BR112014027116B1 - Composição farmacêutica aquosa e dispositivo de distribuição - Google Patents

Abstract

formulação liofilizada, seus usos, composição farmacêutica aquosa, e dispositivo de distribuição. a presente invenção refere-se aos anticorpos anti-cd40 que são formulados como liofilisato ou formulação líquida. os liofilisatos podem ser reconstituídos para dar uma solução com uma concentração alta do ingrediente ativo de anticorpo, para distribuição a um paciente sem níveis altos de agregação de anticorpo. os liofilisatos podem ser reconstituídos com um reconstituinte aquoso para prover uma composição aquosa, em que o anticorpo tem uma concentração de pelo menos 50 mg/ml. o liofilisato ou composição farmacêutica aquosa pode incluir um ou mais de um açúcar, um agente de tamponamento, um tensoativo e/ou um aminoácido livre.

Description

Campo Técnico

[001] A presente invenção refere-se a uma formulaçãofarmacêutica de um anticorpo em oposição a CD40, um processo para a preparação do mesmo e usos da formulação.

Antecedentes

[002] A despeito da disponibilidade de diversos tratamentosimunossupressores para doenças autoimunes, ainda permanece uma grande necessidade, não atendida por fármacos mais eficazes e mais seguros, em uma grande fração da população de pacientes. Por exemplo, a despeito da eficácia reportada das terapias de descongestionar/inibir células B, como Rituximab e Belimumab em artrite reumatoide, lupus eritematoso sistêmico, síndrome de Sjogren, e esclerose múltipla, essas terapias só são eficazes em uma porção dos indivíduos doentes, e com Rituximab, com um risco que acompanha de leucoencefalopatia multifocal progressiva. Ainda, outros múltiplos tipos de células de leucócitos estão muitas vezes envolvidos na patologia dessas doenças autoimunes, tais como macrófagos, células dendríticas e células T, desta maneira a intervenção terapêutica, alvejando tipos adicionais de células ou vias imunológicas chave, que venham a inibir sua função, poderão prover benefício. Dado os múltiplos papéis imunologicamente relevantes de CD40-CD154, na ativação e função desses tipos de células, é provável que um anticorpo anti-CD40 possa conferir benefício terapêutico para pacientes sofrendo das doenças autoimunes delineadas acima, além desse atualmente provido pelas terapias correntes. Além disso, o papel central para interações de CD40CD154 nos distúrbios inflamatórios intestinais, tais como doença de Crohn e colite ulcerativa, e ligações mecanicistas da via de CD40 à patologia, em distúrbios mais raros, tais como vasculite autoimune, pênfigo vulgar, e púrpura trombocitopênica idiopática (ITP) também realçam o potencial de anticorpos anti-CD40 nessas indicações.

[003] Os imunossupressores atualmente disponíveis, usadosdepois de transplante de órgão sólido, provêm excelente eficácia a curto prazo. Rejeições agudas dentro de novo período são observadas em 5%-20% dos recipientes (dependendo do órgão, população de pacientes, e regime) e a proporção de perdas de enxertos para rejeição aguda dentro de novo período é abaixo de 5% para qualquer composição. Atualmente, a necessidade chave não atendida é a tolerabilidade da imunossupressão com a sobrevivência do paciente e enxerto no longo prazo. Depois de transplante renal, 33% dos pacientes morrem e/ou perdem seu enxerto dentro 5 anos; a idade média de morte de receptores de transplante é 58 anos. Inibidores de calcineurina (CNI) permanecem o esteio de terapia imunossupressora para a vasta maioria de pacientes de transplante. Embora a nefrotoxicidade e a mobidade cardiovascular associadas com CNIs seja um dos acionadores de nefropatia de aloenxerto crônica, como também da morte do paciente com um enxerto funcionando, a imunossupressão primária alternativa não foi capaz de substituir CNIs. No total, ainda existe espaço para melhorar a imunossupressão de transplante a longo prazo. O dano imunológico mediado por célula B de rins transplantados pode contribuir para resultados a longo prazo insatisfatórios, e a necessidade de novos agentes para alvejar a rejeição de células B está cada vez mais sendo reconhecida pela comunidade médica.

[004] Anticorpos em oposição a CD40 são conhecidos na técnica.Chir12.12 é um anticorpo totalmente humanizado, não agonista anti- CD40 (IgG1, kappa) que bloqueia CD154 (também conhecido como CD40 ligante; CD40L) - ativação mediada por leucócitos e pode mediar citotoxidade celular dependente de anticorpo (ADCC) de leucócitos de ser humano e linfomas de células B in vitro (ver o WO 2006/073443). O WO 2005/044306 descreve anticorpos antagonistas de anti-CD40, incluindo Chir12.12 para uso em particular no tratamento de distúrbios autoimunes e inflamatórios. Além disso, Chir12.12 é eficaz em retardar a rejeição de enxerto dos rins, quando dosado como uma monoterapia em Macaca fascicularis (macacos cinomólogos) [Li et al. (2008) Transplante; 86 (1):10-15]. Entretanto, Chir12.12 pode também mediar a depleção de células B periféricas em primatas não humanos (NHPs).

[005] Anti-CD40 mAbs com atividade de ADCC silenciada sãoprevistos ter um perfil de segurança melhorada em relação aos anticorpos anti-CD40 originais e, em particular, podem ser mais apropriados para indicações não oncológicas, tais como doenças autoimunes e o uso de uma composição de transplante. O solicitante desenvolveu três anticorpos anti-CD40 silenciosos baseado no anticorpo de Chir12.12. Esses anticorpos, daqui em diante designados mAb1, mAb2 e mAb3, são caracterizados por certas mutações de aminoácido na região de Fc de atividade de ADCC de silêncio.

[006] mAb1 compreende uma mutação de N297A na sequência deaminoácidos de cadeia pesada de anticorpo. O anticorpo compreende a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs 3, 4 e 5, respectivamente, e cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 6, 7 e 8, respectivamente. mAb1 compreende um domínio de VH com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 e um domínio de VL com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. mAb1 compreende a sequência de aminoácidos de cadeia pesada de comprimento total de SEQ ID NO: 9 e a sequência de aminoácidos de cadeia leve de comprimento total SEQ ID NO: 10.

[007] mAb2 compreende uma mutação de D265A na sequência deaminoácidos da cadeia pesada de anticorpos. O anticorpo compreende a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs 3, 4 e 5, respectivamente, e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 6, 7 e 8, respectivamente. mAb2 compreende um domínio de VH com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 e um domínio de VL com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. mAb2 compreende a sequência de aminoácidos de cadeia pesada de comprimento total de SEQ ID NO: 13 e a sequência de aminoácidos de cadeia leve de comprimento total de SEQ ID NO: 14.

[008] mAb3 compreende uma mutação L234A, L235A (LALA) nasequência de aminoácidos de cadeia pesada de anticorpos. O anticorpo compreende a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs 3, 4 e 5, respectivamente, e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 6, 7 e 8, respectivamente. mAb3 compreende um domínio de VH com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, e um domínio de VL com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. mAb3 compreende a sequência de aminoácidos de cadeia pesada de comprimento total de SEQ ID NO: 17 e a sequência de aminoácidos de cadeia leve de SEQ ID NO: 18.

[009] Formulações com alta concentração de anticorpo podem terprazos de validade curtos, e os anticorpos formulados podem perder atividade biológica resultante de instabilidades químicas e físicas durante a armazenagem. Entre estes, agregação, desamidação e oxidação são conhecidas como sendo as causas mais comuns de degradação de anticorpo. Em particular, a agregação pode potencialmente levar a um aumento da resposta imune nos pacientes, levando a preocupações de segurança. Desse modo, ela deve ser minimizada ou evitada.

[0010] É um objetivo da invenção prover formulações adicionais emelhoradas de anticorpos anti-CD40 e, em particular, formulações com alta concentração de anticorpos anti-CD40 e baixos níveis de agregação de anticorpos.

Descrição da invenção

[0011] Anticorpos terapêuticos são tipicamente formulados emforma aquosa, pronta para administração parenteral, ou como liofilisatos para reconstituição com um diluente apropriado antes da administração. De acordo com a invenção, um anticorpo anti-CD40 pode ser formulado como um liofilisato ou como uma composição aquosa, por exemplo, em seringas pré-cheias. A formulação apropriada pode prover uma composição farmacêutica aquosa ou um liofilisato, que pode ser reconstituído para dar uma solução com uma concentração alta do ingrediente ativo do anticorpo e um nível baixo de agregação de anticorpo para distribuir para um paciente. Concentrações altas de anticorpo são úteis quando elas reduzem a quantidade de material que deve ser distribuído para um paciente. Volumes de dosagem reduzidos minimizam o tempo tomado para distribuir uma dose fixa para o paciente. As composições aquosas da invenção com concentração alta de anticorpos anti-CD40 são particularmente apropriadas para administração subcutânea.

[0012] Desse modo, a invenção provê uma composiçãofarmacêutica aquosa, apropriada para administração parenteral em um indivíduo, por exemplo, para administração subcutânea, compreendendo um anticorpo anti-CD40.

