CN114222568A - 用于治疗和缓解疾病的极长链脂肪酸 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于治疗和缓解疾病的方法和组合物。特别地，本发明提供了一种包含极长链脂肪酸的组合物，其用于治疗例如具有存在于特定组织中且在疾病中起到作用的VLCFA的水平的缺乏或异常的对象。特别地，本发明提供了治疗脂肪酸内源性合成能力降低的对象的方法和组合物。

Description

用于治疗和缓解疾病的极长链脂肪酸

技术领域

本发明涉及用于治疗和缓解疾病的方法和组合物。特别地，本发明提供了一种治疗与脂肪酸内源性合成能力降低有关的疾病的方法。

发明背景

在长链多不饱和脂肪酸(LCPUFA)、尤其是长链ω-3脂肪酸(LCn3)中，链长为C20-C22的脂肪酸在文献中最受关注。EPA(二十碳五烯酸)和DHA(二十二碳六烯酸)已成为家喻户晓的名字，用于描述鱼油和其他来源的有价值的ω-3酸。市场上也有来自植物来源的富含α-亚麻酸(ALA)的产品。

最近，链长为C20-C22的长链单不饱和脂肪酸(LCMUFA)已成为科学兴趣的焦点。例如，参见Breivik和Vojnovic的“长链单不饱和脂肪酸组合物及其制备方法”，US9,409,851B2。

在这方面，应当指出，脂质用式X:YnZ描述，其中X是其烷基链中的碳原子数，Y是该链中双键的个数；其中“nZ”是从甲基端基到第一个双键的碳原子数。实际上，双键都是顺式的。在多不饱和脂肪酸中，每个双键被一个亚甲基(-CH₂)与另一个双键隔开。使用该命名法，EPA为C20:5n3；DHA为C22:6n3，ALA为C18:3n3。此外，ω-3脂肪酸的天然来源(例如鱼油)也包含比C20-C22更短和更长的脂肪酸。

为了生产富含EPA和DHA的海洋ω-3-浓缩物，常规的工业流程被设计为通过去除短链脂肪酸以及比C22脂肪酸更大的分子来浓缩C20-C22馏分。这样的方法的例子是分子/短程蒸馏、尿素分馏、萃取和色谱法方法，所有这些方法都可以用于浓缩海洋脂肪酸和衍生自其他来源的类似物质的C20-22馏分。这些方法的综述参见Breivik H(2007)Concentrates，Breivik H(编)，“长链ω-3精油(Long-Chain Omega-3 Specialty Oils)”，The Oily Press，PJ Barnes&Associates，英国布里奇沃特(Bridgwater,UK)，第111-140页。除了ω-3酸以外，海洋油的多不饱和脂肪酸还可以含有少量的ω-6脂肪酸。

对于重要的鱼类来源，如北大西洋鲱鱼和鲭鱼，除了EPA和DHA等ω-3酸以外，C20-C22脂肪酸部分还含有大量C20-C22MUFA。US9,409,851B2中公开了分离C20-C22MUFA和PUFA的程序。

ω-3酸非常容易氧化。为了符合推行低聚/聚合氧化产物的上限的药典和自愿性标准，通常通过例如蒸馏、萃取和类似方法除去链长超过DHA的组分。此外，海洋油的这种较高分子量的组分通常与这种油的不希望的不可皂化的成分(包括胆固醇)以及与有机污染物(如溴化二苯醚)有关。

已知ω-3脂肪酸，尤其是LCPUFA EPA、DHA和n3DPA(n3二十二碳五烯酸，C22:5n3)具有广泛的有益健康效果，因此已知具有不同的用途。这些LCω-3脂肪酸天然存在于鱼类和其他海洋生物中。它们也可以在体内源自ALA，其为一种存在于某些植物油和动物油中的ω-3脂肪酸。然而，身体不足以将ALA转化为LCω-3酸。因此，LCω-3酸通常被称为“必需”脂肪酸。脂肪酸被细胞吸收，在那里它们可以作为合成其他化合物的前体，作为产生能量的燃料，并作为酮体合成的底物。此外，一些细胞合成脂肪酸用于储存或输出。对象吸收的脂肪酸(例如从膳食来源吸收)通常在体内发生改性。此类改性可以包括链延长以产生更长的脂肪酸和/或去饱和产生不饱和脂肪酸。

众所周知，对象可能会出现脂肪酸代谢疾病，这可以用例如高甘油三酯血症(甘油三酯水平过高)或其他类型的高脂血症来描述。其可能是家族性的或获得性的。这些疾病可以被描述为脂肪氧化疾病或脂质储存疾病，是由酶缺陷导致的几种先天性代谢错误中的任一种，所述酶缺陷影响身体氧化脂肪酸以在肌肉、肝和其他细胞类型中产生能量的能力。此外，除了与脂肪酸代谢相关的疾病外，一些对象可能会经历脂肪酸内源性合成能力的降低，例如因为他们从较短的脂肪酸合成较长的脂肪酸的能力降低。因此，这些对象从较短长度的脂肪酸内源性合成长链脂肪酸的能力可能降低。这种内源性合成能力的降低可能存在于特定组织中，这些组织需要这些脂肪酸来维持对象的最佳健康状况。能力的降低可能随着年龄的增长而发展，或者可能在年轻时就已经存在。尤其是在后一种情况下，内源性合成较长脂肪酸的能力降低可能由遗传性疾病引起。

通常建议使用含有传统C20-C22ω-3脂肪酸浓缩物的补充剂来治疗或缓解不同病症的症状。此外，年龄相关性黄斑变性(AMD)、干眼病(DED)、心理健康下降和男性对象的精子质量下降等疾病和病症也已使用传统C20-C22ω-3脂肪酸进行治疗，例如包含高浓度EPA和/或DHA的那些。然而，并非所有对象对这种治疗的反应都令人满意，结果可能会出现矛盾，这取决于对象是通过食用富含鱼类的膳食还是通过服用传统C20-C22浓缩物来摄入ω-3脂肪酸。例如，最近的一篇出版物(Gorusupudi A、Liu A、Hageman GS和Bernstein P(2016)的“人类视网膜极长链多不饱和脂肪酸与膳食脂质生物标志物的关联”(Associations of human retinal very long-chain polyunsaturated fatty acidswith dietary lipid biomarkers)，Journal of Lipid Research 57：499-508)提出了一个尚未解决的悖论：虽然多项流行病学研究表明富含n3LCPUFA的膳食与较低的AMD风险相关，但是两项为期3-5年的“鱼油”补充剂临床试验未能显示对于向晚期AMD的进展的任何影响。

对该悖论的解释可能是错误的假设，即人类膳食通常不摄入极长链多不饱和脂肪酸(VLCPUFA)。如Breivik和Svensen的WO2016/182452所示，野生鱼油含有链长C24及以上的VLCPUFA。另一方面，膳食“鱼油”ω-3补充剂通常是通过浓缩宝贵的长链海洋ω-3脂肪酸并减少链长比EPA(C20)更短和链长比n3DPA和DHA(C22)更长的脂肪酸的量来制备。

类似于Gorusupudi等人关于AMD的发表中的悖论，如上所述，给患有干眼病(DED)的患者补充ω-3酸得到了矛盾的结果。DED，也称为干燥性角膜结膜炎(KCS)，是一种常见的慢性疾病，其特征是眼部不适和视力障碍，降低了生活质量。正如干眼评估与控制(Dry EyeAssessment and Management，DREAM)研究小组(新英格兰医学杂志，2018年4月13日，DOI:10.1056/NEJMoa1709691)近来所述，许多临床医生建议使用ω-3脂肪酸缓解DED症状。然而，大规模DREAM研究得出的结论是，在DED患者中，那些接受ω-3浓缩物补充剂(每天摄入3000mg n3脂肪酸，其为甘油三酯形式的2000mg EPA和1000mg DHA)12个月的人没有比接受安慰剂的人获得显著更好的结果。

与此相反，其他研究表明鱼油对DED有积极影响。例如，在DREAM研究报告的参考文献中列出的一片文章、即Deinema等人的“一项针对两种形式的ω-3补充剂治疗干眼症的随机、双盲、安慰剂对照临床试验”(A randomized,double-masked,placebo controlledclinical trial of two forms of omega-3 supplements for treating dry eyedisease)(Ophthalmology 2017；124:43-52)中显示，使用非浓缩鱼油和虾油作为ω-3来源对DED具有显著的积极作用。

DREAM研究指出，许多临床医生推荐ω-3脂肪酸的膳食补充剂，因为它们具有抗炎活性并且与实质性副作用无关。

在最近发表的关于补充ω-3脂肪酸治疗DED疗效的荟萃分析(Giannaccare等人(2019)，ω-3脂肪酸补充剂治疗干眼症的功效：随机临床试验的荟萃分析，Cornea 38(5)565-573)的讨论部分中，作者指出膳食摄入和补充ω-3脂肪酸对DED的特征和症状的效果仍然值得怀疑。然而，根据研究，包括涉及3363名患者的17项随机临床研究，作者得出结论，补充ω-3脂肪酸能改善DED患者的干眼症状、泪膜稳定性和泪液的产生。另一方面，作者评论观察到的所有结果变量的显著差异性，这意味着研究结果并不一致。

如本发明所公开的，在一些疾病中，对C20-C22ω-3脂肪酸的治疗缺乏反应的原因可能在于，对象从如EPA和DHA内源性合成长链脂肪酸的能力降低，因此无法合成足量的极长ω-3脂肪酸来达到最佳健康状况所需的链长和不饱和度。

与上述LCPUFA类似，VLCPUFA也可以称为必需脂肪酸。不幸的是，若通过化学合成制备VLCPUFA，则这些方法只会产生相较于存在于重要身体组织中的VLCPUFA而言数量有限的VLCPUFA。此外，人们普遍认为VLCPUFA是在相关组织中合成的，而非来自膳食。因此，包含多种脂肪酸(包括VLCPUFA)的相关组合物尚无法商购获得。

基于以上论述，对于对象、特别是对于脂肪酸内源性合成能力降低的那些对象的疾病和病症，需要进行新的替代性治疗。

发明概述

因此，本发明的一个目的在于，提供方法和组合物，其可以用于治疗和缓解与脂肪酸内源性合成能力降低有关的疾病、症状和病症，例如在一种或多种延长酶系统中具有缺陷的那些。

本发明进一步提供包含VLCFA的组合物，其用于治疗可以通过增加特定组织中的VLCFA浓度来改善的疾病、症状和病症。在一个实施方式中，对象具有存在于特定组织中并在疾病中起到作用的VLCFA的水平缺乏或异常。

申请人设想一种或多种延长酶系统和/或其他酶系统中的缺陷可以通过给予天然来源的极长链脂肪酸(VLCFA)来缓解。

附图简要说明

图1-8提供了喂食不同测试饲料的小鼠眼(眼球)组织中不同脂肪酸的含量。

图9-16提供了喂食测试饲料1、2和3的小鼠血浆中表征的不同脂肪酸的含量(μg/g组织)。

图10-24提供了喂食5种不同测试饲料的Salmo salar眼球组织中表征的不同脂肪酸的含量(mg/g组织)。

图25提供了喂食三种不同饲料(植物油、鱼油或植物/鱼油)的大鼠的脑、眼和皮肤组织中表征的VLCPUFA水平。

图26显示了喂食三种不同水平的两种鱼油的大西洋鲑鱼的脑、眼和皮肤磷脂中表征的VLC-PUFA。

图27提供了在培养基中补充了4μM脂质组合物A的ATCC人成纤维细胞的荧光图像，其中创建有划痕，对于不同浓度的脂质组合物A，随着时间的推移，细胞迁移到划痕/伤口闭合处。

图28提供了真皮成纤维细胞系在用脂质组合物B孵育直到约50％融合后的细胞增殖测量。

图29提供了脂质组合物B对划痕闭合率的影响，其中用脂质组合物B孵育人ATCC真皮成纤维细胞，对细胞进行划痕，并且在不同时间点跟踪细胞迁移。

图30显示了鲑鱼壳的细胞迁移，其中将壳置于具有培养基的孔中，用两种不同浓度的脂质组合物B处理并在接下来的几天检查细胞迁移。

图31-33显示了喂食不同饲料的小鼠皮肤组织中一些主要VLC脂肪酸的含量。

图34-37显示了喂食不同饲料的小鼠脑组织中主要VLC脂肪酸的含量。

图38-41显示了喂食不同饲料的小鼠睾丸组织中主要VLC脂肪酸的含量。

图42-43显示了喂食不同饲料的小鼠肝组织PL部分中一些主要VLC脂肪酸的含量。

图44-46显示了喂食不同饲料的小鼠肝组织TAG部分中一些主要VLC脂肪酸的含量。

图47-48显示了喂食不同饲料的小鼠心脏组织PL部分中一些主要VLC脂肪酸的含量。

图49-51显示了喂食不同饲料的小鼠心脏组织TAG部分中一些主要VLC脂肪酸的含量。

图52-54显示了喂食不同饲料的鲑鱼皮肤组织中一些主要VLC脂肪酸的含量。

图55-56显示了喂食不同饲料的鲑鱼脑组织中一些主要VLC脂肪酸的含量。

图57-59显示了喂食不同饲料的鲑鱼肝组织PL部分中一些主要VLC脂肪酸的含量。

图60-62显示了喂食不同饲料的鲑鱼肝组织TAG部分中一些主要VLC脂肪酸的含量。

图63-65显示了喂食不同饲料的鲑鱼心脏组织PL部分中一些主要VLC脂肪酸的含量。

图66-68显示了喂食不同饲料的鲑鱼心脏组织TAG部分中一些主要VLC脂肪酸的含量。

图69显示了大西洋鲑鱼皮肤的显微解剖，其显示了不同的层。

图70显示了鲑鱼皮肤显微解剖的测量，包括黏膜细胞计数、表皮和真皮的厚度以及鳞发育的评估。

图71显示了鱼表皮厚度随时间的变化，其随着时间的推移显示出更成熟的鳞。

图72显示了包含不同浓度的VLCPUFA的饲料喂食的鱼测得的表皮厚度。

图73-74显示了喂食三种不同测试饲料的小鼠皮肤组织中两种VLCMUFA的含量。

图75-76显示了喂食不同测试饲料的小鼠皮肤组织的中性脂质部分中两种VLCMUFA的含量。

图77显示了喂食不同测试饲料的小鼠血浆中C24:1的含量。

具体实施方式

因此，一些对象可能经历脂肪酸内源性合成的能力降低，因为他们从较短的脂肪酸合成较长的脂肪酸的能力降低。因此，这些对象从较短长度的脂肪酸内源性合成较长的脂肪酸(例如链长大于C22的脂肪酸)的能力可能降低。这种内源性合成能力的降低可能存在于特定组织中，这些组织需要这些脂肪酸来维持对象的最佳健康状况。能力的降低可能随着年龄的增长而发展，或者可能在年轻时就已经存在。尤其是在后一种情况下，内源性合成极长链脂肪酸的能力降低可能由遗传性疾病引起。因此，与内源性合成缺陷相关的疾病可能是家族性的或获得性的。

通常推荐用含有C20-C22ω-3脂肪酸浓缩物的组合物来治疗或缓解不同病症的症状，并且此类脂肪酸包括在药物和补充剂中。然而，并非所有对象对治疗(如用高浓度EPA和DHA)的反应都令人满意。原因可能在于，对象的身体不能充分代谢或使用给予的脂肪酸，如用于在体内制备更长的脂肪酸。缺乏延长酶系统或其他酶系统可能是对传统C20-C22ω-3脂肪酸治疗反应降低的原因。因此，申请人意识到，在某些情况下，实际上是极长链脂肪酸(VLCFA)(即链长至少为C24)的存在提供了有益效果。因此，提供有益效果的是通常由施用的长链脂肪酸在体内产生的VLCFA，而酶系统(例如延长酶系统)有效性降低的对象将无法由施用的脂肪酸产生最佳量的有益的VLCFA。

因此，生物有益的PUFA(包括ω-3脂肪酸)并不限于长链脂肪酸，例如EPA、DHA和n3DPA。正如Breivik和Svensen在WO2016/182452中公开的那样，天然油(如鱼油)中只有少量的VLCn3，在目的是提高链长为C20-C22的ω-3-脂肪酸的浓度的传统的海洋ω-3浓缩物的生产过程中，这些和其他极长链脂肪酸被大量去除。因此，在传统ω-3脂肪酸补充剂中，任何极长链脂肪酸都已经被基本去除，并且此类补充剂不适用于获得VLCω-3脂肪酸。

然而，不幸的是，当从天然油(如海洋油，如鱼、甲壳类动物等生物的油、藻油、或高等植物的油)中分离VLCFA时，VLCFA的脂肪酸链长度通常比已知在组织(如健康的眼、男性生育能力、皮肤、表皮和黏膜组织(包括肺和呼吸道)、脑和神经系统)中表现出积极的生物学效应的许多VLCPUFA的链长短。然而，现发现天然油的VLCFA有益于治疗与这些组织相关的各种疾病，并具有令人惊讶的良好效果，如下文所述。VLCPUFA例如存在于与诸如ELOVL4的高表达相关的组织中。

申请人意识到，下文讨论的一种或多种延长酶系统或其他酶系统的缺陷可以通过施用来自天然油(如海油)的极长链脂肪酸(VLCFA)来缓解。不希望限于特定解释：如下文进一步详细讨论的，身体的各种延长酶系统(尤其还有去饱和酶和β-氧化反应)参与多种脂肪酸的体内合成。这包括链长最高达C22的脂肪酸以及VLCn3、VLCn6、VLCMUFA(如n9MUFA)和VLCSFA，导致脂肪酸之间对这些酶的竞争。若这些体内系统中的一种或多种在对象中表现出与具有正常表现系统的对象相比降低的有效性，则可能导致VLCFA的体内合成的一个或多个“瓶颈”。

作为一个简化的例子，我们可以将脂肪酸C22:5n3(n3DPA)视为通过有效性降低的延长酶系统在体内合成C24:5n3的中间体。延长酶系统降低的有效性以及与许多其他脂肪酸对同一系统的竞争将产生“瓶颈”，与具有正常有效延长酶系统的对象相比，导致C24:5n3的合成减少。为了获得示意图结构C(24+2x):5n3的VLCPUFA，降低的C24:5n3浓度(与正常相比)将不得不通过“瓶颈”延长酶系统竞争x个新通道。由于与需要相同有效性降低的延长酶系统的其他脂肪酸竞争，因此与具有最佳延长酶系统的对象相比，对于每一代，VLC脂肪酸C(24+2x):5n3的连续中间体的相对浓度将进一步降低。仅出于说明的目的，若我们假设延长酶系统从C22:5n3(n3DPA)通过C24:5n3到示意性结构C(24+2x):5n3的VLCPUFA的每个(x+1)步骤与最佳情况相比有效性降低50％，结构C32:5n3(x＝4；x+1＝5)的延长的脂肪酸将在体内以(0.5)⁵、即相较于最佳产率而言产率为3％。类似地，若有效性降低到80％，在说明性计算中，C32:5n3将在体内以(0.8)⁵、即相较于最佳产率而言产率为33％，而若有效性降低到20％，在说明性计算中，C32:5n3将在体内以(0.2)⁵、即相较于最佳产率而言产率为0.03％。然而，为了说明，若身体补充了足量的C28:5n3，使得C28:5n3可以作为体内合成C32:5n3(x＝2)的起始材料，类似的与最佳情况相比的相对产率分别为(0.5)²，即25％；(0.8)²，即64％；和(0.2)²，即4％。

