MX2014013434A

MX2014013434A - Formulaciones liofilizadas y acuosas de anticuerpo anti-cd40.

Info

Publication number: MX2014013434A
Application number: MX2014013434A
Authority: MX
Inventors: Claudia Mueller; Matthias Willmann
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2012-05-04
Filing date: 2013-05-02
Publication date: 2015-05-11
Also published as: HUE048895T2; PT2844286T; PL2844286T3; EA201492021A1; JP6007316B2; TW201347791A; JP2015522524A; EP2844286B1; MA37471A1; AU2016204371B2; US20190151450A1; AU2013255457A1; KR20150008892A; US20150086559A1; KR101782203B1; US20140004131A1; CL2014002823A1; US11612659B2; EP3693016A1; WO2013164789A3

Abstract

Se formulan anticuerpos anti-CD40 como una formulación liofilizada o liquida. Los liofilizados se pueden reconstituir para dar una solución con una alta concentración del ingrediente activo de anticuerpo para suministrarse a un paciente sin altos niveles de aglomeración de anticuerpos. El liofilizado se puede reconstituir con un reconstituyente acuoso para proporcionar una composición acuosa en la cual el anticuerpo tiene una concentración de cuando menos 50 miligramos/mililitro. La composición farmacéutica liofilizada o acuosa puede incluir uno o más de un azúcar, un agente regulador del pH, un tensoactivo, y/o un aminoácido libre.

Description

FORMULACIONES LIOFILIZADAS Y ACUOSAS DE ANTICUERPO ANTI- CD40 CAMPO TÉCNICO La presente invención se refiere a una formulación farmaceutica de un anticuerpo contra CD40, un proceso para la preparación de la misma y usos de la formulación.

ANTECEDENTES A pesar de la disponibilidad de varios tratamientos inmunosupresores para enfermedades autommunes, sigue existiendo una gran necesidad insatisfecha de fármacos más eficaces y seguros en una gran parte de la población de pacientes. Por ejemplo, a pesar de la eficacia reportada de terapias de agotamiento/inhibición de células B como rituximab y belimumab en artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, síndrome de Sjógren, y esclerosis múltiple, estas terapias sólo son eficaces en una parte de los individuos enfermos, y con Rituximab, con un consiguiente riesgo de leucoencefalopatía multifocal progresiva. Además, varios otros tipos de leucocitos a menudo están involucrados en la patología de estas enfermedades autoinmunes, tales como macrófagos, células dendríticas y células T; por lo tanto, la intervención terapéutica centrada en tipos celulares adicionales o rutas inmunológicas clave que inhiben su función podría proporcionar un beneficio. Teniendo en cuenta las múltiples funciones inmunológicamente relevantes de CD40-CD154 en la activación y función de estos tipos de células, es probable que un anticuerpo anti-CD40 confiera algún beneficio terapéutico a los pacientes que padecen las enfermedades autommunes descritas anteriormente, más allá del que actualmente es proporcionado por las terapias actuales. Además, el papel central de las interacciones CD40-CD154 en trastornos intestinales inflamatorios, tales como la enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa, y los vínculos mecanísticos de la ruta de CD40 con la patología en trastornos más raros tales como la vasculitis autoinmune, pénfigo vulgar, y púrpura trombocitopénica idiopática (ITP), también destacan el potencial de los anticuerpos anti-CD40 en estas indicaciones.

Los inmunosupresores actualmente disponibles, utilizados después del trasplante de órganos sólidos, proporcionan una excelente eficacia a corto plazo. Se observan rechazos agudos dentro del periodo de asimilación en un 5% a 20% de los receptores (en función del órgano, la población de pacientes, y el régimen), y la relación de injertos perdidos a rechazo agudo en el periodo de asimilación es inferior al 5% en cualquier contexto. En la actualidad, la necesidad no satisfecha clave es la tolerabilidad de la inmunosupresión con supervivencia del paciente y del injerto a largo plazo. Después del trasplante renal, 33% de los pacientes mueren y/o pierden su injerto a los 5 años; la edad media de fallecimiento del paciente con trasplante es de 58 años. Los inhibidores de la calcineurina (ICN) siguen siendo el pilar del tratamiento inmunosupresor para la gran mayoría de los pacientes con trasplante.

Mientras que la nefrotoxicidad y la morbilidad cardiovascular asociada con ICN es una de las causas de la nefropatía crónica de alomjerto, así como la muerte del paciente con un injerto funcional, la inmunosupresión primaria alternativa no ha sido capaz de sustituir los ICN. En general, todavía hay un margen de mejora en la inmunosupresión de trasplante a largo plazo. El daño inmunológico mediado por células B de los riñones trasplantados puede contribuir a resultados pobres a largo plazo, y la comunidad médica reconoce cada vez más la necesidad de nuevos agentes para actuar sobre el rechazo de células B.

Los anticuerpos contra CD40 se conocen en la téenica. El Chir12.12 es un anticuerpo anti-CD40 no agonista totalmente humanizado (IgG 1 , kappa) que bloquea la activación de leucocitos mediada por CD154 (también conocido como ligando de CD40; CD40L) y puede mediar la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC) de los leucocitos humanos y linfomas de células B in vitro (Véase el documento WO 2006/073443). WO 2005/044306 describe anticuerpos antagonistas anti-CD40, incluyendo Chir12.12 para su uso en particular en el tratamiento de trastornos autoinmunes e inflamatorios. Además, Chirl 2.12 es eficaz para retrasar el rechazo del trasplante de riñón cuando se administra como monoterapia en Macaca fascicularis (monos cynomolgus) [Li et al. (2008) Transplantatiorr, 86 (1 ) : 10- 15] . Sin embargo, el Chir12.12 también puede mediar el agotamiento de las células B periféricas en primates no humanos (PNHs).

Se predice que los anticuerpos monoclonales anti-CD40 con actividad ADCC silenciada tienen un perfil de seguridad mejorado en relación con los anticuerpos anti-CD40 precursores, y en particular pueden ser más adecuados para indicaciones no oncológicas, tales como las enfermedades autommunes y el uso en un contexto de trasplante. El solicitante ha desarrollado tres anticuerpos anti-CD40 silenciosos con base en el anticuerpo Ch ir 12.12. Estos anticuerpos, en lo sucesivo designados mAb1 , mAb2 y mAb3, se caracterizan por ciertas mutaciones de aminoácidos en la región Fe que silencian la actividad ADCC.

El mAb1 comprende una mutación N297A en la secuencia de aminoácidos de cadena pesada del anticuerpo. El anticuerpo comprende las CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8, respectivamente. El mAb1 comprende un dominio VH con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 , y un dominio VL con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. El mAb1 comprende la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de longitud completa de SEQ ID NO: 9 y la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de longitud completa de SEQ ID NO: 10.

El mAb2 comprende una mutación D265A en la secuencia de aminoácidos de cadena pesada del anticuerpo. El anticuerpo comprende las CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8, respectivamente. El mAb2 comprende un dominio VH con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 , y un dominio VL con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. El mAb2 comprende la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de longitud completa de SEQ ID NO: 13 y la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de longitud completa de SEQ ID NO: 14.

El mAb3 comprende una mutación L234A, L235A (LALA) en la secuencia de aminoácidos de cadena pesada del anticuerpo. El anticuerpo comprende las CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8, respectivamente. El mAb3 comprende un dominio VH con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 , y un dominio VL con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. El mAb3 comprende la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de longitud completa de SEQ ID NO: 17 y la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de longitud completa de SEQ ID NO: 18.

Las formulaciones con alta concentración de anticuerpo pueden tener una vida útil corta y los anticuerpos formulados pueden perder su actividad biológica como consecuencia de la inestabilidades químicas y físicas durante el almacenamiento. Entre estas, la agregación, desamidación y oxidación son conocidas como las causas más comunes de degradación de anticuerpos. En particular, la agregación puede conducir potencialmente a una mayor respuesta inmune en los pacientes, lo que conduce a problemas de seguridad. Por lo tanto, ésta debe minimizarse o evitarse.

Un objeto de la invención es proporcionar formulaciones nuevas y mejoradas de anticuerpos anti-CD40, y, en particular, formulaciones con alta concentración de anticuerpos anti-CD40 y baja agregación de anticuerpos.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Los anticuerpos terapeuticos se formulan típicamente ya sea en forma acuosa lista para la administración parenteral, o como liofilizados para la reconstitución con un diluyente adecuado antes de la administración. Según la invención, un anticuerpo anti-CD40 puede formularse como un liofilizado, o como una composición acuosa, por ejemplo en jeringas precargadas. La formulación adecuada puede proporcionar una composición farmacéutica acuosa o un liofilizado que puede reconstituirse para proporcionar una solución con una alta concentración del ingrediente activo de anticuerpo y baja agregación de anticuerpo para suministro a un paciente. Las altas concentraciones de anticuerpo son útiles ya que reducen la cantidad de material que debe ser suministrado a un paciente. Volúmenes reducidos de dosificación minimizan el tiempo necesario para suministrar una dosis fija al paciente. Las composiciones acuosas de la invención con alta concentración de anticuerpos anti-CD40 son particularmente adecuadas para la administración subcutánea.

Así, la invención proporciona una composición farmacéutica acuosa adecuada para su administración parenteral en un sujeto, por ejemplo, para administración subcutánea, que comprende un anticuerpo antí-CD40.