[0013] As modalidades específicas da invenção a seguir sãodescritas como numeradas daqui em diante:1. Uma composição farmacêutica aquosa, apropriada para administração subcutânea em um indivíduo, compreendendo um anticorpo anti-CD40, em que o anticorpo tem uma concentração de pelo menos 50mg/ml, e em que o dito anticorpo anti-CD40 inclui: (i) uma ou mais cadeias pesadas CDRs selecionadas do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 3, 4 e 5; e/ou (ii) uma ou mais cadeias leves CDRs selecionadas do grupo consistindo em SEQ ID NOs: 6, 7 e 8. 2. A composição farmacêutica aquosa, apropriada para administração subcutânea em um indivíduo, de acordo com a Modalidade 1, em que o dito anticorpo anti-CD40 inclui a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs 3, 4 e 5 respectivamente, e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 6, 7 e 8.3. A composição farmacêutica aquosa das Modalidades 1 ou 2, em que o anticorpo anti-CD40 compreende um domínio de VH com aminoácido SEQ ID NO: 1, e um domínio de VL com aminoácido SEQ ID NO: 2.4. A composição farmacêutica aquosa das Modalidades 1, 2 ou 3, em que o anticorpo anti-CD40 compreende uma região de cadeia pesada de SEQ ID NO: 9 e uma região de cadeia leve de SEQ ID NO: 10, ou uma região de cadeia pesada de SEQ ID NO: 13 e uma região de cadeia leve de SEQ ID NO: 14, ou uma região de cadeia pesada de SEQ ID NO: 17 e uma região de cadeia leve de SEQ ID NO: 18.5. A composição farmacêutica aquosa de qualquer uma das Modalidades 1 a 4, em que menos do que 5% do anticorpo anti-CD40 é agregado ou degradado.6. A composição farmacêutica aquosa de qualquer uma das Modalidades 1 a 5, compreendendo um ou mais dos componentes a seguir, selecionados entre o grupo consistindo em: um estabilizador, um agente de tamponamento; e um tensoativo.7. A composição farmacêutica aquosa da Modalidade 6, em que o estabilizador é um açúcar.8. A composição farmacêutica aquosa das Modalidades 6 ou 7, compreendendo: um açúcar, um agente de tamponamento e um tensoativo.9. A composição farmacêutica aquosa da Modalidade 6 ou 7, ainda compreendendo um aminoácido livre.10. A composição farmacêutica aquosa das Modalidades 7 a 9, compreendendo sacarose como um açúcar.11. A composição farmacêutica aquosa da Modalidade 10, compreendendo 200-300 mM de sacarose.12. A composição farmacêutica aquosa das Modalidades 611, compreendendo um tampão de histidina como o agente de tamponamento.13. A composição farmacêutica aquosa da Modalidade 12, compreendendo 25-35 mM de tampão de histidina.14. A composição farmacêutica aquosa das Modalidades 6 a 13, compreendendo polissorbato 20 como um tensoativo.15. A composição farmacêutica aquosa da Modalidade 14, compreendendo 0,01 a 0,2% de polissorbato 20.16. A composição farmacêutica aquosa da Modalidade 9, ainda compreendendo arginina e/ou metionina como aminoácido livre.17. A composição farmacêutica aquosa da Modalidade 16, compreendendo 40-80 mM de arginina.18. A composição farmacêutica aquosa de qualquer modalidade anterior, compreendendo sacarose, um tampão de histidina, polissorbato 20 e arginina.19. A composição farmacêutica aquosa de qualquer modalidade anterior, compreendendo sacarose, um tampão de histidina, polissorbato 20 e metionina.20. A composição farmacêutica aquosa de qualquer modalidade anterior, compreendendo sacarose, um tampão de histidina, polissorbato 20, arginina e metionina.21. Um liofilisato apropriado para preparar uma composição farmacêutica aquosa de quaisquer modalidades anteriores.22. Um liofilisato de acordo com a Modalidade 21, compreendendo sacarose, um tampão de histidina e polissorbato 20.23. Um método para preparar um liofilisato, compreendendo as etapas de: (i) preparar uma solução aquosa compreendendo um anticorpo anti-CD40, um açúcar, um agente de tamponamento, um tensoativo e opcionalmente um aminoácido livre; e (ii) liofilisando a solução aquosa.24. Um dispositivo de distribução, incluindo uma composição farmacêutica aquosa de qualquer uma das Modalidades 1-20.25. Uma seringa pré-cheia, incluindo uma composição farmacêutica aquosa de qualquer uma das Modalidades 1-20.26. Um método para distribuir um anticorpo anti-CD40 monoclonal para um mamífero, compreendendo uma etapa de administrar para o paciente um composição farmacêutica de qualquer uma das Modalidades 1-20.27. A composição de qualquer uma das Modalidades 1-20, para uso em tratar uma doença ou distúrbio que é mediado por CD40.28. A composição da Modalidade 27, para o tratamento de doenças autoimunes.29. A composição da Modalidade 28, para o tratamento de artrite reumatoide, lupus eritematoso sistêmico ou Pênfigo vulgar.30. A composição farmacêutica aquosa de qualquer uma das Modalidades 1-20 em que o anticorpo tem uma concentração de pelo menos 50mg/ml, pelo menos 100mg/ml, pelo menos 150mg/ml, pelo menos 200mg/ml, pelo menos 250mg/ml, ou pelo menos 300mg/ml.

[0014] A invenção também provê uma composição farmacêuticaaquosa compreendendo: um anticorpo anti-CD40 monoclonal, como descrito acima, por exemplo, mAb1, mAb2 ou mAb3, especialmente mAb1; um estabilizador; um agente de tamponamento; e um tensoativo. A composição preferivelmente também inclui um aminoácido livre.

[0015] A invenção também provê um liofilisato compreendendo: umanticorpo anti-CD40 monoclonal como descrito acima, por exemplo, mAb1, mAb2 ou mAb3, especialmente mAb1; um açúcar; um agente de tamponamento; e um tensoativo. O liofilisato preferivelmente também inclui um aminoácido livre.

[0016] A invenção também provê um liofilisato compreendendo umanticorpo anti-CD40 monoclonal, como descrito acima, por exemplo, mAb1, mAb2 ou mAb3, especialmente mAb1; em que o liofilisato pode ser reconstituído com um reconstituinte aquoso para prover uma composição aquosa, em que o anticorpo tem uma concentração de pelo menos 50 mg/ml, 100 mg/ml, 150 mg/ml, 200 mg/ml, 250 mg/ml, ou 300 mg/ml, depois da reconstituição em uma solução aquosa.

[0017] A invenção também provê uma composição farmacêuticaaquosa compreendendo uma concentração alta de um anticorpo anti- CD40 monoclonal, como descrito acima, por exemplo, mAb1, mAb2 ou mAb3, especialmente mAb1; em que menos do que 5%, 4%, 3%, 2% ou 1% do anticorpo anti-CD40 é agregado ou degradado.

[0018] A invenção também provê um processo para preparar umliofilisato, compreendendo as etapas de: (i) preparar uma solução aquosa compreendendo um anticorpo anti-CD40 monoclonal, um açúcar, um agente de tamponamento, um tensoativo, e opcionalmente um aminoácido livre; e (ii) liofilisando a solução aquosa.

[0019] A invenção também provê um processo para preparar umacomposição farmacêutica, compreendendo uma etapa de misturar um liofilisato com um reconstituinte aquoso, em que o liofilisato compreende um anticorpo anti-CD40 monoclonal, um açúcar, um agente de tamponamento, um tensoativo, e opcionalmente um aminoácido livre.

[0020] Mais especificamente, a invenção provê uma formulaçãoliofilisada preparada liofilisando uma formulação aquosa tendo um pH de 5,0-7,0 e compreendendo(i) um anticorpo anti-CD40 em que o anticorpo tem uma concentração de 20-150 mg/ml, e em que o dito anticorpo anti-CD40 inclui a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs 3, 4 e 5, respectivamente, e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 6, 7 e 8,(ii) um estabilizador,(iii) um agente de tamponamento,(iv) um tensoativo, e opcionalmente(v) um aminoácido.

[0021] Em uma modalidade, a dita formulação é preparada de umaformulação aquosa tendo um pH de 5,0-7,0 e compreendendo(i) um anticorpo anti-CD40 em que o anticorpo tem uma concentração de 20-150mg/ml, e em que o dito anticorpo anti-CD40 inclui uma cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs 3, 4 e 5, respectivamente, e uma cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 6, 7 e 8,(ii) sacarose ou trealose como um estabilizador,(iii) histidina como um agente de tamponamento,(iv) polissorbato 20 como um tensoativo, e opcionalmente(v) um aminoácido selecionado de arginina, metionina e glicina.

[0022] Em uma modalidade, a dita formulação liofilizada épreparada a partir de um formulação aquosa tendo um pH de 5,0-7,.0 e compreendendo(i) um anticorpo anti-CD40 em que o anticorpo tem uma concentração de 20-150 mg/ml, e em que o dito anticorpo anti-CD40 inclui uma cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs 3, 4 e 5, respectivamente, e uma cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 6, 7 e 8,(ii) 3-300 mM de sacarose ou trealose como um estabilizador,(iii) 1-60 mM de histidina como um agente de tamponamento,(iv) até 0,2% de polissorbato 20 como um tensoativo, e opcionalmente(v) 2-80 mM de arginina, metionina ou glicina.

[0023] Em uma modalidade, a dita formulação liofilizada épreparada a partir de uma formulação aquosa tendo um pH de 6,0 e compreendendo(i) um anticorpo anti-CD40 em que o anticorpo tem uma concentração de 50 mg/ml, e em que o dito anticorpo anti-CD40 inclui a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs 3, 4 e 5, respectivamente, e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 6, 7 e 8,(ii) 90 mM de sacarose como um estabilizador,(iii) 10 mM de histidina como um agente de tamponamento, (iv) 0,02% de polissorbato 20 como um tensoativo.

[0024] Em uma modalidade, a dita formulação liofilizada épreparada de uma formulação aquosa tendo um pH de 6,0 e compreendendo(i) um anticorpo anti-CD40 em que o anticorpo tem uma concentração de 50 mg/ml, e em que o dito anticoro anti-CD40 inclui a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs 3, 4 e 5, respectivamente, e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 6, 7 e 8, (ii) 90 mM de sacarose como um estabilizador,(iii) 10 mM de histidina como um agente de tamponamento, (iv) 0,02% de polissorbato 20 como um tensoativo, e(v) 17 mM de arginina.

[0025] Em uma modalidade, a dita formulação liofilizada épreparada de uma formulação aquosa tendo um pH de 6,0 e compreendendo(i) um anticorpo anti-CD40 em que o anticorpo tem uma concentração de 150 mg/ml, e em que o dito anticorpo anti-CD40 inclui a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs 3, 4 e 5, respectivamente, e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 6, 7 and 8,(ii) 270 mM de sacarose como um estabilizador,(iii) 30 mM de histidina como um agente de tamponamento, e(iv) 0,06% de polissorbato 20 como um tensoativo.

[0026] A invenção também provê uma composição farmacêuticaaquosa obtida pela reconstituição de uma formulação liofilizada como descrito acima, em que o fator de reconstituição é entre 1:0,5 a 1:6.

[0027] Em uma modalidade, o fator de reconstituição é 1:3.

[0028] A invenção também provê uma composição farmacêuticaaquosa tendo um pH de 5,0 a 7,0 compreendendo(i) um anticorpo anti-CD40 em que o anticorpo tem uma concentração de pelo menos 50 mg/ml, e em que o dito anticorpo anti-CD40 inclui a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs 3, 4 e 5, respectivamente, e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 6, 7 e 8,(ii) um estabilizador,(iii) um agente de tamponamento,(iv) um tensoativo, e opcionalmente(v) um aminoácido.

[0029] Em uma modalidade, uma composição farmacêutica aquosatendo um pH de 5,0 a 7,0 compreende(i) um anticorpo anti-CD40 em que o anticorpo tem uma concentração de pelo menos 50 mg/ml, e em que o dito anticorpo anti-CD40 inclui a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs 3, 4 e 5, respectivamente, e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 6, 7 e 8,(ii) sacarose ou trealose como um estabilizador,(iii) histidina como um agente de tamponamento,(iv) polissorbato 20 como um tensoativo, e opcionalmente (v) um aminoácido selecionado de arginina, metionina ou glicina.

