos ou aproximadamente 0,5 (por exemplo, pelo menos ou aproximadamente 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3, 3,25, 3,5, 3,75, 4, 4,25, 4,5, 4,75, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9, 9,5, 10 ou mais) %. Em algumas modalidades em que uma solução apresentada contém dois ou mais (por exemplo, pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove ou 10 ou mais) excipientes de carboidrato diferentes, cada excipiente pode, independentemente, estar presentes em qualquer uma das concentrações descritas acima.
[0187] Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende um ou mais agentes estabilizantes. Exemplos de estabilizadores incluem, mas não se limitam a poliois, açúcares (por exemplo, sacarose ou trealose), aminoácidos (por exemplo, arginina), aminas e sais de salga. Em uma modalidade, a solução compreende pelo menos um agente estabilizador a uma concentração de 2-10%, inclusive. Em uma modalidade, a solução compreende 5% de sacarose. Em outra modalidade, a solução compreende pelo menos um ou mais agentes estabilizadores a uma concentração de 10 mM a 50 mM, inclusive. Em outra modalidade, o agente estabilizador está presente na solução a uma concentração de pelo menos ou igual a 20 mM. Em outra modalidade, o agente estabilizador está presente na solução a uma concentração de pelo menos ou igual a 25 mM. Em outra modalidade, o agente estabilizador está presente na solução a uma concentração de pelo menos ou igual a 50 mM. Em outra modalidade, a solução compreende 25 mM de arginina.
[0188] Em uma modalidade, as soluções descritas neste documento contêm um ou mais conservantes.
[0189] Conforme usado neste documento, o termo "conservante" refere-se a um agente que reduz a ação bacteriana e pode ser opcionalmente adicionado às formulações deste documento. A adição de um conservante pode, por exemplo, facilitar a produção de uma formulação multiuso (doses múltiplas). Exemplos de conservantes em potencial incluem cloreto de octadecildimetilbenzil amônio, cloreto de hexametônio, cloreto de benzalcônio (uma mistura de cloretos de alquilbenzildimetilamônio nos quais os grupos alquil são compostos de cadeia longa) e cloreto de benzetônio. Outros tipos de conservantes incluem álcoois aromáticos como fenol, álcool butílico e benzílico, alquil parabenos como metil ou propil parabeno, catecol, resorcinol, ciclo-hexanol, 3pentanol e m-cresol.
[0190] Em uma modalidade, a solução aquosa estável compreende não mais que cinco agentes além do anticorpo anti-C5. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende não mais que quatro agentes além do anticorpo anti-C5. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende não mais que três agentes além do anticorpo anti-C5. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende não mais que dois agentes além do anticorpo anti-C5. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende não mais que um agentes além do anticorpo anti-C5.
[0191] Em uma modalidade, a solução aquosa estável compreende um anticorpo anti-C5 compreendendo uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO: 19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO: 18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO: 3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO: 4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO: 5, e uma
CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO: 6 a uma concentração de 100 ± 20 (por exemplo, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 ou 120) mg/mL; 50 ± 15 (por exemplo, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55 , 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64 ou 65) mM de tampão fosfato; 5 ± 3 (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8) % de sacarose; e 25 ± 10 (por exemplo, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 ou 35) mM de arginina ; em que a solução possui um pH de 7,4 ± 0,5 (por exemplo, 6,9, 7, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8 ou 7,9).
[0192] Em outra modalidade, a solução aquosa estável consiste em um anticorpo anti-C5 compreendendo uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5, e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6 a uma concentração de 100 ± 20 (por exemplo, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88 , 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113 , 114, 115, 116, 117, 118, 119 ou 120) mg/mL; 50 ± 15 (por exemplo, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55 , 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64 ou 65) mM de tampão fosfato; 5 ± 3 (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8) % de sacarose; e 25 ± 10 (por exemplo, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 ou 35) mM de arginina; em que a solução tem um pH de 7,4 ± 0,5 (por exemplo, 6,9, 7, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8 ou 7,9).
[0193] Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende um anticorpo anti-C5 compreendendo uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5, e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6 a uma concentração de 100 ± 20 (por exemplo, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 ou 120) mg/mL; 50 ± 15 (por exemplo, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55 , 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64 ou 65) mM de tampão fosfato; 5 ± 3 (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8) % de sacarose; e 25 ± 10 (por exemplo, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 ou 35) mM de arginina ; e 0,05 ± 0,03 (por exemplo, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07 e 0,08)% de polissorbato 80, em que a solução possui um pH de 7,4 ± 0,5 (por exemplo, 6,9, 7, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8 ou 7,9).
[0194] Em outra modalidade, a solução aquosa estável consiste de um anticorpo anti-C5 compreendendo uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5, e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6 a uma concentração de 100 ± 20 (por exemplo, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119 ou 120) mg/mL; 50 ± 15 (por exemplo, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51,
52, 53, 54, 55 , 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64 ou 65) mM de tampão fosfato; 5 ± 3 (por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8) % de sacarose; e 25 ± 10 (por exemplo, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 ou 35) mM de arginina ; e 0,05 ± 0,03 (por exemplo, 0,02, 0,03, 0,04, 0,05, 0,06, 0,07 e 0,08)% de polissorbato 80, em que a solução possui um pH de 7,4 ± 0,5 (por exemplo, 6,9, 7, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4, 7,5, 7,6, 7,7, 7,8 ou 7,9).
[0195] Em outra modalidade, é fornecida uma solução aquosa estável (por exemplo, uma solução estéril), em que a solução compreende (a) um anticorpo anti- C5 (por exemplo, ravulizumabe) em uma concentração de cerca de 100 mg/mL, (b) cerca de 50 mM de tampão fosfato; (c) cerca de 5% de sacarose; e (d) cerca de 25 mM de arginina. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende (a) um anticorpo anti-C5 (por exemplo, ravulizumabe) a uma concentração de 100 mg/mL, (b) 50 mM de Tampão Fosfato; (c) 5% de sacarose; e (d) 25 mM de Arginina.
[0196] Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de cerca de 100 mg/mL, (b) cerca de 50 mM de Tampão Fosfato, (c) cerca de 5% de sacarose, (d) cerca de 0,05% Polissorbato 80 e (e) cerca de 25 mM de Arginina. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL, (b) 50 mM de Tampão Fosfato, (c) 5% de sacarose, (d) 0,05% de Polissorbato 80 e (e) 25 mM de Arginina.
[0197] Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende não mais que três agentes adicionais. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende não mais que dois agentes adicionais. Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende não mais que um agente adicional.
[0198] Em outra modalidade, a solução aquosa estável consiste em (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de cerca de 100 mg/mL, (b) cerca de 50 mM de Tampão Fosfato, (c) cerca de 5% de sacarose e (d) cerca de 25 mM de Arginina. Em outra modalidade, a solução aquosa estável consiste em (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL, (b) 50 mM de Tampão Fosfato; (c) 5% de sacarose e (d) 25 mM de Arginina.
[0199] Em outra modalidade, a solução aquosa estável consiste em (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de cerca de 100 mg/mL, (b) cerca de 50 mM de Tampão Fosfato, (c) cerca de 5% de sacarose, (d) cerca de 0,05% de Polissorbato 80 e (e) cerca de 25 mM de Arginina. Em outra modalidade, a solução aquosa estável consiste em (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL, (b) 50 mM de Tampão Fosfato, (c) 5% de sacarose, (d) 0,05% de Polissorbato 80 e (e) 25 mM de Arginina.
[0200] Em uma modalidade, a solução aquosa estável compreende (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de cerca de 100 mg/mL, em que o anticorpo anti-C5 compreende uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5 e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6, (b) cerca de 50 nM de Tampão Fosfato, (c) cerca de 5% de sacarose e (d) cerca de 25 mM de Arginina.
[0201] Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende: (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL, em que o anticorpo anti-C5 compreende uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5 e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6, (b) 50 mM de Tampão Fosfato, (c) 5% de sacarose; e (d) 25 mM de
Arginina.
[0202] Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de cerca de 100 mg/mL, em que o anticorpo anti-C5 compreende uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5 e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6, (b) cerca de 50 nM de Tampão Fosfato, (c) cerca de 5% de sacarose e (d) cerca de 0,05% de Polissorbato 80 e (e) cerca de 25 mM de Arginina.
[0203] Em outra modalidade, a solução aquosa estável compreende: (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL, em que o anticorpo anti-C5 compreende uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5 e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6, (b) 50 mM de Tampão Fosfato, (c) 5% de sacarose, (d) 0,05% de Polissorbato 80 e (e) cerca de 25 mM de Arginina.
[0204] Em outra modalidade, a solução aquosa estável consiste em: (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de cerca de 100 mg/mL, em que o anticorpo anti-C5 compreende uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma
CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5 e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6, (b) cerca de 50 nM de Tampão Fosfato, (c) cerca de 5% de sacarose e (d) cerca de 0,05% de Polissorbato 80 e (e) cerca de 25 mM de Arginina.
[0205] Em outra modalidade, a solução aquosa estável consiste em: (a) um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL, em que o anticorpo anti-C5 compreende uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5 e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6, (b) 50 mM de Tampão Fosfato, (c) 5% de sacarose, (d) 0,05% de Polissorbato 80 e (e) 25 mM de Arginina. IV. Métodos de Preparo das Soluções de Anticorpos Altamente Concentradas
[0206] Também são fornecidos neste documento métodos para preparar uma solução de anticorpo anti-C5 altamente concentrada. Em uma modalidade, foram fornecidos os métodos para a produção de uma solução de anticorpo concentrada estável compreendendo um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL, 50 mM de Tampão Fosfato, 5% de sacarose; e 25 mM de Arginina, o método compreendendo: i) fornecer uma primeira solução aquosa compreendendo o anticorpo anti- C5, a primeira solução aquosa tendo uma primeira formulação e compreendendo não mais que 10mg/mL do anticorpo anti-C5; ii) submeter a primeira solução aquosa a diafiltração em uma formulação compreendendo 50 mM de Tampão Fosfato, 5% de sacarose e 25 mM de Arginina, em pH 7,4 para, desse modo, produzir uma segunda solução aquosa, em que a segunda solução aquosa tem uma segunda formulação como resultado da diafiltração; e iii) concentrar a segunda solução aquosa para produzir uma solução de anticorpo concentrada estável compreendendo 100 mg/mL do anticorpo anti-C5, 50 mM de Tampão Fosfato, 5% de sacarose; e 25 mM de Arginina.
[0207] Em outra modalidade, é fornecido um método para a produção de uma solução de anticorpo concentrada estável compreendendo um anticorpo anti-C5 a uma concentração de 100 mg/mL, 50 mM de Tampão Fosfato, 5% de sacarose; 25 mM de Arginina e 0,05% de Polissorbato 80 , o método compreendendo: i) fornecer uma primeira solução aquosa compreendendo o anticorpo anti- C5, a primeira solução aquosa tendo uma primeira formulação e compreendendo não mais que 10mg/mL do anticorpo anti-C5; ii) submeter a primeira solução aquosa a diafiltração em uma formulação compreendendo 50 mM de Tampão Fosfato, 5% de sacarose, 25 mM de Arginina e 0,05% de Polissorbato 80, em pH 7,4 para, desse modo, produzir uma segunda solução aquosa, em que a segunda solução aquosa tem uma segunda formulação como resultado da diafiltração; e iii) concentrar a segunda solução aquosa para produzir uma solução de anticorpo concentrada estável compreendendo 100 mg/mL do anticorpo anti-C5, 50 mM de Tampão Fosfato, 5% de sacarose, 25 mM de Arginina e 0,05% de Polissorbato 80. V. Vias de Administração
[0208] As soluções descritas neste documento podem ser administradas a um paciente usando uma variedade de métodos que dependem, em parte, da via de administração. A via pode ser um modo parenteral, por exemplo, injeção ou infusão intravenosa (IV), injeção subcutânea (SC), injeção intraperitoneal (IP), injeção intraocular, injeção intra-articular ou injeção intramuscular (IM). "Administração parenteral", "administrado parenteralmente" e outras frases gramaticalmente equivalentes, conforme usadas neste documento, referem-se a modos de administração diferentes da administração enteral e tópica, geralmente por injeção, e incluem, sem limitação, injeção ou infusão intravenosa, intranasal, intra-ocular, pulmonar, intramuscular, intra-arterial, intratecal, intracapsular, intra-orbital, intracardíaca, intradérmica, intrapulmonar, intraperitoneal, transtraqueal, subcutânea, subcuticular, subarticular, intra-articular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal, epidural, intracerebral, intracraniana, intracarotídea e instraesternal.
[0209] Em uma modalidade particular, a solução é administrada através de injeção subcutânea. A administração subcutânea pode ser realizada por meio de um dispositivo. O dispositivo pode ser uma seringa, uma seringa pré-carregada, um auto- injetor descartável ou reutilizável, um injetor de caneta, um injetor de adesivo, um injetor vestível, uma bomba de infusão de seringa ambulatorial com conjuntos de infusão subcutânea ou outro dispositivo.
[0210] Em uma modalidade, uma solução descrita neste documento é distribuída a um sujeito por meio de administração local. Conforme usado neste documento, "administração local" ou "entrega local" refere-se à entrega que não depende do transporte da composição ou do agente ativo (por exemplo, um anticorpo anti-C5) para o sítio ou tecido alvo pretendido através do sistema vascular. Após a administração local na vizinhança de um sítio ou tecido alvo, a solução, ou um ou mais componentes da mesma, pode difundir para o sítio ou tecido alvo pretendido.
[0211] Por exemplo, a solução pode ser entregue por injeção ou através da implantação de um dispositivo contendo a solução. O implante pode ser de um material poroso, não poroso ou gelatinoso, incluindo membranas, como membranas sialásticas ou fibras. O implante pode ser configurado para liberação sustentada ou periódica da solução para o sujeito. Ver, por exemplo, a Publicação do Pedido de Patente US Nº 20080241223; Patentes US Nº. 5,501,856; 4,863,457; e 3,710,795; EP 488401; e EP 430539, cujas divulgações são incorporadas aqui por referência em sua totalidade. Uma solução descrita neste documento pode ser entregue ao sujeito por meio de um dispositivo implantável com base em, por exemplo, sistemas difusivos,
erodíveis ou convectivos, por exemplo, bombas osmóticas, implantes biodegradáveis, sistemas de eletrodifusão, sistemas de eletroosmose, bombas de pressão de vapor, bombas eletrolíticas, bombas efervescentes, bombas piezoelétricas, sistemas baseados em erosão ou sistemas eletromecânicos.
[0212] Em uma modalidade, uma solução descrita neste documento pode ser administrada localmente a uma junta (por exemplo, uma junta articulada). Por exemplo, nas modalidades em que o distúrbio é artrite, uma solução terapeuticamente apropriada pode ser administrada diretamente a uma junta (por exemplo, em um espaço da junta) ou nas proximidades de uma junta. Exemplos de juntas intra- articulares nas quais uma composição descrita neste documento pode ser administrada localmente incluem, por exemplo, quadril, joelho, cotovelo, punho, junta esternoclavicular, temperomandibular, carpal, tarsal, tornozelo e qualquer outra junta sujeita a condições artríticas. Uma composição descrita neste documento também pode ser administrada à bursa, como, por exemplo, acromial, bicipitoradial, cubitoradial, deltoide, infrapatelar, isquiática e qualquer outra bolsa conhecida na técnica da medicina.
[0213] Em outra modalidade, uma solução aqui descrita pode ser administrada localmente no olho. Conforme usado neste documento, o termo "olho" refere-se a todo e qualquer tecido e estrutura anatômica associada a um olho. Em uma modalidade, uma solução descrita neste documento é administrada na câmara posterior do olho. Em outra modalidade, uma solução descrita neste documento é administrada de forma intravítrea. Em outra modalidade, uma solução descrita neste documento é administrada transescleralmente.
[0214] Em algumas modalidades, por exemplo, nas modalidades de tratamento ou prevenção de um distúrbio como COPD ou asma, uma solução descrita neste documento pode ser administrada a um sujeito por meio do pulmão. A entrega de drogas pelo pulmão pode ser alcançada por inalação e a administração por inalação neste documento pode ser oral e/ou nasal. Em uma modalidade, uma solução conforme descrito neste documento pode ser administrada aos pulmões de um sujeito por meio de um nebulizador. Os nebulizadores usam ar comprimido para fornecer um composto como aerossol liquefeito ou névoa. Um nebulizador pode ser, por exemplo, um nebulizador de jato (por exemplo, nebulizadores de jato de ar ou líquido) ou um nebulizador ultrassônico. Dispositivos adicionais e métodos de administração intrapulmonar são estabelecidos, por exemplo, nas Publicações de Pedido de Patente US Nº. 20050271660 e 20090110679, cujas divulgações de cada um dos quais são incorporadas aqui por referência em sua totalidade.
[0215] Em outras modalidades, as soluções aqui descritas estão presentes na forma de dosagem unitária, que pode ser particularmente adequada para autoadministração. Um produto formulado da presente divulgação pode ser incluído dentro de um recipiente, tipicamente, por exemplo, um frasco, cartucho, seringa pré- carregada ou caneta descartável. Um doseador, tal como o dispositivo doseador descrito na Patente US Nº 6,302,855, também pode ser utilizado. Um sistema de injeção pode incluir caneta de entrega conforme descrito na Patente US Nº 5,308,341. Os dispositivos de caneta, mais comumente usados para auto-entrega de insulina a pacientes com diabetes, são bem conhecidos na técnica. Tais dispositivos podem compreender pelo menos uma agulha de injeção (por exemplo, uma agulha de calibre 31 com cerca de 5 a 8 mm de comprimento), são tipicamente pré-carregados com uma ou mais doses terapêuticas unitárias de uma solução e são úteis para rápida entrega da solução a um sujeito com o mínimo de dor possível. VI. Métodos de Tratamento
[0216] As soluções descritas podem ser usadas para tratar uma variedade de doenças e condições em um paciente humano. Em uma modalidade, as soluções podem ser usadas para tratar um distúrbio associado ao complemento, incluindo, mas não limitado a: artrite reumatoide (RA); síndrome do anticorpo antifosfolípide; nefrite lúpica; lesão de isquemia-reperfusão; síndrome hemolítico-urêmica atípica (aHUS); síndrome hemolítica urêmica típica ou infecciosa (tHUS); doença do depósito denso (DDD); hemoglobinúria paroxística noturna (PNH); neuromielite óptica (NMO); neuropatia motora multifocal (MMN); esclerose múltipla (MS); degeneração macular (por exemplo, degeneração macular relacionada à idade (AMD)); hemólise, síndrome das enzimas hepáticas elevadas e das plaquetas baixas (HELLP); púrpura trombocitopênica trombótica (TTP); aborto espontâneo; vasculite Pauci-imune; epidermólise bolhosa; aborto recorrente; e lesão cerebral traumática (ver, por exemplo, Holers (2008) Immunological Reviews 223:300-316 e Holers e Thurman (2004) Molecular Immunology 41: 147-152.)
[0217] Em outra modalidade, o distúrbio associado ao complemento é um distúrbio vascular associado ao complemento, como, mas não limitado a, um distúrbio vascular associado ao diabetes (por exemplo, do olho), oclusão da veia central da retina, um distúrbio cardiovascular, miocardite, distúrbio cerebrovascular, distúrbio vascular periférico (por exemplo, músculo-esquelético), distúrbio renovascular, distúrbio vascular mesentérico/entérico, revascularização de transplantes e/ou replantes, vasculite, nefrite de púrpura de Henoch-Schönlein, vasculite associada a lúpus eritematoso sistêmico, vasculite associada a artrite reumatoide, vasculite do complexo imune, doença de Takayasu, cardiomiopatia dilatada, angiopatia diabética, doença de Kawasaki (arterite), embolia gasosa venosa (VGE) e reestenose após colocação de stent, aterectomia rotacional e angioplastia coronária transluminal percutânea (PTCA) (ver, por exemplo, Publicação do Pedido de Patente U.S. Nº 20070172483.)
[0218] Os distúrbios adicionais associados ao complemento incluem, sem limitação, miastenia gravis, doença da aglutinina fria, dermatomiosite, doença de Graves, aterosclerose, doença de Alzheimer, síndrome de Guillain-Barré, doença de Degos, rejeição do enxerto (por exemplo, rejeição de transplante), sepse, queimadura (por exemplo, queimadura grave), sepse de resposta inflamatória sistêmica, choque séptico, lesão medular, glomerulonefrite, tireoidite de Hashimoto, diabetes tipo I, psoríase, pênfigo, anemia hemolítica autoimune (AIHA), púrpura trombocitopênica idiopática (ITP), Síndrome de Goodpasture, síndrome antifosfolípide (APS), APS catastrófica (CAPS), esclerose lateral amiotrófica (ALS), doença de Alzheimer e neuropatia desmielinizante inflamatória crônica.
[0219] Em outra modalidade, as soluções descritas neste documento podem ser usadas para tratar microangiopatia trombótica (TMA), por exemplo, TMA associada a um distúrbio associado ao complemento, como qualquer um dos distúrbios associados ao complemento descritos neste documento.
[0220] Os distúrbios associados ao complemento também incluem distúrbios pulmonares associados ao complemento, como asma, bronquite, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), doença pulmonar intersticial, deficiência de anti-tripsina α- 1, enfisema, bronquiectasia, bronquiolite obliterante, alveolite, sarcoidose, fibrose pulmonar e distúrbios vasculares do colágeno.
[0221] Em outra modalidade, a solução descrita neste documento é administrada a um sujeito para tratar, prevenir ou melhorar pelo menos um sintoma de uma resposta inflamatória associada ao complemento (por exemplo, o aspecto da resposta inflamatória associada ao complemento de um distúrbio associado ao complemento) em um sujeito. Por exemplo, uma composição pode ser usada para tratar, prevenir e/ou melhorar um ou mais sintomas associados a uma resposta inflamatória associada ao complemento, como rejeição do enxerto/doença do enxerto contra o hospedeiro (GVHD), lesões de reperfusão (por exemplo, após colocação de marcapasso cardiopulmonar ou transplante de tecido) e dano tecidual após outras formas de lesão traumática, como queimadura (por exemplo, queimadura grave), traumatismo contuso, lesão medular ou ulceração pelo frio. Veja, por exemplo, Park et al. (1999) Anesth Analg 99(1):42-48; Tofukuji et al. (1998) J Thorac Cardiovasc Surg 116(6):1060-1068; Schmid et al. (1997) Shock 8(2):119-124; e Bless et al. (1999) Am J Physiol 276(1):L57-L63.