Las siguientes modalidades específicas de la invención se describen según la numeración siguiente: 1. Una composición farmaceutica acuosa adecuada para su administración subcutánea en un sujeto, que comprende un anticuerpo anti-CD40 en donde el anticuerpo tiene una concentración de al menos 50 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye: (i) una o más CDRs de cadena pesada seleccionadas entre el grupo que consiste en SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, y/o (ii) una o más CDR de cadena ligera seleccionadas del grupo constituido por SEQ ID NOs: 6, 7 y 8. 2. La composición farmacéutica acuosa adecuada para su administración subcutánea en un sujeto, según la modalidad 1 , en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8. 3. La composición farmacéutica acuosa de la modalidad 1 o 2, en donde el anticuerpo anti-CD40 comprende un dominio VH con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y un dominio VL con la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2. 4. La composición farmacéutica acuosa de la modalidad 1 , 2 o 3, en donde el anticuerpo anti-CD40 comprende una región de cadena pesada de SEQ ID NO: 9, y una región de cadena ligera de SEQ ID NO: 10, o una región de la cadena pesada de SEQ ID NO: 13 y una región de cadena ligera de SEQ ID NO: 14, o una región de cadena pesada de SEQ ID NO: 17 y una región de cadena ligera de SEQ ID NO: 18. 5. La composición farmacéutica acuosa de cualquiera de las modalidades 1 a 4, en donde menos del 5% del anticuerpo anti-CD40 está agregado o degradado. 6. La composición farmacéutica acuosa de cualquiera de las modalidades 1 a 5, que comprende uno o más de los siguientes componentes seleccionados de entre el grupo que consiste en: un estabilizador, un agente amortiguador, y un agente tensoactivo. 7. La composición farmacéutica acuosa de la modalidad 6, en donde el estabilizador es un azúcar. 8. La composición farmacéutica acuosa de la modalidad 6 o 7, que comprende: un azúcar, un agente amortiguador, y un agente tensoactivo. 9. La composición farmacéutica acuosa de la modalidad 6 o 7, que comprende además un aminoácido libre. 10. La composición farmacéutica acuosa de las modalidades 7 a 9, que comprende sacarosa como azúcar. 11. La composición farmacéutica acuosa de la modalidad 10, que comprende sacarosa a 200-300 mM. 12. La composición farmacéutica acuosa de las modalidades 6 a 11 , que comprende un amortiguador de histidina como agente amortiguador. 13. La composición farmacéutica acuosa de la modalidad 12, que comprende amortiguador de histidina a 25-35 mM. 14. La composición farmacéutica acuosa de las modalidades 6 a 13, que comprende polisorbato 20 como agente tensoactivo. 15. La composición farmacéutica acuosa de la modalidad 14, que comprende polisorbato 20 al 0.01 % - 0.2%. 16. La composición farmaceutica acuosa de la modalidad 9, que comprende además arginina y/o metionina como aminoácido libre. 17. La composición farmacéutica acuosa de la modalidad 16, que comprende arginina a 40-80 mM. 18. La composición farmacéutica acuosa de cualquier modalidad anterior, que comprende sacarosa, un amortiguador de histidina, polisorbato 20 y arginina. 19. La composición farmacéutica acuosa de cualquier modalidad anterior, que comprende sacarosa, un amortiguador de histidina, polisorbato 20 y metionina. 20. La composición farmacéutica acuosa de cualquier modalidad anterior, que comprende sacarosa, un amortiguador de histidina, polisorbato 20, arginina y metionina. 21. Un liofilizado adecuado para preparar la composición farmacéutica acuosa de cualquiera de las modalidades anteriores. 22. Un liofilizado según la modalidad 21 , que comprende sacarosa, un amortiguador de histidina y polisorbato 20. 23. Un método para preparar un liofilizado, que comprende los pasos de: (i) preparar una solución acuosa que comprende un anticuerpo anti-CD40, un azúcar, un agente amortiguador, un agente tensoactivo y, opcionalmente, un aminoácido libre, y (ii) liofilizar la solución acuosa. 24. Un dispositivo de suministro que incluye la composición farmacéutica acuosa de una cualquiera de las modalidades 1 -20. 25. Una jeringa precargada que incluye la composición farmacéutica acuosa de cualquiera de las formas de las modalidades 1 -20. 26. Un método para suministrar un anticuerpo monoclonal anti-CD40 a un mamífero, que comprende el paso de administrar al paciente de una composición farmacéutica de cualquiera de las modalidades 1 -20. 27. La composición de una cualquiera de las modalidades 1 -20, para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno que es mediado por CD40. 28. La composición de la modalidad 27, para el tratamiento de enfermedades autommunes. 29. La composición de la modalidad 28, para el tratamiento de artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, o pénfigo vulgar. 30. La composición farmacéutica acuosa de cualquiera de las modalidades 1 -20 en la que el anticuerpo tiene una concentración de al menos 50 mg/ml, al menos 100 mg/ml, al menos 150 mg/ml, al menos 200 mg/ml, al menos 250 mg/ml, o al menos 300 mg/ml.

La invención también proporciona una composición farmacéutica acuosa que comprende: un anticuerpo monoclonal anti-CD40 como se describió anteriormente, por ejemplo mAb1 , mAb2 o mAb3, especialmente mAb1 ; un estabilizador; un agente amortiguador, y un agente tensoactivo. La composición también incluye preferiblemente un aminoácido libre.

La invención también proporciona un liofilizado que comprende: un anticuerpo monoclonal anti-CD40 como se describió anteriormente, por ejemplo mAb1 , mAb2 o mAb3, especialmente mAb1 ; un azúcar, un agente amortiguador, y un agente tensoactivo. El liofilizado también incluye preferiblemente un aminoácido libre.

La invención también proporciona un liofilizado que comprende un anticuerpo monoclonal anti-CD40 como se describió anteriormente, por ejemplo mAb1 , mAb2 o mAb3, especialmente mAb1 ; en donde el liofilizado se puede reconstituir con un reconstituyente acuoso para proporcionar una composición acuosa en la que el anticuerpo tiene una concentración de al menos 50 mg/ml, 100 mg/ml, 150 mg/ml, 200 mg/ml, 250 mg/ml, o 300 mg/ml, después de la reconstitución en una solución acuosa.

La invención también proporciona una composición farmacéutica acuosa que comprende una alta concentración de un anticuerpo monoclonal anti-CD40 como se describió anteriormente, por ejemplo mAb1 , mAb2 o mAb3, especialmente mAb1 ; en donde menos de 5%, 4%, 3%, 2% o 1 % del anticuerpo anti-CD40 está agregado o degradado.

La invención también proporciona un procedimiento para preparar un liofilizado, que comprende los pasos de: (i) preparar una solución acuosa que comprende un anticuerpo monoclonal anti-CD40, un azúcar, un agente amortiguador, un agente tensoactivo, y opcionalmente un aminoácido libre, y (ii) liofilizar la solución acuosa.

La invención también proporciona un procedimiento para preparar una composición farmacéutica, que comprende el paso de mezclar un liofilizado con un reconstituyente acuoso, en donde el liofilizado comprende un anticuerpo monoclonal anti-CD40, un azúcar, un agente amortiguador, un agente tensoactivo y, opcionalmente, un aminoácido libre.

Más específicamente, la invención proporciona una formulación liofilizada preparada por liofilización de una formulación acuosa que tiene un pH de 5.0-7.0 y que comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40 en donde el anticuerpo tiene una concentración de 20-150 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs. 6, 7 y 8; (ii) un estabilizador; (iii) un agente amortiguador; (iv) un agente tensoactivo; y opcionalmente (v) un aminoácido.

En una modalidad, dicha formulación se prepara de una formulación acuosa que tiene un pH de 5.0-7.0 y que comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de 20-150 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) sacarosa o trehalosa como estabilizador; (iii) histidina como agente amortiguador; (iv) polisorbato 20 como agente tensoactivo; y opcionalmente (v) un aminoácido seleccionado de arginina, metionina y glicina.

En una modalidad, dicha formulación liofilizada se prepara de una formulación acuosa que tiene un pH de 5.0-7.0 y que comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de 20-150 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) sacarosa o trehalosa a 3-300 mM como estabilizador; (iii) histidina a 1-60 mM como agente amortiguador; (iv) polisorbato 20 hasta 0.2% como agente tensoactivo; y opcionalmente (v) arginina, metionina o glicina a 2-80 mM.

En una modalidad, dicha formulación liofilizada se prepara de una formulación acuosa que tiene un pH de 6.0 y que comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de 50 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) sacarosa a 90 mM como estabilizador; (iii) histidina a 10 mM como agente amortiguador; (iv) polisorbato 20 al 0.02% como agente tensoactivo.

En una modalidad, dicha formulación liofilizada se prepara de una formulación acuosa que tiene un pH de 6.0 y que comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de 50 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) sacarosa a 90 mM como estabilizador, (iii) histidina a 10 mM como agente amortiguador; (iv) polisorbato 20 al 0.02% como agente tensoactivo; y (v) arginina a 17 mM.

En una modalidad, dicha formulación liof i I izada se prepara de una formulación acuosa que tiene un pH de 6.0 y que comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de 150 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) sacarosa a 270 mM como estabilizador, (iii) histidina a 30 mM como agente amortiguador; y (iv) polisorbato 20 al 0.06% como agente tensoactivo.

La invención tambien proporciona una composición farmacéutica acuosa obtenida por reconstitución de una formulación liofilizada como se describe anteriormente, en donde el factor de la reconstitución está entre 1 :0.5 y 1 :6.

En una modalidad, el factor de reconstitución es de 1 :3.

La invención también proporciona una composición farmacéutica acuosa que tiene un pH de 5.0 a 7.0, que comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de al menos 50 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) un estabilizador; (iii) un agente amortiguador; (iv) un agente tensoactivo; y opcionalmente (v) un aminoácido.

En una modalidad, la composición farmacéutica acuosa que tiene un pH de 5.0 a 7.0 comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de al menos 50 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) sacarosa o trehalosa como estabilizador; (iii) histidina como agente amortiguador; (iv) polisorbato 20 como agente tensoactivo; y opcionalmente (v) un aminoácido seleccionado de arginina, metionina o glicina.

En una modalidad, la composición farmacéutica acuosa que tiene un pH de 5.0 a 7.0 comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de al menos 50 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti- CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) sacarosa a 200-300 mM como estabilizador; (iii) histidina a 25-35 mM como agente amortiguador; (iv) polisorbato 20 hasta 0.2% como agente tensoactivo; y opcionalmente (v) arginina, metionina o glicina a 10-80 mM.

En una modalidad, la composición farmacéutica acuosa tiene un pH de 6.0 y comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de al menos 50 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) sacarosa a 270 mM como estabilizador; (iii) histidina a 30 mM como agente amortiguador; y (iv) polisorbato 20 al 0.06% como agente tensoactivo.

En una modalidad, la composición farmacéutica acuosa tiene un pH de 6.0 y comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de al menos 50 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (¡i) sacarosa a 270 mM como estabilizador; (iii) histidina a 30 mM como agente amortiguador; (iv) polisorbato 20 al 0.06% como agente tensoactivo; y (v) arginina a 51 mM.

En una modalidad, la composición farmaceutica acuosa de la invención tiene una concentración de anticuerpo anti-CD40 de 150 mg/ml.

En una modalidad, la formulación liofilizada o la composición farmacéutica acuosa de la invención comprende un dominio VH que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y un dominio VL que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2.

En una modalidad, la formulación liofilizada o la composición farmacéutica acuosa de la invención comprende un anticuerpo anti-CD40 que comprende una región de cadena pesada de la SEQ ID NO: 9 y una región de cadena ligera de SEQ ID NO: 10.

En una modalidad, la formulación liofilizada o la composición farmacéutica acuosa de la invención comprende el anticuerpo anti-CD40 C h ir 12.12 que tiene una mutación N297A.

En una modalidad, la formulación liofilizada o la composición farmacéutica acuosa de la invención comprende un anticuerpo anti-CD40 que comprende una región de cadena pesada de SEQ ID NO: 13 y una región de cadena ligera de la SEQ ID NO: 14.

En una modalidad, la formulación liofilizada o la composición farmacéutica acuosa de la invención comprende el anticuerpo anti-CD40 Chir12.12 que tiene una mutación D265A.

En una modalidad, la formulación liofilizada o la composición farmaceutica acuosa de la invención comprende un anticuerpo anti-CD40 que comprende una región de cadena pesada de la SEQ ID NO: 17 y una región de cadena ligera de la SEQ ID NO: 18.

En una modalidad, la formulación liofilizada o la composición farmacéutica acuosa de la invención comprende el anticuerpo anti-CD40 Chir12.12 que tiene una mutación L234A L235A.

La invención también comprende un dispositivo de suministro que incluye la composición farmacéutica acuosa de la invención.

La invención también comprende una jeringa precargada que incluye la composición farmacéutica acuosa de la invención.

La invención también comprende un método para el suministro de un anticuerpo anti-CD40 a un mamífero, que comprende el paso de administrar al paciente una composición farmacéutica acuosa de la invención.

