BR112014030570B1 - extratos de tomilho selvagem e uso destes - Google Patents

Abstract

EXTRATOS DE TOMILHO SELVAGEM E USO DESTES. Extratos de Thymus serpyllum L. para uso em doenças inflamatórias entéricas.

Description

[0001] A presente invenção refere-se a extratos de tomilho selvagem (Thymus serpyllum), à preparação e à utilização dos mesmos.

[0002] A utilização de tomilho (Thymus spp.) tem sido descrita, em particular, para fins culinários, mas também como medicamento para doenças do trato respiratório.

[0003] O tomilho é uma planta culinária e erva medicinal do gênero Thymus. O tomilho é conhecido por seu sabor forte, além de ser cultivado devido ao seu teor de timol, que é mais bem cultivado em habitats quentes e ensolarados com solos muito permeáveis. Plantado na primavera, o tomilho cresce como uma planta perene e pode ser propagado através de sementes, corte ou por divisão da raiz. É também muitas vezes coletado como uma erva selvagem.

[0004] O tomilho é encontrado em todo o mundo e está sendo utilizado em cozinhas da Europa, Oriente Médio, Ásia, Índia, África e América. Em particular, o tomilho é empregado para o tempero de carnes, sopas e ensopados, como um tempero único ou em ervas finas e especiarias. O tomilho é contido como um ingrediente importante como temperos Za'atar (tomilho, em árabe) em refeições dos países do Levante, e é um componente do bouquet garni e de ervas da Provence.

[0005] O tomilho é comercializado tanto no estado fresco quanto no estado seco. O produto fresco está disponível quase todo o ano em estufas, e é muito aromático, mas após a colheita, não se mantém por mais tempo do que uma semana. O tomilho fresco é vendido em cachos com galhos, constituídos de um caule lenhoso com folhas e inflorescências. De acordo com a receita, tanto os galhos inteiros quanto as folhas sem os galhos serão utilizados. O tomilho seco mantém o seu sabor de forma mais eficiente, se comparado a muitas outras ervas.

[0006] Em adição à utilização culinária, o óleo essencial que fornece sabor possui várias funções medicinais. Desta forma, o óleo de tomilho comum (Thymus vulgaris) contém de 20% a 54% de timol, o qual, sendo um antisséptico, é o principal ingrediente ativo, por exemplo, em vários enxaguantes bucais, tais como Listerine. Em épocas anteriores, o óleo de tomilho também foi empregado na cicatrização de feridas em curativos, ou topicamente contra vários fungos, e como um desinfetante antibioticamente ativo. Em contraste, o óleo essencial de tomilho (Thymus serpyllum) possui um alto teor de carvacrol, um fenol de terpeno que é estereoisomérico com timol e possui uma gama de atividades análogas.

[0007] Infusões aquosas da erva tomilho são medicinais incluem infecções do trato respiratório, nas quais o tomilho é aplicado sob a forma de extratos, pomadas, xaropes ou inalações de vapor, além de chá de ervas. Uma vez que o tomilho possui um efeito antisséptico, uma decocção ou infusão em água pode ser muito bem empregada, após arrefecimento, contra dores de garganta, se for utilizada para gargarejos diversas vezes por dia. O timol absorvido juntamente com outros componentes voláteis da erva de tomilho é excretado através do pulmão (exalado) e, portanto, causa redução da viscosidade do muco bronquial devido à sua lipofilicidade, uma vez que o último pode ser expelido mais facilmente. Além disso, este exerce o seu efeito antimicrobiano no trato respiratório. Outras infecções e ferimentos também podem ser tratados com infusões de tomilho.

[0008] Quase todas as propriedades e utilizações acima referidas podem ser descritas para as espécies de tomilho utilizadas regionalmente. Estas espécies de liberação de fármacos vegetais incluem principalmente Thymus capitatus, Thymus citriodorus, Thymus mastichina, Thymus pulegioides, Thymus serpyllum, Thymus vulgaris, e Thymus zygis. Tradicionalmente, T. zygis é considerado equivalente a T. vulgaris, mas a sua importância econômica é pequena. Neste grupo, principalmente T. vulgaris e T. serpyllum estão economicamente disponíveis em quantidades significativas para cultura ou coleta selvagem. Na Farmacopeia Europeia, o tomilho selvagem (Thymus serpyllum L.) é indicado como uma adulteração indesejável do tomilho medicinalmente empregado (Thymus vulgaris L. + Thymus zygis) (monografia 865), e vice-versa. Isto se deve à diferença farmacológica muito conhecida entre as espécies vegetais. O conteúdo mínimo de óleo essencial em monografias de fármacos de vegetais, graficamente representados, é de pelo menos 3 ml/kg para o tomilho selvagem, e de pelo menos 12 ml/kg para o tomilho comum.

[0009] Neste grau, o óleo essencial farmacologicamente valioso listado na Ph. Eur. sob a monografia 1374 é recuperado exclusivamente a partir de T. vulgaris ou T. zygis.

[0010] Consequentemente, T. serpyllum e T. vulgaris são principalmente tratados de forma separada na literatura especializada, e suas atividades são atribuídas principalmente ao conteúdo de óleos essenciais. Em adição à utilização culinária, como mencionado acima, adicionalmente são mencionadas aplicações cosméticas de perfume e, em particular, no tratamento de doenças do trato respiratório e tosse, mas também em aplicações populares sem nenhuma prova clínica, tais como externamente para doenças e alterações de pele, tais como feridas, abcessos e queimaduras, bem como inflamatórias do trato urinário, intestino e etc. (HagerROM 2010).

[0011] Além destas aplicações clinicamente não comprovadas de preparações de tomilho relacionadas às queixas gastrointestinais, existe um pedido de patente europeu EP 1 080 727 (A1), "A utilização do extrato de Thymus vulgaris para a preparação de um medicamento para o tratamento da colite ulcerosa e doença de Crohn" de Anastasios Emmanouilidis, reivindicando Thymus vulgaris e os seus ingredientes, especialmente os óleos essenciais, em combinação com medicamentos padrão para essas doenças, que é baseada em estudos de casos clínicos.

[0012] Além disso, o pedido de patente DE4213167 (A1), "Medicamento contra gastrite, úlceras do estômago e duodenais, e dispepsia", de Suekrettin Guelduetuna, descreve a utilização bem sucedida de óleo de tomilho. Quanto ao modo de ação, é feita referência aos componentes de óleo essencial de timol / carvacrol / cimeno e cineol, e a sua atividade contra Helicobacter pylori.

[0013] No relatório descritivo da patente EP 0 577 481 (B1), "Nova aplicação terapêutica de um extrato de tomilho e métodos in vitro para inibir o crescimento e a atividade de urease de Helicobacter pylori", de Itzhak Neeman, a atividade antibacteriana dos extratos aquosos a partir de Thymus vulgaris, Thymus citriodorus e Coridothymus capitatus já está descrita.

[0014] É o objetivo da presente invenção fornecer formulações eficazes de tomilho, e indicar outras utilizações possíveis do mesmo.

[0015] Este objetivo é alcançado por novos extratos e novas utilizações destes extratos.

[0016] Dentro do escopo das atividades de pesquisa sistemática, novas aplicações das espécies de tomilho selecionadas foram surpreendentemente encontradas. Assim, de acordo com a invenção, especialmente tal como descrito de acordo com o presente processo, preparações eficazes de tomilho podem ser obtidas, as quais são empregadas contra inflamações, como por exemplo, doenças inflamatórias crônicas do trato digestivo, e síndrome do intestino irritável.

[0017] Portanto, a invenção refere-se à utilização de extratos a partir de Thymus serpyllum L. para o tratamento de doenças inflamatórias, especialmente do trato digestivo.

[0018] O trato digestivo inclui a cavidade oral, a faringe, o esôfago, e o trato gastrointestinal.

[0019] Em uma modalidade, a referida doença inflamatória é uma síndrome do intestino irritável (IBS), ou uma doença inflamatória intestinal (IBS).

