BR112019012929A2 - anticorpos anti-il-5 - Google Patents

Abstract

são reveladas nesse relatório descritivo moléculas de anticorpo totalmente humanas que se ligam de forma imunoespecífica à il-5 humana. as moléculas de anticorpo podem se ligar à il-5 humana com uma constante de afinidade de equilíbrio (kd) de pelo menos cerca de 40 pm, como determinada por ressonância de plásmon de superfície.

Description

ANTICORPOS ANTI-IL-5

REFERÊNCIA CRUZADA COM PEDIDOS RELACIONADOS [001] Esse pedido reivindica prioridade para o Pedido U.S. Provisório N° 62/438.502, depositado em 23 de dezembro de 2016, cuja revelação é incorporada por meio deste por referência em sua totalidade.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS [002] O presente pedido contém uma listagem de sequências que foi submetida eletronicamente em formato ASCII e é incorporada por meio deste por referência em sua totalidade. A referida cópia em ASCII, criada em 30 de novembro de 2017, é denominada 102085.000906_sl.txt e tem 93.529 bytes de tamanho.

CAMPO TÉCNICO [003] São reveladas nesse relatório descritivo novas moléculas de anticorpo que se ligam de forma imunoespecifica à IL-5, e usos dos anticorpos revelados.

FUNDAMENTOS [004] A Interleucina-5 (IL-5) é uma citocina Ύ-helper 2 (Th2) que causa a proliferação e diferenciação tanto de células B quanto de eosinófilos. Em células B, IL-5 também aumenta a secreção de imunoglobulina. IL-5 é um modulador crucial de eosinófilos, nos quais também regula a maturação, migração para tecidos, sobrevida, e a prevenção de apoptose.

[005] Por meio de dois motivos separados, IL-5 se liga ao seu receptor especifico (IL5-Ra) e a um receptor de sinalização, uma cadeia-β (βο) comum compartilhada entre Interleucina-3 (IL-3) e fator estimulante de colônia de granulócitos-macrófagos (GMCSF). A afinidade de IL-5 por IL5-Ra foi relatada como estando na faixa de nM média-baixa

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2/138 (0,2-100 nM) ; isso muda para a faixa de pM média (aproximadamente 100 pM) na presença de βο. IL5-Ra se liga à IL-5 especificamente, que então recruta βο para IL-5R.

[006] 0 potencial terapêutico do direcionamento de interleucina-5 (IL-5) foi demonstrado por validação extensa na literatura e dados clinicos de Fase III positivos recentes tanto para reslizumab quanto para mepolizumabe.

SUMÁRIO [007] São reveladas nesse relatório descritivo moléculas de anticorpo humano que se ligam de forma imunoespecifica à IL-5 humana com uma constante de afinidade de equilibrio (Kd) de pelo menos cerca de 40 pM, como determinada por ressonância de plásmon de superficie.

[008] Também são fornecidas moléculas de anticorpo que compreende uma CDR1 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 4, uma CDR2 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 6, uma CDR3 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 8, uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos dos IDS. DE SEQ. N^os: 5, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39 ou 66, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos

dos	IDS. DE SEQ. Nos: 7,	42	ou	45, e uma CDR3 da cadeia leve
que	compreende a sequência	de	aminoácidos	dos IDS. DE SEQ.
Nos :	15, 48, 51, 54, 57,	60	ou	63.
	[009] As moléculas	de	anticorpo	reveladas podem

compreender uma região variável da cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 16 e uma região variável da

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3/138 cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 17, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, ou 67, em que a variabilidade (ou seja, os (pelo menos) 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade) ocorre fora da sequência de CDR.

[010] As moléculas de anticorpo reveladas podem compreender uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos dos IDS. DE SEQ. N^os: 18 ou 2 0 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 19, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 65 ou 68, em que a variabilidade (ou seja, os (pelo menos) 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade) ocorre fora da sequência de CDR.

[011] Moléculas de ácido nucléico que codificam as moléculas de anticorpo reveladas, vetores que compreendem as moléculas de ácido nucléico, e células transformadas para expressar as moléculas de anticorpo reveladas, também são fornecidos.

[012] Também são reveladas composições farmacêuticas que compreendem qualquer uma das moléculas de anticorpo reveladas nesse relatório descritivo.

[013] Também são fornecidos métodos de tratamento de um indivíduo que possui asma eosinofílica, síndrome hipereosinofílica, polipose nasal com envolvimento eosinofílico, granulomatose eosinofílica com poliangeíte,

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4/138 dermatite atópica ou esofagite eosinofílica, que compreendem a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer uma das moléculas de anticorpo reveladas nesse relatório descritivo, ou composições farmacêuticas que compreendem as mesmas, para tratar a asma eosinofílica, síndrome hipereosinofílica, polipose nasal com envolvimento eosinofílico, granulomatose eosinofílica com poliangeíte, dermatite atópica ou esofagite eosinofílica.

[014] O uso de uma quantidade eficaz de qualquer uma das moléculas de anticorpo reveladas nesse relatório descritivo, ou composições farmacêuticas que compreendem as mesmas, no tratamento de asma eosinofílica, síndrome hipereosinofílica, polipose nasal com envolvimento eosinofílico, granulomatose eosinofílica com poliangeíte, dermatite atópica, ou esofagite eosinofílica, também é fornecido.

[015] Também é fornecido o uso de qualquer uma das moléculas de anticorpo reveladas nesse relatório descritivo, ou composições farmacêuticas que compreendem as mesmas, na fabricação de um medicamento para o tratamento de asma eosinofílica, síndrome hipereosinofílica, polipose nasal com envolvimento eosinofílico, granulomatose eosinofílica com poliangeíte, dermatite atópica ou esofagite eosinofílica.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [016] O sumário, bem como a descrição detalhada seguinte é adicionalmente compreendido quando lido em conjunto com os desenhos em anexo. Com o objetivo de ilustrar as moléculas de anticorpo, métodos e usos revelados, são mostrados nos desenhos modalidades exemplares das moléculas de anticorpo, métodos e usos; no entanto, as moléculas de anticorpo,

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5/138 métodos e usos não estão limitados às modalidades especificas reveladas. Nos desenhos:

[017] A FIG. 1 ilustra um ensaio de TF-1.6G4 que mostra que a variante de anticorpo 3A5.001 (em formato de IgG4) retinha uma potência equivalente ao anticorpo original 3A5 (em formato de IgGl).

[018] A FIG. 2 ilustra um ensaio de TF-1.6G4 que mostra que a variante de anticorpo 3A5.040 retinha uma potência equivalente ao anticorpo parental 3A5.001.

[019] A FIG. 3 é uma matriz gráfica que mostra a posição e identidade das diferentes substituições de aminoácido único que foram geradas nas CDRs da VH de 3A5.040, alinhadas à sequência de VH de 3A5.040 original (sequência superior). As caixas contêm os residues que eram residues da CDR projetados de acordo com a nomenclatura de AbM. Além dos resíduos da CDR, foram feitas variantes aos números de resíduos de Kabat 93 e 94 (adjacentes à CDR3 de HC) , como descrito no Exemplo Testagem funcional e caracterização de anticorpos. As várias sequências citadas nessa figura são fornecidas no ID. DE SEQ. N°: 73.

[020] A FIG. 4 é uma matriz gráfica que mostra a posição e identidade das diferentes substituições de aminoácido único que foram geradas às CDRs da VL 3A5.040, alinhadas à sequência de VL de 3A5.040 original (sequência superior). As caixas contêm os resíduos que eram resíduos da CDR projetados de acordo com a nomenclatura de AbM. As várias sequências citadas nessa figura são fornecidas no ID. DE SEQ. N°: 74.

[021] A FIG. 5 ilustra sequências de consenso de CDR da cadeia leve exemplares alinhadas à sequência de VL de 3A5.040 (sequência superior). Variantes de substituição de

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6/138 aminoácido único da CDR de VL de 3A5.040 que mostra aprimoramentos potenciais de acordo com os critérios de inclusão descritos nos Exemplos de (a proporção de kd da variante para 3A5.040 kd > 1,5) e (a proporção do nível de expressão da variante para o nível de expressão de 3A5.040 >0,5) foram incluídos nas sequências de consenso. As definições e numeração da CDR são de acordo com nomenclatura de AbM e Kabat, respectivamente. As caixas identificam as posições de resíduos da CDR. As várias sequências citadas nessa figura são fornecidas no ID. DE SEQ. N°: 75.

[022] A FIG. 6 ilustra uma análise cinética multiconcentração Biacore da ligação do anticorpo 3A5.046 a IL-5 humana recombinante a 2,5, 1,25, 0,625, 0,313 e 0,156 gg/ml. Sensorgramas mostram concentrações decrescentes de IL-5 em ordem de 2,5 gg/ml de IL-5 no traçado superior até 0,156 gg/ml de IL-5 no traçado inferior.

[023] As FIG. 7A e FIG. 7B ilustram a proliferação de células TF-1.6G4 em resposta à IL-5, e a potência da inibição de proliferação dirigida por IL-5 por 3A5.046. 3A5.046 foi um inibidor de IL-5 humana (FIG. 7A) e IL-5 de macaco Cynomolgus (FIG. 7B) mais potente do que mepolizumabe.

[024] As FIG. 8A e FIG. 8B ilustram um ELISA exemplar desenvolvido usando o anticorpo 3A5 e um anticorpo de captura de controle (R&D Systems). O ELISA foi capaz de detectar IL5 recombinante (FIG. 8A) e IL-5 produzida por células T humanas primárias ativadas CD3/CD28/IL-33 de 3 doadores (FIG 8B) . FIG. 8B painel superior: Doador 1, FIG. 8B painel do meio: Doador 3; FIG. 8B painel inferior: Doador 4.

[025] A FIG. 9 ilustra os resultados de um experimento no qual células sanguíneas CD34+ do cordão se diferenciaram

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7/138 em eosinófilos fenotipicamente maduros usando IL-5 e outras citocinas, como descrito nos Exemplos. 0 Anticorpo 3A5.046 foi mais potente do que mepolizumabe na inibição de diferenciação de eosinófilos induzida por IL-5.

[026] As FIG. 10A, FIG. 10B, FIG. 10C, FIG. 10D, e FIG. 10E ilustram os resultados da análise de reatividade cruzada Biacore da ligação do anticorpo 3A5.046 à IL-5 humana (FIG. 10A) , IL-5 de macaco Cynomolgus (FIG. 10B) , IL-5 de camundongo (FIG. 10C) , IL-5 de rato (FIG. 10D) e IL-5 de porquinho-da-india (FIG. 10E) . Sensorgramas de referência dupla são mostrados para ligação às citocinas a 1 pg/ml ou 10 pg/ml.

[027] As FIG. 11A, FIG. 11B, FIG. 11C, e FIG. 11D ilustram os resultados de uma análise de especificidade Biacore do anticorpo 3A5.046. Sensorgramas de referência dupla são mostrados para ligação às citocinas a 10 pg/ml (FIG. 11A e FIG. 11B) ou 1 pg/ml (FIG. 11C e FIG. 11D).

[028] A FIG. 12 ilustra os resultados de ataque com Ascaris suum (A. suum) em um modelo em macaco Cynomolgus de eosinofilia das vias aéreas. No Dia 2 houve uma diferença substancial nos números de eosinófilos no pulmão (BALF) quando se comparam animais tratados com 3A5.046 e animais tratados com veiculo (placebo) (p<0,01; teste de MannWhitney).

[029] As FIG. 13A e FIG. 13B ilustram a resposta de eosinófilos sanguíneos ao longo de 10 dias após um ataque com A. suum em macacos Cynomolgus que foram pré-tratados com 3A5.046 ou um anticorpo de controle de isótipo compatível (placebo) uma semana antes do ataque com A. suum (FIG. 13A) . A Figura 13B ilustra ainda detalhes das contagens de

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8/138 eosinófilos sanguíneos para animais tratados com anticorpo 3A5.046, até 45 dias pós-ataque (52 dias pós-dose) . As contagens de eosinófilos permaneceram abaixo do nível de base por pelo menos 45 dias pós-ataque após uma dose única de 3A5.046 uma semana antes do ataque.

[030] A FIG. 14 ilustra níveis de eosinófilos em BALF em um modelo em rato de knockin de IL-5 humana (Kl) em resposta a um ataque com Alternaria alternata. Esse modelo pode ser usado para testar a potência de um anticorpo anti-IL-5 para modular os números de eosinófilos em BALF após ataque com Alternaria.

DESCRIÇÃO DETALHADA DE MODALIDADES ILUSTRATIVAS [031] As moléculas de anticorpo, métodos e usos revelados podem ser compreendidos mais prontamente por referência à descrição detalhada seguinte considerada em conexão com as figuras em anexo, que formam uma parte dessa revelação. Deve ser subentendido que as moléculas de anticorpo, métodos e usos revelados não estão limitados às moléculas de anticorpo, métodos e usos específicos descritos e/ou mostrados nesse relatório descritivo, e que a terminologia usada nesse relatório descritivo tem o objetivo de descrever modalidades particulares apenas como exemplo e não visa ser limitante das moléculas de anticorpo, métodos e usos reivindicados.

[032] Salvo indicação em contrário, qualquer descrição quanto a um possível mecanismo ou modo de ação ou razão para aprimoramento visa ser somente ilustrativa, e as moléculas de anticorpo, métodos e usos revelados não devem ser restritos pela exatidão ou inexatidão de qualquer um desses mecanismos ou modos de ação ou razoes para aprimoramento

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9/138 sugeridos .

[033] Ao longo desse texto, as descrições se referem às moléculas de anticorpo e métodos de utilização das referidas moléculas de anticorpo. Quando a revelação descreve ou reivindica uma característica ou modalidade associada com uma molécula de anticorpo, essa característica ou modalidade é igualmente aplicável aos métodos de utilização da referida molécula de anticorpo. Da mesma forma, quando a revelação descreve ou reivindica uma característica ou modalidade associada com um método de utilização de uma molécula de anticorpo, essa característica ou modalidade é igualmente aplicável à molécula de anticorpo.

[034] Quando uma faixa de valores numéricos é citada ou estabelecida nesse relatório descritivo, a faixa inclui os pontos finais desta e todos os números inteiros e frações individuais dentro da faixa, e também inclui cada uma das faixas mais estreitas desta formadas por toas as várias combinações possíveis daqueles pontos finais e números inteiros e frações internos para formar subgrupos do grupo maior de valores dentro da faixa estabelecida, na mesma extensão como se cada uma daquelas faixas mais estreitas fosse explicitamente citada. Quando uma faixa de valores numéricos é estabelecida nesse relatório descritivo como sendo maior do que um valor estabelecido, a faixa é, no entanto, finita e está limitada em sua extremidade superior por um valor que é operável dentro do contexto da invenção, como descrita nesse relatório descritivo. Quando uma faixa de valores numéricos é estabelecida nesse relatório descritivo como sendo menor do que um valor estabelecido, a faixa é, no entanto, limitada em sua extremidade inferior

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10/138 por um valor diferente de zero. Não se deseja que o escopo da invenção seja limitado aos valores específicos citados quando se define uma faixa. Todas as faixas são inclusivas e combináveis.

[035] Referência a um valor numérico particular inclui pelo menos aquele valor em particular, salvo o contexto determine claramente em contrário.

[036] Quando valores são expressos como aproximações, por uso do antecedente cerca de, será subentendido que o valor particular forma outra modalidade. O termo cerca de, quando usado em referência a faixas numéricas, valores de corte ou valores específicos, é usado para indicar que os valores citados podem variar por até 10% do valor listado. Dessa forma, o termo cerca de é usado para englobar variações de ± 10% ou menos, variações de ± 5% ou menos, variações de ± 1% ou menos, variações de ± 0,5% ou menos, ou variações de ± 0,1% ou menos do valor especificado.

[037] Deve ser observado que certas características das moléculas de anticorpo, métodos e usos revelados que são, para maior clareza, descritas nesse relatório descritivo no contexto de modalidades separadas, também podem ser fornecidas em combinação em uma modalidade única. Inversamente, várias características das moléculas de anticorpo, métodos e usos revelados que são, por brevidade, descritas no contexto de uma única modalidade, também podem ser fornecidas separadamente ou em qualquer subcombinação.

[038] Como usadas nesse relatório descritivo, as formas no singular a, o, uma e um incluem o plural.

[039] Vários termos em relação aos aspectos da descrição são usados ao longo do relatório descritivo e reivindicações.

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Esses termos devem receber seus significados habituais na técnica, salvo indicação em contrário. Outros termos especificamente definidos devem ser considerados de uma forma consistente com as definições fornecidas nesse relatório descritivo.

[040] O termo que compreende visa incluir, sem limitação, exemplos englobados pelos termos que consiste basicamente em e que consiste em; similarmente, o termo que consiste basicamente em visa incluir, sem limitação, exemplos englobados pelo termo que consiste em.

[041] O termo molécula de anticorpo significa num sentido amplo e inclui moléculas de imunoglobulina de comprimento total e fragmentos de ligação ao antigeno destas.

[042] Imunoglobulinas podem ser divididas em cinco classes principais, especificamente IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, dependendo da sequência de aminoácidos do dominio constante da cadeia pesada. IgA e IgG são ainda subclassifiçadas como os isótipos IgAl, IgA2, IgGl, IgG2, IgG3 e IgG4. Cadeias leves de anticorpo de qualquer espécie de vertebrado podem ser distribuídas em um de dois tipos claramente distintos, especificamente kappa (κ) e lambda (λ), com base nas sequências de aminoácidos de seus dominios constantes.

[043] Fragmento de ligação ao antigeno se refere a uma porção de uma molécula de imunoglobulina que retém as propriedades de ligação ao antigeno do anticorpo parental de comprimento total (ou seja, fragmento de ligação ao antigeno deste). Fragmentos de ligação ao antigeno exemplares podem ter: regiões determinantes de complementaridade da cadeia pesada (HCDR) 1, 2 e/ou 3; regiões determinantes de complementaridade da cadeia leve (LCDR) 1, 2 e/ou 3; uma

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12/138 região variável da cadeia pesada (VH); uma região variável da cadeia leve (VL); e combinações destas. Fragmentos de ligação ao antigeno incluem: um fragmento Fab, um fragmento monovalente que consiste nos domínios VL, VH, leves constantes (CL) e pesados constantes 1 (CHI); um fragmento F(ab)2, um fragmento bivalente que compreende dois fragmentos Fab ligados por uma ponte dissulfeto na região de dobradiça; um fragmento Fd que consiste nos domínios VH e CHI; um fragmento Fv que consiste nos domínios VL e VH de um único braço de um anticorpo; e um fragmento de anticorpo de domínio (dAb) (Ward e cols., Nature 341: 544-546, 1989), que consiste em um domínio VH ou um domínio VL. Domínios VH e VL podem ser modificados geneticamente e ligados juntos por meio de um vinculador sintético para formar vários tipos de designs de anticorpo de cadeia única nos quais os domínios VH/VL pareiam intramolecularmente, ou intermolecularmente nos casos em que os domínios VH e VL são expressos por construções de anticorpo de cadeia única separadas, para formar um sítio de ligação ao antigeno monovalente, por exemplo, Fv de cadeia única (scFv) ou diabody, descrito, por exemplo, nas Publicações de Patente Internacional N^os WO 1998/44001, WO 1988/01649, WO 1994/13804 e WO 1992/01047. Esses fragmentos de anticorpo são obtidos usando metodologias bem conhecidas por aqueles habilitados na técnica, e os fragmentos são avaliados quanto à utilidade da mesma forma que o são os anticorpos de comprimento total.

[044] A frase se liga de forma imunoespecí f ica se refere à habilidade das moléculas de anticorpo reveladas para se ligar preferencialmente ao seu alvo (IL-5, no caso de moléculas de anticorpo anti-IL-5) sem se ligar

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13/138 preferencialmente a outras moléculas em uma amostra que contém uma população mista de moléculas. Moléculas de anticorpo que se ligam de forma imunoespecifica à IL-5 são substancialmente livres de outros anticorpos que possuem especificidades antigênicas diferentes (por exemplo, um anticorpo anti-IL-5 é substancialmente livre de anticorpos que se ligam especificamente a antígenos diferentes de IL5) . Moléculas de anticorpo que se ligam de forma imunoespecifica à IL-5, no entanto, podem ter reatividade cruzada com outros antígenos, por exemplo, ortólogos de IL5 humana, incluindo IL-5 de Macaca fascicularis (macaco Cynomolgus) . As moléculas de anticorpo reveladas nesse relatório descritivo são capazes de se ligar de forma imunoespecifica tanto à IL-5 humana produzida naturalmente quanto à IL-5 que é produzida recombinantemente em células de mamíferos ou procarióticas.

[045] Uma região variável de anticorpo consiste em quatro regiões '''framework interrompidas por três sítios de ligação ao antígeno. Os sítios de ligação ao antígeno são definidos usando vários termos: (i) Regiões Determinantes de Complementaridade (CDRs), três na VH (HCDR1, HCDR2, HCDR3) e três na VL (LCDR1, LCDR2, LCDR3), são baseadas em variabilidade de sequência (Wu e Kabat J. Exp. Med. 132: 211-50, 1970; Kabat e cols. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5^a Edição, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991); e (ii) Regiões hipervariáveis (HVR ou HV) , três na VH (Hl, H2, H3) e três na VL (LI, L2, L3), se referem às regiões dos domínios variáveis de anticorpo que são hipervariáveis em estrutura, como definido por Chothia e Lesk (Chothia e Lesk

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Mol. Biol. 196:9 01-17, 1987) . A definição de CDRs de AbM também é amplamente usada; ela é um comprometimento entre os esquemas de numeração de Kabat e Chothia e é assim denominada porque foi usada pelo software de modelagem de anticorpo AbM de Oxford Molecular (Rees, A.R., Searle, S.M.J., Henry, A.H.and Pedersen, J.T. (1996) . Em Sternberg M.J.E. (ed.), Protein Structure Prediction. Oxford University Press, Oxford, 141-172) . Outros termos incluem IMGT-CDRs (Lefranc e cols., Dev. Comparat. Immunol. 27: 55-77, 2003) e Uso de Resíduo Determinante de Especificidade (SDRU) (Almagro Mol. Recognit. 17: 132-43, 2004) . A base de dados de International ImMunoGeneTics (IMGT) (http://www_imgt_org) fornece uma numeração e definição padronizadas de sítios de ligação ao antígeno. A correspondência entre as delineações de CDRs, HVs e IMGT é descrita em Lefranc e cols., Dev. Comparat. Immunol. 27:55-77, 2003.

[04 6] '''Framework ou sequências framework são as sequências restantes de uma região variável diferentes daquelas definidas como sendo sítios de ligação ao antígeno. Como os sítios de ligação ao antígeno podem ser definidos por vários termos, como descrito acima, a sequência de aminoácidos exata de um framework depende de como o sítio de ligação ao antígeno foi definido. Anticorpo humano, anticorpo totalmente humano e termos semelhantes se referem a um anticorpo que possui regiões variáveis da cadeia pesada e leve nas quais tanto a framework quanto aos sítios de ligação ao antígeno são derivados de sequências de origem humana. Se o anticorpo contém uma região constante, a região constante também é derivada de sequências de origem humana. Um anticorpo humano compreende regiões variáveis da cadeia

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15/138 pesada e/ou leve que são derivadas de sequências de origem humana se as regiões variáveis do anticorpo são obtidas de um sistema que usa imunoglobulina de linhagem germinativa humana ou genes de imunoglobulina rearranjados. Esses sistemas incluem bibliotecas de gene de imunoglobulina humana exibidas em fago e animais não humanos transgênicos como, por exemplo, camundongos que carregam loci de imunoglobulina humana, como descrito nesse relatório descritivo. Anticorpo humano pode conter diferenças de aminoácidos quando comparado com as sequências da linhagem germinativa humana ou sequências de imunoglobulina rearranjadas em função, por exemplo, de mutações somáticas de ocorrência natural ou introdução intencional de substituições no dominio variável (framework e sitios de ligação ao antigeno), ou dominio constante. Tipicamente, um anticorpo humano é pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntico em sequência de aminoácidos a uma sequência de aminoácidos codificada por um gene de imunoglobulina da linhagem germinativa humana ou rearranjado. Em alguns casos, um anticorpo humano pode conter sequências framework de consenso derivadas de análises de sequência framework humana, por exemplo, como descrito em Knappik e cols., J. Mol. Biol. 296: 57-86, 2000, ou HCDR3 sintética incorporada em bibliotecas de gene de imunoglobulina humana exibidas em fago, como descrito, por exemplo, em Shi e cols., J. Mol. Biol. 397: 385-96, 2010 e Publicação de Patente Internacional N° W02009/085462. Anticorpos nos quais sitios de ligação ao antigeno são derivados de uma espécie não humana não estão incluídos na

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16/138 definição de anticorpo humano.

[047] Anticorpos humanos, embora derivados de sequências de imunoglobulina humana, podem ser gerados usando sistemas como, por exemplo, apresentação em fago que incorpora CDRs sintéticas e/ou frameworks sintéticas, ou podem ser submetidos à mutagênese in vitro para aprimorar as propriedades do anticorpo nas regiões variáveis ou nas regiões constantes, ou ambas, resultando em anticorpos que não existem naturalmente dentro do repertório da linhagem germinativa de anticorpo humano in vivo.

[048] Anticorpo recombinante inclui todos os anticorpos que são preparados, expressos, criados ou isolados por meios recombinantes, por exemplo: anticorpos isolados de um animal (por exemplo, um camundongo) que é transgênico ou transcromossômico para genes de imunoglobulina humana ou um hibridoma preparado a partir dele (descrido adicionalmente abaixo); anticorpos isolados de uma célula hospedeira transformada para expressar o anticorpo; anticorpos isolados de uma biblioteca combinatória de anticorpos, recombinante; e anticorpos preparados, expressos, criados ou isolados por qualquer outro meio que envolva o splicing de sequências de gene de imunoglobulina humana para outras sequências de DNA, ou anticorpos que são gerados in vitro usando troca de braço de Fab.

[049] Anticorpo monoclonal se refere a uma população de moléculas de anticorpo de uma composição molecular única. A composição de um anticorpo monoclonal exibe uma especificidade e afinidade de ligação únicas para um epitopo particular ou, no caso de um anticorpo monoclonal

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17/138 biespecífico, uma especificidade de ligação dupla para dois epitopos distintos. Anticorpo monoclonal, portanto, se refere a uma população de anticorpos com composição de aminoácidos única em cada cadeia pesada e cada cadeia leve, exceto para possíveis alterações bem conhecidas como, por exemplo, remoção de Usina do terminal-C da cadeia pesada do anticorpo. Anticorpos monoclonais podem ter glicosilação heterogênea dentro da população de anticorpos. 0 anticorpo monoclonal pode ser monoespecifico ou multiespecifico, ou monovalente, bivalente ou multivalente. Um anticorpo biespecifico está incluido no termo anticorpo monoclonal.

[050] Epitopo se refere a uma porção de um antigeno à qual um anticorpo se liga especificamente. Epitopos normalmente consistem em agrupamentos de superfície quimicamente ativos (por exemplo, polares, não polares ou hidrofóbicos) de porções como, por exemplo, cadeias laterais de aminoácidos ou polissacarideo, e podem ter características estruturais tridimensionais específicas, bem como características de carga específicas. Um epitopo pode ser composto por aminoácidos contíguos e/ou não contíguos que formam uma unidade espacial conformacional. Para um epitopo não contíguo, aminoácidos de porções diferentes da sequência linear do antigeno se aproximam no espaço tridimensional por meio do enovelamento da molécula de proteína.

[051] Variante se refere a um polipeptídeo ou a um polinucleotideo que difere de um polipeptídeo de referência ou de um polinucleotídeo de referência por uma ou mais modificações, por exemplo, substituições, inserções ou deleções. O termo mutação, como usado nesse relatório

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18/138 descritivo, visa significar uma ou mais substituições intencionais que são feitas a um polipeptideo ou polinucleotideo.

[052] Como usado nesse relatório descritivo, o termo 90 idênticas a engloba pelo menos 90% idênticas, 91% idênticas, 92% idênticas, 93% idênticas, 94% idênticas, 95% idênticas, 96% idênticas, 97% idênticas, 98% idênticas, 99% idênticas ou 100% idênticas ao item de referência (por exemplo, uma sequência biológica). O presente relatório descritivo usa o termo % idênticas para descrever diversas sequências. Como seria subentendido, o termo % idênticas significa que, em uma comparação de duas sequências sobre a região especificada as duas sequências possuem o número especificado de resíduos idênticos na mesma posição. O nível de identidade pode ser determinado usando CLUSTAL W com parâmetros-padrão.

[053] O termo tratar, tratamento e termos semelhantes se referem tanto ao tratamento terapêutico quanto às medidas profiláticas ou preventivas, e inclui a redução da severidade e/ou da frequência de sintomas, eliminação de sintomas e/ou da causa subjacente dos sintomas, redução da frequência ou da probabilidade de sintomas e/ou de sua causa subjacente, melhora ou remediação do dano causado, diretamente ou indiretamente, por a asma eosinofílica, síndrome hipereosinofílica, polipose nasal com envolvimento eosinofílico, granulomatose eosinofílica com poliangeíte, dermatite atópica ou esofagite eosinofílica. Tratamento também inclui o prolongamento da sobrevida, quando comparada com a sobrevida esperada de um indivíduo que não recebe tratamento. Indivíduos a serem tratados incluem aqueles que possuem a condição ou distúrbio, bem

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19/138 como aqueles com tendência a ter a condição ou distúrbio ou aqueles nos quais a condição ou distúrbio deve ser evitado.

