BR112019024953A2

BR112019024953A2 - Agente, alimento ou medicamento para melhorar a função cerebral

Info

Publication number: BR112019024953A2
Application number: BR112019024953-2A
Authority: BR
Inventors: Soma Gen-Ichiro; Gen-Ichiro Soma; Inagawa Hiroyuki; Hiroyuki Inagawa; Kohchi Chie; Chie Kohchi; Kobayashi Yutaro; Yutaro KOBAYASHI
Original assignee: Control Of Innate Immunity Technology Research Association; National University Corporation Kagawa University; Biomedical Research Group Inc.; Macrophi Inc.
Priority date: 2017-05-28
Filing date: 2017-12-04
Publication date: 2020-06-23
Also published as: KR20200011490A; US11278564B2; CN110691599B; EP3643314B1; WO2018220886A1; JP2018199643A; EP3643314A1; JP2021169506A; IL270936B1; CN110691599A; EP3643314C0; IL270936B2; EP3643314A4; JP6998133B2; KR20220025912A; US20200179436A1; IL270936A

Abstract

Um agente ou composição alimentar para melhorar a função cerebral, prontamente disponível, tendo um efeito supressivo na deposição cerebral de ¿ß ou o efeito de melhora na função de aprendizagem é provido com base na descoberta de que, como resultado da administração oral de Pantoea LPS a camundongos modelo de doença de Alzheimer e estudo dos efeitos, a administração oral de LPS de Pantoea diminuiu significativamente o acúmulo do peptídeo de ¿ß no cérebro e melhorou a função de aprendizagem.

Description

1 / 15 AGENTE, ALIMENTO OU MEDICAMENTO PARA MELHORAR A

FUNÇÃO CEREBRAL [Campo Técnico]

[001] A presente invenção se refere a um agente, alimento e medicamento para melhorar a função cerebral que contém um lipopolissacarídeo. [Fundamentos da Técnica]

[002] Nos últimos anos no Japão, enquanto a população total está em declínio, a população idosa de 65 anos ou mais tem aumentado ano após ano. Segundo o Ministério da Saúde, Trabalho e Bem-Estar, a população idosa (2015) excedeu 33 milhões e diz-se que o percentual da população idosa atingiu 26,7%. No que se refere à demência, que é um distúrbio do idoso, atualmente o número de pacientes no Japão excede 4,60 milhões e deve chegar a 700 milhões e constituir um em cada cinco idosos até 2025. Aproximadamente 60% dos pacientes com demência têm doença de Alzheimer, aproximadamente 20% têm demência vascular e o restante inclui pacientes com vários distúrbios demenciais, como a demência por corpos de Lewy. Os sintomas clínicos da doença de Alzheimer são distúrbios da função cognitiva, como distúrbios da memória, distúrbios da fala e sintomas psiquiátricos, distúrbios comportamentais e etc. Como uma característica patológica da doença de Alzheimer, estruturas abnormais, como placas senis, também chamadas de placas amiloides, emaranhados neurofibrilares depositam-se sobre uma ampla faixa do córtex cerebral e do hipocampo. As proteínas β amiloides (doravante denominadas simplesmente “Aβ”) são componentes principais das placas amiloides e, em particular, um peptídeo de Aβ constituído por 42 resíduos (doravante denominado “Aβ1- 42”) tem alta agregabilidade e é conhecido por desempenham um papel crítico na deposição de amiloides. Estes últimos são constituídos por proteínas tau excessivamente fosforiladas. Atualmente, a hipótese amiloide é geralmente aceita como uma

2 / 15 cascata patológica da doença de Alzheimer. A sequência temporal é tal que o acúmulo excessivo de Aβ causa a formação de placas amiloides e o acúmulo de proteínas tau (emaranhados neurofibrilares) e subsequentemente conduz à neurodegeneração e morte celular neuronal (NPL 1). Embora Aβ apareça com o envelhecimento mesmo no cérebro de pessoas saudáveis, considera-se que o acúmulo de Aβ é promovido por uma mutação genética de uma enzima envolvida na produção de Aβ ou pela diminuição da atividade de um sistema de decomposição de Aβ. Embora os agentes terapêuticos que alvejem um neurotransmissor ou um receptor do mesmo (inibidores da acetilcolinesterase e antagonistas do receptor do ácido N-metil-D-aspártico) tenham sido desenvolvidos como agentes terapêuticos para a doença de Alzheimer, esses não são agentes terapêuticos que tratam alterações patológicas tais como acúmulo de Aβ, agregação de proteínas tau, e, portanto, não são agentes terapêuticos fundamentais capazes de interromper o desenvolvimento da doença de Alzheimer.

