CN110267986A - 抗il-5抗体 - Google Patents

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Abstract

本文公开了与人IL‑5免疫特异性地结合的全人抗体分子。该抗体分子可以与人IL‑5结合，按照通过表面等离子体共振测定的平衡亲和常数(KD)为至少约40pM。

Description

抗IL-5抗体
相关申请的交叉参考
本申请要求2016年12月23日提交的美国临时申请号62/438,502的优先权，其内容通过援引整体并入本文。
序列表
本申请包含序列表，该序列表已经以ASCII格式电子提交并且通过援引整体并入本文中。所述ASCII备份创建于2017年11月30日，名称为102085.000906_sl.txt且大小为93,529字节。
技术领域
本文公开的是免疫特异性地结合IL-5的新的抗体分子和公开的抗体的用途。
背景技术
白介素-5(IL-5)是引起B细胞和嗜酸性粒细胞增殖和分化的T辅助性因子2(T-helper 2)(Th2)。在B细胞中，IL-5也增加免疫球蛋白的分泌。IL-5是嗜酸性粒细胞的关键调节因子，其中它也调节成熟、向组织迁移、存活和细胞凋亡的预防。
通过两种分开的基序，IL-5与它的特异性受体(IL5-Rα)和信号受体结合，白介素-3(IL-3)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulatingfactor)(GMCSF)之间共享的共同的β链(βc)。据报道，IL-5对IL5-Rα的亲和力在中低的nM范围(0.2-100nM)；在βc的存在下，这转移到中间的pM范围(～100pM)。IL5-Rα与IL-5特异性地结合，然后这为IL-5R招募βc.
靶向白介素-5(IL-5)的治疗潜力已经由文献中的广泛验证和近期针对瑞利珠单抗(reslizumab)和美泊利单抗治疗(mepolizumab)的积极的Ⅲ期临床数据证明。
发明内容
本文公开了与人IL-5免疫特异性地结合的人抗体分子，按照通过表面等离子体共振测定的平衡亲和常数(KD)为至少40pM。
还提供了抗体分子，该抗体分子包含包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链CDR1、包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链CDR2、包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链CDR3、包含SEQ ID NOs:5、21、24、27、30、33、36、39或66的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ IDNOs:7、42或45的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NOs:15、48、51、54、57、60或63的氨基酸序列的轻链CDR3。
公开的抗体分子可以包含包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的重链可变区和包含与SEQ ID NO:17、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58、61、64、或67的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区，其中变异(即至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致性)发生在CDR序列之外。
公开的抗体分子可以包含包含与SEQ ID NOs:18或20的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的重链和包含与SEQ ID NO:19、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59、62、65或68的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链，其中变异(即至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致性)发生在CDR序列之外。
还提供了编码公开的抗体分子的核酸分子、包含该核酸分子的载体以及经转化以表达该公开的抗体分子的细胞。
还公开了包含任何本文公开的抗体分子的药物组合物。
还提供了用于治疗患有嗜酸性粒细胞性哮喘(eosinophilic asthma)、嗜酸性粒细胞增多症(hypereosinophilic syndrome)、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉(nasal polyposis with eosinophilic involvement)、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎(eosinophilic granulomatosis with polyangiitis)、特应性皮炎(atopicdermatitis)或嗜酸性粒细胞性食管炎(eosinophilic esophagitis)的受试者的方法，该方法包含向该受试者施用治疗有效量的任何本文公开的的抗体分子或包含该抗体分子的药物组合物以治疗嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞增多症、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞性食管炎。
还提供了治疗有效量的任何本文公开的抗体分子或包含该抗体分子的药物组合物在治疗嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞增多症、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞性食管炎中的用途。
进一步提供了任何本文公开的的抗体分子或包含该抗体分子的药物组合物在制备用于治疗嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞增多症、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞性食管炎中的药物中的用途。
附图简述
概要以及下列详细说明，当连同附图一起阅读时，进一步被理解。为了说明公开的抗体分子、方法和用途的目的，附图中显示了抗体分子、方法和用途的典型的实施方式；然而，该抗体分子、方法和用途并不限于公开的具体的实施方式。在附图中：
图1说明了TF-1.6G4试验法，其显示了抗体变异体3A5.001(以IgG4形式)保持了与原始抗体3A5(以IgG1形式)相等的效力(potency)。
图2说明了TF-1.6G4试验法，其显示了抗体变异体3A5.040保持了与亲本抗体3A5.001相等的效力。
图3是图形矩阵，其显示了在3A5.040VH CDRs上生成的不同的单个氨基酸取代的位置和标识，与原始3A5.040VH序列(顶层序列)比对。方框包含根据AbM命名法指定为CDR残基的残基。除了CDR残基之外，按照实例“抗体的功能测试和特性鉴定”中描述的，制得Kabat残基编号93和94(与HC CDR3相邻)的变异体。在该图中引述的各种序列被提供在SEQ IDNO:73中。
图4是图形矩阵，其显示了在3A5.040VL CDRs上生成的不同的单个氨基酸取代的位置和识标识，与原始3A5.040VH序列(顶层序列)比对。方框包括根据AbM命名法指定为CDR残基的残基。在该图中引述的各种序列被提供在SEQ ID NO:74中。
图5说明了与3A5.040VL序列(顶层序列)比对的典型的轻链CDR共有序列(consensus sequence)。根据在(变异体kd与3A5.040kd的比≥1.5)和(变异体表达水平与3A5.040表达水平的比≥0.5)的实例中描述的纳入标准，显示了潜在的改进的3A5.040VLCDR单个氨基酸取代变异体被纳入在共有序列中。CDR的定义和编号分别根据AbM和Kabat命名法。方框识别了CDR残基的位置。在该图中引述的各种序列被提供在SEQ ID NO:75中。
图6说明了在2.5、1.25、0.625、0.313和0.156μg/mL，3A5.046抗体与重组人IL-5结合的多个浓度Biacore动力学分析。传感图(Sensorgrams)显示了IL-5按顺序从在顶部迹线的2.5μ/mL IL-5到底部迹线的0.156μg/mL IL-5的逐渐降低的浓度。
图7A和图7B说明了TF-1.6G4细胞在对IL-5响应中的增殖，以及通过3A5.046抑制IL-5驱动的增殖的效力。相比美泊利单抗，3A5.046是人IL-5(图7A)和食蟹猕猴(cynomolgus monkey)IL-5(图7B)的更有效的抑制剂。
图8A和图8B说明了使用3A5抗体和对照捕获抗体(R&D体系)建立的典型的ELISA。该ELISA能够检测重组IL-5(图8A)和由来自3位供体的CD3/CD28/IL-33的激活的原代人T细胞产生的IL-5(图8B)。图8B上面部分：供体1；图8B中间部分：供体3；图8B底部部分：供体4。
图9说明了CD34+脐带血细胞使用IL-5和如实例中描述的其他细胞因子分化为表型成熟的嗜酸性粒细胞的实验的结果。抗体3A5.046在抑制IL-5诱导的嗜酸性粒细胞分化方面比美泊利单抗更有效。
图10A、图10B、图10C、图10D和图10E说明了抗体3A5.046与人IL-5(图10A)、食蟹猕猴IL-5(图10B)、小鼠IL-5(图10C)、大鼠IL-5(图10D)和豚鼠IL-5(图10E)结合的Biacore交叉反应分析的结果。显示了与1μg/ml或10μg/ml的细胞因子结合的双参考传感图。
图11A、图11B、图11C和图11D说明了抗体3A5.046的Biacore特异性分析的结果。显示了与10μg/ml(图11A和图11B)或1μg/ml(图11C和图11D)的细胞因子结合的双参考传感图。
图12说明了在气道嗜酸性粒细胞增多症的食蟹猕猴模型中猪蛔虫(A.suum)激发(challenge)的结果。在第2天，当比较3A5.046治疗的和载剂(安慰剂)治疗的动物时，肺(BALF)嗜酸性粒细胞数具有显著性差异(p<0.01；Mann-Whitney试验)。
图13A和图13B显示了在食蟹猕猴中猪蛔虫(A.suum)激发后10天的血液嗜酸性粒细胞响应，该食蟹猕猴在猪蛔虫激发前1周用3A5.046或同种型匹配的对照抗体(“安慰剂”)进行预先治疗(图13A)。图13B说明了利用3A5.046抗体治疗的动物在长达激发后45天(给药后52天)的血液嗜酸性粒细胞计数的进一步细节。在激发前一周单次给药3A5.046之后，嗜酸性粒细胞计数保持低于基线持续激发后至少45天。
图14说明了在对利用链格孢(Alternaria alternata)激发的响应中，人IL-5基因敲入(KI)大鼠模型的BALF嗜酸性粒细胞水平。该模型可用于测试抗IL-5抗体的效力以调节在链格孢属(Alternaria)激发之后的BALF嗜酸粒细胞的数目。
说明性实施方式的详述
可以通过参照下列详细描述，结合构成本公开的一部分的附图，更容易理解公开的抗体分子、方法和用途。应当理解，公开的抗体分子、方法和用途并不限于本文描述和/或显示的特定抗体分子、方法和用途，本文使用的术语仅是为了借助实例描述特定的实施方式的目的，而不是为了限制请求保护的抗体分子、方法和用途。
除非另有特别说明，任何关于可能的作用机理或方式或改进的理由的描述仅仅意味着是说明性的，并且公开的抗体分子、方法和用途不受任何此类建议的作用机理或方式或改进的理由的正确性或不正确的限制。
在本文中，描述是指抗体分子和使用所述抗体分子的方法。在本公开内容描述或请求保护与抗体分子相关的特征或实施方式的情况下，这样的特征或实施方式同样适用使用所述抗体分子的方法。同样，在本公开内容描述或请求保护与使用抗体分子的方法相关的特征或实施方式的情况下，这样的特征或实施方式同样适用抗体分子。
在数值范围在本文中被引述或确立的情况下，该范围包含该值的端点以及该范围内的所有单个整数和小数，并且还包括该范围内的由那些端点和里面的整数和小数的所有各种可能的组合形成的每个较窄范围，以形成规定范围内的数值的较大组的亚组，达到好像那些较窄范围中的每一个被明确地引述了的相同程度。在本文中的数值范围规定为大于规定值的情况下，然而该范围是有限的，并且在其上端由如本文描述的本发明的背景中可操作的值限定。在本文中数值范围规定为小于规定值的情况下，然而该范围仍以非零值限定它的下端。当限定范围时，这并不是说本发明的范围被限制到引述的具体值。所有范围都是包含的和可组合的。
对特定数值的提及至少包括那个特定值，除非上下文另有明确规定。
当通过使用前面的“约”，值被表示为近似值时，应当理解，特殊值构成另一实施方式。当提及数值范围、截止值(cutoffs)或具体值使用时，术语“约”被用来表示引述的值可以与列出的值相差多达10％。因此，术语“约”被用于包含规定的值±10％或更小的变化值、±5％或更小的变化值、±1％或更小的变化值、±0.5％或更小的变化值或±0.1％或更小的变化值。
应当领会为了清楚起见，在本文中的分开的实施方式的背景中描述的公开的抗体分子的、方法和用途的各种特征也可以提供在单个实施方式的组合中。相反地，为了简洁起见，它在单个实施方式的背景中描述的公开的抗体分子、方法和用途的各种特征也可以分开地提供或提供在任何亚组合中。
如本文所使用的，单数形式“一(a)”、“一(an)”和“该(the)”包含复数。
与描述的各个方面有关的各种术语在整个说明书和权利要求书中使用。除非另有说明，此类术语被给予本领域它们通常的含义。其他明确定义的术语应以与本文中提供的定义一致的方式来解释。
术语“包含”意在包括，但不一定限制到由术语“主要由…组成”和“由…组成”包含的实例；同样地，术语“主要由…组成”意在包含，但不一定限制到由术语“由…组成”包含的实例。
术语“抗体分子”是指广义的，并且包括全长免疫球蛋白分子及其抗原结合片段。
免疫球蛋白可被指定为五大类，即IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，这取决于重链恒定结构域氨基酸序列。IgA和IgG进一步细分为同种型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。任何脊椎动物物种的抗体轻链都可以根据它们的恒定结构域的氨基酸序列被指定为两种明显不同的类型(即kappa(κ)和lambda(λ))之一。
“抗原结合片段”是指保留亲本全长抗体的抗原结合特性的免疫球蛋白分子的一部分(即“其抗原结合片段”)。典型的抗原结合片段可以具有：重链互补决定区(heavychain complementarity determining regions)(HCDR)1、2和/或3；轻链互补决定区(light chain complementarity determining regions)(LCDR)1、2和/或3；重链可变区(VH)；轻链可变区(VL)以及其组合。抗原结合片段包含：Fab片段、由VL、VH、恒定轻(CL)和恒定重1(CH1)结构域组成的单价片段；F(ab)2片段、包含由二硫桥在铰链区连接的两个Fab片段的二价片段；由VH和CH1结构域组成的Fd片段；由抗体的单臂VL和VH结构域组成的Fv片段；以及VH结构域或VL结构域组成的结构域抗体(dAb)片段(Ward et al.,Nature 341:544-546,1989)。VH和VL结构域可以是基因工程合成的，并且通过合成连接子连接在一起，以形成不同类型的单链抗体设计，其中，在那些情况下,当VH和VL结构域由分开的单链抗体构筑体(separate antibody constructs)表达时，VH/VL结构域分子内或分子间配对以形成单价抗原结合位点，如单链Fv(scFv)或双特异抗体(diabody)，例如在Int’lPat.Pub.Nos.WO1998/44001、WO1988/01649、WO1994/13804和WO1992/01047中描述的。这些抗体片段是使用本领域技术人员熟知的技术获得的，并且筛选片段用于以与全长抗体以相同的方式使用。
词组“免疫特异性结合”是指公开的抗体分子优先与它的靶(在抗IL-5抗体分子的情况下IL-5)结合的能力，而而不是优先结合包含混合的众多分子的样品中的其他分子。免疫特异性地结合IL-5的抗体分子基本上不含有具有不同抗原特异性的其他抗体(例如，抗IL-5抗体基本上不含有特异性地结合除IL-5以外的抗原的抗体)。然而，免疫特异性地结合IL-5的抗体分子可以对其他抗原如人IL-5的直系同源(包含食蟹猕猴(Macacafascicularis)(食蟹猕猴(cynomolgus monkey))IL-5)具有交叉反应性。本文公开的抗体分子能够免疫特异性地结合天然产生的人IL-5和在哺乳动物或原核细胞中重组产生的IL-5。
抗体可变区由被三个“抗原结合位点”中断的四个“骨架”区组成。抗原结合位点使用下列各种术语定义：(i)互补决定区(CDRs)，在VH中三个(HCDR1、HCDR2、HCDR3)和在VL中三个(LCDR1、LCDR2、LCDR3)是基于序列变异性(Wu and Kabat J Exp Med 132:211-50,1970；Kabat et al.Sequences of Proteins of Immunological Interest,5thEd.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1991)；和(ii)“高变区”(“HVR”或“HV”)，在VH中三个(H1、H2、H3)和在V L中三个(L1、L2、L3)是指抗体可变结构域的区域，该抗体可变结构域的区域在由Chothia和Lesk定义的结构方面是高变的(Chothia and Lesk Mol Biol 196:901-17,1987)。CDRs的AbM定义也得到了广泛的应用；这是一种介于Kabat和Chothia编号方案之间的折衷方案，它之所以这样被命名，因为它被Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用(Oxford Molecular's AbM antibodymodelling software)(Rees,A.R.,Searle,S.M.J.,Henry,A.H.and Pedersen,J.T.(1996)In Sternberg M.J.E.(ed.),Protein Structure Prediction.Oxford UniversityPress,Oxford,141–172)。其他术语包含“IMGT-CDRs”(Lefranc et al.,Dev ComparatImmunol 27:55-77、2003)和“特异性决定残基使用(Specificity Determining ResidueUsage)”(SDRU)(Almagro Mol Recognit 17:132-43,2004)。国际免疫遗传学(IMGT)数据库(http://www_imgt_org)提供了抗原结合位点的标准化编号和定义。CDRs、HVs和IMGT划定之间的对应关系被记载在Lefranc et al.,Dev Comparat Immunol 27:55-77,2003中。
