BR112014025909B1 - Composto, seus usos e composição farmacêutica - Google Patents

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Abstract

composto, seus usos e composição farmacêutica. a presente invenção refere-se a compostos de fórmula (i) r2-l2-o-r3-l3-o-r1-l1-o-n-l4-r4-n-l5-r6-l6-r6-n-r7-n-n- (i), como descrito aqui. compostos de fórmula (i) são úteis em métodos de inibição da atividade de rna polimerase viral e replicação viral. são também fornecidas composições farmacêuticas compreendendo compostos de fórmula (i), bem como métodos de tratamento de infecções virais usando compostos de fórmula (i).

Description

PEDIDO RELACIONADO
[0001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade para o Pe¬ dido de Patente Provisional dos Estados Unidos No. 61/625.994, de¬positado em 18 de abril de 2012.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[0002] Viroses são responsáveis por muitas doenças infecciosas em animais, incluindo mamíferos e humanos em particular. Ao contrá¬rio de infecções com bactérias, relativamente poucos agentes são efe¬tivos para a prevenção e tratamento de infecções virais. A biologia de doenças virais e atualmente bem entendida, incluindo transcrição, translação e replicação de genoma viral. Em viroses contendo RNA uma importante enzima é a RNA polimerase dependente de RNA, que é responsável pela replicação de genoma viral. A RNA polimerase de¬pendente do RNA é uma proteína essencial codificada nos genomas de todas as viroses que contêm RNA sem nenhum estágio de DNA que tem RNA de sentido negativo. A enzima catalisa a sintase do fila¬mento de RNA complementar a um determinado padrão de RNA. Por que a replicação do vírus depende da RNA polimerase, esta enzima é um alvo promissor no desenvolvimento de novos compostos antivirais.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0003] A invenção fornece compostos de fórmula I, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, para uso na inibição de atividade de RNA polimerase viral ou replicação viral, e tratamento de infecções virais. Os compostos são caracterizados, em parte, por far- macocinéticos favoráveis para o ingrediente farmacêutico ativo, parti¬cularmente em conjunto com a administração enteral, incluindo, em particular, a administração oral. A invenção também fornece composi¬ções farmacêuticas compreendendo um ou mais compostos de fórmu- la I, ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, bem como métodos para a preparação dos mesmos. São também fornecidos mé¬todos para a inibição de atividade de RNA polimerase viral, replicação viral, e tratamento de infecções virais.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0004] A Figura 1 é um gráfico que representa os farmacocinéti- cos de plasma de composto 12i após administração oral de dose única do composto 12i (triângulos, controle) e composto 30f (círculos, expe¬rimental) a ratos. N = 4 por grupo.
[0005] A Figura 2 é um gráfico que representa os efeitos de com¬ posto 12i (COMPOSTO 1) sobre a sobrevivência de hamsters infecta¬dos com vírus da Febre Amarela. **, P<0,01 em comparação ao pla¬cebo. ***, P<0,001 em comparação ao placebo. dpi, dias após a infec¬ção.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0006] Um aspecto da invenção é um composto representado pela fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:
Figure img0001
em que:
[0007] L1, L2, L3, L4, L5, e L6, cada independentemente, são uma ligação ou um ligador -C(R0)2-O-;
[0008] R0, independentemente para cada ocorrência, é H ou (C1- C6)alquila;
[0009] R1, R2, e R3, cada independentemente, são selecionados do grupo que consiste em H, aminoacila, aminotionila, acila, R10OC(O)-, fosforila, e aminofosforila; ou R1 e R2, tomados juntos, ou R2 e R3, tomados juntos, são selecionados do grupo que consiste em carbonila, tiocarbonila, fosforila, e (C1-C6)alquilfosforila;
[00010] R4, R5, e R6, cada independentemente, são selecionados do grupo que consiste em H, acila, fosforila, alquiltio, R10OC(O)-, e aminoalquila;
[00011] R7 é H; ou R6, R7, e o nitrogênio ao qual eles são ligados, tomados juntos, representam -N=CR20R21;
[00012] R10, independentemente para cada ocorrência, é seleciona¬do do grupo que consiste em H, (C1-C6)alquila, arila, heteroarila, aral- quila, e heteroaralquila;
[00013] R20 e R21, cada independentemente, são selecionados do grupo que consiste em H, alquila, amino, arila, heteroarila, aralquila, e heteroaralquila;
[00014] contanto que o composto representado pela fórmula I não seja
Figure img0002
[00015] Em certas modalidades o composto de fórmula I é um com¬posto representado pela fórmula IA, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:
Figure img0003
[00016] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, L1-R1 é H.
[00017] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, L2-R2 é H.
[00018] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, L3-R3 é H.
[00019] Alternativamente, em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, L2-R2 e L3-R3 são idênticos.
[00020] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, cada de L2-R2 e L3-R3 é H.
[00021] Alternativamente, em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, L1-R1 e L3-R3 são idênticos.
[00022] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, L1-R1 e L2-R2 são idênticos.
[00023] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, cada de L1-R1 e L2-R2 é H.
[00024] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, cada de L1-R1 e L3-R3 é H.
[00025] Alternativamente, em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, L1-R1, L2-R2, e L3-R3 são idênticos; e ne¬nhum de L1-R1, L2-R2, e L3-R3 é H.
[00026] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, independentemente para cada ocorrência aminoacila é - C(=O)CH(NH2)(CH2)nCHR30R31, em que n é 0 ou 1; e R30 e R31 cada independentemente são selecionados do grupo que consiste em H, (C1-C6)alquila, arila, heteroarila, aralquila, e heteroaralquila.
[00027] Em certas modalidades, R30 e R31 cada independentemente são selecionados do grupo que consiste em H e (C1-C6)alquila.
[00028] Em certas modalidades, R30 e R31 cada independentemente são (C1-C6)alquila.
[00029] Em certas modalidades, n é 0; e R30 e R31 cada indepen¬dentemente são metila.
[00030] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, independentemente para cada ocorrência aminotionila é - C(=S)CH(NH2)(CH2)nCHR30R31, em que n é 0 ou 1; e R30 e R31 cada independentemente são selecionados do grupo que consiste em H, (C1-C6)alquila, arila, heteroarila, aralquila, e heteroaralquila.
[00031] Em certas modalidades, R30 e R31 cada independentemente são selecionados do grupo que consiste em H e (C1-C6)alquila.
[00032] Em certas modalidades, R30 e R31 cada independentemente são (C1-C6)alquila.
[00033] Em certas modalidades, n é 0; e R30 e R31 cada indepen¬dentemente são metila.
[00034] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, independentemente para cada ocorrência acila é - C(=O)R40, em que R40 é selecionado do grupo que consiste em H, (C1- C6)alquila, arila, heteroarila, aralquila, e heteroaralquila.
[00035] Em certas modalidades, R40 é H.
[00036] Em certas modalidades, R40 é (C1-C6)alquila.
[00037] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, independentemente para cada ocorrência R10 é H.
[00038] Alternativamente, em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, independentemente para cada ocorrên¬cia R10 é (C1-C6)alquila.
[00039] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, independentemente para cada ocorrência aminofosforila é -P(=O)(OR50)NR51R52, em que
[00040] R50 é selecionado do grupo que consiste em H, (C1- C6)alquila, arila, arilalquila, heteroarila, heteroaralquila, e -(CH2)mSC(=O)C(CH3)2CH2OH;
[00041] m é 1 ou 2;
[00042] R51 é H ou (C1-C6)alquila; e
[00043] R52 é selecionado do grupo que consiste em H, (C1- C6)alquila, arila, aralquila, heteroarila, heteroaralquila, e - CR60R61C(=O)OR62, em que
[00044] R60 e R61 cada independentemente são H ou (C1-C6)alquila; e
[00045] R62 é selecionado do grupo que consiste em H, (C1- C6)alquila, arila, aralquila, heteroarila, heteroaralquila.
[00046] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R50 é H.
[00047] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R50 é arila.
[00048] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R50 é -(CH2)mSC(=O)C(CH3)2CH2OH.
[00049] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, m é 2.
[00050] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R51 é H.
[00051] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R52 é aralquila.
[00052] Alternativamente, em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R52 é -CR60R61C(=O)OR62.
[00053] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R60 é H; R61 é (C1-C6)alquila; e R62 é (C1-C6)alquila.
[00054] Em certas modalidades, o composto de fórmula I é um composto representado pela fórmula IB, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:
Figure img0004
[00055] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R7 é H; cada de L4, L5, e L6 é uma ligação; e cada de quaisquer dois de R4, R5, e R6 é H.
[00056] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, cada de R4 e R5 é H.
[00057] Alternativamente, em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, cada de R5 e R6 é H.
[00058] Alternativamente, em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, cada de R4 e R6 é H.
[00059] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R10 de qualquer R10OC(O)- de R4, R5, e R6 é H ou (C1- C6)alquila.
[00060] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, qualquer aminoalquila de R4, R5, e R6 é -CH2N(CH3)2.
[00061] Em certas modalidades, cada de L4, L5, e L6 é uma ligação; e R6, R7, e o nitrogênio ao qual eles são ligados, tomados juntos, re¬presentam -N=CR20R21.
[00062] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R20 é H e R21 é amino.
[00063] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, cada de R4 e R5 é H.
[00064] Alternativamente, em certas modalidades R7 é H; pelo me¬nos um de L4, L5, e L6 é um ligador de -C(R0)2-O-; e qualquer R4, R5, ou R6 ligado a pelo menos um ligador de -C(R0)2-O- é fosforila. Definições
[00065] O termo "alquila" como usado aqui é um termo de técnica e refere-se a grupos alifáticos saturados, incluindo grupos alquila de ca¬deia linear, grupos alquila de cadeia ramificada, grupos cicloalquila (alicíclico), grupos cicloalquila substituídos por alquila, e grupos alquila substituídos por cicloalquila. Em certas modalidades, uma alquila de cadeia linear ou cadeia ramificada tem cerca de 30 ou menos átomos de carbono em seu esqueleto (por exemplo, C1-C30 para cadeia linear, C3-C30 para cadeia ramificada), e alternativamente, cerca de 20 ou menos. Da mesma maneira, cicloalquilas têm de cerca de 3 a cerca de 10 átomos de carbono em sua estrutura de anel, e alternativamente cerca de 5, 6 ou 7 carbonos na estrutura de anel.
[00066] O termo "amino" é um termo de técnica e como usado aqui se refere a ambas as aminas não substituídas e substituídas, por exemplo, uma porção que pode ser representada pelas fórmulas ge¬rais:
Figure img0005
em que Ra, Rb, e Rc cada independentemente representa um hidrogê¬nio, uma alquila, uma alquenila, -(CH2)x-Rd, ou Ra e Rb, tomados juntos com o átomo de N ao qual eles são ligados completam um heterociclo tendo de 4 a 8 átomos na estrutura de anel; Rd representa uma arila, um cicloalquila, um cicloalquenila, um heterociclila ou um policiclila; e x é zero ou um número inteiro na faixa de 1 a 8. Em certas modalidades, somente um de Ra ou Rb pode ser um carbonila, por exemplo, Ra, Rb, e o nitrogênio juntos não formam uma imida. Em outras modalidades, Ra e Rb (e opcionalmente Rc) cada independentemente representa um hidrogênio, uma alquila, uma alquenila, ou -(CH2)x-Rd.
[00067] O termo "acila" é um termo de técnica e como usado aqui se refere a qualquer grupo ou radical da forma RCO- onde R é qual¬quer grupo orgânico, por exemplo, alquila, arila, heteroarila, aralquila, e heteroaralquila. Grupos acila representativos incluem acetila, benzoí- la, e malonila.
[00068] O termo "aminoalquila" como usado aqui se refere a um grupo alquila substituído com um ou mais grupos amino.
[00069] O termo "aminoacila" é um termo de técnica e como usado aqui se refere a um grupo acila substituído com um ou mais grupos amino.
[00070] O termo "aminotionila" como usado aqui se refere a um análogo de um aminoacila em que o O de RC(O)- foi substituído por enxofre, portanto é da forma RC(S)-.
[00071] O termo "fosforila" é um termo de técnica e como usado aqui pode em geral ser representado pela fórmula:
Figure img0006
em que Q50 representa S ou O, e R59 representa hidrogênio, uma arila ou alquila inferior; por exemplo, -P(O)(OMe)- ou -P(O)(OH)2. Quando usado para substituir, por exemplo, uma alquila, o grupo fosforila do fosforilalquila pode ser representado pelas fórmulas gerais:
Figure img0007
em que Q50 e R59, cada independentemente, são definidos acima, e Q51 representa O, S ou N; por exemplo, -O-P(O)(OH)OMe ou -NHP(O)(OH)2. Quando Q50 for S, a porção fosforila é um "fosforotioato."
[00072] O termo "aminofosforila" como usado aqui se refere a um grupo fosforila substituído com pelo menos um grupo amino, como definido aqui; por exemplo, -P(O)(OH)NMe2.
[00073] O termo "carbonila" como usado aqui se refere a -C(O)-.
[00074] O termo "tiocarbonila" como usado aqui se refere a -C(S)-.
[00075] O termo "alquilfosforila" como usado aqui se refere a um grupo fosforila substituído com pelo menos um grupo alquila, como definido aqui; por exemplo, -P(O)(OH)Me.
[00076] O termo "alquiltio" como usado aqui se refere a alquil-S-.
[00077] O termo "arila" é um termo de técnica e como usado aqui se refere a incluir grupos hidrocarboneto aromáticos monocíclicos, bi- cíclicos e policíclicos, por exemplo, benzeno, naftaleno, antraceno, e pireno. O anel aromático pode ser substituído em uma ou mais posi¬ções de anel com um ou mais substituintes, tais como porções de ha- logênio, azida, alquila, aralquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, hidro- xila, alcoxila, amino, nitro, sulfidrila, imino, amido, fosfonato, fosfinato, carbonila, carboxila, silila, éter, alquiltio, sulfonila, sulfonamido, cetona, aldeído, éster, heterociclila, aromático ou heteroaromático, fluoroalqui- la (tais como triflurometila), ciano, ou similares. O termo "arila" também inclui sistemas de anel policíclicos tendo dois ou mais anéis cíclicos em que dois ou mais carbonos são comuns aos dois anéis adjacentes (os anéis são "anéis fundidos") em que pelo menos um dos anéis é um hidrocarboneto aromático, por exemplo, os outros anéis cíclicos po¬dem ser cicloalquilas, cicloalquenilas, cicloalquinilas, arilas, heteroari- las, e/ou heterociclilas.
[00078] O termo "heteroátomo" é reconhecido na técnica, e inclui um átomo de qualquer elemento exceto carbono ou hidrogênio. Hete- roátomos ilustrativos incluem boro, nitrogênio, oxigênio, fósforo, enxo¬fre e selênio, e alternativamente oxigênio, nitrogênio ou enxofre.
[00079] O termo "heteroarila" é um termo de técnica e como usado aqui se refere a um grupo aromático monocíclico, bicíclico e policíclico tendo um ou mais heteroátomos na estrutura de anel, por exemplo, pirrol, furano, tiofeno, imidazol, oxazol, tiazol, triazol, pirazol, piridina, pirazina, piridazina e pirimidina, e similares. O "heteroarila" pode ser substituído em uma ou mais posições de anel com um ou mais substi- tuintes tais como porções de halogênio, azida, alquila, aralquila, al- quenila, alquinila, cicloalquila, hidroxila, alcoxila, amino, nitro, sulfidrila, imino, amido, fosfonato, fosfinato, carbonila, carboxila, silila, éter, al- quiltio, sulfonila, sulfonamido, cetona, aldeído, éster, heterociclila, aromático ou heteroaromático, fluoroalquila (tais como triflurometil), ciano, ou similares. O termo "heteroarila" também inclui sistemas de anel policíclicos tendo dois ou mais anéis cíclicos em que dois ou mais carbonos são comuns aos dois anéis adjacentes (os anéis são "anéis fundidos") em que pelo menos um dos anéis é um grupo aromático tendo um ou mais heteroátomos na estrutura de anel, por exemplo, os outros anéis cíclicos podem ser cicloalquilas, cicloalquenilas, cicloal- quinilas, arilas, heteroarilas, e/ou heterociclilas.
[00080] O termo "aralquila" é um termo de técnica e como usado aqui se refere a um grupo alquila substituído com um grupo arila.
[00081] O termo "heteroaralquila" é um termo de técnica e como usado aqui se refere a um grupo alquila substituído com um grupo he- teroarila.
[00082] Certos compostos contidos em composições da presente invenção podem existir em formas geométricas ou estereoisoméricas particulares. Além disso, compostos da presente invenção podem também ser oticamente ativos. A presente invenção contempla todos tais compostos, incluindo isômeros cis e trans, enantiômeros (R) e (S), diastereoisômeros, isômeros (D), isômeros (L), as misturas racêmicas dos mesmos, e outras misturas dos mesmos, como abrangido pelo escopo da invenção. Átomos de carbono assimétricos adicionais po¬dem estar presentes em um substituinte tal como um grupo alquila. Todos os tais isômeros, bem como misturas dos mesmos, são desti-nados a ser incluídos nesta invenção.
[00083] Se, por exemplo, um enantiômero particular de composto da presente invenção for desejado, ele pode ser preparado por síntese assimétrica, ou por derivação com um auxiliar quiral, onde a mistura diastereomérica resultante é separada e o grupo auxiliar clivado para fornecer os enantiômeros desejados puros. Alternativamente, onde a molécula contém um grupo funcional básico, tais como amino, ou um grupo funcional acídico, tal como carboxila, sais diastereoméricos são formados com uma base ou ácido oticamente ativo apropriado, segui¬do por resolução dos diastereômeros desse modo formados por crista¬lização fracional ou meios cromatográficos bem conhecidos na técnica, e subsequente recuperação dos enantiômeros puros.
[00084] Será entendido que "substituição" ou "substituída com" in¬clui a condição implícita de que tal substituição está de acordo com a valência permitida do átomo substituído e o substituinte, e que a subs¬tituição resulta de um composto estável, por exemplo, que não sofra espontaneamente transformação tais como por redisposição, cicliza- ção, eliminação, ou outra reação.
[00085] O termo "substituído" é também contemplado para incluir todos os substituintes permissíveis de compostos orgânicos. Em um aspecto amplo, os substituintes permissíveis incluem substituintes ací- clicos e cíclicos, ramificados e não ramificados, carbocíclicos e hetero- cíclicos, aromáticos e não aromáticos de compostos orgânicos. Substi- tuintes ilustrativos incluem, por exemplo, aqueles descritos aqui acima. Os substituintes permissíveis podem ser um ou mais e os mesmos ou diferentes para compostos orgânicos apropriados. Para propósitos desta invenção, os heteroátomos tais como nitrogênio podem ter subs- tituintes de hgidrogênio e/ou qualquer substituintes permissíveis de compostos orgânicos descritos aqui que satisfaçam as valências dos heteroátomos. Esta invenção não é destinada a ser limitada de qual¬quer maneira pelos substituintes permissíveis de compostos orgâni¬cos.
[00086] Para propoósitos da invenção, os elementos químicos são identificados de acordo com a tabela periódica dos elementos, versão CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 67a Ed., 1986-87, contra¬capa.
[00087] Outros termos químicos aqui são usados de acordo com uso convencional na técnica, como exemplificado por The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (ed. Parker, S., 1985), McGraw-Hill, San Francisco, incorporado aqui por referência. A menos que de outro mo¬do definido, todos os termos técnicos e científicos usados aqui têm o mesmo significado como comumente entendido por alguém versado na técnica à qual esta invenção pertence.
[00088] O termo "grupo de proteção" como usado aqui são substi- tuintes temporários que protegem um grupo funcional potencialmente reativo de transformações químicas indesejadas. Exemplos de tais grupos de proteção incluem ésteres de ácidos carboxílicos e ácidos borônicos, éteres de álcoois, e acetais e cetais de aldeídos e cetonas. Por exemplo, a frase "grupo de proteção de terminal N" ou "grupo de proteção amino" como usada aqui se refere a vários grupos de prote¬ção amino que podem ser empregados para proteger o terminal N de um aminoácido ou peptídeo contra reações indesejáveis durante os procedimentos sintéticos. Exemplos de grupos adequados incluem grupos de proteção acila tais como, para ilustrar, formila, dansila, ace¬tila, benzoíla, trifluoroacetila, succinila, e metoxisuccinila; grupos de proteção uretano aromáticos como, por exemplo, benziloxicarbonila (Cbz); e grupos de proteção uretano alifáticos tais como t- butoxicarbonila (Boc) ou 9-fluorenilmetoxicarbonila (Fmoc).
[00089] O termo "grupo de proteção amino" ou "grupo de proteção de terminal N" refere-se àqueles grupos destinados a proteger o termi¬nal α-N de um aminoácido ou peptídeo ou de outro modo proteger o grupo amino de um aminoácido ou peptídeo contra reações indesejá¬veis durante os procedimentos sintéticos. Comumente usados grupos de proteção N são descritos em Greene, Protective Groups In Organic Synthesis, (John Wiley & Sons, Nova Iorque (1981)), que é aqui incor¬porado por referência. Adicionalmente, grupos de proteção podem ser usados como profármacos que são prontamente clivados in vivo, por exemplo, por hidrólise enzimática, para liberar a origem biologicamen¬te ativa. Os grupos de proteção α-N compreendem grupos alcanoíla inferiores tais como formila, acetila ("Ac"), propionila, pivaloila, t- butilacetila e similares; outros grupos acila incluem 2-cloroacetila, 2- bromoacetila, trifluoroacetila, tricloroacetila, ftalila, o-nitrofenoxiacetila, -clorobutirila, benzoíla, 4-clorobenzoíla, 4-bromobenzoíla, 4- nitrobenzoíla e similares; grupos sulfonila tais como benzenossulfonila, p-toluenossulfonila e similares; grupos formadores de carbamato tais como benziloxicarbonila, p-clorobenziloxicarbonila, p- metoxibenziloxicarbonila, p-nitrobenziloxicarbonila, 2- nitrobenziloxicarbonila, p-bromobenziloxicarbonila, 3,4- dimetoxibenziloxicarbonila, 3,5-dimetoxibenziloxicarbonila, 2,4- dimetoxibenziloxicarbonila, 4-etoxibenziloxicarbonila, 2-nitro-4,5- dimetoxibenziloxicarbonila, 3,4,5-trimetoxibenziloxicarbonila, 1-(p- bifenilil)-1-metiletoxicarbonila, α,α-dimetil-3,5- dimetoxibenziloxicarbonila, benzidriloxicarbonila, t-butioxicarbonila, diisopropilmetoxicarbonila, isopropiloxicarbonila, etoxicarbonila, meto- xicarbonila, aliloxicarbonila, 2,2,2,-tricloroetoxicarbonila, fenoxicarboni- la, 4-nitrofenoxicarbonila, fluorenil-9-metoxicarbonila, ciclopentiloxicar- bonila, adamantiloxicarbonila, cicloexiloxicarbonila, feniltiocarbonila e similares; grupos arilalquila tais como benzila, trifenilmetila, benziloxi- metila, 9-fluorenilmetiloxicarbonila (Fmoc) e similares e grupos silila tais como trimetilsilila e similares. Ainda outros exemplos incluem teíla, succinila, metoxisuccinila, subéria, adipila, azelaíla, dansila, benziloxi¬carbonila, metoxiazelalia, metoxiadipila, metoxisuberila, e 2,4- dinitrofenila.
[00090] O termo "grupo de proteção carbóxi" ou "grupo de proteção de terminal C" refere-se a um grupo amida ou éster de proteção de ácido carboxílico empregado para bloquear ou proteger a funcionali¬dade de ácido carboxílico, ao mesmo tempo em que as reações envol¬vendo outros sítios funcionais do composto são realizadas. Os grupos de proteção carbóxi são descritos em Greene, Protective Groups in Organic Synthesis pp. 152-186 (1981), que é aqui incorporado por re¬ferência. Adicionalmente, um grupo de proteção carbóxi pode ser usa¬do como um profármaco pelo qual o grupo de proteção carbóxi pode ser prontamnete clivado in vivo, por exemplo, por hidrólise enzimática, para liberar a origem biologicamente ativa. Tais grupos de proteção carbóxi são bem conhecidos por aqueles versados na técnica, sendo extensivamente usados na proteção de grupos carboxila nos campos de penicilina e cefalosporina, como descrito em Patente dos Estados Unidos Nos 3.840.556 e 3.719.667, as descrições das quais são aqui incorporadas por referência. Os grupos de proteção carbóxi represen¬tativos são C1-C8 alquila inferior (por exemplo, metila, etila ou t-butila e similares); arilalquila tais como fenetila ou benzila e derivados substitu¬ídos dos mesmos tais como grupos alcoxibenzila ou nitrobenzila e si¬milares; arilalquenila tais como feniletenila e similares; arila e deriva¬dos substituídos dos mesmos tais como 5-indanila e similares; dialqui- laminoalquila tais como dimetilaminoetila e similares); grupos alcanoi- loxialquila tais como acetoximetila, butiriloximetila, valeriloximetila, isobutiriloximetila, isovaleriloximetila, 1-(propionilóxi)-1-etila, 1- (pivaloiloxil)-1-etila, 1-metil-1-(propionilóxi)-1-etila, pivaloiloximetila, propioniloximetila e similares; grupos cicloalcanoiloxialquila tais como ciclopropilcarboniloximetila, ciclobutilcarboniloximetila, ciclopentilcar- boniloximetila, cicloexilcarboniloximetila e similares; aroiloxialquila tais como benzoiloximetila, benzoiloxietila e similares; arilalquilcarboniloxi- alquila tais como benzilcarboniloximetila, 2-benzilcarboniloxietila e si¬milares; alcoxicarbonilalquila ou cicloalquiloxicarbonilalquila tais como metoxicarbonilmetila, cicloexiloxicarbonilmetila, 1-metoxicarbonil-1-etila e similares; alcoxicarboniloxialquila ou cicloalquiloxicarboniloxialquila tais como metoxicarboniloximetila, t-butiloxicarboniloximetila, 1- etoxicarbonilóxi-1-etila, 1-cicloexiloxicarbonilóxi-1-etila e similares; ari- loxicarboniloxialquila tais como 2-(fenoxicarbonilóxi)etila, 2-(5- indaniloxicarbonilóxi)etila e similares; alcoxialquilcarboniloxialquila tais como 2-(1-metóxi-2-metilpropan-2-oilóxi)etila e similares; arilalquiloxi- carboniloxialquila tais como 2-(benziloxicarbonilóxi)etila e similares; arilalqueniloxicarboniloxialquila tais como 2-(3-fenilpropen-2- iloxicarbonilóxi)etila e similares; alcoxicarbonilaminoalquila tais como t- butiloxicarbonilaminometila e similares; alquilaminocarbonilaminoalqui- la tais como metilaminocarbonilaminometila e similares; alcanoilami- noalquila tais como acetilaminometila e similares; carboniloxialquila heterocíclica tais como 4-metilpiperazinilcarboniloximetila e similares; dialquilaminocarbonilalquila tais como dimetilaminocarbonilmetila, dieti- laminocarbonilmetila e similares; (5-(alquila inferior)-2-oxo-1,3- dioxolen-4-il)alquila tais como (5-t-butil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)metila e similares; e (5-fenil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)alquila tais como (5-fenil-2- oxo-1,3-dioxolen-4-il)metila e similares. Os grupos de proteção carbóxi amida representativos são grupos aminocarbonila e alquilinferiorami- nocarbonila. Por exemplo, ácido aspártico pode ser protegido no ter¬minal α-C por um grupo lábil de ácido (por exemplo, t-butila) e protegi¬do no terminal β-C por um grupo lábil de hidrogenação (por exemplo, benzila), em seguida, desprotegido seletivamente durante a síntese. Como mencionado acima, o grupo carbóxi protegido pode também ser um éster de alquila inferior, cicloalquila ou arilalquila, por exemplo, me- til éster, etil éster, propil éster, isopropil éster, butil éster, sec-butil és¬ter, isobutil éster, amil éster, isoamil éster, octil éster, cicloexil éster, feniletil éster e similares ou um éster de alcanoiloxialquila, cicloalcanoi- loxialquila, aroiloxialquila ou arilalquilcarboniloxialquila.
[00091] O termo "aminoácido" como usado aqui é um termo de téc¬nica e refere-se a ácidos aminocarboxílicos alfa e beta, incluindo os assim chamados aminoácidos alfa de ocorrência natural e aminoáci- dos de ocorrência não natural. Os aminoácidos alfa de ocorrência na¬tural especificamente incluem alanina (Ala), arginina (Arg), asparagina (Asn), ácido aspártico (Asp), cisteína (Cys), ácido glutâmico (Glu), glu- tamina (Gln), glicina (Gly), histidina (His), isoleucina (Ile), leucina (Leu), lisina (Lys), metionina (Met), ornitina (Orn), fenilalanina (Phe), prolina (Pro), selenocisteína, serina (Ser), taurina, treonina (Thr), triptofan (Trp), tirosina (Tyr), e valina (Val). Os aminoácidos alfa de ocorrência natural polares incluem arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutâmico, glutamina, histidina, lisina, ornitina, serina, treonina, e tirosina. Os aminoácidos alfa de ocorrência natural não polares inclu¬em alanina, glicina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, prolina, triptofan, e valina.
[00092] Aminoácidos de ocorrência não natural incluem, porém não são limitados a, D-aminoácidos (isto é, um aminoácido de uma quirali- dade oposta à forma de ocorrência natural), aminoácidos N-α-metila, aminoácidos C-α-metila, aminoácidos β-metila, β-alanina (β-Ala), nor¬valina (Nva), norleucina (Nle), ácido 4-aminobutírico (Y-Abu), ácido 2- aminoisobutírico (Aib), ácido 6-aminoexanóico (ε-Ahx), ornitina (orn), hidroxiprolina (Hyp), sarcosina, citrulina, ácido cisteíco, cicloexilalani- na, ácido α-amino isobutírico, t-butilglicina, t-butilalanina, ácido 3- aminopropiônico, ácido 2,3-diaminopropiônico (2,3-diaP), D- ou L- fenilglicina, D- ou L-2-naftilalanina (2-Nal), ácido 1,2,3,4- tetraidroisoquinolina-3-carboxílico (Tic), D- ou L-2-tienilalanina (Thi), D¬ou L-3-tienilalanina, D- ou L-1-, 2-, 3- ou 4-pirenilalanina, D- ou L-(2- piridinil)-alanina, D- ou L-(3-piridinil)-alanina, D- ou L-(2-pirazinil)- alanina, D- ou L-(4-isopropil)-fenilglicina, D-(trifluorometil)-fenilglicina, D- (trifluorometil)-fenilalanina, D-p-fluorofenilalanina, D- ou L-p- bifenilalanina, D- ou L-p-metoxibifenilalanina, sulfóxido de metionina (MSO) e homoarginina (Har). Outros exemplos incluem D- ou L-2- indol(alquil)alaninas e D- ou L-alquilalaninas, em que alquila é substitu¬ída ou não substituída metila, etila, propila, hexila, butila, pentila, iso- propila, iso-butila, ou iso-pentila, e aminoácidos não carboxilados fos- fonos ou sulfatados (por exemplo, -SO3H).
[00093] Outros exemplos de aminoácidos de ocorrência não natural incluem 3-(2-clorofenil)-alanina, 3-cloro-fenilalanina, 4-cloro- fenilalanina, 2-fluoro-fenilalanina, 3-fluoro-fenilalanina, 4-fluoro- fenilalanina, 2-bromo-fenilalanina, 3-bromo-fenilalanina, 4-bromo- fenilalanina, homofenilalanina, 2-metil-fenilalanina, 3-metil-fenilalanina, 4-metil-fenilalanina, 2,4-dimetil-fenilalanina, 2-nitro-fenilalanina, 3-nitro- fenilalanina, 4-nitro-fenilalanina, 2,4-dinitro-fenilalanina, ácido 1,2,3,4- tetraidroisoquinolina-3-carboxílico, ácido 1,2,3,4-tetraidronorharman-3- carboxílico, 1-naftilalanina, 2-naftilalanina, pentafluorofenilalanina, 2,4- dicloro-fenilalanina, 3,4-dicloro-fenilalanina, 3,4-difluoro-fenilalanina, 3,5-difluoro-fenilalanina, 2,4,5-trifluoro-fenilalanina, 2-trifluorometil- fenilalanina, 3-trifluorometil-fenilalanina, 4-trifluorometil-fenilalanina, 2- ciano-fenialanina, 3-ciano-fenialanina, 4-ciano-fenialanina, 2-iodo- fenialanina, 3-iodo-fenialanina, 4-iodo-fenialanina, 4-metoxifenilalanina, 2-aminometil-fenilalanina, 3-aminometil-fenilalanina, 4-aminometil- fenilalanina, 2-carbamoil-fenilalanina, 3-carbamoil-fenilalanina, 4- carbamoil-fenilalanina, m-tirosina, 4-amino-fenilalanina, estirilalanina, ácido 2-amino-5-fenil-pentanoico, 9-antrilalanina, 4-terc-butil- fenilalanina, 3,3-difenilalanina, 4,4'-difenilalanina, benzoilfenilalanina, α-metil-fenilalanina, α-metil-4-fluoro-fenilalanina, 4-tiazolilalanina, 3- benzotienilalanina, 2-tienilalanina, 2-(5-bromotienil)-alanina, 3- tienilalanina, 2-furilalanina, 2-piridilalanina, 3-piridilalanina, 4- piridilalanina, ácido 2,3-diaminopropiônico, ácido 2,4-diaminobutírico, alilglicina, ácido 2-amino-4-bromo-4-pentenóico, propargilglicina, ácido 4-aminociclopent-2-enocarboxílico, ácido 3- aminociclopentanocarboxílico, ácido 7-amino-heptanóico, dipropilglici- na, ácido pipecólico, ácido azetidina-3-carboxílico, ciclopropilglicina, ciclopropilalanina, 2-metóxi-fenilglicina, 2-tienilglicina, 3-tienilglicina, α- benzil-prolina, α-(2-fluoro-benzil)-prolina, α-(3-fluoro-benzil)-prolina, α- (4-fluoro-benzil)-prolina, α-(2-cloro-benzil)-prolina, α-(3-cloro-benzil)- prolina, α-(4-cloro-benzil)-prolina, α-(2-bromo-benzil)-prolina, α-(3- bromo-benzil)-prolina, α-(4-bromo-benzil)-prolina, α-fenetil-prolina, α- (2-metil-benzil)-prolina, α-(3-metil-benzil)-prolina, α-(4-metil-benzil)- prolina, α-(2-nitro-benzil)-prolina, α-(3-nitro-benzil)-prolina, α-(4-nitro- benzil)-prolina, α-(1-naftalenilmetil)-prolina, α-(2-naftalenilmetil)-prolina, α-(2,4-dicloro-benzil)-prolina, α-(3,4-dicloro-benzil)-prolina, α-(3,4- difluoro-benzil)-prolina, α-(2-trifluorometil-benzil)-prolina, α-(3- trifluorometil-benzil)-prolina, α-(4-trifluorometil-benzil)-prolina, α-(2- ciano-benzil)-prolina, α-(3-ciano-benzil)-prolina, α-(4-ciano-benzil)- prolina, α-(2-iodo-benzil)-prolina, α-(3-iodo-benzil)-prolina, α-(4-iodo- benzil)-prolina, α-(3-fenil-alil)-prolina, α-(3-fenil-propil)-prolina, α-(4- terc-butil-benzil)-prolina, α-benzidril-prolina, α-(4-bifenilmetil)-prolina, α- (4-tiazolilmetil)-prolina, α-(3-benzo[b]tiofenilmetil)-prolina, α-(2- tiofenilmetil)-prolina, α-(5-bromo-2-tiofenilmetil)-prolina, α-(3- tiofenilmetil)-prolina, α-(2-furanilmetil)-prolina, α-(2-piridinilmetil)- prolina, α-(3-piridinilmetil)-prolina, α-(4-piridinilmetil)-prolina, α-alil- prolina, α-propinil-prolina, Y—benzil—prolina, Y—(2-fluoro-benzil)—prolina, Y— (3-fluoro-benzil)-prolina, Y—(4—fluoro—benzil)—prolina, Y-(2-cloro-benzil)- prolina, Y—(3—cloro—benzil)—prolina, Y—(4—cloro—benzil)—prolina, Y—(2—bromo— benzil)—prolina, Y—(3—bromo—benzil)—prolina, Y—(4—bromo—benzil)—prolina, Y—(2—metil—benzil)—prolina, Y—(3—metil—benzil)—prolina, Y—(4—metil—benzil)— prolina, Y—(2—nitro—benzil)—prolina, Y—(3—nitro—benzil)—prolina, Y—(4—nitro— benzil)—prolina, Y—(1—naftalenilmetil)—prolina, Y—(2—naftalenilmetil)—prolina, Y—(2,4—dicloro—benzil)—prolina, Y—(3,4—dicloro—benzil)—prolina, Y—(3,4— difluoro—benzil)—prolina, Y—(2—trifluorometil—benzil)—prolina, Y—(3— trifluorometil—benzil)—prolina, Y—(4—trifluorometil—benzil)—prolina, Y—(2— ciano—benzil)—prolina, Y—(3—ciano—benzil)—prolina, Y—(4—ciano—benzil)— prolina, Y—(2—iodo—benzil)—prolina, Y—(3—iodo—benzil)—prolina, Y—(4—iodo— benzil)—prolina, Y—(3—fenil—alil—benzil)—prolina, Y—(3—fenil—propil—benzil)— prolina, Y—(4—terc—butil—benzil)—prolina, Y—benzidril—prolina, Y—(4— bifenilmetil)—prolina, Y—(4—tiazolilmetil)—prolina, Y—(3—benzotioienilmetil)— prolina, Y—(2—tienilmetil)—prolina, Y—(3—tienilmetil)—prolina, Y—(2— furanilmetil)-prolina, Y—(2—Piridinilmetil)—prolina, y-(3-piridinilmetil)- prolina, Y—(4—piridinilmetil)—prolina, Y—alil—prolina, Y—propinil—prolina, ácido trans-4-fenil-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2-fluoro-fenil)- pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-fluoro-fenil)-pirrolidina-3- carboxílico, ácido trans-4-(4-fluoro-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2-cloro-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-cloro- fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(4-cloro-fenil)-pirrolidina-3- carboxílico, ácido trans-4-(2-bromo-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, áci¬do trans-4-(3-bromo-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(4- bromo-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2-metil-fenil)- pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-metil-fenil)-pirrolidina-3- carboxílico, ácido trans-4-(4-metil-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2-nitro-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-nitro- fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(4-nitro-fenil)-pirrolidina-3- carboxílico, ácido trans-4-(1-naftil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans- 4-(2-naftil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2,5-dicloro-fenil)- pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2,3-dicloro-fenil)-pirrolidina-3- carboxílico, ácido trans-4-(2-trifluorometil-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-trifluorometil-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(4-trifluorometil-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2- ciano-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-ciano-fenil)- pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(4-ciano-fenil)-pirrolidina-3- carboxílico, ácido trans-4-(2-metóxi-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, áci¬do trans-4-(3-metóxi-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(4- metóxi-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2-hidróxi-fenil)- pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-hidróxi-fenil)-pirrolidina-3- carboxílico, ácido trans-4-(4-hidróxi-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, áci¬do trans-4-(2,3-dimetóxi-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4- (3,4-dimetóxi-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3,5- dimetóxi-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2-piridinil)- pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-piridinil)-pirrolidina-3- carboxílico, ácido trans-4-(6-metóxi-3-piridinil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(4-piridinil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2- tienil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-tienil)-pirrolidina-3- carboxílico, ácido trans-4-(2-furanil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-isopropil-pirrolidina-3-carboxílico, 4-fosfonometil-fenilalanina, benzil-fosfotreonina, (1'-amino-2-fenil-etil)oxirano, (1'-amino-2-cicloexil- etil)oxirano, (1'-amino-2-[3-bromo-fenil]etil)oxirano, (1'-amino-2-[4- (benzilóxi)fenil]etil)oxirano, (1'-amino-2-[3,5-difluoro-fenil]etil)oxirano, (1'-amino-2-[4-carbamoil-fenil]etil)oxirano, (1'-amino-2-[benzilóxi- etil])oxirano, (1'-amino-2-[4-nitro-fenil]etil)oxirano, (1'-amino-3-fenil- propil)oxirano, (1'-amino-3-fenil-propil)oxirano, e/ou sais e/ou grupo de proteção variantes dos mesmos.