[003] Por outro lado, a micróglia, que é um dos macrófagos no tecido cerebral, tem sido encontrada para desempenhar papéis importantes na manutenção da homeostase do cérebro, tais como a reparação do tecido danificado, a remoção fagocítica de produtos residuais no cérebro. A micróglia expressa os receptores Aβ e realiza a ingestão e decomposição de Aβ por meio da resposta fagocítica, e, portanto, a prevenção da doença de Alzheimer causada pelo acúmulo excessivo de Aβ pode ser antecipada pela ativação da capacidade fagocítica de Aβ da micróglia. Nos últimos anos, a busca por um composto tendo uma ação que permita a ativação da capacidade fagocítica de Aβ da micróglia avançou e os efeitos de constituintes alimentares, tais como amidas do ácido oleico (NPL 2) e peptídeos (PTL 1) em sistemas experimentais in vitro, foram relatados.

[004] Aliás, um lipopolissacarídeo é um componente da membrana externa das paredes celulares de bactérias gram-negativas. O termo

3 / 15 endotoxina foi dado em 1892 a uma substância tóxica derivada de Vibrio cholerae e a essência da endotoxina foi relatada como lipopolissacarídeo em 1954 (NPL 3). No entanto, foi relatado nos últimos anos que a injeção intracraniana de um lipopolissacarídeo nos camundongos modelo da doença de Alzheimer induz a ativação da micróglia e suprime a deposição intracerebral de Aβ (NPL 4). Da mesma forma, foi relatado que a injeção intraperitoneal de MPL (monofosforil lipídeo A) que é um derivado do lipídeo A, que é um componente de um lipopolissacarídeo, e aprovada como um adjuvante (imunoestimulante) exibe uma ação supressora da deposição intracerebral de Aβ e um ação de melhora da função de aprendizagem (NPL 5). Por outro lado, tem sido relatado que, com a ingestão oral ou percutânea de um lipopolissacarídeo, uma toxicidade clara não é evidente e um efeito de melhora contra distúrbios, como hiperlipidemia, alergias, é exibido (NPL 6). Soma et al. descobriu que um desses lipopolissacarídeos é um lipopolissacarídeo derivado de uma bactéria simbiótica do trigo Pantoea agglomerans (doravante denominada simplesmente “Pantoea LPS”) e relatou um método de fermentação e cultura para obter um lipopolissacarídeo que é seguro mesmo se adicionado a um cosmético, um alimento, um alimento funcional etc. (PTL 2). Fukasaka et al. relatou que em um experimento com animais, o Pantoea LPS administrado por via sublingual atua como adjuvante e aumenta a imunoatividade de uma membrana mucosa (NPL 7). Além disso, Kobayashi et al., examinando usando células primárias de cultura de micróglias derivadas do cérebro de camundongos, relatou que o Pantoea LPS aumenta a capacidade fagocítica em relação ao Aβ1-42 (NPL 8). Aliás, um lipopolissacarídeo administrado por via oral dificilmente é absorvido pelo trato digestivo.