La invención también comprende una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa según la invención para utilizarse en el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por CD40.

La invención también comprende una formulación liofilizada o composición farmacéutica acuosa según la invención para uso en el tratamiento de enfermedades autommunes.

La invención también proporciona una formulación liofilizada o una composición farmacéutica acuosa según la invención para el tratamiento de esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, síndrome de Sjogren, artritis reumatoide, rechazo de trasplante, enfermedad de injerto contra hospedero, pénfigo vulgar. o Composiciones farmacéuticas acuosas con alta concentración de anticuerpos anti-CD40 La invención se basa, al menos en parte, en las propiedades de la formulación de anticuerpos tales como mAb1 , que retienen notable estabilidad y propiedades bioactivas, cuando se formulan en una concentración alta, ya sea como una composición líquida (acuosa) o liof ilizada.

Como se usa en la presente, una composición farmacéutica "acuosa" es una composición adecuada para uso farmacéutico, en donde el vehículo acuoso es agua destilada. Una composición adecuada para uso farmacéutico puede ser estéril, homogénea y/o isotónica. Las composiciones farmacéuticas acuosas se pueden preparar ya sea directamente en una forma acuosa, por ejemplo en jeringa precargada lista para su uso (las "formulaciones líquidas") o como un liofilizado para ser reconstituido poco antes de su uso. Tal como se utiliza en la presente, el término "composición farmacéutica acuosa" se refiere a la formulación líquida o formulación liofilizada reconstituida. En ciertas modalidades, las composiciones farmacéuticas acuosas de la invención son adecuadas para la administración parenteral a un sujeto humano. En una modalidad específica, las composiciones farmacéuticas acuosas de la invención son adecuadas para su administración subcutánea.

Como se usa en la presente, la frase "administración parenteral" significa un modo de administración diferente de la administración enteral y tópica, normalmente mediante inyección, e incluye, sin limitación, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardiaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaraenoidea, intraespinal, epidural e inyección e infusión intraesternal.

El uso de anticuerpos como ingredientes activos de productos farmacéuticos está muy extendido ahora, incluyendo los productos HERCEPTIN™ (trastuzumab), RITUXAN™ (rituximab), SYNAGIS™ (palivizumab), etc. Las técnicas para la purificación de anticuerpos terapéuticos a un grado farmacéutico son bien conocidas en la técnica.

La composición normalmente será no pirogénica, por ejemplo que contiene <1 UE (unidad de endotoxina, una medida estándar) por dosis y, preferentemente, <0.1 UE por dosis. La composición preferentemente está libre de gluten.

En modalidades específicas, las composiciones farmacéuticas acuosas de la invención exhiben agregación o degradación de anticuerpos baja o indetectable, con muy poca o ninguna pérdida de la actividad biológica durante la fabricación, preparación, transporte y periodos largos de almacenamiento; la concentración del anticuerpo anti-CD40 es al menos de aproximadamente 50 mg/ml, 100 mg/ml, 150 mg/ml, 200 mg/ml, 250 mg/ml, o 300 mg/ml.

En un aspecto, la invención se refiere a una composición farmacéutica acuosa con alta concentración de anticuerpos anti-CD40.

Se sabe en la técnica que tales composiciones farmacéuticas acuosas de alta de concentración se pueden diluir antes de la inyección, por ejemplo, si son necesarias concentraciones más bajas de anticuerpo para intervenciones terapéuticas específicas, o para tratar a pacientes de peso corporal menor, incluso los niños. Las concentraciones adecuadas pueden ser de 25 mg/ml o 10 mg/ml. Alternativamente, la formulación original puede ser producida con tal concentración más baja.

El término "anticuerpo" como se refiere en la presente incluye anticuerpos completos y cualquier fragmento de unión a antígeno (es decir, "porción de unión a antígeno") o cadenas simples de los mismos. Un "anticuerpo" de origen natural es una glicoproteína que comprende al menos dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro. Cada cadena pesada se compone de una región variable de cadena pesada (abreviada en este documento como VH), y una región constante de cadena pesada. La región constante de cadena pesada se compone de tres o cuatro dominios, dependiendo del isotipo, CH1 , CH2, CH3 y CH4. Cada cadena ligera está compuesta por una región variable de cadena ligera (abreviada en este documento como VL) y una región constante de cadena ligera. La región constante de cadena ligera está compuesta de un dominio, CL. Las regiones VH y VL pueden subdividirse adicionalmente en regiones de hipervariabilidad, denominadas regiones determinantes de complementariedad (CDR), intercaladas con regiones que están más conservadas, denominadas regiones de armazón (FR). Cada VH y VL está compuesta de tres CDRs y cuatro FRs, dispuestas del extremo amino al extremo carboxi en el siguiente orden: FR1 , CDR1 , FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Las regiones variables de las cadenas pesadas y ligeras contienen un dominio de unión que interacciona con un antígeno. Las regiones constantes de los anticuerpos pueden mediar la unión de la inmunoglobulina a los tejidos o factores del hospedero, que incluyen varias células del sistema inmune (por ejemplo, células efectoras) y el primer componente (Clq) del sistema del complemento clásico.

El término "porción de unión a antígeno" de un anticuerpo (o simplemente "porción de antígeno"), tal como se utiliza en la presente, se refiere a la longitud completa o uno o más fragmentos de un anticuerpo que conservan la capacidad de unirse específicamente a un antígeno (por ejemplo, una porción de CD40). Se ha demostrado que la función de unión al antígeno de un anticuerpo puede ser realizada por fragmentos de un anticuerpo de longitud completa. Ejemplos de fragmentos de unión incluidos dentro del término "porción de unión a antígeno" de un anticuerpo incluyen un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste en los dominios VL, VH, CL y CH1 ; un fragmento F(ab)2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab unidos por un puente disulfuro en la región bisagra; un fragmento Fd que consiste de los dominios VH y CH1 ; un fragmento Fv que consiste en los dominios VL y VH de un solo brazo de un anticuerpo; un fragmento dAb (Ward et al., 1989, Nature 341 :544-546), que consiste en un dominio VH; y una región determinante de complementariedad (CDR) aislada.

Además, aunque los dos dominios del fragmento Fv, VL y VH, son codificados por genes separados, pueden unirse usando métodos recombinantes, por medio de un enlazador sintético que permite hacerlos como una cadena sencilla de proteína en la que las regiones VL y VH se aparean para formar moléculas monovalentes (conocidas como Fv de cadena sencilla (scFv); véase, por ejemplo, Bird, et al., 1988, Science 242:423-426: y Huston et al., 1988, Proc. Nati. Acad. Sci. 85:5879-5883). Tales anticuerpos de cadena sencilla también se consideran comprendidos dentro del término "región de unión a antígeno" de un anticuerpo. Estos fragmentos de anticuerpo se obtienen usando téenicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica, y los fragmentos se tamizan por utilidad de la misma manera que los anticuerpos intactos.

Un "anticuerpo aislado", como se utiliza en la presente, se refiere a un anticuerpo que está sustancialmente libre de otros anticuerpos que tienen especificidades antigénicas diferentes, por ejemplo, un anticuerpo aislado que se une específicamente a CD40 humano está sustancialmente libre de anticuerpos que se unen específicamente a antígenos distintos de CD40. Un anticuerpo aislado que se une específicamente a CD40 puede, sin embargo, tener reactividad cruzada con otros antígenos, tales como moléculas CD40 de otras especies. Además, un anticuerpo aislado puede estar sustancialmente libre de otro material celular y/o sustancias químicas.

Los términos "anticuerpo monoclonal" o "composición de anticuerpo monoclonal", tal como se utilizan en la presente, se refieren a una preparación de moléculas de anticuerpo de composición molecular única. Una composición de anticuerpo monoclonal muestra una especificidad de unión y afinidad únicas por un epítopo particular.

El término "anticuerpo humano", como se utiliza en la presente, incluye anticuerpos que tienen regiones variables en las que las regiones de armazón y las CDR se derivan de secuencias de origen humano. Además, si el anticuerpo contiene una región constante, la región constante también se deriva de dichas secuencias humanas, por ejemplo, secuencias de línea germinal humanas, o versiones mutadas de las secuencias de línea germinal humana, o anticuerpos que contienen secuencias de armazón de consenso derivadas del análisis de secuencias de armazón humanas, por ejemplo, como se describe en Knappik et al. (2000. J Mol Biol, 296, 57-86).

Las estructuras y ubicaciones de los dominios variables de inmunoglobulina, por ejemplo, CDRs, se pueden definir usando esquemas de numeración bien conocidos, por ejemplo, el esquema de numeración de Kabat, el esquema de numeración de Chothia, una combinación de Kabat y Chothia (ABM), etc. (véase, por ejemplo, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services (1991), eds. Kabat et al.; Al Lazikani et al., (1997) J. Mol.Bio. 273:927 948). A lo largo de esta especificación, la región determinante de complementariedad ("CDR") se define de acuerdo con la definición de Kabat con la excepción de CDRH1 , que es el tramo de aminoácidos definido por una combinación de las definiciones de Kabat y Chothia para esta CDR.

Los anticuerpos humanos de la invención pueden incluir residuos de aminoácido no codificados por secuencias humanas (por ejemplo, mutaciones introducidas por mutagenesis aleatoria o específica de sitio in vitro, o por mutación somática ¡n vivo). Sin embargo, el término "anticuerpo humano", como se utiliza en la presente, no pretende incluir anticuerpos en los que se han injertado secuencias CDR derivadas de la línea germinal de otra especie de mamífero, tal como un ratón, sobre secuencias de armazón humanas.

El término "anticuerpo monoclonal humano" se refiere a anticuerpos que muestran una especificidad de unión única, que tienen regiones variables en las que tanto las regiones de armazón como las CDR derivan de secuencias humanas.

El término "anticuerpo recombinante humano", como se utiliza en la presente, incluye todos los anticuerpos humanos que se preparan, expresan, crean o aíslan por medios recombinantes, tales como anticuerpos aislados de un animal (por ejemplo, un ratón) que son transgénicos o transcromosomales para los genes de inmunoglobulina humana o un hibridoma preparado de los mismos, anticuerpos aislados de una célula hospedero transformada para expresar el anticuerpo humano, por ejemplo, de un transfectoma, anticuerpos aislados de una biblioteca de anticuerpos humanos combinatoria recombinante, y anticuerpos preparados, expresados, creados o aislados por cualquier otro medio que implica corte y empalme de la totalidad o una porción de un gen de inmunoglobulina humana, secuencias a otras secuencias de ADN. Tales anticuerpos humanos recombinantes tienen regiones variables en las que las regiones de armazón y CDR se derivan de secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. En ciertas modalidades, sin embargo, tales anticuerpos humanos recombinantes se pueden someter a mutagénesis in vitro (o, cuando se utiliza un animal transgénico para las secuencias de Ig humanas, mutagénesis somática in vivo), y por lo tanto las secuencias de aminoácidos de las regiones VH y VL de los anticuerpos recombinantes son secuencias que, aunque se derivan y están relacionadas con las secuencias VH y Vu de línea germinal humana, puede no existir de manera natural dentro del repertorio de línea germinal de anticuerpos humanos in vivo.

