BR112018073219B1 - Composto de fórmula i, composição farmacêutica, processo para síntese destes compostos e uso dos mesmos - Google Patents

Abstract

a presente invenção refere-se a novos derivados de selenofeno[h]cromeno que previne e cura metástase de câncer, bem como aos métodos de fabricação e a sua utilização em diferentes composições farmacêuticas para o tratamento e/ou prevenção de câncer primário e suas metástases por administração de tais substâncias.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO

[001] As modalidades da presente invenção referem-se ao campo da química e bioquímica, e, mais especificamente, a compostos anticâncer, síntese destes, e métodos para usar os mesmos. A presente invenção revela novos derivados de 2H-selenofeno[3,2-h]cromeno, um processo de fabricação e uso dos compostos revelados para tratamento e/ou prevenção do câncer e metástase.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

[002] Os cânceres de localização diferente são amplamente difundidos e são importante causa de mortalidade de todas as idades. O crescimento do tumor é um processo de multietapa complexo. A ocorrência e o crescimento do tumor progressivo são dependentes das propriedades das células cancerosas e do estado de reatividade imunológica. Isso determina a diversidade das abordagens da terapia do câncer usando um ou vários métodos básicos: cirurgia, radioterapia, quimioterapia e imunoterapia. Seu objetivo é minimizar a massa do tumor. No caso de tumores sólidos, a remoção cirúrgica do tumor é a opção de primeira linha. Leucemia e outras doenças generalizadas são tratadas por radiação intensa ou quimioterapia. No entanto, nenhum método por si só é capaz de eliminar todas as células tumorais e para conseguir uma recuperação total. Portanto, a oncologia moderna geralmente aplica as combinações de tratamentos para eliminar as células tumorais.

[003] Infelizmente, apesar da remoção cirúrgica com sucesso do tumor primário, a probabilidade de recidiva é muito alta, uma vez que o tumor é capaz de se espalhar e evoluir para uma metástase para tecidos e órgãos circundantes. A metástase começa com invasão local de

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2/49 células tumorais do tumor primário para o tecido circundante e as células entram no sangue ou no sistema de circulação linfática (Hunter, et al., Breast Cancer Res, 2008, 10, S2; Talmadge et al., Cancer Res 2010, 70, 5649-5669). Após a remoção do tumor primário, a porcentagem de pacientes que foram diagnosticados com metástases em diversos órgãos é de até 30% (Essner et al., Arch Surg, 2004, 139, 961-966, 966-7).

[004] Metástases são responsáveis por 90% das mortes por câncer. Existem formas linfogênicas, hematogênicas e mistas (por via linfática, hematogênica ou por semeadura) de disseminação de metástase. A propagação linfogênica ocorre através do sistema linfático, onde as células cancerosas penetram o sistema linfático e, em seguida, entram na corrente sanguínea. Os tumores malignos dos órgãos internos: esôfago, estômago, cólon, laringe, colo do útero frequentemente sofrem metástase para os linfonodos desta forma.

[005] No caso da via hematogênica, as células tumorais penetram no vaso sanguíneo primeiro e, em seguida, se disseminam por fluxo sanguíneo em diferentes órgãos e tecidos (por exemplo, pulmões, fígado, ossos, etc.). A maioria das mortes são associadas a esta via, pois a intervenção cirúrgica aumenta o risco de disseminação de células tumorais da corrente sanguínea. Tumores malignos do tecido linfático e hematopoiético - sarcoma, hipernefroma, horionepitelioma, se tornaram metástases desta forma.

[006] No entanto, a maioria dos cânceres: mama, tireoide, pulmões e ovários - são capazes de sofrer metástase pelas vias linfogênicas e hematogênicas igualmente (Achen, Stacker, Annals of the New York Academy of Sciences, 2008, 1131, pp. 225-234; Li and Li, Int. J. Oncol., 2014, 44, 1806-1812).

[007] O câncer metastático pode ser tratado com terapia sistêmica (quimioterapia, terapia biológica, terapia direcionada, terapia de

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3/49 reposição hormonal), terapia local (cirurgia, radioterapia), ou uma combinação desses tratamentos. ([Guideline] Fizazi K, Greco FA, Pavlidis N, Daugaard G, Oien K, Pentheroudakis G, et al. Cancers of unknown primary site: ESMO Clinical Practice Guidelines for diagnosis, treatment and follow-up. Ann Oncol. 2015 Set. 26 Suppl.5:v133-8.) Vários fármacos anticancerígenos como a oxaliplatina e irinotecano são usados em metástase hepática com algum efeito. A eficiência do tratamento de câncer metastático de origem primária desconhecida com quimioterapia baseada em cisplatina e 5-fluorouracil ainda está em debate. Os regimes de quimioterapia mais eficazes para pacientes com câncer metastático de origem primária desconhecida envolvem terapia combinada com um composto de platina (cisplatina ou carboplatina) e um taxano (de preferência paclitaxel). No entanto, mesmo esta combinação dá uma taxa de resposta apenas de cerca de 12-26% e uma sobrevida média de 5-7 meses. A terapia de fármaco triplo parece não oferecer qualquer benefício adicional (Vajdic CM, Goldstein D. Cancer of unknown primary site. Aust Fam Physician. 2015 Set. 44 (9):640-3).

[008] Infelizmente, a maioria dos cânceres metastáticos não têm cura hoje. Por exemplo, o tratamento do câncer de mama metastático pode prolongar a vida, retardar a progressão do câncer, aliviar os sintomas relacionados com o câncer e melhorar a qualidade de vida. No entanto, a sobrevida mediana de indivíduos com câncer de mama metastático é apenas 18 a 24 meses (http://www.uptodate.com/contents/treatment-of-metastatic-breastcancer-beyond-the-basics). Portanto, ainda há alta necessidade médica de medicamentos antimetastáticos e quimioterápicos eficazes.

A PRESENTE INVENÇÃO

[009] Foi descoberto surpreendentemente que certos novos derivados de 2H-selenofeno[3,2-h]cromeno com baixa ou média

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4/49 citotoxicidade em linhagens de células cancerosas têm, inesperadamente, atividade antimetastática excelente in vitro contra vários tipos de câncer. Essas substâncias são altamente apropriadas para o tratamento e/ou prevenção de tumores metastáticos por causa de citotoxicidade extremamente baixa contra fibroblastos de embrião de camundongo normal. Estes novos compostos podem ser usados para a fabricação de uma composição farmacêutica variada, onde estão presentes em conjunto com um ou mais diluentes, veículos ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

OBJETOS DA INVENÇÃO

[0010] Um objeto da presente invenção é o selênio contendo novos compostos com propriedades anticancerígenas, útil para o tratamento de cânceres primários e/ou metástases deles, métodos para fabricação de compostos revelados e o tratamento e/ou a prevenção de vários cânceres pela administração de tais substâncias.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[0011] São revelados compostos selecionados a partir daqueles de Fórmula I

[0012] sendo que

[0013] Ri representa OH, grupo de hidrocarbonetos OC1-C16, incluindo a porção de esteroides (por exemplo, colesterol), N(alquila)2, N-heterociclila;

[0014] R2 representa um átomo de halogênio (p.ex. Br).

[0015] R3 representa hidróxi-C1-4alquila, 1-hidróxi-ciclo-C3-6alquila, ciclo-C5-7alquenila, hidróxi-C1-6cicloalquila, C1-4alquil-N-heterociclila;

[0016] Como usado aqui, o termo hidrocarboneto refere-se a um

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5/49 grupo alquila, um grupo alquenila ou um grupo alquinila de cadeia cíclica, ramificada ou linear. Grupos de hidrocarbonetos podem ser não substituídos ou substituídos com um ou mais substituintes. Se o hidrocarboneto é uma estrutura ramificada tendo substituinte(s) nela, então, a substituição pode ser tanto na cadeia principal do hidrocarboneto ou na ramificação; alternativamente, as substituições podem ser na cadeia principal do hidrocarboneto e na ramificação.

[0017] O termo alquila refere-se a uma cadeia linear ou ramificada de hidrocarbonetos, contendo o número indicado de átomos de carbono. Por exemplo, C1-C12 alquila indica que o grupo alquila pode ter de 1 a 12 (inclusive) átomos de carbono. O termo alquileno refere-se a uma alquila divalente, como, por exemplo, —CH2—, —CH2CH2—, — CH2CH2CH2— ou —CH2CH(CH3)CH2—. Uma alquila ou um alquileno podem opcionalmente ser substituídos.

[0018] O termo cicloalquila como usado aqui refere-se aos grupos de hidrocarbonetos nonaromáticos, saturados ou parcialmente insaturados, cíclicos, bicíclicos, tricíclicos ou policíclicos com 3 a 12 átomos de carbono. Qualquer átomo de anel pode ser substituído (por exemplo, com um ou mais substituintes). Os grupos cicloalquila podem conter anéis fundidos. Os anéis fundidos são anéis que compartilham um ou mais átomos de carbono. Exemplos de grupos cicloalquila incluem, mas não estão limitados a, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-hexenila, ciclo-hexadienila, metilciclo-hexila, adamantila, norbornila e norbornenil.

[0019] O termo alquenila refere-se a uma cadeia de hidrocarbonetos linear ou ramificada tendo uma ou mais ligações duplas. Exemplos de grupos alquelina incluem, mas não estão limitados a, grupos alila, propenila, 2-butenila, 3-hexenila e 3-octenila. Um dos carbonos de ligação duplas pode, opcionalmente, ser o ponto de fixação do substituinte alkenila. O termo alquenileno refere-se a uma alquenila

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6/49 divalente, como, por exemplo, —CH=CH—, —CH=CH2CH2— ou — CH=C=CH—. Uma alquenila ou um alquenileno podem ser opcionalmente substituídos.

[0020] O termo alquinila refere-se a uma cadeia de hidrocarboneto ramificado ou linear com uma ou mais ligações triplas. Exemplos de grupos alquinila incluem, mas não estão limitados a, etinila, propargila e 3-hexinila. Um dos carbonos de ligação tripla pode, opcionalmente, ser o ponto de fixação do substituinte alquinila. O termo alquileno referese a uma alquinila divalente, como, por exemplo, —C = C— ou —C = C—CH2—. Uma alquinila ou um alquinileno pode ser opcionalmente substituído.

[0021] Como usado aqui, o termo éster refere-se ao produto da reação entre um ácido carboxílico e um álcool.

[0022] Como usado aqui, o termo amida refere-se a um composto orgânico contendo o grupo —CONH2—.

[0023] Conforme usado aqui, o termo arila se refere a uma fenila ou naftila.

[0024] O termo heterociclila, como utilizado aqui, refere-se a um sintema de anel monocíclico não-aromático, saturado ou parcialmente insaturado de 3-10 membros, bicíclico de 8-12 membros, ou tricíclico de 11-14 membros tendo 1-3 heteroátomos se monocíclico, 1-6 heteroátomos se bicíclico, ou 1-9 heteroátomos se tricíclico, os referidos heteroátomos selecionados de O, N, S, Si e P (por exemplo, átomos de carbono e 1-3, 1-6 ou 1-9 heteroátomos de O, N, S, Si e P se monocíclico, bicíclico ou tricíclico, respectivamente). Qualquer átomo de anel pode ser substituído (por exemplo, com um ou mais substituintes). Os grupos heterociclila podem conter anéis fundidos, que são anéis que compartilham um ou mais átomos comuns. Exemplos de grupos de heterociclila incluem, mas não estão limitados a, radicais de tetrahidrofurano, tetra-hidrotiofeno, tetra-hidropirano, piperidina, piperazina,

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7/49 morfolina, pirrolina, pirimidina, pirrolidina, indolina, tetra-hidropiridina, dihidropirano, tiantreno, pirano, benzopirano, xanteno, fenoxatiina, fenotiazina, furazanl, lactonas, lactamas como, azetidinonas e pirrolidinonas, sultamas, sultonas, e similares.

[0025] Como usado aqui, o termo halo ou halogênio refere-se a flúor, cloro, bromo e iodo.

[0026] Modalidades da presente descrição abrangem qualquer forma racêmica opticamente ativa, polimórfica, tautomérica ou estereoisomérica ou mistura destas, de um composto da descrição, que possui as propriedades úteis descritas aqui.

[0027] Nos casos em que compostos são ácidos ou básicos suficientemente para formar sais de ácido ou base atóxico estáveis, o uso de compostos como sais farmaceuticamente aceitáveis pode ser apropriado. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis no escopo das modalidades da presente descrição incluem sais de adição de ácido orgânico formados com ácidos que formam um ânion fisiológico aceitável e sais inorgânicos.