上面的计算说明，与来自海洋油的传统长链ω-3浓缩物相比，VLCPUFA组合物(如本文所公开的)可以极大地改善生物活性VLCPUFA的体内合成。

若对象摄入很少或不摄入海洋ω-3脂肪酸(例如从食物中)，则膳食中的主要ω-3脂肪酸预计为C18:3n3(ALA)，这在体内增加了另外两个获得结构C(24+2x):5n3的脂肪酸所需的步骤。此外，需要两个去饱和酶步骤才能达到C(24+2x):5n3中的5个双键，相比之下C18:3n3中是3个。因此，若对象不摄入海洋ω-3脂肪酸(如由于过敏、膳食问题或偏好)，则LCPUFA在相关组织中能够用于进一步延长的程度将会较低。因此，对象可能缺乏LCPUFA。此类对象可以受益于来自本公开的包含VLCFA的组合物的脂肪酸的补充，即使对象具有VLCFA的正常的内源性合成能力也亦是如此。因此，本发明提供了一种包含VLCFA的组合物，其用于治疗可以通过增加特定组织中的VLCFA浓度来改善的对象的疾病或病症。当施用VLCFA的组合物时，脂肪酸被目标身体组织吸收，在那里VLCFA发挥正常组织功能的作用。因此，该组合物用于通过施用VLCFA来预防或治疗疾病，其被转运到目标身体组织，在那里这些VLCFA发挥正常组织功能的作用。

通过将根据本申请的VLCFA组合物施用于对象，可以克服与上述那些类似的“瓶颈”。特别是，对于一种或多种用于合成脂肪酸的体内系统表现出降低的有效性的情况，可以克服这种“瓶颈”。即使对于根据本申请施用的VLCFA与产生所需积极健康效果的那些VLCPUFA相比具有更短的链长和/或含有不同数量的双键的情况，也可以实现患者健康的令人惊讶的高程度缓解。

VLCPUFA通常存在于特定的身体组织中，包括以下组织：眼(眼球、视网膜、来自眼睑睑板腺的睑脂)、精子和睾丸、脑和神经系统、各种表皮和黏膜组织/黏膜(包括肺和呼吸道)。皮脂腺是皮肤中的微小外分泌腺，可以分泌一种称为皮脂的油状或蜡状物质，用于润滑哺乳动物的皮肤和毛发并使其防水。在人类中，它们大量出现在面部和头皮上，但是也出现在除了手掌之外的所有皮肤部位。在眼睑中，睑板腺是一种皮脂腺，可以将一种特殊类型的皮脂分泌到眼泪中。越来越多的证据表明，皮脂脂肪酸在维持皮肤屏障完整性方面发挥作用。如在本申请中所理解的，黏膜或黏性膜是排列在体内各种腔体并覆盖内部器官表面的膜。它由覆盖松散结缔组织层的一层或多层上皮细胞组成。它主要起源于内胚层，并与身体各个开口(例如眼、耳朵、鼻子内部、嘴巴内部、嘴唇、阴道、尿道开口和肛门)处的皮肤连续。一些黏膜分泌粘液，其为粘稠的保护液。膜的功能是阻止病原体和污垢进入体内，并防止身体组织脱水。因此，VLCFA通常存在于各种组织中并在那里发挥作用。未来的研究可能会带来更多关于VLCFA体内合成的知识，这些合成发生在哪些组织中，以及哪些组织和身体功能受益于VLCFA。

如以下实施例所述，给对象施用的VLCPUFA和VLCMUFA被对象的特定身体组织吸收，以提供积极的健康效果。更具体而言，施用的VLCFA被转运到特定组织并被吸收到这些通常存在VLCFA的组织中，并且其中该特定组织在疾病或病症中起作用。因此，本发明提供包含VLCFA的组合物，其用于治疗可以通过增加特定组织中的VLCFA浓度来改善的疾病。发生吸收的特定组织如眼(眼球、视网膜、眼睑睑板腺的睑脂)，精子和睾丸，脑和神经系统，各种表皮和黏膜组织/黏膜，包括肺和呼吸道，心血管系统以及膀胱的组织，泌尿系统和消化系统。

令人惊讶的是，一种或多种酶系统(例如延长酶系统)的缺陷可以通过施用极长链脂肪酸(VLCFA)来缓解。此外，施用的VLCFA被相关组织吸收。术语VLCFA包括VLCPUFA以及VLCn3、VLCMUFA、VLCSA和VLCn6。如本文所用，术语极长链脂肪酸(或VLCFA)旨在表示链长大于22个碳原子的脂肪酸(FA)，即链长至少为C24；术语极长链多不饱和脂肪酸(VLCPUFA)旨在表示链长大于22个碳原子的多不饱和脂肪酸(PUFA)；术语极长链单不饱和脂肪酸(VLCMUFA)旨在表示链长大于22个碳原子的单不饱和脂肪酸(MUFA)；而术语VLCn3旨在表示链长大于22个碳原子的多不饱和ω-3脂肪酸，但应理解，VLCn3代表VLCPUFA的一个亚类。类似地，术语VLCn6旨在表示链长大于22个碳原子的多不饱和ω-6脂肪酸。极长链饱和脂肪酸(VLCSFA)旨在表示链长大于22个碳原子的饱和脂肪酸。因此，本文使用的VLCFA的链长为C24-C40，例如C24-C38，优选C24-32。本文使用的VLCFA的链长为C24-C40，例如C24-C38，优选C24-32。在一些实施方式中，本文使用的VLCFA的链长为C26-C40，例如C26-C38，优选C26-32。在一些实施方式中，本文使用的VLCFA具有大于6个双键，优选7或8个双键，更优选为具有7或8个双键的长度为C28-C32的VLCn3脂肪酸。

极长链脂肪酸通过其链长和不饱和度的变化赋予细胞功能多样性。体内脂肪酸延长发生在三个细胞区室：细胞质、线粒体和内质网(微粒体)。在细胞质中，脂肪酸延长是从头脂肪生成的一部分，涉及乙酰CoA羧化酶和脂肪酸合酶。脂肪酸合酶利用乙酰CoA和丙二酰CoA将脂肪酸延长两个碳。微粒体脂肪酸延长是确定细胞脂质中饱和、单不饱和和多不饱和脂肪酸链长的主要途径。脂肪酸延长的整个反应涉及四种酶的延长酶系统，并利用丙二酰CoA、NADPH和脂肪酰CoA作为底物。该途径涉及一系列参与反应第一步、即缩合反应的酶。已在小鼠、大鼠和人类基因组中表征出七种脂肪酸延长酶亚型(ELOVL#1-7)。这些酶决定了总脂肪酸伸长率。此外，这些酶还显示出不同的底物特异性、组织分布和调节，使其成为细胞脂质组成以及特定细胞功能的重要调节剂。Jump,D.在Methods Mol Biol.2009；579、375-389中描述了测量延长酶活性、分析延长产物和改变细胞延长酶表达的方法。

在体内，VLCPUFA因此由较短的脂肪酸通过脂肪酸链延长而在体内产生，并且对于某些脂肪酸，还尤其通过去饱和、饱和以及β-和ω-氧化反应产生。

综上所述，脂肪酸的延长发生在导致两个碳被添加到脂肪酸的羰基末端的复杂反应中。从这里使用的命名法来看，这意味着在延长之后，ω-酸在延长之后仍然保持为ω-3酸，即脂肪酸C20:5n3(EPA)可以延长为C22:5n3(n3DPA)，其可以再次进一步延长到C24:5n3等。ω-6PUFA、其他PUFA、MUFA和SFA也会发生类似的体内反应。

除了延长之外，还尤其需要产生碳/碳键的体内去饱和反应以及减少链长的步骤。例如，上面提到的C24:5n3可以通过Δ6去饱和酶反应形成C24:6n3，创建双键，其之后通过β-氧化反应去除两个碳，可以得到C22:6n3(DHA)。因此，在必需脂肪酸的生物合成中，延长酶可能与不同的去饱和酶(例如Δ6去饱和酶)交替插入乙基基团，之后形成双键。

本发明的发明人认识到，通过利用根据本发明的进一步包含DHA(C22:6n3)的组合物，可以增强对象对VLCPUFA的内源性合成，因为内源性合成系统从C24:6n3合成C22:6n3的需要减少或完全消除。因此，C24:6n3和/或其生物前体C24:5n3可以在更大程度上用于内源性合成更多长链VLCn3。这意味着根据本发明的VLCPUFA组合物可以在DHA的存在下表现出令人惊讶的增加效果。在一些实施方式中，VLCFA组合物可以有利地包含n3DPA(C22:5n3)，例如为了减少或消除内源性合成系统合成22:5n3的需要和/或提升内源性合成系统从22:5n3合成24:5n3的能力。

如上面讨论的DHA反应那样，各种延长酶、去饱和酶和β-氧化反应也参与其他脂肪酸(包括VLCn3、VLCn6、VLCMUFA(如n9MUFA)和VLCSFA)的体内合成，导致脂肪酸之间竞争这些酶。

如上所述，对于哺乳动物，目前已经表征了七种用于VLCPUFA的延长系统/延长酶(ELOVL1-7)，每种延长酶都表现出特有的底物特异性和组织分布。这意味着一个特定延长酶系统的缺陷将具有通常不能被其他延长酶系统补偿的负面生物学效应。

例如，糖尿病等疾病会影响延长酶和去饱和酶的表达水平。这种对延长酶的影响对ELOVL4非常强，其为一种可以延长VLCPUFA、VLCMUFA和VLCFA的延长酶。

ELOVL4也在胸腺、即淋巴组织中表达，有迹象表明这在免疫系统和信号分子的制备中起作用。

ELOVL4是视网膜中表达量最高的延长酶，可以产生对健康眼很重要的VLCPUFA和VLCSA。ELOVL4的功能障碍可能由衰老引起，导致与年龄相关性黄斑营养不良AMD的发作，由与Stargardt样黄斑营养不良(STGD3)等相关的遗传性疾病引起，以及由糖尿病等代谢疾病引起，其可能导致视力下降和视网膜炎症。

ELOVL4在皮肤中也有重要作用，其产生VLCSA，该VLCSA结合到神经酰胺中，这对于维持皮肤的水屏障而言是必不可少的。角质层是表皮的最外层，由死细胞(角质细胞)组成。这些角质细胞嵌入由神经酰胺、胆固醇和游离脂肪酸组成的脂质基质中。角质层的功能是形成屏障，保护下层组织免受感染、脱水、化学物质和机械压力的影响。在活的角质形成细胞转化为非活的角质细胞的过程中，细胞膜被神经酰胺层所取代，其与结构蛋白的包膜共价连接。这种复合物对皮肤的屏障功能有重要贡献，也被认为具有保持皮肤健康、避免皮肤皱纹以及防止皮肤受到太阳UV辐射的负面影响的重要功能。

内源性生物系统可以用于将VLCFA转化为ω-羟基脂肪酸，包括(O-酰基)ω-羟基FA(OAHFA)。ELOVL4似乎参与VLCω-羟基脂肪酸的合成。Wenmei等人(Wenmei L、SandhoffR、Kono M、Zerfas P、Hoffmann V、Ding B CH、Proia RL和Deng CX，用极长链脂肪酸消耗神经酰胺导致皮肤通透屏障功能缺陷，以及ELOVL4缺陷小鼠的新生儿致死率(Depletion ofceramides with very long chain fatty acids causes defective skin permeabilitybarrier function,and neonatal lethality in ELOVL4 deficient mice)，Int.J.Biol.Sci.2007 3(2):120-128)发现含有ω-羟基极长链脂肪酸(C≥28)的神经酰胺是表皮通透屏障的重要组成部分，ELOVL4在极长链脂肪酸的形成中起到不可或缺的作用，极长链脂肪酸在表皮屏障中充当鞘脂的组分。根据Wenmei等人的研究，在ELOVL4缺陷小鼠中，与对照组相比，脂肪酸≥C28的神经酰胺不存在或显著减少。大多数长度大于26个碳原子的表皮VLCFA是ω-羟基化的，可以是饱和的或不饱和的(1-2个双键)。具有这些脂肪酸的鞘脂是神经酰胺和葡糖神经酰胺(Sandhoff(2010)极长链鞘脂：组织表达、功能和合成(Very long chain sphingolipids:Tissue expression,function and synthesis)，FEBSLetters 584 1907-1923，参见第1.2节，第一段)。这些分子构成表皮保护功能的重要部分。除了延长酶系统之外的内源性生物系统也可以用于将LCFA(包括VLCMUFA和VLCFA)转换成有益的(O-酰基)-ω-羟基FA(OAHFA)、胆固醇酯、神经酰胺、游离脂肪酸、磷脂、鞘磷脂和蜡酯。尽管为不同于ω-羟基脂肪酸的另一种形式，根据本发明的包含VLCFA的组合物仍可以用于将这些非常重要的脂肪酸提供给相关组织，尤其是皮肤和黏膜/组织。这对于根据本发明的包含链长为C28及以上的VLCFA的组合物可能特别重要。

值得注意的是，Wenmei等人发现缺乏ELOVL4的小鼠表现出没有寻找乳头和吸母乳的欲望。作者怀疑这反映了脑中缺乏ELOVL4而导致的神经行为异常。根据本发明的组合物可以代表一种通过向脑提供VLCFA来缓解此类神经行为的方法。

以下对ELOV1-3和5-7的讨论在很大程度上基于Sassa和Kihara(2014)极长链脂肪酸的代谢：基因与病理生理学(Metabolism of very long chain fatty acids:Genes andpathophysiology)，Biomol Ther 22(2):83-92。但是，未来的研究可能会带来更多关于VLCFA体内合成的知识，这些合成发生在哪些组织中，以及哪些组织和身体功能受益于VLCFA。

ELOVL1延长饱和和单不饱和C20-C26酰基CoA。

ELOVL2延长n3和n6系列的C20-C22多不饱和酰基CoA。ELOVL2缺乏可能导致睾丸中VLCPUFA减少，包括C28:5n6和C30:5n6，从而导致精子发生和男性生育能力下降。哺乳动物睾丸和精子含有n3和n6VLCPUFA。

已知ELOVL3和ELOVL7能延长饱和和不饱和C16-C22酰基CoA。

已知ELOVL3在皮肤皮脂腺和毛囊以及棕色脂肪组织中表达。对小鼠的研究表明，ELOVL3的缺乏表现出C20:1在皮肤中的积累，并与斥水和毛发稀疏的缺陷有关。通过减少毛囊的炎症，以及通过其他目前未知的机制，VLCFA可以防止脱发并改善整体毛发健康。缺失ELOVL3的小鼠不会像ELOVL4一样因失水而导致新生儿快速死亡(Sandhoff 2010)，这表明ELOVL3延长酶系统导致的效果与ELOVL4不同。

ELOVL5被认为对于肝中n3和n6系列的C18-CoA的延长至关重要。小鼠中ELOVL5的缺失与肝脂肪变性有关。它在肾上腺和睾丸中高度表达，并编码位于内质网中的多通道膜蛋白。该基因的突变与脊髓小脑性共济失调38(SCA38)相关，这是一种罕见的共济失调。

与其他ELOV相比，ELOVL6能延长较短的脂肪酸，对C12:0-16:0酰基CoA具有活性。已显示在包括肝在内的几种组织中的细胞质表达。

与上述类似的一种或多种途径的有效性降低可能会在用于体内延长的系统以及随后的β氧化和去饱和反应(形成对最佳健康至关重要的VLCFA)中产生瓶颈。如上所述，在复杂的体内合成中，这些瓶颈可能发生在不止一个地方，目前可能尚未阐明所有细节。

因此，个体对象的VLCFA内源性合成能力可能会降低，包括特定组织中的VLCMUFA和VLCPUFA，在这些组织中，这些脂肪酸是维持对象最佳健康所必需的。这种能力的降低可能随着年龄的增长而发展，或者可能在年轻时就已经存在。尤其是在后一种情况下，内源性合成VLCFA的能力降低可能由遗传性疾病引起。

婴儿需要DHA来发育组织，但是其没有完全发育的酶系统。申请人意识到，为了获得最佳健康，婴儿、特别是那些没有接受母乳的婴儿，除了公认的DHA补充剂(如包括婴儿配方、婴儿药用食品)外，还将受益于天然来源的VLCPUFA的补充。

现在认识到，如本文所述，给对象施用的来自天然油的VLCPUFA可以在对象体内被吸收，而一种或多种延长酶系统和/或去饱和酶和/或β-氧化系统的缺陷可能通过施用链长为C24-C40、例如C24-C32的VLCFA(包括VLCn3、VLCn6、VLCMUFA、VLCSA)来缓解。如下文进一步讨论和实施例中所示的那样，补充的VLCFA被不同的身体组织吸收，在那里它们可以发挥其功能。

根据本发明，进一步认识到，在某些实施方式中，如上所述和在下文更详细地描述的各种VLCFA的组可以一起给出，而在某些其他实施方式中，一个或多个VLCFA亚组、即一个或多个VLCn3、VLCn6、VLCMUFA、VLCSA(如链长为C24-C32)可以相较于其他物质富含，以增加VLCFA组合物的效果。由于VLCFA通过其链长和不饱和度的变化赋予细胞功能多样性，因此在一个实施方式中，施用的组合物可以包含具有不同长度和不饱和度的几种不同脂肪酸的混合物，如下文所公开。通过使用此类富含VCLFA的组合物，避免了脂肪酸之间对参与所需延长酶、去饱和酶和β-氧化反应的酶的竞争，因此所需的VLCFA“构建模块”组将被引导至最终的VLCFA。本文使用的术语VLCFA应理解为包括VLCFA的进一步体内转化。例如，该术语包括体内形成的VLCFA的羟基衍生物，包括ω-羟基VLCFA以及ω-羟基VLCFA的进一步体内转化。

在体内，如上所述的最终VLCFA因其有益作用而可能以多种形式存在，包括但不限于(O-酰基)-ω-羟基FA、胆固醇酯、神经酰胺、游离脂肪酸、甘油酯、磷脂、鞘磷脂和蜡酯。

在一种或多种用于内源性合成的复合系统中存在缺陷的对象可能不能、或者只能以低于正常水平的程度从短链和长链脂肪酸产生VLCFA。酶系统的缺陷可能包括ELOVL基因的突变和小缺失，这可能与疾病有关。若存在此类缺陷，则那些可以通过增加VLCFA浓度(通常由体内脂肪酸延长产生)来改善的病症和疾病可能会恶化。对象因此可能经历VLFA的内源性合成能力降低，即例如由参与合成的任何酶的低浓度引起，导致脂肪酸合成的程度较低和/或较慢。

在一个方面，本发明提供了一种治疗对象的方法，其通过给对象施用包含VLCFA的组合物来实施。VLCFA的链长为C24-C40，例如C24-38，或例如C24-C32。同样，本发明提供了用于治疗对象的包含VLCFA的组合物。本文公开了可以治疗的相关疾病和相关组合物。在一个实施方式中，该疾病与一种或多种内源性系统的缺陷和/或VLCFA的内源性合成能力降低有关。在一个实施方式中，对象具有存在于特定组织中并在疾病中起到作用的VLCFA的水平缺乏或异常。示例表明，施用的VLCFA被不同的组织吸收。此外，已显示出施用的VLCFA的积极作用，例如对于皮肤。这一新知识与VLCFA通常存在于不同组织中的知识以及促进疾病的酶活性降低的知识相结合。请参阅下面关于可能影响衰老模式以及与其他疾病和病症相关的内在和外在因素的讨论。

在一个实施方式中，本发明提供了一种组合物，其包含至少5重量％的VLCFA，其用于治疗对象，其中将该组合物施用于对象进行治疗，所述对象具有存在于特定组织中且在疾病中起到作用的VLCFA水平缺乏或异常。