[0030] Em uma modalidade, uma composição farmacêutica aquosatendo um pH de 5,0 a 7,0 compreende(i) um anticorpo anti-CD40 em que o anticorpo tem uma concentração de pelo menos 50 mg/ml, e em que o dito anticorpo anti- CD40 inclui a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs 3, 4 e 5, respectivamente, e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 6, 7 e 8,(ii) 200-300 mM de sacarose como um estabilizador,(iii) 25-35 mM de histidina como um agente de tamponamento,(iv) até 0,2% de polissorbato 20 como um tensoativo, e opcionalmente(v) 10-80 mM de arginina, metionina ou glicina.

[0031] Em uma modalidade, a composição farmacêutica aquosatem um pH de 6,0 and compreende(i) um anticorpo anti-CD40 em que o anticorpo tem uma concentração de pelo menos 50 mg/ml, e em que o dito anticorpo anti-CD40 inclui a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs 3, 4 e 5, respectivamente, e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 6, 7 e 8,(ii) 270 mM de sacarose como um estabilizador,(iii) 30 mM de histidina como um agente de tamponamento, e(iv) 0,06% de polissorbato 20 como um tensoativo.

[0032] Em uma modalidade, a composição farmacêutica aquosatem um pH de 6,0 e compreende(i) um anticorpo anti-CD40 em que o anticorpo tem uma concentração de pelo menos 50 mg/ml, e em que o dito anticorpo anti- CD40 inclui a cadeia pesada CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs 3, 4 e 5 respectivamente, e a cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NOs: 6, 7 e 8,(ii) 270 mM de sacarose como um estabilizador,(iii) 30 mM de histidina como um agente de tamponamento, (iv) 0,06% de polissorbato 20 como um tensoativo, e (v) 51 mM de arginina.

[0033] Em uma modalidade, a composição farmacêutica aquosa dainvenção tem uma concentração de anticorpo anti-CD40 anticorpo de 150 mg/ml.

[0034] Em uma modalidade, a formulação liofilizada, ou umacomposição farmacêutica aquosa da invenção, compreende um domínio de VH tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 e um domínio de VL tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2.

[0035] Em uma modalidade, a formulação liofilizada, ou umacomposição farmacêutica aquosa da invenção, compreende um anticorpo anti-CD40 compreendendo uma região de cadeia pesada de SEQ ID NO: 9 e uma região de cadeia leve de SEQ ID NO: 10.

[0036] Em uma modalidade, a formulação liofilizada, ou umacomposição farmacêutica aquosa da invenção, compreende o anticorpo anti-CD40 Chir12.12 tendo uma mutação de N297A.

[0037] Em uma modalidade, a formulação liofilizada, ou umacomposição farmacêutica aquosa da invenção, compreende um anticorpo anti-CD40 compreendendo uma região de cadeia pesada de SEQ ID NO: 13 e uma região de cadeia leve de SEQ ID NO: 14.

[0038] Em uma modalidade, a formulação liofilizada ou umacomposição farmacêutica aquosa da invenção, compreende o anticorpo anti-CD40 Chir12.12 tendo uma mutação D265A.

[0039] Em uma modalidade, a formulação liofilizada ou uma composição farmacêutica aquosa da invenção, compreende um anticorpo anti-CD40 compreendendo uma região cadeia pesada de SEQ ID NO: 17 e uma região de cadeia leve de SEQ ID NO: 18.

[0040] Em uma modalidade, a formulação liofilizada ou umacomposição farmacêutica aquosa da invenção compreende o anticorpo anti-CD40 anticorpo Chir12.12 tendo uma mutação L234A L235A.

[0041] A invenção também compreende um dispositivo dedistribuição incluindo uma composição farmacêutica aquosa da invenção.

[0042] A invenção também compreende uma seringa pré-cheiaincluindo uma composição farmacêutica aquosa da invenção.

[0043] A invenção também compreende um método para distribuirum anticorpo anti-CD40 para um mamífero, compreendendo uma etapa de administrar para o paciente uma composição farmacêutica aquosa da invenção.

[0044] A invenção também compreende uma formulação liofilizadaou uma composição farmacêutica aquosa, de acordo com a invenção, para uso em tratar uma doença ou distúrbio que é mediado por CD40.

[0045] A invenção também compreende uma formulação liofilizadaou composição farmacêutica aquosa de acordo com a invenção, para uso no tratamento de doenças autoimunes.

[0046] A invenção também provê uma formulação liofilizada oucomposição farmacêutica aquosa de acordo com a invenção para tratar Esclerose Múltipla, Lupus Eritematoso Sistêmico, Síndrome de Sjogren, Artrite Reumatoide, rejeição de transplante; doença de enxerto-versus- hospedeiro, Pênfigo vulgar.Composição farmacêutica aquosa com concentração alta de anticorpos anti-CD40

[0047] A invenção confia, pelo menos parcialmente, naspropriedades de formulação de anticorpos tais como mAb1, que retêm notáveis propriedades de estabilidade e bioativas, quando formulado em uma concentração alta como um líquido (aquosa) ou composição de liofilisato.

[0048] Como usado aqui, uma composição farmacêutica "aquosa"é uma composição apropriada para uso farmacêutico, em que o veículo aquoso é água destilada. Uma composição apropriada para uso farmacêutico pode ser estéril, homogênea e/ou isotônica. A composição farmacêutica aquosa pode ser preparada diretamente em uma forma aquosa, por exemplo, em seringa pré-cheia pronta para uso (as "formulações líquidas"), ou como liofilisato para ser reconstituído logo antes do uso. Como usado aqui, o termo "composição farmacêutica aquosa" se refere a uma formulação líquida ou formulação liofilizada reconstituída. Em certas modalidades, uma composição farmacêutica aquosa da invenção é apropriada para administração parenteral para um indivíduo humano. Em uma modalidade específica, uma composição farmacêutica aquosa da invenção é apropriada para administração subcutânea.

[0049] Como usado aqui, a frase "administração parenteral"significa modo de administração, em vez de administração enteral e tópica, normalmente por injeção, e inclui, sem limitação, injeção e infusão intravenosa, intramuscular, intrarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutânea, subcuticular, intrarticular, subcapsular, subaracnoide, intraespinhal, epidural e intrastemal.

[0050] O uso de anticorpos como o ingrediente ativo de produtosfarmacêuticos está agora muito disseminado, incluindo os produtos HERCEPTIN™ (trastuzumab), RITUXAN™ (rituximab), SYNAGIS™ (palivizumab), etc. Técnicas para purificação de anticorpos terapêuticos para um grau farmacêutico são bem conhecidas na técnica.

[0051] A composição normalmente vai ser não pirogênica, por exemplo, contendo <1 EU (unidade de endotoxina, uma medida padrão) por dose, e preferivelmente <0,1 EU por dose. A composição é preferivelmente sem glúten.

[0052] Em modalidades específicas, uma composição farmacêuticaaquosa da invenção exibe níveis baixos a indetectáveis de agregação ou degradação de anticorpo, com muito pouca ou nenhuma perda das atividades biológicas durante a fabricação, preparação, transporte e longos períodos de armazenagem, a concentração do anticorpo anti- CD40 sendo pelo menos cerca de 50mg/ml, 100mg/ml, 150mg/ml,200mg/ml, 250mg/ml, ou 300mg/ml.

[0053] Em um aspecto, a invenção se refere a uma composiçãofarmacêutica aquosa com concentração alta de anticorpos anti-CD40.

[0054] É conhecido na técnica que tal composição farmacêuticaaquosa de concentração alta pode ser diluída antes de injetar, por exemplo, se concentrações de anticorpos mais baixa são requeridas para intervenções terapêuticas específicas, ou quando tratado pacientes de peso corporal mais baixo, incluindo crianças. Concentrações apropriadas podem ser de 25mg/ml ou 10mg/ml. Alternativamente, a formulação original pode ser produzida com tal concentração mais baixa.

[0055] O termo "anticorpo", como referido aqui, inclui todos osanticorpos e qualquer fragmento de ligação de antígeno (Isto é, "porção de ligação de antígeno") ou cadeias únicas dos mesmos. Um "anticorpo" de ocorrência natural é uma glicoproteína compreendendo pelo menos duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L) interconectadas por ligações de dissulfeto. Cada cadeia pesada é compreendida de uma região variável de cadeia pesada (abreviada aqui como VH) e uma região constante de cadeia pesada. A região constante de cadeia pesada é compreendida de três a quatro domínios, dependendo do isótopo, CH1, CH2, CH3 e CH4. Cada cadeia leve compreende uma região variável de cadeia leve (abreviada aqui como VL) e uma região constanate de cadeia leve. A região constante de cadeia leve é compreendida por um domínio, CL. As regiões VH e VL podem ser ainda subdivididas em regiões de hipervariabilidade, regiões determinando complementaridade denominada (CDR), intercaladas com regiões que são mais conservadas, denominadas regiões de estrutura (FR). Cada VH e VL é composto de três CDRs e quatro FRs, dispostos do terminal de amino para o terminal de carboxi, na ordem a seguir: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. As regiões variáveis das cadeias pesadas e leves contêm um domínio de ligação que interage com um antígeno. As regiões constantes dos anticorpos podem mediar uma ligação de imunoglobulina para tecidos ou fatores hospedeiros, incluindo várias células do sistema imune (por exemplo, células efetoras) e o primeiro componente (Clq) do sistema de complemento clássico.

[0056] O termo "porção de ligação de antígeno" de um anticorpo (ousimplesmente "porção de antígeno"), como usado aqui, se refere a um comprimento todo, ou um ou mais fragmentos de um anticorpo que retém a capacidade de especificamente ligar para um antígeno (por exemplo, uma porção de CD40). Tem sido mostrado que a função de ligação de antígeno de um anticorpo pode ser realizada por fragmentos de um anticorpo de comprimento todo. Exemplos de fragmentos de ligação abrangidos dentro do termo "porção de ligação de antígeno" de um anticorpo inclui um fragmento de Fab, um fragmento monovalente consistindo nos domínios de VL, VH, CL e CH1; um fragmento de F(ab)2, um fragmento bivalente compreendendo dois fragmentos de Fab ligados por uma ponte de dissulfeto na região de articulação; um fragmento de Fd consistindo nos domínios de VH e CH1; um fragmento de Fv consistindo nos domínios de VL e VH de um braço único de um anticorpo; um fragmento de dAb (Ward et al., 1989 Nature 341:544-546), que consiste em um domínio de VH; e uma região determinante de complementaridade isolada (CDR).

[0057] Além do mais, embora os dois domínios de fragmento Fv, VLe VH, sejam codificados por genes separados, eles podem ser unidos, usando métodos recombinantes, por um ligante sintético que possibilita que eles sejam feitos como uma cadeia de proteínas única em que as regiões de VL e VH emparelham para formar moléculas monovalentes (conhecidas como cadeia única Fv (scFv); ver, por exemplo, Bird et al., 1988 Science 242:423-426; e Huston et al., 1988 Proc. Natl. Acad. Sci. 85:5879-5883). Tais anticorpos de cadeia única são também destinados a ser contidos dentro do termo "região de ligação de antígeno" de um anticorpo. Esses fragmentos de anticorpo são obtidos usando técnicas convencionais conhecidas daqueles versados na técnica, e os fragmentos são rastreados para utilizar da mesma maneira como são anticorpos intactos.