[0020] Em outra modalidade, as doenças inflamatórias são selecionadas a partir do grupo constituído de gengivite, parodontite, faringite, esofagite, gastrite, colite linfocítica, colite ulcerativa, diverticulite, duodenite, e doença de Crohn.

[0021] A invenção adicionalmente refere-se a um processo de extração pelo qual os extratos particularmente eficazes podem ser obtidos, processo o qual compreende as seguintes etapas: a. fornecer uma fármaco vegetal de parte aérea a partir de plantas Thymus serpyllum L.; b. opcionalmente, secar o referido fármaco vegetal; c. opcionalmente, triturar o referido fármaco vegetal; d. opcionalmente, desengaçar as folhas e reduzir o conteúdo de haste para menos de 2% em peso; e. opcionalmente, vaporizar o fármaco vegetal e reduzir o óleo essencial para menos do que 0,5 ml/kg, com base no fármaco vegetal seco; f. extrair o fármaco vegetal com um agente de extração; g. remover, pelo menos parcialmente, o agente de extração para se obter um extrato espesso; h. opcionalmente, remover gordura com solventes líquidos; i. opcionalmente, realizar uma desinfecção térmica; j. adicionar um adjuvante de secagem, em que o referido adjuvante de secagem é selecionado a partir do grupo constituído de prebióticos de carboidratos solúveis em água, mais preferencialmente, a partir do grupo constituído de fruto-oligossacarídeos; k. secar, para obter um extrato.

[0022] De um modo preferencial, pelo menos uma das etapas e, h, ou i é realizada.

[0023] Surpreendentemente, verificou-se que os extratos preparados de acordo com a invenção podem ser empregados de modo eficiente contra doenças inflamatórias, mesmo que os componentes do óleo essencial sejam substancialmente removidos durante a preparação do extrato. Preferencialmente, isto pode ser realizado através do tratamento com vaporização do fármaco vegetal antes da extração, ou por remoção de gordura por meio de solventes orgânicos, ou por tratamento térmico de desinfecção.

[0024] Em particular, agentes de extração apropriados são selecionados a partir do grupo constituído de água, álcool, cetona, éster, éter ou gases supercríticos, ou misturas dos mesmos.

[0025] Preferencialmente, água ou uma mistura de água e álcool é utilizada como agente de extração. No caso de agentes de extração aquosos, os teores de álcool são, preferencialmente, de uma gama de 0% em peso a 70% em peso, mais preferencialmente, de 0% em peso a 40% em peso, ou de 5% em peso a 40% em peso. O etanol, em particular, mas também metanol, n-propanol ou isopropanol são particularmente adequados como os referidos álcoois. A utilização de CO2 como um agente de extração também é preferencial.

[0026] As extrações a uma temperatura de 20°C até 100°C, preferencialmente de 50°C a 90°C, mais preferencialmente de 60°C a 80°C, são particularmente adequadas, mas são dependentes do agente de extração selecionado.

[0027] O fármaco vegetal empregado corresponde, preferencialmente, ao da monografia "Serpylli herba" da Farmacopeia Europeia.

[0028] A secagem é preferencialmente realizada através de secagem por pulverização ou secagem a vácuo.

[0029] A invenção também se refere a um extrato da parte aérea das plantas Thymus serpyllum L. e, em particular, o extrato ou formulação de extrato correspondente pode ser obtido pelo processo descrito acima.

[0030] A invenção também se refere a uma formulação farmacêutica, um medicamento ou um produto alimentar que compreende um extrato de Thymus serpyllum L.

[0031] Preferencialmente, este extrato ou formulação de extrato possui um teor de óleo essencial de, no máximo, 0,5% em peso, com base no extrato seco, preferencialmente de no máximo 0,1% em peso, mais preferencialmente de no máximo 0,01% em peso. O teor de óleos essenciais na formulação de extrato é determinado de acordo com o método da Farmacopeia Europeia (Ph. Eur. 2.8.12), por analogia ao método para a determinação de óleo essencial de fármacos de vegetais.

[0032] Em conformidade com a alta tolerabilidade das preparações de tomilho anteriormente conhecidas, será objeto da presente invenção fornecer um novo extrato que é adequado para utilização em toda a gama de doenças inflamatórias. Os efeitos anti-inflamatórios locais podem ser úteis ao longo de todo o trato digestivo, conforme o caso, no tratamento ou prevenção de doenças inflamatórias. Gengivite, parodontite, faringite, esofagite e gastrite descrevem as doenças inflamatórias da parte superior do trato digestivo. Colite linfocítica, colite ulcerativa, diverticulite, duodenite e doença de Crohn são, além de IBD e IBS, as representantes mais conhecidas de doenças inflamatórias da região intestinal. Doenças da região intestinal são as doenças pertencentes ao trato intestinal.

[0033] Por causa da alta volatilidade dos componentes do óleo essencial, outros grupos de substâncias também são empregados para exames analíticos de preparações de tomilho. Entre estes, o ácido rosmarínico de tanino, que é ubíquo na família Lamiaceae, deve ser mencionado como o representante mais proeminente. Preferencialmente, as preparações podem conter um teor de pelo menos 0,5% em peso de ácido rosmarínico para que a comparação analítica de qualidades de extrato seja tão simples quanto possível. Naturalmente, “mais” significa ser mais facilmente detectável, razão pela qual uma concentração mínima de 1,5% em peso de ácido rosmarínico, com base no extrato nativo seco, parece ser realizável.

[0034] Portanto, extratos que compreendem, pelo menos 0,5% em peso de ácido rosmarínico, preferencialmente, pelo menos 1% em peso de ácido rosmarínico e mais preferencialmente 1,5% em peso de ácido rosmarínico, são particularmente preferenciais.

[0035] Em uma modalidade preferencial da invenção, o teor de timol mais carvacrol é inferior a 0,01% em peso, com base no extrato nativo seco. Todos os valores referem-se ao extrato nativo seco, ou seja, o extrato sem a adição de agentes auxiliares.

[0036] Em uma modalidade, o extrato de acordo com a invenção é fornecido e utilizado em conjunto com um prebiótico.

[0037] Entre os componentes ativos adicionais em doenças inflamatórias crônicas do trato digestivo e síndrome do intestino irritável, substâncias prebióticas são frequentemente mencionadas.

[0038] Substâncias prebióticas são componentes alimentares digeríveis por humanos que promovem a saúde, fomentando o crescimento e atividade de bactérias no sistema digestivo.

[0039] Eles são alimentos funcionais e, como tais, foram descritos por Marcel Roberfroid em 1995. Tipicamente, os prebióticos são carboidratos (tais como oligossacarídeos) classificados como fibras dietéticas solúveis em água, na sua maioria, pertencentes ao grupo de fruto-oligossacarídeos (por exemplo, oligofrutose e inulina).

[0040] Os prebióticos são diferenciados de acordo com seu comprimento de cadeia: de cadeia curta, apresentando de 2 a 8 blocos de construção de açúcar, de cadeia longa, como a inulina, apresentando de 9 a 64 unidades de sacarídeos. Dependendo do tamanho molecular, estas são fermentadas como substratos de forma mais rápida ou mais lenta através de diferentes espécies bacterianas nos diferentes segmentos do intestino.

[0041] Geralmente, é reconhecido que os prebióticos melhoram a saúde intestinal dos animais e dos seres humanos como organismos hospedeiros, aumentando o número e a atividade de bifidobactérias e de bactérias ácido-lácticas. Os efeitos positivos do bifidobactérias e bactérias ácido- lácticas (de lactobacilos) no intestino do hospedeiro incluem, principalmente, a melhoria da digestão, incluindo uma absorção melhorada dos nutrientes e minerais, e a eficácia e fortalecimento intrínsecos do sistema imunológico. Os produtos de estimulação de bifidobactérias são referidos como fatores bifidogênicos.

[0042] As fontes de alimentos típicos que fornecem prebióticos incluem plantas que armazenam carboidratos, tal como a soja e muitos cereais, por exemplo, alcachofras de Jerusalém e as raízes de chicória, as quais são fontes ricas de inulina.