“骨架”或“骨架序列”是除被定义为抗原结合位点的那些可变区以外的可变区的剩余序列(remaining sequences)。由于抗原结合位点可以由上述描述的各种术语来定义，骨架的精确的氨基酸序列取决于抗原结合位点是如何定义的。“人抗体”、“全人抗体”和类似术语是指具有重链和轻链可变区的抗体，在该重链和轻链可变区中，骨架和抗原结合位点都是起源于人类源的序列。如果抗体包含恒定区，该恒定区也是起源于人起源的序列。如果抗体的可变区是从使用人种系免疫球蛋白(human germline immunoglobulin)或重排免疫球蛋白基因(rearranged immunoglobulin genes)的体系中获得的，那么人抗体包含“起源于”人来源的序列的重链和/或轻链可变区。这样的体系包含在噬菌体和转基因的非人动物(比如本文描述的携带人免疫球蛋白基因座的小鼠)上显示的人免疫球蛋白基因库。例如，由于在可变结构域(骨架和抗原结合位点)或恒定结构域中自然发生的体细胞突变或有意引入取代，当与人种系或重排免疫球蛋白序列相比时，“人抗体”可能包含氨基酸差异通常，“人抗体”的氨基酸序列与由人种系或重排免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％一致。在某些情况下，“人抗体”可能包含来自人骨架序列分析(例如Knappik et al.,J Mol Biol 296:57-86,2000中描述的)的共有骨架序列或合成的HCDR3，该合成的HCDR3被引入到在噬菌体上显示的人免疫球蛋白基因库中，例如，在Shi et al.,J Mol Biol 397:385-96,2010和Int’l Pat.Pub.No.WO2009/085462中描述的。抗体(其中抗原结合位点起源于非人物种)不包含在“人抗体”的定义中。
人抗体(虽然起源于人免疫球蛋白序列)可以使用比如噬菌体展示的体系，并入合成的CDRs(phage display incorporating synthetic CDRs)和/或合成骨架来生成，或可以经受体外突变形成以改进可变区或恒定区或两者中的抗体特性，产生了在体外不会自然地存在于人抗体种系库(human antibody germline repertoire)中的抗体。
“重组抗体”包含通过重组方式制备、表达、构建或分离的所有抗体，比如：从针对人免疫球蛋白基因是转基因或转染色体的动物(例如老鼠)或从该动物制备的杂交瘤(下文进一步描述)分离的抗体；从经转化以表达抗体的宿主细胞分离的抗体；从重组的组合的抗体库分离的抗体和通过其他方式(涉及将人免疫球蛋白基因序列拼接为其他DNA序列)制备、表达、构建或分离的抗体，或通过使用Fab臂交换在体外产生的抗体。
“单克隆抗体”是指单一分子组合物的抗体分子的群体。单克隆抗体组合物对特定的表位显示单一结合特异性和亲和性，或在双特异性单克隆单体的情况下，对两个不同的表位显示双重结合特异性。因此，单克隆抗体是指在每个重链和每个轻链上具有单个氨基酸组合物的抗体群体，除了可能的众所周知的改变，如从抗体重链上去除C末端赖氨酸。单克隆抗体在抗体群体中可以具有异源糖基化。单克隆抗体可以是单特异性的或多特异性的、或单价的、二价的或多价的。双特异性抗体包含在术语单克隆抗体中。
“表位”是指抗体与之特异性结合的抗原的一部分。表位通常由比如氨基酸或多糖侧链的部分的化学活性(比如极性、非极性或疏水性)的表面基团组成，并且可以具有特定的三维结构特性和特定的电荷特性。表位可以由连续的和/或不连续的氨基酸组成，该连续的和/或不连续的氨基酸形成构象的空间单元。对于不连续的表位，来自抗原的线性序列的不同部分的氨基酸通过蛋白质分子的折叠在三维空间中非常接近。
“变异体”是指通过一个或多个修饰，例如取代、插入或缺失与参考多肽或参考多核苷酸不同的多肽或多核苷酸。本文使用的术语“突变”旨在意味着对多肽或多核苷酸作出的一个或多个有意的取代。
如本文所使用的，“与…90％一致的”包含与参照项(比如生物序列)至少90％一致的、91％一致的、92％一致的、93％一致的、94％一致的、95％一致的、96％一致的、97％一致的、98％一致的、99％一致的、或100％一致的(如：生物序列)。本说明书使用了术语“％一致的”用来描述许多序列。可以理解，术语“％一致的”意味着在对指定区的两个序列进行比较时，该两个序列在同一位置上具有指定数量的一致的残基。一致性等级(level ofidentity)可以通过使用具有默认参数的CLUSTAL W来确定。
“治疗(Treat)”、“治疗(treatment)”等术语是指治疗性治疗和预防性或预防性措施，并且包括减轻(减小)症状的严重程度和/或频率，消除症状和/或症状的根本原因，减小(减少)症状的频率或可能性和/或它们的根本原因，直接或间接地改善或补救由嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞增多症、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞性食管炎引起的损伤。治疗还包括相比还未接受治疗的受试者的预期存活期延长存活期。待治疗的受试者包含患有病况或紊乱的那些受试者，以及容易患有病况或紊乱的那些受试者，或病况或紊乱待预防的那些受试者。
如本文所使用的，“向受试者施用”和类似的术语表示一过程，通过该过程，公开的抗体分子或包括该公开的抗体分子的组合物被注射到患者体内使得受试者的身体的靶细胞、组织或片段与公开的抗体分子接触。
词组“治疗有效量”是指如本文描述的，有效地达到特定的生物或治疗结果(比如，但不限于本文公开的、描述的或例证的生物或治疗结果)的抗体分子的量。该治疗有效量可以根据比如个体的疾病状况、年龄、性别或体重以及组合物引起受试者的理想响应的能力等因素而不同。治疗有效量的典型指标包括，例如，患者的提高的良好状态、疾病症状的减少、疾病症状的停止或减缓进展和/或无疾病症状。
本文使用了以下缩写：链格孢(Alternaria alternata)(链格孢属(Alternaria))、猪蛔虫(A.suum)；互补决定区(CDR)；重链(HC)；轻链(LC)；重链可变区(VH)；轻链可变区(VL)；表面等离子体共振(SPR)。
抗体分子
本文公开的是与人IL-5免疫特异性地结合的人抗体分子，按照通过表面等离子体共振(SPR)测定的平衡亲和常数(KD)为至少约40pM。如本文所使用的，“至少约40pM”意味着公开的抗体免疫特异性地结合人IL-5，其中KD为小于或等于约40pM。例如，该公开的抗体可以免疫特异性地结合人IL-5，其中KD为约40pM、约30pM、约20pM、约10pM或小于约10pM。
公开的人抗体分子可以包含包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链CDR1、包含SEQID NO:6的氨基酸序列的重链CDR2、包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链CDR3、包含SEQID NO:1的氨基酸序列的轻链共有(light chain consensus)CDR1、包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的轻链共有CDR2和包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链共有CDR3。
该轻链共有CDR1包含GX1X2X3X4X5X6KX7X8Y(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列，其中：
X1是G或K；
X2是N或D；
X3是N或H；
X4是I或A；
X5是G或D；
X6是S或K；
X7是N或H；以及
X8是V或A。
在一些实施方式中，轻链CDR1氨基酸序列可以包含GGNNIGSKNVY(SEQ ID NO:5)。在一些实施方式中，轻链CDR1氨基酸序列可以包含GKNNIGSKNVY(SEQ ID NO:21)。在一些实施方式中，轻链CDR1氨基酸序列可以包含GGDNIGSKNVY(SEQ ID NO:24)。在一些实施方式中，轻链CDR1氨基酸序列可以包含GGNHIGSKNVY(SEQ ID NO:27)。在一些实施方式中，轻链CDR1氨基酸序列可以包含GGNNAGSKNVY(SEQ ID NO:30)。在一些实施方式中，轻链CDR1氨基酸序列可以包含GGNNIDSKNVY(SEQ ID NO:66)。在一些实施方式中，轻链CDR1氨基酸序列可以包含GGNNIGKKNVY(SEQ ID NO:33)。在一些实施方式中，轻链CDR1氨基酸序列可以包含GGNNIGSKHVY(SEQ ID NO:36)。在一些实施方式中，轻链CDR1氨基酸序列可以包含GGNNIGSKNAY(SEQ ID NO:39)。
轻链CDR2氨基酸序列包含DDX8X9RPS(SEQ ID NO:2)，其中:
X8是S或L；以及
X9是D或S。
在一些实施方式中，轻链CDR2氨基酸序列可以包含DDSDRPS(SEQ ID)NO:7)。在一些实施方式中，轻链CDR2氨基酸序列可以包含DDLDRPS(SEQ ID.NO:42)。在一些实施方式中，轻链CDR2氨基酸序列可以包含DDSSRPS(SEQ ID NO:45)。
轻链CDR3氨基酸序列可以包含QVWX10SSSDX11VX12(SEQ ID NO:3)，其中：
X10是D或L；
X11是H、S、Y或D；以及
X12是V、A或W。
在一些实施方式中，轻链CDR3氨基酸序列可以包含QVWDSSSDHVV(SEQ IDNO:15)。在一些实施方式中，轻链CDR3氨基酸序列可以包含QVWLSSSDHVV(SEQ IDNO:48)。在一些实施方式中，轻链CDR3氨基酸序列可以包含QVWDSSSDSVV(SEQ ID)NO:51)。在一些实施方式中，轻链CDR3氨基酸序列可以包含QVWDSSSDYVV(SEQ ID)NO:54)。在一些实施方式中，轻链CDR3氨基酸序列可以包含QVWDSSSDDVV(SEQ ID NO:57)。在一些实施方式中，轻链CDR3氨基酸序列可以包含QVWDSSSDHVA(SEQ IDNO:60)。在一些实施方式中，轻链CDR3氨基酸序列可以包含QVWDSSSDHVW(SEQ ID NO:63)。
公开的人抗体分子可以包含包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链CDR1、包含SEQID NO:6的氨基酸序列的重链CDR2、包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链CDR3、包含SEQID NOs:5、21、24、27、30、33、36、39或66的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NOs:7、42或45的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NOs:15、48、51、54、57、60或63的氨基酸序列的轻链CDR3。典型的抗体分子包含包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链CDR1、包含SEQ IDNO:6的氨基酸序列的重链CDR2、包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链CDR3和
包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的轻链CDR3；
包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的轻链CDR3；
包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的轻链CDR3；
包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的轻链CDR3；
包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链CDR3；或
包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1、包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的轻链CDR3；
其中CDR的氨基酸残基的位置是根据AbM确定的。
公开的抗体分子可以包含包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％一致的氨基酸序列的重链可变区和包含与SEQ ID NO:17、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58、61、64或67的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区，其中变异(即至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致性)发生在CDR序列范围之外。表1和表15提供了典型的抗体分子。
表1.抗体链/结构域组合物总结
*在这些序列中每个的小写字母“b”是指CDR位置的Kabat编号。Kabat编号允许可变大小的CDRs通过使用字母数字编号表示在某些位置的氨基酸插入。在这些CDR序列中，还存在其它的氨基酸，它们被编号为位置95a和95b(分别对应于Kabat的位置95A和95B)。因此，对于抗体3A5.276，例如，根据Kabat数字，相对于3A5.040VL链，H95bS指示在位置95B的组氨酸(“H”)到丝氨酸(“S”)的突变。因此，在这里使用小写字母符号以区分Kabat编号，与在指示的Kabat位置的突变分开。
在一些实施方式中，公开的抗体分子可以包含包含与SEQ ID NO:16的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％、99％或100％一致的氨基酸序列的重链可变区，和
包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
包含与SEQ ID NO:31的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
包含与SEQ ID NO:34的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
包含与SEQ ID NO:37的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
包含与SEQ ID NO:40的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
包含与SEQ ID NO:43的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
包含与SEQ ID NO:46的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
包含与SEQ ID NO:49的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
包含与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
包含与SEQ ID NO:55的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
包含与SEQ ID NO:58的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
包含与SEQ ID NO:61的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
包含与SEQ ID NO:64的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；或
包含与SEQ ID NO:67的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
其中变异(即至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致性)发生在CDR序列之外。
公开的抗体分子可以包含在骨架和/或恒定区的一个或多个突变、缺失或插入。在一些实施方式中，IgG4抗体分子可以包含S228P突变。S228位于IgG4抗体分子的铰链区。丝氨酸(S)到脯氨酸(“P”)的突变用来稳定IgG4的铰链，并且阻止在体内和体外的Fab臂的交换。在一些实施方式中，抗体分子可以包含一个或多个修饰，该一个或多个修饰增加抗体分子在体内的半衰期。例如，在某些实施方式中，该抗体可以包含M252Y突变、S254T突变和T256E突变(统称为“YTE”突变)。M252、S254和T256位于重链的CH2结构域内。这些残基分别到酪氨酸(Y)、苏氨酸(T)和谷氨酸(“E”)的突变保护抗体分子不被溶酶体降解，从而提高抗体分子的血清半衰期。根据其他抗体的实例，设想在抗IL-5抗体中引入YTE突变可以提供足够的血清半衰期的延长，从而允许给药间隔为3个月或更长的给药方案。在一些实施方式中，抗体分子可以包含重链C末端赖氨酸残基的缺失。当由哺乳动物细胞产生抗体分子时，重链C末端赖氨酸残基的缺失减少抗体分子的异质性。在一些实施方式中，抗体分子可以包含突变、缺失或插入的组合。例如，在一些方面，公开的抗体分子可以包含S228P突变和重链C末端赖氨酸残基的缺失。包含SEQ ID NO:18的重链序列的公开的抗体分子，例如，包含S228P突变和重链C末端赖氨酸残基的缺失。在一些方面，公开的抗体分子可以包含S228P突变、M252Y突变、S254T突变、T256E突变和重链C末端赖氨酸残基的缺失。例如，包含SEQIDNO:20的重链的3A5.046抗体包含S228P突变、M252Y突变、S254T突变、T256E突变和重链C末端赖氨酸残基的缺失。
抗体分子可以包含IgG1或IgG4重链恒定区和lambda轻链恒定区。在一些实施方式中，该抗体分子包含IgG1重链恒定区和lambda轻链恒定区(例如，抗体3A5)。在一些实施方式中，该抗体分子包含IgG4重链恒定区和lambda轻链恒定区。
公开的抗体分子可以包含包含与SEQ ID NOs:18或20的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的重链和包含与SEQ ID NO:19、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59、62、65或68的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链，其中变异(即至少90％一致性)发生在CDR序列之外。表1和表15提供了典型的抗体分子。在一些实施方式中，该抗体分子可以包含与SEQ ID NO:18的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的重链，和
包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
包含与SEQ ID NOs:23的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