[0058] Um "anticorpo isolado", como usado aqui, refere-se a umanticorpo que é substancialmente livre de outros anticorpos, tendo especificidades antigênicas diferentes, por exemplo, um anticorpo isolado que especificamente liga um CD40 de ser humano é substancialmente livre de anticorpos que especificamente ligam antígenos em vez de CD40. Um anticorpo isolado que especificamente liga CD40 pode, entretanto, ter reatividade cruzada com outros antígenos, tais como moléculas de CD40 de outras espécies. Além do mais, um anticorpo isolado pode ser substancialmente livre de outro material celular e/ou produtos químicos.

[0059] Os termos "anticorpo monoclonal" ou "composição deanticorpo monoclonal", como usados aqui, se referem a uma preparação de moléculas de anticorpos de composição molecular única. Uma composição de anticorpo monoclonal exibe uma especificidade e afinidade de ligação única para um epítopo particular.

[0060] O termo "anticorpo de ser humano", como usado aqui, incluianticorpos tendo regiões variáveis em que ambas a estrutura e as regiões de CDR, são derivadas de sequências de origem humana. Além disso, se o anticorpo contém uma região constante, a região constante também é derivada de tais sequências humanas, por exemplo, sequências de linha de germes de ser humano, ou versões mudadas de sequências de linha de germes de ser humano, ou anticorpo contendo sequências de estruturas de consenso derivadas de análise de sequências de estruturas de ser humano, por exemplo, como descrito em Knappik, et al. (2000. J Mol Biol 296, 57-86).

[0061] As estruturas e locais de domínios de imunoglobulinavariáveis, por exemplo, CDRs, podem ser definidos usando esquemas de numeração bem conhecidos, por exemplo, o esquema de numeração de Kabat, o esquema de numeração de Chothia, uma combinação de Kabat e Chothia (AbM), etc. (ver, por exemplo, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services (1991), eds. Kabat et al.; Al Lazikani et al. (1997) J. Mol. Bio. 273:927 948). Ao longo de todo este relatório descritivo, a região determinando complementaridade ("CDR") é definida de acordo com a definição de Kabat, com exceção de CDRH1, que é a extensão de aminoácidos definidos por uma combinação de ambas as definições de Kabat e Chothia para este CDR.

[0062] Os anticorpos humanos da invenção podem incluir resíduosde aminoácidos não codificados por sequêcias humanas (por exemplo, mutações introduzidas por mutagênesis randômica ou de sítio específico in vitro ou por mutação somática in vivo). Entretanto, o termo "anticorpo humano", como usado aqui, não é destinado a incluiur anticorpos em que as sequências de CDR, derivadas de linha de germes de outras espécies de mamíferos, tal como um camundongo, foram enxertadas em sequências de estruturas de seres humanos.

[0063] O termo "anticorpo monoclonal de ser humano" se refere aosanticorpos que exibem uma única especificidade de ligação, que tem regiões variáveis em que ambas as regiões de estrutura e de CDR, são derivadas de sequências humanas.

[0064] O termo "anticorpo de ser humano recombinante", comousado aqui, inclui todos os anticorpos de ser humano que são preparados, expressos, criados ou isolados por meios recombinantes, tais como anticorpos isolados de um animal (por exemplo, um camundongo), que é transgênico ou transcromossomal, para genes de imunoglobulina de ser humano, ou um hibridoma preparado a partir do mesmo, anticorpos isolados de uma célula hospedeira transformada para expressar o anticorpo de ser humano, por exemplo, de uma transfectomia, anticorpos isolados de uma biblioteca de anticorpo de ser humano recombinante, combinatorial, e anticorpos preparados, expressos, criados ou isolados qualquer outro meio que envolve junção de todos ou de uma porção de um gene de imunoglobulina de ser humano, sequências para outras sequências de DNA. Tais anticorpos de ser humano recombinantes têm regiões variáveis, em que as regiões de estrutura e de CDR são derivadas de sequências de imunoglobulina de linha de germes de ser humano. Em certas modalidades, entretanto, tais anticorpos recombinantes de seres humanos podem ser submetidos a uma mutagênse in vitro (ou, quando sequência de Ig de um animal transgênico para ser humano é usada, mutagênesis somática in vivo) e, desse modo, a sequência de aminoácidoss das regiões de VH e VL dos anticorpos recombinantes são sequências que, embora derivadas de e relacionadas a uma linha de germes de ser humano, as sequências VH e VL, podem não existir naturalmente dentro do repertório in vivo da linha de germes de anticorpo de ser humano.

[0065] Como usado aqui, "isotipo" se refere a uma classe deanticorpos (por exemplo, IgM, IgA, IgD, IgE e IgG tal como IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4) que é provida pelos genes da região de cadeia pesada constante.

[0066] As frases "um anticorpo reconhecendo um antígeno" e "umanticorpo específico para um antígeno" são usadosintercambiavelmente aqui com o termo "um anticorpo que liga especificamente a um antígeno".

[0067] Como usado aqui, um anticorpo que "especificamente liga aopolipeptídeo CD40" ou um "anticorpo anti-CD40" se refere a um anticorpo que liga a um polipeptídeo CD40 de ser humano da SEQ ID NO: 21 com um KD de 100nM ou menos, 10nM ou menos, 1nM ou menos. Um anticorpo que "tem reação cruzada com um antígeno em vez de CD40" se refere a um anticorpo que liga aquele antígeno com um KD de 0,5 x 10-8 M ou menos, 5 x 10-9 M ou menos, ou 2 x 10-9 M ou menos. Um anticorpo que "não tem reação cruzada com um antígeno particular" é destinado a se referir a um anticorpo que liga aquele antígeno, com um KD de 1,5 x 10-8 M ou mais, ou um KD de 5-10 x 10-8 M ou 1 x 10-7 M ou mais. Em certas modalidades, tais anticorpos que não têm reação cruzada com o antígeno exibem essencialmente ligações indetectáveis em oposição a essas proteínas nos ensaios de ligação padrão.

[0068] Em uma modalidade, uma concentração alta de umanticorpo anti-CD40 em uma composição farmacêutica aquosa da invenção é pelo menos 50 mg/ml. Em uma modalidade, uma concentração alta é pelo menos 100 mg/ml. Em uma modalidade, umaconcentração alta é pelo menos 150 mg/ml. Em uma modalidade, umaconcentração alta é pelo menos 200 mg/ml. Em uma modalidade, umaconcentração alta é pelo menos 250 mg/ml. Em uma modalidade, umaconcentração alta é pelo menos 300 mg/ml.

[0069] Em uma modalidade, a composição farmacêutica aquosa dainvenção compreende entre 50 mg/ml e 300 mg/ml de um anticorpo anti- CD40, por exemplo, mAb1.

[0070] Em uma modalidade, a composição farmacêutica aquosa dainvenção compreende entre 75 mg/ml e 250 mg/ml de um anticorpo anti- CD40, por exemplo, mAb1.

[0071] Em uma modalidade, a composição farmacêutica aquosa dainvenção compreende entre 100 mg/ml e 250 mg/ml de um anticorpo anti-CD40, por exemplo, mAb1.

[0072] Em uma modalidade, a composição farmacêutica aquosa dainvenção compreende entre 100 mg/ml e 200 mg/ml de um anticorpo anti-CD40, por exemplo, mAb1.

[0073] Em uma modalidade, a composição farmacêutica aquosa dainvenção compreende 150mg/ml de um anticorpo anti-CD40, por exemplo, mAb1.

[0074] Em uma modalidade, a composição farmacêutica aquosa dainvenção compreende cerca de 50 mg/ml, cerca de 60 mg/ml, cerca de 70 mg/ml, cerca de 80 mg/ml, cerca de 90 mg/ml, cerca de 100 mg/ml, cerca de 110 mg/ml, cerca de 120 mg/ml, cerca de 130mg/ml, cerca de 140 mg/ml, cerca de 150 mg/ml, cerca de 160 mg/ml, cerca de 170 mg/ml, cerca de 180 mg/ml, cerca de 190 mg/ml, cerca de 200 mg/ml, cerca de 210 mg/ml, cerca de 220 mg/ml, cerca de 230 mg/ml, cerca de 240 mg/ml, cerca de 250 mg/ml ou cerca de 300mg/ml de um anticorpo anti-CD40, por exemplo, mAb1.

[0075] Além disso, as composições farmacêuticas aquosas sãoestáveis de tal maneira que, mesmo depois da armazenagem por 4 semanas a 2-8°C, menos de 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,05% ou 0,01% do anticorpo total anti-CD40 é agregado como medido por SEC-HPLC.

[0076] A composição farmacêutica aquosa pode incluir, em adiçãoao anticorpo anti-CD40, componentes adicionais tais como um ou mais dos a seguir: (i) um estabilizador; (ii) um agente de tamponamento; (iii) um tensoativo; e (iv) um aminoácido livre. A inclusão de cada um de tais componentes adicionais pode dar composições com baixa agregação do anticorpo anti-CD40.

[0077] Estabilizadores apropriados para uso com a invenção podematuar, por exemplo, como agentes de intensificação de viscosidade, agentes volumosos, agentes solubilizantes, e/ou similares. O estabilizador pode ser iônico ou não iônico (por exemplo, açúcares). Como açúcares eles incluem, mas não são limitados a, monossacarídeos, por exemplo, frutose, maltose, galactose, glucose, D- manose, sorbose e similares; dissacarídeos, por exemplo, lactose, sacarose, trealose, celobiose, e similares; polissacarídeos, por exemplo, rafinose, melezitose, maltodextrinas, dextranos, amidos, e similares; e alditóis, tais como manitol, xilitol, maltitol, lactitol, xilitol sorbitol (glucitol) e similares. Por exemplo, o açúcar pode ser sacarose, trealose, rafinose, maltose, sorbitol ou mannitol. O açúcar pode ser um álcool açúcar ou um amino açúcar. A sacarose é particularmente útil. Como estabilizadores iônicos eles incluem sais tais conmo NaCl ou componentes de aminoácidos tal como arginina-HCl.

[0078] Agentes de tamponamento apropriados para uso com ainvenção incluem, mas não são limitados a, sais de ácido orgânico tais como sais de ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido glucônico, ácido carbônico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido acético ou ácido ftálico; Tris, cloridrato de tometamina, ou tampão de fosfato. Em adição, componentes de aminoácidos podem também ser usados como agentes de tamponamento. Tais componentes de aminoácido incluem, sem limitação, glicina e histidina. Um tampão de histidina é particularmente útil.