Enquanto o amido, por exemplo, é digerido, pois os seres humanos possuem enzimas (amilase e maltase) que digerem o amido (um polissacarídeo macromolecular formado pela ligação α1-4 da glicose) (Wikipedia, Starch), um polissacarídeo de um LPS tem uma estrutura

4 / 15 constituída por três a cinco tipos de hexose ou pentose (Wikipedia, Lipopolysaccharide) e não é digerido, pois os humanos não possuem uma enzima digestiva que pode quebrar a estrutura polissacarídica do LPS. Além disso, no que se refere ao transporte para o cérebro, mesmo que um lipopolissacarídeo seja absorvido no sangue por administração oral, o transporte para o cérebro diminui ainda mais em eficiência devido à presença da barreira hematoencefálica, etc., e então é considerado que um lipopolissacarídeo administrado por via oral chegue ao interior do cérebro. Muito mais, um efeito de supressão da deposição intracerebral de Aβ ou um efeito de melhora da função de aprendizagem pela administração oral de um lipopolissacarídeo não foi relatado até o momento e não é mencionado em nenhuma literatura. [Lista de Citações] [Literatura Patente]

[005] [PTL 1] JP 2016-193865 A [PTL 2] JP 2011-193877 A [Literatura Não Patente]

[006] [NPL 1] J. Hardy et al., Science, 297, 353-356, 2002 [NPL 2] Y. Ano et al., PLOS ONE, 10, e0118512, 2015 [NPL 3] O. Westpal et al., Angewandte Chemie, 66, 407-417, 1954 [NPL 4] D. L. Herber et al., Journal of NeuroImmune Pharmacology, 2, 222-231, 2007 [NPL 5] J. P. Michaud et al., Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 110, 1941-1946, 2013 [NPL 6] C. Kohchi et al., Journal of Bioscience and Bioengineering, 102, 485-496, 2006 [NPL 7] M. Fukasaka et al., PLOS ONE, 10, e0126849, 2015 [NPL 8] Y. Kobayashi et al., Anticancer Research, 36, 3693-

5 / 15 3698, 2016 [NPL 9] J. E. Morley et al., Biochimica et Biophysica Acta, 1822, 650-656, 2012 [NPL 10] J. Mehla et al., Journal of Alzheimer’s Disease, 39, 145-162, 2014 [NPL 11] K. Nakata et al., Nutrition Research and Practice, 5, 435-442, 2011A [Sumário da Invenção] [Problema Técnico]

[007] Um efeito de supressão da deposição intracerebral de Aβ ou um efeito de melhora da função de aprendizagem é considerado útil para a prevenção da demência, especialmente doença de Alzheimer. A presente invenção foi feita em vista de tal fundamento e um objetivo da mesma é prover um agente, alimento e medicamento para melhorar a função cerebral com um efeito de supressão da deposição intracerebral de Aβ ou um efeito de melhora da função de aprendizagem através de um lipopolissacarídeo que é disponibilizado comparativamente de maneira fácil através do método de cultura de fermentação mencionado acima (PTL 2). [Solução para o Problema]

[008] Os presentes inventores realizaram diligentemente uma pesquisa em um efeito de resolução do problema acima. O Pantoea LPS foi administrado por via oral a camundongos modelo da doença de Alzheimer e os efeitos foram estudados. Consequentemente, os inventores descobriram que a quantidade de acúmulo de peptídeo intracerebral Aβ diminui significativamente e a função de aprendizagem é melhorada pela administração oral de Pantoea LPS e completa a presente invenção. Um agente para melhorar a função cerebral da presente invenção é um agente para a doença de Alzheimer que se distingue por conter Pantoea LPS como um componente eficaz.

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[009] Ou seja, a presente invenção tem os seguintes arranjos.

[0010] (1) Um agente, alimento ou medicamento para melhorar a função cerebral, tendo um lipopolissacarídeo constituído por Pantoea LPS como um componente eficaz.

[0011] (2) Um agente, alimento ou medicamento para melhorar a função cerebral de acordo com a reivindicação 1, onde uma função cerebral que é melhorada é uma função cognitiva que se deteriorou devido ao envelhecimento ou a um distúrbio cerebral que acompanha o envelhecimento.

[0012] (3) Um agente, alimento ou medicamento para melhorar a função cerebral de acordo com a reivindicação 1, contendo uma dose eficaz de Pantoea LPS.

[0013] (4) Um agente, alimento ou medicamento para melhorar a função cerebral de acordo com a reivindicação 1, sendo para a prevenção da doença de Alzheimer.