包含与SEQ ID NO:32的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
包含与SEQ ID NOs:35的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
包含与SEQ ID NOs:38的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
包含与SEQ ID NO:41的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
包含与SEQ ID NO:44的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
包含与SEQ ID NOs:47的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
包含与SEQ ID NOs:50的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
包含与SEQ ID NOs:53的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
包含与SEQ ID NO:56的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
包含与SEQ ID NO:59的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
包含与SEQ ID NO:62的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
or包含与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
包含与SEQ ID NOs:68的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
其中变异(即至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致性)发生在CDR序列之外。
公开的抗体分子可以包含包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的重链和包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链，其中变异(即至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致性)发生在CDR序列之外。
在一些实施方式中，该抗体分子为全长抗体分子(具有或不具有重链C末端赖氨酸残基的缺失)。在其他实施方式中，该抗体分子是抗原结合片段。合适的抗体结合片段包括但不限于Fab片段、Fab2片段或单链抗体。
该抗体分子可以具有下列一种或多种特性：
a.结合人IL-5，按照通过表面等离子体共振测定的平衡亲和常数(KD)为至少约40pM；
b.减少IL-5与IL-5受体的结合；
c.具有至少约20天的血清半衰期；或者
d.结合人和食蟹猕猴IL-5，而不结合老鼠、大鼠或豚鼠IL-5。
还提供了包括任何公开的抗体分子的药物组合物。
还提供了编码任何公开的抗体分子的核酸分子和包括公开的核酸分子的载体。
进一步提供了经转化用于表达任何公开的抗体分子的细胞。
方法和用途
公开的抗体分子或包括该公开的抗体分子的药物组合物可被用于治疗嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞增多症、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞性食管炎。本文公开的任何抗体分子特征同样适用于在公开的方法和用途中使用的抗体。
本文公开的是治疗患有嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞增多症、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞性食管炎的受试者的方法，该方法包含向受试者施用治疗有效量的任何本文公开的的抗体分子或包括该抗体分子的药物组合物，用于治疗嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞增多症、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞性食管炎。
还提供了治疗有效量的任何公开的的抗体分子或包括该抗体分子的药物组合物在治疗嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞增多症、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞性食管炎中的用途。
还提供了任何公开的的抗体分子或包括该抗体分子的药物组合物在制备用于治疗嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞增多症、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞性食管炎的药物中的用途。
实例
提供了下列实例以进一步描述本文公开的一些实施方式。该实例旨在说明而不限制公开的实施方式
抗人IL-5抗体的生成
抗人IL-5抗体是从转基因大鼠(OMT)(人V基因被克隆到它们的基因组中)得到的，并且OMT产生具有人V结构域和大鼠Fc结构域的抗体。简单地说，转基因大鼠在21天内(在第0、7、14、21天)用编码IL-5的DNA进行4次基因免疫并且在免疫方案的第28天用重组人IL-5进行增强。血清抗体滴度是通过ELISA试验法利用重组人IL-5在免疫方案的第0天和第38天测定的。简单地说，将来自每只动物的血清用PBS 1％BSA稀释并且利用包被有1μg/ml人IL-5或作为对照的BSA的ELISA板进行测试。使用10μg/ml的山羊抗大鼠IgG R澡红蛋白缀合物(goat anti-rat IgG R-phycoerythrin conjugate)(SouthernBiotech，#3030-09)作为二级抗体(secondary antibody)。根据这些血清滴度选择特定的动物用于杂交瘤融合。
为了生成产生人IL-5单克隆抗体的杂交瘤，将来自免疫动物的脾细胞和/或淋巴结细胞分离，并与P3X63Ag8.653非分泌性小鼠骨髓瘤细胞(ATCC、CRL-1580)融合。细胞以大约1×105个细胞/mL的浓度平铺在平底微量滴定板中，然后在含有10％胎儿克隆血清和1×HAT(Sigma)的选择性培养基中孵育两周。杂交瘤通过通过连续传代在96孔板(96孔1～4阶段)中经历四次介质改变进行扩增，然后进入T25并且最终进入T75烧瓶中。
在杂交瘤扩增过程期间，对来自杂交瘤克隆的上清液进行了检测，最初在全细胞ELISA中利用GPI-锚定的人IL-5转染的细胞，然后在ELISA中利用重组人IL-5ELISA检测法(重组人IL-5ELISA检测法如上所述)。将放大过程中存活到T75阶段的并且给出高于这两种检测法中结合的给定阈值的信号的杂交瘤进行冷冻，作为细胞微球，用于Ig v结构域的克隆和测序。按照这些筛选步骤，选择了大约20个产生嵌合IgGs的杂交瘤，用于克隆。
来自候选嵌合IgGs的人v结构域是通过从杂交瘤细胞微球、v结构域的PCR扩增、亚克隆和DNA测序生成cDNA分离的。根据这些杂交瘤的测序，得到了总计大约35个重链和轻链的组合。将所有抗体克隆到哺乳动物表达载体中，并瞬时转染到HEK-293细胞中。抗体是利用标准蛋白A纯化方案纯化的。
抗体的功能测试和特性鉴定
首先针对人IL-5ELISA中的特异性，检测了选择的呈IgG1形式的抗体。简单地说，将抗体利用PBS 0.1％BSA稀释并且利用包被有1μg/ml人IL-5或不相关的对照蛋白的ELISA板测试。使用辣根过氧化物酶缀合的抗IgG抗体作为二级抗体。
在人依赖IL-5的细胞增殖试验法中利用人TF-1.6G4(人红血球细胞系TF-1的衍生物)细胞，对显示免疫特异性地结合人IL-5的抗体的效力进行了分等级。将TF-1.6G4细胞系进行亚克隆并且针对IL-5Rα的增强的表面表达和对IL-5的一贯增殖响应进行筛选。将TF-1.6G4细胞系按照用于TF-1人红细胞白血病细胞系(ATCC:CRL-2003)的标准条件保持在培养物中。简单地说，将每个抗体的稀释物在45pM人IL-5和5x 104TF-1.6G4细胞/孔存在的情况下进行孵育，孵育48h，对细胞增殖利用发光细胞活力试验法(Luminescent Cell Viability Assay)(Promega,WI)进行测定。就所有增殖和抑制曲线利用GraphPad Prism 6(6.04版)软件中的三或四参数剂量-响应模型进行拟合。表2总结了这些结果。
表2.呈IgG1形式的初始测试组的筛选和特性鉴定的总结
在表2中，按照TF1.6G4试验效力对测试结果分等级。初始测试组是根据效力、亲和力、IL-5Rα抑制和序列倾向(sequence liabilities)(免疫原性和开发性)选择的。
使用Biacore试验法测定测试抗体对重组人IL-5的亲和力和它们的抑制IL-5Rα结合人IL-5的效力。表2总结了这些结果。测试抗体对人IL-5的结合亲和力(KD；图6)是在Biacore T200系统(GE Healthcare)上通过利用选择的纯化IgG抗体包被Biacore系列S传感器芯片蛋白A(Biacore Series S Sensor Chip Protein A(GE Healthcare)至75RU的捕获水平测定的，然后，从1μg/ml开始，将重组人IL-5以60μL/分钟进行注射，跨越7级双重连续稀释范围(7-step two-fold serial dilution range)。所有实验均利用HBS-EP+缓冲液(GE Healthcare)进行。最终传感图是双参考的(从对照(没有包被抗体的蛋白A表面)流细胞值以及缓冲液空白中减去测试流细胞值)。结合常数是通过将1:1Langmuir结合模型拟合成双参考的传感图确定的。
为了确定每个测试抗体是否抑制IL-5与IL-5Rα的结合，使用了Biacore T200或Biacore 3000系统(GE Healthcare)。首先将Biacore CM5传感器芯片利用Fab捕获试剂盒(GE Healthcare)根据制造商的说明在两个相邻(测试和对照)流动池上进行衍生化。使用这个表面捕获单个测试流动池上的每个纯化的IgG测试抗体。然后，将重组人IL-5(以5μg/ml)或缓冲液空白注射穿过测试和对照流动池，用以分别浸透测试流动池表面和对照，用于非特异性联合IL-5。在测试流动池上进行纯化的IgG测试抗体(以10μg/ml)或缓冲液空白的第二次注射，以分别阻断游离的IL-5结合位点和对照，用于使IgG测试抗体与Fab捕捉抗体解离。
使用随后注射IL-5Rα-Fc(R&D Systems)(以5或20μg/mL)或缓冲液空白穿过两个流动池确定IgG测试抗体是否阻断IL-5与IL-5Rα或对照之间的相互作用，用于使IgG抗体与Fab捕获抗体在这个步骤期间解离。在注射IL-5Rα时，抑制IL-5结合IL-5Rα的抗体显示了显著降低的信号(表2)。用上面详述的方式，使用三参考减法分析数据。所有数据从Biacore评估软件输出，并在Excel(Microsoft)软件中减去。所有实验均使用HBS-EP+缓冲液(GEHealthcare)运行。
在这些结果的基础上选择了一较小组的测试抗体(表2中的3A5、5H11和2B4)。这些抗体被重新形成为人IgG4并且用相同的试验法进行了测试。将抗体3A5的IgG4版本(最初为IgG1)指定为3A5.001。证明了这个全人抗体具有与呈IgG1形式的最初测试3A5同等的效力(图1)。
抗体3A5.001的变异体(指定为3A5.040)是利用特定氨基酸取代(VH：S[68]T、N[82A]S；VL：S[2]Y、I[3]V、Y[92]D，其中方括号内的残基表示Kabat位置)制备的，该特定氨基酸取代被引入V-结构域区域中以去除预测的T细胞表位。在TF-1.6G4试验法中，抗体3A5.040被证明具有与它的亲本抗体，3A5.001(图2)同等的效力。
抗体3A5.040的CDR扫描
抗体3A5.040变异体的生成—抗体3A5.040的单突变变异体是通过取代轻链CDR1
(CDR-L1)、轻链CDR2(CDR-L2)、重链CDR1(CDR-H1)和重链CDR2(CDR-H2)(如由AbM命名法所定义的)中的每个氨基酸位置处的九个典型氨基酸(A、S、L、Y、D、Q、K、H、W)基团中的一个制得的。抗体变异体还通过取代轻链CDR3(CDR-L3)、重链CDR3(CDR-H3)中的每个CDR氨基酸位置处的，和可变重链中的Kabat位置93和94处的十个典型氨基酸(A、S、L、Y、D、Q、K、H、W、P)基团中的一个制得的。生成的所有单突变抗体变异体的完整列表分别如图3(可变重链)和图4(可变轻链)所示。
载体表达抗体的构建—可变区变异体是通过将氨基酸序列反翻译成DNA序列生成的，随后，该DNA序列通过组装合成的寡核苷酸来重新合成。将可变重(VH)变异体亚克隆到含有人恒定区的哺乳动物表达载体中，以产生全长抗体重链(人IgG4重链CH1、铰链、CH2和CH3结构域)。同样地，将可变轻(VL)变异体亚克隆到含有人lambda轻链恒定区的哺乳动物表达载体中，以产生全长抗体lambda链。
抗体变异体的表达—抗体是通过将编码抗体重链和轻链的单独表达载体共转染到细胞(Life Technologies,Carlsbad,CA)中产生的。在体系中，将每个单突变链与亲本链配对，用于蛋白表达。对每次20mL转染来说，在20mL的表达培养基中需要3.6×107个细胞。在转染前一天，将细胞以0.9×106个活细胞/mL的密度接种，并在以200rpm旋转的轨道式震荡器上在37℃、含8％CO2的潮湿空气气氛中孵育过夜。在转染当天，使用自动细胞计数器测定细胞数量和存活率。只使用含有>98％活细胞的培养物。对于每次20mL转染来说，质粒DNA复合物是通过将10μg的重链DNA和10μg的轻链DNA用(Life Technologies，Carlsbad，CA)I还原血清培养基(Reduced SerumMedium)(Cat.no.31985-062)稀释成总体积为1.0mL制备的。将54μL的试剂(Life Technologies,Carlsbad,CA)用I培养基稀释成总体积为1.0mL。将两个小瓶轻轻混合并且在室温下孵育5分钟。孵育后，将稀释的DNA与稀释的试剂和试剂混合物混合并且在室温下再孵育20分钟，以使试剂复合物形成。孵育后，将2mL的试剂复合物加入到每个50mL生物反应器管(TPP TechnoPlastic Products AG)中。将2mL的(Life Technologies,Carlsbad,CA)I培养基加入到阴性对照管中，代替试剂复合物。将细胞在以200rpm旋转的轨道式震荡器上在含8％CO2的潮湿空气气氛中在37℃培养箱中孵育。转染后大约16-18小时，将100μL的转染增强子1和1.0mL的转染增强子2加入到每个生物反应器。将上清液在转染后约48小时进行收集。
抗体变异体的纯化—将每个抗体变异在20或100mL的细胞培养物中在细胞中进行表达。将培养物在50mL falcon管中以3000x g离心20分钟，并且使用0.22μm过滤器过滤上清液。将上清液使用Gilson ASPEC GX274机器人进行纯化。简单地说，将装有1.2mL MABSELECT蛋白A树脂(GE Healthcare)的SPE盒(Agilent,12131014)用3个柱体积的1X PBS进行预平衡。上清液流过柱，然后用4ml 1X PBS冲洗。将每个柱用9ml的1M柠檬酸(pH 2.9)进行冲洗。将抗体利用2ml 0.1M柠檬酸(pH 2.9)进行洗脱。利用PD-10柱(GEHealthcare)将抗体脱盐至 PBS(5mM KH2PO4，3mM Na2HPO4.2H2O,145.4mM NaCl(pH～5.8))中。
通过Biacore测定上清液中3A5.040变异抗体的滴度—将含有来自细胞表达的抗体的上清液利用蛋白A系列S芯片(Protein A series S chip)在Biacore T200上进行分析，以测定它们的滴度并相对于亲本抗体3A5.040对它们分等级。将每个上清液样品利用运行缓冲液(running buffer)(1x HBS-EP+,350mM NaCl)进行稀释并且通过以60μL/分钟注射到流动池上(FC)2捕获。最终捕获水平(以响应单位(response units))(RUs)是在FC 2-1上通过从注射后一个5秒减去循环开始后报告点5秒测量的。表面是通过每4个循环将50mM NaOH在12秒内以60μL/分钟的流速注射到FC 1和2上再生的。每次再生后，将表面和传感图通过注射运行缓冲液稳定120秒。由于以这种方式筛选的抗体数量众多，因此运行了多批次。
针对每个上清液样品得到的捕获水平(以Biacore响应单位“RU”)是通过将针对每个30秒注射得到的值乘以上清液稀释因子调整的，使得稀释成跨越不同实验运行的不同程度的上清液之间的上清液之间能够比较。将每个突变的相对抗体表达水平(滴度)与特定批次3A5.040上清液比较，(表3)利用下面的公式，：
(30秒注射的调整的3A5.040参考RU/30秒注射的调整的变异抗体)x 100＝亲本抗体的比例滴度(％3A5.040滴度)
公式1
与亲本3A5.040抗体相比，具有较高滴度的变异抗体具有“％3A5.040滴度”值>100％，具有较低滴度的变异抗体，值<100％。这使得识别可能具有比亲本抗体3A5.040表达水平更高的变异抗体成为可能。一些变异体的滴度不是通过上清液样品的Biacore分析测定的，而是按上述方法表达和纯化的并且它们的纯化产率是通过分光光度分析(A280)测定的，然后与亲本3A5.040抗体进行比较(表5)。
通过Biacore测定3A5.040变异抗体IL-5结合动力学—将含有来自细胞中的表达的抗体的上清液或纯化的抗体利用蛋白A序列S芯片在Biacore T200系统上(GEHealthcare)进行分析，以确定它们的对重组人IL-5的结合亲和力并且相对于亲本抗体3A5.040对它们分等级。
将每个抗体用运行缓冲液(1x HBS-EP+,350mM NaCl)进行稀释，并且以60μL/分钟进行捕获，直到FC 2上大约50RU。然后，将表面和传感图通过注射运行缓冲液稳定120秒。将重组人IL-5(5μg/mL)或运行缓冲液注射到FC 1和2上，以60μL/分钟的流速持续70秒。允许IL-5在运行缓冲液中解离300秒。表面是通过将50mM NaOH在12秒内以60μL/分钟的流速注射在FC 1和2上再生的。将缓冲液在60秒内以60μL/分钟的流速注射到FC 1和2上以进一步清理漂移(drift)。将表面利用遍布在FC 1和2上的运行缓冲液稳定300秒。每次运行，将含有亲本3A5.040抗体的并且利用每个批次转染的上清液运行大约25个循环。将3A5.040的纯化样品和IgG4lambda同种型对照利用每个批次运行，作为批次间分析可变性的测量。由于以这种方式筛选的抗体数量众多，因此运行了多批次。