[0079] As composições farmacêuticas aquosas incluem tal agentede tamponamento ou agente de ajuste de pH para prover controle de pH melhorado. Em uma modalidade, uma composição farmacêutica aquosa da invenção tem um pH entre 5,0 e 8,0, entre 5,5 e 7,5, entre 5,0 e 7,0, entre 6,0 e 8,0, ou entre 6,0 e 7,0. Em uma modalidade específica, uma composição farmacêutica aquosa da invenção tem um pH de cerca de 6,0.

[0080] Como usado aqui, o termo "tensoativo" aqui se refere àssubstâncias orgânicas que têm estruturas anfipáticas; isto é, elas são compostas de grupos de tendências de solubilidade em oposição, tipicamente uma cadeia de hidrocarboneto solúvel em óleo e um grupo iônico solúvel na água. Tensoativos podem ser classificados, dependendo da carga da porção ativa de superfície, em agentes aniônicos, catiônicos e dispersantes para várias composições farmacêuticas e preparações de materiais biológicos.

[0081] Tensoativos apropriados para uso com a invenção incluem,mas não são limitados a, tensoativos não iônicos, tensoativos iônico e tensoativos zwitteriônicos. Tensoativos típicos para uso com a invenção incluem, mas não são limitados a, ésteres de ácido graxo de sorbitano (por exemplo, monocaprilato de sorbitano, monolaurato de sorbitano, monopalmitato de sorbitano), trioleato de sorbitano, ésteres de ácido graxo de glicerina (por exemplo, monocaprilato de glicerina, glicerina monomiristato, glicerina monostearato), ésteres de ácido graxo de poliglicerina (por exemplo, decagliceril monoestearato, decagliceril distearato, decagliceril monolinoleato), ésteres de ácido graxo de polioxietileno sorbitano (por exemplo, monolaurato de polioxietileno sorbitano, mono-oleato de polioxietileno sorbitano, monoestearato de polioxietileno sorbitano, monopalmitato de polioxietileno sorbitano, trioleato de polioxietileno sorbitano, triestearato de polioxietileno sorbitano), ésteres de ácido graxo de polioxietileno sorbitol (por exemplo, tetraestearato de polioxietileno sorbitol, tetraoleato de polioxietileno sorbitol), ésteres de ácido graxo de glicerina de polioxietileno (por exemplo, monoestearato de gliceril de polioxietileno), ésteres de ácido graxo de polietileno glicol (por exemplo, diestearato de polietileno glicol), éteres de alquila de polioxietileno (por exemplo, éter de laurila de polioxietileno), éteres de alquila de polioxietileno polioxipropileno (por exemplo, polioxietileno polioxipropileno glicol, éter de propil polioxietileno polioxipropileno, éter de cetil polioxietileno polioxipropileno), éteres de polioxietileno alquilfenila (por exemplo, éter de nonilfenil de polioxietileno), óleos de mamona de polioxietileno hidrogenado (por exemplo, óleo de mamona de polioxietileno, óleo de mamona de polioxietileno hidrogenado), derivados de cera de abelha de polioxietileno (por exemplo, cera de abelha de polioxietileno sorbitol), derivados de lanolina de polioxietileno (por exemplo, lanolina de polioxietileno), e amidas de ácido graxo de polioxietileno (por exemplo, amida de ácido esteárico de polioxietileno); C10-C18 sulfatos de alquila (por exemplo, sulfato de cetila de sódio, sulfato de laurila de sódio, sulfato de oleíla de sódio), sulfato de éter de polioxietileno C10-C18 alquila com uma média de 2 a 4 moles de unidades de óxido de etileno adicionados (por exemplo, sulfato de laurila de polioxietileno de sódio), e sais de éster de C1-C18 alquil sulfossuccinato (por exemplo, éster de sulfossuccinato de laurila de sódio); e tensoativos naturais tais como lecitina, glicerofosfolipídeo, esfingofofolipídeos (por exemplo,esfingomielina), e ésteres de sacarose de C12-C18 ácidos graxos. Uma composição pode incluir um ou mais desses tensoativos. Tensoativos peferidos são ésteres de ácido graxo de polioxietileno sorbitano, por exemplo, polissorbato 20, 40, 60 ou 80. Polissorbato 80 (Tween 80) é particularmente útil.

[0082] Aminoácidos livres apropriados para uso com a invençãoincluem, mas não são limitados a, arginina, lisina, histidina, metionina, ornitina, isoleucina, leucina, alanina, glicina, ácido glutâmico ou ácido aspártico. A inclusão de um aminoácido básico é preferida, isto é, arginina, lisina e/ou histidina. Se uma composição inclui histidina, depois esta pode atuar como ambos, um agente de tamponamento e um aminoácido livre, mas quando um tampão de histidina é usado, é típico incluir um aminoácido de não histidina livre, por exemplo, para incluir o tampão de histidina e lisina. Um aminoácido pode estar presente em sua forma de D- e/ou L-, mas a forma L- é típica. O aminoácido pode estar presente como qualquer sal apropriado, por exemplo, um sal de cloridrato, tal como arginina-HCl.

[0083] Quando presente, os componentes (i) até (iv) estarão emuma concentração suficiente para manter o anticorpo anti-CD40 em uma forma que é ativa e solúvel depois de(i) liofilização e armazenagem e reconstituição (para liofilisatos), ou(ii) condicionando em unidades de dosagem e armazenagem (para formulações líquidas).

[0084] Desse modo, um açúcar pode estar presente em umacomposição farmacêutica aquosa da invenção, por exemplo, depois da reconstituição de um liofilisato em água, em uma concentração de entre 3 e 400 mM, por exemplo, 50-380 mM, 100-350 mM, 200-300 mM. Uma concentração de 270 mM de sacarose é útil.

[0085] Um agente de tamponamento pode estar presente em umacomposição farmacêutica aquosa da invenção, por exemplo, depois da reconstituição de um liofilisato em água, a uma concentração de entre 1 e 60 mM, por exemplo, 10-50 mM, 20-40 mM, 25-35 mM. Uma concentração de 30 mM de tampão de histidina é útil.

[0086] Um tensoativo pode estar presente em uma composiçãofarmacêutica aquosa da invenção, por exemplo, depois da reconstituição de um liofilisato em água, a uma concentração de até 0,2% (em volume), por exemplo, 0,01-0,1%, 0,03-0,08%, 0,04-0,08%. Uma concentração de 0,06% polissorbato 20 é útil. Em algumas modalidades, polissorbato 80 pode ser usado.

[0087] Um aminoácido livre pode estar presente em umacomposição farmacêutica aquosa da invenção, por exemplo, depois da reconstituição de um liofilisato em água, a uma concentração entre 2 e 100 mM, por exemplo, 10-80 mM, 20-70 mM, 30-60 mM, 40-60 mM. Uma concentração de 51 mM de arginina (por exemplo, arginina-HCl) ou 60 mM de metionina ou glicina (por exemplo, glicina-HCl) é útil.

[0088] Uma formulação contendo tampão de histidina, sacarose epolissorbato 20 mostrou ser apropriada para a liofilisação do anticorpo mAb1 a uma concentração de pelo menos 150mg/ml depois da reconstituição.

[0089] Em uma modalidade, a composição farmacêutica aquosaconsiste em 150 mg/ml de mAb1, 30 mM de histidina, 270 mM de sacarose e 0,06% de polissorbato 20.

[0090] Em uma modalidade, a composição farmacêutica aquosaconsiste em 150 mg/ml de mAb1, 30 mM de histidina, 270 mM de sacarose, 0,06% de polissorbato 20 e 51 mM de arginina-HCl.

[0091] Em uma modalidade, a composição farmacêutica aquosaconsiste em 150 mg/ml de mAb1, 30 mM de histidina, 270 mM de sacarose, 0,06% de polissorbato 20 e 60 mM de glicina-HCl.

[0092] Em uma modalidade, a composição farmacêutica aquosaconsiste em 200 mg/ml de mAb1, 30 mM de histidina, 270 mM de sacarose, e 0,06% de polissorbato 20.

[0093] Em uma modalidade, a composição farmacêutica aquosaconsiste em 200 mg/ml de mAb1, 30 mM de histidina, 270 mM de sacarose, 0,06% de polissorbato 20 e 51 mM de arginina-HCl.

[0094] Em uma modalidade, a composição farmacêutica aquosaconsiste em 75 mg/ml de mAb1, 30 mM de histidina, 270 mM de sacarose, e 0,06% de polissorbato 20.

[0095] Em uma modalidade, a composição farmacêutica aquosaconsiste em 75 mg/ml de mAb1, 30 mM de histidina, 270 mM de sacarose, 0,06% de polissorbato 20 e 51 mM de arginina-HCl.

[0096] Outros excipientes considerados, que podem ser utilizados em uma composição farmacêutica aquosa da invenção incluem, por exemplo, agentes flavorizantes, agentes antimicrobianos, adoçantes, antioxidantes, agentes antiestáticos, lipídeos tais como fosfolipídeos ou ácidos graxos, esteroides tais como colesterol, excipientes de proteínas tais como albumina do soro (albumina de soro de ser humano), albumina recombinante de ser humano, gelatina, caseína, contra-íons formando sal tal como sódio e similares. Estes e excipientes farmacêuticos adicionais conhecidos e/ou aditivos apropriados para uso nas formulações da invenção, são conhecidos na técnica, por exemplo, como relacionado no "Manual de Excipientes Farmacêuticos", 4a edição, Rowe et al., Eds., Associação Americana de Produtos Farmacêuticos (2003); e Remington: a Ciência e a Prática de Farmácia, 21a edição, Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2005).

[0097] As composições farmacêuticas aquosas da invenção podemincluir ainda ingredientes ativos em adição ao anticorpo anti-CD40. Ainda agentes farmacológicos podem incluir, por exemplo, compostos quimioterapêuticos.

Liofilisatos

[0098] Técnicas para liofilisação de anticorpos são bem conhecidasna técnica, por exemplo, ver John F. Carpenter e Michael J. Pikal, 1997 (Pharm. Res. 14, 969-975); Xialin (Charlie) Tang e Michael J. Pikal, 2004 (Pharm. Res. 21, 191-200). Por exemplo, os produtos de anticorpos monoclonais, SYNAGIS™, REMICADE™, RAPTIVA™, SIMULECT™, XOLAIR™ e HERCEPTIN™, são supridos como liofilisatos. Estes anticorpos são reconstituídos para várias concentrações finais, por exemplo, SIMULECT™ é reconstituído para uma concentração de 4 mg/ml de anticorpo, REMICADE™ é reconstituído para uma concentração de 10 mg/ml, HERCEPTIN™ para 21 mg/ml, SYNAGIS™ e RAPTIVA™ para 100 mg/ml, e XOLAIR™ para 125 mg/ml.

Pré-liofilisatos, liofilisatos e reconstituição aquosa

[0099] Antes de um liofilisato poder ser administrado para umpaciente, ele deverá ser reconstituído com um reconstituinte aquoso. Esta etapa permite o anticorpo e outros componentes no liofilisato, redissolverem para dar uma solução que é apropriada para a injeção em um paciente.