[0014] (5) Um agente, alimento ou medicamento para melhorar a função cerebral de acordo com a reivindicação 1, contendo Pantoea LPS na proporção de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal por unidade de dose diária. [Efeitos Vantajosos da Invenção]

[0015] Pela presente invenção, uma composição, como um agente médico, alimentos tendo efeitos de prevenção da doença de Alzheimer, especialmente um efeito de supressão da deposição intracerebral de Aβ e um efeito de melhora da função de aprendizagem devido ao Pantoea LPS podem ser providos. O Pantoea LPS foi confirmado para segurança da administração oral ou percutânea em formas de alimentos, cosméticos, dietas com animais, etc., e pode, portanto, ser antecipado para efeito preventivo com baixo risco de efeitos colaterais. [Breve Descrição dos Desenhos]

[0016] [FIG. 1] A Fig. 1 mostra os resultados de um teste de treinamento em um teste de labirinto de água. É um gráfico que mostra que,

7 / 15 com cinco dias contínuos de treinamento, o tempo necessário para chegar a uma plataforma foi reduzido com todos os grupos. Não foram encontradas diferença entre os grupos.

[0017] [FIG. 2] A Fig. 2 mostra trajetos de natação representativos em um teste de sonda do teste de labirinto de água. O círculo da linha pontilhada indica a posição na qual uma plataforma foi instalada.

[0018] [FIG. 3] A Fig. 3 mostra os resultados dos tempos durante os quais os camundongos residiam em um quadrante no qual a plataforma foi instalada no teste da sonda do teste de labirinto de água. Os resultados mostram que, embora tenha sido encontrada uma diminuição no tempo de residência com um grupo de PCs que ingeriu uma dieta rica em gordura, a ingestão de Pantoea LPS prolonga o tempo de permanência.

[0019] [FIG. 4A e 4B] As Fig. 4A e 4B mostram quantidades de acúmulo de Aβ (Aβ1-40 e Aβ1-42) em cérebros removidos de camundongos após 18 semanas de criação. Os resultados mostram que, em comparação com um grupo NC, foi encontrado um aumento significativo na quantidade de Aβ1-40 no grupo PC que ingeriu a dieta rica em gordura e que a ingestão de Pantoea LPS diminui significativamente as quantidades de Aβ1-40 e Aβ1-42 em comparação com o grupo PC. [Descrição das Modalidades]

[0020] Um agente e composição alimentar de melhora da função cerebral da presente invenção contém Pantoea LPS.

[0021] Aqui, a menos que especificado de outra forma, “Pantoea LPS” se refere a um lipopolissacarídeo obtido pela cultura de bactérias gram- negativas, simbióticas ao trigo, Pantoea agglomerans, com farinha de trigo, água quente extraindo o lipopolissacarídeo das células bacterianas e removendo sólidos de acordo com um procedimento descrito em PTL 2.

[0022] O agente e alimento de melhora da função cerebral e alimentar da presente invenção são capazes de melhorar disfunções cerebrais, em

8 / 15 especial distúrbios da função cognitiva, devido ao envelhecimento ou distúrbios cerebrais que acompanham o envelhecimento. A doença de Alzheimer, etc., pode ser dada como exemplo de um distúrbio cerebral que acompanha o distúrbio da função cognitiva.

[0023] O Pantoea LPS da presente invenção pode ser aplicado a seres humanos, mamíferos além de seres humanos (animais domésticos, como porcos, gado, ovelhas, cavalos, cães, gatos), pássaros (aves domésticas, como galinhas, perus, patos), etc.

[0024] Uma rota de administração e uma forma de dosagem de uma composição médica da presente invenção podem ser projetadas conforme apropriado, de acordo com a finalidade, sintomas, idade do indivíduo, peso corporal, etc. Exemplos da rota de administração incluem administração oral, administração percutânea, administração bucal, injeção subcutânea, injeção intradérmica, injeção intraperitoneal, administração intramuscular, etc. A administração oral, a administração percutânea ou a administração bucal são preferíveis. Como exemplos de formas de dosagem, podem ser dados pó, grânulos, líquido, cápsula, grânulos finos, pílula, xarope, emulsão, etc. A composição médica é administrável por via oral e é eficaz. Tais formulações podem ser feitas para conter, além do Pantoea LPS, qualquer um dos vários aditivos permitidos como medicamento, por exemplo, um estabilizador, agente de enchimento, emulsificante, extensor, excipiente, ligante, hidratante, desintegrador, tensoativo, agente de suspensão, agente de revestimento, corante, fragrância, agente flavorizante, adoçante, conservante e antioxidante.