[0028] Compostos específicos da Fórmula I dentro da presente invenção incluem, mas não estão limitados a:

[0029] 7-bromo-8-(2-hidroxipropan-2-il)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de metila,

[0030] 7-bromo-8-(ciclopent-1-en-1-il)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de metila,

[0031] 7-bromo-8-(1-hidroxiciclo-hexil)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de metila,

[0032] 7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de metila,

[0033] 7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-2-oxo-2H-selenofeno[H]3,2cromeno-3-carboxilato de butila,

[0034] 7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2Petição 870180150412, de 12/11/2018, pág. 21/70

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h]cromeno-3-carboxilato de octila,

[0035] 7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de decila,

[0036] 7-bromo-2-oxo-8-(piperidin-1-ilmetil)-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de metila,

[0037] 7-bromo-8-(morfolinometil)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de metila,

[0038] 7-bromo-8-((4-metilpiperazin-1-il)metil)-2-oxo-2Hselenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxilato de metila,

[0039] ácido 7-bromo-8-(1-hidroxiciclo-hexil)-2-oxo-2Hselenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxílico,

[0040] ácido 7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-2-oxo-2Hselenofeno[3,2-h]cromeno-3- carboxílico,

[0041] cloridrato de ácido 7-bromo-2-oxo-8-(piperidin-1-ilmetil)-2Hselenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxílico,

[0042] cloridrato de ácido 7-bromo-2-oxo-8-(morfolin-1-ilmetil)-2Hselenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxílico,

[0043] cloridrato de ácido 7-bromo-8-((4-metilpiperazin-1-il)metil)-2oxo-2H-selenofeno[3,2-h]cromeno-3- carboxílico,

[0044] 7-bromo-8-(ciclo-hex-1-en-1-il)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de octila,

[0045] (3S,8S,9S,10R, 13R,14S,17R)-10,13-dimetil-17-((R)-6metilheptan-2-il)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro1 H-ciclopenta[a]fenantren-3-il-7-bromo-8-(ciclo-hex-1-en-1-il)-2-oxo2H-selenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxilato,

[0046] (3S,8S,9S,10R, 13R,14S,17R)-10,13-dimetil-17-((R)-6metilheptan-2-il)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro1H-ciclopenta[a]fenantren-3-il-7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-2-oxo2H-selenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxilato,

[0047] 7-bromo-8-(ciclo-hex-1-en-1-il)-3-(piperidina-1-carbonil)-2H

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9/49 selenofeno[3,2-h]cromen-2-ona,

[0048] 7-bromo-8-(ciclo-hex-1-en-1-il)-3-(morfolina-1-carbonil)-2Hselenofeno[3,2-h]cromen-2-ona,

[0049] 7-bromo-8-(ciclo-hex-1-en-1-il)-N,N-bis(2-metoxietil)-2-oxo2H-selenofeno[H]3,2-cromeno-3-carboxamida,

[0050] 7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-3-(morfolina-4-carbonil)-2Hselenofeno[3,2-h]cromen-2-ona.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0051] Na busca de compostos anticancerígenos com propriedades antimetastática, descobriu-se inesperadamente que derivados de 2Hselenofeno[3,2-h]cromeno da Fórmula 1 são altamente ativos contra o desenvolvimento de metástases de vários tumores em animais experimentais. Foi também surpreendente que esses compostos eram altamente seletivos contra células cancerosas sem citotoxicidade significante contra células 3T3 normais (fibroblastos de embrião de camundongo), amplamente utilizadas para avaliação in vitro de LD50. Nosso achado é inesperado, porque é bem sabido que alta toxicidade e baixa seletividade contra células cancerosas versus células normais são típicas para moléculas contendo selênio.

[0052] Historicamente, o selênio tem atraído grande interesse como um microelemento essencial. Algumas doenças podem ser controladas pela suplementação alimentar deste elemento. O selênio é essencial para o metabolismo celular como um componente da glutationa peroxidase e outros sistemas enzimáticos. Existem algumas tentativas de utilização de suplementos que contenham selênio na prevenção de alguns tipos de câncer. Infelizmente, a atividade anticâncer dos compostos contendo selênio ainda é imprevisível, porque se baseia em vários mecanismos dependendo da forma química do selênio e das características estruturais dos compostos projetados. Mesmo se estes compostos estiverem ativos em linhagens celulares, há falta de regras

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10/49 para prever a toxicidade basal e seletividade, bem como atividade antimetastática dos novos compostos contendo selênio in vivo.

[0053] Descobrimos que a atividade antimetastática é típica para um número de compostos com a cadeia principal de 2H-selenofeno[3,2h]cromeno, especialmente se houver substituintes presentes nas posições 7 e 8 do arcabouço. Verificou-se que os substituintes mais adequados para R2 na posição 7 dos compostos de acordo com a Fórmula 1 são halogênios, bem como para R3 na posição 8 mais preferíveis são os grupos hidróxi-C1-4alquila, 1-hidróxi-ciclo-C3-6alquila, ciclo-C5-7alquenila, hidróxi-C1-6cicloalquila, C1-4-alquil-N-heterociclila.

[0054] Porções de amida, éster ou ácido serão preferíveis na 3 posição dos compostos representados pela Fórmula 1.

[0055] Descobriu-se também que substituintes R1 poderiam ser preferencialmente selecionados de grupo de substituintes consistindo de grupo de hidrocarbonetos OH, OC1-C16, incluindo a porção de esteroide (por exemplo, colesterol), N(alquila)2, porção N-heterociclila. [0056] Como usado aqui, o termo hidrocarboneto refere-se a um grupo alquila, um grupo alquenila ou um grupo alquinila de cadeia cíclica, ramificada ou linear. Grupos de hidrocarbonetos podem ser não substituídos ou substituídos com um ou mais substituintes. Se o hidrocarboneto é uma estrutura ramificada tendo substituinte(s) nela, então, a substituição pode ser tanto na cadeia principal do hidrocarboneto ou na ramificação; alternativamente, as substituições podem ser na cadeia principal do hidrocarboneto e na ramificação.

[0057] O termo alquila refere-se a uma cadeia linear ou ramificada de hidrocarbonetos, contendo o número indicado de átomos de carbono. Por exemplo, C1-C12 alquila indica que o grupo alquila pode ter de 1 a 12 (inclusive) átomos de carbono. O termo alquileno refere-se a uma alquila divalente, como, por exemplo, —CH2—, —CH2CH2—, — CH2CH2CH2— ou —CH2CH(CH3)CH2—. Uma alquila ou um alquileno

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11/49 podem opcionalmente ser substituídos.

[0058] O termo cicloalquila como usado aqui refere-se aos grupos de hidrocarbonetos nonoaromáticos, saturados ou parcialmente insaturados, cíclicos, bicíclicos, tricíclicos ou policíclicos com 3 a 12 átomos de carbono. Qualquer átomo de anel pode ser substituído (por exemplo, com um ou mais substituintes). Os grupos cicloalquila podem conter anéis fundidos. Os anéis fundidos são anéis que compartilham um ou mais átomos de carbono. Exemplos de grupos cicloalquila incluem, mas não estão limitados a, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo-hexenila, ciclo-hexadienila, metilciclo-hexila, adamantila, norbornila e norbornenila.

[0059] O termo alquenila refere-se a uma cadeia de hidrocarbonetos linear ou ramificada tendo uma ou mais ligações duplas. Exemplos de grupos alquelina incluem, mas não estão limitados a, grupos alila, propenila, 2-butenila, 3-hexenila e 3-octenila. Um dos carbonos de ligação duplas pode, opcionalmente, ser o ponto de fixação do substituinte alquenila. O termo alquenileno refere-se a uma alquenila divalente, como, por exemplo, —CH=CH—, —CH= CH2CH2— ou —CH=C=CH—. Uma alquenila ou um alquenileno podem ser opcionalmente substituídos.

[0060] O termo alquinila refere-se a uma cadeia de hidrocarboneto ramificado ou linear com uma ou mais ligações triplas. Exemplos de grupos alquinila incluem, mas não estão limitados a, etinila, propargila e 3-hexinila. Um dos carbonos de ligação tripla pode, opcionalmente, ser o ponto de fixação do substituinte alquinila. O termo alquileno referese a uma alquinila divalente, como, por exemplo, —C = C— ou —C = C—CH2—. Uma alquinila ou um alquinileno podem ser opcionalmente substituídos.

[0061] Como usado aqui, o termo éster refere-se ao produto da reação entre um ácido carboxílico e um álcool.

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[0062] Como usado aqui, o termo amida refere-se a um composto orgânico contendo o grupo —CONH2—.

[0063] Conforme usado aqui, o termo arila se refere a uma fenila ou naftila.

[0064] O termo heterociclila, como utilizado aqui, refere-se a um sintema de anel monocíclico não-aromático, saturado ou parcialmente insaturado de 3-10 membros, bicíclico de 8-12 membros, ou tricíclico de 11-14 membros tendo 1-3 heteroátomos se monocíclico, 1-6 heteroátomos se bicíclico, ou 1-9 heteroátomos se tricíclico, os referidos heteroátomos selecionados de O, N, S, Si e P (por exemplo, átomos de carbono e 1-3, 1-6 ou 1-9 heteroátomos de O, N, S, Si e P se monocíclico, bicíclico ou tricíclico, respectivamente). Qualquer átomo de anel pode ser substituído (por exemplo, com um ou mais substituintes). Os grupos heterociclila podem conter anéis fundidos, que são anéis que compartilham um ou mais átomos comuns. Exemplos de grupos de heterociclila incluem, mas não estão limitados a, radicais de tetrahidrofurano, tetra-hidrotiofeno, tetra-hidropirano, piperidina, piperazina, morfolina, pirrolina, pirimidina, pirrolidina, indolina, tetra-hidropiridina, dihidropirano, tiantreno, pirano, benzopirano, xanteno, fenoxatiina, fenotiazina, furazan, lactonas, lactamas como, azetidinonas e pirrolidinonas, sultamas, sultonas, e similares.

[0065] Como usado aqui, o termo halo ou halogênio refere-se a flúor, cloro, bromo e iodo.

[0066] Modalidades da presente descrição abrangem qualquer forma racêmica opticamente ativa, polimórfica, tautomérica ou estereoisomérica ou mistura destas, de um composto da descrição, que possui as propriedades úteis descritas aqui.

[0067] Nos casos em que compostos são ácidos ou básicos suficientemente para formar sais de ácido ou base atóxico estáveis, o uso de compostos como sais farmaceuticamente aceitáveis pode ser

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13/49 apropriado. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis no escopo das modalidades da presente descrição incluem sais de adição de ácido orgânico formados com ácidos que formam um ânion fisiológico aceitável e sais inorgânicos.

[0068] O termo farmaceuticamente aceitável refere-se aqui às formas de sal não tóxicas terapeuticamente ativas, as quais os compostos de Fórmula I são capazes de formar. Este último pode ser convenientemente obtido por tratamento da forma de base com tais ácidos adequados, como os ácidos inorgânicos como o ácido clorídrico, ácido bromídrico; ácido sulfúrico; ácido nítrico; ácido fosfórico e similares; ou ácidos orgânicos como ácidos acético, propanoico, hidroxiacético, 2-hidroxipropanoico, oxopropanoico, oxálico, malônico, succínico, maleico, fumárico, málico, tartárico, metanosulfônico, benzenosulfônico, 4-metilbenzenosulfônico, 2-hidroxibenzoico, e similares. Por outro lado, o sal pode ser convertido para a base livre por tratamento com álcali.

[0069] Para uso terapêutico, os compostos de Fórmula I podem ser na forma de um solvato.

[0070] Composições farmacêuticas de acordo com modalidades de descrição podem ser preparadas ao combinar os compostos revelados com um veículo sólido ou líquido farmaceuticamente aceitável e, opcionalmente, com excipientes e adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis empregando técnicas convencionais e padrão. As composições de forma sólida incluem pós, comprimidos, grânulos dispersáveis, cápsulas, pastilhas e supositórios. Um veículo sólido pode ser, pelo menos, uma substância que pode funcionar também como um diluente, agente flavorizante, solubilizante, lubrificante, agente de suspensão, aglutinante, agente de desintegração de comprimido e agente de encapsulamento. Os veículos sólidos inertes incluem carbonato de magnésio, estearato de magnésio, talco, açúcar, lactose,

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14/49 pectina, dextrina, amido, gelatina, materiais celulósicos, cera de baixo ponto de fusão, manteiga de cacau, e similares. As composições de forma líquida incluem soluções, suspensões e emulsões. Por exemplo, podem ser fornecidas soluções dos compostos divulgados aqui dissolvidos em água e sistemas de água-propileno glicol, opcionalmente contendo corantes, agentes flavorizantes, estabilizantes, e/ou agentes de espessamento adequados convencionais.

[0071] Em uma modalidade, uma composição farmacêutica pode ser fornecida utilizando técnicas convencionais na forma de dosagem unitária eficaz ou que contenham quantidades adequadas de um ou mais componentes ativos. Em modalidades, a quantidade de componente ativo (composto) em uma composição farmacêutica e forma de dosagem unitária desta pode ser variada ou ajustada amplamente dependendo da aplicação em particular, a potência do seu composto específico e a concentração desejada. Em uma modalidade, a quantidade de componente ativo pode variar de 0,5% a 90% em peso da composição.