[054] Como usado nesse relatório descritivo, o termo administração ao individuo e termos similares indicam um procedimento pelo qual as moléculas de anticorpo ou composições reveladas que compreendem as mesmas são injetadas em um paciente de tal modo que células-alvo, tecidos ou segmentos do corpo do individuo sejam contatados com as moléculas de anticorpo reveladas.

[055] A frase quantidade terapeuticamente eficaz se refere a uma quantidade das moléculas de anticorpo, como descritas nesse relatório descritivo, eficaz para obter um resultado biológico ou terapêutico particular como, por exemplo, sem limitação, resultados biológicos ou terapêuticos revelados, descritos ou exemplificados nesse relatório descritivo. A quantidade terapeuticamente eficaz pode variar de acordo com fatores como, por exemplo, o estado de doença, idade, sexo e peso do individuo, e a habilidade da composição para causar uma resposta desejada em um individuo. Indicadores exemplares de uma quantidade terapeuticamente eficaz incluem, por exemplo, bem-estar aumentado do paciente, redução de um sintoma da doença, progressão interrompida ou mais lenta de sintomas da doença, e/ou ausência de sintomas da doença.

[056] As seguintes abreviações são usadas nesse relatório descritivo: Alternaria alternata (Alternaria), Ascaris suum (A. suum); região determinante de complementaridade (CDR); cadeia pesada (HC); cadeia leve (LC); região variável da cadeia pesada (VH); região variável da cadeia leve (VL); ressonância de plásmon de superficie

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20/138 (SPR) .

Moléculas de anticorpo [057] São reveladas nesse relatório descritivo moléculas de anticorpo humano que se ligam de forma imunoespecifica à IL-5 humana. As moléculas de anticorpo humano podem se ligar de forma imunoespecifica à IL-5 humana com uma constante de afinidade de equilíbrio (Kd) de pelo menos cerca de 40 pM, como determinada por ressonância de plásmon de superfície (SPR) . Como usado nesse relatório descritivo, o termo de pelo menos cerca de 40 pM significa que os anticorpos revelados se ligam de forma imunoespecifica à IL-5 humana com uma Kd de menos do que ou igual a cerca de 4 0 pM. Por exemplo, os anticorpos revelados podem se ligar de forma imunoespecifica à IL-5 humana com uma Kd de cerca de 40 pM, cerca de 30 pM, cerca de 20 pM, cerca de 10 pM, ou menos do que cerca de 10 pM.

[058] As moléculas de anticorpo humano reveladas podem compreender uma CDR1 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 4, uma CDR2 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 6, uma CDR3 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 8, uma CDR1 de consenso da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N° : 1, uma CDR2 de consenso da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N° : 2 e uma CDR3 de consenso da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 3.

[059] A CDR1 de consenso da cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de GX1X2X3X4X5X6KX7X8Y (ID. DE SEQ. N°: 1), em que:

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Xi é G ouK;

Χ₂ é Ν ouD;

Χ₃ é Ν ouΗ;

Χ4 é I ouA;

Xs é G ouD;

X₆ é S ouK;

X? é N ouH; e

Xs é V ouA.

[060] Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR1 da cadeia leve pode compreender GGNNIGSKNVY (ID. DE SEQ. N°: 5). Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR1 da cadeia leve pode compreender GKNNIGSKNVY (ID. DE SEQ. N°: 21). Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR1 da cadeia leve pode compreender GGDNIGSKNVY (ID. DE SEQ. N° : 24). Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR1 da cadeia leve pode compreender GGNHIGSKNVY (ID. DE SEQ. N° : 27). Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR1 da cadeia leve pode compreender GGNNAGSKNVY (ID. DE SEQ. N°: 30). Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR1 da cadeia leve pode compreender GGNNIDSKNVY (ID. DE SEQ. N°: 66). Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR1 da cadeia leve pode compreender GGNNIGKKNVY (ID. DE SEQ. N°: 33). Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR1 da cadeia leve pode compreender GGNNIGSKHVY (ID. DE SEQ. N°: 36). Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR1 da cadeia leve pode compreender GGNNIGSKNAY (ID. DE SEQ. N°: 39).

[061] A sequência de aminoácidos da CDR2 da cadeia leve compreende DDXsXgRPS (ID. DE SEQ. N°: 2), em que:

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Xs é S ou L; e

X9 é D ou S.

[062] Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR2 da cadeia leve pode compreender DDSDRPS (ID. DE SEQ. N° : 7) . Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR2 da cadeia leve pode compreender DDLDRPS (ID. DE SEQ. N° : 42) . Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR2 da cadeia leve pode compreender DDSSRPS (ID. DE SEQ. N°: 45).

[063] A sequência de aminoácidos da CDR3 da cadeia leve compreende QVWX10SSSDX11VX12 (ID. DE SEQ. N° : 3), em que:

X10 é D ou L;

Xn é H, S, Y ou D; e

X12 é V, A ou W.

[064] Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR3 da cadeia leve pode compreender QVWDSSSDHW (ID. DE SEQ. N°: 15). Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR3 da cadeia leve pode compreender QVWLSSSDHW (ID. DE SEQ. N°: 48). Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR3 da cadeia leve pode compreender QVWDSSSDSW (ID. DE SEQ. N° : 51). Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR3 da cadeia leve pode compreender QVWDSSSDYW (ID. DE SEQ. N° : 54). Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR3 da cadeia leve pode compreender QVWDSSSDDW (ID. DE SEQ. N°: 57). Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR3 da cadeia leve pode compreender QVWDSSSDHVA (ID. DE SEQ. N°: 60). Em algumas modalidades, a sequência de aminoácidos da CDR3 da cadeia leve pode compreender QVWDSSSDHVW (ID. DE SEQ. N°: 63).

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23/138 [065] As moléculas de anticorpo humano reveladas podem compreender uma CDR1 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 4, uma CDR2 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 6, uma CDR3 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 8, uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos dos IDS. DE SEQ. N^os: 5, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39 ou 66, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos dos IDS. DE SEQ. N^os: 7, 42 ou 45, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos dos IDS. DE SEQ. N^os: 15, 48, 51, 54, 57, 60 ou 63. Moléculas de anticorpo exemplares compreendem uma CDR1 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 4, uma CDR2 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 6, uma CDR3 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 8, e

a. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

b. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 21, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

c. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 24, uma CDR2 da cadeia

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24/138 leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

d. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 27, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

e. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 30, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

f. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 33, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

g. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 3 6, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

h. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 3 9, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

i. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 66, uma CDR2 da cadeia

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25/138 leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

j. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 42, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

k. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 45, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

l. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 48;

m. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 51;

n. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 54;

o. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve

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26/138 que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 57;

p. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 60; ou

q. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de

aminoácidos	do	ID . DE	SEQ.	N°: 63;
em que	a	posição	dos	resíduos de aminoácidos da CDR é
determinada	de	acordo	com	AbM.

[066] As moléculas de anticorpo reveladas podem compreender uma região variável da cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 16 e uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 17, 22, 25, 28, 31, 34, 37, 40, 43, 46, 49, 52, 55, 58, 61, 64, ou 67, em que a variabilidade (ou seja, os (pelo menos) 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade) ocorre fora da sequência de CDR. Moléculas de anticorpo exemplares são fornecidas na Tabela 1 e na Tabela 15.

Tabela 1. Resumo da composição da cadeia/domínio de anticorpo.

ID do anticorpo

Proteína da VH /

Proteína da VL /

Proteína da HC /

Proteína da LC /

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	(ID. DE SEQ. )	(ID. DE SEQ. )	(ID. DE SEQ. )	(ID. DE SEQ. )
3A5	3A5 VH (ID. DE SEQ. N°:10)	3A5 VL (ID. DE SEQ. N° : 11)	3A5 HC (ID. DE SEQ. N°:12)	3A5 LC (ID. DE SEQ. N°:13)
3A5.001	3A5 VH (ID. DE SEQ. N°:10)	3A5 VL (ID. DE SEQ. N° : 11)	3A5.001 HC (ID. DE SEQ. N°:14)	3A5 LC (ID. DE SEQ. N°:13)
3A5.040	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL (ID. DE SEQ. N°:17)	3A5.040 HC (ID. DE SEQ. N°:18)	3A5.040 LC (ID. DE SEQ. N°:19)
3A5.046	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL (ID. DE SEQ. N°:17)	3A5.046 HC (ID. DE SEQ. N° :20)	3A5.040 LC (ID. DE SEQ. N°:19)
3A5.063	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL + G25K (ID. DE SEQ. N° : 22)	3A5.040 HC (ID. DE SEQ. N° :18)	3A5.040 LC + G25K (ID. DE SEQ. N°:23)
3A5.070	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL + N2 6D (ID. DE SEQ. N° : 25)	3A5.040 HC (ID. DE SEQ. N° :18)	3A5.040 LC + N2 6D (ID. DE SEQ. N°:26)
3A5.082	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL + N27H (ID. DE SEQ. N° : 28)	3A5.040 HC (ID. DE SEQ. N° :18)	3A5.040 LC + N27H (ID. DE SEQ. N°:29)
3A5.084	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL + I28A (ID. DE SEQ. N° : 31)	3A5.040 HC (ID. DE SEQ. N° :18)	3A5.040 LC + I28A (ID. DE SEQ. N°:32)

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3A5.097	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL + G2 9D (ID. DE SEQ. N°:67)	3A5.040 HC (ID. DE SEQ. N° :18)	3A5.040 LC + G2 9D (ID. DE SEQ. N°:68)
3A5.107	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL + S30K (ID. DE SEQ. N° : 34)	3A5.040 HC (ID. DE SEQ. N° :18)	3A5.040 LC + S30K (ID. DE SEQ. N°:35)
3A5.125	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL + N32H (ID. DE SEQ. N° : 37)	3A5.040 HC (ID. DE SEQ. N° :18)	3A5.040 LC + N32H (ID. DE SEQ. N°:38)
3A5.127	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL + V33A (ID. DE SEQ. N° : 40)	3A5.040 HC (ID. DE SEQ. N° :18)	3A5.040 LC + V33A (ID. DE SEQ. N°:41)
3A5.161	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL + S52L (ID. DE SEQ. N° : 43)	3A5.040 HC (ID. DE SEQ. N° :18)	3A5.040 LC + S52L (ID. DE SEQ. N°:44)
3A5.169	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL + D53S (ID. DE SEQ. N° : 46)	3A5.040 HC (ID. DE SEQ. N° :18)	3A5.040 LC + D53S (ID. DE SEQ. N°:47)
3A5.232	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL + D92L (ID. DE SEQ. N° : 49)	3A5.040 HC (ID. DE SEQ. N° :18)	3A5.040 LC + D92L (ID. DE SEQ. N°:50)

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3A5.276*	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL + H95bS (ID. DE SEQ. N°:52)	3A5.040 HC (ID. DE SEQ. N°:18)	3A5.040 LC + H95bS (ID. DE SEQ. N°:53)
3A5.278*	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL + H95bY (ID. DE SEQ. N° : 55)	3A5.040 HC (ID. DE SEQ. N°:18)	3A5.040 LC + H95bY (ID. DE SEQ. N°:56)
3A5.279*	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL + H95bD (ID. DE SEQ. N° : 58)	3A5.040 HC (ID. DE SEQ. N° :18)	3A5.040 LC + H95bD (ID. DE SEQ. N°:59)
3A5.294	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL + V97A (ID. DE SEQ. N°:61)	3A5.040 HC (ID. DE SEQ. N° :18)	3A5.040 LC + V97A (ID. DE SEQ. N°:62)
3A5.302	3A5.040 VH (ID. DE SEQ. N°:16)	3A5.040 VL + V97W (ID. DE SEQ. N°:64)	3A5.040 HC (ID. DE SEQ. N° :18)	3A5.040 LC + V97W (ID. DE SEQ. N°:65)

* A letra minúscula b em cada uma dessas sequências se refere à numeração de Kabat para a posição de CDR. A numeração de Kabat permite CDRs de tamanhos variáveis, por utilização de numeração alfanumérica para denotar inserções de aminoácidos em certas posições. Nessas sequências de CDR, aminoácidos adicionais estavam presentes, que foram numeradas as posições 95a e 95b (que correspondem às posições de Kabat 95A e 95B, respectivamente) . Dessa forma, para o anticorpo 3A5.276, por exemplo, H95bS indica uma mutação de

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30/138 histidina (H) para serina (S) na posição 95B de acordo com o número de Kabat em relação à cadeia VL de 3A5.040. A notação em letra minúscula é aqui usada, portanto, para distinguir o número de Kabat, separado da mutação na posição de Kabat indicada.

[067] Em algumas modalidades, as moléculas de anticorpo reveladas podem compreender uma região variável da cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 16 e

a. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 17;

b. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 22;

c. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 25;

d. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 28;

e. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 31;

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f. uma região variável da uma sequência de aminoácidos que 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à ID. DE SEQ. N°: 34;

g. uma região variável da uma sequência de aminoácidos que 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à ID. DE SEQ. N°: 37;

h. uma região variável da uma sequência de aminoácidos que 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à ID. DE SEQ. N°: 40;

i. uma região variável da uma sequência de aminoácidos que 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à ID. DE SEQ. N°: 43;

j . uma região variável da uma sequência de aminoácidos que 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à ID. DE SEQ. N°: 46;

k. uma região variável da uma sequência de aminoácidos que 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à ID. DE SEQ. N°: 49;

l. uma região variável da uma sequência de aminoácidos que 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à ID. DE SEQ. N°: 52;

m. uma região variável da uma sequência de aminoácidos que cadeia leve que compreende é pelo menos 90%, 95%, 96%, sequência de aminoácidos do cadeia leve que compreende é pelo menos 90%, 95%, 96%, sequência de aminoácidos do cadeia leve que compreende é pelo menos 90%, 95%, 96%, sequência de aminoácidos do cadeia leve que compreende é pelo menos 90%, 95%, 96%, sequência de aminoácidos do cadeia leve que compreende é pelo menos 90%, 95%, 96%, sequência de aminoácidos do cadeia leve que compreende é pelo menos 90%, 95%, 96%, sequência de aminoácidos do cadeia leve que compreende é pelo menos 90%, 95%, 96%, sequência de aminoácidos do cadeia leve que compreende é pelo menos 90%, 95%, 96%,

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97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 55;

n. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 58;

o. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 61;

p. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 64; ou

q. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 67, em que a variabilidade (ou seja, os (pelo menos) 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade) ocorre fora da sequência de CDR.

[068] As moléculas de anticorpo reveladas podem compreender uma ou mais mutações, deleções ou inserções, nas regiões framework e/ou constantes. Em algumas modalidades, uma molécula de anticorpo IgG4 pode compreender uma mutação S228P. S228 está localizada na região de dobradiça da molécula de anticorpo IgG4. A mutação da serina (S) para uma prolina (P) serve para estabilizar a dobradiça da IgG4 e evitar a troca de braço de Fab in vitro e in vivo. Em algumas modalidades, as moléculas de anticorpo podem

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33/138 compreender uma ou mais modificações que aumentam a meiavida in vivo das moléculas de anticorpo. Por exemplo, em certas modalidades o anticorpo pode compreender uma mutação M252Y, uma mutação S254T e uma mutação T256E (coletivamente referida como a mutação YTE) . M252, S254 e T256 estão localizadas no dominio CH2 da cadeia pesada. A mutação desses residues para tirosina (Y), treonina (T) e glutamato (E), respectivamente, protege as moléculas de anticorpo de degradação lisossomal aumentando, dessa forma, a meia-vida sérica das moléculas de anticorpo. Com base no exemplo de outros anticorpos, é contemplado que a introdução da mutação YTE em um anticorpo anti-IL-5 pode fornecer extensão suficiente da meia-vida sérica para permitir regimes de administração com 3 meses ou mais de intervalos entre dosagens. Em algumas modalidades, as moléculas de anticorpo podem compreender uma deleção do residue de lisina do terminal-C da cadeia pesada. A deleção do resíduo de lisina do terminal-C da cadeia pesada reduz a heterogeneidade das moléculas de anticorpo quando produzidas por células de mamíferos. Em algumas modalidades, as moléculas de anticorpo podem compreender uma combinação de mutações, deleções ou inserções. Por exemplo, em alguns aspectos, as moléculas de anticorpo reveladas podem compreender uma mutação S228P e uma deleção de um resíduo de lisina do terminal-C da cadeia pesada. Os anticorpos revelados que compreendem uma sequência da cadeia pesada do ID. DE SEQ. N°: 18, por exemplo compreendem uma mutação S228P e uma deleção de um resíduo de lisina do terminal-C da cadeia pesada. Em alguns aspectos, a molécula de anticorpo revelada pode compreender uma mutação S228P, uma mutação M252Y, uma mutação S254T, uma mutação

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T256E e uma deleção de um resíduo de lisina do terminal-C da cadeia pesada. 0 anticorpo 3A5.046, por exemplo, que compreende uma cadeia pesada do ID. DE SEQ. N°: 20, compreende uma mutação S228P, uma mutação M252Y, uma mutação S254T, uma mutação T256E e uma deleção de um resíduo de lisina do terminal-C da cadeia pesada.

[069] A molécula de anticorpo pode compreender uma região constante da cadeia pesada de IgGl ou IgG4 e uma região constante da cadeia leve lambda. Em algumas modalidades, a molécula de anticorpo compreende uma região constante da cadeia pesada de IgGl e uma região constante da cadeia leve lambda (anticorpo 3A5, por exemplo). Em algumas modalidades, a molécula de anticorpo compreende uma região constante da cadeia pesada de IgG4 e uma região constante da cadeia leve lambda.

[070] As moléculas de anticorpo reveladas podem compreender uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos dos IDS. DE SEQ. N^os: 18 ou 2 0 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 19, 23, 26, 29, 32, 35, 38, 41, 44, 47, 50, 53, 56, 59, 62, 65 ou 68, em que a variabilidade (ou seja, os (pelo menos) 90% de identidade) ocorre fora da sequência de CDR. Moléculas de anticorpo exemplares são fornecidas na Tabela 1 e na Tabela 15. Em algumas modalidades, as moléculas de anticorpo podem compreender uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID.

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DE SEQ. N°: 18 e

a. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 19;

b. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 23;

c. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 2 6;

d. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 2 9;

e. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 32;

f. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 35;

g. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 38;

h. uma cadeia leve que compreende uma sequência de

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36/138 aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 41;

i. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 44;

j . uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 47;

k. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 50;

l. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 53;

m. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5 6;

n. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5 9;

o. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°:

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62;

p. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 65; ou

q. a cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou

100% idêntica	à sequência de	aminoácidos do ID.	DE SEQ.	N° :
68,
em que a	variabilidade	(ou seja, os (pelo	menos)	90%,
95%, 96%, 97%,	98%, 99% ou 100% de identidade)	ocorre	fora

da sequência de CDR.

[071] As moléculas de anticorpo reveladas podem compreender uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 20 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 19, em que a variabilidade (ou seja, os (pelo menos) 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade) ocorre fora da sequência de CDR.

[072] Em algumas modalidades, as moléculas de anticorpo são moléculas de anticorpo de comprimento total (com ou sem uma deleção do resíduo de lisina do terminal-C da cadeia pesada). Em outras modalidades, as moléculas de anticorpo são fragmentos de ligação ao antígeno. Fragmentos de ligação ao antígeno adequados incluem, sem limitação, um fragmento Fab, um fragmento Fab₂ ou um anticorpo de cadeia única.

[073] As moléculas de anticorpo podem ter uma ou mais

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38/138 das seguintes propriedades:

a. se liga à IL-5 humana com uma constante de afinidade de equilíbrio (Kd) de pelo menos cerca de 40 pM, como determinada por ressonância de plásmon de superfície;

b. reduz a ligação de IL-5 ao receptor de IL-5;

c. possui uma meia-vida sérica de pelo menos cerca de 20 dias; ou

d. se liga à IL-5 humana e de macaco Cynomolgus, mas não à IL-5 de camundongo, rato ou porquinho-da-índia.

[074] Composições farmacêuticas que compreendem qualquer uma das moléculas de anticorpo reveladas, também são fornecidas.

[075] Também são fornecidas moléculas de ácido nucléico que codificam qualquer uma das moléculas de anticorpo reveladas e vetores que compreendem as moléculas de ácido nucléico reveladas.

[076] Células transformadas para expressar qualquer uma das moléculas de anticorpo reveladas são ainda fornecidas.

Métodos e usos [077] As moléculas de anticorpo reveladas, ou composições farmacêuticas que compreendem as mesmas, podem ser usadas para tratar asma eosinofílica, sindrome hipereosinofílica, polipose nasal com envolvimento eosinofílico, granulomatose eosinofílica com poliangeíte, dermatite atópica e esofagite eosinofílica. Qualquer uma das características da molécula de anticorpo revelada nesse relatório descritivo se aplica igualmente aos anticorpos uados nos métodos e usos revelados.

[078] São revelados nesse relatório descritivo métodos de tratamento de um indivíduo que possui asma eosinofílica,

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39/138 síndrome hipereosinofílica, polipose nasal com envolvimento eosinofílico, granulomatose eosinofílica com poliangeíte, dermatite atópica ou esofagite eosinofílica, que compreendem a administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer uma das moléculas de anticorpo reveladas nesse relatório descritivo, ou composições farmacêuticas que compreendem as mesmas, para tratar a asma eosinofilica, sindrome hipereosinofilica, polipose nasal com envolvimento eosinofilico, granulomatose eosinofilica com poliangeíte, dermatite atópica ou esofagite eosinofilica.

[079] O uso de uma quantidade eficaz de qualquer uma das moléculas de anticorpo reveladas, ou composições farmacêuticas que compreendem as mesmas, no tratamento de asma eosinofílica, síndrome hipereosinofílica, polipose nasal com envolvimento eosinofilico, granulomatose eosinofílica com poliangeíte, dermatite atópica ou esofagite eosinofílica, também é fornecido.

[080] Também é fornecido o uso de qualquer uma das moléculas de anticorpo reveladas, ou composições farmacêuticas que compreendem as mesmas, na fabricação de um medicamento para o tratamento de asma eosinofílica, síndrome hipereosinofílica, polipose nasal com envolvimento eosinofilico, granulomatose eosinofílica com poliangeíte, dermatite atópica ou esofagite eosinofílica.

EXEMPLOS [081] Os exemplos seguintes são fornecidos para descrever adicionalmente algumas das modalidades reveladas nesse relatório descritivo. Os exemplos visam ilustrar, e não limitar, as modalidades reveladas.

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Geração de anticorpos anti-IL-5 humana [082] Anticorpos anti-IL-5 humana foram obtidos de ratos transgênicos (OMT) com genes-V humanos clonados em seus genomas e que produzem anticorpos com dominios-V humanos e dominios Fc de rato. Resumidamente, os ratos transgênicos foram imunizados geneticamente com DNA que codifica IL-5 quatro vezes ao longo de 21 dias (nos dias 0, 7, 14, 21) e reforçados com IL-5 humana recombinante no dia 28 do protocolo de imunização. As titulações séricas de anticorpo foram determinadas nos dias 0 e 38 do protocolo de imunização por um ensaio ELISA usando IL-5 humana recombinante. Resumidamente, soros de cada animal foram diluidos em PBSBSA 1% e foram testados usando placas de ELISA revestidas com 1 pg/ml de IL-5 humana, ou BSA como um controle. Um antiIgG de rato de cabra conjugado à R-ficoeritrina (SouthernBiotech, #3030-09) foi usado a 10 pg/ml como um anticorpo secundário. Animais específicos foram escolhidos para fusão de hibridoma com base nessas titulações séricas.

[083] Para gerar hibridomas que produzem anticorpos monoclonais à IL-5 humana, esplenócitos e/ou células de linfonodo de animais imunizados foram isolados e fundidos a células não secretoras de mieloma de camundongo P3X63Ag8.653 (ATCC, CRL-1580). As células foram plaqueadas a aproximadamente 1 x 10⁵ células/ml em placas de microtitulação de fundo plano, seguido por uma incubação de duas semanas em meio seletivo que incluia soro de clone fetal 10% e 1 x HAT (Sigma) . Os hibridomas foram expandidos por passagem serial através de quatro trocas de meios em placas de 96 poços (estágios de 96 poços 1 a 4), de depois em frascos T25 e finalmente frascos T75.

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41/138 [084] Os sobrenadantes de clones de hibridoma foram testados durante o processo de expansão de hibridoma, inicialmente em um ELISA de célula inteira usando células transfectadas com IL-5 humana ancorada em GPI e depois ELISA usando um ensaio ELISA de IL-5 humana recombinante (esse último como descrito acima). Hibridomas que sobreviveram ao processo de aumento de escala até o estágio T75 e que geravam sinais acima de certo limiar para ligação em ambos os ensaios foram congelados como péletes de células, para clonagem e sequenciamento de dominios-V de Ig. Aproximadamente 20 hibridomas que produzem IgGs quiméricas foram selecionados para clonagem após essas etapas de avaliação.

[085] Os dominios-V humanos das IgGs quiméricas candidatas foram isolados por geração de cDNA de péletes de células de hibridoma, amplificação por PCR de dominios-V, subclonagem, e sequenciamento de DNA. Um total de aproximadamente 35 combinações de cadeia pesada e leve foi obtido do sequenciamento desses hibridomas. Todos os anticorpos foram clonados em um vetor de expressão de mamifero e transfectados transitoriamente em células HEK293. Anticorpos foram purificados usando protocolos padronizados de purificação com Proteína A.

Testagem funcional e caracterização de anticorpos [086] Anticorpos selecionados em formato de IgGl humana primeiro foram testados quanto à especificidade em um ELISA de IL-5 humana. Resumidamente, os anticorpos foram diluídos em PBS-BSA 0,1% e foram testados usando placas de ELISA revestidas com 1 pg/ml de IL-5 humana, ou uma proteína de controle irrelevante. Um anticorpo anti-IgG conjugado à peroxidase de raiz- foi usado como um anticorpo secundário.

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42/138 [087] Anticorpos que exibiam ligação imunoespecifica à IL-5 humana foram ranqueados quanto à potência em um ensaio de proliferação celular IL-5 humana-dependente usando células TF-1.6G4 humanas (um derivado da linhagem de célula eritroleucêmica humana TF-1). A linhagem de células TF-1.6G4 foi subclonada e selecionada quanto à expressão de superfície aumentada de IL-5Ra e resposta proliferativa consistente à IL-5 humana. A linhagem de células TF-1.6G4 foi mantida em cultura seguindo condições padronizadas usadas para a linhagem de célula eritroleucêmica humana TF-1 (ATCC: CRL2003) . Resumidamente, diluições de cada anticorpo foram incubadas na presença de 45 pM de IL-5 humana e 5 x 10⁴ células TF-1.6G4 por poço, incubadas por 48 h, e a proliferação celular foi determinada usando o Ensaio de Viabilidade Celular Luminescente CellTiter-Glo® (Promega, WI) . Todas as curvas de proliferação e inibição foram ajustadas usando um modelo de dose-resposta três ou quatro parâmetros no software GraphPad Prism 6 (Versão 6.04) . A Tabela 2 resume esses resultados.

Tabela 2. Resumo da avaliação e caracterização de um painel de teste inicial em formato de IgGl.

Anticorpo de teste	IC50 (pM) em TF1.6G4	Afinidade de equilíbrio (KD)	Inibe a ligação ao IL— 5Ra?	Especificidade confirmada por ELISA?
3A5	35, 07	3 6 pM	Sim	Sim
1A3	55, 5	18 pM	Sim	Sim
2B4	56, 75	42 pM	Sim	Sim
6G10	72,34	61 pM	Sim	Sim
1E8	72,45	2 8 pM	Sim	Sim
3G4	80, 92	41 pM	Sim	Sim
6C9	81,89	41 pM	Sim	Sim

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5H1	86, 42	3 6 pM	Sim	Sim
1H10	93, 26	18 pM	Sim	Sim
5H11	109, 3	3 6 pM	Não	Sim
5G9	184,4	52 pM	Sim	Sim
1B2	214,4	4 5 pM	Sim	Sim

[088] Na Tabela 2, os resultados dos testes foram ranqueados em ordem de potência do ensaio de TF1.6G4. 0 painel de teste inicial foi selecionado com base na potência, afinidade, inibição de IL-5Ra e responsabilidade de sequência (imunogenicidade e capacidade de desenvolvimento).

[089] Ensaios Biacore foram usados para determinar a afinidade de anticorpos de teste à IL-5 humana recombinante e sua potência na inibição da ligação de IL-5Ra à IL-5 humana A Tabela 2 resume esses resultados. A afinidade de ligação de anticorpos de teste à IL-5 humana (Kd; FIG. 6) foi determinada em um sistema Biacore T200 (GE Healthcare) por revestimento de Proteina A de Chip Sensor Biacore Série S (GE Healthcare) com anticorpo IgG purificado selecionado até um nivel de captura de 75 RU, e depois IL-5 humana recombinante foi injetada a 60 μΐ/min através de uma faixa de diluição serial de duas vezes em 7 etapas, começando em 1 pg/ml. Todos experimentos foram executados usando tampão HBS-EP+ (GE Healthcare). Os sensorgramas resultantes foram referenciados duplamente (valores da lâmina de fluxo de teste subtraídos dos valores da lâmina de fluxo de controle (superfície de Proteína A sem anticorpo revestido) e também um branco de tampão). As constantes de ligação foram determinadas por ajuste de um modelo de ligação de Langmuir de 1:1 aos sensorgramas de referência dupla.