[0025] A composição alimentar da presente invenção pode usar o Pantoea LPS como ele é ou usá-lo de acordo com um método convencional para composições alimentares, como a mistura com outro alimento ou componente alimentar. Além disso, no que se refere à sua forma, não há restrições em particular e um estado alimentar normalmente usado, por exemplo, qualquer forma sólida (pó, granular, etc.), pasta, líquido ou em

9 / 15 suspensão é permitido. A composição alimentar da presente invenção pode ser organizada como alimento nutracêutico, alimento para uso específico em saúde, alimento funcional, alimento natural, alimento suplementar nutricional, preparação para beber, refrigerante, bebida alcoólica, suplemento, dieta animal, aditivo para dieta animal, etc.

[0026] Em um caso de ingestão oral, o agente ou a composição alimentar que melhora a função cerebral é preferencialmente formulado(a) de modo a conter Pantoea LPS em uma faixa de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal por dia para um adulto e pode ser administrado em uma dose ou administrado divididamente em várias vezes. Uma dose de 0,3 a 1 mg/kg de peso corporal é preferível e 0,5 a 1 mg/kg de peso corporal é mais preferível. A dose pode ser ajustada conforme apropriado, de acordo com vários fatores, como idade do indivíduo, peso corporal, estado de saúde, método de administração e combinação com outros agentes (ou componentes alimentares). No caso de ingestão por um longo período de tempo para fins profiláticos, a dose pode ser menor do que as faixas acima mencionadas. [Exemplo]

[0027] Embora a presente invenção seja agora descrita mais detalhadamente por meio de exemplos, a presente invenção não se restringe aos seguintes exemplos. [Exemplo 1] Método de teste de administração oral de Pantoea LPS em camundongos modelo da doença de Alzheimer

[0028] Como Pantoea LPS, que foi preparado e refinado de acordo com um método de cultura de fermentação para lipopolissacarídeo desenvolvido por Soma et al. (PTL2) (Lipopolissacarídeo, Pantoea agglomerans <LPS>; Macrophi Inc.) foi usado. Para experimentos, camundongos SAMP8 machos de 12 a 14 semanas de idade (camundongo propenso 8/Ta Slc acelerado por senescência; Japão SLC, Inc.) foram usados como camundongos modelo da doença de Alzheimer e após uma semana de

10 / 15 criação preliminar, os camundongos foram divididos em quatro grupos de acordo com o peso corporal. Uma dieta animal (Dieta de Pesquisa) contendo 35% de gordura foi alimentada e água contendo 0,3 ou 1 mg/kg de peso corporal/dia de Pantoea LPS foi administrada por administração oral por bebida ad libitum. Para um grupo de controle, a dieta animal contendo 35% de gordura ou uma dieta animal (Dieta de Pesquisa) contendo 4% de gordura foi alimentada e a água foi administrada pelo mesmo método. Os camundongos foram criados em um viveiro de temperatura e umidade controladas, sob condições ambientais de alimentação ad libitum, consumo ad libitum e luz por 12 horas/escuridão por 12 horas. Após a criação por 17 semanas, um teste de labirinto de água descrito abaixo foi realizado por uma semana para avaliar a função de aprendizagem. No dia seguinte ao final do teste de labirinto de água, foi coletado sangue do coração. Os adipócitos brancos do cérebro, fígado e epidídimo foram removidos. O presente experimento com animais foi aprovado pelo Comitê de Experimentos com Animais da Universidade de Kagawa.