[00094] Os aminoácidos beta incluem, sem limitação, beta-alanina (ácido 3-aminopropanóico).
[00095] O termo "composto da invenção" como usado aqui significa um composto de Fórmula I e sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.
[00096] O termo "sal farmaceuticamente aceitável" como usado aqui inclui sais derivados de ácidos inorgânicos ou orgânicos incluindo, por exemplo, hidroclórico, hidrobrômico, sulfúrico, nítrico, perclórico, fosfórico, fórmico, acético, láctico, maleico, fumárico, succínico, tartári- co, glicólico, salicílico, cítrico, metanossulfônico, benzenossulfônico, benzoico, malônico, trifluoroacético, tricloroacético, naftaleno-2- sulfônico, e outros ácidos. As formas de sal farmaceuticamente aceitá¬veis podem incluir formas em que a relação de moléculas compreen¬dendo o sal não é 1:1. Por exemplo, o sal pode compreender mais do que uma molécula de ácido inorgânico ou orgânico por molécula de base, tais como duas moléculas de ácido hidroclórico por molécula de composto de Fórmula I. Como outro exemplo, o sal pode compreender menos do que uma molécula de ácido inorgânico ou orgânico por mo¬lécula de base, tais como duas moléculas de composto de Fórmula I por molécula de ácido tartárico.
[00097] Os termos "portador" e "portador farmaceuticamente acei¬tável" como usado aqui se refere a um diluente, adjuvante, excipiente, ou veículo com o qual um composto é administrado ou formulado para administração. Exemplos não limitantes de tais portadores farmaceuti- camente aceitáveis incluem líquidos, tais como água, salina, e óleos; e sólidos, tais como goma acácia, gelatina, pasta de amido, talco, quera- tina, sílica coloidal, ureia, e similares. Além disso, agentes auxiliares, estabilizantes, espessantes, lubrificantes, aromatizantes, e colorantes podem ser usados. Outros exemplos de portadores farmacêuticos adequados são descritos em Remington's Pharmaceutical Sciences por E.W. Martin, aqui incorporado por referência em sua íntegra.
[00098] O termo "tratar" como usado aqui significa prevenir, deter ou retardar a progressão de, ou eliminar a doença ou condição em um indivíduo. Em uma modalidade "tratar" significa deter ou retardar a progressão de, ou eliminar a doença ou condição em um indivíduo. Em uma modalidade, "tratar" significa reduzir pelo menos uma manifesta¬ção objetiva da doença ou condição.
[00099] O termo "quantidade eficaz" como usado aqui se refere a uma quantidade que seja suficiente para trazer cerca de um efeito bio¬lógico desejado.
[000100] O termo "inibir" como usado aqui significa diminuir por uma quantidade ou extensão objetivamente mensurável. Em várias modali¬dades "inibir" significa diminuir por pelo menos 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, ou 95 porcento comparado ao controle relevante. Em uma modalidade "inibir" significa diminuir 100 porcento, isto é, deter ou eliminar.
[000101] O termo "indivíduo" como usado aqui se refere a um mamí- fero. Em várias modalidades, um indivíduo é um camundongo, rato, coelho, gato, cachorro, porco, ovelha, cavalo, vaca, ou primata não humano. Em uma modalidade um indivíduo é um humano.
[000102] Em certas modalidades, o composto representado pela fórmula I é selecionado do grupo que consiste em:
Figure img0008
mesmos.
[000103] Em certas modalidades, o composto representado pela fórmula I é selecionado do grupo que consiste em
[000104] 2-amino-3-metilbutanoato de (S)-((2R,3R,4S,5S)-5-(4- amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-di-hidroxipirrolidin-2-il)metila;
[000105] 2-amino-3-metilpentanoato de (2S,3S)-((2R,3R,4S,5S)-5-(4- amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-di-hidroxipirrolidin-2-il)metila;
[000106] 2-amino-4-metilpentanoato de (S)-((2R,3R,4S,5S)-5-(4- amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-di-hidroxipirrolidin-2-il)metila;
[000107] bis(2-amino-3-metilbutanoato) de (2S,2'S)-(2S,3S,4R,5R)-2- (4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroximetil)pirrolidina-3,4- di-ila;
[000108] 2-amino-3-metilbutanoato de (S)-(2R,3R,4S,5S)-5-(4- amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-hidróxi-2-(hidroximetil)pirrolidin- 3-ila;
[000109] 2-amino-3-metilbutanoato de (S)-(2S,3S,4R,5R)-2-(4- amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-hidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidin- 3-ila; e
[000110] sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Métodos Gerais de Preparação de Compostos da Invenção:
[000111] Heterociclos e heteroarilas podem ser preparados de méto¬dos conhecidos como reportado na literatura (a. Ring system handbo¬ok, publicado por American Chemical Society edição 1993 e subse¬quentes suplementos. b. The Chemistry of Heterocyclic Compounds; Weissberger, A., Ed.; Wiley: Nova Iorque, 1962. c. Nesynov, E. P.; Grekov, A. P. The chemistry of 1,3,4-oxadiazole derivatives. Russ. Chem. Rev. 1964, 33, 508-515. d. Advances in Heterocyclic Chemis¬try; Katritzky, A. R., Boulton, A. J., Eds.; Academic Press: Nova Iorque, 1966. e. In Comprehensive Heterocyclic Chemistry; Potts, K. T., Ed.; Pergamon Press: Oxford, 1984. f. Eloy, F. A review of the chemistry of 1,2,4-oxadiazoles. Fortschr. Chem. Forsch. 1965, 4, pp 807-876. g. Adv. Heterocycl. Chem. 1976. h. Comprehensive Heterocyclic Chemis¬try; Potts, K. T., Ed.; Pergamon Press: Oxford, 1984. i. Chem. Rev. 1961 61, 87-127. j. 1,2,4-Triazoles; John Wiley & Sons: Nova Iorque, 1981; Vol 37). Grupos funcionais durante a sintase podem necessitar ser protegidos e subsequentemente desprotegidos. Exemplos de gru¬pos de proteção adequados podem ser encontrados em Protective Groups in Organic Synthesis, quarta edição, editada por Greene and Wuts.
[000112] Processos representativos que podem ser usados para preparar compostos da invenção e intermediários úteis para a prepa¬ração dos mesmos são mostrados nos seguintes esquemas.
Figure img0009
Figure img0010
Figure img0011
Figure img0012
Referências para o Esquema 8:
[000113] WO 2011/123586 A1 (incorporado por referência).
[000114] WO 2010/135520 A1 (incorporado por referência).
[000115] WO 2009/069095 A2 (incorporado por referência).
[000116] WO 2009/029729 A1 (incorporado por referência).
[000117] WO 2008/082601 A2 (incorporado por referência).
[000118] WO 2007/022073 A2 (incorporado por referência).
[000119] Hecker, Scott J.; Reddy, K. Raja; van Poelje, Paul D.; Sun, Zhili; Huang, Wenjian; Varkhedkar, Vaibhav; Reddy, M. Venkat; Fujita- ki, James M.; Olsen, David B.; Koeplinger, Kenneth A.; Boyer, Serge H.; Linemeyer, David L.; MacCoss, Malcolm; Erion, Mark D; Journal of Medicinal Chemistry (2007), 50(16), 3891-3896.
[000120] Yadava, Virendra Singh; Asian Journal of Chemistry (2005), 17(4), 2857-2859.
[000121] Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 2005/0182252 A1 (incorporado por referência).
[000122] Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 2005/0070556 A1 (incorporado por referência).
[000123] Reitz, Allen B.; Goodman, Michael G.; Pope, Barbara L.; Argentieri, Dennis C.; Bell, Stanley C.; Burr, Levelle E.; Chourmouzis, Erika; Come, Jon; Goodman, Jacquelyn H.; Klaubert, Dieter H.; Maryanoff, Bruce E.; McDonnell, Mark E.; Rampulla, Marianne S.; Schott, Mary R.; Chen, Robert; Journal of Medicinal Chemistry (1994), 37(21), 3561-78. Esquema 9
Figure img0013
Referências para o Esquema 9
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[000125] Kaji, Akira. (Japan) (1988), 5 pp. CODEN: JKXXAF JP 63135399 Uma patente 19880607 escrita em japonês. Pedido: JP 1986-282021 19861128. Esquema 10
Figure img0014
Figure img0015
Referências para o Esquema 10:
[000126] Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 2010/0203015 A1 (incorporado por referência).
[000127] WO 2009/132123 A1 (incorporado por referência).
[000128] Hatton, Wilfried; Hunault, Julie; Egorov, Maxim; Len, Chris-tophe; Pipelier, Muriel; Blot, Virginie; Silvestre, Virginie; Fargeas, Vale¬rie; Ane, Adjou; McBrayer, Tami; Detorio, Mervi; Cho, Jong-Hyun; Bourgougnon, Nathalie; Dubreuil, Didier; Schinazi, Raymond F.; Lebre- ton, Jacques; European Journal of Organic Chemistry (2011), 2011(36), 7390-7399.
[000129] Zhang, Hong-wang; Zhou, Longhu; Coats, Steven J.; McBrayer, Tamara R.; Tharnish, Phillip M.; Bondada, Lavanya; Detorio, Mervi; Amichai, Sarah A.; Johns, Melissa D.; Whitaker, Tony; Schinazi, Raymond F; Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2011), 21(22), 6788-6792.
[000130] Ross, Bruce S.; Ganapati Reddy, P.; Zhang, Hai-Ren; Ra- chakonda, Suguna; Sofia, Michael J; Journal of Organic Chemistry (2011), 76(20), 8311-8319.
[000131] McGuigan, Christopher; Madela, Karolina; Aljarah, Mo¬hamed; Gilles, Arnaud; Battina, Srinivas K.; Ramamurty, Changalvala V. S.; Srinivas Rao, C.; Vernachio, John; Hutchins, Jeff; Hall, Andrea; Kolykhalov, Alexander; Henson, Geoffrey; Chamberlain, Stanley; Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2011), 21(19), 6007-6012.
[000132] Cho, Jong Hyun; Amblard, Franck; Coats, Steven J.; Schi- nazi, Raymond F; Tetrahedron (2011), 67(30), 5487-5493.
[000133] WO 2010/135520 A1 (incorporado por referência).
[000134] Perlikova, Pavla; Pohl, Radek; Votruba, Ivan; Shih, Robert; Birkus, Gabriel; Cihlar, Tomas; Hocek, Michal; Bioorganic & Medicinal Chemistry (2011), 19(1), 229-242.
[000135] WO 2010/108135 A1 (incorporado por referência).
[000136] WO 2010/130726 A1 (incorporado por referência).
[000137] WO 2010/030858 A1 (incorporado por referência).
[000138] WO 2010/108140 A1 (incorporado por referência).
[000139] WO 2010/026153 A1 (incorporado por referência).
[000140] WO 2010/081082 A2 (incorporado por referência).
[000141] McGuigan, Christopher; Madela, Karolina; Aljarah, Moha¬med; Gilles, Arnaud; Brancale, Andrea; Zonta, Nicola; Chamberlain, Stanley; Vernachio, John; Hutchins, Jeff; Hall, Andrea; Ames, Brenda; Gorovits, Elena; Ganguly, Babita; Kolykhalov, Alexander; Wang, Jin; Muhammad, Jerry; Patti, Joseph M.; Henson, Geoffrey; Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2010), 20(16), 4850-4854.
[000142] Derudas, Marco; Brancale, Andrea; Naesens, Lieve; Neyts, Johan; Balzarini, Jan; McGuigan, Christopher; Bioorganic & Medicinal Chemistry (2010), 18(7), 2748-2755.
[000143] Mehellou, Youcef; Valente, Rocco; Mottram, Huw; Walsby, Elisabeth; Mills, Kenneth I.; Balzarini, Jan; McGuigan, Christopher; Bioorganic & Medicinal Chemistry (2010), 18(7), 2439-2446.
[000144] McGuigan, Christopher; Gilles, Arnaud; Madela, Karolina; Aljarah, Mohamed; Holl, Sabrina; Jones, Sarah; Vernachio, John; Hutchins, Jeff; Ames, Brenda; Bryant, K. Dawn; Gorovits, Elena; Gan-guly, Babita; Hunley, Damound; Hall, Andrea; Kolykhalov, Alexander; Liu, Yule; Muhammad, Jerry; Raja, Nicholas; Walters, Robin; Wang, Jin; Chamberlain, Stanley; Henson, Geoffrey; Journal of Medicinal Chemistry (2010), 53(13), 4949-4957.
[000145] Leisvuori, Anna; Aiba, Yuichiro; Loennberg, Tuomas; Poi- jaervi-Virta, Paeivi; Blatt, Laurence; Beigelman, Leo; Loennberg, Harri; Organic & Biomolecular Chemistry (2010), 8(9), 2131-2141.
[000146] Mehellou, Youcef; Balzarini, Jan; McGuigan, Christopher; Antiviral Chemistry & Chemotherapy (2010), 20(4), 153-160.
[000147] Rondla, Ramu; Coats, Steven J.; McBrayer, Tamara R.; Grier, Jason; Johns, Melissa; Tharnish, Phillip M.; Whitaker, Tony; Zhou, Longhu; Schinazi, Raymond F; Antiviral Chemistry & Chemo¬therapy (2009), 20(2), 99-106.
[000148] WO 2008/121941 A1 (incorporado por referência).
[000149] WO 2009/086192 A1 (incorporado por referência).
[000150] McGuigan, Christopher; Kelleher, Mary Rose; Perrone, Pli- nio; Mulready, Sinead; Luoni, Giovanna; Daverio, Felice; Rajyaguru, Sonal; Le Pogam, Sophie; Najera, Isabel; Martin, Joseph A.; Klumpp, Klaus; Smith, David B; Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2009), 19(15), 4250-4254.
[000151] McGuigan, Christopher; Perrone, Plinio; Madela, Karolina; Neyts, Johan; Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2009), 19(15), 4316-4320. Esquema 11
Figure img0016
Referências para o Esquema 11:
[000152] WO 2011/150016 A1 (incorporado por referência).
[000153] WO 2010/150761 A1 (incorporado por referência).
[000154] WO 2011/068899 A1 (incorporado por referência).
[000155] WO 2011/084849 A1 (incorporado por referência).
[000156] Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 2011/0166128 A1 (incorporado por referência).
[000157] WO 2011/084846 A1 (incorporado por referência).
[000158] CN 102060874 A.
[000159] WO 2011/031979 A1 (incorporado por referência).
[000160] WO 2011/002999 A1 (incorporado por referência).
[000161] WO 2010/064735 A1 (incorporado por referência).
[000162] WO 2010/036638 A2 (incorporado por referência).
[000163] WO 2010/079443 A1 (incorporado por referência).
[000164] WO 2010/010017 A1 (incorporado por referência).
[000165] WO 2010/093789 A2 (incorporado por referência). Esquema 12
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Referências para composto de aldeído de Garner 12a:
[000166] Upadhyay, Puspesh K.; Kumar, Pradeep; Synthesis (2010), (18), 3063-3066.
[000167] Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 2010/0152098 A1 (incorporado por referência).
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[000170] Osada, Satoshi; Ishimaru, Takako; Kawasaki, Hiroshi; Ko- dama, Hiroaki; Heterocycles (2006), 67(1), 421-431.
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[000172] Dondoni, Alessandro; Perrone, Daniela; Organic Syntheses (2000), 77 64-77.
[000173] Campbell, Andrew D.; Raynham, Tony M.; Taylor, Richard J. K; Synthesis (1998), (12), 1707-1709.
[000174] Referências para reação Wittig relacionada com o compos¬to 12b:
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[000179] Thander, Latibuddin; Sarkar, Kaushik; Chattopadhyay, Shi- tal K; Tetrahedron: Asymmetry (2009), 20(11), 1213-1216.
[000180] Chiou, Wen-Hua; Schoenfelder, Angele; Mann, Andre; Oji- ma, Iwao; Pure and Applied Chemistry (2008), 80(5), 1019-1024.
[000181] Ribes, Celia; Falomir, Eva; Carda, Miguel; Marco, J. Alber¬to; Journal of Organic Chemistry (2008), 73(19), 7779-7782.
[000182] Mochizuki, Akiyoshi; Naito, Hiroyuki; Nakamoto, Yumi; Uoto, Kouichi; Ohta, Toshiharu; Heterocycles (2008), 75(7), 1659-1671.
[000183] Spangenberg, Thomas; Schoenfelder, Angele; Breit, Bernhard; Mann, Andre; Organic Letters (2007), 9(20), 3881-3884.
[000184] Lebel, Helene; Ladjel, Chehla; Organometallics (2008), 27(11), 2676-2678.
[000185] Liu, Fa; Hu, Tai-Shan; Yao, Zhu-Jun; Tetrahedron (2005), 61(21), 4971-4981.
[000186] Shigeki Sano, Tomoka Takehisa, Shiho Ogawa, Kenji yokoyama and Yoshimitsu Nagao Chem. Pharm. Bull. 50 (9) 1300¬1302 (2002).
[000187] Raghavan, Sadagopan; Rajender, A.; Joseph, Suju C.; Rasheed, M. Abdul; Ravi Kumar, K; Tetrahedron: Asymmetry (2004), 15(2), 365-379.
[000188] Referências para Di-hidroxilação para os compostos relaci-onados a 12c:
[000189] Dondoni, Alessandro; Merino, Pedro; Perrone, Daniela; Te-trahedron (1993), 49(14), 2939-56.
[000190] Ribes, Celia; Falomir, Eva; Carda, Miguel; Marco, J. Alber¬to; Journal of Organic Chemistry (2008), 73(19), 7779-7782.
[000191] Upadhyay, Puspesh K.; Kumar, Pradeep; Synthesis (2010), (18), 3063-3066. Referência relacionada à sintase de base 12e:
[000192] Bambuch, Vitezslav; Otmar, Miroslav; Pohl, Radek; Maso- jidkova, Milena; Holy, Antonin; Tetrahedron (2007), 63(7), 1589-1601. Esquema 13
Figure img0018
Referências para preparação de composto 13a:
[000193] Mishra, Girija Prasad; Rao, Batchu Venkateswara; Tetrahe¬dron: Asymmetry (2011), 22(7), 812-817.
[000194] Brock, E. Anne; Davies, Stephen G.; Lee, James A.; Ro¬berts, Paul M.; Thomson, James E; Organic Letters (2011), 13(7), 1594-1597.
[000195] WO 2010/085377 A2 (incorporado por referência).
[000196] Yadav, J. S.; Reddy, P. Narayana; Reddy, B. V. Subba; Synlett (2010), (3), 457-461.
[000197] Song, Kai; Zheng, Guo-jun; Huaxue Shiji (2010), 32(2), 171¬172.
[000198] Prabhakar, Peddikotla; Rajaram, Singanaboina; Reddy, Dorigondla Kumar; Shekar, Vanam; Venkateswarlu, Yenamandra; Tet-rahedron: Asymmetry (2010), 21(2), 216-221.
[000199] CN 101182342 A.
[000200] Baird, Lynton J.; Timmer, Mattie S. M.; Teesdale-Spittle, Paul H.; Harvey, Joanne E; Journal of Organic Chemistry (2009), 74(6), 2271-2277.
[000201] Wang, Xiang-cheng; Wang, Gang; Qu, Gang-lian; Huaxue Shijie (2008), 49(4), 226-228.
[000202] Ivanova, N. A.; Valiullina, Z. R.; Shitikova, O. V.; Miftakhov, M. S; Russian Journal of Organic Chemistry (2007), 43(5), 742-746.
[000203] Braga, Fernanda Gambogi; Coimbra, Elaine Soares; Matos, Magnum de Oliveira; Lino Carmo, Arturene Maria; Cancio, Marisa Da-mato; da Silva, Adilson David; European Journal of Medicinal Chemis¬try (2007), 42(4), 530-537.
[000204] Wender, Paul A.; Bi, F. Christopher; Buschmann, Nicole; Gosselin, Francis; Kan, Cindy; Kee, Jung-Min; Ohmura, Hirofumi; Organic Letters (2006), 8(23), 5373-5376.
[000205] 13. Fei, Xiangshu; Wang, Ji-Quan; Miller, Kathy D.; Sledge, George W.; Hutchins, Gary D.; Zheng, Qi-Huang; Nuclear Medicine and Biology (2004), 31(8), 1033-1041.
[000206] 14. Abdel-Rahman, Adel A.-H.; Abdel-Megied, Ahmed E.-S.; Goda, Adel E.-S.; Zeid, Ibrahim F.; El Ashry, El Sayed H; Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids (2003), 22(11), 2027-2038.
[000207] 15. Palmer, Andreas M.; Jager, Volker; European Journal of Organic Chemistry (2001), (7), 1293-1308.
[000208] 16. Paquette, Leo A.; Bailey, Simon; Journal of Organic Chemistry (1995), 60(24), 7849-56.
[000209] 17. Classon, Bjoern; Liu, Zhengchun; Samuelsson, Bertil; Journal of Organic Chemistry (1988), 53(26), 6126-30.
[000210] 18. Kissman, Henry M.; Baker, B. R; Journal of the Ameri¬ can Chemical Society (1957), 79 5534-40. Referências para ciclizações relacionadas com a preparação de com-postos de tipo 13d:
[000211] Davies, Stephen G.; Durbin, Matthew J.; Goddard, Euan C.; Kelly, Peter M.; Kurosawa, Wataru; Lee, James A.; Nicholson, Rebec¬ca L.; Price, Paul D.; Roberts, Paul M.; Russell, Angela J.; Scott, Philip M.; Smith, Andrew D; Organic & Biomolecular Chemistry (2009), 7(4), 761-776.
[000212] Davies, Stephen G.; Nicholson, Rebecca L.; Price, Paul D.; Roberts, Paul M.; Russell, Angela J.; Savory, Edward D.; Smith, An¬drew D.; Thomson, James E; Tetrahedron: Asymmetry (2009), 20(6-8), 758-772.
[000213] Davies, Stephen G.; Nicholson, Rebecca L.; Price, Paul D.; Roberts, Paul. M.; Smith, Andrew D; Synlett (2004), (5), 901-903.
[000214] Brock, E. Anne; Davies, Stephen G.; Lee, James A.; Ro¬berts, Paul M.; Thomson, James E; Organic Letters (2011), 13(7), 1594-1597.
[000215] Gary B. Evans, Richard H. Furneaux, Andrzej Lewandowicz, Vern L. Schramm, e Peter C. Tyler, Journal of Medicinal Chemistry (2003), 46, 3412-3423.
Figure img0019
Referências para o Esquema 15:
[000216] Chenevert, Robert; Jacques, Frederic; Giguere, Pascall; Dasser, Mohammed; Tetrahedron: Asymmetry (2008), 19(11), 1333- 1338.
[000217] Donohoe, Timothy J.; Thomas, Rhian E.; Cheeseman, Mat¬thew D.; Rigby, Caroline L.; Bhalay, Gurdip; Linney, Ian D; Organic Let¬ters (2008), 10(16), 3615-3618.
[000218] Hanessian, Stephen; Therrien, Eric; Warrier, Jayakumar S.; Charron, Guillaume; Heterocycles (2006), 70 461-476.
[000219] Hamada, Yasumasa; Kawai, Akiyoshi; Kohno, Yasushi; Ha¬ra, Osamu; Shioiri, Takayuki; Journal of the American Chemical Socie- ty (1989), 111(4), 1524-5. (para Álcool a Ciano).
Figure img0020
Legenda: Acetona; Base; 3 equivalentes Referências para o Esquema 17:
[000220] Nikolaos G. Argyropoulos and Vassiliki C. Sarli; Tetrahe¬dron Letters 45 (2004) 4237-4240.
[000221] Yuji Matsuya, Sho-ichi Takayanagi, e Hideo Nemoto; Chem¬istry A European Journal 2008, 14, 5275-5281.
[000222] Hyo-Joong; Ricardo, Alonso; Illangkoon, Heshan I.; Kim, Myong Jung; Carrigan, Matthew A.; Frye, Fabianne; Benner, Steven A; Journal of the American Chemical Society (2011), 133(24), 9457-9468.
[000223] Paudyal, Mahesh P.; Rath, Nigam P.; Spilling, Christopher D; Organic Letters (2010), 12(13), 2954-2957.
[000224] Scarpi, Dina; Occhiato, Ernesto G.; Guarna, Antonio. Dipar- timento di Chimica Organica 'U. Schiff; Tetrahedron: Asymmetry (2009), 20(3), 340-350.
[000225] WO 2008/108508 A1 (incorporado por referência).
[000226] WO 2008/010776 A1 (incorporado por referência).
[000227] Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 2007/0265333 A1 (incorporado por referência).
[000228] Vu, Nguyen Quang; Chai, Christina L. L.; Lim, Kok Peng; Chia, Sze Chen; Chen, Anqi; Tetrahedron (2007), 63(30), 7053-7058.
[000229] WO 99/21858 A1 (incorporado por referência).
[000230] Bambuch, Vitezslav; Otmar, Miroslav; Pohl, Radek; Maso- jidkova, Milena; Holy, Antonin; Tetrahedron (2007), 63(7), 1589-1601.
Figure img0021
Legenda: Base Relatório Descritivo da Patente de Invenção para PEDIDO RELACIONADO
[000231] Este pedido reivindica o benefício de prioridade para o Pe¬dido de Patente Provisional dos Estados Unidos No. 61/625.994, de¬positado em 18 de abril de 2012.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[000232] Viroses são responsáveis por muitas doenças infecciosas em animais, incluindo mamíferos e humanos em particular. Ao contrá¬rio de infecções com bactérias, relativamente poucos agentes são efe¬tivos para a prevenção e tratamento de infecções virais. A biologia de doenças virais e atualmente bem entendida, incluindo transcrição, translação e replicação de genoma viral. Em viroses contendo RNA uma importante enzima é a RNA polimerase dependente de RNA, que é responsável pela replicação de genoma viral. A RNA polimerase de¬pendente do RNA é uma proteína essencial codificada nos genomas de todas as viroses que contêm RNA sem nenhum estágio de DNA que tem RNA de sentido negativo. A enzima catalisa a sintase do fila¬mento de RNA complementar a um determinado padrão de RNA. Por que a replicação do vírus depende da RNA polimerase, esta enzima é um alvo promissor no desenvolvimento de novos compostos antivirais. SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[000233] A invenção fornece compostos de fórmula I, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, para uso na inibição de atividade de RNA polimerase viral ou replicação viral, e tratamento de infecções virais. Os compostos são caracterizados, em parte, por far- macocinéticos favoráveis para o ingrediente farmacêutico ativo, parti-cularmente em conjunto com a administração enteral, incluindo, em particular, a administração oral. A invenção também fornece composi-ções farmacêuticas compreendendo um ou mais compostos de fórmu¬la I, ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, bem como métodos para a preparação dos mesmos. São também fornecidos mé¬todos para a inibição de atividade de RNA polimerase viral, replicação viral, e tratamento de infecções virais.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[000234] A Figura 1 é um gráfico que representa os farmacocinéti- cos de plasma de composto 12i após administração oral de dose única do composto 12i (triângulos, controle) e composto 30f (círculos, expe-rimental) a ratos. N = 4 por grupo.
[000235] A Figura 2 é um gráfico que representa os efeitos de com¬posto 12i (COMPOSTO 1) sobre a sobrevivência de hamsters infecta¬dos com vírus da Febre Amarela. **, P<0,01 em comparação ao pla¬cebo. ***, P<0,001 em comparação ao placebo. dpi, dias após a infec¬ção.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[000236] Um aspecto da invenção é um composto representado pela fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:
Figure img0022
em que:
[000237] L1, L2, L3, L4, L5, e L6, cada independentemente, são uma ligação ou um ligador -C(R0)2-O-;
[000238] R0, independentemente para cada ocorrência, é H ou (C1- C6)alquila;
[000239] R1, R2, e R3, cada independentemente, são selecionados do grupo que consiste em H, aminoacila, aminotionila, acila, R10OC(O)-, fosforila, e aminofosforila; ou R1 e R2, tomados juntos, ou R2 e R3, tomados juntos, são selecionados do grupo que consiste em carbonila, tiocarbonila, fosforila, e (C1-C6)alquilfosforila;
[000240] R4, R5, e R6, cada independentemente, são selecionados do grupo que consiste em H, acila, fosforila, alquiltio, R10OC(O)-, e aminoalquila;
[000241] R7 é H; ou R6, R7, e o nitrogênio ao qual eles são ligados, tomados juntos, representam -N=CR20R21;
[000242] R10, independentemente para cada ocorrência, é seleciona¬do do grupo que consiste em H, (C1-C6)alquila, arila, heteroarila, aral- quila, e heteroaralquila;
[000243] R20 e R21, cada independentemente, são selecionados do grupo que consiste em H, alquila, amino, arila, heteroarila, aralquila, e heteroaralquila;
[000244] contanto que o composto representado pela fórmula I não seja
Figure img0023
[000245] Em certas modalidades o composto de fórmula I é um com¬posto representado pela fórmula IA, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:
Figure img0024
[000246] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, L1-R1 é H.
[000247] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, L2-R2 é H.
[000248] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, L3-R3 é H.
[000249] Alternativamente, em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, L2-R2 e L3-R3 são idênticos.
[000250] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, cada de L2-R2 e L3-R3 é H.
[000251] Alternativamente, em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, L1-R1 e L3-R3 são idênticos.
[000252] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, L1-R1 e L2-R2 são idênticos.
[000253] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, cada de L1-R1 e L2-R2 é H.
[000254] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, cada de L1-R1 e L3-R3 é H.
[000255] Alternativamente, em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, L1-R1, L2-R2, e L3-R3 são idênticos; e ne-nhum de L1-R1, L2-R2, e L3-R3 é H.
[000256] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, independentemente para cada ocorrência aminoacila é - C(=O)CH(NH2)(CH2)nCHR30R31, em que n é 0 ou 1; e R30 e R31 cada independentemente são selecionados do grupo que consiste em H, (C1-C6)alquila, arila, heteroarila, aralquila, e heteroaralquila.
[000257] Em certas modalidades, R30 e R31 cada independentemente são selecionados do grupo que consiste em H e (C1-C6)alquila.
[000258] Em certas modalidades, R30 e R31 cada independentemente são (C1-C6)alquila.
[000259] Em certas modalidades, n é 0; e R30 e R31 cada indepen-dentemente são metila.
[000260] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, independentemente para cada ocorrência aminotionila é - C(=S)CH(NH2)(CH2)nCHR30R31, em que n é 0 ou 1; e R30 e R31 cada independentemente são selecionados do grupo que consiste em H, (C1-C6)alquila, arila, heteroarila, aralquila, e heteroaralquila.
[000261] Em certas modalidades, R30 e R31 cada independentemente são selecionados do grupo que consiste em H e (C1-C6)alquila.
[000262] Em certas modalidades, R30 e R31 cada independentemente são (C1-C6)alquila.
[000263] Em certas modalidades, n é 0; e R30 e R31 cada indepen-dentemente são metila.
[000264] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, independentemente para cada ocorrência acila é - C(=O)R40, em que R40 é selecionado do grupo que consiste em H, (C1- C6)alquila, arila, heteroarila, aralquila, e heteroaralquila.
[000265] Em certas modalidades, R40 é H.
[000266] Em certas modalidades, R40 é (C1-C6)alquila.
[000267] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, independentemente para cada ocorrência R10 é H.
[000268] Alternativamente, em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, independentemente para cada ocorrên¬cia R10 é (C1-C6)alquila.
[000269] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, independentemente para cada ocorrência aminofosforila é -P(=O)(OR50)NR51R52, em que
[000270] R50 é selecionado do grupo que consiste em H, (C1- C6)alquila, arila, arilalquila, heteroarila, heteroaralquila, e -(CH2)mSC(=O)C(CH3)2CH2OH;
[000271] m é 1 ou 2;
[000272] R51 é H ou (C1-C6)alquila; e
[000273] R52 é selecionado do grupo que consiste em H, (C1- C6)alquila, arila, aralquila, heteroarila, heteroaralquila, e - CR60R61C(=O)OR62, em que
[000274] R60 e R61 cada independentemente são H ou (C1-C6)alquila; e
[000275] R62 é selecionado do grupo que consiste em H, (C1- C6)alquila, arila, aralquila, heteroarila, heteroaralquila.
[000276] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R50 é H.
[000277] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R50 é arila.
[000278] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R50 é -(CH2)mSC(=O)C(CH3)2CH2OH.
[000279] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, m é 2.
[000280] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R51 é H.
[000281] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R52 é aralquila.
[000282] Alternativamente, em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R52 é -CR60R61C(=O)OR62.
[000283] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R60 é H; R61 é (C1-C6)alquila; e R62 é (C1-C6)alquila.
[000284] Em certas modalidades, o composto de fórmula I é um composto representado pela fórmula IB, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:
Figure img0025
[000285] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R7 é H; cada de L4, L5, e L6 é uma ligação; e cada de quaisquer dois de R4, R5, e R6 é H.
[000286] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, cada de R4 e R5 é H.
[000287] Alternativamente, em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, cada de R5 e R6 é H.
[000288] Alternativamente, em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, cada de R4 e R6 é H.
[000289] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R10 de qualquer R10OC(O)- de R4, R5, e R6 é H ou (C1- C6)alquila.
[000290] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, qualquer aminoalquila de R4, R5, e R6 é -CH2N(CH3)2.
[000291] Em certas modalidades, cada de L4, L5, e L6 é uma ligação; e R6, R7, e o nitrogênio ao qual eles são ligados, tomados juntos, re¬presentam -N=CR20R21.
[000292] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, R20 é H e R21 é amino.
[000293] Em certas modalidades de acordo com qualquer uma das anteriores, cada de R4 e R5 é H.
[000294] Alternativamente, em certas modalidades R7 é H; pelo me¬nos um de L4, L5, e L6 é um ligador de -C(R0)2-O-; e qualquer R4, R5, ou R6 ligado a pelo menos um ligador de -C(R0)2-O- é fosforila. Definições
[000295] O termo "alquila" como usado aqui é um termo de técnica e refere-se a grupos alifáticos saturados, incluindo grupos alquila de ca-deia linear, grupos alquila de cadeia ramificada, grupos cicloalquila (alicíclico), grupos cicloalquila substituídos por alquila, e grupos alquila substituídos por cicloalquila. Em certas modalidades, uma alquila de cadeia linear ou cadeia ramificada tem cerca de 30 ou menos átomos de carbono em seu esqueleto (por exemplo, C1-C30 para cadeia linear, C3-C30 para cadeia ramificada), e alternativamente, cerca de 20 ou menos. Da mesma maneira, cicloalquilas têm de cerca de 3 a cerca de 10 átomos de carbono em sua estrutura de anel, e alternativamente cerca de 5, 6 ou 7 carbonos na estrutura de anel.
[000296] O termo "amino" é um termo de técnica e como usado aqui se refere a ambas as aminas não substituídas e substituídas, por exemplo, uma porção que pode ser representada pelas fórmulas ge¬rais:
Figure img0026
em que Ra, Rb, e Rc cada independentemente representa um hidrogê¬nio, uma alquila, uma alquenila, -(CH2)x-Rd, ou Ra e Rb, tomados juntos com o átomo de N ao qual eles são ligados completam um heterociclo tendo de 4 a 8 átomos na estrutura de anel; Rd representa uma arila, um cicloalquila, um cicloalquenila, um heterociclila ou um policiclila; e x é zero ou um número inteiro na faixa de 1 a 8. Em certas modalidades, somente um de Ra ou Rb pode ser um carbonila, por exemplo, Ra, Rb, e o nitrogênio juntos não formam uma imida. Em outras modalidades, Ra e Rb (e opcionalmente Rc) cada independentemente representa um hidrogênio, uma alquila, uma alquenila, ou -(CH2)x-Rd.
[000297] O termo "acila" é um termo de técnica e como usado aqui se refere a qualquer grupo ou radical da forma RCO- onde R é qual¬quer grupo orgânico, por exemplo, alquila, arila, heteroarila, aralquila, e heteroaralquila. Grupos acila representativos incluem acetila, benzoí- la, e malonila.
[000298] O termo "aminoalquila" como usado aqui se refere a um grupo alquila substituído com um ou mais grupos amino.
[000299] O termo "aminoacila" é um termo de técnica e como usado aqui se refere a um grupo acila substituído com um ou mais grupos amino.
[000300] O termo "aminotionila" como usado aqui se refere a um análogo de um aminoacila em que o O de RC(O)- foi substituído por enxofre, portanto é da forma RC(S)-.
[000301] O termo "fosforila" é um termo de técnica e como usado aqui pode em geral ser representado pela fórmula:
Figure img0027
em que Q50 representa S ou O, e R59 representa hidrogênio, uma ari- la ou alquila inferior; por exemplo, -P(O)(OMe)- ou -P(O)(OH)2. Quan¬do usado para substituir, por exemplo, uma alquila, o grupo fosforila do fosforilalquila pode ser representado pelas fórmulas gerais:
Figure img0028
em que Q50 e R59, cada independentemente, são definidos acima, e Q51 representa O, S ou N; por exemplo, -O-P(O)(OH)OMe ou -NH- P(O)(OH)2. Quando Q50 for S, a porção fosforila é um "fosforotioato."
[000302] O termo "aminofosforila" como usado aqui se refere a um grupo fosforila substituído com pelo menos um grupo amino, como de¬finido aqui; por exemplo, -P(O)(OH)NMe2.
[000303] O termo "carbonila" como usado aqui se refere a -C(O)-.
[000304] O termo "tiocarbonila" como usado aqui se refere a -C(S)-.
[000305] O termo "alquilfosforila" como usado aqui se refere a um grupo fosforila substituído com pelo menos um grupo alquila, como definido aqui; por exemplo, -P(O)(OH)Me.
[000306] O termo "alquiltio" como usado aqui se refere a alquil-S-.
[000307] O termo "arila" é um termo de técnica e como usado aqui se refere a incluir grupos hidrocarboneto aromáticos monocíclicos, bi- cíclicos e policíclicos, por exemplo, benzeno, naftaleno, antraceno, e pireno. O anel aromático pode ser substituído em uma ou mais posi¬ções de anel com um ou mais substituintes, tais como porções de ha- logênio, azida, alquila, aralquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, hidro- xila, alcoxila, amino, nitro, sulfidrila, imino, amido, fosfonato, fosfinato, carbonila, carboxila, silila, éter, alquiltio, sulfonila, sulfonamido, cetona, aldeído, éster, heterociclila, aromático ou heteroaromático, fluoroalqui- la (tais como triflurometila), ciano, ou similares. O termo "arila" também inclui sistemas de anel policíclicos tendo dois ou mais anéis cíclicos em que dois ou mais carbonos são comuns aos dois anéis adjacentes (os anéis são "anéis fundidos") em que pelo menos um dos anéis é um hidrocarboneto aromático, por exemplo, os outros anéis cíclicos po¬dem ser cicloalquilas, cicloalquenilas, cicloalquinilas, arilas, heteroari- las, e/ou heterociclilas.
[000308] O termo "heteroátomo" é reconhecido na técnica, e inclui um átomo de qualquer elemento exceto carbono ou hidrogênio. Hete- roátomos ilustrativos incluem boro, nitrogênio, oxigênio, fósforo, enxo¬fre e selênio, e alternativamente oxigênio, nitrogênio ou enxofre.