在一个实施方式中，本发明提供了一种组合物，其包含至少5重量％的VLCFA，其用于治疗对象，其中将该组合物施用于对象以用于与一种或多种内源性延长酶系统的缺陷和/或VLCFA的内源性合成能力降低相关的治疗。

在一个实施方式中，本发明提供了一种组合物，其包含至少5重量％的VLCFA，其用于治疗对象的疾病，其中将该组合物施用于对象。在一个实施方式中，该疾病与一种或多种内源性延长酶系统的缺陷和/或VLCFA的内源性合成能力降低有关。

因此，在一个实施方式中，本发明提供了一种组合物，其包含至少5重量％的VLCFA，其链长大于22个碳原子并从天然油中分离出来，用于治疗对象，其中该组合物施用于对象，用于与一种或多种内源性延长酶系统缺陷和/或VLCFA的内源性合成能力降低相关的治疗，或用于预防或治疗疾病，其中施用的VLCFA被转运至目标身体组织，在那里这些物质对正常的组织功能起作用。

如本文所用，术语“疾病”是指疾病、病症、失调或病痛中的任一种。特别地，本发明的方法和用于本发明用途的组合物可以用于治疗与通常包含VLCFA的特定组织相关或涉及其的疾病。相关组织选自以下非限制性组，如眼组织(眼球、视网膜或睑脂)，精子和睾丸，脑和神经系统，皮肤，表皮和黏膜/黏膜组织，包括肺和呼吸道组织，心血管系统组织和膀胱组织，泌尿系统和消化系统。

特别地，该治疗可以用于通过向组织供应VLCFA来维持正常组织功能，其中施用的VLCFA可以帮助维持已知通常存在VLCFA的组织的良好功能。例如，向不同组织中添加VLCFA有助于引导、修正或改善细胞膜的流动性。此类治疗(包括通过施用所使用的组合物来实施的疾病的治疗)包括或涉及眼健康、男性生育能力、皮肤和/或内皮和黏膜组织/黏膜的疾病、脑和神经组织以及心血管疾病。皮肤和/或内皮和黏膜组织/黏膜的疾病是例如泌尿系统和消化系统的疾病，并且还包括湿疹、过敏和肺病，例如哮喘。

对于心血管系统，我们指的是包括通过血管将血液输送到身体所有部位(包括肺和全身回路)的器官系统，由动脉、毛细血管和静脉组分构成。因此，包括血管组织和心肌组织以及与这些相关的疾病。心脏和血管的任何心血管疾病，无论是先天性的还是后天性的，都与通过本发明所使用的组合物进行的治疗有关。其中最重要的是动脉粥样硬化、风湿性心脏病和血管炎症。

所使用的组合物可以用于治疗受减少量的VLCFA不利影响的眼病。这些包括年龄相关性黄斑变性(AMD)、糖尿病眼部炎症引起的疾病和显性Stargardt黄斑营养不良(STGD3)。这些通常由ELOVL4基因的突变引起。由于后一个原因，STGD3通常发生在童年或青春期。干眼病(DED)和睑板腺炎是与眼有关的疾病。

在AMD中，黄斑中会逐渐积累特征性的黄色沉积物，称为玻璃疣(drusen)(细胞外蛋白质和脂质的堆积)。研究表明，与AMD相关的玻璃疣在分子组成上与β-淀粉样蛋白(βA)斑块相似，并在其他与年龄相关的疾病(如阿尔茨海默病和动脉粥样硬化)中沉积。这表明类似的途径可能与AMD和其他与年龄相关的疾病的病因有关。

可以通过本发明的组合物治疗的与脑和神经组织相关的疾病包括中枢神经系统疾病，至少包含以下：心理健康的降低，脱髓鞘疾病(如多发性硬化症)、帕金森氏症、精神分裂症、痴呆症、阿尔茨海默症、认知功能受损、偏头痛、发作和癫痫症。

对于男性生育能力的治疗，使用VLCFA组合物可以增强精子的功能和/或活力，或增加成熟精子细胞的数量。

可以通过本发明所使用的组合物治疗的与皮肤和毛发相关的疾病至少包含以下：干燥和起皱的皮肤、受刺激、酸痛或敏感的皮肤、伤口愈合能力、作为保护(即预防性治疗)抵抗太阳UV辐射对皮肤的负面影响、对毛囊的负面影响、降低的毛发健康(包括脱发的风险)。通常产生刺激/酸痛皮肤并且可能受益于使用所用组合物的治疗的皮肤疾病和病症的示例如湿疹、银屑病、痤疮和酒渣鼻(丘疹性脓疱性酒渣鼻)。通过使用本发明的组合物或方法，可以使组织(例如皮肤)的脂肪酸组成正常化，例如通过补偿异常的皮脂腺脂肪酸组成，即补偿内源性合成的极长链脂肪酸的降低的水平。

已知婴儿需要DHA来发育组织，但是其没有完全发育的酶系统。DHA是人类母乳中重要的脂肪酸组分，因此在婴儿配方中添加DHA以及作为婴儿的药用营养物是正常的。本发明的申请人意识到，为了获得最佳健康，婴儿也将受益于补充天然来源的VLCPUFA。在一个实施方式中，本发明提供了一种用于给婴儿添加营养物的组合物，例如婴儿食品、婴儿配方和药用营养物，后者包括胃肠外给予的营养物。根据本发明，婴儿是指子宫内的婴儿和小于约两岁的儿童，包括早产儿和新生儿。因此，该组合物也可以作为补充营养物的一部分对孕妇施用，以促进胎儿的发育，并且可以作为口服或胃肠外制剂施用。

与免疫系统降低有关的疾病也可以通过所使用的组合物来治疗。特别是，脂肪酸有助于增强皮肤、表皮和黏膜组织/黏膜，形成保护下层组织免受病原体(包括感染)、炎症、脱水、化学物质和机械压力侵害的屏障。现在还显示施用的VLCFA被免疫细胞吸收，请参见实施例部分，其中实施例1显示小鼠饲料中包含的VLCPUFA被血浆吸收。

此外，炎症相关的疾病和心血管疾病可以通过所使用的组合物进行治疗，特别是如动脉粥样硬化和类风湿性关节炎。

如本文所用，术语“治疗”或“处理”是指1)抑制疾病；例如，抑制正在经历或表现出疾病、病症或失调的病理或症状的对象的疾病、病症或失调，包括预防疾病(即预防性治疗、阻止病理和/或症状的进一步发展)，或2)缓解疾病的症状，或3)改善疾病；例如，改善正在经历或表现出疾病、病症或失调的病理或症状的对象的疾病、病症或失调(即逆转病理和/或症状)。特别地，在一个实施方式中，所用组合物用于预防性治疗，例如通过向组织供应VLCFA来维持正常组织功能或改善组织功能。施用的VLCFA可以帮助维持已知通常存在VLCFA的组织的良好功能。

如本文所用，当提及对象时，该术语包括人和非人动物体，并且非人动物还包括鱼，例如养殖的鱼。

特别地，本发明提供一种治疗与眼健康、男性生育能力、皮肤和内皮组织和黏膜组织/黏膜、脑和神经组织以及心血管组织中的一种或多种相关的疾病的方法和所用组合物，其通过施用包含极长链脂肪酸的脂质组合物来实施。

在一个实施方式中，本发明提供了一种组合物，用于治疗在一种或多种内源性延长酶和/或体内合成VLCPUFA所必需的其他酶系统方面存在缺陷的对象。延长酶系统和/或其他酶系统对于对象的健康可能很重要。该方法包括给对象施用包含VLCFA的脂质组合物的步骤。VLCFA可能对对象有直接的积极健康影响，或者它们可以作为具有直接积极健康影响的更长脂肪酸的“构建模块”。因此，含有VLCFA的脂质组合物特别用于治疗VLCFA的内源性合成能力降低的对象。此外，VLCFA还可以通过一种表观遗传效应作为脂肪酸延长酶或去饱和酶表达的触发器。

特别是，如上所述，ELOVL2缺乏可能导致睾丸中VLCPUFA减少，包括特定脂肪酸C28:5n6和C30:5n6，从而导致精子发生和男性生育能力下降。在一个实施方式中，本发明提供了一种用于治疗对象产生健康精子的能力的组合物，通过给对象施用包含链长为C24-C32、例如链长为C28-C30的VLCFA的组合物来实施。更具体而言，该组合物富含脂肪酸C28:5n6和C30:5n6的一种或多种。在一个实施方式中，该组合物富含脂肪酸C28:5n3、C28:6n3、C28:7n3、C28:8n3和C30:5n3的一种或多种。参考下面的实施例1A，其显示对于已经喂食包含VLCPUFA的饲料(测试饲料2)的小鼠而言，来自饲料的VLCPUFA被睾丸组织的磷脂部分吸收。

延长酶：

在一个实施方式中，所用组合物用于治疗一种或多种与延长酶系统ELOVL 1-7中的任一个中的缺陷相关的疾病。上文提供了与这些酶相关的疾病的非限制性示例。

特别地，在一个实施方式中，该治疗针对ELOVL4酶系统的缺陷，并且该组合物可以用于治疗与此类缺陷相关的疾病，如眼、皮肤或糖尿病的疾病。在另一个实施方式中，该治疗针对ELOVL2酶系统的缺陷，并且该组合物可以用于治疗与此类缺陷相关的疾病，如男性生育能力的改善。在另一个实施方式中，该治疗针对ELOVL3酶系统的缺陷，并且该组合物可以用于治疗与此类缺陷相关的疾病，如在皮肤、毛发和棕色脂肪组织疾病中。特别是，发现组合物能改善伤口愈合，因为VLCFA被皮肤、内皮组织或黏膜组织的细胞吸收，从而提供更快的细胞分裂。因此伤口愈合得更快。因此，可以根据本发明治疗导致与皮肤有关的疾病或病症的ELOVL3或ELOVL4等的缺陷。当被皮肤细胞(例如成纤维细胞)吸收时，组合物的VLCFA有助于加强屏障以保护下层组织免受感染、脱水、化学物质和机械应力的影响。在一个实施方式中，用于治疗皮肤的组合物还包含VLCMUFA，特别是具有最多达34个碳的α-羟基VLCMUFA。正如A.Poulos(1995)高等动物中的极长链脂肪酸-综述(Very long chain fattyacids in higher animals-a review)，Lipids，30:1-14中发现的，在表皮脂质中发现了具有最多达34个碳原子的α-羟基VLCMUFA。α-羟基形式的脂肪酸可以通过将来自天然油的VLCMUFA改性来合成。

在一个实施方式中，所用组合物特别用于处理养殖鱼以增强它们的皮肤，例如抵抗虱子、机械应力或为了更快的伤口愈合和提高的存活率。例如，如本文所公开的所使用的VLCFA组合物可以包括在鱼的饲料中。参照实施例。实施例1A和2B显示VLCPUFA在皮肤组织中的吸收。针对喂食含VLCPUFA饲料的鱼的实施例5和6显示出对伤口愈合以及促进更厚的表皮和改善的鳞发育的积极作用。

在另一个实施方式中，该治疗针对ELOVL5酶系统的缺陷，并且该组合物可以用于治疗与此类缺陷相关的疾病，如肝疾病，例如肝脂肪变性，或较温和的形式如脂肪肝(非酒精性脂肪肝，NAFLD)。任何ELOVL1-7酶系统的缺陷可以通过根据本发明的治疗来补偿。

此外，本发明提供了改善组织中VLCFA浓度的所使用的组合物，其中此类脂肪酸对于对象的健康和幸福很重要。申请人发现，给对象施加的极长链脂肪酸被组织吸收，通常在该组织中存在这种脂肪酸。因此，申请人发现身体在合成相关VLCFA和在不同组织中提供必要浓度方面的不足可以通过向身体施用相关VLCFA来弥补，因为这些VLCFA实际上会被运输到并被相关组织吸收。

在一个实施方式中，对象经历一种或多种身体延长酶系统的有效性降低。在一个实施方式中，所用组合物旨在用于经历身体的一种或多种延长酶系统的与年龄相关的有效性降低的人。在本发明的另一个实施方式中，所用组合物旨在用于经历身体的一种或多种延长酶系统的遗传性的有效性降低的人。衰老是一个复杂的过程，其特点是生理功能下降，并与各种疾病的风险增加有关。众所周知，基因组的甲基化代表了生物衰老率的强大且可重复的生物标志物。甲基化模式可以建立定量的衰老模型，该模型可以用于多种组织，作为一种常见的“分子钟”。例如，已经证明人类延长基因Elovl2显示出随着年龄的增长而增加的甲基化。Garagnani,P.,Bacalini,M.G等人进行的一项研究((2012)ELOVL2基因甲基化作为新的年龄表观遗传标记，Aging Cell,11,1132–1134.https://doi.org/10.1111/acel.12005)显示，甲基化程度与年龄高度相关，并且在生命的两端之间呈现几乎“开-关”的甲基化趋势，范围为7％到91％的甲基化。延长酶ELOVL2延长n3和n6系列的C20-C22多不饱和酰基CoA。ELOVL2被认为存在于许多组织中，包括视网膜、肝和睾丸中。假设Elovl2基因甲基化增加与延长酶活性降低之间存在相关性，则可以认为年龄增加与ELOVL2的缺乏相对应，导致体内VLCPUFA合成减少。这种由与年龄相关的Elovl2表达下调引起的延长酶缺乏将对与健康的眼、男性生育能力、健康的肝功能和神经功能等相关的生物学功能产生负面影响。以最佳视力为例：即使在健康的人类个体中，衰老也会导致视觉功能下降，包括与年龄相关的视杆驱动或暗视敏锐度和空间对比敏感度下降。如本发明的发明人所认识到的，观察到的与年龄相关的视杆视觉丧失可能与年龄引起的延长基因的生理功能下降有关，包括但不限于与年龄相关的延长基因Elovl2的甲基化，后者导致C20-C22多不饱和脂肪酸的ELOVL2延长降低。如下文详细解释的，本发明人认识到，根据本发明的公开内容，通过补充VLCFA可以改善延长酶(不限于ELOVL2)进行VLCFA的体内合成的能力随年龄而降低的影响。

类似地，对于个体而言，除了眼以外的其他组织，尤其是皮肤和内皮组织、睾丸、神经组织和肝中，与年龄相关的伸长酶活性降低的影响可以通过补充本发明公开的VLCFA来改善。对个体的有益影响可以包括但不限于改善的视力和眼健康、改善的生育能力、改善的皮肤健康(包括减少皮肤皱纹)、改善的脑和神经组织的功能以及改善的肝功能。

发明人设想可以获得与在各种延长酶的情况下类似的有益效果，以改善参与VLCFA体内合成的所有酶组内的酶活性与年龄相关的降低。如上所述，在体内，VLCFA是由较短的脂肪酸通过脂肪酸链延长在体内产生的。此外，对于某些VLCFA，还涉及其他酶系统，尤其是用于去饱和、饱和以及β-和ω-氧化反应的酶系统。

众所周知，DHA缺乏与衰老有关。申请人认为VLCFA的情况也是如此，并公开了如本文所公开的包含VLCFA的组合物如何可以减轻导致这些缺陷的衰老效应的结果。

如上所述，衰老与全基因组DNA甲基化模式的广泛变化有关。除了衰老本身之外，甲基化的这种变化还可能受到遗传和环境因素的影响。例如，吸烟、日晒和肥胖等外在环境因素与DNA甲基化模式的特定变化有关。遗传背景等内在因素也会影响衰老模式，包括“基线”DNA甲基化水平。设想根据本发明的治疗方法和组合物改善外在环境因素和内在先天遗传因素对与用于体内VLCPUFA合成和改性的酶相关的基因组甲基化的负面健康影响，包括但不限于上面提到的显性因素。

在另一个实施方式中，所用组合物旨在用于婴儿，如尚未完全开发出身体酶系统的人。

眼健康：

在一个实施方式中，本发明提供了一种用于治疗对象的与眼健康有关的疾病的组合物，其中对象在一种或多种对健康眼很重要的内源性延长酶系统中存在缺陷，而治疗通过向对象引入包含VLCFA的脂质组合物来实施。这可能有直接的积极健康影响，或者VLCFA可以作为对健康的眼具有积极健康影响的更长脂肪酸的“构建模块”。因此，本发明提供了一种包含VLCFA的组合物，用于治疗对象的眼健康，其中在眼特定组织中获得VLCFA浓度的增加。在一个实施方式中，与眼健康相关的疾病选自黄斑变性(AMD)、由眼的糖尿病性炎症引起的疾病和显性Stargardt黄斑营养不良(STGD3)。

在一个实施方式中，本发明提供了一种用于治疗对象的与干眼病或睑板腺炎有关的疾病的组合物，其中对象在一种或多种内源性延长酶系统中存在缺陷，而治疗通过向对象引入包含VLCFA的脂质组合物来实施。这可能有直接的积极健康影响，或者VLCFA可以作为对DED或睑板腺炎具有积极健康影响的更长脂肪酸的“构建模块”。在一个实施方式中，对于组合物的用途，其中所述用途是治疗与眼健康相关的对象的疾病，不包括干眼症和睑板腺炎。类似于Gorusupudi等人关于AMD的发表中的悖论，如第3页所述，给患有干眼病(DED)的患者补充ω-3酸得到了矛盾的结果。本发明的发明人研究了包含在Giannaccare等人(2019)关于补充ω-3脂肪酸治疗干眼症(DED)的疗效的荟萃分析中已发表的研究，以研究并可能确定哪些类型的脂肪酸对干眼症症状有影响。已经研究了荟萃分析的17项单独研究中使用的ω-3脂肪酸补充剂的组分，以确定不同脂肪酸的存在和浓度，包括极长链脂肪酸(VLCFA)的浓度。总而言之，基于植物油和海洋ω-3浓缩物的研究(其中VLCFA不存在或假定已被大量去除以浓缩所需的C20-C22ω-3酸)似乎显示对DED没有或有限的积极影响，而基于非浓缩鱼油和磷虾油的研究，包含VLCPUFA，以及含有少量VLCPUFA的LCPUFA浓缩物(例如荟萃分析的第15号研究)往往给出明显的对DED患者的积极结果。ω-3脂肪酸来源和效果之间的这种令人惊讶的联系，已经避开了荟萃分析的作者，以及包括在荟萃研究中的个别研究的作者。Giannaccare等人和所有个别研究的作者都对VLCPUFA/VLCn3的存在或影响保持沉默。很明显，对于科学界来说，补充VLCPUFA对DED症状的积极影响并不明显。至于许多其他适应症，关于DED的荟萃研究侧重于C20-C22ω-3脂肪酸(EPA+DHA)的潜在影响。在研究了荟萃分析和使用的组合物后，申请人得出结论，是组合物的VLCFA有助于治疗效果，并且通过施用包含VLCFA(包括VLCn3)的组合物，可以获得缓解症状和治疗DED的更有效的益处。对于眼睛的其他适应症，预计会有类似的效果。如以下所附实施例1、2和3所示，饲料中包括的VLCFA被眼组织吸收。因此，对眼睛健康有益的补充的VLCFA可以到达眼组织，并在那里发挥其功能。这意味着本发明的VLCFA组合物的补充可以用于治疗眼部疾病以及除DED之外的其他疾病和病症，例如黄斑变性(AMD)、由眼的糖尿病性炎症引起的疾病和主要的Stargardt黄斑营养不良(STGD3)。