[0222] Em outra modalidade, o distúrbio associado ao complemento é um distúrbio vascular associado ao complemento, tal como, mas não limitado a, um distúrbio cardiovascular, miocardite, distúrbio cerebrovascular, distúrbio vascular periférico (por exemplo, músculo-esquelético), distúrbio renovascular, distúrbio vascular mesentérico/entérico, revascularização de transplantes e/ou replantes, vasculite, nefrite de púrpura de Henoch-Schönlein, vasculite associada a lúpus eritematoso sistêmico, vasculite associada a artrite reumatoide, vasculite do complexo imune, transplante de órgão ou tecido, doença de Takayasu, síndrome do extravasamento capilar, cardiomiopatia dilatada, angiopatia diabética, aneurisma aórtico torácico- abdominal, doença de Kawasaki (arterite), embolia gasosa venosa (VGE) e reestenose após colocação de stent, aterectomia rotacional e angioplastia coronária transluminal percutânea (PTCA) (ver, por exemplo, Publicação do Pedido de Patente U.S. Nº 20070172483.) VII. Tratamentos Combinados
[0223] Em uma modalidade, as soluções descritas neste documento são administradas a um paciente como uma monoterapia. Em outra modalidade, elas são administradas em conjunto com um ou mais agentes adicionais e/ou outras terapias (por exemplo, que são adequados para o tratamento de distúrbios associados ao complemento). Por exemplo, a terapia combinada pode incluir a administração ao paciente humano de um ou mais agentes adicionais (por exemplo, drogas anti- coagulantes, anti-hipertensivas ou anti-inflamatórias (por exemplo, esteroides)) que fornecem um benefício terapêutico para um paciente. Em uma modalidade, as soluções descritas neste documento são administradas em combinação com um agente anti-inflamatório (por exemplo, AINEs, corticosteroides, metotrexato, hidroxicloroquina, agentes anti-NF, como etanercepte e infliximabe, um agente de depleção de células B, como o rituximabe, um antagonista da interleucina-1 ou um agente bloqueador co-estimulador de células T, como o abatacept).
[0224] Agentes adicionais para o tratamento de um distúrbio associado ao complemento em um indivíduo variam de acordo com o distúrbio específico que está sendo tratado, mas podem incluir, sem limitação, um ou mais anti-hipertensivos (por exemplo, um inibidor da enzima de conversão da angiotensina, labetalol, hidralazina, nifedipina, antagonistas dos canais de cálcio, nitroglicerina ou nitroprussiato de sódio), anticoagulantes, corticosteroides (por exemplo, prednisona), agentes imunossupressores (por exemplo, vincristina ou ciclosporina A), anticoagulantes (por exemplo, varfarina (Coumadin). aspirina, heparina, fenindiona, fondaparinux, idraparinux), inibidores de trombina (por exemplo, argatrobana, lepirudina, bivalirudina ou dabigatrana), agentes fibrinolíticos (por exemplo, ancrodo, ácido α-aminocaproico, antiplasmina-a1), prostaciclina e desfibrotídeo), agentes anti-hipertensivos (por exemplo, labetalol, hidralazina, nifedipina, antagonistas dos canais de cálcio, nitroglicerina ou nitroprussiato de sódio), agentes hipolipemiantes (por exemplo, um inibidor da hidroximetilglutaril CoA redutase), agentes anti-convulsivos (por exemplo,
sulfato de magnésio), agentes antitrombóticos (por exemplo, heparina, antitrombina, prostaciclina ou baixa dose aspirina), simpatomiméticos (por exemplo, albuterol), antibióticos, desoxirribonucleases (por exemplo, Pulmozyme®), drogas anticolinérgicas, inibidores anti-IgE (por exemplo, anticorpos anti-IgE), corticosteroides, ou drogas anti-inflamatórias não esteroides (AINE). Muitos AINEs diferentes estão disponíveis, alguns vendidos sem receita médica, incluindo ibuprofeno (Advil®, Motrin®, Nuprin®) e naproxeno (Alleve®) e muitos outros disponíveis mediante receita médica, incluindo meloxicam (Mobic®), etodolaco (Lodine®), nabumetona (Relafen®), sulindaco (Clinoril®), tolementina (Tolectin®), salicilato de colina-magnésio (Trilasate®), diclofenaco (Cataflam®, Voltaren®, Arthrotec®), Diflunisal (Dolobid®), indometacina (Indocin®), cetoprofeno (Orudis®, Oruvail®), oxaprozina (Daypro®) e piroxicam (Feldene®) (ver, por exemplo, Mihu et al. (2007) J Gastrointestin Liver Dis 16(4):419-424). Em outra modalidade, uma solução descrita neste documento pode ser formulada para administração a um paciente juntamente com terapia com globulina gama intravenosa (IVIG), plasmaferese, reposição de plasma ou troca de plasma.
[0225] Em uma modalidade, a solução e um ou mais agentes e/ou terapias adicionais são administrados ao mesmo tempo. Em outra modalidade, a solução é administrada antes da administração de um ou mais agentes e/ou terapias adicionais. Em outra modalidade, a solução é administrada após a administração de um ou mais agentes e/ou terapias adicionais.
[0226] Quando uma solução de anticorpo descrita neste documento é usada em combinação com um segundo agente ativo, os agentes (por exemplo, o anticorpo anti- C5 e o segundo agente) podem ser formulados separadamente ou em conjunto. Por exemplo, a solução e o agente podem ser misturados, por exemplo, imediatamente antes da administração, e administrados juntos ou separadamente, por exemplo, ao mesmo tempo ou em momentos diferentes. VIII. Kits e Formas de Dosagem Unitária
[0227] Também são fornecidos neste dpcumento kits que incluem uma solução aquosa estável contendo um anticorpo anti-C5, ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, como o ravulizumabe ou o BNJ421, em uma quantidade terapeuticamente eficaz, adequada para administração a um paciente humano (por exemplo, um paciente com um distúrbio associado ao complemento). Os kits opcionalmente também podem incluir instruções, por exemplo, compreendendo horários de administração, para permitir que um praticante (por exemplo, um médico, enfermeiro ou paciente) administre a composição contida no mesmo para administrar a solução a um paciente.
[0228] Os kits também podem conter um meio adequado para a entrega de uma ou mais soluções a um paciente em necessidade, por exemplo, um paciente atingido, suspeito de ter ou em risco de desenvolver um distúrbio associado ao complemento. Em uma modalidade, os meios são adequados para entrega invasiva (por exemplo, intravascular (por exemplo, intravenosa), subcutânea, intra-articular, intra-ocular, intra-ocular, intravítrea ou intramuscular) da solução a um paciente. Em outra modalidade, os meios são adequados para a distribuição subcutânea da solução ao paciente. Em outra modalidade, os meios são adequados para a distribuição intravenosa da solução ao paciente. Por exemplo, os meios podem ser uma seringa ou uma bomba osmótica. Em outra modalidade, a solução pode ser formulada como um colírio, sendo os meios um conta-gotas.
[0229] Opcionalmente, os kits incluem várias embalagens de uma solução de dose única, cada uma contendo uma quantidade eficaz da solução para uma única administração. Os instrumentos ou dispositivos necessários para administrar a solução também podem ser incluídos nos kits. Por exemplo, um kit pode fornecer uma ou mais seringas pré-carregadas contendo a solução.
[0230] Os exemplos a seguir são meramente ilustrativos e não devem ser interpretados como limitando o escopo desta divulgação de nenhuma maneira, pois muitas variações e equivalentes serão evidentes para os versados na técnica após a leitura da presente divulgação.
[0231] O conteúdo de todas as referências, entradas do Genbank, patentes e pedidos de patentes publicados citados ao longo deste pedido é aqui expressamente incorporado por referência.
EXEMPLOS Exemplo 1: Desenvolvimento da Formulação de Alta Concentração de ravulizumabe (AXLN1210) para Administração Subcutânea
[0232] Este exemplo resume o desenvolvimento de uma formulação de alta concentração ALXN1210 para administração subcutânea (por exemplo, 50 mM de Tampão Fosfato, 5% de sacarose, 25 mM de arginina, pH 7,4 a 100 mg/mL). Experimentos preliminares foram realizadas no desenvolvimento inicial da formulação para obter dados de triagem pré-formulação e avaliar a redução no aspecto opalescente em concentrações mais altas para ALXN1210. A formulação inicial de ALXN1210 (10 mM de Fosfato, Cloreto de Sódio 150 mM, pH 7,0, Tween 80 a 0,02%, a 10 mg/mL) era incolor e ligeiramente opalescente. À medida que a concentração no ALXN1210 aumentava, o aspecto opalescente também aumentava. Com os resultados da triagem pré-formulação, um estudo de estabilidade foi executado para obter dados de estabilidade de guia. Após o estudo de estabilidade inicial, foi realizado um estudo de estabilidade do protótipo para obter uma formulação ideal para a substância ativa a granel e o produto da droga. Os estudos preliminares e de estabilidade são discutidos em detalhes abaixo.
1. Métodos A. Aspecto
[0233] O aspecto foi determinado por observação visual usando luz normal de laboratório, contra um fundo branco e um preto. B. Ligação de C5
[0234] O ELISA de ligação de C5 é um teste de potência para ALXN1210. Este procedimento de teste é um imunoensaio de ligação direta com detecção colorimétrica, usado para testar a capacidade do ALXN1210 de se ligar ao seu alvo, a proteína do complemento C5 humana. Uma placa de microtitulação Polysorp foi revestida com proteína C5 humana e bloqueada com albumina sérica bovina (BSA). Uma curva padrão foi preparada a partir do material de referência ALXN1210. O material de referência e as amostras de teste foram preparados em três diluições direcionadas pata ficar dentro do intervalo de trabalho do ensaio. Após incubação com os padrões e amostras, a placa foi então lavada e incubada com IgG4 anti-humano de camundongo conjugado com peroxidase de raiz forte (HRP). A placa foi lavada novamente e depois desenvolvida usando o substrato, 2,2'-azino-bis(ácido 3- etilbenzotiazolina-6-sulfônico), (ABTS). A quantidade de substrato reagido foi lida espectrofotometricamente em um leitor de placas a 405 nm. A leitura da absorbância foi proporcional à concentração de ALXN1210 ligada a C5 na placa. Um ajuste de curva de quatro parâmetros foi aplicado à curva padrão e o material de referência e os resultados da amostra de teste foram interpolados a partir da curva. Os resultados dos testes de amostra foram comparados com os resultados do material de referência e a atividade relativa (%) foi relatada. C. Densidade
[0235] As medições de densidade usando o medidor de densidade DMA 4500 foram determinadas pelo princípio do tubo em U. Um tubo de vidro oco em forma de U foi preenchido com amostra e, em seguida, eletronicamente excitado na menor amplitude possível. A densidade foi determinada através da seguinte relação: ρ=A(τ2) -B ρ = densidade τ = o período de oscilação
[0236] A e B são constantes instrumentais, determinadas através da calibração do instrumento com duas substâncias de densidade conhecida. D. Fluorescência Diferencial de Varredura
[0237] A fluorescência diferencial de varredura mede a alteração da estabilidade térmica executando uma curva de desnaturação térmica na presença de um corante fluorescente, como o Sypro Orange. Quando a proteína se desdobra, as superfícies hidrofóbicas expostas se ligam ao corante, aumentando a fluorescência e gerando uma curva de estabilidade com um valor característico do ponto médio à temperatura da exposição hidrofóbica Th. E. Espalhamento Dinâmico de Luz
[0238] O espalhamento dinâmico de luz mede o tamanho e as interações de proteínas, nanopartículas e outras macromoléculas in situ em placas de micropoços,
usando um sistema de iluminação que permite que os poços em uma microplaca sejam visualizados usando uma câmera de 3 megapixels acoplada. As flutuações do espalhamento de luz devido ao movimento browniano fornecem um coeficiente de difusão relacionado ao raio hidrodinâmico das partículas presentes na solução. F. Permeação de Gel HPLC
[0239] Utilizou-se HPLC de permeação em gel (exclusão de tamanho) para distinguir IgG monomérica das espécies de anticorpos maiores e múltiplas que podem resultar da agregação de monômeros. As amostras de teste foram injetadas em uma coluna TSK gel G3000 SWXL equilibrada com solução salina tamponada com fosfato, pH 7,0, seguida por eluição isocrática. Os picos de proteína foram monitorados a 214 nm e a porcentagem de pureza da IgG monomérica foi expressa como uma porcentagem da área total do pico integrado. A detecção dos multímeros de massa maiores foi pela observação de picos eluindo antes do pico do monômero. G. Eletroforese Capilar com Imagem (iCE)
[0240] Este método usa o sistema Protein Simple iCE280 ou iCE3, que executa a solução IEF livre em uma coluna capilar e detecta zonas de proteína focadas usando um detector UV de coluna completa. As amostras foram preparadas pela pré-mistura de ALXN1210, anfólitos carreadores e marcadores de pI. A amostra foi carregada em um cartucho capilar e os tanques eletrolíticos em cada extremidade do capilar são preenchidos com ácido e base. A voltagem foi aplicada e os analitos foram focados em seus pI. Uma câmera CCD pruduziu uma imagem de absorção de luz UV de toda a coluna capilar a cada 30 segundos, permitindo o monitoramento em tempo real da etapa de foco. O padrão de separação resultante foi capturado e analisado. O pI das proteínas presentes na amostra foi interpolado da posição dos marcadores de pI inseridos na amostra. H. Lab on Chip (LoC)
[0241] Este método testa a homogeneidade e pureza do produto. As amostras não reduzidas foram desnaturadas por tratamento com dodecilsulfato de lítio (LDS). Amostras reduzidas foram desnaturadas por tratamento com dodecilsulfato de lítio (LDS) e as ligações dissulfeto foram rompidas com ditiotreitol (DTT). As cadeias polipeptídicas foram misturadas com corante fluorescente, que se liga ao LDS e separadas de acordo com o tamanho molecular por eletroforese microcapilar. A proteína foi detectada e quantificada por fluorescência induzida por laser. I. Osmolalidade
[0242] A osmolalidade da amostra foi determinada usando um osmômetro de depressão no ponto de congelamento. O osmômetro foi calibrado antes do uso com padrões de osmolaridade certificados comercialmente disponíveis a 50 mOsm/kg e 850 mOsm/kg, que se enquadram no intervalo de amostras. Uma solução de referência de 290 mOsm/kg foi usada para confirmar a calibração bem-sucedida antes do teste das amostras. As amostras foram testadas em triplicado e a média das determinações da amostra foi relatada. J. pH
[0243] A medição do pH foi realizada usando um eletrodo de combinação de KCl livre de prata saturada resistente a proteínas e um medidor e monitor de temperatura associados. O medidor foi calibrado antes do uso, usando soluções disponíveis comercialmente no intervalo de pH apropriado (isto é, pH 4,0 - pH 7,0). K. Concentração de proteínas usando SoloVPE
[0244] A absorbância a 280 nm foi usada para determinar a concentração de proteína usando a tecnologia de comprimento de caminho variável nas amostras de teste usando um coeficiente de extinção determinado teoricamente de 1,479. As leituras de absorbância em triplicado pelo método foram realizadas por amostra. L. Viscosidade
[0245] As medições de viscosidade usando o viscosímetro AMVn foram determinadas pelo princípio da bola rolante. Um tubo oco foi preenchido com amostra e uma bola sólida de densidade conhecida e depois inclinado em um ângulo conhecido. O tempo que a bola leva para se mover de um lado do tubo para o outro foi determinado e usado para calcular a viscosidade através da seguinte relação: η=K*(ρb- ρs )*tr η = viscosidade dinâmica (mPa*s) K = constante de proporcionalidade ρb = densidade da bola (g/mL) ρs = densidade da amostra (g/mL) tr = tempo de rolagem da bola
[0246] Para calcular a viscosidade, a densidade da amostra determinada usando o medidor de densidade DMA 4500 M foi usada como ρs.
[0247] M. Determinação de Partículas Subvisíveis por Geração de Imagens de Micrfluxo (Micro Flow Imaging - MFI)
[0248] O objetivo é avaliar todas as partículas subvisíveis em uma formulação por geração de imagens de microfluxo (MFI). A amostra foi removida do armazenamento de 2-8oC e testada diretamente na MFI usando o amostrador automático BOT1. A inversão da amostra foi realizada seis vezes antes do carregamento da amostra no BOT1 para garantir a mistura completa das partículas. As amostras foram carregadas em três poços consecutivos e cada poço teve uma medição para um total de 3 repetições. Três ciclos de mistura foram construídos no BOT1 para garantir uma mistura uniforme.
2. Desenvolvimento de Formulação
[0249] As Figuras 1-5 e as Tabelas 1-5 mostram os resultados experimentais para o desenvolvimento precoce da formulação de ALXN1210 em alta concentração.
[0250] No primeiro experimento, foi observado o efeito da adição de um aminoácido ao ALXN1210 em tampão fosfato de sódio na opalescência. A causa da opalescência foi determinada como uma falta de carga para carregar repulsão entre moléculas de anticorpo em solução em alta concentração. Uma série de experimentos foi conduzido conforme descrito abaixo para otimizar o aminoácido particular e a concentração necessária para produzir uma solução límpida estável. Com base nesses experimentos, determinou-se que a adição de aminoácido carregado positivamente (L-arginina) reduziu a opalescência em uma amostra de 50 mg/mL ALXN1210 em tampão fosfato de sódio. A mesma conclusão foi alcançada pela inspeção visual dos frascos (dados não mostrados).
[0251] Além disso, os seguintes experimentos foram conduzidas usando a formulação ALXN1210 IV a 10 mg/ml e concentrando o anticorpo e conduzindo a troca de tampões para avaliar vários sistemas tampão iniciais para uso na busca de uma formulação de ALXN1210 de alta concentração. Conforme mostrado na Tabela 1 abaixo, todas as amostras agrupadas tiveram uma troca final de tampão de 1:1000 para obter o pH desejado. As amostras agrupadas apresentaram um intervalo de concentração de 35,3 a 54,0 mg/mL. A % de recuperação após a troca de tampão variou de 70,6% a 108%. Os resultados do aspecto mostram que os frascos de 25 mM de histidina pH 7 e 25 mM de tampão fosfato pH 7 eram transparentes e incolores, comparáveis ao Eculizumabe, e as soluções em todos os outros frascos trocados de tampão eram opalescentes. Os resultados da eletroforese capilar de imagem (iCE) mostraram um intervalo de pI de 5,98 a 6,54, intervalo de pI principal de 6,19 a 6,24 e intervalo de % de área de 63,1% a 65,9%. Os resultados da cromatografia de exclusão por tamanho (SEC) mostraram uma % de monômero (pureza) de 98,48% a 98,98%. Tabela 1: Troca de Tampão ALXN1210 de 10 mg/mL a 50 mg/mL (Conjuntos Agrupados 1-3)
SEC % de PH do Concentração (% de Recuperaçã Tampão Tampão medida Aspecto iCE Monômero o de Troca Pós-Troca (mg/mL) ) de Tampão 25 mM de Tampão intervalo de pI 5,05 54,0 108,0 Opalescência 98,48 de Citrato 6,01-6,53 pH 5 25 mM de Tampão intervalo de pI 6,09 41,7 83,4 Opalescência 98,70 de Citrato 6,01-6,53 pH 6 25 mM de Tampão intervalo de pI de 4,98 42,1 84,2 Opalescência 98,98 6,01-6,53 Acetato pH 5 25 mM de Tampão intervalo de pI de 5,86 35,3 70,6 Opalescência 98,79 6,01-6,53 Acetato pH 6 25 mM Tampão Intervalo de pI 6,93 49,7 99,4 Opalescência 98,59 HEPES 6,03-6,54 pH 7
SEC % de PH do Concentração (% de Recuperaçã Tampão Tampão medida Aspecto iCE Monômero o de Troca Pós-Troca (mg/mL) ) de Tampão 25 mM de intervalo de pI 5,90 37,4 74,8 Opalescência 98,93 Histidina 6,02-6,53 pH 6 25 mM de *Límpida, intervalo de pI 6,94 47,2 94,4 98,82 Histidina incolor 5,98-6,48 pH 7 25 mM de *Límpida, intervalo de pI 7,10 48,6 97,2 98,50 Fosfato incolor 6,01-6,53 pH 7 25 mM de Tampão 6,83 49,6 99,2 Opalescência de Citrato pH 6,8 25 mM de Fosfato- 6,89 46,5 93,1 Opalescência Citrato, pH 6,9 25 mM de Tampão de 7,05 49,0 97,9 Opalescência Fosfato de Potássio pH 7 25 mM de Tampão de 7,55 44,5 89,1 Opalescência Fosfato de Sódio pH 7,5 *Comparável ao Eculizumabe
[0252] Conforme mostrado na Figura 1, os resultados da titulação de sal para amostras trocadas de tampão de Histidina a pH 7 usando DLS mostram que, à medida que a concentração de sal aumentava, a auto-associação também aumentava no ALXN1210.
[0253] Conforme mostrado na Figura 2, os resultados da titulação de L-arginina usando o espalhamento dinâmico de luz (DLS) mostram que 25 mM de L-arginina é a quantidade mínima necessária para reduzir a opalescência no ALXN1210 a 50 mg/mL.
[0254] Conforme mostrado na Figura 3, os resultados da titulação de sal para amostras trocadas de tampão de Histidina a pH 7 usando DLS mostram que nenhum sal e 150 mM de adição de sal tiveram a menor auto-associação também no ALXN1210. Picos de comparação identificados como 2 e 5.
[0255] Conforme mostrado na Figura 4, os resultados das amostras trocadas de tampão usando DSF mostram que as bolsas hidrofóbicas não estão expostas no ALXN1210. Os tampões de citrato e acetato em pH 5 e 6 têm baixa estabilidade térmica com a menor temperatura de fusão (Tm), e os tampões de histidina e fosfato em pH 7 são os mais estáveis com a maior Tm.
[0256] Como mostrado nos resultados de aspecto apresentados na Tabela 2, o ALXN1210 a cerca de 100 mg / mL é claro e incolor com a adição de L-arginina 25 mM em tampão fosfato 25 mM a pH 7. Tabela 2: Aspecto de amostras de ALXN1210 100 mg/mL Concentração ID da Amostra Tampão medida Aspecto (mg/mL) 10 mM de Fosfato de Sódio, 100,0 Opalescência pH 7 SPPD-14-0042-8 25 mM de Histidina, pH 7,2 66,0 Opalescência 10 mM de Fosfato, 25 mM de SPPD-14-0042-9 114,5 Opalescência L-Arginina, pH 7 SPPD-14-0042- 25 mM de Fosfato, pH 7 112,0 Opalescência Formulação C SPPD-14-0042- Formulação C 25 mM de Fosfato, 25 mM de 112,0 Límpida, incolor com pico de L- L-Arginina (com pico), pH 7 arginina
[0257] Conforme mostrado na Figura 5, os resultados para ALXN1210 a 10 mg/mL e 114 mg/mL com e sem pico de L-arginina usando o DLS mostraram que a adição de 25 mM de L-arginina a pelo menos 100 mg/mL de amostra é mais comparável a 10 mg/mL de referência. A amostra de pelo menos 100 mg/mL sem a adição de L- arginina resultou em espécies de ordem superior, o que indica auto-associação.