[0072] Em modalidades, no uso terapêutico para tratar, atenuar, prevenir ou lutar contra o câncer em animais, os compostos ou composições farmacêuticas destes podem ser administrados por via oral, parenteral, topicamente, e/ou por inalação em uma dose para obter e manter uma concentração ou nível de sangue do componente ativo no animal submetido ao tratamento que é terapeuticamente eficaz. Em uma modalidade, tal quantidade terapeuticamente eficaz de dosagem de componente ativo pode estar no intervalo de cerca de 0,1 a cerca de 100 mg/kg, mais de preferência cerca de 3,0 a cerca de 50 mg/kg de peso corporal/dia. É para ser entendido que as doses podem variar, dependendo dos requisitos do paciente, da gravidade, do tipo, estágio, grau ou da localização do câncer sendo tratado, e do composto específico que está sendo usado. Também, é para ser entendido que a

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15/49 dose inicial administrada pode ser aumentada para além do nível superior, a fim de rapidamente atingir o nível de sangue desejado ou a dose inicial pode ser menor do que ideal e a dose diária pode ser aumentada progressivamente no decorrer do tratamento, dependendo da situação particular. Se desejado, a dose diária pode ser dividida em múltiplas doses para a administração, por exemplo, de duas a quatro vezes por dia.

[0073] O Esquema 1 descreve a preparação de compostos de Fórmula I da presente invenção. Todos os compostos finais da presente invenção podem ser preparados pelos procedimentos descritos nestes gráficos ou por procedimento análogo a eles, cujos procedimentos seriam bem conhecidos de um versado na técnica em química orgânica. Todas as variáveis utilizadas no esquema são definidas abaixo ou como nas modalidades.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

[0074] Figura 1: Apresenta a inibição das metástases B16-F10 no pulmão (camundongos C57BL/6). As células B16-F10 (10.000/0,1 ml de PBS) foram injetadas i.v. em camundongos singênicos. O número de metástases pulmonares macroscópicas foi determinado 21 dias mais tarde.

[0075] Figura 2: Inibição de metástases do 4T1 no pulmão, bem como o peso do baço em camundongos BALB/c. Os compostos foram administrados s.c. em 1,4, 7, 9, 11 e 14 dias. As células 4T1 (10.000/0,1 ml de PBS) foram injetadas i.v. em camundongos singênicos. As metástases no dia 16 são mostradas para cada camundongo, e médias são fornecidas para fins de ilustração.

Procedimento geral de preparação de compostos de Fórmula 1 (Esquema 1).

[0076] Éster metílico do ácido 7-hidróxi-2-oxo-2H-cromeno-3carboxílico (2) foram obtidos na reação de 2,4-di-hidroxibenzaldeído e

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16/49 malonato de dimetila em metanol com algumas gotas de piperidina. A reação realizada a 60 ^oC em 48 h. 2 desejado isolado em bons rendimentos por filtração.

[0077] Ésteres de butila, octila e decila 3 foram sintetizados pelo tratamento de 2 com clorotrimetilsilano em álcool (butanol, octanol ou decanol) como solvente, seguido de aquecimento prolongado a 130 ^oC por 4-5 dias. Após o resfriamento, o solvente foi evaporado e os precipitados lavados com éter de petróleo filtrado e secado para render ésteres puros 3.

[0078] A síntese de ésteres de ácido 2-oxo-7trifluorometanosulfonilóxi-2H-cromeno-3-carboxílico (4) realizada em bons rendimentos na reação 2 e 3 com anidrido de trifluorometanossulfonil em diclorometano com excesso de trietilamina a 0 ^oC. A mistura foi agitada por 3 horas em temperatura ambiente e em seguida resfriada para 0 ^oC de novo. Água de gelo foi adicionada e a mistura foi trabalhada com 1N HCl até pH 2-3. A fase orgânica foi separada, secada, filtrada através de SiO2 e evaporada até secar, rendendo um sólido cristalino.

[0079] Para a introdução de ligação tripla na posição 7, o protocolo de Sonogashira modificado foi utilizado. 7-(3-hidróxi-3-metilbut-1-in-1il)-2-oxo-2H-cromeno-3-carboxilatos (II) preparado pela reação de 4 com terminal acetilenos na presença de uma quantidade catalítica de tetracis (trifenilfosfina) paládio (0) e/ou acetato de paládio, e iodeto de cobre em DMF / trietilamina a 20 ^oC ou temperatura ligeiramente elevada (até 40 ^oC sob atmosfera de Ar. Após a conclusão da reação, o acetato de etila e algumas gotas de amônia (aq.) foram adicionados seguido por filtração através de uma almofada de sílica-gel. Em seguida, a solução orgânica foi lavada com salmoura e secada. Após a evaporação do solvente, produtos desejados II foram isolados por cromatografia de média pressão (rápida) em sílica-gel.

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[0080] Surpreendentemente, foi descoberto que o tratamento de cromenos etinil II com brometo de selênio (IV) preparado in situ levou à formação de selenofeno[3,2-h]cromenos (I-1-I-10).A reação realizada pela dissolução de dióxido de selênio em ácido bromídrico concentrado seguido por adição de etinil cromeno II em dioxano; a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 24-48 horas. Após o consumo do substrato II, a mistura de reação alcalina foi feita por Na2CO3 aquoso até pH 8-9 e extraída com cloreto de metileno. A fase orgânica foi lavada com salmoura, secada, filtrada, concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel. Ácidos carboxílicos adequados (I-11-I-15) preparados por hidrólise simples de ésteres com um excesso de hidróxido de sódio em metanol-água. Normalmente, a mistura de reação foi deixada agitar por 5 dias e, em seguida, acidificada com 2N HCl até pH=2-3. O precipitado formado foi filtrado, lavado com acetonitrila fria e secado. Ésteres I-16-I-18, contendo substituintes lipofílicos (por exemplo, porção de octila ou colesterol) foram preparados em duas etapas pelo tratamento dos ácidos carboxílicos I11-I-15 com excesso de cloreto de ácido oxálico em diclorometano. O solvente foi evaporado após 24 h de agitação e o produto bruto foi dissolvido em CH2Cl2 seco. Enquanto isso, em um outro frasco, álcool correspondente e 0,5 equiv. de dimetilaminopiridina foram dissolvidos em CH2Cl2 seco e excesso de trietilamina. Este frasco foi resfriado em banho de gelo e solução de cloreto de ácido selenofeno[3,2-h]cromeno3-carboxílico foi adicionada por gotejamento. Após 24 h de agitação em temperatura ambiente. Os ésteres I-16-I-18 foram isolados com sucesso por cromatografia rápida em sílica-gel. As amidas I-19-I-22 foram preparadas de forma semelhante com excesso de aminas secundárias, em vez de álcoois.

[0081] Esquema 1. Procedimento geral para os compostos de Fórmula I.

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O

HO

O

R'

R'

R'

I-16 - I-18

I-11 - I-15

I-1 - I-10

Br

R'

I-19 - I-22

NR''R'''

Condições de reação:

[0082] a: malonato de dimetila, metanol, piperidina, 48 h, 60 ^oC;

[0083] b: clorotrimetilsilano, álcool, 4-5 dias, 130 ^oC;

[0084] c: anidro de trifluorometanosulfonila, trietilamina, diclorometano, 0 ^oC;

[0085] d: acetileno terminal, tetracis (trifenilfosfina) paládio(0) e/ou acetato de paládio, iodeto de cobre, DMF/trietilamina, temperatura ambiente ou 40 ^oC, Ar;

[0086] e: óxido de selênio(IV), ácido bromídrico conc., dioxano, temperatura ambiente;

[0087] f: hidróxido de sódio, metanol/água, temp. ambiente;

[0088] g: cloreto de oxalila, álcool, trietilamina, diclorometano, 0 ^oC;

[0089] h: cloreto de oxalila, amina, diclorometano, 0 ^oC.

Exemplos

[0090] A preparação de compostos da descrição da presente invenção é descrita nos exemplos a seguir, que servem como uma ilustração de e não uma limitação do escopo da invenção.

[0091] A seguir, DMF é definido como N,N-dimetilformamida,

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DMAC é definido como N,N-dimetilacetamida, NMP é definido como N-metilpirrolidona, DMSO como dimetilsulfóxido, HCl como ácido clorídrico, NH3 aq. como solução de amônia aquosa, MeCN como acetonitrila, DIEA como diisopropiletilamina, EtOAc como acetato de etila, t.a. como temperatura ambiente.

Intermediário 2

[0092] Síntese de éster metílico de ácido 7-hidróxi-2-oxo-2Hcromeno-3- carboxílico (2). Para a solução de 2,4-dihidroxibenzaldeído (10 g, 0,072 mol) e malonato de dimetila (14 g, 0,108 mol) em 50 ml de metanol seco, 6 gotas de piperidina foram adicionadas. A mistura de reação foi agitada por 48 h a 60 ^oC. Em seguida, ela foi resfriada a 0 ^oC e precipitados foram filtrados, lavados com metanol gelado e secados. Rendimento, 90%. ¹H RMN: 3,79 (s, 3H), 4,08 (br s, 1H), 6,71 (d, 1H), 6,83 (dd, 1H), 7,74 (d, 1H), 8,68 (s, 1H).

Intermediários 3

[0093] Síntese de ésteres de ácido 7-hidróxi-2-oxo-2H-cromeno-3carboxílico (3). O 7-hidróxi-2-oxo-2H-cromeno-3-carboxilato de metila (3 g, 13,63 mmol) foi suspenso em álcool apropriado (15 ml) e, em seguida, 5 ml de SiMeaCl foi adicionado. Então a mistura de reação foi aquecida a 130 ^oC por 4-5 dias. Após o resfriamento, o solvente foi evaporado e os precipitados lavados com éter de petróleo filtrado e secado para render o éster puro.

[0094] Éster butílico de ácido 7-hidróxi-2-oxo-2H-cromeno-3carboxílico (3a).

[0095] Rendimento, 64%.¹H RMN: 0,92 (t, 3H), 1,35-1,47 (m, 2H), 1,60-1,70 (m, 2H), 4,21 (t, 2H), 6,72-6,73 (m, 1H), 6,82-6,86 (m, 1H), 7,75 (d, 1H), 8,65 (s, 1H).

[0096] Éster octílico de ácido 7-hidróxi-2-oxo-2H-cromeno-3carboxílico (3b).

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[0097] Rendimento, 68%.¹H RMN: 0,87 (t, 3H), 1,26-1,42 (m, 8H), 1,71-1,78 (m, 2H), 4,31 (t, 2H), 6,86-6,88 (m, 2H), 7,43 (d, 1H), 8,48 (s, 1H).

[0098] Éster decílico de ácido 7-hidróxi-2-oxo-2H-cromeno-3carboxílico (3c).

[0099] Rendimento, 63%. ¹H RMN: 0,88 (t, 3H), 1,23-1,38 (m, 14H), 1,61-1,70 (m, 2H), 4,20 (t, 2H), 6,73 (br s, 1H), 6,84 (dd, 1H), 7,76 (d, 1H), 8,65 (s, 1H).

Intermediários 4

[00100] Síntese de ésteres de ácido 2-oxo-7trifluorometanosulfonilóxi-2H-cromeno-3-carboxílico (4). Método apresentado para preparação de éster metílico de ácido 2-oxo-7trifluorometanosulfonilóxi-2H-cromeno-3-carboxílico (4a). Anidro de trifluorometanosulfonila (5,64 g, 20 mmol) foi adicionado por gotejamento à solução de éster metílico de ácido 7-hidróxi-2-oxo-2Hcromeno-3-carboxílico 2 (4 g, 18,2 mmol) e trietilamina (7,34 g, 72,7 mmol) em diclorometano seco a 0 ^oC. A mistura foi agitada para as 3 horas (controle TLC) e resfriada a 0 ^oC. Água de gelo foi adicionada e a mistura foi trabalhada com 1N HCl até pH 2-3. A fase orgânica foi separada, secada sobre MgSO4, filtrada através de SiO2 e evaporada até secar, rendendo um sólido cristalino. Rendimento: 63%; p.f. 156158^oC. GC-MS: 352 (M+). ¹H RMN (CDCl3/ HMDS) δ ppm: 3,97 (s, 3H, OCH3), 7,28 (dd, 1H), 2,31 (d, 1H), 7,73 (d, 1H), 8,55 (s, 1H).¹³C RMN (CDCl3) δ ppm: 53,2, 110,4, 117,0, 117,7, 118,3, 119,0, 120,2, 131,2, 147,5, 152,5, 155,3, 155,7, 163,1.

[00101] Éster butílico de ácido 2-oxo-7trifluorometanosulfonilóxi-2H-cromeno-3-carboxílico (4b).

Rendimento: 44%; p.f. 122-123 ^oC. ¹H RMN: 0,97 (t, 3H, J = 6,9 Hz, CH3), 1,42-1,52 (m, 2H, CH2), 1,72-1,79 (m, 2H, CH2), 4,36 (t, 2H, J = 6,9 Hz, CH2), 7,25-7,30 (m, 2H, 6-CH, 8-CH), 7,72 (d, 1H, J = 8,6 Hz, 5

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CH), 8,49 (s, 1H, 4-CH). ¹³C RMN: 13,7, 19,1, 30,5, 66,2, 110,4, 117,0, 117,7, 118,1, 119,5, 131,1, 146,8, 152,4, 155,2, 155,7, 162,6.