男性生育能力：

在另一个实施方式中，本发明提供了一种用于治疗对象的产生健康精子的能力的组合物，其中对象在一种或多种对男性产生健康精子的能力很重要的内源性延长酶系统中存在缺陷，而治疗通过向对象引入包含VLCFA的脂质组合物来实施。这可能有直接的积极健康影响，或者VLCFA作为对健康精子的产生具有直接积极健康影响的更长脂肪酸的“构建模块”。因此，本发明提供了一种包含VLCFA的组合物，用于治疗男性对象产生健康精子的能力，其中在与睾丸和精子相关的特定组织中获得VLCFA浓度的增加。因此，该治疗可以增强精子的功能和/或活力，或增加成熟精子细胞的数量。以Gorusupudi等人的出版物(与年龄黄斑变性有关)和Giannaccare等人的出版物(与干眼症有关)为代表，类似的误解似乎存在于研究ω-3补充剂对睾丸功能和男性生育能力的影响的研究中。根据Esmaieili等人的综述(Esmaeili,V.,Shahverdi,AH,Moghadasian,MH和Alizadeh,AR(2015)膳食脂肪酸影响精液质量：综述,Andrology 3:450-461)，DHA浓度不足是低质量精子的主要原因(第453页，第一栏)。与其他富含PUFA的组织(例如脑和视网膜)相比，睾丸不断排出PUFA(例如DHA)，因为精子被运送到附睾。然而，三项已发表的含有DHA补充剂的研究似乎给出了相互矛盾的结果：

i)两项利用鱼油衍生的高DHA浓缩物的研究报告了男性生育能力的积极结果参数：

Martinez-Soto JC、Domingo JC、Cordobilla B等人(膳食补充二十二碳六烯酸(DHA)可改善精液抗氧化状态并减少精子DNA断裂,Syst Biol Reprod Med.2016；62(6):387-395.doi:10.1080/19396368.2016.1246623)使用了来自鱼油的76％DHA浓缩物。作者发现，在膳食中补充这种DHA产品会导致精浆中ω-3脂肪酸和DHA浓度增加，这与总抗氧化能力的增加和精子DNA的降低有关。补充10周后，DNA损伤的精子百分比从22.0％降低到9.3％。相比之下，葵花籽油安慰剂的补充并没有引起精液参数的任何变化。在Giannaccare等人发表的研究编号15中，Marinez等人似乎使用了脂肪酸组成与市售DHA浓缩物相似的DHA浓缩物，申请人实验室的化学分析证明其存在少量VLCPUFA，请参阅讨论以上与Giannaccare等人的干眼症的荟萃研究有关的分析。

Gonzalez-Ravina C、Aguirre-Lipperheide M、Pinto F等人(具有高纯度和浓缩二十二碳六烯酸(DHA)补充剂的膳食补充剂对人类精子功能的影响，Reprod Biol.2018；18(3):282-288.doi:10.1016/j.repbio.2018.06.002)同样使用高DHA浓缩物(NuaDHA，根据制造商含有85％DHA，(https://nuabiological.com/nua-dha/nua-dha-composicion-e-ingredientes/)，从本申请的公开内容表明其中存在VLCPUFA。作者得出结论：“他们的研究支持先前的迹象，这些迹象强调了补充DHA作为改善弱精子症男性精子质量的一种手段的重要性”(摘要)。该研究的结果清楚地指示弱精子症患者补充DHA，其表明1克/天的膳食DHA的补充对不育人群特别有益(讨论部分，最后一段)。

ii)利用富含DHA的藻油的研究

Conquer等人的出版物(Conquer JA、Martin JB、Tummon I、Watson L、TekpeteyF.DHA补充剂对弱精子症男性DHA状态和精子活力的影响，Lipids.2000；35(2):149-154.doi:10.1007/BF02664764)使用含有38.6％DHA的微藻油。

作者指出，弱精子症男性的精浆磷脂DHA水平低于正常精子男性。他们的研究表明，他们的DHA补充剂可以将精浆中这种脂肪酸的水平提高到与之前报道的正常精子水平男性相当的水平。然而，虽然DHA补充剂确实改变了血清和精浆中这种脂肪酸的水平，但是补充剂对精子中的DHA水平没有影响，而且DHA补充剂对弱精子症男性的精子活力没有影响。作者认为，对精子中DHA水平没有影响更有可能与精子无法吸收预先形成的DHA有关。在这方面，作者提到了一项针对正常精子人类的研究，其“表明DHA水平随着鱼油(EPA+DHA的来源)的补充而升高”。

上述三份出版物均未提及VLCPUFA。然而，基于本申请中公开的内容，发明人意识到除了DHA之外，VLCn3的补充对于获得健康精子是至关重要的。最初的两项研究在提高精子质量方面取得了积极成果，它们使用了鱼油中的DHA浓缩物，其中也可能含有少量的VLCn3。第三项研究没有记录对精子质量有任何影响，它使用藻油，未知其含有VLCn3，即结构可用作本申请中公开的“构建模块”。本发明的发明人已经意识到，即使脂肪酸DHA可能对精子质量起作用，也需要VLCFA，并且这种VLCFA可以由根据本发明的组合物提供。如本发明的实施例所示，非常令人惊讶地发现，添加到饲料中的VLCFA组合物可以被吸收并转运至睾丸组织(实施例1A)。因此，对男性生育能力有益的补充的VLCFA可以到达睾丸，并在那里发挥其功能。这意味着补充本发明的VLCFA组合物可用于治疗男性生育能力，例如精子功能和/或活力降低或成熟精子细胞数量减少，例如VLCFA的体内合成能力降低的个体。

认知健康：

在另一个实施方式中，本发明提供了用于治疗对象的与脑和神经组织相关的疾病的组合物。例如，通过向对象引入包含VLCFA的脂质组合物来实施，该对象在一种或多种对健康的脑和神经组织很重要的内源性延长酶系统中存在缺陷。这可能有直接的积极健康影响，或者VLCFA作为对健康的脑或神经组织的产生具有直接积极健康影响的更长脂肪酸的“构建模块”。因此，本发明提供了一种包含VLCFA的组合物，用于治疗与脑和神经组织相关的疾病，其中在特定组织中获得VLCFA浓度的增加。

ω-3脂肪酸EPA和DHA的低摄入与延迟的大脑发育有关，并且在以后的生活中，其会增加认知能力下降的风险，包括阿尔茨海默病(AD)的风险增加。然而，该领域已发表的研究似乎显示出相互矛盾的结果。似乎已经确定鱼的摄入对健康的认知表现有益。Albanese等人(拉丁美洲、中国和印度的膳食鱼类和肉类摄入与痴呆症：一项10/66痴呆症研究小组基于人群的研究，Am J Clin Nutr 2009；90:392-400)基于14960名≥65岁的中国、印度、古巴、多米尼加共和国、委内瑞拉、墨西哥和秘鲁的老年居民的研究通过结合所有国家的数据进行荟萃分析，发现更低的痴呆症患病率与更高的膳食鱼类摄入量之间存在显著关联。

Freund-Levi等人的(ω-3脂肪酸治疗174名轻度至中度阿尔茨海默病患者：OmegAD研究，一项随机双盲试验，Arch Neurol.2006；63:1402-1408)发现给予ω-3脂肪酸在患有非常轻度AD的患者亚组中产生积极结果。结合流行病学研究的数据看出，摄入鱼类可以降低患AD的风险，Freund-Levi等人得出的结论是，他们的研究支持ω-3脂肪酸在AD的一级预防中起作用而在治疗明显疾病方面没有作用的观点。Freund-Levi等人使用了比EPA多2.8倍DHA的补充剂，并将患者随机分为每天服用4粒1g胶囊，每粒含有430mg的DHA和150mg的EPA(申请人的EPAX1050TG)、或玉米油作为等热量安慰剂。EPAX1050TG是从鱼油中提取的DHA浓缩物。如下所述，该浓缩物还含有一定量的VLCFA。

Kongai等人(含有磷脂形式的n-3多不饱和脂肪酸的磷虾油对人脑功能的影响：一项针对健康老年志愿者的随机对照试验，老龄化临床干预(Clinical Interventions inAging)2013:8 1247-1257)进行了一项研究，其中61-72岁男性接受了12周的治疗：中链甘油三酯作为安慰剂；磷虾油，其富含结合在磷脂酰胆碱中的n-3 PUFA；或沙丁鱼油，其富含结合在甘油三酯中的n-3 PUFA。测量记忆和计算任务期间大脑皮层中氧合血红蛋白(oxy-Hb)浓度的变化，作者发现在工作记忆任务期间，在第12周时磷虾油和沙丁鱼油组中氧合血红蛋白浓度的变化明显大于安慰剂组。磷虾油给出了最好的结果，使得作者得出结论：“这项研究提供了n-3 PUFA活化老年人认知功能的证据。磷虾油尤其如此，其中大部分n-3PUFA被结合到磷脂酰胆碱中，使其比n-3 PUFA以甘油三酯的形式存在的沙丁鱼油更有效”。

Kongai等人研究的参与者每天接受2克(8×0.25g胶囊)各油，对于磷虾油代表193mg EPA和92mg DHA每天(即每克磷虾油96.5mg EPA和46mg DHA)，对于“沙丁鱼油”代表491mg EPA和251mg DHA(即每克“沙丁鱼油”245.5mg EPA和125.5mg DHA)。本领域技术人员意识到，245.5mg/g EPA和125.5mg/g DHA(总和371mg/g(EPA+DHA)以及总共460mg/gω-3酸的值显著高于天然鱼油中可以发现的值，所谓的沙丁鱼“SO”油因此代表含有来自鱼油的适度浓缩的C20-C22ω-3脂肪酸的产品。正如下文中讨论的那样，被忽略的少量VLCFA(磷虾油中以及Kongai等人使用的适度浓缩的ω-3脂肪酸中的组分)代表的脂肪酸可能是维持健康认知表现的令人惊讶的重要因素。如上所述，在记忆和计算任务期间，Kongai等人利用大脑皮层中增加的oxy-Hb浓度作为增加的脑血流量的衡量标准。Jackson等人(富含DHA的油可以调节健康年轻人对认知任务的脑血流动力学反应：近红外光谱试验研究，英国营养学杂志(2012),107,1093-1098)早些时候曾使用过这样的步骤，他们发现在认知任务期间，与安慰剂相比，补充“富含DHA的FO”使得oxy-Hb浓度和血红蛋白(Hb)总水平显著增加，表明脑血流量(CBF)增加。相比之下，补充“富含EPA的FO”后未观察到对CBF的影响。由于“富含EPA的FO”也含有可观量的DHA(详见下文)，作者得出结论，CBF的响应“仅在以高于200mg/天的剂量补充DHA后才能调节”。首字母缩略词“FO”用作“鱼油”的缩写，在上下文中是指来自鱼油的EPA和DHA。治疗油(参见第1094页)购自EPAX AS(Aalesund，挪威，即本申请的申请人)，并封装在500mg胶囊中。根据作者提供的信息，每天2粒500mg富含DHA和EPA油的胶囊具有以下EPA和DHA含量(与天然鱼油相比是富含的)：

“富含DHA的FO”：450mg DHA和90mg EPA(即与Freund-Levi等人在上面讨论的文章中使用的430mg DHA和150mg EPA“EPAX1050TG”非常相似)。

“富含EPA的FO”：300mg EPA和200mg DHA。

上述引用的科学出版物提供了重要信息：

·已发表的研究侧重于海洋ω-3脂肪酸EPA和DHA的作用。然而，这些研究似乎显示出相互矛盾的结果。

·摄入鱼似乎对健康的认知表现有益。

磷虾油似乎对健康的认知表现有益。

·DHA含量与EPA相比更高的鱼油ω-3浓缩物似乎产生了积极的结果。

·EPA含量与DHA相比更高的鱼油ω-3浓缩物的结果似乎不如DHA含量与EPA相比更高的鱼油ω-3浓缩物。

后一种说法似乎与大多数天然鱼油以及磷虾油含有比DHA更多的EPA的事实有些相反。此外，用于获得阳性结果的DHA量差异很大：Freund-Levi等人使用每天1.7g DHA的剂量。Jackson等人得出的结论是，认知任务期间增加的脑血流量仅在DHA补充剂的剂量高于200mg/天后才能得到调节。Kongai等人使用与Jackson等人非常相似的评估程序，但是获得显著阳性结果的DHA补充剂仅为92mg/天。

然而，除了DHA以及DHA在磷脂酰胆碱中可能的优先作用之外，本发明的发明人意识到VLCFA(在这些研究中完全被忽视的一组脂肪酸)具有令人惊讶的重要作用，解释了科研文献中相互矛盾的结果：

天然鱼油和磷虾油含有有价值的少量VLCFA。如上面引用的科学出版物所示，海洋ω-3脂肪酸的浓缩物主要浓缩脂肪酸EPA(C20:5n3)和DHA(C22:6n3)。为了获得这样的浓缩物，例如通过分子/短程蒸馏或萃取程序，通常已除去分子量低于EPA且高于DHA的组分。尤其是，希望除去分子量高于DHA的组分，以除去高分子量杂质，例如由易氧化和热敏海洋LCPUFA氧化/分解形成的低聚物。由于不饱和脂肪酸极易氧化，为了符合药典和自愿性标准对低聚/聚合氧化产物的上限规定，链长高于DHA的组分通常被除去，例如通过蒸馏、萃取和类似的程序。此外，海洋油的这种较高分子量的组分通常与这种油的不希望的不可皂化的成分(包括胆固醇)以及与有机污染物(如溴化二苯醚)有关。不幸的是，除去不需要的重质组分也意味着大部分源自起始天然油的有价值的VLCFA也已被去除。

在生产高度富含EPA的浓缩物期间，VLCFA的去除尤其如此，因此，包括DHA在内的一部分C22馏分也被除去。另一方面，当制造DHA浓缩物时，本发明的发明人发现产品中可以保留合适量的VLCFA。例如，在分析含有50％DHA、6％DPA和仅8.5％EPA的现有浓缩物时，申请人发现该产品含有1.4％C24-C30VLCn3。[Giannaccare等人，第15号研究]。申请人在分析一批富含DHA的EPAX1050TG样品时，发现其含有0.2％VLCPUFA和0.6％VLCMUFA。使用来自天然油的浓缩物的不同研究出版物的作者对来自天然油的VLCPUFA/VLCn3的存在或影响保持沉默，很明显，来自天然油的VLCPUFA的积极影响对于科学界来说并不知晓。

来自天然油的适度浓缩的EPA加DHA产品也可能含有少量VLCFA，因为这些浓缩物通常是通过去除比DHA高的有限部分的脂肪酸来制造的。

在分析商业封装的磷虾油时，申请人发现其含有0.2％C24-C30VLCPUFA和0.2％VLCMUFA。然而，由于商业磷虾油生产方法似乎基于几种完全不同的生产方法，市场上磷虾油中VLCFA的确切浓度与这些值相比可能有所不同。

因此，在Jackson等人的文章中，“富含DHA的FO”将相较于“富含EPA的FO”包含显著更高的VLCFA相对浓度，从而在认知任务期间对脑血流产生积极影响。同样，在Kongai等人的文章中，SOω-3鱼油浓缩物的VLCFA含量可能比磷虾油少，这对磷虾油的阳性结果起到贡献，尽管磷虾油相较于SO油而言含有明显更少的EPA和DHA。

高等动物的脑(尤其是髓磷脂)含有VLCFA。脑中VLCFA的浓度随着发育而增加。脑和髓磷脂含有饱和和单不饱和以及多不饱和VLCFA。正常的年轻人脑含有至少最多达38个碳原子的多不饱和VLCFA。α-羟基VLCFA也存在于脑中。(A Poulos(1995)高等动物中的极长链脂肪酸——综述(Very long chain fatty acids in higher animals–a review)，脂质，30:1-14。)

根据Steinberg等人的说法，在人类中，一种特定的极长链酰基CoA合成酶(VLCS)在脑中初步表达(Steinberg SJ,PA(2000)极长链酰基CoA合成酶；人类“泡泡糖”代表能够活化极长链脂肪酸的新蛋白质家族，生物化学杂志,275,No.45,pp.35162-35169)。VLCFA的浓度在发育过程中增加，这些VLCFA是复杂脂质的组分，如神经节苷脂、脑苷脂、硫脂、鞘磷脂和其他磷脂。将VLCFA掺入这些复杂脂质中需要VLCS的活化。许多这些含有VLCFA的脂质是脑中髓鞘膜的组分。

本发明的发明人认识到，若例如由于与衰老相关的原因，个体体内合成有价值的脑VLCFA或将VLCFA掺入复杂脂质的能力降低，则补充根据本发明的组合物可以改善之后对个体认知健康的负面影响。

这一令人惊讶的公开与现有技术形成强烈对比。例如，在最近一篇关于用于生产ω-3酸的藻的评论文章中，作者对本发明定义的VLCPUFA完全保持沉默。(Harwood JL，综述：藻：极长链多不饱和脂肪酸的关键来源，生物分子2019,9,708；doi:10.3390/biom9110708)。根据Harwood的说法，“有很多证据表明膳食中的EPA和DHA对身体健康有益”，这些益处包括改善脑功能(引言最后一段)。如正文和表格所示，没有提及生产或使用链长超过C22的脂肪酸。

与该观点相反，本发明的发明人意识到，即使脂肪酸DHA和EPA对于脑功能非常重要，也需要VLCFA，并且这种VLCFA可以由根据本发明的组合物提供。如本发明的实施例所示，非常令人惊讶地发现，添加到饲料中的VLCFA组合物可以被吸收并转运至脑(实施例1A、2B、3)。因此，有益于认知健康的补充的VLCFA可以到达脑，尤其以便融入髓磷脂，并在那里发挥其功能。这意味着补充本发明的VLCFA组合物可用于治疗改善对认知健康的负面影响，例如对于体内合成VLCFA能力降低的个体的负面影响。

在另一个实施方式中，本发明公开了一种组合物，其用于治疗对象的与皮肤和/或内皮和黏膜组织/黏膜相关的疾病，其中对象在一种或多种对健康皮肤和/或内皮和黏膜组织很重要的内源性延长酶系统中具有缺陷，治疗通过给对象引入包含VLCFA的脂质组合物来实施。这可能有直接的积极健康影响，或者VLCFA作为对健康的皮肤和/或内皮和黏膜组织/黏膜具有直接积极健康影响的脂肪酸的“构建模块”。因此，本发明提供了一种包含VLCFA的组合物，其用于治疗皮肤和/或内皮和黏膜组织/黏膜的疾病，其中在这种特定组织中获得了增加的VLCFA浓度。在一个实施方式中，所使用的组合物包括一种或多种皮肤和/或内皮和黏膜组织/黏膜疾病的治疗，例如皮肤干燥、湿疹和过敏。参照实施例。实施例1A和2B显示VLCPUFA在皮肤组织中的吸收。实施例5和6显示VLCFA对伤口愈合的积极作用以及促进更厚的表皮和改善的鳞的作用。在另一个实施方式中，所使用的组合物包括肺和呼吸道的治疗，例如哮喘。