[0258] Os resultados para a osmolalidade apresentados na Tabela 3 mostram que o ALXN1210 em 25 mM de Histidina, pH 7,2 com sacarose a 8% ou sorbitol a 4,5%, está dentro do intervalo de Osmolalidade desejada de 275-320. A osmolalidade de ALXN1210 em 25 mM de fosfato, 25 mM de L-arginina, pH 7 suplementado com sacarose a 7% ou sorbitol a 4% também caiu dentro do intervalo de osmolaridade desejada. Tabela 3: Osmolalidade para ALXN1210 em várias formulações Descrição da Concentração % de Osmolalidade Tampão Usado amostra (mg/mL) Excipiente (mOsm/kg) 25 mM de SPPD-14-0042-8 66,0 55 Histidina pH 7,2 25 mM de Sacarose a SPPD-14-0042-8 66,0 299 Histidina pH 7,2 8% 25 mM de Sorbitol a SPPD-14-0042-8 66,0 295 Histidina pH 7,2 4,5% SPPD-14-0042- 25 mM de Formulação C Fosfato, 25 mM 112,0 69 com de L-Arginina, pH pico de L-arginina 7 SPPD-14-0042- 25 mM de Formulação C Fosfato, 25 mM Sacarose a 112,0 302 com de L-Arginina, pH 7% pico de L-arginina 7 SPPD-14-0042- 25 mM de Formulação C Fosfato, 25 mM 112,0 Sorbitol a 4% 317 com de L-Arginina, pH pico de L-arginina 7
[0259] Os resultados de viscosidade estabelecidos na Tabela 4 mostram que, à medida que a concentração de ALXN1210 aumenta, a viscosidade também aumenta para soluções de ALXN1210 em tampões de histidina e fosfato. Os resultados da densidade apresentados na Tabela 4 não mostram alterações significativas na densidade dos tampões de histidina e fosfato à medida que a concentração muda.
Tabela 4: Viscosidade e Densidade para Amostras ALXN1210 em Várias Concentrações
ALXN1210 Viscosidade Densidade Descrição da Amostra/Matriz da Amostra Conc.
Dinâmica (g/cm3) (mg/mL) (mPa.S)
25 mM de tampãop de histidina, pH 7,2 0 1,014 0,999
ALXN1210, Histidina, pH 7,2 66,0 3,368 1,018
10 mM de Tampão de Fosfato de Sódio pH 0 1,014 0,999 7
10 mM de Fosfato de Sódio 100 8,788 1,027
25 mM de Fosfato, 25 mM de L-Arginina, 0 1,030 1,002 tampão de pH 7 ALXN1210, Fosfato, 25 mM de Arginina, 114,5 10,387 1,034 pH 7 ALXN1210, Fosfato, 25 mM de Arginina, 100,3 6,605 1,002 pH 7 ALXN1210, Fosfato, 25 mM de Arginina, 95,1 5,714 1,002 pH 7 ALXN1210, Fosfato, 25 mM de Arginina, 90,0 4,906 1,002 pH 7 ALXN1210, Fosfato, 25 mM de Arginina, 75,7 3,476 1,002 pH 7 ALXN1210, 25 mM de Fosfato, 25 mM de L-Arginina, pH 7, Tampão de Sacarose a 0 1,250 1,028 7% ALXN1210, 25 mM de Fosfato, 25 mM de L-Arginina, pH 7, Sacarose a 7% (SPPD- 93,6 4,109 1,056 14-0042-Formulação C com pico de L- arginina) ALXN1210, 25 mM de Fosfato, 25 mM de 1,153 1,016 L-Arginina, pH 7, Tampão de Sorbitol a 4%
ALXN1210, 25 mM de Fosfato, 25 mM de L-Arginina, pH 7, Sorbitol a 4% (SPPD-14- 80,0 2,877 1,038 0042-Formulação C com pico de L- arginina)
[0260] Conforme mostrado na Tabela 5, a adição de L-arginina à base aumentou significativamente o pH da amostra. A L-arginina QS com fosfato de sódio monobásico em pico em uma amostra aumentou o pH em 1 unidade de pH. A L-arginina HCl em pico em uma amostra reduziu o pH em cerca de 0,25 unidades de pH. No entanto, o aspecto diminuiu em opalescência do pico de L-arginina HCl para pico monobásico de L-arginina QS fosfato de sódio para pico de base de L-arginina. Tabela 5: Tampões de L-arginina para pH de Pico de 25 mM de L-Arginina e Efeitos do Aspecto para ALXN1210 Descrição da amostra pH Aspecto Solução de base de 0,5 M de L-Arginina 11,47 1210-PD-14-0042-Formulação C 7,04 SPPD-14-0042-Formulação C com pico de 25 mM 8,85 de L-Arginina 0,5M de Solução Monobásica de Fosfato de Sódio 4,23 0,5M de Solução Dibásica de Fosfato de Sódio 8,94 0,5M de Base de L-Arginina, QS com 0,5M de 8,31 Solução Monobásica de Fosfato de Sódio SPPD-14-0042-Formulação C com 25nM de Solução Monobásica de Fosfato de Sódio QS com 7,38 pico de L-Arginina 0,5M de L-Arginina HCl 5,48 25 mM de Fosfato de Sódio, Sacarose a 7%, pH 7, 6,79 pico de 25mM de L-Arginina HCl 25 mM de Fosfato de Sódio, Sorbitol a 4%, pH 7, 6,81 pico de 25mM de L-Arginina HCl 1210-75-25P-7,0-5S a Granel (SPAS-14-007), pico 7,07 Muito opalescente de 25 mM de L-arginina HCl 1210-75-25P-7,0-3So a Granel (SPAS-14-007), 25 Moderadamente 7,55 mM de L-Arginina QS Fosfato de Sódio Monobásico opalescente 1210-75-25P-7,0-3So a Granel (SPAS-14-007), Ligeiramente 9,17 25mM de Base de L-arginina opalescente
3. Estabilidade da Duração
[0261] As Figuras 6-21 mostram os resultados para o estudo de estabilidade inicial. Esses resultados mostram que as formulações de histidina são as menos estáveis e as formulações de fosfato são mais estáveis após 2 meses a 2-8°C, 23- 27°C e 37°C. Além disso, conforme evidenciado pela cromatografia de exclusão por tamanho, nas formulações de fosfato, o sorbitol e a sacarose foram comparáveis após 2 meses a 2-8°C e 23-27°C. No entanto, o sorbitol foi ligeiramente mais estável a 37° C em comparação com a sacarose após 2 meses. Os resultados do espalhamento dinâmico de luz não mostraram alterações significativas nas amostras de fosfato com 25 mM de L-arginina após 2 meses a 2-8°C com a adição de sacarose ou sorbitol. Os resultados do espalhamento dinâmico de luz para as amostras de histidina em T=2 meses não puderam ser sobrepostos devido à alta polidispersividade entre as aquisições, indicando uma formulação menos estável sobre as formulações de fosfato. Os resultados do ciclo de congelamento e descongelamento de 5 dias não mostraram nenhuma alteração significativa entre T=0 e os ciclos de congelamento e descongelamento de 5 dias.
4. Formulação de Protótipo
[0262] As Figuras 22-46 mostram os resultados para o estudo de estabilidade do protótipo.
[0263] Estes resultados mostram que todas as formulações de fosfato a 75 mg/mL e 100 mg/mL (substância ativa a granel (BDS) e produto da droga (DP)) são estáveis ao longo do estudo de estabilidade a 2-8°C, -20°C e -80°C. Todas as formulações de 100 mg/mL de substância ativa a granel após 5 ciclos de congelamento e descongelamento a -20°C e -80°C foram estáveis e não apresentaram alterações significativas.
5. Conclusões Provisória Antes dos Testes de Degradação em Curto Prazo
[0264] Com base nos resultados desses estudos, foi determinada a formulação ideal para o material de alta concentração ALXN1210. Os experimentos preliminares sugeriram a adição de L-Arginina para reduzir o aspecto opalescente do ALXN1210 a
100 mg/mL. O estudo de estabilidade inicial resultou na seleção da formulação principal do tampão fosfato com L-Arginina a > 50 mg/mL. Os resultados do estudo de estabilidade do protótipo determinaram que a formulação ideal inicial para ALXN1210 era 50 mM de tampão fosfato, Sacarose a 5%, 25 mM de Arginina, pH 7,4 a 100 mg/mL.
6. Desenvolvimento de Formulação Ideal Final
[0265] A adequabilidade da formulação ideal inicial (100 mg/mL de ALXN1210 em um tampão da formulação (50 mM de Fosfato de Sódio, 25 mM de Arginina e 5% de Sacarose, em pH 7,4)) estava sujeita a estudos de degradação de curto prazo para avaliar se o polissorbato 80 (PS80) ou outro surfactante era necessário para impedir a degradação. As duas marcas de PS 80 foram 0,05% (p/v) de POLYSORBATE 80 (HX2)™ da NOF America Corporation que foi relatado como sendo composto de >99% de ácido oleico puro e polissorbato 80 AVANTOR™ 4117, J.T. Baker® é um surfactante amplamente usado que consiste em uma mistura de ácidos graxos incluindo ácido oleico e ácido palmítico. Os dois produtos são frequentemente denominados TWEEN 80® e são um surfactante não-iônico derivado de um sorbitano polietoxilado e ácido oleico com grupos hidrofílicos derivados de polímeros de óxido de etileno.
[0266] Os métodos de teste usados para a avaliação para o uso potencial de PS80 J.T. baker avantor 4117 em 100 mg/mL da formulação de ALXN1210 são listados na Tabela 6 abaixo. Consulte o método de teste individual para obter mais detalhes e a descrição do método. Tabela 6: Métodos de Teste para Uso Potencial de PS80 J.T. Baker Avantor 4117 Teste Tipo de Ensaio Objetivo e Base Lógica Característica Uma mudança no aspecto pode indicar Aspecto Geral degradação do produto. Resultados alterados da concentração Concentração Concentração proteica poderiam indicar mudanças na Proteica Proteica solubilidade ou estabilidade do produto. Característica O aumento na turbidez poderia indicar Turbidez (UV-vis) Geral mudanças na solubilidade ou estabilidade do produto.
Assegurar que a amostra permaneça SE UPLC Pureza intacta e atenda aos requisitos de pureza. Quantificar mudanças no número de partículas subvisíveis na solução. Um HIAC de pequeno Característica aumento nas partículas subvisíveis pode volume Geral indicar mudanças físicas no perfil do produto que podem ter impacto na segurança. Uma alteração no padrão de CE-SDS pode indicar degradação do produto, tal CE-SDS Pureza como clivagem de cadeia(s) de polipeptídeo ou agregação do produto.
Um resultado falho pode indicar iCE Identidade degradação proteica com a formação de isoformas não características. Espalhamento Estimar a extensão da agregação / Dinâmico de Luz Estabilidade degradação. (DLS) Quantificar a concentração de polissorbato 80 na formulação. Uma Teor de Característica diminuição na concentração de Polissorbato 80 Geral polissorbato 80 pode resultar na agregação do anticorpo. Quantificar a quantidade de degradação de polissorbato 80 na formulação. Um Degradação de Característica aumento na degradação de polissorbato Polissorbato 80 Geral 80 poderia resultar na agregação do anticorpo.
[0267] Frascos contendo 100 mg/mL de ALXN1210 com PS 80 J.T. Baker avantor 4117 ou PS80 HX2 NOF foram visualmente inspecionados. Todas as amostras não apresentaram nenhuma partícula visível nem mudanças de cor distintas em todas as amostras expostas ao armazenamento de degradação a 45°C e agitação adicional por 5 dias em 2-8°C.Os resultados são mostrados na Tabela 7. Tabela 7. Inspeção visual de 100 mg/mL de ALXN1210 em frascos de 5 cm3 contendo J.T. Baker avantor 4117 PS80 ou HX2 NOF PS80 ID da Amostra Clareza Cor Partículas Partículas Intermediárias Finais 100 mg/mL de ALXN1210 + Transparente Ligeiramente Praticamente Praticamente Avantor T=0 amarelado sem partículas sem partículas 100mg/mL de ALXN1210 + Transparente Ligeiramente Praticamente Praticamente NOF T=0 amarelado sem partículas sem partículas 100mg/mL de ALXN1210 + Transparente Ligeiramente Praticamente Praticamente Avantor T=7 dias a 45°C amarelado sem partículas sem partículas 100mg/mL de ALXN1210 + Transparente Ligeiramente Praticamente Praticamente NOF T=7 dias a 45°C amarelado sem partículas sem partículas 100mg/mL de ALXN1210 Transparente Ligeiramente Praticamente Praticamente Avantor T = 7 dias a 45°C + 5 amarelado sem partículas sem dias de agitação a 2-8°C partículas 100mg/mL de ALXN1210 NOF Transparente Ligeiramente Praticamente Praticamente T=7 dias a 45°C + 5 dias de amarelado sem partículas sem agitação a 2-8°C partículas 100mg/mL de ALXN1210 Transparente Ligeiramente Praticamente Praticamente Avantor T=4 dias a 45°C amarelado sem partículas sem partículas 100mg/mL de ALXN1210 + Transparente Ligeiramente Praticamente Praticamente NOF T = 14 dias a 45°C amarelado sem partículas sem partículas 100mg/mL de ALXN1210 Transparente Ligeiramente Praticamente Praticamente Avantor T=14 dias a 45°C + 5 amarelado sem partículas sem dias de agitação a 2-8°C partículas 100mg/mL de ALXN1210 NOF Transparente Ligeiramente Praticamente Praticamente T=14 dias a 45°C + 5 dias de amarelado sem partículas sem agitação@ 5°C partículas
[0268] A concentração de ALXN1210 mg/mL mostra uma pequema diminuição causada pela condição de degradação. Consulte a Tabela 8 para saber todas as medidas de concentração.
[0269] As formulações de 100 mg/mL de ALXN1210 contendo 0,05% de PS 80 Avantor ou PS80 HX2 NOF não tiveram nenhuma mudança significativa quando expostas à mesma condição de degradação mostrada na figura 2.
Tabela 8: Medidas da Concentração ID da Amostra Conc. ID da Amostra Concen. (mg/mL) (mg/mL) 100 mg/mL de ALXN1210 + 100mg/mL de ALXN1210 + 98,6 100,5 Avantor T=0 NOF T=0 100mg/mL de ALXN1210 + 100mg/mL de ALXN1210 + 88,9 91,3 Avantor T=7 dias a 45°C NOF T=7 dias a 45°C 100mg/mL de ALXN1210 100mg/mL de ALXN1210 Avantor T = 7 dias a 45°C + 5 97,1 NOF T=7 dias a 45°C + 5 98,2 dias de agitação a 2-8°C dias de agitação a 2-8°C 100mg/mL de ALXN1210 100mg/mL de ALXN1210 + 98,4 96,5 Avantor T=4 dias a 45°C NOF T = 14 dias a 45°C 100mg/mL de ALXN1210 100mg/mL de ALXN1210 Avantor T=14 dias a 45°C + 5 98,5 NOF T=14 dias a 45°C + 5 96,9 dias de agitação a 2-8°C dias de agitação@ 5°C
[0270] Como mostrado na Tabela 8, as formulações de 100 mg/mL de ALXN1210 contendo 0,05% de PS 80 Avantor ou PS80 HX2 NOF não tiveram nenhuma mudança significativa quando expostas à mesma condição de degradação. A concentração permaneceu comparável entre formulações de 100 mg/mL de ALXN1210 contendo 0,05% de PS80 Avantor ou PS80 HX2 NOF.
[0271] A turbidez foi medida pelo monitoramento da absorbância a 650 nm. As medições são mostradas na Tabela 9.
[0272] As formulações de 100 mg/mL de ALXN1210 contendo 0,05% de PS80 Avantor ou 0,05% de PS80 HX2 NOF não tiveram nenhuma mudança de turbidez significativa. A turbidez permanece estável em todos os pontos do tempo e condições de degradação neste estudo Tabela 9: Turbidez Medida pelo Monitoramento da Abs a 650 nm ID da Amostra Abs ID da Amostra Abs (650 nm) (650 nm) 100 mg/mL de ALXN1210 + 100mg/mL de ALXN1210 + 5,02E-03 -9,28E-04 Avantor T=0 NOF T=0 100mg/mL de ALXN1210 + 100mg/mL de ALXN1210 + 9,10E-04 7,31E-03 Avantor T=7 dias a 45°C NOF T=7 dias a 45°C 100mg/mL de ALXN1210 100mg/mL de ALXN1210 -6,80E-04 4,02E-04 Avantor T = 7 dias a 45°C + NOF T=7 dias a 45°C + 5 dias
5 dias de agitação a 2-8°C de agitação a 2-8°C 100mg/mL de ALXN1210 100mg/mL de ALXN1210 + -1,21E-03 1,12E-03 Avantor T=4 dias a 45°C NOF T = 14 dias a 45°C 100mg/mL de ALXN1210 100mg/mL de ALXN1210 Avantor T=14 dias a 45°C + 6,82E-04 NOF T=14 dias a 45°C + 5 2,12E-03 5 dias de agitação a 2-8°C dias de agitação@ 5°C
[0273] Foi observada uma diminuição na porcentagem do monômero para amostras incubadas a 45°C por 7 dias ou 14 dias mais agitação adicional (200RPM) a 2-8°C conforme esperado devido às condições de degradação. No entanto, a porcentagem do monômero não apresentou nenhuma diferença substancial entre formulações de 100 mg/mL de ALXN1210 contendo 0,05% de PS80 Avantor ou 0,05% de PS80 HX2 NOF quando expostas ao mesmo ponto do tempo e condição.
[0274] Os dados da porcentagem de monômero são mostrados na Tabela 10. A Figura 4 mostra a diminuição da % de monômero conforme esperado após as condições de degradação e nenhuma diferença significativa entre formulações de 100 mg/mL de ALXN1210 contendo 0,05% de PS80 Avantor ou 0,05% de PS80 HX2 NOF quando expostas ao mesmo ponto do tempo e condição. Tabela 10: Amostras da Porcentagem de Monômero Incubadas a 45°C por 7 dias ou 14 dias Mais Agitação Adicional (200RPM) a 2-8°C ID da Amostra % de ID da Amostra % de Monômero Monômero 100 mg/mL de ALXN1210 + 100mg/mL de ALXN1210 + 98,2 98,2 Avantor T=0 NOF T=0 100mg/mL de ALXN1210 + 100mg/mL de ALXN1210 + 93,0 93,0 Avantor T=7 dias a 45°C NOF T=7 dias a 45°C 100mg/mL de ALXN1210 100mg/mL de ALXN1210 Avantor T = 7 dias a 45°C + 92,8 NOF T=7 dias a 45°C + 5 92,9 5 dias de agitação a 2-8°C dias de agitação a 2-8°C 100mg/mL de ALXN1210 100mg/mL de ALXN1210 + 88,1 88,0 Avantor T=4 dias a 45°C NOF T = 14 dias a 45°C 100mg/mL de ALXN1210 100mg/mL de ALXN1210 Avantor T=14 dias a 45°C + 85,3 NOF T=14 dias a 45°C + 5 87,7 5 dias de agitação a 2-8°C dias de agitação@ 5°C
[0275] Foi detectada uma mudança para espécies ácidas por foco isoelétrico após incubação de ALXN1210 com 0,05% de Polissorbato 80 J.T. Baker Avantor ou 0,05% de Polissorbato 80 HX2 NOF a 45°C por 7 dias e 14 dias, conforme mostrado na Tabela 11. A agitação adicional das amostras não teve impacto significativo em outras mudanças do principal pico para espécies ácidas. Tabela 11: Foco Isoelétrico por CE-SDS ID da Amostra pI % da Área % da Área % da Área Principal Principal Ácida Básica Avantor-T0 6,2 64,2 23,4 12,4 NOF-T0 6,2 65,0 21,4 13,6 Avantor-7d 6,2 38,9 52,2 8,9 NOF-7D+5D 6,2 41,7 50,4 8,0 Avantor-7d+5d/s 6,2 41,6 49,2 9,2 NOF-7d+5d/s 6,2 42,3 48,7 9,1 T=14D_Avantor_45C 6,2 21,4 74,8 3,8 T=14D_NOF_45C 6,2 18,1 79,0 2,9 T=14D_Avantor_45C+5d/s 6,2 19,3 75,8 4,9 T=14D_NOF_45C+5d/s 6,2 19,3 77,8 2,9
[0276] Um teste de estresse por agitação foi realizado na formulação ideal inicial, uma formulação tampão de 100 mg/mL de ALXN1210 contendo 50 mM de Fosfato de Sódio, 25 mM de Arginina e 5% de sacarose, em pH 7,4 na presença e ausência de duas marcas de PS 80 incluído em uma concentração de 0,05%. A formação de partículas subvisíveis foi usada para avaliar a degradação. As amostras foram agitadas a 200 rpm em uma temperatura entre 2-8°C. Os pontos do tempo para medir se houve formação de partícula subvisível foram 0, 1, 3 e 5 dias. Os resultados mostrados na Tabela 12 indicam que a adição de 0,05% de PS80 à formulação reduz bastante a formação de partículas subvisíveis quando a formuação de alta concentração é submetida a estresse de curto prazo, tal como agitação a 200 rpm.
Tabela 12: Desenvolvimento de Partícula Subvisível Reduzido pela Adição de PS80 e Filtração Conc. Contagem Contagem Contage Contagem Número da de de ID da m de de Volume de Partícula Partícula Partícula Amostra Partícula Partícula Analisado Execução Total 11,5-25,5 >25,5 Total (#) 1-10,5 µm (#/mL) µm µm Não filtrado, 1 869.694 454.725 419.989 33.722 1.014 0,5229 mL Sem PS80
PÓS filtrado, 1 221.485 115.805 96.661 18.111 1.033 0,5229 mL Sem PS80 Não filtrado - 1 605.402 316.239 312.238 3.414 587 0,5224 mL PS80
NOF
PÓS filtrado, 1 199 104 101 2 1 0,5321 mL PS80
NOF
PÓS filtrado, 1 185 97 95 1 1 0,5231 mL PS80 4500
7. Conclusão
[0277] Na conclusão, a formulação subQ ideal para ALXN1210 a 100 mg/mL é tampão contendo 50 mM de Fosfato de Sódio, 25 mM de Arginina e 5% de sacarose e 0,05% de PS80 em pH 7,4. Exemplo 2: Estudo de Fase 1 para Avaliar Dose Única de ALXN1210 Administrado por Via Subcutânea em Comparação com Via Intravenosa em Sujeitos Saudáveis
[0278] Um estudo de fase 1 foi realizado para avaliar a segurança, tolerabilidade, eficácia farmacocinética (PK)/farmacodinâmica (PD) e imunogenicidade do anticorpo BNJ441 (também conhecido como ALXN1210) administrado por via subcutânea (SC) em comparação com via intravenosa (IV) em um sujeito saudável.
1. Objetivos
[0279] Os objetivos primários deste estudo foram (1) avaliar a segurança e tolerabilidade de uma dose única de ALXN1210 administrado por via subcutânea em comparação com ALXN1210 administrado por via intravenosa em sujeitos saudáveis, conforme avaliado por achados do exame físico, medidas de sinal vital, imunogenicidade, análise laboratorial e avaliações de Eventos Adversos (AEs) e (2) determinar a biodisponibilidade absoluta de ALXN1210 administrado por via subcutânea.