Como se usa en este documento, "isotipo" se refiere a la clase de anticuerpo (por ejemplo, IgM, IgA, IgD, IgE e IgG, tal como I g G 1 , lgG2, lgG3 o lgG4) que es proporcionado por los genes de la región constante de cadena pesada.

Las frases "un anticuerpo que reconoce un antígeno" y "un anticuerpo específico para un antígeno" se usan aquí de forma intercambiable con el término "un anticuerpo que se une específicamente a un antígeno".

Como se usa en este documento, un anticuerpo que "se une específicamente al polipéptido CD40" o un "anticuerpo anti-CD40" se refiere a un anticuerpo que se une a un polipéptido CD40 humano de SEQ ID NO: 21 con una KD de 100 nM o menor, 10 nM o menor, 1 nM o menor. Un anticuerpo que "reacciona de forma cruzada con un antígeno distinto de CD40" se refiere a un anticuerpo que se une a ese antígeno con una KD de 0.5 x 10 8 M o menor, 5 x 10 9 M o menor, o 2 x 10 9 M o menor. Un anticuerpo que "no presenta reacción cruzada con un antígeno particular" pretende referirse a un anticuerpo que se une a ese antígeno con una KD de 1.5 x 10 8 M o mayor, o una KD de 5-10 x 10 8 M o 1 x 10 7 M o mayor. En ciertas modalidades, tales anticuerpos que no reaccionan de manera cruzada con el antígeno exhiben unión esencialmente indetectable contra estas proteínas en ensayos de unión estándares.

En una modalidad, una concentración alta de un anticuerpo antí-CD40 en la composición farmacéutica acuosa de la invención es de por lo menos 50 mg/ml. En una modalidad, una concentración alta es de por lo menos 100 mg/ml. En una modalidad, una concentración alta es de por lo menos 150 mg/ml. En una modalidad, una concentración alta es de por lo menos 200 mg/ml. En una modalidad, una concentración alta es de por lo menos 250 mg/ml. En una modalidad, una concentración alta es de por lo menos 300 mg/ml.

En una modalidad, la composición farmacéutica acuosa de la invención comprende entre 50 mg/ml y 300 mg/ml de un anticuerpo anti-CD40, por ejemplo, mAb1.

En una modalidad, la composición farmacéutica acuosa de la invención comprende entre 75 mg/ml y 250 mg/ml de un anticuerpo anti-CD40, por ejemplo, mAb1.

En una modalidad, la composición farmacéutica acuosa de la invención comprende entre 100 mg/ml y 250 mg/ml de un anticuerpo anti-CD40, por ejemplo, mAb1.

En una modalidad, la composición farmacéutica acuosa de la invención comprende entre 100 mg/ml y 200 mg/ml de un anticuerpo anti-CD40, por ejemplo, mAb1.

En una modalidad, la composición farmaceutica acuosa de la invención comprende 150 mg/ml de un anticuerpo anti-CD40, por ejemplo, mAb1.

En una modalidad, la composición farmacéutica acuosa de la invención comprende aproximadamente 50 mg/ml, aproximadamente 60 mg/ml, aproximadamente 70 mg/ml, aproximadamente 80 mg/ml, aproximadamente 90 mg/ml, aproximadamente 100 mg/ml, aproximadamente 110 mg/ml, aproximadamente 120 mg/ml, aproximadamente 130 mg/ml, aproximadamente 140 mg/ml, aproximadamente 150 mg/ml, aproximadamente 160 mg/ml, aproximadamente 170 mg/ml, aproximadamente 180 mg/ml, aproximadamente 190 mg/ml, aproximadamente 200 mg/ml, aproximadamente 210 mg/ml, aproximadamente 220 mg/ml, aproximadamente 230 mg/ml, aproximadamente 240 mg/ml, aproximadamente 250 mg/ml o aproximadamente 300 mg/ml de un anticuerpo anti-CD40, por ejemplo, mAb1.

Además, las composiciones farmacéuticas acuosas son estables de tal manera que, incluso después de un almacenamiento durante 4 semanas a 2-8 °C, se encuentra agregado menos de 5%, 4%, 3%, 2%, 1 %, 0.05% o 0.01 % del total de anticuerpo anti-CD40, medido por SEC-HPLC.

Las composiciones farmacéuticas acuosas pueden incluir, además del anticuerpo anti-CD40, componentes adicionales tales como uno o más de los siguientes: (i) un estabilizador, (ii) un agente amortiguador; (iii) un agente tensoactivo, y (iv) un aminoácido libre. La inclusión de cada uno de dichos componentes adicionales puede dar composiciones con baja agregación del anticuerpo anti-CD40.

Los estabilizadores adecuados para uso con la invención pueden actuar, por ejemplo, como agentes potenciadores de la viscosidad, agentes de carga, agentes solubilizantes, y/o similares. El estabilizador puede ser iónico o no iónico (por ejemplo, azúcares). Como azúcares se incluyen, pero no se limitan a, monosacáridos, por ejemplo, fructosa, maltosa, galactosa, glucosa, D-manosa, sorbosa, y similares; disacáridos, por ejemplo, lactosa, sacarosa, trehalosa, celobiosa, y similares; polisacáridos, por ejemplo, rafinosa, melezitosa, maltodextrinas, dextranos, almidones y similares; y alditoles, tales como manitol, xilitol, maltitol, lactitol, xilitol, sorbitol (glucitol) y similares. Por ejemplo, el azúcar puede ser sacarosa, trehalosa, rafinosa, maltosa, sorbitol o manitol. El azúcar puede ser un alcohol de azúcar o un azúcar amino. La sacarosa es especialmente útil. Como estabilizador iónico se incluyen sales tales como NaCI o componentes de aminoácidos tales como arginina-HCI.

Agentes amortiguadores adecuados para uso con la invención incluyen, pero no se limitan a, sales de ácidos orgánicos tales como sales de ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido glucónico, ácido carbónico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido acético o ácido itálico; Tris, clorhidrato de tometamina, o amortiguador de fosfato. Además, también pueden utilizarse componentes aminoácidos como agentes amortiguadores. Tales componentes aminoácidos incluyen, sin limitación, glicina e histidina. Un amortiguador de histidina es particularmente útil.

Las composiciones farmacéuticas acuosas incluyen tal agente amortiguador o agente de ajuste del pH para proporcionar un control del pH mejorado. En una modalidad, una composición farmacéutica acuosa de la invención tiene un pH entre 5.0 y 8.0, entre 5.5 y 7.5, entre 5.0 y 7.0, entre 6.0 y 8.0, o entre 6.0 y 7.0. En una modalidad específica, una composición farmacéutica acuosa de la invención tiene un pH de aproximadamente 6.0.

Tal como se utiliza en la presente, el término "agente tensoactivo" en la presente se refiere a las sustancias orgánicas que tienen estructuras antipáticas, es decir, están compuestos de grupos de tendencias de solubilidad opuestas, típicamente una cadena de hidrocarburo soluble en aceite y un grupo iónico soluble en agua. Los agentes tensoactivos pueden clasificarse, dependiendo de la carga de la fracción de superficie activa, en aniónicos, catiónicos y agentes dispersantes para diversas composiciones y preparaciones farmacéuticas de materiales biológicos.

Los agentes tensoactivos adecuados para uso con la invención incluyen, pero no se limitan a, agentes tensoactivos no iónicos, agentes tensoactivos iónicos y agentes tensoactivos zwitteriónicos. Los agentes tensoactivos típicos para el uso con la invención incluyen, pero no se limitan a, ésteres de ácidos grasos de sorbitán (por ejemplo monocaprilato de sorbitán, monolaurato de sorbitán, monopalmitato de sorbitán), trioleato de sorbitán, ésteres de ácidos grasos de glicerina (por ejemplo monocaprilato de glicerina, monomiristato de glicerina, monoestearato de glicerina), ésteres de ácidos grasos de poliglicerina (por ejemplo monoestearato de decaglicerilo, diestearato de decaglicerilo, monolinoleato de decaglicerilo), ésteres de ácidos grasos de sorbitán polioxietileno (por ejemplo, monolaurato de sorbitán polioxietileno, monooleato de sorbitán polioxietileno, monoestearato de sorbitán polioxietileno, monopalmitato de sorbitán polioxietileno, trioleato de sorbitán polioxietileno, triestearato de sorbitán polioxietileno), ésteres de ácidos grasos de sorbitol polioxietileno (por ejemplo, tetraestearato de sorbitán polioxietileno, tetraoleato de sorbitol polioxietileno), ésteres de ácidos grasos de glicerina polioxietileno (por ejemplo, monoestearato de glicerilo polioxietileno), ésteres de ácidos grasos de polietilenglicol (por ejemplo diestearato de glicol de polietileno), éteres de alquilo de polioxietileno (por ejemplo éter laurílico de polioxietileno), éteres de alquilo de polioxietileno y polioxipropileno (por ejemplo polioxietileno polioxipropileno glicol, éter propílico de polioxietileno y polioxipropileno, éter cetílico de polioxietileno y polioxipropileno), éteres de alquilfenil polioxietileno (por ejemplo éter de nonilfenilo polioxietileno), aceites de ricino hidrogenados de polioxietileno (por ejemplo aceite de ricino polioxietileno, aceite de ricino hidrogenado polioxietilenado), derivados de polioxietileno de cera de abejas (por ejemplo cera de abejas de sorbitol polioxietileno), derivados de lanolina de polioxietileno (por ejemplo lanolina de polioxietileno), y amidas de ácidos grasos de polioxietileno (por ejemplo amida de ácido esteárico polioxietileno); sulfatos de alquilo de Ci0-C18 (por ejemplo cetil sulfato de sodio, lauril sulfato de sodio, oleil sulfato de sodio), sulfato de éter de alquilo de C10-C 8 de polioxietileno, con un promedio de 2 a 4 moles de unidades de óxido de etileno añadido (por ejemplo lauril sulfato de sodio polioxietileno), y sales de éster de sulfosuccinato de alquilo de C!-C18 (por ejemplo éster de lauril sulfosuccinato de sodio), y agentes tensoactivos naturales tales como lecitina, glicerofosfolípido, esfingofosfolípidos (por ejemplo esfingomielina), y ésteres de sacarosa de ácidos grasos de C12-C18. Una composición puede incluir uno o más de estos agentes tensoactivos. Los agentes tensoactivos preferidos son los ésteres de ácidos grasos de sorbitán polioxietileno, por ejemplo, polisorbato 20, 40, 60 u 80. El polisorbato 80 (Tween 80) es particularmente útil.

Aminoácidos libres adecuados para su uso con la invención incluyen, pero no se limitan a, arginina, Usina, histidina, metionina, ornitina, ¡soleucina, leucina, alanina, glicina, ácido glutámico o ácido aspártico. Se prefiere la inclusión de un aminoácido alcalino, es decir arginina, lisina y/o histidina. Si una composición incluye histidina, entonces esta puede actuar tanto como un agente amortiguador como un aminoácido libre, pero cuando se usa un amortiguador de histidina es típico incluir un aminoácido libre diferente de histidina, por ejemplo, incluir un amortiguador de histidina y lisina. Un aminoácido puede estar presente en su forma D y/o L, pero la forma L es típica. El aminoácido puede estar presente como cualquier sal adecuada, por ejemplo una sal de clorhidrato, tal como arginina-HCI.