[0029] Neste exemplo, camundongos SAMP8 machos foram usados como camundongos modelo da doença de Alzheimer. Os camundongos presentes são usados como camundongos modelo acelerados por senescência devido à exibição de sintomas semelhantes à doença de Alzheimer, tais como aumento na quantidade de deposição intracerebral de Aβ, deterioração da função de aprendizagem com o envelhecimento (NPL 9). Além disso, foi relatado que a ingestão de uma dieta rica em gordura acelera o progresso da doença de Alzheimer ao induzir sintomas semelhantes ao diabetes tipo 2, por exemplo, aumento no nível de glicose no sangue em jejum, aumento no valor de HbA1c etc. (NPL 10).

[0030] No presente exemplo, os camundongos foram divididos nos quatro grupos a seguir.

[0031] (1) Grupo NC: A dieta animal contendo 4% de gordura (dieta

11 / 15 animal com baixo teor de gordura) e água foi provida para a ingestão ad libitum.

[0032] (2) Grupo PC: A dieta animal contendo 35% de gordura (dieta animal rica em gordura) e água foi provida para a ingestão ad libitum.

[0033] (3) Pantoea LPS 0,3 mg/kg de peso corporal/dia: foram providas dieta animal com alto teor de gordura e água contendo Pantoea LPS (0,3 mg/kg de peso corporal/dia) para ingestão ad libitum.

[0034] (4) Pantoea LPS 1 mg/kg de peso corporal/dia: A dieta animal com alto teor de gordura e água contendo Pantoea LPS (1 mg/kg de peso corporal/dia) foram providas para ingestão ad libitum. [Teste de Labirinto de Água] (1) Aparelho

[0035] A água (23±1ºC) foi colocada em uma piscina cilíndrica (diâmetro: 100 cm; profundidade: 40 cm) e uma plataforma transparente (diâmetro: 10 cm) foi instalada para ser afundada 1 cm abaixo da superfície da água. Uma tinta preta disponível comercialmente foi adicionada à água na piscina, de modo que um camundongo nadador não possa reconhecer visualmente a plataforma. Uma câmera digital disponível comercialmente foi instalada diretamente acima da superfície da água da piscina e a natação de cada camundongo foi gravada por vídeo. Os trajetos de natação foram analisados usando um software de análise de imagem, AminalTracker, e de acordo com o método descrito em “Neuroinformatics, 14, 479-481, 2016”. (2) Procedimentos

[0036] No dia anterior ao teste, cada camundongo foi levado a nadar uma vez para se acostumar com a piscina. Conforme os procedimentos, cada camundongo foi deixado por 20 segundos na plataforma fixada 1 cm acima da superfície da água e depois levado a nadar livremente por 30 segundos. Depois disso, o camundongo foi guiado para a plataforma pela mão de um experimentador e deixado lá por 20 segundos. Além disso, ao colocar um

12 / 15 camundongo na piscina, o camundongo foi levado a entrar na água de frente para a parede da piscina e o experimentador moveu-se imediatamente para uma posição não visível do camundongo. No primeiro ao quinto dia, foi realizado treinamento para que cada camundongo memorize a posição da plataforma. O treinamento foi realizado quatro vezes consecutivas por dia. No procedimento de treinamento, cada camundongo foi colocado na piscina a partir de uma posição arbitrária e levado a nadar por 60 segundos e procurar a plataforma instalada 1cm abaixo da superfície da água. O tempo necessário para alcançar a plataforma foi registrado e, se a plataforma não pôde ser alcançada em 60 segundos, o tempo foi registrado como 60 segundos. Além disso, um camundongo que não conseguia alcançar a plataforma a tempo foi guiado para a plataforma pela mão do experimentador. Depois de chegar à plataforma, o camundongo foi deixado lá por 20 segundos e retirado da piscina. Um teste de sonda foi realizado no sexto dia. Para o teste da sonda, a plataforma foi removida da piscina, cada camundongo foi levado a nadar por 60 segundos e os tempos residentes nos respectivos quadrantes da piscina foram medidos. O teste da sonda foi realizado uma vez para cada camundongo.