[090] Para determinar se cada anticorpo de teste inibia

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44/138 a ligação de IL-5 ao IL-5Ra, foi usado um sistema Biacore T200 ou Biacore 3000 (GE Healthcare). Um Chip Sensor Biacore CM5 primeiro foi derivatizado com um kit de captura de Fab (GE Healthcare) de acordo com as instruções do fabricante em duas lâminas de fluxo adjacentes (de teste e de controle) . Essa superficie foi usada para capturar cada anticorpo IgG de teste purificado e uma única lâmina de fluxo de teste. IL-5 humana recombinante a 5 pg/ml ou um branco de tampão foi então injetado através das lâminas de fluxo de teste e de controle, para saturar a superficie da lâmina de fluxo de teste e de controle para associação não-especifica de IL-5, respectivamente. Uma segunda injeção de anticorpo IgG de teste purificado a 10 pg/ml ou um branco de tampão foi realizada na lâmina de fluxo de teste para bloquear sitios de ligação à IL-5 livres e controle para dissociação do anticorpo IgG de teste do anticorpo Fab de captura, respectivamente.

[091] A injeção subsequente de IL-5Ra-Fc (R&D Systems) a 5 ou 20 pg/ml ou de um branco de tampão através de ambas as lâminas de fluxo foi usada para determinar se o anticorpo IgG de teste bloqueava a interação entre IL-5 e IL-5Ra ou para controle da dissociação de anticorpo IgG do anticorpo Fab de captura durante essa etapa. Anticorpos que inibiam a ligação de IL-5 ao IL-5Ra mostraram um sinal acentuadamente reduzido mediante injeção de IL-5Ra (Tabela 2). Um método de subtração de referência tripla foi usado para analisar dados na mesma forma detalhada acima. Todos os dados foram exportados pelo software de avaliação Biacore e subtraidos no software Excel (Microsoft). Todos os experimentos foram executados usando tampão HBS-EP+ (GE Healthcare) .

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45/138 [092] Um painel de anticorpos de teste menor (3A5, 5H11 e 2B4 na Tabela 2) foi escolhido com base nesses resultados. Os anticorpos foram reformatados como IgG4 humana e testados nos mesmos ensaios. A versão IgG4 do anticorpo 3A5 (originalmente uma IgGl) foi designada como 3A5.001. Foi demonstrado que esse anticorpo totalmente humano possui potência equivalente ao 3A5 de teste original em formato de IgGl (FIG. 1).

[093] Uma variante do anticorpo 3A5.001 (designada 3A5.040) foi preparada com substituições de aminoácidos especificas (VH: S[68]T, N[82A]S; VL: S[2]Y, I[3]V, Y[92]D, em que os residues entre colchetes representam as posições de Kabat) introduzidas na regiões do dominio-V para remover epitopos de célula T previstos. Foi demonstrado que o Anticorpo 3A5.040 possui potência equivalente ao seu anticorpo parental, 3A5.001 (FIG. 2) no ensaio de TF-1.6G4. Varredura de CDR do anticorpo 3A5.040 [094] Geração de variantes do anticorpo 3A5.040 Variantes de mutante único do anticorpo 3A5.040 foram feitas por substituição de um de um grupo de nove aminoácidos representativos - A, S, L, Y, D, Q, K, H, W - em cada posição de aminoácido na CDR1 da cadeia leve (CDR-L1), na CDR2 da cadeia leve (CDR-L2), na CDR1 da cadeia pesada (CDR-H1) e na CDR2 da cadeia pesada (CDR-H2) (como definidas pela nomenclatura de AbM) . Também foram feitas variantes de anticorpo por substituição de um de um grupo de dez aminoácidos representativos - A, S, L, Y, D, Q, K, H, W, P - em cada posição de aminoácido da CDR na CDR3 da cadeia leve (CDR-L3), CDR3 da cadeia pesada (CDR-H3), e nas posições de Kabat 93 e 94 na cadeia pesada variável. Uma lista

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46/138 completa de todas as variantes de mutante único de anticorpo geradas é mostrada na FIG. 3 (cadeia pesada variável) e na FIG. 4 (cadeia leve variável), respectivamente.

[095] Construção de vetores que expressam anticorpos Variantes da região variável foram geradas por retrotradução de sequências de aminoácidos em sequências de DNA que foram subsequentemente sintetizadas de novo por montagem de oligonucleotídeos sintéticos. Variantes pesadas variáveis (VH) foram subclonadas em um vetor de expressão de mamífero que contém uma região constante humana para produzir cadeias pesadas de anticorpo de comprimento total (domínios CHI da cadeia pesada de IgG4 humana, dobradiça, CH2 e CH3) . Similarmente, variantes leves variáveis (VL) foram subclonadas em um vetor de expressão de mamífero que contém uma região constante humana da cadeia leve lambda para produzir cadeias lambda anticorpo de comprimento total.

[096] Expressão de variantes de anticorpo - Anticorpos foram produzidos por cotransfecção de vetores de expressão separados que codificam cadeias pesadas e cadeias leves de anticorpo em células EXPI293® (Life Technologies, Carlsbad, CA). Cada cadeia de mutante único foi pareada com uma cadeia parental para expressão de proteína no sistema EXPI293®. Para cada transfecção de 20 ml, 3,6 x 10⁷ células foram necessárias em 20 ml de Meio de Expressão EXPI293®. No dia anterior à transfecção, as células foram semeadas em uma densidade de 0,9 x 10⁶ células viáveis/ml e incubadas de um dia para o outro a 37°C em uma atmosfera umidificada de CO2 8% em ar em uma agitadora orbitária girando a 200 rpm. No dia da transfecção, o número e viabilidade das células foram determinados usando um contador de células automatizado. Só

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47/138 foram usadas culturas com >98% de células viáveis. Para cada transfecção de 20 ml, foram preparados complexos lipídeo-DNA por diluição de 10 pg de DNA de cadeia pesada e 10 pg de DNA de cadeia leve em Meio de Soro Reduzido OPTI-MEM® (Life Technologies, Carlsbad, CA) I (N° de Catálogo 31985-062) até um volume total de 1,0 ml. 54 pi de Reagente EXPIFECTAMINE® 293 (Life Technologies, Carlsbad, CA) foram diluídos em meio OPTI-MEM® I até um volume total de 1,0 ml. Ambos os frascos foram misturados gentilmente e incubados por 5 minutos em temperatura ambiente. Após incubação, o DNA diluído foi misturado com o Reagente EXPIFECTAMINE® 293 diluído e a mistura DNA-Reagente EXPIFECTAMINE® 293 e incubado por mais 20 minutos em temperatura ambiente para permitir a formação de complexos DNA-Reagente EXPIFECTAMINE® 293. Após incubação 2 ml de complexo DNA-Reagente EXPIFECTAMINE® 293 foram adicionados a cada tubo de biorreator de 50 ml (TPP Techno Plastic Products AG). 2 ml de meio OPTI-MEM® (Life Technologies, Carlsbad, CA) I foram adicionados ao tubo de controle negativo ao invés de complexo DNA-Reagente EXPIFECTAMINE® 293. As células foram incubadas em uma incubadora a 37°C com uma atmosfera umidifiçada de CO₂ 8% em ar em uma agitadora orbitária girando a 200 rpm. Aproximadamente 16-18 horas pós-transfecção, 100 pi de Intensificador de Transfecção EXPIFECTAMINE® 293 1 e 1,0 ml de Intensificador de Transfecção EXPIFECTAMINE® 293 2 foram adicionados a cada biorreator. Os sobrenadantes foram coletados em aproximadamente 48 horas pós-transfecção.

[097] Purificação de variantes de anticorpo - Cada variante de anticorpo foi expressa em células EXPI293® em 20 ou 100 ml de cultura de células. As culturas foram

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48/138 centrifugadas em tubos de Falcon de 50 ml a 3.000 x g por 20 minutos, e os sobrenadantes foram filtrados usando um filtro de 0,22 pm. Os sobrenadantes foram purificados usando um robô Gilson ASPEC GX274. Resumidamente, cartuchos de SPE (Agilent, 12131014) empacotados com 1,2 ml de resina de proteína A MABSELECT SURE® (GE Healthcare) foram préequilibrados com 3 volumes de coluna de IX PBS. O sobrenadante foi corrido sobre as colunas, seguido por uma lavagem com IX PBS de 4 ml. Cada coluna foi lavada com 9 ml de 1 M de ácido cítrico, pH 2,9. Os anticorpos foram eluídos com 2 ml de 0,1 M de ácido cítrico, pH 2,9. Os anticorpos foram dessalinizados em PBS Sorensens (5 mM KH2PO4, 3 mM de Na2HPO4 · 2H2O, 145,4 mM de NaCl (pH aproximadamente 5,8)) usando colunas PD-10 (GE Healthcare).

[098] Determinação da titulação da variante do anticorpo 3A5.040 no sobrenadante por Biacore - Sobrenadantes contendo anticorpo da expressão em células EXPI293® foram analisados usando um chip de Proteína A Série S no Biacore T200 para determinar sua titulação e ranqueá-los com relação ao anticorpo 3A5.040 parental. Cada amostra de sobrenadante foi diluída com tampão de corrida (1 x HBS-EP+, 350 mM de NaCl) e capturada por injeção a 60 μΐ/min em célula de fluxo (FC)

2. O nível de captura resultante em unidades de resposta (RUs) foi medido em FC 2-1 por subtração de um ponto de relato 5 segundos após início do ciclo de 1 a 5 segundos após injeção. A superfície foi regenerada por injeção de 50 mM de NaOH por 12 segundos em uma taxa de fluxo de 60 μΐ/min sobre FC 1 e 2 a cada 4 ciclos. Após cada regeneração, a superfície e sensorgrama foram estabilizados por 120 segundos por injeção de tampão de corrida. Várias bateladas

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49/138 foram executadas em função do grande número de anticorpos que eram avaliados dessa forma.

[099] Os niveis de captura (em unidades de resposta Biacore RU) obtidos para cada amostra de sobrenadante foram ajustados por multiplicação dos valores obtidos para cada injeção de 30 segundos pelo fator de diluição do sobrenadante permitindo a comparação de níveis de captura entre sobrenadantes diluídos até graus variáveis através de diferentes rodadas experimentais. O nível de expressão relativa de anticorpo (titulação) de cada mutante foi comparado com o sobrenadante de 3A5.040 específico de uma batelada (Tabela 3) usando a seguinte fórmula:

(RU ajustada de referência de 3A5.040 para injeção de 30 segundos / RU ajustada da variante de anticorpo para injeção de 30 segundos) x 100 = titulação proporcional de anticorpo parental (% da titulação de 3A5.040) Fórmula 1 [100] Anticorpos variantes com uma titulação maior do que anticorpo 3A5.040 parental tiveram um valor do % da titulação de 3A5.040 >100% e aqueles com uma titulação menor um valor <100%. Isso permitiu a identificação de anticorpos variantes que podem ter expressão aumentada em relação ao anticorpo parental, 3A5.040. As titulações de algumas variantes não foram determinadas por análise Biacore de amostras de sobrenadante, mas foram expressas e purificadas como acima e seus rendimentos purificados determinados por análise espectrofotométrica (A280) , e depois comparadas com o anticorpo 3A5.040 parental (Tabela 5).

[101] Determinação da cinética de ligação à IL-5 pela variante do anticorpo 3A5.040 por Biacore - Sobrenadantes

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50/138 contendo anticorpo da expressão em células EXPI293® ou anticorpos purificados foram analisados usando um chip de Proteina A Série S em um sistema Biacore T200 (GE Healthcare) para determinar sua afinidade de ligação para IL-5 humana recombinante e ranqueá-los com relação ao anticorpo 3A5.040 parental.

[102] Cada anticorpo foi diluido em tampão de corrida (1 x HBS-EP + , 350 mM de NaCl) e capturado a 60 μΐ/min até aproximadamente 50 RU em FC 2. A superfície e sensorgrama foram então estabilizados por 120 segundos por injeção de tampão de corrida. IL-5 humana recombinante a 5 pg/ml ou tampão de corrida foi injetado em FC 1 e 2 em uma taxa de fluxo de 60 μΐ/min por 70 segundos. Foi permitido que a IL5 se dissociasse em tampão de corrida por 300 segundos. A superfície foi regenerada por injeção de 50 mM de NaOH por 12 segundos em uma taxa de fluxo de 60 μΐ/min sobre FC 1 e

2. Tampão foi injetado para limpar ainda mais o mandril por 60 segundos em uma taxa de fluxo de 60 μΐ/min sobre FC 1 e

2. A superfície foi estabilizada por 300 segundos com tampão de corrida sobre FC 1 e 2. Sobrenadante contendo o anticorpo 3A5.040 parental e que foi transfectado com cada batelada foi corrido aproximadamente a cada 25 ciclos ao longo de cada corrida. Uma amostra purificada de 3A5.040 e um controle de isótipo lambda de IgG4 foram corridos com cada batelada como uma medida da variabilidade dentro do ensaio. Várias bateladas foram processadas em função do grande número de anticorpos que eram avaliados dessa forma.

[103] Os dados foram referenciados duplamente (célula de fluxo 2 foi subtraída da célula de fluxo 1 e um branco de tampão) e sensorgramas ajustados para um modelo de ligação

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51/138 de Langmuir de 1:1 com software de Avaliação Biacore. Um valor da kd (off-rate) foi calculado para cada amostra de sobrenadante de 3A5.040 ao longo da corrida e esses foram ponderados para gerar uma kd de referência, com a exceção da corrida 2.1, que só tinha uma amostra de sobrenadante de 3A5.040 (Tabela 3 e Tabelas 6-11) . 0 valor da kd calculado para cada anticorpo do sobrenadante foi comparado contra a kd de referência média de 3A5.040 usando a seguinte fórmula: (kd de referência de 3A5.040 / kd da variante de anticorpo) x 100 = kd proporcional do anticorpo parental (% da kd de 3A5.040)

Fórmula 2 [104] Anticorpos variantes com uma kd menor (off-rate mais lenta) do que o anticorpo 3A5.040 parental tiveram um valor do % da kd de 3A5.040 >100% e aqueles com uma kd maior (off-rate mais rápida) um valor <100%. Isso permitiu a identificação de anticorpos variantes que podem ter cinética de ligação aprimorada para IL-5 e, portanto, função aumentada em relação ao anticorpo parental, 3A5.040. Para variantes nas quais só foi feita proteína purificada (Tabela 6), a análise cinética por Biacore foi realizada em triplicata como acima usando esses anticorpos purificados e os valores médios de cada análise em triplicata usados para realizar o cálculo da kd proporcional, como acima (Tabela 4 e Tabelas 8-11) .

Tabela 3. Determinação de titulação da variante do anticorpo 3A5.040 do sobrenadante e cinética de ligação à IL-5 por Biacore.

Corrida #

ID do anticorpo

N° da répli—

Substi tuição de amino-

Nível de captu -ra

ka (1/ Ms)

kd (1/ s)

KD (M)

Rmáx (RU)

% da kd de 3A5.

% da titulação de

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		cata	ácido						040	3A5.0 40
1.1	3A5.0 40	1	Tipo selvagem	51, 6	7, 20 E+05	1, 15 E-04	1, 60 E-10	16, 3
1.1	3A5.0 40	2	Tipo selvagem	51, 6	7, 27 E+05	8, 96 E-05	1, 23 E-10	16, 6
1.1	3A5.0 40	3	Tipo selvagem	51,8	7, 18 E+05	9,21 E-05	1, 28 E-10	16, 7
1.1	3A5.0 40	4	Tipo selvagem	52	6, 96 E+05	9, 95 E-05	1, 43 E-10	16, 8
1.1	3A5.0 40	Média	Tipo selvagem	51,75	7,15 E+05	9, 91 E-05	1,39 E-10	16, 6	100	100
1.1	Isótipo de IgG4			54,4	N/A	N/A	N/A	0,7	N/A	N/A
1.1	3A5.0 40 (purificado)		Tipo selvagem	56, 4	7, 17 E+05	1,06 E-04	1, 48 E-10	17,8	93.0
1.1	3A5.3 04		VH_G2 6 A	54, 6	7,41 E+05	7,73 E-05	1, 04 E-10	17, 1	128	49
1.1	3A5.3 05		VH_G2 6 S	53, 1	7, 36 E+05	1,09 E-04	1, 48 E-10	16, 7	91	59
1.1	3A5.3 06		VH_G2 6 L	49, 1	7,49 E+05	8,74 E-05	1, 17 E-10	15, 6	113	15
1.1	3A5.3 08		VH_G2 6 D	52,5	6, 75 E+05	8,57 E-05	1, 27 E-10	16, 4	116	61
1.1	3A5.3 09		VH_G2 6 Q	55, 1	7, 47 E+05	9, 23 E-05	1, 24 E-10	17,4	107	86
1.1	3A5.3 10		VH_G2 6 K	51,8	7, 36 E+05	1,01 E-04	1, 37 E-10	16, 4	98	100
1.1	3A5.3 11		VH_G2 6 H	50, 9	7, 60 E+05	1,11 E-04	1,46 E-10	16, 3	89	85
1.1	3A5.3 12		VH_G2 6 W	56, 1	8, 54 E+05	1,21 E-04	1,41 E-10	18	82	107
1.1	3A5.3 13		VH_G2 7 A	54,5	6, 97 E+05	1, 17 E-04	1, 68 E-10	17,3	85	99
1.1	3A5.3 14		VH_G2 7 S	50, 9	7, 16 E+05	9,81 E-05	1, 37 E-10	16, 2	101	95
1.1	3A5.3 15		VH_G2 7 L	54,3	7,01 E+05	1,31 E-04	1, 87 E-10	17, 1	76	118
1.1	3A5.3 16		VH_G2 7 Y	56	6, 66 E+05	8,56 E-04	1,29 E-09	16, 9	12	80
1.1	3A5.3 17		VH_G2 7 D	57,4	6, 56 E+05	1, 16 E-04	1,76 E-10	17,8	85	73

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1.1	3A5.3 18		VH_G2 7 Q	55, 2	7, 31 E+05	1,49 E-04	2, 04 E-10	17,4	67	82
1.1	3A5.3 19		VH_G2 7 K	54,8	7, 70 E+05	2,04 E-04	2, 65 E-10	17,5	49	95
1.1	3A5.3 20		VH_G2 7 H	54,4	7, 12 E+05	2,43 E-04	3, 42 E-10	16, 9	41	71
1.1	3A5.3 22		VH_S28 A	58	7,49 E+05	1,05 E-04	1,41 E-10	18	94	62
1.1	3A5.3 23		VH_S28 L	53, 8	7, 18 E+05	9, 30 E-05	1, 30 E-10	17	107	70
1.1	3A5.3 24		VH_S28 Y	54,8	8, 13 E+05	8, 60 E-05	1,06 E-10	17	115	51
1.1	3A5.3 25		VH_S28 D	54, 9	6, 03 E+05	9, 16 E-05	1, 52 E-10	17	108	68
1.1	3A5.3 26		VH_S28 Q	56, 9	6, 78 E+05	9, 97 E-05	1, 47 E-10	17,7	99	77
1.1	3A5.3 27		VH_S28 K	53, 7	7, 22 E+05	1, 15 E-04	1, 59 E-10	16, 9	86	84
1.1	3A5.3 28		VH_S28 H	54	7, 82 E+05	1,23 E-04	1, 57 E-10	16, 9	81	71
1.1	3A5.3 29		VH_S28 W	55	8, 33 E+05	1,36 E-04	1, 63 E-10	17	73	41
1.1	3A5.3 30		VH_I29 A	56, 3	6, 54 E+05	1, 69 E-04	2, 58 E-10	16, 8	59	30
1.1	3A5.3 31		VH_I29 S	53, 3	5, 87 E+05	2,04 E-04	3, 48 E-10	15, 7	49	28
1.1	3A5.3 32		VH_I29 L	55, 3	8,26 E+05	1, 16 E-04	1,41 E-10	17,5	85	75
1.1	3A5.3 33		VH_I29 Y	55, 4	5, 44 E+05	9, 31 E-04	1,71 E-09	15, 7	11	24
1.1	3A5.3 34		VH_I29 D	52,8	3, 53 E+06	5, 37 E-03	1, 52 E-09	11, 9	2	21
1.1	3A5.3 36		VH_I29 K	53, 7	6, 17 E+05	6, 75 E-04	1, 10 E-09	14,8	15	29
1.1	3A5.3 38		VH_I29 W	56, 6	1, 31 E+06	2,34 E-03	1, 78 E-09	14, 9	4	38
1.1	3A5.3 40		VH_S30 L	48,7	6, 51 E+05	1,47 E-04	2, 25 E-10	15, 6	67	153
1.1	3A5.3 41		VH_S30 Y	54,3	7, 54 E+05	1,37 E-04	1, 82 E-10	17,3	72	103
1.1	3A5.3 42		VH_S30 D	54, 9	6, 17 E+05	1,23 E-04	2, 00 E-10	17,4	81	103
1.1	3A5.3 47		VH_N31 A	53, 8	7, 53 E+05	6, 75 E-04	8, 97 E-10	17,3	15	118
1.1	3A5.3 48		VH_N31 S	54, 6	7, 82 E+05	5, 03 E-04	6, 44 E-10	17,7	20	107
1.1	3A5.3 50		VH_N31 Y	56, 2	9, 01 E+05	8,80 E-04	9, 76 E-10	17, 6	11	NE
1.1	3A5.3 51		VH_N31 D	59, 8	6, 40 E+05	2,03 E-04	3, 17 E-10	19, 2	49	75
1.1	3A5.3 52		VH_N31 Q	54,8	6, 93 E+05	4,21 E-04	6, 07 E-10	17,7	24	156

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1.1	3A5.3 53		VH_N31 K	55, 5	6, 85 E+05	7,54 E-04	1, 10 E-09	17,7	13	170
1.1	3A5.3 54		VH_N31 H	53, 7	7, 63 E+05	1,32 E-04	1, 73 E-10	17,5	75	143
1.1	3A5.3 56		VH_G32 A	52,3	5, 25 E+05	3, 02 E-04	5, 76 E-10	16, 4	33	179
1.1	3A5.3 57		VH_G32 S	49, 2	6, 02 E+05	1,23 E-03	2, 04 E-09	15, 3	8	153
1.1	3A5.4 95		VH_S94 K	55	6, 76 E+05	2, 91 E-04	4, 31 E-10	17, 6	34	127
1.1	3A5.4 97		VH_S94 W	56, 8	1, 67 E+06	2, 92 E-03	1, 75 E-09	12,5	3	38
1.1	3A5.4 98		VH_S94 P	55, 5	4, 45 E+05	1, 17 E-04	2, 63 E-10	16	85	17
1.1	3A5.5 00		VH_L95 S	2,7					NE	NE
1.1	3A5.5 04		VH_L95 K	51,7	1, 53 E+06	3, 12 E-03	2, 03 E-09	11,3	3	67
1.1	3A5.5 05		VH_L95 H	52, 9	5, 59 E+05	6, 66 E-04	1, 19 E-09	16, 3	15	88
1.1	3A5.5 07		VH_L95 P	54,7					NB	40
1.1	3A5.5 09		VH_G96 S	54,4	5, 94 E+05	1, 92 E-04	3, 23 E-10	17	52	88
1.1	3A5.5 10		VH_G96 L	54	4,11 E+06	7, 90 E-03	1, 92 E-09	8,5	1	63
1.1	3A5.5 13		VH_G96 Q	54,8	4, 45 E+05	5, 13 E-04	1, 15 E-09	16, 5	19	64
1.1	3A5.5 14		VH_G96 K	54, 9	5, 14 E+06	6, 84 E-03	1, 33 E-09	11,4	1	147
1.1	3A5.5 15		VH_G96 H	53, 2	4, 37 E+05	1,20 E-03	2, 74 E-09	15, 3	8	117
1.1	3A5.5 16		VH_G96 W	53	1, 31 E+06	1,40 E-02	1, 07 E-08	6, 7	1	55
1.1	3A5.5 17		VH_G96 P	47,8	1, 35 E+05	5, 04 E-04	3, 73 E-09	11,7	20	15
1.1	3A5.5 18		VH_N97 A	52	5, 35 E+05	1,72 E-04	3,21 E-10	16, 3	58	95
1.1	3A5.5 20		VH_N97 L	54,5	4, 73 E+05	1,11 E-04	2, 35 E-10	16	89	96
1.1	3A5.5 21		VH_N97 Y	54,7	5, 05 E+05	3, 34 E-04	6, 62 E-10	16, 1	30	75
1.1	3A5.5 23		VH_N97 Q	53, 7	5, 06 E+05	9,79 E-05	1, 94 E-10	16, 6	101	127
1.1	3A5.5 24		VH_N97 K	52,5	2,89 E+05	1,37 E-04	4, 75 E-10	15, 1	72	167
1.1	3A5.5 25		VH_N97 H	53, 1	4,11 E+05	2, 14 E-04	5, 20 E-10	15	46	113
1.1	3A5.5 26		VH_N97 W	53, 7	5, 28 E+05	5,26 E-04	9, 95 E-10	15, 5	19	56
1.1	3A5.5 27		VH_N97 P	55, 1	4,21 E+05	4,38 E-04	1, 04 E-09	15, 5	23	68

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1.1	3A5.5 28		VH_W98 A	57, 6	7,26 E+05	1,87 E-04	2, 57 E-10	18,4	53	114
1.1	3A5.5 29		VH_W98 S	53, 9	6, 23 E+05	2,36 E-04	3, 78 E-10	16, 8	42	83
1.1	3A5.5 30		VH_W98 L	54,3	3, 38 E+05	1,72 E-04	5, 08 E-10	14, 9	58	38
1.1	3A5.5 31		VH_W98 Y	56, 3	7, 15 E+05	1, 12 E-04	1, 56 E-10	18, 1	88	143
1.1	3A5.5 32		VH_W98 D	56, 4	2, 17 E+05	8,87 E-05	4,09 E-10	14, 6	112	42
1.1	3A5.5 33		VH_W98 Q	53, 8	5, 01 E+05	1,54 E-04	3, 08 E-10	15, 8	64	51
1.1	3A5.5 34		VH_W98 K	53, 4	3, 46 E+05	8,25 E-04	2, 38 E-09	11,5	12	73
1.1	3A5.5 35		VH_W98 H	53, 8	6, 13 E+05	1,45 E-04	2, 37 E-10	17	68	81
1.1	3A5.5 36		VH_W98 P	56, 1	9, 97 E+04	8, 17 E-04	8, 20 E-09	14,2	12	31
1.1	3A5.5 37		VH_F99 A	54,2	1, 54 E+05	4, 90 E-04	3, 18 E-09	13, 7	20	37
1.1	3A5.5 38		VH_F99 S	53, 3	1, 18 E+05	1,02 E-03	8, 67 E-09	9, 9	10	40
1.1	3A5.5 39		VH_F99 L	54,2	7, 05 E+05	1, 15 E-04	1, 63 E-10	16, 7	86	55
1.1	3A5.5 40		VH_F99 Y	55, 6	5, 27 E+05	9, 13 E-05	1, 73 E-10	14, 9	109	41
1.1	3A5.5 41		VH_F99 D	53, 9	1,46 E+05	1,11 E-02	7, 56 E-08	4,4	1	32
1.1	3A5.5 42		VH_F99 Q	53, 8	9, 93 E+04	1,00 E-03	1,01 E-08	13	10	35
1.1	3A5.5 43		VH_F99 K	54, 6					NB	38
1.1	3A5.5 44		VH_F99 H	54,8	2, 05 E+05	9, 50 E-05	4, 64 E-10	14,5	104	41
1.1	3A5.5 45		VH_F99 W	54,5	5, 35 E+04	4,09 E-04	7, 66 E-09	6	24	29
1.1	3A5.5 46		VH_F99 P	53, 1					NB	43
1.1	3A5.5 47		VH_D10 IA	55, 6	1, 68 E+05	1,40 E-04	8, 37 E-10	14,7	71	69
1.1	3A5.5 48		VH_D10 IS	55, 2	2, 38 E+05	1,11 E-04	4, 67 E-10	15, 3	89	78
1.1	3A5.5 49		VH_D10 1L	53, 6	5, 94 E+05	4,76 E-04	8,01 E-10	16, 3	21	43
1.1	3A5.5 51		VH_D10 1Q	54,5	5, 93 E+05	2,19 E-04	3, 69 E-10	17, 1	45	78
1.2	3A5.0 40	1	Tipo selvagem	50,3	7, 40 E+05	1,33 E-04	1, 80 E-10	16, 3