Cuando están presentes, los componentes (i) a (iv) estarán a una concentración suficiente para mantener el anticuerpo anti-CD40 en una forma activa y soluble despues de cualquiera de: (i) liofilización y almacenamiento y reconstitución (para liofilizados), o (ii) acondicionamiento en unidades de dosis y almacenamiento (para formulaciones líquidas).

Así, un azúcar puede estar presente en la composición farmacéutica acuosa de la invención, por ejemplo, después de la reconstitución de un liofilizado en agua, a una concentración de entre 3 y 400 mM, por ejemplo 50-380 mM, 100-350 mM, 200-300 mM. Una concentración de sacarosa 270 mM es útil.

Un agente amortiguador puede estar presente en la composición farmacéutica acuosa de la invención, por ejemplo después de la reconstitución de un liofilizado en agua, a una concentración de entre 1 y 60mM, por ejemplo 10-50 mM, 20-40 mM, 25-35 mM. Una concentración de 30 mM de amortiguador de histidina es útil.

Un agente tensoactivo puede estar presente en la composición farmacéutica acuosa de la invención, por ejemplo después de la reconstitución de un liofilizado en agua, a una concentración de hasta 0.2% (en volumen), por ejemplo 0.01 -0.1 %, 0.03-0.08%, 0.04-0.08%.

Una concentración de 0.06% de polisorbato 20 es útil. En algunas modalidades se puede utilizar polisorbato 80.

Un aminoácido libre puede estar presente en la composición farmacéutica acuosa de la invención, por ejemplo después de la reconstitución de un liofilizado en agua, a una concentración de entre 2 y 100mM, por ejemplo 10-80 mM, 20-70 mM, 30-60 mM, 40-60 mM. Una concentración de arginina de 51 mM (por ejemplo, arginina-HCI) o 60 mM de metionina o glicina (por ejemplo, glicina-HCI) es útil.

Una formulación que contiene un amortiguador de histidina, sacarosa y polisorbato 20 ha demostrado ser adecuada para la liofilización del anticuerpo mAb1 a una concentración de al menos 150 mg/ml después de la reconstitución.

En una modalidad, la composición farmacéutica acuosa consiste en mAb1 a 150 mg/ml, histidina a 30 mM, sacarosa a 270 mM y polisorbato 20 al 0.06%.

En una modalidad, la composición farmacéutica acuosa consiste en mAb1 a 150 mg/ml, histidina a 30mM, sacarosa a 270 mM, polisorbato 20 al 0.06% y arginina-HCI a 51 mM.

En una modalidad, la composición farmacéutica acuosa consiste en mAb1 a 150 mg/ml, histidina a 30 mM, sacarosa a 270 mM, polisorbato 20 al 0.06% y glicina-HCI a 60 mM.

En una modalidad, la composición farmacéutica acuosa consiste en 200 mg/ml de mAb1 , histidina a 30 mM, sacarosa a 270 mM, y polisorbato 20 al 0.06%.

En una modalidad, la composición farmacéutica acuosa consiste en mAb1 a 200 mg/ml, histidina a 30 mM, sacarosa a 270 mM, polisorbato 20 al 0.06% y arginina-HCI a 51 mM.

En una modalidad, la composición farmacéutica acuosa consiste en mAb1 a 75 mg/ml, histidina a 30 mM, sacarosa a 270 mM, y polisorbato 20 al 0.06%.

En una modalidad, la composición farmacéutica acuosa consiste en mAb1 a 75 mg/ml, histidina a 30mM, sacarosa a 270 mM, polisorbato 20 al 0.06% y arginina-HCI a 51 mM.

Otros excipientes contemplados, que se pueden utilizar en las composiciones farmacéuticas acuosas de la invención incluyen, por ejemplo, agentes aromatizantes, agentes antimicrobianos, edulcorantes, antioxidantes, agentes antiestéticos, lípidos tales como fosfolípidos o ácidos grasos, esteroides tales como colesterol, proteínas excipientes tales como albúmina de suero (albúmina de suero humano), albúmina humana recombinante, gelatina, caseína, contraiones formadores de sales tales como sodio y similares. Estos y otros excipientes y/o aditivos farmacéuticos conocidos adecuados para uso en las formulaciones de la invención son conocidos en la téenica, por ejemplo, como se anotan en "The Handbook of Pharmaceutical Excipiente”, cuarta edición, Rowe et al., Eds., American Pharmaceuticals Association (2003), y “Remington: the Science and Practice of Pharmacy”, 21 a edición, Gennaro, Ed. Lippincott Williams &Wilkins (2005).

Las composiciones farmacéuticas acuosas de la invención pueden incluir ingredientes activos adicionales además de los anticuerpos anti-CD40. Otros agentes farmacológicos pueden incluir, por ejemplo, los compuestos quimioterapéuticos.

Liofilizados Las técnicas para la liofilización de anticuerpos son bien conocidas en la técnica, p. ej., ver John F. Carpenter y Michael J. Pikal, 1997 ( Pharm . Res. 14, 969-975); Xialin (Charlie) Tang y Michael J. Pikal, 2004 ( Pharm . Res. 21 , 191 -200). Por ejemplo, los productos de anticuerpos monoclonales SYNAGIS™, REMICADE™, RAPTIVA™, SIMULECT™, XOLAIR™ y HERCEPTIN™ se suministran como liofilizados. Estos anticuerpos se reconstituyen a diversas concentraciones finales, p. ej . , SIMULECT ™ se reconstituye a una concentración de 4 mg/ml de anticuerpo; REMICADE™ se reconstituye a una concentración de 10 mg/ml; HERCEPTIN™ a 21 mg/ml; SYNAGIS™ y RAPTIVA™ a 100 mg/ml; y XOLAIR™ a 125 mg/ml. o Preliofilizados, liofilizados y reconstitución acuosa Antes de que un liofilizado pueda administrarse a un paciente debe ser reconstituido con un reconstituyente acuoso. Este paso permite que el anticuerpo y otros componentes en el liofilizado se vuelvan a disolver para proporcionar una solución que es adecuada para su inyección a un paciente.

El volumen de material acuoso usado para la reconstitución dicta la concentración del anticuerpo en una composición farmacéutica resultante. La reconstitución con un volumen de reconstituyente más pequeño que el volumen de preliofilización proporciona una composición que es más concentrada que antes de la liofilización. El factor de reconstitución (volumen de la formulación después de la liofilización : volumen de la formulación antes) puede ser de 1 :0.5 a 1 :6. Un factor de reconstitución de 1 :3 es útil. Como se mencionó anteriormente, los liofilizados de la invención pueden reconstituirse para proporcionar composiciones acuosas con una concentración de anticuerpo anti-CD40 de al menos 50 mg/ml, 100 mg/ml, 150 mg/ml. 200 mg/ml, 250 mg/ml o 300 mg/ml, y el volumen de reconstituyente se selecciona en consecuencia. Si se requiere, la formulación reconstituida puede diluirse antes de la administración a un paciente según sea apropiado para administrar la dosis deseada.

Reconstituyentes típicos para anticuerpos liofilizados incluyen agua estéril o amortiguador, que contiene opcionalmente un conservante. Si el liofilizado incluye un agente amortiguador entonces el reconstituyente puede incluir agente amortiguador adicional (que puede ser el mismo o diferente del agente amortiguador del liofilizado), o en su lugar puede no incluir ningún agente amortiguador (p. ej., WFI (agua para inyección), o solución salina fisiológica).

Cuando están presentes los componentes (i) a (iv), estarán a una concentración de preliofilización suficiente para mantener el anticuerpo anti-CD40 en una forma que sea activa y soluble después del almacenamiento (en condiciones normales) y reconstitución. Los componentes también estarán presentes después de la reconstitución.

Así, un azúcar, tal como sacarosa o trehalosa, puede estar presente antes de la liofilización a una concentración de entre 3 y 300 mM, p. ej. , 15-200 mM, 30-150 mM, 80-100 mM. Una concentración de sacarosa 90 mM es útil. Un agente amortiguador, tal como histidina, puede estar presente antes de la liofilización a una concentración de entre 1 y 60 mM, p. ej., 3-30 mM, 520 mM, 5-15 mM. Una concentración de 10 mM de amortiguador de histidina es útil. Un agente tensoactivo, tal como polisorbato 80 o polisorbato 20 puede estar presente antes de la liofilización a una concentración de hasta 0.2% (por volumen), p. ej . , 0.01 -0.1 %, 0.01 -0.08%, 0.01 -0.04%. Una concentración de 0.02% de polisorbato 80 o polisorbato 20 es útil. Un aminoácido libre, tal como arginina, metionina o glicina, puede estar presente antes de la liofilización a una concentración de entre 2 y 80 mM, p. ej., 3-60 mM, 3-50 mM, 6-30 mM, 10-25 mM, 15-20 mM. Una concentración de arginina-HCI 17 mM, o glicina-HCI 20 mM o metionina 60 mM es útil. El anticuerpo anti-CD40 está presente antes de la liofilización a una concentración entre 20 mg/ml y 120 mg/ml, por ejemplo, 20 mg/ml, 30 mg/ml, 40 mg/ml, 50 mg/ml, 60 mg/ml, 66.6 mg/ml, 70 mg/ml, 80 mg/ml, 90 mg/ml, 100 mg/ml, 1 10 mg/ml, o 120 mg/ml . Una concentración de 50 mg/ml es útil.

El preliofilizado de la invención tiene un pH entre 5.0 y 8.0, entre 5.0 y 7.0, entre 5.5 y 6.5. En una modalidad específica, el preliofilizado de la invención tiene un pH de aproximadamente 6.0.

En una modalidad el preliofilizado de la invención tiene una relación molar de sacarosa : anticuerpo de 90:1 , y una proporción molar de histidina : anticuerpo de 10: 1.

En una modalidad el preliofilizado de la invención tiene una relación molar de sacarosa : anticuerpo de 90: 1 , una relación molar de histidina : anticuerpo de 10: 1 , y una relación molar de arginina-HCI : anticuerpo de 17: 1.

En una modalidad el preliofilizado de la invención tiene una relación molar de sacarosa : anticuerpo de 90: 1 , una relación molar de histidina : anticuerpo de 10: 1 , y una relación molar de glicina-HCI : anticuerpo de 60: 1.

Una formulación que contiene amortiguador de histidina, sacarosa, polisorbato 20 y, opcionalmente, arginina, metionina o glicina ha demostrado ser adecuada para la liofilización del anticuerpo mAb1. Despues de la reconstitución, los componentes del liofilizado pueden estar presentes a una concentración de las composiciones farmacéuticas acuosas como se ha descrito anteriormente. o Enfermedades y trastornos a tratar Las composiciones farmacéuticas acuosas de la invención que comprenden anticuerpos anti-CD40 pueden utilizarse para tratar, mejorar o prevenir trastornos autommunes relacionados con CD40, trastornos inflamatorios relacionados con CD40 y/o para prevenir o reducir el riesgo de rechazo del injerto en el trasplante. Para los fines de la presente invención, el término "trastornos inflamatorios" incluye "trastornos autoinmunes".