[000309] O termo "heteroarila" é um termo de técnica e como usado aqui se refere a um grupo aromático monocíclico, bicíclico e policíclico tendo um ou mais heteroátomos na estrutura de anel, por exemplo, pirrol, furano, tiofeno, imidazol, oxazol, tiazol, triazol, pirazol, piridina, pirazina, piridazina e pirimidina, e similares. O "heteroarila" pode ser substituído em uma ou mais posições de anel com um ou mais substi- tuintes tais como porções de halogênio, azida, alquila, aralquila, al- quenila, alquinila, cicloalquila, hidroxila, alcoxila, amino, nitro, sulfidrila, imino, amido, fosfonato, fosfinato, carbonila, carboxila, silila, éter, al- quiltio, sulfonila, sulfonamido, cetona, aldeído, éster, heterociclila, aromático ou heteroaromático, fluoroalquila (tais como triflurometil), ciano, ou similares. O termo "heteroarila" também inclui sistemas de anel policíclicos tendo dois ou mais anéis cíclicos em que dois ou mais carbonos são comuns aos dois anéis adjacentes (os anéis são "anéis fundidos") em que pelo menos um dos anéis é um grupo aromático tendo um ou mais heteroátomos na estrutura de anel, por exemplo, os outros anéis cíclicos podem ser cicloalquilas, cicloalquenilas, cicloal- quinilas, arilas, heteroarilas, e/ou heterociclilas.
[000310] O termo "aralquila" é um termo de técnica e como usado aqui se refere a um grupo alquila substituído com um grupo arila.
[000311] O termo "heteroaralquila" é um termo de técnica e como usado aqui se refere a um grupo alquila substituído com um grupo he- teroarila.
[000312] Certos compostos contidos em composições da presente invenção podem existir em formas geométricas ou estereoisoméricas particulares. Além disso, compostos da presente invenção podem também ser oticamente ativos. A presente invenção contempla todos tais compostos, incluindo isômeros cis e trans, enantiômeros (R) e (S), diastereoisômeros, isômeros (D), isômeros (L), as misturas racêmicas dos mesmos, e outras misturas dos mesmos, como abrangido pelo escopo da invenção. Átomos de carbono assimétricos adicionais po¬dem estar presentes em um substituinte tal como um grupo alquila. Todos os tais isômeros, bem como misturas dos mesmos, são desti¬nados a ser incluídos nesta invenção.
[000313] Se, por exemplo, um enantiômero particular de composto da presente invenção for desejado, ele pode ser preparado por síntese assimétrica, ou por derivação com um auxiliar quiral, onde a mistura diastereomérica resultante é separada e o grupo auxiliar clivado para fornecer os enantiômeros desejados puros. Alternativamente, onde a molécula contém um grupo funcional básico, tais como amino, ou um grupo funcional acídico, tal como carboxila, sais diastereoméricos são formados com uma base ou ácido oticamente ativo apropriado, segui¬do por resolução dos diastereômeros desse modo formados por crista-lização fracional ou meios cromatográficos bem conhecidos na técnica, e subsequente recuperação dos enantiômeros puros.
[000314] Será entendido que "substituição" ou "substituída com" in¬clui a condição implícita de que tal substituição está de acordo com a valência permitida do átomo substituído e o substituinte, e que a subs¬tituição resulta de um composto estável, por exemplo, que não sofra espontaneamente transformação tais como por redisposição, cicliza- ção, eliminação, ou outra reação.
[000315] O termo "substituído" é também contemplado para incluir todos os substituintes permissíveis de compostos orgânicos. Em um aspecto amplo, os substituintes permissíveis incluem substituintes ací- clicos e cíclicos, ramificados e não ramificados, carbocíclicos e hetero- cíclicos, aromáticos e não aromáticos de compostos orgânicos. Substi- tuintes ilustrativos incluem, por exemplo, aqueles descritos aqui acima. Os substituintes permissíveis podem ser um ou mais e os mesmos ou diferentes para compostos orgânicos apropriados. Para propósitos desta invenção, os heteroátomos tais como nitrogênio podem ter subs- tituintes de hgidrogênio e/ou qualquer substituintes permissíveis de compostos orgânicos descritos aqui que satisfaçam as valências dos heteroátomos. Esta invenção não é destinada a ser limitada de qual¬quer maneira pelos substituintes permissíveis de compostos orgâni¬cos.
[000316] Para propoósitos da invenção, os elementos químicos são identificados de acordo com a tabela periódica dos elementos, versão CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 67a Ed., 1986-87, contra¬capa.
[000317] Outros termos químicos aqui são usados de acordo com uso convencional na técnica, como exemplificado por The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (ed. Parker, S., 1985), McGraw-Hill, San Francisco, incorporado aqui por referência. A menos que de outro mo¬do definido, todos os termos técnicos e científicos usados aqui têm o mesmo significado como comumente entendido por alguém versado na técnica à qual esta invenção pertence.
[000318] O termo "grupo de proteção" como usado aqui são substi- tuintes temporários que protegem um grupo funcional potencialmente reativo de transformações químicas indesejadas. Exemplos de tais grupos de proteção incluem ésteres de ácidos carboxílicos e ácidos borônicos, éteres de álcoois, e acetais e cetais de aldeídos e cetonas. Por exemplo, a frase "grupo de proteção de terminal N" ou "grupo de proteção amino" como usada aqui se refere a vários grupos de prote¬ção amino que podem ser empregados para proteger o terminal N de um aminoácido ou peptídeo contra reações indesejáveis durante os procedimentos sintéticos. Exemplos de grupos adequados incluem grupos de proteção acila tais como, para ilustrar, formila, dansila, ace¬tila, benzoíla, trifluoroacetila, succinila, e metoxisuccinila; grupos de proteção uretano aromáticos como, por exemplo, benziloxicarbonila (Cbz); e grupos de proteção uretano alifáticos tais como t- butoxicarbonila (Boc) ou 9-fluorenilmetoxicarbonila (Fmoc).
[000319] O termo "grupo de proteção amino" ou "grupo de proteção de terminal N" refere-se àqueles grupos destinados a proteger o termi¬nal α-N de um aminoácido ou peptídeo ou de outro modo proteger o grupo amino de um aminoácido ou peptídeo contra reações indesejá¬veis durante os procedimentos sintéticos. Comumente usados grupos de proteção N são descritos em Greene, Protective Groups In Organic Synthesis, (John Wiley & Sons, Nova Iorque (1981)), que é aqui incor-porado por referência. Adicionalmente, grupos de proteção podem ser usados como profármacos que são prontamente clivados in vivo, por exemplo, por hidrólise enzimática, para liberar a origem biologicamen¬te ativa. Os grupos de proteção α-N compreendem grupos alcanoíla inferiores tais como formila, acetila ("Ac"), propionila, pivaloila, t- butilacetila e similares; outros grupos acila incluem 2-cloroacetila, 2- bromoacetila, trifluoroacetila, tricloroacetila, ftalila, o-nitrofenoxiacetila, -clorobutirila, benzoíla, 4-clorobenzoíla, 4-bromobenzoíla, 4- nitrobenzoíla e similares; grupos sulfonila tais como benzenossulfonila, p-toluenossulfonila e similares; grupos formadores de carbamato tais como benziloxicarbonila, p-clorobenziloxicarbonila, p- p-nitrobenziloxicarbonila, 2- p-bromobenziloxicarbonila, 3,4- 3,5-dimetoxibenziloxicarbonila, 2,4- 4-etoxibenziloxicarbonila, 2-nitro-4,5- dimetoxibenziloxicarbonila, 3,4,5-trimetoxibenziloxicarbonila, 1-(p- bifenilil)-1-metiletoxicarbonila, dimetoxibenziloxicarbonila, benzidriloxicarbonila, t-butioxicarbonila, diisopropilmetoxicarbonila, isopropiloxicarbonila, etoxicarbonila, meto- xicarbonila, aliloxicarbonila, 2,2,2,-tricloroetoxicarbonila, fenoxicarboni- la, 4-nitrofenoxicarbonila, fluorenil-9-metoxicarbonila, ciclopentiloxicar- bonila, adamantiloxicarbonila, cicloexiloxicarbonila, feniltiocarbonila e similares; grupos arilalquila tais como benzila, trifenilmetila, benziloxi- metila, 9-fluorenilmetiloxicarbonila (Fmoc) e similares e grupos silila tais como trimetilsilila e similares. Ainda outros exemplos incluem teíla, succinila, metoxisuccinila, subéria, adipila, azelaíla, dansila, benziloxi¬carbonila, metoxiazelalia, metoxiadipila, metoxisuberila, e 2,4- dinitrofenila.
[000320] O termo "grupo de proteção carbóxi" ou "grupo de proteção de terminal C" refere-se a um grupo amida ou éster de proteção de ácido carboxílico empregado para bloquear ou proteger a funcionali¬dade de ácido carboxílico, ao mesmo tempo em que as reações envol¬vendo outros sítios funcionais do composto são realizadas. Os grupos de proteção carbóxi são descritos em Greene, Protective Groups in Organic Synthesis pp. 152-186 (1981), que é aqui incorporado por re¬ferência. Adicionalmente, um grupo de proteção carbóxi pode ser usa¬do como um profármaco pelo qual o grupo de proteção carbóxi pode ser prontamnete clivado in vivo, por exemplo, por hidrólise enzimática, para liberar a origem biologicamente ativa. Tais grupos de proteção carbóxi são bem conhecidos por aqueles versados na técnica, sendo extensivamente usados na proteção de grupos carboxila nos campos de penicilina e cefalosporina, como descrito em Patente dos Estados Unidos Nos 3.840.556 e 3.719.667, as descrições das quais são aqui incorporadas por referência. Os grupos de proteção carbóxi represen-tativos são C1-C8 alquila inferior (por exemplo, metila, etila ou t-butila e similares); arilalquila tais como fenetila ou benzila e derivados substitu-ídos dos mesmos tais como grupos alcoxibenzila ou nitrobenzila e si-milares; arilalquenila tais como feniletenila e similares; arila e deriva¬dos substituídos dos mesmos tais como 5-indanila e similares; dialqui- laminoalquila tais como dimetilaminoetila e similares); grupos alcanoi- loxialquila tais como acetoximetila, butiriloximetila, valeriloximetila, isobutiriloximetila, isovaleriloximetila, 1-(propionilóxi)-1-etila, 1- (pivaloiloxil)-1-etila, 1-metil-1-(propionilóxi)-1-etila, pivaloiloximetila, propioniloximetila e similares; grupos cicloalcanoiloxialquila tais como ciclopropilcarboniloximetila, ciclobutilcarboniloximetila, ciclopentilcar- boniloximetila, cicloexilcarboniloximetila e similares; aroiloxialquila tais como benzoiloximetila, benzoiloxietila e similares; arilalquilcarboniloxi- alquila tais como benzilcarboniloximetila, 2-benzilcarboniloxietila e si-milares; alcoxicarbonilalquila ou cicloalquiloxicarbonilalquila tais como metoxicarbonilmetila, cicloexiloxicarbonilmetila, 1-metoxicarbonil-1-etila e similares; alcoxicarboniloxialquila ou cicloalquiloxicarboniloxialquila tais como metoxicarboniloximetila, t-butiloxicarboniloximetila, 1- etoxicarbonilóxi-1-etila, 1-cicloexiloxicarbonilóxi-1-etila e similares; ari- loxicarboniloxialquila tais como 2-(fenoxicarbonilóxi)etila, 2-(5- indaniloxicarbonilóxi)etila e similares; alcoxialquilcarboniloxialquila tais como 2-(1-metóxi-2-metilpropan-2-oilóxi)etila e similares; arilalquiloxi- carboniloxialquila tais como 2-(benziloxicarbonilóxi)etila e similares; arilalqueniloxicarboniloxialquila tais como 2-(3-fenilpropen-2- iloxicarbonilóxi)etila e similares; alcoxicarbonilaminoalquila tais como t- butiloxicarbonilaminometila e similares; alquilaminocarbonilaminoalqui- la tais como metilaminocarbonilaminometila e similares; alcanoilami- noalquila tais como acetilaminometila e similares; carboniloxialquila heterocíclica tais como 4-metilpiperazinilcarboniloximetila e similares; dialquilaminocarbonilalquila tais como dimetilaminocarbonilmetila, dieti- laminocarbonilmetila e similares; (5-(alquila inferior)-2-oxo-1,3- dioxolen-4-il)alquila tais como (5-t-butil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)metila e similares; e (5-fenil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)alquila tais como (5-fenil-2- oxo-1,3-dioxolen-4-il)metila e similares. Os grupos de proteção carbóxi amida representativos são grupos aminocarbonila e alquilinferiorami- nocarbonila. Por exemplo, ácido aspártico pode ser protegido no ter¬minal α-C por um grupo lábil de ácido (por exemplo, t-butila) e protegi¬do no terminal β-C por um grupo lábil de hidrogenação (por exemplo, benzila), em seguida, desprotegido seletivamente durante a síntese. Como mencionado acima, o grupo carbóxi protegido pode também ser um éster de alquila inferior, cicloalquila ou arilalquila, por exemplo, me- til éster, etil éster, propil éster, isopropil éster, butil éster, sec-butil és¬ter, isobutil éster, amil éster, isoamil éster, octil éster, cicloexil éster, feniletil éster e similares ou um éster de alcanoiloxialquila, cicloalcanoi- loxialquila, aroiloxialquila ou arilalquilcarboniloxialquila.
[000321] O termo "aminoácido" como usado aqui é um termo de téc¬nica e refere-se a ácidos aminocarboxílicos alfa e beta, incluindo os assim chamados aminoácidos alfa de ocorrência natural e aminoáci- dos de ocorrência não natural. Os aminoácidos alfa de ocorrência na¬tural especificamente incluem alanina (Ala), arginina (Arg), asparagina (Asn), ácido aspártico (Asp), cisteína (Cys), ácido glutâmico (Glu), glu- tamina (Gln), glicina (Gly), histidina (His), isoleucina (Ile), leucina (Leu), lisina (Lys), metionina (Met), ornitina (Orn), fenilalanina (Phe), prolina (Pro), selenocisteína, serina (Ser), taurina, treonina (Thr), triptofan (Trp), tirosina (Tyr), e valina (Val). Os aminoácidos alfa de ocorrência natural polares incluem arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutâmico, glutamina, histidina, lisina, ornitina, serina, treonina, e tirosina. Os aminoácidos alfa de ocorrência natural não polares inclu- em alanina, glicina, isoleucina, leucina, metionina, fenilalanina, prolina, triptofan, e valina.
[000322] Aminoácidos de ocorrência não natural incluem, porém não são limitados a, D-aminoácidos (isto é, um aminoácido de uma quiralidade oposta à forma de ocorrência natural), aminoácidos N-α-metila, aminoácidos C-α-metila, aminoácidos β-metila, β-alanina (β-Ala), norvalina (Nva), norleucina (Nle), ácido 4-aminobutírico (γ-Abu), ácido 2- aminoisobutírico (Aib), ácido 6-aminoexanóico (ε-Ahx), ornitina (orn), hidroxiprolina (Hyp), sarcosina, citrulina, ácido cisteíco, cicloexilalanina, ácido α-amino isobutírico, t-butilglicina, t-butilalanina, ácido 3- aminopropiônico, ácido 2,3-diaminopropiônico (2,3-diaP), D- ou Lfenilglicina, D- ou L-2-naftilalanina (2-Nal), ácido 1,2,3,4- tetraidroisoquinolina-3-carboxílico (Tic), D- ou L-2-tienilalanina (Thi), Dou L-3-tienilalanina, D- ou L-1-, 2-, 3- ou 4-pirenilalanina, D- ou L-(2- piridinil)-alanina, D- ou L-(3-piridinil)-alanina, D- ou L-(2-pirazinil)- alanina, D- ou L-(4-isopropil)-fenilglicina, D-(trifluorometil)-fenilglicina, D- (trifluorometil)-fenilalanina, D-p-fluorofenilalanina, D- ou L-pbifenilalanina, D- ou L-p-metoxibifenilalanina, sulfóxido de metionina (MSO) e homoarginina (Har). Outros exemplos incluem D- ou L-2- indol(alquil)alaninas e D- ou L-alquilalaninas, em que alquila é substitu- ída ou não substituída metila, etila, propila, hexila, butila, pentila, isopropila, iso-butila, ou iso-pentila, e aminoácidos não carboxilados fosfonos ou sulfatados (por exemplo, −SO3H).
[000323] Outros exemplos de aminoácidos de ocorrência não natural incluem 3-(2-clorofenil)-alanina, 3-cloro-fenilalanina, 4-clorofenilalanina, 2-fluoro-fenilalanina, 3-fluoro-fenilalanina, 4-fluorofenilalanina, 2-bromo-fenilalanina, 3-bromo-fenilalanina, 4-bromofenilalanina, homofenilalanina, 2-metil-fenilalanina, 3-metil-fenilalanina, 4-metil-fenilalanina, 2,4-dimetil-fenilalanina, 2-nitro-fenilalanina, 3-nitro fenilalanina, 4-nitro-fenilalanina, 2,4-dinitro-fenilalanina, ácido 1,2,3,4- tetraidroisoquinolina-3-carboxílico, ácido 1,2,3,4-tetraidronorharman-3- carboxílico, 1-naftilalanina, 2-naftilalanina, pentafluorofenilalanina, 2,4- dicloro-fenilalanina, 3,4-dicloro-fenilalanina, 3,4-difluoro-fenilalanina, 3,5-difluoro-fenilalanina, 2,4,5-trifluoro-fenilalanina, 2-trifluorometilfenilalanina, 3-trifluorometil-fenilalanina, 4-trifluorometil-fenilalanina, 2- ciano-fenialanina, 3-ciano-fenialanina, 4-ciano-fenialanina, 2-iodofenialanina, 3-iodo-fenialanina, 4-iodo-fenialanina, 4-metoxifenilalanina, 2-aminometil-fenilalanina, 3-aminometil-fenilalanina, 4-aminometilfenilalanina, 2-carbamoil-fenilalanina, 3-carbamoil-fenilalanina, 4- carbamoil-fenilalanina, m-tirosina, 4-amino-fenilalanina, estirilalanina, ácido 2-amino-5-fenil-pentanoico, 9-antrilalanina, 4-terc-butilfenilalanina, 3,3-difenilalanina, 4,4'-difenilalanina, benzoilfenilalanina, α-metil-fenilalanina, α-metil-4-fluoro-fenilalanina, 4-tiazolilalanina, 3- benzotienilalanina, 2-tienilalanina, 2-(5-bromotienil)-alanina, 3- tienilalanina, 2-furilalanina, 2-piridilalanina, 3-piridilalanina, 4- piridilalanina, ácido 2,3-diaminopropiônico, ácido 2,4-diaminobutírico, alilglicina, ácido 2-amino-4-bromo-4-pentenóico, propargilglicina, ácido 4-aminociclopent-2-enocarboxílico, ácido 3- aminociclopentanocarboxílico, ácido 7-amino-heptanóico, dipropilglicina, ácido pipecólico, ácido azetidina-3-carboxílico, ciclopropilglicina, ciclopropilalanina, 2-metóxi-fenilglicina, 2-tienilglicina, 3-tienilglicina, α- benzil-prolina, α-(2-fluoro-benzil)-prolina, α-(3-fluoro-benzil)-prolina, α- (4-fluoro-benzil)-prolina, α-(2-cloro-benzil)-prolina, α-(3-cloro-benzil)- prolina, α-(4-cloro-benzil)-prolina, α-(2-bromo-benzil)-prolina, α-(3- bromo-benzil)-prolina, α-(4-bromo-benzil)-prolina, α-fenetil-prolina, α- (2-metil-benzil)-prolina, α-(3-metil-benzil)-prolina, α-(4-metil-benzil)- prolina, α-(2-nitro-benzil)-prolina, α-(3-nitro-benzil)-prolina, α-(4-nitrobenzil)-prolina, α-(1-naftalenilmetil)-prolina, α-(2-naftalenilmetil)-prolina, α-(2,4-dicloro-benzil)-prolina, α-(3,4-dicloro-benzil)-prolina, α-(3,4-difluoro-benzil)-prolina, α-(2-trifluorometil-benzil)-prolina, α-(3- trifluorometil-benzil)-prolina, α-(4-trifluorometil-benzil)-prolina, α-(2- ciano-benzil)-prolina, α-(3-ciano-benzil)-prolina, α-(4-ciano-benzil)- prolina, α-(2-iodo-benzil)-prolina, α-(3-iodo-benzil)-prolina, α-(4-iodobenzil)-prolina, α-(3-fenil-alil)-prolina, α-(3-fenil-propil)-prolina, α-(4- terc-butil-benzil)-prolina, α-benzidril-prolina, α-(4-bifenilmetil)-prolina, α- (4-tiazolilmetil)-prolina, α-(3-benzo[b]tiofenilmetil)-prolina, α-(2- tiofenilmetil)-prolina, α-(5-bromo-2-tiofenilmetil)-prolina, α-(3- tiofenilmetil)-prolina, α-(2-furanilmetil)-prolina, α-(2-piridinilmetil)- prolina, α-(3-piridinilmetil)-prolina, α-(4-piridinilmetil)-prolina, α-alilprolina, α-propinil-prolina, γ-benzil-prolina, γ-(2-fluoro-benzil)-prolina, γ- (3-fluoro-benzil)-prolina, γ-(4-fluoro-benzil)-prolina, γ-(2-cloro-benzil)- prolina, γ-(3-cloro-benzil)-prolina, γ-(4-cloro-benzil)-prolina, γ-(2-bromobenzil)-prolina, γ-(3-bromo-benzil)-prolina, γ-(4-bromo-benzil)-prolina, γ-(2-metil-benzil)-prolina, γ-(3-metil-benzil)-prolina, γ-(4-metil-benzil)- prolina, γ-(2-nitro-benzil)-prolina, γ-(3-nitro-benzil)-prolina, γ-(4-nitrobenzil)-prolina, γ-(1-naftalenilmetil)-prolina, γ-(2-naftalenilmetil)-prolina, γ-(2,4-dicloro-benzil)-prolina, γ-(3,4-dicloro-benzil)-prolina, γ-(3,4- difluoro-benzil)-prolina, γ-(2-trifluorometil-benzil)-prolina, γ-(3- trifluorometil-benzil)-prolina, γ-(4-trifluorometil-benzil)-prolina, γ-(2- ciano-benzil)-prolina, γ-(3-ciano-benzil)-prolina, γ-(4-ciano-benzil)- prolina, γ-(2-iodo-benzil)-prolina, γ-(3-iodo-benzil)-prolina, γ-(4-iodobenzil)-prolina, γ-(3-fenil-alil-benzil)-prolina, γ-(3-fenil-propil-benzil)- prolina, γ-(4-terc-butil-benzil)-prolina, γ-benzidril-prolina, γ-(4- bifenilmetil)-prolina, γ-(4-tiazolilmetil)-prolina, γ-(3-benzotioienilmetil)- prolina, γ-(2-tienilmetil)-prolina, γ-(3-tienilmetil)-prolina, γ-(2- furanilmetil)-prolina, γ-(2-piridinilmetil)-prolina, γ-(3-piridinilmetil)- prolina, γ-(4-piridinilmetil)-prolina, γ-alil-prolina, γ-propinil-prolina, ácido trans-4-fenil-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2-fluoro-fenil)- pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-fluoro-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(4-fluoro-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2-cloro-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-clorofenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(4-cloro-fenil)-pirrolidina-3- carboxílico, ácido trans-4-(2-bromo-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-bromo-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(4- bromo-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2-metil-fenil)- pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-metil-fenil)-pirrolidina-3- carboxílico, ácido trans-4-(4-metil-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2-nitro-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-nitrofenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(4-nitro-fenil)-pirrolidina-3- carboxílico, ácido trans-4-(1-naftil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans- 4-(2-naftil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2,5-dicloro-fenil)- pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2,3-dicloro-fenil)-pirrolidina-3- carboxílico, ácido trans-4-(2-trifluorometil-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-trifluorometil-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(4-trifluorometil-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2- ciano-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-ciano-fenil)- pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(4-ciano-fenil)-pirrolidina-3- carboxílico, ácido trans-4-(2-metóxi-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-metóxi-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(4- metóxi-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2-hidróxi-fenil)- pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-hidróxi-fenil)-pirrolidina-3- carboxílico, ácido trans-4-(4-hidróxi-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2,3-dimetóxi-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4- (3,4-dimetóxi-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3,5- dimetóxi-fenil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2-piridinil)- pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-piridinil)-pirrolidina-3- carboxílico, ácido trans-4-(6-metóxi-3-piridinil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(4-piridinil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2- tienil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(3-tienil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-(2-furanil)-pirrolidina-3-carboxílico, ácido trans-4-isopropil-pirrolidina-3-carboxílico, 4-fosfonometil-fenilalanina, benzil-fosfotreonina, (1'-amino-2-fenil-etil)oxirano, (1'-amino-2-cicloexiletil)oxirano, (1'-amino-2-[3-bromo-fenil]etil)oxirano, (1'-amino-2-[4- (benzilóxi)fenil]etil)oxirano, (1'-amino-2-[3,5-difluoro-fenil]etil)oxirano, (1'-amino-2-[4-carbamoil-fenil]etil)oxirano, (1'-amino-2-[benzilóxietil])oxirano, (1'-amino-2-[4-nitro-fenil]etil)oxirano, (1'-amino-3-fenilpropil)oxirano, (1'-amino-3-fenil-propil)oxirano, e/ou sais e/ou grupo de proteção variantes dos mesmos.
[000324] Os aminoácidos beta incluem, sem limitação, beta-alanina (ácido 3-aminopropanóico).
[000325] O termo "composto da invenção" como usado aqui significa um composto de Fórmula I e sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.
[000326] O termo "sal farmaceuticamente aceitável" como usado aqui inclui sais derivados de ácidos inorgânicos ou orgânicos incluindo, por exemplo, hidroclórico, hidrobrômico, sulfúrico, nítrico, perclórico, fosfórico, fórmico, acético, láctico, maleico, fumárico, succínico, tartári- co, glicólico, salicílico, cítrico, metanossulfônico, benzenossulfônico, benzoico, malônico, trifluoroacético, tricloroacético, naftaleno-2- sulfônico, e outros ácidos. As formas de sal farmaceuticamente aceitá-veis podem incluir formas em que a relação de moléculas compreen-dendo o sal não é 1:1. Por exemplo, o sal pode compreender mais do que uma molécula de ácido inorgânico ou orgânico por molécula de base, tais como duas moléculas de ácido hidroclórico por molécula de composto de Fórmula I. Como outro exemplo, o sal pode compreender menos do que uma molécula de ácido inorgânico ou orgânico por mo¬lécula de base, tais como duas moléculas de composto de Fórmula I por molécula de ácido tartárico.
[000327] Os termos "portador" e "portador farmaceuticamente acei- tável" como usado aqui se refere a um diluente, adjuvante, excipiente, ou veículo com o qual um composto é administrado ou formulado para administração. Exemplos não limitantes de tais portadores farmaceuti- camente aceitáveis incluem líquidos, tais como água, salina, e óleos; e sólidos, tais como goma acácia, gelatina, pasta de amido, talco, quera- tina, sílica coloidal, ureia, e similares. Além disso, agentes auxiliares, estabilizantes, espessantes, lubrificantes, aromatizantes, e colorantes podem ser usados. Outros exemplos de portadores farmacêuticos adequados são descritos em Remington's Pharmaceutical Sciences por E.W. Martin, aqui incorporado por referência em sua íntegra.
[000328] O termo "tratar" como usado aqui significa prevenir, deter ou retardar a progressão de, ou eliminar a doença ou condição em um indivíduo. Em uma modalidade "tratar" significa deter ou retardar a progressão de, ou eliminar a doença ou condição em um indivíduo. Em uma modalidade, "tratar" significa reduzir pelo menos uma manifesta¬ção objetiva da doença ou condição.
[000329] O termo "quantidade eficaz" como usado aqui se refere a uma quantidade que seja suficiente para trazer cerca de um efeito bio¬lógico desejado.
[000330] O termo "inibir" como usado aqui significa diminuir por uma quantidade ou extensão objetivamente mensurável. Em várias modali-dades "inibir" significa diminuir por pelo menos 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, ou 95 porcento comparado ao controle relevante. Em uma modalidade "inibir" significa diminuir 100 porcento, isto é, deter ou eliminar.
[000331] O termo "indivíduo" como usado aqui se refere a um mamí¬fero. Em várias modalidades, um indivíduo é um camundongo, rato, coelho, gato, cachorro, porco, ovelha, cavalo, vaca, ou primata não humano. Em uma modalidade um indivíduo é um humano.
[000332] Em certas modalidades, o composto representado pela fórmula I é selecionado do grupo que consiste em:
Figure img0029
mesmos.
[000333] Em certas modalidades, o composto representado pela fórmula I é selecionado do grupo que consiste em
[000334] 2-amino-3-metilbutanoato de (S)-((2R,3R,4S,5S)-5-(4- amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-di-hidroxipirrolidin-2-il)metila;
[000335] 2-amino-3-metilpentanoato de (2S,3S)-((2R,3R,4S,5S)-5-(4- amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-di-hidroxipirrolidin-2-il)metila;
[000336] 2-amino-4-metilpentanoato de (S)-((2R,3R,4S,5S)-5-(4- amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-di-hidroxipirrolidin-2-il)metila;
[000337] bis(2-amino-3-metilbutanoato) de (2S,2'S)-(2S,3S,4R,5R)-2- (4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroximetil)pirrolidina-3,4- di-ila;
[000338] 2-amino-3-metilbutanoato de (S)-(2R,3R,4S,5S)-5-(4- amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-hidróxi-2-(hidroximetil)pirrolidin- 3-ila;
[000339] 2-amino-3-metilbutanoato de (S)-(2S,3S,4R,5R)-2-(4- amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-hidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidin- 3-ila; e
[000340] sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Métodos Gerais de Preparação de Compostos da Invenção:
[000341] Heterociclos e heteroarilas podem ser preparados de méto¬dos conhecidos como reportado na literatura (a. Ring system handbo¬ok, publicado por American Chemical Society edição 1993 e subse- quentes suplementos. b. The Chemistry of Heterocyclic Compounds; Weissberger, A., Ed.; Wiley: Nova Iorque, 1962. c. Nesynov, E. P.; Grekov, A. P. The chemistry of 1,3,4-oxadiazole derivatives. Russ. Chem. Rev. 1964, 33, 508-515. d. Advances in Heterocyclic Chemis¬try; Katritzky, A. R., Boulton, A. J., Eds.; Academic Press: Nova Iorque, 1966. e. In Comprehensive Heterocyclic Chemistry; Potts, K. T., Ed.; Pergamon Press: Oxford, 1984. f. Eloy, F. A review of the chemistry of 1,2,4-oxadiazoles. Fortschr. Chem. Forsch. 1965, 4, pp 807-876. g. Adv. Heterocycl. Chem. 1976. h. Comprehensive Heterocyclic Chemis¬try; Potts, K. T., Ed.; Pergamon Press: Oxford, 1984. i. Chem. Rev. 1961 61, 87-127. j. 1,2,4-Triazoles; John Wiley & Sons: Nova Iorque, 1981; Vol 37). Grupos funcionais durante a sintase podem necessitar ser protegidos e subsequentemente desprotegidos. Exemplos de gru¬pos de proteção adequados podem ser encontrados em Protective Groups in Organic Synthesis, quarta edição, editada por Greene and Wuts.
[000342] Processos representativos que podem ser usados para preparar compostos da invenção e intermediários úteis para a prepa¬ração dos mesmos são mostrados nos seguintes esquemas.
[000343] Esquema 1
Figure img0030
[000344] Esquema 2
Figure img0031
[000345] Esquema 3
Figure img0032
[000346] Esquema 4
Figure img0033
[000347] Esquema 5
Figure img0034
[000348] Esquema 6
Figure img0035
[000349] Esquema 7
Figure img0036
[000350] Esquema 8
Figure img0037
Referências para o Esquema 8:
[000351] WO 2011/123586 A1 (incorporado por referência).
[000352] WO 2010/135520 A1 (incorporado por referência).
[000353] WO 2009/069095 A2 (incorporado por referência).
[000354] WO 2009/029729 A1 (incorporado por referência).
[000355] WO 2008/082601 A2 (incorporado por referência).
[000356] WO 2007/022073 A2 (incorporado por referência).
[000357] Hecker, Scott J.; Reddy, K. Raja; van Poelje, Paul D.; Sun, Zhili; Huang, Wenjian; Varkhedkar, Vaibhav; Reddy, M. Venkat; Fujita- ki, James M.; Olsen, David B.; Koeplinger, Kenneth A.; Boyer, Serge H.; Linemeyer, David L.; MacCoss, Malcolm; Erion, Mark D; Journal of Medicinal Chemistry (2007), 50(16), 3891-3896.
[000358] Yadava, Virendra Singh; Asian Journal of Chemistry (2005), 17(4), 2857-2859.
[000359] Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 2005/0182252 A1 (incorporado por referência).
[000360] Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 2005/0070556 A1 (incorporado por referência).
[000361] Reitz, Allen B.; Goodman, Michael G.; Pope, Barbara L.; Argentieri, Dennis C.; Bell, Stanley C.; Burr, Levelle E.; Chourmouzis, Erika; Come, Jon; Goodman, Jacquelyn H.; Klaubert, Dieter H.; Maryanoff, Bruce E.; McDonnell, Mark E.; Rampulla, Marianne S.; Schott, Mary R.; Chen, Robert; Journal of Medicinal Chemistry (1994), 37(21), 3561-78.
[000362] Esquema 9
Figure img0038
Referências para o Esquema 9
[000363] Roelen, H. C. P. F.; De Vroom, E.; Wang, A. H. J.; Van der Marel, G. A.; Van Boom, J. H; Nucleosides & Nucleotides (1992), 11(1), 141-56.
[000364] Kaji, Akira. (Japan) (1988), 5 pp. CODEN: JKXXAF JP 63135399 Uma patente 19880607 escrita em japonês. Pedido: JP 1986-282021 19861128.
[000365] Esquema 10
Figure img0039
Figure img0040
Referências para o Esquema 10:
[000366] Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 2010/0203015 A1 (incorporado por referência).
[000367] WO 2009/132123 A1 (incorporado por referência).
[000368] Hatton, Wilfried; Hunault, Julie; Egorov, Maxim; Len, Chris-tophe; Pipelier, Muriel; Blot, Virginie; Silvestre, Virginie; Fargeas, Vale¬rie; Ane, Adjou; McBrayer, Tami; Detorio, Mervi; Cho, Jong-Hyun; Bourgougnon, Nathalie; Dubreuil, Didier; Schinazi, Raymond F.; Lebre- ton, Jacques; European Journal of Organic Chemistry (2011), 2011(36), 7390-7399.
[000369] Zhang, Hong-wang; Zhou, Longhu; Coats, Steven J.; McBrayer, Tamara R.; Tharnish, Phillip M.; Bondada, Lavanya; Detorio, Mervi; Amichai, Sarah A.; Johns, Melissa D.; Whitaker, Tony; Schinazi, Raymond F; Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2011), 21(22), 6788-6792.
[000370] Ross, Bruce S.; Ganapati Reddy, P.; Zhang, Hai-Ren; Ra- chakonda, Suguna; Sofia, Michael J; Journal of Organic Chemistry (2011), 76(20), 8311-8319.
[000371] McGuigan, Christopher; Madela, Karolina; Aljarah, Mo¬hamed; Gilles, Arnaud; Battina, Srinivas K.; Ramamurty, Changalvala V. S.; Srinivas Rao, C.; Vernachio, John; Hutchins, Jeff; Hall, Andrea; Kolykhalov, Alexander; Henson, Geoffrey; Chamberlain, Stanley; Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2011), 21(19), 6007-6012.
[000372] Cho, Jong Hyun; Amblard, Franck; Coats, Steven J.; Schi- nazi, Raymond F; Tetrahedron (2011), 67(30), 5487-5493.
[000373] WO 2010/135520 A1 (incorporado por referência).
[000374] Perlikova, Pavla; Pohl, Radek; Votruba, Ivan; Shih, Robert; Birkus, Gabriel; Cihlar, Tomas; Hocek, Michal; Bioorganic & Medicinal Chemistry (2011), 19(1), 229-242.
[000375] WO 2010/108135 A1 (incorporado por referência).
[000376] WO 2010/130726 A1 (incorporado por referência).
[000377] WO 2010/030858 A1 (incorporado por referência).
[000378] WO 2010/108140 A1 (incorporado por referência).
[000379] WO 2010/026153 A1 (incorporado por referência).
[000380] WO 2010/081082 A2 (incorporado por referência).
[000381] McGuigan, Christopher; Madela, Karolina; Aljarah, Moha¬med; Gilles, Arnaud; Brancale, Andrea; Zonta, Nicola; Chamberlain, Stanley; Vernachio, John; Hutchins, Jeff; Hall, Andrea; Ames, Brenda; Gorovits, Elena; Ganguly, Babita; Kolykhalov, Alexander; Wang, Jin; Muhammad, Jerry; Patti, Joseph M.; Henson, Geoffrey; Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2010), 20(16), 4850-4854.
[000382] Derudas, Marco; Brancale, Andrea; Naesens, Lieve; Neyts, Johan; Balzarini, Jan; McGuigan, Christopher; Bioorganic & Medicinal Chemistry (2010), 18(7), 2748-2755.
[000383] Mehellou, Youcef; Valente, Rocco; Mottram, Huw; Walsby, Elisabeth; Mills, Kenneth I.; Balzarini, Jan; McGuigan, Christopher; Bioorganic & Medicinal Chemistry (2010), 18(7), 2439-2446.
[000384] McGuigan, Christopher; Gilles, Arnaud; Madela, Karolina; Aljarah, Mohamed; Holl, Sabrina; Jones, Sarah; Vernachio, John; Hutchins, Jeff; Ames, Brenda; Bryant, K. Dawn; Gorovits, Elena; Gan-guly, Babita; Hunley, Damound; Hall, Andrea; Kolykhalov, Alexander; Liu, Yule; Muhammad, Jerry; Raja, Nicholas; Walters, Robin; Wang, Jin; Chamberlain, Stanley; Henson, Geoffrey; Journal of Medicinal Chemistry (2010), 53(13), 4949-4957.
[000385] Leisvuori, Anna; Aiba, Yuichiro; Loennberg, Tuomas; Poi- jaervi-Virta, Paeivi; Blatt, Laurence; Beigelman, Leo; Loennberg, Harri; Organic & Biomolecular Chemistry (2010), 8(9), 2131-2141.
[000386] Mehellou, Youcef; Balzarini, Jan; McGuigan, Christopher; Antiviral Chemistry & Chemotherapy (2010), 20(4), 153-160.
[000387] Rondla, Ramu; Coats, Steven J.; McBrayer, Tamara R.; Grier, Jason; Johns, Melissa; Tharnish, Phillip M.; Whitaker, Tony; Zhou, Longhu; Schinazi, Raymond F; Antiviral Chemistry & Chemo¬therapy (2009), 20(2), 99-106.
[000388] WO 2008/121941 A1 (incorporado por referência).
[000389] WO 2009/086192 A1 (incorporado por referência).
[000390] McGuigan, Christopher; Kelleher, Mary Rose; Perrone, Pli- nio; Mulready, Sinead; Luoni, Giovanna; Daverio, Felice; Rajyaguru, Sonal; Le Pogam, Sophie; Najera, Isabel; Martin, Joseph A.; Klumpp, Klaus; Smith, David B; Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2009), 19(15), 4250-4254.
[000391] McGuigan, Christopher; Perrone, Plinio; Madela, Karolina; Neyts, Johan; Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2009), 19(15), 4316-4320.