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1.2	3A5.0 40	2	Tipo selvagem	50,3	7, 14 E+05	8,22 E-05	1, 15 E-10	16, 1
1.2	3A5.0 40	3	Tipo selvagem	50	7, 28 E+05	1,01 E-04	1, 39 E-10	16, 1
1.2	3A5.0 40	4	Tipo selvagem	50,2	7, 32 E+05	1, 10 E-04	1, 50 E-10	16, 2
1.2	3A5.0 40	5	Tipo selvagem	50, 1	7, 27 E+05	9, 36 E-05	1,29 E-10	16, 1
1.2	3A5.0 40	Média	Tipo selvagem	50,2	7,28 E+05	1,04 E-04	1,43 E-10	16,2	100	100
1.2	Isótipo de IgG4			50,8	N/A	N/A	N/A	0	N/A
1.2	3A5.0 40 (purificado)		Tipo selvagem	52, 6	7, 35 E+05	1,11 E-04	1, 51 E-10	16, 6	94
1.2	3A5.5 53		VH_D10 1H	51, 9	4,41 E+05	1, 63 E-04	3, 69 E-10	15, 5	64	66
1.2	3A5.5 55		VH_D10 IP	51,3	7, 54 E+03	8,00 E-04	1,06 E-07	23, 6	13	39
1.2	3A5.5 56		VH_Y10 2A	50, 6	6, 60 E+05	8, 94 E-05	1, 35 E-10	16, 4	116	106
1.2	3A5.5 57		VH_Y10 2S	53, 5	6, 85 E+05	1,11 E-04	1, 61 E-10	17,2	94	135
1.2	3A5.5 58		VH_Y10 2L	53, 2	7, 40 E+05	1, 14 E-04	1, 54 E-10	16, 8	91	51
1.2	3A5.5 59		VH_Y10 2D	52,8	7, 03 E+05	1,41 E-04	2,01 E-10	16, 7	74	51
1.2	3A5.5 60		VH_Y10 2Q	52, 6	7, 14 E+05	1,08 E-04	1, 51 E-10	16, 9	96	87
1.2	3A5.5 61		VH_Y10 2K	55, 9	7, 23 E+05	8,01 E-05	1,11 E-10	17,7	130	90
1.2	3A5.5 62		VH_Y10 2H	50,4	7, 22 E+05	1,00 E-04	1, 39 E-10	16, 4	104	132
1.2	3A5.5 63		VH_Y10 2W	50, 9	7, 51 E+05	1, 16 E-04	1, 54 E-10	16, 8	90	117
1.2	3A5.5 64		VH_Y10 2P	53	6, 44 E+05	1,29 E-04	2,01 E-10	15	81	32
2.1	3A5.0 40	1	Tipo selvagem	68,5	7, 13 E+05	1, 16 E-04	1, 63 E-10	22, 6
2.1	3A5.0 40	Média	Tipo selva-	68,5	7,13 E+05	1,16 E-04	1, 63 E-10	22,6	100	100

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			gem
2.1	Isótipo de IgG4			60,7	N/A	N/A	N/A	1, 6	N/A
2.1	3A5.0 40 (purificado)		Tipo selvag em	75, 6	7, 37 E+05	1,05 E-04	1, 42 E-10	24,3	110
2.1	3A5.0 48		VL_G2 4 A	69	7, 16 E+05	9, 18 E-05	1, 28 E-10	22,7	126	104
2.1	3A5.0 49		VL_G2 4 S	72,5	6, 98 E+05	1,03 E-04	1, 47 E-10	23, 7	113	104
2.1	3A5.0 50		VL_G2 4 L	73, 8	6, 79 E+05	8, 13 E-05	1, 20 E-10	23, 9	143	103
2.1	3A5.0 51		VL_G2 4 Y	61,7	6, 40 E+05	1, 12 E-04	1, 75 E-10	20,3	104	91
2.1	3A5.0 52		VL_G2 4 D	66, 7	7, 16 E+05	9,71 E-05	1, 36 E-10	21, 9	119	104
2.1	3A5.0 53		VL_G2 4 Q	72, 6	6, 99 E+05	9, 84 E-05	1,41 E-10	23, 6	118	95
2.1	3A5.0 54		VL_G2 4 K	74,2	7, 12 E+05	9, 59 E-05	1, 35 E-10	24, 1	121	98
2.1	3A5.0 55		VL_G2 4 H	60, 9	6, 90 E+05	9, 17 E-05	1, 33 E-10	20,2	126	99
2.1	3A5.0 56		VL_G2 4 W	64,4	6,41 E+05	8,06 E-05	1,26 E-10	21, 1	144	111
2.1	3A5.0 57		VL_G2 5 A	69, 9	7, 04 E+05	8,75 E-05	1, 24 E-10	22, 9	133	109
2.1	3A5.0 59		VL_G2 5 L	63, 1	7, 16 E+05	1,04 E-04	1, 45 E-10	21	112	83
2.1	3A5.0 60		VL_G2 5 Y	67,7	7, 05 E+05	8,55 E-05	1,21 E-10	22,2	136	96
2.1	3A5.0 61		VL_G2 5 D	71, 9	7,26 E+05	1,11 E-04	1, 53 E-10	23, 4	105	94
2.1	3A5.0 62		VL_G2 5 Q	73, 2	6, 52 E+05	9, 24 E-05	1, 42 E-10	23, 5	126	94
2.1	3A5.0 64		VL_G2 5 H	60,4	6, 90 E+05	9,21 E-05	1, 33 E-10	20, 1	126	108
2.1	3A5.0 65		VL_G2 5 W	70,8	7, 37 E+05	8, 97 E-05	1, 22 E-10	23, 1	129	81
2.1	3A5.0 66		VL_N2 6 A	76, 8	7, 27 E+05	8,75 E-05	1, 20 E-10	24,7	133	77
2.1	3A5.0 69		VL_N2 6 Y	71,2	6, 79 E+05	8,73 E-05	1, 28 E-10	22, 9	133	100
2.1	3A5.0 70		VL_N2 6 D	62,7	7, 22 E+05	7,87 E-05	1,09 E-10	20,7	147	95
2.1	3A5.0 71		VL_N2 6 Q	67,4	7, 05 E+05	1,08 E-04	1, 53 E-10	22	107	95
2.1	3A5.0 72		VL_N2 6 K	69, 7	7, 04 E+05	1, 17 E-04	1, 66 E-10	22,7	99	99

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2.1	3A5.0 73		VL_N2 6 H	74,8	7, 15 E+05	1,11 E-04	1, 55 E-10	24	105	95
2.1	3A5.0 74		VL_N2 6 W	62, 6	6,41 E+05	9, 82 E-05	1, 53 E-10	20,3	118	87
2.1	3A5.0 75		VL_N2 7 A	62,7	6, 55 E+05	9,29 E-05	1, 42 E-10	20,7	125	120
2.1	3A5.0 76		VL_N2 7 S	71,7	7, 04 E+05	1,09 E-04	1, 55 E-10	23, 2	106	93
2.1	3A5.0 77		VL_N2 7 L	71,7	6, 73 E+05	8, 98 E-05	1, 33 E-10	23, 4	129	102
2.1	3A5.0 78		VL_N2 7 Y	61,5	6, 16 E+05	1,02 E-04	1, 65 E-10	20,3	114	103
2.1	3A5.0 80		VL_N2 7 Q	68,3	6, 52 E+05	1,07 E-04	1, 64 E-10	22, 1	108	91
2.1	3A5.0 81		VL_N2 7 K	71,5	6, 89 E+05	8,84 E-05	1, 28 E-10	23, 2	131	96
2.1	3A5.0 82		VL_N2 7 H	74,7	7,06 E+05	7,85 E-05	1,11 E-10	24, 1	148	90
2.1	3A5.0 84		VL_I28 A	62, 1	6, 71 E+05	6, 20 E-05	9, 24 E-ll	20,3	187	91
2.1	3A5.0 85		VL_I28 S	91, 9	6, 37 E+05	1, 16 E-04	1, 82 E-10	31,3	100	47
2.1	3A5.0 86		VL_I28 L	81,5	6, 02 E+05	1,04 E-04	1, 73 E-10	27,2	112	62
2.1	3A5.0 87		VL_I28 Y	73, 1	7, 07 E+05	8,52 E-05	1, 20 E-10	23, 8	136	93
2.1	3A5.0 88		VL_I28 D	80,3	5, 56 E+05	9, 83 E-05	1, 77 E-10	27, 9	118	40
2.1	3A5.0 89		VL_I28 Q	79, 8	5, 80 E+05	1,03 E-04	1, 77 E-10	27,8	113	54
2.1	3A5.0 93		VL_G2 9 A	68,4	5, 42 E+05	1, 10 E-04	2, 04 E-10	22, 6	105	59
2.1	3A5.0 94		VL_G2 9 S	67, 6	6, 98 E+05	9, 31 E-05	1, 33 E-10	21, 9	119	93
2.2	3A5.0 40	1	Tipo selvagem	52,4	7, 77 E+05	1,05 E-04	1, 35 E-10	17, 9
2.2	3A5.0 40	2	Tipo selvagem	52,7	7,89 E+05	1,09 E-04	1, 38 E-10	17, 9
2.2	3A5.0 40	3	Tipo selvagem	52,7	7, 72 E+05	1,37 E-04	1, 77 E-10	18, 1
2.2	3A5.0 40	Média	Tipo selvagem	52,6	7,79 E+05	1,17 E-04	1,50 E-10	17,9	100	100
2.2	Isótipo de IgG4			56, 6	N/A	N/A	N/A	0,5	N/A
2.2	3A5.0		Tipo	54, 9	7, 93	1,06	1,33	18,7	110

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	40 (purificado)		selva- gem		E+05	E-04	E-10
2.2	3A5.0 95		VL_G2 9 L	55, 4	7, 17 E+05	9, 08 E-05	1, 27 E-10	18,7	122	75
2.2	3A5.0 96		VL_G2 9 Y	56, 7	6, 92 E+05	1,33 E-04	1, 92 E-10	19, 2	83	58
2.2	3A5.0 97		VL_G2 9 D	56, 2	7, 31 E+05	7,19 E-05	9, 84 E-ll	18,7	154	85
2.2	3A5.0 99		VL_G2 9 K	49, 9	7, 18 E+05	9, 08 E-05	1,26 E-10	17,2	122	71
2.2	3A5.1 00		VL_G2 9 H	52	7, 38 E+05	8, 65 E-05	1, 17 E-10	17,7	128	100
2.2	3A5.1 01		VL_G2 9 W	55, 8	7, 59 E+05	9, 40 E-05	1, 24 E-10	18,7	118	114
2.2	3A5.1 02		VL_S30 A	56, 3	6, 85 E+05	1,09 E-04	1, 58 E-10	18,7	102	84
2.2	3A5.1 03		VL_S30 L	49, 5	7, 87 E+05	9, 94 E-05	1,26 E-10	16, 9	112	126
2.2	3A5.1 04		VL_S30 Y	54,7	8, 17 E+05	1,08 E-04	1, 33 E-10	18,5	103	93
2.2	3A5.1 05		VL_S30 D	56, 4	8, 20 E+05	8, 91 E-05	1,09 E-10	18,8	125	119
2.2	3A5.1 06		VL_S30 Q	58,3	7, 22 E+05	9, 10 E-05	1,26 E-10	19, 7	122	78
2.2	3A5.1 07		VL_S30 K	50, 6	7, 85 E+05	7,34 E-05	9, 34 E-ll	17,3	151	102
2.2	3A5.1 13		VL_K31 Y	53, 8	8, 35 E+05	8,73 E-05	1, 05 E-10	18,4	127	99
2.2	3A5.1 14		VL_K31 D	54,5	4,89 E+05	4,73 E-04	9, 65 E-10	17, 9	23	105
2.2	3A5.1 15		VL_K31 Q	57, 9	4, 65 E+05	4, 60 E-04	9, 91 E-10	19	24	85
2.2	3A5.1 16		VL_K31 H	49, 5	5, 52 E+05	2,46 E-04	4,46 E-10	16, 7	45	104
2.2	3A5.1 17		VL_K31 W	52,7	5, 34 E+05	1,33 E-04	2,49 E-10	17,7	83	125
2.2	3A5.1 18		VL_N32 A	55, 8	5, 07 E+05	6, 39 E-04	1,26 E-09	18,3	17	67
2.2	3A5.1 21		VL_N32 Y	56, 1	9, 57 E+05	9, 68 E-05	1,01 E-10	19, 1	115	91
2.2	3A5.1 22		VL_N32 D	49, 8	5, 68 E+05	1,25 E-04	2, 20 E-10	15, 8	89	115
2.2	3A5.1 23		VL_N32 Q	53, 9	8, 85 E+05	1,25 E-04	1,41 E-10	18, 6	89	102
2.2	3A5.1 25		VL_N32 H	56, 4	9, 01 E+05	7,73 E-05	8, 58 E-ll	19, 2	144	90
2.2	3A5.1 26		VL_N32 W	56, 6	6, 35 E+05	9,26 E-05	1,46 E-10	18,8	120	79
2.2	3A5.1 27		VL_V33 A	49, 1	7, 15 E+05	8,05 E-05	1, 13 E-10	16, 6	138	74

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2.2	3A5.1 28		VL_V33 S	51,5	2, 85 E+05	9, 65 E-05	3, 38 E-10	13, 7	115	126
2.2	3A5.1 30		VL_V33 Y	56, 1	7,41 E+05	9, 16 E-05	1, 24 E-10	19	121	68
2.2	3A5.1 31		VL_V33 D	52,4	7, 40 E+05	9, 67 E-05	1, 31 E-10	19, 3	115	40
2.2	3A5.1 32		VL_V33 Q	48,7	6, 61 E+05	1,38 E-04	2,09 E-10	16, 7	80	50
2.2	3A5.1 35		VL_V33 W	48,4	5, 26 E+05	1,04 E-04	1, 99 E-10	18,8	107	24
2.2	3A5.1 37		VL_Y34 S	48,3	6, 96 E+05	9, 88 E-05	1, 42 E-10	19	112	32
2.2	3A5.1 38		VL_Y34 L	49, 4	5, 94 E+05	2,16 E-04	3, 64 E-10	16, 6	51	56
2.2	3A5.1 39		VL_Y34 D	52,8	4, 63 E+05	4, 90 E-04	1,06 E-09	13, 1	23	68
2.2	3A5.1 40		VL_Y34 Q	54,4	7,01 E+05	5, 40 E-04	7,71 E-10	18,2	21	55
2.2	3A5.1 41		VL_Y34 K	56	8, 16 E+05	3, 72 E-04	4, 56 E-10	18,8	30	64
2.2	3A5.1 42		VL_Y34 H	48,8	6, 71 E+05	5, 00 E-04	7,46 E-10	16, 3	22	82
2.2	3A5.1 43		VL_Y34 W	53, 5	6, 98 E+05	2,19 E-03	3, 13 E-09	9, 7	5	58
2.2	3A5.1 65		VL_S52 K	52, 6	5, 32 E+05	9, 30 E-04	1, 75 E-09	16, 6	12	167
2.2	3A5.1 68		VL_D53 A	57,2	1, 20 E+06	2,04 E-03	1,71 E-09	17, 1	5	51
2.2	3A5.1 72		VL_D53 Q	50,3	7, 13 E+05	1,08 E-04	1, 51 E-10	17, 1	103	97
2.2	3A5.1 74		VL_D53 H	53	7, 45 E+05	1,23 E-04	1, 65 E-10	17,7	90	120
2.2	3A5.1 86		VL_P55 S	55, 8	7, 97 E+05	1,08 E-04	1, 35 E-10	18, 6	103	108
2.2	3A5.1 99		VL_S56 K	57,3	7,71 E+05	1, 18 E-04	1, 54 E-10	18,8	94	104
2.2	3A5.2 01		VL_S56 W	49, 6	7,41 E+05	1,24 E-04	1, 67 E-10	17, 1	90	92
2.2	3A5.2 10		VL_Q89 P	53, 5	3, 80 E+05	4,78 E-04	1,26 E-09	18	25	72
2.2	3A5.2 11		VL_V90 A	55, 7	7, 65 E+05	1,06 E-04	1, 39 E-10	18,8	105	78
3.1	3A5.0 40	1	Tipo selvagem	53, 3	7, 72 E+05	1,32 E-04	1,71 E-10	18,2
3.1	3A5.0 40	2	Tipo selvagem	53, 4	7,76 E+05	1, 15 E-04	1, 48 E-10	18, 1
3.1	3A5.0 40	3	Tipo selvagem	53, 3	7, 73 E+05	1,03 E-04	1, 34 E-10	18, 1

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3.1	3A5.0 40	4	Tipo selvagem	54	7, 69 E+05	1, 14 E-04	1,49 E-10	18,5
3.1	3A5.0 40	5	Tipo selvagem	53, 8	7, 84 E+05	1,20 E-04	1, 53 E-10	18,4
3.1	3A5.0 40	Média	Tipo selvagem	53, 6	7,75 E+05	1,17 E-04	1,51 E-10	18,2	100	100
3.1	Isótipo de IgG4			56	N/A	N/A	N/A	0,7	N/A
3.1	3A5.0 40 (purificado)		Tipo selvagem	52,5	8, 07 E+05	1,40 E-04	1, 74 E-10	17, 9	83
3.1	3A5.2 13		VL_V90 L	53, 7	7,49 E+05	1,55 E-04	2,06 E-10	18,2	75	58
3.1	3A5.2 14		VL_V90 Y	54	6, 50 E+05	2, 92 E-04	4,49 E-10	18	40	85
3.1	3A5.2 15		VL_V90 D	52, 9	5, 54 E+05	4,19 E-04	7, 56 E-10	19, 9	28	27
3.1	3A5.2 16		VL_V90 Q	48, 6	5, 93 E+05	1,88 E-04	3, 18 E-10	16, 3	62	74
3.1	3A5.2 17		VL_V90 K	44,3	6, 34 E+05	8,30 E-05	1, 31 E-10	17	141	48
3.1	3A5.2 18		VL_V90 H	47,5	5, 90 E+05	2, 99 E-04	5, 07 E-10	17, 6	39	60
3.1	3A5.2 19		VL_V90 W	53, 4	5, 69 E+05	6, 64 E-04	1, 17 E-09	17, 9	18	77
3.1	3A5.2 20		VL_V90 P	47,7	2, 72 E+05	7, 61 E-03	2,79 E-08	1,7	2	76
3.1	3A5.2 21		VL_W91 A	51,8	3, 05 E+05	7,08 E-03	2, 32 E-08	2,4	2	79
3.1	3A5.2 23		VL_W91 L	53, 6	2, 59 E+06	2,55 E-02	9, 83 E-09	7,7	0	98
3.1	3A5.2 24		VL_W91 Y	45, 1	8, 82 E+05	9, 03 E-04	1, 02 E-09	15, 8	13	64
3.1	3A5.2 26		VL_W91 Q	51, 1	5, 38 E+06	3,79 E-02	7, 05 E-09	6, 8	0	75
3.1	3A5.2 27		VL_W91 K	51,8					NB	71
3.1	3A5.2 28		VL_W91 H	50, 9	1, 53 E+06	7,24 E-03	4, 74 E-09	9	2	62
3.1	3A5.2 29		VL_W91 P	39, 4	4, 02 E+05	7,40 E-03	1, 84 E-08	1,4	2	36
3.1	3A5.2 30		VL_D92 A	51,2	5, 63 E+05	9, 94 E-05	1, 77 E-10	16, 5	118	113
3.1	3A5.2 31		VL_D92 S	53, 2	7, 67 E+05	9,46 E-05	1, 23 E-10	17,5	124	113

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3.1	3A5.2 32		VL_D92 L	54,3	9, 17 E+05	7,59 E-05	8, 27 E-ll	18	154	130
3.1	3A5.2 33		VL_D92 Y	47,7	1,11 E+06	1, 10 E-04	9, 92 E-ll	16, 4	106	72
3.1	3A5.2 34		VL_D92 Q	50, 9	5, 25 E+05	1,39 E-04	2, 64 E-10	15, 7	84	194
3.1	3A5.2 35		VL_D92 K	54,7	7, 63 E+05	8,84 E-05	1, 16 E-10	18	132	92
3.1	3A5.2 36		VL_D92 H	54,3	7, 93 E+05	1,09 E-04	1, 37 E-10	17, 6	107	122
3.1	3A5.2 37		VL_D92 W	0,5					NE	NE
3.1	3A5.2 38		VL_D92 P	46, 8	5,21 E+05	1,43 E-04	2, 75 E-10	16, 1	82	63
3.1	3A5.2 39		VL_S93 A	52,2	3, 12 E+06	3, 65 E-03	1, 17 E-09	15, 9	3	112
3.1	3A5.2 40		VL_S93 L	54,8	2, 39 E+07	2,45 E-01	1, 03 E-08	6, 5	0	124
3.1	3A5.2 41		VL_S93 Y	50, 1	6, 20 E+05	7,48 E-03	1,21 E-08	2	2	118
3.1	3A5.2 42		VL_S93 D	51, 6	5, 18 E+05	1, 68 E-02	3, 25 E-08	2, 9	1	73
3.1	3A5.2 43		VL_S93 Q	54,4	1, 90 E+06	1,51 E-02	7, 95 E-09	8,2	1	111
3.1	3A5.2 44		VL_S93 K	55, 5					NB	162
3.1	3A5.2 45		VL_S93 H	49, 7	2, 92 E+06	2,23 E-02	7, 64 E-09	7,3	1	133
3.1	3A5.2 46		VL_S93 W	52,8	3, 27 E+05	4,33 E-03	1, 33 E-08	0,8	3	115
3.1	3A5.2 47		VL_S93 P	53, 8	6, 94 E+05	5, 33 E-02	7, 68 E-08	1,7	0	112
3.1	3A5.2 48		VL_S94 A	56, 1	8, 15 E+05	1,22 E-04	1, 50 E-10	19, 1	96	101
3.1	3A5.2 49		VL_S94 L	49, 7	7,81 E+05	5, 00 E-04	6,41 E-10	17, 1	23	90
3.1	3A5.2 53		VL_S94 K	53	6, 74 E+05	1,48 E-04	2, 20 E-10	17, 9	79	109
3.1	3A5.2 54		VL_S94 H	53, 7	6, 24 E+05	1,51 E-04	2, 42 E-10	18, 1	77	104
3.1	3A5.2 56		VL_S94 P	49, 7	6, 97 E+05	1,27 E-04	1, 82 E-10	16, 7	92	139
3.1	3A5.2 57		VL_S95 A	52, 1	7, 34 E+05	1, 19 E-04	1, 62 E-10	17,7	98	99
3.1	3A5.2 58		VL_S95 L	54	7, 73 E+05	1, 13 E-04	1, 47 E-10	18,3	104	99
3.1	3A5.2 59		VL_S95 Y	55, 7	8, 35 E+05	1,07 E-04	1, 28 E-10	18,7	109	83
3.1	3A5.2 60		VL_S95 D	49, 2	6, 07 E+05	1,25 E-04	2, 07 E-10	16, 5	94	109
3.1	3A5.2 61		VL_S95 Q	48, 6	7, 87 E+05	9, 19 E-05	1, 17 E-10	17,8	127	62

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3.1	3A5.2 62		VL_S95 K	53, 1	7, 99 E+05	1,01 E-04	1,26 E-10	18,2	116	118
3.1	3A5.2 63		VL_S95 H	55, 4	7, 83 E+05	1,00 E-04	1, 28 E-10	18,7	117	101
3.1	3A5.2 64		VL_S95 W	49	7, 95 E+05	1,27 E-04	1, 60 E-10	16, 5	92	87
3.1	3A5.2 65		VL_S95 P	52,7	6, 45 E+05	5, 55 E-03	8, 61 E-09	7, 1	2	147
3.1	3A5.2 66		VL_D95 aA	53, 7	5, 78 E+06	8,07 E-03	1, 40 E-09	10,4	1	109
3.1	3A5.2 67		VL_D95 aS	55, 3	4, 53 E+05	1,21 E-03	2, 68 E-09	16, 7	10	101
3.1	3A5.2 68		VL_D95 cLL	48,5	9, 19 E+06	1,35 E-02	1, 47 E-09	8,7	1	71
3.1	3A5.2 69		VL_D95 aY	51,8	1, 77 E+06	6, 74 E-03	3, 80 E-09	8	2	95
3.1	3A5.2 70		VL_D95 aQ	53, 6	5, 26 E+06	7,11 E-03	1, 35 E-09	11,4	2	110
3.1	3A5.2 71		VL_D95 aK	53, 8	3, 92 E+05	3, 83 E-02	9, 77 E-08	2	0	70
3.1	3A5.2 72		VL_D95 aH	49, 7	2, 56 E+06	4, 90 E-03	1, 92 E-09	10, 1	2	188
3.1	3A5.2 73		VL_D95 aW	53, 1	1, 27 E+06	1,47 E-02	1, 15 E-08	7, 1	1	94
3.1	3A5.2 74		VL_D95 aP	54, 6	1, 17 E+06	3, 05 E-03	2, 61 E-09	9, 8	4	150
3.1	3A5.2 76		VL_H95 bS	52, 1	8, 47 E+05	7,33 E-05	8, 66 E-ll	19, 6	160	61
3.1	3A5.2 81		VL_H95 bK	45, 5	7, 08 E+05	9, 58 E-05	1, 35 E-10	16, 3	122	64
3.1	3A5.3 07		VH_G2 6 Y	48, 1	8, 73 E+05	1,02 E-04	1, 17 E-10	18,3	115	60
3.1	3A5.3 21		VH_G2 7 W	55	7, 64 E+05	5, 59 E-04	7, 31 E-10	18,4	21	97
3.1	3A5.3 35		VH_I29 Q	37, 9	5, 64 E+05	3, 90 E-04	6, 92 E-10	14, 9	30	37
3.1	3A5.3 43		VH_S30 Q	51, 9	7, 55 E+05	1,06 E-04	1, 40 E-10	17,7	110	121
3.1	3A5.3 44		VH_S30 K	53, 9	7,41 E+05	1,39 E-04	1, 88 E-10	18	84	156
3.1	3A5.3 45		VH_S30 H	54,8	7, 34 E+05	1,46 E-04	1, 99 E-10	18,7	80	77
3.1	3A5.3 49		VH_N31 L	47, 1	7, 69 E+05	7, 13 E-04	9, 27 E-10	16, 3	16	69
3.1	3A5.3 55		VH_N31 W	45, 3	8, 52 E+05	4,80 E-04	5, 63 E-10	17,3	24	59
3.1	3A5.3 59		VH_G32 Y	53, 7	3, 28 E+06	4,30 E-03	1, 31 E-09	15, 5	3	90
3.1	3A5.3 60		VH_G32 D	54,2	1, 05 E+06	6, 78 E-03	6, 44 E-09	8, 1	2	105
3.1	3A5.3 61		VH_G32 Q	49, 5	3, 98 E+06	6, 22 E-03	1, 56 E-09	11,8	2	133

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3.1	3A5.3 62		VH_G32 K	52, 6	6, 07 E+05	2,20 E-03	3, 62 E-09	7, 6	5	171
3.1	3A5.3 63		VH_G32 H	55, 4	1,81 E+06	3,01 E-03	1, 66 E-09	15, 3	4	114
3.1	3A5.3 64		VH_G32 W	52,3	1,46 E+07	1,27 E-02	8, 65 E-10	13, 5	1	66
3.1	3A5.3 65		VH_G33 A	48,7	6, 97 E+05	9, 24 E-05	1, 33 E-10	16, 6	127	116
3.1	3A5.3 66		VH_G33 S	53	8, 56 E+05	2, 68 E-03	3, 14 E-09	8,3	4	117
3.1	3A5.3 67		VH_G33 L	54,2	8, 03 E+05	3, 05 E-04	3, 79 E-10	17, 9	38	82
3.1	3A5.3 68		VH_G33 Y	55, 4	3, 97 E+06	4,08 E-03	1, 03 E-09	13, 4	3	107
3.2	3A5.0 40	1	Tipo selvag em	54,7	6, 75 E+05	9,46 E-05	1, 40 E-10	19
3.2	3A5.0 40	2	Tipo selvag em	55, 2	6, 82 E+05	7,26 E-05	1, 07 E-10	19
3.2	3A5.0 40	3	Tipo selvag em	55, 7	7, 17 E+05	9, 30 E-05	1, 30 E-10	19, 3
3.2	3A5.0 40	4	Tipo selvag em	55, 3	7, 08 E+05	8,82 E-05	1, 25 E-10	19, 1
3.2	3A5.0 40	5	Tipo selvag em	55, 2	6, 95 E+05	1,05 E-04	1, 51 E-10	19, 2
3.2	3A5.0 40	Média	Tipo selvagem	55,2	6, 95 E+05	9,07 E-05	1,31 E-10	19,1	100	100
3.2	Isótipo de IgG4			55, 8	N/A	N/A	N/A	0	N/A
3.2	3A5.0 40 (purificado)		Tipo selvagem	54,5	7, 12 E+05	8,25 E-05	1, 16 E-10	1, 85 E+01	110
3.2	3A5.3 69		VH_G33 D	52,4	9, 85 E+05	2,46 E-03	2, 50 E-09	9, 4	4	277
3.2	3A5.3 70		VH_G33 Q	54,5	5, 33 E+05	1,07 E-03	2, 00 E-09	17,2	8	279
3.2	3A5.3 71		VH_G33 K	58,5	2, 08 E+06	2,02 E-03	9, 72 E-10	14, 1	4	350
3.2	3A5.3 72		VH_G33 H	51,5	1, 45 E+06	2, 67 E-03	1, 83 E-09	14,4	3	273
3.2	3A5.3 73		VH_G33 W	52,4	6, 71 E+05	1,32 E-03	1, 96 E-09	15, 9	7	172