Tal como se utiliza en la presente, se entiende generalmente que el término "autoinmunidad" incluye procesos inflamatorios mediados por el sistema inmune que involucran “auto” antígenos. En las enfermedades autoinmunes, es el autoantígeno el que desencadena la respuesta inmune en el hospedero.

Las composiciones farmacéuticas que comprenden los anticuerpos anti-CD40 son particularmente útiles para tratar esclerosis múltiple, lupus eritematoso sistémico, síndrome de Sjógren, artritis reumatoide, rechazo de trasplante, enfermedad de injerto contra hospedero, penfigo vulgar y neoplasmas de células B, tales como la leucemia linfoblástica aguda (ALL) y la leucemia linfocítica crónica de células B (CLL).

Además, la presente invención incluye el tratamiento de la inflamación asociada con el rechazo de trasplante de tejido. "Rechazo de trasplante" o "rechazo del injerto" se refiere a cualquier respuesta inmune que se desarrolla en el hospedero contra un injerto, que incluye pero no limitado a los antígenos HLA, antígenos de grupos sanguíneos, y similares.

La invención también se puede utilizar para tratar la enfermedad de injerto contra hospedero, tal como la asociada con el trasplante de médula ósea, por ejemplo. En tal enfermedad de injerto contra hospedero, la médula ósea del donante incluye linfocitos y células que maduran a linfocitos. Los linfocitos del donante reconocen los antígenos del receptor como no propios y desarrollan una respuesta inmune inflamatoria. Por lo tanto, tal como se utiliza en la presente, "enfermedad injerto contra hospedero" o "reacción de injerto contra hospedero" se refiere a cualquier respuesta inmune mediada por linfocitos T en la que los linfocitos del donante reaccionan a los antígenos del hospedero.

Los anticuerpos o proteínas anti-CD40 antagonistas descritos en este documento, por ejemplo mAb1 , mAb2 o mAb3, pueden utilizarse según los métodos de la invención para el tratamiento de trastornos autommunes y/o inflamatorios que incluyen, pero no se limitan a, lupus eritematoso sistémico (SLE), lupus discoide, nefritis de lupus, sarcoidosis, artritis inflamatoria, incluyendo artritis juvenil, artritis reumatoide, artritis psoriásica, síndrome de Reiter, espondilitis anquilosante y artritis gotosa, rechazo de un trasplante de órgano o tejido, rechazo hiperagudo, agudo o crónico y/o enfermedad de injerto contra hospedero, esclerosis múltiple, síndrome de hiper I g E , poliarteritis nodosa, cirrosis biliar primaria, enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, enfermedad celíaca (enteropatía sensible al gluten), síndrome de Sjógren primario (pSS), hepatitis autommune, anemia perniciosa, anemia hemolítica autoinmune, psoriasis, esclerodermia, miastenia grave, púrpura trombocitopenica autoinmune, tiroiditis autoinmune, enfermedad de Graves, tiroiditis de Hashimoto, enfermedad de complejo inmune, fatiga crónica, síndrome de disfunción inmune (CFIDS), polimiositis y dermatomiositis, crioglobulinemia, trombólisis, cardiomiopatía, pénfigo vulgar, fibrosis pulmonar intersticial, diabetes mellitus de tipo I y tipo II, hipersensibilidad de tipo tardío de tipo 1 , 2, 3 y 4, alergia o trastornos alérgicos, respuestas inmunes no deseadas / no intencionadas a proteínas terapéuticas (véase, por ejemplo, solicitud de patente de EE. UU. No. 2002/01 19151 y Koren, et al. (2002) Curr. Pharm. Biotechnol. 3: 349-60), asma, síndrome de Churg-Strauss (granulomatosis alérgica), dermatitis atópica, dermatitis de contacto alérgica e irritativa, urticaria, alergia mediada por IgE, aterosclerosis, vasculitis asociadas a ANCA, vasculitis, miopatías inflamatorias idiopáticas, enfermedad hemolítica, enfermedad de Alzheimer, polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica, y similares.

La ablación genetica o inhibición farmacológica de la ruta CD40-CD154 ha demostrado previamente beneficio terapéutico, ya sea en modelos clínicos o preclínicos de SLE, pSS, ITP, esclerosis múltiple, enfermedad de Crohn, pénfigo vulgar, vasculitis autommune y RA (Lcy CL, Grewal IS. (2009), Adv. Exp. Med. Biol. 2009;. 647:8-36); la necesidad médica de la cual se detalla a continuación.

En modalidades preferidas, los anticuerpos o proteínas anti-CD40 de la invención son útiles en el tratamiento de: (i) lupus eritematoso sistémico (nefritis por lupus), preferiblemente en el suministro de terapias efectivas ahorradoras de esteroides para la inducción y mantenimiento de remisión, y la prevención de enfermedad renal de etapa terminal; (ii) síndrome de Sjogren primario, preferiblemente en la prevención de la destrucción de la glándula salival y lacrimal, y la inducción y mantenimiento de la remisión de las manifestaciones extraglandulares; (iii) púrpura trombocitopénica autoinmune, preferiblemente el tratamiento de pacientes refractarios al tratamiento estándar, (iv) las vasculitis asociadas a ANCA, preferiblemente induciendo y manteniendo la remisión en pacientes refractarios a corticosteroides, y terapias efectivas ahorradoras de esteroides, (v) pénfigo vulgar, de preferencia en la inducción y mantenimiento de remisión en pacientes refractarios a los corticosteroides, y el tratamiento ahorrador de esteroides, (vi) esclerosis múltiple, preferiblemente en el suministro de tratamientos más eficaces para la prevención de recaídas y progresión de la discapacidad, y el logro de una condición libre de enfermedad, y (vii) enfermedad de Crohn, preferiblemente en el suministro de terapias más eficaces para el mantenimiento de remisión, y el tratamiento de los pacientes refractarios a anti-TNF.

En algunas otras modalidades, los anticuerpos o proteínas anti-CD40 de la invención son útiles en el tratamiento de la inflamación pulmonar, incluyendo pero no limitado a rechazo del injerto pulmonar, asma, sarcoidosis, enfisema, fibrosis quística, fibrosis idiopática pulmonar, bronquitis crónica, rinitis alérgica y enfermedades alérgicas del pulmón tales como neumonitis por hipersensibilidad, neumonía eosinofílica, bronquiolitis obliterante debido a trasplante de médula ósea y/o de pulmón u otras causas, aterosclerosis de injerto/fleboesclerosis de injerto, así como fibrosis pulmonar resultante de enfermedades de colágeno, autommunes y vasculares, tales como artritis reumatoide, esclerodermia y lupus eritematoso.

"Tratamiento" se define en la presente como la aplicación o administración de un anticuerpo anti-CD40 o proteína según la invención, por ejemplo, el anticuerpo mAb1 , mAb2 o mAb3, a un sujeto, o la aplicación o administración de una composición farmacéutica que comprende dicho anticuerpo o proteína anti-CD40 de la invención a un tejido aislado o línea celular de un sujeto, donde el sujeto tiene una enfermedad autoinmune y/o enfermedad inflamatoria, un síntoma asociado con una enfermedad autoinmune y/o enfermedad inflamatoria, o una predisposición al desarrollo de una enfermedad autoinmune y/o enfermedad inflamatoria, donde el propósito es curar, sanar, aliviar, mitigar, alterar, remediar, aliviar, mejorar, o afectar a la enfermedad autommune y/o enfermedad inflamatoria, cualquiera de los síntomas asociados de la enfermedad autoinmune y/o enfermedad inflamatoria, o la predisposición al desarrollo de la enfermedad autoinmune y/o enfermedad inflamatoria.

Por "tratamiento" también se incluye la aplicación o administración de una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo o proteína anti-CD40 de la invención, por ejemplo, el anticuerpo mAb1 , mAb2 o mAb3, a un sujeto, o la aplicación o administración de una composición farmacéutica que comprende dicho anticuerpo o proteína anti-CD40 de la invención a un tejido aislado o línea celular de un sujeto, donde el sujeto tiene una enfermedad autoinmune y/o enfermedad inflamatoria, un síntoma asociado con una enfermedad autoinmune y/o enfermedad inflamatoria, o una predisposición al desarrollo de una enfermedad autoinmune y/o enfermedad inflamatoria, donde el propósito es curar, sanar, aliviar, mitigar, alterar, remediar, aliviar, mejorar, o afectar a la enfermedad autoinmune y/o enfermedad inflamatoria, cualquiera de los síntomas asociados de la enfermedad autoinmune y/o la enfermedad inflamatoria, o la predisposición al desarrollo de la enfermedad autoinmune y/o enfermedad inflamatoria.

Por "actividad antiinflamatoria" se entiende una reducción o prevención de la inflamación. La terapia con al menos un anticuerpo o proteína anti-CD40 según la invención provoca una respuesta fisiológica que es beneficiosa con respecto al tratamiento de una enfermedad autoinmune y o enfermedad inflamatoria, donde la enfermedad involucra las células que expresan el antígeno CD40. Se reconoce que los métodos de la invención pueden ser útiles en la prevención de cambios fenotípicos en las células, tales como la proliferación, activación, y similares. o Administración a los pacientes Una composición farmacéutica de la invención se puede administrar a un paciente. La administración será típicamente a través de una jeringa. Así, la invención proporciona un dispositivo de suministro (p. ej., una jeringa) que incluye una composición farmacéutica de la invención (p. ej. , jeringa precargada). Los pacientes recibirán una cantidad efectiva del anticuerpo anti-CD40 como el ingrediente activo principal, es decir, una cantidad que es suficiente para tratar, mejorar o prevenir la enfermedad o trastorno en cuestión. Los efectos terapéuticos pueden incluir también la reducción de los síntomas físicos. La cantidad óptima efectiva y la concentración de anticuerpo para cualquier sujeto particular dependerá de varios factores, incluyendo la salud, edad, talla y/o género del paciente, la naturaleza y extensión de la condición, la actividad del anticuerpo particular, la tasa de su depuración por el cuerpo, y también dependerá de cualquier otra posible terapia administrada en combinación con el anticuerpo. La cantidad efectiva suministrada para una situación dada puede determinarse de acuerdo con el criterio de un médico. Para propósitos de la presente invención, una dosis eficaz puede estar entre 0.005 mg/kg y 50 mg/kg, aproximadamente, o entre 0.05 mg/kg y 10 mg/kg, aproximadamente. Los productos farmacéuticos basados en anticuerpos conocidos proporcionan orientación a este respecto, p. ej., HERCEPTIN™ se administra a una dosis de carga inicial de 4 mg/kg de peso corporal, y una dosis de mantenimiento semanal de 2 mg/kg de peso corporal; RITUXAN™ se administra semanalmente a 375 mg/m2; SYNAGIS™ se administra intramuscularmente a 15 mg/kg de peso corporal; etc.

La invención proporciona un método para administrar un anticuerpo monoclonal a un mamífero, que comprende el paso de administrar al paciente una composición farmacéutica de la invención.