[000392] Esquema 11
Figure img0041
Referências para o Esquema 11:
[000393] WO 2011/150016 A1 (incorporado por referência).
[000394] WO 2010/150761 A1 (incorporado por referência).
[000395] WO 2011/068899 A1 (incorporado por referência).
[000396] WO 2011/084849 A1 (incorporado por referência).
[000397] Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 2011/0166128 A1 (incorporado por referência).
[000398] WO 2011/084846 A1 (incorporado por referência).
[000399] CN 102060874 A.
[000400] WO 2011/031979 A1 (incorporado por referência).
[000401] WO 2011/002999 A1 (incorporado por referência).
[000402] WO 2010/064735 A1 (incorporado por referência).
[000403] WO 2010/036638 A2 (incorporado por referência).
[000404] WO 2010/079443 A1 (incorporado por referência).
[000405] WO 2010/010017 A1 (incorporado por referência).
[000406] WO 2010/093789 A2 (incorporado por referência).
[000407] Esquema 12
Figure img0042
Referências para composto de aldeído de Garner 12a:
[000408] Upadhyay, Puspesh K.; Kumar, Pradeep; Synthesis (2010), (18), 3063-3066.
[000409] Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 2010/0152098 A1 (incorporado por referência).
[000410] Badarau, Eduard; Suzenet, Franck; Finaru, Adriana- Luminita; Guillaumet, Gerald; European Journal of Organic Chemistry (2009), (21), 3619-3627.
[000411] Belanger, Dominique; Tong, Xia; Soumare, Sadia; Dory, Yves L.; Zhao, Yue; Chemistry-A European Journal (2009), 15(17), 4428-4436.
[000412] Osada, Satoshi; Ishimaru, Takako; Kawasaki, Hiroshi; Ko- dama, Hiroaki; Heterocycles (2006), 67(1), 421-431.
[000413] Xin, Cong; Liao, Qing-Jiang; Yao, Zhu-Jun; Journal of Or¬ganic Chemistry (2004), 69(16), 5314-5321.
[000414] Dondoni, Alessandro; Perrone, Daniela; Organic Syntheses (2000), 77 64-77.
[000415] Campbell, Andrew D.; Raynham, Tony M.; Taylor, Richard J. K; Synthesis (1998), (12), 1707-1709.
[000416] Referências para reação Wittig relacionada com o compos¬to 12b:
[000417] Ma, Zhiqiang; Lu, Jianming; Wang, Xiao; Chen, Chuo; Chemical Communications (Cambridge, Reino Unido) (2011), 47(1), 427-429.
[000418] Spangenberg, Thomas; Schoenfelder, Angele; Breit, Ber¬nhard; Mann, Andre; European Journal of Organic Chemistry (2010), (31), 6005-6018.
[000419] Osman, Sami; Albert, Brian J.; Wang, Yanping; Li, Miao- sheng; Czaicki, Nancy L.; Koide, Kazunori; Chemistry--A European Journal (2011), 17(3), 895-904,
[000420] Passiniemi, Mikko; Koskinen, Ari M. P; Synthesis (2010), (16), 2816-2822.
[000421] Thander, Latibuddin; Sarkar, Kaushik; Chattopadhyay, Shi- tal K; Tetrahedron: Asymmetry (2009), 20(11), 1213-1216.
[000422] Chiou, Wen-Hua; Schoenfelder, Angele; Mann, Andre; Oji- ma, Iwao; Pure and Applied Chemistry (2008), 80(5), 1019-1024.
[000423] Ribes, Celia; Falomir, Eva; Carda, Miguel; Marco, J. Alber¬to; Journal of Organic Chemistry (2008), 73(19), 7779-7782.
[000424] Mochizuki, Akiyoshi; Naito, Hiroyuki; Nakamoto, Yumi; Uoto, Kouichi; Ohta, Toshiharu; Heterocycles (2008), 75(7), 1659-1671.
[000425] Spangenberg, Thomas; Schoenfelder, Angele; Breit, Bernhard; Mann, Andre; Organic Letters (2007), 9(20), 3881-3884.
[000426] Lebel, Helene; Ladjel, Chehla; Organometallics (2008), 27(11), 2676-2678.
[000427] Liu, Fa; Hu, Tai-Shan; Yao, Zhu-Jun; Tetrahedron (2005), 61(21), 4971-4981.
[000428] Shigeki Sano, Tomoka Takehisa, Shiho Ogawa, Kenji yokoyama and Yoshimitsu Nagao Chem. Pharm. Bull. 50 (9) 1300¬1302 (2002).
[000429] Raghavan, Sadagopan; Rajender, A.; Joseph, Suju C.; Rasheed, M. Abdul; Ravi Kumar, K; Tetrahedron: Asymmetry (2004), 15(2), 365-379.
[000430] Referências para Di-hidroxilação para os compostos relaci-onados a 12c:
[000431] Dondoni, Alessandro; Merino, Pedro; Perrone, Daniela; Te-trahedron (1993), 49(14), 2939-56.
[000432] Ribes, Celia; Falomir, Eva; Carda, Miguel; Marco, J. Alber¬to; Journal of Organic Chemistry (2008), 73(19), 7779-7782.
[000433] Upadhyay, Puspesh K.; Kumar, Pradeep; Synthesis (2010), (18), 3063-3066. Referência relacionada à sintase de base 12e:
[000434] Bambuch, Vitezslav; Otmar, Miroslav; Pohl, Radek; Maso- jidkova, Milena; Holy, Antonin; Tetrahedron (2007), 63(7), 1589-1601.
[000435] Esquema 13
Figure img0043
Referências para preparação de composto 13a:
[000436] Mishra, Girija Prasad; Rao, Batchu Venkateswara; Tetrahe¬dron: Asymmetry (2011), 22(7), 812-817.
[000437] Brock, E. Anne; Davies, Stephen G.; Lee, James A.; Ro¬berts, Paul M.; Thomson, James E; Organic Letters (2011), 13(7), 1594-1597.
[000438] WO 2010/085377 A2 (incorporado por referência).
[000439] Yadav, J. S.; Reddy, P. Narayana; Reddy, B. V. Subba; Synlett (2010), (3), 457-461.
[000440] Song, Kai; Zheng, Guo-jun; Huaxue Shiji (2010), 32(2), 171¬172.
[000441] Prabhakar, Peddikotla; Rajaram, Singanaboina; Reddy, Dorigondla Kumar; Shekar, Vanam; Venkateswarlu, Yenamandra; Tet-rahedron: Asymmetry (2010), 21(2), 216-221.
[000442] CN 101182342 A.
[000443] Baird, Lynton J.; Timmer, Mattie S. M.; Teesdale-Spittle, Paul H.; Harvey, Joanne E; Journal of Organic Chemistry (2009), 74(6), 2271-2277.
[000444] Wang, Xiang-cheng; Wang, Gang; Qu, Gang-lian; Huaxue Shijie (2008), 49(4), 226-228.
[000445] Ivanova, N. A.; Valiullina, Z. R.; Shitikova, O. V.; Miftakhov, M. S; Russian Journal of Organic Chemistry (2007), 43(5), 742-746.
[000446] Braga, Fernanda Gambogi; Coimbra, Elaine Soares; Matos, Magnum de Oliveira; Lino Carmo, Arturene Maria; Cancio, Marisa Da-mato; da Silva, Adilson David; European Journal of Medicinal Chemis¬try (2007), 42(4), 530-537.
[000447] Wender, Paul A.; Bi, F. Christopher; Buschmann, Nicole; Gosselin, Francis; Kan, Cindy; Kee, Jung-Min; Ohmura, Hirofumi; Organic Letters (2006), 8(23), 5373-5376.
[000448] 13. Fei, Xiangshu; Wang, Ji-Quan; Miller, Kathy D.; Sledge, George W.; Hutchins, Gary D.; Zheng, Qi-Huang; Nuclear Medicine and Biology (2004), 31(8), 1033-1041.
[000449] 14. Abdel-Rahman, Adel A.-H.; Abdel-Megied, Ahmed E.-S.; Goda, Adel E.-S.; Zeid, Ibrahim F.; El Ashry, El Sayed H; Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids (2003), 22(11), 2027-2038.
[000450] 15. Palmer, Andreas M.; Jager, Volker; European Journal of Organic Chemistry (2001), (7), 1293-1308.
[000451] 16. Paquette, Leo A.; Bailey, Simon; Journal of Organic Chemistry (1995), 60(24), 7849-56.
[000452] 17. Classon, Bjoern; Liu, Zhengchun; Samuelsson, Bertil; Journal of Organic Chemistry (1988), 53(26), 6126-30.
[000453] 18. Kissman, Henry M.; Baker, B. R; Journal of the Ameri¬ can Chemical Society (1957), 79 5534-40. Referências para ciclizações relacionadas com a preparação de com-postos de tipo 13d:
[000454] Davies, Stephen G.; Durbin, Matthew J.; Goddard, Euan C.; Kelly, Peter M.; Kurosawa, Wataru; Lee, James A.; Nicholson, Rebec¬ca L.; Price, Paul D.; Roberts, Paul M.; Russell, Angela J.; Scott, Philip M.; Smith, Andrew D; Organic & Biomolecular Chemistry (2009), 7(4), 761-776.
[000455] Davies, Stephen G.; Nicholson, Rebecca L.; Price, Paul D.; Roberts, Paul M.; Russell, Angela J.; Savory, Edward D.; Smith, An¬drew D.; Thomson, James E; Tetrahedron: Asymmetry (2009), 20(6-8), 758-772.
[000456] Davies, Stephen G.; Nicholson, Rebecca L.; Price, Paul D.; Roberts, Paul. M.; Smith, Andrew D; Synlett (2004), (5), 901-903.
[000457] Brock, E. Anne; Davies, Stephen G.; Lee, James A.; Ro¬berts, Paul M.; Thomson, James E; Organic Letters (2011), 13(7), 1594-1597.
[000458] Gary B. Evans, Richard H. Furneaux, Andrzej Lewandowicz, Vern L. Schramm, e Peter C. Tyler, Journal of Medicinal Chemistry (2003), 46, 3412-3423.
[000459] Esquema 14
Figure img0044
[000460] Esquema 15
Figure img0045
Referências para o Esquema 15:
[000461] Chenevert, Robert; Jacques, Frederic; Giguere, Pascall; Dasser, Mohammed; Tetrahedron: Asymmetry (2008), 19(11), 1333¬1338.
[000462] Donohoe, Timothy J.; Thomas, Rhian E.; Cheeseman, Mat¬thew D.; Rigby, Caroline L.; Bhalay, Gurdip; Linney, Ian D; Organic Let¬ters (2008), 10(16), 3615-3618.
[000463] Hanessian, Stephen; Therrien, Eric; Warrier, Jayakumar S.; Charron, Guillaume; Heterocycles (2006), 70 461-476.
[000464] Hamada, Yasumasa; Kawai, Akiyoshi; Kohno, Yasushi; Ha¬ra, Osamu; Shioiri, Takayuki; Journal of the American Chemical Socie- ty (1989), 111(4), 1524-5. (para Álcool a Ciano).
[000465] Esquema 16A
Figure img0046
[000466] Esquema 16B
Figure img0047
[000467] Esquema 17
Figure img0048
Legenda: Acetona; Base; 3 equivalentes
[000468] Referências para o Esquema 17:
[000469] Nikolaos G. Argyropoulos and Vassiliki C. Sarli; Tetrahe¬dron Letters 45 (2004) 4237-4240.
[000470] Yuji Matsuya, Sho-ichi Takayanagi, e Hideo Nemoto; Chem¬istry A European Journal 2008, 14, 5275-5281.
[000471] Hyo-Joong; Ricardo, Alonso; Illangkoon, Heshan I.; Kim, Myong Jung; Carrigan, Matthew A.; Frye, Fabianne; Benner, Steven A; Journal of the American Chemical Society (2011), 133(24), 9457-9468.
[000472] Paudyal, Mahesh P.; Rath, Nigam P.; Spilling, Christopher D; Organic Letters (2010), 12(13), 2954-2957.
[000473] Scarpi, Dina; Occhiato, Ernesto G.; Guarna, Antonio. Dipar- timento di Chimica Organica 'U. Schiff; Tetrahedron: Asymmetry (2009), 20(3), 340-350.
[000474] WO 2008/108508 A1 (incorporado por referência).
[000475] WO 2008/010776 A1 (incorporado por referência).
[000476] Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 2007/0265333 A1 (incorporado por referência).
[000477] Vu, Nguyen Quang; Chai, Christina L. L.; Lim, Kok Peng; Chia, Sze Chen; Chen, Anqi; Tetrahedron (2007), 63(30), 7053-7058.
[000478] WO 99/21858 A1 (incorporado por referência).
[000479] Bambuch, Vitezslav; Otmar, Miroslav; Pohl, Radek; Maso- jidkova, Milena; Holy, Antonin; Tetrahedron (2007), 63(7), 1589-1601.
[000480] Esquema 18
Figure img0049
; Desproteção
[000481] Esquema 19
Figure img0050
Legenda: Acetona; D-ribose; D-ribono-lactona; 2,3-O-isopropilideno-D- ribono-1,4-lactona 19c; Base Litiada apropriadamente protegida; Base. Referência para o Esquema 19:
[000482] Yokoyama, Masataka; Akiba, Takahiro; Ochiai, Yoshie; Momotake, Atsuya; Togo, Hideo; Journal of Organic Chemistry (1996), 61(17), 6079-6082.
[000483] Esquema 20
Figure img0051
[000484] Referências para o Esquema 20:
[000485] Su, Jia-Kun; Jia, Yue-Mei; He, Ruirui; Rui, Pei-Xin; Han, Nanyin; He, Xihui; Xiang, Junfeng; Chen, Xin; Zhu, Jinghua; Yu, Chu- Yi; Synlett (2010), (11), 1609-1616.
[000486] Li, Xiao-Liu; Qin, Zhan-Bin; Wang, Rui; Chen, Hua; Zhang, Ping-Zhu; Tetrahedron (2011), 67(10), 1792-1798.
[000487] Esquema 21
Figure img0052
Legenda: Proteção; Desproteção; Redução.
[000488] Esquema 22
Figure img0053
Legenda: Nitratação; redução Referência para 7-nitro-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona:
[000489] WO 2008/063669 A1 (incorporado por referência).
[000490] Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 2007/0155738 A1 (incorporado por referência).
[000491] Esquema 23
Figure img0054
Legenda: 2,6-lutidina; di-hidroxilação Referências para preparar (S)-l-terc-butil 2-metil 5-oxopirrolidina-1,2- dicarboxilato (23c):
[000492] Publicação de Pedido de Patente dos Estados Unidos 2011/0237636 A1 (incorporado por referência).
[000493] WO 2011/015537 A1 (incorporado por referência). Referências para preparar 2-(hidroximetil)-2,3-di-hidro-1H-pirrol-1- carboxilato de (S)-terc-butila (23d):
[000494] Oliveira, Denilson F.; Miranda, Paulo C. M. L.; Correia, Car¬los R. D; Journal of Organic Chemistry (1999), 64(18), 6646-6652.
[000495] Schumacher, Kelly K.; Jiang, Jianjun; Joullie, Madeleine M; Tetrahedron: Asymmetry (1998), 9(1), 47-53.
[000496] Dormoy, Jean Robert; Castro, Bertrand; Chappuis, Geor¬ges; Fritschi, Ulrich Stefan; Grogg, Peter; Angewandte Chemie (1980), 92(9), 761.
[000497] Woo, Grace H. C.; Kim, Se-Ho; Wipf, Peter; Tetrahedron (2006), 62(45), 10507-10517.
[000498] Moro, Angelica Venturini; Rodrigues dos Santos, Marcelo; Correia, Carlos Roque D; European Journal of Organic Chemistry (2011), 2011(36), 7259-7270. Referência para acoplamento Heck relacionado com a preparação de compostos 23g e 23h:
[000499] Severino, Elias A.; Costenaro, Edson R.; Garcia, Ariel L. L.; Correia, Carlos Roque D; Organic Letters (2003), 5(3), 305-308.
[000500] Esquema 24
Figure img0055
Legenda: Desproteção; P = grupo de proteção
[000501] Esquema 25
Figure img0056
[000502] Esquema 26
Figure img0057
Legenda: acetona; n-BuLi em Hexanos; terc-butilmetil éter
[000503] Esquema 27
Figure img0058
[000504] Esquema 28
Figure img0059
Legenda: piridina
[000505] Esquema 29
Figure img0060
[000506] Esquema 30
Figure img0061
Legenda: Acetona; H2SO4 conc.; 5 eq.; ou HCl conc.; 10 equivalentes ou 6 NHCl; Solvente
[000507] Esquema 31
Figure img0062
Legenda: Acetona; H2SO4 conc.; 5 eq.; ou HCl conc.; 10 equivalentes ou 6 NHCl; Solvente
[000508] Esquema 32
Figure img0063
Legenda: Acetona; H2SO4 conc.; 5 eq.; ou HCl conc.; 10 equivalentes ou 6 NHCl; Solvente
[000509] Esquema 33
Figure img0064
Legenda: Lv = grupo de saída
[000510] Esquema 34
Figure img0065
Legenda: Imidazol
[000511] Esquema 35
Figure img0066
Legenda: Cloreto de tritila
[000512] Esquema 36
Figure img0067
[000513] Esquema 37
Figure img0068
[000514] Esquema 38
Figure img0069
[000515] Esquema 39A
Figure img0070
Legenda: piridina
[000516] Esquema 39B
Figure img0071
Legenda: H2SO4 concentrado; HCl concentrado
[000517] Esquema 40
Figure img0072
Legenda: P = grupo de proteção; Base Litiada apropriadamente prote-gida; 30 minutos Referências para preparação de 4-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-2,2- dimetil-6-oxodi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aR,4R,6aR)-terc-butila (40a):
[000518] Malladi, Venkata L. A.; Sobczak, Adam J.; Meyer, Tiffany M.; Pei, Dehua; Wnuk, Stanislaw F; Bioorganic & Medicinal Chemistry (2011), 19(18), 5507-5519.
[000519] Fiaux, Helene; Kuntz, Douglas A.; Hoffman, Daniela; Jan- zer, Robert C.; Gerber-Lemaire, Sandrine; Rose, David R.; Juillerat- Jeanneret; Bioorganic & Medicinal Chemistry (2008), 16(15), 7337¬7346.
[000520] Yokoyama, Masataka; Ikenogami, Taku; Togo, Hideo. Inage-ku, Yayoi-cho; Perkin 1 (2000), (13), 2067-2071.
[000521] Zanardi, Franca; Battistini, Lucia; Nespi, Marika; Rassu, Gloria; Spanu, Pietro; Cornia, Mara; Casiraghi, Giovanni; Tetrahedron: Asymmetry (1996), 7(4), 1167-1180. Referências para redução de Lactona (40a) em Lactol (40b):
[000522] Malladi, Venkata L. A.; Sobczak, Adam J.; Meyer, Tiffany M.; Pei, Dehua; Wnuk, Stanislaw F; Bioorganic & Medicinal Chemistry (2011), 19(18), 5507-5519.
[000523] Wang, Xiao-Ling; Huang, Wen-Feng; Lei, Xin-Sheng; Wei, Bang-Guo; Lin, Guo-Qiang; Tetrahedron (2011), 67(26), 4919-4923
[000524] Liu, Xue-Kui; Qiu, Shi; Xiang, Yong-Gang; Ruan, Yuan¬Ping; Zheng, Xiao; Huang, Pei-Qiang; Journal of Organic Chemistry (2011), 76(12), 4952-4963.
[000525] Hulme, Alison N.; Montgomery, Charles H; Tetrahedron Let¬ters (2003), 44(41), 7649-7653. Referências para Lactol para composto de Bromo (40c):
[000526] Reddy, P. Ganapati; Chun, Byoung-Kwon; Zhang, Hai-Ren; Rachakonda, Suguna; Ross, Bruce S.; Sofia, Michael J; Journal of Or-ganic Chemistry (2011), 76(10), 3782-3790.
[000527] Chatterjee, Abhishek; Hazra, Amrita B.; Abdelwahed, Sameh; Hilmey, David G.; Begley, Tadhg P; Angewandte Chemie, Edição Internacional (2010), 49(46), 8653-8656.
[000528] WO 2010075549 A2 (incorporado por referência).
[000529] WO 2010075517 A2 (incorporado por referência).
[000530] WO 2009152095 A2 (incorporado por referência).
[000531] Castro, Bertrand R. Ecole Nationale Superieure de Chimie de Montpellier, Montpellier, Fr. Organic Reactions (Hoboken, NJ, Esta¬dos Unidos) (1983), 29 Publisher: John Wiley & Sons, Inc.
[000532] Esquema 41
Figure img0073
Legenda: base; cbzValina
[000533] Em uma modalidade, o composto de fórmula I é seleciona-
Figure img0074
[000534] Em uma modalidade, o composto de fórmula I é
Figure img0075
ou um sal farmaceuticamente aceitável do
[000535] Em uma modalidade, o composto de fórmula I é seleciona- aceitáveis dos mesmos, em que em cada caso "AA" representa um grupo aminoacila de um aminoácido, por exemplo, alanila, leucila, me- tionila, ou valinila.
Figure img0076
[000536] Em uma modalidade, o composto de fórmula I é seleciona do do grupo que consiste em
Figure img0077
e
Figure img0078
e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mes¬mos, em que em cada caso "AA" representa um grupo aminoacila de um aminoácido, por exemplo, alanila, leucila, metionila, ou valinila.
[000537] Em uma modalidade, o composto de fórmula I é seleciona-
Figure img0079
do do grupo que consiste em 0H N^N , e
Figure img0080
, e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[000538] Em uma modalidade, o composto de fórmula I é seleciona- do do grupo que consiste em
Figure img0081
Figure img0082
sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[000539] Em uma modalidade, o composto de fórmula I é seleciona- do do grupo que consiste em
Figure img0083
Figure img0084
e sais farmaceuticamente aceitáveis dos
[000540] Em uma modalidade, o composto de fórmula I é
Figure img0085
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[000541] Em uma modalidade, o composto de fórmula I é
Figure img0086
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[000542] Em uma modalidade, o composto de fórmula I é seleciona-
Figure img0087
Figure img0088
aceitáveis dos mesmos.
[000543] Em uma modalidade, o composto de fórmula I é seleciona- do do grupo que consiste em
Figure img0089
Figure img0090
e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mes¬ mos.
[000544] Em uma modalidade, o composto de fórmula I é seleciona¬do do grupo que consiste em
Figure img0091
e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
[000545] Em uma modalidade, o composto de fórmula I é
Figure img0092
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[000546] Um aspecto da invenção é uma composição farmacêutica que compreende um composto da invenção, ou um sal farmaceutica- mente aceitável do mesmo, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
[000547] Um aspecto da invenção é um método de preparar uma composição farmacêutica. O método inclui a etapa de combinação de um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, com um veículo farmaceuticamente aceitável.
[000548] Compostos da invenção são úteis para a inibição da ativi¬dade de ácido nucleico polimerase de certas viroses. Compostos da invenção são também úteis para a inibição de replicação viral ou tra¬tamento de infecções virais.
[000549] RNA viroses animais são classificadas em três grupos dis- tintos com base em seu genoma e modo de replicação (e os grupos numéricos com base na classificação Baltimore mais antiga):
[000550] As viroses de RNA de filamento duplo (ds) (classificação Baltimore Grupo III) contêm uma a doze diferentes moléculas de RNA, cada das quais codifica para uma ou mais proteínas virais. Exemplos de viroses de dsRNA incluem reoviridae.
[000551] Viroses de RNA de filamento único (ss) de sentido positivo (classificação Baltimore Grupo IV) têm seu genoma diretamente utili¬zado como se fosse mRNA, produzindo uma única proteína que é mo¬dificada por proteínas hospedeiras e virais para formar as várias prote¬ínas necessárias para a replicação. Uma destas inclui RNA polimerase dependente de RNA, que copia o RNA viral para formar uma forma replicativa de filamento duplo, que por sua vez impulsiona a formação de novos vírions. Exemplos de viroses de ssRNA de senso positivo incluem togaviridae, flaviviridae, calciviridae, coronaviridae, picorna- viridae, e togaviridae.
[000552] Viroses de ssRNA de sentido negativo (classificação Balti¬more Grupo V) devem ter seu genoma copiado por uma RNA polime- rase para formar RNA de sentido positivo. Isto significa que o vírus de¬ve trazer junto com ele a enzima RNA polimerase dependente do RNA. A molécula de RNA de sentido positivo então age como mRNA viral, que é transladado para dentro das proteínas pelas ribossomas hospedeiras. A proteína resultante continua a impulsionar a sintase de novos vírions, tal como proteínas de capsídeo e RNA replicase, que é usada para produzir novas moléculas de RNA de sentido negativo. Vi¬roses de ssRNA de sentido negativo incluem bornaviridae, filoviridae, orthomyxoviridae, paramyxoviridae, rhabdoviridae, arenaviridae, e bunyaviridae.
[000553] Retroviroses (classificação Baltimore Grupo VI) têm um ge- noma de RNA de filamento único, porém geralmente não são conside- radas viroses de RNA porque selas usam intermediários de DNA para replicar-se. Transcriptase reversa, uma enzima viral que se origina do próprio vírus após ele ser não revestido, converte o RNA viram em um filamento complementar de DNA, que é copiado para produzir uma molécula de filamento duplo de DNA viral. Após este DNA ser integra¬do, a expressão dos genes codificados pode levar à formação de no¬vos vírions. As retroviroses incluem, sem limitação, HIV-1 e HIV-2.
[000554] Um aspecto da invenção é um método de inibição da ativi¬dade de ácido nucleico porimerase viral de um vírus. O método inclui a etapa de contato de ácido nucleico polimerase viral do vírus com uma quantidade efetiva de um composto da invenção, ou um sal farmaceu- ticamente aceitável do mesmo.
[000555] Em uma modalidade, ácido nucleico polimerase viral é uma DNA polimerase.
[000556] Em uma modalidade o ácido nucleico polimerase viral é um RNA polimerase.
[000557] Em uma modalidade, o vírus é selecionado do grupo que consiste em RNA viroses.
[000558] Em uma modalidade, o vírus é selecionado do grupo que consiste em orthomyxoviridae, paramyxoviridae, arenaviridae, bunya- viridae, flaviviridae, filoviridae, togaviridae, picornaviridae, e coronaviri- dae.
[000559] Em uma modalidade, o vírus é selecionado do grupo que consiste em adenovírus, rinovírus, vírus da hepatite A, vírus da hepati¬te C, polio vírus, vírus do sarampo, vírus Ebola, Coxsackie vírus, vírus do Oeste do Nilo, vírus da varíola, vírus da Febre Amarela, vírus da Febre Dengue, vírus da influenza A, vírus da influenza B, lassa vírus, vírus da coriomeningite linfocítica, vírus Junino, vírus machuppo, vírus guanarito, hantavírus, vírus da Febre Rift Valley, La Crosse vírus, vírus da encefalite Califórnia, Crimean-Congo vírus, Vírus de Marburg, Vírus da encefalite Japonesa, Kyasanur Forest vírus, vírus da encefalite equina Venezuelana, Vírus da encefalite equina Oriental, Vírus da en- cefalite equina Ocidental, vírus da síndrome respiratória aguda severa (SARS), vírus da parainfluenza, vírus sincicial respiratório, Vírus Punta Toro, Tacaribe vírus, e Vírus Pichinde.
[000560] Em uma modalidade, o vírus é selecionado do grupo que consiste em adenovírus, vírus da Febre Dengue, vírus Ebola, Vírus de Marburg, vírus da influenza A, vírus da influenza B, vírus Junino, vírus do sarampo, vírus da parainfluenza, Vírus Pichinde, Vírus Punta Toro, vírus sincicial respiratório, rinovírus, vírus da Febre Rift Valley, SARS vírus, Tacaribe vírus, vírus da encefalite equina Venezuelana, vírus do Oeste do Nilo, e vírus da Febre Amarela.
[000561] Em uma modalidade, o vírus é selecionado do grupo que consiste em vírus Ebola, vírus da Febre Amarela, Vírus de Marburg, vírus da influenza A, e vírus da influenza B .
[000562] Um aspecto da invenção é um método de inibição da repli- cação de um vírus. O método inclui a etapa de contatar um vírus com uma quantidade efetiva de um composto da invenção, ou um sal far- maceuticamente aceitável do mesmo: a fim de inibir a replicação do vírus.
[000563] Em uma modalidade, o vírus é selecionado do grupo que consiste em RNA viroses.
[000564] Em uma modalidade, o vírus é selecionado do grupo que consiste em orthomyxoviridae, paramyxoviridae, arenaviridae, bunya- viridae, flaviviridae, filoviridae, togaviridae, picornaviridae, e coronaviri- dae.
[000565] Em uma modalidade, o vírus é selecionado do grupo que consiste em adenovírus, rinovírus, vírus da hepatite A, vírus da hepati¬te C, polio vírus, vírus do sarampo, vírus Ebola, Coxsackie vírus, vírus do Oeste do Nilo, vírus da varíola, vírus da Febre Amarela, vírus da Febre Dengue, vírus da influenza A, vírus da influenza B, lassa vírus, vírus da coriomeningite linfocítica, vírus Junino, vírus machuppo, vírus guanarito, hantavírus, vírus da Febre Rift Valley, La Crosse vírus, vírus da encefalite Califórnia, Crimean-Congo vírus, Vírus de Marburg, vírus da encefalite Japonesa, Kyasanur Forest vírus, vírus da encefalite equina Venezuelana, vírus da encefalite equina Oriental, vírus da en- cefalite equina Ocidental, vírus da síndrome respiratória aguda severa (SARS), vírus da parainfluenza, vírus sincicial respiratório, Vírus Punta Toro, Tacaribe vírus, e Vírus Pichinde .
[000566] Em uma modalidade, o vírus é selecionado do grupo que consiste em adenovírus, vírus da Febre Dengue, vírus Ebola, Vírus de Marburg, vírus da influenza A, vírus da influenza B, vírus Junino, vírus do sarampo, vírus da parainfluenza, Vírus Pichinde, Vírus Punta Toro, vírus sincicial respiratório, rinovírus, vírus da Febre Rift Valley, SARS vírus, Tacaribe vírus, vírus da encefalite equina Venezuelana, vírus do Oeste do Nilo, e vírus da Febre Amarela .
[000567] Em uma modalidade, o vírus é selecionado do grupo que consiste em vírus Ebola, vírus da Febre Amarela, Vírus de Marburg, vírus da influenza A, e vírus da influenza B .
[000568] Um aspecto da invenção é um método de tratar uma infec¬ção viral em um indivíduo. O método inclui a etapa de administrar a um indivíduo em necessidade do mesmo uma quantidade efetiva de um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
[000569] Em uma modalidade, o vírus é selecionado do grupo que consiste em RNA viroses.
[000570] Em uma modalidade, o vírus é selecionado do grupo que consiste em orthomyxoviridae, paramyxoviridae, arenaviridae, bunya- viridae, flaviviridae, filoviridae, togaviridae, picornaviridae, e coronaviri- dae.
[000571] Em uma modalidade, o vírus é selecionado do grupo que consiste em adenovírus, rinovírus, vírus da hepatite A, vírus da hepati¬te C, polio vírus, vírus do sarampo, vírus Ebola, Coxsackie vírus, vírus do Oeste do Nilo, vírus da varíola, vírus da Febre Amarela, vírus da Febre Dengue, vírus da influenza A, vírus da influenza B, lassa vírus, vírus da coriomeningite linfocítica, vírus Junino, vírus machuppo, vírus guanarito, hantavírus, vírus da Febre Rift Valley, La Crosse vírus, vírus da encefalite Califórnia, Crimean-Congo vírus, Vírus de Marburg, vírus da encefalite Japonesa, Kyasanur Forest vírus, vírus da encefalite equina Venezuelana, Vírus da encefalite equina Oriental, vírus da en- cefalite equina Ocidental, vírus da síndrome respiratória aguda severa (SARS), vírus da parainfluenza, vírus sincicial respiratório, Vírus Punta Toro, Tacaribe vírus, e Vírus Pichinde .
[000572] Em uma modalidade, o vírus é selecionado do grupo que consiste em adenovírus, vírus da Febre Dengue, vírus Ebola, Vírus de Marburg, vírus da influenza A, vírus da influenza B, vírus Junino, vírus do sarampo, vírus da parainfluenza, Vírus Pichinde, Vírus Punta Toro, vírus sincicial respiratório, rinovírus, vírus da Febre Rift Valley, SARS vírus, Tacaribe vírus, vírus da encefalite equina Venezuelana, vírus do Oeste do Nilo, e vírus da Febre Amarela.
[000573] Em uma modalidade, o vírus é selecionado do grupo que consiste em vírus Ebola, vírus da Febre Amarela, Vírus de Marburg, vírus da influenza A, e vírus da influenza B.
[000574] Os compostos da invenção podem ser formulados como composições farmacêuticas e administrados a um hospedeiro mamífe¬ro, tal como um paciente humano, de uma variedade de formas adap¬tadas à rotina de administração escolhida, por exemplo, oralmente ou parenteralmente, por rotinas intravenosa, intraperitoneal, intramuscu¬lar, tópica ou subcutânea.
[000575] Desse modo, os presentes compostos podem ser sistemi- camente administrados, por exemplo, oralmente, em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável, tal como um diluente inerte ou um veículo comestível assimilável. Eles podem ser inseridos em cápsulas de gelatina de casca dura ou macia, podem ser prensados em comprimidos, ou podem ser incorporados diretamente com o ali¬mento da dieta do paciente. Para administração terapêutica oral, o composto ativo pode ser combinado com um ou mais excipientes e usados na forma de comprimidos digeríveis, comprimidos bucais, tro- ciscos, cápsulas, elixires, suspensões, xaropes, wafers, e similares. Tais composições e preparações devem conter pelo menos 0,1% de composto ativo. A percentagem das composições e preparações pode, de fato, ser variada e pode convenientemente ser entre cerca de 2 a cerca de 60% do peso de uma determinado forma de dosagem unitá¬ria. A quantidade de composto ativo em tais composições terapeuti- camente úteis é tal que um nível de dosagem efetivo seja obtido.
[000576] Os comprimidos, trociscos, pílulas, cápsulas, e similares podem também conter os seguintes diluentes e veículos: aglutinantes tais como goma tragacanto, acácia, amido de milho ou gelatina; exci- pientes, tal como fosfato de dicálcio; um agente desintegrante, tal co¬mo amido de milho, amido de batata, ácido algínico e similares; um lubrificante, tal como estearato de magnésio; e um agente adoçante, tal como sacarose, frutose, lactose ou aspartame ou um agente aro- matizante, tal como hortelã-pimenta, óleo de gualtéria, ou aromatizante de cereja, pode ser adicionado. Quando a forma de dosagem unitária é uma cápsula, ela pode conter, além de materiais do tipo acima, um veículo líquido, tal como um óleo vegetal ou um polietileno glicol. Vá¬rios outros materiais podem estar presente como revestimentos ou pa¬ra de outro modo modificar a forma física da forma de dosagem unitá¬ria sólida. Por exemplo, comprimidos, pílulas, ou cápsulas podem ser revestidos com gelatina, cera, goma-laca ou açúcar, e similares. Um xarope ou elixir pode conter o composto ativo, sacarose ou frutose, como um agente adoçante, metil e propilparabenos como preservati¬vos, um pigmento e aromatizante, tal como sabor de cereja ou laranja. De fato, qualquer material usado na preparação de qualquer forma de dosagem unitária deve ser farmaceuticamente aceitável e substanci¬almente não tóxico nas quantidades empregadas. Além disso, o com¬posto ativo pode ser incorporado em preparações e dispositivos de liberação prolongada.
[000577] O composto ativo pode também ser administrado intrave-nosamente ou intraperitonealmente por infusão ou injeção. Soluções do composto ativo ou seus sais podem ser preparados em água ou solução aquosa fisiologicamente aceitável, opcionalmente misturados com um tensoativo não tóxico. Dispersões podem também ser prepa¬radas em glicerol, polietileno glicóis líquidos, triacetina, e misturas dos mesmos e em óleos. Sob condições ordinárias de armazenagem e uso, estas preparações contêm um preservativo para prevenir o cres¬cimento de micro-organismos.
[000578] As formas de dosagem farmacêutica adequadas para inje¬ção ou infusão, podem incluir soluções ou dispersões aquosas estéreis ou pós estéreis, compreendendo o ingrediente ativo que são adapta¬das para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões inje¬táveis ou para infusão estéreis, opcionalmente encapsuladas em lipos- somas. Em todos os casos, a forma de dosagem final deve ser estéril, fluida e estável sob as condições de fabricação e armazenagem. O portador ou veículo líquido pode ser um solvente ou meio de dispersão líquido compreendendo, por exemplo, água, etanol, um poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol, polietileno glicóis líquidos, e simila¬res), óleos vegetais, gliceril ésteres não tóxicos, e misturas adequadas dos mesmos. A fluidez apropriada pode ser mantida, por exemplo, pe¬la formação de lipossomas, pela manutenção do tamanho de partícula requerido no caso de dispersões ou pelo uso de tensoativos. A pre¬venção da ação de micro-organismos pode ser realizada por vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clo- robutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal, e similares. Em muitos ca¬sos, será preferível incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, tampões ou cloreto de sódio. A absorção prolongada das composições injetáveis pode ser realizada pelo uso nas composições de agentes de retardo da absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio e gela¬tina.
[000579] Soluções injetáveis estéreis são preparadas incorporando- se o composto ativo na quantidade requerida no solvente apropriado com vários dos outros ingredientes enumerados acima, como requeri¬do, seguido por esterilização por filtro. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, métodos de preparação podem incluir secagem por vácuo e as técnicas de secagem por con-gelamento, que produzem um pó do ingrediente ativo mais qualquer ingrediente desejado adicional presente nas soluções filtradas previa-mente estéreis.
[000580] Para administração tópica, os presentes compostos podem ser aplicados em forma pura, isto é, quando eles são líquidos. Entre¬tanto, geralmente será desejável administrá-los à pele como composi¬ções ou formulações, em combinação com um veículo dermatologica- mente aceitável, que pode ser um sólido ou um líquido.
[000581] Veículos sólidos úteis incluem sólidos finamente divididos, tais como talco, argila, celulose microcristalina, sílica, alumina e simila¬res. Veículos líquidos úteis incluem água, álcoois ou glicois ou mistu¬ras água-álcool/glicol, na quais os presentes compostos podem ser dissolvidos ou disperses em níveis efetivos, opcionalmente com o asu- xílio de tensoativos não tóxicos. Adjuvantes tais como fragrâncias e agentes antimicrobianos adicionais podem ser adicionados para otimi- zar as propriedades para um determinado uso. As composições líqui¬das resultantes podem ser aplicadas de almofadas absorventes, usa¬das para impregnar bandagens e outros curativos, ou vaporizadas so¬bre a área afetada usando vaporizadores do tipo bomba ou aerossol.
[000582] Espessantes, tais como polímeros sintéticos, ácidos graxos, sais de ácido graxo e ésteres, álcoois graxos, celuloses modificadas ou materiais minerais modificadas, podem também ser empregados com veículos líquidos para formar pastas espalháveis, géis, unguen¬tos, sabões, e similares, para aplicação diretamente à pele do usuário.
[000583] Exemplos de composições dermatológicas úteis, que po¬dem ser usadas para liberar os compostos de fórmula I para a pele, são conhecidos na técnica; por exemplo, veja Jacquet et al. (Patente dos Estados Unidos No. 4.608.392; incorporada aqui por referência), Geria (Patente dos Estados Unidos No. 4.992.478; incorporada aqui por referência), Smith et al. (Patente dos Estados Unidos No. 4.559.157; incorporada aqui por referência), e Wortzman (Patente dos Estados Unidos No. 4.820.508; incorporada aqui por referência).