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 71/163

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3.2	3A5.3 74		VH_Y34 A	56, 4	5, 91 E+05	1,27 E-04	2,16 E-10	19, 2	71	162
3.2	3A5.3 75		VH_Y34 S	56, 4	6, 23 E+05	1,24 E-04	2, 00 E-10	19, 1	73	159
3.2	3A5.3 76		VH_Y34 L	50	5, 79 E+05	1, 60 E-04	2, 77 E-10	17,2	57	160
3.2	3A5.3 77		VH_Y34 D	54,7	5, 40 E+05	6, 04 E-04	1, 12 E-09	18, 1	15	103
3.2	3A5.3 78		VH_Y34 Q	54,4	5, 98 E+05	1,51 E-04	2, 53 E-10	18,5	60	165
3.2	3A5.3 79		VH_Y34 K	56, 6	6, 17 E+05	4, 91 E-04	7, 96 E-10	19, 1	18	407
3.2	3A5.3 80		VH_Y34 H	49, 8	6, 40 E+05	7,06 E-04	1, 10 E-09	16, 7	13	223
3.2	3A5.3 82		VH_Y35 A	52,8	2, 48 E+05	2,46 E-03	9, 91 E-09	0, 9	4	289
3.2	3A5.3 83		VH_Y35 S	55, 8	3, 34 E+05	8,50 E-03	2, 54 E-08	1, 9	1	129
3.2	3A5.3 84		VH_Y35 L	57	5, 98 E+05	1,42 E-03	2, 37 E-09	17,5	6	190
3.2	3A5.3 85		VH_Y35 D	48,5	2, 75 E+06	6, 13 E-03	2, 23 E-09	8, 1	1	87
3.2	3A5.3 86		VH_Y35 Q	51,8	1, 18 E+07	2,72 E-01	2, 31 E-08	5, 4	0	127
3.2	3A5.3 87		VH_Y35 K	56, 2					NB	382
3.2	3A5.3 88		VH_Y35 H	58	3, 40 E+05	9, 25 E-03	2, 72 E-08	3, 3	1	195
3.2	3A5.3 89		VH_Y35 W	50	3, 65 E+06	5,41 E-03	1, 48 E-09	8,8	2	225
3.2	3A5.3 90		VH_W35 aA	47	6, 84 E+05	1,74 E-03	2, 55 E-09	15, 4	5	37
3.2	3A5.3 92		VH_W35 cLL	55	4, 59 E+05	1, 14 E-03	2,49 E-09	17, 1	8	100
3.2	3A5.3 93		VH_W35 aY	49, 1	6, 34 E+05	1,87 E-04	2, 94 E-10	16, 7	49	104
3.2	3A5.3 94		VH_W35 aD	0,7					NE	NE
3.2	3A5.3 95		VH_W35 aQ	50,4	5, 46 E+05	8,47 E-04	1, 55 E-09	18,8	11	34
3.2	3A5.3 97		VH_W35 aH	39, 6	5, 07 E+05	2,44 E-04	4, 82 E-10	15, 8	37	53
3.2	3A5.3 99		VH_S35 bL	46	1, 08 E+05	2,86 E-04	2, 64 E-09	14, 1	32	39
3.2	3A5.4 00		VH_S35 bY	51,7	4, 43 E+05	7,06 E-03	1, 59 E-08	1,8	1	88
3.2	3A5.4 02		VH_S35 bQ	38,8	1, 84 E+05	5, 15 E-04	2, 80 E-09	13, 6	18	45
3.2	3A5.4 04		VH_S35 bH	48,8	6, 18 E+05	1,88 E-03	3, 05 E-09	13, 3	5	75
3.2	3A5.4 05		VH_S35 bW	49, 6	2, 93 E+05	7,19 E-03	2, 45 E-08	0,7	1	50

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 72/163

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3.2	3A5.4 06		VH_Y50 A	50, 6	4,79 E+05	5, 88 E-04	1, 23 E-09	16, 1	15	268
3.2	3A5.4 07		VH_Y50 S	56, 1	4, 95 E+05	3, 64 E-04	7, 34 E-10	17,5	25	327
3.2	3A5.4 08		VH_Y50 L	57	4, 31 E+05	3, 22 E-04	7,46 E-10	17,3	28	122
3.2	3A5.4 09		VH_Y50 D	56, 9	7, 63 E+05	1,45 E-03	1, 90 E-09	16	6	169
3.2	3A5.4 10		VH_Y50 Q	50, 9	5, 95 E+05	3, 69 E-04	6, 20 E-10	17, 1	25	241
3.2	3A5.4 11		VH_Y50 K	53, 5	5, 51 E+05	4,47 E-04	8, 11 E-10	17,5	20	135
3.2	3A5.4 12		VH_Y50 H	55, 5	6, 72 E+05	7,88 E-04	1, 17 E-09	18,2	12	300
3.2	3A5.4 13		VH_Y50 W	57,2	6, 67 E+05	1, 61 E-03	2,41 E-09	16, 9	6	131
3.2	3A5.4 14		VH_I51 A	51, 9	7,29 E+05	1, 13 E-04	1, 56 E-10	17,7	80	244
3.2	3A5.4 15		VH_I51 S	54,2	7, 38 E+05	1, 15 E-04	1, 56 E-10	18, 6	79	130
3.2	3A5.4 16		VH_I51 L	54, 6	6, 62 E+05	1,39 E-04	2, 10 E-10	19	65	87
3.2	3A5.4 17		VH_I51 Y	57,2	5, 42 E+05	7,77 E-03	1, 43 E-08	7, 9	1	106
3.2	3A5.4 18		VH_I51 D	40,4	5, 15 E+05	6, 36 E-04	1, 23 E-09	15, 8	14	48
3.2	3A5.4 19		VH_I51 Q	51, 6	6, 26 E+05	5, 02 E-04	8,01 E-10	17,7	18	95
3.2	3A5.4 20		VH_I51 K	53, 3	7, 42 E+05	1, 16 E-03	1, 57 E-09	17,3	8	124
3.2	3A5.4 21		VH_I51 H	54, 1	7,46 E+06	8,34 E-03	1, 12 E-09	13, 4	1	93
3.2	3A5.4 22		VH_I51 W	49, 7	3, 18 E+05	3, 31 E-03	1, 04 E-08	0, 9	3	139
3.2	3A5.4 23		VH_Y52 A	54, 9	1,49 E+07	1,08 E-02	7, 23 E-10	11,8	1	304
3.2	3A5.4 24		VH_Y52 S	57,3	6, 79 E+05	1,29 E-03	1,89 E-09	11,7	7	325
3.2	3A5.4 25		VH_Y52 L	59, 4	1, 90 E+06	8,83 E-03	4, 66 E-09	10, 1	1	209
3.2	3A5.4 26		VH_Y52 D	51,7					NB	333
3.2	3A5.4 27		VH_Y52 Q	55, 5	1,86 E+06	8,86 E-03	4,76 E-09	9, 2	1	264
3.2	3A5.4 28		VH_Y52 K	58,4					NB	348
3.2	3A5.4 29		VH_Y52 H	61,5	5, 62 E+05	2, 91 E-04	5, 17 E-10	20, 6	31	286
3.2	3A5.4 30		VH_Y52 W	48, 6	6, 79 E+05	1,26 E-03	1,86 E-09	15, 9	7	102
3.2	3A5.4 31		VH_Y53 A	53	6, 79 E+05	5,21 E-04	7, 67 E-10	17, 9	17	249

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 73/163

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3.2	3A5.4 32		VH_Y53 S	55	6, 94 E+05	1,57 E-04	2,26 E-10	18,8	58	226
3.2	3A5.4 33		VH_Y53 L	57,3	6, 02 E+05	4,43 E-04	7, 36 E-10	19, 1	20	102
3.2	3A5.4 34		VH_Y53 D	50,8	4, 80 E+05	5, 94 E-04	1, 24 E-09	16, 6	15	182
3.2	3A5.4 35		VH_Y53 Q	53, 4	6, 27 E+05	4,41 E-04	7, 03 E-10	17, 9	21	206
3.2	3A5.4 36		VH_Y53 K	56, 7	6, 17 E+05	9, 61 E-04	1, 56 E-09	18, 1	9	232
3.2	3A5.4 37		VH_Y53 H	57	6, 71 E+05	1, 91 E-04	2, 85 E-10	19, 1	47	206
3.2	3A5.4 38		VH_Y53 W	49, 2	6, 91 E+05	2,35 E-04	3, 40 E-10	16, 8	39	152
3.2	3A5.4 39		VH_S54 A	53, 1	6, 98 E+05	1,54 E-04	2, 20 E-10	18, 1	59	112
3.2	3A5.4 40		VH_S54 L	53, 4	9, 17 E+06	8, 95 E-03	9, 76 E-10	13, 6	1	158
3.2	3A5.4 41		VH_S54 Y	55	1, 57 E+06	2, 17 E-03	1, 38 E-09	16, 5	4	92
3.2	3A5.4 42		VH_S54 D	51,4	8,06 E+05	2,02 E-03	2, 50 E-09	14,4	4	200
3.2	3A5.4 43		VH_S54 Q	54	6, 04 E+05	1,07 E-03	1, 77 E-09	17, 6	8	150
3.2	3A5.4 44		VH_S54 K	55, 6	2, 65 E+06	3, 55 E-03	1, 34 E-09	15, 5	3	201
3.2	3A5.4 45		VH_S54 H	57,5	7, 10 E+05	4,59 E-04	6, 46 E-10	19, 3	20	97
3.2	3A5.4 46		VH_S54 W	46, 7	7, 24 E+05	8, 68 E-04	1, 20 E-09	14,8	10	112
3.2	3A5.4 47		VH_G55 A	45, 7	6, 76 E+05	1,05 E-04	1, 55 E-10	17, 1	86	68
3.2	3A5.4 48		VH_G55 S	48,4	7, 30 E+05	1,24 E-04	1, 70 E-10	18	73	72
3.2	3A5.4 49		VH_G55 L	47,7	6, 14 E+05	6, 30 E-04	1, 03 E-09	17,7	14	66
3.2	3A5.4 50		VH_G55 Y	38, 6	6, 88 E+05	7,06 E-04	1, 03 E-09	14,2	13	49
4.1	3A5.0 40	1	Tipo selvagem	82,7	1, 00 E+06	1, 16 E-04	1, 16 E-10	24, 9
4.1	3A5.0 40	2	Tipo selvagem	82,7	1, 02 E+06	1,07 E-04	1, 04 E-10	25, 1
4.1	3A5.0 40	3	Tipo selvagem	85, 2	1, 03 E+06	1, 12 E-04	1,09 E-10	25, 1
4.1	3A5.0 40	4	Tipo selvagem	85, 1	1,01 E+06	1,06 E-04	1, 05 E-10	25, 3

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 74/163

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4.1	3A5.0 40	5	Tipo selvagem	83, 5	9, 91 E+05	9,29 E-05	9, 37 E-ll	25, 3
4.1	3A5.0 40	Média	Tipo selvagem	83,84	1,01 E+06	1,07 E-04	1,06 E-10	25,1 4	100	100
4.1	Isótipo de IgG4			61,4	N/A	N/A	N/A	0	N/A
4.1	3A5.0 40 (purificado)		Tipo selvagem	84,2	1,06 E+06	1,09 E-04	1, 03 E-10	23, 8	98
4.1	3A5.1 33		VL_V33 K	52,7	7, 83 E+05	1,34 E-04	1,71 E-10	15, 9	80	15
4.1	3A5.2 22		VL_W91 S	62,8	1, 38 E+06	2,85 E-03	2,06 E-09	12,5	4	14
4.1	3A5.3 91		VH_W35 aS	68,4	6, 35 E+05	1, 19 E-03	1, 87 E-09	15, 6	9	22
4.1	3A5.3 96		VH_W35 aK	65, 9	7,21 E+05	2,08 E-03	2, 88 E-09	9, 4	5	26
4.1	3A5.4 01		VH_S35 bD	53, 1	5, 96 E+05	1, 19 E-04	2,01 E-10	14,5	90	16
4.1	3A5.4 03		VH_S35 bK	53, 1	1, 83 E+05	1,23 E-02	6, 68 E-08	2,8	1	12
4.1	3A5.2 75		VL_H95 bA	69, 7	5, 47 E+05	1, 62 E-04	2, 95 E-10	18	66	24
4.1	3A5.2 82		VL_H95 bW	77,5	7, 18 E+05	1,07 E-04	1,49 E-10	21, 1	100	152
4.1	3A5.2 83		VL_H95 bP	63, 4	5, 90 E+05	4,22 E-02	7, 15 E-08	3, 6	0	154
4.1	3A5.2 85		VL_V96 S	74,4	9, 02 E+05	2,01 E-04	2, 23 E-10	19, 9	53	21
4.1	3A5.2 87		VL_V96 Y	92,4	7, 33 E+06	1,50 E-03	2, 05 E-10	17, 6	7	62
4.1	3A5.2 88		VL_V96 D	68,8	7, 32 E+05	1,30 E-03	1, 78 E-09	16, 8	8	9.5
4.1	3A5.2 89		VL_V96 Q	77, 1	1, 62 E+06	6, 54 E-04	4, 03 E-10	20,4	16	25
4.1	3A5.2 90		VL_V96 K	64, 6	8, 08 E+05	2,32 E-03	2, 87 E-09	13, 1	5	15
4.1	3A5.2 91		VL_V96 H	5, 2					NB	45
4.1	3A5.2 92		VL_V96 W	66, 4	3, 83 E+07	2,01 E-02	5, 26 E-10	10, 6	1	19
4.1	3A5.2 93		VL_V96 P	81,5	8, 54 E+05	5, 22 E-04	6, 11 E-10	23, 4	20	106
4.1	3A5.1 10		VL_K31 A	74	7,01 E+05	1,86 E-04	2, 65 E-10	21, 1	58	122
4.1	3A5.1		VL_K31	79,2	7, 10	1,36	1, 92	23, 6	79	109

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 75/163

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	11		S		E + 05	E-04	E-10
4.1	3A5.1 12		VL_K31 L	79, 9	6, 30 E+05	3, 91 E-04	6,21 E-10	22,3	27	125
4.1	3A5.1 34		VL_V33 H	5, 8					NB	52
4.1	3A5.1 36		VL_Y34 A	59, 9	1, 05 E+06	3, 45 E-04	3, 28 E-10	17,2	31	170
4.1	3A5.2 06		VL_Q89 D	71, 6	5, 68 E+05	8,76 E-05	1, 54 E-10	18, 6	122	12
4.1	3A5.2 25		VL_W91 D	114,2	6, 31 E+05	1,05 E-02	1, 66 E-08	3, 7	1	74
4.1	3A5.2 50		VL_S94 Y	74, 6	8, 14 E+05	3, 48 E-04	4, 27 E-10	20,3	31	147
4.1	3A5.2 52		VL_S94 Q	63, 4	8, 25 E+05	1, 65 E-04	2, 00 E-10	18	65	136
4.2	3A5.0 40	1	Tipo selvagem	50,4	6, 96 E+05	1,03 E-04	1, 48 E-10	16, 2
4.2	3A5.0 40	2	Tipo selvagem	50,5	7, 10 E+05	1,06 E-04	1,49 E-10	16
4.2	3A5.0 40	Média	Tipo selvagem	50,4	7,03 E+05	1,05 E-04	1,49 E-10	16,1	100	100
4.2	Isótipo de IgG4			52,5	N/A	N/A	N/A		N/A
4.2	3A5.0 40 (purificado)		Tipo selvagem	48,7	7,21 E+05	6, 63 E-05	9, 20 E-ll	16, 5	150
4.2	3A5.4 51		VH_G55 D	33, 1	4, 54 E+05	2,50 E-04	5, 50 E-10	9, 9	42	39
4.2	3A5.4 52		VH_G55 Q	37,2	6, 09 E+05	1, 94 E-04	3, 18 E-10	11,7	54	42
4.2	3A5.4 53		VH_G55 K	43, 8	5, 49 E+05	2,07 E-04	3, 76 E-10	12,4	50	51
4.2	3A5.4 54		VH_G55 H	38,2	5, 92 E+05	1,81 E-04	3, 05 E-10	11,7	58	41
4.2	3A5.4 55		VH_G55 W	31,2	6, 17 E+05	6, 65 E-04	1, 08 E-09	10	16	33
4.2	3A5.4 56		VH_S56 A	49, 7	6, 44 E+05	1, 18 E-04	1, 84 E-10	15, 5	89	104
4.2	3A5.4 57		VH_S56 L	51, 1	5, 49 E+05	8, 63 E-05	1, 57 E-10	15, 6	121	101
4.2	3A5.4 58		VH_S56 Y	47, 6	5, 44 E+05	1, 92 E-04	3, 53 E-10	14,2	54	85
4.2	3A5.4 59		VH_S56 D	49	5, 05 E+05	4,57 E-04	9, 06 E-10	15	23	84

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 76/163

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4.2	3A5.4 60		VH_S56 Q	50,2	5, 90 E+05	9, 69 E-05	1, 64 E-10	15, 8	108	106
4.2	3A5.4 61		VH_S56 K	52, 9	6, 11 E+05	7,84 E-05	1, 28 E-10	16, 6	133	119
4.2	3A5.4 63		VH_S56 W	47,7	4, 72 E+05	2,85 E-04	6, 03 E-10	13, 9	37	98
4.2	3A5.4 64		VH_T57 A	50	7, 50 E+05	1,26 E-04	1, 67 E-10	16, 1	83	104
4.2	3A5.4 65		VH_T57 S	48,5	7,29 E+05	1,26 E-04	1, 73 E-10	15, 6	83	69
4.2	3A5.4 67		VH_T57 Y	44	7, 66 E+05	9, 50 E-05	1, 24 E-10	13, 8	110	49
4.2	3A5.4 68		VH_T57 D	42,5	7, 02 E+05	9,89 E-05	1,41 E-10	14	106	46
4.2	3A5.4 69		VH_T57 Q	45, 1	7, 24 E+05	1,07 E-04	1, 48 E-10	14,2	98	58
4.2	3A5.4 70		VH_T57 K	46, 5	7, 28 E+05	1,21 E-04	1, 66 E-10	14, 6	86	61
4.2	3A5.4 71		VH_T57 H	43, 8	7, 34 E+05	1,09 E-04	1,49 E-10	13, 9	96	50
4.2	3A5.4 72		VH_T57 W	39, 2	7, 57 E+05	1,34 E-04	1, 77 E-10	13, 3	78	40
4.2	3A5.4 73		VH_Y58 A	48, 1	1, 56 E+06	2,86 E-03	1, 83 E-09	13	4	95
4.2	3A5.4 74		VH_Y58 S	50,7	2,76 E+06	3, 84 E-03	1, 39 E-09	13, 7	3	101
4.2	3A5.4 75		VH_Y58 L	48, 6	5, 58 E+06	5, 88 E-03	1, 05 E-09	8,3	2	70
4.2	3A5.4 76		VH_Y58 D	42,4	1,89 E+07	1, 68 E-02	8, 88 E-10	7,3	1	47
4.2	3A5.4 77		VH_Y58 Q	46, 6	6, 62 E+05	1,33 E-03	2, 02 E-09	13, 9	8	75
4.2	3A5.4 78		VH_Y58 K	49, 2	5, 75 E+05	1,31 E-03	2, 28 E-09	14, 6	8	102
4.2	3A5.4 79		VH_Y58 H	50, 6	6, 68 E+05	5, 75 E-04	8, 62 E-10	15, 8	18	91
4.2	3A5.4 80		VH_Y58 W	48, 1	6, 58 E+05	5, 53 E-04	8,41 E-10	14,7	19	79
4.2	3A5.4 81		VH_A93 S	45, 3	7, 18 E+05	9, 31 E-05	1, 30 E-10	13, 9	112	58
4.2	3A5.4 82		VH_A93 L	13	2, 55 E+05	2,02 E-04	7, 90 E-10	5, 2	52	17
4.2	3A5.4 84		VH_A93 D	0,5					NE	NE
4.2	3A5.4 85		VH_A93 Q	40,4	6, 48 E+05	1,00 E-04	1, 54 E-10	12,7	105	44
4.2	3A5.4 86		VH_A93 K	17					NE	NE
4.2	3A5.4 87		VH_A93 H	28,8					NE	NE
4.2	3A5.4 89		VH_A93 P	6, 5					NE	NE

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 77/163

71/138

4.2	3A5.4 91		VH_S94 L	37,4	5, 33 E+05	8, 11 E-04	1, 52 E-09	12,5	13	40
4.2	3A5.4 92		VH_S94 Y	30,3	3, 27 E+05	1, 10 E-03	3, 37 E-09	9, 7	10	30
4.2	3A5.4 93		VH_S94 D	4, 6					NE	NE
4.2	3A5.4 94		VH_S94 Q	42	6, 74 E+05	6, 37 E-04	9, 45 E-10	13, 6	16	49
4.2	3A5.4 96		VH_S94 H	47, 1	2,19 E+06	4, 62 E-03	2,11 E-09	6, 5	2	72
4.2	3A5.5 01		VH_L95 Y	49	4, 17 E+06	5, 88 E-03	1,41 E-09	12,4	2	96
4.2	3A5.5 02		VH_L95 D	21,2					NB	22
4.2	3A5.5 06		VH_L95 W	46, 4	6, 20 E+06	7,36 E-03	1, 19 E-09	8,4	1	68
4.2	3A5.5 11		VH_G96 Y	45, 5					NB	59
4.2	3A5.5 19		VH_N97 S	48	5, 61 E+05	2,27 E-04	4, 04 E-10	14, 9	46	80
4.2	3A5.5 52		VH_D10 1K	47, 1	6, 10 E+05	3, 63 E-04	5, 95 E-10	14, 6	29	67
4.2	3A5.3 58		VH_G32 L	48,4	2,01 E+06	3, 83 E-03	1, 91 E-09	12,3	3	75
4.2	3A5.3 81		VH_Y34 W	42,4	7,09 E+05	2, 18 E-04	3, 07 E-10	14	48	47
4.2	3A5.3 98		VH_S35 bA	47	6, 82 E+05	1,02 E-04	1, 50 E-10	14,7	102	88
4.2	3A5.4 88		VH_A93 W	14,2					NB	17
4.2	3A5.4 90		VH_S94 A	49, 6	6, 78 E+05	8,70 E-05	1, 28 E-10	15, 1	120	104
4.2	3A5.4 99		VH_L95 A	43, 4	3, 09 E+06	7,48 E-03	2, 42 E-09	10,4	1	51
4.2	3A5.5 08		VH_G96 A	47, 1	5, 77 E+05	1,25 E-04	2, 17 E-10	14,8	84	75
4.2	3A5.5 22		VH_N97 D	49	1, 00 E+06	1, 92 E-04	1, 91 E-10	15, 5	54	91
4.2	3A5.5 54		VH_D10 1W	32,7	1, 38 E+05	6, 18 E-04	4, 47 E-09	8,3	17	33
4.2	3A5.1 44		VL_D50 A	47, 1	5, 29 E+05	1, 67 E-04	3, 15 E-10	14,5	63	77
4.2	3A5.1 45		VL_D50 S	48,2	5, 74 E+05	1,05 E-04	1, 83 E-10	15, 1	100	90
4.2	3A5.1 46		VL_D50 L	48	5, 92 E+05	2,59 E-04	4, 38 E-10	15	40	86
4.2	3A5.1 47		VL_D50 Y	48	5, 36 E+05	1, 95 E-04	3, 63 E-10	15	54	78
4.2	3A5.1 48		VL_D50 Q	47	5, 99 E+05	1, 93 E-04	3, 22 E-10	15	54	70
4.2	3A5.1 49		VL_D50 K	45, 8	6, 00 E+05	1, 61 E-04	2, 68 E-10	13, 2	65	74

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 78/163

72/138

4.2	3A5.1 50		VL_D50 H	48,2	4, 07 E+05	1, 68 E-04	4, 14 E-10	14,3	62	95
4.2	3A5.1 51		VL_D50 W	48	5, 36 E+05	2,35 E-04	4, 38 E-10	15	44	74
4.2	3A5.1 52		VL_D51 A	47	6, 34 E+05	1,34 E-04	2,11 E-10	14, 6	78	88
4.2	3A5.1 53		VL_D51 S	46, 1	8, 53 E+05	1, 60 E-04	1, 87 E-10	14, 1	65	72
4.2	3A5.1 54		VL_D51 L	47,8	6, 22 E+05	1, 63 E-04	2, 63 E-10	14,3	64	83
4.2	3A5.1 55		VL_D51 Y	48, 1	6, 14 E+05	1,78 E-04	2, 90 E-10	13, 7	59	75
4.2	3A5.1 56		VL_D51 Q	47,8	6, 48 E+05	1, 15 E-04	1, 77 E-10	15	91	85
4.2	3A5.1 57		VL_D51 K	45, 2	5, 85 E+05	1,20 E-04	2, 05 E-10	13, 2	87	68
4.2	3A5.1 58		VL_D51 H	48,3	6, 15 E+05	1,82 E-04	2, 95 E-10	14,7	57	86
4.2	3A5.1 59		VL_D51 W	45, 7	4, 93 E+05	1, 96 E-04	3, 98 E-10	14, 1	53	57
4.2	3A5.1 60		VL_S52 A	47,7	6, 61 E+05	1,11 E-04	1, 68 E-10	15, 2	94	80
4.2	3A5.1 61		VL_S52 L	47,8	6, 87 E+05	5, 74 E-05	8, 36 E-ll	15	182	106
4.2	3A5.1 62		VL_S52 Y	49	7,26 E+05	9, 91 E-05	1, 36 E-10	15, 8	105	114
5.1	3A5.0 40	1	Tipo selvagem	49, 9	6, 56 E+05	1,22 E-04	1,86 E-10	14,5
5.1	3A5.0 40	2	Tipo selvagem	48,5	6, 43 E+05	1, 12 E-04	1, 75 E-10	14,4
5.1	3A5.0 40	3	Tipo selvagem	48, 1	6, 67 E+05	1,25 E-04	1, 87 E-10	13, 7
5.1	3A5.0 40	4	Tipo selvagem	50,4	6, 63 E+05	1, 17 E-04	1, 77 E-10	14,4
5.1	3A5.0 40	Média	Tipo selvagem	49,2	6,57 E+05	1,19 E-04	1,81 E-10	14,3	100	100
5.1	Isótipo de IgG4			51,2	N/A	N/A	N/A	0, 1	N/A
5.1	3A5.0 40 (purificado)		Tipo selvagem	48, 9	7, 07 E+05	1,08 E-04	1, 53 E-10	15, 6	110
5.1	3A5.3		VH_I29	48, 1	4,79	1, 12	2,34	13, 7	11	24

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 79/163

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	37		Η		E + 05	E-03	E-09
5.1	3A5.3 39		VH_S30 A	50,7	6, 79 E+05	1, 12 E-04	1, 65 E-10	16, 3	106	6
5.1	3A5.3 46		VH_S30 W	53, 4	6, 42 E+05	1,32 E-04	2,06 E-10	16, 7	90	69
5.1	3A5.0 58		VL_G2 5 S	47, 6	6, 93 E+05	1,08 E-04	1, 56 E-10	15, 7	110	43
5.1	3A5.0 90		VL_I28 K	49, 1	5, 73 E+05	1,04 E-04	1,81 E-10	16, 2	114	51
5.1	3A5.0 92		VL_I28 W	47	6, 13 E+05	1,30 E-04	2, 12 E-10	15, 5	92	35
5.1	3A5.2 12		VL_V90 S	46, 1	5, 71 E+05	3, 11 E-04	5, 45 E-10	14, 6	38	4.8
5.1	3A5.2 51		VL_S94 D	52, 9	2, 77 E+05	4, 98 E-04	1,79 E-09	15, 5	24	7
5.1	3A5.2 55		VL_S94 W	48,5	5, 54 E+05	2,86 E-04	5, 16 E-10	14,7	42	19
5.1	3A5.2 99		VL_V97 Q	48,5	5, 86 E+05	9, 90 E-05	1, 69 E-10	15, 5	120	71
5.1	3A5.4 62		VH_S56 H	50	6, 35 E+05	1, 16 E-04	1, 83 E-10	15, 9	103	41
5.1	3A5.4 66		VH_T57 L	44, 9	6, 39 E+05	1,02 E-04	1, 59 E-10	14,2	117	14
5.1	3A5.4 83		VH_A93 Y	38,2					NB	8
5.1	3A5.5 03		VH_L95 Q	48,5	4, 04 E+05	6, 18 E-04	1, 53 E-09	14,4	19	18
5.1	3A5.1 63		VL_S52 D	49, 3	6, 65 E+05	1,01 E-04	1, 52 E-10	16, 4	118	177
5.1	3A5.1 64		VL_S52 Q	49, 6	6, 57 E+05	1, 17 E-04	1, 78 E-10	15, 8	102	9.8
5.1	3A5.1 66		VL_S52 H	51, 6	6, 71 E+05	1,11 E-04	1, 66 E-10	16, 9	107	167
5.1	3A5.1 67		VL_S52 W	52,3	7,19 E+05	1,11 E-04	1, 55 E-10	17,2	107	166
5.1	3A5.1 69		VL_D53 S	50, 6	6, 38 E+05	6, 35 E-05	9, 97 E-ll	16, 5	187	151
5.1	3A5.1 70		VL_D53 L	48,8	6, 87 E+05	9, 50 E-05	1, 38 E-10	15, 8	125	143
5.1	3A5.1 71		VL_D53 Y	51	6, 79 E+05	1,09 E-04	1, 60 E-10	16, 1	109	208
5.1	3A5.1 73		VL_D53 K	52, 6	6, 35 E+05	1,09 E-04	1,71 E-10	16, 7	109	175
5.1	3A5.1 75		VL_D53 W	50	5, 88 E+05	9, 74 E-05	1, 66 E-10	15, 7	122	178
5.1	3A5.1 76		VL_R54 A	50,4	6, 51 E+05	9, 75 E-05	1, 50 E-10	16, 8	122	138
5.1	3A5.1 77		VL_R54 S	50, 1	6, 45 E+05	1,11 E-04	1, 72 E-10	16, 8	107	131
5.1	3A5.1 78		VL_R54 L	51,5	6, 60 E+05	1,01 E-04	1, 53 E-10	17	118	135
5.1	3A5.1		VL_R54	49,2	6, 66	1,24	1,86	16,4	96	138