La invención también proporciona un método para suministrar un anticuerpo monoclonal a un mamífero, que comprende los pasos de: (i) reconstituir un liofilizado de la invención para proporcionar una formulación acuosa, y (ii) administrar la formulación acuosa al paciente. El paso (ii) se lleva a cabo idealmente dentro de las 24 horas del paso (i), p. ej., dentro de las 12 horas, dentro de 6 horas, dentro de 3 horas, o dentro de 1 hora.

La invención también proporciona formulaciones de la invención para utilizar como medicamentos, p. ej. , para su uso en el suministro de un anticuerpo a un mamífero, o para uso en el tratamiento, prevención o mejora de una o más de las enfermedades y trastornos descritos anteriormente.

El mamífero preferiblemente es un ser humano, pero puede ser también, por ejemplo, un caballo o una vaca o un perro o un gato. Los anticuerpos idealmente serán elegidos para que coincidan con la especie objetivo, p. ej. , un anticuerpo humano para la administración humana, un anticuerpo equmo para caballos, un anticuerpo canino para perros, etc. Si los anticuerpos nativos hospederos no están disponibles, entonces la transferencia de la especificidad del anticuerpo de una especie a otra se puede lograr mediante la transferencia de residuos de CDR (y típicamente, además, uno o más residuos de armazón) de un anticuerpo donante a un armazón receptor de la especie hospedera, p. ej., como en la humanización. Los anticuerpos equinizados, bovinizados, caninizados y felinizados son conocidos en la téenica. El anticuerpo se unirá a CD40 de la especie objetivo, pero también puede reaccionar de manera cruzada con CD40 de otras especies.

La dosificación puede ser mediante un programa de dosis única o un programa de múltiples dosis.

Los ingredientes para la formación de composiciones de la invención (p. ej., liofilizados y reconstituyentes) pueden suministrarse en contenedores herméticamente sellados. o El anticuerpo anti-CD40 La invención se refiere a la formulación de anticuerpos anti-CD40, y más específicamente los anticuerpos denominados mAb1 , mAb2 y mAb3, especialmente mAb1.

Un anticuerpo adecuado que puede estar comprendido en las composiciones farmacéuticas de la invención es el anticuerpo recombinante humano mAb1 , caracterizado estructuralmente como se describe más adelante. La secuencia de aminoácidos de VH de tal anticuerpo anti-CD40 aislado se muestra en la SEQ ID NO: 1. La secuencia de aminoácidos de VL de tal anticuerpo anti-CD40 aislado se muestra en la SEQ ID NO: 2. La secuencia de aminoácidos de cadena pesada de longitud completa de tal anticuerpo aislado anti-CD40 se muestra en la SEQ ID NO: 9. La secuencia de aminoácidos de cadena ligera de longitud completa de tal anticuerpo anti-CD40 se muestra en la SEQ ID NO: 10. Otro ejemplo de secuencias de aminoácidos de cadena pesada y ligera de tales anticuerpos anti-CD40 aislados son las codificadas por las secuencias de nucleótidos de SEQ ID NO: 11 y SEQ ID NO: 12, respectivamente.

Otros anticuerpos anti-CD40 que se pueden utilizar para preparar las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen anticuerpos anti-CD40 con aminoácidos que se han mutado por deleción, inserción o sustitución de aminoácidos, sin embargo, no tienen más de 1 , 2, 3, 4 o 5 deleciones, inserciones o sustituciones de aminoácidos en cualquiera de las regiones de cadena pesada o ligera descritas anteriormente. En una modalidad específica, tales cambios de aminoácidos aparecen sólo en las regiones de armazón y/o constante y las regiones CDR son 100% idénticas a las regiones CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NO: 3, 4 y 5, y a las regiones CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NO: 6, 7, y 8, respectivamente. En una modalidad más específica, los cambios que se han hecho son solamente sustituciones de aminoácido conservativas fuera de las regiones CDR.

Las sustituciones de aminoácido conservativas son aquellas en las que se sustituye el residuo aminoácido con un residuo aminoácido que tiene una cadena lateral similar. Familias de residuos aminoácidos que tienen cadenas laterales similares han sido definidas en la téenica.

Estas familias incluyen aminoácidos con cadenas laterales básicas (por ejemplo, lisina, arginina, histidina), cadenas laterales ácidas (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico), cadenas laterales polares no cargadas (por ejemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina , cisteína, triptófano), cadenas laterales no polares (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina), cadenas laterales beta-ramificadas (p. ej . , treonina, valina, isoleucina) y cadenas laterales aromáticas (p. ej., tirosina, fenilalanina, triptófano, histidina). Por lo tanto, uno o más residuos de aminoácido fuera de las regiones CDR de un anticuerpo anti-CD40, pueden ser reemplazados con otros residuos de aminoácido de la misma familia de cadena lateral, y el anticuerpo alterado puede ser probado para determinar la función retenida, en particular las mismas propiedades de unión a CD40.

Los anticuerpos típicamente pueden estar glicosilados. Los glicanos N-ligados unidos al dominio CH2 de una cadena pesada, por ejemplo, pueden influir en la unión a C1q y FcR, y los anticuerpos aglicosilados (por ejemplo que comprenden una mutación N297A) pueden tener una afinidad inferior o diferente para estos receptores. La estructura de glicano también puede afectar la actividad, p. ej., se pueden observar diferencias en la muerte celular mediada por el complemento en función del número de azúcares de galactosa (0, 1 o 2) en el extremo de una cadena biantenaria del glicano. Los glicanos de un anticuerpo preferentemente no conducen a una respuesta inmunogénica humana después de su administración.

Otra modificación de los anticuerpos anti-CD40 en la presente que se contempla en la invención es la pegilación. Un anticuerpo puede ser pegilado, por ejemplo, para aumentar la vida media biológica (p. ej. , suero) del anticuerpo. Para pegilar un anticuerpo, el anticuerpo, o fragmento del mismo, por lo general se puede hacer reaccionar con polietilenglicol (PEG), tal como un derivado reactivo de éster o aldehido de PEG, en condiciones en las que uno o más grupos PEG se adhieren al anticuerpo o fragmento de anticuerpo. La pegilación se puede llevar a cabo mediante una reacción de acilación o una reacción de alquilación con una molécula PEG reactiva (o un polímero reactivo análogo soluble en agua).

Tal como se utiliza en la presente, el término "polietilenglicol" tiene la intención de abarcar cualquiera de las formas de PEG que se han utilizado para derivatizar otras proteínas, tales como mono- alcoxi (C1-C10) o ariloxi-polietilenglicol o polietilenglicol-maleimida. En ciertas modalidades, el anticuerpo a ser pegilado es un anticuerpo aglicosilado. Los métodos para pegilar proteínas se conocen en la téenica y pueden aplicarse a los anticuerpos de la invención. Véase, por ejemplo, el documento EP 0 154 316 por Nishimura et al. , y EP 0 401 384 por Ishikawa et al.

Cualquier otra modificación natural o no natural posterior a la traducción de anticuerpos anti-CD40 (p. ej., mAb1 ) se contempla adicionalmente como modalidades específicas de anticuerpos anti-CD40 que podrían utilizarse para preparar las composiciones farmacéuticas de la invención.

Los anticuerpos pueden prepararse en una forma libre a partir de productos con los que estarían naturalmente asociados. Los componentes contaminantes del ambiente natural de un anticuerpo incluyen materiales tales como enzimas, hormonas u otras proteínas celulares del hospedero.

Las diversas características y modalidades de la presente invención, mencionadas en las secciones individuales y modalidades anteriores se aplican, según sea apropiado, a otras secciones y modalidades, cambiando lo que se deba cambiar. Consecuentemente las características especificadas en una sección o modalidad se pueden combinar con características especificadas en otras secciones o modalidades, según proceda.

EJEMPLOS Preparación de anticuerpos anti-CD40 CHIR-12.12 y mAb1 (N297A CHIR-12.12), mAb2 (D265A CHIR-12.12), y mAb3 (CHIR-12.12 LALA) se unen específicamente a CD40. Las Tablas 1 y 2 a continuación resumen las características de secuencia de estos anticuerpos. Estos anticuerpos pueden ser producidos en celulas hospederas de mamífero, tales como una línea de células CHO transfectadas con vectores de expresión que llevan cadenas codificadoras de cadena pesada y ligera bajo promotores de expresión adecuados.

Tabla 1 Breve descripción de las secuencias anotadas en el listado de secuencias de la Tabla 2 Tabla 2 Listado de secuencias Tabla 2 (Continuación) Tabla 2 (Continuación) Tabla 2 (Continuación) Ejemplos de formulaciones Se desea una alta concentración de una formulación liofilizada o líquida de mAb1 y, así, se realizaron estudios de formulación. Una formulación liofilizada que comprende un azúcar, un agente amortiguador y un agente tensoactivo fue estable y logró mantener altas concentraciones de anticuerpos después de la reconstitución.

Cinco formulaciones (F1 , F2, F3, F4 y F5) de mAb1 se evaluaron en cuanto a estabilidad. F1 fue una formulación líquida de mAb1 a 50 mg/mL a pH 6.0. Las formulaciones F2, F3, F4 y F5 tuvieron antes de la liofilización el mAb1 a 50 mg/vial. Las formulaciones F2, F3, F4 y F5 tuvieron, antes de la liofilización, el mAb1 a 50 mg/ml a pH 6.0. Las formulaciones F2, F3, F4 y F5 tuvieron un volumen de llenado de 3.6 mi. Las cinco formulaciones incluyeron amortiguador, azúcar, agente tensoactivo y aminoácido libre, como se anota en la Tabla 3: Tabla 3 Ejemplos de formulaciones Los liofilizados de F2, F3, F4 y F5 se reconstituyeron con agua para inyección (1.0 mi) para proporcionar un volumen reconstituido de 1.2 mi (1/3 del volumen acuoso original). Las composiciones reconstituidas fueron como se anota en la Tabla 4: Tabla 4 Ejemplos de formulaciones El ciclo de liofilización utilizado se presenta en la Tabla 5.

Tabla 5 Los parámetros del ciclo de liofilización Tiempo Paso Operación Temp. en el Presión de la [hh:mm] estante cámara Según Carga del vial se 20 °C Ambiente requiera 2 Enfriamiento a 5°C 00:30 5 °C Ambiente 3 Retención a 5°C 03:00 5 °C Ambiente 4 Rampa de congelación 01:24 5 °C a -37 °C Ambiente 5 Retención en congelación 06:00 -37 °C Ambiente como se 6 Cámara de vacío -37 °C 0.2 mbar requiera a 7 Rampa de desecación primaria 16:00 -37 °C a 25 °C 0.2 mbara Retención en desecación 24:00 25 °C 0.2 mbar secundaria a 11 Taponado del vial 25 °C 850 ± 50 mbar a La presión de la cámara se controló usando nitrógeno filtrado estéril. La presión se determinó mediante instrumentos basados en mediciones de capacitancia.

Las cinco formulaciones se ensayaron para determinar la estabilidad en diversos puntos de tiempo después de la formulación/reconstitución como se indica a continuación.