[00102] Éster octílico de ácido 2-oxo-7trifluorometanosulfonilóxi-2H-cromeno-3-carboxílico (4c).

Rendimento: 96%. ¹H RMN: 0,87 (t, 3H), 1,26-1,36 (m, 8H), 1,38-1,46 (m, 2H), 4,35 (t, 2H), 7,25-7,30 (m, 2H), 7,72 (d, 1H), 8,49 (s, 1H). ¹³C RMN: 14,1,22,6, 25,8, 29,1,29,2, 31,7, 66,5, 110,4, 117,0, 117,7, 118,1, 119,5, 120,2, 131,1, 146,8, 152,4, 155,2, 155,7, 162,5.

[00103] Éster decílico de ácido 2-oxo-7trifluorometanusulfonilóxi-2H-cromeno-3-carboxílico (4d).

Rendimento: 46%; p.f. 96-98 ^oC. ¹H RMN: 0,87 (t, 3H), 1,27-1,47 (m, 14H), 1,73-1,81 (m, 2H), 4,35 (t, 2H), 7,25-7,30 (m, 2H), 7,72 (d, 1H), 8,49 (s, 1H). ¹³C RMN: 14,0, 22,6, 25,8, 28,5, 29,1, 29,2, 29,4, 29,5, 31,8, 66,4, 110,3, 117,0, 117,7, 118,1, 119,5, 120,2, 131,1, 146,8, 152,3, 155,2, 155,6, 162,5.

Intermediários II

[00104] Síntese de 7-(3-hidróxi-3-metilbut-1-in-1-il)-2-oxo-2Hcromeno-3-carboxilatos (II). Método apresentado para preparação de 7(3-hidróxi-3-metilbut-1 -in-1 -il)-2-oxo-2H-cromeno-3-carboxilato de metila (IIa). A solução de éster metílico de ácido 2-oxo-7trifluorometanossulfonilóxi-2H-cromeno-3-carboxílico (0,97 g, 2,76 mmol) e trietilamina (0,837 g, 8,28 mmol) em DMF seco (5 ml) foi adicionado por gotejamento sob atmosfera de Ar para a mistura de tetracis (trifenilfosfina) paládio(0) (0,319 g, 0,276 mmol) e iodeto de cobre (0,10 g, 0,552 mmol) em DMF seco (5 ml). Então 2-metilbut-3-in2-ol (0,46 g, 5,52 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante a noite. Após a conclusão da reação, o acetato de etila (150 ml) e algumas gotas de amônia (aq.) foram adicionados seguido por filtração através de uma almofada de sílica-gel. Então, a solução orgânica foi lavada com salmoura (5 x 50

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22/49 ml), secada sobre MgSO4. Após a evaporação do solvente, o produto desejado Ila foi isolado por cromatografia rápida (sílica-gel, hexano/acetato de etila como eluente). Rendimento: 65 %, p.f. 168170^oC. GC-MS: 286 (M+). 1H RMN (CDCl3) δ ppm: 1,64 (s, 6H), 2,14 (s, 1H), 3,95 (s, 3H), 7,33 (dd, 1H), 7,34-7,36 (m, 1H), 7,52 (d, 1H), 8,51 (s, 1H). ¹³C RMN (CDCl3) δ ppm: 31,2, 53,0, 65,6, 80,7, 99,1, 117,5, 117,9, 119,4, 128,0, 129,2, 148,3, 154,8, 156,4, 163,6.

[00105] 7-/(1 -hidroxiciclopentil)etinil/-2-oxo-2H-cromeno-3carboxilato de metila (IIb). Rendimento: 60%, p.f. 176-177 ^oC. ¹H RMN: 1,77-1,92 (m, 4H), 2,04-2,07 (m, 4H), 2,09 (s, 1H), 3,94 (s, 3H), 7,317,33 (m, 2H), 7,51 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 8,50 (s, 1H). ¹³C RMN: 23,5, 42,4, 52,9, 74,7, 81,6, 98,5, 117,4, 117,7, 119,3, 128,0, 129,2, 129,4, 148,3, 154,8, 156,3, 163,5.

[00106] 7-/(1-hidroxiciclo-hexil)etinil/-2-oxo-2H-cromeno-3carboxilato de metila (IIc). Rendimento: 66 %. P.f. 178-180 ^oC. GCMS: 326 (M+). 1H RMN (CDCl3/ HMDS) δ ppm: 1,23-1,32 (m, 1H), 1,561,78 (m, 7H), 2,00-2,04 (m, 1H), 2,18 (s, 1H), 3,95 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,34 (d, 1H), 7,52 (d, 1H), 8,51 (s, 1H). ¹³C RMN (CDCl3) δ ppm: 23,2, 25,1, 39,7, 52,9, 69,1, 82,8, 98,4, 117,5, 117,8, 119,4, 128,1, 129,3, 148,3, 154,9, 156,3, 163,6.

[00107] 7-/(1-metoxiciclo-hexil)etinil/-2-oxo-2H-cromeno-3carboxilato de metila (IId). Rendimento: 57%, espuma. 1H RMN: 1,301,31 (m, 1H), 1,52-1,60 (m, 3H), 1,61-1,74 (m, 4H), 1,96-2,00 (m, 2H), 3,42 (s, 3H), 3,95 (s, 3H), 7,34-7,38 (m, 2H), 7,53 (d, 1H), 8,51 (s, 1H). ¹³C RMN: 22,7, 25,3, 36,5, 50,9, 52,9, 74,3, 84,5, 96,2, 117,4, 117,8, 119,5, 128,1, 129,2, 129,4, 148,3, 154,9, 156,3, 163,5.

[00108] 7-/(1-hidroxiciclo-hexil)etinil/-2-oxo-2H-cromeno-3carboxilato de butila (IIe). Rendimento: 61%, espuma. ¹H RMN: 0,97 (t, 3H), 1,28-1,36 (m, 1H), 1,42-1,52 (m, 2H), 1,52-1,69 (m, 4H), 1,691,79 (m, 5H), 1,99-2,04 (m, 2H), 4,35 (t, 2H), 7,33-7,36 (m, 2H), 7,53 (d,

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1H), 8,45 (s, 1H).¹³C RMN: 13,7, 19,1,23,2, 25,1,30,6, 39,8, 65,9, 69,1, 82,9, 98,2, 117,6, 118,4, 119,4, 128,0, 129,13, 129,18, 147,6, 154,8, 156,3, 163,0.

[00109] 7-/(1 -hidroxiciclo-hexil)etinil/-2-oxo-2H-cromeno-3carboxilato de octila (Ilf). Rendimento: 59%, espuma. ¹H RMN: 0,86 (t, 3H), 1,26-1,35 (m, 9H), 1,38-1,46 (m, 2H, CH2), 1,55-1,80 (m, 9H), 1,992,00 (m, 2H), 2,13 (s, 1H), 4,33 (t, 2H), 7,32-7,35 (m, 2H), 7,52 (d, 1H), 8,45 (s, 1H). ¹³C RMN: 14,1, 22,6, 25,1, 25,9, 28,5, 29,1, 29,2, 31,7, 39,7, 66,2, 69,1, 82,8, 98,2, 117,5, 118,4, 119,4, 128,0, 129,1, 129,2, 147,6, 154,8, 156,3, 163,0

[00110] 7-/(1-hidroxiciclo-hexil)etinil/-2-oxo-2H-cromeno-3carboxilato de decila (IIg). Rendimento: 83%, espuma. ¹H RMN: 0,87 (t, 3H), 1,26-1,45 (m, 14H), 1,56-1,80 (m, 9H), 2,00-2,04 (m, 2H), 2,06 (s, 1H), 4,34 (t, 2H), 7,33-7,36 (m, 2H), 7,52 (d, 1H), 8,45 (s, 1H). ¹³C RMN: 14,1, 22,6, 23,2, 25,1, 25,9, 28,5, 29,2, 29,3, 29,4, 29,5, 31,8, 39,7, 66,2, 69,1, 82,8, 98,2, 117,5, 118,3, 119,4, 128,0, 129,1, 129,2, 135,0, 147,6, 154,8, 156,3, 163,0.

[00111 ] 2-oxo-7-/3-(piperidin-1 -il)prop-1 -in-1 -il/-2H-cromeno-3carboxilato de metila (IIh). A mistura de tetraquis (trifenilfosfina) paládio(0) (98,5 mg, 0,085 mmol), acetato de paládio (12,7 mg, 0,114 mmol), iodeto de cobre (21,6 mg, 0,114 mmol) em DMF seco foi agitada sob atmosfera Ar a 40 ⁰C por 20 min. A solução de éster metílico de ácido 2-oxo-7-trifluorometanosulfonilóxi-2H-cromeno-3-carboxílico (500 mg, 1,42 mmol) e trietilamina (0,43 g, 4,26 mmol) em DMF e a propargilamina correspondente (1,99 mmol) foram posteriormente adicionadas. A síntese foi realizada a 40 ^oC por 3 horas (controle TLC). A mistura de reação foi resfriada a t.a., EtOAc foi adicionado. A mistura foi lavada com água e salmoura e filtrada através de uma almofada de sílica-gel. A fase orgânica foi separada, tratada com 1N HCl e extraída com água. A fase de água foi lavada com Et2O, diluída com EtOAc e

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24/49 trabalhada com Solução saturada de Na2CO3 até pH 8-9. A fase orgânica separada foi secada sobre MgSO4 e evaporada até secar rendendo o produto puro. Rendimento: 54%. p.f. 148-149 ^oC. MS (EI) m/z: 326 [M+1]+. ¹H RMN (CDCI3) δ ppm: 1,41-1,48 (m, 2H), 1,61-1,66 (m, 4H), 2,52-2,59 (m, 2H), 3,50 (s, 2H), 3,93 (s, 3H), 7,34 (d, 1H), 7,36 (s, 1H), 7,51 (d, 1H), 8,50 (s, 1H). ¹³C RMN (CDCI3) δ ppm: 23,8, 25,9, 48,5, 52,9, 53,6, 83,6, 91,3, 117,3, 117,6, 119,46, 128,1, 129,2, 129,8, 148,3, 154,9, 156,4, 163,5.

[00112] 2-oxo-7-/3-(piperidin-1 -il)prop-1 -in-1 -il/-2H-cromeno-3carboxilato de metila (Ili). Rendimento: 60%. P.f. 146-148 ^oC. MS (EI) m/z: 328 [M+1]+. 1H RMN (CDCI3) δ ppm: 2,65 (t, 4H), 3,56 (s, 2H), 3,78 (t, 4H), 3,96 (s, 3H), 7,34 (dd, 1H), 7,37 (d, 1H), 7,54 (d, 1H), 8,52 (s, 1H, 8-CH). ¹³C RMN (CDCI3) δ ppm: 48,1,52,5, 53,0, 66,8, 84,2, 90,0, 117,6, 117,9, 119,5, 128,2, 129,30, 148,3, 154,9, 156,3, 163,6.

[00113] 7-/3-(4-metilpiperazin-1 -il/prop-1 -in-1 -il)-2-oxo-2Hcromeno-3-carboxilato de metila (IIj). Rendimento: 43%. P.f. 149150^oC. MS (EI) m/z: 341 [M+1]+. 1H RMN (CDCI3) δ ppm: 2,28 (s, 3H), 2,40-2,56 (m, 4H), 2,62-2,72 (m, 4H), 3,54 (s, 2H), 3,92 (s, 3H), 7,307,34 (m, 2H), 7,50 (d, 1H), 8,49 (s, 1H).¹³C RMN (CDCI3) δ ppm: 45,9, 47,6, 52,0, 52,9, 54,9, 84,0, 90,4, 117,4, 117,7, 119,4, 128,1, 129,2, 148,3, 154,8, 156,3, 163,5.

[00114] Método geral para preparação de selenofeno[3,2h]cromeno (I).

[00115] Para a soIução de dióxido de seIênio (0,22 g, 2,0 mmoI) em HBr (2 mI), etiniI cromeno II (1,0 mmoI) em dioxano foi adicionado e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 24-48 horas. Após o consumo de substrato II (LC-MS), a mistura de reação foi basificada por Na2CO3 até pH 8-9 e extraída com cIoreto de metiIeno. A fase orgânica foi Iavada com saImoura, secada com Na2SO4 anidro, fiItrada, concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia rápida em

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25/49 sílica-gel usando a mistura cloreto de metileno / acetato de etila como eluente.

Exemplo 1.

7-bromo-8-(2-hidroxipropan-2-il)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de metila (I-1).

[00116] Rendimento: 63 %; p.f. > 200 ^oC. MS (EI) m/z: 445 [M+1]+. [00RMN (CDCl3/ HMDS) δ ppm: 1,88 (s, 6H), 3,99 (s, 3H), 7,64 (d, 1H), 7,79 (d, 1H), 8,81 (s, 1H). ¹³C RMN (CDCls) δ ppm: 28,7, 53,2, 75,1, 113,3, 115,4, 121,1, 122,2, 124,6, 126,1, 151,1, 162,1.

Exemplo 2.