数据是双参照的(从流动池1和缓冲液空白中减去流动池2)，并且利用Biacore评价软件将传感图拟合成1:1Langmuir结合模型。在整个运行过程中，对每个3A5.040上清液样品计算kd(解离率)值，将这些值进行平均以得到参考kd，除了运行2.1之外，运行2.1中只有一个3A5.040上清液样品(表3和表6-11)。将每个上清液抗体的计算kd值与3A5.040平均参考kd进行比较，利用下面的公式：
(3A5.040参考kd/变异抗体kd)x 100＝亲本抗体的比例kd(％3A5.040kd)
公式2
与亲本3A5.040抗体相比，具有较低的kd(较慢的解离率)的变异抗体具有“％3A5.040kd”值>100％并且具有较高的kd(较快的解离率)的变异抗体，“％3A5.040kd”值<100％。这使得识别可能改善IL-5结合动力学因而改善亲本抗体3A5.040的功能的变异抗体成为可能。对于仅制得纯化蛋白的变异体(表6)来说，使用这些纯化抗体如上所述一式三份地进行Biacore动力学分析，并且来自每个一式三份分析的平均值用于进行比例kd计算(如上所述)，(表4和表8-11)。
表5选择的3A5.040抗体变异体的纯化蛋白表达率
表达载体构建
核苷酸序列可影响基因表达和后续蛋白表达水平。针对3A5.046的最佳表达，对几种不同的核苷酸序列进行了检测。将这些序列总结在下表中。
表12.核苷酸序列
基因名称 SEQ ID Nos:
3A5.046VH SEQ ID NO:69
3A5.046VL SEQ ID NO:71
3A5.046HC恒定区 SEQ ID NO:70
3A5.046LC恒定区 SEQ ID NO:72
通过SPR测量抗体3A5.046对重组人IL-5的亲和力
利用Biacore T200系统(GE Healthcare)，对抗体3A5.046对重组人IL-5的亲和力进行了测定。简单地说，根据制造商的建议，将市售小鼠抗人IgG抗体(Thermo Scientific)结合到Biacore CM5芯片(GE Healthcare)上的两个相邻(对照和测试)流动池上。将3A5.046抗体以低密度(大约125RU)在测试流动池表面上捕获，并且将重组人IL-5的稀释液或缓冲液空白以30μL/分钟注射在测试和对照流动池上(图6，表13)。
最终的传感图是双参照的(从对照(抗人IgG连接的表面，没有包被抗体)流动池值以及缓冲液空白中减去测试流动池值)。利用Biacore评价软件，将从人IL-5的注射(以1.25、0.625、0.313和0.156μg/mL)中减去的传感图拟合成1:1Langmuir结合模型，以根据一式两份试验法确定结合常数(表13)。
表13.来自3A5.046抗体结合重组人IL-5的多浓度Biacore动力学分析的动力学常数，浓度为2.5、1.25、0.625、0.313和0.156μg/mL。
这些结果证明了抗体3A5.046对重组人IL-5具有较高的亲和力。
TF-1.6G4细胞系增殖试验中，3A5.046的效力与美泊利单抗(mepolizumab)进行比较
在TF-1.6G4细胞系增殖试验中，分别检测3A5.046和美泊利单抗。3A5.046和美泊利单抗抑制人IL-5增殖，平均IC50分别为13.8pM和534pM(参见表14和图7A)。在TF1.6G4细胞系上，两种抗体均表现出食蟹猕猴IL-5的抑制作用(图7B)，平均IC50，3A5.046为43.8pM，美泊利单抗为584pM。
表14
利用本发明的抗IL-5抗体经由ELISA检测来自原代细胞的天然IL5
使用抗体3A5作为夹心ELISA中的捕获试剂。与市售可得的检测抗体(TRFk5R；R&Dsystems，#MAB405)配对，可对增敏缓冲液样品(spiked buffer samples)中量化的重组IL-5含量水平(图8)进行测定。然后将这个方法应用于检测原代细胞分泌的天然IL-5。刺激来自四种供体的CD4+T细胞以分泌IL-5。然后，利用夹心ELISA，利用抗体3A5作为捕获试剂对IL-5含量水平进行测定。四种供体T细胞中的三种响应T细胞刺激，并且在细胞培养物上清液中具有可检测IL-5含量水平(图8)。在从原代人供体CD4+T分泌的人IL-5上利用抗体3A5.046作为捕捉剂进行了类似研究，并且得到的结果与用抗体3A5得到的结果一致(数据未显示)。
抗IL-5抗体抑制嗜酸性粒细胞分化
使用利用CD34+脐带血细胞的存活试验法评估抗IL-5抗体抑制骨髓祖细胞依赖IL-5分化成嗜酸性粒细胞的能力，并且评估抗IL-5抗体抑制表型成熟的嗜酸性粒细胞存活的能力。在IL-5处理的对照细胞中，表型成熟的嗜酸性粒细胞在第28天是主要群体(图9，图中阴影区域)。抗体3A5.046能够抑制CD34+脐带血细胞(与IL-5一起孵育28天)分化成嗜酸性粒细胞。与美泊利单抗体相比，抗体3A5.046是更强的IL-5介导的嗜酸性粒细胞分化的抑制剂(图9)。
X射线晶体学分析
通过X射线晶体学研究了抗体3A5.046Fab与重组人IL-5之间的复合物的分子结构。为了准备X射线晶体学实验。将3A5.046利用木瓜蛋白酶进行酶切，木瓜蛋白酶在铰链区切开完整的抗体，分离成Fc和Fab结构域。将3A5.046Fab利用标准蛋白A亲和层析法进行纯化，并且与重组非糖基化人IL-5络合。3A5.046Fab：利用标准尺寸的排阻色谱将人IL-5复合物进行纯化，用于结晶实验。该复合物设置为不同浓度，进入市售可得的稀疏矩阵结晶筛，用于结晶条件的广泛取样。对从稀疏矩阵结晶筛提供复合物的晶体的任何“命中(hit)”条件进行优化，以按照需要改善晶体形态学和晶体衍射。
将3A5.046Fab：人IL-5复合物的晶体进行收集，在液氮中快速冷冻，然后运送到同步加速器设备用于衍射测试和数据收集。晶体衍射测试是在同步加速器上进行的，该同步加速器封装有高能X射线微束线，用于产生高分辨率的衍射。用这种方法，收集了3A5.046Fab：人IL-5复合物晶体的X射线衍射数据。复合物的初始结构模型是利用已公开的IL-5和Fab分子结构作为模板，采用标准分子置换技术得到的。3A5.046Fab和人IL-5复合物的最终结构是通过该结构模型的迭代寻优得到的，直到拟合的错误(errors of fitting)好于30％(0.3的最终Rfree)并且化学键合参数(例如，键长和键角的分布、立体化学和氢键)在可接受的范围内。
抗体3A5.046结合来自非人模型物种的IL-5的特性鉴定
通过Biacore试验，利用T200系统(GE Healthcare)对抗体3A5.046与重组细胞因子人IL-5、大鼠IL-5、小鼠IL-5和豚鼠IL-5的结合进行了测试。选择这组非人IL-5s来代表临床前开发中使用的主要动物模型物种。分别将同种型对照抗体(IgG4)和抗体3A5.046利用标准的胺偶联方法(amine coupling methods)固定在在Series S CM5芯片(GEHealthcare)的流动池1和2上。将细胞因子用HBS-EP+运行缓冲液(GE Healthcare)稀释成1和10μg/ml并且注射穿过流动池1和2。对于双参考来说，纳入穿过流动池1和2的只含有缓冲液的注射。数据分析是利用Biacore T200评价软件进行的。最终的传感图是双参考的(从对照流动池值以及缓冲液空白中减去测试流动池值)。
发现抗体3A5.046与人IL-5和食蟹猕猴IL-5结合，但不与小鼠IL-5、大鼠IL-5或豚鼠IL-5结合(图10A-图10E)。这表明3A5.046可用于食蟹猕猴临床前模型。
抗体3A5.046不与其他与IL-5密切相关的人细胞因子结合
通过Biacore试验，利用T200系统(GE Healthcare)对抗体3A5.046与重组人细胞因子IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、生长激素(GH)的结合进行了测试。这个代表性的紧密相关的人细胞因子的组是根据它们的与人IL-5结构和功能相似性选择的。分别将同种型对照抗体(IgG4)和抗体3A5.046利用标准的胺偶联方法固定在Series S CM5芯片(GE Healthcare)的流动池1和2上。将细胞因子用HBS-EP+运行缓冲液(GE Healthcare)稀释成1和10μg/ml并且注射穿过流动池1和2。对于双参考来说，纳入穿过流动池1和2的只含有缓冲液的注射。数据分析是利用Biacore T200评价软件进行的。最终的传感图是双参考的(从对照流动池值以及缓冲液空白中减去测试流动池值)。
发现抗体3A5.046只与人IL-5结合，不与人细胞因子IL-2、IL-3、IL-4、GM-CSF、M-CSF或GH结合(图11A-图11D)，因此，表明3A5.046对人IL-5具有高特异性。
在猪蛔虫诱导的食蟹猕猴气道嗜酸性粒细胞增多模型(Ascaris suum-inducedcynomolgus monkey airways eosinophilia model)中评价抗体3A5.046
对抗体3A5.046利用Hart,T.K.,et al.,Preclinical efficacy and safety ofmepolizumab
(SB-240563)a humanized monoclonal antibody to IL-5,in cynomolgusmonkeys.J Allergy Clin Immunol,2001.108(2):p.250-7中描述的急性气道嗜酸性粒细胞增多的猪蛔虫食蟹猕猴猕猴模型进行了测试。
通过皮肤内注射猪蛔虫(A.suum)激发，评估以前已经对猪蛔虫(Ascaris suum)敏感的16只雌性食蟹猕猴(cynomolgus macaques)的保留敏感性水平。根据对激发的皮肤水疱响应(skin wheal response)，选择了这些动物中的14只参与研究，并随机分为两组，每组n＝7只。皮内注射皮肤水疱测试后两周，收集基线血液和支气管肺泡灌洗液(BALF)样品(第8天)。基准样品收集后大约24小时，按盲方式，将动物用安慰剂(包括具有200mM精氨酸和25mM组氨酸的含水缓冲液pH 6.3)或抗体3A5.046(10mg/kg静脉注射，在具有200mM精氨酸和25mM组氨酸的pH 6.3的含水缓冲液中)治疗(第七天)。利用安慰剂或抗体治疗后一周，进行第二次皮内注射猪蛔虫激发，并且通过递送经由PARI LC喷雾器施用的等量的猪蛔虫提取物(Greer Laboratories Inc.；5mg/ml在无菌水中)，对所有动物给予猪蛔虫吸入激发(A.suum inhalation challenge)(第0天)。在激发后15分钟测量皮肤水疱直径。在猪蛔虫吸入激发后两天，收集血液和BALF样品。从第10天开始直到第45天，每周收集额外血液样品，用于血液学终点和PK分析。
第一次和第二次皮内注射猪蛔虫激发之间皮肤水疱响应不存在显著差异。在BALF中，所有动物都显示了嗜酸性粒细胞因猪蛔虫激发而增加，但在用抗体3A5.046治疗的动物中，这个增加微不足道。在猪蛔虫激发后48小时，用抗体3A5.046治疗的动物的BALF中的嗜酸性粒细胞明显少于安慰剂治疗的动物(p<0.01；Mann-Whitney测试；图12)。
到激发后第10天，猪蛔虫激发还导致安慰剂治疗的动物中的血液嗜酸性粒细胞较基线显著增加(图13A)。利用抗体3A5.046治疗导致血液嗜酸性粒细胞显著降低至基线以下水平(图13A)，并且在初始给药后至少52天期间内，血液嗜酸性粒细胞数量保持下降(图13B)。
综上所述，在激发后48小时，利用3A5.046的治疗显著降低了猪蛔虫诱导的气道嗜酸性粒细胞增多，并且在单次静脉注射(IV)10mg/kg给药后至少52天内显著降低了血液嗜酸性粒细胞，到低于基线水平。
抗体在气道嗜酸性粒细胞增多的人源化IL-5大鼠模型中的功能的研究
链格孢(Alternaria alternata)(链格孢属(Alternaria))是一种真菌过敏原，已知可引发人哮喘，并可在啮齿动物中引起嗜酸性粒细胞增多和类似哮喘的症状。当受到链格孢属激发时，人源化IL-5敲入大鼠(其中大鼠IL-5被人IL-5取代的动物)显示了来自肺的支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞水平升高(图14)。
将链格孢属悬浮液的单气管滴注向人源化IL-5大鼠施用，并且在链格孢属施用后2、3或4天收集血液和BALF样品。通常地，在这个模型中，嗜酸性粒细胞在BALF样品中显著增加，并且在血液样品中可能增加或不变。测试抗体是在用链格孢属诱导嗜酸性粒细胞增多之前施用的，并且评估它们的降低BALF和血液中嗜酸性粒细胞数量的能力。
本领域技术人员将会领会到可以对本发明的优选实施方式进行很多改变和修改，而且这些改变和修改可以在不脱离本发明精神的情况下进行。因此，意图是所附的权利要求书包括所有属于本发明的真正精神和范围内的同等变化。
本文件引用或描述的每一项专利、专利申请和出版物的披露均以其整体通过援引并入本文。
表15.序列
具体实施方式
下面列出的具体实施方式旨在补充而不是代替或取代前面的描述。
具体实施方式1.一种人抗体分子，该人抗体分子免疫特异性地结合人IL-5，按照通过表面等离子体共振测定的平衡亲和常数(KD)为至少约40pM。
具体实施方式2.免疫特异性结合人IL-5的人抗体分子，该抗体分子包含：
包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链CDR1，包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链CDR2，包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链CDR3，包含SEQ ID NOs:5、21、24、27、30、33、36、39或66的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NOs:7、42或45的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NOs:15、48、51、54、57、60或63的氨基酸序列的轻链CDR3。
具体实施方式3.根据具体实施方式1或2所述的抗体分子，其中该抗体分子包含包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链CDR1，包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链CDR2，包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链CDR3，以及
a.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1,包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2，和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
b.包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
c.包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
d.包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
e.包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
f.包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
g.包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
h.包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
i.包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
j.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
k.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
l.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的轻链CDR3；
m.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的轻链CDR3；
n.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的轻链CDR3；
o.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的轻链CDR3；
p.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链CDR3；或
q.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的轻链CDR3；
其中CDR的氨基酸残基位置是根据AbM确定的。
具体实施方式4.根据具体实施方式3所述的抗体分子，其中该抗体分子包含包含SEQID NO:4的氨基酸序列的重链CDR1，包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链CDR2，包含SEQID NO:8的氨基酸序列的重链CDR3，包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3。
具体实施方式5.根据前面的具体实施方式的任一个所述的抗体分子，其中该抗体分子包含包含与氨基酸序列SEQ ID:16至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的重链可变区和
a.包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
b.包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
c.包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
d.包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
e.包含与SEQ ID NO:31的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
f.包含与SEQ ID NO:34的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
g.包含与SEQ ID NO:37的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
h.包含与SEQ ID NO:40的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
i.包含与SEQ ID NO:43的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
j.包含与SEQ ID NO:46的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
k.包含与SEQ ID NO:49的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