[00100] O volume de material aquoso usado para reconstituição ordena a concentração do anticorpo em uma composição farmacêutica resultante. A reconstituição com um volume menor de reconstituinte do que o volume de pré-liofilisação provê uma composição que é mais concentrada do que a de antes da liofilisação. O fator de reconstituição (volume da formulação depois da liofilisação: volume da formulação antes) pode ser de 1:0,5 a 1:6. Um fator de reconstituição de 1:3 é útil. Como mencionado acima, liofilisatos da invenção podem ser reconstituídos para dar composições aquosas com uma concentração de anticorpo anti-CD40 de, pelo menos, 50 mg/ml, 100 mg/ml, 150 mg/ml. 200 mg/ml, 250 mg/ml ou 300 mg/ml, e o volume do reconstituinte será selecionado consequentemente. Se requerido, a formulação reconstituída pode ser diluída antes da administração para um paciente como apropriado para distribuir a dose pretendida.

[00101] Reconstituintes típicos para anticorpos liofilisados incluem água ou tampão estéril, opcionalmente contendo um conservante. Se o liofilisato inclui um agente de tamponamento, então o reconstituinte pode incluir ainda um agente de tamponamento (que pode ser o mesmo ou diferente do agente de tamponamento de liofilisato) ou ele pode, em vez disso, não incluir agente de tamponamento (por exemplo, WFI (água para injeção), ou salina fisiológica).

[00102] Quando presentes, os componentes (i) a (iv) estarão em uma concentração de pré-liofilização suficiente para manter o anticorpo anti- CD40 em uma forma que é ativa e solúvel depois da armazenagem (sob condições normais) e reconstituição. Os componentes estarão também presentes depois da reconstituição.

[00103] Desse modo, um açúcar, tal como sacarose ou trealose, pode estar presente antes da liofilisação, a uma concentração de entre 3 e 300 mM, por exemplo, 15-200 mM, 30-150 mM, 80-100 mM. Uma concentração de 90 mM de sacarose é útil. Um agente de tamponamento, tal como histidina, pode estar presente antes da liofilisação a uma concentração de entre 1 e 60 mM, por exemplo, 3-30 mM, 5-20 mM, 5-15 mM. Uma concentração de 10 mM de tampão de histidina é útil. Um tensoativo, tal como polissorbato 80 ou polissorbato 20, pode estar presente antes da liofilisação a uma concentração de até 0,2% (em volume), por exemplo, 0,.01-0,1%, 0,01-0,08%, 0,01-0,04%. Uma concentração de 0,02% de polissorbato 80 ou polissorbato 20 é útil. Um aminoácido livre, tal como arginina, metionina ou glicina, pode estar presente antes da liofilisação a uma concentração de entre 2 e 80 mM, por exemplo, 3-60mM, 3-50 mM, 6-30 mM, 10-25 mM, 15-20 mM. Uma concentração de 17 mM de arginina-HCl ou 20 mM de glicina-HCl ou 60 mM de metionina é útil. O anticorpo anti-CD40 está presente antes da liofilisação em uma concentração de entre 20 mg/ml e 120 mg/ml, por exemplo, 20 mg/ml, 30 mg/ml, 40 mg/ml, 50 mg/ml, 60 mg/ml, 66.6 mg/ml, 70 mg/ml, 80 mg/ml, 90 mg/ml, 100 mg/ml, 110 mg/ml, ou 120 mg/ml. Uma concentração de 50 mg/ml é útil.

[00104] O pré-liofilisato da invenção tem um pH entre 5,0 e 8,0, entre 5,0 e 7,0, entre 5,5 e 6,5. Em uma modalidade, o pré-liofilisato da invenção tem um pH de cerca de 6,0.

[00105] Em uma modalidade, o pré-liofilisato da invenção tem uma proporção molar de sacarose:anticorpo de 90:1 e uma proporção molar de histidina:anticorpo de 10:1.

[00106] Em uma modalidade, o pré-liofilisato da invenção tem uma proporção molar de sacarose:anticorpo de 90:1, uma proporção molar de histidina:anticorpo de 10:1, e uma proporção molar de arginina- HCl:anticorpo de 17:1.

[00107] Em uma modalidade, o pré-liofilisato da invenção tem uma proporção molar de sacarose:anticorpo de 90:1, uma proporção molar de histidina:anticorpo de 10:1, e uma proporção molar de glicina- HCl:anticorpo de 60:1.

[00108] Uma formulação contendo tampão de histidina, sacarose, polissorbato 20 e, opcionalmente arginina, metionina ou glicina, tem ostrado ser apropriada para liofilisação do anticorpo mAb1. Depois da reconstituição, os componentes do liofilisato podem estar presentes a uma concentração de uma composição farmacêutica aquosa, como descrita aqui anteriormente.

Doenças e distúrbios alvos

[00109] Uma composição farmacêutica aquosa da invenção compreendendo anticorpos anti-CD40 pode ser usada para tratar, melhorar ou prevenir distúrbios autoimunes relacionados à CD40, distúrbios inflamatórios relacionados à CD40 e/ou para prevenir ou reduzir o risco de rejeição ao enxerto em transplante. Para os propósitos da presente invenção, o termo "distúrbios inflamatórios" inclui "distúrbios autoimunes".

[00110] Como usado aqui, o termo "autoimunidade" é geralmente compreendido para abranger processos mediados por imune inflamatório envolvendo "autoantígeno". Em doenças autoimunes, autoantígeno(s) deflagram respostas imunes do hospedeiro.

[00111] Composições farmacêuticas compreendendo anticorpos anti-CD40 são particularmente úteis para tratar Esclerose Múltipla, Lupus Eritematoso Sistêmico, síndrome de Sjogren, Artrite Reumatoide, rejeição a transplante; doença de enxerto-versus-hospedeiro, Pênfigo vulgar; e neoplasmas de célula B, tais como leucemia linfoblástica aguda (ALL) e leucemia linfocítica crônica de célula B (CLL).

[00112] Também, a presente invenção inclui tratamento de inflamação associada com rejeição de transplante de tecido. "Rejeição de transplante" ou "rejeição de enxerto" se refere a qualquer resposta imune montada pelo hospedeiro em oposição ao enxerto, incluindo, mas não limitado a, antígenos HLA, antígenos de grupos de sangue, e similares.

[00113] A invenção pode também ser usada para tratar enxerto versus doença do hospedeiro, tal como aquela associada com transplante da medula óssea, por exemplo. Em tal enxerto versus doença do hospedeiro, a medula óssea do doador inclui linfócitos e células que se desenvolvem totalmente em linfócitos. Os linfócitos do doador reconhecem os antígenos do recipiente como não auto e montam uma resposta imune inflamatória. Dessa maneira, como usado aqui, "enxerto versus doença do hospedeiro" ou "enxerto versus reação do hospedeiro" se refere a qualquer resposta imune mediada pela célula T em que os linfócitos do doador reagem aos antígenos do hospedeiro.

[00114] Os anticorpos ou proteínas antagonistas de anti-CD40 descritos aqui, por exemplo, mAb1, mAb2 ou mAb3, podem ser usados de acordo com os métodos da invenção para tratar distúrbios autoimunes e/ou inflamatórios incluindo, mas não limitado a, lupus eritematoso sistêmico (SLE), lúpus discoide, lúpus de nefrite, sarcoidose, artrite inflamatória, incluindo artrite juvenil, artrite reumatoide, artrite psoríatica, síndrome de Reiter, espondilite anquilosante, e artrite gotosa, rejeição de transplante de um órgão ou tecido, rejeição hiperaguda, aguda, ou crônica e/ou enxerto versus doença do hospedeiro, esclerose múltipla, síndrome de hiper IgE, polarterite nodosa, cirrose biliar primária, doença inflamatória do intestino, doença de Crohn, doença de celíaco (enteropatia de glúten sensível), síndrome de Sjogren primário (pSS), hepatite autoimune, anemia perniciosa, anemia hemolítica autoimune, psoríase,escleroderma, miastenia grave, púrpura trombocitopênica autoimune, tiroidite autoimune, doença de Grave, tiroidite de Hasimoto, doença complexa imune, fadiga crônica, síndrome de disfunção imune (CFIDS), polimiosite e dermatomiosite, crioglobulinemia, trombólise,cardiomiopatia, pênfigo vulgar, fibrose intersticial pulmonar, diabetes mellitus Tipo I e Tipo II, hipersensitividade tipo retardada do tipo 1,2, 3, e 4, distúrbios de alergia ou alérgicos, respostas não desejadas / não intencionadas às proteínas terapêuticas (ver, por exemplo, Pedido de Patente U.S. No. US 2002/0119151 e Koren, et al. (2002) Curr. Pharm. Biotechnol. 3: 349-60), asma, síndrome de Churg-Strauss(granulomatose alérgica), dermatite atópica, dermatite de contato irritante e alérgica, urticária, alergia mediada por IgE, aterosclerose, Vasculite associada à ANCA, vasculite, miopatias inflamatórias idiopáticas, doença hemolítica, doença de Alzheimer, polineuropatia demielinante inflamatória crônica, e similares.

[00115] A ablação genética ou inibição farmacológica da via CD40CD154 anteriormente demonstrou benefício terapêutico em modelos clínicos ou em pré-clínicos de SLE, pSS, ITP, MS, doença de Crohn, Pênfigo vulgar, vasculite autoimune e RA (Law CL, Grewal IS. (2009). Adv. Exp. Med. Biol. 2009;647:8-36); em que a necessidade médica está detalhada abaixo.

[00116] Em modalidades preferidas, os anticorpos anti-CD40 ou proteínas da invenção são úteis para tratar: (i) lupus eritematoso sistêmico (nefrite de lupus), preferivelmente em prover terapias de esteroide moderada eficaz para indução e manutenção de remissão, e prevenção de doença renal de estágio final; (ii) síndrome de Sjogren primário, preferivelmente na prevenção de destruição da glândula salivar e lacrimal, e indução de manutenção de remissão de manifestações extraglandulares; (iii) púrpura trombocitopênicaautoimune, preferivelmente tratamento de pacientes refratários ao padrão de cuidados; (iv) Vaculite associada à ANCA, preferivelmente induzindo e mantendo remissão em pacientes refratários a corticosteroides, de tratamento de esteroide moderada; (v) Pênfigo Vulgar, preferivelmente em indução e manutenção de remissão em pacientes refratários à corticosteroides, e tratamento de esteroide moderada; (vi) Esclerose Múltipla, preferivelmente provendo tratamentos mais eficazes para prevenção de relapsos e progressão de incapacidade, e realizando o estado de livre de doença; e (vii) doença de Crohn, preferivelmente provendo terapias mais eficazes para manutenção da remissão, e tratamento de pacientes refratários a anti- TNF.