7-bromo-8-(ciclopent-1 -en-1 -il)-2-oxo-2 H-selenofeno[3,2h ]cromeno-3-carboxilato de metila (I-2).

O

OMe

[00117] Rendimento: 36%, p.f. = 176-177 ^oC.1H RMN: 2,03-2,11 (m, 2H), 2,57-2,63 (m, 2H), 2,93-2,99 (m, 2H), 3,96 (s, 3H), 6,69-6,72 (m, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,74 (d, 1H), 8,65 (s, 1H). ¹³C RMN: 23,4, 33,9, 36,9, 52,9, 105,9, 113,5, 116,2, 121,9, 124,3, 126,1, 136,5, 137,0, 144,8, 146,9, 149,7, 152,2, 156,2, 163,7.

Exemplo 3.

7-bromo-8-(1-hidroxiciclo-hexil)-2-oxo-2 H-selenofeno[3,2h ]cromeno-3-carboxilato de metila (I-3)

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26/49

[00118] Rendimento: 66 %. P.f. = 260-265 ^oC. MS (EI) m/z: 485 [M+H1]8.] 1H RMN (CDCle) δ ppm: 1,37-1,46 (m, 1H), 1,69-1,88 (m, 7H), 2052128P1 (m, 2H), 2,74 (s, 1H), 3,97 (s, 3H), 7,59 (d, 1H), 7,76 (d, 1H), 8,68 (s, 1H). ¹³C RMN (CDCle) δ ppm: 21,6, 24,7, 34,9, 52,9, 75,9, 101,6, 113,1, 116,2, 121,6, 124,7, 125,8, 147,8, 149,9, 152,6, 156,4, 162,6, 163,8.

Exemplo 4.

7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-2-oxo-2 H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de metila (I-4)

[00119] Rendimento: 45%, p.f. = 166-167 ^oC. 1H RMN: 1,29-1,39 (m, 1H), 1,65-1,78 (m, 5H), 1,99-2,01 (m, 2H), 2,29-2,33 (m, 2H), 3,30 (s, 3H), 3,97 (s, 3H), 7,60 (d, 1H), 7,81 (d, 1H), 8,68 (s, 1H). ¹³C RMN: 21,7, 25,1, 34,7, 51,0, 52,9, 79,6, 104,6, 113,4, 116,4, 122,0, 124,8, 125,9, 147,3, 149,8, 152,4, 156,2, 157,9, 163,7. ESI-MS m/z: 498 [M].

Exemplo 5.

7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-2-oxo-2 H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de butila (I-5)

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27/49

[00120] Rendimento: 61%, p.f. = 202-204 ^oC. ¹H RMN: 0,99 (t, 3H), [0)042054 (m, 2H), 1,69-1,81 (m, 7H), 1,84-1,88 (m, 2H), 2,52-2,59 (m, 2)0)12036 (t, 2H), 7,57 (d, 1H), 7,73 (d, 1H), 8,61 (s, 1H). ¹³C RMN: 13,7, 19,2, 21,6, 24,8, 30,6, 34,9, 65,8, 75,9, 101,5, 113,1, 116,7, 121,5, 124,6, 125,8, 147,7, 149,2, 152,5, 156,3, 162,5, 163,2. ESI-MS m/z: 541 [M].

Exemplo 6.

7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-2-oxo-2 H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de octila (I-6)

[00121] Rendimento: 33%, p.f. = 189-190 ^oC. ¹H RMN: 0,88 (t, 3H), 1,27-1,48 (m, 11H), 1,68-1,82 (m, 7H), 1,82-1,88 (m, 2H), 2,51-2,59 (m, 2H), 2,90 (s, 1H), 4,35 (t, 2H), 7,57 (d, 1H), 7,73 (d, 1H), 8,61 (s, 1H). ¹³C RMN: 14,1,21,6, 22,6, 24,8, 25,9, 28,6, 29,1,29,2, 31,8, 34,9, 66,1, 75,9, 101,5, 113,1, 116,7, 121,5, 124,6, 125,7, 147,7, 149,3, 152,4, 156,4, 162,6, 163,2. ESI-MS m/z: 582 [M].

Exemplo 7.

7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-2-oxo-2 H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de decila (I-7)

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28/49

10H21

[00122] Rendimento: 28%, p.f. = 175-176 ^oC. ¹H RMN: 0,86-0,90 (m, 1H), 0,87 (t, 3H), 1,25-1,37 (m, 14H), 1,41-1,47 (m, 2H), 1,69-1,81 (m, 7H), 1,84-1,88 (m, 2H), 2,52-2,60 (m, 2H), 286 (s, 1H), 4,35 (t, 2H), 7,58 (d, 1H), 7,74 (d, 1H), 8,61 (s, 1H). ¹³C RMN: 14,1,21,6, 22,7, 24,8, 25,7, 25,9, 28,6, 29,3, 29,4, 29,5, 31,9, 32,8, 34,9, 63,1, 66,1, 75,9, 101,5, 113,1, 116,7, 121,5, 124,6, 125,8, 147,7, 149,3, 152,5, 156,4, 162,5, 163,2. ESI-MS m/z: 611 [M+1].

Exemplo 8.

7-bromo-2-oxo-8-(piperidin-1-ilmetil)-2 H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de metila (I-8)

p.f. = 125-130 ^oC. MS (EI) m/z: 484

[00123] Rendimento: 65 %,

[M+1]+. ¹H RMN (CDCI3/ HMDS) δ ppm: 1,45-1,52 (m, 2H), 1,61-1,66 (m, 4H), 2,59-2,63 (m, 4H), 3,78 (s, 2H), 3,97 (s, 3H), 7,58 (d, 1H), 7,71 (d, 1H), 8,68 (s, 1H). ¹³C RMN (CDCI3) δ ppm: 23,9, 26,1, 52,8, 55,3, 59,5, 104,8, 112,9, 116,0, 120,8, 125,8, 146,7, 149,9, 152,7, 155,2, 156,3, 163,8.

Exemplo 9.

7-bromo-8-(morfolinometil)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2-cromeno h]3-carboxilato de metila (I-9)

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29/49

[00124] Rendimento: 48 %. M.p.150-155 ^oC. MS (EI) m/z: 486 [M+1]⁺. ¹H RMN (CDCla/ HMDS) δ ppm: 2,70 (t, 4H), 3,77 (t, 4H), 3,86 (s, 2H), 3,97 (s, 3H), 7,59 (dd, 1H), 7,73 (dd, 1H), 8,68 (d, 1H). ¹³C RMN (CDCla) δ ppm: 52,9, 54,1, 59,3, 67,0, 106,0, 113,2, 116,4, 121,1, 125,6, 126,0, 146,5, 149,9, 152,4, 152,7, 156,2, 163,7.

Exemplo 10.

7-bromo-8-((4-metilpiperazin-1-il)metil)-2-oxo-2 H-selenofeno[3,2h ]cromeno-3-carboxilato de metila (I-10).

[00125] Rendimento: 34 %, p.f. = 115-118 ^oC (decomp.). MS (EI) m/z: 499 [M+1]⁺. ¹H RMN (CDCI3/ HMDS) δ ppm: 2,34 (s, 3H), 2,44-2,60 (m, 4H), 2,64-2,80 (m, 4H), 3,86 (s, 2H), 3,97 (s, 3H), 7,58 (d, 1H), 7,72 (d, 1H), 8,68 (s, 1H). ¹³C RMN (CDCI3) δ ppm: 45,8, 52,8, 53,5, 55,0, 58,7, 105,4, 113,0, 116,1, 120,8, 125,5, 125,8, 146,5, 149,8, 152,6, 153,6, 156,1, 163,6.

Método geral de hidrólise

[00126] O hidróxido de sódio (276 mg, 6,9 mmol) como uma solução de água saturada foi adicionado à solução de cromeno (335 mg, 0,69 mmol) em 50 ml de metanol. A mistura de reação foi deixada em agitação por 5 dias (controle TLC) e, em seguida, acidificada com 2N HCl até pH=2-3. O precipitado formado foi filtrado, lavado com

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30/49 acetonitrila fria e secado.

Exemplo 11.

Ácido 7-bromo-8-(1-hidroxiciclo-hexil)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3- carboxílico (I-11).

[00127] Rendimento: 98%. P.f. > 200 ^oC. ¹H RMN: 1,21-1,29 (m, 1H), 1,61-1,74 (m, 7H), 2,39-2,43 (m, 2H), 7,68 (d, 1H), 7,93 (d, 1H), 8,87 (s, 1H). ESI-MS m/z: 471 [M+1].

Exemplo 12.

Ácido 7-bromo-8-(1 -metoxiciclo-hexil)-2-oxo-2 H-selenofeno[3,2h ]cromeno-3-carboxílico (I-12)

[00128] Rendimento: 75%, p.f. > 200 ^oC. ¹H RMN: 1,30-1,41 (m, 1H), 1,67-1,81 (m, 5H), 2,05-2,12 (m, 2H), 2,28-2,32 (m, 2H), 3,34 (s, 3H), 7,73 (d, 1H), 7,93 (d, 1H), 9,04 (s, 1H). ¹³C RMN: 21,7, 25,1,34,7, 51,0, 52,9, 79,6, 104,6, 113,4, 116,4, 122,0, 124,8, 125,9, 147,3, 149,8, 152,4, 156,2, 157,9, 163,7. ESI-MS m/z: 485 [M+1].

Exemplo 13.

Cloridrato de ácido 7-bromo-2-oxo-8-(piperidin-1-ilmetil)-2Hselenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxílico (I-13)

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31/49

[00129] Rendimento: 99 %, p.f. = 237-240 ^oC. 1H RMN: 1,51-1,55 (m, 2H), 1,75-1,81 (m, 4H), 2,96-3,13 (m, 4H), 4,53 (br s, 1H), 7,76 (d, 1H), 7,98 (d, 1H), 8,88 (s, 1H). ESI-MS m/z: 470 [M+1].

Exemplo 14.

Cloridrato de ácido 7-bromo-2-oxo-8-(morfolin-1-ilmetil)-2Hselenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxílico (I-14)

[00130] Rendimento: 90 %, p.f. > 200 oC. 1H RMN: 3,03-3,38 (m, 4H), 3,82-3,98 (m, 4H), 4,72 (br s, 2H), 7,78 (d, 1H), 7,99 (d, 1H), 8,88 (s, 1H). ESI-MS m/z: 472 [M+1].

Exemplo 15.

Cloridrato de ácido 7-bromo-8-/(4-metilpiperazin-1-il/metil)-2-oxo2H-selenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxílico (I-15)

[00131] Rendimento: 88 %, p.f. > 200 oC. 1H RMN: 2,66-2,79 (m, 4H), 2,78 (br s, 3H), 3,08-3,15 (m, 4H), 4,03 (s, 2H), 7,73 (d, 1H), 7,97 (d, 1H), 8,89 (s, 1H). ESI-MS m/z: 485 [M+1].

[00132] Método geral de síntese de amidas e ésteres de ácido |Qfleâ2»]feno[H]3,2-cromeno-3-carboxílico. O ácido 7-bromo-2-oxo[20H0-1s3e2le] nofeno[H]3,2-cromeno-3-carboxílico (0,21 mmol) foi suspenso

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32/49 em CH2CI2 (20 ml) e o excesso de cloreto de oxalila (0,17 ml, 2 mmol) foi adicionado por gotejamento. O solvente foi evaporado após 24 h de agitação e o produto bruto foi dissolvido em CH2Cl2 seco (20 ml). Enquanto isso, em um outro frasco amina secundária (10 equiv) ou álcool (0,61 mmol) e 0,5 equiv. DMAP (0,1 mmol, 13 mg) foi dissolvido em CH2Cl2 seco (10 ml). No caso de álcool, um excesso de Et3N (0,5 ml) foi adicionado à mistura. Este frasco foi resfriado em banho de gelo e solução de cloreto de ácido selenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxílico foi adicionada por gotejamento. Após 24 h de agitação em temperatura ambiente, amidas ou ésteres foram isolados por cromatografia rápida em sílica-gel.

Exemplo 16.

7-bromo-8-(ciclo-hex-1 -en-1 -il)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de octila (I-16)

[00133] Rendimento: 31%, p.f. = 145-147 ^oC. ¹H RMN: 0,88 (t, 3H), 1,24-1,48 (m, 10H), 1,68-1,84 (m, 6H), 2,24-2,29 (m, 2H), 2,48-2,53 (m, 2H), 4,35 (t, 2H), 6,32-6,35 (m, 1H), 7,58 (d, 1H), 7,74 (d, 1H), 8,60 (s, 1H). ¹³C RMN: 14,2, 21,5, 22,6, 22,7, 25,8, 25,9, 28,6, 29,1, 29,2, 29,9, 31,8, 66,1, 105,2, 113,4, 116,7, 121,9, 124,7, 126,0, 132,2, 133,5, 146,3, 149,1, 151,0, 152,2, 156,2, 163,1.

Exemplo 17.