[0280] Um objetivo secundário era avaliar os efeitos da PD de ALXN1210 administrado por via subcutânea em comparação com ALXN1210 administrado por via intravenosa, conforme avaliado pelo nível de C5 livre e hemólise de glóbulos vermelhos de galinha (cRBC).
2. Desenho de Estudo
[0281] O desenho de estudo geral foi conduzido conforme representado na Figura
47. Este foi um estudo de Fase 1 projetado para avaliar a segurança, tolerabilidade, PK, PD e imunogenicidade de uma dose única de 400 mg de ALXN1210 administrada por via subcutânea em comparação com uma dose única de 400 mg de ALXN1210 administrada por via intravenosa ou placebo por administrado por via subcutânea em 42 sujeitos saudáveis. Todos os sujeitos foram triados pela elegibilidade. Os sujeitos que não atenderam aos critérios de elegibilidade não foram triados novamente para participação no estudo, a menos que a condição que resultou na não elegibilidade fosse transitória, autolimitada e facilmente tratável e fosse esperado que estivesse resolvida no momento da dosagem.
[0282] Seis sujeitos foram inicialmente designados de maneira randomizada em uma razão de 2:1 para a Coorte 1a, de modo cego, para receber uma dose única de 400 mg de ALXN1210 por via subcutânea ou uma dose única de placebo por via subcutânea. As primeiras 48 horas dos dados de segurança clínicos posteriores à dose foram avaliadas para sujeitos na Coorte 1a antes de o ingresso nas Coortes 1b ou 2 começar. Em seguida, trinta e seis sujeitos foram designados de maneira randomizada, em uma razão de 2:1, para a Coorte 1b (N=24) ou Coorte 2 (N=12). Na Coorte 1b, os outros 24 sujeitos foram designados de maneira randomizada em uma razão de 5:1, de modo cego, para receber uma dose única de 400 mg de ALXN1210 por via subcutânea (20 sujeitos) ou uma dose única de placebo por via subcutânea (4 sujeitos), respectivamente. Os 12 sujeitos na Coorte 2 receberam uma dose única de 400 mg de ALXN1210 por via intravenosa de maneira aberta.
[0283] Todos os sujeitos admitidos foram incluídos nas análises, conforme apropriado. Os sujeitos nas Coortes 1a e 1b foram combinados para análises. Os sujeitos participaram do estudo por até 39 semanas, incluindo um período de triagem de até 70 dias, seguido por um período de acompanhamento de 200 dias para avaliação da segurança, PK, PD e imunogenicidade após a administração da droga do estudo.
[0284] Quarenta e dois sujeitos foram avaliados quanto aos objetivos primários e secundários neste estudo: 6 (4 receberam ALXN1210 por via subcutânea, 2 receberam placebo por via subcutânea) sujeitos na Coorte 1a; 24 (20 receberam ALXN1210 por via subcutânea, 4 receberam placebo por via subcutânea) sujeitos na Coorte 1b e 12 (ALXN1210 IV) sujeitos na Coorte 2.
3. Base Lógica
[0285] Uma dose única de 400 mg, equivalente a 4 mL, foi administrada por via subcutânea por meio de 4 injeções de 1 mL na área abdominal. Esperou-se que a administração de uma dose única de 400 mg de ALXN1210 tivesse um perfil de segurança aceitável. As doses únicas de 400 mg de ALXN1210 SC e placebo SC, administradas conforme descrito neste protocolo, foram antecipadas para fornecer dados a partir dos quais simulações de doses múltiplas pudessem ser geradas para projetar regimes de dosagem necessários para obter as concentrações séricas terapêuticas (> 50 μg/mL) em pacientes.
[0286] A randomização paralela de 36 sujeitos na Coorte 1b e Coorte 2 ocorreu com base na análise das primeiras 48 horas dos dados de segurança clínicos posteriores à dose dos 6 sujeitos na Coorte 1a. A admissão na Coorte 1b e Coorte 2 ocorreu conforme descrito na Tabela 13.
[0287] As regras de toxicidade do grupo estão dispostas a seguir. Toxicidade se refere a reações adversas relacionadas à droga significativas. "Progressão da coorte"
se refere à progressão para uma dose/regime de dosagem consecutivo alinhado com as regras de progressão da dose e requisitos de dados mínimos. "Suspensão" significa que nenhum outro IMP foi administrado no nível de dose/regime de dosagem em questão e que a progressão adicional da coorte foi suspensa. Tabela 13: Regras de Toxicidade Número Efeito sobre a Grau de de Gravidade/Seriedade Ação progressão da CTCAE Sujeitos coorte Afetados I Leve N/A Estudo Regime de continuado de ≤ 2 sujeitos dose acordo com o em SOC continuado. protocolo do diferente estudo clínico. 2 sujeitos As coortes 1b e na mesma Regime de 2 começaram, SOC ou 3 dose se já não sujeitos em continuado. tiverem
SOC iniciado. diferente A continuação do estudo (se Todos os ambas as regimes de coortes II Moderado dose pararam) suspensos necessitou de EXCETO se a alteração ≥ 3 sujeitos toxicidade substancial. na mesma fosse um A continuação SOC OU ≥ evento de da coorte 4 sujeitos tolerabilidade afetada (para em SOC local ou reação tolerabilidade diferente do local da local ou injeção/infusão, reações do caso em que local da apenas a injeção/infusão) coorte afetada necessitou de foi suspensa. alteração substancial.
Número Efeito sobre a Grau de de Gravidade/Seriedade Ação progressão da CTCAE Sujeitos coorte Afetados As coortes 1b e Regime de 2 começaram, 1 sujeito dose continua. se já não tiverem iniciado.
A continuação Todos os do estudo (se regimes de ambas as dose coortes suspensos pararam) EXCETO se a necessitou de III Grave toxicidade alteração fosse um substancial. evento de A continuação ≥ 2 sujeitos tolerabilidade da coorte local e/ou afetada (para reação do local tolerabilidade da local ou injeção/infusão, reações do caso em que local da apenas a injeção/infusão) coorte afetada necessitou de foi suspensa. alteração substancial.
IV Risco de morte A continuação Fatal do estudo Estudo ≥ 1 sujeito necessitou de V suspenso. alteração substancial.
A continuação do estudo Estudo SAE Sério ≥ 1 sujeito necessitou de suspenso. alteração substancial.
Abreviações: CTCAE = Critérios de Terminologia Comum para Eventos Adversos; SAE = evento adverso sério; SOC = Classe de Sistema de Órgãos (“System Organ Class”).
4. Esquema das Avaliações
[0288] A cronologia dos procedimentos do estudo usados estão apresentados nas Tabelas 14-15.
Tabela 14: Esquema das Avaliações: Triagem até Consulta 1 Consulta 1 Dia do Estudo Triagem Dia –1 Dia 1 Dia 2 Dia 3 Dia 5 Avaliações1 Dia –70 a Admissão Pré- 0h EOI2 15 min 30 min 2h 4h 8h 24 h 48 h 96 h Dia –2 Dia –1 dose (SOI) após após após após após
EOI EOI SOI SOI SOI Status (OP ou CRU) OP Admissão CRU CRU CRU CRU CRU CRU CRU CRU CRU CRU CRU3 Consentimento
X informado4 Imunização com
X MCV4 (Dia -56)5 Imunização com sorogrupo
X meningocócico B (Dia -56 e Dia -28)5 Anticorpo bactericida sérico (sorogrupos
X meningocócicos A, 102/154 CW135 e Y) Histórico médico e
X demografia Exame físico X X X Altura, peso e IMC X Teste
X QuantiFERON®-TB Química X X X X Hematologia X X X X Coagulação X X X X Triagem de hepatite
X BeC Triagem de HIV,
X tipos I e II Atividade do
X complemento6 CH507 X Teste de gravidez
X X sérico8 Teste do bafômetro X X Urinálise e química
X X X X da urina Teste de drogas na X X
Consulta 1 Dia do Estudo Triagem Dia –1 Dia 1 Dia 2 Dia 3 Dia 5 Avaliações1 Dia –70 a Admissão Pré- 0h EOI2 15 min 30 min 2h 4h 8h 24 h 48 h 96 h Dia –2 Dia –1 dose (SOI) após após após após após
EOI EOI SOI SOI SOI Status (OP ou CRU) OP Admissão CRU CRU CRU CRU CRU CRU CRU CRU CRU CRU CRU3 urina Medições dos sinais X X X9 X X9 X9 X9 X9 X X X vitais 10
ECG X X X X X X Telemetria X X (X) (X) (X) (X) cardíaca11 Randomização X Administração da
X droga do estudo Amostras de PK X X X X X X X X X Painel de PD (C5 sérico, hemólise de X X X X X X X X X X 103/154 cRBC) Avaliação do local
X X X X X X X da infusão12 Imunogenicidade
X (ADA) Análise dos riscos de segurança
X X X potenciais de ALXN121013 Medicamentos ←Monitorar continuamente (após ICF ter sido sinalizado na triagem)→ concomitantes Eventos adversos14 ←Monitorar continuamente (após ICF ter sido sinalizado na triagem)→ Tratamento ←Profilaxia antibiótica→ profilático antibiótico15 1As janelas permitidas para avaliações do estudo são descritas no manual de operações do estudo. 2O final da infusão (EOI) foi aproximadamente 15 minutos após o início da infusão (SOI). 3Sujeito foi liberado da unidade de pesquisa clínica após concluir todas as avaliações do Dia 5. Os sujeitos receberam um "cartão de identificação do Participante do Estudo" com informações para o Prestador dos Serviços de Saúde e participante sobre sintomas da infecção por meningite.
4Os formulários do consentimento informado datados e assinados foram obtidos antes dos procedimentos de triagem específicos do estudo serem realizados. 5Para sujeitos que não tinham documentação adequada da imunização com MCV4 ou vacinação com sorogrupo B, a imunização com MCV4 foi realizada pelo menos 56 dias antes da primeira dose no Dia 1, e vacinação para infecções meningocócicas do sorogrupo B foi administrada pelo menos 56 dias antes da dosagem do Dia 1 com administração de reforço pelo menos 28 dias antes da dosagem no Dia 1. 6Atividade do complemento, confirmada por um ensaio adequado tal como inibição da via alternativa do complemento (CAP) ELISA/C5 (hemólise), foi realizada na triagem para confirmar que os sujeitos não tinham uma deficiência do complemento. 7A amostra retirada no Dia -1 foi armazenada para análise futura se a amostra posterior à dose indicar que o
104/154 complemento não normalizou. 8Teste de gravidez sérico para todos os sujeitos do sexo feminino para confirmar que não há gravidez do sujeito do sexo feminino. 9No Dia 1, as medições do sinal vital foram avaliadas antes da dose (15 minutos antes do SOI) e no final da infusão, 30 minutos após o final da infusão, 2 horas após o início da infusão, 4 horas após o início da infusão e 8 horas após o início da infusão. 10No Dia 1, um ECG de 12 derivações em triplicata foi realizado antes da dose e aproximadamente 15 minutos após o final da infusão.11Registro cardíaco contínuo anterior à dose durante a infusão IV (Coorte 2) e até 3 horas após a injeção SC (Coortes 1a e 1b). 12As avaliações do local da infusão ou injeção foram feitas 15 minutos a partir do início da infusão/injeção e ± 15 minutos de outros horários programados no Dia 1. Indurações ou reações < 1 cm não foram listadas como um evento adverso a menos que persistissem por mais de 24 hr.
Dor no local da infusão ou injeção foi avaliada usando uma Escala Visual
Analógica (0-10). A dor não foi avaliada pré-dose. 13 O investigador ou designado se reuniu com o sujeito em cada consulta para discutir os riscos de segurança potenciais de ALXN1210 e para tratar de quaisquer preocupações referentes à segurança por parte do sujeito. 14 A compilação de eventos adversos (AEs) e eventos adversos graves (SAEs) começou na assinatura do formulário do consentimento informado. 15Os sujeitos receberam tratamento antibiótico profilático, penicilina oral V 500 mg duas vezes ao dia (equivalente a 1 × 106 unidades), começando na noite do Dia -1, até que a atividade do complemento seja normalizada, conforme determinado pelo ensaio de CH50. Abreviações: ADA = anticorpo antidroga; IMC = índice de massa corporal; cRBC = glóbulos vermelhos de galinha; CRU = unidade de pesquisa clínica; ECG = eletrocardiograma; EOI = final da infusão/injeção; HIV = vírus da imunodeficiência
105/154 humana; ICF = formulário do consentimento informado; MCV4 = vacina conjugada meningocócica tetravalente; OP = paciente de ambulatório; SOI = início da infusão/injeção; TB = tuberculose
Tabela 15: Esquema das Avaliações: Consulta 2 a Consulta 14 Consult Consult Consult Consult Consult Consult Consult Consult Consulta Consult Consulta Consult Consult a2 a3 a4 a5 a6 a7 a8 a9 10 a 11 12 a 13 a 14 Procedimentos Dia 8 Dia 15 Dia 22 Dia 29 Dia 36 Dia 43 Dia 50 Dia 57 Dia 71 Dia 90 Dia 120 Dia 150 Dia 200 Status (OP ou CRU)
OP OP OP OP OP OP OP OP OP OP OP OP OP Exame Físico
X X X X X X Medições dos Sinais Vitais X X X X X X X X X X X X X
ECG X X Química X X X X X X X X X Hematologia 106/154
X X X X X X X X X Coagulação
X X X X X X X X X Urinálise e Química da Urina X X X X X X Teste de Gravidez Sérico X X Teste de CH50 X X1 Amostras da Farmacocinética X X X X X X X X X X X X X Painel da Farmacodinâmica (C5 sérico, X X X X X X X X X X X X X hemólise de cRBC) Imunogenicidade (ADA) X X X X X X X Análise dos riscos de segurança ß--- Discussão dos riscos de segurança potenciais de ALXN1210 --à potenciais de ALXN12102
Medicamentos ß--- Monitorar continuamente (após ICF ter sido sinalizado na triagem)--à Concomitantes Eventos adversos3 ß--- Monitorar continuamente (após ICF ter sido sinalizado na triagem)--à Tratamento4 ß--- Profilaxia antibiótica--àProfilaxia antibiótica→ Profilático Antibiótico4 1Amostras adicionais foram tomadas após o Dia 57. 2O investigador ou designado se reuniu com o sujeito em cada consulta para discutir os riscos de segurança potenciais de ALXN1210 e para tratar de quaisquer preocupações referentes à segurança por parte do sujeito. 3A compilação de eventos adversos começou na assinatura do formulário do consentimento informado.
107/154 4Os sujeitos receberam tratamento antibiótico profilático, penicilina oral V 500 mg duas vezes ao dia (equivalente a 1 × 106 unidades), até que a atividade do complemento seja normalizada, conforme determinado pelo ensaio de CH50. Abreviações: ADA = anticorpo antidroga; cRBC = glóbulos vermelhos de galinha; CRU = unidade de pesquisa clínica; ECG = eletrocardiograma; ICF = formulário do consentimento informado; OP = paciente de ambulatório
5. Seleção e Retirada de Sujeitos
[0289] Os sujeitos devem atender a todos os critérios dispostos a seguir para que sejam elegíveis para o estudo:
1. Sujeitos saudáveis, entre 25 e 55 anos, inclusive, no momento da dosagem.
2. Índice de massa corporal (IMC) de 18 a 29,9 kg/m2, inclusive, e peso entre 50 e 100 kg, inclusive.
3.Intervalo QT corrigido usando a fórmula de Fridericia (QTcF) ≤ 450 ms para homens e ≤ 470 ms para mulheres na triagem e antes da dosagem no Dia 1.
4. Disposto e capaz de fornecer consentimento informado escrito e cumprir o esquema de consulta do estudo.
5. Vacinação documentada com MCV4 pelo menos 56 dias e no máximo 3 anos antes da dosagem. Documentação deve ter incluído um título de anticorpo positivo para confirmar uma resposta imune antes da administração da droga do estudo.
6. Vacinação com vacina meningocócica do sorogrupo B pelo menos 56 dias antes da dosagem no Dia 1, com administração de reforço pelo menos 28 dias antes da dosagem no Dia 1, com pelo menos 28 dias entre a primeira e a segunda injeção.
7. Mulheres com potencial para engravidar, se heterossexualmente ativas, devem ter usado contraceptivo aceitável ou altamente eficaz, conforme definido abaixo, a partir da triagem e continuando até pelo menos 6 meses após a administração da droga do estudo. A profilaxia antibiótica foi exigida durante este estudo, a qual pode comprometer a eficácia do contraceptivo hormonal. Portanto, foi recomendado que os sujeitos que estejam usando contraceptivo hormonal usem também contraceptivo de barreira (por exemplo, camisinha ou diafragma com espermicida) durante a profilaxia antibiótica. Homens, se heterossexualmente ativos e com cônjuges ou parceiras do sexo feminino com potencial para engravidar, grávidas ou lactantes devem concordar em usar contraceptivo de barreira (camisinha masculina) durante o período de tratamento e por pelo menos 6 meses após a administração do droga do estudo. O contraceptivo de barreira foi exigido mesmo com avaliação médica documentada de sucesso cirúrgico de vasectomia. Cônjuges ou parceiras do sexo feminino de homens que tenham potencial para engravidar devem ter usado contraceptivo altamente eficaz, conforme definido abaixo, ou contraceptivo aceitável, conforme definido abaixo, partir da triagem e continuando até pelo menos 6 meses após a administração da droga do estudo. Os homens não devem ter doado esperma durante a triagem e períodos de tratamento e por pelo menos 6 meses após a administração da droga do estudo.
[0290] Os sujeitos que atenderem a qualquer um dos critérios de exclusão a seguir não estavam elegíveis para participar do estudo:
1. Sujeitos que mantiveram contato íntimo e prolongado (definido como vivendo sob o mesmo teto ou prestando cuidados pessoais) a pessoas com menos de 2 anos ou mais de 65 anos, ou que estavam imunocomprometidas ou tiveram uma das seguintes condições médicas subjacentes: asplenia anatômica ou funcional (incluindo doença falciforme); complemento congênito, deficiências de properidina, fator D ou anticorpo primário; deficiências adquiridas de complemento (por exemplo, aquelas que recebem eculizumabe); ou vírus da imunodeficiência humana (HIV).
2. Sujeitos que se enquadrem em um dos seguintes itens: profissionais que foram expostos a ambientes de maior risco para doença meningocócica; pessoal de pesquisa, industrial e laboratório clínico que foi exposto rotineiramente a N meningites; pessoal militar durante o treinamento de recrutamento (o pessoal militar pode estar exposto a maior risco de infecção meningocócica quando acomodado em locais próximos); trabalhadores de creches; aqueles que vivem em campus de faculdade ou universidade; e aqueles que planejaram viajar durante o estudo para ou que tenham viajado para áreas endêmicas de meningite meningocócica (por exemplo, Índia, África Subsaariana, peregrinação à Arábia Saudita por Hajj) dentro de 6 meses antes da dosagem
3. Histórico de infecção por Neisseria
4. Histórico de infecção recorrente e inexplicada ou infecção que necessite de tratamento com antibióticos sistêmicos no período de 90 dias antes da dosagem.
5. Infecção por HIV (comprovada pelo título do anticorpo de HIV-1 ou HIV- 2).
6. Infecção pelo vírus da hepatite B (HBV) aguda ou crônica. Teste de antígeno de superfície para hepatite B (HBsAg) foi requerido para todos os sujeitos antes do ingresso. Os sujeitos com HBsAg positivo não participaram. Para os sujeitos com HBsAg negativo, o seguinte algoritmo de teste foi requerido: Se o anticorpo nuclear da hepatite B (HBcAb) tiver sido negativo, o sujeito foi elegível para participar. Se HBcAb fosse positivo, seria testado o anticorpo de superfície para hepatite B (HBsAb). Se HBcAb e HBsAb fossem positivos, o sujeito seria elegível para participação. Se HBcAb fosse positivo e HBsAb fosse negativo, o sujeito não participaria.
7. Infecção pelo vírus da hepatite C (HCV) aguda ou crônica (comprovada pelo título do anticorpo).
8. Infecção viral ou fúngica sistêmica ativa no período de 14 dias antes da dosagem.
9. Teste QuantiFERON®-TB positivo ou indeterminado indicando possível infecção por tuberculose (TB).
10. Histórico de TB latente ou ativa ou exposição a áreas endêmicas 8 semanas antes da consulta da triagem.
11. Mulheres lactantes ou que estavam heterossexualmente ativas e não dispostas a praticar contracepção e que não estejam na pós-
menopausa. Pós-menopausa foi definida como amenorreia ≥ 12 meses consecutivos sem outra causa e um nível do hormônio folículo estimulante sérico ≥ 40 mIU/mL e concentração de estradiol ≤ 110 pmol/L no período de 6 meses antes da administração da droga do estudo.
12. Teste de gravidez sérico positivo na triagem ou no Dia -1.
13. Creatinina sérica maior que o limite superior do normal (ULN) do intervalo de referência do laboratório do teste na triagem ou no Dia –1.
14. Alanina aminotransferase (ALT) ou aspartato aminotransferase (AST) > ULN do intervalo de referência do laboratório de teste na triagem ou > 1,5 × ULN do intervalo de referência do laboratório de teste no Dia –
1.
15. Qualquer um dos resultados hematológicos a seguir: hemoglobina < 130 g/L para homens e < 115 g/L para mulheres, hematócrito < 0,37 L/L para homens e < 0,33 para mulheres, contagem de leucócitos < 3,0 × 103/μL, contagem absoluta de neutrófilo < 2,0 × 10 3/μL e contagem de plaquetas < 150 ou > 400 × 103/μL na triagem ou no Dia –1. Resultados laboratoriais clínicos do hemograma completo (CBC) que são considerados clinicamente relevantes e inaceit[aveis pelo investigador no Dia –1.
16. Histórico de deficiência do complemento ou atividade do complemento inferior ao intervalo de referência normal, conforme avaliado por CAP ELISA na triagem.
17. Histórico de malignidade com exceção de um câncer de pele não melanoma ou carcinoma in situ do colo do útero que tenha sido tratado sem evidência de reincidência.
18. Participação em um estudo clínico 30 dias antes do início da dosagem no Dia 1 ou uso de qualquer terapia de molécula pequena experimental 30 dias antes da dosagem no Dia 1.
19. Participação em mais de um estudo clínico de mAb ou participação em um estudo clínico de mAb 12 meses antes da triagem, durante o qual o sujeito tenha sido exposto à droga do estudo ativa. Os sujeitos que participaram de apenas um estudo de mAb poderiam ter sido considerados para admissão se eles concluíram esse estudo mais de 12 meses antes da triagem.
20. Antes da exposição ao ALXN1210.
21. Cirurgia de grande porte ou hospitalização 90 dias antes da dosagem.
22. Histórico de alergia aos excipientes do ALXN1210 (por exemplo, polissorbato 80).
23. Histórico de alergia à penicilina ou cefalosporina documentado.
24. Histórico de reação alérgica significativa (por exemplo, anafilaxia ou angioedema) a qualquer produto (alimentos, artigos farmacêuticos, etc.).