[00117] Em algumas outras modalidades, os anticorpos anti-CD40 ou proteínas da invenção são úteis para tratar inflamação pulmonar incluindo, mas não limitado a, rejeição de enxerto de pulmão, asma, sarcoidose, enfisema, fibrose cística, fibrose pulmonar idiopática, bronquite alérgica, rinite alérgica e doenças alérgicas do pulmão tais como pneumonite de hipersensibilidade, pneumonia eosinofílica, bronquiolite obliterante devido à medula óssea e/ou transplante de pulmão ou outras causas, aterosclerose de enxerto/flebosclerose de enxerto, como também outras fibroses pulmonares resultantes de colágeno, vascular, e doenças autoimunes tais como artrite reumatoide, escleroderma e lupus eritematoso.

[00118] "Tratamento" é aqui definido como a aplicação ouadministração de um anticorpo anti-CD40 ou proteína de acordo com a invenção, por exemplo, anticorpo mAb1, mAb2 ou mAb3, para um indivíduo, ou aplicar ou administrar uma composição farmacêutica compreendendo o dito anticorpo anti-CD40 ou proteína da invenção, para um tecido isolado ou linha de celulas de um indivíduo, em que o indivíduo tem uma doença autoimune e/ou doença inflamatória, um sintoma associado com uma doença autoimune e/ou doença inflamatória, ou uma predisposição para desenvolvimento de uma doença autoimune e/ou doença inflamatória, em que o propósito é curar, sarar, aliviar, dar alívio, alterar, remédiar, amelhorar, melhorar, ou afetar a doença autoimune e/ou doença inflamatória, quaisquer sintomas associados da doença autoimune e/ou doença inflamatória, ou a predisposição no sentido de desenvolvimento da doença autoimune e/ou doença inflamatória.

[00119] Por "tratamento" é também destinado à aplicação ou administração de uma composição farmacêutica compreendendo anticorpos anti-CD40 ou proteína da invenção, por exemplo, anticorpos mAb1, mAb2 ou mAb3, para um indivíduo, ou aplicação ou administração de uma composição farmacêutica compreendendo o dito anticorpo anti-CD40 ou proteína da invenção, para um tecido isolado ou linha de células de um indivíduo, em que o indivíduo tem uma doença autoimune e/ou doença inflamatória, um sintoma associado com uma doença autoimune e/ou doença inflamatória, ou uma predisposição para o desenvolvimento de uma doença autoimune e/ou doença inflamatória, em que o propósito é curar, sarar, aliviar, liberar, alterar, remediar, melhoramento, melhorar, ou afetar a doença autoimune e/ou doença inflamatória, quaisquer sintomas associados da doença autoimune e/ou doença inflamatória, ou a predisposição para o desenvolvimento da doença autoimune e/ou doença inflamatória.

[00120] Por "atividade anti-inflamatória" é destinado a uma redução ou prevenção de inflamação. A terapia com pelo menos um anticorpo anti-CD40, ou proteína de acordo com a invenção, causa uma resposta fisiológica que é benéfica em relação ao tratamento de uma doença autoimune e/ou doença inflamatória, em que a doença envolve células expressando o antígeno CD40. É reconhecido que os métodos da invenção podem ser úteis para prevenir uma mudança fenotípica em células tais como proliferação, ativação, e similares.

Administração ao paciente

[00121] Uma composição farmacêutica da invenção pode ser administrada para um paciente. A administração será tipicamente através de uma seringa. Desse modo, a invenção provê um dispositivo de distribuição (por exemplo, uma seringa) incluindo uma composição farmacêutica da invenção (por exemplo, seringa pré-cheia). Os pacientes receberão uma quantidade eficaz do anticorpo anti-CD40 como o principal ingrediente ativo, isto é, uma quantidade que é suficiente para tratar, melhorar, ou prevenir a doença ou distúrbio em questão. Efeitos terapêuticos podem também incluir redução nos sintomas físicos. A quantidade eficaz ideal e a concentração do anticorpo para qualquer indivíduo em particular dependerá de vários fatores, incluindo a idade, tamanho, saúde e/ou gênero do paciente, a natureza e extensão da condição, a atividade do corpo particular, a taxa de sua depuração pelo corpo, e também de qualquer possível terapêutica(s) adicional(is) administrada(s) em combinação com o anticorpo. A quantidade eficaz distribuída para uma dada situação pode ser determinada dentro do julgamento de um médico. Para os propósitos da presente invenção, uma dose eficaz pode ser de cerca de 0,005 mg/kg a cerca de 50 mg/kg, ou cerca de 0,05 mg/kg a cerca de 10 mg/kg. Produtos farmacêuticos conhecidos baseados em anticorpos provêm orientação a esse respeito, por exemplo, HERCEPTIN™ é administrado com uma dose inicial de 4 mg/kg de peso corporal e uma dose de manutenção semanal de 2 mg/kg de peso corporal; RITUXAN™ é administrado semanalmente a 375 mg/m2; SYNAGIS™ é administrado intramuscularmente a 15 mg/kg do peso corpal; etc.

[00122] A invenção provê um método para distribuir um anticorpo monoclonal para um mamífero, compreendendo uma etapa de administrar para o paciente uma composição farmacêutica da invenção.

[00123] A invenção também provê um método para distribuição de um anticorpo monoclonal para um mamífero, compreendendo as etapas de: (i) reconstituir um liofilisato da invenção para dar uma formulação aquosa, e (ii) administrar a formulação aquosa para o paciente. Etapa (ii) idealmente tem lugar dentro de 24 horas da etapa (i) por exemplo, dentro de 12 horas, dentro de 6 horas, dentro de 3 horas, ou dentro de 1 hora.

[00124] A invenção também provê formulações da invenção para uso como medicamentos, por exemplo, para uso na distribuição de um anticorpo para um mamífero, ou para uso para tratar, prevenir ou melhorar uma ou mais das doenças e distúrbios descritos acima.

[00125] O mamífero é preferivelmente um ser humano, mas pode ser também, por exemplo, um cavalo ou uma vaca ou um cão ou um gato. Os anticorpos idealmente serão escolhidos para combinar com as espécias alvo, por exemplo, um anticorpo de ser humano para administração para ser humano, um anticorpo de equino para cavalos, um anticorpo de canino para cães, etc. Se anticorpos de hospedeiro nativo não estão disponíveis, então a transferência de especificidade de anticorpo de uma espécie para outra pode ser realizada pela transferência de resíduos de CDR (e tipicamente, além disso, um ou mais resíduos de estruturas) de um anticorpo de doador em uma estrutura de recipiente da espécie hospedeira, por exemplo, como em humanização. Anticorpos equinizados, bovinizados, caninizados e felinizados são conhecidos na técnica. O anticorpo será ligado a CD40 das espécies alvos, mas podem também ter reação cruzada com CD40 de outras espécies.

[00126] A dosagem pode ser um programa de dose única ou um programa de múltiplas doses.

[00127] Ingredientes para formar composiçãos da invenção (porexemplo, liofilisatos e reconstituintes) podem ser supridos em recipientes hermeticamente lacrados.

O anticorpo anti-CD40

[00128] A invenção diz respeito à formulação de anticorpos anti- CD40 e, mais especificamente, a anticorpos designados mAb1, mAb2, e mAb3, especialmente mAb1.

[00129] Um anticorpo apropriado que pode ser compreendido nas composições farmacêuticas da invenção é o anticorpo recombinante de ser humano mAb1, estruturalmente caracterizado como ainda descrito abaixo. A sequência de aminoácidos VH de tal anticorpo isolado anti- CD40 é mostrada na SEQ ID NO: 1. A sequência de aminoácidos VL de tal anticorpo isolado anti-CD40 é mostrada na SEQ ID NO: 2. Asequência de aminoácidos de cadeia pesada de comprimento total detal anticorpo isolado anti-CD40 é mostrada na SEQ ID NO: 9. Asequência de aminoácidos de cadeia leve de comprimento total de talanticorpo isolado anti-CD40 é mostrada na SEQ ID NO: 10. Outro exemplo de sequência de aminoácidos de cadeia pesada e leve de tais anticorpos isolados anti-CD40 são aqueles codificados por sequências de nucleotídeos de SEQ ID NO: 11 e SEQ ID NO: 12, respectivamente.

[00130] Outros anticorpos anti-CD40 que podem ser usados para preparar as composições farmacêuticas da invenção incluem anticorpos anti-CD40 com aminoácidos, que foram mudados por eliminação, inserção ou substituição de aminoácido, todavia, não têm mais do que 1, 2, 3, 4 ou 5 eliminações, inserções ou substituições de aminoácidos nas regiões de cadeia pesada ou leve descritas acima. Em uma modalidade específica, tais mudanças de aminoácido aparecem somente dentro da estrutura e/ou regiões constantes, e as regiões de CDR são 100% idênticas às regiões de cadeias pesadas CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NO: 3, 4 e 5, e às regiões de cadeias leves CDR1, CDR2 e CDR3 de SEQ ID NO: 6, 7, e 8, respectivamente. Em uma ou mais modalidades específicas, as mudanças que foram feitas são somente substituições de aminoácidos conservadoras fora das regiões de CDR.

[00131] Substituições de aminoácidos conservadoras são umas em que o resíduo de aminoácido é substituído por um resíduo de aminoácido que tem uma cadeia lateral similar. Famílias de resíduos de aminoácido tendo cadeias laterais similares foram definidas na técnica. Essas famílias incluem aminoácidos com cadeias laterias básicas (por exemplo, lisina, arginina, histidina), cadeias laterais acídicas (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais polares não carregadas (por exemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína, triptofano), cadeias laterais não polares (por exemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina), cadeias laterias beta ramificadas (por exemplo, treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina). Desse modo, um ou mais resíduos de aminoácido fora das regiões de CDR de um anticorpo anti-CD40, podem ser substituídos com outros resíduos de aminoácido da mesma família de cadeia lateral, e o anticorpo alterado pode ser testado por função retida, em particular, as mesmas propriedades de ligação para CD40.

[00132] Anticorpos podem tipicamente ser glicosilados. Glicanos N- ligados acoplados ao domínio CH2 de uma cadeia pesada, por exemplo, podem influenciar a ligação de C1q e FcR, e anticorpos glicosilados (por exemplo, compreendendo uma mutação de N297A) podem ter afinidade mais baixa ou diferente para esses receptores. A estrutura de glicano pode também afetar a atividade, por exemplo, diferenças na morte de célula mediada por complemento pode ser vista dependendo do número de açúcares de galactose (0, 1 ou 2) no terminal de uma cadeiabiantenária de glicano. Um glicano de anticorpo preferivelmente não leva a uma resposta imunogênica humana depois da administração.