(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-Dimetil-17-((R)-6-metilheptan-2il)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro-1Hciclopenta[a]fenantren-3-il-7-bromo-8-(ciclo-hex-1-en-1-il)-2-oxo2H-selenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxilato (I-17)

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33/49

[00134] Rendimento: 26%, p.f.> 200 ^oC. ¹H RMN: 0,67 (s, 3H), 0,85 (dd, 6H), 0,90 (d, 3H), 0,94-1,57 (m, 20H), 1,67-2,02 (m, 13H), 2,33-2,37 (m, 2H), 2,46-2,51 (m, 4H), 4,81-4,90 (m, 1H, CH), 5,39-5,41 (m, 1H), 6,30-6,33 (m, 1H), 7,56 (d, 1H), 7,73 (d, 1H), 8,57 (s, 1H). ¹³C RMN: 11,8, 18,7, 19,3, 21,0, 21,5, 22,5, 22,7, 22,8, 23,8, 24,3, 25,8, 27,8, 28,0, 28,2, 29,9, 31,8, 31,9, 35,8, 36,2, 36,6, 36,9, 38,0, 39,5, 39,7, 42,3, 49,9, 56,1,56,6, 75,7, 105,2, 113,4, 116,9, 121,9, 122,9, 124,7, 125,9, 132,3, 133,5, 139,4, 146,2, 148,8, 150,9, 152,2, 156,2, 162,2.

Exemplo 18.

(3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-Dimetil-17-((R)-6-metilheptan-2il)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro-1H ciclopenta[a]fenantren-3-il-7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-2-oxo2H-selenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxilato (I-18)

[00135] Rendimento: 24%, p.f.> 200 ^oC. ¹H RMN: 0,68 (s, 3H), 0,86 (dd, 6H), 0,92 (d, 3H), 0,94-1,04 (m, 3H), 1,06 (s, 3H, CH3), 1,11-1,38 (m, 12H), 1,44-1,59 (m, 6H), 1,67-1,86 (m, 7H), 1,91-2,06 (m, 6H), 2,312,34 (m, 2H), 2,48-2,50 (m, 2H), 3,30 (s, 3H), 4,84-4,92 (m, 1H), 5,41

Petição 870180150412, de 12/11/2018, pág. 47/70

34/49

5,43 (m, 1H), 7,60 (d, 1H), 7,81 (d, 1H), 8,60 (s, 1H). ¹³C RMN: 11,8, 18,7, 19,3, 21,0, 21,6, 22,5, 22,8, 23,8, 24,3, 25,1,27,7, 28,0, 28,2, 31,8, 31,9, 34,7, 35,8, 36,1,36,6, 36,9, 38,0, 39,5, 39,7, 42,3, 49,9, 51,0, 56,1, 56,6, 75,7, 79,5, 104,6, 113,4, 117,2, 121,9, 122,9, 124,8, 125,8, 139,4, 147,1, 148,8, 152,2, 156,2, 157,5, 162,2.

Exemplo 19.

7-Bromo-8-(ciclo-hex-1 -en-1 -il)-3-(piperidine-1 -carbonil)-2Hselenofeno[3,2-h]cromen-2-ona (I-19)

[00136] Rendimento: 29%, espuma. ¹H RMN: 1,62-1,74 (m, 8H), 1,78-1,84 (m, 2H), 2,24-2,28 (m, 2H), 2,48-2,53 (m, 2H), 3,34-3,37 (m, 2H), 3,70-3,74 (m, 2H), 6,30-6,33 (m, 1H), 7,51 (d, 1H), 7,73 (d, 1H), 7,97 (s, 1H). ¹³C RMN: 21,5, 22,7, 24,4, 25,4, 25,8, 26,2, 29,9, 43,1, 48,4, 105,1, 114,0, 121,9, 124,5, 124,8, 125,2, 132,2, 133,3, 143,1, 144,9, 149,5, 150,9, 157,5, 163,2.

Exemplo 20.

7-Bromo-8-(ciclo-hex-1 -en-1 -il)-3-(morfolina-1 -carbonil)-2Hselenofeno[3,2-h]cromen-2-ona (I-20)

[00137] Rendimento: 34%, p.f. = 195-196 ^oC. ¹H RMN: 1,69-1,75 (m, 2H), 1,79-1,85 (m, 2H), 2,24-2,30 (m, 2H), 2,49-2,54 (m, 2H), 3,44 (t, 2H), 3,74 (t, 2H), 3,80-3,82 (m, 4H), 6,32-6,35 (m, 1H), 7,54 (d, 1H), 7,77

Petição 870180150412, de 12/11/2018, pág. 48/70

35/49 (d, 1H), 8,07 (s, 1H). ¹³C RMN: 21,5, 22,7, 25,8, 29,9, 42,7, 47,7, 66,7, 105,1, 113,9, 122,1, 123,3, 124,8, 125,3, 132,2, 133,4, 144,7, 145,4, 149,9, 151,1, 157,5, 163,6.

Exemplo 21.

7-Bromo-8-(ciclo-hex-1-en-1-il)-N,N-bis(2-metóxietil)-2-oxo-2Hselenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxamida (I-21)

[00138] Rendimento: 27%, espuma. ¹H RMN: 1,67-1,83 (m, 4H), 2,22-2,28 (m, 2H), 2,48-2,53 (m, 2H), 3,28 (s, 3H), 3,39 (s, 3H), 3,493,58 (m, 4H), 3,66-3,77 (m, 4H), 6,29-6,33 (m, 1H), 7,49 (d, 1H), 7,72 (d, 1H), 7,92 (s, 1H). ¹³C RMN: 21,5, 22,7, 25,8, 29,9, 45,7, 49,8, 58,8, 58,9, 70,3, 70,7, 105,0, 113,9, 121,9, 124,3, 124,8, 125,1, 132,2, 133,2, 143,1, 144,9, 149,3, 150,8, 157,7, 165,6.

Exemplo 22.

7-Bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-3-(morfolina-4-carbonil)-2Hselenofeno[3,2-h]cromen-2-ona (I-22)

[00139] Rendimento: 40%, espuma. ¹H RMN: 1,30-1,39 (m, 1H), 1,64-1,77 (m, 5H), 1,99-2,07 (m, 2H), 2,29-2,32 (m, 2H), 3,30 (s, 3H), 3,42 (t, 2H), 3,72 (t, 4H), 3,79 (br s, 4H), 7,53 (d, 1H), 7,80 (d, 1H), 8,06 (s, 1H). ¹³C RMN: 21,7, 25,1, 34,7, 42,6, 47,7, 51,0, 66,5, 66,6, 79,5, 104,5, 113,8, 122,0, 123,5, 124,8, 125,1, 144,6, 146,2, 151,1, 156,5,

Petição 870180150412, de 12/11/2018, pág. 49/70

36/49

157,4, 163,5. ESI-MS m/z: 554 [M+1].

[00140] A citotoxicidade e atividade anticâncer contra tumor primário e metástase dos compostos sintetizados da Fórmula 1 foram testadas em linhagens celulares e em modelos animais.

1. Atividade antiproliferativa in vitro

[00141] A atividade anticâncer de selenofeno[h]cromeno foi testada in vitro utilizando o ensaio de citotoxicidade. Assim, as linhagens celulares tumorais monocamada MDA-MB-435s (melanoma humano), MCF-7 (adenocarcinoma de mama humano, estrógeno-positivo), MESSA (sarcoma do útero humano), HT-1080 (fibrossarcoma humano), A549 (carcinoma de pulmão humano), SH-SY5Y (neuroblastoma humano), CCL-8 (sarcoma de camundongo), MG-22A (hepatoma de camundongo) e HepG2 (carcinoma hepatocelular humano) foram cultivadas em meio DMEM padrão (meio de Eagle modificado por Dulbecco) (Sigma) suplementado com soro fetal bovino a 10% (Sigma). Cerca de 2-9^.10⁴ células/ml (dependendo na natureza da linha) foram colocadas em placas de 96 poços, imediatamente depois de compostos serem adicionados aos poços. As células não tratadas foram utilizadas como controle. As placas foram incubadas por 72 h, a 37 ^oC, 5% CO2. O número de células sobreviventes foi determinado usando brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolínio (MTT). Teste MTT: após incubação, o meio de cultura foi removido e 200 μΙ de meio fresco com 10mM HEPES foi adicionado em cada poço da placa, então 20 μΙ de MTT (2mg/ml em HBSS) foi adicionado. Após a incubação (3 h, a 37^oC, 5% CO2), o meio com MTT foi removido e 200 μl de DMSO foram adicionados de uma vez para cada amostra. As amostras foram testadas em 540 nm no fotômetro Anthos HT II.

[00142] Em paralelo, a concentração limite relevante para a maior dose tolerada foi determinada para cada composto utilizando a linhagem celular NIH 3T3 (fibroblastos de embrião de camundongo) e a

Petição 870180150412, de 12/11/2018, pág. 50/70

37/49 citotoxicidade basal obtida foi utilizada para predizer as doses iniciais para os valores LD50 orais agudos in vivo em roedores.

[00143] Teste de citotoxicidade basal: o ensaio de absorção do vermelho neutro (NRU) foi realizado de acordo com o protocolo padrão de Stokes modificado pelo estudo de validação NICEATM-ECVAM. O procedimento de ensaio de citotoxicidade NRU é baseado na habilidade de células viáveis para incorporar e ligar o vermelho neutro, um corante supravital. Células (9000 células/poço) de camundongos Balb/c 3T3 (fibroblastos de embrião de camundongo Swiss Albino) foram colocadas em placas de 96 poços por 24 h em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) contendo soro fetal bovino a 5%. As células foram então expostas a compostos de teste em um intervalo de oito concentrações (1000, 316, 100, 31, 10, 3, 1 pg/ml) por 24 horas. As células não tratadas foram utilizadas como controle. Após 24 h, o meio foi removido de todas as placas. Em seguida, 250 μl de solução de vermelho neutro foi adicionada (0,05 mg/ml NR em DMEM, 24 h préincubadas a 37 °C e, em seguida, filtrada antes do uso através de um filtro de seringa de 0,22 pm). As placas foram incubadas por 3 h e, em seguida, as células foram lavadas três vezes com PBS. O corante dentro de células viáveis foi liberado por extração com uma mistura de ácido acético, etanol e água (1:50:49). Absorção do vermelho neutro foi medida usando um leitor multiplaca espectrofotômetro (TECAN, Infinite M1000) a 540 nm. A porcentagem de células vivas foi calculada através da fórmula: OD (células tratadas)*100/OD (células controle). Os valores de IC50 foram calculados utilizando o programa Graph Pad Prism® 3.0. [00144] Estimativa de LD50 a partir de valores de IC50: Dados dos testes in vitro foram utilizados para estimar a dose inicial para os testes de toxicidade aguda oral em roedores. A dose inicial in vivo é uma estimativa do valor LD50 calculado inserindo o valor IC50 in vitro em uma fórmula de regressão: log LD50 (mM/kg) = 0,439 log IC50 (mM) + 0,621.

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38/49

O valor é recalculado para mg/kg e compostos são avaliados de acordo com quatro categorias de toxicidade: categoria 1: LD50 ^ 5 mg/kg (alta toxicidade); categoria 2: 5 < LD50 ^ 50 mg/kg (toxicidade moderada); categoria 3: 50 < LD50 ^ 300 mg/kg (toxicidade leve); categoria 4: 300 < LD50 ^ 2 000 mg/kg (praticamente sem toxicidade).

[00145] Determinação da toxicidade aguda. Toxicidade aguda oral (LD50) foi estimada pelo procedimento Up-and-Down (sobe e desce), de acordo com diretrizes de teste da OECD 425 [OECD (2001) Guideline for testing of chemicals OECD 425, acute oral toxicity - Up-and-Down Procedure, Paris, p. 1-26]. Os animais foram observados diariamente para sinais clínicos ou mortalidade ao longo de um período de duas semanas após o tratamento. Compostos foram dissolvidos em DMSO e, em seguida, em PBS (pH 7,4; concentração final de DMSO <1%). A substância de teste foi administrada em uma dose única oral para camundongos. Os animais foram observados diariamente para sinais clínicos ou mortalidade ao longo de um período de duas semanas após o tratamento.

[00146] Os resultados dos estudos com base em cultura de células estão resumidos na Tabela 1.

[00147] Em geral, os compostos testados apresentaram citotoxicidade média ou baixa contra células tumorais malignas. Particularmente, todos os derivados são células NIH 3T3 de baixa a normal toxicidade de acordo com teste de citotoxicidade basal (LD50 > 1252 mg/kg), o que é surpreendentemente muito para compostos contendo Se.