总之，所用组合物可以用于治疗以下一种或多种疾病：

i)眼部疾病，例如黄斑变性(AMD)、糖尿病眼部炎症引起的疾病和显性Stargardt黄斑营养不良(STGD3)；

ii)男性生育能力，例如精子功能和/或活力降低，或成熟精子细胞数量减少；

iii)皮肤和内皮疾病，包括任何干燥和起皱的皮肤、受刺激、发酸或敏感的皮肤、伤口愈合能力、防止皮肤受到太阳UV辐射的负面影响、对毛囊的负面影响、减少的毛发健康(包括脱发的风险)，包括湿疹、银屑病、痤疮和酒渣鼻；

iv)黏膜组织/黏膜疾病，例如肺病，呼吸道疾病(包括哮喘)，肝病，过敏，泌尿系统和消化系统的疾病；

v)脑和神经组织疾病，包括中枢神经系统疾病，例如精神健康下降，脱髓鞘疾病，例如多发性硬化症，帕金森症，精神分裂症，痴呆症，阿尔茨海默氏症，认知功能受损，偏头痛，发作和癫痫；

vi)与炎症相关的疾病，如心血管疾病，例如动脉粥样硬化和类风湿性关节炎。

本发明进一步提供了增加对象中VLCFA的血液水平的方法，特别是在VLCFA的内源性合成能力降低的对象中，例如那些延长酶系统低效的对象。通过使用本发明的方法或组合物实现的VLCFA的增加或校正可以量化为血液中VLCFA的富集，例如在红血球细胞(红细胞)或血浆中。此外，本发明提供了一种用于使涉及待治疗疾病的特定组织中VLCFA水平增加或正常化的方法。特别地，如实施例中所示，申请人研究了喂食包含VLCFA的饲料的动物(小鼠、鲑鱼、大鼠)的特定组织中VLCFA的摄取，并发现VLCFA可以量化为特定组织中VLCFA的富集。在一组研究中，给鲑鱼和大鼠喂食海洋油，申请人分析了眼、脑、睾丸、肝、心脏和皮肤的组织，以确定这些组织吸收了VLCFA。组织中存在的脂肪酸的分析和定量可以根据现有技术进行，如在用适当的溶剂提取相关组织后，通过色谱法(通常与质谱法相结合)进行体外分析。所包含的实施例提供的数据表明，VLCFA在几种组织类型和动物/鱼类型中的含量可以直接受到VLCFA补充剂的影响。从施用的含VLCFA的组合物、例如从饲料中能直接摄取VLCFA。先前的研究表明，存在负责形成VLCPUFA的延长酶和去饱和酶。然而，申请人现在发现了将这些“必需”脂肪酸获取到不同组织中的替代方法。本申请的实施例清楚地表明，VLCFA从消化道摄取，并运输到各种组织，如肝、皮肤、脑、视网膜、眼球、以及血浆中。与具有相似脂肪酸组成的对照组饲料相比，能清楚地表明，除了VLCFA以外，观察到的组织中VLCFA的增加不仅仅是体内合成较短脂肪的脂肪酸的结果，如由LCPUFA进行的体内合成。在实施例的研究中，通过将VLCFA包含在饲料中来口服施用VLCFA。下面提供了替代使用途径。

在一个实施方式中，本发明提供了一种增加VLCFA水平或校正对象血液中VLCFA缺乏的方法，特别是在VLCFA内源性合成能力降低的对象中。通过使用的组合物，实现了血浆中VLCFA量的显著增加。此外，本发明提供了所公开的用于校正血液中LCPUFA与VLCPUFA的比率不平衡的方法。在一个实施方式中，通过使用本发明的方法例如在红细胞VLCFA中获得的变化作为总脂肪酸的百分比为至少10％、例如至少20％、例如30-60％的增加。或者，可以对实际的红细胞VLCFA进行定量测量。通过使用的组合物，实现了血液中VLCFA量的显著增加。在一个实施方式中，本发明提供了一种增加VLCFA水平或校正对象血液中VLCFA缺乏的方法，特别是在VLCFA内源性合成能力降低的对象中。此外，本发明提供了所公开的用于校正血液中LCPUFA与VLCPUFA的比率不平衡的方法。通过使用的组合物，实现了红细胞VLCFA量的显著增加。在一个实施方式中，本发明提供了一种增加VLCFA水平或校正对象组织中VLCFA缺乏的方法，特别是在VLCFA内源性合成能力降低的对象中。此外，本发明提供了所公开的用于校正组织中LCFA与VLCFA的比率不平衡的方法。组织例如选自眼球，视网膜或睑脂，精子和睾丸，脑和神经系统，表皮和黏膜/黏膜组织，包括肺和呼吸道组织，心血管系统组织和膀胱组织，泌尿系统和消化系统。

组合物：

脂质组合物的VLCFA属于一个或多个脂肪酸基团VLCPUFA(即包括但不限于VLCn3和VLCn6)或VLCMUFA(包括VLCMUFAn7、VLCMUFAn9、VLCMUFAn11、VLCMUFAn13和VLCSA)。在一个实施方式中，用于本发明的治疗的脂质组合物包含至少5重量％的VLCFA。在一些(优选的)实施方式中，VLCFA的主要成分是ω-3酸和/或单不饱和脂肪酸。脂肪酸获自(即分离自)天然来源，例如来自下文详述的海洋油。

因此，本发明提供了包含至少5重量％的VLCFA的组合物，其用于治疗对象的疾病，特别是其中，疾病与一种或多种用于VLCFA的内源性合成的内源性延长酶系统的缺陷和/或能力降低有关。

在一个实施方式中，脂质组合物包含至少4.0重量％的极长链单不饱和脂肪酸和至少1.0重量％的极长链多不饱和脂肪酸。在另一个实施方式中，脂质组合物包含至少1.0重量％的极长链单不饱和脂肪酸和至少4.0重量％的极长链多不饱和脂肪酸。

此外，在一个实施方式中，脂质组合物包含至少8重量％的VLCMUFA，例如至少15重量％的VLCMUFA。

在一个实施方式中，脂质组合物包含至少2重量％的VLCPUFA，例如至少5重量％的VLCPUFA。VLCPUFA优选为ω-3或ω-6脂肪酸。对于某些特定用途，例如男性生育能力的治疗，该组合物包含ω-6VLCPUFA。

在一个实施方式中，脂质组合物总共包含至少8重量％、10重量％、12重量％、15重量％、例如至少20重量％、至少25重量％、更优选至少30重量％的极长链脂肪酸。

在一个实施方式中，该组合物包含几种不同脂肪酸的混合物，其具有不同的长度和不饱和度。这种组合物可以包含至少两种不同的VLCFA，例如至少三种不同的VLCFA。在一个实施方式中，该组合物除了VLCFA之外还包含LCPUFA，如下文进一步公开的。例如，该组合物包含至少两种LCPUFA和至少两种VLCFA。此外，该组合物可以包含ω-3和/或ω-6VLCPUFA以及VLCMUFA。在一个实施方式中，该组合物包含具有多于6个双键的ω-3和ω-6VLCPUFA。

组合物中可以存在的VLCFA选自包括但不限于以下脂肪酸组中的任一种：

C24:1n9(神经酸)和二十四碳烯酸的其他异构体；

C26:1n9和二十六碳烯酸的其他异构体；

C28:1n9和二十八碳烯酸的异构体；

C30:1、C32:1、C32:1和甚至更长的单不饱和脂肪酸

C24:4n3、C24:5n3、C24:6n3，特别是C24:5n3；

C26:3n3、C26:4n3、C26:5n3、C26:6n3、C26:7n3，特别是C26:6n3；

C28:3n3、C28:4n3、C28:5n3、C28:6n3、C28:7n3、C28:8n3，特别是C28:7n3、C28:8n3；

C30:3n3、C30:4n3、C30:5n3、C30:6n3、C30:7n3、C30:8n3；

C32:3n3、C32:4n3、C32:5n3、C32:6n3、C32:7n3、C32:8n3、C32:9n3，特别是C32:7n3、C32:8n3；

C34:4n3、C34:5n3、C34:6n3、C34:7n3、C34:8n3、C34:9n3，特别是C34:7n3、C34:8n3；

C36:4n3、C36:5n3、C36:6n3、C36:7n3、C36:8n3、C36:9n3，特别是C36:7n3、C36:8n3、或甚至更长的ω-3脂肪酸；

C24:2n6、C24:4n6、C24:5n6，

C26:4n6、C26:5n6、C26:6n6；

C28:4n6、C28:5n6、C28:6n6、C28:7n6；

C30:4n6、C30:5n6、C30:6n6、C30:7n6

C32:4n6、C32:5n6、C32:6n6、C32:7n6、C32:8n6，

C34:4n6、C34:5n6、C34:6n6、C34:8n6

C36:4n6、C36:5n6、C36:6n6、C34:8n6或甚至更长的ω-6脂肪酸；

并且还可能含有VLCSA C24:0、C26:0、C28:0、C30:0或C32:0、甚至更长的饱和脂肪酸。

在某些实施方式中，根据本发明所使用的组合物可以含有一定量的链长甚至比C32更长的脂肪酸，即包括但不限于链长为C34、C36、C38和C40的脂肪酸。此外，组合物中可以存在上面列出的脂肪酸的其他位置异构体，以及具有与上面列出的脂肪酸数目不同和/或双键数目不同的脂肪酸。

实施例表明，来自施用的组合物的VLCFA被不同组织和血浆吸收。在一个实施方式中，所用组合物包含实施例中所示的任何待吸收的脂肪酸。主要脂肪酸存在于膳食中，尤其是那些在组织中增加最多的脂肪酸。特别是，在一个实施方式中，所使用的组合物包含至少一种选自C24:5n3、C26:6n3和C28:8n3的脂肪酸。

在已知某些VLCFA积聚的疾病中，此类脂肪酸不应包括在用于治疗的组合物中。

在一个实施方式中，该组合物包含至少4重量％的链长为C24-C32的VLCMUFA，在一个实施方式中，该组合物包含VLCMUFA C24:1。特别是，对于一些与脑和神经组织相关的疾病的治疗，包括高浓度的这种脂肪酸可能是有益的。然而，在已知VLCMUFA积聚的疾病中，此类脂肪酸不应包括在治疗中。在一个实施方式中，该方法包括以4.0-50.0％、例如7.0-40.0％、8.0-20.0％、例如13.0-20.0％、例如约40％的量施用包含C24:1脂肪酸的脂质组合物的步骤。更进一步，为了治疗脑和神经组织疾病，以及为了眼健康和产前和产后健康，该组合物优选包含高浓度的DHA。如实施例2B所示，与脑组织的摄取有关，脂肪酸C28:8在脑组织中的吸收比其他物质更多，这对于该脂肪酸可以包括在用于脑健康的组合物中起到支持。

根据上述实施方式，施用的脂质组合物的脂肪酸可以以游离脂肪酸、游离脂肪酸盐、甘油单酯、二酯、三酯、乙酯、蜡酯、(O)-乙酰化ω-羟基脂肪酸(OAHFA)、胆固醇酯、神经酰胺、磷脂或鞘磷脂的形式存在，其单独或组合使用。或者，脂肪酸可以是可在消化道中吸收的任何形式，或通过局部施用后被特定组织吸收的任何形式。优选地，脂肪酸为游离脂肪酸、脂肪酸盐、乙酯、甘油酯或蜡酯的形式。对于递送包含VLFA组合物的制剂的局部施用，脂肪酸优选为游离脂肪酸、脂肪酸盐、例如甘油酯(单甘油二酯或甘油三酯单独或组合)、OAHFA、胆固醇酯、神经酰胺、磷脂、鞘磷脂或蜡酯的形式，并且在一个更优选的实施方式中，VLCFA为蜡酯的形式。在一个实施方式中，对于组合物的局部施用，这包含盐，因此组合物中的至少一些脂肪酸、例如至少一些VLCPUFA可以是脂肪酸盐的形式。

除了VLCFA，所用脂质组合物还可以包含其他脂肪酸，例如其他长链多不饱和脂肪酸。在一个实施方式中，所使用的组合物包含至少5重量％的一种或多种LCPUFA，例如一种或多种C20-C22PUFA。在某些实施方式中，本发明的此类组合物包含至少10重量％、至少25重量％、至少30重量％、至少40重量％、至少50重量％、至少60重量％或至少70重量％的至少一种LCPUFA，例如一种或多种C20-C22长链PUFA。在一个实施方式中，LCPUFA包含EPA、DHA和ω-3DPA(n3DPA，全顺式-7,10,13,16,19-二十二碳五烯酸)中的至少一种。在另一个实施方式中，本发明的组合物包含至少5重量百分比、至少10重量百分比、或至少20重量百分比、至少30重量百分比、至少40重量百分比的DHA。此外，在其他实施方式中，本发明的组合物包含至少5重量百分比、至少8重量百分比或至少10重量百分比的DPA(22:5n3)。在本发明的一些实施方式中，组合物的EPA:DHA的重量比为约1:15至约10:1、约1:10至约8:1、约1:8至约6:1、约1:5至约5:1、约1:4至约4:1、约1:3至约3:1、或约1:2至约2:1。在一个实施方式中，所用组合物包含按组合物重量计5-30％的VLCFA和50-90％的LCPUFA。在一个实施方式中，所使用的脂质组合物主要包含脂肪酸和/或脂肪酸衍生物，优选脂质组合物的至少90.0重量％、例如至少95.0重量％是脂肪酸。

此外，在一些实施方式中，富含VLCFA的脂质组合物包含进一步量的单不饱和脂肪酸。在一个实施方式中，所使用的组合物包含至少5重量％的一种或多种LCMUFA，例如一种或多种C20-C22MUFA。在某些实施方式中，本发明的此类组合物包含至少10重量％、至少25重量％、至少30重量％、至少40重量％、至少50重量％、至少60重量％或至少70重量％的至少一种LCMUFA，例如一种或多种C20-C22长链MUFA。在一些实施方式中，富含VLCFA的组合物还包含一定量的C18MUFA，例如C18:1n9和/或C18:1n7。

此外，在一些实施方式中，富含VLCFA的脂质组合物包含少量的各种长度的饱和脂肪酸。总的来说，该组合物包含小于1.0％的饱和脂肪酸，更优选小于0.5％的饱和脂肪酸。特别地，C16:0(棕榈酸)、C18:0(硬脂酸)和C20:0(花生酸)的量低，并且优选它们的总含量小于1.0％。特别地，硬脂酸的量低，优选低于1.0％，更优选低于0.5％。此外，极长链饱和脂肪酸(VLCSFA)的量低，并且脂肪酸C24:0、C26:0、C28:0和C30:0的总量优选低于脂肪酸混合物重量的2.0％，更优选低于1.0％，最优选低于0.5％。但是，在其他实施方式中(如其中该组合物用于治疗皮肤或黏膜)，该组合物可以包含极长链饱和脂肪酸(VLCSA)。例如，该组合物包含大于1.0％、例如大于2.0％的VLCSA，并且包含在组合物中以供使用的相关VLCSA是例如二十四酸(C24:0)和二十六酸(C26:0)。在一个实施例中，该组合物包含C24:0并且用于治疗皮肤病，特别是丘疹性脓疱性酒渣鼻。

Bennett和Anderson(2016)(解读VLC-PUFA在视网膜中的重要性的当前进展，C.Bowes Rickman等人(编)，视网膜退行性疾病，实验医学和生物学进展854,瑞士施普林格)，在关于解读视网膜中VLCPUFA的重要性的当前进展的一本书的章节中，陈述如果VLCPUFA可以在缺陷视网膜中重组，则这些脂肪酸的重要性将得到巩固。“然而，VLCPUFA的化学合成量不够大，导致无法在小鼠中进行喂食研究”。尽管许多工作都集中在使用重组技术合成生产VLCPUFA，仍然是这种情况。例如，Anderson等人(US2009/0203787A1、US2012/0071558A1和US2014/0100280A1)公开了一种使用ELOVL4基因生产C28-C38VLCPUFA的重组方法，并且Anderson等人表示(在US2009/0203787A1第13段中)此类重组过程是必要的，因为VLCPUFA在少数器官或某些动物物种中仅以极少量天然存在，并指出“为了获得甚至μg量的这些VLC-PUFA，其必须从牛视网膜等天然来源中提取。因此，对C28-C38 VLCPUFA的研究受到限制，并且不存在商业化生产的手段。”此外，Raman等人(US2013/0190399)公开了VLCPUFA的化学合成。根据Raman的说法，[0009]“由于在少数已知的生物来源中发现VLC-PUFA的酶促产率有限且数量有限，对化合物及其治疗用途的研究非常有限。因此，需要可靠且有效的化学方法来生产VLCPUFA……”。在[0010]中：Raman指出：VLCPUFA的常规来源(例如视网膜、脑和精子)仅含有极少量的这些长链脂肪酸。Raman等人从DHA或DPA等C20-C22LCPUFA开始合成。通过使用“饱和锌增量剂”或醛的化学合成，选定的LCPUFA以化学方式连接到油中不存在的单独碳原子链上，以提供合成的VLC-PUFA。不幸的是，公开的LCPUFA(如EPA、DHA和DPA)与单独的非天然碳原子链通过合成的“增量剂”发生的化学反应将导致合成的VLCPUFA的双键数量与原始PUFA的相同，即若以EPA和DPA开始，则为5个双键，若以DHA开始，则为6个双键。Raman公开了具有4、5和6个双键的VLCPUFA的合成，因此没有教导如何合成具有不同数量双键的所有生物学上重要的VLCPUFA。

实际上，脂肪酸的双键都是顺式的。在多不饱和ω-3和ω-6脂肪酸中，每个双键被一个亚甲基(-CH₂-)与另一个双键隔开。脂肪酸分子中双键的全顺式以及准确位置对于脂肪酸的生物转化和作用至关重要。所用组合物的多不饱和脂肪酸基本上都是顺式的。天然脂肪酸在体内的作用可能使它们与化学合成的脂肪酸(其总是含有一定量的反式异构体)以及双键位置偏离有益天然脂肪酸位置的脂肪酸区别开来，包括具有共轭双键的脂肪酸异构体。在涉及VLCPUFA(包括VLCn3s和VLCn6s)的复杂生物反应中，反式和共轭异构体将与天然全顺式异构体一起转化，并产生与天然脂肪酸异构体竞争并改变其生物效应的分子。

在一些实施方式中，脂质组合物的脂肪酸来源于(即分离自)天然来源，例如来自水生动物或植物的油、天然非水生植物油、或这些油的组合。优选地，脂肪酸源自来自水生动物或植物，例如来自海洋或淡水生物的油或油的组合。更优选地，脂肪酸源自海洋油，即源自海洋动物或植物的油。海洋油可选自、包括但不限于鱼油、软体动物油、甲壳类油、海洋哺乳动物油、浮游生物油、藻油和微藻油。脂质组合物中的脂肪酸也可以源自如上所述的两种或更多种天然来源的组合。术语“鱼油”包括存在于任何鱼类中的所有脂质部分。“鱼”是一个术语，包括硬骨鱼以及软骨鱼类(软骨鱼类，如鲨鱼、鳐鱼和银鲛)、圆口鱼和无颌类。在不限制原材料的选择的情况下，在硬骨鱼中优选的物种可以在诸如鳀科(Engraulidae)、鲹科(Carangidae)、鲱科(Clupeidae)、胡瓜鱼科(Osmeridae)、鲑科(Salmonidae)和鲭科(Scombridae)的鱼类中找到。可以从中提取这种油的特定鱼类包括鲱鱼(herring)、毛鳞鱼(capelin)、鳀鱼(anchovy)、鲭鱼(mackerel)、蓝鳕(blue whiting)、沙鳗(sand eel)、鳕鱼(cod)和狭鳕(pollock)。油可以来自整条鱼，或来自鱼的部分，例如肝脏或去除鱼片后剩余的部分。在软骨鱼类如鲨鱼中，油可优选地从肝脏获得。术语“软体动物油”包括存在于软体动物门任何物种中的所有脂质部分，包括任何头足类动物，例如鱿鱼和章鱼。这里使用的术语“浮游生物油”是指可以从生活在大水体中且无法逆流游泳的各种生物体中获得的所有脂质部分，不包括大型生物体如水母。术语“天然植物油”意在包括来自藻类和微藻的油，也意在包括来自单细胞生物的油。因此，天然植物油可以选自所有源自非转基因植物、蔬菜、种子、藻类、微藻和单细胞生物的油。