Se usó cromatografía de exclusión por tamaño-cromatografía de líquidos de alta presión (SEC-HPLC) para evaluar la cantidad de mAb1 en cada formulación en el momento de la formulación (T0), a las 4 semanas (25° C), 4 semanas (40° C), 6 meses (2-8° C), 6 meses (25°C) y 6 meses (40°C). La cantidad de anticuerpo se expresa como un porcentaje de la cantidad inicial, como se anota en la Tabla 6. La formulación F1 se mantiene cerca de 50 mg/ml ± 5 mg/ml (100%±10%), las formulaciones F2, F3, F4 y F5 permanecen cerca de 150 mg/ml ± 15 mg/ml (100%±10%).

Tabla 6 Cantidad de anticuerpo determinada por SEC-HPLC La potencia del anticuerpo mAb1 en cada formulación se midió mediante un ensayo ELISA a T0, 4 semanas (25 °C), 4 semanas (40 °C), 6 meses (2-8 °C), 6 meses (25 °C) y 6 meses (40 °C). Los resultados, expresados como un porcentaje de la potencia inicial (100%) se anotan en la Tabla 7. La potencia de la formulación F1 disminuye con el tiempo y el aumento de temperatura; después de 6 meses a 40° C se encontró que la potencia era de 79%. El valor más bajo medido fue de 85% para F4 (6 meses a 25 °C) y 86% para F3 (6 meses a 40 °C).

Tabla 7 Potencia del anticuerpo medida por ELISA La estabilidad de las formulaciones se evaluó por el porcentaje de impurezas medido por cromatografía de exclusión por tamaño-cromatografía de líquidos de alta presión (SEC-HPLC) y dispersión de luz dinámica (DLS). Los resultados se muestran en las Tablas 8 y 9.

Tabla 8 Resultado de los productos de agregación de la SEC-HPLC Tabla 9 Resultado de las partículas pequeñas por índice de polidispersividad (PDI) de la dispersión de luz dinámica La formulación F1 mostró un aumento de los productos de agregación al aumentar la temperatura y el tiempo. Para las formulaciones F2 a F5, la adición de arginina (F2 y F3) redujo ligeramente el grado de agregación, y la sacarosa (F3 y F5) fue superior a la trehalosa.

Los productos de agregación también se evaluaron midiendo la turbidez. La formulación F1 mostró un aumento de la turbidez al aumentar la temperatura y el tiempo. Las formulaciones F2 a F5 mostraron valores de turbidez ligeramente elevados para formulaciones que contienen arginina (F2 y F3).

Tabla 10 Mediciones de turbidez (unidades de absorbancia) La estabilidad de las formulaciones se evaluó por el porcentaje de productos de degradación medido por SEC-HPLC. Con las formulaciones F2 a F5, la adición de arginina redujo ligeramente la degradación. Los resultados se muestran en la Tabla 1 1.

Tabla 11 Resultado de los productos de degradación de la SEC-HPLC Las cuatro formulaciones liofilizadas F2, F3, F4 y F5 se evaluaron para determinar la claridad visual después de la reconstitución. Los resultados se presentan en la Tabla 12.

Tabla 12 Claridad visual Las propiedades fisicoquímicas de las formulaciones se evaluaron y los resultados se presentan en la Tabla 13. Los valores de viscosidad son los valores de las formulaciones que tienen 50 mg/ml de anticuerpo antes de la liofilización. Los valores de osmolalidad corresponden a las composiciones reconstituidas con 150 mg/ml de anticuerpo.

Tabla 13 Propiedades fisicoquímicas Conclusiones En general, las formulaciones ensayadas mostraron buenos resultados. Los bioensayos (SEC y ELISA) mostraron que las formulaciones son comparables. Los agregados solubles se redujeron ligeramente en presencia de arginina y fueron ligeramente inferiores en formulaciones que contenían sacarosa, en comparación con las formulaciones que contenían trehalosa. La turbidez aumentó ligeramente en presencia de arginina; no hubo diferencia entre las formulaciones que contenían trehalosa o sacarosa. La degradación se redujo en presencia de arginina. Con respecto a las propiedades fisicoquímicas, el pH, viscosidad, contenido de humedad residual, y aspecto visual fueron comparables en todas las formulaciones. La osmolalidad fue > 300 mOsm/kg para todas las formulaciones, y fue incluso mayor en la presencia de arginina-HCI (F2 y F3). Es deseable disponer de una formulación que es isotónica con el plasma (290 mOsm/kg), o lo tan cercano a este valor como sea posible. Las formulaciones con sacarosa (F3 y F5) fueron consideradas preferibles sobre aquellas con trehalosa. Aunque algunos de los efectos beneficiosos sobre la degradación fueron vistos con arginina (F3), la osmolalidad inferior de la formulación F5 se consideró como un factor más importante. La formulación F5 se consideró como la formulación óptima.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una formulación liofilizada preparada liofilizando una formulación acuosa que tiene un pH de 5.0-7.0 y que comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de 20-150 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) un estabilizador; (iii) un agente amortiguador; (iv) un agente tensoactivo; y opcionalmente (v) un aminoácido.

2. La formulación liofilizada de la reivindicación 1 , caracterizada además porque dicha formulación se prepara de una formulación acuosa que tiene un pH de 5.0-7.0 y que comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de 20-150 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) sacarosa o trehalosa como estabilizador; (iii) histidina como agente amortiguador; (iv) polisorbato 20 como agente tensoactivo; y opcionalmente (v) un aminoácido seleccionado de arginina, metionina y glicina.

3. La formulación liofilizada de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, caracterizada además porque dicha formulación se prepara de una formulación acuosa que tiene un pH de 5.0-7.0 y que comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de 20-150 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) sacarosa o trehalosa a 3-300 mM como estabilizador; (iii) histidina a 1-60 mM como agente amortiguador; (iv) polisorbato 20 hasta 0.2 % como agente tensoactivo; y opcionalmente (v) arginina, metionina o glicina a 2-80 mM.

4. La formulación liofilizada de conformidad con cualquier reivindicación anterior, caracterizada además porque dicha formulación se prepara de una formulación acuosa que tiene un pH de 6.0 y que comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de 50 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) sacarosa a 90 mM como estabilizador; (iii) histidina a 10 mM como agente amortiguador; (¡v) polisorbato 20 al 0.02% como agente tensoactivo.

5. La formulación liofilizada de conformidad con cualquier reivindicación anterior, caracterizada además porque dicha formulación se prepara de una formulación acuosa que tiene un pH de 6.0 y que comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de 50 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) sacarosa a 90 mM como estabilizador; (iii) histidina a 10 mM como agente amortiguador; (iv) polisorbato 20 al 0.02% como agente tensoactivo; y (v) arginina a 17 mM.

6. La formulación liofilizada de conformidad con cualquier reivindicación anterior, caracterizada además porque dicha formulación se prepara de una formulación acuosa que tiene un pH de 6.0 y que comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de 150 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) sacarosa a 270 mM como estabilizador; (iii) histidina a 30 mM como agente amortiguador; y (¡v) polisorbato 20 al 0.06% como agente tensoactivo.

7. Una composición farmacéutica acuosa obtenida mediante la reconstitución de una formulación liofilizada de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el factor de reconstitución es entre 1 :0.5 y 1 :6.

8. La composición farmacéutica acuosa de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada además porque el factor de reconstitución es de 1 :3.

9. Una composición farmacéutica acuosa que tiene un pH de 5.0 a 7.0 que comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de al menos 50 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) un estabilizador; (iii) un agente amortiguador; (iv) un agente tensoactivo; y opcionalmente (v) un aminoácido.

10. La composición farmacéutica acuosa de la reivindicación 9, caracterizada además porque comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de al menos 50 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs; 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) sacarosa o trehalosa como estabilizador; (iii) histidina como agente amortiguador; (iv) polisorbato 20 como agente tensoactivo; y opcionalmente (v) un aminoácido seleccionado de arginina, metionina o glicina.

11. La composición farmacéutica acuosa de la reivindicación 9 o 10, caracterizada además porque comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de al menos 50 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) sacarosa a 200-300 mM como estabilizador; (iii) histidina a 25-35 mM como agente amortiguador; (iv) polisorbato 20 hasta 0.2% como agente tensoactivo; y opcionalmente (v) arginina, metionina o glicina a 10-80 mM.

12. La composición farmacéutica acuosa de cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11 , caracterizada además porque la composición tiene un pH de 6.0 y comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de al menos 50 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) sacarosa a 270 mM como estabilizador; (iii) histidina a 30 mM como agente amortiguador; y (iv) polisorbato 20 al 0.06 % como agente tensoactivo.

13. La composición farmacéutica acuosa de cualquiera de las reivindicaciones 9 a 1 1 , caracterizada además porque la composición tiene un pH de 6.0 y comprende: (i) un anticuerpo anti-CD40, en donde el anticuerpo tiene una concentración de al menos 50 mg/ml, y en donde dicho anticuerpo anti-CD40 incluye la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena pesada de SEQ ID NOs: 3, 4 y 5, respectivamente, y la CDR1 , CDR2 y CDR3 de cadena ligera de SEQ ID NOs: 6, 7 y 8; (ii) sacarosa a 270 mM como estabilizador; (iii) histidina a 30 mM como agente amortiguador; (iv) polisorbato 20 al 0.06% como agente tensoactivo; y (v) arginina a 51 mM.

14. La composición farmacéutica acuosa de cualquiera de las reivindicaciones 9 a 13, caracterizada además porque el anticuerpo anti-CD40 tiene una concentración de 150 mg/ml.

15. La formulación liofilizada de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o la composición farmacéutica acuosa de cualquiera de las reivindicaciones 7 a 14, en donde el anticuerpo anti-CD40 comprende un dominio VH que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 , y un dominio VL que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2.

16. La formulación liofilizada de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o la composición farmaceutica acuosa de cualquiera de las reivindicaciones 7 a 14, en donde el anticuerpo anti-CD40 comprende una región de cadena pesada de la SEQ ID NO: 9 y una región de cadena ligera de la SEQ ID NO: 10.

17. La formulación liofilizada de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o la composición farmacéutica acuosa de cualquiera de las reivindicaciones 7 a 14, en donde el anticuerpo anti-CD40 comprende una región de cadena pesada de la SEQ ID NO: 13 y una región de cadena ligera de la SEQ ID NO: 14.

18. La formulación liofilizada de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o la composición farmacéutica acuosa de cualquiera de las reivindicaciones 7 a 14, en donde el anticuerpo anti-CD40 comprende una región de cadena pesada de la SEQ ID NO: 17 y una región de cadena ligera de la SEQ ID NO: 18.

19. Un dispositivo de suministro que incluye la composición farmacéutica acuosa de cualquiera de las reivindicaciones 7 a 18.

20. Una jeringa precargada que incluye la composición farmacéutica acuosa de cualquiera de las reivindicaciones 7 a 18.

21. Un método para suministrar un anticuerpo anti-CD40 a un mamífero, que comprende el paso de administrar al mamífero una composición farmacéutica acuosa como la que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 7 a 18.

22. La formulación liofilizada de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, o la composición farmacéutica acuosa de cualquiera de las reivindicaciones 7 a 14, para uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno mediado por CD40.

23. La formulación liofilizada o la composición farmaceutica acuosa de conformidad con la reivindicación 22, para su uso en el tratamiento de enfermedades autommunes.

24. La formulación liofilizada o la composición farmacéutica acuosa de conformidad con la reivindicación 23, para su uso en el tratamiento de la artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, o pénfigo vulgar.