[00148] O derivado I-1 é capaz de suprimir o crescimento de células SHSY5Y (IC50= 32 μ M). Também hidroxiciclo-hexilselenofeno[ h ]cromeno I-3 apresenta atividade antiproliferativa moderada (IC50 até 19 μM em linhagens celulares de câncer A549 e SHSY5Y) e simultaneamente é baixo a normal tóxico para fibroblastos

Petição 870180150412, de 12/11/2018, pág. 52/70

39/49 de embrião de camundongo NIH 3T3 (toxicidade basal estimada LD50 é igual a 2712 mg/kg). A hidrólise de grupo de éster (composto I-11) levou a perda completa de citotoxicidade. Morfolinometilselenofeno[ h ]cromeno I-9 possui citotoxicidade média, no entanto, este composto é o mais tóxico entre cromenos estudados contra células NIH 3T3 normais. Ácido carboxílico correspondente I-14 manteve citotoxicidade em linhagens celulares de câncer e toxicidade basal substancial (LD50= 1320 mg/kg). N-metilpiperazinometila substituída por selenofeno[h]cromenos I-10 e I-15 são baixos tóxicos para as linhagens celulares de câncer, que demonstrou maior entrada de recursos estruturais sobre a atividade citotóxica de compostos testados em vez de presença de selênio ou cadeia principal de cumarina na molécula.

[00149] Toxicidade aguda in vivo tem sido determinada para I-10 e I-11 em camundongos ICR machos com 6 semanas de idade. Surpreendentemente, de acordo com os dados a toxicidade aguda para I-10 é de 891 mg/kg e I-11 - mais do que 2000 mg/kg após administração oral em camundongos.

Tabela 1. Citotoxicidade in vitro de selenofeno[h]cromenos em linhagens celulares tumorais monocamada: MDA-MB-435s (melanoma humano), MCF-7 (adenocarcinoma de mama humano, estrógenopositivo), MES-SA (sarcoma de útero humano), HT-1080 (fibrossarcoma humano), A549 (carcinoma de pulmão humano), SH-SY5Y (neuroblastoma humano), CCL-8 (sarcoma de camundongo), 3T3 (fibroblastos de embrião de camundongo), MG-22A (hepatoma de camundongo), HepG2 (carcinoma hepatocelular humano).

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N^o.

Citotoxicidade IC50, μM

Citotoxicidade basal

LD50 Estimado*

MDA-MB435s

MCF-7

MES-SA

O CO o T““ T

A549

SHSY5Y

CO _J O O

3T3

MG-22A

HepG2

μ M/kg

mg/kg

I-1

95±8

221±13

95±9

225±11

196±9

32±3

>225

225±11

-

-

>6000

>2665

I-2

142±12

281±12

155±3

110±12

122±8

-

82±8

>235

>235

197±24

500

194

I-3

64±6

29±2

66±3

27±1

19±2

19±3

186±9

207±9

33±6

-

>5600

>2712

I-4

103±4

46±14

201±5

52±5

>201

-

95±2

198±2

446±6

103±5

1100

548

I-5

-

>190

>190

-

>190

-

>190

-

-

51±5

>3800

>2000

I-6

>171

66±10

>171

>171

>171

50±1

>171

-

-

89±5

>3400

>2000

I-7

152±9

48±13

>164

>164

>164

-

81±2

>164

>164

151±6

>3300

>2000

I-8

>192

165±5

-

>192

115±8

>192

-

54±3

46±3

181±9

>3900

>2000

I-9

67±8

81±6

54±7

86±6

86±6

46±9

84±6

56±3

48±3

90±6

2400

1252

I-10

>187

150±9

>187

170±9

187±10

-

94±7

86±5

64±5

187±10

4300

2299

I-11

208±13

213±6

206±10

77±5

>213

-

149±9

>213

-

>213

>5800

>2727

I-12

127±12

141±10

>206

51±2

61±1

193±2

134±6

213±7

>206

97±7

300

134

I-13

182±11

119±2

103±9

197±3

129±6

>197

-

197±8

49±6

>197

4300

2175

I-14

156±9

95±9

65±6

100±6

51±8

35±9

79±9

43±2

59±2

106±9

2600

1320

I-15

-

>192

-

>192

>192

>192

-

192±7

186±7

>192

3200

1666

I-16

-

-

-

-

-

-

>177

-

>177

500

876

I-17

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

3000

2454

I-18

>117

-

-

-

-

-

>117

-

>117

-

3700

3192

40/49

Petição 870180150412, de 12/11/2018, pág. 54/70

N^o. Citotoxicidade IC50, μM Citotoxicidade basal

LD50 Estimado*

MDA-MB435s

MCF-7

MES-SA

O CO o T““ T

A549

SHSY5Y

CO _J O O

3T3

MG-22A

HepG2

μ M/kg

mg/kg

I-19

51±8

125±8

105±4

50±5

100±3

-

>193

161±23

41±2

103±15

1000

500

I-20

13±1

81±7

61±4

92±12

38±5

-

126±4

>192

117±7

63±6

3000

1605

I-21

76±4

92±12

73±3

51±1

61±6

139±6

100±8

131±7

46±6

51±7

700

384

I-22

43±3

18±2

41±2

38±2

43±4

98±3

39±3

47±4

37±1

47±2

300

195

* LD50 oral agudo estimado foi calculado com base no valor IC50 (mM) do ensaio 3T3 NRU utilizando a fórmula de regressão:

log LD50 (mM/kg) = 0,439 log IC50 (mM) + 0,621 “-“ - sem efeito

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2. Avaliação da atividade anticâncer in vivo

Modelos de câncer não metastático de camundongo.

[00150] Camundongos. Camundongos ICR e BALB/c fêmeas de seis semanas de idade foram comprados no Centro de animais de laboratório da Universidade de Tartu (Estônia). Os camundongos foram alojados cinco a uma gaiola, e em condições normais (21-23°C, 12 h de ciclo luz: escuro), alimentados ad libitum (dieta R3, Lactamin AB, Kimstad, Suécia) e observados diariamente. Os procedimentos experimentais envolvendo animais experimentais foram realizados de acordo com as orientações da Comunidade Europeia, leis e políticas locais, e foram aprovados pelo Comitê de Ética para Proteção dos Animais da Letônia, Serviço Alimentar e Veterinário, Riga, Letônia.

[00151] Linhagens celulares: Estudos in vivo foram realizados utilizando as linhagens celulares de sarcoma de camundongo CCRFS180 II (CCL-8) e carcinoma pulmonar de Lewis (LLC). Todas as linhagens celulares foram adquiridas da ATCC. As células foram cultivadas em meio de Eagle modificado por Dulbecco (Sigma) suplementado com 10% soro bovino fetal (Sigma).

[00152] Ensaios de atividade anticâncer dos compostos divulgados foram realizados in vivo em modelos de câncer não metastático. Os camundongos ICR foram inoculados por via subcutânea na parte traseira com 5x10⁶ células CCL-8 e os camundongos BALB/c foram inoculados com 1x10⁶ células LLC (carcinoma pulmonar de Lewis), que foram suspensas em 0,1 ml de PBS no dia zero do estudo. Os compostos dissolvidos em DMSO e então em 0, 1 ml de água (concentração final de DMSO 1%) foram injetados s.c. Camundongos no grupo não tratado foram igualmente administrados com doses de 0,1 ml de água com DMSO. Volume tumoral (tumor volume V=4nab2/3, a é o máximo e b o mínimo diâmetro do tumor) foi registrado duas vezes por semana. Os camundongos foram examinados a cada dia para

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43/49 doenças, incluindo aparência, peso e comportamento. Os camundongos foram sacrificados no dia 16 do experimento por decapitação depois de anestesia com cetamina/xilazina.

[00153] Os resultados estão apresentados na Tabela 2. Surpreendentemente, depois de um curso de injeções de I-9-I-11 na dose total de 45 mg/kg de um volume do sarcoma CCL-8, o tumor diminuiu em 38-58%. Além disso, derivado I-10 foi capaz de suprimir o crescimento de tumor primário LLC por 34%. Deve-se notar que não foram detectados efeitos colaterais em todos os grupos de animais.

[00154] Tabela 2. Atividade anticâncer in vivo causada por selenofeno[ h ]cromenos (inibição, %)

Condições	I-9	I-10	I-11
CCL-8. Administração: s.c. de acordo com o seguinte esquema: Dia 1, 2, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11; dose 5 mg/kg.	38**	42**	58*
Dose total 45 mg/kg. Carcinoma pulmonar de Lewis. Administração: s.c. de acordo com o seguinte esquema: Dia 1, 2, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 11; dose 20 mg/kg. Dose total 180 mg/kg.		34*

[00155] * - p<0,05; **-p<0,15 comparado com o controle pelo teste t de Student bicaudal

3. Avaliação da atividade antimetastática in vivo

[00156] Modelo in vivo de disseminação hematogênica metastática. Existem vários modelos experimentais in vivo para o estudo de crescimento e metástase de diferentes tumores após o transplante. O local de injeção e as linhagens celulares selecionadas do tropismo do tumor específico são determinados principalmente pelas metástases primárias e secundárias e o crescimento de sua localização. O modelo de metástases pulmonares é amplamente utilizado para avaliar o tratamento de muitos modelos de tumor, incluindo o melanoma B16 e o carcinoma de mama 4T1. O melanoma da pele pode ser curado pela remoção cirúrgica dos estágios iniciais, mas o alto potencial

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44/49 metastático e resistência à quimioterapia leva a um elevado nível de recorrência. A taxa de sobrevida de 5 anos no diagnóstico de metástases em 2013 foi de apenas 15%, e apenas ligeiramente melhorada a partir de 12% na última década. (Cancer Facts and Figures 2013. American Cancer Society. Atlanta, GA, USA, 2013). Uma das formas mais agressivas de câncer de pele melanoma B16-F10 foi escolhida para administração intravenosa na veia da cauda formou metástases pulmonares (Poste et al.,Cancer Res., 40, 1636-1644, 1980).

Modelo de melanoma de metástase pulmonar.

[00157] Camundongos C57BL/6 foram injetados com 100.000 células de melanoma B16-F10 em camundongos através da veia da cauda e o tratamento iniciado 24 horas depois com injeções subcutâneas (s.c.) de compostos administrados de acordo com o seguinte esquema: 1, 7, 8, 9, 10, 11 e 14 dias na dose de 20 mg/kg. Os camundongos do grupo controle receberam igualmente doses de 0,1 ml de água com DMSO (concentração final de DMSO <1%). Vinte e um dias depois, todos os camundongos foram anestesiados com cetamina/xilazina e eutanasiados, os camundongos foram sacrificados e o nódulos de melanoma preto no pulmão foram medidos. Em cada experimento, os camundongos foram pesados duas vezes por semana. [00158] Com base em dados recebidos de experimentos realizados (Figura 1) usando o modelo de metástase de melanoma pulmonar B16-F10 foi confirmado o resultado inesperado e extraordinário que o selenofeno[ h ]cromeno I-10 inibe a metástase de melanoma no pulmão por 74% (Administração: s.c. de acordo com o seguinte esquema: Dia 1, 7, 8, 9, 10, 11, 14; dose total de 140 mg/kg dose). Ao analisar o impacto de I-10 em cada camundongo individual no grupo de seis animais, observou-se que metástases de melanoma em cinco animais foram completamente prevenidas, mas em um - não. O uso do

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45/49 composto I-11 nas mesmas condições experimentais levou-nos a concluir que este composto previne quase totalmente metástase de melanoma no pulmão (96%). Além disso, em quatro dos seis animais não foram observadas metástases.

Avaliação da atividade antimetastática

[00159] O modelo de camundongos singênicos de carcinoma de mama 4T1 (American Type Culture Collection (ATCC) n° de catálogo CRL-2539, 2004) é um excelente modelo que imita os parâmetros clínicos do câncer de mama humano. Usando diferentes métodos de administração dessas células aos camundongos, as metástases do tumor são formadas em vários órgãos e utiliza diferentes vias para a propagação.

[00160] Assim, o implante de células 4T1 na glândula mamária ortotrópica do camundongo induz o desenvolvimento de metástases no pulmão, linfonodos, fígado e na medula óssea. Neste caso, as células do câncer usam uma via linfogênica e hematogênica para a difusão e desenvolve o tumor primário após a invasão e metástase.

[00161] No caso de injeção de células 4T1 na veia da cauda a metástase se desenvolve principalmente no pulmão e no fígado. Tal método simula a propagação hematogênica de células tumorais (Aslakson e Miller, Cancer Res, 1992, 52, 1399-1405; Eckhardt et al.,Nat Rev Drug Discov. 2012, 11, 479-497; Khanna et al.,Carcinogenesis 2005, 26, 513-523).

Modelo ortotrópico do câncer de mama metastático murino 4T1 com metástase no pulmão, fígado, linfonodos e cérebro.

[00162] Modelo ortotrópico de câncer de mama de camundongo foi desenvolvido pela injeção de células 4T1 na almofada de gordura mamária de camundongos BALB/c singênicos. Neste caso, as células 4T1 desenvolvem tumores sólidos seguidas por metástases no pulmão, fígado, linfonodos e cérebro (Aslakson et al., Cancer Res, 1992, 52,

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1399-1405).