25. Fume atualmente > 10 cigarros diariamente (ex-fumantes estão autorizados a se inscrever a critério do investigador).
26. Histórico de abuso de drogas ilícitas, histórico de abuso de álcool significativo 1 ano antes da consulta de triagem ou uso regular de álcool 6 meses antes da consulta de triagem (mais de 14 unidades de álcool por semana [1 unidade = 150 mL de vinho, 360 mL de cerveja ou 45 mL de bebida com 40% de teor alcoólico]).
27. Teste toxicológico de urina positivo na triagem ou no Dia –1.
28. Consumo de álcool 48 horas antes da administração da droga do estudo ou teste do bafômetro positivo no Dia –1.
29. Doação de plasma 7 dias antes da dosagem. Doação ou perda (excluindo volume retirado na triagem) de mais de 50 mL de sangue 30 dias antes da dosagem ou mais de 499 mL de sangue 56 dias antes da dosagem.
30. Histórico de uso contínuo de esteroide tópico, inalado ou sistêmico > 28 dias ou histórico de qualquer terapia imunossupressora tópica 90 dias antes da administração da droga do estudo.
31. Uso de medicamentos com prescrição (excluindo contraceptivos orais) 14 dias antes da administração do estudo da droga, salvo com aprovação prévia do patrocinador.
32. Uso regular de medicamentos sem prescrição, de venda livre, inclusive remédios fitoterápicos e suplementos, 14 dias antes da administração da droga do estudo. Multivitamínicos, acetaminofeno ≤ 2 g ao dia e produtos dermatológicos tópicos sem absorção sistêmica significativa são permitidos.
33. Diagnóstico clínico de qualquer doença autoimune ou reumatológica (por exemplo, lúpus eritematoso sistêmico, artrite reumatoide).
34. Imunização com vacina viva atenuada 28 dias antes da dosagem ou vacinação planejada durante o estudo (exceto vacinação planejada pelo protocolo do estudo). Imunização com vacina da influenza inativa ou recombinante foi permitida.
35. Presença de febre (temperatura corporal confirmada > 37,6°C) (por exemplo, febre associada a uma infecção viral ou bacteriana sintomática) 14 dias antes da dosagem.
36. Sujeitos com qualquer histórico médico, condições ou riscos que, na opinião do investigador, poderiam ter interferido na participação total do sujeito no estudo ou conformidade com o protocolo ou que poderiam ter apresentado risco adicional para o sujeito confundido a avaliação do sujeito ou o resultado do estudo. Infecção
[0291] Para mitigar o risco de infecção associado à inibição do complemento terminal, os sujeitos neste estudo receberam o disposto a seguir:
1. Uma vacinação com MCV4 pelo menos 56 dias antes da dosagem de ALXN1210 no Day 1 (se não tiver sido vacinado com MCV4 nos últimos 3 anos, ou se os sujeitos tiverem sido vacinados anteriormente, mas não tiverem documentação adequada para verificar a vacinação prévia).
2. Duas injeções da vacina meningocócica do sorogrupo B. A primeira injeção deve ser administrada pelo menos 56 dias antes da dosagem no Dia 1, com administração de reforço pelo menos 28 dias antes da dosagem no Dia 1, com pelo menos 28 dias entre a primeira e a segunda injeção.
3. Tratamento antibiótico profilático, penicilina oral V 500 mg duas vezes ao dia (equivalente a 1 × 106 unidades), até que a atividade do complemento seja normalizada (conforme determinado pelo ensaio de CH50).
[0292] A primeira dose é administrada por via oral no Dia –1 à noite, antes do Dia 1 (administração da dose) da droga do estudo. Para a parte dos pacientes de ambulatório do estudo, os sujeitos foram instruídos a tomar o antibiótico aproximadamente nos mesmos horários (duas vezes ao dia) em cada dia programado. Um sistema adequado (tal como mensagem de texto) foi usado para monitoramento diário do cumprimento do regime de profilaxia antibiótica pelo sujeito.
[0293] As observações a seguir respaldar a administração da profilaxia antibiótica no estudo de dose única:
1. Penicilina foi a droga escolhida na erradicação de N meningitidis em portadores.
2. Pacientes com deficiência de complemento que receberam injeções mensais com penicilina G benzatina como profilaxia para doença meningocócica recorrente durante um período de 2 a 4 anos apresentaram menos episódios de infecção por Neisseria do que indivíduos com deficiente que não receberam profilaxia (Figueroa JE,et al., Clin. Microbiol. Rev. Jul 1991;4(3):359-95).
3. Altos níveis de resistência à penicilina causados por β-lactamases codificadas por plasmídeos foram raramente encontrados em cepas meningocócicas (Yazdankhah SP, et al.J. Med. Microbiol. Set 2004;53(Pt 9):821-32).
4. A profilaxia com 500 mg de penicilina V administrada por via oral duas vezes ao dia foi fornecida no tratamento de pacientes PNH e aHUS com eculizumabe por alguns médicos (Kelly RJ, et al., Blood 23 de Junho de 2011;117(25):6786-92 e Leeds Teaching Hospitals NHS Trust, Kings College Hospital NHS Foundation Trust. National Specialised Commissioning Team (NSCT) Service Specification Paroxysmal Nocturnal Haemoglobinuria (PNH). 2013).
5. Incerteza em torno da eficácia das vacinas em pacientes imunocomprometidos levou vários países, como a França, a recomendar profilaxia antibiótica contínua durante o tratamento com eculizumabe em pacientes PNH e aHUS (Zuber J, Fakhouri F, Roumenina LT, Loirat C, Fremeaux-Bacchi V. Use of eculizumab for atypical haemolytic uraemic syndrome and C3 glomerulopathies. Nat.Rev.Nephrol. Nov 2012;8(11):643-57).
7. Medicamentos Anteriores e Concomitantes e Procedimentos
[0294] Os medicamentos anteriores (qualquer droga ou substância tomada pelo sujeito 14 dias antes do momento em que o sujeito assinar o ICF até a administração da droga do estudo) e medicamentos concomitantes (qualquer droga ou substância tomada pelo sujeito após a administração da droga do estudo até a conclusão da última consulta do estudo) foram registrados no formulário de relato de caso eletrônico (eCRF). Procedimentos anteriores (qualquer intervenção terapêutica [por exemplo, cirurgia/biópsia, terapia física] realizados 14 dias antes do momento em que o sujeito assinar o consentimento informado até a administração da droga do estudo) e procedimentos concomitantes (qualquer intervenção terapêutica [por exemplo, cirurgia/biópsia, terapia física] realizados após administração da droga do estudo até a conclusão da última consulta do estudo) foram registrados no eCRF do sujeito.
[0295] Uma terapia concomitante era qualquer droga ou substância administrada a partir do momento em que o sujeito foi triado para o estudo até a conclusão da última consulta do estudo. Durante o estudo, os sujeitos foram instruídos a não iniciar nenhum medicamento novo, inclusive drogas sem prescrição e preparações de ervas, a menos que eles tenham recebido permissão do investigador. O uso ocasional de antipirético ou analgésico de venda livre (por exemplo, acetaminofeno) foi permitido durante o estudo.
[0296] Um procedimento concomitante era qualquer intervenção terapêutica (por exemplo, cirurgia/biópsia, terapia física) ou avaliação diagnóstica não relacionada ao estudo (por exemplo, medição de gás no sangue, culturas bacterianas) realizada a partir do momento em que o sujeito assinar o consentimento informado até a última consulta do estudo. Os procedimentos concomitantes não foram permitidos, salvo se medicamente indicados.
8. Randomização e Mascaramento
[0297] Foram atribuídos números para admissão e randomização aos sujeitos elegíveis que atendem aos critérios de inclusão e exclusão.
[0298] Este foi um estudo parcialmente cego de modo que: • Coorte 1a. Dosagem (uma dose única de 400 mg de ALXN1210 SC ou placebo SC) foi duplo-cega. Os sujeitos na Coorte 1a foram designados randomicamente em uma razão de 2:1 (4 ALXN1210 SC, 2 placebo SC; N = 6). • Coorte 1b. Dosagem (uma dose única de 400 mg de ALXN1210 SC ou placebo SC) foi duplo-cega. Os sujeitos na Coorte 1b foram designados randomicamente em uma razão de 5:1 (20 ALXN1210 SC, 4 placebo SC; N = 24). • Coorte 2. Dosagem (uma dose única de 400 mg de ALXN1210 IV) foi aberta (N = 12).
[0299] Durante a dosagem da Coorte 2, ambos os sujeitos e equipe médica/enfermagem interna sabiam a droga/dose que estavam sendo administradas.
[0300] Durante a dosagem das Coortes 1a e 1b, os sujeitos e equipe médica/de enfermagem no centro de estudo foi mascarada quanto à designação da droga do estudo. A equipe farmacêutica que está preparando as injeções SC não foi mascarada, nem os administradores da droga do estudo, enquanto todas as outras equipes do centro de estudo envolvidas nas avaliações de segurança continuaram mascaradas quanto à designação da droga do estudo. A equipe do patrocinador não foi mascarada, conforme necessário (por exemplo, monitorar se as injeções SC estavam sendo preparadas apropriadamente, determinar a reportabilidade dos SAEs) e se abster de compartilhar quaisquer informações sobre a designação da droga do estudo com a equipe do centro de estudo.
9. Descrição da Droga do Estudo
[0301] O produto sob pesquisa está descrito na Tabela 16. Tabela 16: Produto sob Pesquisa Produto sob Pesquisa Nome do Produto ALXN1210 IV ALXN1210 SC Placebo SC Forma de Solução estéril Solução estéril Solução estéril para Dosagem para infusão para injeção injeção 2 Dose Unitária 150 mg/frasco1 100 mg/frasco NA Via de Intravenosa Injeção Injeção subcutânea Administração subcutânea Descrição Física Solução estéril, Solução estéril, 0,9% de cloreto de sem conservante sem conservante sódio para injeção Ph Eur ou BP, solução estéril, sem conservante Fabricante Alexion Alexion Solução salina Pharmaceuticals, Pharmaceuticals, comercializada no Inc. Inc. RU Erro! Fonte de referência não encontrada.Cada frasco do produto da droga ALXN1210 IV incluiu um overfill nominal para assegurar que 15 mL (150 mg de ALXN1210) possam ser retirados para administração. Erro! Fonte de referência não encontrada.Cada frasco do produto da droga ALXN1210 SC incluiu um overfill nominal para assegurar que 1 mL (100 mg de ALXN1210) possa ser retirado para administração. Abreviações: BP = Farmacopeia Britânica; IV = intravenosa; NA = não aplicável; Ph Eur = Farmacopeia Europeia; SC = subcutânea
10. ALXN1210 e Placebo
[0302] Cada frasco de ALXN1210 SC continha 100 mg de ALXN1210 (100 mg/mL) em 50 mM de fosfato de sódio, 25 mM de arginina, 5% de sacarose e 0,05% de polissorbato 80. ALXN1210 SC é formulado em pH 7,4 e foi fornecido como 100 mg/mL de solução aquosa, totalmente formulada, estéril, sem conservante de
ALXN1210 fornecida em frascos de uso único de 2 mL. Cada frasco de ALXN1210 SC incluiu um overfill nominal para assegurar que 1 mL (100 mg de ALXN1210) possa ter sido retirado para administração.
[0303] Cada dose do placebo SC continha injeção com 0,9% de cloreto de sodio, Ph Eur ou BP para o mesmo volume especificado para as Coortes 1a e 1b.
[0304] Cada frasco de ALXN1210 IV continha 150 mg de ALXN1210 SC em 10 mM de fosfato de sódio, 150 mM de cloreto de sódio, 0,02% de polissorbato 80 e água para injeção. ALXN1210 IV foi formulado em pH 7,0 e foi fornecido como 10 mg/mL de solução aquosa, totalmente formulada, estéril, sem conservante de ALXN1210 fornecida em frascos de uso único de 20 mL. ALXN1210 IV foi diluído na injeção com 0,9% de cloreto de sódio, Ph Eur ou BP e foi administrado por infusão IV em uma vazão máxima de 333 mL/hr, excluindo interrupção para por motivos de segurança e técnicos.
[0305] Os frascos de ALXN1210 foram armazenados em condições de refrigeração a 2°C a 8°C (36°F a 46°F) e ficaram protegidos da luz. Os frascos de ALXN1210 não foram congelados nem agitados.
[0306] ALXN1210 SC e placebo SC foram preparados de maneira cega em uma seringa para administração SC. Não houve nenhuma diluição de ALXN1210 SC ou placebo SC. ALXN1210 SC e placebo SC foram colocados diretamente na seringa.
[0307] ALXN1210 IV foi projetado para infusão pela diluição de solução salina comercialmente disponível (0,9% de cloreto de sódio, Ph Eur ou BP) por infusão IV em uma vazão máxima de 333 mL/hr, excluindo interrupção para por motivos de segurança e técnicos.
[0308] O ALXN1210 IV foi diluído com injeção com 0,9% de cloreto de sódio, Ph Eur ou BP, antes da administração (solução de dosagem). A vida de prateleira da solução de dosagem em uso era de 4 horas em temperatura ambiente 15°C a 25°C (59°F a 77°F). A data e tempo de validade da solução de dosagem foram calculados a partir da violação do primeiro frasco. A dose foi administrada dentro da data e tempo de validade. Cada seringa de 1 mL de ALXN1210 SC ou placebo SC que foi preparada (4 seringas por sujeito) foi administrada dentro de 1 hora a partir de quando foi preparada do frasco para a seringa.
11. Administração
[0309] Todas as doses de ALXN1210 SC ou placebo SC foram administradas por quatro injeções SC de 100 mg de 1 mL cada (Tabela 17) na área abdominal. Todas as quatro injeções de 1 mL foram administradas durante um período de 15 minutos e deveria haver pelo menos 15 minutos entre o final da injeção em um sujeito e o início da injeção no próximo sujeito. Tabela 17: Quadro de Referência de Dosagem para Preparação de ALXN1210 SC e Placebo SC Coorte Droga em estudo e Número de Volume total dose seringas de 1 mL administrado preparadas 1a 1 dose de 400 mg 4 4 mL ALXN1210 SC ou placebo SC 1b 1 dose de 400 mg 4 4 mL ALXN1210 SC ou placebo SC
[0310] Todas as doses de ALXN1210 IV foram administradas por infusão IV, usando conjuntos IV com filtros em linha, em uma vazão máxima de 333 mL/hr, excluindo interrupção por razões técnicas ou de segurança. Deveria haver pelo menos 15 minutos entre o final da injeção em um sujeito e o início da injeção no próximo sujeito. Tabela 18: Quadro de Referência de Dosagem para Preparação de ALXN1210 IV Coorte Droga em Volume de Volume Volume Vazão Duração estudo e dose ALXN1210 do de máxima mínima por dose diluente infusão de da (mL) por dose (mL) infusão infusão1 (mL) (mL/h) minutos (hora) 2 1 dose de 400 40 40 80 333 15 (0,25) mg ALXN1210
IV Erro! Fonte de referência não encontrada.A duração da infusão foi aproximada.
12. Controle de Eventos Adversos Potenciais Durante Administração da Droga em Estudo
[0311] Alguns sujeitos tratados com infusões IV de anticorpos monoclonais apresentaram reações relacionadas à infusão simultâneas com sinais ou sintomas que podem ser classificados como reações alérgicas agudas/reações de hipersensibilidade ou síndrome da liberação de citocinas.
[0312] Os sujeitos foram monitorados de perto durante e após a administração da droga do estudo em relação a quaisquer sintomas de anafilaxia e outras reações de hipersensibilidade, incluindo alterações ou parada circulatória e/ou respiratória ou urticária, artralgia, mialgias ou outros sinais de reações relacionadas. Foi disponibilizado imediatamente tratamento adequado. Eventos adversos associados à infusão poderiam ter ocorrido e, dependendo do tipo e da gravidade, poderia ser necessário interromper a infusão. Os sujeitos foram informados sobre os primeiros sintomas e sinais de reações de hipersensibilidade incluindo urticária, inchaço facial, pálpebras, lábios ou língua ou dificuldade respiratória. Foi usado um algoritmo de reação aguda à infusão para controlar as reações relacionadas à infusão. Neste estudo, as avaliações regulares para monitorar as reações à infusão e as reações do local da infusão foram feitas. Para garantir que as reações pudessem ser prontamente tratadas, houve pelo menos 15 minutos entre o final da infusão/injeção em um sujeito e o início da infusão/injeção no próximo sujeito. No máximo 6 sujeitos receberam a dose por dia. Quaisquer reações foram tratadas e levadas em conta na continuação/escalação da dose e regras de toxicidade. Se ocorreram reações anafiláticas, o “UK Treatment Guideline for Anaphylactic Reactions" atual do UK Resuscitation Council foi seguido.
13. Avaliações Farmacocinéticas (PK) e Famacodinâmicas (PD)
[0313] Após a administração da droga do estudo, as amostras de soro para a determinação das concentrações de ALXN1210 sérico e para as análises das concentrações de C5 livre e total, hemólise de cRBC e potencialmente outras medições da ativação de C5 foram coletadas nos seguintes pontos de tempo, com as datas de amostragem de soro reais e os tempos sendo registrados e usados nos cálculos de PK e PD: •As concentrações séricas de ALXN1210 foram analisadas a partir dos seguintes pontos no tempo: pré-dose (dentro de 15 minutos antes do início da infusão/injeção [SOI]); Dia 1 ao final da infusão/injeção (EOI), 30 minutos após EOI, e nos seguintes pontos no tempo após SOI: 2 h, 4 h, e 8 h; Dia 2 (24 h); Dia 3 (48 h); Dia 5 (96 h); Dia 8 (168 h); Dia 15 (336 h); Dia 22 (504 h); Dia 29 (672 h); Dia 36 (840 h); Dia 43 (1008 h); Dia 50 (1176 h); Dia 57 (1344 h); Dia 71 (1680 h); Dia 90 (2136 h); Dia 120 (2856 h); Dia 150 (3576 h); e Dia 200 (4776 h).
[0314] Todos os sujeitos que forneceram um número adequado de amostras de PK de soro para caracterizar um perfil de concentração-tempo foram incluídos na população de análise de PK. Todos os sujeitos que forneceram amostras de PD foram incluídos na população de análise de PD.
14. Avaliações de Imunogenicidade
[0315] As amostras de soro foram coletas nos seguintes pontos no tempo: pré- dose (dentro de 15 minutos antes de SOI), e nos Dias 15 (336 h), 29 (672 h), 57 (1344 h), 90 (2136 h), 120 (2856 h), 150 (3576 h), e 200 (4776 h) e analisadas para ADA para ALXN1210. Caracterização adicional da resposta do anticorpo foi realizada conforme adequado com base nos dados de PK/PD e de segurança de ALXN1210.
[0316] Todos os sujeitos que forneceram uma amostra de pré-dose e de pós-dose para ADA foram incluídos na população de análise de imunogenicidade.
[0317] O ensaio de imunogenicidade avalia o anticorpo antidroga (ADA) para ALXN1210. Instruções detalhadas sobre o procedimento para coleta, processamento, armazenamento e transporte das amostras de soro para a análise de imunogenicidade foram fornecidas no manual do laboratório.
15. Avaliação de Segurança
[0318] As avaliações de segurança incluíam testes TB, achados de exames físicos, medições de sinais vitais, testes de imunogenicidade (ADA), avaliações laboratoriais, ECGs, avaliações do local de infusão e do local de injeção (por exemplo,
sangramento, contusão, eritema, inchaço, induração e dor), e monitoramento de eventos adversos. Os eventos adversos foram classificados de acordo com o National Cancer Institute Common Terminology Criteria for Adverse Events v4.03 (CTCAE v4.03), publicado em 14 Junho de 2010. As avaliações laboratoriais incluíam hematologia, química e painéis de coagulação; CBC com diferencial; urinálise; e teste de gravidez por soro para sujeitos fêmeas.
[0319] As avaliações clínicas e laboratoriais foram realizadas para avaliar a segurança de ALXN1210. A cronologia das avaliações é descrita no Esquema de Avaliações. Os resultados anormais foram acompanhados até resolução ou estabilização.
[0320] Uma revisão de parâmetros demográficos, incluindo idade, gênero, raça e etnia foi realizada conforme descrito no Esquema de Avaliações. Foi obtido um histórico médico completo.
[0321] As medições de sinais vitais foram obtidas após o sujeito estar em posição supina ou semi-reclinada por pelo menos 5 minutos e inclui temperatura (°C; oral), taxa respiratória, pressão sanguínea em posição supina e pulso. A cronologia das medições dos sinais vitais é descrita no Esquema de Avaliações. As medições de pressão sanguínea ou de pulso fora dos limites foram repetidas à critério do pesquisador. Quaisquer medições de sinais vitais clinicamente significativas confirmadas foram registradas como eventos adversos.
[0322] O peso, altura e IMC foram registrados conforme descrito no Esquema de Avaliações. Cada examinação incluía as seguintes avaliações: aspecto geral; pele; cabeça, orelhas, olhos, nariz e garganta; pescoço, linfonodos; peito; coração cavidade abdominal; membros; sistema nervoso central; e sistema musculoesquelético.
[0323] Um ECG de 12 derivações em triplicata foi obtido após o sujeito estar em repouso por pelo menos 5 minutos. A cronologia dos ECGs é descrita no Esquema de Avaliações. Além disso, um registro cardíaco contínuo foi realizado em cada administração de dose a partir da pré-dose até o final da infusão IV na Coorte 2 e a partir da pré-dose até 3 horas após o final da injeção SC nas Coortes 1a e 1b. A frequência cardíaca, PR, QRS, RR e QT foram medidas e os intervalos de QTcF corrigidos foram calculados.
[0324] As amostras de sangue para análise de hematologia, química clínica, coagulação e sorologia do vírus e amostras de urina para urinálise, química de urina e triagens de droga e álcool foram coletadas conforme descrito no Esquema de Avaliações.
[0325] As amostras de sangue foram analisadas para os seguintes parâmetros hematológicos: plaquetas, contagem de glóbulos vermelhos (RBC) e contagens de WBC; diferenciação automatizada (neutrófilos, linfócitos, monócitos, eosinófilos, basófilos); hemoglobina; hematócrito; e índices de RBC (volume corpuscular médio, hemoglobina corpuscular média e concentração de hemoglobina corpuscular média). A cronologia das avaliações de hematologia é descrita no Esquema de Avaliações.
[0326] As amostras de sangue foram analisadas para os seguintes parâmetros de química clínica: nitrogênio ureico no sangue; creatinina; glicose; sódio; fósforo; potássio; cloreto; dióxido de carbono total; cálcio total; magnésio; AST; ALT; gama- glutamiltransferase; fosfatase alcalina; lactato desidrogenase; bilirrubina total, direta e indireta; ácido úrico; albumina; e proteína total. Considerando que a bilirrubina indireta foi calculada a partir dos valores de bilirrubina direta, os resultados da bilirrubina indireta não estavam disponíveis se a bilirrubina direta estivesse abaixo do limite de quantificação.