[0037] O nível de glicose no sangue do sangue foi medido usando um dispositivo de medição do nível de glicose no sangue (Roche Diagnostics) e HbA1c foi medida utilizando um kit de medição de método enzimático (Sekisui Medical). Triglicerídeos, colesterol total, colesterol LDL e colesterol HDL no soro foram medidos usando um kit de medição de método enzimático (Wako Pure Chemical Industries). O LDL oxidado no soro foi medido usando um kit ELISA (Kamiya Biomedical Company). A quantidade de acúmulo de peptídeo intracerebral de Aβ foi medida usando um kit ELISA (Wako Pure Chemical Industries). De acordo com um protocolo em um manual de instruções, uma fração de Aβ foi preparada a partir de cada amostra de cérebro de camundongo removida e Aβ1-42 e um peptídeo de Aβ constituído

13 / 15 por 40 resíduos (Aβ1-40) foram quantificados, respectivamente. Os resultados são expressos por um valor médio e um erro padrão do valor médio (SEM). Além disso, a análise de variância unidirecional foi realizada de acordo com o teste de comparações múltiplas de Tukey-Kramer. Símbolos diferentes indicam que há uma diferença significativa com P <0,05. [Resultados]

[0038] No que se refere ao peso corporal após 18 semanas de criação, embora o grupo PC tenha tido uma diferença significativa em comparação com o grupo NC, o grupo PC não teve diferença significativa em comparação com os grupos de administração de Pantoea LPS. O nível de glicose no sangue em jejum é claramente aumentado no grupo PC em comparação ao grupo NC e diminuído significativamente nos grupos de administração de Pantoea LPS em comparação ao grupo PC. Similarmente, a HbA1c aumentou claramente no grupo PC em comparação com o grupo NC e diminuiu significativamente no grupo Pantoea LPS 1 mg/kg de peso corporal/dia em comparação com o grupo PC. Além disso, o peso do fígado e o peso da gordura branca epididimal foram claramente aumentados no grupo PC em comparação com o grupo NC e verificou-se uma diminuição significativa nos grupos de administração de Pantoea LPS em comparação com o grupo PC (Tabela 1). A partir desses resultados, pode-se entender que, nos camundongos que ingeriram a dieta animal rica em gordura, os sintomas semelhantes ao diabetes tipo 2 (aumento do nível de glicose no sangue, valor de HbA1c etc.) se desenvolveram e a função do metabolismo da glicose é melhorada pela administração de Pantoea LPS.

[0039] Como resultado da análise de lipídios no sangue, foram encontradas reduções claras no colesterol total e no colesterol LDL nos grupos de administração de Pantoea LPS. Verificou-se que o colesterol HDL aumentou claramente no grupo Pantoea LPS 1 mg/kg de peso corporal/dia em comparação ao grupo PC. Além disso, em relação ao LDL oxidado, o grupo

14 / 15 Pantoea LPS 1,0 mg/kg de peso corporal/dia apresentou valores muito mais baixos em comparação ao grupo PC do que o grupo Pantoea LPS 0,3 mg/kg de peso corporal/dia (Tabela 1). A partir desses resultados, pode-se entender que, em camundongos SAMP8 que ingeriram a dieta animal rica em gordura, a administração oral de Pantoea LPS melhora o metabolismo da glicose e o metabolismo lipídico. Até agora, Nakata et al. relatou que, em um teste de administração oral de uma bebida de chá combinada com Pantoea LPS (0,02% p/p) realizada em camundongos modelo com diabetes (KK-Ay), o nível de glicose no sangue em jejum diminuiu significativamente em comparação com um grupo de controle provido com água, e relataram ainda que em um ensaio clínico (ensaio comparativo aleatório cego duplo) da mesma bebida de chá combinada com Pantoea LPS, o colesterol LDL diminuiu e o colesterol HDL aumentou devido à ingestão da bebida (NPL 10). [Tabela 1] Pantoea LPS 0,3 Pantoea LPS 1 NC PC mg/kg de peso mg/kg de peso corporal/dia corporal/dia Peso corporal inicial (g) 30,4±1,6a 30,0±0,9a 28,1±1,2a 28,5±1,5a Peso corporal inicial (g) 37,7±1,5a 44,7±0,8b 41,9±1,5a,b 43,6±1,8a,b Ingestão de alimento (g/dia) 3,6±0,1a 4,0±0,2a 4,1±0,2a 3,9±0,2a Glicose no sangue em jejum 119,0±6,6a 2220,5±6,5b 189,9±6,6c 193,9±5,4c (mg/dL) HbA1c (%) 3,4±0,1a 4,4±0,2b 4,0±0,1a,b 3,8±0,1a Fígado (g) 1,7±0,1a 2,4±0,1b 1,8±0,1a 1,9±0,1a Gordura Epididimal 1,0±0,1a 1,3±0,1b 1,0±0,1a 1,1±0,1a Lipídio Plasmático Colesterol Total 49,5±9,3a 143,8±5,2b 88,6±9,9c 68,1±7,5a,c Colesterol LDL 3,9±1,3a 16,8±4,6b 8,0±2,0a,b 5,2±0,7a Colesterol HDL 44,3±5,5a,b 39,0±4,3b,c 39,0±2,7b,c 54,0±3,8a LDL oxidizado de plasma 186,7±16,7a 407,2±38,1b 342,7±47,6b,c 256,7±14,1a,c