l.包含与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
m.包含与SEQ ID NO:55的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列；
n.包含与SEQ ID NO:58的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
o.包含与SEQ ID NO:61的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
p.包含与SEQ ID NO:64的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；或
q.包含与SEQ ID NO:67的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区。
具体实施方式6.根据前面的具体实施方式的任一个所述的抗体分子，其中该抗体分子包含包含与SEQ ID:16的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的重链可变区，和包含与SEQ ID:17的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区。
具体实施方式7.根据前面的具体实施方式的任一个所述的抗体分子，其中该抗体分子包含：
a.S228P突变；
b.M252Y突变，S254T突变和T256E突变；
c.重链C末端赖氨酸的缺失；
d.a到c的任意组合。
具体实施方式8.根据具体实施方式7所述的抗体分子，其中该抗体分子包含S228P突变和重链C末端赖氨酸的缺失。
具体实施方式9.根据具体实施方式7所述的抗体分子，其中该抗体分子包含S228P突变、M252Y突变、S254T突变和T256E突变和重链C末端赖氨酸的缺失。
具体实施方式10.根据前面的具体实施方式的任一个所述的抗体分子，其中该抗体分子包含IgG4重链恒定区和lambda轻链恒定区。
具体实施方式11.根据前面的具体实施方式的任一个所述的抗体分子，其中该抗体分子包含包含与SEQ ID:18的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的重链，和
a.包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
b.包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
c.包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
d.包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
e.包含与SEQ ID NO:32的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
f.包含与SEQ ID NO:35的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
g.包含与SEQ ID NO:38的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
h.包含与SEQ ID NO:41的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
i.包含与SEQ ID NO:44的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
j.包含与SEQ ID NO:47的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
k.包含与SEQ ID NO:50的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
l.包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
m.包含与SEQ ID NO:56的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
n.包含与SEQ ID NO:59的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
o.包含与SEQ ID NO:62的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
p.包含与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；或
q.包含与SEQ ID NO:68的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链。
具体实施方式12.根据具体实施方式1-10的任一个所述的抗体分子，其中该抗体分子包含包含与SEQ ID NO:20的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的重链，和包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链。
具体实施方式13.根据具体实施方式2或具体实施方式3所述的抗体分子，其中该抗体分子是Fab片段、Fab2片段或单链抗体。
具体实施方式14.根据前面的具体实施方式的任一个所述的抗体分子，其中该抗体分子具有一个或多个下列特性：
a.降低IL-5与IL-5受体的结合，
b.具有至少约20天的血清半衰期，或
c.结合人和食蟹猕猴IL-5，但不结合小鼠、大鼠或豚鼠IL-5。
具体实施方式15.根据具体实施方式2所述的抗体分子，其中该抗体分子结合人IL-5，按照通过表面等离子体共振测定的平衡亲和常数(KD)为至少约40pM。
具体实施方式16.一种药物组合物，其包含具体实施方式1到15的任何一个所述的抗体分子。
具体实施方式17.一种核酸分子，该核酸分子编码具体实施方式1到15的任何一个所述的抗体分子。
具体实施方式18.一种载体，该载体包含具体实施方式17所述的核酸分子。
具体实施方式19.一种细胞，该细胞经转化用来表达具体实施方式1到15的任何一个所述的抗体分子。
具体实施方式20.一种治疗患有嗜酸性粒细胞性哮喘)、嗜酸性粒细胞增多症、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞性食管炎的受试者的方法，该方法包含:
向该受试者施用治疗有效量的具体实施方式1到15的任一个所述的抗体分子或具体实施方式16所述的药物组合物以治疗嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞增多症、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞性食管炎。
具体实施方式21.有效量的具体实施方式1到15的任一个所述的抗体分子或具体实施方式16所述的药物组合物在治疗嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞增多症、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞性食管炎中的用途。
具体实施方式22.具体实施方式1到15的任一个所述的抗体分子或具体实施方式16所述的药物组合物在制备用以治疗嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞增多症、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞性食管炎的药物中的用途。
序列表
<110> 赛福伦公司
<120> 抗IL-5抗体
<130> 102085.000906
<140>
<141>
<150> 62/438,502
<151> 2016-12-23
<160> 75
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Gly 或 Lys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Asn 或 Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Asn 或 His
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Ile 或 Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Gly 或 Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Ser 或 Lys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Asn 或 His
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Val 或 Ala
<400> 1
Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Tyr
1 5 10
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Ser 或 Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Asp 或 Ser
<400> 2
Asp Asp Xaa Xaa Arg Pro Ser
1 5
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Asp 或 Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> His, Ser, Tyr 或 Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (11)..(11)
<223> Val, Ala 或 Trp
<400> 3
Gln Val Trp Xaa Ser Ser Ser Asp Xaa Val Xaa
1 5 10
<210> 4
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 4
Gly Gly Ser Ile Ser Asn Gly Gly Tyr Tyr Trp Ser
1 5 10
<210> 5
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 5
Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val Tyr
1 5 10
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 6
Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr
1 5
<210> 7
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 7
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser
1 5
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 8
Leu Gly Asn Trp Phe Asp Tyr
1 5
<210> 9
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 9
Gln Val Trp Tyr Ser Ser Ser Asp His Val Val
1 5 10
<210> 10
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 10
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Gly
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Ser Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Leu Gly Asn Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 11
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 11
Ser Ser Ile Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Tyr Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 12
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 12
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Gly
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Ser Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Leu Gly Asn Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 13
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 13
Ser Ser Ile Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Tyr Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165 170 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180 185 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 14
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 14
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Gly
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Ser Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Leu Gly Asn Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440
<210> 15
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 15
Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Val Val
1 5 10
<210> 16
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 16
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Gly
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Leu Gly Asn Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 17
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 17
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 18
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 18
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Gly
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Leu Gly Asn Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440
<210> 19
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 19
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165 170 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180 185 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 20
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 20
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Gly
20 25 30
Gly Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Leu Gly Asn Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440
<210> 21
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 21
Gly Lys Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val Tyr
1 5 10
<210> 22
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 22
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Lys Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
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Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
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Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
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Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