[0043] Existem diferentes recomendações para a quantidade diária ideal de prebióticos. Esta quantidade está tipicamente dentro de uma gama de 4g a 8g para suportar o estado de saúde geral do sistema digestivo. Até 15g ou mais é recomendável para distúrbios digestivos graves.

[0044] Por causa de suas vantagens para a saúde, os oligossacarídeos prebióticos são cada vez mais adicionados aos alimentos. Estes incluem, em particular, fruto- oligossacarídeos (FOS), xilo-oligossacarídeos (XOS), polidextrose e galacto-oligossacarídeos (GOS). Os mano- oligossacarídeos são frequentemente utilizados em alimentos para animais para tais fins prebióticos.

[0045] No relatório descritivo da patente WO 2010/023422 (A1), "A utilização de prebióticos galacto- oligossacarídeos no tratamento de inflamação intestinal" de Tzortzis et al., os dados in vivo em um modelo de camundongo DSS relata que os prebióticos já são apresentados. Adicionalmente, no documento WO 2006/111624 (A1), em “Composições anti-inflamatórias e/ou analgésicas que compreendem maltodextrina ramificada para o intestino" de Wils et al., os fruto-oligossacarídeos são examinados com sucesso para o seu efeito anti-inflamatório em um modelo de camundongo. Estes estão hoje disponíveis no mercado de commodities sob as denominações de ACTILIGHT, FIBERSOL, NUTRIOSE ou RAFTILOSE.

[0046] Muitos destes prebióticos ocorrem como carboidratos vegetais naturais, alguns são tecnicamente modificados para adaptar as suas propriedades para fins dietéticos. Assim, por exemplo, amidos de cereais são convertidos em homoglucanos ou dextrinas mais ou menos resistentes à digestão através de processos de tecnologia alimentar, tais como aquecimento, tratamento ácido ou enzimático, e estes podem ser muito bem utilizados como fibra alimentar probiótica. Mais recentemente, métodos de engenharia genética para produzir inulinas também foram estabelecidos.

[0047] Estudos pré-clínicos e clínicos mostram efeitos positivos sobre a absorção de minerais, especialmente cálcio, hipertensão (aumento da pressão arterial), doenças inflamatórias intestinais crônicas (doença de Crohn e colite ulcerosa), redução do risco de câncer de cólon, melhoria da digestão, e regulação do pH intestinal, e uma potente eficácia sobre o sistema imune e a na estimulação do mesmo.

[0048] Estes efeitos versáteis para a saúde são explicados em termos de aumento da produção de ácidos graxos de cadeia curta (SCFA) através de oligossacarídeos prebióticos pelas bactérias intestinais benéficas estimuladas.

[0049] Uma vez que a ingestão de grandes quantidades de prebióticos com a comida pode temporariamente acarretar um aumento dos movimentos de gases, flatulência ou movimentos intestinais, a ingestão de alimentos contendo prebiótico deve, portanto, ser aumentada gradativamente, a fim de que uma flora bacteriana saudável possa se estabelecer passo a passo.

[0050] Os prebióticos utilizados são preferencialmente selecionados a partir do grupo constituído de fibras alimentares, especialmente o grupo de carboidratos, mais preferencialmente o grupo de carboidratos solúveis em água. Preferencialmente, estes podem ser utilizados como auxiliares de secagem, apoiando assim a secagem e a eficácia. A utilização de ACTILIGHT®, FIBERSOL®, NUTRIOSE® ou RAFTILOSE® é particularmente preferencial.

[0051] Na medicina, as doenças intestinais inflamatórias crônicas (IBD) são definidas como um grupo de doenças inflamatórias dos intestinos grosso e delgado. As formas mais importantes de IBD são a doença de Crohn e a colite ulcerativa (UC).

[0052] Tipos mais raros, que também deve ser incluídos nas doenças inflamatórias intestinais crônicas, são colite colagenosa, colite linfático, colite isquêmica, colite de exclusão, doença de Behçet, e colite não classificável.

[0053] A doença de Crohn e a colite ulcerativa se distinguem principalmente pela localização e natureza das alterações inflamatórias. A doença de Crohn pode afetar qualquer parte do trato gastrintestinal, da boca ao ânus, mas principalmente a partir do íleo terminal. Em contraste, a colite ulcerativa está limitada ao intestino grosso e ao reto.

[0054] Em termos histológicos, a colite ulcerativa está limitada à mucosa (epitélio intestinal), enquanto a doença de Crohn afeta toda a parede do intestino como uma consequência de lesões transmurais.

[0055] A doença de Crohn e a colite ulcerativa são frequentemente associadas com sintomas não intestinais, tais como doenças hepáticas, artrite, fenômenos de pele e problemas oculares. Além disso, no início, um claro diagnóstico de doença de Crohn ou colite ulcerosa é difícil de ser feito, de modo que estas são consideradas como colite não classificável.

[0056] Além disso, essas doenças ocorrem com os seguintes sintomas bastante diferentes: dor abdominal, vômitos, diarreia, sangramento retal, cãibra severa interior e espasmos musculares na região pélvica, perda de peso e as diversas queixas associadas às doenças mencionadas acima, tais como artrite, pioderma gangrenoso e colangite esclerosante primária. O diagnóstico final é geralmente feito por uma colonoscopia com biópsia das regiões intestinais patologicamente alteradas.

[0057] A terapia otimizada das doenças intestinais inflamatórias crônicas geralmente depende do tipo de doença existente oriunda de IBD. No entanto, por exemplo, mesalazina (5-ASA) ou o pró-fármaco correspondente a sulfassalazina são administrados, tanto para colite ulcerosa, quanto para doença de Crohn. Basicamente, os imunossupressores, tais como prednisona, inibidores de TNF, e azatioprina citostática, metotrexato ou 6-mercaptopurina são utilizados, dependendo da gravidade dos sintomas da IBD. Em casos graves, a cirurgia pode ser necessária, tal como na ressecção parcial do intestino, estrituroplastia, ou colostomia ou ileostomia temporária ou permanente.

[0058] Como regra geral, o tratamento é iniciado através da administração de medicamentos com um efeito anti- inflamatório forte, tal como prednisona. Assim que o efeito anti-inflamatório tenha sido bem sucedido, o paciente é tratado com medicamentos mais leves, tais como mesalazina, a fim de alcançar a remissão da doença. Se este tratamento não é bem sucedido, uma combinação dos imunossupressores acima mencionados com mesalazina, que também exibe uma ação anti- inflamatória, pode ser administrada.

[0059] Embora as IBD limitem fortemente a qualidade de vida por causa da dor, vômitos, diarreia e outros sintomas socialmente desconfortáveis, a doença por si só raramente apresenta um resultado fatal. Mortes por causa de complicações, como megacólon tóxico, perfuração intestinal e complicações cirúrgicas, também são raras. Embora os pacientes de IBD apresentem um aumento do risco de câncer do cólon, tal câncer é descoberto por colonoscopia e tratado muito mais cedo do que seria na população geral, devido a um controle de rotina do intestino grosso.

[0060] O objetivo do tratamento após a remissão tem sido atingido visando à utilização de medicamentos mais leves que possuem menos efeitos secundários potenciais. Entre estas fases de remissão, que podem durar meses ou anos, flare-ups, ou seja, as recaídas agudas dos sintomas originais, podem ocorrer a qualquer momento e, em sua maioria, podem prevalecer durante várias semanas.

[0061] Por algum tempo, novas estratégias terapêuticas têm sido relatadas e que parecem promissoras em muitas formas de doenças intestinais inflamatórias crônicas.

[0062] Os primeiros relatos sugerem que uma "terapia helmíntica", na qual os parasitas intestinais, tais como Trichuris suis ou o ancilóstomo Necator americanus, são administrados, possuem efeitos muito positivos sobre o sintoma da IBD, e especula-se que, para além de uma estimulação do sistema imune, uma "imunização" de efeito persistente pode ser responsável pelo efeito de cura.