[000584] Dosagens úteis dos compostos da invenção podem ser de-terminadas comparando-se sua atividade in vitro e atividade in vivo em modelos animais. Métodos para a extrapolação de dosagens efetivas em camundongos, e outros animais, para humanos são conhecidas na técnica; por exemplo, veja a Patente dos Estados Unidos No. 4.938.949.
[000585] As quantidades do composto, ou um sal ativo ou derivado do mesmo, requerida para uso no tratamento variará não apenas com o composto particular ou sal selecionado, porém também com a rotina de administração, a natureza da condição que está sendo tratada, e a idade e condição do paciente e estará finalmente na discrição do mé¬dico ou clínico atendente.
[000586] De um modo geral, entretanto, uma dose adequada será na faixa de cerca de 0,5 a cerca de 100 mg/kg de peso corporal do recep¬tor por dia, por exemplo, de cerca de 3 a cerca de 90 mg/kg de peso corporal por dia, de cerca de 6 a cerca de 75 mg por quilograma de peso corporal por dia, de cerca de 10 a cerca de 60 mg/kg/dia, ou de cerca de 15 a cerca de 50 mg/kg/dia.
[000587] Compostos da invenção podem ser convenientemente for-mulados em forma de dosagem unitária; por exemplo, contendo 5 a 1000 mg, 10 a 750 mg, ou 50 a 500 mg de ingrediente ativo por forma de dosagem unitária. Em uma modalidade, a invenção fornece uma composição que compreende um composto da invenção formulado em tal forma de dosagem unitária. A dose desejada pode conveniente¬mente ser apresentada em uma dose única ou como doses divididas a serem administradas em intervalos apropriados, por exemplo, como duas, três, quatro ou mais subdoses por dia. A própria subdose pode ser também dividida, por exemplo, em diversas administrações livre¬mente espaçadas discretas, tal como múltiplas inalações a partir de um insuflador ou por aplicação de uma pluralidade de gotas no olho.
[000588] Compostos da invenção podem também ser administrados em combinação com outros agentes terapêuticos, por exemplo, outros agentes que são úteis para tratar uma infecção viral.
[000589] A invenção também fornece um kit que compreende um composto da invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pelo menos outro agente terapêutico, material de empacota-mento, e instruções para a administração do composto da invenção ou do sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e do outro agente, ou agentes terapêuticos a um mamífero para tratar uma infecção viral no mamífero. Em uma modalidade, o mamífero é um humano.
[000590] A invenção será agora ilustrada pelos seguintes exemplos não limitantes. EXEMPLOS Exemplo 1: dicloridrato de (2S,3S,4R,5R)-2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-5-(hidroximetil)pirrolidina-3,4-diol (12i)
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[000591] 2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-diidróxi-5- (hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (28f) foi tratado como segue em três bateladas.
[000592] A Batelada 1. (28f) foi dissolvida em HCl aq. (1658,8 mmol, 118 mL de HCl concentrado e 293 mL de água).
[000593] A Batelada 2. (28f) foi dissolvida em HCl aq. (239,6 mmol, 169 mL de HCl concentrado e 421 mL de água).
[000594] A Batelada 3. (28f) foi dissolvida em HCl aq. (263,5 mmol, 186 mL de HCl concentrado e 468 mL de água).
[000595] As misturas de reação foram agitadas em temperatura am¬biente durante 30 minutos (evolução forte de gás de CO2) e em segui¬da cada batelada foi concentrada em vácuo à secura (80-90 °C). As bateladas 2 e 3 foram reunidas para fornecer 226 g de produto ama¬relo claro úmido. A batelada 1 forneceu 91,4 g de um produto cinza escuro. A cristalização foi feita como segue: Para as bateladas 2 e 3 o produto úmido: 226 mL de água foram adicionados ao produto em se¬guida aquecidos a 50 °C em cujo ponto quente etanol foi vagarosa¬mente adicionado até a cristalização iniciar. A mistura foi mantida a 50 °C durante 10 minutos, em seguida deixada alcançar 25°C com forte agitação antes da filtração para fornecer o pó de cor amarela clara de (2S,3S,4R,5R)-2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-5- (hidroximetil)pirrolidina-3,4-diol (12i) (88 g, 52 %). A Batelada 1 foi pu-rificada da mesma forma para fornecer 33,0 g (59 %) de produto de cor cinzenta clara. A produção total foi de 121,0 g (53,5 %) após seca- gem a 55 °C em vácuo elevado. O líquido mãe da recristalização das bateladas 1 e 2 foi reprocessado para fornecer 15,0 g de produto em pó amarelado claro (12i); MP: 238 °C. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,60 (s, 1H), 13,25 (s, 1H), 10,23 (s, 1H), 9,13 (s, 2H), 8,84 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 8,11 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 5,55 (s, 2H), 4,78 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,44 (dd, J = 8,8, 5,0 Hz, 1H), 4,14 — 4,02 (m, 1H), 3,73 (d, J = 5,1 Hz, 2H), 3,52 (s, 1H); 1H NMR (300 MHz, D2O) δ 8,33 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 4,90 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 4,65 (s, 1H), 4,37 (dd, J = 4,8, 3,4 Hz, 1H), 3,89 (s, 1H), 3,88 (s, 1H), 3,81 (dd, J = 8,1, 4,5 Hz, 1H); MS (ES+) 266,3 (M+1); Rotação ótica -52,69; (H2O,C=1,15); Análise: Calculada para CiiHi5N5θ3-2HCl,0,25H2θ: C, 38,55; H, 5,15; Cl, 20,44; N, 20,69; Encontrada: C, 38,67; H, 5,05; Cl, 20,45; N, 20,42.
[000596] Método alternativo para a preparação de (2S,3S,4R,5R)-2- (4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroximetil)pirrolidina-3,4- diol dicloridrato (12i) de diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2-(acetoximetil)-1- (terc-butoxicarbonil)-5-(4-chloro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7- il)pirrolidina-3,4-di-ila (28c).
[000597] A uma solução clara de diacetato de (2R,3R,4S,5S)- 2- (acetoximetil)-1-(tercbutoxicarbonil)-5-(4-cloro-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-pirrolidina-3,4-di-ila (28c) (40 g, 78,29 mmol) em etanol (400 mL) foi purgada amônia (35 % de volume com relação ao etanol) a -50 °C. A solução gelada foi derramada cuidadosamente em auto¬clave e aquecida durante 16 horas a 100 a 105 °C. TLC foi verificada para garantir a conclusão da reação. A mistura foi deixada resfriar à temperatura ambiente. O solvente foi destilado para fornecer 2-(4- amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-diidróxi-5- (hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (28f) 38 g como massa grudenta marrom escura.
[000598] A uma solução agitada de (2S,3R,4S,5S)-5-(hidroximetil)-2- (4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-pirrolidina-3,4-di-hidroxi carbo- xilato de terc-butila (28f) (292 g, 799,16 mmol) em água desionizada (584 mL) foi adicionado HCl concentrado (423 mL). A solução clara resultante foi agitada durante 30 minutos em temperatura ambiente. Em seguida ela foi concentrada à secura (banho de água a 80 a 90 °C) para obter um sólido amarelo úmido. A massa úmida foi em seguida diluída com água desionizada (475 mL) e deixada aquecer a 70 °C pa¬ra obter uma solução clara e resfriada a 50 °C. Etanol quente (1,6 L) foi adicionado vagarosamente para obter uma precipitação parcial. A mistura foi agitada durante 10 minutos a 60 °C. A mistura foi deixada resfriar à temperatura ambiente e resfriada a 10 °C e agitada durante 1 hora na mesma temperatura. O sólido obtido foi coletado por filtração, secado a 55 a 60 °C até o peso constante ser obtido para fornecer di- cloridrato de (2S,3S,4R,5R)-2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)- 5-(hidroximetil)pirrolidina-3,4-diol (12i) (65 g) como sólido amarelo cla¬ro a não totalmente branco; MP: 255,5 °C. 1H NMR (300 MHz, DMSO- d6) δ 14,64 (s, 1H), 13,19 (s, 1H), 10,20 (s, 1H), 9,11 (s, 2H), 8,83 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,11 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 5,99 - 5,20 (bs, 2H), 4,78 (s, 1H), 4,43 (dd, J = 8,9, 4,9 Hz, 1H), 4,11 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 3,73 (d, J = 5,1 Hz, 2H), 3,51 (s, 2H); MS (ES+) 266,1 (M+1); Rotação ótica -51,74 (H2O,C=0,545); Análise: Calculada para CiiHi5N5θ3’2HCl-0,25H2θ: C, 38,55; H, 5,15; Cl, 20,69; N, 20,44; Encontrada: C, 38,51; H, 5,11; Cl, 20,57; N, 20,31. Preparação de diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2-(acetoximetil)-1-(terc- butoxicarbonil)-5-(4-cloro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pirrolidina-3,4- di-ila (28c) e (2S,3R,4S,5S)-5-(hidroximetil)-2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-pirrolidina-3,4-di-hidroxi carboxilato de terc-butila (28f). Etapa 1: Preparação de D-Ribono lactona (19b)
[000599] Um frasco de três gargalos de 22 litros equipado com um agitador mecânico, um funil de adição de equalização de pressão de 1L, e um condensador eficiente foi carregado com D-ribose (19a) (2,0 kg, 13,33 mol) bicarbonato de sódio sólido (2,24 kg, 26,66 mole) e água (12 L). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora em cujo tempo a maior parte do sólido desapareceu. O vaso de reação foi colocado em um banho de gelo com a temperatura interna mantida a 5 ± 1 °C. O funil de adição foi carregado com bromo (710 mL, 13,86 mol) e o bromo foi adicionado à solução aquosa vigo¬rosamente agitada em uma taxa de cerca de 5 mL/minuto tal que a temperatura fosse mantida entre 5 a 10 °C. Quando a adição foi con¬cluída (cerca de 2,5 h) a solução alaranjada resultante foi agitada du¬rante um adicional de 3 h. À mistura reacional foi adicionado sulfito de hidrogênio de sódio sólido (~ 75 g) em pequenos lotes até a cor laranja ser completamente descarregada. A solução aquosa clara foi transfe¬rida a um frasco de evaporação de 20-L, e evaporada à secura em um evaporador giratório (80 °C, 10 mm Hg) durante um período de 4 h, para deixar um resíduo semissólido. Ao resíduo foi adicionado álcool etílico (~ 4 L) e agitado a 40 °C durante 1 hora. A mistura foi resfriada e filtrada por um funil para remover a maior parte dos sais inorgânicos insolúveis. O resíduo sólido foi lavado com álcool etílico (1 L). O filtra¬do foi transferido a um frasco de evaporação de 20-L e concentrado à secura em um evaporador giratório (50 °C, 10 mm Hg) para fornecer um resíduo sólido. A este resíduo foi adicionado álcool etílico (~ 3 L) e a suspensão foi agitada em temperatura ambiente durante 12 horas. O sólido foi coletado por filtração e lavado com álcool etílico (750 mL). O produto D-Ribono lactona (19b) foi secado em um forno a vácuo a 40 °C (0,1 mmHg). Produção de 1,28 kg (65 %); M.P. 77 - 80 °C; 1H NMR (D2O) δ 4,72 (d, 1 H), 4,57 (t, 1 H), 4,42 (d, 1 H), 3,80 (m, 2 H). Etapa 2: Preparação de 2,3-O-isopropilideno D-Ribono-1,4-lactona (19c)
[000600] Um vaso de reação encamisado de 50-L foi carregado com D-ribono-1,4-lactona (19b) (3,0 kg, 20,27 mol), e 30 L de acetona de grau ACS. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. A temperatura interna do vaso de reação foi diminuída a 10 °C e ácido sulfúrico concentrado (49 mL) foi adicionado vagaro-samente à mistura reacional. Na adição do ácido sulfúrico a tempera¬tura de reação interna foi deixada aquecer vagarosamente. A mistura de reação foi agitada nesta temperatura durante 2,5 a 3 h. A reação foi monitorada por TLC (TLC; 9:1, metilenocloreto:álcool de metila, Rf = 0,75). A mistura reacional foi neutralizada pela adição de bicarbonato de sódio sólido (~500 g) até o pH ser neutro. A mistura reacional foi filtrada sobre um funil. O resíduo sólido contendo sais inorgânicos foi lavado com acetona (3 L). O filtrado foi transferido a um frasco de eva¬poração de 20-L e evaporado à secura (50 °C, 10 mmHg) para forne¬cer um composto semissólido. O resíduo foi tomado em acetato de eti- la (3 L) e agitado em temperatura ambiente durante 4 horas em evapo- rador giratório. O sólido 2,3-O-isopropilideno D-Ribono-1,4-lactona (19c) foi coletado por filtração e secado em um forno a vácuo durante 16 horas a 40 °C (0,1 mm Hg). Produção: 1,819 kg (48 %); MP 136 - 140 °C; 1H NMR (CDCl3) δ 4,8 (dd, 2 H), 4,6 (s, 1 H), 3,85 (dd, 2 H), 1,5 (s, 3 H), 1,4 (s, 3 H). Etapa 3: Preparação de 2,3-O-isopropilideno 5-O-metanossulfonila D Ribono-1,4-lactona (26a)
[000601] Uma solução de 2,3-O-isopropilideno D-Ribono-1,4-lactona (19c) (4,3 kg, 22,96 mol) em piridina de grau ACS (20 L) foi agitada em um vaso de reação de 50 L em temperatura ambiente durante 15 mi¬nutos até a dissolução completa. A temperatura interna do vaso de re¬ação foi diminuída a -15 °C seguido pela adição lenta de sulfonilcloreto de metano (1,96 L, 25,26 mol) durante um período de 2 h. A tempera¬tura interna foi mantida a 0 a 5 °C. A reação foi agitada a 0 °C for ~ 2 h sob atmosfera inerte até a reação TLC não mostrar nenhum SM (TLC; 7:3 acetato de etila:hexano, Rf = 0,85). Na conclusão da reação DCM (10 L) foi adicionado e extraído com HCl a 3N (4 vezes, pH = 3), [No-vamente extrair a camada aquosa com DCM (5L) cada vez] seguido por rápida lavagem de NaHCO3 saturado. A fração orgânica foi secada sobre sulfato de sódio, filtrada e evaporada para xarope. Produção: 4,89 kg (80 %). O produto 2,3-O-isopropilideno 5-O-metanossulfonil D Ribono-1,4-lactona (26a) foi tomado para a etapa seguinte sem qual¬quer outra purificação; 1H NMR (CDCl3) δ 4,8 (m, 3H), 4,5 (m, 2H), 3,08 (s, 3H), 1,5 (s, 3H), 1,4 (s, 3H). Etapa 4: Preparação de 2,3-O-isopropilideno L Lixono-1,4-lactona (26b)
[000602] A 2,3-O-isopropilideno 5-O-metanossulfonil D Ribono-1,4- lactona (26a) (3,04 kg, 11,37 mol) foi adicionado água (10 L), seguido pela adição lenta de KOH sólido (1,83 kg, 32,77 mol). (Advertência: O composto entra na solução na adição de KOH sólido. A reação é exo- térmica enquanto adicionando KOH desse modo o vaso de reação foi colocado em um banho de gelo.) Até lá a adição de KOH estava com-pleta, a temperatura de reação alcançou 45 °C. A mistura de reação foi agitada a ~ temperatura ambiente (RT) durante 3 horas. A solução foi novamente resfriada em um banho de gelo e em seguida acidificada ao pH = 3 (exato) empregando-se solução concentrada de HCl. A mis¬tura reacional foi evaporada para fornecer um resíduo marrom sólido. O resíduo foi agitado duas vezes com acetona borbulhante (~ 5 L) du¬rante 1 hora e os orgânicos foram decantados. Os sais remanescentes foram em seguida dissolvidos em quantidade mínima de água e o pH ajustado a 3 empregando-se HCl concentrado (~ 200 mL). A solução aquosa foi concentrada e o resíduo sólido foi extraído com acetona (~5 L). A camada orgânica foi secada, filtrada, e evaporada para fornecer agulhas brancas de 2,3-O-isopropilideno L Lixono-1,4-lactona (26b). A cristalização pode ser realizada em acetona quente. Produção: 1,60 kg (75 %); 1H NMR (D2O) δ 5,00 (m, 2H), 3,8 (m, 3H), 1,5 (s, 3H), 1,4 (s, 3H). Etapa 5: Preparação de L Lixono-1,4-lactona de 2,3-O-isopropilideno 5-O-tertbutildimetilsilila (26c)
[000603] Um frasco de 3 gargalos de 22-L equipado com agitador mecânico foi adicionado L Lixono-1,4-lactona de 2,3-O-isopropilideno (26b) (2,0 kg, 10,63 mol), DMAP (~25 g), Imidazol (1,60 kg, 23,40 mol, 2,2 equiv.) e agitado em DMF de grau ACS (8 L) durante 1 hora. A temperatura de reação foi diminuída a 0 °C empregando-se banho de gelo. À mistura reacional foi adicionado TBDMSCl (2,08 kg, 13,81 mol, 1,3 equiv.) vagarosamente durante um período de 2 horas. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera inerte durante 14 horas. Na conclusão da reação como indicado por TLC (7:3, EtOAc: hexano, Rf = 0,80), a mistura reacional foi derramada em água gelada e extraída com EtOAc (x 2). A camada orgânica foi sepa¬rada, secada e filtrada para fornecer um resíduo oleoso. O vaso de reação, o qual contém o produto, foi colocado em um banho de gelo seguido pela adição de hexanos (~3 L). O composto cristaliza em he¬xano. Filtrar os cristais e lavar os cristais com quantidade mínima de hexanos e colocar o produto em forno a vácuo a 40 °C durante a noite para fornecer 2,3-O-isopropilideno 5-O-tertbutildimetilsilila L Lixono- 1,4-lactona (26c) 3,01 kg (93 %); 1H NMR (CDCl3) δ 4,8 (s, 2H), 4,5 (m, 1H), 3,9 (m, 2H), 1,5 (s, 3H), 1,4 (s, 3H), 0,9 (s, 9H), 0,0 (s, 6H). Etapa 6: Preparação de 2-(terc-Butildimetilsilanoxi)-1-(5-hidroximetil- 2,2-dimetil-[1,3]dioxolano-4-il)-ethanol (26d)
[000604] Uma solução de 2,3-O-isopropilideno 5-O-tertbutildimetilsilil L Lixono-1,4-lactona (26c) (3,00 kg, 9,93 mol) em THF:MeOH (9:1 v/v mistura, 15 L) foi agitada a RT durante 0,5 hora até a dissolução com-pleta ser observada. A temperatura interna do vaso de reação foi dimi-nuída a -5 °C. Boroidreto de sódio (751 g, 19,86 mol, 2 eq) foi adicio¬nado em pequenas porções, tal que a temperatura não exceda 15-17 °C. A adição do reagente foi concluída durante um período de 1 hora. A reação foi deixada alcançar a temperatura ambiente durante um pe¬ríodo de 3 horas e em seguida continuada agitando nesta temperatura durante 18 horas. A mistura reacional foi monitorada por TLC (3:7, acetato de etila:hexano, Rf = 0,15). Na conclusão da reação, a solução foi diluída com EtOAc (5 L), e lavada com 1 N de solução de HCl (2 vezes). A camada orgânica foi lavada com água, secada e evaporada para fornecer um resíduo oleoso. A esta adicionar ~ 3 L de hexanos e resfriar o frasco de evaporação em um banho de gelo. Os cristais pre¬cipitarão da solução. Filtrar os cristais e lavar com ~250 mL de hexa- nos. Secar em forno a vácuo a 40 °C durante 24 horas, para fornecer 2-(terc-Butildimetilsilanoxi)-1-(5-hidroximetil-2,2-dimetil-[1,3]dioxolano- 4-il)-etanol (26d). Produção: 2,32 kg (77 %); 1H NMR (CDCl3) δ 4,2 (m, 2H), 3,7 (m, 5H), 1,5 (s, 3H), 1,4 (s, 3H), 0,9 (s, 9H), 0,0 (s, 6H). Etapa 7: Preparação de 2-(tercbutildimetilsilailoxi)-1-1(5- metanossulfoniloximetil-2,2-dimetil-[1,3]dioxolan-4-il)-etil éster de ácido metanossulfônico (26e)
[000605] Um frasco com 3 gargalos de 500 mL foi carregado com piridina seca (20 mL), quantidade catalítica de DMAP seguido pela adição de cloreto de metano sulfonila (4,98 mL, 64,4 mmol, 4,0 eq) a 0°C. 2-(terc-Butildimetilsilanoxi)-1-(5-hidroximetil-2,2-dimetil-[1,3] dio- xolano-4-il)-etanol (26d) (5,0 g, 16,3 mmol) dissolvido em piridina seca (20 mL) foi adicionado vagarosamente ao vaso de reação. A reação foi agitada sob atmosfera inerte durante 4 horas nesta temperatura. (TLC; 1:9 acetato de etila:hexano, Rf = 0,85). Na conclusão da reação, adici¬onar 1 ml de água e 100 mL de EtOAc e agitar. Extrair a camada or¬gânica com água, secar e evaporar para fornecer xarope de 2- (tercbutildimetilsilailoxi)-1-1(5-metanossulfoniloximetil-2,2-dimetil- [1,3]dioxolan-4-il)-etil éster de ácido metanossulfônico (26e). Produ¬ção: 8,7 g (90 %). O cru foi tomado para a etapa seguinte sem qual- quer outra purificação. Etapa 8: Preparação de 5-O-tercbutildimetilsilil-1,4-N-benzilimino-2,3- O-ispropilideno-D-ribitol (26f)
[000606] Ao éster de ácido metanossulfônico de 2- (tercbutildimetilsilailoxi)-1-1(5-metanosulfoniloximetil-2,2-dimetil- [1,3]dioxolan-4-il)-etila (26e) (8,6 g) foi adicionado benzilamina pura (10 mL) e a reação foi aquecida a 70 °C durante 48 horas. TLC (4:1 hexano:EtOAc, Rf = 0,68) mostrou que a reação foi concluída. A mistu¬ra reacional foi resfriada e a solução salina foi adicionada à mistura reacional. Extrair a mistura reacional com diclorometano, lavar com água, secar e evaporar para fornecer o xarope que continha muito do reagente de amina. O resíduo foi absorvido em tolueno e àquele las¬cas de gelo seco foram adicionadas a fim de precipitar os sais. Filtrar o sólido e evaporar o filtrado para fornecer o produto desejado 5-O- tercbutildimetilsilil-1,4-N-benzilimino-2,3-O-ispropilideno-D-ribitol (26f) (5,6 g, 92 %). Isto foi levado para a etapa seguinte sem qualquer outra purificação. 1H NMR (CDCfe) δ 7,2 - 7,4 (m, 5H), 4,65 (m, 1H), 4,55 (dd, 1H), 4,0 (d, 1H), 3,6 - 3,8 (m, 3H), 3,1 (dd, 1H), 3,0 (m, 1H), 2,75 (dd, 1H), 1,5 (s, 3H), 1,34 (s, 3H), 0,9 (s, 9H), 0,0 (s, 6H). Etapa 9: Preparação de 5-O-tercbutildimetilsilil-1,4-imino-2,3-O- ispropilideno-D-ribitol (20a)
[000607] A 5-O-tercbutildimetilsilil-1,4-N-benzilimino-2,3-O- ispropilideno-D-ribitol (26f) (5,93 g, 15,74 mmol) em EtOH (15 mL) foi adicionado Pd/C (50 mg) e a reação foi hidrogenada a 5,62 kg/cm2 (80 psi) durante 5 horas, ou até TLC (3:2, hexano:EtOAc, Rf = 0,18) mos¬trou a reação estar completa. A mistura reacional foi filtrada sobre al¬mofada de Celita e a almofada de celita foi lavada com EtOH (25 mL). O filtrado foi passado através de um filtro de Millipore (0,25 μm) para remover sinais do catalisador e evaporado para fornecer 5-O- tercbutildimetilsilil-1,4-imino-2,3-O-ispropilideno-D-ribitol (20a) como um xarope. Produção: 3,5 g (75 % - etapas); 1H NMR (CDCl3) δ 4,65 (m, 2H), 3,60 (dd, 2H), 3,24 (t, 1H), 3,00 (d, 2H), 1,5 (s, 3H), 1,34 (s, 3H), 0,9 (s, 9H), 0,0 (s, 6H). Etapa 10:Preparação de(3aR,4R,6aS)-4-(((terc- butildimetilsilil)oxi)metil)-2,2-dimetil-4,6a-di-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5- c]pirrol (20b)
[000608] Uma solução de 5-O-tercbutildimetilsilil-1,4-imino-2,3-O- ispropilideno-D-ribitol (20a) (94 g, 327 mmol) em tolueno (470 mL) é adicionada a uma suspensão de N-Clorossucinimida (54,6 g, 408,8 mmol) em tolueno (470 mL) a 17 a 23 °C durante um período de 60 a 90 minutos. A mistura de reação foi agitada de 17 a 23 °C durante 1 hora, esfriada a -3 a 3 °C e agitada durante uma hora adicional. O subproduto de sucinimida é removido por filtração e a solução filtrada carregada diretamente a 60 % de solução de hidróxido de potássio (458 g, 8175 mmol em 305 mL de água) contendo brometo de tetrabu- tilamônio (10,53 g, 32,7 mmol). A mistura reacional é agitada a -5 a 5 °C durante 17 horas. Água (700 mL) é em seguida adicionado à mistu¬ra de duas fases para dissolver os precipitados inorgânicos e a solu¬ção de produto de tolueno é lavada com tampão de acetato de amônio (pH ~4,5), solução de salina tamponada (700 mL) e estabilizada com trietilamina antes de secar por circulação através de sulfato de magné¬sio e em seguida carregando sulfato de magnésio ao reator. A solução seca contendo (3aR,4R,6aS)-4-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-2,2- dimetil-4,6a-di-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol (20b) em tolueno é empregada como tal imediatamente durante a próxima etapa. Etapa 11: Preparação de 1S-5- O-terc-butildimetilsilil-1,4-dideóxi-1- C - [(4-metiloxipirrolo[3,2-d]pirimidin-9-N -(benziloxometil)-7-il)]-1,4-imino- 2,3- O -isopropilidina-D-ribitol (26g)
[000609] 6-Metóxi-N-(benziloximetil)-9-deazaipoxantina (27f) (271,0 g, 0,775 mole) foi adicionado a um frasco de base redonda de 3 garga- los de 22 litros, que contém anisol anidroso (1,7 L) sob atmosfera de N2. Esta mistura foi aquecida suavemente até a mistura tornar-se ho-mogênea (® 45 °C). A mistura foi resfriada à temperatura ambiente e éter anidroso (2,9 L) foi adicionado. O frasco de reação foi colocado em um banho de resfriamento e resfriado a -70 °C empregando-se gelo seco /acetona. A ® -20 °C, o brometo iniciou precipitando como um sólido branco fino. À suspensão foi adicionado nBuLi (1,6 N, 486 mL, 0,778 mol) durante um período de 1,2 hora por meio de um funil de gotejamento tal que a temperatura interna fosse mantida < -50 °C. Após a última adição, a análise de TLC (30 % de EtOAc/hexano) indi¬cou < 2 % do brometo permaneceu. (3aR,4R,6aS)-4-(((terc- butildimetilsilil)oxi)metil)-2,2-dimetil-4,6a-di-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5- c]pirrol (20b) (183 g, 0,642 mole) em tolueno foi adicionado durante um período de 15 minutos por meio de um funil de adição mantendo a temperatura interna abaixo de -50 °C. A mistura reacional tinha uma cor âmbar clara. O frasco de reação foi removido do banho de resfria¬mento e deixado aquecer. A mistura reacional foi deixada aquecer a - 2 °C e TLC (40 % de EtOAc/hexano, visualizado com o reagente Ehrli- chs) não mostrou nenhum (3aR,4R,6aS)-4-(((terc- butildimetilsilil)oxi)metil)-2,2-dimetil-4,6a-di-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5- c]pirrol (20b) remanescente. A reação foi saciada com H2O (2 L) e ex-traída com éter (2 x 2 L). As camadas orgânicas combinadas foram secadas (MgSO4) e concentradas em vácuo (vácuo elevado a 60 °C foi empregado para remover o anisol) para fornecer um óleo escuro cru de 1S-5-O-terc-butildimetilsilil-1,4-dideóxi-1-C-[(4-metiloxipirrolo[3,2- d]pirimidin-9-N-(benziloxometil)-7-il)]-1,4-imino-2,3-O-isopropilidina-D- ribitol (26g) o qual foi adequado para o uso na etapa seguinte. Produ¬ção de 284 g (79 %). Uma quantidade pequena (5 g) da mistura crua foi purificada por cromatografia de coluna flash (sílica gel, eluindo com 0 a 40 % de acetato de etila em hexano) para fornecer 1S-5-O-terc- butildimetilsilil-1,4-dideóxi-1-C-[(4-metiloxipirrolo[3,2-d]pirimidin-9-N- (benziloxometil)-7-il)]-1,4-imino-2,3-O-isopropilidina-D-ribitol (26g) co¬mo um xaropa alaranjado (3,4 g); 1H NMR (DMSO-d6) δ 0,02 (s, 3 H), 0,03 (s, 3 H), 0,8 (s, 9 H), 1,25 (s, 3 H), 1,48 (s, 3 H), 3,11-3,20 (m, 1 H), 3,60-3,71 (m, 2 H), 4,05 (s, 3 H), 4,26 (d, 1 H, J = 4,7 Hz), 4,49 (s, 2 H), 4,52-4,56 (m, 1 H), 4,81-4,85 (m, 1 H), 5,71 (s, 2 H), 7,21-7,32 (m, 5 H), 7,80 (s, 1 H), 8,40 (s, 1 H); 13C NMR (CDCl3) δ -5,46, -5,43, 18,30, 25,53, 25,88, 27,63, 53,43, 61,59, 62,54, 66,14, 70,14, 76,93, 82,32, 86,40, 114,43, 116,22, 116,56, 127,67, 127,93, 128,43, 130,55, 136,93, 149,61, 149,82, 156,16; IR 3420, 1610 cm-1; MS (ES+) m/z 555,3; Análise: Calculada para C29H42N4O5Si: C, 62,79; H, 7,63; N, 10,10; Encontrada: C, 62,95; H, 7,59; N, 9,95. Etapa 12: Preparação de 1S-N-terc-butoxicarbonil-5-O-terc- butildimetilsilil-1,4-dideóxi-1-C-[(4-metiloxipirrolo[3,2-d]pirimidin-9-N- (benziloxometil)-7-il)]-1,4-imino-2,3-O-isopropilidina-D-ribitol (26h)
[000610] 1S-5-O-terc-butildimetilsilil-1,4-dideóxi-1-C-[(4- metiloxipirrolo[3,2-d]pirimidin-9-N-(benziloxometil)-7-il)]-1,4-imino-2,3- O-isopropilidina-D-ribitol cru (26g) (275 g, 0,496 mole) foi absorvido em CH2CI2 (1,4 L) e resfriado a 5 °C em um banho de gelo/água. A es¬ta mistura resfriada foi adicionado Boc2O (168,5 g, 0,772 mole) em 4 porções tal que a temperatura da mistura reacional fosse mantida < 10 °C. Após 30 minutos, TLC (40 % de acetato de etila/hexano) mostrou que nenhum material de partida permaneceu. A mistura crua foi absor¬vida em SiO2 (700 g) e purificada por cromatografia flash (sílica gel 1,5 kg, eluindo com 10 % de acetato de etila em hexano). As frações apropriadas foram misturadas e concentradas em vácuo para fornecer 1S-N-terc-butoxicarbonil-5-O-terc-butildimetilsilil-1,4-dideóxi-1-C-[(4- metiloxipirrolo[3,2-d]pirimidin-9-N-(benziloxometil)-7-il)]-1,4-imino-2,3- O-isopropilidina-D-ribitol (26h) (272 g, 84 %) como um xarope amarelo; 1H NMR (CDCl3) δ 0,02 (s, 3 H), 0,03 (s, 3 H), 0,82 (s, 9 H), 1,31-1,58 (m, 15 H) 2,05-2,09 (m, 1 H); 3,58-3,80 (m, 2 H), 4,08 (s, 3 H), 4,17¬4,32 (m, 1 H), 4,44 (s, 2 H), 4,84-5,71 (m, 4 H), 7,19-7,33 (m, 5 H), 7,46 (s, 1 H), 8,51 (s, 1 H); 13C NMR (CDCl3) δ -5,31, -5,20, 14,10, 14,20, 18,32, 21,01, 22,64, 25,56, 25,93, 27,46, 28,46, 31,58, 53,44, 60,34, 62,48, 70,08, 76,96, 79,84, 111,69, 115,89, 127,67, 127,93, 128,43, 136,90, 148,62, 149,90, 154,38, 156,19; IR 1692, 1608 cm-1; MS (ES+) m/z 655,3; Análise: Calculada para C34H50N4O7Si: C, 62,43; H, 7,65; N, 8,56; Encontrada: C, 62,79; H, 7,89; N, 8,47. Etapa 13: Preparação de 4-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-6-(4-metóxi- 5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5- c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aR,4R,6S,6aS)-terc-butila (26i)
[000611] Hidróxido de paládio sobre carvão (120 g, 50 % tipo úmido) foi carregado em um frasco cônico de 2 L. Metanol (7,60 kg) foi pesa¬do em um polydrum de 20 L. 0,80 kg deste metanol foi empregado pa¬ra transferir ao frasco cônico contendo o catalisador de hidróxido de paládio e o frasco cônico turbilhonado para preparar uma mistura ho¬mogênea. Esta suspensão foi em seguida derramada em um vaso de hidrogenação de 20 L, o qual foi purgado com nitrogênio. O hidróxido de paládio residual sobre carvão foi enxaguado do frasco cônico ao vaso de hidrogenação com metanol (25 mL). 1S-N-terc-butoxicarbonil- 5-O-terc-butildimetilsilil-1,4-dideóxi-1-C-[(4-metiloxipirrolo[3,2- d]pirimidin-9-N-(benziloxometil)-7-il)]-1,4-imino-2,3-O-isopropilidina-D- ribitol (26h) (380 g) foi carregado em um polydrum de 10 L seguido por 1,32 kg do metanol do polydrum de 20 L. Esta solução metanólica de 1S-N-terc-butoxicarbonil-5-O-terc-butildimetilsilil-1,4-dideóxi-1-C-[(4- metiloxipirrolo[3,2-d]pirimidin-9-N-(benziloxometil)-7-il)]-1,4-imino-2,3- O-isopropilidina-D-ribitol (26h) foi carregada ao vaso de hidrogenação de 20 L. O resíduo do metanol no polydrum de 20 L foi carregado ao vaso, por meio do polydrum de 10 L, como um enxague. Uma solução de amônia em metanol (7,0 M, 0,68 kg) foi medida no polydrum de 10 L e transferida ao vaso de hidrogenação. O vaso foi pressurizado a 5 bar com gás de hidrogênio e os conteúdos aquecidos a 35 °C com agi¬tação. Estas condições de reação foram mantidas durante 20 horas, com o hidrogênio coroado como requerido. Após este tempo, a análise de HPLC indicou que aproximadamente 2 % de material de partida permaneceu, o que sugeriu que a reação foi suficientemente completa. Os conteúdos do vaso foram transferidos a um polydrum de 20 L em seguida filtrados através de um leito de celita. O nitrogênio foi purgado sobre o funil de filtro durante esta operação, e metanol (1,50 kg) foi empregado para lavar a massa filtrante. O filtrado e as lavagens foram transferidos a um evaporador giratório e concentrado sob pressão re¬duzida a um peso de 0,48 kg. Metanol (2,50 kg) foi adicionado ao fras¬co do evaporador giratório e a solução concentrada a uma massa constante (0,340 kg, aproximadamente produção quantitativa). Meta¬nol adicional (1,0 kg) foi adicionado ao produto 4-(((terc- butildimetilsilil)oxi)metil)-6-(4-metóxi-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-2,2- dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aR,4R,6S,6aS)-terc-butila (26i) para preparar uma solução para o uso na próxima etapa. Etapa 14: Preparação de cloridrato de 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-diidróxi-5- (hidroximetil)pirrolidin-2-il)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona (26j)
[000612] A solução de 4-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-6-(4-metóxi- 5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-2,2-dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5- c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aR,4R,6S,6aS)-terc-butila (26i) foi diluí¬da com metanol para produzir um volume total de 2,5 L e carregada a um frasco de base circular multi-gargalos de 5 L equipado com um agi¬tador mecânico, um condensador de refluxo e um termômetro interno. A solução foi aquecida empregando-se um banho de óleo simultanea¬mente, ácido hidroclórico concentrado (37 %, 2,18 L ou 2,62 kg) foi carregada durante 40 minutos (A temperatura interna aumentou de 43 °C a 58 °C durante este tempo). O aquecimento foi continuado por ou¬tras 6 horas, com a temperatura interna alcançando 68 °C, em cujo ponto a solução foi deixada resfriar à temperatura ambiente e agitada durante outras 15 horas. A solução marrom foi concentrada em um evaporador giratório a um volume de 1,5 - 2,0 L em seguida água (0,5 L) foi adicionado. A suspensão foi transferida novamente ao frasco de 5 L e aquecida para redissolver os sólidos. Isto foi obtido a 50 °C após água adicional (0,50 L) ter sido adicionado. Carvão (95 g) foi adiciona¬do, e a suspensão foi agitada a 50 °C durante 1 hora. O carvão foi re¬movido por filtração através de uma almofada de celita, lavando com água (1,0 L aproximadamente). O filtrado e as lavagens, agora parci¬almente descoloridas, foram concentrados em um evaporador giratório a um volume de 0,95 L. A solução em temperatura ambiente foi trans¬ferida a um frasco de 10 L e resfriada em um banho de gelo com agi¬tação. Etanol (7,90 L) foi carregado em porções à solução, motivando o produto a cristalizar. Durante outras 2 horas de agitação, a tempera¬tura interna foi reduzida a 5 °C. O produto sólido foi coletado por filtra¬ção sob uma manta de nitrogênio, e foi lavado com etanol pré- resfriado (3 x 250 mL). O produto foi extraído seco no funil de filtro du¬rante 30 minutos em seguida transferido a uma bandeja de secagem. O produto foi secado no forno a 70 °C durante a noite para fornecer o cloridrato de 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-diidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidin-2- il)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona (26j) como um sólido não total¬mente branco (101,2 g, 58 %). O cloridrato de 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4- diidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidin-2-il)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)- ona (26j) (101,2 g) foi carregado em um vaso encamisado de 20 L. Água (1,52 L) foi adicionado e a suspensão agitada até os sólidos dis¬solverem. Ácido hidroclórico concentrado (37 %, 63,6 mL) foi carrega¬do e a solução agitada a 25 °C. Uma vez homogênea, a solução foi tirada em um polydrum e o vaso foi lavado limpo com água (506 mL). Como uma etapa de clarificação, a solução de cloridrato de 7- ((2S,3S,4R,5R)-3,4-diidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidin-2-il)-3H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-4(5H)-ona (26j) foi filtrada através de um filtro de papel em um funil de filtro de polipropileno e em seguida carregada novamente ao vaso. A lavagem foi também filtrada desta maneira, em seguida carregada novamente ao vaso. A solução foi agitada a aproximada¬mente 15 °C durante 45 minutos. Etanol (1,0 L) foi adicionado à solu¬ção agitada durante 15 minutos. Os cristais sementes de cloridrato de 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-diidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidin-2-il)-3H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona (26j) (2,0 g) foram adicionados para induzir a cristalização. Após 70 minutos, etanol (1,0 L) foi adicionado e a suspensão foi agitada a 15 °C durante outras 19,5 horas. Etanol adi¬cional (8,0 L) foi adicionado à suspensão, e a agitação a 15 °C foi con¬tinuada durante outras 5 horas. A temperatura do envoltório foi ajusta¬da a 0 °C e a agitação continuada durante um adicional de 2 h. Neste ponto, a suspensão foi tirada a um polydrum e filtrada através de filtros de papel em um funil de filtro de polipropileno. A massa filtrante foi la¬vada com etanol gelado (1,0 L em seguida 0,5 L) e extraída seca no funil de filtro durante 30 minutos. O sólido foi em seguida transferido a uma bandeja de secagem e secado no forno a 70 °C durante a noite para fornecer o cloridrato de 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-diidróxi-5- (hidroximetil)pirrolidin-2-il)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona (26j) como um sólido não totalmente branco (176,9 g, 87 % de recupera¬ção). Etapa 15: Preparação de 3,4-diidróxi-2-(hidroximetil)-5-(4-oxo-4,5-di- hidro-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pirrolidina-1-carboxilato de (2R,3R,4S,5S)-terc-butila (28a)
[000613] A uma suspensão de 7-((2S,3S,4R,5R)-3,4-diidróxi-5- (hidroximetil)pirrolidin-2-il)-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-4(5H)-ona (26j) (446,19 gm, 1,47 mol) em uma mistura de água : metanol (1:1, 10,4 L) foi adicionado trietilamina (621 mL, 4,42 mol, 3,0 eq) em temperatura ambiente seguido por (Boc)2O (987 g, 4,53 mol, 3,1 eq). A mistura rea- cional tornou-se uma solução de cor clara após a adição de (Boc) 2O com leve aumento da temperatura interna de 28 oC a 33 oC. A solução iniciou mostrando alguma turvação após 1 hora de agitação. A solução foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O produto sólido foi coletado por filtração e lavado com água (5,0 L), secado em vácuo elevado a 50 oC para fornecer 3,4-diidróxi-2-(hidroximetil)-5-(4-oxo-4,5- di-hidro-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pirrolidina-1-carboxilato (2R,3R,4S,5S)-terc-butila (28a) (482 g, 89 %) como um sólido não to-talmente branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11,92 (s, 2H), 7,81 (s, 1H), 7,32 (d, J = 22,7 Hz, 1H), 5,73 - 5,20 (m, 1H), 5,05 - 4,91 (m, 1H), 4,87 - 4,76 (m, 1H), 4,74 - 4,49 (m, 1H), 4,33 - 4,17 (m, 1H), 4,09 - 3,86 (m, 2H), 3,64 - 3,48 (m, 2H), 1,39 - 1,00 (m, 9H); MS (ES+) 755,1 (2M+Na), (ES-) 731,7 (2M-1); Análise: Calculada para C16H22N4O6: C, 52,45; H, 6,05; N, 15,29; Encontrada: C, 52,24; H, 6,02; N, 15,05. Etapa 16: Preparação de diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2-(acetoximetil)- 1-(terc-butoxicarbonil)-5-(4-oxo-4,5-di-hidro-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin- 7-il)pirrolidina-3,4-di-ila (28b)