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 80/163

74/138

	79		Y		E + 05	E-04	E-10
5.1	3A5.1 80		VL_R54 D	49, 5	6, 79 E+05	9,89 E-05	1,46 E-10	16, 6	120	128
5.1	3A5.1 81		VL_R54 Q	51,3	6, 58 E+05	9, 55 E-05	1, 45 E-10	17	125	148
5.1	3A5.1 82		VL_R54 K	51,5	6, 50 E+05	1, 17 E-04	1,79 E-10	17	102	165
5.1	3A5.1 83		VL_R54 H	49, 1	6, 47 E+05	8,44 E-05	1, 30 E-10	16, 3	141	137
5.1	3A5.1 84		VL_R54 W	50	6, 14 E+05	1,22 E-04	1, 99 E-10	15, 8	98	7.5
5.1	3A5.1 85		VL_P55 A	51, 9	6, 87 E+05	1,34 E-04	1, 95 E-10	16, 5	89	8.9
5.1	3A5.1 87		VL_P55 L	49, 6	7, 00 E+05	9, 58 E-05	1, 37 E-10	16, 3	124	153
5.1	3A5.1 88		VL_P55 Y	49, 2	6, 61 E+05	1, 19 E-04	1, 80 E-10	16, 4	100	127
5.1	3A5.1 89		VL_P55 D	51, 1	6, 48 E+05	9,21 E-05	1, 42 E-10	16, 7	129	155
5.1	3A5.1 90		VL_P55 Q	48,8	6, 55 E+05	1,08 E-04	1, 64 E-10	16, 4	110	151
5.1	3A5.1 91		VL_P55 K	49, 3	6, 38 E+05	1,05 E-04	1, 64 E-10	16, 3	113	137
5.1	3A5.1 92		VL_P55 H	51,5	6, 51 E+05	1, 16 E-04	1, 78 E-10	16, 7	103	176
5.1	3A5.1 93		VL_P55 W	51,5	6,41 E+05	8,80 E-05	1, 37 E-10	16, 8	135	160
5.1	3A5.1 94		VL_S56 A	49, 8	6,41 E+05	1,06 E-04	1, 65 E-10	16, 1	112	143
5.1	3A5.1 95		VL_S56 L	49, 6	6, 85 E+05	1,06 E-04	1, 54 E-10	16, 3	112	131
5.1	3A5.1 96		VL_S56 Y	50,2	6, 89 E+05	1, 14 E-04	1, 66 E-10	16, 5	104	123
5.1	3A5.1 97		VL_S56 D	50, 1	6, 87 E+05	1, 19 E-04	1, 73 E-10	16, 5	100	153
5.1	3A5.1 98		VL_S56 Q	49, 6	6, 86 E+05	8,85 E-05	1,29 E-10	16, 4	134	131
5.1	3A5.2 00		VL_S56 H	49, 3	6, 83 E+05	1, 15 E-04	1, 68 E-10	16, 3	103	138
5.1	3A5.2 07		VL_Q89 K	49, 9	6, 84 E+05	1,27 E-04	1,86 E-10	16, 4	94	136
5.1	3A5.2 09		VL_Q89 W	48, 6	5, 57 E+05	1,27 E-04	2, 28 E-10	15, 7	94	72
5.1	3A5.2 78		VL_H95 bY	49, 9	7, 65 E+05	7, 90 E-05	1, 03 E-10	16, 3	151	139
5.1	3A5.2 79		VL_H95 bD	49, 6	7,01 E+05	7,84 E-05	1, 12 E-10	16, 5	152	210
5.1	3A5.2 80		VL_H95 bQ	50,3	7, 47 E+05	1,51 E-04	2, 02 E-10	16, 6	79	133
5.1	3A5.2 84		VL_V96 A	48,2	7, 24 E+05	1,88 E-04	2, 60 E-10	15, 9	63	65
5.1	3A5.2		VL_V96	48,4	6, 50	1, 94	2, 98	15, 9	61	79

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75/138

	86		L		E + 05	E-04	E-10
5.1	3A5.2 94		VL_V97 A	48, 6	6, 27 E+05	7, 68 E-05	1, 23 E-10	16	155	133
5.1	3A5.2 95		VL_V97 S	48, 6	6, 12 E+05	1,07 E-04	1, 74 E-10	15, 9	111	110
5.1	3A5.2 96		VL_V97 L	48	6, 71 E+05	9, 60 E-05	1, 43 E-10	15, 9	124	95
5.1	3A5.2 97		VL_V97 Y	48,4	6, 72 E+05	1,07 E-04	1, 60 E-10	16, 2	111	90
5.1	3A5.2 98		VL_V97 D	47,7	5, 94 E+05	1,30 E-04	2, 18 E-10	15, 8	92	96
5.1	3A5.3 00		VL_V97 K	50, 1	5, 88 E+05	1, 18 E-04	2,01 E-10	15, 8	101	4.7
5.1	3A5.3 01		VL_V97 H	49, 4	6, 34 E+05	8,79 E-05	1, 39 E-10	16, 1	135	168
5.1	3A5.0 63		VL_G2 5 K	49	6, 90 E+05	7,21 E-05	1, 05 E-10	16, 2	165	90
5.1	3A5.0 67		VL_N2 6 S	49	6, 52 E+05	1, 10 E-04	1, 69 E-10	16	108	162
5.1	3A5.0 83		VL_N2 7 W	49, 6	6, 03 E+05	1,29 E-04	2, 14 E-10	16, 4	92	148
5.1	3A5.0 91		VL_I28 H	47,7	5, 71 E+05	1,30 E-04	2, 27 E-10	15, 7	92	75
5.1	3A5.0 98		VL_G2 9 Q	49, 7	6, 53 E+05	1,05 E-04	1, 61 E-10	16, 2	113	139
5.1	3A5.1 08		VL_S30 H	49, 4	6, 95 E+05	1,02 E-04	1,46 E-10	16, 2	117	145
5.1	3A5.1 09		VL_S30 W	48	6, 77 E+05	1,35 E-04	2, 00 E-10	15, 5	88	112
5.1	3A5.1 19		VL_N32 S	48, 6	8, 35 E+05	1,08 E-04	1,29 E-10	16, 3	110	98
5.1	3A5.1 20		VL_N32 L	49, 2	8, 72 E+05	1,03 E-04	1, 18 E-10	16, 4	116	119
5.1	3A5.1 29		VL_V33 L	48,8	5, 80 E+05	1,42 E-04	2, 45 E-10	15, 8	84	99
5.1	3A5.2 77		VL_H95 bL	50,4	6, 79 E+05	1,40 E-04	2,06 E-10	16, 6	85	180
5.1	3A5.3 02		VL_V97 W	47,7	7, 18 E+05	7,59 E-05	1,06 E-10	15, 9	157	73
5.1	3A5.3 03		VL_V97 P	48,7	6, 99 E+05	1,21 E-04	1, 73 E-10	16, 2	98	21

[105] Essa tabela contém um resumo dos dados da cinética e da titulação calculados para cada sobrenadante de anticorpo testado. Anticorpos variantes com uma kd menor (off-rate mais lenta) do que o anticorpo 3A5.040 parental possuem um valor do % da kd de 3A5.040 >100% e aqueles com uma kd maior (off-rate mais rápida) um valor <100%. Anticorpos

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76/138 variantes com uma titulação maior do que anticorpo 3A5.040 parental possuem um valor do % da titulação de 3A5.040 >100 e aqueles com uma titulação menor, um valor <100%. N/A, nonaplicável. NB, Sem ligação. NE, Sem expressão.

Tabela 4. Determinação da cinética de ligação à IL-5 da variante do anticorpo 3A5.040 purificada por Biacore.

Corrida #	ID do anti-corpo	Réplicas	Substituição de aminoácido	Nível de captura	ka (1/ Ms)	kd (1/ s)	KD (M)	Rmáx (RU)	% da kd de 3A5. 040
6	3A5.040 (batelada 6)	1	Tipo selvagem	48, 6	1, 44 E+06	2,32 E-04	1, 61 E-10	16
6	3A5.040 (batelada 6)	2	Tipo selvagem	49, 4	1, 44 E+06	2, 14 E-04	1,48 E-10	15, 7
6	3A5.040 (batelada 6)	3	Tipo selvagem	49, 2	1, 36 E+06	2, 61 E-04	1, 93 E-10	16
6	3A5.040 (batelada 6)	4	Tipo selvagem	49, 2	1, 36 E+06	2,46 E-04	1,80 E-10	16
6	3A5.040 (batelada 6)	5	Tipo selvagem	49, 3	1, 47 E+06	2,52 E-04	1,71 E-10	16, 1
6	3A5.040 (batelada 6)	6	Tipo selvagem	49, 2	1, 45 E+06	2, 13 E-04	1,47 E-10	16
6	3A5.040 (batelada 6)	7	Tipo selvagem	49, 2	1,41 E+06	2,29 E-04	1, 63 E-10	16, 1
6	3A5.040 (batelada 6)	8	Tipo selvagem	50, 9	1, 40 E+06	2,45 E-04	1,75 E-10	16, 8
6	3A5.040 (bate-lada 6)	Média	Tipo selvagem	49,3	1,42 E+06	2,37 E-04	1, 67 E-10	16,1	100
6	IgG4 iso	1		48, 8	N/A	N/A	N/A	0
6	IgG4 iso	2		48, 9	N/A	N/A	N/A	0
6	IgG4 iso	3		48, 8	N/A	N/A	N/A	0
6	Isótipo de IgG4	Média		49, 8	N/A	N/A	N/A	0	N/A
6	3A5.040 (purificado)	1	Tipo selvagem	49, 6	1, 43 E+06	2,39 E-04	1, 68 E-10	16, 1
6	3A5.040 (purifica-	2	Tipo selvagem	49, 8	1, 48 E+06	2,85 E-04	1, 93 E-10	16, 2

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	do)
6	3A5.040 (purificado)	3	Tipo selvagem	49, 7	1, 45 E+06	2,32 E-04	1, 60 E-10	16, 1
6	3A5.040 (purificado)	Média	Tipo selvagem	49, 7	1, 45 E+06	2,52 E-04	1,74 E-10	16,1	94
6	3A5.237	1	VL_D92W	47, 9	1,57 E + 06	2, 67 E-04	1,70 E-10	15, 5
6	3A5.237	2	VL_D92W	48,7	1,55 E + 06	2,58 E-04	1, 66 E-10	15, 6
6	3A5.237	3	VL_D92W	48,5	1,52 E + 06	2, 12 E-04	1,40 E-10	15, 7
6	3A5.237	Média	VL_D92W	48,3	1,55 E+06	2,46 E-04	1,59 E-10	15, 6	96
6	3A5.161	1	VL_S52L	49,4	1,47 E + 06	2, 62 E-04	1,78 E-10	16, 2
6	3A5.161	2	VL_S52L	49, 9	1,43 E + 06	2,41 E-04	1, 69 E-10	16, 2
6	3A5.161	3	VL_S52L	49, 9	1,40 E + 06	2,19 E-04	1,57 E-10	16, 4
6	3A5.161	Média	VL_S52L	49, 7	1,43 E+06	2,41 E-04	1, 68 E-10	16,2	99
6	3A5.169	1	VL_D53S	48, 9	1,23 E + 06	2,43 E-04	1, 98 E-10	15, 6
6	3A5.169	2	VL_D53S	49, 5	1,26 E + 06	2,44 E-04	1, 93 E-10	15, 9
6	3A5.169	3	VL_D53S	49,7	1,23 E + 06	2,46 E-04	1, 99 E-10	16, 1
6	3A5.169	Média	VL_D53S	49,3	1,24 E+06	2,44 E-04	1, 97 E-10	15,8	97
6	3A5.183	1	VL_R54H	47, 9	1,44 E + 06	2,32 E-04	1, 61 E-10	15, 6
6	3A5.183	2	VL_R54H	48,2	1,44 E + 06	2,50 E-04	1,74 E-10	15, 8
6	3A5.183	3	VL_R54H	48,4	1,39 E + 06	2,04 E-04	1,47 E-10	15, 8
6	3A5.183	Média	VL_R54H	48,1	1,42 E+06	2,29 E-04	1, 61 E-10	15,7	104
6	3A5.193	1	VL_P55W	48,5	1,32 E + 06	2,32 E-04	1,76 E-10	15, 7
6	3A5.193	2	VL_P55W	48,3	1,34 E + 06	2,51 E-04	1,88 E-10	15, 3
6	3A5.193	3	VL_P55W	48,7	1,29 E + 06	2,57 E-04	1, 99 E-10	15, 6
6	3A5.193	Média	VL_P55W	48,5	1,32 E+06	2,47 E-04	1,88 E-10	15,5	96
6	3A5.198	1	VL_S56Q	49,1	1,42 E + 06	2,43 E-04	1,71 E-10	16
6	3A5.198	2	VL_S56Q	49	1,49 E + 06	2, 90 E-04	1, 95 E-10	15, 7
6	3A5.198	3	VL_S56Q	49, 3	1,42	2,38	1, 68	15, 9

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					E+06	E-04	E-10
6	3A5.198	Média	VL_S56Q	49,1	1, 44 E+06	2,57 E-04	1,78 E-10	15,8	92
6	3A5.278	1	VL_H95bY	48,3	1,55 E + 06	2,53 E-04	1, 63 E-10	15, 9
6	3A5.278	2	VL_H95bY	48,2	1,62 E + 06	2,43 E-04	1,49 E-10	15, 7
6	3A5.278	3	VL_H95bY	48,5	1,57 E + 06	2, 14 E-04	1,36 E-10	15, 8
6	3A5.278	Média	VL_H95bY	48,3	1,58 E+06	2,37 E-04	1,49 E-10	15,8	100
6	3A5.279	1	VL_H95bD	50	1,58 E + 06	2,50 E-04	1,58 E-10	16, 3
6	3A5.279	2	VL_H95bD	49,7	1,61 E + 06	2,42 E-04	1,50 E-10	16, 1
6	3A5.279	3	VL_H95bD	50	1,61 E + 06	2,43 E-04	1,51 E-10	16, 4
6	3A5.279	Média	VL_H95bD	49, 9	1, 60 E+06	2,45 E-04	1,53 E-10	16,2	97
6	3A5.294	1	VL_V97A	49,1	1,31 E + 06	2,54 E-04	1, 94 E-10	15, 9
6	3A5.294	2	VL_V97A	48, 6	1,31 E + 06	2, 13 E-04	1, 62 E-10	15, 7
6	3A5.294	3	VL_V97A	48, 6	1,37 E + 06	2, 15 E-04	1,57 E-10	15, 6
6	3A5.294	Média	VL_V97A	48,7	1,33 E+06	2,27 E-04	1,71 E-10	15,7	104
6	3A5.301	1	VL_V97H	48,4	1,51 E + 06	2,76 E-04	1,83 E-10	15, 8
6	3A5.301	2	VL_V97H	48, 1	1,58 E + 06	1,06 E-04	6,71 E-ll	15, 6
6	3A5.301	3	VL_V97H	47,8	1,60 E + 06	2,45 E-04	1,53 E-10	15, 4
6	3A5.301	Média	VL_V97H	48,1	1,56 E+06	2,09 E-04	1,34 E-10	15, 6	114
6	3A5.063	1	VL_G25K	48	1,37 E + 06	2, 61 E-04	1, 90 E-10	15, 7
6	3A5.063	2	VL_G25K	48, 1	1,36 E + 06	2,70 E-04	1, 99 E-10	15, 5
6	3A5.063	3	VL_G25K	47,8	1,42 E + 06	2,50 E-04	1,76 E-10	15, 3
6	3A5.063	Média	VL_G25K	47,9	1,38 E+06	2,60 E-04	1,88 E-10	15,5	91
6	3A5.302	1	VL_V97W	48, 9	1,65 E + 06	2,35 E-04	1,42 E-10	16
6	3A5.302	2	VL_V97W	48, 9	1,69 E + 06	2,35 E-04	1,39 E-10	15, 8
6	3A5.302	3	VL_V97W	48,5	1,66 E + 06	2,40 E-04	1,45 E-10	15, 7
6	3A5.302	Média	VL_V97W	48,7	1, 67 E+06	2,37 E-04	1,42 E-10	15,8	100
6	3A5.202	1	VL_Q89A	48, 9	1,09	2,49	2,29	15, 8

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					E+06	E-04	E-10
6	3A5.202	2	VL_Q89A	48,7	1,07 E + 06	1,89 E-04	1,77 E-10	15, 6
6	3A5.202	3	VL_Q89A	48,8	1,09 E + 06	2,44 E-04	2,25 E-10	15, 7
6	3A5.202	Média	VL_Q89A	48,8	1,08 E+06	2,27 E-04	2,10 E-10	15,7	104
6	3A5.203	1	VL_Q89S	49	1,28 E + 06	2,82 E-04	2,20 E-10	15, 9
6	3A5.203	2	VL_Q89S	48, 6	1,28 E + 06	2,26 E-04	1,76 E-10	15, 6
6	3A5.203	3	VL_Q89S	48, 9	1,27 E + 06	2,36 E-04	1,86 E-10	15, 7
6	3A5.203	Média	VL_Q89S	48,8	1,28 E+06	2,48 E-04	1, 94 E-10	15,7	96
6	3A5.204	1	VL_Q89L	49, 9	5,01 E + 05	2,20 E-04	4,38 E-10	14,4
6	3A5.204	2	VL_Q89L	49, 9	5, 02 E + 05	1,88 E-04	3, 74 E-10	14,2
6	3A5.204	3	VL_Q89L	49, 9	4,95 E + 05	2,11 E-04	4,26 E-10	14,3
6	3A5.204	Média	VL_Q89L	49, 9	4, 99 E+05	2,06 E-04	4,13 E-10	14,3	115
6	3A5.205	1	VL_Q89Y	48,4	9, 87 E + 05	2,42 E-04	2,45 E-10	15, 5
6	3A5.205	2	VL_Q89Y	48, 6	1,04 E + 06	2,37 E-04	2,28 E-10	15, 6
6	3A5.205	3	VL_Q89Y	48,5	1,05 E + 06	2, 60 E-04	2,47 E-10	15, 6
6	3A5.205	Média	VL_Q89Y	48,5	1,03 E+06	2,46 E-04	2,40 E-10	15,5	96
6	3A5.208	1	VL_Q89H	51	9,41 E + 05	2,53 E-04	2, 68 E-10	16
6	3A5.208	2	VL_Q89H	51, 1	9, 45 E + 05	2,52 E-04	2, 66 E-10	16, 1
6	3A5.208	3	VL_Q89H	51	9, 54 E + 05	2,88 E-04	3, 02 E-10	16
6	3A5.208	Média	VL_Q89H	51	9, 47 E+05	2,64 E-04	2,79 E-10	16	90
6	3A5.550	1	VH_D101Y	48,3	1,16 E + 06	4,40 E-04	3,81 E-10	15, 5
6	3A5.550	2	VH_D101Y	48,5	1,17 E + 06	4,54 E-04	3, 87 E-10	15, 7
6	3A5.550	3	VH_D101Y	48,3	1,19 E + 06	4,86 E-04	4, 10 E-10	15, 5
6	3A5.550	Média	VH_D101Y	48,3	1,17 E+06	4,60 E-04	3, 93 E-10	15,5	51
6	3A5.512	1	VH_G96D	50,4	1,70 E + 07	8, 63 E-03	5, 07 E-10	13, 7
6	3A5.512	2	VH_G96D	50,7	1,88 E + 07	9, 87 E-03	5,26 E-10	13, 8
6	3A5.512	3	VH_G96D	50,5	1,28	1,52	1, 19	12,5

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 86/163

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					E+06	E-03	E-09
6	3A5.512	Média	VH_G96D	50,5	1,24 E+07	6, 67 E-03	7,41 E-10	13,3	3.5
6	3A5.124	1	VL_N32K	50, 9	9, 94 E + 05	2,46 E-04	2,47 E-10	16, 3
6	3A5.124	2	VL_N32K	51,2	1,05 E + 06	2, 62 E-04	2,49 E-10	16, 5
6	3A5.124	3	VL_N32K	50,7	1,02 E + 06	2,28 E-04	2,24 E-10	16, 3
6	3A5.124	Média	VL_N32K	50, 9	1,02 E+06	2,45 E-04	2,40 E-10	16,3	97
7	3A5.040 (batelada 7)	1	Tipo selvagem	51,2	1, 37 E+06	2,30 E-04	1, 68 E-10	16, 4
7	3A5.040 (batelada 7)	2	Tipo selvagem	51, 6	1, 43 E+06	2, 15 E-04	1,50 E-10	16, 6
7	3A5.040 (batelada 7)	3	Tipo selvagem	51, 6	1, 42 E+06	2,84 E-04	2,00 E-10	16, 6
7	3A5.040 (batelada 7)	Média	Tipo selvagem	51,4	1,41 E+06	2,43 E-04	1,73 E-10	16,5	100
7	Isótipo de IgG4	1		48,8	N/A	N/A	N/A	0
7	Isótipo de IgG4	2		48, 9	N/A	N/A	N/A	0
7	Isótipo de IgG4	3		48,8	N/A	N/A	N/A	0
7	Isótipo de IgG4	Média		49, 8	N/A	N/A	N/A	0	N/A
7	3A5.040 (purificado)	1	Tipo selvagem	49, 6	1, 43 E+06	2,39 E-04	1, 68 E-10	16, 1
7	3A5.040 (purificado)	2	Tipo selvagem	49, 8	1, 48 E+06	2,85 E-04	1, 93 E-10	16, 2
7	3A5.040 (purificado)	3	Tipo selvagem	49, 7	1, 45 E+06	2,32 E-04	1, 60 E-10	16, 1
7	3A5.040 (purificado)	Média	Tipo selvagem	49, 7	1, 45 E+06	2,52 E-04	1,74 E-10	16,1	94
7	3A5.068	1	VL_N26L	52,3	1,29 E + 06	2, 68 E-04	2,07 E-10	16, 8
7	3A5.068	2	VL_N26L	53	1,39 E + 06	2,08 E-04	1,50 E-10	17, 1
7	3A5.068	3	VL_N26L	53, 1	1,43 E + 06	2, 69 E-04	1,88 E-10	17,2
7	3A5.068	Média	VL_N26L	52,8	1,37 E+06	2,48 E-04	1,82 E-10	17	98

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 87/163

81/138

7	3A5.079	1	VL_N27D	49, 3	1,22 E + 06	2,29 E-04	1,88 E-10	16, 1
7	3A5.079	2	VL_N27D	50	1,29 E + 06	2,39 E-04	1,85 E-10	16, 4
7	3A5.079	3	VL_N27D	49, 9	1,25 E + 06	2, 63 E-04	2,09 E-10	16, 2
7	3A5.079	Média	VL_N27D	49, 7	1,25 E+06	2,44 E-04	1, 94 E-10	16,2	100

[106] Essa tabela contém um resumo dos dados cinéticos calculados para cada anticorpo purificado testado. Anticorpos variantes com uma kd menor (off-rate mais lenta) do que o anticorpo 3A5.040 parental possuem um valor do % da kd de 3A5.040 >100% e aqueles com uma kd maior (off-rate mais rápida) um valor <100%. Corridas 6 e 7 foram transfectados separadamente, mas corridos na mesma batelada de Biacore, e, portanto, usam mesmo isótipo e controles de 3A5.040 (purificado). N/A: non-aplicável.

Tabela 5. Rendimento de expressão de proteína purificada para variantes do anticorpo 3A5.040 selecionadas.

Corr. #	ID do anticorpo	Substituição de aminoácido	Rendimento % de 3A5.040 parental purificado
6	3A5.040	Sequência parental	100
6	3A5.237	VL_D92W	89
6	3A5.161	VL_S52L	160
6	3A5.169	VL_D53S	173
6	3A5.183	VL_R54H	172
6	3A5.193	VL_P55W	187
6	3A5.198	VL_S56Q	205
6	3A5.278	VL_H95bY	210
6	3A5.279	VL_H95bD	143
6	3A5.294	VL_V97A	140
6	3A5.301	VL_V97H	151
6	3A5.063	VL_G25K	110
6	3A5.302	VL_V97W	156
6	3A5.202	VL_Q89A	64
6	3A5.203	VL_Q89S	129
6	3A5.204	VL_Q89L	61
6	3A5.205	VL_Q89Y	41

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 88/163

82/138

6	3A5.208	VL_Q89H	54
6	3A5.550	VH_D101Y	88
6	3A5.512	VH_G96D	72
6	3A5.124	VL_N32K	128
7	3A5.040	Parental Sequência	100
7	3A5.068	VL_N26L	96
7	3A5.079	VL_N27D	99

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 89/163

83/138

Tabela 6. Matriz de Varredura de CDR1 de VH.

SC

A

S

L

Y

D

Q

K

H

W

P

[107] Resumo de diferença na titulação da variante do anticorpo 3A5.040 e kd para variantes de CDR1 de VH (definição de AbM). Numeração de aminoácidos de Kabat e aminoácidos de 3A5.040 parental são mostrados na fileira superior. Identidades de residues mutados estão listadas na coluna da esquerda. O valor mais à esquerda em cada célula é a titulação proporcional de cada variante vs. 3A5.040 parental (>1 = titulação maior, <1 = titulação menor), enquanto o valor da direita é a kd proporcional (>1 = kd menor, <1 = kd maior) de cada variante vs. 3A5.040 parental. Variantes não produzidas marcadas em cinza. NB, sem ligação. NE, sem expressão.

(sequência de CDR1 de VH revelada como residues 26-37 do ID. DE SEQ. N°: 73).

Tabela 7. Matriz de Varredura de CDR2 de VH.

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 90/163

84/138

	CDR2 de VH
	50	51	52	53	54	55	56	57	58
SC	Y	I	Y	Y	S	G	S	T	Y
A	2,7 0,2	2,4 0,8	3 0	2,5 0,2	1,1 0,6	0,7 0,9	1 0,9	1 0,8	1 0
S	3,3 0,2	1,3 0,8	3,3 0,1	2,3 0,6		0,7 0,7		0,7 0,8	1 0
L	1,2 0,3	0,9 0,7	2,1 0	1 0,2		0,7 0,1		0,1 1,2	0,7 0
Y		1,1 0			0,9 0	0,5 0,1	0,9 0,5	0,5 1,1
D		0,5 0,1			2 0	0,4 0,4	0,8 0,2	0,5 1,1
Q	2,4 0,2	1 0,2	2,6 0	2,1 0,2	1,5 0,1	0,4 0,5	1,1 1,1	0,6 1	0,8 0,1
K	1,4 0,2	1,2 0,1	3,5 NB	2,3 0,1	2 0	0,5 0,5	1,2 1,3	0,6 0,9	1 0,1
H	3 0,1	0,9 0	2,9 0,3	2,1 0,5	1 0,2	0,4 0,6	0,4 1	0,5 1	0,9 0,2
W	1,3 0,1	1,4 0	1 0,1	1,5 0,4	1,1 0,1	0,3 0,2	1 0,4	0,4 0,8	0,8 0,2
P

[108] Resumo de diferença na titulação da variante do anticorpo 3A5.040 e kd para variantes de CDR2 de VH (definição de AbM). Numeração de aminoácidos de Kabat e aminoácidos de 3A5.040 parental são mostrados na fileira superior. Identidades de residues mutados estão listadas na coluna da esquerda. O valor mais à esquerda em cada célula é a titulação proporcional de cada variante vs. 3A5.040 parental (>1 = titulação maior, <1 = titulação menor), enquanto o valor da direita é a kd proporcional (>1 = kd menor, <1 = kd maior) de cada variante vs. 3A5.040 parental. Variantes não produzidas marcadas em cinza. NB, sem ligação. NE, sem expressão.

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 91/163

85/138 (sequência de CDR2 de VH revelada como residues 52-60 do ID. DE SEQ. N°: 73).

Tabela 8. Matriz de Varredura de CDR3 de VH.