[0063] Espera-se que a utilização de prebióticos e probióticos, em particular, acarrete em tratamentos eficazes contra IBD, e em alguns estudos, estes provaram eficácia equivalente aos medicamentos de prescrição.

[0064] Um impacto igualmente positivo sobre os sintomas de IBD é atribuído às preparações de maconha. A planta da maconha contém mais de 50 dos chamados canabinóides específicos de plantas, dos quais Δ9- tetrahidrocanabinol (THC) e canabidiol (CBD) parecem ser os mais conhecidos e mais ativos. Os canabinóides possuem um efeito anti-inflamatório forte, especialmente através do receptor CB2. Isto também pode ser detectado em estudos pré-clínicos em roedores. Além disso, tem-se observado que a imunidade mediada por células é prejudicada em utilizadores crônicos de maconha. O estudo do papel funcional do sistema endocanabinóide na imunomodulação mostra que este está envolvido em quase todas as atividades imunológicas. Os canabinóides movimentam o equilíbrio de citocinas pró-inflamatórios e citocinas anti-inflamatórias em direção ao perfil auxiliador de células T de tipo 2 (fenótipo Th2) e suprimem a imunidade mediada por células, enquanto que a imunidade humoral é reforçada.

[0065] A síndrome do intestino irritável (IBS) é uma desordem de todo o trato digestivo, provocando dor e inchaço abdominal, bem como obstipação ou diarreia, uma variedade de substâncias e fatores emocionais são capazes de provocar sintomas de IBS. Geralmente, o médico irá diagnosticar a IBS com base nos sintomas após a exclusão de outros problemas intestinais, por exemplo, através de testes de sangue e fezes e de sigmoidoscopia para o diagnóstico diferencial de IBD (doença de Crohn, colite ulcerosa), câncer ou de outras inflamações intestinais crônicas.

[0066] Os sintomas incluem dor abdominal associada com o movimento do intestino (defecação), que geralmente melhoram posteriormente. Alterações na frequência de evacuações (tal como, constipação ou diarreia) ou na consistência, expansão abdominal, muco nas fezes, e a sensação de esvaziamento incompleto após a defecação são outros problemas.

[0067] Uma dieta saudável e regular é fundamental adicionais podem aliviar sintomas específicos.

[0068] A IBS afeta cerca de 10% a 20% da população em geral nos países industrializados (por exemplo, até 50% no México), sendo as mulheres com IBS mais propensas a procurar aconselhamento médico. Apenas na Alemanha, acredita-se que sete milhões de pessoas sofrem deste problema. Adicionalmente, a IBS é a doença mais comum diagnosticada pelos gastroenterologistas. A IBS pertence aos distúrbios gastrintestinais funcionais, juntamente com estômago irritável (dispepsia funcional).

[0069] A causa da síndrome do intestino irritável não é compreendida. Em muitas pessoas com IBS, o trato digestivo é particularmente sensível a muitos estímulos. Aqui, distúrbios no neuroplexo abdominal ou sua comunicação com CNS são assumidos. Além disso, fatores emocionais (por exemplo, estresse, depressão e ansiedade), bem como dieta, medicamentos, flutuações hormonais ou até mesmo pequenas irritações desempenham um papel importante e podem desencadear ou piorar os sintomas da IBS.

[0070] Como a maioria das pessoas com IBS apresentam-se fisicamente saudáveis, uma causa psicossomática de IBS foi bastante considerada no passado, mas, recentemente, "mini-inflamações" foram descobertas na Universidade Técnica de Munique (TUM), e distúrbios relacionados com comunicação neuronal no complexo nervoso do intestino foram discutidos como uma causa. Estes focos inflamatórios levam à IBS ao contato muito próximo com a IBD, que também pode oferecer um tratamento anti- inflamatório do intestino irritável semelhante à IBD (1. Bercik P, Verdu EF, Collins SM. Is irritable bowel syndrome a low-grade inflammatory bowel disease? Gastroenterol Clin North Am. (2005) Vol. 34, Issue: 2: 235-45 // 2. Mearin F, Perelló A, Balboa A; Irritable bowel syndrome and inflammatory bowel disease: Is there a connection? Gastroenterologia y hepatologia (2009) Volume: 32, Issue: 5, Pages: 364-372 // 3. Quigley EMM, Shanahan F; Irritable Bowel Syndrome and Inflammatory Bowel Disease: Is There an Overlap? Practical Gastroenterology, Novembro de 2010, 3137).

[0071] O tratamento é específico para cada pessoa e primeiramente consiste no contorno ou eliminação da causa, por exemplo, se certos alimentos ou tipos de estresse iniciam o problema. Se a constipação adicionalmente ocorre, a atividade física regular é frequentemente útil para restaurar a digestão normal. Basicamente, uma IBS pode ser afetada de forma positiva por uma mudança correspondente na dieta, ou manutenção de uma dieta.

[0072] Se as constipações se mantiverem, o fornecimento de materiais mais volumosos e ricos em fibra ou outros agentes promotores de digestão muitas vezes é satisfatório, tais como farelo, plantago indiano (Metamucil), metilcelulose, sorbitóis, lactulose, constulose, polietileno glicóis, glicerol e bisacodil (Dulcolax) ou lubiprostona (Amitiza). Além disso, a eficácia direta em IBD e IBS também tem sido postulada por plantago (Baljit Singh: Review - Psyllium as therapeutic and drug delivery agent; Internacional Jornal of Pharmaceutic 334 (2007) 1-14).

[0073] Os laxantes, direcionados aos músculos lisos do intestino, tais como diciclomina (Bentyl) ou butilescopolamina (Buscopan) podem aliviar a dor abdominal e as cólicas. Em contraste, se diarreias se mantiverem, antidiarreicos, tais como um opiáceo análogo a loperamida (IMODIUM) ou UZARA de ervas, um extrato de Xysmalobium undulatum, devem ser utilizados. Para diarreias associadas a náuseas, alossetrona (nome comercial norte-americano: Lotronex), um inibidor seletivo de receptores 5-HT3, pode ser utilizado. Efeitos anti-serotoninérgicos comparáveis foram recentemente atribuídos ao gengibre.

[0074] Antidepressivos, bem como as técnicas para a modificação de comportamento (tais como a terapia comportamental cognitiva), a terapia psiquiátrica e a hipnose também são utilizadas para o tratamento de sintomas de IBS, muitas vezes mostrando uma boa eficácia. Mesmo a utilização em longo prazo de antidepressivos é relativamente segura, e os antidepressivos podem reduzir a dor e outros sintomas, mas também aliviar a insônia, a depressão ou a ansiedade.

[0075] Adicionalmente a estas terapias com química farmacêutica, as preparações fitoterapêuticas têm sido cada vez mais empregadas, especialmente os óleos aromáticos, tais como óleo de hortelã-pimenta, que são muito eficazes contra sintomas de IBS, tais como inchaço e cólicas abdominais.

[0076] Além disso, os probióticos e prebióticos tornaram-se um importante componente terapêutico em IBS, assim como em IBD (Damaskos & Kolios: Probiotics and prebiotics in inflammatory bowel disease: microflora 'on the scope' 2008 Br J Clin Pharmacol / 65:4 / 453-467) . Adicionalmente, muitos extratos de plantas que compreendem as chamadas "fibras solúveis", tais como os extratos de cladódios ricos em fibra a partir da Opuntia ficus indica L., também pertencem aos prebióticos. Estes carboidratos solúveis em água aliviam o trato gastrointestinal, por exemplo, através da emulsão de lipídios e, consequente liberação dos mesmos com atraso, mas também pelo fato de que os carboidratos sozinhos são metabolizados por apenas algumas espécies bacterianas desejadas na flora intestinal, contribuindo, assim, para uma mudança na quantidade proporcional individual de espécies de bactérias.

[0077] A invenção é adicionalmente ilustrada através dos Exemplos não limitativos seguintes.