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Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
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Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 23
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 23
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Lys Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
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Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
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85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165 170 175
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180 185 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 24
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 24
Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val Tyr
1 5 10
<210> 25
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 25
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
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Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
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Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 26
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 26
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165 170 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180 185 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 27
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 27
Gly Gly Asn His Ile Gly Ser Lys Asn Val Tyr
1 5 10
<210> 28
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 28
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn His Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
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Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 29
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 29
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1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn His Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
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100 105 110
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Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
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165 170 175
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195 200 205
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210
<210> 30
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 30
Gly Gly Asn Asn Ala Gly Ser Lys Asn Val Tyr
1 5 10
<210> 31
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 31
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Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ala Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 32
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
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<210> 34
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 34
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100 105
<210> 35
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 35
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<220>
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 38
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<210> 39
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 39
Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Ala Tyr
1 5 10
<210> 40
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 40
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<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 41
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<210> 42
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 42
Asp Asp Leu Asp Arg Pro Ser
1 5
<210> 43
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 43
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<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 44
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
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Asp Asp Leu Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
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210
<210> 45
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 45
Asp Asp Ser Ser Arg Pro Ser
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<210> 46
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 46
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Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
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<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 47
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
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Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 48
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<210> 49
<211> 109
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 49
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 50
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210
<210> 51
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 51
Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp Ser Val Val
1 5 10
<210> 52
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 52
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
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100 105
<210> 53
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 53
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
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195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 54
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 54
Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp Tyr Val Val
1 5 10
<210> 55
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 55
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
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<210> 56
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 56
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
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165 170 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180 185 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 57
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 57
Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp Asp Val Val
1 5 10
<210> 58
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 58
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp Asp
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 59
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 59
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp Asp
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165 170 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180 185 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 60
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 60
Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Val Ala
1 5 10
<210> 61
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 61
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 62
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 62
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165 170 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180 185 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 63
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 63
Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Val Trp
1 5 10
<210> 64
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 64
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Trp Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 65
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 65
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Asn Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Trp Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165 170 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180 185 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 66
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 66
Gly Gly Asn Asn Ile Asp Ser Lys Asn Val Tyr
1 5 10
<210> 67
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 67
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Asp Ser Lys Asn Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 68
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 68
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Asp Ser Lys Asn Val
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln
115 120 125
Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly
130 135 140
Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly
145 150 155 160
Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala
165 170 175
Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser
180 185 190
Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val
195 200 205
Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210
<210> 69
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 69
caggtgcagc tgcaggaatc tggccctggc ctggtcaagc ccagccagac cctgagcctg 60
acctgtaccg tgtccggcgg cagcatcagc aacggcggct actactggtc ctggatcaga 120
cagcaccccg gcaagggcct ggaatggatc ggctacatct actacagcgg cagcacctac 180
tacaacccca gcctgaagtc cagagtgacc atcagcgtgg acaccagcaa gaaccagttc 240
agcctgaagc tgagcagcgt gacagccgcc gacaccgccg tgtactactg cgccagcctg 300
ggcaattggt tcgactactg gggccagggc accctcgtga cagtgtcctc a 351
<210> 70
<211> 978
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 70
gctagcacca agggccccag cgtgttcccc ctggcccctt gtagcagaag caccagcgag 60
agcacagccg ccctgggctg cctggtgaaa gactacttcc ccgagcccgt caccgtgtcc 120
tggaacagcg gagccctgac cagcggcgtg cacacctttc cagccgtgct gcagagcagc 180
ggcctgtaca gcctgagcag cgtggtgaca gtgccctcca gcagcctggg caccaagacc 240
tacacctgta acgtggacca caagcccagc aacaccaagg tggacaagcg ggtggaatct 300
aagtacggcc caccctgccc cccctgccct gcccctgaat ttctgggcgg accctccgtg 360
ttcctgttcc ccccaaagcc caaggacacc ctgtatatca ctcgggagcc cgaagtgacc 420
tgcgtggtgg tggacgtgtc ccaggaagat cccgaggtcc agttcaattg gtacgtggac 480
ggcgtggaag tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg aacagttcaa cagcacctac 540
cgggtggtgt ccgtgctgac cgtgctgcac caggactggc tgaacggcaa agagtacaag 600
tgcaaagtct ccaacaaggg cctgcccagc tccatcgaga aaaccatcag caaggccaag 660
ggccagcccc gcgagcctca ggtgtacaca ctgcccccca gccaggaaga gatgaccaag 720
aaccaggtgt ccctgacctg tctggtgaaa ggcttctacc ccagcgatat cgccgtggaa 780
tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca ccccccctgt gctggacagc 840
gacggcagct tcttcctgta ctcccggctg accgtggaca agagccggtg gcaggaaggc 900
aacgtcttca gctgcagcgt gatgcacgag gccctgcaca accactacac ccagaagtcc 960
ctgagcctga gcctgggc 978
<210> 71
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 71
agctacgtgc tgacccagcc tcctagcgtg tccgtggccc ctggccagac cgccagaatc 60
acctgtggcg gcaacaacat cggcagcaag aacgtgtact ggtatcagca gaagcccggc 120
caggcccccg tgctggtggt gcacgacgac agcgacagac ccagcggcat ccccgagcgg 180
ttcagcggca gcaacagcgg caataccgcc accctgacca tcagccgggt ggaagtgggc 240
gacgaggccg actacagctg ccaggtctgg gacagcagca gcgaccacgt ggtgttcggc 300
ggaggcacca agctgaccgt cctaggt 327
<210> 72
<211> 315
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 72
cagcccaagg ccgctcccag cgtgaccctg ttccccccaa gcagcgagga actgcaggcc 60
aacaaggcca ccctggtgtg cctgatcagc gacttctacc ctggggccgt gaccgtggcc 120
tggaaggccg atagcagccc tgtgaaggcc ggcgtggaaa ccaccacccc ctccaagcag 180
agcaacaaca aatacgccgc cagcagctac ctgtccctga cccccgagca gtggaagtcc 240
caccggtcct acagctgcca ggtgacacac gagggcagca ccgtggaaaa gaccgtggcc 300
cccaccgagt gcagc 315
<210> 73
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (26)..(26)
<223> Gly, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Gly, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (28)..(28)
<223> Ser, Ala, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Ile, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Ser, Ala, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (31)..(31)
<223> Asn, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (32)..(32)
<223> Gly, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (33)..(33)
<223> Gly, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (34)..(34)
<223> Tyr, Ala, Ser, Leu, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (35)..(35)
<223> Tyr, Ala, Ser, Leu, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (36)..(36)
<223> Trp, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys 或 His
<220>
<221> MOD_RES
<222> (37)..(37)
<223> Ser, Ala, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (52)..(52)
<223> Tyr, Ala, Ser, Leu, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (53)..(53)
<223> Ile, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (54)..(54)
<223> Tyr, Ala, Ser, Leu, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (55)..(55)
<223> Tyr, Ala, Ser, Leu, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (56)..(56)
<223> Ser, Ala, Leu, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (57)..(57)
<223> Gly, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (58)..(58)
<223> Ser, Ala, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (59)..(59)
<223> Thr, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (60)..(60)
<223> Tyr, Ala, Ser, Leu, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (98)..(98)
<223> Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His, Trp 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (99)..(99)
<223> Ser, Ala, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His, Trp 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (100)..(100)
<223> Leu, Ala, Ser, Tyr, Asp, Gln, Lys, His, Trp 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (101)..(101)
<223> Gly, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His, Trp 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (102)..(102)
<223> Asn, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His, Trp 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (103)..(103)
<223> Trp, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (104)..(104)
<223> Phe, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His, Trp 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (105)..(105)
<223> Asp, Ala, Ser, Leu, Tyr, Gln, Lys, His, Trp 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (106)..(106)
<223> Tyr, Ala, Ser, Leu, Asp, Gln, Lys, His, Trp 或 Pro
<400> 73
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
20 25 30
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 74
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (23)..(23)
<223> Gly, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(24)
<223> Gly, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (25)..(25)
<223> Asn, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (26)..(26)
<223> Asn, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Ile, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (28)..(28)
<223> Gly, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Ser, Ala, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (30)..(30)
<223> Lys, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (31)..(31)
<223> Asn, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (32)..(32)
<223> Val, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (33)..(33)
<223> Tyr, Ala, Ser, Leu, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (49)..(49)
<223> Asp, Ala, Ser, Leu, Tyr, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (50)..(50)
<223> Asp, Ala, Ser, Leu, Tyr, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (51)..(51)
<223> Ser, Ala, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (52)..(52)
<223> Asp, Ala, Ser, Leu, Tyr, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (53)..(53)
<223> Arg, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (54)..(54)
<223> Pro, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (55)..(55)
<223> Ser, Ala, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (88)..(88)
<223> Gln, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Lys, His, Trp 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (89)..(89)
<223> Val, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His, Trp 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (90)..(90)
<223> Trp, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (91)..(91)
<223> Asp, Ala, Ser, Leu, Tyr, Gln, Lys, His, Trp 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (92)..(92)
<223> Ser, Ala, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His, Trp 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (93)..(93)
<223> Ser, Ala, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His, Trp 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (94)..(94)
<223> Ser, Ala, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His, Trp 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (95)..(95)
<223> Asp, Ala, Ser, Leu, Tyr, Gln, Lys, His, Trp 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (96)..(96)
<223> His, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, Trp 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (97)..(97)