如本文所用，术语“天然油”和“来自天然来源的油”是指任何含脂肪酸的脂质，包括但不限于从天然生物体获得的甘油酯、磷脂、二酰基甘油醚、蜡酯、甾醇、甾醇酯、神经酰胺或鞘磷脂中的一种或多种。天然生物体没有经过基因改造(非转基因)。

本发明的脂质组合物的VLCPUFA基本上为全顺式。所使用的根据本发明的VLCFA组合物因此基本上不含反式脂肪酸。反式异构体的量小于总脂肪酸的2％，小于1％，例如小于0.9重量％，优选小于0.5重量％，更优选小于0.3重量％。在一个实施方式中，反式异构体的量在油的0.1-0.3重量％的范围内，在另一个实施方式中，VLCFA反式异构体的量在油的0.2-0.5重量％的范围内。因此，对于最佳组合物，从生物学的角度来看，从天然油中富含的VLCFA是更优选的。组合物中反式脂肪酸的量尤其可以通过GC-FID方法测量，其中反式脂肪酸将出现在主峰之前或之后，并且其中假定它们具有与全顺式脂肪酸相同的响应因子。

根据本发明的脂肪酸组合物通常可以通过从天然油中脂肪酸的酯交换或水解的合适方案和随后的物理化学纯化过程获得和分离。根据本发明的组合物尤其可以基于专利申请WO2016/182452中公开的那些的天然油和方法制造，但是不限于该申请中公开的起始油和方法。所用组合物的脂肪酸不是化学合成的。脂质组合物中的脂肪酸已从天然来源中分离和浓缩以获得富含的量的脂肪酸。在一个实施方式中，与从天然来源分离的油相比，组合物的VLCFA是未改性的。因此，在一个实施方式中，VLCPUFA的链长是未修饰的，并且优选地，组合物中包含天然VLCPUFA，在施用之前没有进行任何延长步骤。此外，所述组合物不包含任何分泌或产生VLCFA的脂质产生细胞。相反，该组合物包含一定量的VLCFA，其中使用适合于规模化和商业化生产的方法，从天然来源分离VLCFA并提高浓度。脂肪酸通常是不稳定的，所使用的脂肪酸应通过使用温和条件(例如低温和压力)的方法制备以避免降解和异构化，例如以避免将天然全顺式脂肪酸改性为反式脂肪酸或共轭脂肪酸。

所使用的组合物可以包括在不同种类的产品中，应当根据用途进行配制。所述组合物可以通过任何施用途径施用，包括但不限于口服、静脉内、肌内、舌下、皮下、鞘内、颊、直肠、阴道、眼、鼻、吸入、透皮和经皮。对于口服使用，本公开的组合物可以配制成多种形式，例如口服施用形式，例如片剂或软或硬胶囊、可咀嚼胶囊或珠，或者作为流体组合物。通过摄入天然油中VLCFA部分的浓缩物，与摄取鱼油、磷虾油、藻油或水菖蒲油等天然油相比，对象可以获益于更高的积极效果以及更少量的药物/补充剂。同时，对象将受益于不存在热量摄入以及脂肪酸和脂质组分的潜在负面影响，其不促进缓解和/或愈合，如本申请中所公开的。

在本发明的一个实施方式中，脂质组合物的施用通过口服途径进行。在本发明的另一个实施方式中，脂质组合物的施用通过胃肠外施用来进行。

在一个优选的实施方式中，用于胃肠外施用的脂质组合物与适合胃肠外使用的稀释剂一起施用，所述稀释剂可以是用作胃肠外营养物的脂质组合物，即掺入到商业脂质乳液制剂中，例如用作卡路里和必需脂肪酸来源的静脉内脂肪乳剂，例如Intralipid。

在一个实施方式中，与肺组织和呼吸道有关的疾病的治疗通过根据本领域的吸入装置进行。

在一个实施方式中，与皮肤和黏膜有关的疾病的治疗通过透皮递送进行，例如通过直接施用于皮肤和黏膜，例如通过本领域的洗剂或乳膏，或通过贴剂、栓剂(和类似装置)。在另一个更通常的实施方式中，贴剂可以用于将脂质组合物引入体内，用于通过皮肤将脂肪酸透皮递送到血流中。包含根据本发明所使用的组合物的化妆品包括洗剂和乳膏、皮肤保湿制剂、防晒制剂，而这些通常直接施用于皮肤。在一个实施方式中，该组合物将被局部施用在眼睛或眼睑中或周围。对于局部施用，这种制剂可以是例如滴眼剂、软膏剂、药膏剂、洗剂、凝胶剂、眼用迷你片剂等形式。

在本公开的一些实施方式中，该组合物起到活性药物成分(API)的作用，并且该组合物用作药物。在一些实施方式中，组合物的脂肪酸以药学上可接受的量存在。如本文所用，术语“药学有效量”是指足以治疗(如减轻和/或缓解有需要的对象中至少一种健康问题的影响、症状等)的量。在本发明的至少一些实施方式中，组合物不包含额外的活性剂。在该实施方式中，该组合物可以用于对象的药物治疗，例如诊断为VLCFA的内源性合成能力降低的那些对象。相关疾病也在上文中公开。在另一个实施方式中，本发明的组合物是包含VLCFA的食品补充剂、营养补充剂或膳食补充剂。在一个相关的实施方式中，本发明提供了一种组合物，其选自特殊医疗用途的肠内制剂、特殊健康用途的食品、特殊医疗用途的食品(FSMP)、特殊膳食用途的食品(FSDU)、医疗营养和医疗食品。此类组合物特别适用于缺乏某些营养物(如VLCFA)的对象。该组合物适用于具有独特营养需求的对象的营养管理。这种组合物通常在医学监督下施用于对象。该组合物包含相关的VLCFA，以增加或校正血液或特定组织中的VLCFA水平，例如被诊断为VLCFA的内源性合成能力降低的对象的VLCFA水平。因此，VLCFA组合物特别用于治疗VLCFA的内源性合成能力降低的对象。本发明的组合物和方法具有校正此类目标人群的营养缺乏的能力。

根据本发明的膳食补充剂可以以任何合适的形式递送，包括但不限于口服递送、皮肤递送或黏膜递送，包括作为滴眼剂。膳食补充剂的成分可以包括可接受的赋形剂和/或用于口服的载体，特别是口服递送载体的形式，例如胶囊(优选明胶胶囊)、液体、乳剂、片剂或粉末。

剂量：

每日总剂量将取决于几个因素，包括对象患有哪种疾病、疾病的严重程度、对象、组合物、制剂、使用类型和施用方式。在一个实施方式中，脂质组合物剂量在约0.600g-约6.0g的范围内。例如，在一些实施方式中，组合物的总剂量范围为约0.8g-约4.0g，约1.0g-约4.0g，例如约3.0g，或约1.0g-约2.0g。如果使用浓度远高于5％的高度浓缩VLCFA组合物，则剂量可能会低得多，例如约0.06-0.6g。组合物可以以1-10个剂量施用，例如每天1-4次，例如每天一次、两次、三次或四次，进一步例如每天一次、两次或三次。在一个实施方式中，根据对于对象测量的VLCFA水平调整剂量。组合物优选长期施用，例如12-52周，如24-46周。预计12-16周后将达到足够的VLCFA水平，但是对象应当继续治疗以维持该水平。在一个实施方式中，对象应该在余生中继续服用该组合物。

实施例：

实施例1：在小鼠中补充VLCPUFA-对眼(眼球)和血浆的脂肪酸组成的影响

脂质组合物：

Lipidmix 1和2由标准凤尾鱼油制备。将粗制鱼油纯化并乙基化，将乙基化油进行分馏并通过蒸馏提升浓度以及尿素沉淀，对Lipidmix 1进行锂沉淀，以获得所需的组合物。最后通过与甘油的酶促反应将部分重新酯化为甘油三酯。

在Scion 436-GC上分析Lipidmix 1和2的脂肪酸组成，其带分流/不分流进样器(不分流1分钟)，使用Restek Rxi-5ms毛细管柱(长30m，内径0.25mm，膜厚0.25μM)、火焰离子化检测器和TotalChrom软件。载气为氢气。使用C23:0、EPA和DHA标准计算脂肪酸的量。VLCPUFA的响应因子假定与DHA相同，因为没有可用的标准。

Lipidmix 1和2的脂肪酸组成如表1所示。

表1.Lipidmix 1和2的脂肪酸组成

按以下组成制备测试饲料：

测试饲料1：10％脂肪(5％大豆油、5％猪油)、17％蛋白质、5％纤维、62％碳水化合物、矿物质、维生素(即标准小鼠饲料)。

测试饲料2：10％脂肪(5％Lipidmix 1(包括VLCPUFA)、5％猪油)、17％蛋白质、5％纤维、62％碳水化合物、矿物质、维生素(即包含VLCPUFA)。

测试饲料3：10％脂肪(5％Lipidmix 2、5％猪油)、17％蛋白质、5％纤维、62％碳水化合物、矿物质、维生素(即不包含VLCPUFA)。

所有测试饲料都储存在-20℃。

动物：

来自查尔斯河的株C57/bl6的小鼠用于喂食研究。体重为约25g。动物被关在室温下的笼子里，可以自由获取食物和水。

眼组织

在喂食研究开始后29-33天处死来自测试饲料组1的8个个体和来自测试饲料组2和3的9个个体。由专业人员从动物身上仔细解剖出含有视网膜组织的整个眼球。样品立即在干冰上冷冻并运往挪威诺菲玛，以提取和分离磷脂。制备的样品的脂肪酸分析在挪威Epax进行。

用Folch等人的方法¹(使用薄层色谱法(TLC)分离脂质类别)从小鼠眼组织中提取所有脂质。磷脂部分用于脂肪酸分析。

血浆

从喂食研究开始后33天处死的每个测试饲料组的2只小鼠中取血样。样本是在死后立即从主动脉采集的。样品立即在干冰上冷冻并运往挪威Epax进行分析。

将含有0.05157mg/ml C23:0内部标准的1ml溶液添加到试管中，并在氮气流下蒸发溶剂。之后，在同一试管中加入血浆并记录组织的重量。加入3.5ml含有0.5M甲醇钠的甲醇溶液，之后在沸水浴中将试管加热1小时。冷却后加入5ml BCL3，将试管在沸水浴中加热5分钟。加热试管后，加入0.6ml异辛烷并用5ml饱和氯化钠水溶液洗涤。将异辛烷相转移到微量瓶中并直接注入GC。

眼组织样品的脂肪酸分析：

脂肪酸分析在Perkin Elmer,Clarius 680/600T GC-MS上使用Agilent CP Wax52 B(CP7713)柱进行。由67、79和91m/z的同时单离子扫描获得的色谱峰面积用于定量LC和VLCPUFA脂肪酸。使用此设定的DHA(相对于C23:0)的响应因子是通过使用具有已知浓度的DHA和C23:0的标准溶液计算的。由于VLCPUFA没有可用的标准，因此假定其具有与DHA相同的响应因子，其用于计算VLCPUFA的mg脂肪酸/g组织。

眼的结果

具有22个或更多个碳的PUFA的分析结果显示在下表2中，并且每种脂肪酸的结果显示在图1-8中，其中

图1.喂食测试饲料1、2和3的小鼠眼(眼球)中EPA的含量(mg/g组织)。

图2.喂食测试饲料1、2和3的小鼠眼(眼球)中DHA的含量(mg/g组织)。

图3.喂食测试饲料1、2和3的小鼠眼(眼球)中DPAn3的含量(mg/g组织)。

图4.喂食测试饲料1、2和3的小鼠眼(眼球)中C24:5n3的含量(μg/g组织)。

图5.喂食测试饲料1、2和3的小鼠眼(眼球)中C24:6n3的含量(μg/g组织)。

图6.喂食测试饲料1、2和3的小鼠眼(眼球)中C26:5n3的含量(μg/g组织)。

图7.喂食测试饲料1、2和3的小鼠眼(眼球)中C26:6n3的含量(μg/g组织)。

图8.喂食测试饲料1、2和3的小鼠眼(眼球)中C28:8n3的含量(μg/g组织)。

表2.小鼠眼(眼球)组织中脂肪酸的计算量。

组织分析的结果显示，与对照组(测试饲料1)相比，喂食测试饲料2和3的小鼠眼组织中EPA、DPA和DHA的水平略高。测试饲料2和3之间似乎没有区别。这些饲料含有相似量的EPA、DPA和DHA。

喂食测试饲料2(包含VLCPUFA)的小鼠的PL提取物显示出比喂食测试饲料1和3的小鼠更高的VLCPUFA水平。尤其是对于VLCPUFA C26:6和C28:8，这一点非常清楚。

血浆的结果

具有20个或更多个碳的血浆中发现的PUFA脂肪酸的分析结果显示在下表3中。每种脂肪酸的结果如图9-16所示，其中

图9.喂食测试饲料1、2和3的小鼠血浆中EPA的含量(μg/g组织)。

图10.喂食测试饲料1、2和3的小鼠血浆中DHA的含量(μg/g组织)。

图11.喂食测试饲料1、2和3的小鼠血浆中DPAn3的含量(μg/g组织)。

图12.喂食测试饲料1、2和3的小鼠血浆中C24:5n3的含量(μg/g组织)。

图13.喂食测试饲料1、2和3的小鼠血浆中C24:6n3的含量(μg/g组织)。

图14.喂食测试饲料1、2和3的小鼠血浆中C26:5n3的含量(μg/g组织)。

图15.喂食测试饲料1、2和3的小鼠血浆中C26:6n3的含量(μg/g组织)。

图16.喂食测试饲料1、2和3的小鼠血浆中C28:8n3的含量(μg/g组织)。

表3.小鼠血浆中脂肪酸的计算量。

结果表明，所有样品中的EPA、DHA和DPA水平都相似，趋势是喂食测试饲料2和3的组比喂食标准小鼠饲料的对照组(测试饲料1)具有更高的水平。这是符合预期的，因为测试饲料2和3包含EPA、DHA和DPA，而标准小鼠饲料不含这些脂肪酸。

对于VLC脂肪酸，在喂食测试饲料2的组的血浆中发现显著更高的水平，该组的饲料中含有VLC脂肪酸。这对于脂肪酸C26:5、C26:6和C28:8尤其明显，其中在喂食测试饲料2的组中发现显著水平，而在其他两组中未发现可检测的量。

结论：

对小鼠的喂食研究表明，口服的VLC脂肪酸被眼组织吸收。饲料中含有VLCPUFA的小鼠的眼组织中VLCPUFA水平高于对照组。

已知眼组织中极长链脂质成分对视网膜和视网膜功能起重要作用。该实施例支持本发明，即VLCFA的组合物被组织吸收并可以用于治疗眼部疾病并且通常用于维持良好的眼部健康。

对小鼠的喂食研究还表明，口服的VLC脂肪酸被吸收到血浆中。喂食包含VLCPUFA的饲料的小鼠血浆中VLC脂肪酸水平明显高于对照组。

该实施例支持本发明，即VLCFA的组合物可以被运输到血浆中以进一步分布在其他组织中。生物体中的吸收和运输是活性化合物对各种疾病起作用以及通常保持良好健康的重要步骤。

实施例1A：在小鼠中补充VLCPUFA-对皮肤、脑、睾丸、肝和心脏的脂肪酸组成的影响

脂质组合物和测试饲料

使用与实施例1中所述相同的脂质组合物、测试饲料和动物。如实施例1中提供的，2号测试饲料包含VLCPUFA。

组织的准备

在喂食研究开始后29-33天处死来自测试饲料组1的8个个体和来自测试饲料组2和3的9个个体。由专业人员从每个饲料组中的5只动物中仔细解剖下皮肤、脑、睾丸、肝和心脏组织样品。样品立即在干冰上冷冻并运往挪威诺菲玛，从而提取和分离磷脂。制备的样品的脂肪酸分析在挪威Epax进行。

用Folch等人的方法¹(使用薄层色谱法(TLC)分离脂质类别)从组织中提取所有脂质。磷脂(PL)部分用于所有组织样品的脂肪酸分析，而甘油三酯(TAG)部分用于肝和心脏样品的分析。

皮肤、脑、睾丸、肝和心脏组织样品的脂肪酸分析：

脂肪酸分析在Perkin Elmer,Clarius 680/600T GC-MS上使用Agilent CP Wax52 B(CP7713)柱进行。由67、79和91m/z的同时单离子扫描获得的色谱峰面积用于定量LC和VLCPUFA脂肪酸。使用此设定的DHA(相对于C23:0)的响应因子是通过使用具有已知浓度的DHA和C23:0的标准溶液计算的。由于VLCPUFA没有可用的标准，因此假定其具有与DHA相同的响应因子，其用于计算VLCPUFA的mg脂肪酸/g组织。