Exemplos Métodos Determinação do ácido rosmarínico

[0078] A determinação quantitativa do ácido rosmarínico é efetuada por meio de gradiente HPLC em uma fase RP18 (preferencialmente LiChrospher 100, RP 18, 5 μm, 250 x 4 mm), com detecção a 320 nm. O eluente binário consiste em A (15% em volume de acetonitrila + 0,425% de ácido fosfórico + 84,575% de água) e B (80% em volume de acetonitrila + 0,425% de ácido fosfórico + 19,575% de água) e é executada em uma perfil de rampa com 1 mL/min a partir de 100% de A até 30% de A + 70% de B no intervalo de 40 minutos. O volume de injeção é de 10 μl.

[0079] Como uma referência, 25 mg de ácido rosmarínico foi rigorosamente pesado e dissolvido em 100 ml de metanol; 10 ml do mesmo sendo diluído em 100 ml.

[0080] Para a solução de ensaio, 400 mg de extrato de tomilho foi dissolvido em um balão volumétrico de 100 ml contendo 25 ml de água e 25 ml de metanol em um banho de ultrassons. Após equilíbrio térmico à temperatura ambiente, o balão volumétrico é preenchido até à marca com 50% de metanol, e misturado homogeneamente. 10 ml da solução são diluídos em 100 ml com 50% de metanol.

Determinação de timol e carvacrol

[0081] A determinação quantitativa das substâncias timol e carvacrol a partir de óleo essencial foi efetuada por meio de cromatografia gasosa (CG). Desta forma, uma coluna capilar de sílica fundida (por exemplo, a partir de Zberon ZB-FFAP, código 7JM-G009-17) com 50 m de comprimento e um diâmetro interno de 0,32 mm foi utilizado. Hidrogênio 5,0 com uma taxa de fluxo de 2,5 ml/min foi utilizado como gás de transporte. Um detector FID (250°C) é adequado para detecção. As condições de trabalho da CG são: 140°C (1 minuto isotérmico), aquecimento de 140°C até 190°C com 5°C/min, em seguida 190°C (5 minutos isotérmicos), aquecimento adicional de 190°C até 220° C com 20°C/min, em seguida 220°C (9 minutos isotérmicos).

[0082] Como substâncias de referência, timol puro (Merck 108167) e carvacrol (Fluka 22051), 50,0 mg cada, são adicionados a um balão volumétrico de 50 ml, juntamente com uma substância padrão interna (50,0 mg de 4- isopropilfenol), e preenchido com n-hexano até à marca.

[0083] Uma solução separada de 250,0 mg de 4- isopropilfenol como substância interna padrão é dissolvida e preenchida com n-hexano em um balão volumétrico de 250 ml.

[0084] Extratos de tomilho de aproximadamente 1g foram pesados e dissolvidos em 40 ml de metanol a 30% em volume. Após transferência para uma ampola de decantação de 250 ml, 5 ml de solução interna padrão foi adicionada. Toda a solução foi particionada três vezes com 40 ml de éter dietílico. As fases combinadas de éter dietílico foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas de forma limpa e concentrada por evaporação em um evaporador rotativo a 40°C em vácuo parcial. O resíduo foi retomado em 5,0 ml de etanol a 96%. Desta solução, 1μL foi injetado (temperatura do injetor: 230°C).

[0085] O cromatrograma CG contém carvacrol como um pico dominante (cerca de 12,7 minutos à temperatura ambiente) para os extratos de tomilho selvagem, ao passo que o timol possui uma área de pico que é menor em cerca de um terço (cerca de 12,1 minutos à temperatura ambiente). O 4-isopropilfenol de padrão interno estava próximo a este grupo de pico com cerca de 12,9 minutos à temperatura ambiente.

Exemplo 1: Extrato aquoso de tomilho (técnica anterior)

[0086] 14,3 kg de fármaco vegetal desengaçado e secode Herba Thymi Ph. Eur. (erva tomilho) (Thymus vulgaris) foi cozido com vapor sobreaquecido a 134°C em um coador Holstein-Kappert durante 1,5 horas, até que o cheiro de componentes de óleo essencial não pudesse ser notado no vapor de exaustão (< 0,5 ml/kg de fármaco).Subsequentemente, a extração foi efetuada no coador com 286 litros de água por osmose, a 60°C. O eluato foi drenado através do fármaco e liberado de resíduos do fármaco através de um saco de peneira com um tamanho de poro de 250 μm. Através de uma placa de evaporação, o eluato foi concentrado para se tornar um extrato espesso com cerca de 53% de proporção em relação à substância seca. A partir do extrato viscoso obtido, 70% de extrato seco equivalente foi misturado com 30% de maltodextrina da Ph. Eur., autoclavado a 121°C durante 15 minutos, e seco a 50°C em uma estufa de secagem a vácuo. O extrato obtido é caracterizado por uma DEVnativa de 4:1 (DEV = proporção fármaco-extrato), um teor de óleo essencial inferior a 0,1%, em que a proporção timol/carvacrol é inferior a 0,01%, e o teor de ácido rosmarínico é de 2,5%.

Exemplo 2: Extrato aquoso de tomilho selvagem

[0087] 17,8 kg de fármaco vegetal desengaçado e seco de Herba Serpylli Ph. Eur. (Thymus serpyllum) foi cozido com vapor sobreaquecido a 134°C em um coador Holstein-Kappert durante 1,5 horas, até que o cheiro de componentes de óleo essencial não pudesse ser notado no vapor de exaustão. Subsequentemente, a extração foi efetuada no coador com 356 litros de água por osmose, a 60°C. O eluato foi drenado através do fármaco e liberado de resíduos do fármaco através de um saco de peneira com um tamanho de poro de 250 μm. Através de uma placa de evaporação, o eluato é concentrado para se tornar um extrato espesso com cerca de 50% de proporção em relação à substância seca.

Exemplo 3: Extrato aquoso de tomilho selvagem 1

[0088] O extrato viscoso obtido de acordo com o Exemplo 2 foi seco em um estado nativo a 50°C em uma estufa de secagem a vácuo. O extrato obtido é caracterizado por uma DEVnativa de 6:1, um teor de óleo essencial inferior a 0,1%, em que a proporção de timol/carvacrol é inferior a 0,01%, e o teor de ácido rosmarínico é de 2,6%.

Exemplo 4: Extrato aquoso de tomilho selvagem 2

[0089] A partir do extrato viscoso obtido de acordo com o Exemplo 2, 70% de extrato seco equivalente foi misturado com 30% de Nutriose FB 06, autoclavado a 121°C durante 15 minutos, e seco a 50°C em uma estufa de secagem a vácuo. O extrato obtido é caracterizado por uma DEVnativa de 6:1, um teor de óleo essencial inferior a 0,1%, em que a proporção timol/carvacrol é inferior a 0,01%, e o teor de ácido rosmarínico é de 1,8%.

Exemplo 5: Extrato etanólico de tomilho selvagem 20%

[0090] 500 g de fármaco vegetal desengaçado e seco de Herba Serpylli Ph. Eur. (Thymus serpyllum) foi extraída duas vezes com 5 litros (cada) de etanol a 20% (em volume) a 50°C em um coador. O eluato foi drenado através do fármaco e liberado de resíduos do fármaco através de um filtro plissado em formato de estrela (32-WE). Em um evaporador rotativo, o eluato foi concentrado para se tornar um extrato espesso com cerca de 50% de proporção de substância seca sob um baixo vácuo inferior a 50 mbar. O extrato viscoso assim obtido é misturado com 30% Nutriose FB 06, autoclavado a 121°C durante 15 minutos, e seco a 50°C em uma estufa de secagem a vácuo. O extrato obtido é caracterizado por uma DEVnativa de 6:1 e um teor de óleo essencial inferior a 0,1%.