[0327] As concentrações séricas do nível de hormônio estimulador do folículo e de estradiol foram medidas na triagem para sujeitos fêmeas na pós-menopausa para confirmar seu estado de pós-menopausa.
[0328] A cronologia das avaliações de química é descrita no Esquema de Avaliações.
[0329] As amostras de sangue foram analisadas para o tempo de protrombina, razão normalizada internacional e tempo de tromboplastina parcial. A cronologia das avaliações de coagulação é descrita no Esquema de Avaliações.
[0330] A urinálise inclui gravidade, pH, glicose, proteína, sangue e cetonas. A examinação microscópica de amostras de urina foi realizada apenas em achados anormais. As amostras de urina também foram enviadas para o laboratório de patologia para medir proteína e creatinina a fim de calcular a razão de proteína:creatinina na urina. A cronologia da urinálise e as avaliações de química são descritas no Esquema de Avaliações.
[0331] As amostras de sangue coletadas na triagem foram analisada para os títulos de anticorpos contra HIV-1, HIV-2, HBsAg e HCV. Teste de antígeno de superfície para hepatite B foi requerido para todos os sujeitos antes do ingresso. Os sujeitos com HBsAg positivo não participaram. Para os sujeitos com HBsAg negativo, o seguinte algoritmo de teste foi requerido:
1. Se HBcAb fosse negativo, o sujeito seria elegível para participação.
2. Se HBcAb fosse positivo, seria testado o anticorpo de superfície para hepatite B (HBsAb). a. Se HBcAb e HBsAb fossem positivos, o sujeito seria elegível para participação. b. Se HBcAb fosse positivo e HBsAb fosse negativo, o sujeito não participaria.
[0332] Uma amostra de urina para triagem de droga foi analisada para os seguintes compostos: anfetaminas, barbitúricos, benzodiazepinas, cocaína, metadona, opiáceos, fenciclidina, metanfetamina, 3,4-metilenodioxi-metanfetamina e tetrahidrocanabinol (canabinoides). Um teste de hálito alcoólico foi realizado. Se positivo antes da dosagem, a dosagem não procederia. A cronologia dos testes de droga e álcool na urina é descrita no Esquema de Avaliações.
[0333] Um teste de gravidez (beta gonadotropina coriônica humana) foi realizado em todas as fêmeas. A cronologia do teste de gravidez é descrita no Esquema de Avaliações.
[0334] As amostras de soro para um teste QuantiFERON-TB foram coletadas conforme descrito no Esquema de Avaliações.
[0335] Um ensaio adequado para a determinação da atividade do complemento, tal como inibição de CAP ELISA/C5 (hemólise), foi realizado na triagem para confirmar que os sujeitos não tinham uma deficiência do complemento. Os sujeitos tidos como deficientes do complemento foram excluídos da participação no estudo.
[0336] As amostras de soro foram coletadas na avaliação inicial e durante o acompanhamento para medição da atividade de CH50 usando um LIA in vitro para confirmar a normalização da atividade do complemento. Se um resultado normal de CH50 fosse obtido de uma primeira amostra de CH50 do sujeito coletada durante o acompanhamento, a profilaxia com antibiótico poderia ter sido interrompida e a segunda amostra de CH50 programada não seria necessária. Se a primeira e segunda amostras de CH50 não estivessem normais, a amostra da avaliação inicial poderia ter sido analisada, e outras amostras de CH50 foram tomadas até que a atividade do complemento tivesse sido restaurada.
[0337] Um título de anticorpo bactericida sérico (SBA) contra os sorogrupos meningocócicos A, C, W135 e Y foi realizado na triagem. As medições de título foram usadas para excluir os sujeitos sem uma resposta imunológica de serem dosados.
[0338] Foram realizadas avaliações do local de injeção subcutânea ou de infusão IV. Dor no local de injeção SC ou de infusão IV foi avaliada usando uma Escala Visual Analógica (0-10). A dor não foi avaliada pré-dose. Indurações ou reações £1 cm de tamanho não foram listadas como um evento adverso a menos que persistissem por mais de 24 horas.
[0339] As amostras de soro foram analisadas para anticorpo antidroga (ADA). A cronologia de coleta de amostra de soro de ADA foi descrita no Esquema de Avaliações.
16. Controle do Evento Adverso
[0340] O pesquisador foi responsável por detectar, avaliar, documentar e relatar todos os eventos adversos (AEs). Todos os AEs foram registrados a partir da assinatura do formulário de consentimento informado até o término do estudo. Não houve limite de tempo para os SAEs que foram considerados causalmente relacionados.
[0341] Todos os AEs observados ou voluntários, independente de relação causal, foram relatados e registrados no sistema de captura de dados. Os eventos adversos relatados pelo sujeito e/ou pais ou tutor legal, e/ou identificados em resposta a uma questão aberta da equipe do estudo, ou revelados por observação, examinação física,
ou outros procedimentos do estudo foram coletados e registrados.
[0342] Um AE foi definido como sinal, sintoma desfavorável e não pretendido (por exemplo, incluindo um achado laboratorial anormal), ou doença temporariamente associada ao uso de um produto ou procedimento médico, considerado relacionado ou não ao produto ou procedimento médico, que ocorre durante o curso do estudo clínico.
[0343] Exacerbações de uma condição pré-existente crônica ou intermitente, incluindo um aumento na frequência e/ou intensidade da condição, foram todas consideradas AEs.
[0344] Achados de teste anormais foram considerados AEs. Se um valor laboratorial anormal fosse identificado, os pesquisadores eram fortemente estimulados a relatar um diagnóstico, ou um sinal ou um sintoma, em vez de um valor de teste anormal isolado. Um achado de teste anormal era documentado como um AE se qualquer uma das seguintes condições fossem atendidas: estivesse associado a um sinal ou sintoma; teste diagnóstico adicional necessário (repetição de testes não era considerado teste adicional); intervenção médica ou cirúrgica necessária; alteração na dosagem do estudo fora da dosagem definida no protocolo ou descontinuação do estudo; tratamento significativo adicional necessário; não atender nenhuma das condições acima.
[0345] Esta definição também inclui os sinais ou sintomas resultantes dentre os seguintes: dose excessiva da droga, retirada da droga, uso errado da droga, interações medicamentosas, extravasamento, exposição durante gravidez, exposição através da amamentação, erro de medicação e exposição ocupacional.
[0346] Um AE não necessariamente inclui os seguintes: • Procedimentos médicos ou cirúrgicos (por exemplo, cirurgia, endoscopias, extração dental, transfusão); a condição que leva ao procedimento era o AE (por exemplo, colecistectomia laparoscópica era o procedimento ou tratamento para um SAE de vesícula biliar necrótica) • Doenças ou condições pré-existente, presentes ou detectadas antes da avaliação da triagem, que não pioraram
• Situações em que uma ocorrência médica desfavorável não ocorreu (por exemplo, hospitalização para cirurgia elegível, se planejada antes do início do estudo; admissões sociais e/ou de conveniência)
[0347] Qualquer AE que preencha qualquer 1 dos critérios listados abaixo devia ser registrado como um SAE.
[0348] Um SAE era descrito como qualquer ocorrência médica desfavorável que, em qualquer dose:
1. Resulte em morte
2. Apresente risco de mortea
3. Requeira hospitalização ou prolongamento da hospitalização b Hospitalização não necessariamente inclui os seguintes: • Reabilitação/asilo/instalações de enfermagem • Consulta no departamento de emergência inferior a 24 horas • Admissão/cirurgia/cirurgia de um dia elegível ou pré-planejada • Admissão especificada em protocolo • Admissão para uma condição pré-existente não associada a um novo AE ou a uma piora de um AE pré-existente
4. Resulte em comprometimento/incapacidade persistente ou significativo
5. Seja uma anomalia congênita/defeito de nascimento
6. Seja um evento médico relevantec a O termo "risco de morte" na definição de "sério" refere-se a um evento no qual o sujeito estava em risco de morte no momento do evento; este não se refere a um evento que possa, hipoteticamente, ter causado a morte se fosse mais grave. b Hospitalização requer admissão do paciente internado ou prolongamento de uma hospitalização existente. Os AEs que estavam associados à hospitalização ou prolongamento da hospitalização foram considerados SAEs. c Evento médico relevante: O julgamento médico e científico deve ser exercitado na decisão de se expedir um relatório era apropriado em outras situações, tais como eventos médicos relevantes que possam não apresentar imediatamente risco de morte, ou resultar na morte ou hospitalização, mas ameaçar o sujeito ou possa requerer intervenção para prevenir 1 dentre os outros desfechos listados na definição acima. Estes também devem ser usualmente considerados sérios. Exemplos desses eventos eram o tratamento intensivo em um departamento de emergência ou doméstico para broncoespasmo alérgico; discrasias sanguíneas ou convulsões que não resultam na hospitalização; ou desenvolvimento de dependência da droga ou abuso de droga.
[0349] Gravidade e seriedade foram diferenciadas. A gravidade descreve a intensidade de um AE, enquanto o termo seriedade refere-se a um AE que atende aos critérios para um SAE, conforme descrito acima.
[0350] Todos os AEs foram classificados de acordo com os seguintes critérios de CTCAE v4.03, publicado em 14 de junho de 2010. • Grau 1: Leve (ciente dos sinais ou sintomas, mas facilmente tolerados) • Grau 2: Moderado (desconforto suficiente para provocar interferência nas atividades normais) • Grau 3: Grave (incapacitante, com comprometimento na realização das atividades normais) • Grau 4: Risco de morte • Grau 5: Fatal
[0351] Alterações na gravidade de um AE foram documentadas para permitir uma avaliação da duração do AE em cada nível de intensidade a ser avaliado. Os eventos adversos caracterizados como intermitentes necessitaram de documentação de aparecimento e duração de cada episódio, se a gravidade do evento intermitente mudasse.
[0352] Uma avaliação de causalidade pelo pesquisador foi fornecida para todos os AEs (não sérios e sérios). Esta avaliação foi registrada no sistema de captura de dados e em quaisquer formulários adicionais, conforme apropriado. As definições para as avaliações de causalidade foram conforme se segue: • Não relacionado (não relacionado): Esta relação sugere que não houve associação entre o produto sob pesquisa e o evento relatado. • Improvavelmente relacionado: Esta relação sugere que o quadro clínico era altamente consistente com uma causa diferente do produto sob pesquisa, mas atribuição não pôde ser feita com certeza absoluta, e uma relação entre o produto sob pesquisa e o AE não pode ser excluída com completa confiança. • Possivelmente relacionado: Esta relação sugere que o tratamento com o produto sob pesquisa pode ter causado ou contribuído para o AE;isto é, o evento segue uma sequência temporal razoável a partir do tempo da administração da droga em estudo, e/ou segue um padrão de resposta conhecido para o produto sob pesquisa, mas também poderia ter sido produzido por outros fatores. • Provavelmente relacionado: Esta relação sugere que uma sequência temporal razoável do evento com a administração do produto sob pesquisa existe, bem como a provável associação do evento com o produto sob pesquisa. Isto será baseado na ação farmacológica conhecida do produto sob pesquisa, reações adversas conhecidas ou previamente relatadas ao produto sob pesquisa ou classe de drogas, ou julgamento baseado na experiência clínica do pesquisador. • Definitivamente relacionado: Relação temporal ao produto sob pesquisa. Outras condições (doença concomitante, reação à medicação concomitante, ou progressão/expressão do estado de doença) não parecem explicar o evento; o evento corresponde ao perfil farmacêutico conhecido; melhora na descontinuação; reaparecimento na re- exposição.
[0353] Se um sujeito experimentar um SAE com um desfecho de morte, os seguintes procedimentos eram realizados: O SAE resultante na morte tinha um desfecho documentado como morte/fatal, com uma data final sendo a data de morte. Se o sujeito tivesse AE/SAEs adicionais que estivessem em curso no momento da morte, esses eventos eram documentados como em andamento sem data final. Apenas 1 evento teve um desfecho de morte/fatal, a menos que um relatório de autópsia ou pesquisador declare o contrário.
17. Estatísticas
[0354] Um plano de análise estatística formal (SAP) foi desenvolvido e finalizado antes do bloqueio da base de dados.
[0355] A população de segurança consiste em todos os sujeitos que receberam pelo menos 1 dose da droga do estudo. Os sujeitos nessa população foram usados para a análise de segurança.
[0356] A população PK consiste em todos os sujeitos que tinham dados de concentração sérica suficientes para permitir o cálculo dos parâmetros PK. A população PK foi usada para os resumos de PK.
[0357] A população PD consiste em todos os sujeitos que tinham dados de concentração de C5 total e livre e dados de hemólise de cRBC suficientes. A população PD foi usada para os resumos de PD.
[0358] A população de análise de imunogenicidade consiste em todos os sujeitos que tinham uma amostra de ADA pré-dose e pós-dose coletadas.
[0359] Um tamanho total de amostra avaliável de 36 sujeitos, 24 sujeitos ALXN1210 SC da Coorte 1 e 12 sujeitos ALXN1210 IV da Coorte 2, forneceram > 80% de poder para inferir que a ligação inferior a um intervalo de confiança de 90% para a razão entre biodisponibilidade de ALXN1210 SC e IV era > 0,4 assumindo uma biodisponibilidade absoluta de 0,6 e um coeficiente de variação de 0,35. Adicionalmente, 6 sujeitos receberam placebo SC, 2 na Coorte 1a e 4 na Coorte 1b. A randomização para a Coorte 1a foi realizada em uma razão de 2:1, e Coorte 1b em uma razão de 5:1, para receber ALXN1210 SC ou placebo SC. Isto trouxe o número planejado total de sujeitos para N=42.
[0360] Em geral, a estatística descritiva para variáveis contínuas incluem o número de valores disponíveis, média aritmética, desvio padrão, mediana, mínimo e máximo. A estatística descritiva para parâmetros PK incluíam número de observações, média aritmética, desvio padrão, coeficiente de variação aritmético (%CV), mediana, mínimo, máximo, média geométrica e %CV geométrico. As variáveis categóricas foram resumidas usando porcentagens e contagens de frequência, por coorte e ponto no tempo.
[0361] Todos os sujeitos foram incluídos no resumo de disposição do sujeito, que resume a frequência e porcentagem de sujeitos selecionados e tratados que completaram ou descontinuaram o estudo, juntamente com o motivo da descontinuação, por coorte. As características demográficas e da avaliação inicial foram resumidas para todos os sujeitos por cada coorte e em geral.
[0362] As análises foram realizadas na população de segurança e relatadas por cada coorte. As análises de segurança incluíam uma análise de todos os AEs, ECGs, dados laboratoriais clínicos, examinações físicas e medições de sinais vitais, e foram apresentadas usando estatísticas descritivas. Nenhuma análise estatística inferencial foi planejada sobre os parâmetros de segurança deste estudo. A incidência de AEs emergentes do tratamento e SAEs foi resumida, pela Classe de Sistema de Órgãos e terminologia típica para cada coorte e em geral, por relação à droga do estudo. Os AEs emergentes do tratamento também foram resumidos por coorte e em geral por gravidade. AEs sérios e AEs que resultaram na retirada do estudo foram listados. Os sujeitos tendo múltiplos AEs dentro de uma categoria (por exemplo, geral, classe de sistema de órgãos, terminologia típica) foram contados uma vez nessa categoria. Para tabelas de gravidade, um evento mais grave do sujeito dentro de uma categoria foi contado.
[0363] Alterações da avaliação inicial nas medições de sinal vital e avaliações laboratoriais (por exemplo, química, CBC com diferencial e urinálise) foram resumidas por cada coorte. Os valores de parâmetro laboratorial foram classificados de acordo com CTCAE. Tabelas de troca por coorte foram produzidas para esses parâmetros laboratoriais. Essas tabelas resumem o número de sujeitos com cada grau de avaliação inicial relativo aos intervalos de referência e alterações em relação à pior pós-dose avaliada de grau mais alto durante o estudo.
[0364] Os parâmetros de ECG foram medidos nos pontos de tempo especificados, incluindo frequência cardíaca, PR, RR, QRS, QT e intervalos corrigidos de QTcF. A média das leituras de ECG em triplicata nos pontos de tempo coletadas foi calculada, e alterações dos valores de avaliação inicial pré-tratamento foram avaliadas por cada coorte.
[0365] Foi realizada uma análise atípica que resume a frequência e porcentagem de sujeitos que atendem a qualquer um dos seguintes critérios atípicos em cada consulta por coorte: • QT, intervalo de QTcF > 450 mseg • QT, intervalo de QTcF > 480 mseg • QT, intervalo de QTcF > 500 mseg • QT, intervalo de QTcF aumenta a partir da avaliação inicial > 30 mseg • QT, intervalo de QTcF aumenta a partir da avaliação inicial > 60 mseg
[0366] Todas as medicações concomitantes foram codificadas usando o WHO Drug Dictionary, e a frequência e porcentagem de medicações concomitantes foram resumidas.
[0367] Os dados de concentração sérica do indivíduo para sujeitos tratados com ALXN1210, com datas e tempos de amostrados reais, foram usados para derivar os parâmetros PK por métodos de análises não compartimentais usando Phoenix WinNonlin 6.3 ou superior.
[0368] Os seguintes parâmetros PK foram derivados: concentração sérica máxima observada (Cmáx), tempo para a concentração sérica máxima observada (T máx), área sob a curva de concentração sérica versus tempo do tempo zero até a última concentração quantificável (AUCt), área sob a curva do tempo zero até o infinito (AUC∞), constante da taxa de eliminação terminal (λz), meia-vida de eliminação terminal (T½), depuração total (CL ou CL/F), e volume de distribuição (Vd ou Vd/F).
[0369] A razão de médias geométricas (ALXN1210 SC/ALXN1210 IV) e seus IC de 90% foram calculados para Cmáx, AUCt, e AUC∞, e foram dispostos em tabela. O IC foi calculado usando a variância entre os sujeitos. As avaliações de concentração ao longo do tempo foram apresentadas.
[0370] Os efeitos PD de ALXN1210 SC e IV foram avaliados por análise das alterações nas concentrações séricas de C5 total e livre, hemólise de cRBC e outras medições da ativação de C5 ao longo do tempo. As análises foram realizadas nas amostras coletadas conforme descrito no Esquema de Avaliações.
[0371] A imunogenicidade, conforme medida por ADA, foi resumida na forma de tabela por coorte e listagens por sujeito. Exemplo 3: Resultados do Estudo de Fase 1 para Avaliar Dose Única de ALXN1210 Administrado por Via Subcutânea em Comparação com Via Intravenosa em Sujeitos Saudáveis
[0372] A seguir está um resumo de dados de um estudo de fase 1 de dose única que foi conduzido substancialmente conforme descrito acima no Exemplo 2. Especificamente, o estudo foi desenhado para avaliar a segurança, tolerabilidade, farmacocinética (PK), farmacodinâmica (PD)e imunogenicidade de uma dose única de 400-mg de ALXN1210 administrada por via subcutânea em comparação a uma dose única de 400-mg de ALXN1210 administrada por via intravenosa ou placebo administrado por via subcutânea em 42 sujeitos saudáveis.
1. Disposição dos Sujeitos
[0373] Dos 161 sujeitos selecionados, 42 (26,09%) sujeitos foram randomicamente atribuídos para receber a droga do estudo: placebo SC (n=6), ALXN1210 SC (n=24), e ALXN1210 IV (n=12) (Figura 48). Nenhum dos sujeitos randomizados descontinuou prematuramente o estudo.
2. Desvios de Protocolo
[0374] Pelo menos um desvio de protocolo foi relatado para 36 sujeitos (placebo SC: n = 6; ALXN1210 SC: n = 20; e ALXN1210 IV: n = 10). As categorias de desvio de protocolo incluíam desvio de janela de tempo, consentimento do sujeito, avaliação não realizada, critérios de exclusão e administração da dose.
[0375] Em dois sujeitos no grupo ALXN1210 IV, os desvios de protocolo foram avaliados como maior. Em um sujeito, avaliações do Dia 29 ADA, PK, PD e laboratoriais não foram realizadas uma vez que o sujeito não compareceu à consulta de acompanhamento. No outro sujeito, amostras de PK e PD do Dia 71 não foram coletadas uma vez que o sujeito não compareceu à consulta de acompanhamento. Embora esses desvios fossem avaliados como maiores devido à natureza do desenho do estudo (critério de avaliação primário relacionado à PK), estes não foram considerados como tendo efeito sobre a interpretação dos resultados. Nenhum dos outros desvios de protocolo foi considerado como tendo afetado a interpretação dos resultados ou da segurança dos sujeitos. Os resultados do teste de gravidez por soro foram negativos em todos os sujeitos durante o estudo.
3. Avaliação Farmacocinética, Farmacodinâmica e de Imunogenicidade
[0376] Todos os 42 sujeitos randomizados receberam a droga do estudo e foram incluídos no Conjunto de Segurança (Tabela 19). Todos desses sujeitos também foram incluídos no Conjunto de PD e o Conjunto de Análise de Imunogenicidade com base nas definições. Os 36 sujeitos no Conjunto de Segurança que receberam ALXN1210 SC ou ALXN1210 IV tinham dados de concentração sérica suficientes para permitir o cálculo de parâmetros PK e foram incluídos no Conjunto de PK (Tabela 19). Tabela 19: Populações de Análise (Todos os Sujeitos Randomizados) Placebo SC ALXN1210 SC ALXN1210 IV (N = 6) (N = 24) (N = 12) n (%) n (%) n (%) Conjunto de 6 (100,0) 24 (100,0) 12 (100,0) Segurança Conjunto de 0 24 (100,0) 12 (100,0) Farmacocinética Conjunto de 6 (100,0) 24 (100,0) 12 (100,0) Farmacodinâmica Conjunto de análise 6 (100,0) 24 (100,0) 12 (100,0) de imunogenicidade Observação: Porcentagem (%) é igual a n/N × 100. Abreviações: IV = intravenoso; N = número total de sujeitos; n = número de sujeitos; SC = subcutâneo.
4. Características Demográficas e Outras de Avaliação Inicial
[0377] Pelos grupos de tratamento, a maioria dos sujeitos era machos (66,7%) e brancos (69,0%) com uma idade média (± SD) de 35,0 (± 7,65) anos. O IMC médio (± SD) para a população geral foi de 24,035 (± 3,1582). Em geral, os dados demográficos foram bem equilibrados por todos os grupos de tratamento (Tabela 20).