<223> Val, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His, Trp 或 Pro
<220>
<221> MOD_RES
<222> (98)..(98)
<223> Val, Ala, Ser, Leu, Tyr, Asp, Gln, Lys, His, Trp 或 Pro
<400> 74
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
20 25 30
Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
35 40 45
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
85 90 95
Xaa Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 75
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (24)..(24)
<223> Gly 或 Lys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (25)..(25)
<223> Asn 或 Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (26)..(26)
<223> Asn 或 His
<220>
<221> MOD_RES
<222> (27)..(27)
<223> Ile 或 Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (28)..(28)
<223> Gly or Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (29)..(29)
<223> Ser 或 Lys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (31)..(31)
<223> Asn 或 His
<220>
<221> MOD_RES
<222> (32)..(32)
<223> Val 或 Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (51)..(51)
<223> Ser 或 Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (52)..(52)
<223> Asp 或 Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (91)..(91)
<223> Asp 或 Leu
<220>
<221> MOD_RES
<222> (96)..(96)
<223> His, Ser, Tyr 或 Asp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (98)..(98)
<223> Val, Ala 或 Trp
<400> 75
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Xaa
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val His
35 40 45
Asp Asp Xaa Xaa Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Val Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Ser Cys Gln Val Trp Xaa Ser Ser Ser Asp Xaa
85 90 95
Val Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105

Claims (22)

1.一种人抗体分子，所述人抗体分子免疫特异性地结合人IL-5，按照通过表面等离子体共振测定的平衡亲和常数(KD)为至少约40pM。
2.一种免疫特异性地结合人IL-5的人抗体分子，所述抗体分子包含：
包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链CDR1，包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链CDR2，包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链CDR3，包含SEQ ID NOs:5、21、24、27、30、33、36、39或66的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NOs:7、42或45的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NOs:15、48、51、54、57、60或63的氨基酸序列的轻链CDR3。
3.根据权利要求1或2所述的抗体分子，其中所述抗体分子包含：包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链CDR1，包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链CDR2，包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链CDR3，以及
a.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1,包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2，和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
b.包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
c.包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
d.包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
e.包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
f.包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
g.包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
h.包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
i.包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
j.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
k.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3；
l.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的轻链CDR3；
m.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的轻链CDR3；
n.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的轻链CDR3；
o.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的轻链CDR3；
p.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链CDR3；或
q.包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的轻链CDR3；
其中CDR的氨基酸残基的位置是根据AbM确定的。
4.根据权利要求3所述的抗体分子，其中所述抗体分子包含：包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链CDR1，包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链CDR2，包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链CDR3，包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的轻链CDR1，包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链CDR2和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3。
5.根据前面的权利要求的任一项所述的抗体分子，其中所述抗体分子包含包含与SEQID:16的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的重链可变区和
a.包含与SEQ ID NO:17的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
b.包含与SEQ ID NO:22的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
c.包含与SEQ ID NO:25的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
d.包含与SEQ ID NO:28的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
e.包含与SEQ ID NO:31的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
f.包含与SEQ ID NO:34的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
g.包含与SEQ ID NO:37的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
h.包含与SEQ ID NO:40的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
i.包含与SEQ ID NO:43的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
j.包含与SEQ ID NO:46的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
k.包含与SEQ ID NO:49的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
l.包含与SEQ ID NO:52的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
m.包含与SEQ ID NO:55的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
n.包含与SEQ ID NO:58的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
o.包含与SEQ ID NO:61的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；
p.包含与SEQ ID NO:64的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区；或
q.包含与SEQ ID NO:67的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区。
6.根据前面的权利要求的任一项所述的抗体分子，其中所述抗体分子包含包含与SEQID:16的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的重链可变区，和包含与SEQ ID:17的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链可变区。
7.根据前面的权利要求的任一项所述的抗体分子，其中所述抗体分子包含：
a.S228P突变；
b.M252Y突变，S254T突变和T256E突变；
c.重链C末端赖氨酸的缺失；
d.a到c的任意组合。
8.根据权利要求7所述的抗体分子，其中所述抗体分子包含S228P突变和重链C末端赖氨酸的缺失。
9.根据权利要求7所述的抗体分子，其中所述抗体分子包含S228P突变、M252Y突变、S254T突变和T256E突变和重链C末端赖氨酸的缺失。
10.根据前面的权利要求的任一项所述的抗体分子，其中所述抗体分子包含IgG4重链恒定区和lambda轻链恒定区。
11.根据前面的权利要求的任一项所述的抗体分子，其中所述抗体分子包含包含与SEQID:18的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的重链，和
a.包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
b.包含与SEQ ID NO:23的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
c.包含与SEQ ID NO:26的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
d.包含与SEQ ID NO:29的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
e.包含与SEQ ID NO:32的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
f.包含与SEQ ID NO:35的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
g.包含与SEQ ID NO:38的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
h.包含与SEQ ID NO:41的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
i.包含与SEQ ID NO:44的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
j.包含与SEQ ID NO:47的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
k.包含与SEQ ID NO:50的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
l.包含与SEQ ID NO:53的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
m.包含与SEQ ID NO:56的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
n.包含与SEQ ID NO:59的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
o.包含与SEQ ID NO:62的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；
p.包含与SEQ ID NO:65的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链；或
q.包含与SEQ ID NO:68的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链。
12.根据权利要求1-10的任一项所述的抗体分子，其中所述抗体分子包含包含与SEQID NO:20的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的重链，和包含与SEQ ID NO:19的氨基酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％一致的氨基酸序列的轻链。
13.根据权利要求2或3所述的抗体分子，其中所述抗体分子是Fab片段、Fab2片段或单链抗体。
14.根据前面的权利要求的任一项所述的抗体分子，其中所述抗体分子具有一个或多个下列特性：
a.降低IL-5与IL-5受体的结合，
b.具有至少约20天的血清半衰期，或
c.结合人和食蟹猕猴IL-5，但不结合小鼠、大鼠或豚鼠IL-5。
15.根据权利要求2所述的抗体分子，其中所述抗体分子结合人IL-5，按照通过表面等离子体共振测定的平衡亲和常数(KD)为至少约40pM。
16.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1到15的任一项所述的抗体分子。
17.一种核酸分子，所述核酸分子编码权利要求1到15的任一项所述的抗体分子。
18.一种载体，所述载体包含权利要求17所述的核酸分子。
19.一种细胞，所述细胞经转化用于表达权利要求1到15的任一项所述的抗体分子。
20.一种治疗患有嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞增多症、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞性食管炎的受试者的方法，所述方法包括:
向所述受试者施用治疗有效量的权利要求1到15的任一项所述的抗体分子或权利要求16所述的药物组合物以治疗嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞增多症、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞性食管炎。
21.有效量的权利要求1到15的任一项所述的抗体分子或权利要求16所述的药物组合物在治疗嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞增多症、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞性食管炎中的用途。
22.权利要求1到15的任一项所述的抗体分子或权利要求16所述的药物组合物在制备用以治疗嗜酸性粒细胞性哮喘、嗜酸性粒细胞增多症、具有嗜酸性粒细胞参与的嗜酸性的鼻息肉、嗜酸性粒细胞性肉芽肿合并多血管炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞性食管炎的药物中的用途。
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