Exemplo 6: Extrato etanólico de tomilho selvagem 40%

[0091] 500 g de fármaco vegetal desengaçado e seco de Herba Serpylli Ph. Eur. (Thymus serpyllum) foi extraída duas vezes com 5 litros (cada) de etanol a 40% (em volume) a 50°C em um coador. O eluato foi drenado através do fármaco e liberado de resíduos do fármaco através de um filtro plissado em formato de estrela. Em um evaporador rotativo, o eluato foi concentrado para se tornar um extrato espesso com cerca de 50% de proporção de substância seca sob um baixo vácuo inferior a 50 mbar. O extrato viscoso assim obtido é misturado com 30% Nutriose FB 06, autoclavado a 121°C durante 15 minutos, e seco a 50°C em uma estufa de secagem a vácuo. O extrato obtido é caracterizado por uma DEVnativa de 6:1 e um teor de óleo essencial inferior a 0,1%.

Exemplo 7: Extrato etanólico de tomilho selvagem 70%

[0092] 500 g de fármaco vegetal desengaçado e seco de Herba Serpylli Ph. Eur. (Thymus serpyllum) foi extraída duas vezes com 5 litros (cada) de etanol a 70% (em volume) a 50°C em um coador. O eluato foi drenado através do fármaco e liberado de resíduos do fármaco através de um filtro de filtro plissado em formato de estrela (32-WE). Em um evaporador rotativo, o eluato foi concentrado para se tornar um extrato espesso com cerca de 50% de proporção de substância seca sob um baixo vácuo inferior a 50 mbar. O extrato viscoso assim obtido é misturado com 30% Nutriose FB 06, autoclavado a 121°C durante 15 minutos, e seco a 50°C em uma estufa de secagem a vácuo. O extrato obtido é caracterizado por uma DEVnativa de 6:1 e um teor de óleo essencial inferior a 0,1%.

Exemplo 8: Extrato de tomilho com CO2

[0093] 500 g de fármaco vegetal desengaçado e seco de Herba Serpylli Ph. Eur. (Thymus serpyllum) foi cozido no vapor com vapor superaquecido e substancialmente liberado de óleo essencial. O fármaco vegetal foi seco e fragmentado até a formação de pó, transferido para um sistema de gás pressurizado, onde foi extraído com 95% de dióxido de carbono supercrítico e etanol a 5% (como modificador) a 200 bar e a 60°C durante 60 minutos. Após a liberação para o recipiente de descarga do produto, um extrato resultante possuía uma DEVnativa média de 18:1 e um teor de flavonoides de cerca de 2,3%. O teor de óleo essencial foi de apenas 0,45%, com base no extrato nativo seco. O extrato assim obtido foi processado com 30% de Fibersol para dar origem a um extrato homogêneo, e moído em um Starmix.

Exemplo 9: Modelo de ensaio in vitro

[0094] Liberação induzida por lipopolissacarídeo (LPS) de fator alfa de necrose tumoral (TNFα) em monócitos humanos periféricos.

[0095] Monócitos primários humanos foram recuperados a partir do creme leucocitário de doadores de sangue humanos saudáveis, em um procedimento normalizado. As células foram semeadas em placas de 24 poços para ensaios ELISA.

[0096] Os monócitos foram estimulados com 10 ng/ml de LPS em uma placa de 24 poços de cultura celular a 37°C e 5% de CO2 durante 24 horas. Os extratos foram adicionados 30 minutos antes da adição de LPS a fim de testar se podiam evitar os efeitos indutores de LPS. Após 24 horas, os sobrenadantes celulares foram retirados, centrifugados e analisados para as concentrações de TNFα em um ELISA de acordo com as instruções do fabricante (Biotrend, Alemanha; Immunotools, Alemanha).Tabela 1:

[0097] Verificou-se que um extrato aquoso a partir de Thymus serpyllum é claramente superior a um extrato aquoso a partir de Thymus vulgaris, e que, em adição ao extrato puramente aquoso, extratos etanólicos superiores, de 40% a 70%, também mostraram uma boa inibição comparável.

[0098] O fato de que o TNF-alfa está relacionado com as doenças reivindicadas é suportado pela literatura (Reinecker et al.: Enhanced secretion of tumour necrosis factor-alpha, IL-6, and IL-1fi by isolated lamina propria mononuclear cells from patients with ulcerative colitis and Crohn's disease; Clin Exp Immunol 1993; 94: 174-181).

Exemplo 10: Modelo de ensaio in vivo utilizando DSS

[0099] O presente estudo foi realizado em conformidade com a Diretriz de proteção dos animais utilizados para fins experimentais ou outros fins científicos da União Europeia (86/609/EEC).

[0100] O sistema de ensaio utilizando DSS (= sulfato de sódio dextrano) em camundongos para induzir colite é amplamente utilizado e cientificamente aceito.

[0101] Na presente série de ensaios, camundongos fêmeas de 7 a 9 semanas de idade (cepa C57/BL6j) com um peso médio de 20 g foram utilizados; estes foram mantidos em gaiolas Makrolon em um ambiente com ar condicionado, com 12 horas de ciclo claro-escuro, alimentados com comida padrão para roedores e água à vontade durante todo o experimento.

[0102] Os camundongos foram divididos aleatoriamente em sete grupos (n = 8). Exceto para o grupo de controle saudável, todos os animais receberam uma concentração de 3% de DSS na água potável a partir do dia d(—4) até o dia d(0) para induzir a colite. Subsequentemente, a água potável foi devolvida ao normal, e a abordagem curativa da série de ensaios pôde começar. Dois grupos (controles doentes e saudáveis) receberam o meio de administração exclusivamente por via oral, e os grupos de ensaio receberam 100 mg/kg de peso corporal ou 250 mg/kg de peso corporal de uma formulação de extrato de tomilho de acordo com o Exemplo 1, ou 100 mg/kg de peso corporal ou 250 mg/kg de peso corporal de uma formulação de extrato de tomilho selvagem de acordo com o Exemplo 4, ou 50 mg/kg de peso corporal da substância de referência química sulfassalazina (SAZ). As substâncias foram administradas, respectivamente, como uma solução / suspensão através de um tubo gástrico durante um período de 7 dias. Em d(7), os animais foram sacrificados por uma overdose de halotano, e o intestino foi removido para avaliar o dano intestinal. Um parâmetro alternativo que está intimamente relacionado com as doenças inflamatórias gastrointestinais é IL-17 (1. Takanori Kanai et al.: Homeostatic (IL-7) and effector (IL- 17) cytokines as distinct but complementary target for an optimal therapeutic strategy in inflammatory bowel disease, Current Opinion in Gastroenterology 2009, 25: 306-313 // 2. Atsuhiro Ogawa et al.: Neutralization of interleukin-17 aggravates dextran sulfate sodium-induced colitis in mice, Clinical Immunology 110 (2004), 55-62), o qual foi determinado por RT-PCR e com base na expressão de β-actina como um padrão interno.

[0103] A molécula de adesão intercelular ICAM-1 foi adicionalmente determinada por RT-PCR (1. R.C. Burns et al.; Antibody blockade of ICAM-1 and VCAM-1 ameliorates inflammation in the SAMP-1/Yit adoptive transfer model of Crohn's disease in mice; Gastroenterology Volume 121, Issue 6, Páginas 1428-1436, Dezembro de 2001 // 2. E. Rijcken et al.; ICAM-1 and VCAM-1 antisense oligonucleotides attenuate in vivo leukocyte adherence and inflammation in rat inflammatory bowel disease; Gut 2002; 51: 529-535).Tabela 2:

[0104] Deverá ser observado que a excreção de citocina IL-17 relacionada com a IBD e a integrina de ICAM-1 foram significativamente reduzidas pelo extrato de tomilho selvagem de acordo com a invenção, enquanto que um extrato de Thymus vulgaris não pôde confirmar este efeito.

Exemplo 11: modelo de ensaio in vivo utilizando TNBS

[0105] O presente estudo foi realizado em conformidade com a Diretriz de proteção dos animais utilizados para fins experimentais ou outros fins científicos da União Europeia (86/609/EEC).