[00133] Outra modificação dos anticorpos anti-CD40 aqui, que é considerada pela invenção, é peguilação. Um anticorpo pode ser peguilado para, por exemplo, aumentar a média de vida biológica (por exemplo, soro) do anticorpo. Para peguilar um anticorpo, o anticorpo, ou fragmento do mesmo, tipicamente pode ser reagido com polietileno glicol (PEG), tal como um éster reativo ou derivado de aldeído de PEG, sob condições em que um ou mais grupos PEG se tornam acoplados ao anticorpo ou fragmento do anticorpo. A peguilação pode ser realizada por uma reação de acilação, ou uma reação de alquilação com uma molécula de PEG reativa (ou um polímero solúvel na água reativo análogo).

[00134] Como usado aqui, o termo "polietileno glicol" é destinado a abranger qualquer uma das formas de PEG que foram usadas para derivatizar outras proteínas, tais como polietileno glicol mono (C1-C10) alcoxi- ou ariloxi-polietileno glicol ou polietileno glicol-maleimida. Em certas modalidades, o anticorpo a ser peguilado é um anticorpo aglicosilado. Métodos para peguilar proteínas são conhecidos na técnica e podem ser aplicados para os anticorpos da invenção. Ver, por exemplo, a EP 0 154 316 por Nishimura et al. e EP 0 401 384 por Ishikawa et al.

[00135] Qualquer outra modificação pós-traducional natural ou não natural de anticorpos anti-CD40 (por exemplo, mAb1) é ainda considerada como modalidades específicas de anticorpos anti-CD40 que poderiam ser usados para preparar as composições farmacêuticas da invenção.

[00136] Anticorpos podem ser preparados em uma forma livre de produtos com os quais eles seriam naturalmente associados. Componentes contaminantes de um ambiente natural de anticorpo incluem materiais tais como enzimas, hormônios ou outras proteínas de células hospedeiras.

[00137] As várias características e modalidades da presente invenção, referidas em seções e modalidades individuais acima se aplicam, quando apropriado, a outras seções e modalidades, mutatis mutandis. Consequentemente, características especificadas em uma seção ou modalidade podem ser combinadas com características especificadas em outras seções ou modalidades, quando apropriado. EXEMPLOS

Preparando anticorpos anti-CD40

[00138] CHIR-12.12, e mAb1 (N297A CHIR-12.12), mAb2 (D265ACHIR-12.12), e mAb3 (CHIR-12.12 LALA) ligam especificamente para CD40. As Tabelas 1 e 2 abaixo resumem as características da sequência desses anticorpos. Esses anticorpos podem ser produzidos em células hospedeiras de mamífero, tais como uma linha de células CHO transfectada com vetores de expressão carregando sequências de codificação de cadeia leve e pesada sob promotores de expressão apropriados.Tabela 1: Breve descrição das sequências listadas na lista de sequências da Tabela 2

Exemplos de formulações

[00139] Uma formulação liofilizada ou líquida, de concentração alta de mAb1, foi desejada e assim os estudos da formulação foram realizados. Uma formulação liofilizada compreendendo um açúcar, um agente de tamponamento e um tensoativo foi estável e pode manter altas concentrações de anticorpo depois da reconstituição.

[00140] Cinco formulações (F1, F2, F3, F4 e F5) de mAb1 tiveram a estabilidade avaliada. F1 era uma formulação líquida a 50 mg/mL mAb1 de pH 6,0. As formulações F2, F3, F4, e F5 tinham, antes da liofilização, 50 mg/vial mAb1. As formulações F2, F3, F4 e F5 tinham, antes da liofilisação, 50 mg/ml mAb1 em pH 6,0. As formulações F2, F3, F4 e F5 tinham um volume cheio de 3,6 ml. As cinco formulações incluiram tampão, açúcar, tensoativo e aminoácidos livres como listado na Tabela 3:Tabela 3: Exemplos de formulações

[00141] Os liofilisatos F2, F3, F4, e F5 foram reconstituídos com WFI (1,0 ml) para dar um volume reconstituído de 1,2 ml (1/3 do volume aquoso original). As composições reconstituídas eram como listado na Tabela 4: Tabela 4: Exemplos de formulações

[00142] O ciclo de liofilisação usado é reportado na Tabela 5.Tabela 5: Os parâmetros do ciclo de liofilisação

a A pressão da câmara foi controlada usando nitrogênio filtrado estéril. A pressão foi determinada por instrumentos baseados nas medições da capacitância.

[00143] As cinco formulações foram testadas por estabilidade em vários pontos do tempo depois da formulação/reconstituição como listado abaixo.

[00144] Exclusão de tamanho-Cromatografia Líquida de Pressão Alta (SEC-HPLC) foi usado para avaliar a quantidade de mAb1 em cada formulação no tempo da formulação (T0), 4 semanas (25oC), 4 semanas (40oC), 6 meses (2-8oC), 6 meses (25oC) e 6 meses (40oC). Aquantidade de anticorpos é expressa como uma percentagem da quantidade de partida, como listado na Tabela 6. A formulação F1 permanece perto de 50 mg/ml ± 5 mg/ml (100% ± 10%), as formulações F2, F3, F4 e F5 permanecem perto de 150 mg/ml ± 15 mg/ml (100% ± 10%).Tabela 6: Quantidade de anticorpos de SEC-HPLC

[00145] A potência do anticorpo mAb1 em cada formulação foi medida pelo ensaio ELISA a T0, 4 semanas (25oC), 4 semanas (40oC), 6 meses (2-8oC), 6 meses (25oC) e 6 meses (40oC). Os resultados, expressos como uma percentagem da potência de partida (100%) estão listados na Tabela 7. A potência da formulação F1 diminui com a progressão do tempo e aumento de temperatura; depois de 6m a 40°C descobriu-se que a potência era de 79%. O valor mais baixo medido foi 85% para F4 (6m a 25°C) e 86% para F3 (6m a 40°C)Tabela 7: Potência de anticorpo como medido em ELISA

[00146] A estabilidade das formulações foi avaliada por % de impurezas, como medido por exclusão de tamanho-Cromatografia Líquida de Pressão Alta (SEC-HPLC) e Dispersão de Luz Dinâmica (DLS). Os resultados são mostrados nas Tabelas 8 e 9.Tabela 8: Resultados da agregação de produtos de SEC-HPLC

Tabela 9: Partículas pequenas; resultados para Índice dePolidistribuição (PDI) de Dispersão de Luz Dinâmica

[00147] A formulação F1 mostrou um aumento de produtos de agregação com aumento de temperatura e tempo. Para as formulações F2 a F5 a adição de arginina (F2 e F3) reduziu ligeiramente o nível de agregação; e a sacarose (F3 e F5) foi superior a trealose.

[00148] Produtos de agregação foram também avaliados medindo a turvação. A formulação F1 mostrou um aumento de turvação com aumento na temperatura e com aumento em tempo. As formulações F2 a F5 mostraram valores de turvação ligeiramente aumentados para formulações contendo arginina (F2 e F3).Tabela 10: Medidas de turvação (unidades de absorção)

[00149] A estabilidade das formulações foi avalida por % de produtos de degradação, como SEC-HPLC medido. Com as formulações F2 a F5 a adição de arginina ligeiramente reduziu a degradação. Os resultados são mostrados na Tabela 11.Tabela 11: Resultados de produtos de degradação de SEC-HPLC

[00150] As quatro formulações liofilizadas F2, F3, F4, e F5 foram avaliadas por clareza visual depois da reconstituição. Os resultados estão apresentados na Tabela 12.Tabela 12: Clareza visual

[00151] As propriedades físico-químicas das formulações foram avaliadas; os resultados são apresentados na Tabela 13. Os valores de viscosidade são valores das formulações tendo 50 mg/ml de anticorpo antes da liofilisação. Os valores de osmolalidade correspondem às composições reconstituídas tendo 150 mg/ml de anticorpo.Tabela 13: Propriedades físico-químicas

Conclusões

[00152] No total, as formulações testadas mostram bons resultados. Os bioensaios (SEC e ELISA) mostraram que as formulações são comparáveis. Agregados solúveis foram lilgeiramente reduzidos na presença de arginina e foram ligeiramente menores para a sacarose, contendo formulações comparadas para trealose contendo formulações. A turvação foi ligeiramente aumentada na presença de arginina; não houve diferença entre trealose ou sacarose contendo formulações. A degradação foi reduzida na presença de arginina. Com relação às propriedades físico-químicas de pH, viscosidade, teor de umidade residual e aspectos visuais, foram comparáveis para todas as formulações. A osmolalidade foi >300 mOsm/kg para todas as formulações, e foi ainda mais alta na presença de arginina-HCl (F2 e F3). É desejável ter uma formulação que é isotônica para plasma (290 mOsm/kg), ou tão perto desse valor quanto possível. As formulações tendo sacarose (F3 e F5) foram consideradas preferíveis para aquelas compreendendo trealose. Embora alguns efeitos benéficos sobre a degradação tenham sido vistos com arginina (F3), a osmolalidade mais baixa da formulação F5 foi considerada ser um fator mais importante. A formulação F5 foi considerada como sendo a formulação mais ideal.

Claims (11)

1. Composição farmacêutica aquosa apresentando um pH de 6,0, caracterizada pelo fato de que compreende:(i) um anticorpo anti-CD40 em que o anticorpo apresenta uma concentração de 150 mg/mL, e em que o dito anticorpo anti-CD40 inclui CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada com SEQ ID NOs 3, 4 e 5, respectivamente, e CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve com SEQ ID NOs: 6, 7 e 8,(ii) 270 mM de sacarose como estabilizante,(iii) 30 mM de histidina como agente de tamponamento,(iv) 20 a 0,06% de polissorbato como surfactante.

2. Composição farmacêutica aquosa, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-CD40 compreende um domínio VH com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 e um domínio VL com a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 2.

3. Composição farmacêutica aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-CD40 compreende uma região de cadeia pesada de SEQ ID NO: 9 e uma região de cadeia leve de SEQ ID NO: 10.

4. Composição farmacêutica aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-CD40 compreende uma região de cadeia pesada de SEQ ID NO: 13 e uma região de cadeia leve de SEQ ID NO: 14.

5. Composição farmacêutica aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-CD40 compreende uma região de cadeia pesada de SEQ ID NO: 17 e uma região de cadeia leve de SEQ ID NO: 18.

6. Dispositivo de distribuição, caracterizado pelo fato de que inclui a composição farmacêutica aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5.

7. Dispositivo de distribuição, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que é uma seringa pré-cheia.

8. Composição farmacêutica aquosa, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de uma doença ou distúrbio que é mediado por CD40.

9. Composição farmacêutica aquosa, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de doenças autoimunes.

10. Composição farmacêutica aquosa, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de esclerose múltipla, lúpus eritematoso sistêmico, nefrite lúpica, síndrome de Sjogren, síndrome de Sjogren, artrite reumatóide, pênfigo vulgar ou miastenia grave.

11. Composição farmacêutica aquosa, de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de rejeição de transplante ou doença de enxerto contra hospedeiro.