皮肤的结果

皮肤组织中具有22个或更多个碳的PUFA的分析结果显示在下表A1中，并且每种脂肪酸的结果显示在图31-33中，其中

图31.喂食测试饲料1、2和3的小鼠皮肤中C24:5n3的含量(mg/g组织)。

图32.喂食测试饲料1、2和3的小鼠皮肤中C26:6n3的含量(mg/g组织)。

图33.喂食测试饲料1、2和3的小鼠皮肤中C28:8n3的含量(mg/g组织)。

表A1.不同饲料组的皮肤组织PL部分中不同脂肪酸的平均含量

图31-33显示了喂食不同饲料的小鼠皮肤组织中一些主要VLC脂肪酸的含量。图中的每个框表示平均值+/-标准偏差，括号显示每组中的最高和最低值。

脑的结果

脑组织中具有22个或更多个碳的PUFA的分析结果显示在下表A2中，并且每种脂肪酸的结果显示在图34-37中，其中

图34.喂食测试饲料1、2和3的小鼠脑中EPA的含量(mg/g组织)。

图35.喂食测试饲料1、2和3的小鼠脑中DHA的含量(mg/g组织)。

图36.喂食测试饲料1、2和3的小鼠脑中C24:5n3的含量(mg/g组织)。

图37.喂食测试饲料1、2和3的小鼠脑中C28:8n3的含量(mg/g组织)。

表A2.不同饲料组的脑组织PL部分中不同脂肪酸的平均含量

图34-37显示了喂食不同饲料的小鼠脑组织中主要VLC脂肪酸的含量。图中的每个框表示平均值+/-一个标准偏差，括号显示每组中的最高和最低值。

睾丸的结果

睾丸组织中具有22个或更多个碳的PUFA的分析结果显示在下表A3中，并且每种脂肪酸的结果显示在图38-41中，其中

图38.喂食测试饲料1、2和3的小鼠睾丸中C24:5n3的含量(mg/g组织)。

图39.喂食测试饲料1、2和3的小鼠睾丸中C24:6n3的含量(mg/g组织)。

图40.喂食测试饲料1、2和3的小鼠睾丸中C26:6n3的含量(mg/g组织)。

图41.喂食测试饲料1、2和3的小鼠睾丸中C28:8n3的含量(mg/g组织)。

表A3.不同饲料组的睾丸组织PL部分中不同脂肪酸的平均含量

图38-41显示了喂食不同饲料的小鼠睾丸组织中主要VLC脂肪酸的含量。图中的每个框表示平均值+/-一个标准偏差，括号显示每组中的最高和最低值。

肝的结果

PL部分-肝

肝组织的PL部分中具有22个或更多个碳的PUFA的分析结果显示在下表A4中，并且每种脂肪酸的结果显示在图42-43中，其中

图42.喂食测试饲料1、2和3的小鼠肝中PL的C24:6n3的含量(mg/g组织)。

图43.喂食测试饲料1、2和3的小鼠肝中PL的C26:6n3的含量(mg/g组织)。

表A4：各饲料组中肝的PL部分中脂肪酸的平均值

图42-43显示了喂食不同饲料的小鼠肝组织PL部分中一些主要VLC脂肪酸的含量。图中的每个框表示平均值+/-一个标准偏差，括号显示每组中的最高和最低值。

TAG部分-肝

肝组织的TAG部分中具有22个或更多个碳的PUFA的分析结果显示在下表A5中，并且每种脂肪酸的结果显示在图44-46中，其中

图44.喂食测试饲料1、2和3的小鼠肝的TAG部分中C24:5n3的含量(mg/g组织)。

图45.喂食测试饲料1、2和3的小鼠肝的TAG部分中C26:6n3的含量(mg/g组织)。

图46.喂食测试饲料1、2和3的小鼠肝的TAG部分中C28:8n3的含量(mg/g组织)。

表A5：各饲料组中肝组织的TAG部分中脂肪酸的平均值

图44-46显示了喂食不同饲料的小鼠肝组织TAG部分中一些主要VLC脂肪酸的含量。图中的每个框表示平均值+/-一个标准偏差，括号显示每组中的最高和最低值。

心脏的结果

PL部分-心脏

心脏的PL部分中具有22个或更多个碳的PUFA的分析结果显示在下表A6中，并且每种脂肪酸的结果显示在图47-48中，其中

图47.喂食测试饲料1、2和3的小鼠心脏的PL部分中C24:5n3的含量(μg/g组织)。

图48.喂食测试饲料1、2和3的小鼠心脏的PL部分中C26:6n3的含量(μg/g组织)。

表A6：各饲料组中心脏的PL部分中脂肪酸的平均值

图47-48显示了喂食不同饲料的小鼠心脏组织PL部分中一些主要VLC脂肪酸的含量。图中的每个框表示平均值+/-一个标准偏差，括号显示每组中的最高和最低值。

TAG部分-心脏

心脏组织的TAG部分中具有22个或更多个碳的PUFA的分析结果显示在下表A7中，并且每种脂肪酸的结果显示在图49-51中，其中

图49.喂食测试饲料1、2和3的小鼠心脏的TAG部分中C24:5n3的含量(mg/g组织)。

图50.喂食测试饲料1、2和3的小鼠心脏的TAG部分中C26:6n3的含量(mg/g组织)。

图51.喂食测试饲料1、2和3的小鼠心脏的TAG部分中C28:8n3的含量(mg/g组织)。

表A7：各饲料组中心脏组织的TAG部分中脂肪酸的平均值

图49-51显示了喂食不同饲料的小鼠心脏组织TAG部分中一些主要VLC脂肪酸的含量。图中的每个框表示平均值+/-一个标准偏差，括号显示每组中的最高和最低值。

结论：

对小鼠的喂食研究表明，口服的VLC脂肪酸被皮肤、脑、睾丸、肝和心脏组织吸收。饲料中含有VLCPUFA的小鼠的组织中VLCPUFA水平高于对照组。脂肪酸通常以极性脂质部分(包括磷脂)和中性甘油三酯脂质部分(包括甘油三酯)被组织吸收。

该实施例支持本发明，即VLCFA的组合物被组织吸收并可以用于治疗由于缺乏VLCFA而引起的疾病并且通常用于维持这些器官的良好功能。

实施例2：

在大西洋鲑鱼饲料中补充VLCPUFA-对眼的脂肪酸组成的影响

脂质组合物：

Lipidmix A由标准凤尾鱼油制备。将粗制鱼油纯化并乙基化，将乙基化油进行分馏并通过蒸馏提升浓度，尿素沉淀以及锂沉淀，以获得所需的组合物。最后通过与甘油的酶促反应将VLCPUFA部分重新酯化为甘油三酯。Lipidmix A为甘油三酯形式，含有少量甘油单酯和甘油二酯。

在Perkin Elmer,Clarius 500上进行Lipidmix A的脂肪酸分析，其带分流/不分流进样器(不分流1分钟)，使用Agilent CP Wax 52 B(CP7713)柱、火焰离子化检测器和TotalChrom软件。载气为氢气。使用23:0内部标准计算脂肪酸的量。DHA(相对于C23:0)的响应因子是通过使用具有已知浓度的EPA、DHA和C23:0的标准溶液计算的。由于VLCPUFA没有可用的标准，因此假定其具有与DHA相同的响应因子，其用于计算VLCPUFA的mg/g。具有20个或更多个碳的Lipidmix A中的PUFA脂肪酸的分析结果显示在下表4中。

表4.Lipidmix A的脂肪酸组合物

Lipidmix A包含来自鱼油的175mg/g VLCPUFA，用于制备具有不同含量的VLCPUFA的测试饲料。

测试饲料：

准备5种不同的测试饲料(a、b、c、d和e)。调整成分的量以确保所有测试饲料中的水平相同。将EPA和DHA的含量也调整到相同浓度。唯一的区别是测试饲料中VLCPUFA的含量。测试饲料中VLCPUFA浓度的调整是通过向测试饲料中添加不同量的Lipidmix A来完成的。

不同测试饲料的组成见表5。

表5.测试饲料的组成(重量％)

喂食试验：

实验使用重约5克的幼年养殖大西洋鲑鱼(Salmo salar)。

制备5种不同的测试饲料(a-e，饲料中含0.00-1.41重量％的VLCPUFA)。为每种测试饲料(一式三份)设置3个饲养池。将100条鱼放入各个带循环淡水的池中。饲养期为4周。在饲养实验结束时，将每个池中的10条鱼汇总，处死，在干冰上冷冻，并在解剖器官前储存在-40℃下。个体重量增加到约11克。

样品制备：

从每个饲养池的10个个体中解剖出整个眼球，均化以制成10条鱼的混合样品，并在液氮中冷冻并储存在-40℃下以供后续脂质分析。每个测试饲料都有一式三份的样品(来自三个池的混合样品)。

通过Folch等人的方法从鲑鱼眼组织中提取总脂质。使用薄层色谱法(TLC)分离脂质类别。磷脂部分用于脂肪酸分析。

眼组织的脂肪酸分析：

组织提取物的脂肪酸分析在Perkin Elmer,Clarius 680/600T GC-MS上使用Agilent CP Wax 52 B(CP7713)柱进行。由67、79和91m/z的同时单离子扫描获得的色谱峰面积用于定量LC和VLCPUFA。使用此设定的DHA(相对于C23:0)的响应因子是通过使用具有已知浓度的DHA和C23:0的标准溶液计算的。由于VLCPUFA没有可用的标准，因此假定其具有与DHA相同的响应因子，其用于计算VLCPUFA的mg脂肪酸/g组织。

结果：

具有20个或更多个碳的鲑鱼眼组织中的PUFA的分析结果显示在下表6中。每种脂肪酸的结果如图17-24所示，其中

图17提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的眼球组织中EPA的含量(mg/g组织)。

图18提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的眼球组织中DHA的含量(mg/g组织)。

图19提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的眼球组织中DPAn3的含量(mg/g组织)。

图20提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的眼球组织中C24:5n3的含量(mg/g组织)。

图21提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的眼球组织中C24:6n3的含量(mg/g组织)。

图22提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的眼球组织中C26:5n3的含量(mg/g组织)。

图23提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的眼球组织中C26:6n3的含量(mg/g组织)。

图24提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的眼球组织中C28:8n3的含量(mg/g组织)。

表6.喂食具有不同浓度VLCPUFA的测试饲料的Salmo salar的眼球组织的PL部分脂肪酸的计算量

*异常值，不包括在进一步的计算和图表/图中。

数据显示，随着测试饲料中VLCPUFA浓度的增加，鲑鱼眼组织(眼球)中VLCPUFA含量有增加的趋势。对于C26:5、C26:6和C28:8，具有最高VLCPUFA含量的测试饲料d和e相对于没有任何VLCPUFA的测试饲料而言效果显著。

结论：

鲑鱼喂食研究表明，口服的VLCPUFA导致眼组织(眼球)中一些VLCPUFA含量的增加。众所周知，VLCPUFA在人眼中发挥重要作用，我们现在已经证明VLCPUFA也是鲑鱼眼的一部分。已知眼视网膜具有高表达的ELOVL4蛋白和相对高含量的VLCPUFA。以前的研究表明，眼中VLCPUFA的水平仅由内源性延长和去饱和反应决定。本研究首次表明，VLCPUFAS可以从饲料中摄取。

该实施例支持本发明，即VLCFA的组合物可以用于补充剂，并可能治疗和缓解眼部相关疾病或一般眼部健康。

实施例2B：

在大西洋鲑鱼饲料中补充VLCPUFA-对皮肤、脑、心脏和肝的脂肪酸组成的影响

使用与实施例2相同的脂质组合物和测试饲料，喂食实验和样品制备的细节在实施例2中给出。分析了所有组织的PL部分，而对于心脏和肝组织还分析了TAG部分。

皮肤、脑、心和肝组织的脂肪酸分析：

组织提取物的脂肪酸分析在Perkin Elmer,Clarius 680/600T GC-MS上使用Agilent CP Wax 52 B(CP7713)柱进行。由67、79和91m/z的同时单离子扫描获得的色谱峰面积用于定量LC和VLCPUFA。使用此设定的DHA(相对于C23:0)的响应因子是通过使用具有已知浓度的DHA和C23:0的标准溶液计算的。由于VLCPUFA没有可用的标准，因此假定其具有与DHA相同的响应因子，其用于计算VLCPUFA的mg脂肪酸/g组织。

皮肤组织的结果：

具有20个或更多个碳的鲑鱼皮肤组织中的PUFA的分析结果显示在下表B1中。每种脂肪酸的结果如图52-54所示，其中

图52提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的皮肤组织中C24:5n3的含量(μg/g组织)。

图53提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的皮肤组织中C26:6n3的含量(μg/g组织)。

图54提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的皮肤组织中C28:8n3的含量(μg/g组织)。

表B1：各饲料组的皮肤组织中不同脂肪酸的平均值

*一个异常值被移除

图52-54显示了喂食不同饲料的鲑鱼皮肤组织中一些主要VLC脂肪酸的含量。图中的每个框表示平均值+/-标准偏差，括号显示每组中的最高和最低值。

脑组织的结果：

具有20个或更多个碳的鲑鱼脑组织中的PUFA的分析结果显示在下表B2中。每种脂肪酸的结果如图55-56所示，其中

图55提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的脑组织中C26:6n3的含量(μg/g组织)。

图56提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的脑组织中C28:8n3的含量(μg/g组织)。

表B2：各饲料组的不同脂肪酸的平均值

*一个异常值被移除

观察到吸收的C28:8n3脂肪酸比其他脂肪酸多得多。

图55-56显示了喂食不同饲料的鲑鱼脑组织中一些主要VLC脂肪酸的含量。图中的每个框表示平均值+/-标准偏差，括号显示每组中的最高和最低值。

肝组织的结果：

PL部分-肝

具有20个或更多个碳的鲑鱼肝组织PL中的PUFA的分析结果显示在下表B3中。选定的脂肪酸的结果如图57-59所示，其中

图57提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的肝组织PL部分中C24:5n3的含量(μg/g组织)。

图58提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的肝组织PL部分中C26:6n3的含量(μg/g组织)。

图59提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的肝组织PL部分中C28:8n3的含量(μg/g组织)。

表B3：各饲料组中PL部分中不同脂肪酸的平均值

观察到对于测试饲料e)，脂肪酸C24:5和C26:6在极性磷脂肝组织中被非常清楚地吸收，并且其程度比肝组织的TAG-部分中更高，如下面提供的表B4中的结果所示。

图57-59显示了喂食不同饲料的鲑鱼肝组织PL部分中一些主要VLC脂肪酸的含量。图中的每个框表示平均值+/-标准偏差，括号显示每组中的最高和最低值。

TAG部分-肝

具有20个或更多个碳的鲑鱼肝组织的TAG部分中的PUFA的分析结果显示在下表B4中。选定的脂肪酸的结果如图60-62所示，其中

图60提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的肝组织TAG部分中C24:5n3的含量(μg/g组织)。

图61提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的肝组织TAG部分中C26:6n3的含量(μg/g组织)。

图62提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的肝组织TAG部分中C28:8n3的含量(μg/g组织)。

表B4：各饲料组中TAG部分中脂肪酸的平均值

图60-62显示了喂食不同饲料的鲑鱼肝组织TAG部分中一些主要VLC脂肪酸的含量。图中的每个框表示平均值+/-标准偏差，括号显示每组中的最高和最低值。

心脏组织的结果：

PL部分-心脏组织

具有20个或更多个碳的鲑鱼心脏组织PL组织中的PUFA的分析结果显示在下表B5中。每种脂肪酸的结果如图63-65所示，其中

图63提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的心脏组织PL部分中C24:5n3的含量(μg/g组织)。

图64提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的心脏组织PL部分中C26:6n3的含量(μg/g组织)。

图65提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的心脏组织PL部分中C28:8n3的含量(μg/g组织)。

表B5：各饲料组中PL部分中脂肪酸的平均值

图63-65显示了喂食不同饲料的鲑鱼心脏组织PL部分中一些主要VLC脂肪酸的含量。图中的每个框表示平均值+/-标准偏差，括号显示每组中的最高和最低值。

TAG部分-心脏组织

具有20个或更多个碳的鲑鱼心脏组织的TAG部分中的PUFA的分析结果显示在下表B6中。每种脂肪酸的结果如图66-68所示，其中

图66提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的心脏组织TAG部分中C24:5n3的含量(μg/g组织)。

图67提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的心脏组织TAG部分中C26:6n3的含量(μg/g组织)。

图68提供了来自喂食试验饲料a、b、c、d、e的Salmo salar的心脏组织TAG部分中C28:8n3的含量(μg/g组织)。

表B6：各饲料组中心脏组织的TAG部分中脂肪酸的平均值

图66-68显示了喂食不同饲料的鲑鱼心脏组织TAG部分中一些主要VLC脂肪酸的含量。图中的每个框表示平均值+/-标准偏差，括号显示每组中的最高和最低值。

结论：

鲑鱼喂食研究表明，除了如实施例2所示眼中的吸收以外，口服的VLCPUFA还导致皮肤、脑、心脏和肝中一些VLCPUFA量的增加。

研究表明，VLCPUFAS可以从饲料中摄取，并且对不同组织中含量的增加起到贡献。其进一步表明，组织的中性脂质部分和极性部分的吸收程度存在差异。

实施例3：

大鼠脑、眼和皮肤组织中VLCPUFA的含量-饲料中鱼油量的影响

将16只雄性Zucker fa/fa大鼠(Crl:ZUC(Orl)-Lepr fa(来自意大利查尔斯河实验室)分配到三个由6只大鼠组成的实验组，每个饲料组中的平均体重相当。在4周的喂食干预期间内，给大鼠喂食含植物油、鱼油或1:1植物油/鱼油混合物(PO、FO或1:1PO/FO混合物)的饲料。解剖器官皮肤、眼和脑，并在-80℃下储存，用于后续VLCPUFA的分析。鱼油含有0.3-0.5％的VLCPUFA。Pelagia/Epax所有的MarOmega3项目提供了器官材料(来自Nofima)。

大鼠组织中的VLCPUFA

按照Folch等人¹描述的方法从大鼠组织(脑、眼和皮肤)中提取总脂质。每个饲料组分析六个单独的器官样品。使用薄层色谱法(TLC)分离主要脂质类别。磷脂部分用于确定器官中的VLCPUFA水平。

图25显示了不同饲料组中大鼠脑、眼和皮肤组织中表征的VLCPUFA水平，其中VLCPUFA以喂食三种不同饲料(PO、FO或1:1PO/FO混合物)的总脂肪酸的百分比表示。以其SEM的平均值表示结果，其中每个值来自3-4只大鼠。通过单因素ANOVA分析数据。饲料组之间组织内没有显著差异(P<0.05)，尽管随着饲料中鱼油水平的增加，眼中的水平有增加的趋势，而这与鲑鱼组织中的发现一致。

结论：

在所有组织样品中检测到VLCPUFA。对于大鼠眼，随着饲料中鱼油水平的增加，VLCPUFA的浓度呈增加趋势。在鱼油中只有0.3-0.5％的VLCPUFA。这个例子表明，重要组织中VLCPUFA的含量会受到食物摄入的影响。这意味着VLCFA组合物(浓缩物)可以用于VLCFA的新型补充剂，以治疗或缓解疾病或帮助保持身体健康。

实施例4：大西洋鲑鱼的脑、眼和皮肤组织中VLCPUFA的含量-饲料中鱼油量的影响

1.鲑鱼喂食试验

给实验鱼喂食三种饮食水平的两种不同鱼油(鱼油1和鱼油2，两者都含有约0.3-0.5％VLCPUFA)，从鱼100克的起始重量直至重量增加约一倍。每个饲料组有三个池。当鱼通过不同的饲料达到200克时，取出脑、眼和皮肤的样本并在液氮中冷冻并储存在-40℃下，以供器官中VLC-PUFA含量的后续分析。该试验的目的在于，测试增加的鱼油饮食水平如何影响大西洋鲑鱼眼、脑和皮肤中VLC-PUFA的含量。

鲑鱼组织中的VLCPUFA：

通过Folch等人¹的方法从鲑鱼组织中提取总脂质。使用每个组织每个池的五个器官样品的混合样品。使用薄层色谱法(TLC)分离主要脂质类别。来自三个器官的磷脂(PL)部分用于确定VLCPUFA水平。

在Scion 436-GC上分析VLCPUFA甲酯，其带有分流/不分流进样器(不分流1分钟)，使用Restek Rxi-5ms毛细管柱(长30m，内径0.25mm，膜厚0.25mM)、火焰离子化检测器和TotalChrom软件。载气为氢气。

如图26所示，在喂食饲料水平增加的鱼油1的鱼的眼组织PL中，检测到的VLC-PUFA水平(占总FA的百分比)显著不同。图26显示了喂食三种不同水平的两种鱼油的大西洋鲑的脑、眼和皮肤PL中表征的VLC-PUFA(鱼油1和鱼油2)。结果用其SEM的平均值表示。通过单因素ANOVA分析数据。星号(*)表示显著差异(P<0.05)。然而，尽管不显著，所有器官还是显示出VLC-PUFA水平随着饲料中鱼油剂量增加而增加的趋势。

鱼油具有低含量的VLC-PUFA。为了看到显著效果，很可能需要在饲料中添加更高浓度的VLC-PUFA。

结论：

随着饲料中鱼油水平的增加，VLCPUFA在所有检查的鲑鱼组织中都显示出增加的趋势。在鱼的眼组织中，存在显著差异。这个例子表明，重要组织中VLC-PUFA的含量会受到食物摄入的影响。这意味着VLCFA组合物(浓缩物)可以用于VLCFA的新型补充剂，以治疗或缓解疾病或帮助保持身体健康。

实施例5：VLCPUFA对皮肤细胞的影响-一般用于伤口愈合和皮肤健康

在体外伤口愈合模型中检查了VLCPUFA的作用。使用人类(1)和鲑鱼皮肤细胞(2)模型，并测试了合成的C26:6n-3和来自鱼油的VLCPUFA浓缩物。

脂质组合物：

脂质组合物A.来自鱼油的VLCPUFA浓缩物

脂质组合物B：C26:6n-3：购自BOC科学(NY,USA)的纯合成脂肪酸

Lipidmix组合物A由标准凤尾鱼油制备。将粗制鱼油纯化并乙基化，将乙基化油进行分馏并通过蒸馏提升浓度，尿素沉淀以及锂沉淀，以获得所需的组合物。最后通过与甘油的酶促反应将部分重新酯化为甘油三酯。