[0106] Camundongos fêmeas Wistar (de 200 g a 210 g) foram mantidos em gaiolas Makrolon, em um ambiente com ar condicionado, com 12 horas de ciclo claro-escuro, alimentados com comida padrão para roedores e água à vontade durante todo o experimento. Os camundongos foram aleatoriamente divididos em seis grupos (n = 10). Dois grupos (controles saudáveis e doentes) e receberam 1 ml do meio de administração por via oral, e os grupos de ensaio receberam 100 mg/kg de peso corporal de uma formulação de extrato de tomilho selvagem de acordo com o Exemplo 4, ou 70 mg/kg de peso corporal de uma formulação de extrato de tomilho selvagem de acordo com o Exemplo 3, ou 30 mg/kg de peso corporal de Nutriose prebiótico, ou 100 mg/kg de peso corporal de sulfassalazina (SAZ) no grupo de referência. Todas as substâncias de ensaio são administradas uma vez por dia como uma solução ou suspensão através de um tubo gástrico durante um período de 7 dias. A administração das substâncias de ensaio iniciou-se no mesmo dia que a indução da colite. Para este fim, os camundongos ficaram em jejum durante a noite, e, em seguida, uma colite foi induzida, tanto no grupo de controle de doentes quanto nos grupos de tratamento com TNBS como se segue: durante uma anestesia com halotano, uma solução (10 mg de TNBS dissolvido em 0,25 ml de etanol a 50% em volume) foi injetado a partir de uma cânula Teflon através do ânus, 8 cm de profundidade no intestino. Aos camundongos do grupo de controle saudável foi administrado 0,25 ml de uma solução de PBS, em vez da solução de TNBS. O peso corporal, a ingestão de água e comida, e consistência das fezes foram registrados diariamente durante o período de ensaio. Uma semana após o início de indução da colite, todos os camundongos foram sacrificados por uma overdose de halotano, e o intestino foi removido para avaliar o dano intestinal. O segmento intestinal foi limpo de gordura e mesentério, e transferido para um papel de filtro. Cada amostra foi pesada, e o seu comprimento medido sob uma carga constante (2 g), e a proporção de peso-para-comprimento da mesma foi determinado. Independentemente do tratamento empregado, o intestino foi avaliado macroscopicamente para danos visíveis em uma escala de 0 a 10, por dois observadores, por meio de critérios anteriormente definidos, os quais consideram a extensão e a gravidade do dano. Uma secção do tecido adjacente perto da região distal doente foi imediatamente fixada com formaldeído a 4% e embebida em parafina para estudos histológicos. Posteriormente, esta preparação foi dividida em diferentes segmentos para determinações bioquímicas. Um pedaço foi congelado a -80 C para a determinação da mieloperoxidase (MPO), um outro pedaço foi imerso em ácido tricloroacético a 5% para a determinação da glutationa (GSH), e um outro pedaço foi processado imediatamente para a medição dos níveis de citocinas IL-6 e expressão de iNOS. Finalmente, o segmento restante foi utilizado para a extração de RNA e a análise posterior da expressão de marcadores diferentes por meio de qPCR.Tabela 3:

[0107] A partir desta tabela, pode ser verificado que a Nutriose não pôde exercer uma influência significativa sobre qualquer um dos parâmetros. Em contraste, não somente o potencial do extrato nativo pode ser melhorado pela adição de Nutriose (avaliação microscópica, atividade de MPO), mas também o extrato nativo em si tornou-se significativamente eficaz apenas pela combinação com Nutriose, nos parâmetros de avaliação macroscópica, bem como no conteúdo de GSH e da secreção de IL-6. Mesmo a referência química da preparação de sulfassalazina não demostrou melhorias significativas em todos os parâmetros.

[0108] A mieloperoxidase é especificamente associada com doenças inflamatórias crônicas (Tomohisa Saiki: Myeloperoxidase concentration in the stool as a new parameter of IBD; Kurume medical journal, 45, 69-73, 1998). A glutationa também é avaliada na literatura em conexão com IBD (Sido et al.: Impairment of intestinal glutathione synthesis in patients with inflammatory bowel disease; Gut 1998 42: 485-492).

[0109] Adicionalmente, a interleucina 6 já está associada com a doença de Crohn e com a colite ulcerosa na literatura (Reinecker et al.: Enhanced secretion of tumour necrosis factor-alpha, IL-6, and IL-1fi by isolated lamina propria mononuclear cells from patients with ulcerative colitis and Crohn's disease; Clin Exp Immunol 1993; 94: 174-181).

Exemplo 12: Medição da influência sobre a síndrome do intestino irritável (IBS) em um modelo animal

[0110] O presente estudo foi realizado em conformidade com a Diretriz de proteção dos animais utilizados para fins experimentais ou outros fins científicos da União Europeia (86/609/EEC). Machos de camundongos Sprague Dawley (de 240 g a 320 g; Supplier Janvier, St Berthevin Cedex) foram mantidos em gaiolas Makrolon com 3 a 4 animais por gaiola em um ambiente com ar condicionado, com 12 horas de ciclo claro-escuro, alimentados com comida padrão para roedores e água à vontade durante todo o experimento. Os camundongos foramdistribuídos aleatoriamente em quatro grupos (n Todas as substâncias de teste foram administradas uma vez por dia como uma solução ou suspensão através de um tubo entérico.

[0111] Dois grupos (controles saudáveis e doentes) e receberam 1 ml do meio de administração por via oral, e os grupos de ensaio receberam 100 mg/kg de peso corporal de uma formulação de extrato de tomilho selvagem de acordo com o Exemplo 4, ou 70 mg/kg de peso corporal de gabapentina como controle positivo. A gabapentina já foi descrita para esse fim na literatura em camundongos (Stepanovic-Petrovic RM, et al. The antinociceptive effects of anticonvulsants in a mouse visceral pain model. Anesth Analg. 2008; 106: 1897-903) e camundongos (O' Mahony SM, Coelho AM, Fitzgerald P, Lee K, Winchester W, Dinan TG, Cryan JF. The effects of gabapentin in two animal models of co-morbid anxiety and visceral hypersensitivity. Eur J Pharmacol. 2011; 667: 169-74).

[0112] Os camundongos foram anestesiados com isofluorano, e uma cânula foi introduzido através do ânus, cerca de 6 cm de profundidade no intestino grosso. Subsequentemente, 1 ml de 4 mM de ácido desoxicólico (DCA) dissolvido em solução de Krebs, pH 7,4, foi administrado enquanto a cânula foi retirada lentamente. Os animais foram deixados em uma posição de "cabeça para baixo", a fim de evitar que o DCA fluísse para fora. Os camundongos receberam DCA uma vez por dia durante três dias consecutivos. A primeira injeção foi registrada como “dia 1”. Os camundongos no grupo de controle receberam 1 ml de 0,9% de soro fisiológico em vez de DCA.

[0113] A determinação de distensão colorretal (CDR) foi efetuada pelo método de La et al. (La JH, Sung TS, Kim HJ, Kim TW, Kang TM, Yang IS. Peripheral corticotropin releasing hormone mediates post-inflammatory visceral hypersensitivity in rats. World J Gastroenterol. 2008; 14: 731-6). A administração das substâncias de ensaio iniciou- se 24 horas após a última administração de DCA e perdurou através de uma semana. Subsequentemente, os diferentes grupos foram examinados para a hipersensibilidade visceral através da distensão colorretal. Para este efeito, os camundongos foram deixados sem alimento durante a noite (com acesso livre a água), a fim de facilitar a colocação do balão. No dia da experiência, os camundongos foram brevemente anestesiados com isofluorano, e um balão de 5 cm a 6 cm foi ligado a um tubo flexível que foi introduzido através do ânus pelo reto de forma descendente até o cólon, sendo a extremidade distal 1 cm próximo ao esfíncter externo. O cateter foi depois colado à base da cauda, de modo a evitar o deslocamento. Após este procedimento, os camundongos forma colocados em uma cabine transparente (20 cm x 8 cm x 8 cm), e deixados para recriar. Posteriormente, os animais foram completamente acordados e aclimatados, a CRD foi produzida por insuflação do balão com ar. Cada experiência consistiu de cinco impulsos definidos (60 mm de Hg) durante um período de 20 segundos com 3 minutos de intervalo entre os estímulos. Genericamente, 4 experiências foram realizadas para alcançar uma resposta estável (menos de 20% de variabilidade entre as duas últimas experiências).