CDR3 de VH

		93			94
SC		A			S
A						1,2
S	0, 6		1,1
L	0,2		0,5	0,4		0,1
Y	0,1		NB	0,3		0,1
D	NE		NE	NE		NE
Q	0,4		1	0,5		0,2
K	0,2		NB	1,3		0,3
H	0,3		NB	0,7		0
W	0,2		NB	0,4		0,0
P	0,1		NB	0,2		0,8

0,5

NE

0,2

0,2

0,7

0, 9

0,7

0,4

101

102

NE

NB

0,2

0,1

NB

0,8

0,8

0, 6

1,1

0,5

0,4

0,2

0,7

0,7

1,1

1,2 o, 9

0, 6

0, 6

0,7

0, 6

1,5

1,2

0, 6

0,2

0,5

NB

0,2

0,1

0,2

0,8

0,8

0, 9

1,3

1,7

1,1

0, 6

0,7

0,5

0,8

0,4

0,4

0,1

0,8

0, 9

1,4

0, 9

0, 9

0,3

0,5

0,7

0,5

0,2

0,2

0,4

1,4

0,4

0,5

0,7

0,8

0, 6

0, 9

1,1

0, 6

0,1

0,7

0,3 0,1

0, 6

0, 9

0,4

0,2

0,5

0, 9

0,4

1,1

0,9 0,5

0,3

0,5

0,7

0,4

0,4

0,4

0,3

0,4

0,1

0,8

0,5

0, 9

NB

0,2

NB

0,7

0,7

0,3

0,4

0,3

0, 6

0,2

0,1

0, 9

1,3

1,3

1,2

0,3

0, 9

0,8 [109] Resumo de diferença na titulação da variante do anticorpo 3A5.040 e kd para variantes de

CDR3 de

VH (definição de AbM) e posições de Kabat de aminoácido 93 e 94. Numeração de aminoácidos

Identidades de Kabat e aminoácidos de 3A5.040 parental são mostrados na fileira superior.

de residues mutados estão listadas na coluna da esquerda. O valor mais à esquerda em cada célula é a titulação proporcional de cada variante vs. 3A5.040 parental (>1 = titulação

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 92/163

86/138 maior, <1 = titulação menor), enquanto o valor da direita é a kd proporcional (>1 = kd menor, <1 = kd maior) de cada variante vs. 3A5.040 parental. Variantes não produzidas marcadas em cinza. NB, sem ligação. NE, sem expressão, (sequência de CDR3 de VH revelada como residues 98106 do ID. DE SEQ. N°: 73).

Tabela 9. Matriz de Varredura da CDR1 de VL.

SC

A S L Y D Q K H

W

P

	CDR1	de	VL
24		25	26	27			28	29		30				31			32	33			34
G		G		N		N			I			G		S				K			N	V			Y
Ϊ	1' 7 '3	Ί]ϊ	1] 3	õ;8	ϊ,!'		1'7'2	b'7	9	T,'9'	0,6	Ί,'	í		1'7	ΐ	T,2		6	0,7	q'7'2	θ'']/'	Τ,'5'	1'7	7	b'7	3'
1	1, 1	0,4	1, 1	1, 6	1, i	0, 9	1,1	0,	5	1	0, 9	1,	2	IIU		2'	1,1	o,	8	1	1,1	1,3	1,2	0,	3	1,	2
1	1,4	0,8	1, 1	1	1	1	1,3	0,	6	1, 1	0,8	1,	3	1,3	'1,		1,3	o,	3	1,2	1,2	1	0,8	0,	6	0,	5
0, 9	1	1	1,4	1	1,3	1	1,1	0,	9	1,4	0, 6	0,	9	0,9	1,	1	1	1,	3	0, 9	1,2	0,7	1,3		ÍIB
1	1,2	0, 9	1	1	1,5	1	1	0,	4	1,2	0, 9	1,	6	1,2	1,	3	1,1	o,	2	1,2	0, 9	0,4	1,2		T	b'7	Τ'
1	1,2	0, 9	1,3	1	1, 1	0, 9	1,1	0,	5	1, 1	1,4	1,	1	0,8	1,	3	0, 9	o,	3	1	0, 9	0,5	0,8	0,	6	0,	2
1	1,2	0, 9	1,7	1	1	1	1,3	0,	5	1, 1	0,7	1,	3	1	1,	6				1,3	1	0,1	1	0,	6	0,	3
1	1,3	1, 1	1,3	1	1	0, 9	1,5	0,	8	0, 9	1	1,	4	1,5	1,	2	1	o,	5	0, 9	1,5	0,5	NB	0,	8	0,	2
1, 1	1,4	0,8	1,3	0, 9	1,2	1,5	0, 9	0,	4	0, 9	1, 1	1,	2	1,1	0,	9	1,3	o,	9	0,8	1,3	0,2	1,1	0,	6	0,	1
BBI																									IBK

[110] Resumo de diferença na titulação da variante do anticorpo 3A5.040 e kd para variantes de CDR1 de VL (definição de AbM). Numeração de aminoácidos de Kabat e aminoácidos de 3A5.040 parental são mostrados na fileira superior. Identidades de residues mutados estão listadas na coluna da esquerda. O valor mais à esquerda em cada célula é a titulação proporcional de cada

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 93/163

87/138 variante vs. 3A5.040 parental (>1 = titulação maior, <1 = titulação menor), enquanto o valor da direita é a kd proporcional (>1 = kd menor, <1 = kd maior) de cada variante vs. 3A5.040 parental. Variantes não produzidas marcadas em cinza. NB, sem ligação. NE, sem expressão.

(sequência de CDR1 de VL revelada como residues 23-33 do ID. DE SEQ. N°: 74).

Tabela 10. Matriz de Varredura de CDR2 de VL.

CDR2 de VL
50 D	51 D	52 S	53 D	54 R	55 P	56 S
0,8 0,6		0, 9	0,8	0,8 0,9	0,5	0,1	1,4	1,2	0,1 0,9	1,4 1,1
0,9 1		0,7	0,7		1,5	1, 9	1,3	1,1	1,1 1
0,9 0,4		0,8	0, 6		1,4	1,3	1,4	1,2	1,5 1,2	xxxxxxpxxxx^xxxxxxxxxxxxxxpxxx^
0,8 0,5		0,8	0, 6	1,1 1,1	2,1	1,1	1,4	1,0	1,3 1	1,2 1
			1,8 1,2			1,3	1,2	1,6 1,3	1,5 1
0,7 0,5		0, 9	0, 9	0,1 1	1	1	1,5	1,2	1,5 1,1	1,3 1,3
0,7 0,6		0,7	0, 9	1,7 0,1	1,8	1,1	1,7	1,0	1,4 1,1	1 0,9
1 0,6		0, 9	0, 6	1,7 1,1	1,2	0, 9	1,4	1,4	1,8 1	1,4 1
0,7 0,4		0, 6	0,5	1,7 1,1	1,8	1,2	0,1	1,0	1,6 1,4	0,9 0,9
			K			β

[111] Resumo de diferença na titulação da variante do anticorpo 3A5.040 e kd para variantes de CDR2 de VL (definição de AbM). Numeração de aminoácidos de Kabat e aminoácidos de 3A5.040

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 94/163

88/138 parental são mostrados na fileira superior. Identidades de residues mutados estão listadas na coluna da esquerda. 0 valor mais à esquerda em cada célula é a titulação proporcional de cada variante vs. 3Ά5.040 parental (>1 = titulação maior, <1 = titulação menor), enquanto o valor da direita é a kd proporcional (>1 = kd menor, <1 = kd maior) de cada variante vs. 3Ά5.040 parental. Variantes não produzidas marcadas em cinza. NB, sem ligação. NE, sem expressão.

(sequência de CDR2 de VL revelada como residues 49-55 do ID. DE SEQ. N°: 74).

Tabela 11. Matriz de Varredura de CDR3 de VL.

CDR3 de VL

95A

95B

SC

A S L Y D Q K H

W P

0, 6

1,3

0, 6

0,4

0, 1

1,4

0,5

0,7

0,7

1,2

1,2

0, 9

0, 9

0, 9

0,2

0,8

0, 6

0, 9

0,3

0,8

0,5

0, 6

0,8

0,8

0,4

0,8

0,4

0,3

0, 6

1,4

0,4

0,2

0,8

0, 6

0,7

0,8

0,7

0, 6

0, 1

NB

0,4 0

1, 1

1,2

1,1 0

1, 1

0,2

0,7

0,7

0, 6

1, 1

1,2

0, 1

0, 6

1, 6

0,2

0,5

1,3

1,5

1,2

0, 9

0,2

0,7

1,8

0, 9

0,8

0, 6

0,7

1, 9

0, 9

1,2

NE

0, 6

1, 1

0,8

1,3

1, 1

NE

0,8

1,2

0,7

1, 1

1, 6

1,3

1,2

1, 1

NB

1,5

0, 1

1,4

1, 1

0,2

1,4

0,3

0,2

0, 6

0,8

0,8

0,4 o, 9

0,8

1, 1

1,4

1,5

0, 6

0, 1

1, 1 o, 9

2, 1

1,5

0, 1

0, 1

0, 6

1,3

1, 1

1,3

0,8

0,3

0,2

1,2

1,2

0,7

0, 6

1,2

0,2

1,2

1, 9

0,5

NB

0, 9

0, 9

0, 9

1,5 1

0,2

1,5

1,5

1,5 0

1, 1

0,2

V

T?3 Γ/δ

1,1 1,1

11,2

0,91,1

10,9

0,71,2

1,71,4

0,71,6

0,21

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89/138 [112] Resumo de diferença na titulação da variante do anticorpo 3A5.040 e kd para variantes de CDR3 de VL (definição de AbM). Numeração de aminoácidos de Kabat e aminoácidos de 3A5.040 parental são mostrados na fileira superior. Identidades de resíduos mutados estão listadas na coluna da esquerda. 0 valor mais à esquerda em cada célula é a titulação proporcional de cada variante vs. 3A5.040 parental (>1 = titulação maior, <1 = titulação menor), enquanto o valor da direita é a kd proporcional (>1 = kd menor, <1 = kd maior) de cada variante vs. 3A5.040 parental. Variantes não produzidas marcadas em cinza. NB, sem ligação. NE, sem expressão, (sequência de CDR3 de VL revelada como resíduos 88-98 do ID. DE SEQ. N°: 74).

Construção de vetor de expressão [113] A sequência de nucleotídeo pode influenciar a expressão gênica e subsequente nível de expressão de proteína Várias sequências de nucleotídeos diferentes foram examinadas quanto à expressão ótima de 3A5.046. Essas sequências estão resumidas na tabela seguinte:

Tabela 12. Sequência de nucleotídeos.

Nome do gene	IDS. DE SEQ. Nos:
3A5.046 VH	ID. DE SEQ. N°: 69
3A5.046 VL	ID. DE SEQ. N°: 71
Região constante de HC de 3A5.046	ID. DE SEQ. N°: 70
Região constante de LC de 3A5.046	ID. DE SEQ. N°: 72

Medição da afinidade do anticorpo 3A5.046 para IL-5 humana recombinante por SPR [114] A afinidade de anticorpo 3A5.046 para IL-5 humana recombinante foi determinada usando um sistema Biacore T200 (GE Healthcare). Resumidamente, um anticorpo de camundongo anti-IgG humana comercial (Thermo Scientific) foi acoplado

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90/138 a duas lâminas de fluxo adjacentes (de controle e de teste) em um chip CM5 Biacore (GE Healthcare) de acordo com as recomendações do fabricante. O anticorpo 3A5.046 foi capturado em uma densidade baixa (aproximadamente 125 RU) na superfície da lâmina de fluxo de teste e diluições de IL-5 humana recombinante ou de um branco de tampão foram injetadas sobre ambas as lâminas, de fluxo de teste e de controle, a 30 μΐ/min (FIG. 6, Tabela 13).

[115] Os sensorgramas resultantes foram referenciados duplamente (valores da lâmina de fluxo de teste subtraídos dos valores da lâmina de fluxo de controle (superfície acoplada ao anti-IgG humana sem anticorpo revestido) e também um branco de tampão). Os sensorgramas subtraídos de injeções de IL-5 humana a 2,5, 1,25, 0,625, 0,313 e 0,156 gg/ml foram ajustados a um modelo de ligação de Langmuir de 1:1 usando software de Avaliação Biacore para determinar as constantes de ligação de ensaios em duplicata (Tabela 13) .

Tabela 13. Constantes cinéticas de uma análise cinética multiconcentração Biacore da ligação do anticorpo 3A5.046 à IL-5 humana recombinante a 2,5, 1,25, 0,625, 0,313 e 0,156 pg/ml.

Anticorpo	Experimento	ka (1/Ms)	kd (1/s)	KD (pM)	Qui2 (RU2)
3A5.046	Repetição 1	8,16E+05	1,58E-05	19, 4	0,0269
Repetição 2	8,49E+05	1,84E-05	21,7	0,0296

[116] Esses resultados demonstram que o anticorpo 3A5.046 possui uma afinidade elevada para IL-5 humana recombinante.

Potência de 3A5.046 comparado com mepolizumabe no ensaio de proliferação da linhagem de células TF-1.6G4 [117] 3A5.046 e mepolizumabe foram processados no ensaio

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91/138 de proliferação da linhagem de células TF-1.6G4. 3A5.046 e mepolizumabe inibiram a proliferação de IL-5 humana com uma IC50 média de 13,8 pM e 534 pM, respectivamente (veja a Tabela 14 e a FIG. 7A). Ambos os anticorpos demonstraram a inibição de IL-5 de macaco Cynomolgus na linhagem de células TF-1.6G4 (FIG. 7B), com uma IC50 média para 3A5.046 de 43,8 pM e para mepolizumabe de 584 pM.

Tabela 14.

Anticorpo	Agonista	Número de observações	Média (pM)	Desvio— padrão
Mepolizumab e	IL-5 de Cynomolgus	4	584,098 2	129,9019
IL-5 humana	4	534,280 3	150,2546
3A5.046	IL-5 de Cynomolgus	8	43,8091 6	12,62095
IL-5 humana	8	13,8366 7	4,219783

Detecção de IL-5 nativa por células primárias por meio de

ELISA usando anticorpos anti-IL-5 da invenção [118] Anticorpo 3A5 foi usado como um reagente de captura em um ELISA sanduiche. Pareada com um anticorpo de detecção disponível comercialmente (TRFk5R; R&D Systems, #MAB405), a quantificação dos níveis de IL-5 recombinante em amostras de tampão esfriadas podia ser determinada (FIG. 8). Esse método foi então aplicado à detecção de IL-5 nativa secretada por células primárias. Células T CD4+ de quatro doadores foram estimuladas a secretar IL-5. Os níveis de IL-5 foram então determinados usando o ELISA sanduíche com anticorpo 3A5 como o reagente de captura. Células T de três dos quatro doadores responderam à estimulação de célula T e tinham níveis detectáveis de IL-5 no sobrenadante da cultura de células (FIG. 8). Estudos similares foram realizados em IL-5 humana secretada por células T CD4+ humanas primarias de doador

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92/138 usando anticorpo 3A5.046 como um agente de captura, e os resultados obtidos foram consistentes com os resultados obtidos com anticorpo 3A5 (dados não mostrados) .

Inibição da diferenciação de eosinófilos por anticorpo antiIL-5 [119] Um ensaio de sobrevida usando células sanguineas CD34+ do cordão foi usado para avaliar a capacidade de anticorpos anti-IL-5 para inibir a diferenciação IL-5dependente de progenitores da medula óssea em eosinófilos e para avaliar a capacidade de anticorpos anti-IL-5 para inibir a sobrevida de eosinófilos fenotipicamente maduros. Em células de controle tratadas com IL-5, eosinófilos fenotipicamente maduros eram a população predominante no dia 28 (Figura 9, região sombreada no gráfico). 0 anticorpo 3A5.046 foi capaz de inibir a diferenciação de células sanguineas CD34+ do cordão, incubadas com IL-5 por 28 dias, em eosinófilos. 0 anticorpo 3A5.046 foi um inibidor mais potente da diferenciação de eosinófilos mediada por IL-5 do que mepolizumabe (FIG. 9).

Análise por cristalografia de raios-X [120] A estrutura molecular do complexo entre Fab de anticorpo 3A5.046 e IL-5 humana recombinante é investigada por cristalografia de raios-X. Para preparar os experimentos de cristalografia de raios-X, 3A5.046 é digerido por papaina, que cliva o anticorpo intacto na região de dobradiça, separando os dominios Fc e Fab. O Fab de 3A5.04 6 é purificado por cromatografia por afinidade de Proteina A padronizada e complexada com IL-5 humana recombinante não glicosilada. O complexo Fab de 3A5.046:IL-5 humana é purificado para experimentos de cristalização usando cromatografia por

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93/138 exclusão de tamanho padronizada. 0 complexo é configurado em concentrações variáveis, em telas de cristalização de matriz esparsa disponíveis comercialmente para amostragem ampla das condições de cristalização. São realizadas otimizações de quaisquer condições de 'hit' que forneçam cristais do complexo pelas telas de matriz esparsa para aprimorar a morfologia do cristal e a difração do cristal como necessário [121] Cristais do complexo Fab de 3A5.046:IL-5 humana são coletados, congelados instantaneamente em nitrogênio liquido e transportados até as instalações de um sincrotron para testes de difração e coleta de dados. A testagem de difração do cristal é realizada em um sincrotron, que abriga microlinhas de luz de raios-X de alta energia para a produção de difração de alta resolução. Dessa forma, dados de difração de raios-X em cristais do complexo Fab de 3A5.046:IL-5 humana são coletados. Um modelo inicial da estrutura do complexo pode ser obtido usando técnicas padronizadas de substituição molecular com estruturas moleculares publicadas de IL-5 e Fab como modelos. A estrutura final do complexo de Fab de 3A5.046 e IL-5 humana pode ser obtida por refinamento repetitivo do modelo da estrutura, até que os erros de ajuste sejam melhores do que 30% (Riivre final de 0,3) e parâmetros de ligação quimica (por exemplo, a distribuição de comprimentos e ângulos de ligação, estereoquimica e ligações hidrogênio) estejam dentro de limites aceitáveis.

Caracterização da ligação do anticorpo 3A5.046 à IL-5 de espécies-modelo não humanas [122] O anticorpo 3A5.046 foi testado por ensaio Biacore usando um sistema T200 (GE Healthcare) para ligação à citocina IL-5 humana recombinante, IL-5 de rato, IL-5 de

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94/138 camundongo e IL-5 de porquinho-da-india. Esse painel de IL5s não humanas foi escolhido para representar as principais espécies animais-modelo usadas em desenvolvimento préclinico. Um anticorpo de controle de isótipo (IgG4) e o anticorpo 3A5.046 foram imobilizados em lâminas de fluxo 1 e 2 de um chip CM5 Série S (GE Healthcare), respectivamente, usando métodos padronizados de acoplamento de amina. As citocinas foram diluidas até 1 e 10 gg/ml em tampão de corrida HBS-EP+ (GE Healthcare) e injetadas através de lâminas de fluxo 1 e 2. Injeções apenas de tampão através das lâminas de fluxo 1 e 2 foram incluidas para referenciamento duplo. A análise de dados foi realizada usando software de avaliação Biacore T200. Os sensorgramas resultantes foram referenciados duplamente (valores da lâmina de fluxo de teste subtraidos dos valores da lâmina de fluxo de controle e também um branco de tampão).

[123] Foi verificado que o anticorpo 3A5.046 se liga à IL-5 humana e à IL-5 de macaco Cynomolgus, mas não à IL-5 de camundongo, IL-5 de rato ou IL-5 de porquinho-da-índia (FIG. 10A - FIG. 10E). Isso indicava que 3A5.046 poderia ser usado em modelos pré-clínicos em macaco Cynomolgus.

Anticorpo 3A5.046 não se liga a outras citocinas humanas intimamente relacionadas à IL-5 [124] O anticorpo 3A5.046 foi testado por ensaio Biacore usando um sistema T200 (GE Healthcare) para ligação às citocinas humanas recombinantes IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, fator estimulante de colônia de granulócitos-macrófagos (GMCSF) , fator estimulante de colônia de macrófagos (M-CSF) e hormônio do crescimento (GH). Esse painel representativo de citocinas humanas intimamente relacionadas foi escolhido com

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95/138 base em sua similaridade estrutural e funcional à IL-5 humana Um anticorpo de controle de isótipo (IgG4) e o anticorpo 3A5.046 foram imobilizados em lâminas de fluxo 1 e 2 de um chip CM5 Série S (GE Healthcare), respectivamente, usando métodos padronizados de acoplamento de amina. As citocinas foram diluidas até 1 e 10 pg/ml em tampão de corrida HBS-EP+ (GE Healthcare) e injetadas através de lâminas de fluxo 1 e

2. Injeções apenas de tampão através das lâminas de fluxo 1 e 2 foram incluídas para referenciamento duplo. A análise de dados foi realizada usando software de avaliação Biacore T200. Os sensorgramas resultantes foram referenciados duplamente (valores da lâmina de fluxo de teste subtraídos dos valores da lâmina de fluxo de controle e também um branco de tampão).

[125] Foi verificado que o anticorpo 3A5.046 se liga apenas à IL-5 humana, e não às citocinas humanas IL-2, IL-

3, IL—4, GM-CSF, M-CSF ou GH (FIG. 11A - FIG. 11D) demonstrando, dessa forma, a alta especificidade de 3A5.046 para IL-5 humana.

Avaliação do anticorpo 3A5.046 em um modelo de eosinofilia das vias aéreas em Cynomolgus macaco induzida por Ascaris suum [126] O anticorpo 3A5.046 foi testado usando o modelo em Cynomolgus de eosinofilia aguda das vias aéreas por Ascaris suum como descrito em Hart, T.K., e cols., Preclinical Efficacy and Safety of Mepolizumabe (SB-240563), an Monoclonal Humanized Antibody to IL-5, in Cynomolgus Monkeys. J. Allergy Clin. Immunol., 2001. 108(2): páginas 250-7.

[127] Dezesseis fêmeas de macacos Cynomolgus que foram

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96/138 sensibilizadas previamente ao Ascaris suum foram avaliadas quanto ao nivel de sensibilidade retida por ataque intradérmico com A. suum. Catorze desses animais foram selecionados para participação no estudo com base na resposta de pápula cutânea ao ataque e randomizados em dois grupos de n=7 por grupo. Duas semanas após testagem da pápula cutânea intradérmica, amostras no nivel de base de sangue e liquido de lavagem broncoalveolar (BALF) foram coletadas (Dia 8) . Cerca de 24 horas após coleta de amostras do nivel de base, os animais foram tratados com placebo (que compreende tampão aquoso pH 6,3 com 200 mM de arginina e 25 mM de histidina) ou anticorpo 3A5.046 (10 mg/kg por via intravenosa, em tampão aquoso pH 6,3 com 200 mM de arginina e 25 mM de histidina) de forma cega (Dia 7). Uma semana após tratamento com placebo ou anticorpo, um segundo ataque intradérmico com A. suum foi realizado e um ataque por inalação de A. suum foi dado a todos os animais por liberação de uma quantidade igual de extrato de A. suum (Greer Laboratories Inc.; 5 mg/ml em água estéril) administrada por meio de um nebulizador PARI LC (Dia 0). O diâmetro da pápula cutânea foi medido 15 minutos após o ataque. Dois dias após o ataque por inalação de A. suum, amostras de sangue e BALF foram coletadas. Amostras de sangue adicionais para pontos finais de hematologia e análise PK foram coletadas semanalmente começando no Dia 10 até o Dia 45.

[128] Não houve diferença significante nas respostas de pápula cutânea entre o primeiro e segundo ataques intradérmicos por A. suum. Todos os animais exibiram um aumento em eosinófilos no BALF como resultado do ataque com A. suum, mas, em animais tratados com anticorpo 3A5.046,

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97/138 esse aumento foi desprezível. Havia significantemente menos eosinófilos no BALF de animais tratados com anticorpo 3A5.046 comparados com animais tratados com placebo 48 horas após o ataque com A. suum (p<0,01; teste de Mann-Whitney; FIG. 12).

[12 9] 0 ataque com A. suum também levou a um aumento significantemente dos eosinófilos sanguíneos em relação ao nível de base em animais tratados com placebo até o Dia 10 pós-ataque (FIG. 13A) . O tratamento com anticorpo 3A5.04 6 levou a uma diminuição significante nos eosinófilos sanguíneos até níveis abaixo do nível de base (FIG. 13A), e essa depressão nos números de eosinófilos sanguíneos foi mantida ao longo de um período de pelo menos 52 dias após a dose inicial (FIG. 13B).

[130] Em resumo, o tratamento com 3A5.046 reduziu significantemente a eosinofilia das vias aéreas induzida por A. suum 48 horas após o ataque, e diminuiu significantemente os eosinófilos sanguíneos, até abaixo dos níveis do nível de base, por pelo menos 52 dias após uma dose intravenosa única (IV) de 10 mg/kg.

Investigação da função do anticorpo em um modelo em rato de eosinofilia das vias aéreas de IL-5 humanizada [131] Alternaria alternata (Alternaria) é um alérgeno fúngico que sabidamente desencadeia asma em humanos e pode causar eosinofilia e sintomas do tipo asma em roedores. Quando atacados com Alternaria, ratos com knock-in de IL-5 humanizada (animais nos quais a IL-5 de rato foi substituída por IL-5 humana) exibem níveis elevados de eosinófilos no líquido de lavagem broncoalveolar (BALF) dos pulmões (FIG. 14) .

[132] Uma única instilação intratraqueal de suspensão de

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Alternaria é administrada a ratos com IL-5 humanizada, e amostras de sangue e BALF são coletadas 2, 3 ou 4 dias após administração de Alternaria. Tipicamente, nesse modelo, os eosinófilos estão significantemente aumentados em amostras de BALF e podem estar aumentados ou inalterados em amostras de sangue. Os anticorpos de teste são administrados antes da indução de eosinofilia com Alternaria e avaliados quanto à sua habilidade para reduzir os números de eosinófilos no BALF e sangue.

[133] Aqueles habilitados na técnica observarão que diversas alterações e modificações podem ser feitas às modalidades preferidas da invenção e que essas alterações e modificações podem ser feitas sem se se afastar do espirito da invenção. Deseja-se, portanto, que as reivindicações em anexo cubram todas essas variações equivalentes que caiam dentro do verdadeiro espírito e escopo da invenção.

[134] As revelações de cada patente, pedido de patente e publicação citada ou descrita nesse documento são, por meio deste, incorporados nesse relatório descritivo por referência, em sua totalidade.

Tabela 15. Sequências.