[000614] A uma suspensão de 3,4-diidróxi-2-(hidroximetil)-5-(4-oxo- 4,5- di-hidro-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pirrolidina-1-carboxilato de (2R,3R,4S,5S)-terc-butila (28a) (482 g, 1,32 mole, 1,0 equiv.) em piri- dina (740 mL, 9,21 mole, 7 equiv.) foi adicionado DMAP (3,22 g, 26,32 mmol, 0,02 equiv.) e anidrido acético (435 mL, 4,61 mmol, 3,5 eq) em temperatura ambiente. A temperatura interna começou aumentando na adição do anidrido acético, portanto resfriamento por banho de água gelada foi requerido. Na adição total do anidrido, a temperatura subiu a 67 °C em seguida diminuiu à temperatura ambiente. O banho de água gelada foi removido após a reação alcançar 25 °C. A suspensão não forneceu uma solução clara, porém uma suspensão mais leve foi ob-servada. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente du-rante 14 horas para produzir uma solução não clara. Uma alíquota tra-balhada mostra que não existe mais nenhum material de partida e existem apenas dois pontos principais por TLC (9:1 clorofórmio: meta-nol), MS mostra dois picos principais a (493,0, M+1) para o produto e produto tetraacetilado (M+1= 535). A mistura reacional foi diluída com 3,0 L de clorofórmio, agitada durante 10 minutos, em seguida adicio¬nado 2,0 L de água desionizada. Um produto desconhecido branco ceroso foi formado na interface de fase orgânica aquosa. Este produto desconhecido permaneceu na fase aquosa após a partição ser feita. A fase orgânica foi separada e novamente lavada com 2,0 L de água. As camadas aquosas combinadas foram novamente extraídas com 1,0 L de clorofórmio. As fases orgânicas combinadas foram lavadas com 2,0 N de HCl aquoso (2 x 1,0 L), água (2 x 1,0 L), bicarbonato de sódio saturado (2 x 1,0 L) e solução salina (2 x 1,0 L). A camada orgânica foi secada sobre MgSO4, filtrada e concentrada à secura sob vácuo e ba¬nho de água a 50 a 55 °C. O vácuo foi transferido a uma bomba de óleo de vácuo elevado até não mais destilado ser observado para for¬necer um produto xaroposo denso. O frasco de base circular foi deixa¬do em bomba de óleo de vácuo elevado durante 14 horas para minimi¬zar a piridina residual. Uma combinação de espuma sólida que enrola em um sólido branco bom e um resíduo denso de diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2-(acetoximetil)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-(4-oxo-4,5-di- hidro-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pirrolidina-3,4-di-ila (28b) foi obtido (715, 110 % de produção). Esta porcentagem reflete a quantidade de composto tetraacetilado. O produto estava puro o suficiente para ser empregado como está durante a próxima etapa. Uma amostra analíti¬ca foi preparada por purificação da mistura empregando-se cromato- grafia de coluna flash (sílica gel, eluindo com 0 a 100 % (9:1) de aceta- to de etila/metanol em hexano) para fornecer o diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2-(acetoximetil)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-(4-oxo-4,5-di- hidro-3H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pirrolidina-3,4-di-ila (28b) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δd 12,13 (s, 1H, D2O permutável), 11,98 (s, 1H, D2O permutável), 7,82 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 5,76 (s, 1H), 5,37 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 4,99 (s, 1H), 4,55 (dd, J = 11,3, 6,6 Hz, 1H), 4,34 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,03 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 2,01 (d, J = 12,6 Hz, 9H), 1,23 (dd, J = 39,9, 32,8 Hz, 9H); MS (ES+) 493,0 (M+1); (ES-) 526,7 (M+Cl); Análise: Calculada para C22H28N4O9: C, 53,65; H, 5,73; N, 11,38; Encontrada: C, 53,18; H, 5,89; N, 11,10. Etapa 17: Preparação de diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2-(acetoximetil)- 1-(terc-butoxicarbonil)-5-(4-cloro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7- il)pirrolidina-3,4-di-ila (28c)
[000615] A uma solução de diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2- (acetoximetil)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-(4-oxo-4,5-di-hidro-3H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pirrolidina-3,4-di-ila (28b) (622 g, 1,26 mol, 1,0 eq) em acetonitrila (2,75 L) foi adicionado cloreto de benziltrietila- mônio (575 g, 2,5 mol, 2,0 eq), dimetilanilina (240 mL, 1,9 mol, 1,5 eq), seguido por POCl3 (706 mL, 7,58 mol, 6,0 eq) em temperatura ambien¬te. Uma solução de cor amarela brilhante, clara foi obtida. A mistura reacional foi vagarosamente aquecida até 80 °C e mantida nesta tem¬peratura durante 10 minutos. TLC em 9:1 clorofórmio:metanol mostra que a reação está >98 % completa. A solução homogênea escura foi resfriada a 50,0 °C e concentrada sob vácuo (banho de água 70-73 °C) para remover POCl3; o resíduo foi colocado sob bomba de óleo de vácuo elevado até não mais destilado ser visto. O resíduo foi dissolvi¬do em 3,0 L de clorofórmio e rapidamente lavado cuidadosamente com bicarbonato de sódio aquoso saturado até um pH neutro ser obtido. A camada orgânica foi separada lavada com água (2 L), solução salina (2 L), secada sobre MgSO4, filtrada e concentrada em vácuo à secura (banho de água a 50 a 53 °C). O produto escuro de diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2-(acetoximetil)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-(4-cloro-5H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pirrolidina-3,4-di-ila (28c) foi empregado co¬mo está na próxima etapa sem purificação. Uma amostra analítica foi preparada purificando-se 0,5 g empregando-se cromatografia de colu¬na flash (sílica gel 12 g, eluindo com 0 a 50 % de acetato de eti- la/metanol (9:1) em hexanos) produto relevante obtido foi dissolvido em éter/hexanos deixado durante a noite, os cristais formados (301 mg) foram coletados por filtração para fornecer o diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2-(acetoximetil)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-(4-cloro-5H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)pirrolidina-3,4-di-ila (28c) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,55 (s, 1H, D2O permutá¬vel), 8,65 (s, 1H), 7,87 (bs, 1H), 5,79 (bs, 1H), 5,44 (t, J = 4,0 Hz, 1H), 5,10 (bs, 1H), 4,56 (dd, J = 11,5, 6,8 Hz, 1H), 4,38 (dd, J = 11,4, 4,1 Hz, 1H), 4,08 (bs, 1H), 2,07 (s, 3H), 2,00 (s, 6H), 1,38 (s, 4H), 1,13 (s, 5H); MS (ES+) 510,865 (M+1), (ES-) 508,717 (M-1); Análise: Calcula¬da para C22H27ClN4O8: C, 51,72; H, 5,33; Cl, 6,94; N, 10,97; Encontra¬da: C, 51,91; H, 5,32; Cl, 6,76; N, 10,90. Etapa 18: Preparação de diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2-(acetoximetil)- 5-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-1-(terc- butoxicarbonil)pirrolidina-3,4-di-ila (28d)
[000616] A uma solução de diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2- (acetoximetil)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-(4-cloro-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)pirrolidina-3,4-di-ila (28c) (622 g, 1,26 mol, 1 eq) em DMF (1,5 L) foi adicionado azida de sódio (411 g, 6,32 mol, 5 equiv.) e aquecida com agitação a 60 °C durante 10 horas em cujo tempo a re¬ação foi concluída (TLC em 9:1 clorofórmio metanol e 1:1 hexano: ace¬tato de etila). A reação foi resfriada a 25 °C, despejada em gelo (2 L) e extraída com clorofórmio (2 x 1 L). As camadas de clorofórmio foram combinadas lavadas com água (2 x 2 L), solução salina (2 L), secadas, filtradas e concentradas em vácuo (banho de água 70-80 °C) para produzir um lodo escuro. A purificação do lodo foi obtida por cromato- grafia de coluna (987 g de lodo escuro, coluna de 8x30 polegada, ^ de sílica gel completo, perfil de eluição hexano:acetato de etila; 9:1 (40,0L); 7:3 (20,0L); 6:4 (20,0L); 1:1 (20L); 4:6 (20,0L) e 2:8 (20,0L). As frações apropriadas foram misturadas e concentradas em vácuo (ba¬nho de água 50,0 °C) para fornecer o diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2- (acetoximetil)-5-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-1-(terc- butoxicarbonil)pirrolidina-3,4-di-ila (28d) (407,05 g, 62,3 % de produ¬ção durante duas etapas) como um produto tipo mel de cor averme¬lhada denso. Uma amostra analítica foi preparada por purificação da mistura por cromatografia de coluna flash (0-100 % de acetato de etila em hexano) para fornecer o diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2- (acetoximetil)-5-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-1-(terc- butoxicarbonil)pirrolidina-3,4-di-ila (28d) como um sólido alaranjado. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,08 (d, J = 155,6 Hz, 1H, D2O permu-tável), 9,86 (s, 1H), 7,61 (d, J = 76,8 Hz, 1H), 5,78 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 5,41 (t, J = 4,3 Hz, 1H), 5,21 (s, 1H), 4,55 (dd, J = 11,4, 6,4 Hz, 1H), 4,41 (dd, J = 11,4, 3,9 Hz, 1H), 4,07 (d, J = 16,5 Hz, 1H), 2,06 (s, 3H), 2,01 (d, J = 9,9 Hz, 6H), 1,23 (dd, J = 39,8, 32,7 Hz, 9H); MS (ES+) 518,0 (M+1), 540 (M+23); (ES-) 516,4 (M-1); Análise: Calculada para C22H27N7O8: C, 51,06; H, 5,26; N, 18,95; Encontrada: C, 50,97; H, 5,30; N, 18,62. Etapa 19: Preparação de diacetato de (2R, 3R, 4S, 5S)-2- (acetoximetil)-5-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-1-(terc- butoxicarbonil)pirrolidina-3,4-di-ila (28e)
[000617] Diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2-(acetoximetil)-5-(4-azido-5H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-1-(terc-butoxicarbonil)pirrolidina-3,4-di-ila (28d) foi reduzido em três diferentes bateladas como segue.
[000618] Batelada 1: A um hidrogenador Parr de 2,0 L, suplemento de Teflon foi adicionado diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2-(acetoximetil)-5- (4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-1-(terc- butoxicarbonil)pirrolidina-3,4-di-ila (28d) (108,01 g, 300 mmol em me¬tanol, 800 mL), Pd(OH)2 (21,6 g, 20 % peso/peso).
[000619] Batelada 2: A um hidrogenador Parr de 2,0 L, suplemento de Teflon foi adicionado diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2-(acetoximetil)-5- (4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-1-(terc- butoxicarbonil)pirrolidina-3,4-di-ila (28d) (140,70 g, 271,9 mmol em metanol, 1,0 L), Pd(OH)2 (28,14 g, 20 % peso/peso).
[000620] Batelada 3: A um hidrogenador Parr de 2,0 L, suplemento de Teflon foi adicionado diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2-(acetoximetil)-5- (4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-1-(terc- butoxicarbonil)pirrolidina-3,4-di-ila (28d) (140,7 g, 271,9 mmol em me¬tanol, 1,0 L), Pd(OH)2 (28,14 g, 20 % peso/peso).
[000621] As misturas de reação foram hidrogenadas a 10,54 kg/cm2 (150 psi) durante 15-18 horas. A mistura reacional foi filtrada para re¬mover o catalisador através de Celita. O filtrado foi concentrado em vácuo (banho de água 60 a 70 °C) até o peso constante para fornecer um produto de cor escura diacetato de (2R, 3R, 4S, 5S)-2- (acetoximetil)-5-(4-amino-5H-pirrolo [3, 2-d] pirimidin-7-il)-1-(terc- butoxicarbonil) pirrolidina-3,4-di-ila (28e) (328,8 g, 89 %). O produto estava puro o suficiente para ser empregado como está durante a pró-xima etapa. Uma amostra analítica foi preparada por purificação da mistura empregando-se cromatografia de coluna flash (0 a 10 % meta¬nol em clorofórmio). 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11,06 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 6,94 (s, 2H), 5,86 (s, 1H), 5,44 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 5,02 (s, 1H), 4,56 (dd, J = 11,3, 6,9 Hz, 1H), 4,40 (dd, J = 11,3, 4,2 Hz, 1H), 4,16 - 3,98 (m, 1H), 2,09 - 1,94 (m, 9H), 1,48 - 1,14 (m, 9H); MS (ES+) 492,1 (M+1); (ES-) 526,4 (M+Cl); Análise: Calculada para C22H29N5O8,1,25H2O: C, 51,41; H, 6,18; N, 13,62; Encontrada: C, 51,24; H, 5,92; N, 13,33. Etapa 20: Preparação de 2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4- diidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc- butila (28f)
[000622] Batelada 1. Ao diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2-(acetoximetil)- 5-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-1-(terc- butoxicarbonil)pirrolidina-3,4-di-ila (28e) (81,5 g, 165,8 mmol), foi adi-cionado metanol anidroso (370 mL) seguido pela adição de NaOMe (metóxido de sódio, 25% em peso de solução em metanol, 4,49 g, 20,76 mmol) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agita¬da em temperatura ambiente até TLC (clorofórmio:metanol 9:1) mostra que todo o material de partida reagiu.
[000623] Batelada 2. Ao diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2-(acetoximetil)- 5-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-1-(terc- butoxicarbonil)pirrolidina-3,4-di-ila (28e) (117,8 g, 239,6 mmol), foi adi-cionado metanol anidroso (530 mL) seguido pela adição de NaOMe (metóxido de sódio, 25% em peso de solução em metanol, 6,58 g, 30,45 mmol) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agita¬da em temperatura ambiente até TLC (clorofórmio:metanol 9:1) mos¬trar que todo o material de partida reagiu.
[000624] Batelada 3. Ao diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2-(acetoximetil)- 5-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-1-(terc- butoxicarbonil)pirrolidina-3,4-di-ila (28e) (129,5 g, 263,5 mmol) foi adi-cionado metanol anidroso (584 mL) seguido pela adição de NaOMe (metóxido de sódio, 25 % em peso de solução em metanol, 6,99 g, 32,35 mmol) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agita¬da em temperatura ambiente até TLC (clorofórmio:metanol 9:1) mos¬trar que todo o material de partida reagiu (7-8 horas).
[000625] As soluções acima foram concentradas (banho de água 65¬75 °C) para fornecer 2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4- diidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc- butila (28f) o qual estava puro o suficiente para ser empregado como está durante a próxima etapa. Uma amostra analítica foi preparada por purificação da mistura empregando-se cromatografia de coluna flash (0 a 10 % de metanol em clorofórmio). 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,77 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 6,82 (s, 3H), 5,04 - 4,91 (m, 1H), 4,87 - 4,74 (m, 1H), 4,56 - 4,35 (m, 2H), 4,04 - 3,90 (m, 2H), 3,72 - 3,63 (m, 1H), 3,59 - 3,41 (m, 1H), 1,15 (2s, 9H); MS (ES+) 366,1 (M+1); (ES-) 400,3 (M+Cl); Análise: Calculada para C16H23N5O5,0,25H2O: C, 51,33; H , 6,46; N, 18,71; Encontrada: C, 51,04; H, 6,43; N, 18,48. Preparação de Metóxi-N-(benziloximetil)-9-bromo-9-desazaipoxantina (27f) Etapa 1: Preparação de 3-amino-1 H-pirrol-2,4-dicarboxilato de Dimetila £27bl
[000626] A uma solução de aminomalonato de dietila (370,4 g, 1,75 mol) em metanol (3,6 L) em temperatura ambiente foi adicionado 5,4 M de solução de NaOMe (975 mL, 5,25 mol) em uma porção (a mistura reacional era na cor marrom clara). À mistura reacional foi adicionado (etoximetileno)cianoacetato de etila (27a) (296 g, 1,75 mol) em três porções (não muita mudança de temperatura foi observado durante a adição ~1 °C de mudança, a cor da reação muda de marrom claro pa¬ra marrom escuro). A mistura reacional foi aquecida ao refluxo durante 48 horas (análise de TLC 50 % de acetato de etila em hexano foi feita para checar o desaparecimento do material de partida). A mistura rea- cional foi neutralizada pela adição de AcOH (210 mL, 3,5 mole) para o pH 6. A mistura reacional foi concentrada em vácuo para fornecer o resíduo marrom. O resíduo foi triturado com água (3 L), filtrado, lavado com água (500 mL) e hexanos. Ele foi secado por ar durante 48 horas e em forno a vácuo a 60 °C para fornecer 3-amino-1H-pirrol-2,4- dicarboxilato de dimetila (27b) 287 g (83 %) como um sólido marrom. Ele foi empregado como tal durante a próxima etapa. Etapa 2: Preparação de 3H,5H-Pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ona (27c)
[000627] Uma mistura de 3-amino-1H-pirrol-2,4-dicarboxilato de di- metila (27b) (286 g, 1,44 mole) e acetato de formamidina (451g, 4,33 mole) em etanol (2,8 L, 2 mL/mmole) foi aquecida ao refluxo durante a noite. A mistura reacional não estava inicialmente homogênea, porém após acoplamento de h de refluxo parece homogênea e na cor marrom escuro (a agitação torna-se difícil quando o sólido começa a cair da solução). A análise de TLC de uma alíquota (50 % de acetato de etila em hexano) indica que ainda algum material de partida não reagido estava presente. A mistura reacional foi continuada para aquecer ao refluxo durante 24 horas adicionais e resfriada à temperatura ambien¬te. O sólido obtido foi coletado por filtração lavado com água e hexano e secado em vácuo para fornecer 3H,5H-Pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ona (27c) (223 g, 80 %) como um sólido marrom claro. O material foi em¬pregado como tal sem purificação. Etapa 3: Preparação de 3H,5H-Pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ona (22a)
[000628] Uma mistura de 3H,5H-Pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ona (27c) (130,4 g, 0,675 mole) em 2 N de KOH (1,35 L, 2,7 moles) foi aquecida ao refluxo suave durante 40 horas. A mistura reacional foi resfriada a 60 °C e cuidadosamente neutralizada com ácido acético glacial (162 mL, 2,7 moles) ao pH 6 (formação de espuma devido à descarboxila- ção ser observada e a cor da mistura reacional era preta). A mistura reacional foi resfriada à temperatura ambiente e o sólido obtido foi co¬letado por filtração lavado com água (2 x 250 mL) secado por ar e se¬cado em vácuo elevado sobre P2O5 para fornecer o produto como um sólido cinza escurecido (145 g, 159 %). NMR do produto indica muito ácido acético ou seu sal, desse modo a produção é maior, a TLC mos¬tra o produto perfeito mais algum produto no parâmetro empregando- se CMA-80 como sistema solvente). O produto foi triturado com água (400 mL) e neutralizado com NaHCO3 aquoso saturado até nenhuma efervescência e o pH é por volta de 7 a 8). O sólido cinza escurecido foi coletado por filtração e lavado com água para fornecer secagem por ar durante 48 horas, 67,62 g (74 %) de produto. O produto foi tam¬bém secado em vácuo em temperatura de refluxo de etanol para for¬necer 3H,5H-Pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ona (22a) como um pó cinza es¬curecido; MP de uma amostra analiticamente pura > 250°C; 1H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 12,05 (s, D2O permutável, 1H), 11,82 (s, D2O permutável, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,36 (s, 1H), 6,35 (s, 1H). 13C-NMR (DMSO-d6) 153,88, 144,80, 141,66, 127,51, 117,92, 103,10; IR (KBr) 3107, 3030 e 1674 cm-1; MS (ES+) 136,2 (M+1); Análise: Calculada para C6H5N3O: C, 53,33; H, 3,73; N, 31,10; Encontrada: C, 53,38; H, 3,77; N, 31,11. Etapa 4: Preparação de 4-Cloropirrolo[3,2-dpirimidina (27d)
[000629] A uma amostra de 3H,5H-Pirrolo[3,2-d]pirimidin-4-ona (22a) (31,08 g, 230 mmol) sob N2 foi adicionado oxicloreto de fósforo (60 mL, 644 mol, 2,8 eq). A mistura foi aquecida ao refluxo durante 1 hora tempo durante o qual a reação tornou-se homogênea escura. A reação foi resfriada em um banho de água gelada e em seguida derramada em gelo em lascas (775 mL) com agitação. O pH da solução aquosa foi vagarosamente ajustado a ~ pH 8 com NH4OH concentrado (225 mL) com resfriamento continuado da mistura. O precipitado resultante foi coletado por filtração a vácuo e lavado com água. O sólido foi trans¬ferido a uma bandeja de secagem e secado em vácuo a 110 °C para fornecer 4-cloropirrolo[3,2-c]pirimidina (27d) (31,48 g, 89 %) como um sólido cinza escuro. Uma amostra analítica foi obtida por cromatografia de coluna (sílica gel, EtOAc-hexanos, 35:65) seguido por evaporação das frações relevantes. A trituração do sólido com EtOAc-MeOH for¬neceu 4-Cloropirrolo[3,2-c]pirimidina (27d) como um sólido não total- mente branco, MP >150 °C (dec); 1H NMR (DMSO-d6) δ 12,43 (s, D2O permutável, 1H), 8,61 (s, 1H), 7,97 (dd, J = 2,8, 2,8 Hz; permuta de D2O sofre colapso para d, 1H), 6,72 (dd, J = 1,7, 3,5 Hz; D2O colapso de permuta para d, 1H). 13C-NMR (DMSO-d6) 151,30, 149,58, 142,12, 134,83, 124,32, 102,70; IR (neat) 3128, 3078, 2979, 1621 cm-1; MS (ES+) 154,01 (100 %, M+1) e 156,01 (33 %); Análise: Calculada para C6H4N3Cl: C, 46,93; H, 2,63; N, 27,36; Cl, 23,09; Encontrada: C, 47,10; H, 2,79; N, 27,15; Cl, 22,93. Etapa 5: Preparação de 6-Metóxi-N-(benziloximetil)-9- desazaipoxantina (27e)
[000630] À suspensão de NaH pré-lavado (20 g, 500 mmol, 1,25 eq, 60 % de dispersão de óleo, lavada com hexanos 2 vezes) em THF anidroso (1,0 L) resfriada a 4 °C foi adicionado em porções 4- Cloropirrolo[3,2-d]pirimidina sólido (27d) (61,4 g, 400 mmol) cuidado¬samente com agitação sob N2 em porções sobre 10-15 minutos tal que a evolução de gás de H2 foi controlada. Após cerca de uma hora, a evolução de gás cessou e éter de benzil clorometila (61 mL, 440 mmol, 1,1 eq) foi adicionado gota a gota durante 45 minutos a 4 °C (a evolu¬ção de gás adicional foi observada). A mistura resultante foi deixada aquecer à temperatura ambiente e agitar durante 1 hora. A mistura re- acional foi resfriada a 4 °C e saciada cuidadosamente com metóxido de sódio (93 mL, 5,4 M de solução em metanol, 500 mmol). A mistura foi deixada aquecer à temperatura ambiente durante a noite e neutrali¬zada com ácido acético glacial (30 mL, 500 mmol) ao pH 6. A mistura foi concentrada e o resíduo triturado com água (2 x 400 mL). A cama¬da aquosa foi decantada e o resíduo secado em vácuo. O resíduo foi tomado em acetato de etila (250 mL) e fervido ao refluxo e filtrado através de um filtro de papel estriado. O resíduo foi fervido com aceta¬to de etila (2 x 100 mL) e filtrado (o resíduo deixado atrás é o compos¬to indesejado e não se agita na análise de TLC 50 % de acetato de etila em hexano). Os filtrados foram combinados concentrados em vá¬cuo a 250 mL e mantidos no refrigerador durante a noite. Os cristais marrons obtidos foram coletados por filtração lavados com acetato de etila gelado/hexano (2 x 100 mL) e secados em vácuo para fornecer 6- Metóxi-N-(benziloximetil)-9-desazaipoxantina (27e) (46,64 g, 43 %) como um sólido marrom alaranjado. Uma amostra analítica foi prepa¬rada por recristalização de acetato de etila; MP 123 - 127 °C; 1H NMR (DMSO-d6) δ 8,44 (s, 1H), 7,86 (d, J = 3,1 Hz, 1 H), 7,31 - 7,22 (m, 5 H), 6,62 (d, J = 3,6 Hz, 1 H), 5,75 (s, 2 H), 4,49 (s, 2 H), 4,05 (s, 3 H); 13C-NMR (DMSO-d6) 156,11, 151,59, 150,09, 137,82, 134,80, 128,53, 127,87, 127,77, 114,99, 103,08, 77,55, 69,95, 53,73; IR (KBr) 1602 cm- 1; MS (ES+) 269,97 (M+1); Análise: Calculada para C15H15N3O2: C, 66,90; H, 5,61; N, 15,60; Encontrada: C, 67,09; H, 5,60; N, 15,60. Etapa 6: Preparação de 6-Metóxi-N-(benziloximetil)-9-bromo-9- desazaipoxantina (27f)
[000631] A uma solução de 6-Metóxi-N-(benziloximetil)-9- desazaipoxantina (27e) (59,81 g, 222 mmol) em diclorometano (225 mL) sob N2 resfriada a 4°C (mistura reacional homogênea) foi adicio¬nado NBS (40,3 g, 224 mol, 1,01 eq) em porções durante 30 minutos tal que a temperatura de reação permaneça abaixo de 15 oC. A mistu¬ra foi agitada a 0 °C durante 15 minutos e deixada aquecer à tempera¬tura ambiente durante 15 minutos (análise de TLC 50 % de acetato de etila em hexano). A mistura reacional foi filtrada a vácuo para remover a insolúvel sucinimida. O filtrado foi lavado com água (2 x 250 mL) e solução salina (200 mL), secado (Na2SO4), filtrado e concentrado em vácuo para fornecer o produto como um sólido marrom claro. O sólido foi dissolvido fervendo-se em acetato de etila (200 mL) e diluído com hexano (200 mL). A solução foi fervida ao refluxo e filtrada quente mui¬to rapidamente (para evitar a cristalização do sólido). O filtrado foi em seguida fervido e adicionado hexano em incrementos de 200 mL (vo- lume total de hexano 1600 mL). A solução quente foi decantada, se necessário, para remover os resíduos insolúveis (o produto é solúvel em 10 % de acetato de etila quente em hexano). O filtrado quente foi deixada resfriar à temperatura ambiente e em seguida mentido no fre¬ezer durante a noite. O sólido obtido foi coletado por filtração e lavado com hexano e secado em vácuo em temperatura ambiente para forne¬cer 6-metóxi-N-(benziloximetil)-9-bromo-9-desazaipoxantina (27f) (59,6 g, 77 %), como um sólido amarelo claro: MP 103 - 108 °C; 1H NMR (DMSO-d6) δ 8,51 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,31 - 7,22 (m, 5H), 5,74 (s, 2H), 4,52 (s, 2H), 4,07 (s, 3H). 13C-NMR (DMSO-d6) 156,19, 150,66, 148,14, 137,59, 133,45, 128,38, 127,80, 127,67, 115,02, 90,90, 77,79, 70,25, 54,07; IR (KBr) 3078, 1602, 1542 cm-1; MS (ES+) 348,27 (100 %), 350,28 (98 %); Análise: Calculada para C15H14N3O2Br: C, 51,74; H, 4,05; N, 12,07; Encontrada: C, 51,72; H, 4,04; N, 12,06. Exemplo 2: Cloridrato de 2-amino-3-metilbutanoato de (S)- ((2R,3R,4S,5S)-5-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-di- hidroxipirrolidin-2-il)metila (30f)
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Método A:
[000632] A uma solução de 4-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7- il)-6-(((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metil)-2,2- dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (30e) (600 mg, 1 mmol) em TFA (10 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora e concentrada em vácuo à secura. O resíduo foi dissolvido em 10 mL de AcOH e adicio¬nado uma solução de BCl3 (3,6 mL, 3,6 mmol, 1 M em diclorometano), agitado em temperatura ambiente durante 4 minutos e saciado com água (5 mL). A mistura reacional foi concentrada à secura. O resíduo foi secado por congelamento para fornecer o cloridrato de 2-amino-3- metilbutanoato de (S)-((2R,3R,4S,5S)-5-(4-amino-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-3,4-di-hidroxipirrolidin-2-il)metila (30f) (400 mg, 76 %) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6/D2O) δ 8,64 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 4,83 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,63 - 4,49 (m, 3H), 4,27 - 4,19 (m, 1H), 3,94 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 3,82 - 3,70 (m, 1H), 2,33 - 2,18 (m, 1H), 0,99 (d, J = 6,9 Hz, 6H); MS (ES+) 365,1 (M+1); Análise: Cal¬culada para C16H27Cl3N6O4,3HCl,2,5H2O: C, 37,17; H, 6,07; Cl, 20,16; N, 16,09; Encontrada: C, 37,04; H, 6,22; Cl, 20,50; N, 16,20. Método B:
[000633] A uma solução de 4-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7- il)-6-(((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metil)-2,2- dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (30e) (0,151 g, 0,25 mmol) em acetona (2 mL) foi adicionado ácido sulfúrico concentrado (18 N, 0,139 mL, 2,5 mmol) e agitado em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi decantada e ao resíduo foi adicionado acetona (10 mL) fervida e resfriada à temperatura ambiente. O sólido obtido foi coletado por filtração para fornecer sulfato de 2-amino-3-metilbutanoato de ((2R,3R,4S,5S)-5-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-di- hidroxipirrolidin-2-il)metila (30f) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, D2O) δ 8,42 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 5,05 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 4,79 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 4,62 (dd, J = 12,6, 7,5 Hz, 1H), 4,55 (t, J = 5,2 Hz, 1H), 4,20 - 4,08 (m, 3H), 2,45 - 2,28 (m, 1H), 1,06 (t, J = 7,3 Hz, 6H). Método C:
[000634] A uma solução de 4-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7- il)-6-(((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metil)-2,2- dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (30e) (0,302 g, 0,5 mmol) em MTBE (2,5 mL) foi adicionado água (0,046 mL) e ácido sulfúrico concentrado (0,138 mL, 5,00 mmol) seguido por MTBE (2,5 mL) após 15 minutos e agitado em temperatura ambiente durante 4 horas. Decantar TBDME, adicionar água (0,5 mL) e agitar para dissolver o sólido em seguida adicionar etanol (9,5 mL) e agitar vigorosamente durante 2 horas. O sólido fino obtido foi coletado por filtração, lavado com etanol para for-necer o sulfato de 2-amino-3-metilbutanoato de ((2R,3R,4S,5S)-5-(4- amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-di-hidroxipirrolidin-2-il)metila (30f) (0,288 g, 103 % de produção) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6/D2O) δ 8,26 (s, 1H), 7,81 (s, 1H), 4,67 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 4,59 - 4,41 (m, 3H), 4,27 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 3,91 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 3,81 - 3,69 (m, 1H), 2,28 - 2,10 (m, 1H), 0,97 (d, J = 6,9 Hz, 6H). Método D:
[000635] A uma solução de 4-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7- il)-6-(((2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metil)-2,2- dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (30e) (0,302 g, 0,5 mmol) em MTBE (2,5 mL) foi adicionado água (0,138 mL) e ácido sulfúrico concentrado (0,138 mL, 5,00 mmol) seguido por MTBE (2,5 mL) após 15 minutos e agitado em temperatura ambiente durante 4 horas. Decantar TBDME, adicionar etanol (9,5 mL) e agitar durante 2 horas, coletar o sólido por filtração secado em vácuo para fornecer um sólido branco de sulfato de 2-amino-3-metilbutanoato de ((2R,3R,4S,5S)-5-(4-amino-5H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-di-hidroxipirrolidin-2-il)metila (30f) (0,160 g, 0,285 mmol, 57,1 % de produção). Preparação de 4-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6-(((2-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metil)-2,2-dimetildi-hidro-3aH- [1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc- butila (30e) Etapa 1: Preparação de 2-(4-cloro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4- diidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc- butila (30a)
[000636] A uma solução de diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2- (acetoximetil)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-(4-cloro-5H-pirrolo[3,2-d] pirimi- din-7-il)pirrolidina-3,4-di-ila (28c) (25,8 g, 50,5 mmol) dissolvido em metanol (200 mL) e foi adicionado metóxido de sódio 25 % em peso em metanol (3,6 mL, 16,66 mmol) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mis¬tura reacional foi concentrada à secura e purificada com uma coluna de 600 g, para fornecer 2-(4-cloro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4- diidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5S)-terc- butila (30a) (17,7 g, 46 mmol, 91 % de produção) como uma espuma incolor; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,34 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 5,40 - 5,02 (m, 2H), 4,96 - 4,70 (m, 2H), 4,41 - 4,25 (m, 1H), 4,13 - 3,93 (m, 2H), 3,69 - 3,51 (m, 2H), 1,35 (s, 3H), 1,01 (s, 6H); MS (ES+) 384,9 (M+1), 792,6 (2M+Na); (ES-) 382,6 (M-1). Etapa 2: Preparação de 4-(4-cloro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6- (hidroximetil)-2,2-dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)- carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (30b)
[000637] A uma solução de 2-(4-cloro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)- 3,4-diidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)- terc-butila (30a) (16,3 g, 42,4 mmol) em acetona (400 mL) foi adicio¬nado 2,2-dimetoxipropano (11,17 mL, 89 mmol) e hidrato de ácido 4- metilbenzenossulfônico (0,41 g, 2,12 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi saciada com TEA (590 μL, 4,24 mmol) e concentrada à secura. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna flash (sílica gel 500 g) para for-necer 4-(4-cloro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6-(hidroximetil)-2,2- dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (30b) (10,7 g, 25,2 mmol, 59,5 % de pro¬ dução) como uma espuma incolor; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,45 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 7,81 (s, 1H), 5,09 (d, J = 36,7 Hz, 3H), 4,82 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 4,00 (s, 1H), 3,53 (s, 1H), 3,34 (s, 1H), 1,47 (s, 3H), 1,40 (bs, 4H), 1,29 (bs, 4H), 1,20 (bs, 4H); MS (ES+) 426,9 (M+1); 422,6 (M-1). Etapa 3: Preparação de 4-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6- (hidroximetil)-2,2-dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)- carboxilato de (3aS,4S,6S,6aR)-terc-butila (30c)
[000638] À solução de 4-(4-cloro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6- (hidroximetil)-2,2-dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)- carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (30b) (5,1 g, 12 mmol) em DMF (30 mL) foi adicionado azida de sódio (3,9 g, 60 mmol), a solução resultante foi agitada a 80 °C durante 4 horas. A mistura reacional foi concentrada em vácuo para remover a maior parte de DMF e o resí¬duo obtido foi dissolvido em clorofórmio. A camada orgânica foi lavada com água, secada com MgSO4 e concentrada em vácuo para fornecer 4-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6-(hidroximetil)-2,2-dimetildi- hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (30c) (5 g, 97 %); 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,22 (bs, 1H), 9,87 (s, 1H), 7,69 - 7,47 (m, 1H), 5,28 (m, 1H), 5,05 (m, 2H), 4,81 (d, J = 5,9, 1H), 4,06 - 3,91 (m, 1H), 3,57 (m, 1H), 3,51 - 3,38 (m, 1H), 1,48 (s, 3H), 1,41-1,23 (bs, 9H), 1,30 (s, 3H); MS (ES+) 454 (M+Na), 863,1 (2M+1), 885,2 (2M+Na); (ES-) 429,7 (M¬1). Etapa 4: Preparação de 4-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6- ((((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metil)-2,2- dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (30d)
[000639] A uma solução de 4-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)- 6-(hidroximetil)-2,2-dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)- carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (30c) (1,088 g, 2,5 mmol) e ácido (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoico (L-Boc valina, 0,543 g, 2,5 mmol) em DMF (20 mL) foi adicionado EDCI (1,198 g, 6,25 mmol) e DMAP (92 mg, 0,75 mmol). A mistura de reação foi agi¬tada em temperatura ambiente durante 10 dias e saciada com água (60 mL) extraída com acetato de etila (3 x 50 mL). As camadas orgâni¬cas foram combinadas lavadas com água (2 x 50 mL), solução salina, secadas e concentradas em vácuo. O resíduo obtido foi purificado du¬as vezes por cromatografia de coluna flash para fornecer 4-(4-azido- 5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6-((((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3- metilbutanoil)oxi)metil)-2,2-dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol- 5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (30d) (0,75 g, 47 %) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,30 (s, 1H), 9,88 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 5,34 (s, 1H), 5,20 (dd, J = 5,7, 1,5 Hz, 1H), 4,82 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 4,34 - 4,14 (m, 2H), 3,80 (dd, J = 8,0, 5,9 Hz, 1H), 3,34 (s, 1H), 1,97 - 1,84 (m, 1H), 1,47 (s, 3H), 1,43- 1,31(m, 21H), 0,80 (dd, J = 6,9, 5,2 Hz, 6H); MS (ES-) 629,1 (M-1); IR (KBr) 2315 cm-1. Etapa 5: Preparação de 4-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6- ((((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metil)-2,2- dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (30e)
[000640] A uma solução de 4-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)- 6-((((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)metil)-2,2- dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (30d) (0,72 g, 1,19 mmol) em metanol (20 mL) foi adicionado Pd/C (200 mg, 5 % em peso em C) e hidrogenado sob atmosfera de hidrogênio durante 2 horas. O catalisador foi removi¬do por filtração através de Celita e o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo obtido foi purificado com coluna para fornecer 4-(4-amino- 5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6-((((S)-2-((terc-butoxicarbonil) amino)-3- metilbutanoil)oxi)metil)-2,2-dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol- 5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (30e) (600 mg, 83 %) como um sólido branco. 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 11,97 (s, 1H), 10,87 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,36 (s, 1H), 6,78 (s, 2H), 5,30 - 5,22 (m, 1H), 5,19 - 5,07 (m, 1H), 4,88 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,18 - 4,07 (m, 2H), 3,87 - 3,79 (m, 1H), 3,44 (qd, J = 7,0, 5,1 Hz, 1H), 2,01 - 1,92 (m, 1H), 1,44 - 1,32 (m, 21H), 1,28 (s, 3H), 0,82 (d, J = 6,7 Hz, 6H); MS (ES+) 605,1 (M+1). Exemplo 3: Cloridrato de 2-amino-3-metilpentanoato de (2S,3S)- ((2R,3R,4S,5S)-5-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-di- hidroxipirrolidin-2-il)metila (31c)
Figure img0095
[000641] Uma solução de 4-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)- 6-((((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metil)- 2,2-dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (31b) (0,398 g, 0,643 mmol) em ácido tri- fluoroacético (10 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora e concentrada em vácuo à secura. O resíduo foi triturado com tolueno (20 mL) concentrado em vácuo à secura. O resíduo obtido foi dissolvido em AcOH (10 mL) e a este foi adicionado uma solução de tricloroborano (2,32 mL, 2,32 mmol), agitado em temperatura ambiente durante 4 minutos e saciada com água (5 mL). A mistura reacional foi concentrada em vácuo à secura. O sólido viscoso obtido foi dissolvido com água (5 mL) e filtrado. O filtrado foi secado por congelamento pa¬ra fornecer 2-amino-3-metilpentanoato de (2S,3S)-((2R,3R,4S,5S)-5- (4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-di-hidroxipirrolidin-2- il)metila (31c) (0,275 g, 88 % de produção) como um sólido branco.