[0114] Neste experimento, o reflexo de retirada abdominal (CRD) é classificado como se segue: 0 = nenhuma resposta comportamental à distensão, 1 = movimentos breves da cabeça devido à imobilidade, 2 = contração dos músculos abdominais sem levantar o abdômen, 3 = levantamento do abdômen, 4 = arqueamento do corpo e levantamento da estrutura pélvica.

[0115] A partir desta pontuação, os seguintes resultados puderam ser obtidos após 1 semana de tratamento:

[0116] A avaliação mostrou que camundongos tratados com DCA (B = grupo de controle de doentes) apresentaram uma diferença estatisticamente significativa em relação aos animais não tratados (A = grupo de controle de saudáveis). Assim, o modelo era adequado, em princípio. O controle positivo de gabapentina (D) pode confirmar a informação a partir da literatura e teve um efeito significativo (p < 0,05) em comparação com o controle de IBS (B). A substância teste (C), o extrato da invenção de acordo com o Exemplo 4, poderia também confirmar a sua adequação para o tratamento de IBS. O extrato de Thymus serpylli foi significativamente inferior ao do grupo de controle de IBS (B) (p <0,05), e apresentou-se no mesmo nível em relação aos animais do grupo saudável (A).

Exemplo 13: Formulação de extrato instantâneo

[0117] Com o intuito de prolongar o tempo para a próxima recaída, tanto quanto possível, no âmbito de uma terapia de manutenção, uma forma de dosagem que conduz a um elevado grau de adesão é necessária. Isto pode ser bem assegurado, por exemplo, por meio de uma formulação de bebida instantânea rapidamente preparada. Desta forma, 50% de extrato seco equivalente de um extrato viscoso, de acordo com o Exemplo 3, é misturado com 43% de Nutriose FB 06, 5% de sacarose e 2% de aroma, e seco em uma torre de pulverização por meio de dióxido de carbono supercrítico para dar origem a um pó instantâneo. Esta formulação pode ser colocada em saches e é prontamente solúvel em água fria. O aroma pode ser facilmente adaptado às necessidades do mercado.

Exemplo 14: Formulação de extrato como "alimentos de astronauta"

[0118] Infelizmente, os pacientes que sofrem de doença de Crohn ou colite ulcerosa encontram-se muitas vezes em mau estado de saúde e capazes de ingerir apenas pequenas quantidades de comida. Para estes pacientes, uma formulação de extrato é fornecida, a qual é popularmente conhecida como "alimentos de astronauta", mas que geralmente possui um alto teor calórico em uma dieta nutraceuticamente equilibrada sob a forma de uma formulação para beber com 200 ml, ou um gel em uma bisnaga flexível. Para preparar tal gel, uma formulação de extrato, de acordo com o Exemplo 4, é dissolvido em conjunto com os outros ingredientes (vitaminas, minerais, proteínas e aminoácidos livres), homogeneizado, e porções de 80 ml cada colocadas em bisnagas flexíveis.

[0119] Assim, uma bisnaga flexível (1 porção) compreende:

[0120] 1000 mg de extrato de tomilho selvagem, 6 g de proteína, 30 g de carboidratos, dos quais 15 g de açúcar (sacarose), 9 g de lipídios (1g de ácidos graxos saturados), 44 g de água, minerais (96 mg de sódio, 91 mg de cloreto, 236 mg de potássio, 174 mg de cálcio, 174 mg de fósforo (taxa de Ca/P = 1,0), 33 mg de magnésio), elementos-traço (3,8 mg de ferro, 2,9 mg de zinco, 430 μg de cobre, 32 μg de iodo, 16 μg de cromo, 200 μg de flúor, 800 μg de manganês, 24 μg de molibdênio, 14 μg de selênio), vitaminas (240 μg de vitamina A, 400 μg de vitamina B1, 400 μg de vitamina B2, 4,3 mg de niacina, 400 μg de vitamina B6, 64 μg de ácido fólico, 1.300 μg de ácido pantatênico, 700 μg de vitamina B12, 9,6 μg de biotina, 24 mg de vitamina C , 1,8 μg de vitamina D, 13 μg de vitamina K) e 88 mg de colina.

Claims (14)

1. Uso de um extrato de Thymus serpyllum L. compreendendo adicionalmente um prebiótico caracterizado pelo fato de ser para a preparação de um medicamento para o tratamento de doenças inflamatórias do trato intestinal, selecionadas a partir de síndrome do intestino irritável (IBS), doença inflamatória do intestino (IBD), colite linfocítica, colite ulcerativa, diverticulite, duodenite, e doença de Crohn, em que o referido prebiótico é selecionado a partir do grupo de carboidratos solúveis em água.

2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o seu teor de ácido rosmarínico é de pelo menos 0,5% em peso, com base no extrato seco nativo.

3. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o seu teor de timol mais carvacrol é menor de 0,01% em peso, com base no extrato seco nativo.

4. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o referido prebiótico é selecionado a partir do grupo de fruto- oligossacarídeos.

5. Processo para produzir um extrato, caracterizado pelo fato de que compreende as seguintes etapas: a. fornecer uma fármaco vegetal de parte aérea de plantas Thymus serpyllum L.; b. opcionalmente, secar o referido fármaco vegetal; c. opcionalmente, triturar o referido fármaco vegetal; d. opcionalmente, desengaçar as folhas e reduzir o conteúdo de haste para menos de 2% em peso; e. opcionalmente, vaporizar o fármaco vegetal e reduzir o óleo essencial para menos do que 0,5 ml/kg, com base no fármaco vegetal seco; f. extrair o fármaco vegetal com um agente de extração; g. remover, pelo menos parcialmente, o agente de extração para se obter um extrato espesso; h. opcionalmente, remover gordura com solventes líquidos; i. opcionalmente, realizar uma desinfecção térmica; j. adicionar um adjuvante de secagem, em que o referido adjuvante de secagem é selecionado a partir do grupo de prebióticos de carboidratos solúveis em água, mais preferivelmente a partir do grupo de fruto- oligossacarídeos; k. secar, para obter um extrato; em que preferivelmente pelo menos uma das etapas e, h, ou i é realizada.

6. Processo, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que o referido agente de extração é selecionado a partir do grupo de água, álcool, cetona, éster, éter ou gases supercríticos, ou misturas dos mesmos.

7. Processo, de acordo com a reivindicação 5 ou 6, caracterizado pelo fato de a referida extração é realizada a uma temperatura de 20°C a 100°C, preferivelmente de 50°C a 90°C, mais preferivelmente de 60°C a 80°C.

8. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 5 a 7, caracterizado pelo fato de que o fármaco vegetal empregado corresponde à monografia "Serpylli herba" da Farmacopeia Europeia.

9. Processo, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 6 a 8, caracterizado pelo fato que a referida secagem é secagem por pulverização ou secagem à vácuo.

10. Extrato ou formulação de extrato, caracterizado pelo fato de ser obtenível pelo processo como definido em qualquer uma das reivindicações de 5 a 9.

11. Extrato ou formulação de extrato, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o referido extrato possui um teor de ácido rosmarínico de pelo menos 0,5% em peso, com base no extrato seco, preferivelmente de pelo menos 1,5% em peso.

12. Extrato ou formulação de extrato, de acordo com a reivindicação 10 ou 11, caracterizado pelo fato de que o referido extrato possui um teor de óleo essencial de, no máximo, 0,5% em peso, com base no extrato seco, preferivelmente no máximo 0,1% em peso, mais preferivelmente, no máximo 0,01% em peso.

13. Formulação de extrato, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato que o referido adjuvante de secagem é selecionado a partir do grupo de ACTILIGHT®, FIBERSOL®, NUTRIOSE® ou RAFTILOSE®.

14. Formulação farmacêutica, medicamento ou alimento, caracterizado pelo fato de compreende um extrato ou Formulação de extrato, como definido em qualquer uma das reivindicações de 10 a 13.