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
LCDR1 de consenso	GX1X2X3X4X5X6KX7 X8Y ID. DE SEQ. N° : 1
LCDR2 de consenso	DDXsXgRPS ID. DE SEQ. N° : 2
LCDR3 de consenso	QVWX10SSSDX11VX 12 ID. DE SEQ. N° : 3

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Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
Anticorpo 3A5
HCDR1 de 3A5	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5	GGNNIGSKNVY ID. DE SEQ. N°: 5
HCDR2 de 3A5	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7
HCDR3 de 3A5	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5	QVWYSSSDHW ID. DE SEQ. N°: 9
3A5 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVSISVDTSKNQFSLKLNSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 10
VL de 3A5	SSILTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW YSSSDHWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 11
HC de 3A5	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVSISVDTSKNQFSLKLNSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKV DKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVF LFPPKPKdTLMI srtpevtcvwdvshedpe VKFNWYVD GVEVHNAKTKP RE E QYN S TYRV VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK TTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

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Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	ID. DE SEQ. N°: 12
LC de 3A5	SSILTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW YSSSDHWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 13
Anticorpo 3A5.001
HCDR1 de 3A5.001	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5.001	GGNNIGSKNVY ID. DE SEQ. N°: 5
HCDR2 de 3A5.001	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5.001	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7
HCDR3 de 3A5.001	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.001	QVWYSSSDHW ID. DE SEQ. N°: 9
VH de 3A5.001	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVSISVDTSKNQFSLKLNSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 10
VL de 3A5.001	SSILTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW YSSSDHWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 11
HC de 3A5.001	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVSISVDTSKNQFSLKLNSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS

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Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI srtpevtcvwdvsqedpevqf NW YVD GVE VHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 14
LC de 3A5.001	SSILTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW YSSSDHWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 13
Anticorpo 3A5.040
HCDR1 de 3A5.040	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5.040	GGNNIGSKNVY ID. DE SEQ. N°: 5
HCDR2 de 3A5.040	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5.040	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7
HCDR3 de 3A5.040	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.040	QVWDSSSDHW ID. DE SEQ. N°: 15
VH de 3A5.040	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 16
VL de 3A5.040	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK

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Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	NVYWYQQKP GQAP VL WHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 17
HC de 3A5.040	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI srtpevtcvwdvsqedpevqf NW YVD GVEVHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 18
LC de 3A5.040	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 19
Anticorpo 3A5.046
HCDR1 de 3A5.046	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5.046	GGNNIGSKNVY ID. DE SEQ. N°: 5
HCDR2 de 3A5.046	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5.046	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 109/163

103/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
HCDR3 de 3A5.046	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.046	QVWDSSSDHW ID. DE SEQ. N°: 15
VH de 3A5.046	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 16
VL de 3A5.046	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 17
HC de 3A5.046	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLYITREPEVTCVWDVSQEDPEVQF NW YVD GVE VHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 20
LC de 3A5.046	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 19

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 110/163

104/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
Anticorpo 3A5.063
HCDR1 de 3A5.063	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5.063	GKNNIGSKNVY ID. DE SEQ. N°: 21
HCDR2 de 3A5.063	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5.063	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7
HCDR3 de 3A5.063	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.063	QVWDSSSDHW ID. DE SEQ. N°: 15
VH de 3A5.063	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 16
VL de 3A5.063 G25K	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGKNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 22
HC de 3A5.063	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI srtpevtcvwdvsqedpevqf NW YVD GVE VHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 111/163

105/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	ID. DE SEQ. N°: 18
LC de 3A5.063 G25K	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGKNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 23
Anticorpo 3A5.070
HCDR1 de 3A5.070	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5.070	GGDNIGSKNVY ID. DE SEQ. N°: 24
HCDR2 de 3A5.070	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5.070	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7
HCDR3 de 3A5.070	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.070	QVWDSSSDHW ID. DE SEQ. N°: 15
VH de 3A5.070	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 16
VL de 3A5.070 N2 6D	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGDNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 25
HC de 3A5.070	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 112/163

106/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI srtpevtcvwdvsqedpevqf NW YVD GVE VHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 18
LC de 3A5.070 N2 6D	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGDNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 26
Anticorpo 3A5.082
HCDR1 de 3A5.082	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5.082	GGNHIGSKNVY ID. DE SEQ. N°: 27
HCDR2 de 3A5.082	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5.082	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7
HCDR3 de 3A5.082	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.082	QVWDSSSDHW ID. DE SEQ. N°: 15
VH de 3A5.082	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 16

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 113/163

107/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
VL de 3A5.082 N27H	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNHIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 28
HC de 3A5.082	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI srtpevtcvwdvsqedpevqf NW YVD GVEVHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 18
LC de 3A5.082 N27H	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNHIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 29
Anticorpo 3A5.084
HCDR1 de 3A5.084	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5.084	GGNNAGSKNVY ID. DE SEQ. N°: 30
HCDR2 de 3A5.084	YIYYSGSTY ID. DE SEQ.	LCDR2 de 3A5.084	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 114/163

108/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	N° : 6
HCDR3 de 3A5.084	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.084	QVWDSSSDHW ID. DE SEQ. N°: 15
VH de 3A5.084	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 16
3A5.084 VL I28A	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNAGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 31
HC de 3A5.084	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI srtpevtcvwdvsqedpevqf NW YVD GVE VHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 18
LC de 3A5.084 I28A	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNAGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 115/163

109/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	ID. DE SEQ. N°: 32
Anticorpo 3A5.107
HCDR1 de 3A5.107	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5.107	GGNNIGKKNVY ID. DE SEQ. N°: 33
HCDR2 de 3A5.107	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5.107	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7
HCDR3 de 3A5.107	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.107	QVWDSSSDHW ID. DE SEQ. N°: 15
VH de 3A5.107	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 16
VL de 3A5.107 S30K	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGKK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 34
HC de 3A5.107	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI srtpevtcvwdvsqedpevqf NW YVD GVE VHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 116/163

110/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 18
LC de 3A5.107 S30K	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGKK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 35
Anticorpo 3A5.125
HCDR1 de 3A5.125	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5.125	GGNNIGSKHVY ID. DE SEQ. N°: 36
HCDR2 de 3A5.125	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5.125	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7
HCDR3 de 3A5.125	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.125	QVWDSSSDHW ID. DE SEQ. N°: 15
VH de 3A5.125	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 16
VL de 3A5.125 N32H	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK HVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 37
HC de 3A5.125	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 117/163

111/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI SRTPEVTCVWDVSQEDPEVQF NW YVD GVE VHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 18
LC de 3A5.125 N32H	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK HVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 38
Anticorpo 3A5.127
HCDR1 de 3A5.127	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5.127	GGNNIGSKNAY ID. DE SEQ. N°: 39
HCDR2 de 3A5.127	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5.127	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7
HCDR3 de 3A5.127	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.127	QVWDSSSDHW ID. DE SEQ. N°: 15
VH de 3A5.127	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 118/163

112/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	ID. DE SEQ. N°: 16
VL de 3A5.127 V33A	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NAYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 40
HC de 3A5.127	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI srtpevtcvwdvsqedpevqf NW YVD GVE VHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 18
LC de 3A5.127 V33A	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NAYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 41
Anticorpo 3A5.161
HCDR1 de 3A5.161	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5.161	GGNNIGSKNVY ID. DE SEQ. N°: 5
HCDR2 de	YIYYSGSTY	LCDR2 de	DDLDRPS

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 119/163

113/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
3A5.161	ID. DE SEQ. N° : 6	3A5.161	ID. DE SEQ. N°: 42
HCDR3 de 3A5.161	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.161	QVWDSSSDHW ID. DE SEQ. N°: 15
VH de 3A5.161	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 16
VL de 3A5.161 S52L	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSK NVYW YQQKP GQAP VL WHD D LD RP S GIP E R FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 43
HC de 3A5.161	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI srtpevtcvwdvsqedpevqf NW YVD GVE VHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 18
LC de 3A5.161 S52L	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIGSK NVYW YQQKP GQAP VL WHD D LD RP S GIP E R FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 120/163

114/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 44
Anticorpo 3A5.169
HCDR1 de 3A5.169	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5.169	GGNNIGSKNVY ID. DE SEQ. N°: 5
HCDR2 de 3A5.169	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5.169	DDSSRPS ID. DE SEQ. N°: 45
HCDR3 de 3A5.169	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.169	QVWDSSSDHW ID. DE SEQ. N°: 15
VH de 3A5.169	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 16
VL de 3A5.169 D53S	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SSRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 46
HC de 3A5.169	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI srtpevtcvwdvsqedpevqf NW YVD GVE VHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 121/163

115/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 18
LC de 3A5.169 D53S	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SSRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 47
Anticorpo 3A5.232
HCDR1 de 3A5.232	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5.232	GGNNIGSKNVY ID. DE SEQ. N°: 5
HCDR2 de 3A5.232	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5.232	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7
HCDR3 de 3A5.232	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.232	QVWLSSSDHW ID. DE SEQ. N°: 48
VH de 3A5.232	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 16
VL de 3A5.232 D92L	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW LSSSDHWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 49
HC de 3A5.232	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 122/163

116/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI srtpevtcwvdvsqedpevqf NW YVD GVE VHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 18
LC de 3A5.232 D92L	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW LSSSDHWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 50
Anticorpo 3A5.276
HCDR1 de 3A5.276	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5.276	GGNNIGSKNVY ID. DE SEQ. N°: 5
HCDR2 de 3A5.276	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5.276	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7
HCDR3 de 3A5.276	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.276	QVWDSSSDSW ID. DE SEQ. N°: 51
VH de 3A5.276	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 123/163

117/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 16
VL de 3A5.276 H95bS	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDSWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 52
HC de 3A5.276	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI srtpevtcvwdvsqedpevqf NW YVD GVE VHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 18
LC de 3A5.276 H95bS	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDSWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 53
Anticorpo 3A5.278
HCDR1 de 3A5.278	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ.	LCDR1 de 3A5.278	GGNNIGSKNVY ID. DE SEQ. N°: 5

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 124/163

118/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	N° : 4
HCDR2 de 3A5.278	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5.278	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7
HCDR3 de 3A5.278	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.278	QVWDSSSDYW ID. DE SEQ. N°: 54
VH de 3A5.278	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 16
VL de 3A5.278 H95bY	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDYWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 55
HC de 3A5.278	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI srtpevtcvwdvsqedpevqf NW YVD GVE VHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 18
LC de 3A5.278 H95bY	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDYWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 125/163

119/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 56
Anticorpo 3A5.279
HCDR1 de 3A5.279	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5.279	GGNNIGSKNVY ID. DE SEQ. N°: 5
HCDR2 de 3A5.279	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5.279	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7
HCDR3 de 3A5.279	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.279	QVWDSSSDDW ID. DE SEQ. N°: 57
VH de 3A5.279	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 16
VL de 3A5.279 H95bD	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDDWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 58
HC de 3A5.279	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI srtpevtcvwdvsqedpevqf NW YVD GVE VHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 126/163

120/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 18
LC de 3A5.279 H95bD	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDDWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 59
Anticorpo 3A5.294
HCDR1 de 3A5.294	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5.294	GGNNIGSKNVY ID. DE SEQ. N°: 5
HCDR2 de 3A5.294	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5.294	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7
HCDR3 de 3A5.294	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.294	QVWDSSSDHVA ID. DE SEQ. N°: 60
VH de 3A5.294	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 16
VL de 3A5.294 V97A	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHVAFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 61

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 127/163

121/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
HC de 3A5.294	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI srtpevtcvwdvsqedpevqf NW YVD GVEVHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 18
LC de 3A5.294 V97A	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHVAFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 62
Anticorpo 3A5.302
HCDR1 de 3A5.302	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ. N° : 4	LCDR1 de 3A5.302	GGNNIGSKNVY ID. DE SEQ. N°: 5
HCDR2 de 3A5.302	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5.302	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7
HCDR3 de 3A5.302	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.302	QVWDSSSDHVW ID. DE SEQ. N°: 63
VH de 3A5.302	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 128/163

122/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 16
VL de 3A5.302 V97W	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHVWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 64
HC de 3A5.302	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI srtpevtcvwdvsqedpevqf NW YVD GVE VHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 18
LC de 3A5.302 V97W	SYVLTQPP SVSVAP GQTARITCGGNNIGSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHVWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 65
3A5.097
HCDR1 de 3A5.097	GGSISNGGYYWS ID. DE SEQ.	LCDR1 de 3A5.097	GGNNIDSKNVY ID. DE SEQ. N°:

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 129/163

123/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	N° : 4		66
HCDR2 de 3A5.097	YIYYSGSTY ID. DE SEQ. N° : 6	LCDR2 de 3A5.097	DDSDRPS ID. DE SEQ. N°: 7
HCDR3 de 3A5.097	LGNWFDY ID. DE SEQ. N° : 8	LCDR3 de 3A5.097	QVWDSSSDHW ID. DE SEQ. N°: 15
VH de 3A5.097	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSS ID. DE SEQ. N°: 16
VL de 3A5.097 G2 9D	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIDSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLG ID. DE SEQ. N°: 67
HC de 3A5.097	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSIS NGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTY YNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAA DTAVYYCASLGNWFDYWGQGTLVTVSSAST KGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKdYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKV DKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFP PKPKdTLMI srtpevtcvwdvsqedpevqf NW YVD GVE VHNAKTKP RE E QFN S T YRWS V LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSL TCLVKGFYP SDIAVEWE SNGQPENNYKTTP PVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSLSLG ID. DE SEQ. N°: 18
LC de 3A5.097 G2 9D	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNIDSK NVYWYQQKP GQAPVLWHD D SDRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISRVEVGDEADYSCQVW DSSSDHWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 130/163

124/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW KADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAP TECS ID. DE SEQ. N°: 68
Sequência de nucleotideos de VH (sintética) de 3A5.046	CAGGTGCAGCTGCAGGAATCTGGCCCTGGC CTGGTCAAGCCCAGCCAGACCCTGAGCCTG ACCTGTACCGTGTCCGGCGGCAGCATCAGC AACGGCGGCTACTACTGGTCCTGGATCAGA CAGCACCCCGGCAAGGGCCTGGAATGGATC GGCTACATCTACTACAGCGGCAGCACCTAC TACAACCCCAGCCT GAAG TCCAGAGTGACC ATCAGCGTGGACACCAGCAAGAACCAGTTC AGCCTGAAGCTGAGCAGCGTGACAGCCGCC GACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGCCTG GGCAATTGGTTCGACTACTGGGGCCAGGGC ACCCTCGTGACAGTGTCCTCA ID. DE SEQ. N°: 69
Sequência de nucleotideos da região constante de HC humana (sintética) de 3A5.046	GCTAGCACCAAGGGCCCCAGCGTGTTCCCC CTGGCCCCTTGTAGCAGAAGCACCAGCGAG AGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTGAAA GACTACTTCCCCGAGCCCGTCACCGTGTCC TGGAACAGCGGAGCCCTGACCAGCGGCGTG CACACCTTTCCAGCCGTGCTGCAGAGCAGC GGCCTGTACAGCCTGAGCAGCGTGGTGACA GTGCCCTCCAGCAGCCTGGGCACCAAGACC TACACCTGTAACGTGGACCACAAGCCCAGC AACACCAAGGTGGACAAGCGGGTGGAATCT AAGTACGGCCCACCCTGCCCCCCCTGCCCT GCCCCTGAATTTCTGGGCGGACCCTCCGTG TTCCTGTTCCCCCCAAAGCCCAAGGACACC CTGTATATCACTCGGGAGCCCGAAGTGACC TGCGTGGTGGTGGACGTGTCCCAGGAAGAT CCCGAGGTCCAGTTCAATTGGTACGTGGAC GGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAG C C CAGAGAG GAACAG TTCAACAGCACCTAC CGGGTGGTGTCCGTGCTGACCGTGCTGCAC CAGGACTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAG TGCAAAGTCTCCAACAAGGGCCTGCCCAGC TCCATCGAGAAAACCATCAGCAAGGCCAAG

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 131/163

125/138

Cadeia de proteína	Sequência	Cadeia de proteína	Sequência
	GGCCAGCCCCGCGAGCCTCAGGTGTACACA CTGCCCCCCAGCCAG GAAGAGAT GAC CAAG AACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAA GGCTTCTACCCCAGCGATATCGCCGTGGAA TGGGAGAGCAACGGCCAGCCCGAGAACAAC TACAAGACCACCCCCCCTGTGCTGGACAGC GACGGCAGCTTCTTCCTGTACTCCCGGCTG ACCGTGGACAAGAGCCGGTGGCAGGAAGGC AACGTCTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAG GCCCTGCACAACCACTACACC CAGAAG T C C CTGAGCCTGAGCCTGGGC ID. DE SEQ. N°: 70
Sequência de nucleotideos de VL (sintética) de 3A5.046	AGCTACGTGCTGACCCAGCCTCCTAGCGTG TCCGTGGCCCCTGGCCAGACCGCCAGAATC ACCTGTGGCGGCAACAACATCGGCAGCAAG AACGTGTACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGC CAGGCCCCCGTGCTGGTGGTGCACGACGAC AGCGACAGACCCAGCGGCATCCCCGAGCGG TTCAGCGGCAGCAACAGCGGCAATACCGCC ACCCTGACCATCAGCCGGGTGGAAGTGGGC GACGAGGCCGACTACAGCTGCCAGGTCTGG GACAGCAGCAGCGACCACGTGGTGTTCGGC GGAGGCACCAAGCTGACCGTCCTAGGT ID. DE SEQ. N°: 71
Sequência de nucleotideos da região constante de LC humana (sintética) de 3A5.046	CAGCCCAAGGCCGCTCCCAGCGTGACCCTG TTCCCCCCAAGCAGCGAGGAACTGCAGGCC AACAAGGCCACCCTGGTGTGCCTGATCAGC GACTTCTACCCTGGGGCCGTGACCGTGGCC TGGAAGGCCGATAGCAGCCCTGTGAAGGCC GGCGTGGAAACCACCACCCCCTCCAAGCAG AGCAACAACAAATAC GCCGCCAGCAGCTAC CTGTCCCTGACCCCCGAGCAGTGGAAGTCC CACCGGTCCTACAGCTGCCAGGTGACACAC GAGGGCAGCACCGTGGAAAAGACCGTGGCC CCCACCGAGTGCAGC ID. DE SEQ. N°: 72

MODALIDADES [135] A lista de modalidades seguinte visa complementar,

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 132/163

126/138 e não substituir ou suplantar, as descrições prévias.

[136] Modalidade 1. Uma molécula de anticorpo humano que se liga de forma imunoespecif ica à IL-5 humana com uma constante de afinidade de equilíbrio (Kd) de pelo menos cerca de 40 pM, como determinada por ressonância de plásmon de superfície.

[137] Modalidade 2. Uma molécula de anticorpo humano que se liga de forma imunoespecifica à IL-5 humana, a molécula de anticorpo compreendendo:

uma CDR1 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 4, uma CDR2 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 6, uma CDR3 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N° : 8, uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos dos IDS. DE SEQ. N^os: 5, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39 ou 6 6, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos dos IDS. DE SEQ. N^os: 7, 42 ou 45, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos dos IDS. DE SEQ. N^os: 15, 48, 51, 54, 57, 60 ou 63.

[138] Modalidade 3. A molécula de anticorpo da modalidade 1 ou 2, em que a molécula de anticorpo compreende uma CDR1 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 4, uma CDR2 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 6, uma CDR3 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 8, e

a. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°:

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 133/163

127/138

7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

b. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 21, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

c. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 24, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

d. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 27, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

e. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 30, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

f. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 33, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

g. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 3 6, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE

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128/138

SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

h. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 3 9, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

i. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 66, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

j . uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 42, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

k. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 45, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

l. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 48;

m. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°:

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129/138

7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 51;

n. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 54;

o. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 57;

p. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 60; ou

q. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 63;

em que a posição dos residues de aminoácidos da CDR é determinada de acordo com AbM.

[139] Modalidade 4. A molécula de anticorpo da modalidade 3, em que a molécula de anticorpo compreende uma CDR1 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 4, uma CDR2 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 6, uma CDR3 da cadeia pesada que compreende a sequência de

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130/138 aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 8, uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°:

15.

[140] Modalidade 5. A molécula de anticorpo de qualquer uma das modalidades prévias, em que a molécula de anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 16 e

a. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 17;

b. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 22;

c. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 25;

d. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 28;

e. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%,

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131/138

97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 31;

f. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 34;

g. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 37;

h. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 40;

i. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 43;

j . uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 46;

k. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 49;

l. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 52;

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 138/163

132/138

m. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 55;

n. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 58;

o. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 61;

p. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 64; ou

q. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 67.

[141] Modalidade 6. A molécula de anticorpo de qualquer uma das modalidades prévias, em que a molécula de anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 16 e uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 17.

[142] Modalidade 7. A molécula de anticorpo de qualquer

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133/138 uma das modalidades prévias, em que a molécula de anticorpo compreende:

a. uma mutação S228P;

b. uma mutação M252Y, uma mutação S254T e uma mutação T256E;

c. uma deleção de um resíduo de lisina do terminal-C da cadeia pesada; ou

d. qualquer combinação de até c.

[143] Modalidade 8. A molécula de anticorpo da modalidade 7, em que a molécula de anticorpo compreende uma mutação S228P e uma deleção de um resíduo de lisina do terminal-C da cadeia pesada.

[144] Modalidade 9. A molécula de anticorpo da modalidade 7, em que a molécula de anticorpo compreende uma mutação S228P, uma mutação M252Y, uma mutação S254T, uma mutação T256E, e uma deleção de um resíduo de lisina do terminal-C da cadeia pesada.

[145] Modalidade 10. A molécula de anticorpo de qualquer uma das modalidades prévias, em que a molécula de anticorpo compreende uma região constante da cadeia pesada de IgG4 e uma região constante da cadeia leve lambda.

[146] Modalidade 11. A molécula de anticorpo de qualquer uma das modalidades prévias, em que a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 18 e

a. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°:

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134/138

19;

b. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 23;

c. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 2 6;

d. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 2 9;

e. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 32;

f. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 35;

g. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 38;

h. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 41;

i. uma cadeia leve que compreende uma sequência de

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135/138 aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 44;

j . uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 47;

k. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 50;

l. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 53;

m. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5 6;

n. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5 9;

o. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 62;

p. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°:

Petição 870190117844, de 14/11/2019, pág. 142/163

136/138

65; ou

q. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 68.

[147] Modalidade 12. A molécula de anticorpo de qualquer um de modalidades 1-10, em que a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 2 0 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°:

19.

[148] Modalidade 13. A molécula de anticorpo da modalidade 2 ou modalidade 3, em que a molécula de anticorpo é um fragmento Fab, um fragmento Fab₂, ou um anticorpo de cadeia única.

[149] Modalidade 14. A molécula de anticorpo de qualquer uma das modalidades prévias, em que a molécula de anticorpo possui uma ou mais das seguintes propriedades:

a. reduz a ligação de IL-5 ao receptor de IL-5;

b. possui uma meia-vida sérica de pelo menos cerca de 20 dias; ou

c. se liga à IL-5 humana e de macaco Cynomolgus, mas não à IL-5 de camundongo, rato ou porquinho-da-india.

[150] Modalidade 15. A molécula de anticorpo da modalidade 2, em que a molécula de anticorpo se liga à IL-5 humana com uma constante de afinidade de equilibrio (Kd) de pelo menos cerca de 40 pM, como determinada por ressonância

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137/138 de plásmon de superfície.

[151] Modalidade 16. Uma composição farmacêutica que compreende a molécula de anticorpo de qualquer um de modalidades 1 a 15.

[152] Modalidade 17. Uma molécula de ácido nucléico que codifica a molécula de anticorpo de qualquer um de modalidades 1 a 15.

[153] Modalidade 18. Um vetor que compreende a molécula de ácido nucléico da modalidade 17.

[154] Modalidade 19. uma célula transformada para expressar a molécula de anticorpo de qualquer um de modalidades 1 a 15.

[155] Modalidade 20. Um método de tratamento de um indivíduo que possui asma eosinofílica, sindrome hipereosinofílica, polipose nasal com envolvimento eosinofílico, granulomatose eosinofílica com poliangeíte, dermatite atópica, ou esofagite eosinofílica, que compreende:

administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz da molécula de anticorpo de qualquer um de modalidades 1 a 15 ou da composição farmacêutica da modalidade 16 para tratar a asma eosinofílica, sindrome hipereosinofílica, polipose nasal com envolvimento eosinofílico, granulomatose eosinofílica com poliangeíte, dermatite atópica ou esofagite eosinofílica.

[156] Modalidade 21. Uso de uma quantidade eficaz da molécula de anticorpo de qualquer um de modalidades 1 a 15 ou da composição farmacêutica da modalidade 16 no tratamento de asma eosinofílica, sindrome hipereosinofilica, polipose nasal com envolvimento eosinofílico, granulomatose eosinofílica com poliangeíte, dermatite atópica, ou

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138/138 esofagite eosinofilica.

[157] Modalidade 22. Uso da molécula de anticorpo de qualquer um de modalidades 1 a 15 ou da composição farmacêutica da modalidade 16a fabricação de um medicamento para o tratamento de asma eosinofilica, sindrome hipereosinofilica, polipose nasal com envolvimento eosinofilico, granulomatose eosinofilica com poliangeite, dermatite atópica ou esofagite eosinofilica.

Claims (21)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Molécula de anticorpo humano, caracterizada por se ligar de forma imunoespecif ica à IL-5 humana com uma constante de afinidade de equilibrio (Kd) de pelo menos cerca de 40 pM, como determinada por ressonância de plásmon de superficie.
2. 2. Molécula de anticorpo humano caracterizada por se ligar de forma imunoespecifica à IL-5 humana, a molécula de anticorpo compreende:

   uma CDR1 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 4, uma CDR2 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 6, uma CDR3 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N° : 8, uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos dos IDS. DE SEQ. N^os: 5, 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39 ou 6 6, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos dos IDS. DE SEQ. N^os: 7, 42 ou 45, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos dos IDS. DE SEQ. N^os: 15, 48, 51, 54, 57, 60 ou 63.
3. 3. Molécula de anticorpo, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que a molécula de anticorpo compreende uma CDR1 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 4, uma CDR2 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 6, uma CDR3 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 8, e

   a. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°:

   Petição 870190057461, de 21/06/2019, pág. 27/41

   2/13

   7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

   b. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 21, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

   c. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 24, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

   d. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 27, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

   e. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 30, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

   f. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 33, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

   g. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 3 6, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE

   Petição 870190057461, de 21/06/2019, pág. 28/41

   3/13

   SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

   h. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 3 9, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

   i. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 66, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

   j. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 42, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

   k. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 45, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15;

   l. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 48;

   m. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°:

   Petição 870190057461, de 21/06/2019, pág. 29/41
4. 4/13

   7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 51;

   n. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 54;

   o. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 57;

   p. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 60; ou

   q. uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de

   aminoácidos do ID . DE SEQ. N°: 63; em que a posição dos residues de aminoácidos da CDR é determinada de acordo com AbM.

   4 . Molécula de anticorpo, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelo fato de que a molécula de anticorpo compreende uma CDR1 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 4, uma CDR2 da cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 6, uma CDR3 da cadeia pesada que compreende

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5. 5/13 a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 8, uma CDR1 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5, uma CDR2 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 7, e uma CDR3 da cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 15.

   5. Molécula de anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a molécula de anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 16 e

   a. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 17;

   b. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 22;

   c. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 25;

   d. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 28;

   e. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%,

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6. 6/13

   97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 31;

   f. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 34;

   g. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 37;

   h. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 40;

   i. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 43;

   j . uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 46;

   k. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 49;

   l. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 52;

   Petição 870190057461, de 21/06/2019, pág. 32/41
7. 7/13

   m. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 55;

   n. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 58;

   o. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 61;

   p. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 64; ou

   q. uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 67.

   6. Molécula de anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a molécula de anticorpo compreende uma região variável da cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 16 e uma região variável da cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 17 .

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8. 8/13

   7. Molécula de anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a molécula de anticorpo compreende:

   a. uma mutação S228P;

   b. uma mutação M252Y, uma mutação S254T e uma mutação T256E;

   c. uma deleção de um resíduo de lisina do terminal-C da cadeia pesada; ou

   d. qualquer combinação de até c.

   8. Molécula de anticorpo, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que a molécula de anticorpo compreende uma mutação S228P e uma deleção de um resíduo de lisina do terminal-C da cadeia pesada.
9. 9. Molécula de anticorpo, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que a molécula de anticorpo compreende uma mutação S228P, uma mutação M252Y, uma mutação S254T, uma mutação T256E, e uma deleção de um resíduo de lisina do terminal-C da cadeia pesada.
10. 10. Molécula de anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a molécula de anticorpo compreende uma região constante da cadeia pesada de IgG4 e uma região constante da cadeia leve lambda.
11. 11. Molécula de anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 18 e

    a. uma cadeia leve que compreende uma sequência de

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    9/13 aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 19;

    b. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 23;

    c. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 2 6;

    d. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 2 9;

    e. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 32;

    f. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 35;

    g. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 38;

    h. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°:

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    10/13

    41;

    i. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 44;

    j . uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 47;

    k. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 50;

    l. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 53;

    m. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5 6;

    n. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 5 9;

    o. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 62;

    p. uma cadeia leve que compreende uma sequência de

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    11/13 aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 65; ou

    q. uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 68.
12. 12. Molécula de anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizada pelo fato de que a molécula de anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 20 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos que é pelo menos 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% idêntica à sequência de aminoácidos do ID. DE SEQ. N°: 19.
13. 13. Molécula de anticorpo, de acordo com a reivindicação

    2 ou 3, caracterizada pelo fato de que a molécula de anticorpo é um fragmento Fab, um fragmento Fab2, ou um anticorpo de cadeia única. 14 . Molécula de anticorpo, de acordo com qualquer uma

    das reivindicações anteriores, caracterizada pelo fato de que a molécula de anticorpo possui uma ou mais das seguintes propriedades:

    a. reduz a ligação de IL-5 ao receptor de IL-5;

    b. possui uma meia-vida sérica de pelo menos cerca de

    20 dias; ou

    c. se liga à IL-5 humana e de macaco Cynomolgus, mas não à IL-5 de camundongo, rato ou porquinho-da-índia.
14. 15. Molécula de anticorpo, de acordo com a reivindicação

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    12/13

    2, caracterizada pelo fato de que a molécula de anticorpo se liga à IL-5 humana com uma constante de afinidade de equilibrio (Kd) de pelo menos cerca de 40 pM, como determinada por ressonância de plásmon de superficie.
15. 16. Composição farmacêutica, caracterizada por compreender a molécula de anticorpo, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15.
16. 17. Molécula de ácido nucléico, caracterizada por codificar a molécula de anticorpo, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15.
17. 18. Vetor caracterizado por compreender a molécula de ácido nucléico, conforme definida na reivindicação 17.
18. 19. Célula caracterizada por ser transformada para expressar a molécula de anticorpo, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15.
19. 20. Método de tratamento de um individuo que possui asma eosinofilica, sindrome hipereosinofilica, polipose nasal com envolvimento eosinofilico, granulomatose eosinofilica com poliangeite, dermatite atópica ou esofagite eosinofilica, caracterizado por compreender:

    administração ao individuo de uma quantidade terapeuticamente eficaz da molécula de anticorpo, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15, ou da composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 16, para tratar a asma eosinofilica, sindrome hipereosinofilica, polipose nasal com envolvimento eosinofilico, granulomatose eosinofilica com poliangeite, dermatite atópica ou esofagite eosinofilica.
20. 21. Uso de uma quantidade eficaz da molécula de anticorpo, conforme definida em qualquer uma das

    Petição 870190057461, de 21/06/2019, pág. 38/41

    13/13 reivindicações 1 a 15, ou da composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 16, caracterizado por ser no tratamento de asma eosinofilica, sindrome hipereosinofilica, polipose nasal com envolvimento eosinofilico, granulomatose eosinofilica com poliangeite, dermatite atópica, ou esofagite eosinofilica.
21. 22. Uso da molécula de anticorpo, conforme definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 15, ou da composição farmacêutica, conforme definida na reivindicação 16, caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para o tratamento de asma eosinofilica, sindrome hipereosinofilica, polipose nasal com envolvimento eosinofilico, granulomatose eosinofilica com poliangeite, dermatite atópica ou esofagite eosinofilica.