在Scion 436-GC上分析VLCPUFA甲酯，其带有分流/不分流进样器(不分流1分钟)，使用Restek Rxi-5ms毛细管柱(长30m，内径0.25mm，膜厚0.25μM)、火焰离子化检测器和TotalChrom软件。载气为氢气。

具有20个或更多个碳的PUFA的分析结果如表7所示。

表7.脂质组合物A和B的脂肪酸组成

1.人真皮成纤维细胞的细胞培养的体外研究

根据Vuong等人²描述的方法，在Dulbecco改性的Eagle培养基中培养商售人真皮成纤维细胞系(ATCC PCS-201-012)。

1A.脂质组合物A的细胞培养研究

将ATCC细胞接种在含有2mL培养基并补充有1、2和4μM脂质组合物A的孔中。对照组是PBS中的白蛋白。在～90-100％融合时，创建划痕，之后在长达24小时的几个时间点对孔进行拍照。在光学显微镜下检查细胞随时间迁移到划痕/伤口闭合处并拍摄图像。划痕/伤口闭合率通过划痕开口的融合％来测量(数值越高，伤口闭合越好)。与对照组相比，2μM脂质组合物A导致24小时后以融合％计的伤口闭合率显著提高(图27)。数据显示，相较于对照组而言，2μM脂质组合物A的“伤口愈合”明显更好。

图27提供了在培养基中补充4μM脂质组合物A的ATCC人成纤维细胞的荧光图像。该图的右图显示不同浓度组中划痕融合的百分比。

1B.脂质组合物B的细胞培养研究

ATCC细胞在补充有10和20μM脂质组合物B的培养基中培养4天，之后回收用于测定脂肪酸组成。在通过Folch等人¹的方法提取脂质之前，将其制成每组三份的混合样品。

ATCC人皮肤细胞中C26:6n-3的含量受到向培养基中添加的脂质组合物B的影响。结果显示C26:6n-3显著增加，占总FA的0.7％至5.5％(p＝0.001(ANOVA))。

增殖试验：

增殖试验通过核酸的荧光染色来测量培养物中细胞的密度/数量。结果显示，与对照组相比，在补充有脂质组合物B的培养基中培养的ATCC细胞具有显著更高的细胞计数(图28)。

图28提供了在用脂质组合物B孵育直到约50％融合后细胞增殖的测量。结果表示为平均±SEM(n＝4)。星号(*)表示组间显著差异。对照组1和2代表与20μM脂质组合物B底物中的白蛋白浓度相当的白蛋白。

划痕试验(体外伤口愈合模型)：

将细胞接种在含有2mL培养基并补充有10μM脂质组合物B的孔中(6次重复)。对照组是PBS中的白蛋白。在～90-100％融合时，创建划痕，之后在长达24小时的几个时间点对孔进行拍照。在光学显微镜下检查细胞随时间迁移到划痕/伤口闭合处并拍摄图像(图29)。

图29提供了脂质组合物B对划痕闭合率的影响。将用脂质组合物B(10μM)或(对照组，PBS中的白蛋白)孵育人ATCC真皮成纤维细胞24小时，直到单层融合。之后对细胞进行划痕，使用Fiji/ImageJ软件在不同时间点(显示0和24小时)跟踪细胞向伤口的迁移，如图A所示。以平均下降百分比分析划痕尺寸(从每个孔在0小时的原始尺寸相对于24小时测量的尺寸来计算(n＝6，结果如图B所示)。

相较于对照组而言，10μM的脂质组合物B组显示出伤口闭合率增加的趋势，其通过24小时后伤口直径的尺寸降低可见。

2.大西洋鲑鱼皮肤细胞原代细胞培养的体外研究

从淡水大西洋鲑鱼中分离出鲑鱼壳的皮肤细胞(角质细胞)的原代细胞培养物。将壳小心地放入板孔中，并在13℃下在补充有10μM或20μM脂质组合物B(26:6n-3)或作为阳性对照组的25ng/mL成纤维细胞生长因子(FGF)的生长培养基(L-15)中孵育。阴性对照组是PBS中的白蛋白。

向培养基中补充脂质组合物B导致C26:6n-3脂肪酸的细胞含量从对照组的0％增加到20μM脂质组合物B组的1.4％。

鲑鱼壳细胞迁移分析

壳的分离后的第二天，在显微镜下检查所有经过不同处理的孔并拍摄图像。

图30显示了细胞从鲑鱼壳迁移的结果。从淡水鲑鱼上摘下鲑鱼壳，放入装有培养基的孔中，在13℃无CO₂的条件下孵育，并在接下来的几天内检查细胞迁移情况。处理为25ng/mL FGF(n＝7)、10μM脂质组合物B(n＝5)、20μM脂质组合物B(n＝5)。对照组是PBS中的白蛋白。(n＝6)。y轴比例表示没有细胞迁移(0％)到所有壳的细胞迁移(100％)。不同字母表示显著差异(p≤0.05)。

在第一个时间点，组间存在显著差异，表明1μM脂质组合物B具有与FGF相似的立即增加的细胞迁移效果(相对于白蛋白对照组)。在第二个时间点，差异不显著(P＝0.061)，但是与其他组相比，对照组仍然清楚地显示出较少的细胞迁移。在最后一个时间点，组间存在显著差异，再次，低剂量(10μM)脂质组合物B对细胞迁移的影响最大。

结论：

相较于对照组而言，脂质组合物A(来自鱼油的VLCPUFA浓缩物)在2μM下显著增加人成纤维细胞的细胞迁移。

相较于对照组而言，脂质组合物B(合成的C26:6n-3)在10μM下显著增加鲑鱼皮肤细胞培养物的细胞迁移。脂质组合物B在人成纤维细胞上也显示出相同的趋势。

该实施例显示VLCPUFA对两种不同皮肤细胞模型的新作用，并阐明了补充VLCPUFA对人类和鱼的皮肤细胞的直接影响。其表明这些脂肪酸在伤口愈合中的健康有益作用。

神经酰胺是人皮肤表皮层的角质层的主要组分。已知极长链脂质组分与神经酰胺相连。该实施例支持本发明，即VLCFA的组合物可以用于人类和动物/鱼的伤口愈合、炎症性皮肤病状和各种其他皮肤相关疾病。

实施例6：在大西洋鲑鱼饲料中补充VLCPUFA-评估喂食不同水平VLCPUFA的幼年大西洋鲑鱼皮肤

为了评估饲料中不同水平的VLCPUFA如何影响幼年大西洋鲑鱼的皮肤和鳞发育，对喂食无、中等或高饲料水平VLCPUFA浓缩物的鱼进行分析。如实施例2所述，称为LipidmixA的VLCPUFA浓缩物以三种不同浓度包括在鱼饲料中，并喂食给三组鱼；

测试饲料a：0％VLCPUFA，

测试饲料c：0.71％VLCPUFA，以及

测试饲料e：1.41％VLCPUFA。

为了捕捉与间充质干细胞的募集、鳞矿化和皮肤成熟相关的变化，使用鳞刚开始发育的小鱼。图69显示大西洋鲑鱼皮肤的显微解剖结构，其显示出不同的层，包括含黏膜细胞的表皮、鳞、真皮和下面的脂肪组织和肌肉。

将喂食不同浓度VLCPUFA的三组不同鱼的皮肤包埋在石蜡中，切片并用组织学染色剂染色，以观察细胞结构和黏膜细胞(AB/PAS，图70)。用显微镜对切片进行分析，40×，使用Leica扫描仪和ImageScope软件。每组15条鱼用于这些分析。图70显示了在该试验中进行的测量，包括黏膜细胞计数、表皮和真皮的厚度以及鳞片发育的评估。

结果表明，与相较于喂食中等(测试饲料c)和高水平(测试饲料e)VLCPUFA的鱼而言，喂食0％VLCPUFA(测试饲料a)的鱼的鳞发育较少。来自测试饲料a组的鱼也具有较薄的表皮厚度。这表明皮肤结构不太成熟。评估了两个不同的时间点。图71说明了测试饲料a组的鱼随时间的发育，在最终取样时显示出更成熟的鳞。第一次取样时鱼为9.5g(左图)，显示矿化的鳞(黑色箭头)和发育中的鳞(白色箭头)，最后一次取样时鱼为12g(右图)。

表皮厚度的测量表明，与喂食较低剂量的鱼相比，喂食较高剂量VLC-PUFA的鱼的表皮更厚(图72)。正如其他鲑鱼实验中所见，这可能表明皮肤更成熟，并且可能是因为更强的鳞发育。如图72所示，当鲑鱼幼鱼接受添加了VLCPUFA的饲料时，所测量的表皮厚度显著增加。实心条显示测试饲料组a、c和e的表皮测量厚度，以μm为单位。这些饲料组的饲料分别含有0重量％、0.71重量％和1.41重量％的VCLPUFA。对每组鲑鱼的15个皮肤样品进行了分析。用不同字母标出显著变化，P<0.05。

将进一步分析样品以评估矿化程度和间充质干细胞的募集。初步结果表明，与饲料中不含VLC-PUFA的鱼相比，喂食VLCPUFA的鲑鱼总体上具有更好的鳞发育和更成熟的表皮。

结论：

鲑鱼喂食研究显示出具有VLCPUFA的鱼饲料对鲑鱼皮肤的体内影响。结果表明，鱼饲料中的VLCPUFA促进表皮更厚的皮肤，改善鳞发育和更成熟的皮肤结构，表明喂食VLCPUFA的鱼皮肤更健康。研究表明，饲料中的VLCPUFA对鲑鱼的皮肤发育有积极影响。该实施例支持本发明，即VLCPUFA的组合物可以用于补充剂，并可能治疗和缓解皮肤疾病或一般皮肤健康。

实施例7：在小鼠中补充VLCFA-对皮肤和血浆的脂肪酸组成的影响脂质组合物：

由标准凤尾鱼油制备VLCFA浓缩物(见下表8)。将粗制鱼油纯化并乙基化，将乙基化油进行分馏并通过蒸馏提升浓度，以获得所需的组合物。最后通过与甘油的酶促反应将部分重新酯化为甘油三酯。

表8：用于制备测试饲料4和5的VLCFA脂质混合物的组成

表9：用于制备测试饲料的油的组成

油	EPA	DHA	VLCMUFA	VLCPUFA
						a％	a％	a％	a％
Epax 3000TG	19.96	12.45	0.25	0.41
					Epax 0460 TGN	8.6	65.3	0.38	0.61
大豆油	0	0	0	0

通过将上述VLCFA浓缩物(测试饲料4和5)之一或Epax Norway AS生产的两种不同鱼油(EPAX 3000 TG和EPAX 0460 TGN)与大豆油混合来制备五种不同的饲料。给小鼠喂食(通过灌服)100mg/天的不同脂肪酸混合物。下表10中给出了不同饲料组中每只小鼠每天的不同脂肪酸的剂量。

表10.不同测试饲料的组成

所有测试饲料都储存在0℃。

动物：

来自查尔斯河的株C57/bl6的小鼠用于喂食研究。动物被关在室温下的笼子里，可以自由获取普通小鼠饲料和水。

脂肪酸分析

在Scion 436-GC上分析VLCFA浓缩物、组织提取物和血浆的脂肪酸组成，其带有分流/不分流进样器(不分流1分钟)，使用Restek Rxi-5ms毛细管柱(长30m，内径0.25mm，膜厚0.25μM)、火焰离子化检测器和指南针CDS软件。载气为氢气。使用C23:0、EPA和DHA标准计算脂肪酸的量。VLCPUFA的响应因子假定与DHA相同，因为没有可用的标准。假设VLC MUFA具有与C23:0相同的响应因子。

组织的准备

在喂食研究开始后4周处死各测试饲料的8个个体。由专业人员从动物身上仔细解剖下不同的组织。样品立即在干冰上冷冻并运往挪威诺菲玛，从而提取和分离脂质类。制备的样品的脂肪酸分析在挪威Epax进行。

用Folch等人的方法¹(使用薄层色谱法(TLC)分离脂质类别)从小鼠组织中提取所有脂质。总提取物和中性脂质部分用于脂肪酸分析。

血浆样品被直接送到挪威Epax并按照实施例1中的描述进行分析。

总脂质结果-皮肤组织

具有22个或更多个碳的PUFA的分析结果显示在下表11中，并且选定的脂肪酸的结果显示在图73-74中，其中

图73.喂食测试饲料1、2和3的小鼠皮肤中C24:1的含量(mg/g组织)。

图74.喂食测试饲料1、2和3的小鼠皮肤中C26:1的含量(mg/g组织)。

表11：各饲料组的总脂质部分中不同脂肪酸的平均值

据观察，喂食测试饲料5号组的VLCMUFA C24:1最高。

中性脂质的结果-皮肤

皮肤的中性脂质中具有22个或更多个碳的PUFA的分析结果显示在下表12中，并且每种脂肪酸的结果显示在图75-76中，其中

图75.喂食测试饲料1、2、3、4和5的小鼠皮肤中C24:1的含量(μg/g组织)。

图76.喂食测试饲料1、2、3、4和5的小鼠皮肤中C26:1的含量(μg/g组织)。

表12：各饲料组的中性脂质部分中不同脂肪酸的平均值

结论：

结果表明，给小鼠喂食含增加量的VLC脂肪酸的饲料会导致皮肤组织中VLCPUFA和VLCMUFA两者的浓度增加。

血浆

血浆中具有22个或更多个碳的PUFA的分析结果显示在下表13中，并且每种脂肪酸的结果显示在图77中，其中

图77.喂食测试饲料1、2、3、4和5的小鼠中C24:1的含量(μg/g血浆)。

表13：各饲料组的不同脂肪酸的总脂质的平均值

饲料组	C24:1
			μg/g组织
1	0.00174
		2	0.00239
3	0.00185
		4	0.00301
5	0.00383

结论：

结果表明，用增加量的VLC脂肪酸小鼠饲料来喂食会导致血浆中VLCMUFA浓度的增加。

参考文献

1)Folch,J.Lees,M,Sloane Stanley GH.，一种从动物组织中分离和纯化总脂质的简单方法(A simple method for the isolation and purification of total lipidsfrom animal tissues)，J Biol Chem.1957；226(1):497-509.PMID:13428781.

2)Vuong TT,

SB,Ahmed TAE,Brathagen K,

V,Hincke MT等人，加工的蛋壳膜粉调节细胞功能并增加对早期伤口愈合过程很重要的MMP活性(Processedeggshell membrane powder regulates cellular functions and increase MMP-activity important in early wound healing processes)，PLoS One.2018；13(8):e0201975.DOI:10.1371/journal.pone.0201975.

Claims (18)

1.一种脂质组合物，其包含至少5重量％的极长链脂肪酸(VLCFA)，其链长大于22个碳原子，从天然油中分离得到，用于治疗对象的疾病，其中，将组合物施用于对象，对象具有存在于特定组织中并在疾病中起到作用的VLCFA的水平的缺乏或异常。

2.如权利要求1所述的脂质组合物，用于权利要求1所述的用途，其中，将该组合物施用于对象，用于与VLCFA的内源性合成能力降低相关的治疗。

3.如权利要求1或2所述的脂质组合物，用于权利要求1或2所述的用途，其中，施用的VLCFA被转运至目标身体组织，其在那里发挥正常组织功能的作用。

4.如权利要求1-3中任一项所述的脂质组合物，用于权利要求1-3所述的用途，其中，疾病与延长酶系统ELOVL1-7中任一个的缺陷相关。

5.如权利要求1-4中任一项所述的脂质组合物，用于权利要求1-4所述的用途，其中，治疗针对选自以下的组织：眼组织(眼球，视网膜或睑脂)，精子和睾丸，脑和神经系统，皮肤，表皮和黏膜/黏膜组织，包括肺和呼吸道组织，以及心血管组织。

6.如权利要求1-5中任一项所述的脂质组合物，用于权利要求1-5所述的用途，其中，施用于对象的VLCFA被在疾病中起到作用的对象的特定身体组织吸收，以提供积极的健康影响。

7.如权利要求1-6中任一项所述的脂质组合物，其中，该用途是用于患有一种或多种身体延长酶系统的年龄相关性有效性降低的人或患有一种或多种身体延长酶系统的遗传性有效性降低的人。

8.如权利要求1-7中任一项所述的脂质组合物，其中，该用途是用于通过向组织供应VLCFA来进行预防性治疗，例如用于维持正常组织功能或改善组织功能。

9.如权利要求1-8中任一项所述的脂质组合物，用于权利要求1所述的用途，其中，治疗是使涉及待治疗疾病的特定组织中的VLCFA水平增加或正常化。

10.如权利要求1-9中任一项所述的脂质组合物，其中，待治疗的疾病为眼健康；男性生育能力；皮肤、内皮组织和黏膜组织/黏膜的疾病；脑和神经组织；心血管疾病和炎症性疾病。

11.如权利要求1-10中任一项所述的脂质组合物，用于权利要求1-10所述的用途，其中，该疾病选自下组：

i)眼部疾病，例如黄斑变性(AMD)、糖尿病眼部炎症引起的疾病和显性Stargardt黄斑营养不良(STGD3)；

ii)男性生育能力，例如精子功能和/或活力降低，或成熟精子细胞数量减少；

iii)皮肤和内皮疾病，包括任何干燥和起皱的皮肤、受刺激、发酸或敏感的皮肤、伤口愈合能力、防止皮肤受到太阳UV辐射的负面影响、对毛囊的负面影响、包括脱发风险的减少的毛发健康，包括湿疹、银屑病、痤疮和酒渣鼻；

iv)黏膜组织/黏膜的疾病，例如肺病和呼吸道的疾病，包括哮喘，肝病，过敏，以及泌尿系统和消化系统的疾病；

v)脑和神经组织的疾病，包括中枢神经系统疾病，例如精神健康下降，脱髓鞘疾病，例如多发性硬化症，帕金森症，精神分裂症，痴呆症，阿尔茨海默症，认知功能受损，偏头痛，发作和癫痫；

vi)与炎症相关的疾病，例如心血管疾病，例如动脉粥样硬化和类风湿性关节炎。

12.如权利要求1-11中任一项所述的脂质组合物，用于权利要求1-11所述的用途，其中，该组合物包含ω-3和/或ω-6VLCPUFA和VLCMUFA两者。

13.如权利要求1-12中任一项所述的脂质组合物，用于权利要求1-12所述的用途，其中，该组合物包含具有大于6个双键的ω-3和/或ω-6VLCPUFA中的任一者。

14.如权利要求1-13中任一项所述的脂质组合物，用于权利要求1-13所述的用途，其中，该组合物包含C28:7n3和C28:8n3中至少一个。

15.如权利要求1-14中任一项所述的脂质组合物，用于权利要求1-14所述的用途，其中，该组合物进一步包含极长链饱和脂肪酸。

16.如权利要求1-15中任一项所述的脂质组合物，用于权利要求1-15所述的用途，其中，该组合物包含总共至少10重量％的极长链单-和多-不饱和脂肪酸。

17.如权利要求1-16中任一项所述的脂质组合物，用于权利要求1-16所述的用途，其中，组合物的VLCFA分离自天然来源，例如来自水生动物或植物的油。

18.如权利要求1-17中任一项所述的脂质组合物，用于权利要求1-17所述的用途，其中，组合物的VLFA基本上为全顺式。

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