[0040] Embora como resultado da realização do teste de treinamento do teste de labirinto de água, verificou-se que em todos os grupos o tempo necessário para alcançar a plataforma foi reduzido por cinco dias de treinamento, não foram encontradas diferenças entre os grupos (Fig. 1). O teste da sonda foi realizado no dia seguinte ao teste de treinamento. Dados representativos das raias de natação dos camundongos são mostrados para os respectivos grupos na Fig. 2. Com relação ao tempo de residência no

15 / 15 quadrante no qual a plataforma foi instalada, uma clara redução no grupo PC foi encontrada em comparação ao grupo NC. Além disso, o tempo foi comparativamente mais longo no Pantoea LPS 1,0 mg/kg de peso corporal/ dia do que no Pantoea LPS 0,3 mg/kg de peso corporal/dia em comparação ao grupo PC (Fig. 3). A partir dos resultados da avaliação da função de aprendizagem com base no teste de labirinto de água, pode-se entender que uma função cerebral relacionada à função de aprendizagem dos camundongos modelo em desenvolvimento da doença de Alzheimer (acelerada por senescência) é melhorada pela administração oral de Pantoea LPS.

[0041] Como resultado da medição da quantidade de acúmulo intracerebral de Aβ por ELISA, verificou-se que Aβ1-40 foi claramente aumentado no grupo PC em comparação com o grupo NC e foi diminuído significativamente nos grupos de administração de Pantoea LPS em comparação com o grupo PC. Além disso, em relação a Aβ1-42, embora não tenha sido encontrada uma diferença significativa entre o grupo NC e o grupo PC, foram encontradas reduções significativas nos grupos de administração de Pantoea LPS em comparação com o grupo PC (Fig. 4A e 4B). A partir desses resultados, pode-se entender que o Pantoea LPS suprime o acúmulo intracerebral de Aβ para suprimir o início da doença de Alzheimer (deterioração funcional da função de aprendizagem, etc.).

[0042] Todas as publicações, patentes e pedidos de patente citados na presente descrição são incorporados na íntegra como referência aqui.

[0043] Além disso, a descrição, incluindo a descrição, reivindicações e desenhos, do Pedido de Patente Japonês No. 2017-105133 solicitado em 28 de maio de 2017 é aqui incorporada na íntegra como referência.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Agente, alimento ou medicamento para melhorar a função cerebral, caracterizado pelo fato de que tem um lipopolissacarídeo constituído por Pantoea LPS como um componente eficaz.

2. Agente, alimento ou medicamento para melhorar a função cerebral de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que uma função cerebral que é melhorada é uma função cognitiva que se deteriorou devido ao envelhecimento ou a um distúrbio cerebral que acompanha o envelhecimento.

3. Agente, alimento ou medicamento para melhorar a função cerebral de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que contém uma dose eficaz de Pantoea LPS.

4. Agente, alimento ou medicamento para melhorar a função cerebral de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser para a prevenção da doença de Alzheimer.

5. Agente, alimento ou medicamento para melhorar a função cerebral de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que contém Pantoea LPS em uma proporção de 0,1 a 1 mg/kg de peso corporal por unidade de dose diária.