Tabela 20: Dados Demográficos - Estatísticas Descritivas por Tratamento (Conjunto de Segurança) Parâmetro Placebo SC ALXN1210 ALXN1210 Geral demográfic (N = 6) SC (N = 24) IV (N = 12) (N = 42) o Macho 4 (66,7) 16 (66,7) 8 (66,7) 28 (66,7) Sexo, n (%) Fêmea 2 (33,3) 8 (33,3) 4 (33,3) 14 (33,3) N 6 24 12 42 Idade (anos) Média 34,2 (± 6,46) 36,2 (± 7,73) 33,2 35,0 (± 7,65) (± SD) (± 8,20) N 6 24 12 42 Peso (kg) Média 71,30 72,69 72,45 72,42 (± SD) (± 6,727) (± 12,892) (± 11,882) (± 11,698) N 6 24 12 42 IMC (kg/m2) Média 23,220 23,846 24,820 24,035 (± SD) (± 2,4948) (± 3,3895) (± 3,0353) (± 3,1582) Hispânico 0 1 (4,2) 1 (8,3) 2 (4,8) ou Latino Etnia, n (%) Não 6 (100,0) 23 (95,8) 11 (91,7) 40 (95,2) hispânico ou latino Asiático 1 (16,7) 2 (8,3) 2 (16,7) 5 (11,9) Negro ou 1 (16,7) 5 (20,8) 0 6 (14,3) Afro- Raça, n (%) Americano Branco 2 (33,3) 17 (70,8) 10 (83,3) 29 (69,0) Outro 2 (33,3) 0 0 2 (4,8) Observação: Porcentagem (%) é igual a n/N × 100. Abreviações: IMC = índice de massa corporal; IV = intravenoso; máx = máximo; mín = mínimo; N = número total de sujeitos; n = número de sujeitos; SC = subcutâneo; SD = desvio padrão.
[0378] O uso de medicações prévias foi relatado por 5 (20,8%) sujeitos no grupo ALXN1210 SC. Não houve relatos de uso de medicações prévias nos grupos placebo SC e no ALXN1210 IV. O uso de medicações concomitantes foi relatado por 3 (50,0%), 13 (54,2%), e 8 (66,7%) sujeitos nos grupos placebo SC, ALXN1210 SC, e ALXN1210 IV, respectivamente.
[0379] As medicações concomitantes mais comumente usadas foram anilidas, tais como acetaminofeno/paracetamol (15 sujeitos) para tratamento de AEs, seguido de progestogenos e estrogenos, combinações fixadas (7 sujeitos) para contracepção). Não espera-se que nenhuma das medicações concomitantes relatadas tenha influência sobre os resultados do estudo.
[0380] Nenhum sujeito tinha nenhuma terapia não farmacológica ou procedimentos. Todas as doses de ALXN1210 SC ou placebo SC foram administradas por quatro injeções SC de 100 mg de 1 mL cada na área abdominal. Todas as doses de ALXN1210 IV foram administradas por infusão IV, usando conjuntos IV com filtros em série. Todos os sujeitos receberam suas doses atribuídas.
5. Resultados de Farmacocinética, Farmacodinâmica e de Imunogenicidade e Tabulações de Dados dos Sujeitos Individuais
[0381] As análises PK foram realizadas no Conjunto de PK que consistia em todos os sujeitos do Conjunto de Segurança que receberam ALXN1210 SC ou ALXN1210 IV e que tinham dados de concentração sérica suficientes para permitir o cálculo dos parâmetros PK.
[0382] As Figuras 49-50 ilustram os perfis de concentração sérica-tempo médio (± SD) para sujeitos saudáveis após administração SC e IV de ALXN1210 (escalas linear e de log-linear). Os gráficos das concentrações séricas de ALXN1210 individuais versus tempo nominal são apresentados usando uma escala linear (Figura 49) e escala de log-linear (Figura 50), respectivamente.
[0383] Os parâmetros farmacocinéticos de ALXN1210 após a administração SC e IV estão resumidos na Tabela 21. Um total de 24 sujeitos recebeu administração de ALXN1210 SC; o tmáx mediano (intervalo) foi de 169,8 (96,0 a 508,1) horas após injeção SC. A média geométrica (CV%) t½ foi semelhante em 31,3 (13,6) dias e 29,9 (15,4) dias para administração de ALXN1210 SC e IV, respectivamente. A eliminação de ALXN1210 foi semelhante entre as vias IV e SC (Figura 49). Tabela 21: Resumo dps Parâmetros Farmacocinéticos de ALXN1210 (Conjunto Farmacocinético)
Cmáx tmáx AUCt AUC∞ λz t½ CL ou Vd ou CL/F Vd/F Tratamento Estatística [µg/mL] [h] [h*µg/mL] [h*µg/mL] [/h] [h] [L/h] [L] Média 35,1 169,8a 46734,5 47653,4 0,001 751,6 0,009 9,1 geométrica
CV ALXN1210 geométrico 32,9 NA 28,4 28,5 0,00 13,6 27,7 24,7 SC (n = 24) (%) Intervalo 19,5, 96,0, 26294,3, 26834,0, 0,001, 614,4, 0,004, 5,7, (mín, máx) 65,2 508,1 99354,7 103195,2 0,001 1012,2 0,015 14,3 Média 134,6 0,8a 77892,8 78902,9 0,001 718,4 0,005 5,3 geométrica
CV ALXN1210 geométrico 19,0 NA 24,9 25,4 0,00 15,4 22,6 24,8 IV (n = 12) (%) Intervalo 99,6, 0,27, 57748,3, 58146,6, 0,001, 601,5, 0,003, 3,1, (mín, máx) 170,0 2,0 151090,9 155019,7 0,001 990,1 0,007 7,1 aMediana apresentada para tmáx. Observação: Para tratamento com ALXN1210 SC, as colunas CL e V d representam CL/F e Vd/F, respectivamente. Abreviações: AUCt = área sob a curva de concentração sérica versus tempo do tempo 0 até a última concentração quantificável; AUC∞ = área sob a curva de concentração sérica versus tempo do tempo 0 extrapolado para o infinito; CL ou CL/F = depuração corporal total da droga a partir do soro; Cmáx = concentração sérica máxima observada; CV = coeficiente de variação; h = hora; IV = intravenoso; L = litro; máx = máximo; mín = mínimo; n = número de sujeitos; NA = não aplicável; SC = subcutâneo; t ½ = meia- vida de eliminação terminal; tmáx = tempo para a concentração sérica máxima observada; Vd ou Vd/F = volume de distribuição; λz = constante da taxa de eliminação terminal.
[0384] A Tabela 22 resume a biodisponibilidade absoluta de ALXN1210. Os parâmetros PK para ALXN1210 SC (Cmáx, AUCt, e AUC∞) foram comparados à referência (ALXN1210 IV) por meio de análise estatística usando um modelo misto após transformação logarítmica dos dados. A GMR da Cmáx para ALXN1210 (SC/IV) foi de 26,1% (95% IC: 21,3, 32,0). A biodisponibilidade absoluta de ALXN1210 SC, determinada com base na GMR das estimativas de AUC∞ (SC/IV), foi de 60,4% (95% IC: 49,7, 73,3). Tabela 22: Análise Estatística de Biodisponibilidade Absoluta de ALXN1210 Subcutâneo (Conjunto Farmacocinético) Média geométrica Parâmetro ALXN1210 ALXN12 GM 90% IC 95% IC farmacocinético SC (n = 24) 10 IV R (n = 12) (%) Cmáx [µg/mL] 35,1 134,6 26,1 22,0 – 30,9 21,3, – 32,0 AUCt [h*µg/mL] 46734,5 77892,8 60,0 51,1 – 70,4 49,5 – 72,8 AUC∞ [h*µg/mL] 47653,4 78902,9 60,4 51,4 – 71,0 49,7 – 73,3 Observação: A razão é definida como média geométrica do grupo ALXN1210 SC dividida pela média geométrica do grupo ALXN1210 IV ×100. Foi usado o modelo misto linear com efeitos fixos e aleatórios para os sujeitos. Abreviações: AUCt = área sob a curva de concentração sérica versus tempo do tempo 0 até a última concentração quantificável; AUC∞ = área sob a curva de concentração sérica versus tempo do tempo 0 extrapolado para o infinito; IC = intervalo de confiança; Cmáx = concentração sérica máxima observada; GMR = razão da média geométrica; h = hora; IV = intravenoso; n = número de sujeitos; SC = subcutâneo.
[0385] As análises PD foram realizadas no Conjunto de PD que consistia em todos os sujeitos do Conjunto de Segurança que tinham dados de concentração de C5 livre e total suficientes e dados de hemólise de cRBC.
[0386] A Figura 51 representa a alteração percentual média (± SD) na concentração sérica de C5 livre a partir da avaliação inicial ao longo do tempo para sujeitos administrados com placebo SC, ALXN1210 SC, e ALXN1210 IV. O C5 livre médio permaneceu relativamente constante após a administração SC de placebo. A administração de uma dose única de ALXN1210 IV de 400 mg resultou em uma inibição imediata e quase completa de C5 livre (≥ 99%) até o Dia 8 após a administração IV. A administração de uma dose única de ALXN1210 SC de 400 mg também resultou numa redução no C5 livre, mas não no mesmo grau ou tão rápido quanto o início visto após a administração IV. Após a administração de ALXN1210 SC, a inibição média máxima no C5 livre (77%) ocorreu 1 semana após a dosagem.
[0387] A duração e o grau da concentração de C5 livre médio reduzido foram dependentes da exposição. A Figura 52 representa a alteração percentual média (± SD) nas concentrações séricas de C5 total a partir da avaliação inicial ao longo do tempo para sujeitos administrados com placebo SC, ALXN1210 SC, e ALXN1210 IV. As concentrações de C5 total médias permaneceram relativamente constantes após a administração SC de placebo. No entanto, a administração de uma única dose de ALXN1210 de 400 mg levou a um aumento da média máximo de 82% e 107% em relação à avaliação inicial no C5 total após a dosagem SC e IV respectivamente.
[0388] A Figura 53 representa a alteração percentual média (± SD) na hemólise de glóbulos vermelhos de galinha (cRBC) a partir da avaliação inicial ao longo do tempo para sujeitos administrados com placebo SC, ALXN1210 SC, e ALXN1210 IV. A hemólise de cRBC média permaneceu relativamente constante após a administração SC de placebo. A administração de uma única dose de ALXN1210 IV de 400 mg resultou em uma inibição imediata na hemólise de cRBC média com redução média máxima em 88%. A administração de uma dose única de ALXN1210 SC de 400 mg também resultou em uma inibição da hemólise de cRBC, mas não no mesmo grau ou tão rápido quanto o início em comparação com a administração IV. A inibição média máxima da hemólise de cRBC de 29% ocorreu em aproximadamente 1 semana após a dosagem de ALXN1210 SC. A duração e o grau de inibição de cRBC foram dependentes da exposição.
[0389] A análise de imunogenicidade foi realizada no Conjunto de Análise de Imunogenicidade que consistia em todos os sujeitos da Conjunto de Segurança que tinham uma amostra de ADA de pré-dose e uma pós-dose coletada. O teste de anticorpo antidroga foi realizado pré-dose e pós-dose nos Dias 15, 29, 57, 90, 120, 150 e 200.
[0390] Um sujeito (Sujeito 0344-185) no grupo de tratamento ALXN1210 SC tinha uma amostra positiva para ADA na avaliação inicial (pré-dose) e todas amostras pós-
dose. Todos os títulos de anticorpo pós-dose neste sujeito estavam abaixo do valor de título de pré-dose. A resposta positiva para anticorpo antidroga neste sujeito não foi considerada clinicamente significativa ou relacionada a ALXN1210. Portanto, este sujeito não está incluído nos resumos de imunogenicidade fornecidos abaixo.
[0391] Um total de 4 sujeitos (grupo ALXN1210 SC: 3/23 [13%] sujeitos e grupo ALXN1210 IV: 1/12 [8,3%] sujeito) desenvolveram ADA emergente do tratamento. No grupo ALXN1210 SC: Um primeiro sujeito foi positivo para ADA nos Dias 57, 90, 120, 150 e 200. Todos os valores positivos para ADA foram positivos para reatividade cruzada de eculizumabe. Um segundo sujeito foi positivo para ADA nos Dias 29, 57, 90, 120, 150 e 200. Todos os valores positivos para ADA foram positivos para reatividade cruzada de eculizumabe, exceto no Dia 90 que foi negativa. Um terceiro sujeito foi positivo para ADA nos Dias 90, 120, 150 e 200. Todos os valores positivos para ADA foram positivos para reatividade cruzada de eculizumabe.
[0392] No grupo ALXN1210 IV: um sujeito foi positivo para ADA nos Dias 15, 29, 90, 120, 150 e 200. Todos os valores positivos para ADA foram negativos para reatividade cruzada de eculizumabe.
[0393] As primeiras respostas positivas para ADA pós-dose foram vistas no Dia 29 e Dia 15, para dosagem SC e IV, respectivamente. Os títulos de ADA para as amostras positivas para ADA foram baixas e variaram de < 1,0 a 27. Na maioria das amostras positivas para ADA após a administração SC, os ADAs sofreram reação cruzada com o eculizumabe. Após a administração IV, os ADAs não sofreram reação cruzada com o eculizumabe. Todos os sujeitos positivos para ADA permaneceram positivos até o final do período de acompanhamento. Uma avaliação formal do impacto de ADA sobre PK e PD não poderia ser feita devido à pequena quantidade de sujeitos positivos para ADA. A examinação dos resultados PK e PD individuais limitados nesses sujeitos sugere que não há impacto evidente da imunogenicidade sobre a PK ou PD de ALXN1210.
6. Conclusões Farmacocinéticas, Farmacodinâmicas e de Imunogenicidade
[0394] O tmáx mediano (intervalo) foi de 169,8 (96,0 a 508,1 horas) após a injeção SC. A meia-vida de eliminação da média geométrica foi semelhante em 31,3 dias e
29,9 dias após a administração de ALXN1210 SC e IV respectivamente.
[0395] As estimativas de GMR da Cmáx (SC/IV) foi de 26,1% (95% IC: 21,3, 32,0). A biodisponibilidade absoluta de ALXN1210 SC, com base na GMR das estimativas de AUC∞ (SC/IV), foi de 60,4% (95% IC: 49,7, 73,3).
[0396] O grau e duração da resposta PD, conforme avaliado pela concentração sérica de C5 livre e total e hemólise de cRBC, foram dependentes da exposição. A administração de uma dose única de ALXN1210 IV de 400 mg resultou em uma inibição imediata e quase completa de C5 livre (≥ 99%) até o Dia 8 após a administração da droga do estudo. A administração de uma dose única de ALXN1210 SC de 400 mg, administrada como quatro injeçÕes SC de 100 mg, também resultou numa redução no C5 livre, mas não no mesmo grau ou tão rápido quanto o início visto após a administração IV. A inibição média máxima no C5 livre foi de 77% que ocorreu aproximadamente 1 semana após a administração SC. A administração de ALXN1210 de 400 mg levou a um aumento da média máximo de 82% e 107% em relação à avaliação inicial no C5 total após a dosagem SC e IV respectivamente. A administração de uma única dose de ALXN1210 IV de 400 mg resultou em uma inibição imediata na hemólise de cRBC média com redução média máxima em 87%. A administração de uma dose única de ALXN1210 SC de 400 mg também resultou em uma inibição da hemólise de cRBC, mas não no mesmo grau ou tão rápido quanto o início em comparação com a administração IV. A inibição média máxima da hemólise de cRBC de 29% ocorreu aproximadamente no Dia 8 após a administração SC.
[0397] ADAs emergentes do tratamento foram relatados para 3/23 (13%) sujeitos e 1/12 (8,3%) sujeito nos grupos ALXN1210 SC e ALXN1210 IV, respectivamente, com baixos valores de titulação de ADA variando de <1,0 a 27. A primeira resposta para ADA pós-dose foi vista no Dia 29 e Dia 15, para dosagem SC e IV, respectivamente. Após a administração SC, os ADAs sofreram reação cruzada com o eculizumabe na maioria das amostras positivas para ADA. Após a administração IV, os ADAs não sofreram reação cruzada com o eculizumabe. Todos os sujeitos positivos para ADA permaneceram positivos até o final do período de acompanhamento. Não houve impacto evidente da imunogenicidade sobre a PK ou PD de ALXN1210.
[0398] Um sujeito adicional no grupo de tratamento ALXN1210 SC tinha uma amostra positiva para ADA na avaliação inicial (pré-dose) e todas amostras pós-dose. Todos os títulos de anticorpo pós-dose neste sujeito estavam abaixo do valor de título de pré-dose. A resposta positiva para anticorpo antidroga neste sujeito não foi relacionada a ALXN1210.
7. Grau de Exposição
[0399] Todos os sujeitos que receberam a dose única da droga do estudo foram incluídos no Conjunto de Segurança (N = 42): placebo SC (n = 6); ALXN1210 SC (n = 24); e ALXN1210 IV (n = 12). O volume de infusão total (80 mL) da droga do estudo foi administrado em cada sujeito atribuído para receber ALXN1210 IV. Em um sujeito, a infusão foi interrompida por um minuto, uma vez que tempo insuficiente foi programado para a bomba para infusão completa. O volume total da droga do estudo (4 mL) foi administrado em cada sujeito que recebeu ALXN1210 SC ou placebo SC.
8. Eventos Adversos
[0400] Por todos os três grupos de tratamento, 35/42 (83,3%) sujeitos experimentaram 75 TEAEs (todos Grau 1). A proporção de sujeitos com pelo menos 1 TEAE foi de 91,7%, 83,3%, e 79,2%, respectivamente no grupo ALXN1210 IV, grupo placebo SC, e grupo ALXN1210 SC. Não houve mortes ou SAEs relatados durante o estudo. Nenhum dos sujeitos descontinuou a droga do estudo ou se retirou do estudo devido aos TEAEs (Tabela 23).Todos os TEAEs foram resolvidos ao longo do estudo. A maioria dos TEAEs não necessitou de medicação e nenhum sujeito a qualquer momento necessitou de intervenções não farmacológicas. Tabela 22: Eventos Adversos Emergentes do Tratamento (TEAEs) - Resumo Geral (Conjunto de Segurança) Placebo SC ALXN1210 ALXN1210 IV Geral (N = 6) SC (N = 24) (N = 12) (N = 42) E n (%) E n (%) E n (%) E n (%) Sujeitos com pelo 15 5 38 19 22 11 75 35 (83,3) menos 1 TEAE (83,3) (79,2) (91,7) TEAE relacionado 0 0 2 2 (8,3) 1 1 (8,3) 3 3 (7,1)
Placebo SC ALXN1210 ALXN1210 IV Geral (N = 6) SC (N = 24) (N = 12) (N = 42) E n (%) E n (%) E n (%) E n (%) TEAE não 15 5 36 18 21 11 72 34 (81,0) relacionado (83,3) (75,0) (91,7) Grau 1 15 5 38 19 22 11 75 35 (83,3) (83,3) (79,2) (91,7) Grau 2 0 0 0 0 0 0 0 0 Grau 3 0 0 0 0 0 0 0 0 Grau 4 0 0 0 0 0 0 0 0 Grau 5 0 0 0 0 0 0 0 0 Sujeitos com pelo 0 0 0 0 0 0 0 0 menos 1 SAE Sujeitos com TEAE 0 0 0 0 0 0 0 0 que levou à descontinuação Sujeitos com TEAE 0 0 0 0 0 0 0 0 durante a administração da droga do estudoa Mortes 0 0 0 0 0 0 0 0 Observação: Porcentagem (%) é igual a n/N × 100. Grau 1 = leve; Grau 2 = moderado; Grau 3 = grave; Grave 4 = risco de morte ou incapacitante; Grau 5 = morte relacionada a TEAE. TEAE relacionado = TEAE possivelmente relacionado, provavelmente relacionado ou definitivamente relacionado; TEAE não relacionado = TEAE não relacionado ou improvavelmente relacionado. aPara ALXN1210 IV, um TEAE foi considerado como tendo ocorrido durante a administração da droga do estudo se o TEAE ocorresse durante a infusão; para Placebo SC e ALXN1210 SC, um evento adverso foi considerado como tendo ocorrido durante a administração da droga do estudo se o evento adverso ocorresse entre a primeira e última injeção. Abreviações: E = número de eventos; IV = intravenoso; N = número total de sujeitos em risco; n = número de sujeitos com um AE; SC = subcutâneo; SAE = evento adverso sério; TEAE = evento adverso emergente do tratamento.
[0401] No total, 75 TEAEs foram relatados para 35 sujeitos. Por todos os grupos de tratamento, os TEAEs mais frequentemente relatados foram nasofaringite (23/42 sujeitos, 54,8%) e cefaleia (7/42 sujeitos, 16,7%). Todos os TEAEs estão resumidos pela classe de sistema de órgãos (SOC) e Terminologia Típica pelo tratamento na Tabela 23. Tabela 23: Eventos Adversos Emergentes do Tratamento - Tabela de Frequência pela Classe de Sistema de Órgãos e Terminologia Típica (Conjunto de Segurança) Classe de sistema Placebo ALXN1210 ALXN1210 IV Geral de órgãos SC SC (N = 12) (N = 42) primária (N = 6) (N = 24) Terminologia E n (%) E n (%) E n (%) E n (%) típica Sujeitos com 15 5 38 19 22 11 (91,7) 75 35 (83,3) TEAEs (83,3) (79,2) Infecções e 10 5 18 14 9 8 (66,7) 37 27 (64,3) infectações (83,3) (58,3) Nasofaringite 7 5 13 11 8 7 (58,3) 28 23 (54,8) (83,3) (45,8) Infecção do trato 1 1 1 1 (4,2) 0 0 2 2 (4,8) respiratório inferior (16,7) Balanite por 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) Candida Celulite 0 0 0 0 1 1 (8,3) 1 1 (2,4) Gastroenterite 1 1 0 0 0 0 1 1 (2,4) (16,7) Tinea pedis (“pé de 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) atleta”) Infecção do trato 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) respiratório superior Infecção do trato 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) respiratório superior viral Candidíase 1 1 0 0 0 0 1 1 (2,4) vulvovaginal (16,7) Distúrbios do 3 3 5 3 (12,5) 4 4 (33,3) 12 10 (23,8) sistema nervoso (50,0) Cefaleia 3 3 2 1 (4,2) 3 3 (25,0) 8 7 (16,7) (50,0) Enxaqueca 0 0 2 2 (8,3) 1 1 (8,3) 3 3 (7,1) Enxaqueca com 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) aura
Classe de sistema Placebo ALXN1210 ALXN1210 IV Geral de órgãos SC SC (N = 12) (N = 42) primária (N = 6) (N = 24) Terminologia E n (%) E n (%) E n (%) E n (%) típica Distúrbios 2 1 4 3 (12,5) 3 3 (25,0) 9 7 (16,7) gastrointestinais (16,7) Diarreia 1 1 2 1 (4,2) 1 1 (8,3) 4 3 (7,1) (16,7) Náusea 1 1 0 0 1 1 (8,3) 2 2 (4,8) (16,7) Dispepsia 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) Dor de dente 0 0 0 0 1 1 (8,3) 1 1 (2,4) Vômitos 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) Dsitúrbios 0 0 3 3 (12,5) 3 3 (25,0) 6 6 (14,3) musculoesquelético s e do tecido conjuntivo Dor 0 0 1 1 (4,2) 1 1 (8,3) 2 2 (4,8) musculoesquelética Mialgia 0 0 1 1 (4,2) 1 1 (8,3) 2 2 (4,8) Dor nas costas 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) Dor nas 0 0 0 0 1 1 (8,3) 1 1 (2,4) extremidades Distúrbios 0 0 3 3 (12,5) 3 3 (25,0) 6 6 (14,3) respiratórios, torácicos e mediastinais Tosse 0 0 0 0 2 2 (16,7) 2 2 (4,8) Congestão nasal 0 0 1 1 (4,2) 1 1 (8,3) 2 2 (4,8) Sinusite alérgica 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) Dor orofaríngea 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) Complicações por 0 0 2 2 (8,3) 0 0 2 2 (4,8) procedimentos, intoxicações e lesões Mordida de 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) artrópode Luxação de junta 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) Distúrbios gerais e 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) condições do sítio de administração Hematoma no sítio 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) da punção venosa
Classe de sistema Placebo ALXN1210 ALXN1210 IV Geral de órgãos SC SC (N = 12) (N = 42) primária (N = 6) (N = 24) Terminologia E n (%) E n (%) E n (%) E n (%) típica Distúrbios do 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) sistema imunológico Alergia sazonal 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) Distúrbios da pele e 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) tecidos subcutâneos Exantema popular 0 0 1 1 (4,2) 0 0 1 1 (2,4) Observação: Porcentagem (%) é igual a n/N × 100. Cada sujeito é contado apenas uma vez para um determinado SOC e Terminologia Típica, independentemente do número real de eventos adversos ocorridos. A classificação da SOC e da Terminologia Típica é de acordo com o MedDRA v20.0. Abreviações: E = número de eventos; IV = intravenoso; MedDRA = Medical Dictionary for Regulatory Activities; N = número total de sujeitos em risco; n = número de sujeitos com um evento adverso; SC = subcutâneo; SOC = Classe de Sistema de Órgãos (“System Organ Class”); TEAE = evento adverso emergente do tratamento.