[000642] 1H NMR (300 MHz, D2O) δ 8,24 (s, 1H), 7,87 (s, 1H), 4,89 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 4,61 - 4,43 (m, 3H), 4,41 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,04 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 3,98 (dt, J = 6,7, 4,2 Hz, 1H), 2,00 - 1,88 (m, 1H), 1,41 - 1,10 (m, 2H), 0,88 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 0,79 (t, J = 7,4 Hz, 3H); 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6/D2O) δ 8,61 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 4,85 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,62 (dd, J = 12,2, 4,2 Hz, 1H), 4,57 - 4,46 (m, 2H), 4,24 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,01 (d, J = 4,1 Hz, 1H), 2,01 - 1,94 (m, 1H), 1,56 - 1,39 (m, 1H), 1,36 - 1,22 (m, 1H), 0,96 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,90 (t, J = 7,3 Hz, 3H); MS (ES+) 379,1 (M+1), (ES-) 412,5 (M+Cl); HPLC [Restek Pinnacle DB C18, 150 x 4,6 mm, 5 μm, Taxa de fluxo: 1,0 mL por mi¬nuto a 40 °C. Tampão "A" = Dissolver 4,3 g de monoidrato de ácido 1- octano sulfônico de sódio em 900 mL de HPLC qualidade aquosa. Adi¬cionar 10 mL de ácido acético e 100 mL de acetonitrila. Tampão "B" = Dissolver 4,3 g de monoidrato de ácido 1-octano sulfônico de sódio em 600 mL de HPLC qualidade aquosa. Adicionar 10 mL de ácido acético e 400 mL de acetonitrila, absorvência de UV = 260 nM; (A:B, 85/15 (0 min) a A:B 0/100 (25 min) a A:B 0/100 (40 min) a A:B 85/15 (50 min)) Rt = 22,79 (97,26 %)]; Análise: Calculada para Ci7H2®Nβθ4-3HCl-2,25H2θ-2B(OH)3: C, 31,84; H, 6,21; Cl, 16,59; N, 13,11; Encontrada: C, 31,99; H, 6,13; Cl, 16,33; N, 12,80. Preparação de 4-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6-((((2S,3S)- 2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metil)-2,2-dimetildi- hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (31b) Etapa 1: Preparação de 4-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6- ((((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metil)- 2,2-dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (31a)
[000643] A uma solução de 4-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)- 6-(hidroximetil)-2,2-dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)- carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (30c) (1,079 g, 2,5 mmol), ácido (2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoico (Boc-L- isoleucina) (0,578 g, 2,5 mmol) em DMF (20 mL) foi adicionado clori- drato de N1-((etilimino)metileno)-N3,N3-dimetilpropano-1,3-diamina (EDCI, 1,20 g, 6,25 mmol) e N,N-dimetilpiridin-4-amina (DMAP, 0,092 g, 0,75 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambi¬ente durante 5 dias, saciada com 1 N de HCl aq. (5,00 mL) e água (60 mL). A mistura reacional foi extraída com acetato de etila (3 x 50 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com água (2 x 25 mL), solução salina, secadas e concentradas em vácuo. O resíduo ob¬tido foi purificado por cromatografia de coluna flash (sílica gel, 25 g, eluindo com acetato de etila em hexanos de 0 a 100 %) para fornecer 4-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6-((((2S,3S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metil)-2,2-dimetildi-hidro- 3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)- terc-butila (31a) (0,683 g, 42 % de produção) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,29 (s, 1H, D2O permutável), 9,86 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,11 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 5,32 (s, 1H), 5,20 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 4,81 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 4,28 (bs, 2H), 4,08 - 3,93 (m, 1H), 3,90 - 3,77 (m, 1H), 1,62 (s, 1H), 1,52 - 1,21 (m, 26H), 0,84 - 0,66 (m, 6H); MS (ES+) 645,2 (M+1), 667,2 (M+Na), (ES-) 643,1 (M-1). Etapa 2: Preparação de 4-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6- ((((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metil)- 2,2-dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (31b)
[000644] A uma solução de 4-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)- 6-((((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metil)- 2,2-dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (31a) (0,625 g, 0,969 mmol) em metanol (20 mL) foi adicionado (10 %) Paládio sobre Carbono (206 mg) e hidrogenado a 4,21 kg/cm2 (60 psi) durante 3,5 horas. A análise de TLC mostra (acetato de etila/metanol (9:1) em 1:1 hexanos) que a reação estava completa. O catalisador foi removido por filtração através de Celita e o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia de coluna flash (sílica gel 12 g, eluindo com acetato de etila/metanol (9:1) em hexanos de 0 a 100 %) para fornecer 4-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6-((((2S,3S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilpentanoil)oxi)metil)-2,2-dimetildi-hidro- 3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)- terc-butila (31b) (0,418 g, 70 % de produção) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,86 (bs, 1H, D2O permutável), 8,09 (s, 1H), 7,36 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 7,14 (s, 1H), 6,77 (s, 2H), 5,25 (s, 1H), 5,14 (bs, 1H), 4,88 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,18 (s, 1H), 4,05 (s, 3H), 3,90 (s, 1H), 1,68 (bs, 1H), 1,42 (s, 3H), 1,38 (s, 18H), 1,28 (s, 3H), 1,17 (s, 1H), 0,78 (m, 6H); MS (ES+) 619,2 (M+1), (ES-) 653,2 (M+Cl); Análise: Calculada para C30H46N6O8·0,25H2O: C, 57,82; H, 7,52; N, 13,48, Encontrada: C, 57,56; H, 7,42; N, 13,40. Exemplo 4: Cloridrato de (S)-((2R,3R,4S,5S)-5-(4-amino-5Hpirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-di-hidroxipirrolidin-2-il)metil 2-amino-4- metilpentanoato (32c)
Figure img0096
[000645] A uma solução de 4-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7- il)-6-((((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilpentanoil)oxi)metil)-2,2- dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (32b) (0,243 g, 0,393 mmol) em ácido trifluoroacético (10 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora e concentrada em vácuo à secura. O resíduo foi triturado com tolueno (20 mL) e concentrado em vácuo à secura. O resíduo foi dissolvido em AcOH (10 mL) e adicionado uma solução de tricloroborano (1,4 mL, 1,4 mmol), agitado em temperatura ambiente durante 4 minutos e saciado com água (5 mL). A mistura reacional foi concentrada à secura. O sólido viscoso foi dissolvido com água (5 mL) e filtrado. O filtrado foi secado por congelamento para obter o sólido (201 mg). O sólido foi dissolvido em 0,37 mL de água e aquecido suavemente até a solução clara ser formada, novamente 0,13 mL de água foi adicionado, em seguida diluído com 9,0 mL de 2-propanol (IPA) em seguida adicionado 0,25 mL de água (agora o total era 0,75 mL), a solução foi decantada para remover a massa insolúvel. Neste estágio, a solução estava clara, aquecida, e adicionando-se 5,5 mL de IPA, a solução tornou-se turva e deixada descansar durante 1 hora. O sólido obtido foi coletado por filtração para fornecer cloridrato de 2-amino-4- metilpentanoato de (S)-((2R,3R,4S,5S)-5-(4-amino-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-3,4-di-hidroxipirrolidin-2-il)metila (32c) (73 mg, 49 % de produção) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,47 (s, 1H), 8,03 (s, 1H), 4,77 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,60 - 4,45 (m, 3H), 4,29 (t, J = 5,0 Hz, 1H), 4,03 (t, J = 6,4 Hz, 1H), 3,80 - 3,71 (m, 1H), 1,83 - 1,58 (m, 3H), 0,90 (d, J = 5,2 Hz, 6H); MS (ES+) 379,1 (M+1), (ES-) 412,7 (M+Cl); HPLC [Restek Pinnacle DB C18, 150 x 4,6 mm, coluna de 5 µm, Taxa de fluxo: 1,0 mL por minuto a 40 °C. Tampão "A" = Dissolver 4,3 g de monoidrato de ácido 1-octano sulfônico de sódio em 900 mL de HPLC qualidade aquosa. Adicionar 10 mL de ácido acé- tico e 100 mL de acetonitrila. Tampão "B" = Dissolver 4,3 g de monoidrato de ácido 1-octano sulfônico de sódio em 600 mL de HPLC qualidade aquosa. Adicionar 10 mL de ácido acético e 400 mL de acetonitrila, absorvência de UV = 260 nM; (A:B, 85/15 (0 min) a A:B 0/100 (25 min) a A:B 0/100 (40 min) a A:B 85/15 (50 min)) Rt = 22,79 (96,3027 %)]; Análise: Calculada para C17H26N6O4 2,75 H2O 2,5HCl: C, 39,33; H, 6,60; Cl, 17,07; N, 16,19; Encontrada: C, 39,04; H, 6,32; Cl, 17,46; N,Preparação de 4-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6-((((S)-2- ((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilpentanoil)oxi)metil)-2,2-dimetildihidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (32b) Etapa 1: preparação de 4-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6- ((((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilpentanoil)oxi)metil)-2,2- dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (32a)
[000646] A uma solução de 4-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)- 6-(hidroximetil)-2,2-dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)- carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (30c) (1,088 g, 2,52 mmol) e ácido (S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilpentanoico (Boc-L- leucina) (0,583 g, 2,52 mmol) em DMF (20 mL) foi adicionado cloridra- to de N1-((etilimino)metileno)-N3,N3-dimetilpropano-1,3-diamina (EDCI, 1,21 g, 6,30 mmol) e N,N-dimetilpiridin-4-amina (DMAP, 0,092 g, 0,757 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambi¬ente durante 96 horas, saciada com água (60 mL) e extraída com EtOAc (3 x 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (2 x 50 mL), solução salina (50 mL), secadas sobre MgSO4 e concentradas à secura em vácuo. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia de coluna flash (sílica gel 25 g) para fornecer 4-(4-azido- 5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6-((((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-4- metilpentanoil)oxi)metil)-2,2-dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5- c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (32a) (633 mg, 39 % de produção) como uma espuma branca; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,28 (s, 1H), 9,86 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,19 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 5,31 (s, 1H), 5,16 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 4,80 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 4,23 (s, 2H), 3,86 (t, J = 11,4 Hz, 1H), 1,39 (m, 27H), 0,86 (dd, J = 11,7, 6,0 Hz, 1H), 0,75 (dd, J = 13,6, 6,5 Hz, 6H); MS (ES+) 645,19(M+1), 667,17 (M+Na); (ES-) 643,20(M-1), 679,18 (M+Cl). Etapa 2: 4-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-6-((((S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)-4-metilpentanoil)oxi)metil)-2,2-dimetildi-hidro- 3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)- terc-butila (32b)
[000647] A uma solução de 4-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)- 6-((((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilpentanoil)oxi)metil)-2,2- dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5-c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (32a) (584 mg, 0,91 mmol) em metanol (20 mL) foi adicionado 10 % de Paládio sobre Carbono (193 mg) e hi- drogenado a 3,51 kg/cm2 (50 psi) durante 2 horas. O catalisador foi filtrado através de uma almofada de Celita, e o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia de coluna flash (sílica gel, 4 g) para fornecer 4-(4-amino-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-6-((((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-4- metilpentanoil)oxi)metil)-2,2-dimetildi-hidro-3aH-[1,3]dioxolo[4,5- c]pirrol-5(4H)-carboxilato de (3aS,4S,6R,6aR)-terc-butila (32b) (300 mg, 53,5 % de produção) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,86 (s, 1H, permutável), 8,09 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,34 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,22 (s, 1H), 6,78 (s, 2H, permutável), 5,23 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 5,14 (s, 1H), 4,87 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 4,22-4,05 (m, 3H), 3,99-3,86 (m, 1H), 3,17 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 1,55 (dd, J = 12,5, 6,0 Hz, 1H), 1,46-1,34 (m, 22H), 1,28 (s, 3H), 0,81 (dd, J = 9,1, 6,7 Hz, 6H); MS (ES+) 619,13(M+1), 642,15 (M+Na); (ES-) 617,18(M-1), 653,27 (M+Cl); Análise: Calculada para CsoH44N8θ8^0,5H2θ: C, 57,40; H, 7,55; N, 13,39; Encontrada: C, 57,46; H, 7,53; N, 13,13. Exemplo 5: bis(2-amino-3-metilbutanoato) de (2S,2'S)-(2S,3S,4R,5R)- 2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroximetil)pirrolidina-3,4- di-ila (38c)
Figure img0097
[000648] A uma solução de bis(2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3- metilbutanoato) de (2S,2'S)-(2S,3S,4R,5R)-2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-((tritiloxi)metil)pirrolidina-3,4-di- ila (38b) (715 mg, 0,711 mmol) em acetona (25 mL) foi adicionado 9 M de ácido sulfúrico (0,395 mL, 3,55 mmol) e agitado em temperatura ambiente durante a noite. A camada de acetona foi decantada e o re¬síduo foi tratado com acetona e decantado (3 vezes). O resíduo obtido foi purificado por cromatografia de coluna flash (sílica gel 12 g, eluindo com 0 a 100 % de CMA-50 em CMA-80) para fornecer de bis(2-amino- 3-metilbutanoato) de (2S,2'S)-(2S,3S,4R,5R)-2-(4-amino-5H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroximetil)pirrolidina-3,4-di-ila (38c) (188 mg, 57 %) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,84 (bs, 1H, D2O permutável), 8,06 (s, 1H), 7,51 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,77 (s, 2H, D2O permutável), 5,33 (dd, J = 7,6, 5,6 Hz, 1H), 5,24 (dd, J = 5,7, 3,8 Hz, 1H), 4,39 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 3,64 - 3,51 (m, 2H), 3,17 (dd, J = 4,5, 2,9 Hz, 2H), 3,06 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 2,01 - 1,88 (m, 1H), 1,87 - 1,75 (m, 1H), 0,91 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,84 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,79 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,73 (d, J = 6,8 Hz, 3H); MS (ES+) 928,2 (2M+1); (ES-) 462,0 (M-1), 925,1(2M-1). Preparação de bis(2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato) de (2S,2'S)-(2S,3S,4R,5R)-2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-1- (terc-butoxicarbonil)-5-((tritiloxi)metil)pirrolidina-3,4-di-ila (38b) Etapa 1: 2-(4-cloro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-diidróxi-5- (hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (34a)
[000649] A uma solução de diacetato de (2R,3R,4S,5S)-2- (acetoximetil)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-(4-cloro-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)pirrolidina-3,4-di-ila (28c) (25,8 g, 50,5 mmol) em meta¬nol (200 mL) e foi adicionado metóxido de sódio 25 % em peso em metanol (3,6 mL, 16,66 mmol) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi concentrada em vácuo à secura e purificada por cromato- grafia de coluna flash (sílica gel 600 g) para fornecer 2-(4-cloro-5H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-diidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidina-1- carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (34a) (17,7 g, 91 % de produ¬ção) como uma espuma incolor; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 12,34 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 7,94 (s, 1H), 5,40 - 5,02 (m, 2H), 4,96 - 4,70 (m, 2H), 4,41 — 4,25 (m, 1H), 4,13 - 3,93 (m, 2H), 3,69 - 3,51 (m, 2H), 1,35 (s, 3H), 1,01 (s, 6H); MS (ES+) 384,9 (M+1), 792,6 (2M+Na); (ES-) 382,6 (M-1). Etapa 2: Preparação de 2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4- diidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc- butila (34b)
[000650] A uma solução de 2-(4-cloro-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)- 3,4-diidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)- terc-butila (34a) (4 g, 10,39 mmol) em DMF (80 mL) foi adicionado azi- da de sódio (3,38 g, 52,0 mmol) e aquecido com agitação a 80 °C du¬rante 10 horas. A reação foi resfriada a 25 °C, despejada em gelo e extraída com acetato de etila. A camada de acetato de etila foi separa¬da lavada com água, solução salina, secada, filtrada e concentrada em vácuo à secura (banho de água 50 °C). O resíduo cru obtido foi purifi¬cado por cromatografia de coluna flash (sílica gel 120 g, eluindo com metanol em clorofórmio de 0 a 100 %) para fornecer 2-(4-azido-5H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-diidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidina-1- carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (34b) (1,28 g, 31 % de produ- ção) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,05 (bs, 1H, D2O permutável), 9,84 (s, 1H), 7,81 (m, 1H), 5,13 (m, 1H), 5,05 - 4,83 (m, 3H, D2O permutável), 4,24 (m, 1H), 4,09 (m, 1H), 4,03 (m, 1H), 3,59 (m, 2H), 1,38 (s, 4H for Boc) e 1,05 (s, 5H for Boc); MS (ES+) 782,8 (2M+1), (ES-) 389,6 (M-1). Etapa 3: Preparação de 2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4- diidróxi-5-((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc- butila (35a)
[000651] A uma solução de 2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)- 3,4-diidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)- terc-butila (34b) (1,0 g, 2,55 mmol) em piridina (5,0 mL, 62,06 mmol) foi adicionado clorotrifenilmetano (0,85 g, 3,07 mmol). A mistura resul¬tante foi agitada a 50 °C durante 4 horas em cujo tempo a reação che¬gou à conclusão (TLC em 9:1 clorofórmio:metanol). A mistura reacio- nal foi resfriada a 25 °C, despejada em água gelada (80 mL) e extraída com acetato de etila (100 mL, 2 x 60 mL). As camadas orgânicas fo¬ram combinadas lavadas com água, solução salina, secadas, filtradas e concentradas em vácuo para produzir um sólido não totalmente branco O sólido foi triturado com 5 % de EtOAc em n-hexano e coleta¬do por filtração para fornecer 2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)- 3,4-diidróxi-5-((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)- terc-butila (35a) (1,47 g, 90,74 % de produção) como um sólido ama¬relo claro; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 370 K) δ 12,82 (s, 1H), 9,48 (s, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,36 (d, J = 8,0 Hz, 5H), 7,29 - 7,19 (m,9H), 4,96 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 4,72 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 4,59 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 4,54 - 4,46 (m, 1H), 4,38 - 4,30 (m, 1H), 4,08 - 3,99 (m, 1H), 3,93 - 3,84 (m, 1H), 3,46 (dd, J = 9,1, 6,4 Hz, 1H), 3,37 (dd, J = 9,2, 4,2 Hz, 1H), 1,19 (s, 9H); MS (ES+) 655,85 (M+Na), (ES-) 632,55 (M-1). IR (KBr) 2133 cm-1. Etapa 4: Preparação de 2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3- (((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-4-hidróxi-5- ((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39a);2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-(((S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-3-hidróxi-5- ((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39b) e bis(2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato) de (2S,2'S)-(2S,3S,4R,5R)-2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-1- (terc-butoxicarbonil)-5-((tritiloxi)metil)pirrolidina-3,4-di-ila (38a) Método 1:
[000652] A uma solução de 2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)- 3,4-diidróxi-5-((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)- terc-butila (35a) (1 g, 1,578 mmol) e ácido (S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (L-Boc valina 0,343 g, 1,58 mmol) em DMF (10 mL) foi adicionado cloridrato de N1- ((etilimino)metileno)-N3,N3-dimetilpropano-1,3-diamina (EDCI, 0,756 g, 3,95 mmol) e N,N-dimetilpiridin-4-amina (DMAP, 0,193 g, 1,578 mmol) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada em tempe¬ratura ambiente durante a noite. A análise de TLC (10 % de clorofór¬mio em metanol) um pouco de 2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7- il)-3,4-diidróxi-5-((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila não reagido (35a). A reação foi saciada com água (50 mL) e extraída com acetato de etila (3 x 100 mL). As cama¬das orgânicas foram combinadas, lavadas com água, solução salina (100 mL), secadas, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo cru obtido foi purificado por cromatografia de coluna flash (sílica gel 40 g) para fornecer:
[000653] 2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3,4-diidróxi-5- ((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato (35a) (196 mg, 19,6 %) como um sólido branco;
[000654] 2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3-(((S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-4-hidróxi-5- ((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39a) (511 mg, 38,9 %) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 370K) δ 12,86 (s, 1H), 9,39 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,38 (d, J = 7,9 Hz, 6H), 7,31 - 7,18 (m, 9H), 6,57 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 5,46 (s, 1H), 5,05 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 4,94 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 4,78 - 4,69 (m, 1H),4,13 - 4,05 (m, 2H), 3,53 - 3,36 (m, 2H), 2,19 - 2,04 (m, 1H), 1,42 (s, 9H), 1,17 (s, 9H), 0,92 (t, J = 6,7 Hz, 6H); IR (KBr) 2133 cm-1; MS (ES-) 831,1 (M-1);
[000655] 2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-(((S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-3-hidróxi-5- ((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39b) (250 mg, 19 %) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 370K) δd 12,84 (s, 1H), 9,49 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,36 - 7,28 (m, 6H), 7,25 -7,17 (m, 9H), 6,48 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,81 - 5,71 (m, 1H), 5,22 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 5,00 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 4,71 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 3,91 (m, 2H), 3,56 - 3,32 (m, 2H), 2,10 - 2,00 (m, 1H),1,32 (s, 9H), 1,22 (s, 9H), 0,88 (dd, J = 6,6, 3,4 Hz, 6H); IR (KBr) 2134 cm-1; MS (ES-) 831,1(M-1); e
[000656] bis(2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato) de (2S,2'S)-(2S,3S,4R,5R)-2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-1- (terc-butoxicarbonil)-5-((tritiloxi)metil)pirrolidina-3,4-di-ila (38a) (18 mg, 1,1 %) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO, 370K) δ 12,94 (s, 1H, N-H), 9,38 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,38- 7,14 (m, 15H), 6,51 (s, 1H, N-H), 6,37 (s, 1H, N-H), 5,97 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,76 (s, 1H), 5,22 (t, J = 11,3 Hz, 1H), 4,19 - 3,98 (m, 2H), 3,91 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 3,55 (d, J = 18,8 Hz, 1H), 3,35 (m, 1H), 2,06 (m, 2H), 1,37 (s,, 9H), 1,24 (s, 9H), 1,21 (s, 9H), 0,94 - 0,78 (m, 12H). Método 2:
[000657] A uma solução de 2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)- 3,4-diidróxi-5-((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)- terc-butila (35a) (1,0 g, 1,58 mmol) e ácido (S)-2-(terc- butoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (L-Boc valina, 0,720 g, 3,31 mmol) em DMF (10 mL) foi adicionado cloridrato de N1- ((etilimino)metileno)-N3,N3-dimetilpropano-1,3-diamina (EDCI, 0,756 g, 3,95 mmol) e N,N-dimetilpiridin-4-amina (DMAP, 0,193 g, 1,578 mmol) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada em tempe¬ratura ambiente durante a noite e saciada com água (30 mL). A mistu¬ra reacional foi extraída com acetato de etila (3 x 60 mL). As camadas orgânicas foram combinadas lavadas com água, solução salina (50 mL), secadas, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo cru obtido foi purificado por cromatografia de coluna flash (sílica gel 25 g, eluindo com acetato de etila em hexanos 0-50 %) para fornecer bis(2-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato) de (2S,2'S)-(2S,3S,4R,5R)-2- (4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-1-(terc-butoxicarbonil)-5- ((tritiloxi)metil)pirrolidina-3,4-di-ila (38a) (670 mg, 41,2 % de produção) como uma espuma branca, mais mistura contendo 2-(4-azido-5H- pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3- metilbutanoil)oxi)-4-hidróxi-5-((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39a) e 2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin- 7-il)-4-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-3-hidróxi- 5-((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39b) (610 mg, 47,9 %) como uma espuma branca; MS (ES-) 831,5 (M-1). Etapa 5: Preparação de bis(2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3- metilbutanoato) de (2S,2'S)-(2S,3S,4R,5R)-2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-((tritiloxi)metil)pirrolidina-3,4-di- ila (38b)
[000658] A uma solução de bis(2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3- metilbutanoato) de (2S,2'S)-(2S,3S,4R,5R)-2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-1-(terc-butoxicarbonil)-5-((tritiloxi)metil)pirrolidina-3,4-di- ila (38a) (964 mg, 0,934 mmol) em etanol (25 mL) foi adicionado Pd/C (10 %) (150 mg) e hidrogenado a 3,51 kg/cm2 (50 psi) durante a noite. O catalisador foi removido por filtração através de uma almofada de celita e o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo obtido foi purifi¬cado por cromatografia de coluna flash (sílica gel 4 g, eluindo com (acetato de etila /metanol, 9:1) em hexano, 0-100%) para fornecer bis(2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoato) de (2S,2'S)- (2S,3S,4R,5R)-2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-1-(terc- butoxicarbonil)-5-((tritiloxi)metil)pirrolidina-3,4-di-ila (38b) (765 mg, 81 % de produção) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 370K) δ 10,61 (s, 1H, N-H), 7,86 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,37 - 7,17 (m, 16H), 6,38 (m, 2H, N-H), 6,30 (s, 2H, N-H), 6,16 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 5,87 (t, J = 3,8 Hz, 1H), 5,06 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 4,12 - 4,00 (m, 2H), 3,98 - 3,86 (m, 1H), 3,78 (dd, J = 9,7, 6,9 Hz, 1H), 3,20 (m, 1H), 2,05 (m, 2H), 1,40 (s, 9H), 1,31 (s, 9H), 1,23 (d, J = 2,0 Hz, 9H), 0,90-0,80 (m, 12H); Análise: Calculada para C55H71N7O11.H2O: C, 64,50; H, 7,18; N, 9,57; Encontrada: C, 64,36; H, 7,11; N, 9,38. Exemplo 6: Preparação de 2-amino-3-metilbutanoato de (S)- (2R,3R,4S,5S)-5-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-hidróxi-2- (hidroximetil)pirrolidin-3-ila (35e) e 2-amino-3-metilbutanoato de (S)- (2S,3S,4R,5R)-2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-hidróxi-5- (hidroximetil)pirrolidin-3-ila (34f)
Figure img0098
Método 1:
[000659] De 2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3-(((S)-2- ((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-4-hidróxi-5- ((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39d) e 2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-(((S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-3-hidróxi-5- ((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39e)
[000660] A uma solução de 2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7- il)-3-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-4-hidróxi-5- ((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39d) e 2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-(((S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-3-hidróxi-5- ((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39e) (744 mg, 0,922 mmol) em acetona (15 mL) foi adicionado 9 M de ácido sulfúrico (0,512 mL, 4,61 mmol) e agitado em temperatura ambi¬ente durante a noite. O solvente foi decantado e o sólido branco foi lavado com acetona e agitado durante 30 minutos antes de decantar novamente. O mesmo procedimento foi repetido 3-4 vezes, o sólido obtido foi coletado por filtração, lavado com acetona secado sobre vá¬cuo a 35 oC para fornecer misturas de 2-amino-3-metilbutanoato de (S)-(2R,3R,4S,5S)-5-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-hidróxi- 2-(hidroximetil)pirrolidin-3-ila (35e) e 2-amino-3-metilbutanoato de (S)- (2S,3S,4R,5R)-2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-hidróxi-5- (hidroximetil)pirrolidin-3-ila (34f) como um sal de sulfato (500 mg, 1,081 mmol, 97 % de produção) como um sólido branco. A purificação empregando-se cromatografia de coluna flash (233 mgs de mistura de amostra, sílica gel eluindo com 0 a 100 % de CMA-50 em CMA-80) forneceu misturas de 2-amino-3-metilbutanoato de (S)-(2R,3R,4S,5S)- 5-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-hidróxi-2- (hidroximetil)pirrolidin-3-ila (35e) e 2-amino-3-metilbutanoato de (S)- (2S,3S,4R,5R)-2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-hidróxi-5- (hidroximetil)pirrolidin-3-ila (34f) (74 mgs, 48 %) como um sólido bran¬ co; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ [8,08 (s, 0,65H), 8,07 (s, 0,35H) 1H], [7,49 (s, 0,35H), 7,48 (s, 0,65H) 1H], [5,09 (t, J = 6,4 Hz, 0,35H), 5,01 (dd, J = 5,7, 3,7 Hz, 0,65H) 1H], [4,35 (d, J = 6,7 Hz, 0,35H), 4,21 (d, J = 5,6 Hz, 0,35H), 4,18 (d, J = 5,7 Hz, 0,65H), 4,14 - 4,09 (m, 1,65H) 3H], [3,63 - 3,48 (m, 1H) 1H], [3,25 (d, J = 5,1 Hz, 0,7H), 3,20 - 3,10 (m, 1,3H) 2H], [2,05 - 1,82 (m, 1H)], [0,93 (d, J = 6,8 Hz, 1,95H), 0,88 (d, J = 6,8 Hz, 1,95H), 0,81 (d, J = 6,9 Hz, 1,05H), 0,77 (d, J = 6,8 Hz, 1,05H) 6H]; MS (ES+) 365,0 (M+1). Método 2:
[000661] De 8-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-9-(((S)-2- ((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-2,2,4,4- tetraisopropiltetraidro-[1,3,5,2,4]trioxadisilocino[7,6-b]pirrol-7(8H)- carboxilato de (6aR,8S,9S,9aR)-terc-butila (34e)
[000662] A uma solução agitada de 8-(4-amino-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-9-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3- metilbutanoil)oxi)-2,2,4,4-tetraisopropiltetraidro-[1,3,5,2,4] trioxadisilo- cino[7,6-b]pirrol-7(8H)-carboxilato de (6aR,8S,9S,9aR)-terc-butila (34e) (0,843 g, 1,04 mmol) em acetona (10 mL) foi adicionado ácido sulfúrico concentrado (50 % de solução em água, 1,16 mL, 10,44 mmol) em temperatura ambiente e agitado durante 18 horas. A mistura reacional foi diluída com acetona (30 mL) e agitada. Acetona foi decantada e esta operação foi repetida duas vezes. O sólido que separou foi cole¬tado por filtração secado em vácuo para fornecer misturas de 2-amino- 3-metilbutanoato de (S)-(2R,3R,4S,5S)-5-(4-amino-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-4-hidróxi-2-(hidroximetil)pirrolidin-3-ila (35e) e sal de sulfato de 2-amino-3-metilbutanoato de (S)-(2S,3S,4R,5R)-2-(4-amino- 5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-hidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidin-3-ila (34f) (0,4 g, 68 %) como um sólido branco. O sólido foi purificado por cromatografia de coluna flash (sílica gel 4 g eluindo com 0 a 100 % de CMA-50 em CMA-80) para fornecer misturas de 2-amino-3- metilbutanoato de (S)-(2R,3R,4S,5S)-5-(4-amino-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-4-hidróxi-2-(hidroximetil)pirrolidin-3-ila (35e) e 2-amino- 3-metilbutanoato de (S)-(2S,3S,4R,5R)-2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-4-hidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidin-3-ila (34f); a análise de NMR mostra as misturas do composto 35e e 34f; MS (ES+) 365,1 (M+1), (ES-) 362,9 (M-1). Preparação de 2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3-(((S)-2- ((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-4-hidróxi-5- ((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39d) e 2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-(((S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-3-hidróxi-5- ((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39e) Método 1:
[000663] De 2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3-(((S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-4-hidróxi-5-((tritiloxi)metil) pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39a)
[000664] A uma solução de 2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)- 3-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-4-hidróxi-5- ((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39a) (1,319 g, 1,584 mmol) em etanol (50 mL) foi adicionado 10 % de Pd/C (200 mg) e hidrogenado a 3,51 kg/cm2 (50 psi) durante 8 horas. O catalisador foi removido por filtração da mistura reacional através de uma almofada de Celita. O filtrado foi concentrado em vácuo e o resí¬duo obtido foi purificado por cromatografia de coluna flash para forne¬cer uma mistura 3:2 (analisado por NMR) de 2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-3-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3- metilbutanoil)oxi)-4-hidróxi-5-((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39d) e 2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin- 7-il)-4-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-3-hidróxi- 5-((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39e) (945 mg, 1,171 mmol, 74,0 % de produção) como um sólido branco; MS (ES+) 806,9 (M+1); (ES-) 805,0 (M-1), 841,2 (M+Cl). Método 2:
[000665] De 2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-(((S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-3-hidróxi-5- ((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39b)
[000666] A uma solução de 2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)- 4-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-3-hidróxi-5- ((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39b) (634 mg, 0,761 mmol) em etanol (25 mL) foi adicionado 10 % de Pd/C (100 mg) e hidrogenado a 3,51 kg/cm2 (50 psi) durante 8 horas. O catalisador foi removido por filtração da mistura reacional através de uma almofada de Celita. O filtrado foi concentrado em vácuo e o resí¬duo obtido foi purificado por cromatografia de coluna flash para forne¬cer uma mistura 3:2 de 2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-3- (((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-4-hidróxi-5- ((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39d) e 2-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-4-(((S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-3-hidróxi-5- ((tritiloxi)metil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (39e) (474 mg, 0,587 mmol, 77 % de produção) como um sólido bran¬co; o espectro de NMR rivaliza com o produto empregando-se o pro¬cedimento do composto 39a; MS (ES+) 806,9 (M+1); (ES-) 805,7 (M¬1). Preparação de 8-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-9-(((S)-2- ((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-2,2,4,4- tetraisopropiltetraidro-[1,3,5,2,4]trioxadisilocino[7,6-b]pirrol-7(8H)- carboxilato de (6aR,8S,9S,9aR)-terc-butila (34e) Etapa 1: Preparação de 8-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-9- hidróxi-2,2,4,4-tetraisopropiltetraidro-[1,3,5,2,4]trioxadisilocino[7,6- b]pirrol-7(8H)-carboxilato de (6aR,8S,9S,9aR)-terc-butila (34c)
[000667] A uma solução agitada de 2-(4-azido-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-3,4-diidróxi-5-(hidroximetil)pirrolidina-1-carboxilato de (2S,3S,4R,5R)-terc-butila (34b) (5 g, 12,78 mmol) em DMF (25 mL) foi adicionado N,N-dimetilpiridin-4-amina (DMAP, 0,078 g, 0,639 mmol), 1H-imidazol (3,48 g, 51,1 mmol) e 1,3-dicloro-1,1,3,3- tetraisopropildisiloxano (4,63 mL, 14,05 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com água (300 mL). O sólido separado foi coletado por filtração e lavado com água. O sólido foi purificado por cromatografia de coluna flash (sílica gel, eluindo com acetato de etila em hexanos de 0 a 35 %) para forne¬cer 8-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-9-hidróxi-2,2,4,4- tetraisopropiltetraidro-[1,3,5,2,4]trioxadisilocino[7,6-b]pirrol-7(8H)- carboxilato de (6aR,8S,9S,9aR)-terc-butila (34c) (5,02 g, 62,0 % de produção) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,26 (s, 1H, D2O permutável), 9,85 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 5,52 (d, J = 3,2 Hz, 1H, D2O permutável), 5,10 (s, 1H), 4,63 - 4,24 (m, 2H), 4,18 - 3,82 (m, 1H), 3,67 (dt, J = 8,2, 2,9 Hz, 1H), 1,37 (d, J = 45,1 Hz, 10H), 1,08 - 0,99 (m, 14H), 0,86 (m, 14H); MS (ES+) 633,9 (M+1); (ES-) 632,2 (M-1); Análise: Calculada para C28H47N7O6Si2: C, 53,05; H, 7,47; N, 15,47; Encontrada: C, 53,00; H, 7,55; N, 15,15. Etapa 2: Preparação de 8-(4-azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-9- (((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-2,2,4,4- tetraisopropiltetraidro-[1,3,5,2,4]trioxadisilocino[7,6-b]pirrol-7(8H)- carboxilato de (6aR,8S,9S,9aR)-terc-butila (34d)
[000668] A uma solução agitada de 8-(4-azido-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-9-hidróxi-2,2,4,4-tetraisopropiltetraidro- [1,3,5,2,4]trioxadisilocino[7,6-b]pirrol-7(8H)-carboxilato de (6aR,8S,9S,9aR)-terc-butila (34c) (2 g, 3,16 mmol) em DMF (20 mL) foi adicionado ácido (S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)-3-metilbutanoico (L-Boc Valina, 1,03 g, 4,73 mmol) e resfriada a 0 °C. A 0 °C cloridrato de N1-((etilimino)metileno)-N3,N3-dimetilpropano-1,3-diamina (EDCI, 1,51 g, 7,89 mmol) e N,N-dimetilpiridin-4-amina (DMAP, 0,385 g, 3,16 mmol) foi adicionado e permitiu a reação vir para a temperatura ambi¬ente durante a noite. A reação foi diluída com água (100 mL) e extraí¬da com acetato de etila (2 x 100 mL). As camadas de acetato de etila foram combinadas lavadas com água (2 x 50 mL), solução salina (50 mL), secadas, filtradas e concentradas em vácuo. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia de coluna flash (sílica gel 80 g, eluindo com acetato de etila em hexanos de 0 a 35 %) para fornecer 8-(4- azido-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-9-(((S)-2-((terc- butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-2,2,4,4- tetraisopropiltetraidro-[1,3,5,2,4]trioxadisilocino[7,6-b]pirrol-7(8H)- carboxilato de (6aR,8S,9S,9aR)-terc-butila (34d) (2,1 g, 80 %) como um sólido branco; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 13,40 (s, 1H, D2O permutável), 9,85 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,23 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,84 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 5,24 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 4,82 - 4,58 (m, 1H), 4,41 (d, J = 12,4 Hz, 1H), 4,03 - 3,93 (m, 2H), 3,67 (s, 1H), 2,08 (dt, J = 13,5, 6,8 Hz, 1H), 1,49 - 1,33 (m, 18H), 1,15 - 0,67 (m, 35H); MS (ES+) 856,0 (M+Na), 832,4 (M-1). Análise: Calculada para C38H64N8O9Si2: C, 54,77; H, 7,74; N, 13,45; Encontrada: C, 54,86; H, 7,78; N, 13,13. Etapa 3: Preparação de 8-(4-amino-5H-pirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-9- (((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)oxi)-2,2,4,4- tetraisopropiltetraidro-[1,3,5,2,4]trioxadisilocino[7,6-b]pirrol-7(8H)- carboxilato de (6aR,8S,9S,9aR)-terc-butila (34e)
[000669] A uma suspensão de Paládio sobre Carbono (10 %, 0,262 g) em etanol (50 mL) foi adicionado 8-(4-azido-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-9-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil) oxi)-2,2,4,4-tetraisopropiltetraidro-[1,3,5,2,4]trioxadisilocino[7,6-b]pirrol- 7(8H)-carboxilato de (6aR,8S,9S,9aR)-terc-butila (34d) (2,05 g, 2,46 mmol) e hidrogenado a 4,21 kg/cm2 (60 psi) durante 12 horas. O cata-lisador foi removido por filtração através de uma almofada de Celita e o filtrado foi concentrado em vácuo. O resíduo obtido foi purificado por cromatografia de coluna flash (sílica gel 25 g, eluindo com CMA 80 em clorofórmio de 0 a 100 %) para fornecer 8-(4-amino-5H-pirrolo[3,2- d]pirimidin-7-il)-9-(((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3- metilbutanoil)oxi)-2,2,4,4-tetraisopropiltetraidro-[1,3,5,2,4] trioxadisilo- cino[7,6-b]pirrol-7(8H)-carboxilato de (6aR,8S,9S,9aR)-terc-butila (34e) (1,9 g, 96 % de produção) como um sólido incolor; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 10,94 (s, 1H, D2O permutável), 8,05 (s, 1H), 7,46 - 7,30 (m, 1H), 7,17 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 6,82 (s, 2H, D2O permutável), 5,86 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 5,16 (d, J = 25,0 Hz, 1H, D2O permutável), 5,00 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 4,17 (dd, J = 12,2, 5,1 Hz, 1H), 3,98 - 3,88 (m, 1H), 3,61 (s, 1H), 2,16 - 1,92 (m, 1H), 1,41 (bs, 18H), 1,01 - 0,83 (m, 35H); MS (ES+) 806,921 (M+1), 830,1 (M+Na), (ES-) 805,289 (M-1), 842,0 (M+Cl). Exemplo 7: Farmacocinéticos de 30f Após Administração Oral a Ratos
[000670] Ratos Sprague-Dawley machos com 8a 10 semanas de idade sadios foram aleatoriamente designados para grupos de controle e experimentais, N = 4 por grupo. Todos os animais foram alojados e alimentados de maneira padrão. No dia do experimento, todos os animais foram isolados e jejuados aproximadamente 15 horas antes da dose em gaiolas metabólicas. Alimento foi retornado para os animais duas horas após a dose com agente de controle ou experimental. Água foi liberada ad libitum. Imediatamente antes da administração, composto de controle dicloridrato de (2S,3S,4R,5R)-2-(4-amino-5Hpirrolo[3,2-d]pirimidin-7-il)-5-(hidroximetil)pirrolidina-3,4-diol (12i) foi dissolvido em água para alcançar uma concentração de 1 mg/mL. O composto experimental 30f similarmente foi dissolvido em água para alcançar uma concentração equivalente (1 mg/mL em termos de composto 12i). Após cada animal ser pesado, todos os animais de controle foram administrados 10 mg/kg de peso corporal de composto 12i por gavagem oral no momento 0, enquanto todos os animais experimentais foram administrados 10 mg/kg de peso corporal de composto 30f por gavagem oral no momento 0. Amostras de sangue seriais foram obtidas no momento 0, 15 min, 30 min, 1 hr, 2 hr, 4 hr, 8 hr, 12 hr, e 24 hr. Todas as amostras foram transferidas para tubos microcentrífugos e centrifugadas a 14.000 rpm durante 3 minutos. Plasma de cada tubo foi removido e transferido para um tubo microcentrífugo prerrotulado e colocado sobre gelo seco até as amostras serem transferidas para congelador a -80 °C para armazenagem até análise. Amostras individuais foram então analisadas para o composto 12i. Os dados de concentração de plasma-versus-tempo foram analisadas por métodos não compartimentais usando o programa de software WinNonlin. Parâmetros farmacocinéticos Tmax, Cmax, T½, AUC(0-last), AUC(0-inf), MRT(0-inf) e gráficos de concentrações de plasma e fígado versus perfil de tempo foram obtidos. Os resultados são mostrados na FIG. 1.