[00163] Em nossos experimentos, camundongos BALB/c fêmeas com sete semanas de idade foram injetadas ortotopicamente na quarta almofada de gordura mamária com 10⁵ células 4T1 suspensas em 0,01 ml de PBS no dia zero do estudo. Os compostos dissolvidos em DMSO, diluídos com 0,1 ml de água (concentração final de DMSO 1%) e injetados s.c. Os compostos foram administrados em 1, 2, 3, 11 dias, dose de 20 mg/kg. Os camundongos no grupo controle foram igualmente administrados com quatro doses de 0,1 ml de água com DMSO. O volume tumoral (volume do tumor V=4nab2/3, onde a é o máximo, e b - o mínimo diâmetro tumoral) foi calculado duas vezes por semana. Os camundongos foram examinados dia sim dia não em aparência, peso e comportamento. Os camundongos foram sacrificados no dia 16 do experimento por decapitação sob anestesia cetamina/xilazina. Após a eutanásia, os camundongos foram dissecados. O tumor primário, fígado e baço foram removidos, pesados e estudados. Todas as metástases em órgãos internos foram descritas.

Modelo 4T1 de metástases de pulmão

[00164] Camundongos Balb/c foram injetados com 100.000 células cancerosas de mama 4T1 na veia caudal e o tratamento iniciado 24 horas depois com injeções subcutânea (s.c.), intraperitoneal (i.p.) ou administração oral (p.o.) dos compostos de acordo com o seguinte esquema: 1, 4, 7, 9, 11 e 14 dias nas doses 20 ou 40 mg/kg. Os compostos foram dissolvidos em DMSO e a solução foi diluída com água (concentração final de DMSO <1%). Os camundongos do grupo controle foram igualmente administrados com doses de 0,1 ml de água com DMSO. Vinte e um dias depois, todos os camundongos foram anestesiados com cetamina/xilazina e eutanisados, os camundongos foram sacrificados, baços foram excisados dos camundongos e pesados. Em cada experimento, os camundongos foram pesados duas

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47/49 vezes por semana.

[00165] Enumeração de metástases pulmonares espontâneas 4T1 (ensaio com a tinta nanquim). (Lewis et al.,Cancer Res, 2005, 65) metástases pulmonares foram enumeradas por injeção intra-traqueal de tinta nanquim (15% tinta nanquim, 85% água, 3 gotas de NH4OH/100 ml). Os pulmões injetados com tinta nanquim foram lavados em solução de Feket (300 ml 70% EtOH, 30 ml 37% formaldeído, 5 ml ácido acético glacial) e, em seguida, colocados na solução de Feket fresco durante a noite. Nódulos tumorais não absorvem a tinta nanquim, o que resulta na coloração do tecido pulmonar normal preto e nódulos tumorais permanecendo branco. Nódulos tumorais brancos contra um fundo de pulmão preto foram medidos.

[00166] Inibição do crescimento do tumor primário e esplenomegalia. O modelo ortotrópico 4T1 imita a forma progressiva do câncer de mama metastático humano insensível ao estrogênio (Heppner et al., Breast Cancer Res 2000, 2, 331-334).

[00167] De acordo com nossos resultados I-10 e I-11 têm efeito inibitório significativo, mas muito modesto, sobre o crescimento do tumor primário (até 32%), mas, surpreendentemente, estes compostos reduzem drasticamente a formação de metástases.

[00168] Este tipo de transplante de células tumorais induz a esplenomegalia muito acentuada. O volume do baço no grupo controle com tumores aumentou 316%, em comparação com animais saudáveis. Neste modelo, o I-10 e I-11 reduziu o desenvolvimento de esplenomegalia e aumento do peso do baço foi de 256% e 198%, respectivamente.

[00169] Surpreendentemente, de acordo com nossos experimentos dados simplesmente magníficos foram recebidos: compostos I-11 e I-15 quase totalmente (98%) previne a formação de metástases pulmonares de carcinoma 4T1 in vivo. Esse efeito foi observado para

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48/49 cada camundongo participante no experimento (cinco de cada grupo) (Tabela 3, Figura 2). Deve notar-se que o tratamento subcutâneo dos compostos foi encontrado para ser o melhor.

[00170] O transplante de células tumorais de câncer de mama aos ratos desenvolveu esplenomegalia que está associado com a indução de reação leucemoide tumoral e infiltrados granulócitos maciços da polpa vermelha (Johnson et al.,Int. J. Cell Cloning, 1985, 3, 91-105; Serafini et al., Cancer Immunol. Immunother., 2004, 53, 64-72; du Pre et al.,Experim. Mol. Pathol., 2007, 82, 12-24). Os resultados de ganho de peso do baço em animais com tumor são mostrados na Figura 2. Nos animais controle com tumor de baço o peso aumentou +147%. Nos animais tratados com I-10 o ganho de peso do baço foi significativamente menor (aumento de 63%). Pelo tratamento com I-15 na dose de 20 mg/kg o aumento do peso do tumor do baço observado foi apenas +55% e na dose de 40 mg/kg - aumento foi impedido quase completamente (+14%). No entanto, os compostos I-10 não afetam o desenvolvimento de esplenomegalia.

[00171] Tabela 3. Efeitos inibitórios dos compostos em metástases pulmonares experimentais desenvolvidos por células de carcinoma 4T1 % da área total ocupada por metástases

Composto	Média ±DP	%	Média ±DP	%	Média
±DP	%
	s.c.		p.o.		i.p.
Controle	50±33	100
I-10 (20 mg/kg)	10±29	19*	16±18	32**	43±40	86
I-11 (20 mg/kg)	20±30	39**	14±31	28**	31±41	62
I-15 (20 mg/kg)	2±2	4*
I-15 (40 mg/kg)	0±1	1*

[00172] Compostos foram administrados em 1, 4, 7, 9, 11 e 14 dias na dose 20 ou 40 mg/kg.

[00173] As células 4T1 (10.000/0,1 mL de PBS) foram injetadas i.v.

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49/49 em camundongos singênicos. O número de metástases pulmonares macroscópicas foi determinado 16 dias mais tarde.

[00174] * - P <0,005, ** - P <0, 05, em comparação com o controle através do teste t de Student bicaudal.

[00175] Esses valores foram particularmente encorajadores, tendo em mente que estes selenofeno[ h ]cromenos específicos não induziram quaisquer principais efeitos colaterais: todos os animais tratados com estes compostos pareciam saudáveis e ativos e alteração de peso foi visualmente inexistente.

[00176] Os testes de citotoxicidade e atividade anticâncer contra tumor primário e metástase dos compostos sintetizados da Fórmula 1 em linhagens celulares em modelos animais demonstraram claramente, que modalidades deste pedido são altamente ativas no tratamento de metástase de câncer de diferentes localizações até mesmo a citotoxicidade destes compostos in vitro é modesta. Esta descoberta inesperada junto com alta seletividade sem precedentes dos compostos para as células do câncer faz com que estes compostos sejam muito promissores como medicamentos antimetastáticos.

Claims (10)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Composto da fórmula (1), caracterizado pelo fato de que

   

   cada Ri é selecionado independentemente de OH, grupos hidrocarbonetos OC1-C16 cujos hidrocarbonetos podem ser lineares, ramificados ou cíclicos, incluindo a fração de esteroide (por exemplo, colesterol), N(alquila)2, N-heterociclila;

   R2 representa um halogênio (por exemplo, Br);

   cada R3 é selecionado independentemente de hidróxi-C14alquila, 1-hidróxi-ciclo-C3-6alquila, ciclo-C5-7alquenila, hidróxi-C36cicloalquila, C1-4alquila-N-heterociclila;

   e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, em que heterociclila significa um anel monocíclico nãoaromático, saturado ou parcialmente insaturado de 3-10 membros, bicíclico de 8-12 membros, ou tricíclico de 11-14 membros tendo 1-3 heteroátomos se monocíclico, 1-6 heteroátomos se bicíclico, ou 1-9 heteroátomos se tricíclico, os referidos heteroátomos selecionados de O, N e S, em que N(alquila)2 significa uma cadeia linear ou ramificada de hidrocarbonetos, contendo de 1 a 12 átomos de carbono.
2. 2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto é selecionado do grupo consistindo em:

   7-bromo-8-(2-hidroxipropan-2-il)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de metila,

   7-bromo-8-(ciclopent-1-en-1-il)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2

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   h]cromeno-3-carboxilato de metila, 7-bromo-8-(1-hidroxiciclo-hexil)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de metila, 7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de metila, 7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-2-oxo-2H-selenofeno[H]3,2cromeno-3-carboxilato de butila, 7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de octila, 7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de decila, 7-bromo-2-oxo-8-(piperidin-1-ilmetil)-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de metila, 7-bromo-8-(morfolinometil)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de metila, 7-bromo-8-((4-metilpiperazin-1-il)metil)-2-oxo-2Hselenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxilato de metila, ácido 7-bromo-8-(1-hidroxiciclo-hexil)-2-oxo-2Hselenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxílico, ácido 7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-2-oxo-2Hselenofeno[3,2-h]cromeno-3- carboxílico, cloridrato de ácido 7-bromo-2-oxo-8-(piperidin-1-ilmetil)-2Hselenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxílico, cloridrato de ácido 7-bromo-2-oxo-8-(morfolin-1-ilmetil)-2Hselenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxílico, cloridrato de ácido 7-bromo-8-((4-metilpiperazin-1-il)metil)2-oxo-2H-selenofeno[3,2-h]cromeno-3- carboxílico,

   7-bromo-8-(ciclo-hex-1-en-1-il)-2-oxo-2H-selenofeno[3,2h]cromeno-3-carboxilato de octila, (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-dimetil-17-((R)-6

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3. 3/6 metilheptan-2-il)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro1H-ciclopenta[a]fenantren-3-il-7-bromo-8-(ciclo-hex-1-en-1-il)-2-oxo2H-selenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxilato, (3S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-10,13-dimetil-17-((R)-6metilheptan-2-il)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-tetradecahidro1H-ciclopenta[a]fenantren-3-il-7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-2-oxo2H-selenofeno[3,2-h]cromeno-3-carboxilato,

   7-bromo-8-(ciclo-hex-1-en-1-il)-3-(piperidin-1-carbonil)-2Hselenofeno[3,2-h]cromen-2-ona,

   7-bromo-8-(ciclo-hex-1-en-1-il)-3-(morfolina-1-carbonil)-2Hselenofeno[3,2-h]cromen-2-ona,

   7-bromo-8-(cicloex-1-en-1-il)-N,N-bis(2-metoxietil)-2-oxo2H-selenofeno[H]3,2-cromeno-3-carboxamida,

   7-bromo-8-(1-metoxiciclo-hexil)-3-(morfolina-4-carbonil)-2Hselenofeno[3,2-h]cromen-2-ona.

   e enantiômeros, racematos e sais farmaceuticamente aceitável destes.

   3. Composto, de acordo com a reivindicação 2, para uso como medicamento, caracterizado pelo fato de que o composto tem a estrutura:

   

   OCH
4. 4. Composto, de acordo com a reivindicação 2, para uso como um medicamento, caracterizado pelo fato de que o composto tem a estrutura:

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5. 5. Composto, de acordo com a reivindicação 2, para uso como um medicamento, caracterizado pelo fato de que o composto tem a estrutura:

   
6. 6. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de que compreende o composto, como definido na reivindicação 1, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
7. 7. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que a composição é uma composição farmacêutica monofásica adequada para administração parenteral ou oral compreendendo essencialmente de uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto de Fórmula I, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
8. 8. Processo para a síntese de um composto caracterizado pelo fato de que é selecionado dentre aqueles de Fórmula I:

   

   sendo que

   Ri representa OH, grupo de hidrocarbonetos OC1-C16,

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   5/6 incluindo a porção de esteroides (por exemplo, colesterol), N(alquil)2, N-heterociclila;

   R2 representa um halogênio (por exemplo, Br);

   R3 representa hidróxi-C1-4alquila, 1-hidróxi-ciclo-C3-6alquila, ciclo-C5-7alquenila, hidróxi-C3-6cicloalquila, C1-4alquil-N-heterociclila;

   a partir de um composto selecionado dentre aqueles de fórmula II:

   OR

   R'

   II sendo que

   R representa grupo de hidrocarbonetos C1-C10,

   R’ é definido como R3 na reivindicação 1 e representa hidróxi-C1-4alquila, 1 -hidróxi-ciclo-C3-6alquila, ciclo-C5-7alquenila, hidróxi-C3-6cicloalquila, C1-4alquila-N-heterociclila;

   pelo tratamento com haleto de selênio, em que heterociclila significa um anel monocíclico nãoaromático, saturado ou parcialmente insaturado de 3-10 membros, bicíclico de 8-12 membros, ou tricíclico de 11-14 membros tendo 1-3 heteroátomos se monocíclico, 1-6 heteroátomos se bicíclico, ou 1-9 heteroátomos se tricíclico, os referidos heteroátomos selecionados de O, N e S, em que N(alquil)2 significa uma cadeia linear ou ramificada de hidrocarbonetos, contendo de 1 a 12 átomos de carbono.
9. 9. Uso de um composto conforme definido na reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de ser para preparar uma composição farmacêutica ou medicamento para tratar ou prevenir melanoma, adenocarcinoma de mama, sarcoma, fibrossarcoma, câncer de pulmão, carcinoma hepatocelular e neuroblastoma.

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10. 10. Uso de um composto, conforme definido na reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de ser para preparar uma composição farmacêutica ou medicamento para tratar ou prevenir câncer metastasico.