[0402] A maioria dos TEAEs (72/75 dos TEAEs, 96%) foram considerados não relacionados ao tratamento com ALXN1210. Dentre os grupos de tratamento, 3/42 (7,1%) dos sujeitos relataram 3 TEAEs que foram avaliados pelo Investigador como relacionados ("possivelmente relacionados") ao tratamento com ALXN1210 e Grau 1 (leve): (1) infecção do trato respiratório superior em um sujeito do grupo ALXN1210 SC (2), enxaqueca em um sujeito no ALXN1210 SC e (3) dor de cabeça em um sujeito no grupo ALXN1210 IV. Todos os 75 TEAEs foram classificados como Grau 1 (leve). Nenhum sujeito morreu, teve SAEs ou interrompeu o tratamento com a droga do estudo ou estudo devido a um TEAE.
[0403] Em geral, os valores médios para hematologia, coagulação, química do sangue, urinálise e química da urina estavam dentro dos intervalos de referência e não havia tendências aparentes na alteração média da avaliação inicial.
[0404] A maioria dos sujeitos entrou no estudo com valores normais (ou seja, dentro dos respectivos intervalos de referência) para parâmetros de hematologia, urinálise, coagulação, química do sangue e química da urina. Não foram observadas tendências aparentes nos deslocamentos ao longo dos grupos de tratamento. O deslocamento do normal na avaliação inicial para valores anormais (Grau 1 [leve] ou Grau 2 [moderado]) durante o estudo foi observada em alguns parâmetros laboratoriais, que, no entanto, não foram considerados clinicamente significativos. A maioria dos deslocamentos foi transitória e resolvida durante o estudo.
[0405] O deslocamento para os valores anormais de Grau 3 foi relatado em 3 sujeitos no grupo ALXN1210 SC durante o estudo. Nenhum dos deslocamentos para os valores anormais de Grau 3 foram relatados como AEs.
[0406] Primeiro, foi relatada uma diminuição na contagem de neutrófilos em um sujeito. A contagem de neutrófilos nesse sujeito na avaliação inicial era de 3,77 × 10^9/L. A contagem de neutrófilos avaliada no dia 43 foi de 0,95 × 10^9/L (intervalo normal: 2,0 a 7,5 × 10^9/L). A contagem de neutrófilos estava no intervalo normal no dia 57.
[0407] Um aumento nos níveis de potássio (intervalo normal: 3,5 a 5,1 mmol/L) foi relatado em dois sujeitos. Em 1 sujeito com uma avaliação inicial de potássio de 4,5 mmol/L, o nível avaliado de potássio no dia 150 foi de 6,1 mmol/L. Um nível repetido de potássio estava no intervalo normal no mesmo dia (consulta não programada). Em outro sujeito com um nível na avaliação inicial de potássio de 4,6 mmol/L, o nível avaliado de potássio no dia 90 foi de 6,4 mmol/L. Esse sujeito apresentou valores anormais de potássio na Triagem (variando de 5,2 a 6,2 mmol/L durante diferentes consultas de triagem) e na maioria das consultas do estudo. Aumentos nos níveis de potássio foram transitórios; os valores registrados estavam dentro do intervalo normal no dia 150 e no dia 200.
[0408] Não houve alterações observáveis desde a avaliação inicial nas medições de sinais vitais nem anormalidades clinicamente significativas nos sinais vitais, consistentemente observadas para sujeitos individuais.
[0409] Nenhum sujeito apresentou achados no exame físico que apresentassem significado clínico além daqueles relatados como AEs. Não houve alterações médias notáveis da avaliação inicial nos resultados de monitoramento de ECG ou telemetria.
[0410] Alterações nos intervalos QT foram corrigidas usando a fórmula de Fridericia (QTcF). Em um sujeito no grupo SC placebo, o intervalo QT médio > 500 ms foi observado na Triagem (510,0 ms) e no Dia 2 (508,7 ms), Dia 150 (516,6 ms) e Dia 200 (612,9 ms). O intervalo médio QTcF no mesmo sujeito foi 449,7 ms, 443,7 ms, 451,9 ms e 501,3 ms na Triagem e nos dias 2, 150 e 200, respectivamente. O aumento no intervalo QT e QTcF não foi considerado clinicamente significativo nesta paciente do sexo feminino em tratamento placebo. Essas alterações também não foram relatadas como um AE. Não foram observadas alterações notáveis da avaliação inicial no intervalo médio QT e QTcF durante o estudo.
[0411] As avaliações do sítio de infusão ou injeção foram realizadas dentro de 15 minutos do SOI e ± 15 minutos aos 30 minutos, 2 h, 4 h, 8 h e no Dia 2 (48 h), Dia 3 (72 h, total de 6 avaliações). Indurações ou reações < 1 cm não foram consideradas como um AE a menos que persistissem por mais de 24 h. O eritema foi observado 30 minutos após o EOI em 5/24 sujeitos do grupo ALXN1210 SC e em 1 sujeito, 2/4 dos sítios de injeção apresentaram eritema mínimo (3 mm) 2 horas após a injeção e nenhum nos últimos momentos. Induração ou inchaço mínimos (10 mm) foram relatados 30 minutos após EOI em 1/24 dos sujeitos do grupo ALXN1210 SC que não foram observados nas últimas avaliações. No entanto, nenhum deles atendeu aos critérios definidos no protocolo para ser considerado um AE. A dor no sítio da infusão ou injeção foi classificada por sujeitos utilizando VAS (0 a 100 mm). Para a maioria das infusões e injeções, a dor no sítio da infusão foi classificada como 0 mm em todas as avaliações. Dois sujeitos no grupo SC relataram dor transitória de 3-5 mm no dia 1, e três sujeitos no grupo IV relataram dor mínima (1-5 mm) após a infusão.
9. Conclusões de segurança
[0412] Todos os sujeitos que receberam a dose única da droga do estudo (placebo SC, ALXN1210 SC ou ALXN1210 IV) foram incluídos no conjunto de segurança (N = 42). Nos três grupos de tratamento, 35/42 indivíduos (83,3%) experimentaram 75 TEAEs. Apenas 3/75 TEAEs (4%) foram considerados relacionados ao ALXN1210,
enquanto 72/75 (96%) foram considerados não relacionados ao tratamento com ALXN1210. Todos os TEAEs foram leves (Grau 1) e foram resolvidos ao longo do estudo. A maioria dos TEAEs não necessitou de medicação e nenhum sujeito a qualquer momento necessitou de intervenções não farmacológicas. Os TESEs mais frequentemente relatados foram nasofaringite (23/42 sujeitos, 54,8%) e dor de cabeça (7/42 indivíduos, 16,7%).
[0413] Não houve óbitos ou SAEs durante o estudo. Nenhum dos TEAEs relatados levou à descontinuação do tratamento com a droga do estudo ou retirada do sujeito do estudo. Em geral, não houve alterações clinicamente significativas nos parâmetros laboratoriais, sinais vitais, exames físicos, ECG ou telemetria durante o estudo ou acompanhamento. Não houve evidência clínica de hipersensibilidade durante ou após qualquer dose única de injeção SC ou infusão IV. Não foram observados sinais ou sintomas clínicos associados a reação alérgica ou hipersensibilidade em sujeitos com resultados positivos para ADA.
10. Discussão e Conclusões Gerais
[0414] O objetivo deste estudo de Fase 1 foi avaliar a segurança, tolerabilidade, PK, PD e imunogenicidade de uma dose única de ALXN1210 SC 400 mg em comparação com uma dose única de ALXN1210 IV 400 mg ou injeção placebo SC em sujeitos saudáveis. Um total de 42 sujeitos foram randomizados e receberam a droga do estudo: placebo SC (n = 6); ALXN1210 SC (n = 24); e ALXN1210 IV (n = 12).
[0415] A administração de ALXN1210 a uma dose de 400 mg foi bem tolerada por via de administração SC em sujeitos saudáveis. A biodisponibilidade absoluta de ALXN1210 SC, com base na GMR das estimativas de AUC∞ (SC/IV), foi de 60,4% (95% IC: 49,7, 73,3). A média geométrica das estimativas de t½ foi de 31,3 dias e 29,9 dias após a administração de ALXN1210 SC e IV, respectivamente. O grau e duração da resposta PD, conforme avaliado pela concentração sérica de C5 livre e total e hemólise de cRBC, foram dependentes da exposição.
[0416] Anticorpos antidrogas foram relatados em 3/23 (13%) sujeitos e 1/12 (8,3%) sujeitos nos grupos ALXN1210 SC e ALXN1210 IV, respectivamente, com valores de título positivo para ADA variando de <1,0 a 27. A primeira resposta pós-dose foi observada nos dias 29 e 15, para dosagem de SC e IV, respectivamente. Na maioria das amostras positivas para ADA após a administração SC, os ADAs sofreram reação cruzada com o eculizumabe. Nos sujeitos que apresentaram resposta positiva à ADA, não houve sinais ou sintomas clínicos consistentes com reação alérgica ou hipersensibilidade (incluindo anafilaxia). Além disso, nenhum impacto aparente na PK ou PD do ALXN1210 pode ser identificado.
[0417] Não houve preocupações inesperadas de segurança em nenhum dos grupos de tratamento durante o estudo. Nenhum óbito ou SAE ocorreu durante o estudo e nenhum sujeito apresentou TEAE levando à interrupção do tratamento com a droga do estudo ou retirada do sujeito do estudo.
RESUMO DE SEQUÊNCIA SEQ ID NO:1 sequência de aminoácidos de CDR1 de cadeia pesada de eculizumabe (conforme definido de acordo com definição de Kabat-Chothia combinada)
GYIFSNYWIQ SEQ ID NO:2 sequência de aminoácidos de CDR2 de cadeia pesada de eculizumabe (conforme definido de acordo com definição de Kabat)
EILPGSGSTEYTENFKD SEQ ID NO:3 sequência de aminoácidos de CDR3 de cadeia pesada de eculizumabe (conforme definido de acordo com definição de Kabat combinada)
YFFGSSPNWYFDV SEQ ID NO:4 sequência de aminoácidos de CDR1 de cadeia leve de eculizumabe (conforme definido de acordo com definição de Kabat)
GASENIYGALN SEQ ID NO:5 sequência de aminoácidos de CDR2 de cadeia leve de eculizumabe (conforme definido de acordo com definição de Kabat)
GATNLAD SEQ ID NO:6 sequência de aminoácidos de CDR3 de cadeia leve de eculizumabe (conforme definido de acordo com definição de Kabat)
QNVLNTPLT SEQ ID NO:7 sequência de aminoácidos de região variável de cadeia pesada de eculizumabe
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFSNYWIQWVRQAPGQGLEWM GEILPGSGSTEYTENFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARY
FFGSSPNWYFDVWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:8 sequência de aminoácidos de região variável de cadeia leve de eculizumabe, ravulizumabe e anticorpo BNJ421
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCGASENIYGALNWYQQKPGKAPKLLIYGA TNLADGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNVLNTPLTFGQGTK
VEIK SEQ ID NO:9 sequência de aminoácidos de região constante de cadeia pesada de eculizumabe e anticorpo BNJ421
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKC CVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKV SNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCS
VMHEALHNHYTQKSLSLSLGK SEQ ID NO:10 sequência de aminoácidos da cadeia pesada inteira de eculizumabe
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFSNYWIQWVRQAPGQGLEWM GEILPGSGSTEYTENFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR YFFGSSPNWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCL VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTY T CNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLT VLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTV
DKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK SEQ ID NO:11 sequência de aminoácidos da cadeia leve inteira de aculizumabe, ravulizumabe e anticorpo BNJ421
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCGASENIYGALNWYQQKPGKAPKLLIYG ATNLADGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQNVLNTPLTFGQ GTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDN ALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPV
TKSFNRGEC SEQ ID NO:12 sequência de aminoácidos de região variável de cadeia pesada ravulizumabe e anticorpo BNJ421
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGHIFSNYWIQWVRQAPGQGLEW MGEILPGSGHTEYTENFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYC
ARYFFGSSPNWYFDVWGQGTLVTVSS SEQ ID NO:13 sequência de aminoácidos de região constante de cadeia pesada de ravulizumabe
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVER KCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPE VQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGN
VFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSLGK SEQ ID NO:14 sequência de aminoácidos da cadeia pesada inteira de ravulizumabe
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGHIFSNYWIQWVRQAPGQGLEWM GEILPGSGHTEYTENFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR YFFGSSPNWYFDVWGQGTLVTVSS ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCL VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTY T CNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISR TPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLT VLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTV
DKSRWQEGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSLGK SEQ ID NO:15 sequência de aminoácidos de variante da região constante de cadeia pesada de IgG2 compreendendo substituições YTE
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVTSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKC CVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVQF NWYVDGMEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKV SNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYP SDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF
SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO:16 sequência de aminoácidos da cadeia pesada inteira de variante de eculizumabe compreendendo região constante de cadeia pesada representada na SEQ ID NO:15 (acima)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFSNYWIQWVRQAPGQGLEWM GEILPGSGSTEYTENFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR YFFGSSPNWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALG CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVTSSNF GTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKP KDTLYITREPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGMEVHNAKTKPREEQ FNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTP PMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS
PGK SEQ ID NO:17 sequência de aminoácidos de CDR1 de cadeia leve de eculizumabe (conforme definido pela definição de Kabat) com substituição de glicina para histidina na posição 8 em relação à SEQ ID NO:4.
GASENIYHALN SEQ ID NO:18 representa uma sequência de aminoácidos de CDR2 de cadeia pesada de eculizumabe, em que a serina na posição 8 em relação à SEQ ID NO:2 é substituída por histidina.
EILPGSGHTEYTENFKD SEQ ID NO:19 representa uma sequência de aminoácidos de CDR1 de cadeia pesada de eculizumabe, em que a tirosina na posição 2 (em relação à SEQ ID NO:1) é substituída por histidina.
GHIFSNYWIQ SEQ ID NO:20 sequência de aminoácidos da cadeia pesada inteira do anticorpo BNJ421
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGHIFSNYWIQWVRQAPGQGLEW MGEILPGSGHTEYTENFKDRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYC ARYFFGSSPNWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALG CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQ T YTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIS RTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVL TVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTV DKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

Claims (31)

REIVINDICAÇÕES
1. Solução aquosa estável caracterizada pelo fato de que compreende: (a) um anticorpo anti-C5 numa concentração de cerca de 100 mg/mL, em que o anticorpo anti-C5 compreende uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5, e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6; (b) cerca de 50 mM de Tampão Fosfato; (c) cerca de 5% de sacarose; e (d) cerca de 25 mM de Arginina.
2. Solução aquosa estável caracterizada pelo fato de que compreende: (a) um anticorpo anti-C5, em que o anticorpo anti-C5 compreende uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:18, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5, e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6; (b) cerca de 50 mM de Tampão Fosfato; (c) cerca de 5% de sacarose; (d) cerca de 0,05% de Polissorbato 80; e (e) cerca de 25 mM de Arginina.
3. Solução aquosa estável, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um surfactante.
4. Solução aquosa estável, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que o surfactante tem cerca de Polissorbato 80 a 0,05%.
5. Solução aquosa estável, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-C5 está em uma concentração de cerca de 100 mg/mL.
6. Solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-C5 compreende ainda uma região constante Fc humana variante que se liga ao receptor Fc neonatal humano (FcRn), em que a região constante Fc CH3 humana variante compreende as substituições Met-429-Leu e Asn-435-Ser nos resíduos correspondentes à metionina 428 e asparagina 434 de uma região constante Fc de IgG humana nativa, cada um na numeração EU.
7. Solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-C5 compreende uma região variável de cadeia pesada representada na SEQ ID NO:12 e uma região variável de cadeia leve representada na SEQ ID NO:8.
8. Solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-C5 compreende uma região constante de cadeia pesada representada na SEQ ID NO:13.
9. Solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-C5 compreende um polipeptídeo de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO: 14 e um polipeptídeo de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO: 11.
10. Solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-C5 é ALXN1210 (ravulizumabe).
11. Solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o pH da solução está entre
7,2 e 7,6.
12. Solução aquosa estável, de acordo com a reivindicação 11, caracterizada pelo fato de que o pH da solução é 7,4.
13. Solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a solução é estéril.
14. Solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-C5 permanece pelo menos 97% monomérico durante o armazenamento de 2°C a 8°C por pelo menos seis meses conforme determinado por SEC-HPLC.
15. Solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-C5 permanece pelo menos 97% monomérico durante o armazenamento de 2°C a 8°C por pelo menos um ano conforme determinado por SEC-HPLC.
16. Solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que menos que 3% do anticorpo anti-C5 na solução está agregado conforme determinado por SEC-HPLC.
17. Solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que menos que 2% do anticorpo anti-C5 na solução está agregado conforme determinado por SEC-HPLC.
18. Solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que menos que 1% do anticorpo anti-C5 na solução está agregado conforme determinado por SEC-HPLC.
19. Solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que, durante o armazenamento de 2°C a 8°C por pelo menos seis meses, o anticorpo anti-C5 retém pelo menos 90% de sua atividade de ligação a C5, em comparação ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento.
20. Solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que, durante o armazenamento de 2°C a 8°C por pelo menos seis meses, o anticorpo anti-C5 retém pelo menos 95%
de sua capacidade de inibir a hemólise, em comparação ao anticorpo anti-C5 antes do armazenamento.
21. Solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a solução é adequada para administração subcutânea.
22. Solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-21, caracterizada pelo fato de que a solução é adequada para administração intravenosa.
23. Método para produção de uma solução de anticorpo concentrada estável compreendendo um anticorpo anti-C5 compreendendo uma CDR1 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:23, uma CDR2 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:19, uma CDR3 de cadeia pesada compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:3, uma CDR1 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:4, uma CDR2 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:5, e uma CDR3 de cadeia leve compreendendo a sequência de aminoácidos representada na SEQ ID NO:6, numa concentração de 100 mg/mL, 50 mM de Tampão Fosfato, 5% de sacarose; e 25 mM de Arginina, sendo o método caracterizado pelo fato de que compreende: i) fornecer uma primeira solução aquosa compreendendo o anticorpo anti- C5, com a primeira solução aquosa tendo uma primeira formulação e compreendendo não mais que 10 mg/mL do anticorpo anti-C5; ii) submeter a primeira solução aquosa à diafiltração em uma formulação compreendendo 50 mM de Tampão Fosfato, 5% de sacarose, e 25 mM de Arginina, em pH 7,4 para, desse modo, produzir uma segunda solução aquosa, em que a segunda solução aquosa tem uma segunda formulação como resultado da diafiltração; e iii) concentrar a segunda solução aquosa para produzir uma solução de anticorpo concentrada estável compreendendo 100 mg/mL do anticorpo anti-C5, 50 mM de Tampão Fosfato, 5% de sacarose; e 25 mM de Arginina.
24. Método de tratamento de um paciente humano com uma condição associada ao complemento, caracterizado pelo fato de que compreende a administração, ao paciente, da solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-21, em uma quantidade eficaz para tratar a condição associada ao complemento.
25. Método, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que a condição associada ao complemento é selecionada do grupo consistindo em artrite reumatoide, síndrome do anticorpo antifosfolípide, nefrite lúpica, lesão de isquemia-reperfusão, síndrome hemolítico-urêmica atípica (aHUS), síndrome hemolítico-urêmica típica, hemoglobinúria paroxística noturna (PNH), doença do depósito denso, neuromielite óptica, neuropatia motora multifocal, esclerose múltipla, degeneração macular, síndrome HELLP, aborto espontâneo, púrpura trombocitopênica trombótica, vasculite Pauci-imune, epidermólise bolhosa, aborto recorrente, lesão cerebral traumática, miocardite, um distúrbio cerebrovascular, um distúrbio vascular periférico, um distúrbio renovascular, um distúrbio vascular mesentérico/entérico, vasculite, nefrite na púrpura de Henoch-Schönlein, vasculite associada ao lúpus eritematoso sistêmico, vasculite associada à artrite reumatoide, vasculite por imunocomplexos, doença de Takayasu, cardiomiopatia dilatada, angiopatia diabética, doença de Kawasaki, embolia gasosa venosa, reestenose após colocação de stent, aterectomia rotacional, angioplastia coronária transluminal percutânea, miastenia gravis, doença por aglutininas a frio, dermatomiosite, hemoglobinúria paroxística ao frio, síndrome antifosfolípide, doença de Graves, aterosclerose, mal de Alzheimer, sepse por resposta inflamatória sistêmica, choque séptico, lesão da medula espinhal, glomerulonefrite, rejeição de transplante, tireoidite de Hashimoto, diabetes tipo I, psoríase, pênfigo, anemia hemolítica autoimune, púrpura trombocitopênica idiopática, síndrome de Goodpasture, doença de Degos, e síndrome antifosfolípide catastrófica.
26. Método, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que a condição associada ao complemento é a síndrome hemolítico-urêmica atípica
(aHUS).
27. Método, de acordo com a reivindicação 24, caracterizado pelo fato de que a condição associada ao complemento é a hemoglobinúria paroxística noturna (PNH).
28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24-26, caracterizado pelo fato de que a solução aquosa estável é administrada por via subcutânea ao paciente.
29. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24-26, caracterizado pelo fato de que a solução aquosa estável é administrada por via intravenosa ao paciente.
30. Kit terapêutico caracterizado pelo fato de que compreende: (i) a solução aquosa estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-21, e (ii) meios para a administração da solução aquosa estável a um ser humano.
31. Kit terapêutico, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que o meio é uma seringa.
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