[000671] Como representado na FIG. 1, grupos experimentais e de controle mostraram diferenças marcantes em farmacocinéticos. Enquanto que a Tmax foi a mesma para os dois grupos (0,5 h), Cmax para o grupo experimental foi de 527 ng/mL, enquanto que a Cmax para o grupo de controle foi de apenas 123 ng/mL, e AUC(0-inf) para o grupo experimental foi de 1076 ng·h, enquanto que AUC(0-inf) para o grupo de controle foi de apenas 219 ng·h. Com base nestes resultados, o composto 30f tem aproximadamente biodisponibilidade quatro vezes maior do que o composto 12i, e plasma esterases rapidamente hidrolizam o composto 30f em composto 12i.Exemplo 8: Efeitos de Inibidor de RNA Polimerase Viral (Composto 12i) sobre a Replicação de Vírus do Sarampo em Células de Rim de Macaco Verde Africano
[000672] Materiais e Métodos: Células Vero-76 (Células de rim de macaco verde africano) foram obtidas da American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA). As células foram rotineiramente passsadas em meio essencial mínimo (MEM com 0,15% de NaHCO3; Hyclone Laboratories, Logan, UT, USA) suplementado com 5% de so¬ro bovino fetal (FBS, Hyclone). Quando avaliando compostos, o soro foi reduzido para uma concentração final de 2,5 %, e gentamicina foi adicionada ao meio de teste para uma concentração final de 50 μg/mL. O virus do sarampo (MV), linhagem Chicago, foi obtido dos Centros para Controle de Doença (Atlanta, GA). Procedimentos de Teste Antiviral: Ensaio de Inibição de Efeito Citopático (Ensaio Visual)
[000673] Células foram semeadas em placas de cultura de tecido de base plana de 96 cavidades (Corning Glass Works, Corning, NY), 0,2 mL/cavidade, na concentração apropriada, e incubadas durante a noite a 37 °C a fim de estabelecer uma monocamada celular. Quando a mo- nocamada foi estabelecidao o meio de crescimento foi decantado e as várias diluições de composto teste foram adicionadas a cada cavidade (3 cavidades/diluição, 0,1 mL/cavidade). Meio diluente de composto foi adicionado à célula e cavidades de controle de vírus (0,1 mL/well). Ví¬rus, diluído em meio de teste, foi adicionado às cavidades de teste de composto (3 cavidades/diluição de composto) e às cavidades de con¬trole de vírus (6 cavidades) a 0,1 mL/cavidade. Vírus (MOI viral = 0,001) foi adicionado aproximadamente 5 minutos após o Composto O meio de teste sem virus foi adicionado a todas as cavidades de contro¬le de toxicidade (2 cavidades / diluição de cada composto teste) e às cavidades de controle celular (6 cavidades) a 0,1 mL/cavidade. As pla- cas foram incubadas a 37°C em uma incubadora umidificada com 5% de CO2, 95% de atmosfera de ar até as cavidades de controle de vírus terem leituras de efeito citopático adequado (CPE) (80 a 100% de des¬truição celular). Isto foi obtido de 4 a 11 dias após a exposição do vírus às células, dependendo do vírus. As células foram em seguido exami¬nadas microscopicamente quanto a CPE, este senco classificado de 0 (células normais) a 4 (máxima, 100%, CPE). As células nas cavidades de controle da toxicidade foram observadas microscopicamente quan¬to às mudanças morfológicas atribuídas à citotoxicidade. Esta citotoxi- cidade (destruição celular e/ou mudança de morfologia) foi também graduada a 100 % de toxicidade, 80 % de citotoxicidade), 60% de cito- toxicidade, 40 % de citotoxicidade, 20 % de citotoxicidade, e 0 (células normais). A dose 50% efetiva (EC50) e dose 50 % citotóxica (IC50) fo¬ram calculadas por análise de regressão dos dados CPE do vírus e os dados de controle de toxicidade, respectivamente. O índice seletivo (SI) para cada composto testado foi calculada usando a fórmula: SI = CC50/EC50. Ensaio de Captação Vermelho Neutro de Inibição de CPE
[000674] A captação de NR foi escolhida como os métodos de quan-tificação de pigmento para avaliar fármacos antivirais com base nas descobertas de Smee et.al. (Virol. Methods 2002, 106: 71-79; aqui in-corporado por referência em sua íntegra). Este ensaio foi feito sobre as mesmas placas de teste de inibição de CPE descritas acima para verificar a atividade inibitória e a citotoxicidade observada por obser-vação visual. O ensaio de NR foi realizado usando um métodos modi-ficado de Cavenaugh et al. (Invest. New Drugs 1990, 8:347-354; aqui incorporado por referência em sua íntegra) como descrito por Barnard et al. (Antiviral Chem. Chernother. 2001, 12:220-231; aqui incorporado por referência em sua íntegra). Em síntese, o meio foi removido para cada cavidade de uma placa classificada para CPE a partir de um en- saio de inibição de CPE, 0,034 % de NR foi adicionado a cada cavida¬de da placa e a placa incubada durante 2 horas a 37 °C no escuro. A solução de NR foi em seguida removida das cavidades. Após enxa¬guar (algumas vezes células desprendem-se da placa causando ele¬vação errônea de vermelho neutro) e aspirando até a secura, o pig¬mento restante foi extraído durante 30 minutos, em temperatura ambi¬ente no escuro das células usando etanol absoluto tamponado com tampão de citrato de Sorenson. Absorvências a 540 nm/405 nm são lidas com uma leitora de microplaca (Opsys MRTM, Dynex Technologi¬es, Chantilly, VA, USA). Os valores de absorvência foram expressos como percentuais de controles não tratados e valores EC50, CC50 e SI foram calculados como descrito acima. Ensaio de Redução de produção de vírus:
[000675] Ensaios de redução de produção de vírus foram realizados usando a cultura celular de ensaio de dose infecciosa de 50 % (CCID50) essencialmente como descrito anteriormente (Antimicrob. Agents Chemother. 1992, 3:1837-1842; aqui incorporado por referên¬cia em sua íntegra). Em síntese, sobrenadantes de cada cavidade fo¬ram serialmente diluídos em cavidades triplicadas de placas de 96 ca¬vidades contendo células Vero-76. As placas foram incubadas durante 6 dias e em seguido checadas quanto a CPE induzidos por vírus. Quantificação de títulos de produção de vírus foi pelo método final de Reed e Muench (Am. J. Hyg. 1938, 27:493-498; aqui incorporado por referência em sua íntegra). O valor EC90 foi calculado usando regres¬são linear para estimar a concentração necessária para inibir a produ¬ção de vírus em 90 % ou um decréscimo de um log10 em título de ví¬rus. Resultados e Discussão:
[000676] O virus do sarampo foi potencialmente inibido pelo compos¬to 12i (Tabela 1). Valores EC50 contra o vírus do sarampo foram 0,6 e 1,4 μg/mL por ensaio visual e ensaio NR, respectivamente. O compos¬to não teve qualquer citotoxicidade em ensaios visual ou NR (IC50 > 100). Portanto, os indices seletivos por ambos os ensaios sugeriram que o composto 12i foi altamente ativo contra o vírus do sarampo (MV). A potente atividade inibitória contra MV foi confirmada por um ensaio de redução da produção de vírus com um EC90 = 0,36 μg/mL, representando uma queda de um log10 em vírus produzida em células infectadas. Conclusões:
[000677] O composto 12i demonstrou potente e seletiva atividade inibitória. Pelo ensaio de redução da produção de vírus, o composto 12i foi também um potente inibidor de MV (EC90 = 0,37 μg/mL). Desse modo, o composto 12i foi constatado ser um potente inibidor de muitas viroses de RNA e sugere que o composto 12i garante avaliação in vitro e in vivo como um inibidor de amplo espectro de viroses de RNA sele¬cionadas. Tabela 1. Efeitos de um inibidor de polimerase (composto 12i) na repli- cação de várias viroses.
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Exemplo 9: Efeitos de Inibidor de RNA Polimerase Viral (Composto 12i) sobre a Replicação de Várias Viroses de RNA Materiais e Métodos Células e vírus
[000678] Células de rim de macaco verde africano (MA-104) foram obtidas de Whitaker MA Bioproducts, Walkersville, MD, USA). Todas as células Vero (Células de rim de macaco verde africano, carcinoma humano das células da laringe (A-549), e células de rim canino Madin- Darby foram obtidas da American Type Culture Collection (ATCC, Ma-nassas, VA). Células A-549 foram cultivadas em meio essencial míni¬mo da Dulbecco (DMEM) suplementadas com 0,15 % de NaHCO3 (Hyclone Laboratories, Logan, UT, USA) e com 10 % de soro bovino fetal (FBS, Hyclone). As células restantes foram rotineiramente passa¬das em meio essencial mínimo (MEM com 0,15 % de NaHCO3; Hyclo- ne Laboratories, Logan, UT, USA) suplementado com 5 % de soro bo¬vino fetal (FBS, Hyclone).
[000679] Quando avaliando compostos, o soro foi reduzido para uma concentração final de 2,5 %, e gentamicina é adicionada ao meio de teste para uma concentração final de 50 μg/mL. Meio de teste para ensaios de influenza consistiu em MEM sem soro, 0,18 % de NaHCO3, 20 μg de tripsina/mL, 2,0 μg de EDTA/mL, e 50 μg de gentamicina/mL.
[000680] Para avaliação de toxicidade em células ativamente cres¬centes, a citotoxicidade foi avaliada determinando-se o número total de células como refletido por um ensaio de captação de NR após uma exposição de 3 dias a diversas concentrações de Composto Para quantificar o crescimento celular em 72 horas na presença ou ausên¬cia de fármaco, as placas foram semeadas com 1 x 103 células MDCK, e após 4 h (deixadas todas as células fixarem-se às cavidades da pla¬ca) foram expostas a concentrações selecionadas de fármaco em MEM ou MEM. Após 72 horas as placas foram tratadas como descrito acima para o ensaio de NR. Os valores deabsorvência foram expres¬sos como percentual de controles não tratados e os valores CC50 fo¬ram calculados por análise de regressão.
[000681] O vírus 2 da Dengue (DV-2), linhagem New Guinea C, vírus sincicial respiratório (RSV) A2, Rinovírus 2 (RV-2), linhagem HOP, Ta- caribe vírus (TCV), linhagem TRVL 11573, vírus da encefalite equina Venezuelana (VEE), e vírus da Febre Amarela (YFV), linhagem 17D, foram todos adquiridos da American Type Culture Collection (ATCC; Manassas, VA). Todas as viroses de influenza, vírus do Sarampo (MV), linhagem Chicago, SARS corona vírus (SARS-CoV), linhagem Urbani, e vírus do Oeste do Nilo (WNV), prototípico Nova Iorque 1999 isolado designado linhagem 996625, foram obtidos dos Centros para Controle de Doença (Atlanta, GA). Vírus Punta Toro (PTV), linhagem Adames, foi obtida de Dr. Dominique Pifat do U. S. Army Medical Re¬search Institute for Infectious Diseases, Ft. Detrick (Frederick, MD). Linhagem de vacina do vírus da febre Rift Valley (RVFV), MP-12, e linhagem de vacina do vírus Junino (JUNV), Cândida 1, foram gentil¬mente fornecidos pelo Dr. Robert Tesh (World Reference Center for Emerging and viroses and Arboviroses, University of Texas Medical Branch, Galveston, TX). Vírus Pichinde (PICV), linhagem An 4763, foi fornecidos pelo Dr. David Gangemi (Clemson University, Clemson, South Carolina). Virus parainfluenza tipo 3 (PIV-3), linhagem 14702/5/95, foi obtido de Jacquelin Boivin (Hospitale St. Justin, Mon¬treal, Canadá). Adenovírus (AV-1) tipo 1, linhagem Chicago/95, foi iso¬lado das lavagens traqueais de um paciente pediátrico e foi fornecido por M.F. Smaron (Department of Medicine, University of Chicago, Chi¬cago IL). Procedimento de Teste Antiviral: Ensaio de Inibição de Efeito Citopático (Ensaio Visual)
[000682] Células foram semeadas em placas de cultura de tecidode base plana de 96 cavidades (Corning Glass Works, Corning, NY), 0,2 mL/cavidade, na concentração celular apropriada, e incubadas durante a noite a 37 °C a fim de estabelecer uma monocamada celular. Quan¬do a monocamada foi estabelecida, o meio de crescimento foi decan¬tado e as várias diluições de composto teste foram adicionadas a cada cavidade (3 cavidades/diluição, 0,1 mL/cavidade). O meio diluente de composto foi adicionado às cavidades de controle da célula e vírus (0,1 mL/cavidade). O vírus, diluído em meio de teste, foi adicionado às cavidades de teste de composto (3 cavidades/diluição de composto) e às cavidades de controle de vírus (6 cavidades) a 0,1 mL/cavidade. Vírus (viral MOT = 0,001) foi adicionado aproximadamente 5 minutos após o Composto Meio de teste sem vírus foi adicionado a todas as cavidades de controle da toxicidade (2 cavidades/diluição de cada composto teste) e às cavidades de controle celular (6 cavidades) a 0,1 mL/cavidade. As placas foram incubadas a 37 °C em uma incubadora umidificada com 5 % de CO2, 95% de atmosfera de ar até as cavida¬des de controle do vírus terem leituras de efeito citopático adequado (CPE) (80 a 100 % de destruição celular). Isto foi obtido de 4 a 11 dias após a exposição do vírus às células, dependendo do vírus. As células foram em seguido examinadas microscopicamente quanto ao CPE, isto sendo classificado de 0 (células normais) a 4 (máximo, 100%) CPE. As células nas cavidades de controle da toxicidade foram obser¬vadas microscopicamente quanto às mudanças morfológicas atribuí¬das à citotoxicidade. Esta citotoxicidade (destruição celular e/ou mu¬dança de morfologia) foi também graduada a 100% de toxicidade, 80% de citotoxicidade), 60% de citotoxicidade, 40% de citotoxicidade, 20% de citotoxicidade, e 0 (células normais). A dose 50% efetiva (EC50) e dose 50% citotóxica (IC50) foram calculadas por análise de regressão dos dados de CPE do vírus e os dados de controle da toxicidade, res¬pectivamente. O índice seletivo (SI) para cada composto testado foi calculado usando a fórmula: SI = CC50 / EC50. Ensaio de Captação Vermelho Neutro (NR) de Inibição de CPE e Cito- toxicidade de Composto
[000683] A captação de NR foi escolhida como o métodos de quanti-ficação de pigmento para avaliação de fármacos antivirais com base nas descobertas de Smee et al (supra). Este ensaio foi feito nas mes¬mas placas de teste de inibição de CPE descritas acima para verificar a atividade inibitória e a citotoxicidade observada pela observação vi¬sual. O ensaio de NR foi realizado usando um métodos modificado de Cavenaugh et al. (supra) como descrito por Barnard et al. (supra). Em síntese, o meio foi removido de cada cavidade de uma placa classifi¬cada quanto ao CPE de um ensaio de inibição de CPE, 0,034 % de NR foi adicionado a cada cavidade da placa e a placa incubada duran¬te 2 horas a 37°C no escuro. A solução de NR foi em seguida removi¬da das cavidades. Após enxaguar (algumas vezes células desprendi¬das da placa causando redução errônea de vermelho neutro) e aspirar até a secura, o pigmento restante foi extraído durante 30 minutos em temperatura ambiente no escuro das células usando etanol absoluto tamponado com tampão de citrato de Sorenson. Absorvências a 540 nm/405 nm são lidas com uma leitora de microplaca (Opsys MRTM, Dynex Technologies, Chantilly, VA, USA). Os valores de absorvência foram expressos como percentuais de controles não tratados e valores EC50, CC50 e SI foram calculados como descrito acima.
[000684] Outras viroses que foram consideradas significantemente inibidas pelo composto 12i (SI >10) foram DV-2 (EC50 = 15, 13 μg/mL), JUNV (EC50 = 29, 16 μg/mL), YFV (EC50 = 8,3, 8,3 μg/mL) (Tabela 1). As seguintes viroses foram ligeiramente inibidas pelo com-posto 12i (3<SI<10): PIV-3 (EC50 = 7,1, 10 μg/mL), SARS-CoV (EC50 = 14, 16 μg/mL), PICV (EC50 = 61, 28 μg/mL), e RVFV (EC50 = 75, 64 μg/mL). O composto 12i foi testado em comparação a um subgrupo de linhagens virais do influenza (Tabela 2), e exibiu atividade anti¬influenza de amplo espectro contra múltiplas linhagens. Tabela 2. Atividade anti-influenza de amplo espectro de composto 12i.
Figure img0101
Conclusões
[000685] O composto 12i demonstrou potente atividade contra todas as viroses de influenza testadas. O composto 12i foi descoberto ser um potente inibidor da replicação do vírus influenza e sugere que o composto 12i é efetivo como um inibidor de amplo espectro de viroses de RNA selecionadas, incluindo todas as viroses de influenza. Exemplo 10: Atividade Antiviral In Vitro do Composto 12i
[000686] A atividade antiviral de composto 12i foi estimada in vitro em diversas viroses quanto à atividade antiviral. Valores EC50 varia¬ram de cerca de 10 μg/mL a cerca de > 300 μg/mL contra Marburg (fi- loviridae), Cândida Junina 1 (arenaviridae), Pichinde (arenaviridae), Chikungunya 181/25 (togaviridae), e Vaccinia NYCBH (poxviridae). Exemplo 11: Atividade Antiviral Sinérgica de Composto 12i e Inibidor de Neuraminidase em Células MDCK
[000687] Células de Rim Canino Madin Darby (MDCK) foram infecta¬das com o influenza vírus H3N2 (A/Victoria/3/75) e tratadas com várias combinações de composto 12i e peramivir durante 72 horas. O efeito citopático foi determinado usando o ensaio de captação de pigmento vermelho neutro. Os dados são mostrados na Tabela 3. Tabela 3. Inibição percentual de efeito citopático em células infectadas por influenza
Figure img0102
[000688] Os dados experimentais foram avaliados pela análise tridi-mensional usando o programa software Mac Synergy IITM (Prichard e Shipman, 1990; aqui incorporado por referência em sua íntegra). O software calcula as interações aditivas teóricas das curvas de dose- resposta dos fármacos individuais. A superfície aditiva calculada, que representa as interações aditivas preditas, é então subtraída da super-fície experimental para revelar regiões de maior (sinergia)- ou menor (antagonismo)- do que as interações esperadas. A combinação de pe- ramivir e composto 12i em estudos de cultura celular demonstrou um efeito antiviral sinérgico com um volume de sinergia igual a 92 μM2 unidade %. Exemplo 12: Eficácia de Injeção Intramuscular (IM) de composto 12i em Modelo de Influenza Murino
[000689] Camundongos BALB/c entre 6 a 8 semanas de idade foram adaptados ao vírus H3N2 (A/Victoria/3/75). Doses de 0, 30, 100, e 300 mg/kg/d qd foram administradas por injeção intramuscular (IM) durante 5 dias iniciando 1 hora antes da infecção. N = 50 animais. Todos os animais foram seguidos durante 16 dias. As finalidades incluiram leta- lidade, média de dias para morte, e perda de peso.
[000690] Os resultados do composto 12i (IM) em vírus de modelo influenza de camundongo são mostrados na Tabela 4. O composto 12i administrado IM melhorou a sobrevivência e perda de peso em ca-mundongos infectados com o influenza vírus. Tabela 4. O composto 12i (IM) em vírus de modelo influenza de ca-mundongo - H3N2 A/Vic/3/75
Figure img0103
*P<0,001 comparado ao grupo de veículo infectado (teste de classifi-cação log) **P<0,001 comparado ao grupo de veículo infectado (teste-t) Exemplo 13: Eficácia de Administração Oral de Composto 12i em Mo¬delo de Influenza Murino
[000691] Camundongos BALB/c entre 6 a 8 semanas de idade foram adaptados ao vírus H3N2 (A/Victoria/3/75). Doses de 0, 30, 100, e 300 mg/kg/d qd e 100 mg/kg/d bid foram administradas oralmente. N = 60 animais. Todos os animais foram seguidos durante 16 dias. Finalida¬des incluiram letalidade, média de dias para a morte, e perda de peso. Os efeitos de composto 12i oralmente administrado sobre a perda de peso em camundongos infectados com o vírus influenza H3N2 A/Vic/3/75 são mostrados na Tabela 5. O composto 12i administrado oralmente melhorou a sobrevivência e perda de peso em camundon¬gos infectados com o vírus influenza. Tabela 5. Composto 12i (Oral) em vírus modelo influenza de camun¬dongo - H3N2 A/Vic/3/75
Figure img0104
*P<0,001 comparado ao grupo de veículo infectado (teste de classifi-cação log) **P<0,001 comparado ao grupo de veículo infectado (teste-t) Exemplo 14: Estudos Farmacocinéticos em Camundongos
[000692] Camundongos BALB/c fêmeas (N = 30) foram dosados oralmente com o composto 12i a 100 mg/kg. Os camundongos foram sangrados através do seio retro-orbital a t = 0,17, 0,5, 1,0, 3, 6, e 24 h (5 camundongos cada ponto do tempo), centrifugados e plasma foi armazenado a -80 °C. Os níveis de fármaco de plasma foram medidos por meio de análise LC/MS/MS.
[000693] Os níveis de plasma de camundongos para o composto 12i após administração oral são mostrados na Tabela 6. Tabela 6. Níveis de plasma de composto 12i em camundongos após a administração oral
Figure img0105
Exemplo 15: Estudo de Profilaxia de Camundondo do Vírus Ebola
[000694] Composto 12i foi administrado i.p., i.m., e oralmente (300 mg/kg/dia, BID) a camundongos C57BL/6 com 8 a 12 semanas de ida¬de (N = 10 por grupo, 4 grupos — um grupo tratado com salina e três tratados com fármaco). Oito dias de tratamento iniciando 4 horas antes da infecção. Desafio com o vírus Ebola (Zaire) adaptado ao camun¬dongo foi administrado intraperitonealmente. Mortalidade e peso foram monitorados durante 14 dias após a infecção.
[000695] Camundongos tratados com salina infectados com o vírus Ebola morreram todos por volta do dia 8. Todos os camundongos tra¬tados intraperitonealmente ou intramuscularmente com o composto 12i sobreviveram no final do estudo (dia 14). Oitenta por cento de camun-dongos tratados oralmente com o composto 12i sobreviveram no final do estudo (dia 14).
[000696] Camundongos tratados com salina infectados com o vírus Ebola exibiram perda de peso total até o dia 8 (todos os camundongos de controle foram mortos por volta do dia 8). Os camundongos trata¬dos intraperitonealmente ou intramuscularmente com o composto 12i mantiveram mais de 95% do peso inicial no dia 12. Os camundongos tratados oralmente com o composto 12i mantiveram mais de 80% do peso inicial no dia 12. Todos os camundongos tratados com o fármaco continuaram a ganhar peso após o dia 12. Exemplo 16: Estudo de Profilaxia de Camundongo com o Vírus Ebola
[000697] O composto 12i foi administrado i.m. e oralmente a camun-dongos C57BL/6 com 8 a 12 semanas de idade. Os indivíduos de es¬tudo foram divididos em 6 grupos (N = 10 por grupo). O grupo 1 foi um controle de salina, o grupo 2 foi dosado com 150 mg/kg de composto 12i (p.o., BID); o grupo 3 foi dosado com 250 mg/kg de composto 12i (p.o., BID); o grupo 4 foi dosado com 150 mg/kg de composto 12i (i.m., BID). O grupo 5 foi de camundongos não infectados tratados com sali¬na (p.o., BID), e o grupo 6 foi de camundongos não infectados tratados com 250 mg/kg de composto 12i (p.o., BID). O tratamento foi durante nove dias, iniciando 4 horas antes da infecção. O desafio com o vírus Ebola (Zaire) adaptado ao camundongo foi administrado intraperitone- almente (1.000 pfu). A mortalidade e o peso foram monitorados duran¬te 14 dias após a infecção.
[000698] Os camundongos tratados com salina infectados com o ví¬rus Ebola morreram todos por volta do dia 8. Todos os camundongos tratados intramuscularmente com o composto 12i sobreviveram no fi¬nal do estudo, indicando que a dosagem i.m. de composto 12i foi completamente protetiva. Oitenta por cento ou mais de camundongos tratados oralmente com o composto 12i sobreviveram no final do estu¬do.
[000699] Os camundongos tratados com salina infectados com o vi¬rus Ebola exibiram perda de peso total até o dia 7 (todos os camun¬dongos de controle foram mortos por volta do dia 8). Os camundongos tratados intramuscularmente com o composto 12i exibiram ganho de peso similar ao grupo de controle não infectado no dia 11. Camundon¬gos tratados oralmente com o composto 12i exibiram perda de peso reversível, e mantiveram mais de 100% do peso inicial no dia 11. Exemplo 17: Estudo de Hamster Golden de Janela de Tempo do Vírus da Febre Amarela (YFV)
[000700] O vírus da Febre Amarela (Jimenez strain) foi injetado i.p. em hamsters Golden Sírios fêmeas (99 g) em 20 CCID50 por hamster (~ 6,25 x LD50). Os grupos foram divididos como segue: 1) composto 12i foi administrado começando -4h (N = 15); 2) composto 12i adminis¬trados começando 1 dpi (dias após a infeção) (N = 10); 3) composto 12i administrado começando 2 dpi (N = 10); 4) composto 12i adminis¬trado 3 dpi (N = 10); 5) composto 12i administrado 4 dpi (N = 10); 6) ribavirina administrada começando -4h (N = 10); 7) veículo salino co¬meçando -4 h (N = 16); 8) hamsters não infectados administrados o composto 12i começando -4 h (N = 3); 9) hamsters não infectados administrados veículo salino começando -4 h (N = 3); e 10) controles normais não tratados, não infectados (N = 3). A dose de tratamento de 100 mg/kg i.p., BID durante 7 dias. Os pontos finais de estudo foram a mortalidade em 21 dias, peso medido nos dias 0, 3, 5, e 6; soro e títu¬los de vírus do fígado (dia 4, composto 12i a -4 h, e veículo a -4 h), e ALT e AST no dia 6.
[000701] Os resultados mostraram sobrevivência realçada para o composto 12i com tratamento retardado em comparação ao placebo (FIG. 2). Sobrevivência de hamsters infectados com YFV e tratados com o composto 12i duas vezes ao dia durante 7 dias, começando com várias vezes após o desafio com o vírus ser indicado (***P<0,001, **P<0,1, como em comparação ao placebo). A taxa de sobrevivência foi de 100% para o composto 12i começando pré-infecção, e tratamen¬to retardado até 3 dias após a infecção. A taxa de sobrevivência foi de 80% para o composto 12i começando 4 dias após a infecção, indican¬do uma melhora significante sobre o placebo em grupos com trata¬mento retardado. Ao contrário, a ribavirina forneceu 90% de sobrevi¬vência, começando pré-infecção e o veículo forneceu 12,5% de sobre¬vivência, começando pré-infecção. A maioria das mortes ocorreu den- tro de 10 dias de infecção. Os animais sobreviventes serão novamente desafiados com YFV em 21 dias após a infecção.
[000702] Hamsters infectados com YFV e tratados com o composto 12i a partir da pré-infecção até 4 dias após a infecção mostraram ga¬nho de peso sobre o placebo e ribavirina administrados pré-infecção. Exemplo 18: Estudo do Vírus Marburg para o Composto 12i
[000703] O composto 12i foi dosado i.m. em camundongos BALB/c com 10 a 12 semanas de idade desafiados (intraperitonealmente) com 1000 pfu de MARV-Ravn adaptado ao camundongo. O estudo foi divi¬dido em 10 grupos (N = 10 por grupo). Os regimes de dosagem, reti¬nas, e doses são mostrados na Tabela 7. O composto 12i foi dissolvi¬do em 0,9% de salina antes da administração, e a saúde e o peso fo¬ram monitorados durante 14 dias após a infecção. Tabela 7. Projeto de estudo para a profilaxia e tratamento com o com-posto 12i para a infecção por vírus Marburg
Figure img0106
Figure img0107
*Dia 0 - Tratamento iniciado 4 h antes da infecção, exceto para o gru¬po 6. Grupo 6 Tratamento iniciado em 4 horas após a infecção no dia 0. PI = após a infecção.
[000704] O percentual de sobrevivência para os 10 grupos neste es¬tudo até o dia 12 é incluído na Tabela 8. A taxa de sobrevivência para os camundongos tratados com veículo apenas (0,9 % de salina) foi de 60 % no dia 7 e 30% nos Dias 8 a 12. O composto 12i foi mostrados aumentar a sobrevivência em pelo menos 90% no dia 7, e pelo menos 80% nos dias 8 a 12 em todas as doses. Tabela 8. Percentual da taxa de sobrevivência para a profilaxia e tra-tamento com o composto 12i para a infeção pelo vírus Marburg
Figure img0108
Figure img0109
Exemplo 19: Formas de Dosagem Farmacêutica
[000705] Os seguintes ilustram as formas de dosagem farmacêutica representativas, contendo um composto da invenção ('Composto X'), para uso terapêutico ou profilático em humanos.
Figure img0110
Figure img0111
[000706] As formulações acima podem ser obtidas por procedimen- tos convencionais bem conhecidos na técnica farmacêutica.
[000707] Todas as publicações, patentes, e documentos de patente são incorporados por referência aqui, como se individualmente incor¬porado por referência. A invenção foi descrita com referência a várias modalidades e técnicas específicas e preferidas. Entretanto, deve ser entendido que muitas variações e modificações podem ser feitas, ao mesmo tempo em que permanecendo dentro do espírito e escopo da invenção.

Claims (21)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que é representado pela Fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:
Figure img0112
na qual: II, L e L3 cada um independentemente, é uma ligação ou um ligador -C(R0)2-O-; III, L5, e L6 são cada um uma ligação; IV, independentemente para cada ocorrência, é H ou (C1- C6)alquila; R1, R2, e R3, cada um independentemente, são seleciona¬dos do grupo que consiste em H, aminoacila, aminotionila, acila, R10OC(O)-, fosforila, e aminofosforila; ou R1 e R2, tomados juntos, ou R2 e R3, tomados juntos, podem ser selecionados do grupo que consiste em carbonila, tiocar- bonila, fosforila, e (C1-C6)alquilfosforila; R4, R5, e R6 são cada um H; R7 é H; e R10, independentemente para cada ocorrência, é seleciona¬do do grupo que consiste em H, (C1-C6)alquila, arila, heteroarila, aral- quila, e heteroaralquila; contanto que o composto representado pela Fórmula (I) não seja
Figure img0113
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracteriza do pelo fato de que L1-R1 e L2-R2 são idênticos, L2-R2 e L3-R3 são idên-ticos, ou L1-R1 e L3-R3 são idênticos.
3. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracteriza¬do pelo fato de que L3-R3 é H.
4. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracteriza¬do pelo fato de que L1-R1 é H.
5. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracteriza¬do pelo fato de que L2-R2 é H.
6. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracteriza¬do pelo fato de que L1-R1, L2-R2, e L3-R3 são idênticos.
7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 6, caracterizado pelo fato de que independentemente para cada ocorrência, aminoacila é -C(=O)CH(NH2)(CH2)nCHR30R31, em que n é 0 ou 1; e R30 e R31, cada um independentemente, são selecionados do grupo que consiste em H, (C1-C6)alquila, arila, heteroarila, aralquila, e heteroaralquila.
8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 6, caracterizado pelo fato de que, independentemente para cada ocorrência, aminotionila é -C(=S)CH(NH2)(CH2)nCHR30R31, em que n é 0 ou 1; e R30 e R31, cada um independentemente, são selecionados do grupo que consiste em H, (C1-C6)alquila, arila, heteroarila, aralquila, e heteroaralquila.
9. Composto de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 8, caracterizado pelo fato de que, independentemente para cada ocorrência, acila é -C(=O)R40, em que R40 é selecionado do gru¬po que consiste em H, (C1-C6)alquila, arila, heteroarila, aralquila, e he- teroaralquila.
10. Composto de acordo com qualquer uma das reivindica-ções 1 a 9, caracterizado pelo fato de que, independentemente para cada ocorrência, aminofosforila é -P(=O)(OR50)NR51R52, em que R50 é selecionado do grupo que consiste em H, (C1- C6)alquila, arila, arilalquila, heteroarila, heteroaralquila, e - (CH2)mSC(=O)C(CH3)2CH2OH; m é 1 ou 2; R51 é H ou (C1-C6)alquila; e R52 é selecionado do grupo que consiste em H, (C1- C6)alquila, arila, aralquila, heteroarila, heteroaralquila, e - CR60R61C(=O)OR62, em que R60 e R61, cada um independentemente, são H ou (C1- C6)alquila; e R62 é selecionado do grupo que consiste em H, (C1- C6)alquila, arila, aralquila, heteroarila, e heteroaralquila.
11. Composto de acordo com a reivindicação 10, caracteri-zado pelo fato de que R52 é -CR60R61C(=O)OR62.
12. Composto de acordo com a reivindicação 11, caracteri-zado pelo fato de que R60 é H; R61 é (C1-C6)alquila; e R62 é (C1- C6)alquila.
13. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracteri-zado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em:
Figure img0114
Figure img0115
14. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracteri¬zado pelo fato de que é representado por ou um sal farmaceuticamente aceitável
Figure img0116
15. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de compreender um composto como definido em qualquer uma das rei-vindicações 1 a 14, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
16. Uso de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 14, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é na preparação de um medi-camento e/ou composição farmacêutica para inibir replicação de um vírus.
17. Uso de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 14, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é na preparação de um medi-camento e/ou composição farmacêutica para tratar uma infecção viral.
18. Uso de acordo com a reivindicação 16 ou 17, caracteri-zado pelo fato de que o vírus é selecionado do grupo que consiste em viroses de RNA.
19. Uso de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o vírus é selecionado do grupo que consiste em or- tomyxoviridae, paramyxoviridae, arenaviridae, bunyaviridae, flaviviri- dae, filoviridae, togaviridae, picornaviridae, e coronaviridae.
20. Uso de acordo com a reivindicação 16 ou 17, caracteri-zado pelo fato de que o vírus é selecionado do grupo que consiste em adenovírus, rinovírus, vírus da hepatite A, vírus da hepatite C, polio vírus, vírus do sarampo, vírus Ebola, vírus Coxsackie, vírus do Oeste do Nilo, vírus da varíola, vírus da Febre Amarela, vírus da Febre da Dengue, vírus da influenza A, vírus da influenza B, vírus lassa, vírus da coriomeningite linfocítica, vírus Junino, vírus machuppo, vírus gua- narito, hantavírus, vírus da Febre Rift Valley, vírus La Crosse, vírus da encefalite da Califórnia, Crimean-Congo vírus, Vírus de Marburg, vírus da encefalite Japonesa, vírus Kyasanur Forest, vírus da encefalite equina Venezuelana, vírus da encefalite equina Oriental, vírus da en- cefalite equina Ocidental, vírus da síndrome respiratória aguda severa (SARS), vírus da parainfluenza, vírus sincicial respiratório, vírus Punta Toro, vírus Tacaribe, e vírus Pichinde.
21. Uso de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o vírus é selecionado do grupo que consiste em vírus Ebola, vírus da Febre Amarela, Vírus de Marburg, vírus da influenza A, e vírus da influenza B.
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